Совершенствование метода криоконсервации семени крупного рогатого скота с использованием биологически активных веществ

Евтух, Виталий Прокофьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Совершенствование метода криоконсервации семени крупного рогатого скота с использованием биологически активных веществ
ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование метода криоконсервации семени крупного рогатого скота с использованием биологически активных веществ"

На правах рукописи

ЕВТУХ ВИТАЛИЙ ПРОКОФЬЕВИЧ

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА КРИОКОНСЕРВАЦИИ СЕМЕНИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

06.02.01. - Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Лесные Поляны, Московской области 2004

Работа выполнена в ФГНУ Всероссийском научно-исследовательском институте племенного дела.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор ЕРОХИН Анатолий Сергеевич

доктор биологических наук, профессор КЛИНСКИЙ Юрий Дмитриевич

Ведущее учреждение:

доктор сельскохозяйственных наук, профессор

БОРОЗДИН Эдуард Константинович

Российская академия менеджмента в животноводстве.

Защита диссертации состоится 19 ноября 2004 г. в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 220.017.01. при Всероссийском научно-исследовательском институте племенного дела

Адрес института: 141212, Московская область, Пушкинский район, п. Лесные Поляны, ВНИИплем

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИплем.

Автореферат разослан 12 октября 2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор

Ерохин А. С.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Искусственное осеменение животных является высокоэффективным методом улучшения породных и продуктивных качеств животных путем использования семени высокоценных племенных производителей. Огромное значение для практики искусственного осеменения и размножения животных имеет метод хранения спермы производителей в глубо-козамороженном состоянии. При этом возможно сохранять сперму выдающихся производителей в течение очень продолжительного времени и производить ее транспортировку на любые расстояния.

В большинстве стран мира для искусственного осеменения крупного рогатого скота используется криоконсервированная сперма. Но несмотря на достаточно высокую эффективность этого метода в молочном скотоводстве, имеется еще ряд малоизученных вопросов, которые смогли бы повысить эффективность осеменения коров и телок замороженной спермой. В частности, в процессе замораживания спермы быков погибает более половины половых клеток. Изучение причин данного явления и разработка более совершенных синтетических сред для замораживания спермы быков, позволило бы повысить выживаемость сперматозоидов в процессе криообработки и их оплодотворяющую способность.

Кроме того, результативность искусственного осеменения коров и телок криоконсервированной спермой все еще остается не достаточно высокой.

В этой связи необходимы дальнейшие исследования в области совершенствования синтетических сред для замораживания спермы быков и повышения результативности искусственного осеменения крупного рогатого скота с помощью различных биологически активных соединений.

В последние годы появились данные о важной роли микроэлемента селена в процессах сперматогенеза у самцов. Вопросы о влиянии различных препаратов селена на воспроизводительную функцию быков и криоустойчи-вость их семени изучены в недостаточной мере и требуются дальнейшие углубленные исследования в данном направлении.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы является совершенствование синтетической среды для глубокого замораживания спермы быков и улучшение оплодотворяемости коров с помощью биологически активных веществ.

Для выполнения этой цели в диссертации изучались следующие вопросы:

усовершенствовать синтетическую среду для замораживания спермы быков путем исключения из ее состава продуктов животного происхождения;

выяснить защитный эффект при замораживании спермы быков сухого соевого лецитина;

изучить протективное влияние низкомолекулярных тиольных соединений при замораживании спермы быков;

провести сравнительное изучение криозащитных свойств некоторых синтетических жирорастворимых антиоксидантов на сперматозоида: быков;

проанализировать криопротективную активность эфира глицерина при замораживании спермы быков;

исследовать влияние парентерального и перорального введения быкам селеноорганического препарата ДАФС-25 на биохимические показатели спермы и устойчивость сперматозоидов к глубокому замораживанию;

выяснить эффективность однократного внутримышечного введения коровам в летний период синтетического воднорастворимого анти-оксиданта амбиола на результативность искусственного осеменения и биохимические показатели крови.

Научная новизна исследований. Разработана усовершенствованная Трис-глюкозо-лимоннокислая синтетическая среда для замораживания спермы быков. Впервые изучено криозащитное влияние на сперму быков сухого соевого лецитина и эфира глицерина. Исследовано защитное влияние низкомолекулярных тиольных соединений при замораживании спермы быков. Проанализировано криопротективное влияние трех синтетических жирорастворимых антиоксидантов на сперматозоиды быков. Показано, что введение быкам- производителям с пониженной подвижностью сперматозоидов селе-ноорганического препарата ДАФС-25, способствует повышению активности в семенной плазме антиоксидантного фермента глутатионпероксидазы и увеличению живучести замороженно-оттаянных сперматозоидов. Установлено положительное влияние инъекции коровам перед осеменением синтетического воднорастворимого антиоксиданта амбиола на их оплодотворяемость.

Практическая значимость. Усовершенствованная Трис-глюкозо-лимоннокислая синтетическая среда для замораживания спермы быков, повышает биологическую полноценность сперматозоидов и улучшает результативность осеменения коров. Использование в составе данной среды сухого соевого лецитина, вместо желтка куриного яйца, снижает возможность переноса инфекционных заболеваний при искусственном осеменении животных. Однократное внутримышечное введение коровам перед осеменением в летний период антиоксиданта амбиола способствует повышению результативности их искусственного осеменения.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на: Ученом Совете ВНИИплем, 2002-2003гг; Научно-производственной конференцией на ВВЦ, 2002 г.;

Расширенной межотдельской конференцией ВНИИплем, 2004 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы.

сертация включает 22 таблицы. Список литературы содержит 223 источника, в том числе 128 на иностранном языке.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные исследования выполнены в лабораторий криобиологии и физиологии размножения животных ВНИИплем, на Ногинском племпредприятии Московской области и ряде хозяйств Московской области.

Все эксперименты проводились согласно прилагаемой схемы исследований.

Лабораторные исследования были проведены на сперме голштинских быков. При разработке усовершенствованной синтетической среды для замораживания спермы быков, изучали комбинацию различных соотношений изотонических растворов Трис-(оксиметил)-аминометана, глюкозы и лимонной кислоты (Милованов В.К., 1962).

Влияние различных веществ на криоустойчивость спермы быков определяли по подвижности и живучести оттаянных сперматозоидов вне организма и по результатам искусственного осеменения коров.

Для замораживания семени быков использовали эякуляты с подвижностью 80-85 % и концентрацией сперматозоидов не менее 1 млрд/мл. Замораживали сперму в виде гранул объемом 0,2 мл на пластине сухого льда, после чего помещали в жидкой азот для хранения. Оттаивали сперму в 3 % растворе цитрата натрия. Коров осеменяли двухкратно в течение половой охоты. Результативность осеменения учитывали по данным ректального исследования.

Содержание АТФ в сперматозоидах быков определяли биолюминис-центным методом с помощью портативного люминометра ЕМШТЕ-10 3А по методу Угаровой (1991).

Концентрацию селена в семенной плазме быков определяли с помощью атомно-абсорбционной спектрометрии.

Анализ активности глутатионпероксидазы в семенной плазме быков проводили в сопряженной глутатионредуктазной системе, с использованием гидроперекиси третбутила в качестве субстрата, на химическом анализаторе ФП-901 фирмы Labsystem OY (Финляндия).

В экспериментах по изучению влияния обработки быков селеном на криоустойчивость их сперматозоидов, использовали селеноорганический препарат ДАФС-25 (диацетофенонилселенид).

В опытах по изучению оплодотворяемости коров после однократной инъекции антиоксиданта, применяли синтетический водно-растворимый ан-тиоксидант амбиол.

Биометрическую обработку данных проводили по Е.К. Меркурьевой.

СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ

Влияние различных биологически активных веществ на:

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Влияние различных веществ на криоустойчивость

спермы быков 3.1.1. Влияние неэлектролита и буферных соединений на живучесть сперматозоидов быка

Известны различные синтетические среды для разбавления и хранения спермы быков в глубокозамороженном состоянии, в состав которых входят различные сахара, соли, буферные соединения, желток куриных яиц и крио-протекторы (Платов Е.М.. 1973; Пакенас П.И. и др., 1980; Наук В.А., 1982; Курбатов А.Д. и др., 1988; Davis L.e.a,, 1963; Steinbach I., Foot R., 1964; Watson P.F., 1995; Vishwanath R., Shannon P., 2000).

Однако недостатком данных сред является то, что большое количество сперматозоидов (>50%) погибает в процессе замораживания-оттаивания и оп-лодотворяемость коров от криоконсервированной спермы не превышает 5060%.

В этой связи актуальной задачей является дальнейшее совершенствование синтетических сред для замораживания спермы быков с целью повышения их защитных свойств.

Основной задачей наших экспериментов являлась разработка усовершенствованной среды для замораживания спермы быков.

• В качестве неэлектролита за основу среды мы взяли глюкозу. В качестве веществ, оказывающих буферное действие, были использованы Трис-(оксиметил)-аминометан и лимонная кислота.

В первом эксперименте мы выясняли влияние различных соотношений Трис-(оксиметил)-аминометана и лимонной кислоты на подвижность и живучесть сперматозоидов быка, подвергнутых замораживанию. Для этого сперму разбавляли средой, состоящей из разных концентраций триса и лимонной кислоты. При этом в разбавитель добавляли 20 мл желтка и 6% глицерина на 100 мл дистиллированной воды.

Результаты этих опытов показали, что наиболее оптимальным соотношением является 2,6-2,8 г Трис-(оксиметил)-аминометана и 1,4 г лимонной кислоты на 100 мл дистиллированной воды.

В дальнейших экспериментах нами было выяснено, что лучшая подвижность и живучесть сперматозоидов быка после замораживания, была получена в варианте, где к 2,7 г триса и 1,4 г лимонной кислоты добавили 0,8 г глюкозы. При этом все вещества растворялись в 100 мл дистиллированной воды, с добавлением желтка и глицерина.

Наши исследования показали, что лучшим вариантом среды является следующее соотношение изучаемых веществ: вода дистиллированная - 100 мл; Трис-(оксиметил)-аминометан - 2,75 г; глюкоза - 0,8 г; лимонная кислота - 1,4 г.

После этого мы уточнили защитное влияние разных концентраций глицерина в составе данной среды. Эксперименты показали, что оптимальной концентрацией глицерина, обеспечивающей высокую подвижность и живучесть сперматозоидов в усовершенствованной среде, являются 4-6 мл глицерина на 100 мл среды.

Анализ влияния разных концентраций желтка куриного яйца выявил, что оптимальной концентрацией является 20-25 мл желтка на 100 мл среды.

В результате проведенных исследований нами разработана усовершенствованная Трис-глюкозо-лимоннокислая среда для замораживания спермы быков следующего состава:

1. Вода дистиллированная - 100 мл

2. Трис-(оксиметил)-аминометан - 2,75 г

3. Глюкоза-0,8 г

4. Лимонная кислота -1,4 г

5. Глицерин - 6 мл

6. Желток куриного яйца - 20 мл

7. Полиген-30мг

Сравнительное изучение криоустойчивости спермы быков в усовершенствованной среде и в контрольной лактозо-глицерино-желточной среде показано в таблице 1.

