Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Повышение эффективности изготовления и использования сывороток-реагентов для типирования групп крови лошадей

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Повышение эффективности изготовления и использования сывороток-реагентов для типирования групп крови лошадей"

□034В0364

На правах рукописи

СЛИЗОВСКАЯ НАТАЛЬЯ МИХАЙЛОВНА

ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИЗГОТОВЛЕНИЯ И ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СЫВОРОТОК-РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ТИПИРОВАНИЯ ГРУПП КРОВИ ЛОШАДЕЙ

06.02.01 - разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

2 2 ОКТ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Дивово, Рязанской области - 2009

003480364

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийском научно-исследовательском институте коневодства

Научный руководитель: кандидат сельскохозяйственных наук, доцент

Храброва Людмила Александровна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Коровушкин Алексей Александрович

Ведущая организация: Московская академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина

Защита состоится 17 ноября 2009 г. в 9 часов на заседании диссертационного совета Д 006.018.01 при ГНУ Всероссийском научно-исследовательском институте коневодства (391105, РФ, Рязанская обл., Рыбновский район, п. Дивово, п/о Институт Коневодства)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института коневодства

Автореферат разослан «_»_2009 года

Ученый секретарь

кандидат сельскохозяйственных наук, Купцова Надежда Александровна

диссертационного совета

Готлиб М.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время иммуногенетические методы находят широкое применение при идентификации и контроле происхождения животных, изучении генетической структуры популяций, при разработке методов и приемов генетического мониторинга, а также при изучении связи с продуктивностью, воспроизводительной способностью и устойчивостью животных к различным заболеваниям. В коневодстве типирование лошадей по эритроцитарным антигенам особенно актуально, так как позволяет наряду с генетической сертификацией проводить эффективную профилактику гемолитической болезни новорожденных жеребят.

В связи с этим важным направлением научных исследований является совершенствование методов получения моноспецифических сывороток-реагентов для типирования эритроцитарных антигенов лошадей, а также их использования для решения задач практической селекции.

В настоящее время производство моноспецифических сывороток-реагентов все еще остается трудоемким и не всегда эффективным процессом, так как иммунный ответ дают только 20-25% иммунизированных лошадей, а результативность иммунизаций зависит от большого ряда факторов (Дубровская P.M., 1987; Шемарыкин Е.И., 1981; Потапова Д.В., 1989; Мемедейкин В.В., 1997).

Основными проблемами при проведении иммунизаций лошадей являются: рациональный подбор лошадей-доноров и реципиентов, прогнозирование иммунореактивности доноров, а также определение спектра антигенов полученной «сырой» сыворотки. Не менее важной производственной задачей, определяющей эффективность получения моноспецифических сывороток-реагентов, является разработка стратегического плана адсорбции полученных сывороток.

Недостаточная изученность этих вопросов свидетельствует о необходимости разработки эффективной методологии иммунизации лошадей и совершенствования методов использования моноспецифических сывороток-реагентов. Решение этих вопросов должно основываться на системном подходе и учитывать генетические особенности групп крови лошадей

Цель и задачи исследований. Целью проводимых исследований явилась разработка способов повышения эффективности изготовления и использования сывороток-реагентов для типирования

групп крови лошадей. В связи с этим было необходимо решить следующие задачи:

1. Оптимизировать составление плана иммунизации донорам и реципиентов на основе генетического анализа групп сцепления эритроцитарных антигенов.

2. Изучить влияние иммунизаций на содержание общего количества белка и иммуноглобулинов в сыворотке крови лошадей - доноров.

3. Проанализировать связь Б-системы групп крови с заболеваемостью жеребят неонатальным изоэритролизисом.

4. Отработать технологию использования планшетного микрометода при определении групп крови лошадей.

5. Определить экономическую эффективность использования предлагаемых разработок при получении и использовании сывороток - реагентов.

Научная новизна. Впервые на основании системного подхода разработана аналитическая схема подборов доноров к реципиентам, позволяющая оптимизировать процесс планирования и полностью исключить неперспективные варианты иммунизации лошадей.

Установлена возможность прогнозирования

иммунореактивности доноров при иммунизациях по содержанию общего количества иммуноглобулинов в сыворотке крови лошадей.

Разработаны оптимальные параметры планшетного микрометода для типирования эритроцитарных антигенов лошадей, а также определена экономическая эффективность внедрения данного метода.

Практическая значимость результатов исследований. Разработана и апробирована аналитическая модель подборов доноров к реципиентам, позволяющая существенно повысить эффективность иммунизации и оптимизировать состав донорского поголовья с учетом генотипических особенностей лошадей.

Выявлено, что показатель общего количества иммуноглобулинов в сыворотке крови продуцентов позволяет прогнозировать иммунореактивность лошадей-доноров в процессе иммунизации. Установлено отсутствие несовместимости родительских пар по эритроцитарному антигену Бс.

Определены оптимальные технологические параметры планшетного микрометода, используемого при типировании эритроцитарных антигенов лошадей, показана высокая экономическая эффективность его использования.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на 2-ой научно-практической конференции по болезням лошадей (Москва, 2001), на координационных совещаниях по коневодству (ВНИИ коневодства, 2001, 2007), конференции молодых ученых РСХА (2001), а также на семинаре «Современные достижения в изучении генетики лошади» (ВНИИК, 2007). Результаты проделанной работы вошли в «Методические рекомендации по производству и использованию сывороток-реагентов для типирования групп крови лошадей» (ВНИИ коневодства, 2005).

Объем работы. Диссертационная работа изложена на 123 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, методики, 5 разделов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и предложений производству. Включает 16 таблиц и 6 рисунков. Список использованной литературы содержит 125 источников, в том числе 67 на иностранных языках. По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе методические рекомендации и 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК.

Материалы и методика исследований. Материалом для исследований служили результаты типирования групп крови 2476 голов лошадей заводских и местных пород, в том числе чистокровной верховой, арабской чистокровной, орловской и русской рысистых, тракененской, советской тяжеловозной, башкирской и их помесей.

При проведении 15 серийных иммунизаций было использовано конское поголовье экспериментальной конюшни ВНИИ коневодства и других хозяйств в количестве 29 голов разных пород, в возрасте 2 лет и старше. Все лошади находились в условиях конюшенно-пастбищного содержания и в дополнение к стандартному рациону получали комплексную витаминно-минерально-аминокислотную подкормку.

Исследования проводили по схеме, приведенной в рисунке 1.

Иммунизацию лошадей-реципиентов производили согласно рекомендациям (P.M. Дубровская, 1983) и собственным методическим разработкам. На основании модельного анализа групп сцепления эритроцитарных антигенов была разработана и апробирована аналитическая модель подборов доноров к реципиентам.

До начала и во время иммунизаций проводили определение содержания общего белка и иммуноглобулинов в сыворотке крови, а после каждой иммунизации определяли титр сыворотки, полученной от лошадей-продуцентов.

-о я о

I

О

о

о X а 3 о>

О о

ы

о §

в> со X

5!