Таблица 1

Влияние разных сред на криоустойчивостъ сперматозоидов быков

Синтетическая среда N Подвижность сперматозоидов, в баллах Абсолютный показатель живучести при 37°С,усл. ед.

до замораживания после оттаивания

1. Трис-глюкозо-лимоннокислая 8 8,1 ±0,6 4,5 ± 0,3 17,4 ±0,7*

2. Лактозо-глицерино-желточная 8 8,1 ± 0,5 4,1 ±0,4 15,1 ±0,9

*-Р<0,05

Как видно из таблицы 1, предложенная среда способствует повышению подвижности и живучести оттаянных сперматозоидов по сравнению с лактозо-глицерино-желточной средой, соответственно, на 9,7% и 10,8%.

3.2. Изучение криозащитного влияния на сперматозоиды быков низкомолекулярных тиольных соединений

На сперме разных видов сельскохозяйственных животных было установлено, что при криоконсервации в половых клетках может индуцироваться окисление сульфгидрильных групп (8И-групп) белков и низкомолекулярных тиолов, что способствует повреждению мембранных белков, инактивации ряда ферментов и нарушению энергетического метаболизма в сперматозоидах (Курбатов А. Д. и др., 1988).

Целью наших исследований было изучение криозащитного влияния на сперму быков ряда тиольных соединений: унитиола, восстановленного глута-тиона, цистеина, меркаптоэтанола и дитиотреитола. Защитное влияние данных соединений изучали на фоне использования в составе среды различных концентраций желтка.

Результаты опытов с использованием лактозо-глицерино-желточной среды показали, что при замораживании спермы быков с 5% желтка, практически все тиолы оказали определенное защитное влияние. При замораживании спермы в этой же среде, с добавлением 10% желтка, криозащитное влияние тиолов выражалось в меньшей степени. Подвижность сперматозоидов сразу после оттаивания во всех группах была практически одинаковой. При повышении концентрации желтка в ЛГЖ среде до 20%, защитное влияние тиолов отмечалось в довольно низкой степени.

Полученные данные свидетельствуют, что повышенные концентрации желтка оказывают благоприятное защитное влияние на сперматозоиды быков при замораживании, вероятно, в результате наличия в составе желтка куриных яиц эндогенных тиолов, таких, как: восстановленный глутатион и цистеин.

При замораживании спермы быков в Трис-глюкозо-лимоннокислой среде, защитный эффект тиолов был выражен слабее, по сравнению с ЛГЖ средой.

В частности, при использовании данной среды с 5% желтка, более заметный защитный эффект оказали восстановленный глутатион и меркаптоэтанол. В этих группах абсолютный показатель живучести замороженно-оттаянных сперматозоидов был выше на 15% и 12,7%, соответственно, по сравнению с контрольной группой.

При увеличении концентрации желтка в данной среде до 10-20%, защитного эффекта тиолов на подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов не установлено.

Результаты наших экспериментов свидетельствуют о том, что использование для замораживания спермы быков более совершенной Трис-глюкозо-лимоннокислой среды, оказывает самостоятельное защитное влияние на сохранность SH-групп в сперматозоидах. Следовательно, дополнительное введение тиолов в состав этой среды является нецелесообразным.

3.3. Влияние синтетических жирорастворимых антиоксидантов на устойчивость сперматозоидов быков к замораживанию

Известно, что в половых клетках животных при криоконсервации могут активизироваться процессы перекисного окисления липидов, что способствует повреждению плазматических мембран, ДНК, белков и других биомолекул в сперматозоидах. Результатом этого может быть снижение оплодотворяющей способности криоконсервированной спермы животных (Наук ВА, Гуськов А., 1983; AitkenR.e.a,, 1989).

В задачу наших исследований входило изучение защитного влияния синтетических жирорастворимых антиоксидантов (ИХФГАН-3, ИХФГАН-4 и ИХФГАН-5) на подвижность и живучесть сперматозоидов быка после замораживания в Трис-глюкозо-лимоннокислой среде.

Результаты изучения криозащитного влияния различных дозировок ан-тиоксидантов при глубоком замораживании спермы быков показали, что все исследуемые антиоксиданты не оказали положительного влияния на подвижность и живучесть замороженно-оттаянных сперматозоидов.

3.4. Анализ криопротективного влияния на сперму быков модифицированного глицерина

В настоящее время основным криопротектором при замораживании спермы сельскохозяйственных животных является глицерин.

Однако наряду с защитным действием, глицерин может оказывать и отрицательное влияние на биологическую полноценность сперматозоидов (Вар-навский А.Н., 1970;1978; Slavic Т., 1987).

В этой связи проводятся исследования по изучению возможности замены глицерина в составе криоконсервирующих сред на другие протекторы.

Имеются сообщения о высоком защитном влиянии некоторых эфиров глицерина при замораживании клеток костного мозга крыс и тромбоцитов человека.

Учитывая, что на сперме быков, криозащитная эффективность эфиров глицерина не изучалась, целью наших исследований было выяснение защитного влияния эфира глицерина при глубоком замораживании спермы быков.

Результаты опытов по изучению влияния различных концентраций эфира глицерина на сперму быков представлены в таблице 2.

Таблица 2

Сравнительное влияние глицерина и эфира глицерина на криоустойчивостъ

спермы быков

Протектор и его концентрация, в % N Подвижность сперматозоидов, в баллах Абсолютный показатель живуче-

,1О после сти при 37°С,

замораживания оттаивания усл. ед.

Эфир глицерина

1 5 8,2±0,5 4,5±0,2 16,2±1,0*

2 5 8,2±0,5 4,4±0,2 16,2±0,7*

3 5 8,3±0,4 4,5±0,1 15,1±0,4*

4 5 8,2±0,4 4,1±0,3 14,0±0,9*

5 5 8,1±0,2 4,1±0,2 11,0±0,7*

6 5 8,0±0,4 4,0±0,1 8,0±0,4

7 5 8,1±0,6 3,5±0,2 6,4±0,2

8 5 8,0±0,3 3,0±0,1 5,7±0,6

Глицерин

1 6 8,0±0,5 4,0±0,3 10,2±0,7

2 6 8,0±0,2 4,2±0,3 11,0±0,4

3 6 8,2±0,2 4,2±0,2 13,2±0,8

4 6 8,2±0,4 4,5±0,3 14,6±0,9*

5 6 8,1±0,5 4,5±0,1 14,8±0,7*

6 6 8,2±0,7 4,5±0,1 15,7±0,7*

7 6 8,3±0,5 4,0±0,2 12,4±0,4

8 6 8,0±0,3 3,8±0,3 10,5±0,9

*-Р<0,05

Анализ таблицы 2 показывает, что эфир глицерина оказывает выраженный криозащитный эффект на сперматозоиды быков при их глубоком замораживании. Причем, больший криозащитный эффект эфира глицерина проявляется при низкой его концентрации в составе среды: 1-3%. Повышение его концентрации приводило к снижению подвижности и живучести оттаянных сперматозоидов.

Введение эфира глицерина в состав Трис-глюкозо-лимоннокислой среды в концентрации 1-2%, оказывает практически такой же защитный эффект при замораживании сперматозоидов быка, как и применение оптимальной концентрации глицерина (5-6%).

Относительно времени экспозиции криопротекторов со сперматозоидами перед замораживанием, существует неоднозначное мнение.

Поэтому мы решили провести исследования по влиянию времени экспозиции данного эфира глицерина со спермой быков на их устойчивость к замораживанию. Эфир глицерина вводили в разбавленную и охлажденную до 4°С сперму за определенное время до замораживания.

Результаты опытов показали, что время экспозиции эфира глицерина со сперматозоидами быков перед замораживанием, не оказало существенного влияния на подвижность и живучесть оттаянных сперматозоидов.

3.5. Изучение криозащитного влияния на сперму быков сухого соевого лецитина

В последние годы предпринимаются попытки исключения из состава синтетических сред для замораживания спермы животных веществ животного происхождения (молочного белка, желтка куриных яиц, лактозы и т.д.), с целью снижения риска переноса различных инфекционных заболеваний при искусственном осеменении животных (Vishwanath R., Shannon P., 2000; Christensen P.e.a, 2000; Thibier M., Guerin В., 2000).

В этой связи мы изучали возможность замены желтка куриных яиц в составе усовершенствованной Трис-глюкозо-лимоннокислой среды на сухой фосфолипидный экстракт из соевых бобов.

Было изучено криозащитное действие на сперматозоиды быков двух видов лецитинового порошка из соевых бобов. Первый вид лецитина выпускается под торговой маркой «Центролекс Ф» (Германия).

Изучение влияния различных дозировок этого препарата на устойчивость сперматозоидов быков к глубокому замораживанию показано в таблице 3.

Как видно из таблицы 3, сухой соевый лецитин в определенных дозировках оказывает выраженный защитный эффект при замораживании спермы быков. Более высокий защитный эффект оказал лецитин в концентрациях 6-10% в составе среды. При введении в разбавитель этого препарата в концентрации 9 и 10%, живучесть замороженно-оттаянных сперматозоидов была сравнима с контрольной группой, где использовали желток куриного яйца. В этих группах отмечена и более высокая подвижность сперматозоидов сразу после оттаивания: 4,5 балла против 4,2 балла в контроле.

Использование низких концентраций лецитина (1-4%), также способствовало сохранению довольно высокой подвижности сперматозоидов сразу после оттаивания, но абсолютный показатель живучести оттаянных сперматозоидов в этих группах был ниже.

Таблица 3

Влияние сухого соевого лецитина «Центролекс Ф» на криоустойчивость спермы быков

Концентрация N Подвижность сперматозоидов, в баллах Абсолютный показатель живуче-

лецитина в среде, % до заморажи- после сти при 37°С, усл.

вания оттаивания ед.

1 5 8,1 ±0,3 3,0 ±0,1 3,5 ±0,3*

2 5 8,1 ±0,4 4,0 ±0,2 4,4 ±0,2*

3 5 8,0 ±0,2 4,0 ±0,2 5,0 ±0,3*

4 5 8,2 ±0,5 4,0 ±0,1 9,0 ±0,6*

5 5 8,3 ±0,4 4,0 ±0,1 10,8 ±0,7*

6 5 8,2 ±0,4 4,2 ±0,3 14,5 ±0,9*

7 5 8,0 ±0,2 4,2 ±0,2 16,0 ±1,0

8 5 8,2 ±0,5 4,2 ± 0,3 16,7 ±0,5

9 5 8,1 ±0,3 4,5 ±0,3 19,9 ±0,8

10 5 8,3 ±0,2 4,5 ±0,2 20,1 ±1,1

Контроль (20% 5 8,2 ±0,2 4,2 ±0,2 19,2 ±0,7

желтка)

*-Р<0,05

В следующем опыте мы изучали криозащитное влияние на сперму быков другой марки сухого соевого лецитина - «^ешриг РС» (Германия).

Было установлено, что данная марка сухого лецитина, при определенных концентрациях, также оказывает заметное защитное влияние при замораживании спермы быков. Более высокая подвижность и абсолютный показатель живучести оттаянных сперматозоидов были в группах, где концентрация лецитина составляла 8-10%. Но при этом, живучесть сперматозоидов в этих группах была ниже, чем в контроле, соответственно, на 21,4%, 24% и 22,5%. Следовательно, сухой лецитин «Центролекс Ф» оказывает более заметный защитный эффект по сравнению с лецитином «^еглриг РС» при замораживании спермы быков.

С целью выяснения сроков сохранения биологической полноценности сухого лецитина «Центролекс Ф» при его хранении в условиях холодильника, нами были проведены специальные эксперименты по замораживанию спермы быков с 10 % данного лецитина после определенных сроков его хранения.

При этом установлено, что хранение соевого лецитина в течение 9 месяцев при 4°С, не оказало отрицательного влияния на подвижность оттаянных сперматозоидов и их живучесть.

3.6. Влияние состава синтетических сред на уровень АТФ в нативных и оттаянных сперматозоидах быков

Использование криоконсервированной спермы быков в практике искусственного осеменения требует дальнейшей разработки более точных методов оценки ее биологической полноценности, так как оценка только по подвижности и живучести сперматозоидов не является надежным показателем оплодотворяющей способности.

Поэтому в задачу наших исследований входило изучение динамики изменения концентрации АТФ в оттаянных сперматозоидах быков, подвергнутых замораживанию в усовершенствованной Трис-глюкозо-лимоннокислой среде в сравнении с лактозо-глицерино-желточной средой (таблица 4).

Таблица 4

Содержание АТФ в оттаянных сперматозоидах быка и их подвижность при криоконсервации вразличных средах (п=10)

Образцы сперматозоидов ЛГЖ среда Трис-глюкозо-лимоннокислая среда

Подвижность сперматозоидов, баллов Концентрация АТФ, нмоль/108 спермиев Подвижность сперматозоидов, баллов Концентрация АТФ, нмоль/108 спермиев

До замораживания 8,0 ±0,7 15,7 ±0,6 8,3 ±0,4 16,2 ±0,5

После оттаивания

5мин 4,0 ±0,2* 8,2 ±0,6* 4,5 ±0,3* 8,9 ±0,5*

60 мин 3,1 ±0,3* 6,4 ±0,4* 4,0 ±0,2* 7,8 ±0,6*

120 мин 2,6 ±0,3** 5,6 ±0,4** 3,5 ± 0,4* 6,7 ±0,2**

180 мин 1,6 ±0,2** 3,4 ±0,1** 2,5 ± 0,2** 4,4 ± 0,4**

*-Р<0,05;**-Р<0,01

Из таблицы 4 видно, что криоконсервация спермы быков в усовершенствованной Трис-глюкозо-лимоннокислой среде, способствует более высокой подвижности оттаянных сперматозоидов и концентрации в них АТФ, по сравнению с лактозо-глицерино-желточной средой. В частности, подвижность сперматозоидов в Трис-глюкозо-лимоннокислой среде через 5, 60, 120 и 180

минут после оттаивания, была выше, чем в ЛГЖ среде, соответственно, на 12,5 %; 29 %, 34,6 % и 56 % (Р < 0,05) А уровень АТФ в сперматозоидах, замороженных в этой же среде, в аналогичные периоды времени был выше, чем в ЛГЖ среде, соответственно, на 8,5 %, 21,8 %, 19,6 и 29,4 % (Р < 0,05)

Полученные результаты свидетельствуют о более высоких криозащит-ных свойствах усовершенствованной Трис-глюкозо-лимоннокислой среды.

3.7. Результативность осеменения коров спермой, замороженной в разных синтетических средах

На основании лабораторных экспериментов нами была разработана усовершенствованная Трис-глюкозо-лимоннокислая среда для замораживания спермы быков. Причем, было разработано два варианта этой среды: первый вариант - с желтком куриного яйца и второй вариант - с сухим соевым лецитином.

С целью выяснения влияния усовершенствованной среды на оплодотворяющую способность спермы быков, нами были проведены производственные эксперименты в хозяйствах Московской области по искусственному осеменению коров спермой, замороженной в двух вариантах этой среды в сравнении с лактозо-глицерино-желточной средой.

Результаты производственных экспериментов суммированы в таблице 5

Таблица 5

Результативность осеменения коров спермой, замороженной в различных синтетических средах

Используемая синтетическая среда Осеменено коров Стельных коров через 3 месяца, голов Оплодотворяемость коров от первичного осеменения, %

ЛГЖ среда 108 44 40,7

Трис-глюкозо-лимоннокислая среда с желтком 114 57 50,0

Трис-глюкозо-лимоннокислая среда с сухим соевым лецитином 106 50 47,2

Было выяснено, что усовершенствованная среда для замораживания спермы быков обладает более высокими криозащитными свойствами. При замораживании спермы быков в этой среде с желтком куриного яйца, оплодотво-ряемость коров была выше, чем в ЛПК среде на 9,3%.

При замораживании спермы быков во втором варианте среды с сухим соевым лецитином, оплодотворяемость коров была выше на 6,5% по сравнению с ЛГЖ средой. Это свидетельствует о возможности замены нативного желтка куриного яйца в составе синтетических сред для замораживания спермы быков на сухой соевый лецитин.

3.8. Влияние перорального и внутримышечного введения быкам-производителям селеноорганического препарата на криоустойчивость их сперматозоидов

В последние годы установлено, что недостаток селена в организме самцов может приводить к ухудшению подвижности сперматозоидов, различным морфологическим изменениям в половых клетках (Scott R.e.a,, 1998), а также к снижению их оплодотворяющей способности (Irvine D, 1996).

Дополнительная обработка быков препаратами селена может способствовать улучшению качества семени. (Слободяник В.И. и др., 2000).

В этой связи в задачу наших исследований входило изучение возможности повышения устойчивости сперматозоидов быков к глубокому замораживанию, путем обработки животных селеноорганическим препаратом ДАФС-25 (диацетофенонилселенид).

С этой целью на Ногинском племпредприятии было отобрано 6 быков, характеризующихся пониженной подвижностью сперматозоидов в нативных эякулятах. Они были разделены на две группы: по 3 быка в каждой. Первой группе быков ДАФС-25 вводили однократно внутримышечно в дозе 250 мг на животное. Второй группе - ДАФС-25 давали совместно с комбикормом, четырехкратно в течение 2 недель, в общей дозе 1000 мг препарата на быка. Контролем (n=3) служили быки с нормальными показателями подвижности сперматозоидов, которые не получали селеносодержащего препарата. У быков всех групп через определенные интервалы времени анализировали содержание селена в сперме, активность в сперме антиоксидантного фермента глутатионпе-роксидазы, а также изучали подвижность сперматозоидов до и после замораживания.

Результаты изучения содержания селена в сперме быков до и после введения ДАФС-25 показали, что у быков опытных и контрольной групп содержание селена в семенной плазме до начала эксперимента было примерно оди-

наковым, хотя у животных первой и второй группы отмечалось несколько пониженное содержание селена.

Проведенные анализы через 2 месяца после обработки быков препаратом показали, что концентрация селена в семенной плазме животных первой и второй группы увеличилась по сравнению с начальным уровнем, соответственно, на 9,8 и 7,6% (Р > 0,05). Через 3 месяца после введения ДАФС-25, концентрация селена в семенной плазме быков этих групп увеличилась на 15,6 и 15,3% (Р < 0,05).

В семенной плазме контрольных животных концентрация селена на протяжении изучаемого периода времени была практически неизменной: 112; 115 и 112 мкг/л через 30, 60 и 90 дней.

Анализ изучения активности фермента глугатионпероксидазы в семенной плазме быков в зависимости от времени после введения ДАФС-25, показал, что у быков первой группы, активность изучаемого фермента в семенной плазме через 30, 60 и 90 дней после введения препарата повысилась, в сравнении с начальным уровнем, на 29 %, 40 % и 35 %, соответственно (Р < 0,05).

У быков второй группы активность глутатионпероксидазы в семенной плазме через 30, 60 и 90 дней после введения увеличилась, соответственно, на 12,8 %; 40 % и 48 % по сравнению с начальным уровнем (Р < 0,05).

У животных контрольной группы активность фермента не изменялась в эти периоды.

Кроме того, мы изучили устойчивость сперматозоидов быков опытных и контрольной групп к глубокому замораживанию, до введения быкам селеноор-ганического препарата и через определенные промежутки времени после введения.

Введение селена быкам опытных групп не оказало положительного влияния на подвижность замороженно-оттаянных сперматозоидов во все изученные периоды времени.

Результаты изучения абсолютного показателя живучести оттаянных сперматозоидов у быков представлены в таблице 6.

Введение быкам препарата ДАФС-25 оказало некоторое защитное влияние на живучесть оттаянных сперматозоидов при обоих способах введения селена.

При этом в первой группе быков через 60 дней после введения селена, абсолютный показатель живучести оттаянных сперматозоидов повысился на 7,2%, а через 90 дней - на 10,8% по сравнению с начальным уровнем.

У быков второй группы абсолютный показатель живучести оттаянных сперматозоидов через 60 и 90 дней после введения ДАФС-25 повысился, соответственно, на 9 и 19% в сравнении с начальным периодом (Р > 0,05).

Таблица б

Изучение живучести оттаянных сперматозоидов быков до и после введения селеноорганического препарата

Абсолютный показатель живучести оттаянных

сперматозоидов при 37°С, усл.ед.

Группа быков Сроки анализа спермы

До введения Через 30 Через 60 Через 90

препарата дней дней дней

Парентеральное

введение 110+12* 112±6,7 118±5,9 122±8,4

ДАФС-25

Пероральное введе-

ние 105±9,4* 108±7,7 115±7,9 125±7,1*

ДАФС-25

Контроль 134+6,8* 136±7,8 132±5,9 140±9,7

*-Р<0,05

В контрольной группе животных живучесть оттаянных сперматозоидов была почти на одном уровне в периоды исследования.

На основании этих экспериментов можно заключить, что дополнительное введение селена быкам с пониженной подвижностью сперматозоидов в эя-кулятах, может оказывать положительное влияние на увеличение подвижности нативных сперматозоидов и повышение уровня селена и активности глутати-онпероксидазы в их семенной плазме. Кроме того, данная обработка может повышать абсолютный показатель живучести замороженно-оттаянных сперматозоидов.

3.9. Изучение возможности повышения оплодотворяемости коров в летний период

3.9.1. Влияние внутримышечного введения коровам антиоксиданта амбиола на результативность их осеменения

Рядом исследователей установлено, что в летний период отмечается снижение результативности искусственного осеменения коров (Taker H., 1982; Ron М.е.а,, 1984).