»

(анализ групп сцепления эритроцитарных антигенов"]

8

Влияние эритроцитарного антигена Юс на проявление гемолитической болезни новорожденных жеребят оценивали по результатам заводской деятельности маток арабской (п=801) и чистокровной верховой (п=459) пород, продуцировавших в конных заводах «Восход», «Лабинский», «Терский» и «Хреновской» в период 1977-1998 гг. Типирование лошадей по группам крови проводили в лаборатории иммуногенетики ВНИИ коневодства при помощи моноспецифических сывороток-реагентов для эритроцитарных систем крови А, Э и К. Учитывались только те жеребости, в которых жеребята унаследовали отцовский антиген Ос, чтобы каждая жеребость могла служить проверкой наличия несовместимости родительских пар.

Результаты плодовой деятельности таких кобыл оценивали по следующим показателям воспроизводства: проценту зажеребляемости; слабо- и мертворожденных жеребят; благополучной выжеребке и делового выхода жеребят.

При разработке параметров микрометода определения групп крови были оптимизированы такие основные технологические характеристики, как время экспозиции (в диапазоне 30 мин - 3 часа), объем и соотношение сыворотки и взвеси эритроцитов, концентрация взвеси эритроцитов (в диапазоне 0,5 - 2,5%). Предварительно была разработана оценочная шкала качественных характеристик реакции агглютинации в микропланшете: конфигурация и площадь агглютината, яркость его окраски и форма ободка.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Разработка аналитической модели подборов доноров к реципиентам при иммунизации лошадей

Изготовление иммуносерологических реактивов для определения групп крови лошадей сопряжено с низкой эффективностью проводимых мероприятий по ряду разнообразных причин: ограниченности поголовья донорского стада, слабой иммунореактивности продуцентов, неполного набора сывороток-реагентов, получения сложных «сырых» сывороток и др. Одной из весомых причин невысокой результативности производства реагентов у лошадей является наличие открытых систем групп крови с еще не до конца определенным набором антигенных факторов. Помимо этого в большинстве систем групп крови есть аллели с группами сцепленных эритроцитарных антигенов, которые затрудняют процесс абсорбции получаемых сывороток.

Таблица 1

Частота встречаемости групп сцепления антигенов в аллелях групп крови лошадей (в %)

Частота встречаемости Группа сцепления

1-49 Ас (be, ce); Dd (dkl, del), De (cegmq), Dg (dhgm), DI (adl, dkl, delq)

50-75 Aa (ad, ag), Ab (be), Ad (dg, ad), Ae (ce); Dd (di), De (delq), Df (cfm), Dk (dkl), Dm (cm, cgm, mq, Dn (din), Dq (mq), Dr (Ir, qr);Pa (ac,ad), Pd (ad)

76-100 Af (adf), Ag (adg); Da(adl), Db (bemq), De (cgm, cm), Dg (gm, cgm), Dh (dghm), Di (cegimnq), DI (di), Dm (gm), Do (deloq), Dp (gmp); Qa (ac), Qc (ас), Pe (ac)

При анализе генетических групп сцепления антигенов в системах А, Р, О и <3-групп крови были выявлены разные частоты их встречаемости (таблица 1)

Низкая частота встречаемости групп сцепления характерна только для антигенов АЬ, Ас, Ра, Рс1, Бе. Все прочие эритроцитарные антигены генетически детерминированы аллелями со сравнительно высокой (50-100%) частотой встречаемости сцепленных факторов и имеют вариации в зависимости от антигенного состава группы. Очень высокая степень встречаемости сцепленных факторов была выявлена у следующих групп антигенов: в системе А - ас1Г и ас1§; в системе <3 — ас; в системе Р - ас; в системе О - ас!1, Ьспк}, сш, с^Ит, седшпя, <11,

Чтобы разрешить проблему получения сложных сывороток со стойкими группами сцепления, на основании модельного анализа была составлена оптимальная схема подборов доноров к реципиентам с учетом эффективности последующей адсорбции на примере Б-системы групп крови (таблица 2). В результате использования разработанной оптимальной схемы подборов можно получить моноспецифическую сыворотку или же сыворотку, требующую минимума адсорбций.

В связи с наличием неразделимых групп сцепления эритроцитарных антигенов возможен ряд подборов пар доноров, неперспективных в плане получения моноспецифических сывороток. Получаемые в результате таких подборов «сырые» сыворотки содержат антитела, соответствующие прочным аллельным группам сцепления, и на их основе невозможно получение «чистой» сыворотки (таблица 3).

Таблица 2

Оптимальные варианты подбора доноров и реципиентов по антигенам О-системы крови

Антиген Генотип донора Генотип реципиента

Da adl dek, de, dfk, dkl, d

adir dek, dfk, dlnqr

adlnr dlnqr

Db bem cefgm, cegm, cgmq, cgmqr

De egm dghm

egmp dghmp

cgmq dghmq, dghmqr

cgmqr dghmqr

egmr dghmqr

Dd dein cefgmq, cegimnq

De dein dflclr, dghm

Df cefgm cegimn

cfmqr cgmqr

dfklr dek

Dg egm bem, efinqr

egmq bem, efinqr

egmr cfmqr

cgmqr cfmqr

egmp bem, efinqr

dghm bem, cfmqr

Dh dghm cgm/deln

Dk cfgkm cefgm

dkl adl, de

Dl dklqr dghmqr

deklqr cefgmq, cegimnq

Dn adlnr adir

dlnq dek, delq, dlqr

dlnqr dek, dlqr

Do deloq delq, dek

Dp egmp cefgmq, cegminq, cfgkm, efinqr, egm, cgmq, cgmqr, egmr

dghmp dghmq

dghmqr

Таблица 3

Варианты неперспективных подборов пар донор - реципиент для получения моноспецифических сывороток-реагентов для Б -системы групп крови

Получаемая Генотип донора Генотип Проблемная

сыворотка реципиента группа сцепления

bcmq любой из Ьс

Анти-Dc возможных

cegimnq — И — с$

Анти-Dd adl(nr), del(korq) ...//._ (Ш, Ш

Анти-De cegimn - // — е1

deloq ...//... ео

Анти-Dg cegimn — Ц —

cgmp, dghm — // — £Р>

adl — // — а1

délo 1о

dek cefgmq, cegimnq

Анти-Dl delq cefgm, cegimn

dfk cefgm) cfgkm, сйп ё!

dkl cfgkm

dl с1

Анти-Dm cegm(finq), cgm(fqrkp), dghm(pqr) любой из возможных ¡т, ст, Бт Ьт

Анти-Dn cegimn —и — ¡п

Проведенный анализ показал, что, даже при соблюдении требования минимальных различий между донором и реципиентом по антигенам групп крови при составлении подбора, можно получить сложную поливалентную сыворотку, включающую антитела на нужный антиген, но в дальнейшем «очистить» ее до моноспецифического состояния практически невозможно. Приведенные в таблице 3 варианты нерациональных подборов демонстрируют генотипические характеристики лошадей-доноров, которых нецелесообразно использовать для получения сывороток-реагентов в связи имеющимися группами сцепления и необходимостью многоэтапной адсорбции. Важно отметить, что

моноспецифическую сыворотку анти-Dm получить очень сложно, даже используя дальнейшую адсорбцию.