Это может быть обусловлено нарушением трофики желтого тела, увеличением уровня перекисного окисления липидов в организме коров и повышением ранней эмбриональной смертности, в результате негативного влияния теплового стресса.

Целью наших исследований было выяснение влияния однократного внутримышечного введения коровам перед осеменением синтетического вод-норастворимого антиоксиданта амбиола на их оплодотворяемость в летний период и содержание продуктов перекисного окисления липидов в крови.

Опыты были проведены в летний период в хозяйствах Московской области.

В первом опыте было сформировано 4 группы коров. Коровам 1, 2 и 3 группы за один час до первого осеменения однократно внутримышечно вводили, соответственно 5, 10 и 15 мг амбиола на животное. Контрольной группе коров в этот период однократно внутримышечно вводили 2 мл физраствора. Коров во всех группах осеменяли дважды в течение охоты.

Результаты данного эксперимента приведены в таблице 7.

Таблица 7

Результативность осеменения коров в зависимости от дозы амбиола

Группа коров Доза амбиола, мг/животное Осеменено коров Стельных от первичного осеменения

коров %

1 5 32 14 43,7

2 10 31 15 48,3

3 15 35 18 51,4

4 (контроль) - 35 14 40,0

Как видно из таблицы 7, внутримышечное введение коровам перед осеменением амбиола в дозах 10 и 15 мг на животное, способствовало повышению их оплодотворяемости на 8,3 и 11,4% по сравнению с контрольной группой.

Затем на большем поголовье животных нами было проверено влияние оптимальной дозировки амбиола (15 мг) на оплодотворяемость коров в летний период.

Результаты этого опыта представлены в таблице 8.

Таблица 8

Результативность осеменения коров после внутримышечного введения амбиола

Группа коров Доза амбиола, мг/животное Осеменено коров Стельных от первичного осеменения

коров %

Опытная 15 208 103 49,5*

Контрольная - 214 88 41,1

*-Р<0,05

Инъецирование коровам перед осеменением 15 мг амбиола на животное, способствовало повышению их оплодотворяемости на 8,4% по сравнению с контролем (Р < 0,05).

3.9.2. Содержание продуктов пероксидации липидов в крови коров до и после введения амбиола

С целью изучения влияния амбиола на концентрацию в крови коров продуктов пероксидации липидов, нами было проанализировано содержание малонового диальдегида в их крови до и после однократного введения 15 мг ам-биола на животное.

Результаты этого эксперимента показали, что концентрация малонового диальдегида в плазме крови у опытных коров была практически одинаковой через 24 и 48 часов после введения антиоксиданта, по сравнению с начальным уровнем. Следовательно, данная дозировка амбиола не оказала ингибирующего влияния на пероксидацию липидов у коров опытной группы.

В этой связи можно предположить, что положительное влияние амбиола на оплодотворяемость коров обусловлено не только его антиоксидантным действием, но и рядом других механизмов.

ВЫВОДЫ

1. Разработанная Трис-глюкозо-лимоннокислая среда для глубокого замораживания спермы быков, повышает биологическую полноценность и оплодотворяющую способность криоконсервированной спермы.

2. Установлено, что сухой соевый лецитин в оптимальной концентрации оказывает высокий защитный эффект при замораживании спермы быков, сравнимый с эффектом желтка куриного яйца. Кроме того, использование сухого соевого лецитина в составе синтетической среды, позволяет выявлять присутствие различных вирусов в криоконсервированной сперме быков с помощью метода ПНР.

3. Показано, что низкомолекулярные тиолы оказывают защитный эффект при замораживании спермы быков в лактозо-глицерино-желточной среде с низким содержанием желтка. При повышении содержания желтка в составе этой среды и при замораживании спермы в Трис-глюкозо-лимоннокислой среде, защитного эффекта тиолов выявлено не было.

4. Введение в состав синтетической среды для замораживания спермы быков синтетических жирорастворимых антиоксидантов ИХФГАН-3,

ИХФГАН-4 и ИХФГАН-5, не оказало положительного влияния на подвижность и абсолютный показатель живучести оттаянных сперматозоидов.

5. Выяснено, что введение в состав синтетической среды для замораживания спермы быков эфира глицерина в концентрации 1-2 %, способствует эффективной защите сперматозоидов при замораживании. При этом подвижность и абсолютный показатель живучести оттаянных сперматозоидов были на таком же уровне, как и при использовании в качестве криопротектора 6 % глицерина

6. Установлено, что пероральное и парентеральное введение проблемным быкам-производителям селеноорганического препарата ДАФС-25, способствовало повышению содержания в семенной плазме селена и увеличению активности антиоксидантного фермента глутатионпе-роксидазы.

7. Обработка быков с пониженной подвижностью половых клеток препаратом селена, способствовала повышению абсолютного показателя живучести замороженно-оттаянных сперматозоидов.

8. Однократное внутримышечное введение коровам перед осеменением в летний период воднорастворимого антиоксиданта амбиола в дозе 15 мг на животное, оказало положительное влияние на результативность искусственного осеменения коров.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Предлагаем племпредприятиям для проведения широких производственных испытаний Трис-глюкозо-лимоннокислую среду для замораживания спермы быков следующего состава: дистиллированная вода - 100 мл; Трис-(оксиметил)-аминометан - 2,75 г; глюкоза - 0,8 г; лимонная кислота - 1,4 г; глицерин - 6 мл; желток куриного яйца - 20 мл или 10 г сухого соевого лецитина; полиген - 30 мг.

2. С целью повышения оплодотворяемости коров в летний период, предлагаем использовать однократное внутримышечное введение антиоксиданта амбиола за один час до первого осеменения в дозе 15 мг препарата на животное.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Евтух В.П., Никонов В.В., Ерохин А.С. Влияние селена на показатели качества семени у быков. // Сб. научных трудов ВНИИплем. - 2002 -Вып. 14.-с. 37-41.

2. Евтух В.П. Влияние состава синтетических сред на уровень АТФ в на-тивной и криоконсервированной сперме быков. // Сб. научных трудов ВНИИплем. - 2004. - Вып. 16 -том 1. - с. 94-97.

3. Евтух В.П. Влияние тиолов на криоустойчивость спермы быков. // Сб. научных трудов ВНИИплем - 2004. - Вып. 16 - том 2. - с. 59-62.

4. Ерохин А.С., Евтух В.П. Улучшение оплодотворяемости коров инъекциями амбиола. // Зоотехния - 2004 - № 9 - с. 31-32.

Заказ № 14

Объем 1,0 п. л. Тираж 60 экз.

Типография ВНИИплем

l»?2 871

229

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Евтух, Виталий Прокофьевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Основные повреждающие факторы при замораживании спермы сельскохозяйственных животных.

1.2. Способы повышения криоустойчивости спермы быков.

1.3. Современные методы и синтетические среды, используемые для криоконсервации спермы быков.

1.4. Влияние биологически факторов на результативность искусственного осеменения коров.

2. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Выявление оптимальных соотношений веществ, входящих в состав усовершенствованной среды для замораживания спермы быков.

3.2. Изучение криозащитного влияния на сперму быков низкомолекулярных тиольных соединений.

3.3. Влияние синтетических жирорастворимых антиоксидантов на устойчивость сперматозоидов быков к замораживанию.

3.4. Анализ криопротективного влияния на сперму быков эфира глицерина.

3.5. Изучение криозащитного влияния сухого соевого лецитина.

3.6. Влияние состава синтетических сред на уровень АТФ в сперматозоидах быков.

3.7. Результативность осеменения коров спермой, замороженной в разных синтетических средах.

3.8. Эффективность выявления вируса ИРТ и возбудителей лептоспироза методом ПЦР в сперме быков, замороженной с желтком или с сухим соевым лецитином.

3.9. Влияние перорального и внутримышечного введения быкампроизводителям селеноорганического препарата ДАФС-25 на криоустойчивость их сперматозоидов.

3.10. Изучение возможности повышения оплодотворяемости коров в летний период.

3.10.1. Влияние внутримышечного введения коровам антиоксиданта амбиола на результативности их осеменения.

3.10.2. Содержание продуктов пероксидации липидов в крови коров после инъекции амбиола.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

5. ВЫВОДЫ.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Совершенствование метода криоконсервации семени крупного рогатого скота с использованием биологически активных веществ"

Актуальность работы. Искусственное осеменение животных является высокоэффективным методом улучшения породных и продуктивных качеств животных путем использования семени высокоценных племенных производителей. Огромное значение для практики искусственного осеменения и размножения животных имеет метод хранения спермы производителей в глубокозамороженном состоянии. При этом возможно сохранять сперму выдающихся производителей в течение очень продолжительного времени и производить ее транспортировку на любые расстояния.

В большинстве стран мира для искусственного осеменения крупного рогатого скота используется криоконсервированная сперма. Но несмотря на достаточно высокую эффективность этого метода в молочном скотоводстве, имеется еще ряд малоизученных вопросов, которые смогли бы повысить эффективность осеменения коров и телок замороженной спермой. В частности, в процессе замораживания спермы быков погибает более половины половых клеток. Изучение причин данного явления и разработка более совершенных синтетических сред для замораживания спермы быков, позволило бы повысить выживаемость сперматозоидов в процессе криооб-работки и их оплодотворяющую способность.

В последние годы появились данные о важной роли микроэлемента селена в процессах сперматогенеза у самцов. Вопросы о влиянии различных препаратов селена на воспроизводительную функцию быков и крио-устойчивость их семени изучены в недостаточной мере и требуются дальнейшие углубленные исследования в данном направлении.

Для выполнения этой цели в диссертации изучались следующие вопросы: усовершенствовать синтетическую среду для замораживания спермы быков путем исключения из ее состава продуктов животного происхождения; выяснить защитный эффект при замораживании спермы быков сухого соевого лецитина; изучить протективное влияние низкомолекулярных тиольных соединений при замораживании спермы быков; провести сравнительное изучение криозащитных свойств некоторых синтетических жирорастворимых антиоксидантов на сперматозоиды быков; проанализировать криопротективную активность эфира глицерина при замораживании спермы быков; исследовать влияние парентерального и перорального введения быкам селеноорганического препарата ДАФС-25 на биохимические показатели спермы и устойчивость сперматозоидов к глубокому замораживанию; выяснить эффективность однократного внутримышечного введения коровам в летний период синтетического воднорастворимого антиоксиданта амбиола на результативность искусственного осеменения и биохимические показатели крови.

Научная новизна исследований. Разработана усовершенствованная Трис-глюкозо-лимоннокислая синтетическая среда для замораживания спермы быков. Впервые изучено криозащитное влияние на сперму быков сухого соевого лецитина и эфира глицерина. Исследовано защитное влияние низкомолекулярных тиольных соединений при замораживании спермы быков. Проанализировано криопротективное влияние трех синтетических жирорастворимых антиоксидантов на сперматозоиды быков. Показано, что введение быкам- производителям с пониженной подвижностью сперматозоидов селеноорганического препарата ДАФС-25, способствует повышению активности в семенной плазме антиоксидантного фермента глутати-онпероксидазы и увеличению живучести замороженно-оттаянных сперматозоидов. Установлено положительное влияние инъекции коровам перед осеменением синтетического воднорастворимого антиоксиданта амбиола на их оплодотворяемость.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на: Ученом Совете ВНИИПлем, 2002-2003гг; Научно-производственной конференцией на ВВЦ, 2002 г.;

Расширенной межотдельской конференцией ВНИИПлем, 2004 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 научные работы.

Объем работы. Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, методики исследований, результатов исследований, выводов и практических предложений. Диссертация включает 22 таблицы. Список литературы содержит 223 источника, в том числе 128 на иностранном языке.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Евтух, Виталий Прокофьевич

5. ВЫВОДЫ

2. Установлено, что сухой соевый лецитин в оптимальной концентрации оказывает высокий криопротективный эффект при замораживании спермы быков, сравнимый с защитным эффектом желтка куриного яйца. Кроме того, использование сухого соевого лецитина в составе синтетической среды, позволяет выявлять присутствие различных вирусов в криоконсервированной сперме быков с помощью метода ПЦР.

4. Введение в состав синтетической среды для замораживания спермы быков синтетических жирорастворимых антиоксидантов ИХФ-ГАН-3, ИХФГАН-4 и ИХФГАН-5, не оказало положительного влияния на подвижность и абсолютный показатель живучести оттаянных сперматозоидов.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Евтух, Виталий Прокофьевич, п. Лесный Поляны Московской обл.

1. Антонюк B.C. Биохимический контроль за качеством спермы хряков.// Доклады ВАСХНИЛ. 1980. - №1. - с. 27-30.

2. Берилло М.М., Пухальский Л.Х. Вопросы длительного сохранения спермы быка и барана.// Проблемы животноводства. -1936. №10. -с.24-40.

3. Белоус A.M., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении. Киев: Наукова Думка. 1982. - 256 с.

4. Бугров А.Д. Способ оттаивания замороженной спермы быков в различной упаковке. // Животноводство. 1976. - №12. - с.57-59.

5. Бугров А.Д., Осташко Ф.И., Олесенко Т.И. Сверхбыстрое оттаивание спермы быков-производителей. // Молочное и мясное скотоводство. 1978. - №12. - с.24-25.

6. Бернштейн А.Д., Петропавловский В.В. Влияние неэлектролитов на переживание сперматозоидов. // Бюлл. Экспер. Биол. и Медицины. -1937.-Вып. 1. с.21-25

7. Варнавский А.Н. Влияние метода замораживания на подвижность и ультраструктуру живчиков. // Доклады ВАСХНИЛ. 1970. - №8. -с.22-23.

8. Варнавский А.Н. Изучение акросомы спермиев барана с помощью фазово-контрастной микроскопии. // Доклады ВАСХНИЛ. 1978. -№8. - с.33-34.

9. Варнавский А.Н., Суббочева Т.В., Кузнецов Ю.В. Эффективность использования амбиола в племзаводе «Санталово» Тульской области. // Тезисы докладов научно-производственной конференции. Быково. РАМЖ. 1997. - с.54-55.

10. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев О.А. и др. Свободные радикалы в живых системах. // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биофизика.-1991.-Т.29.

11. Голубь B.C. Липиды семенника, придатка живчиков барана и быка. //Автореферат дисс. канд.биол.наук. Дубровицы. 1972.

12. Гуськов A.M. Криогенные изменения липидов и функциональная полноценность гамет хряков и быков. // Автореферат дисс. канд.биол.наук. Львов. -1984.

13. Гуськов А.М., Дарий Г.Е. Изменение воспроизводительной функции животных под влиянием стресс-факторов. //Доклады РАСХНИЛ. -1993. №3. - с.71-73.

14. Гордон А. Контроль воспроизводства сельскохозяйственных животных. М. Агропромиздат. -1988.

15. Губанова В.П. Иммунные ответы организма коров на экзогенные антигены и влияние витамина А. // Сб. научн. трудов ВИЖА. 1977. -Вып. 3. - с.54-59.

16. Данилов М.А., Бояхчан Г.А., Костандян Г.М. и др. Микроэлементы и воспроизводительная функция у коров. // Ветеринария. 1977. -№2. - с.66-68.

17. Дарий Г.Е., Делеу В.Г. Замораживание семени в соломинках. // Сельское хозяйство Молдавии. 1978. - №10. - с.42-43.

18. Деряженцев В.И. Синтетическая среда для замораживания спермы быков в соломинках. // Биология воспроизведения и технология искусственного осеменения сельскохозяйственных животных. М. -1986. - с.31-37.

19. Ерохин А.С., Платов Е.М., Тимофеев К.Н. Структурное состояние мембраны сперматозоидов барана и быка после криовоздействия. // Доклады ВАСХНИЛ. 1989. - №3. - с.19-21.

20. Ерохин А.С., Деряженцев В.И. Перекисное окисление липидов в сперме баранов. // Овцеводство. 1991. - №3. - с.17-19.

21. Ерохин А.С. Физиологические аспекты криорезистентности спермы баранов и быков. // Дисс. докт. биол. наук. Дубровицы. 1994.

22. Ерохин А.С., Коган И.Г., Барсель В.А. Активность супероксиддис-мутазы в сперме барана и быка при криоконсервации. // Сельскохозяйственная биология. 1995. - №4. - с. 50-51.

23. Ерохин А.С., Лехмус И.А. Определение содержания АТФ биолюминесцентным методом в сперматозоидах барана после криообработки. //Доклады РАСХН. 1996. - №1. - с.32-34.

24. Ерохин А.С., Лехмус И.А. Содержание АТФ в сперме быков с различной оплодотворяющей способностью. // Зоотехния. 1997. - №1. - с.25-26.

25. Ерохин А.С., Федорченко О.А., Кувшинова B.C. Профилактика нарушений воспроизводительной функции у коров. // Ветеринария. -1998.-№3.-с. 37-38.

26. Ерохин А.С., Чернова И.Е. Эффективность подкормки коров селеном в пастбищный период. // Зоотехния. 1999. - №3. - с.15-17.

27. Ерохин А.С., Григошина М.В. Повышение оплодотворяемости коров инъекциями комплексоната меди. // Зоотехния. 2000. - №3. -с.27-29.

28. Жильцова Л.С., Ерохин А.С., Селиверстова И.А. и др. Замораживание спермы быка в средах с комплексонатами металлов. // Доклады ВАСХНИЛ. 1985. - 1. -с.33-35.

29. Зверева Г.В., Чухрий В.Н., Клевец Л.А. Сукцинатдегидрогеназная активность спермы быков и качество спермы. // Сельскохозяйственная биология. 1989. - №6. - с.30-33.

30. Кальницкий Б.Д. Минеральные вещества в кормлении животных. Л. -1985.

31. Кононов В.П. Значение слабодиссоциирующих катионов при охлаждении спермы. // Доклады ВАСХНИЛ. 1977. - №5. - с.25-26.

32. Кононов В.П. Замораживание семени хряка. Теория и практика. // Дисс. . докт. биол. наук. Дубровицы. - 1982.

33. Кононов В.П., Нарижный А.Г. Защитное действие антиоксидантов при замораживании семени хряка. //. Вестник сельскохозяйственной науки. 1985. - №5. - с.123-128.

34. Кононов В.П. Глубокое замораживание семени хряков. Новое в теории и практике. // Теория и практика воспроизведения животных. М. Колос.-1984.-с. 241-256.

35. Клинский Ю.Д., Чомаев A.M., Огулов А.О. Использование сурфаго-на для повышения оплодотворяемости коров. // Животноводство. -1987. №1. - с.47-48.

36. Клинский Ю.Д., Шейкин В.Н., Куксова Р.И. и др. Методы биотехники в животноводстве в условиях промышленной технологии. // Сб. науч. тр. ВИЖа 1983/1984 - т. 44 - с. 3-11.

37. Кузнецов С.Г. Совершенствование системы минерального питания коров молочного направления продуктивности. // Сельскохозяйственная биология. 1996. - №6. - с.12-34.

38. Кузнецова Н.А. Первый опыт применения искусственного осеменения в каракулеводстве. // Проблемы животноводства. 1932. - № 5-6. - с.86-90.

39. Курбатов А.Д., Платов Е.М., Корбан Н.В. и др. Криоконсервация спермы сельскохозяйственных животных. Л.: Агропромиздат. -1988.-256 с.

40. Лозино-Лозинский Л.К. Очерки по криобиологии: адаптация и устойчивость организмов и клеток к низким и сверхнизким температурам. Л.: Наука. - 1972. - 283 с.

41. Лопатко М.И., Тюпина К.Ф. Замораживание спермы быка без глицерина. // Молочное и мясное скотоводство. 1971. - №4. - с.24.

42. Луговой В.И., Моисеев В.А. Влияние низких температур на растворимые ферменты. // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биофизика. 1978. - т.9. - с.53-79.

43. Лянсберг Э.С. Изучение защитного действия гипертонических сред и полиолов при замораживании семени барана. // Направления и новые результаты исследований по биологии воспроизведения. Дуб-ровицы. - 1974. - ч.1. - с.27-30.

44. Малиновская В.А. Оптимальные режимы замораживания спермы быков в соломинках. // Совершенствование методов воспроизводства и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных. М. -1983. с.100-108.

45. Масалов В.Н. Стимуляция репродуктивной функции коров антиок-сидантами, адреноблокаторами и средствами природного происхождения. // Автореферат дисс. канд. биол. наук. Орел. - 2001.

46. Маринов П.И., Златарев С.Т., Грудова Ч.Н. Среди за криоконсервация на овчи сперматозоиди. // Криобиология на половите клетки. София.- 1983. -с.86-101.

47. Медведев Г.Ф., Долина Д.С., Долин И.А. Результаты применения сурфагона и диригестрана при нарушениях функции яичников у коров. // Повышение качества кормов и продуктивности животных. Горки. 1994. - с.40-46.

48. Милованов В.К. Биология воспроизведения и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных. М. - 1962.

49. Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория холодового удара живчиков млекопитающих. // Доклады ВАСХНИЛ. 1959. - №8. - с.3-9.

50. Милованов В.К. Теория и практика длительного сохранения семени барана и хряка. // Физиология воспроизведения сельскохозяйственных животных. Харьков. 1977. - с. 12-25.

51. Милованов В.К., Жильцова Л.С. Комплексонаты металлов в средах для семени сельскохозяйственных животных. // Вестник сельскохозяйственной науки. 1982. - №2. - с.58-66.

52. Милованов В.К., Соколовская И.И. Теория и практика воспроизведения животных. М. -1984.

53. Михайленко Е.В., Богданова Н.В., Радченков В.П. и др. Повышение эмбриональной выживаемости у коров, иммунизированных спер-миями быков. // Доклады РАСХН. 2000. - №1. - с.35-37.