Учитывая, что каждый этап адсорбции снижает титр получаемой сыворотки, при составлении плана иммунизации продуцентов необходимо не только подбирать пары с минимальными различиями в наличии эритроцитарных антигенов, но и учитывать возможность последующей адсорбции лишних антител.

Апробация разработанной аналитической модели подборов доноров к реципиентам была проведена на 15 серийных иммунизациях лошадей, что позволило получить 11 сывороток и в целом повысить эффективность иммунизаций до 73%.

Влияние иммунизаций на содержание общего белка и иммуноглобулинов в сыворотке крови лошадей

Практическая работа по получению сывороток-реагентов значительно усложняется потому, что 75-80% иммунизированных лошадей остается ареактивными. Известно, что иммунореактивность лошадей - продуцентов зависит от большого ряда факторов: возраста, физиологического состояния, типа нервной системы, времени года и т.д. (Дубровская P.M., 1987; Потапова Д.В. 1989; Мемедейкин В.В., 1997). Поэтому при производстве сывороток-реагентов важно заранее прогнозировать иммунореактивность лошадей-продуцентов и оценивать результативность проводимой иммунизации.

При мониторинге содержания общего белка в сыворотке крови лошадей до начала и в процессе иммунизации не было установлено существенных изменений этого показателя в зависимости иммунореактивности продуцентов (Рис. 2). В то же время отмечена тенденция увеличения содержания общего белка в крови лошадей-продуцентов, давших сыворотку с высоким титром антител (1:16-1:32) уже после первого внутримышечного введения крови доноров реципиентам, т.е. на начальном этапе проведения иммунизации. Несколько иная динамика колебаний общего количества белка наблюдалась у лошадей-реципиентов, давших сыворотку с невысоким титром антител (1:8), что может быть связано со спецификой антигенной активности эритроцитарных факторов. После 4-й серийной иммунизации, к моменту взятия крови у лошадей-продуцентов в большом объеме, самое высокое содержание общего белка было отмечено у лошадей, давших сыворотку с высоким титром антител к эритроцитарным антигенам, тогда как у ареактивных доноров его уровень был даже ниже начального.

—1:16-1:32

- -а- -1:08

•титр отсутствует!

порядок исследовании

Рис. 2. Динамика содержания общего белка в сыворотке крови лошадей-продуцентов в процессе иммунизации.

Более информативные результаты были получены при изучении динамики общего содержания иммуноглобулинов у лошадей-продуцентов (таблица 4).

Таблица 4

Динамика содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови реактивных и ареактивных лошадей-доноров при иммунизации

Этапы иммунизации Содержание иммуноглобулинов, мг/мл

реактивные доноры ареактивные доноры

Титр 1:16-1:32 Титр 1:8 Титр отсутствует

ДО иммунизации 11,22±0,51** 10,46±0,80 9,33±0,44

I 13,17±0,35*** 12,26±0,79*** 9,72±0,30

II 13,70±0,45*** 12,60±0,93** 9,72±0,48

III 13,17±0,18* 13,45±0,71* 10,79±1,05

IV 13,52±0,28*** 13,88±0,62*** 9,84±0,56

Примечание. Достоверность различий: *Р >0,95;**Р >0,99;***? >0,999.

У лошадей-доноров, не выработавших эритроцитарных антител, общее содержание иммуноглобулинов в сыворотке крови до иммунизации и во время нее было достоверно ниже и не подвергалось значительным колебаниями. Напротив, у двух групп реактивных доноров, общее содержание иммунных белков было достоверно выше еще до начала иммунизации и постепенно возрастало в процессе иммунизации.

2

О)

16 14 12 10 8 6 4 2 0

—I-(-1—

2 3 4

порядок исследований

!—-♦-.....1:16-1:32

I

-а. . 1:8

Титр

отсутствует

Рис. 3. Динамика содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови продуцентов при иммунизациях лошадей

Полученные данные свидетельствуют, что показатель содержания общего количества иммуноглобулинов в сыворотке крови может служить в качестве критерия иммунореактивности лошадей-продуцентов и эффективности проводимой иммунизации.

Анализ связи эритроцитарного антигена Бс с заболеваемостью жеребят неонатальным изоэритролизисом

У 1-2% жеребят разных пород встречается заболевание неонатальным изоэритролизом, которое может быть обусловлено несовместимостью родительских пар по эритроцитарным антигенам Ра, а также, возможно, Аа, Са, Ос и Ра. Для проверки гипотезы о связи широко распространенного антигена Ос с гемолитической болезнью новорожденных жеребят была проанализирована заводская карьера кобыл чистокровной верховой и арабской пород, имевших пять и более «несовместимых» жеребостей по этому антигену.

Показатели зажеребляемости, благополучной выжеребки и делового выхода жеребят у кобыл арабской чистокровной породы с «проблемными» подборами менялись волнообразно, достигая максимальных значений при 11 и 12 «несовместимых» жеребостях. Доля слабо- и мертворожденных жеребят колебалась в интервале от 10 до 36%, с максимальными значениями на пятую и восьмую жеребости (рис. 4). При этом многие кобылы выкармливали здоровых жеребят, унаследовавших отцовский антиген Бс, и после девяти «несовместимых» жеребостей.

1 3 5 7 9 11 порядок жеребостей

13

—♦— зажеребляемо сть

—в— благополучная выжеребка

—д—деловой выход жеребят

- » ■ слабо- и

мертворожден ных

Рис. 4. Динамика показателей воспроизводства кобыл арабской породы при несовместимости родительских пар по антигену Бс.

У маток чистокровной верховой породы, давших «несовместимых» жеребят по антигену Бс, была отмечена сходная динамика репродуктивных показателей. Более того, максимальные уровни зажеребляемости, благополучной выжеребки и делового выхода жеребят наблюдались после 9-11 «проблемных» жеребостей, при этом число слабо- и мертворожденных жеребят явно имело тенденцию к снижению.

Проведенный анализ основных показателей воспроизводства кобыл чистокровной верховой и арабской пород, имевших многочисленные «несовместимые» жеребости по эритроцитарному антигену Бс, не подтверждает его связи с возникновением иммуногенетической несовместимости у новорожденных жеребят.

Оптимизация параметров планшетного микрометода при типировании групп крови

С целью апробации планшетного микрометода при типировании групп крови лошадей была разработана оценочная бальная шкала проявления агглютинации в лунках планшета с учетом таких факторов, как дисперсность агглютината, его конфигурация, яркость окраски и форма ободка. Для определения оптимальных параметров реакции агглютинации в планшете при определении групп крови лошадей проведен ряд серийных опытов.

В отличие от постановки реакций в серологических пробирках, наиболее четко выраженная крупнозернистая агглютинация эритроцитов в лунках планшета была отмечена при концентрации суспензии 1,5% и времени инкубации 1 час. Суспензия с 0,5% концентрацией имела очень бледную окраску, что затрудняло чтение результатов реакции, также как и 2,5% взвесь с излишне интенсивной окраской. Инкубация в термостате в течение 30 и 40 минут было явно недостаточной для полного проявления агглютинации эритроцитов с антителами сыворотки, а прочтение результатов через 1,5 и 3 часа несколько затрудняло дифференциацию бахромчатости краев по причине высыхания взвеси в лунках планшета.