54. Мороз Т.А. Причины эмбриональной смертности у коров и методы ее предупреждения. // Научные труды ВНИИРГИЖ. 1985. - с.62-66.

55. Мороз Л.Г., Рустенов А.Р., Шапиев И.Ш. Значение серосодержащих соединений в устойчивости спермы к замораживанию // Доклады ВАСХНИЛ. 1990. - №9. - с.51-55.

56. Мороз Л.Г., Корбан Н.В., Рустенов P.M. Устойчивость семени хряков при замораживании в присутствии тиольных соединений. // Сельскохозяйственная биология. 1983. - №11. - с.88-91.

57. Нарижный А.Г., Ерохин А.С., Рочев Н.Ф. Влияние антиоксидантов и способов криоконсервации на пероксидацию липидов в сперме хряка. // Доклады РАСХН. 1993. - №6. - с.32-34.

58. Нарижный А.Г., Ерохин А.С. Активность супероксиддисмутазы в нативной и криоконсервированной сперме хряков. // Доклады РАСХН. 1995. - №1. - с.37-38.

59. Наук В.А. и др. Синтетическая среда для разбавления и замораживания семени сельскохозяйственных животных. // Бюлл. изобретений и открытий. 1976. - №44.

60. Наук В.А. Криоконсервация семени животных. Консервация генетических ресурсов. Пущино. - 1982.

61. Наук В.А., Гуськов A.M. Особенности перекисного окисления липидов при замораживании спермы быков и хряков. // Доклады ВАСХНИЛ. 1983. - №2. - с.27-29.

62. Осташко Ф.И. Причины и механизмы холодового удара клеток. // Международный сельскохозяйственный журнал. 1964. - №3. -с.106-109.

63. Осташко Ф.И., Строна В.И., Кузнецов Г.Н. Влияние В-глюкуронидазы на качественные показатели спермы производителей. // Животноводство. 1974. - №4. - с.53-54.

64. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей. Киев: Урожай. -1978. 254 с.

65. Пакенас П.И. Исследование сперматогенеза и усовершенствование технологии взятия и обработки семени. // Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Таллин. 1972.

66. Пакенас П.И., Гинкявичус Г., Ленкутис В. Байсогальская технология кормления, содержания, подготовки быков к взятию семени, его криоконсервации и использования. Вильнюс. - 1980. - 89 с.

67. Панасенко О.М. Перекисное окисление липидов влияет на перенос холестерина между липопротеинами высокой плотности и биомембранами. // Биологические мембраны. 1987. - т.12. - №4. - с.1319-1324.

68. Платов Е.М. Замораживание семени быка в глицериновой компенсированной среде. // Животноводство. 1963. - №8. - с.92-94.

69. Платов Е.М. Теоретические и практические основы замораживания семени производителей сельскохозяйственных животных. // Автореф. дисс. . докт. биол. наук. Дубровицы. - 1973.

70. Прокопцев В.М., Рустенов А., Мороз Л.Г. Действие унитиола на сперму хряка. // Сельскохозяйственная биология. 1974. - т.9. - №4. - с.581-584.

71. Пушкарь Н.С., Белоус А.М., Цветков Ц.Д. Теория и практика криогенного и сублимационного консервирования. Киев: Наукова Думка. - 1984.

72. Родионова Н.И. Иммунная система крупного рогатого скота разных половозрастных групп и пути ее коррекции. // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Дубровицы. - 2002.

73. Русаков Р.В., Агалакова Т.В., Перминова Л.В. Использование антиоксиданта колицина Е 2 для профилактики гибели ранних эмбрионов у коров. // Тезисы доклада научной конференции, посвященной 70-летию НИИСХ ЦРНЗ. Немчиновка. 2001. - с.56.

74. Рэ Л.Консервация жизни холодом. М. - 1962.

75. Семаков В.Г. Активность сукцинатдегидрогеназы в процессе замораживания и оттаивания спермы быков и хряков. // Доклады ВАСХ-НИЛ. 1984. - №2. - с.26-27.

76. Семенова В.А. Защитные свойства отдельных факторов желтка куриного яйца при замораживании семени животных. // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Дубровицы. - 1987.

77. Скаржинская Г.М., Кузьмина Е.А., Иванова В.И. и др. Уровень селена в крови коров. // Ветеринария. 1997. - №1. - с.38-41.

78. Слободяник В.И., Холев С.А., Рецкий М.И. Коррекция воспроизводительной функции быков-производителей. // Ветеринария. 2000. -№8. - с.37-40.

79. Смирнов И.В. Сохранение спермы сельскохозяйственных животных посредством глубокого охлаждения. // Дисс. . канд. биол. наук. -М. 1949.

80. Смирнов И.В. К теории глубокого охлаждения спермы. // Животноводство. 1974. - №11. - с.65-70.

81. Смит О. Биологическое действие замораживания и переохлаждения. -М.: ИЛ.-1963.

82. Соколовская И.И., Оивадис Р.Н., Абилов А. О значении акросомы в оценке семени самцов. // Животноводство. 1981. - №9. - с.45-46.

83. Солсбери Г.У., Ван-Демарк Н.Л. Теория и практика искусственного осеменения коров в США. М.: Колос. - 1966.

84. Субботин А.Д. Особенности оплодотворения сельскохозяйственных животных в связи с иммунологическими свойствами гамет. // Сельскохозяйственная биология. 1991. - №2. - с.61-66.

85. Турко Т.И. Оплодотворяемость и эмбриональная выживаемость у крупного рогатого скота в связи с разными степеням инбридинга и иммунными реакциями материнского организма. // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Лесные Поляны - 1997.

86. Угарова Н.Н., Бровко Л.Ю. Трдян И.О. и др. Биолюминесцентные методы анализа в микробиологии. // Прикладная биохимия и микробиология. 1991. -т.21. - №1. -с.134-141.

87. Ушатинская Р.С. Скрытая жизнь и анабиоз. М.: Наука. - 1990.

88. Хабибулин И.Х. Каримов Л.Г., Цуканов Д.Ш. и др. Синтетические соломинки для хранения семени быков. // Животноводство. 1973. -№1. - с.24-25.

89. Хаирбеков С. У. Использование экологически безопасных биопрепаратов для оптимизации воспроизводительной функции коров при повышенном фоне цинка. // Автореф. дисс. .канд. биол. наук. -Владикавказ 2002.

90. Чомаев А. М., Клинский Ю. Д., Харламов Ю. Е. Влияние лютеоста-била на эмбриональную смертность у коров. // Закономерности и пути регуляции воспроизведения животных. Дубровицы. 1997 - Вып. 58. - с. 47-48.

91. Шайдуллин И. Н. Усовершенствование метода замораживания семени барана путем применения антиоксидантов. // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Дубровицы - 1980.

92. Шубин А. А., Писакова Н. Л. Применение антиоксидантов и синтетического метионина в кормлении высокопродуктивных коров. // Новое в кормлении высокопродуктивных животных. М. 1989 -с. 101105.

93. Шубина Л. А. Стабилизация каротина корма, витаминов в организме и действия антиокислителей на воспроизводительную функциюкрупного рогатого скота. // Труды Уральского НИИ сельского хозяйства. 1983 - т. 36 - с. 32-37.

94. Ющенко Н. П., Семаков В. Г., Левин К. Л. Замораживание спермы быков в гранулах без применения сухого льда. // Молочное и мясное скотоводство. 1968 - № 5 - с. 32-37.

95. Ющенко Н. П. Методические рекомендации по криоконсервации, хранению и использованию семени быков, замороженного в гранулах жидким азотом. М. 1979.

96. Aalbers J. G., Johnson L. A., Aalbers Smith E. A. e. a. ATP content of fresh and frozen - thawed boar semen and its relationship to sperm concentration and fertility. // First Int. Conf. Deep Freezing Boar Semen. -Uppsala- 1985.-p. 38-45.

97. Ahmad K., Foote R H. Motility and fertility of frozen bull spermatozoa in Tris-yolk and milk extenders containing amicacin sulphate. // J. Dairy Sci. -1985. v.68 - p. 2083-2086.

98. Ahmad K., Foote R. H. Post-thaw surviwal and fertility of frozen bull spermatozoa treated with antibiotics. // J. Dairy Sci. 1986. - v. 69. -p. 535-541.

99. Almquist J., Flipse R. J., Thacker D. L. Diluters for bovine semen. IV. Fertility of bovine spermatozoa in heated homogenised milk and skim milk. // J. Dairy Sci. 1954. - v. 37. - p. 1303-1307.

100. Almquist J. O. Effect of cold shock after thawing on acrosomal maintenance and motility of bovine spermatozoa frozen in plastic straws. // J. Dairy Sci. -1976 v.59 - p. 1825 - 1829.

101. А1 Hanak X., Грудова Ч., Захариев Э. е. а. Влияние на витамин А въерху някои биологични показатели сперматозоидите от бик при криоконсервации. // Животновъдни науки. - 1989. - v. 26. - № 5. -р. 80-83.

102. Alliston С. W., Howarth В., Ulberg L. С. Embryonic mortality following culture in vitro of one- and two-cell rabbit eggs at elevated temperatures. // J. Reprod. Fertil. 1965. - v. 9. - p.337 - 342.

103. Anderson S., Harkness W., Akin Y. e. a. Categorical data analysis of the effect on bull fertility of butylated hydroxytoluene addition to semen extenders prior to freezing. // J. Dairy Sci 1997. - v. 77. - p. 2302 -2307.

104. Arechiga C. F., Ealy A. D., Hansen P. J. Effecacy of vitamin E and glutathione for thermoprotection of murine morulae. // Theriogenology. 1994.-v.41-p. 1545-1550.

105. Arnott W. J. Problems of artificial breeding of cattle. // Austr. Vet. J.- 1961. v. 37.-p. 140-145.

106. Arriola J., Foote R. H. Glycerolation and thawing effect on bull spermatozoa frozen in detergent treated egg-yolk and whole egg extenders. //J. Dairy Sci. 1987. v.70. -p. 1664-1670.

107. Cassou R. La methode des paillettes en plastique adapt a la generalization de la congelation. // 5 th Proc. Intern. Congr. Anim. Reprod. and A. I. Trento. - 1964. - p. 14-17.

108. Cavestany D., El Wishy А. В., Foote R. H. Effect of season and high environmental temperature on fertility of Holstein cattle . // J. Dairy Sci.- 1985.-v. 68.-p. 1471.

109. Chen Y., Foote R. H., Brockett С. C. Effect of sucrose, trehalose, hypotaurine, taurine and blood serum on survival of frozen bull sperm. // Cryobiology. 1993. - v. 30. - p. 423 - 431.

110. Christensen P., Guo Z., Pedersen К. M. e. a. The viability, motility and fertility of bovine semen frozen in Triladyl and Biociphos plus. // ESDAR NEWSLETTER. 2000. - №.5 - p. 25.

111. Curry M. R., Watson P. F. Osmotic effects on ram and human sperm membranes in relation to thawing injury. // Cryobiology. 1994. -v. 31.-p. 39-46.

112. Данов Д. Т., Ковачев К. Д., Попов Д. В. Исследования въерху ултраструктурните изменения на сперматозоидите на коча при крио-консервация. // Криобиология на половите клетки. София. - 1983. -с. 155-179.

113. Davis Т. S., Bratton R. W., Foote R. Н. Livability of bovine spermatozoa at 5, -25 and 85°C in iris-buffered and citrate-buffered yolk-glycerol extenders. // J. Dairy Sci. - 1963. - v. 46 - p. 333 - 336.

114. De Leeuw F. E., De Leeuw A. M., Den Daas J.H. e. a. Effects of various cryoprotective agents and membrane stabilizing compounds on bull sperm membrane integrity after cooling and freezing. // Cryobiology. 1993. - v. 30.-p. 32-44.

115. Diskin M. G., Sreenan J. M., Fertilization and embryonic mortality rates in beef heifers after A. I. // J. Reprod. Fertil. 1980. - v. 59. - p. 463 -468.

116. Ealy A. D., Drost M., Barros С. M. e. a. Termoprotection of preim-plantation bovine embryos from heat shock by glutathione and taurine. // Cell Biol. Int. Rep. 1992. - v.16 - p. 125.

117. Ealy A. D., Drost M., Hansen P. J. Developmental changes in embryonic resistance to adverse effect of maternal heat stress in cows. // J. Dairy Sci. 1993. - v. 76. - p. 2899 - 2904.

118. Ealy A. D., Hansen P. J. Introduced thermotolerance during early development of murine and bovine embryons. // J. Cell Physiol. 1994. -v. 160-p. 460-463.

119. Ealy A. D., Howell J. L., Monterroso V. H. e. a. Development changes in sensitivity of bovine embryos to heat shock and use of antioxidants as thermoprotectant. // J. Anim. Sci. 1995. - v. 73. - p. 1401 -1407.

120. Entwistle K. W., Martin J. C. Effect of composition of diluents, method of addition of glycerol, freezing rate and storage temperature on the revival of ram spermatozoa after deep-freezing. // Austr. J. Biol. Sci. -1972. v.25. - №.2. - p.379-386.

121. Evans R. W., Setchell B. P. Association of exogenous phospholipids with spermatozoa. // J. Reprod. Fertil. 1978. - v. 53. - n2. - p.357 -362.

122. Evans G. Current topics in artificial insemination of sheep. // Austr. J. Biol. Sci. 1988. -v.41. -№.1 - p. 103 - 116.

123. Fahy G. M. The relevance of cryoprotectant "toxicity" to cryobiol-ogy. // Cryobiology. 1986. - v.23. - p. 1-13.

124. Foote R. H., Chen Y., Brockett С. C. Fertility of bull spermatozoa frozen in whole milk extenders with trehalose, taurine or blood serum. // J. Dairy Sci. 1993. - v.76. - p.1908-1913.

125. Foote R. H. Review: Dairy cattle reproductive physiology research and management past, progress and future prospects. // J. Dairy Sci. -1996.-v.79.-p.980-990.

126. Foote R. H., Kaproth M. T. Sperm numbers inseminated in dairy cattle and non-return rates revisited. // J. Dairy Sci. 1997. - v.80. -p.3072-3076.

127. Foote R. H., Brockett С. C., Kaproth M. T. Motility and fertility of bull sperm in whole milk extender containing antioxidants. // Animal Re-prod. Sci. 2002. - v.71. -p.13 -23.

128. Foulkes J. A. The separation of lipoproteins from egg yolk and their effect on the motility and integrity of bovine spermatozoa. // J. Reprod. Fertil. 1977. -v. 49. - p.277-284.

129. Grafter T. Effect of catalase on fertility results of frozen bull semen. //11th Int. Congr. Anim. Reprod. and A. I. Dublin, Ireland. - 1988. -v.3.- p.246.

130. Goldstein D. Stress induced activation of the sympathetic nervous system. //Bailliere's Clin. Endocrinal. Metab. - 1987. - v.l. -p.253-278.

131. Graham F. e. a. Fertility studies with frozen boar spermatozoa. // A. I. Dig.-1971.-v.l9.-p.l6-18.

132. Graham J. K., Foote R. H. Effect of several lipids, fatty acyl chain length and degree of unsaturation of the motility of bull spermatozoa after cold shock and freezing. // Cryobiology. 1987. - v.24. - №.1. - p.42-52.

133. Graham J. K., Hammersteadt R. H. Dufferential effects of butylated hydroxytoluence analogs on bull sperm subjected to cold-induced membrane stress. // Cryobiology. 1992. - v.29. - p.106-117.

134. Gwazdauskas F. S., McCaffrey C., McEvoy T. G. e. a. In vitro pre-implantation mouse embryo development with incubation temperatures of 37 0 С and 39 0 С.// J. Assist. Reprod. Genet. 1992. - v.9. - p.149.

135. Gibson C. D., Graham E. F. the relationship between fertility and post-freeze motility of bull spermatozoa (by pellet freezing) without glycerol. // J. Reprod. Fertil. 1969. - v.20. - p. 155-157.

136. Hammerstedt R. H. e. a. Use of spin labele to evaluate effect of cold shock and osmolarity on sperm. // Biol. Reprod. 1978. -v. 18. -p.686-696.

137. Harrison R. A., Dott H. H., Foster G.C. Effect of ionic strength, serum albumin and other macromolecules on the maintenance of motility and the surface of mammalian spermatozoa in a simple medium.// J. Reprod. Fertil. 1978. - v.52. -v.l. -p.65-73.

138. Harrison J. H., Hancock D. D., Conrad H. R. Vitamin E and selenium for reproduction of the dairy cows. // J. Dairy Sci. 1984. - v. 67. -p. 123 -132.

139. Hawk H. Infertility in dairy cattle. // Anim. Reprod. 1979. - n3. -p.19-29.

140. Healew P. Effect of freezing on the ultrastructure of the spermatozoon of some domestic animals. // J. Reprod. Fertil. 1969. - v. 18. -№.1. -p.21-27.

141. Hein K., Allrich R. D. Influence of exogenous adreno-corticotropic hormone on estrous behaviour in cattle. // J. Anim. Sci. 1992. - v.70. -p. 243-247.

142. Holt W. V. Reproductive technologies // In: "Creative conservation: interactive management of wild and captive animals." 1st. Edn.( Eds. Olney P. e. a. ) London - 1994. - p.144-166.

143. Irvine D. C. Glutathione as a treatment for male infertility. // Rev. Reprod. 1996. - v.l. - p.6-12.

144. Jones R. C. Influence of diluents and processing times after ejaculation on the survival of deep-frozen ram spermatozoa. // Austr. J. Biol. Sci. 1969. - v.22. - №.4. - p. 995-1004.

145. Jones R., Mann T. Lipid peroxidation in spermatozoa. // Proc. R. Soc. Lond. 1973. - v.184. -p.103-107.

146. Jones R., Mann Т., Lipid peroxidation in spermatozoa: formation, role of plasmologen and physiological significance. // Proc. R. Soc. Lond. B. 1976. - v.193. - p.317-333.

147. Jones R., Stewart D. The effect of cooling to 5 0 С and freezing-thawing on the ultrastructure of bull spermatozoa. // J. Reprod, Fertil. -1979. v.56. -№.1. -p.233-238.

148. Kampachmidt R. F., Meyer D. Т., Herman H. A. Lipid and lypo-proyein constituents of gg-yolk in the resistence and storage of bull spermatozoa. //J. Daiiy Sci. 1953. -v.36.-№3.-p.733-742.

149. Kawate N., Inaba Т., Mori J. Effect of Cortisol on the amount of estradiol -17B and progesterone secret and the number of luteinizing hor-mon receptors in cultured bovine granulosa cells. // Anim. Reprod. Sci. -1993-V.32. p.15-25.

150. Kotwica J., Skazynski D. J., Jaroczewski J. J. e. a. Noradrenaline affects secretory function of corpus luteum independently on prostaglandins in concious attle. //Prostaglandis. -1994.-v.48.-p.l-10.

151. Killian G., Honadel Т., McNutt T. e. a. Evaluation of butylated hy-droxytoluence as a cryoproservative added to whole or skim milk diluent for bull sperm. // J. Dairy Sci. 1989. -v.72-p. 1291-1295.

152. Kunze C., Peter W., Mudra K. e. a. Vergleich ende Untersuchungen zur Gefrierkonservirung von Ebersperma. // Arch. Exper. Vet. Med. -1982. v.36. -№1. -p.133-139.

153. Kreider J. L., Tindall W. C., Potter G. D. Inclusion of bovine serum albumin in semen extenders to enhance maintenance of stallion sperm viability. // Theriogenology. 1985. - v.23. - p.399-408.

154. Levitt J. A sulphydrril disulfide hypothesis of frost injury and resistance in plants. //J. Theoret. Biol. - 1962. -№3-p.l83.

155. Lindemann С. В., O'Brien J. A., Giblin F. J. An investigation of the effectiveness of certain antioxidants in preserving the motility of reactivated bull sperm models. // Biology of Reproduction, -1988.-v.38.-p.114-120.

156. Lovelock J. E., Bishop M. W. Preventation of freezing damage to living cell by dimethyl sulphoxiode. // Nature. 1959. - v.183. - p.1384-1395.

157. Loven D. P. A role for reduced oxygen species in heat induced cell, killing the induction of termotolerance. // Med. Hypotheses. 1988. -v.26. - p.39-42.

158. Luyet B. J., Gehenio P. M. Life and death at low temperatures. // Biodynamica. 1940. - p.1-341.

159. Mahmoud M. F. e. a. Comparative study of the phosphatases activity in fresh and frozen semen of bovine. // Jnd. Vet. J. 1986. - v.63 -№ 5. - p.393-396.

160. Mann T. The biochemistry of semen and of the male reproductive tract.-N.-Y.-1964.

161. Mariman H. Т., Williams R. I., Douglas M. S. Freezing injurey from solution effect and its prevention by natural or artificial cryoprotec-tion. // Cryobiology. 1977. - v.14. -№3. -p.287-302.

162. Mazur P. Kinetics of water loss from cell at subzero temperatures and the likelihood of intracellular freezing. // J. Gen. Physiol. 1963 -v.47. - p. 347-369.

163. Mazur P. Cryobiology: the freezing of biological systems. // Science. 1970. - v.168. -№ 5153-p.939-959.

164. Mazur P. The role of intracellular freezing in the death of cell cooled at supraoptimal rates. // Cryobiology. 1977-v.l4-p.251-272.

165. Mazur P. Freezing of living cells: mechanisms and implications. // Am. J. Physiol. 1984.- v.247. - p. 125-142.

166. Melimse D. R. Artificial insemination in cattle // In: Maule J. P. (Ed.) The semen of animals and artificial insemination. Commowealth Agricultural Bureau, Farnham Royal, Bucks, England. 1962. - p.l -181.