Оптимальная концентрация суспензии эритроцитов для микрометода на планшете составляет 1,5%, время инкубации 1 час.

Экономическая эффективность результатов исследований

Изготовление сывороток-реагентов - это длительный производственный процесс, связанный с содержанием большой группы лошадей - продуцентов. Основной статьей расхода при получении реагентов являются затраты на донорское поголовье, в том числе на приобретение и содержание животных. Поэтому очень важно иметь такое поголовье продуцентов, которое отвечает потребностям лаборатория по генотипам и иммунореактивности.

Расчет экономической эффективности использования аналитической схемы подборов пар доноров к реципиентам при составлении плана иммунизаций показал, что при этом методе один рубль затрат на производство сывороток позволяет получить 85 коп. прибыли, что является хорошим показателем эффективности.

Результаты внедрения микрометода наглядно представлены в таблице 5. Благодаря внедрению микрометода расход дефицитных сывороток-реагентов сократился в 3 раза, существенно снизились

затраты рабочего времени и прочие расходы. При этом значительно повысилась чувствительность метода, а срок хранения проб крови увеличился в 1,5 раза.

В настоящее время лаборатория полностью перешла на планшетный микрометод, что позволило существенно сэкономить имеющиеся запасы сывороток-реагентов.

Таблица 5.

Сравнительная оценка эффективности методов определения групп крови лошадей

№ Показатели Пробирочный Планшетный Экономия при использовании

(в расчете на одну голову) метод микрометод микрометода

1 Расход сывороток-реагентов, цл 75 25 50

2 Расход рабочего времени на операции 30 мин 10 мин 20 мин

3 Дополнительные расходы,

включая хим.реактивы и эл. энергию на 1 пробу, руб. 37 9 28

Производственная проверка показала высокую эффективность системного подхода при использовании аналитической модели. Для 15 апробированных подборов результативность составила 73% , т е было получено 11 сывороток из 15 возможных.

ВЫВОДЫ

1. Результативность получения сывороток-реагентов для определения групп крови лошадей в значительной степени определяется планом иммунизации, который должен составляться с учетом генотипических различий доноров и реципиентов, а также возможности последующей адсорбции полученной сыворотки.

2. Большинство аллелей групп крови лошадей включают группы сцепленных антигенов, что необходимо учитывать как при подборах донорских пар, так и при адсорбции «сырых» сывороток.

3. При контроле содержания общего белка в сыворотке крови лошадей в процессе иммунизации не было выявлено четко выраженной зависимости иммунореактивности продуцентов от этого показателя.

4. Установлена достоверная связь между содержанием иммуноглобулинов в сыворотке крови лошадей и их иммунореактивностью. Реактивные лошади-продуценты с высоким титром антител имели достоверно более высокий уровень общего количества иммуноглобулинов еще до иммунизации, который постепенно увеличивался после каждой инъекции крови донора.

5. Анализ показателей воспроизводства кобыл арабской и чистокровной верховых пород, имевших несовместимые жеребости по антигену Ос, не подтвердил связи гемолитической болезни жеребят с этим фактором.

6. В результате проведенных исследований отработаны оптимальные параметры проведения планшетного микрометода: концентрация взвеси эритроцитов должна составлять 1,5%, количество взвеси эритроцитов и сыворотки-реагента 0,25-0,30цл, время инкубации 1 час.

7. Использование микрометода позволяет снизить расход сывороток-реагентов и затраты рабочего времени в 3 раза, а также продолжительность анализа с четырех до одного часа. Планшетный микрометод типирования групп крови можно использовать как в лабораторных, так и в полевых условиях.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При получении сывороток - реагентов для типирования групп крови лошадей подбор пар «донор-реципиент» следует проводить с учетом групп сцепления и в соответствии с рекомендованной схемой, что позволит избежать получения проблемных сывороток.

2. Для успешной работы необходимо комплектовать донорский табун лошадьми со следующими генотипами Аа, АасЩ АЬс, Асе, АЬсе; ОасНпг, Оас11г, БсИпцг, БЬсш, Бс^Ит, Бс§т, Бёе1оц, 0<1ек, 0<1к1, Ос姙п, Са, Ка, иа, Ра, РЬ, Рас, С>с, С>аЬс, <)Ь.

3. Отбор лошадей-продуцентов проводить с учетом высокого содержания иммуноглобулинов на уровне 11 мг/мл и выше.

4. Иммуногенетическим лабораториям целесообразно полностью перейти на типирование групп крови лошадей планшетным микрометодом, который позволяет существенно экономить сыворотки-реагенты и затраты рабочего времени персонала, а также может быть использован как в лабораторных, так и в полевых условиях.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зайцев A.M., Мелентьева Н.М. Характеристика генетической структуры кузнецкой породы лошадей по эритроцитарным антигенам и полиморфным системам белков и ферментов крови// Материалы науч. сессии РСХА «Стратегия развития животноводства -21 век» и координационного совещания по научно-исследовательской работе в коневодстве. - Дивово, 2001.-С.70-72.

2. Мелентьева Н.М. Повышение эффективности изготовления и использования сывороток-реагентов для типирования групп крови лошадей// Сб.науч.тр. -Дивово, 2007. -С. 107-111.

3. Мелентьева Н.М. Связь систем групп крови с заболеваемостью жеребят неонатальным изоэритролизисом// Журнал «Коневодство и конный спорт», 2007.- № 4. -С. 21-22.

4. Методические рекомендации по производству и использованию сывороток-реагентов для типирования групп крови лошадей// ВНИИК - 2005/ Храброва JI.A., Дубровская P.M., Потапова Д.В, Мелентьева Н.М, Орехова Т.М.

5. Мелентьева Н.М., Храброва Л.А. Генетическая детерминация гемолитической болезни жеребят// Науч. основы сохранения и совершенствования пород лошадей. - Дивово, 2003. -С. 74-80.

6. Мелентьева Н.М., Храброва Л.А. Технологические аспекты микрометода определения групп крови лошадей// Итоги исследований по коневодству в первом году 21 века. - Дивово, 2002. - С.38-40

7. Мелентьева Н.М., Храброва Л.А. Усовершенствование методики получения сывороток-реагентов для открытых систем групп крови у лошадей// Проблемы сохранения генофонда, повышения племенных и продуктивных качеств заводских и местных пород лошадей: Тезисы. - Дивово, 2003. -С.41-44.

8. Мелентьева Н.М., Храброва Л.А., Матвиенко А.П. Оценка экономической эффективности применяемых методов изготовления и использования сывороток-реагентов для типирования групп крови лошадей//Сб.науч.тр. -Дивово, 2007. -С. 103-106.

9. Угадчиков С.Т., Мелентьева Н.М., Цуцков В.В. Влияние минерально-витаминно-аминокислотного премикса на иммунореак-тивность лошадей-доноров//Материалы науч. сессии РСХА «Стратегия развития животноводства - 21 век» и координационного совещания по научно-исследовательской работе в коневодстве. - Дивово, 2001. С.93-94.

10. Храброва Л.А., Мелентьева Н.М. Гемолитическая болезнь новорожденных жеребят: диагностика и профилактика// Материалы 2-ой научно-практической конференции по болезням лошадей. - М., 2001.-С. 98-99.

11. Храброва Л.А., Мелентьева Н.М. Гемолитическая болезнь новорожденных жеребят: диагностика, профилактика// Материалы научной сессии РСХА «Стратегия развития животноводства - 21 век» и координационного совещания по научно-исследовательской работе в коневодстве. - Дивово, 2001. - С.68-70

Издательская лицензия ИД №05806 от 10.09.2001г. Подписано в печать 28.09.09. Формат 60x84 1/16 Печатных листов 1,0. Тираж 100 экз. Заказ №28 Участок печати ГНУ ВНИИ коневодства Рыбновский район, Рязанская область Тел./факс 8(4912)24-02-65, 24-05-39 E-mail: vniik08@mail.ru

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Слизовская, Наталья Михайловна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Генетический полиморфизм систем эритроцитарных антигенов у лошадей.

1.2. Теоретические и практические аспекты получения сывороток-реагентов для определения групп крови лошадей.

1.2.1. Механизм специфической иммунной реакции организма.

1.2.2.3ависимость иммунной реактивности лошадей-продуцентов иммунных сывороток и иммунных реакций «in vitro» от различных факторов.

1.3. Применение данных полиморфизма групп крови в животноводстве.

1.3.1. Особенности генетического полиморфизм групп крови у лошадей разных пород.

1.3.2. Контроль происхождения в коневодстве.

1.3.3. Связь групп крови сельскохозяйственных животных с хозяйственно — полезными признаками.

1.3.4. Несовместимость матери и плода по группам крови.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Материалы и методы исследований.

2.2. Генетико-статистическая обработка данных.

ГЛАВА З.РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Разработка аналитической модели подборов доноров к реципиентам при иммунизации лошадей.

3.2. Влияние иммунизации на содержание общего белка и иммуноглобулинов в сыворотке крови лошадей.

3.3.Связь D-системы групп крови с заболеваемостью жеребят неонатальным изоэритролизисом.

3.4. Оптимизация параметров микрометода при типировании групп крови.

3.5. Экономическая эффективность предлагаемой разработки изготовления и использования сывороток-реагентов для типирования групп крови лошадей.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Повышение эффективности изготовления и использования сывороток-реагентов для типирования групп крови лошадей"

В настоящее время иммуногенетические методы находят широкое применение при идентификации и контроле происхождения животных, изучении генетической структуры популяций, при разработке методов и приемов генетического мониторинга, а также при изучении связи с продуктивностью, воспроизводительной способностью и устойчивостью животных к различным заболеваниям. В коневодстве систематическое типирование лошадей по эритроцитарным антигенам особенно актуально, так как позволяет проводить эффективную профилактику гемолитической болезни новорожденных жеребят.

В связи с этим важным направлением научных исследований является совершенствование методов получения и использования моноспецифических сывороток-реагентов для гипирования эритроцитарных антигенов лошадей.

И сегодня процесс получения таких сывороток достаточно трудоемкое и не всегда эффективное занятие, так как иммунный ответ дают только 2025% иммунизированных животных, а результативность иммунизаций зависит от большого ряда факторов (Р. М. Дубровская, 1987; Е. И. Шемарыкин, 1981; Д. В. Потапова, 1989; В. В. Мемедейкин, 1997).

Основными проблемными вопросами при составлении плана иммунизаций лошадей—доноров являются: продуктивный подбор лошадей-доноров к реципиентам, прогнозирование иммунореактивности доноров и определение спектра антигенов полученной «сырой» сыворотки. Не менее важной производственной задачей, определяющей эффективность получения моноспецифических сывороток-реагентов, является разработка стратегического плана адсорбции полученных сывороток.

Это свидетельствует о необходимости разработки эффективных способов иммунизации лошадей и использовании моноспецифических сывороток-реагентов, основанных на системном подходе и учитывающих генетические особенности групп крови лошадей.

Цель и задачи исследований. Целью проводимых исследований явилась разработка способов повышения эффективности изготовления и использования сывороток — реагентов для типирования групп крови лошадей. В связи с этим было необходимо решить следующие задачи.

1. Разработать аналитическую модель подборов к реципиентам при составлении плана иммунизации лошадей.

2. Выявить влияние иммунизации на содержание иммуноглобулинов и общего белка в сыворотке крови лошадей-реципиентов.

3. Проанализировать связь эритроцитарного антигена Эс с заболеваемостью жеребят неонатальным изоэритролизисом.

4. Усовершенствовать метод определения групп крови лошадей. Научная новизна работы. Впервые на основании системного подхода, с учетом встречаемости групп сцепления эритроцитарных антигенов, разработана аналитическая схема подборов доноров к реципиентам при иммунизации лошадей, позволяющая оптимизировать процесс и исключить неперспективные варианты.

Установлена возможность прогнозирования иммунореактивности доноров при иммупизациях по динамике показателей иммуноглобулинов в сыворотке крови лошадей.

Разработаны оптимальные параметры планшетного микрометода для типирования эритроцитарных антигенов лошадей, а также определена экономическая эффективность внедрения данного метода.

Установлено, что у лошадей не наблюдается несовместимости родительских пар по эритроцитарному антигену Эс.

Практическая значимость результатов исследований. Впервые разработана и апробирована аналитическая модель подборов доноров к реципиентам, позволяющая существенно повысить эффективность иммунизации и оптимизировать состав донорского поголовья с учетом генотипических особенностей лошадей

Выявлены показатели сыворотки крови, позволяющие прогнозировать иммунореактивность лошадей-доноров в процессе иммунизации.

Определены оптимальные технологические параметры планшетного микрометода, используемого при типировании эритроцитарных антигенов лошадей, а также рассчитана экономическая эффективность его использования.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на 2-ой научно-практической конференции по болезням лошадей (Москва, 2001), на координационных совещаниях по коневодству (ВНИИ коневодства, 2001, 2007), конференции молодых ученых РСХА (2001), а также семинаре «Современные достижения в изучении генетики лошади» (ВНИИК, 2007). Результаты проделанной работы вошли в «Методические рекомендации по производству и использованию сывороток-реагентов для типирования групп крови лошадей» (ВНИИ коневодства, 2005).

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Слизовская, Наталья Михайловна

5.1 .ВЫВОДЫ

1. Результативность получения сывороток-реагентов для определения групп крови лошадей в значительной степени определяется правильно составленным планом иммунизации, который должен строится с учетом видовых генетических особенностей и наследования систем эритроцитарных антигенов.

2. Большинство аллелей групп крови лошадей включают группы сцепленных антигенов, которые важно учитывать как при подборах пар донор-реципиент, так и при адсорбциях получаемых сывороток.

3. При контроле динамики содержания общего белка в сыворотке крови лошадей в процессе иммунизации не было установлено четко выраженной зависимости иммунореактивности продуцентов от этого показателя.

4. Установлена достоверная связь между содержанием иммуноглобулинов в сыворотке крови лошадей и их иммунореактивностью. Лошади-продуценты имели достоверно более высокий уровень иммуноглобулинов уже перед иммунизацией, который имел положительную динамику роста в ее процессе.

5. Анализ показателей воспроизводства кобыл арабской и чистокровной верховых пород, имевших несовместимые жеребости по антигену Ос, не подтвердил связи гемолитической болезни жеребят с этим антигеном.

6. В результате проведенных исследований отработаны оптимальные параметры проведения планшетного микрометода: концентрация взвеси эритроцитов должна составлять 1,5%, количество взвеси эритроцитов и сыворотки-реагента 0,25-0,30цл, время инкубации 1 час.

7. Использование микрометода позволяет снизить стоимость тестирования одной лошади в 4 раза, расход сывороток в 3 раза, время анализа с четырех до одного часа. Планшетный микрометод можно использовать как в лабораторных, так и в полевых условиях.

5.2. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При получении сывороток-реагентов для типирования групп крови лошадей подбор пар «донор-реципиент» проводить с учетом групп сцепления и в соответствии с рекомендованной схемой, что позволит избежать получения проблемных сывороток.

2. Для успешной работы необходимо комплектовать донорский табун лошадьми со следующими генотипами: Аа, Aadf, Abc, Асе, Abce; Dadlnr, Dadlr, Ddlnqr, Dbcm, Ddghm, Dcgm, Ddeloq, Ddek, Ddkl, Dcegimn, Ca, Ka, Ua, Pa, Pb, Qac, Qc, Qabc, Qb.

3. Отбор лошадей-продуцентов необходимо проводить с учетом высокого содержания иммуноглобулинов на уровне 11 мг/мл и выше.

4. Иммуногенетическим лабораториям целесообразно полностью перейти на типирование групп крови лошадей планшетным микрометодом, который позволяет существенно экономить сыворотки-реагенты и затраты рабочего времени персонала, а также может быть использован как в лабораторных, так и в полевых условиях.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Слизовская, Наталья Михайловна, Дивово, Рязанской обл.

1. Амбросьева Е. Д. Биохимические маркеры в свиноводстве (обзор)\\ Аграрная Россия, 2002, №5

2. Беренштейн Ф. Я., Мартиненко А. К., Рейнфельд А. К. До питания про кров'яни угруппования в коней.// Украшский ж. Кров1яних угрупповань та переливания крови, 1932, № 2-3 (Харьков)

3. Богданов П. П., Тюлегенов Д. Д., Портных А. Н. Изучение групп крови системы ABO лошадей и их связи с гемодинамическими показателями.// В кн.: «Генетика и селекция с.-х. растений и животных в Киргизии». Фрунзе: Илим, 1977.

4. Бородин Н. Ф. Кровеш групи у рысистых коней.// Ветеринарная справа, 1940, №10.

5. Бургасов П. Н. Руководство по вакцинному и сывороточному делу.// М., «Медицина», 1978

6. Воробьев Э. Г. Группы крови холмогорского и швицкого скота и их использование в племенной работе: Автореф. дис. . канд. наук — Дубровицы, 1970

7. Воробьев А. А., Васильев Н. Н. Адьюванты.//М.: Медицина, 1969

8. Гаврилов О. К. Очерки истории развития и применения переливания крови.//Л., 1968- 180 с.

9. Герман В. А. Группы крови лошадей и способ их определения.// В кн.: Труды Харьк. вет.ин-та, 1939, т. 18, вып. 1.

10. Ю.Диков В. Иммунохематология и иммуногенетика на животните.// София: Изд. БАН, 1970, 55-56.

11. П.Донсков С. И. Ошибки при определении групп крови (лекция)// Заочная академия последипломного образования, 2002

12. Дубровская Р. М. Методические рекомендации по использованию полиморфных белков и групп крови при контроле достоверности происхождения лошадей.//ВНИИК, 1986

13. Дубровская Р. М. Методические указания по изготовлению сывороток-реагентов для определения групп крови и использованию их при контроле происхождения лошадей// Москва «Колос», 1983

14. Дубровская Р. М. Полиморфизм эритроцитарных антигенов и белков крови лошадей и перспективы его использования в селекционной работе// Автореф. дис.доктора с.-х. наук.-Москва, 1988

15. Дубровская Р. М., Шемарыкин Е. И., Зволиньский Е., Холевиньский Г. Сравнительное изучение групп крови у лошадей.// Зоотехния, вып. 235, 1977.

16. Ильп К. Я. Изучение генофонда крупного рогатого скота по группам крови и его использование в селекции. Автореф. канд. дис. Тарту, 1971

17. Колесник Н. Н., Сокол В. И. Иммуногенетические системы в селекции животных.// Киев: Урожай, 1972

18. Корешков В. А. Группы крови, типы белков и ферментов у чернопестрого скота и их использование в селекции: Автореф. дисс. .канд. биол. наук. Тарту, 1973

19. Косяков Г1. Н. Иммунология изоангигенов и изоантител.// М.: Медгиз, 1965

20. Кошаров O.A. Совершенствование технологии воспроизводства лошадей в конных заводах. Автореф. дисс. На соискание ученой степени канд. с./х. наук, Дивово, 2007

21. Максименко В. Ф. Генетический полиморфизм групп крови, типов некоторых белков и ферментов у ярославского скота и возможности его использования в селекции. Автореф. канд. дис. Ленинград; Пушкин, 1978

22. Матоушек Й. Группы крови у крупного рогатого скота// Киев.-Урожай.-1964

23. Машуров А. М. Генетические маркеры в селекции животных.// М.: Наука, 1980

24. Мемедейкин В. В. Иммунобиологические особенности лошадей-продуцентов в аспекте повышения эффективности получения моноспецифических сывороток-реагентов.// Автореф. на соиск.к.с.-х. наук. Дивово 1997

25. Меркурьева Е.К. Биометрия в селекции и генетике сельскохозяйственных животных.- М.: Колос, 1970

26. Методика определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений. МСХ СССР, Москва, Колос, 1980

27. Методические рекомендации определения экономического эффекта генетической аттестации животных. ВИЖ, Дубровицы, 1991

28. Мешкаускас И. И. Изучение групп крови у литовских пород скота и их применение в племенной работе: Автореф. дисс. .канд.наук. — Каунас, 1967

29. Монаенков А. М. Физиологический анализ фактора индивидуальности в процессах иммунитета. Автореф. докт. дис. М.,1965

30. Незлин Р. С. Строение и синтез антител. // М., «Наука», 1972

31. Никитин В. Д. Отбор и иммунологическая подготовка лошадей на месте их заготовки при производстве лечебно-профилактических сывороток. Автореф. канд. дис. М., 1970

32. Павличенко В. П. Изменчивость групп крови в популяциях свиней и ее связь с хозяйственно — полезными признаками.// Автореферат дисс. доктора биол. наук/ Л.-Пушкин.-1975

33. Петров Р. В., Хаитов Р. М., Атауллаханов Р. М. и др. Иммуногенетика и искусственные антигены./ АМН СССР.-М.: Медицина, 1983

34. Попов H.A., Якушенков А. М. Методические рекомендации по формированию генетической структуры стада и совершенствованию племенных качеств скота с использованием систем групп крови // Дубровицы-1997

35. Потапова Д. В. Повышение эффективности иммунизаций при получении моноспецифических сывороток реагентов у лошадей.// Авгореф. дисс. .канд. сельскохозяйственных наук. — ВНИИК, 1989

36. Прокоп О., Гелер В. Группы крови человека.: Пер.с нем.// М.: Медицина, 1991.

37. Рубашкин В. Я. Кровяные группы.// Госиздат М.-Л., 1929

38. Сердюк Г. Н. Иммуногенетика свиней: теория и практика.- Санкт-Петербург: Лекс-Стар, 2002

39. Сердюк Г. Н., Павличенко В. П. Иммуногенетические методы повышения сохранности молодняка свиней в промышленных комплексах // Проблемы увеличения производства свинины: Тез. докл. Всесоюзн. науч.-техн. совещ.- М.: Госагропром, 1985.

40. Сороковой П. Ф. и др. Генетический полиморфизм групп крови у отечественных пород крупного рогатого скота.// Генетический полиморфизм групп крови и белков у сельскохозяйственных животных. Сборник научн. трудов ВИЖ/ Дубровицы. 1968.

41. Сороковой П. Ф., Машуров А. М., Будникова А. В. Некоторые результаты изучения генетических маркеров у крупного рогатого скота. В кн: «Исследования по ртммуногенетике и биохимическому полиморфизму сельскохозяйственных животных» Дубровицы, 1972, вып. 26

42. Стур И., Брий Н., Шлегер С. В. Заметки об изготовленирт тест-сыворотки для определения групп крови// Материалы XVI Международной конференции по группакм крови и биохимическому полиморфизму животных — Л.: Наука, 1979 — Т2.

43. Сухова Н. О. Некоторые результаты исследований по совершенствованию иммуногенетических методов и эффективности их применения в свиноводстве.// ВИЖ. Дубровицы, 1972. —Вып.26.

44. Терентьева А. С., Безенко С. П. Получение изоиммунных эритроцитарных сывороток свиней.// Ветеринария 1970 - №1 -с.10.

45. Тихонов В. Н. Изучение групп крови животных. Новосибирск: СО АН СССР, 1964

46. Тихонов В. Н. Использование групп крови при селекции животных (с основами иммуногепетики). -М.: Колос, 1967.

47. Тихонов В. Н., Бобович В. Е. Внутрихромосомное картирование нового гена многоплодия домашних и диких свиней, оклады Российской академии сельхоз. наук.-1995-№5

48. Тихонов В. Н. и др. Иммуногенетическое изучение некоторых пород свиней, разводимых в СССР.// Породы свиней в СССР. М.: Колос, 1970.

49. Холевинский Г. и др. Группы крови местных польских лошадей//Материалы XVI Международной конференции по группам крови и биохимическому полиморфизму животных// JI.-1979 — Т.З

50. Храброва Л. А. Генетические маркеры в селекции лошадей// Наше племенное дело. № 5-6 2001

51. Шадманов С. И. Полиморфные системы крови крупного рогатого скота и их использование в селекции.// Автореферат дисс. учен. Степени докт. С.-х. наук/ М.-1979.

52. Шадманов С. И., Берникова H.H. Группы крови черно-пестрого скота и их значение в селекции.-В кн.: «Кормление и разведение животных». Одесса: ОСХИ, 1972

53. Шадманов С. И., Егоров С. И. Влияние некоторых факторов на образование изоантител у крупного рогатого скота//достижения молодых ученых и специалистов в интенсификации сельскохозяйственного производства / Тезисы докладов. -Л., 1972

54. Шемарыкин Е. И. Антигены групп крови и их концентрация у лошадей разных пород // Воспроизводство и улучшение племенных качеств конского поголовья. Сборник научных трудов ВНИИ коневодства, 1979

55. Шемарыкин Е. И. Группы крови лошадей и их использование в селекционной работе: Автореф. дисс.канд. биол. наук. Л.Пушкин, 1981.

56. P. Aguilar, D. F. Andres Cara, J. C. Meriaux The Spanish Pure Bred horse: a new combination of factors in the D blood group system// Animal Genetics, v. 18 (1987), suppl.l

57. Andersen E. A study of blood groups of the pig// Thesis. Munksgaard. Copenhagen, 1963

58. Andersen E. Blood groups in pigs.// Annals of the New York Academy of Sciences 1997

59. Ascoli Munch, med. Wsehr., 1901

60. Avon Animal Blood Groups and Biochemical Genetics 5, 1974

61. Bailey E. Prevalence of anti-red blood cell antibodies in the serum and colostrums of mares and its relationship to neonatal isoerythrolysis.// Am J. Vet. Res., 1982

62. Bialosuknia W., Kaczkowski D. Recherches sur les groupes serologiques chez les mounts.// C. r. Soc. boil., 1923

63. Bowling A. T. Three new factors which split the blood group Dcgm of the horse.// Animal Genetics, v. 18 (1987), suppl. 1

64. Bowling A. T., Ewalt R. The A system of horse erythrocyte alloantigens: a new allele and another look at factor Ac.// Animal Genetics, 1988, 19

65. Bowling A. T., Nickel L. S. New A system allele of red cell alloantigens in Paso Fino horses.// Animal Genetics, 1992, 23.

66. Braend M. Blood groups of cattle in norway serological and genetical studies.// Oslo Scand. Bladforbag.-1959.

67. Briles W. E., Briles R. W., Taffs R. E., Stone H. A. Resistance to a malignant lymphoma in chickens is mapped to a subregion of major histocompatibility (B) complex.// Science.-1983-219

68. Bruner D. W. et al. Jeberic foals. J. Omer.vet. med. Ass.-1948,112

69. Busch B. Thamm J. Utersuhungen über die Blutgruppen beim Schwein// Arch. Tierzucht, 1970, Bd 13. №1

70. Caroli J. Bessis M. Sur La cause et le traitement de l'ictere grave des muletons nouveau nes.// C.R. Acad.Sci, 1947, 224

71. Coombs R. R. et al. Hemolytic disease of newborn foals due to isoimmunization of pregnancy J. Hyg. 1948,46

72. Cothran E. G., Mc Clure J. W. Genetic differentiation within American Standardbred horses associated with gait// Animal Genetics 18, 1987 suppl.l

73. Decastello A., Sturli A. Über die isoagglutinine im Serum gesunder und kianker Menschen.// Munch, med. Wschr., 1902,49

74. Dubrovskaya R. M., Potapova D. V. Improvement of immuization efficiency when producing monospecifici reagents in horses.// 25th Conference of IS AG, 1989

75. Dujarric de la Riviere R., Kossovitch N. Sur les groups sanguins des chevaux.// C. r. Soc. boil., 1927, v. 47

76. Dungern E., Hirschfeld L. Uber Vererbung Bruppenspezifischer Strukturen des Blutes.// Immunol. Forsch. 1910. Bd.6.

77. Eisenberg Wien. Klin. Wschr., 1901

78. Erlich P., Morgenroth J. Veber Haemollysine // Berlin.- Klin. Wochenschrift.-1899.

79. Franks D. Horse blood groups and heamolytic diseases of the newborn foal.// Ann. N. Y. Acad. Sei. 1962. - V. 97.- №1.

80. Friedenreich V. Eine bisher unbekannte Blutgruppeneigenschall (A3). -Z. Immun, forsch, 1936

81. Gally J. A., Edelman G. M. The genetic control of immunoglobulin synthesis.//Annual Rev. Genet., 1972, 6

82. Gammelgaard A., Marcussen P. V. Nachweis eines vierten allelomorphen A-Gens (A4)// Z. Immun.-forsch.,1940.

83. Hektoen L. J. infect. Dis., 1907,4

84. Hesselholt M. Studies on blood groups and serum types of the Icelandic horses.// Acta Vet. Scand., 1966, №7

85. Hirszfeld L., Przesmycki F. Isoagglutinations des globule rougers chez cheveaux.// C. r. Soc. boil., 1923, v. 89

86. Jansky J. Sbornik Klin., 1906

87. Johnson Mc Clure J., Koch C., Traub Dargatz J. Characterization of a red blood cell antigen in donkeys and mules associated with neonatal isoerytrolysis.// Animal Genetics 1994 25

88. Kaempffer A. Uber die Vererbung der Blutgruppen des Schweines.// Zeitschrift fur inductive Abstammungs u. Verer — bungslehre. 1932. -№61.

89. Klein A. Beiträge zur Kenntnis der Agglutination rother Blutkörperchen.// Wien. Klin. Wochenschr., 1902, Bd. XV

90. Landous L. Die Transfusion des Blutes: Beitrade zur Transfusion des Blutes//F.C.V. Fogel-Leipzig 1875

91. Landsteiner C. Über Agglutinationserscheinungen normaler menschlicher.// Wien Klin. Wschr.,1901

92. Landsteiner K., Levine P. Further observations on individual differences of human blood.// Proc. Soc. exp. Biol N.Y., 1927, v. 24

93. Landsteiner K., Wiener A.S. An agglutinable factor in human blood recognized by immune sera for rhesus blood.// Proc. Soc. exp. Biol N.Y., 1940

94. Larsen B., Jensen N. E. Association of the M blood group system with bowine mastitis.//Animal Blood Groups and Biochemical Genetics, v. 16 ,1985.

95. Lederer E. Immunostimulation recent progress in the study of natural and synthetic immunomodulators derived from the bacterial cell wall.// In: Progr. Immunol. Eds. M. Fougerau. J.Dausset. New York - London: Acad, press., 1980

96. Lehnert E. Ein Beitrad zur Kenntnis der Bluttypen des Pferdes mit Hielfe erteigener, hochwerliger, gruppensrezifischer isoimmunsera.// Aead. Abb. Almquist. Tiksell. Uppsala. 1939

97. Levin P., Newark N. J., Stetson R. S. JAMA, 1939, 113,126

98. Little R. B. Isoagglutinins in the of cattle.// J. Immunol. 1929.1. V.17.

99. Meriaux J. C., Podliachouk L. Additional factors Af and Ag in the A blood group system of the horse.// Animal Blood Groups and Biochemical Genetics 1981.-V. 12. -№1.-S. 75-7.

100. Moss W. L. Studies on isoagglutinins and isohemolysins.// Bull Johns Hopk. Hosp., 1910

101. Osterhoff D. R. Bepaling van blodgroepe bi j huistiere.// J. Afr. Vet. Med. Ass. 1958. -№1.

102. Panisset L., Verge V. Sur Pexistence des groupes Sanguins chezles animaux.// C. r. Soc. boil., 1922, v. 87, C. r. Soc. boil., 1923, v. 89. Paris.

103. Podliachouk L. Les antigens de groups sanguins equides et leuer transmission hereditaire.// Université de Paris. Thesis. - 1957. - P. 26.

104. Rase R. R. Techniques in Blood Grouping.// Dunsford Bowlly,1955

105. Rendel J., Neimann Sorensen A., Tolle A. Blutgruppen Unterscuchugen bei Rind.// Tierzuczt und Zuchtungsbio1. - 1957. - №1. - Bd. 70.

106. Sandberg K. Blood typing of horses: current status and application to identification problems.// In: Proceedings of the 1st World Congress of Genetics Applied to Livestock Production (Madrid, 1974).

107. Sandberg K. ISAG Horse Blood Typing Nomenclature.// Departament of Animal Breeding and Genetics. Swedish University of Agricultural Sciences Uppsala Sweden. — 1994.

108. Sanger R., Race R. R. An antibody which subdivides the human MN blood groups.//Heredity, 1948

109. Schurmer S. Blutgruppen Haustiere.// Rassenphysiol. 1935. - Bd. 7.

110. Scott A. M., Jeffcott L. B. Haemolytic disease of the newborn foal// Veterinary Record, 1978.

111. Stormont C., Owen R. D., Irwin M. R. The B and I systems of bovine blood groups.// Genetics, 1951, v. 36

112. Stormont G., Suzuki Y. Genetic systems of blood groups in horses.// Genetics, 1964. V. 50.

113. Suzuki Y. Studies on blood groups of horses.// Memoirs of the Tokyo University of Agriculture 20, 1-5, 1978.

114. Suzuki Y., Morris B., Dadd J. Inheritance of a new factor SL3 thatot iindentifies a phenogroup d in the D system of horses.// Animal Blood Groups and Biochemical Genetics — 1985. — V.16. -№1.

115. Szent Ivanyu T., Szabo St. Blood groups in pigs.// Acta Vet. Acad. Sci. Hungarical, Budapest. - 1954. - v. IV. - №4.

116. Taussing M. J. Antigenic competition.// In: The immune system. Eds. M. J.Hobart, I. Mc Conell.-Oxford: Blackwell Scientific publ., 1978

117. Taussing M. J. Antigen specific T-cell factor in cell cooperation and genetic control of the immune recognition.- New York, 1975

118. Todd C. H., White R. G. On the hemolytic immune isolysins of the ox and their relation to the question of individuality and blood relationship.// J. Hyg., 1910, v. 10.

119. Tolle A., Urbaschek B. Nachweis und Häufigkeit der Blutgruppenfactoren bei Rindern verschidener Rassen.// Deutch. Tierarztl. Wschr. 1956. - Bd.63. - №5/6.

120. Trommershausen Smith A., Stormont C., Suzuki Y. Alloantibodies: their role in equine neonatalisoerythrolysis.//Proceedings first International Symposium on Equine Hematology. 1975

121. Walch R., Montgomery C. A new human isoagglutinin subdividing the MN blood groups.// Nature, 1947,v. 160

122. Wesceszky O. Untersuchungen über die gruppenweise Hämagglutination bei Menschen.//Biochem. Z., 1920, Bd. 107