167. Malayer J. R., Pollard J. W., Hansen P. J. Modulation by alanine and taurine of thermal killing of lymphocytes and preimplantation embryos. //Am. J. Vet. Res. 1992 - v. 53-p.689-695.

168. Nagase H., Niwa Т. Deep-freezing bull semen in concentrated pellet form. // 5th Int. Congr. Anim. Reprod. Trento. 1964. -v.4 -p.410-415

169. Nagase H. Protective effect of poliols against freezing injury of bull spermatozoa. // 6th Int. Congr. Anim. Reprod and A. I. Paris. -1968. -v.2 -p.1103.

170. Owens P. C., Smith R. Opiod peptides in blood and cerebrospinal fluid during acute stress. // Baillieres's Clin. Endocrin. Metab. 1987. -v.l. -p.415-437.

171. Pace M. M.s Graham E. F. Components in egg yolk which protect bovine spermatozoa during freezing. // J. Anim. Sci. 1974. - v.39. -p.l 144-1149.

172. Pangawkar G. R., Sharma R. D. Phosphatase and transaminase activity in the seminal plasma of bull in relation to freezability of semen. // Theriogenology. -1988-V.29. -№ 6. -p.1393-1399.

173. Parkinson T. J., Whitfield C. Optimisation of freezing conditions for bovine spermatozoa. // Theriogenology. 1987. - v.27. - p.781-797.

174. Payne S. R., Oliver J. E., Upreti G. C. Effect of antifreeze protein on the motility of ram spermatozoa . // Cryobiology. 1994. - v.31. -p.180-184.

175. Peter А. Т., Simon J. E., Luker C. W. e. a. Site of action for endotoxin induced Cortisol release in the suppresion of preovulatory luteinizing hormon surges. // Theriogenology. - 1990. -v.33. - p.637-643.

176. Phillips P. H., Lardy H. A., Boyer P. D. e. a. The relationship of ascorbic acid to reproduction in the cow. // J. Dairy Sci. 1941 - v.24 -p.153-158.

177. Phillips P. H., Lardy H. A. A yolk buffer pabulum for the preservation of bull semen. // J. Dairy Sci. -1940. - v.23. - p.339-404.

178. Philpott M. The dangers of desease transmission by artificial insemination and embryo transfer. // Br. Vet. J. 1993. - v. 149. - p. 339369.

179. Pickett B. W., Hall R. C., Lucas J. J. e. a Investigations on thawing frozen bovine spermatozoa. // Fertil. Steril. 1965. - v. 16.-p.642-651.

180. Plammer J. M., Robertson L., Watson P. F. Accumulation of calcium in cold-shocked spermatozoa of the ram and its intracellular localization using pyroantimonate. // J. Physiology. 1985. - v.365. - №1. -p.65.

181. Plotsky P. M., Cunningham E. Т., Widmaier E. P. Catechol-aminergic modulation of corticotropin-releasing factor and adrenocortico-tropin secretion. // Endocrin. Rev. 1989. - v.10. - p.437-458.

182. Polge C., Smith A. U., Parkers A. S. Revival of spermatozoa after vitrification and degidratation at low temperature. // Nature. 1949. -v. 164. -№4172. -p.666-667.

183. Polge C., Rowson L. E. Fertilization capacity of bull spermatozoa after freezing at -79 C. // Nature. 1952. - v.169. - №4307. - p.626-627.

184. Prendergast E., Vishwanath R., Shannon P. e. a. Charged lipoprotein fractions of egg yolk in bovine semen diluents. // Proc. 26th Ann. Conf. Austr. Soc. Reprod. Biol. Brisbane. - 1994-v.26-p.113.

185. Rivier C., Rivest S. Effect of stress on the activity of the hypota-lamic-pituitary gonadal axis: peripheral and central mechanisms. // Biol. Reprod. - 1991. - v.45. -p.523-532.

186. Robertson L., Watson P. F. Calcium transport in diluted or cooled ram semen. // J. Reprod. Fertil. 1986. - v.77. -p.177-185

187. Roche J. F., Boland M. P., McGeady T. A. e. a. Reproductive wastage following artificial insemination of heifers. // Vet. Rec. 1981. -v.109. -p.401-404.

188. Royere D., Hamamah S., Nicolle J. C. e. a. Freezing and thawing after chromatin stability of ejaculated human spermatozoa: fluorescene acridine orange staining and feulgen- DNA cytophotometric studies. // Gamete Res. 1988. - v.21. - p.51-57.

189. Salisbary G. W., VanDemark N. L. Physiology of reproduction and artificial insemination of cattle. Freeman, San Francisco. 1961.

190. Saton K. Serum lipid peroxide in celebrovascular disorders determined by a new colorimetric method. // Clinica Chemica Acta. 1978. -v.90. -№1. -p.37-43.

191. Scott R., Macpherson A., Yates R. e. a. The effect of oral selenium supplementation on human sperm motility.// Br. J. Urol. 1998. - v.82. -p.76-80.

192. Senger P. L., Becker W. C., Hillers J. K. Effect of thawing rate and post-thaw temperature on motility and acrosomal maintenance in bovine semen, frozen in plastic straws. // J. Anim. Sci. 1976. - v.42. - №4-p.932-936.

193. Scott G. H., Wiersma F. Short-term relief for improved fertility in dairy cattle during hot wether. // Int. J. Biometeor.-1976. v.20. - №4. -p.344-350.

194. Shannon P., Curson B. Site of aromatic L-amino acid oxidase in dead bovine spermatozoa and determination of between bull differences in the percentage of dead spermatozoa by oxidase activity. // J. Reprod. Fertil. 1982. - v.64. - p.469-473.

195. Shelton J. N., Heath T. D., Old K. G. e. a. Nonsurgical recovery of egg from single-ovulating bovines. // Theriogenology. 1979. - v.ll. -p. 149-152.

196. Slaweta R., Laskowska T. The effect of glutathione on the motility and fertility of frozen bull sperm. // Anim. Reprod. Sci. 1987. - v.4. -p.249-253.

197. Slaweta R., Wasowich W., Lawskowska T. Selenium content glutathione peroxidase and lipid peroxide level in fresh bull semens and its relationship to motility of spermatozoa after freezing-thawing. // J. Vet. Med.A. -1988. v.35. - p.455-460.

198. Slavic T. Effect of glycerol on the penetration ability of fresh ram spermatozoa with zona-free hamster eggs. // J. Reprod. Fertil. 1987. -v.79. -№1. -p.99-103.

199. Soderquist L., Rodrigues-Martines H., Jonson L. Post-thaw motility, ATP content and cytochrome-C oxidase activity of A. I. bull spermatozoa in relation to fertility. // J. Vet. Med. A. 1991. - v.38.-№3-p.165-174.

200. Steinbach J., Foote R. H. Effect of catalase and anaerobic conditions upon the post-thawing survival of bovine spermatozoa frozen in citrate and Tris-buffered yolk extenders. // J/ Dairy Sci. 1964. - v.47. -p.812-815.

201. Stoebel D. P., Moberg G. P. Effect of adrenocorticotropin and Cortisol on luteinizing hormone surge and estrous behaviour of cows. // J. Dairy Sci. 1982. - v.65. -p.1016-1024.

202. Tasker J. В., Bewick T. D., Clark R. G. e. a. Selenium response in dairy cattle. // New -Zeland Vet. J. 1987. - v. 35. -p. 139-140.

203. Thibier M., Guerin B. Hygienic aspects of storage and use of semen for artificial insemination. // Anim. Reprod. Sci. 2000-V.62. -p.233-251.

204. Taylor M. J., Richardson T. Antioxidant activity of skim milk: effect of sonification. //J. Dairy Sci. 1980. - v.63. - p. 1938-1942.

205. Thompson J. G., Cumming J. M. The effect of washing and protein supplementation on the acrosome reaction of ram spermatozoa in vitro.// Anim. Reprod. Sci. 1985. - v.9. - №1. - p.75-78.

206. Vishwanath R., Shannon P., Curson B. Cationic extract of egg yolk and their effects on motility, survival and fertilising ability of bull sperm. //Anim. Reprod. Sci.-1992. v.29.-p,185-194.

207. Vishwanath R. Results of LIC research; Trial 2, straw thawing. // N.-Z. Dairy Exporter. 1998. - v.73. - p.122.

208. Vishwanath R., Shannon P. Storage of bovine semen in liquid and frozen state. // Animal. Reprod. Sci. 2000-V.62. - p.25-53.

209. Wallase E., Cooper G., Calvin H. Effects of selenium deficiency on the shape and arrangement of rodent sperm mitochondria. // Gam. Res. -1983. v.4. - p.389-399.

210. Watson P. F. The interaction of egg yolk and ram spermatozoa studies with a fluorescent probe. // J. Reprod. Fertil. 1975. - v.42. - №1. -p.105-111.

211. Watson P. F., Martin J. C. Effect of egg yolk, glycerol and freezing rate on the viability and acrosomal structures of frozen ram spermatozoa. //Austr. J. Biol. Sci. 1975. - v.28. -№2. -p.153-159.

212. Watson P. F. The roles of lipid and protein in the protection of ram spermatozoa at 5 С by egg yolk lipoprotein. // J. Reprod. Fertil. — 1981. — v.62. -p.483-492.

213. Watson P. F. The preservation of semen in mammals. // Oxford Rev. Reprod. Biol. 1979. - v.l - p.283-350.

214. Watson P. F. Recent developments and concepts in the cryopreser-vation of spermatozoa and the assessment of their post-thawing function. // Reprod. Fertil. Devel. 1995. - v.7. - p.871-891.

215. White J., Darine-Bennet A. The lipids of sperm in relation to cold shock. // Proc. 8th Int. Congr. Anim. Reprod. and A. I. Kracow-1976. -v.4. - p.951-954.

216. Wrathall A. E. Risks of transmitting scrapie and bovine spongiform encephalopathy by semen and embryos. // Rev. Sci. Tech. OIE. 1997. -v.16- №1. - p.240-264.

217. Woelders H. Fundamentals and recent development in cryopreser-vation of bull and boar semen. // Vet. Q. -1997. -v.19. -p. 135-138.

218. Woelders H., Mathiijs A., Engel B. Effects of trehalose and sucrose, osmolality of the freezing medium, and cooling rate on viability and intactness of bull sperm after freezing and thawing. // Cryobiology. -1997. v.35. - p.93-105.

Информация о работе

Евтух, Виталий Прокофьевич
кандидата биологических наук
п. Лесный Поляны Московской обл., 2004
ВАК 06.02.01

Диссертация

Совершенствование метода криоконсервации семени крупного рогатого скота с использованием биологически активных веществ - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Совершенствование метода криоконсервации семени крупного рогатого скота с использованием биологически активных веществ - тема автореферата по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы