Совершенствование лабораторного обеспечения системы эпидемиологического надзора за иерсиниозами

Смирнова, Елена Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Совершенствование лабораторного обеспечения системы эпидемиологического надзора за иерсиниозами
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование лабораторного обеспечения системы эпидемиологического надзора за иерсиниозами"

На правах рукописи

СМИРНОВА Елена Юрьевна ^ д с] д 200/?

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ СИСТЕМЫ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА ЗА ИЕРСИНИОЗАМИ

03.00.07 - микробиология 14.0030 - эпидемиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2003

Работа выполнена в Санкт-Петербургском научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии им. Пастера МЗ РФ и центре государственного санитарно-эпидемиологического надзора в Вологодской

области

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Галина Яковлевна Ценёва доктор биологических наук Нина Алексеевна Рыбакова

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Виктор Борисович Сбойчаков доктор медицинских наук, профессор Виталий Владимирович Нечаев

Ведущая организация: Санкт-Петербургская государственная медицинская академия последипломно!

образования

Защита состоится ¿^Л-А- 2004 г. в_часов на заседай^

диссертационного совета Д. 208.0^6.03 при ГОУВПО Санкт-Петербургскс государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова (195067, Санк Петербург, Пискаревский пр., д. 47).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУВПО Санк Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова.

Автореферат разослан

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

А.Г. Бойцов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Заболевания людей и животных, возбудителями которых являются микроорганизмы распространенных видов рода Yersinia, особенно Y.enterocolitica и Y.pseudotuberculosis, зарегистрированы во многих странах мира. Несмотря на достигнутые успехи в изучении многих аспектов проблемы иерсиниозов актуальность этих инфекций сохраняется (Ющенко Г.В., 2000; Ценева Г.Я и соавт., 2000). Стабильные показатели заболеваемости (данные официальной статистики) по Российской Федерации псевдотуберкулезом (7,1 на 100 тыс. нас.) и иерсиниозом (3,0 на 100 гыс. нас.) в последние 5 лет не отражают истинного распространения инфекций. При обеих нозоформах наблюдается неравномерное распределение заболеваемости по отдельным регионам. Наиболее часто вспышки и спорадические случаи псевдотуберкулеза регистрируются в Сибири, на Дальнем Востоке, в Северо-Западном регионе страны, включая Санкт-Петербург. Показатели заболеваемости псевдотуберкулезом в 2001г. в Кемеровской, Архангельской, Томской, Новосибирской областях составили )7,0; 51,0; 45,0 и 48,0, соответственно, на 100 тыс. нас. Заболеваемость иерсиниозом заметно ниже, что в значительной степени обусловлено этсутствием унифицированных методов лабораторной диагностики и принадлежностью Y.enterocolitica к 4-ой группе условно-патогенных бактерий. Последнее обстоятельство снижает объем исследований и показаний к ним.

Важной особенностью возбудителей указанных заболеваний является изменение их биологических свойств, а также пейзажа циркулирующих Y. cnterocolitica, снижение доли ранее доминировавших серотипов и выявление новых серо-биотипов, ранее считавшихся непатогенными (Ценева Г.Я. и соавт., 2002).

В этиологии иерсиниозов людей на территории Северо-Западного экруга, в том числе Вологодской области, ведущее значение принадлежит y.enterocolitica. Многие теоретические и практические аспекты 1абораторного обеспечения системы эпидемиологического надзора за ^ерсиниозными инфекциями, равно как и организационно-методические составляющие системы микробиологического мониторинга, остаются неразработанными. С этим связано отсутствие информации об истинной распространенности иерсиний среди людей, животных, объектов внешней среды и их этиологической значимости.

Ухудшение эпидемической и эпизоотической обстановки по пищевым зоонозам в ряде регионов России в последние годы (Черкасский Б.Л. и соат.,1995; Шурыгина И.А. и соавт., 2003), угроза их распространения в ранее благополучные территории требуют совершенствования системы эпидемиологического надзора и, в первую очередь, обеспечения его эффективными методами и средствами контроля за циркуляцией иерсиний.

Все вышеизложенное определило цель настоящего исследования: зпределение и характеристика этиологически значимых иерсиний,

циркулирующих в условиях сельскохозяйственного региона и

усовершенствование методов лабораторного обеспечения

эпидемиологического надзора за иерсиниозами.

Задачи исследования:

1. Повысить диагностическую эффективность бактериологического метода в результате разработки и применения новой питательной среды для накопления иерсиний в сочетании с новыми условиями обработки исследуемых проб щелочением. Определить оптимальную тактику применения экспрессных методов для мониторинга за иерсиниями.

2. Изучить серо-биотипную структуру иерсиний, циркулирующих среди людей, мелких млекопитающих, сельскохозяйственных животных, во внешней среде; определить варианты, имеющие этиологическое значение.

3. Оценить информативность показателей серологического скрининга у людей и животных при проведении микробиологического мониторинга за иерсиниями.

4. Определить биологические характеристики иерсиний, циркулирующих на территории с развитым сельскохозяйственным производством, разработать оптимальную тактику лабораторного контроля за их распространением и включить ее в качестве дополнения в систему эпидемиологического мониторинга за иерсиниозами.

Научная новизна работы. Предложена новая жидкая питательная пептонно-калиевая среда (Г1К) для накопления бактерий рода Yersinia. Ее применение позволяет сократить продолжительность бактериологического исследования и с наибольшей частотой установить распространенность иерсиний среди людей и животных, выявить объекты различной степени микробиологической опасности. Разработаны условия применения среды для мониторинга за иерсиниями при контроле материала различного происхождения.

Объекты животного и растительного происхождения на территории изучения в подавляющем большинстве инфицированы Y.enterocolitica биотипа 1, подтипа 1А серотипов 0:3; 0:4,33; 0:5,27; 0:6,30. Впервые установлена вирулентность иерсиний указанных серотипов и доказано их этиологическое значение в развитии иерсиниозов у людей и животных.

Научно обоснована тактика унифицированного микробиологического мониторинга за иерсиниями в условиях крупного сельскохозяйственного региона и использование серологического мониторинга в системе эпидемиологического надзора за иерсиниозами. Предложены организационно-методические рекомендации по проведению микробиологического мониторинга на территории с развитым сельскохозяйственным производством.

дрожжевой среды (БКД), широко используемой в практике. Среда ПК внедрена в практических лабораториях городов Москвы, Санкт-Петербурга, Архангельска, Вологды. Получена приоритетная справка на заявку о выдаче патента на состав среды Российского агентства по патентам и торговым знакам Российской Федерации от 21.0б.2003г. №2003119471/13(020596).

Для повышения эффективности бактериологического метода при массовых исследованиях, рекомендовано однократное щелочение исследуемого материала животного и растительного происхождения на этапе первичного посева на жидкую питательную среду, позволившее увеличить количество изолятов и сократить продолжительность бактериологического исследования на 3 суток.

Предложена унифицированная тактика эпидемиологического мониторинга за иерсиниями для территорий с развитым сельскохозяйственным производством, включающая дифференцированный подход к обследованию на инфицированность иерсиниями объектов, пищевых продуктов по степени эпидемиологической опасности и определенных контингентов людей, сроков проведения обследований, использования эффективных методов и средств. Содержание микробиологического мониторинга изложено в аналитическом обзоре (2002), подготовленном совместно с сотрудниками лаборатории бактериальных инфекций Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера и одобренном Департаментом Госсанэпиднадзора Минздрава России.

В результате многолетних микробиолого-эпидемиологических исследований, проведенных в условиях крупного сельскохозяйственного региона, получены данные о формировании хозяйственных очагов распространения иерсиний, инфицированности людей в группах «риска» и животных, факторов распространения иерсиний и усовершенствована система лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за иерсиниозами. Опыт использования научно обоснованной системы микробиологического мониторинга за иерсиниями включен в программу обучения врачей-интернов кафедры организации санэпидслужбы, эпидемиологии и гигиены Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова на базе ЦГСЭН в Вологодской области и специалистов санитарно-эпидемиологической службы области. В целях подготовки студентов факультета ветеринарной медицины Вологодской государственной молочнохозяйственной академии им. Н.В. Верещагина и внедрения микробиологического мониторинга за иерсиниями разработаны методические рекомендации "Псевдотуберкулез и кишечный иерсиниоз (этиология, эпизоотология, лабораторная диагностика у сельскохозяйственных животных)", Вологда, 2003.

Положения выносимые па защиту:

однократным щелочением исследуемых проб (материала) обеспечивает более полное и раннее выявление иерсиний.

2.0бъекты животного и растительного происхождения на территории изучения в подавляющем большинстве инфицированы Y.enterocolitica биотипа 1, подтипа 1А серотипов 0:3; 0:4,33; 0:5,27; 0:6,30. Установлена вирулентность иерсиний указанных серотипов и их этиологическое значение в развитии иерсиниозов у людей и животных.

З.Многолетний микробиологический мониторинг за иерсиниями с применением новых средств и методов экспрессной диагностики на территории с развитым сельскохозяйственным производством определил дифференцированный подход к выбору обследуемых объектов, сельскохозяйственной продукции с учетом частоты, периода года и длительности их инфицирования.

Апробация работы. Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера 5 ноября 2003г. Материалы работы представлены на международной научно-технической конференции «Проблемы экологии на пути к устойчивому развитию регионов» (Вологда, 2001); на заседаниях Санкт-Петербургского и Вологодского отделений Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (2002); на 8-м международном симпозиуме по Yersinia (Turku, Финляндия, 2002); на международном конгрессе «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней - прогресс и проблемы» (Санкт-Петербург, 2003); на региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы диагностики и профилактики распространенных инфекций» в НИИЭМ им. Пастера (2003); По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе в иностранных изданиях - 1, аналитический обзор «Микробиологический мониторинг за иерсиниозами» (Санкт-Петербург, 2002).

Структура и объем диссертации. Диссертация написана по обычному плану и состоит из введения, обзора литературы и 6 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего 221 источник, в том числе 122 отечественных и 99 зарубежных авторов. Работа изложена на страницах компьютерного текста и иллюстрирована 23 рисунками, 27 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Работа выполнена в Центре государственного санитарно-эпидемиологического надзора (ЦГСЭН) в Вологодской области, ЦГСЭН в городах и районах области. Исследования по изучению распространения иерсиний среди животных проведены совместно с сотрудниками Вологодской научно-исследовательской ветеринарной станции (НИВС). Раздел по изучению протективных свойств иерсиний выполнен на базе лаборатории бактериальных

инфекций Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера. Основная часть работы проведена в 2000-2002гг. в соответствии с программой НИР «Изучение иерсиниозных инфекций на территории Вологодской области», утвержденной главным государственным санитарным врачом по Вологодской области и в рамках научной темы Санкт-Петербургского научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии имени Пастера №034/091/004 «Разработка новых технологий эпидемиологического надзора и контроля за актуальными инфекциями», утвержденной Министерством здравоохранения Российской Федерации 01.08.2001г.

За 1990-2002 гг. исследовано 51002 пробы материала от больных людей, 1197- от больных сельскохозяйственных животных, 8286 проб материала от мелких млекопитающих, 20817 проб пищевых продуктов и объектов внешней среды; серологическому скринингу подвергнуто 977 сывороток крови взрослого населения и 772 сыворотки крови сельскохозяйственных животных, изучены биологические свойства 4477 штаммов иерсиний, изолированных от людей, сельскохозяйственных животных, мелких млекопитающих, из объектов внешней среды. Для экспериментальных работ использовали штаммы, полученные из коллекции государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов имени J1.A. Тарасевича и Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера, а также штаммы, выделенные в лабораториях Вологодской области. В опытах in vivo использовано 10 штаммов иерсиний, в том числе 6 - Y.enterocolitica различных биотипов и 4 штамма Y.pseudotuberculosis.

Ба»сгериологическин метод. Бактериологические исследования (фекалии, пробы объектов внешней среды, пищевые продукты, органы и ткани животных и др.) проводили с использованием буферно-казеиново-дрожжевой (БКД) и пептонно-калиевой (ПК) сред, применяя метод холодового накопления. Засеянные пробы выдерживали в условиях холодильника при температуре +4°С в течение 14 суток. Высев производили прямым методом и с применением щелочной обработки для освобождения от посторонней микрофлоры по методике, описанной Ценёвой Г.Я. (1997) и модифицированной нами. При количественном посеве кусочки органов экспериментальных животных взвешивали, растирали в фарфоровых ступках с добавлением 1,0 мл 0,15 М раствора NaCl до гомогенного состояния. Из каждой пробы по 0,1 мл материал засевали на 4 чашки со средой с бромтимоловым синим (производство г.Оболенск) и инкубировали 2 суток при температуре 37°С. Производили подсчет выросших колоний и определяли концентрацию возбудителя в 1,0 г исследуемого органа.

Видовую принадлежность выделенных культур устанавливали на основании комплекса типичных морфологических, культуральных, биохимических свойств.

Идентификацию вирулентных иерсиний проводили с использованием диагностической сыворотки к вирулентным иерсиниям (производство Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера).

Для автоматической идентификации иерсиний и дифференциации их от других энтеробактерий использовали компьютерную программу «ЭнтероИД» (Смирнов И.В.,2000).

Иммунологический метод. Для выявления антител к иерсиниям использовали реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) с коммерческими кишечноиерсиниозными 0:3, 0:9 и псевдотуберкулезным диагностикумами производства НИИВиС (Санкт-Петербург) и реакцию агглютинации (РА) с антигенами иерсиниозными (серотипов 0:3; 0:4,33; 0:5,27; 0:6,30; 0:7,8; 0:9) и псевдотуберкулезными (I и III серотипов) производства НИИЭМ им. Пастера. Исследование в РНГА и РА проводили согласно инструкций, прилагаемых к наборам.

Для поиска антигена Y.pseudotuberculosis использовали «тест-систему иммуноферментную для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза I серовара» производства НИИЭМ им. Пастера. Подготовку проб, проведение иммуноферментного анализа (ИФА), учет результатов проводили в соответствии с инструкцией к тест-системе. Результаты ИФА регистрировали с помощью спектрофотометра «Multiscan-assent», оптическую плотность измеряли при длине волны 492 нм.

Молекулярно-генетический метод. Постановку полимеразной цепной реакции (ПЦР) со специфичным для фрагмента гена уорА плазмиды pCad Y.pseudotuberculosis проводили в режиме амплификации, описанном в инструкции по применению тест-системы для обнаружения ДНК Y.pseudotuberculosis методом ПЦР (производства Ниармедик Плюс г.Москва). Продукты ПЦР детектировали методом гель-электрофореза в 1,2 агарозном геле, используя трис-ацетатный буфер, содержащий бромистый этидий. Электрофорез проводили в режиме 120 V в течение 30 мин. Гели анализировали в проходящем УФ, используя трансиллюминатор. Амплифицированные фрагменты сравнивали с «положительным» и «отрицательным» контрольными препаратами ДНК, входящими в комплект. Получение липополнсахаридного антигена. Липополисахаридный антиген (ЛПС) Y.pseudotuberculosis получали методом дезинтеграции по Грассе (1974). К осадку живой культуры после центрифугирования, содержащей 5-Ю9 КОЕ/мл добавляли двойной объем ацетона, охлажденного до минус 20°С и оставляли при 24±2°С на 20±2ч. Взвесь центрифугировали при 6000 об/мин. 40 мин, ацетон сливали, а осадок заливали 4 объемами охлажденного ацетона, взвесь выдерживали при 7±3°С 22±2ч. Обработку осадка повторяли дважды при периодическом перемешивании; ацетон сливали, микробную массу высушивали на воздухе. ЛПС выделяли экстракцией трихлоруксусной кислотой на холоду. Полученный препарат содержал ЛПС в концентрации 510% к сухому осадку, а также небольшое количество белковых комплексов. Получение антигена белков наружной мембраны. При получении антигена белков наружной мембраны (БНМ) микробные клетки Y. pseudotuberculosis, выращенные при 37°С, первоначально переводили в сферопласты по методике М. Osborn и R. Munson (1974). Затем суспензию центрифугировали при 5000

об/мин 30 мин (+4°С) для отделения компонентов периплазмы и продуктов гидролиза муреина, содержащихся в надосадочной жидкости. Осадок ресуспендировапи в 10 мМ трис-HCL буфере (рН 7,4).

Лизирование сферопластов проводили ультразвуком на дезинтеграторе фирмы «MSE» (Англия) мощностью 40 V при силе тока 1А в течение 10 мин. Неразрушенные ультразвуковой обработкой клетки удаляли центрифугированием при 5000 об/мин 30 мин. Получение наружных мембран из супернатанта и выделение БНМ осуществляли по методике К. Schnaitman с последующем центрифугированием (5000 об/мин) и отмыванием физиологическим раствором.

Биологические модели. Для оценки протективных свойств различных антигенов Y.pseudotuberculosis использовали модель энтерального заражения морских свинок, как наиболее адекватно воспроизводимую псевдотуберкулезный процесс.

Гистологические исследования. Исследования проведены в НИИЭМ им. Пастера совместно с Ефремовым В.Е. Для гистологических исследований использовали срезы материала - печени, селезенки, мезентериального лимфоузла, тонкой, слепой и подвздошной кишки. Фрагменты органов размером 0,5 х 0,5 см фиксировали нейтральным формалином, приготовленным по методу Лилли или жидкостью Буэна. Фиксированный материал после обезвоживания в спиртах восходящей крепости проводили через кедровое масло, бензол, бензол с парафином, парафин и заливали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 3-5 мкм окрашивали азур-эозином по Романовскому и докрашивали краской Лейшмана. Отдельные препараты изучали методом иммунофлюоресценции. Использовали антивидовуго люминесцентную сыворотку против иммуноглобулинов кролика в РНИФ (производство НИИЭМ им. Гамалея, Москва) с антисыворотками к Y.pseudotuberculosis I серотипа (производство НИИЭМ им. Пастера, Санкт-Петербург).

Эпидемиологический анализ. Проведен детальный микробиолого-эпидемиологический анализ проявлений инфекций, вызванных микроорганизмами рода Ycrsinia, в Вологодской области за период с 1991 по 2002 годы с позиций системного подхода: 1) анализ многолетней динамики заболеваемости; 2) анализ внутригодовой динамики заболеваемости. Данные о заболеваемости сопоставлены с динамикой циркуляции иерсиний в различных объектах.

Первичные регистрационные данные были предоставлены отделением профилактики особо опасных и природно-очаговых инфекций ЦГСЭН в Вологодской области (зав. отделением д.б. н. Рыбакова Н.А.). Статистическая обработка данных. Статистическую обработку полученных данных проводили в соответствии с правилами медицинской статистики (Зайцев В.М. и соавт., 2003) и с помощью программного пакета Microsoft Excel путем вычисления для полученных параметров средней величины (М) и средней ошибки средней величины (m). Оценку достоверности средних

величин для парных рядов осуществляли по критерию Стьюдента (t). Значения фактора достоверности определяли по таблице вероятности. Различия считали достоверными при Р<0,05.

Автор выражает искреннюю признательность и благодарность доктору медицинских наук, профессору Ценевой Г.Я., доктору биологических наук Рыбаковой H.A. за научные консультации при обосновании методической основы работы, главному врачу ЦГСЭН в Вологодской области, доктору медицинских наук, профессору Лимину Б.В. за предоставленную возможность организации микробиологических экспериментов, а также главному врачу «Диагностического центра» Т.Н. Николаевой, всем специалистам отделений диагностики бактериальных, вирусных, особо опасных и природно-очаговых инфекций базовой микробиологической лаборатории, научным сотрудникам Вологодской НИВС, лаборатории бактериальных инфекций Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера за постоянное и всестороннее сотрудничество.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика эпидемиологическом ситуации по иерсиниозам на территории Вологодской области

Инфекции, обусловленные Y. enterocolitica, регистрируются в области с 1988 г., а Y.pseudotuberculosis - с 1991г. С введением в 1992 г. раздельной регистрации иерсиниозов в 13 районах, городах Вологде и Череповце выявлены 107 больных псевдотуберкулезом и на 21 административной территории - 504 случая заболеваний иерсиниозом. Среднемноголетние уровни заболеваемости составили: псевдотуберкулезом 0,7, иерсиниозом - 3,4 на 100 тыс. нас,

Для иерсиниоза за весь период наблюдения характерна спорадическая заболеваемость. Лишь в отдельные годы анализируемого периода (1992, 1998) заболеваемость иерсиниозом в области в 1,7 и 2,9 раза превышала среднереспубликанские показатели. Заболеваемость населения области псевдотуберкулезом во все годы значительно ниже среднероссийского уровня.

На долю вспышечной заболеваемости псевдотуберкулезом приходится 30% от общего количества зарегистрированных случаев. За анализируемый период имели место 4 вспышки в организованных коллективах (1991, 1992, 1993, 1995 годы) с общим количеством пострадавших 52 человека. В эпидемический процесс вовлечены 41 ребенок и И взрослых из числа обслуживающего персонала. Вспышки имели пищевой характер, фактором передачи инфекции послужили салаты из свежей капусты и моркови.

За анализируемый период среди заболевших иерсиниозом и псевдотуберкулезом преобладало городское население (88% и 68%, соответственно). Соотношение заболеваемости взрослого населения и детей составило!: 1,5. При обеих нозоформах чаще заболевали дети, в том числе на детей, посещающих детские дошкольные учреждения, и школьников

приходится 95%. Это указывает на ведущую роль общественного питания при распространении иерсиниозной инфекции.

По нашему мнению истинная распространенность иерсиниоза значительно выше. Во-первых в большом проценте случаев острых кишечных заболеваний, с которыми иерсиниоз имеет общие симптомы, этиологический агент вообще не выявлялся. Во многом это объясняется отсутствием ранних и адекватных методов диагностики этих инфекций. Во-вторых продолжает снижаться объем проводимых диагностических исследований, что также приводит к искажению данных о уровне заболеваемости.

При скрининге материала от 18 тысяч больных с различными острыми и фоническими дисбиотическими нарушениями в кишечнике и больных шгергозами, высеваемость иерсиний из клинического материала составила 2,4%, что, практически, соответствует высеваемости сальмонелл и показывает зысокую эпидемиологическую значимость иерсиний в структуре возбудителей кишечных инфекций и свидетельствует о явной гиподиагностике иерсиниозных инфекций в Вологодской области.

Изучение динамики регистрации иерсиниозов показало, что обе юзоформы имеют сходную весенне-летнюю сезонную динамику подъёма ¡аболеваемости с пиком для псевдотуберкулёза в мае-июне, для кишечного герсиниоза - в апреле и повторным подъемом заболеваемости в октябре-юябре, для псевдотуберкулеза - в декабре-январе.

При эпидемиологическом обследования очагов иерсиниоза установлено, íto 14% больных связывают возникновение заболевания иерсиниозом с /потреблением молока и молочных продуктов, 7% - с употреблением в пищу ляса и контактом с животными, 2% - контактом с синантропными грызунами, 1,5% - с употреблением сырой воды, 74% больных - с употреблением овощей и фруктов. Подобное соотношение установлено и для путей заражения Y. )seudotuberculosis.

Усовершенствование методов выделения иерсиний

В целях повышения эффективности бактериологической диагностики ¡азработана и испытана в полевых условиях диагностическая эффективность ювой жидкой пептонно-калиевой среды (ПК) накопления. Оптимальный состав ;реды был получен в результате сравнительных модельных опытов >азмножения иерсиний на средах различного количественного состава ¡оставляющих её компонентов. Установлено, что среда ПК при оптимальном :оотношении компонентов (средние концентрации) значительно превосходит ю скорости накопления и частоте выделения известную среду БКД и юкращает бактериологическое исследование на 2-3 дня, что существенно ювышает эффективность бактериологического метода.

В модельных опытах с моно- и миксткультурами установлено, что при юсевах на среду ПК иерсинии быстрее увеличивают свою концентрацию от диничных клеток (в исходной взвеси не более 10 КОЕ/мл) до 106 КОЕ/мл. 7араллельно уменьшается, особенно в первые 5 дней, концентрация другой опутствующей флоры, засеянной одномоментно, с 107до 101 КОЕ /мл.

Диагностическую эффективность среды ПК и среды БКД оценивали I ходе мониторинга за иерсиниями при исследовании объектов внешней среды С использованием среды ПК выделено на 18% иерсиний больше, чем на сред( БКД. Культуры иерсиний при накоплении их в среде ПК изолированы в более ранние сроки (25% в первые 2-3 суток), что свидетельствует о значительно!^ преимуществе среды ПК над наиболее распространенной средой БКД.

Опытным путем были изменены ранее принятые условия щелочно? обработки исследуемых проб, позволившие чаще изолировать иерсинии и: исследуемого материала (11,2 и 16,3%, соответственно). Предложенна> методика однократного щелочения материала до посева в среду накоплена наиболее перспективна при мониторинге, проводимом по эпидемиологическим показаниям (массовое поступление проб). При текущем мониторинге щелочение более эффективно начинать со 2-го дня исследования. Ранее этот этап проводили в сроки последнего высева материала, то есть на 10-14 день.

Таким образом, полученные материалы свидетельствуют, чте использование новой питательной пептонно-калиевой среды позволяет существенно повысить эффективность бактериологического исследования г сократить сроки его проведения. Данный вариант среды наиболее экономичный: среда ПК готовится из отечественных компонентов и дешевле среды БКД в 8 раз. Повысить диагностическую эффективность бактериологического метода стало возможным также в результате применения щелочения материала до посева пробы или во время посева, что позволяет сократить продолжительность бактериологического исследования на 3 дня. С учетом полученных данных новая среда равно как и модификация метода щелочения исследуемых проб может быть рекомендована для использования о широкой практике.

Применение экспрессных методов индикации иерсиний

Испытана эффективность экспрессных методов индикации У.р5еис1о1иЬегси1о818 при текущем микробиологическом мониторинге. Установлено их преимущество в наиболее частом и быстром обнаружении возбудителя по сравнению с традиционными. При лабораторном контроле смывов с продукции растительного происхождения, оборудования и тары получены положительные результаты в ПЦР и ИФА в первые сутки в 6,2 и 6,0%, соответственно, в то время как выделение возбудителя псевдотуберкулеза бактериологическими методами отмечали на 10-15 сутки от момента забора материала в 1,6 и 0,4% проб, соответственно.

ПЦР и ИФА-анализ следует расценивать также как сигнальный тест для целенаправленного поиска возбудителя бактериологическим методом е конкретных пробах с положительными находками. Сочетанное использование методов способствует установлению истинного распространения иерсиний среди людей и во внешней среде.

Таким образом, применение указанных методик способствует повышению эффективности индикации иерсиний и значительно сокращает сроки подтверждения этиологии иерсиниозной инфекции.

Биологические свойства иерсиний, изолированных из материала различного происхождения

Изучение видовых, антигенных, вирулентных свойств У.еШегосо1Шса, выделенных от людей, теплокровных животных и из внешней среды, позволило отнести их к 9 серологическим типам. Наиболее частыми в патологии человека на территории изучения являются У. егНегосоШюа серотипов 0:3; 0:5,27; 0:6,30; 0:7,8, принадлежащие к битипу 1, подтипу 1А, ранее считавшихся непатогенными (табл. 1).

Таблица 1.

Серотипы У. еп1егосо1Шса, выделенные от больных иерсиннозом людей, от теплокровных животных, пищевых продуктов (%)

Объекты исследования Серотииы Y.enterocolitica

0:3 0:4,32, 0:4,33 0:5, 0:5,27 0:6,30, 0:6,31 0:7,8 0:9 Не типнруютнеся

Материал от людей 13,7 5,3 18,5 17,1 14,9 2,9 27,6

Синантропные грызуны 11,1 10,1 3,3 18,8 10,0 - 46,7

Дикие мелкие млекопитающие 13,3 - 66,7 16,7 - - 3,3

Свиньи 6,5 10,5 10,5 21,0 6,5 4,0 41,1

Овощи 2.6 8.2 5,6 15,7 3,2 - 64,7

Мясные и молочные продукты 9,1 12,0 16,2 15,4 6,8 4,3 36,2

При изучении вирулентных свойств иерсиний in vitro установлено, что основную долю культур У. entcrocolitica, выделенных из овощей, составили вирулентные штаммы биотипа 1 серотипа 0:3, в то время как иерсинии, изолированные из мясных и молочных продуктов, принадлежали, преимущественно, к биотипу 1 серотипам 0:4,33 и 0:6,30.

Средняя высеваемость Y. enterocoiiiica из диагностического материала составила 2,1%, антитела к иерсиниям у населения, не относящегося к группам эпидемиологического риска, выявлены в 18,3%. Это указывает на широкую циркуляцию иерсиний среди людей.

Среди вирулентных культур У. enterocoiiiica чаще других регистрировали серотип 0:5,27. Иерсинии этого серотипа также чаще вызывали патологию у людей.

Учитывая высокие показатели инфицированное™ сельскохозяйственных животных и гибели молодняка, немаловажным представляется вопрос о возможной их специфической защите. В опытах на морских свинках, иммунизированных различными антигенами и зараженных высоковирулентным штаммом Y.pseudotuberculosis, установлена неодинаковая степень протективной защиты. Показана слабая защита (не менее, чем 2 недели) морских свинок при иммунизации только антигеном ЛПС.

Защитный эффект существенно возрастал при иммунизации лабораторных животных комплексом компонентов из иерсиний липополисахаридной и белковой природы.

Серологический скрининг циркуляции иерсиний у людей и животных

Для установления циркуляции иерсиний в природных и хозяйственных очагах и определения в них основных резервуаров инфекции проведено серологическое исследование мелких млекопитающих, сельскохозяйственных животных и людей. Установлена циркуляция Y.pseudotuberculosis среди 11, а Y. enterocolitica - 13 видов мелких млекопитающих, среди которых по численности преобладают серые крысы, домовые мыши, обыкновенные полевки, обыкновенные бурозубки, рыжие полевки, водяные крысы, полевые мыши.

Антитела к антигенам различных серотипов Y. enterocolitica обнаружены в сыворотках крови 51,9±1,8 % обследованных сельскохозяйственных животных: у овец-18,0±3,0%, коров -49,4±2,7%, свиней 76,7±2,6%; к Y. pseudotuberculosis - у 14,2±1,3 % сельскохозяйственных животных: у овец -6,7± 1,9%, коров-6,9± 1,4%, свиней -28,6±2,8% .

6050 40 30 20 10 0

животноводы персонал работники торговли прочие группы

перерабатыв аюц*1х предприятий

О Псевдотуберкулёз нИерсинйоз|

Рис. 1. Выявление антител к иерсиниям у отдельных профессиональных групп населения (%)

Антитела к Y.pseudotuberculosis (серотипы I и III) выявлены у 4,0±0,6 %, к Y.enterocolitica (серотипы 0:3; 0:4,33; 0:5,27; 0:6,30; 0:7,8; 0:9) - у 47,8±1,6 % обследованного населения. Доля серопозитивных лиц среди животноводов, персонала предприятий, перерабатывающих

животноводческое сырьё, торговли составила, соответственно, к возбудителям псевдотуберкулеза 6,5±1,3; 2,2±0,6 и 4,2± 1,6%, к возбудителям иерсиниоза - 58,0±2,6; 47,1+2,6 и 44,3±3,8%. В контрольной группе населения, профессионально не связанного с риском инфицирования

иерсиниями, антитела к возбудителю псевдотуберкулеза обнаружены у 1,1+0,5%, к возбудителям иерсиниоза-у 17,6+3,9% (рис. 1). Таким образом, выявлено статистически достоверное различие в иммуннологической структуре к возбудителям иерсиниоза у всех профессиональных групп населения (t= 8,5; t=4,8; t=4,9; Р <0,05), к возбудителю псевдотуберкулеза -у животноводов [t=3,9; Р<0,05).

Организация микробиологического мониторинга за иерсшшозами

Разработанная ранее научно обоснованная система микробиологического мониторинга за иерсиниями с применением общепринятых средств табораторной диагностики нами дополнена новыми данными и средствами контроля объектов и продукции животного и растительного происхождения на территории развитого сельскохозяйственного производства.

На основании проведенных многолетних исследований определены объекты «риска». Исходя из частоты инфицированности продуктов и объектов внешней среды иерсиниями на этих объектах и их эпидемиологической значимости выделены 3 категории «риска»:

I категория - эпидемиологически опасные пищевые продукты и объекты знешней среды: сырое мясо, мясные полуфабрикаты, сырое молоко, сырые овощи, салаты из сырых овощей, оборудование и внешняя среда овощехранилищ (стены, стеллажи, тара) и мясо и молокоперерабатывающих лредприятий;

II категория - менее опасные в распространении иерсиний продукты и объекты внешней среды: пастеризованное молоко, мороженое, масло ;ливочное, квашеная капуста при низкой кислотности, фрукты, вода колодцев и открытых водоемов, оборудование предприятий торговли;

III категория - продукты и объекты внешней среды, обсеменяющиеся 1ерсиниями при грубых нарушениях противоэпидемического режима троизводства, хранения и реализации: кисло-молочные продукты, гарниры, )бо рудование пищеблоков.

Распределение объектов по степени эпидемиологической опасности федопределяет дифференцированный отбор материала на исследование в оптимальные сроки. Учитывая годовую динамику высеваемости иерсиний из шщевых продуктов установлен период «риска» - сезон возможного заражения «селения иерсиниями: осень, зима, ранняя весна - через сырое молоко, мясо и мясные полуфабрикаты с пиком максимальной контаминации для мяса в феврале-марте, для молока - в январе и октябре. Период заражения населения !ерез сырые овощи и салаты из сырых овощей возможен круглый год с пиком в «арте-апреле и октябре. При этом установлено, что Y.enterocolitica серотипов ):4,32; 0:5,27; 0:6,30; 0:7,8 контаминировали все виды исследованных шщевых продуктов (овощи, мясные и молочные продукты), серотип 0:3 -)вощи, мясо и мясные продукты, а 0:9 - только мясо и мясные продукты.

Установлена корреляционная зависимость годовой динамики аболеваемости населения области иерсиниозом и псевдотуберкулезом от

ежемесячной инфицированное™ синантропных грызунов и различных видов пищевых продуктов равно как активизация основного фактора - овощей длительного хранения в сочетании с ранней тепличной продукцией.

Выявлена прямая корреляционная связь средней силы между внутригодовой заболеваемостью населения инфекциями, обусловленными У.еЩегосоИНса, и зараженностью указанными микроорганизмами синантропных грызунов (г=0,549) и мелких млекопитающих в целом (г=0,451) и между внутригодовой заболеваемостью населения инфекциями, обусловленными У. сгиегосо1Шса, и обсемененностью овощей указанными микроорганизмами (г=0,557).

Идентичность серотипов У. еШсгосоШша , выделенных от синантропных грызунов и овощей, со штаммами, изолированными от больных людей, наличие вирулентных культур У. еШегосо1Шса, подтверждает этиологическую значимость иерсиний, циркулирующих в условиях овощехранилищ, для человека.

Второе место по значимости в качестве основных факторов передачи иерсиниозной инфекции занимают продукты животного происхождения.

На основании серологического скрининга к группам профессионального риска отнесены: животноводы, работники предприятий, перерабатывающих животноводческое сырье, овощехранилищ, общественного питания и торговли. Значительная доля сероконверсий к иерсиниям, наблюдаемая у данных контингентов, подтверждает значение животноводческой продукции и сельскохозяйственных животных как факторов и резервуаров возбудителей инфекции для людей.

На основании многолетнего микробиологического мониторинга за иерсиниями определены объемы, сроки и кратность лабораторных исследований на объектах «риска» и сроки серологического скрининга населения с учетом сезонных подъемов заболеваемости иерсиниозами и динамики обсемененности объектов иерсиниями.

Разработаны и внедрены в практическую деятельность лабораторной службы схемы подготовки исследуемого материала и первичной индикации и идентификации иерсиний с применением новых средств и экспрессных методов.

Предложено микробиологический мониторинг за иерсиниями проводить: с диагностическими целями, по эпидемиологическим показаниям, с профилактической целью. Его содержание изложено в аналитическом обзоре «Микробиологический мониторинг за иерсиниозами» (Санкт-Петербург, 2002).

Таким образом, на основании полученных данных представлены новые элементы мониторинга за иерсиниями, которые в сочетании с известными позволяют оценить конкретную эпидемическую ситуацию в отношении иерсиниоза и псевдотуберкулеза, изучить нерешенные проблемы патогенеза инфекции, усовершенствовать лабораторную диагностику и, на основе

полученных данных, проводить адекватные противоэпидемические мероприятия.

ВЫВОДЫ:

1 .Разработанная пептонно-калиевая среда для накопления бактерий рода Yersinia позволяет повысить эффективность бактериологического исследования на 18% по сравнению с известной буферно-казеиново-дрожжевой средой, сократить на 3 дня его продолжительность и в 8 раз удешевить проведение исследования.

2. Использование оптимизированного нами метода щелочной обработки исследуемого материала животного и растительного происхождения путем однократного его проведения перед посевом в среду накопления повышает частоту выделения культур и сокращает продолжительность исследования на 3 дня. Метод перспективен при массовых исследованиях.

3. Применение экспрессных методов ПЦР и ИФА при текущем микробиологическом мониторинге позволило чаще (в 6,2 и 6,0 %, соответственно) и в первые сутки обнаружить возбудителя псевдотуберкулеза в смывах и продуктах из овощехранилищ, в то время как выделение культур из этих проб отмечено на 10-15 сутки в 1,6 и 0,4%, соответственно.

ПЦР и ИФА могут быть рекомендованы также как сигнальные методы для целенаправленного поиска возбудителя бактериологическим методом в конкретных пробах с положительными находками.

4. В Вологодской области основным резервуаром Y.pseudotuberculosis и Y.cnterocolitica в природных и хозяйственных (объекты животноводства и овощехранилища) очагах являются массовые виды мелких млекопитающих и свиньи. Их инфицированность составляет 3,9 и 18,0% из 844 и 4055 обследованных особей, соответственно.

5. Продукты животного и растительного происхождения в 14,7 и 5,2% инфицированы Y.cnterocolitica наиболее распространенных серотипов 0:3; 0:5,27; 0:6,30; 0:7,8, принадлежащих к биотипу I, подтипу IA. Они чаще других вызывали заболевания людей.

6. В опытах in vitro установлено, что 75% вирулентных культур Y.cnterocolitica, выделенных из овощей, принадлежали в биотипу I, подтипу IA и преимущественно, к серотипу 0:3, в то время как, изолированные из мясных и молочных продуктов - преимущественно к серотипам 0:4,33 и 0:6,30, ранее [¡читавшихся непатогенными.

7. Предлагаемый научно-обоснованный микробиологический мониторинг з системе эпидемиологического надзора за иерсиниозами определяет дифференцированный подход к обследованию объектов «риска», продукции мстительного и животного происхождения, объектов внешней среды с учетом тстоты, периодов года и длительности их инфицирования. Эффективное применение новых средств и методов контроля за распространением иерсиний эбосновывает их целесообразность и перспективность для внедрения в практику.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Псевдотуберкулез и иерсиниоз: эпидемиологические и экологические особенности на территории Вологодской области//Журн. Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова,-№2-3. - 2001.-С.220 (в соавт. Рыбакова Н.А., Масанская В.В., Макарова В.Н. и др.).

2. Экологические аспекты иерсиниозных инфекций на территории Вологодской области//Мат.межд. науч.-техн.конф.«Проблемы экологии на пути к устойчивому развитию регионов».- Вологда, 2001.- С.151-153 (в соавт. Рыбакова Н. А., Масанская В.В., Макарова В.Н. и др.).

3. Эпидемиологическое значение распространения Yersinia enterocolitica в окружающей среде//Мат. YIII съезда ВОЭМП,- Москва, 2002,- Т.1.- С. 398-399 ( в соавт. Рыбакова Н.А. ,Евсюкова Н.А., Литвинова Р.Г., Чумакова Л.А.).

4. Циркуляция иерсиний среди свиней в хозяйствах Вологодской области и их эпизоотическая и эпидемическая значимость //Мат.науч.-практ. конф. «Состояние и перспективы внедрения достижения ветеринарной науки и практики в сельскохозяйственное производство»,- Вологда, 2002.- С. 73-75(в соавт. Рыбакова Н.А., Масанская В.В., Макарова В.Н.).

5. Monitoring the infections caused by Yersinia in the Europcan North of Russia //8!h Internacional Symposium on Yersinia(September 4-8, 2002).- Turku, Finlang, 2002.-P.87-88 (co-autors Rybakova N.A., Tseneva G.Y. and al.).

6. Проблема безопасности жизнедеятельности как компонент экологической культуры населения// Непрерывное экологическое образование: Сб. мат. науч. конф.- Вологда, 2002,- С. 22-26 (в соавт. Рыбакова Н.А., Новикова Т.В., Филоненко И.В. и др.).

7. Микробиологический мониторинг за иерсиниями //Аналитический обзор,- Санкт- Петербург, 2002.- 30 с. (в соавт. Ценева Г.Я., Воскресенская Е.А., Сварваль А.В.).

8. Иерсиниозная инфекция в Вологодской области//Мат. первой регион, студ. науч.-практ. конф. «Современные вопросы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения».- Вологда, 2002.- С.305-309 (в соавт. Рыбакова Н.А., Евсюкова Н.А., Литвинова Р.Г. и др.).

9. Эпидемиологические особенности иерсиниозной инфекции в Вологодской области //Третья межд. конф., поев. 80-летию института им. Пастера «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями»( Санкт-Петербург, 4-5 сентября, 2003).-СПб,2003,- С. 119 (в соавт. Рыбакова Н.А., Бапакина Е.А.).

Ю.Псевдотуберкулез и кишечный иерсиниоз (экология, эпизоотология, лабораторная диагностика у сельскохозяйственных животных): Методические рекомендации. -Вологда, 2003.-42с. (в соавт. Рыбакова Н.А., Ценёва Г.Я., Макарова В.Н. и др.)

Смирнова Елена Юрьевна

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ЛАБОРАТОРНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ СИСТЕМЫ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА ЗА ИЕРСИНИОЗАМИ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано к печати 09.12.2003 г. Формат 60x84/16. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «ИПЦ Легия»: г. Вологда, Октябрьская, 19/116

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Смирнова, Елена Юрьевна

Введение.

Раздел 1. Обзор литературы.

Глава 1. Характеристика основных биологических свойств иерсиний на современном этапе

1.1. Морфологические особенности.

1.2. Культурные и биохимические свойства.

1.3. Патогенные свойства и методы их определения.

1.3.1. Факторы патогенности.

1.3.2. Методы идентификации вирулентных иериний.

Глава 2.0сновные источники и факторы передачи иерсинийчеловеку и современные методы их индикации и идентификации

2.1. Теплокровные животные как источники иерсиний.

2.2. Значение продуктов растительного и животного происхождения в распространении иерсиний.

2.3. Современные методы индикации и идентификации иерсиний из внешней среды и патологического материала.

2.3.1. Бактериологическая диагностика.

2.3.2. Иммунологическая диагностика.

2.3.3. Генетическая диагностика.

2.3.4. Серологическая диагностика.

Раздел 2. Собственные исследования

Глава 3. Материалы и методы.

Глава 4. Характеристика заболеваемости иерсиниозами на территории Вологодской области.

Глава 5. Серологический скрининг иерсиниоза и псевдотуберкулеза для целей эпидемиологического надзора за инфекциями

5.1. Серологическое исследование крови мелких млекопитающих.

5.2. Серологическое исследование крови сельскохозяйственных животных.

5.3. Серологическое исследование крови людей различных профессиональных групп риска.

Глава 6. Усовершенствование микробиологической диагностики иерсиниоза и псевдотуберкулеза

6.1. Оценка диагностической эффективности новой пептоннокалиевой среды накопления иерсиний в модельных опытах.

6.1.1. Характеристика интенсивности размножения иерсиний в пептонно-калиевой среде с различным содержанием компонентов.

6.1.2. Характеристика интенсивности размножения иерсиний в сочетании с сопутствующей флорой в пептонно-калиевой среде.

6.2. Оценка диагностической эффективности пептонно-калиевой среды накопления при исследовании «полевого» материала.

6.3. Оптимизация способа щелочной обработки проб при исследовании материала из объектов внешней среды.

6.4. Применение экспрессных методов индикации иерсиний.

6.4.1. Полимеразная цепная реакция.

6.4.2 Иммуноферментный анализ.

Глава 7. Биологические свойства иерсиний, изолированных из источников и факторов различного происхождения

7.1. Видовые, антигенные, вирулентные свойства иерсиний.

7.2. Оценка протективной активности антигенов Yersinia pseudotuberculosis.

7.2.1. Микробиологическая характеристика взаимодействия высоковирулентного штамма Yersinia pseudotuberculosis с организмом животных, иммунизированного антигеном ЛПС.

7.2.2.Микробиологическая характеристика взаимодействия высоковирулентного штамма Yersinia pseudotuberculosis с организмом животных, иммунизированным антигенами

ЛПС и БНМ при сочетанном их применении.

7.2.3. Определение показателей гуморального иммунитета у иммунизированных животных.

Глава 8. Микробиологический мониторинг в системе эпидемиологического надзора за иерсиниозами.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Совершенствование лабораторного обеспечения системы эпидемиологического надзора за иерсиниозами"

Актуальность проблемы. Заболевания людей и животных, возбудителями которых являются микроорганизмы распространенных видов рода Yersinia, особенно Yersinia enterocolitica (Y.enterocolitica) и Yersinia pseudotuberculosis (Y.pseudotuberculosis), зарегистрированы во многих странах мира. Несмотря на достигнутые успехи в изучении многих аспектов проблемы иерсиниозов актуальность этих инфекций сохраняется [114, 100]. Стабильные показатели заболеваемости (данные официальной статистики) по Российской Федерации псевдотуберкулезом (7,1 на 100 тыс. нас.) и иерсиниозом (3,0 на 100 тыс. нас.) в последние 5 лет не отражают истинного распространения инфекций. При обеих нозоформах наблюдается неравномерное распределение заболеваемости по отдельным регионам. Наиболее часто вспышки и спорадические случаи псевдотуберкулеза регистрируются в Сибири, на Дальнем Востоке, в Северо-Западном регионе страны, включая Санкт-Петербург. Показатели заболеваемости псевдотуберкулезом в 2001г. в Кемеровской, Архангельской, Томской, Новосибирской областях составили 97,0; 51,0; 45,0 и 48,0, соответственно, на 100 тыс. нас. Заболеваемость иерсиниозом заметно ниже, что в значительной степени обусловлено отсутствием унифицированных методов лабораторной диагностики и принадлежностью Y.enterocolitica к 4-ой группе условно-патогенных бактерий. Последнее обстоятельство снижает объем исследований и показаний к ним.

Важной особенностью возбудителей указанных заболеваний является изменение их биологических свойств, а также пейзажа циркулирующих Y. enterocolitica, снижение доли ранее доминировавших серотипов и выявление новых серо-биотипов, ранее считавшихся непатогенными [107].

В этиологии иерсиниозов людей на территории Северо-Западного округа, в том числе Вологодской области, ведущее значение принадлежит Y.enterocolitica. Многие теоретические и практические аспекты лабораторного обеспечения системы эпидемиологического надзора за иерсиниозными инфекциями, равно как и организационно-методические составляющие системы микробиологического мониторинга, остаются неразработанными. С этим связано отсутствие информации об истинной распространенности иерсиний среди людей, животных, объектов внешней среды и их этиологической значимости.

Ухудшение эпидемической и эпизоотической обстановки по пищевым зоонозам в ряде регионов России в последние годы [108, 110], угроза их распространения в ранее благополучные территории требуют совершенствования системы эпидемиологического надзора и, в первую очередь, обеспечения его эффективными методами и средствами контроля за циркуляцией иерсиний.

Все вышеизложенное определило цель настоящего исследования: определение и характеристика этиологически значимых иерсиний, циркулирующих в условиях сельскохозяйственного региона и усовершенствование методов лабораторного обеспечения эпидемиологического надзора за иерсиниозами.

Задачи исследования:

Научная новизна работы. Предложена новая жидкая питательная пептонно-калиевая среда (ПК) для накопления бактерий рода Yersinia. Ее применение позволяет сократить продолжительность бактериологического исследования и с наибольшей частотой установить распространенность иерсиний среди людей и животных, выявить объекты различной степени микробиологической опасности. Разработаны условия применения среды для мониторинга за иерсиниями при контроле материала различного происхождения.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработана и внедрена в практику жидкая пептонно-калиевая среда (ПК) накопления для выделения бактерий рода Yersinia. Предложена среда позволяет сократить срок подращивания исследуемого материала на 2-3 дня. При испытаниях в полевых условиях показано, что она на 18 % эффективнее буферно-казеиноводрожжевой среды (БКД), широко используемой в практике. Среда ПК внедрена в практических лабораториях городов Москвы, Санкт-Петербурга, Архангельска, Вологды. Получена приоритетная справка на заявку о выдаче патента на состав среды Российского агентства по патентам и торговым знакам Российской Федерации от 21.06.2003г. №2003119471/13(020596).

Положения выносимые на защиту:

1 .Новая жидкая питательная среда для диагностики иерсиниозов (пептонно-калиевая) существенно повышает эффективность бактериологического исследования. Её использование в сочетании с однократным щелочением исследуемых проб (материала) обеспечивает более полное и раннее выявление иерсиний.

3.Многолетний микробиологический мониторинг за иерсиниями с применением новых средств и методов экспрессной диагностики на территории с развитым сельскохозяйственным производством определил дифференцированный подход к выбору обследуемых объектов, сельскохозяйственной продукции с учетом частоты, периода года и длительности их инфицирования.

Апробация работы. Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера 5 ноября 2003 г.

Материалы работы представлены на международной научно-технической конференции «Проблемы экологии на пути к устойчивому развитию регионов» (Вологда, 2001); на заседаниях Санкт-Петербургского и Вологодского отделений Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (2002); на 8-м международном симпозиуме по Yersinia (Turku, Финляндия, 2002); на международном конгрессе «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней - прогресс и проблемы» (Санкт-Петербург, 2003); на региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы диагностики и профилактики распространенных инфекций» в НИИЭМ им. Пастера (2003); По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе в иностранных изданиях - 1, аналитический обзор «Микробиологический мониторинг за иерсиниозами» (Санкт-Петербург, 2002).

Структура и объем диссертации. Диссертация написана по обычному плану и состоит из введения, обзора литературы и 6 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы, включающего 221 источник, в том числе 122 отечественных и 99 зарубежных авторов. Работа изложена на 146 страницах компьютерного текста и иллюстрирована 23 рисунками, 27 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Смирнова, Елена Юрьевна

Выводы:

4. В Вологодской области основным резервуаром Y.pseudotuberculosis и Y.enterocolitica в природных и хозяйственных (объекты животноводства и овощехранилища) очагах являются массовые виды мелких млекопитающих и свиньи. Их инфицированность составляет 3,9 и 18,0% из 844 и 4055 обследованных особей, соответственно.

5. Продукты животного и растительного происхождения в 14,7 и 5,2% инфицированы Y.enterocolitica наиболее распространенных серотипов 0:3; 0:5,27; 0:6,30; 0:7,8, принадлежащих к биотипу I, подтипу IA. Они чаще других вызывали заболевания людей.

6. В опытах in vitro установлено, что 75% вирулентных культур Y.enterocolitica, выделенных из овощей, принадлежали в биотипу I, подтипу IA и преимущественно, к серотипу 0:3, в то время как, изолированные из мясных и молочных продуктов - преимущественно к серотипам 0:4,33 и 0:6,30, ранее считавшихся непатогенными.

7. Предлагаемый научно-обоснованный микробиологический мониторинг в системе эпидемиологического надзора за иерсиниозами определяет дифференцированный подход к обследованию объектов «риска», продукции растительного и животного происхождения, объектов внешней среды с учетом частоты, периодов года и длительности их инфицирования. Эффективное применение новых средств и методов контроля за распространением иерсиний обосновывает их целесообразность и перспективность для внедрения в практику.

Заключение

Проведен анализ заболеваемости населения инфекциями, обусловленными иерсиниями, с 1992 года - с введением раздельной регистрации иерсиниоза и псевдотуберкулеза. Заболеваемость псевдотуберкулезом в области во все годы значительно ниже среднереспубликанской, на долю вспышечной приходится 30,0% случаев. Для иерсиниоза характерна спорадическая заболеваемость, в отдельные годы превышающая среднероссийский уровень. Отмечается неравномерное распределение инфекций по территории области с преобладанием среди заболевших городского и детского населения. Обе инфекции имеют весенне-летнюю сезонность с повторным подъемом заболеваемости псевдотуберкулезом в ноябре-январе, иерсиниозом - в октябре-ноябре.

Установлено, что основную долю больных иерсиниозами составляют дети (95%), посещавшие детские дошкольные учреждения и школьники. Это указывает на ведущую роль общественного питания при распространении иерсиниоза и псевдотуберкулеза.

При эпидемиологическом обследовании очагов иерсиниоза установлено, что 21% больных связывают возникновение заболевания с употреблением продуктов животного происхождения и контактом с животными, 74% больных - с употреблением овощей.

Серологическими методами исследования установлена циркуляция Y.pseudotuberculosis у 11 видов и Y.enterocolitica у 13 видов мелких млекопитающих, среди которых по численности преобладают серые крысы, домовые мыши, обыкновенные полевки, обыкновенные бурозубки, рыжие полевки, водяные крысы, полевые мыши.

Антитела к иерсиниям обнаружены у основных видов сельскохозяйственных животных, наиболее высокий показатель инфицированности выявлен у свиней (76,7% - антитела к Y. enterocolitica, 28,6% -антитела к Y. pseudotuberculosis ).

Установлены статистически достоверные различия в иммунной структуре к возбудителям иерсиниоза и псевдотуберкулеза у животноводов, персонала предприятий, перерабатывающих животноводческое сырье, работников торговли и в группе населения, профессионально не связанной с риском инфицирования иерсиниями.

В целях повышения эффективности бактериологической диагностики разработана и испытана в полевых условиях диагностическая эффективность новой жидкой пептонно-калиевой среды (ПК) накопления. Оптимальный состав среды был получен в результате сравнительных модельных опытов размножения иерсиний на средах различного количественного состава. Установлено, что среда ПК при оптимальном соотношении компонентов (средние концентрации) значительно превосходит известную среду БКД и составы с минимальными и максимальными концентрациями компонентов в среде по размножению бактерий рода Yersinia, особенно в ранние сроки (2-3 день), что наиболее значимо при диагностике инфекции.

В модельных опытах установлено, что на среде ПК иерсинии быстрее увеличивают свою концентрацию от единичных клеток (10) до 106. Параллельно уменьшается, особенно в первые 5 дней, концентрация другой сопутствующей флоры с 107до сотни КОЕ /мл.

Диагностическую эффективность среды ПК и среды БКД оценивали в ходе мониторинга за иерсиниями при исследовании объектов внешней среды: с использованием среды ПК выделено на 18% иерсиний больше, чем на среде БКД. Культуры иерсиний с накоплением в среде ПК изолированы в более ранние сроки (25% в первые 2-3 суток), что свидетельствует о значительном преимуществе среды ПК над наиболее распространенной и эффективной средой БКД.

Таким образом,, полученные материалы свидетельствуют, что новая питательная пептонно-калиевая среда для накопления иерсиний при оптимальном соотношении компонентов значительно превосходит среду БКД по количеству и скорости размножения в ней бактерий рода Yersinia. Применение предлагаемой жидкой питательной среды позволило существенно повысить эффективность бактериологического исследования и сократить сроки проведения исследования. Среда готовится из отечественных компонентов, не требует предварительной подготовки компонентов, методика приготовления среды нетрудоемка и легко воспроизводима в условиях любой практической лаборатории. Данный вариант среды наиболее экономичный, по стоимости среда ПК дешевле среды БКД в 8 раз, что позволяет удешевить бактериологическое исследование. Повысить диагностическую эффективность среды стало возможным путем применения щелочения материала до посева пробы или во время проведения исследования, что сокращает продолжительность бактериологического исследования на 3 дня. С учетом полученных данных новая среда может быть рекомендована для использования в широкой практике равно как и модификация щелочения исследуемых проб.

Испытана эффективность экспрессных методов индикации иерсиний при текущем микробиологическом мониторинге. Установлено их преимущество в наиболее частом обнаружении возбудителя по сравнению с традиционными. При лабораторном контроле смывов с продукции растительного происхождения, оборудования и тары получены положительные результаты в ПЦР и ИФА в первые сутки, в то время как выделение возбудителя псевдотуберкулеза бактериологическими методами отмечали на 10-15 сутки с момента забора материала. Обнаружение в исследуемой пробе ДНК или антигена бактерий при отсутствии роста колоний на питательной среде объясняется высокой чувствительностью методов ПЦР и ИФА, позволяющих выявить атипичные и некультивируемые формы микроорганизмов. Расхождение в результатах ПЦР, ИФА и бактериологического метода при исследовании объектов внешней среды и пищевых продуктов могло быть следствием низкой концентрации инфекционного агента в подобных субстратах или, что более вероятно, существования эпидемически значимых вариантов возбудителя в виде измененных, «покоящихся» форм, не способных к культивированию in vitro.

При сопоставлении экспрессных и бактериологического методов установлено совпадение результатов: ПЦР в 1,55%, ИФА в 0,38% случаев. При этом существенным преимуществом ПЦР и ИФА методов является быстрота получения конечного результата, что позволяет значительно сократить время, и высокая чувствительность, что повышает эффективность лабораторной диагностики иерсиниозов. ПЦР и ИФА-анализ следует также расценивать как сигнальный тест для целенаправленного поиска возбудителя бактериологическим методом в конкретных пробах с положительными находками. Такое сочетание методов способствует установлению истинного распространения иерсиний среди людей и во внешней среде. Положительные результаты полученные методом ПЦР и ИФА при проведении скрининга инфицированности объектов внешней важны в качестве сигнальных данных для оперативных мероприятий в отношении иерсиниозной инфекции.

Изучение видовых, антигенных, вирулентных свойств иерсиний, выделенных от людей, животных и из окружающей среды, позволило установить, что Y.enterocolitica, выделенные от людей, теплокровных животных и из внешней среды, относятся к 9 серологическим типам. Наиболее частыми в патологии человека является Y. enterocolitica серотипов 0:3; 0:5,27; 0:6,30; 0:7,8.

При изучении вирулентных свойств in vivo и in vitro установлено, что основную долю культур Y. enterocolitica, выделенных из овощей, составили вирулентные штаммы I биотипа серотипа 0:3, в то время как иерсинии, изолированные из мясных и молочных продуктов, принадлежали преимущественно к I биотипу серотипам 0:4,33 и 6,30.

При этом установлено, что тяжелые и среднетяжелые формы иерсиниоза были в основном обусловлены патогенными Y. enterocolitica IY биотипа, серотипа 0:3. Среди культур от больных аллергозами и с различными острыми и хроническими дисбиотическими нарушениями преобладали Y. enterocolitica I биотипа, серотипов 0:6,30; 0:4,32; 0:7,8 - 30% из них содержали плазмиду вирулентности.

Средняя высеваемость Y. enterocolitica из диагностического материала составила 2,1%, антитела к иерсиниям у населения, не относящегося к группам эпидемиологического риска, выявлены в 18,3% - это указывает на широкую циркуляцию иерсиний среди людей. Однако диагнозы «кишечный иерсиниоз» и «псевдотуберкулез» в 71,0% случаев установлены при выделении культур из фекалий и лишь в 29,0% - на основании сероконверсии к иерсиниям серотипов 0:3 и 0:9, что указывает на гиподиагностику иерсиниозной инфекции в области.

Среди вирулентных культур Y. enterocolitica чаще других регистрировали серотип 0:5,27. Иерсиниии этого серотипа также чаще вызывали патологию у людей.

Учитывая высокие показатели инфицированности сельскохозяйственных животных и людей немаловажным представляется вопрос о возможной их специфической защите. В опытах на морских свинках установлено, что ЛПС Y.pseudotuberculosis обладает протективной защитой, обеспечивает снижение интенсивности размножения бактерий в органах и тканях животных, тормозит диссеминацию в них. Слабая защита (не менее, чем 2 недели) морских свинок от диссеминации и размножения высоковирулентных штаммов при иммунизации только антигеном ЛПС объясняется отсутствием белковых антигенов, которые усиливают клеточные факторы защиты; обусловливают выработку антибактериальных антител, препятствующих адгезии и инвазии возбудителя в клетки органов и тканей.

Защитный эффект существенно возрастал при иммунизации лабораторных животных комплексов компонентов из микробных клеток липополисахаридной и белковой природы. Использование ЛПС в сочетании с

БНМ создавало более длительную защиту (не менее 3-х месяцев - срок наблюдения).

У иммунизированных этим препаратом животных отмечалось преимущественно персистенция иерсиний в кишечнике на фоне индуцированных антител ЛПС и белковой природы, что препятствовало развитию генерализации возбудителя и способствовало быстрой его элиминации из организма.

Разработанная ранее научно обоснованная система микробиологического мониторинга за иерсиниозами с применением общепринятых средств лабораторной диагностики нами дополнена новыми данными и средствами контроля в условиях развитого сельскохозяйственного производства.

На основании проведенных многолетних исследований объектами «риска» по инфицированности иерсиниями являются: овощехранилища, мясо-и молокоперерабатывающие предприятия, объекты торговли продуктами растительного и животного происхождения, пищеблоки объектов общественного питания детских, образовательных, лечебных учреждений.

Исходя из степени инфицированности продуктов и объектов внешней среды иерсиниями на указанных объектах выделено 3 категории «риска»:

I категория - микробиологически опасные пищевые продукты и объекты внешней среды: сырое мясо, мясные полуфабрикаты, сырое молоко, сырые овощи, салаты из сырых овощей, оборудование и внешняя среда овощехранилищ (стены, стеллажи, тара) и мясо и молокоперерабатывающих предприятий;

II категория - менее опасные в распространении иерсиний продукты и объекты внешней среды: пастеризованное молоко, мороженое, масло сливочное, квашеная капуста при низкой кислотности, фрукты, некипяченая вода колодцев и открытых водоемов, оборудование предприятий торговли;

III категория - продукты и объекты внешней среды, обсеменяющиеся иерсиниями при грубых нарушениях противоэпидемического режима производства, хранения и реализации: кисло-молочные продукты, гарниры, хлеб, печенье, сухофрукты, оборудование пищеблоков.

Таким образом, распределение объектов по степени опасности предопределяет забор материала на исследование в оптимальные сроки. Учитывая годовую динамику высеваемости иерсиний из пищевых продуктов определен период «риска» - возможного заражения населения иерсиниями: для сырого молока, мяса и мясных полуфабрикатов- это осень, зима, ранняя весна с пиком загрязненности для мяса в феврале-марте, для молока — в январе и октябре, для сырых овощей и салатов из сырых овощей - круглый год с пиком в марте-апреле и октябре. При этом установлено, что Y.enterocolitica серотипов 0:4,32; 0:5,27; 0:6,30; 0:7,8 контаминировали все виды исследованных пищевых продуктов (овощи, мясные и молочные продукты), серотип 0:3 -овощи, мясо и мясные продукты, а 0:9 — только мясо и мясные продукты.

Установлена корреляционная зависимость годовой динамики заболеваемости населения области иерсиниозом и псевдотуберкулезом от ежемесячной инфицированности синантропных грызунов и различных видов пищевых продуктов равно как активизация основного фактора - овощей длительного хранения в сочетании с ранней тепличной продукцией.

Выявлена прямая корреляционная связь средней силы между внутригодовой заболеваемостью населения инфекциями, обусловленными Y.enterocolitica и зараженностью указанными микроорганизмами синантропных грызунов (г=0,549) и мелких млекопитающих в целом (г=0.451) и между внутригодовой заболеваемостью населения инфекциями, обусловленными Y. enterocolitica и обсемененностью указанными микроорганизмами овощей (г=0,557).

Идентичность серотипов Y. enterocolitica , выделенных от синантропных грызунов и овощей, со штаммами, изолированными от больных людей, наличие вирулентных культур Y. enterocolitica, подтверждает этиологическую значимость иерсиний, циркулирующих в условиях овощехранилищ, для человека.

На основании серологического скрининга к группам профессионального риска отнесены: животноводы, работники предприятий, перерабатывающих животноводческое сырье, овощехранилищ, общественного питания и торговли. Значительные иммунологические сдвиги, наблюдаемые у данных контингентов по сравнению с другими группами населения, подтверждают значение животноводческой продукции и сельскохозяйственных животных как факторов и резервуаров возбудителей инфекции для людей.

На основании многолетнего микробиологического мониторинга за иерсиниями определили объемы, сроки и кратность лабораторных исследований на объектах «риска» и сроки серологического скрининга населения с учетом сезонных подъемов заболеваемости иерсиниозами и динамики обсемененности объектов иерсиниями.

Микробиологический мониторинг за иерсиниозами проводится: с диагностическими целями, по эпидемиологическим показаниям, с профилактической целью.

Таким образом, на основании полученных данных представлены новые элементы мониторинга за иерсиниями, которые позволяют оценить конкретную эпидемическую ситуацию в отношении иерсиниоза и псевдотуберкулеза, изучать нерешенные проблемы патогенеза инфекции, усовершенствовать лабораторную диагностику и, на основе полученных данных, проводить адекватные мероприятия.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Смирнова, Елена Юрьевна, Санкт-Петербург

1. А.с. № 1489185. Способ получения термостабильного экзотоксина Yersinia pseudotuberculosis/ Тимченко Н.Ф., Вертиев Ю.В., Недашковская Е.П., Барбул Е.А.-1987.

2. А.С. № 1596528. Способ получения эритроцитарного антигенного псевдотуберкулезного диагностикума / Недашковская Е.П., Тимченко Н.Ф., Венедиктов B.C. и др. -1990.

3. Авдеева Т.А. Количественное микробиологическое исследование при дизентерии. Автореф.дисс. д-ра мед. наук. -JI. 1964.-26с.

4. Аксёнов М.Ю., Гинцбург А.Л. Диагностика инфекционных заболеваний с помощью метода полимеразной цепной реакции // Молекулярная генетика.-1993. N4. - С. 3 - 9.

5. Алдова Е., Лазничкова К., Свандова Е., Соботкова Й. Иерсиниоз в ЧССР. Результаты долгосрочного исследования при участии микробиологических лабораторий гигиенической службы // Журн. микробиол.- 1989. -33.- -№4- С.425-434.

6. Алексеева Н.Т., Журбин Ф.Н., Шарапова Т.А., Багрянцев В.Н. Способ обработки материала для посева на иерсинии // Лабораторное дело. 1982. -№ 12. - С. 47(751) -48(752).

7. Багрянцев В.Н., Шубин Ф.Н., Цветков B.C. Опыт применения иммуноферментного анализа для диагностики псевдотуберкулеза // Вопросы микробиологии, патогенеза и лабораторной диагностики иерсиниозов. -Новосибирск, 1985.-С.53-56.

8. Белохвостов А.С. Полимеразная цепная и лигазная реакции: принципы, традиционные методики и нововведения // Молекулярная генетика.- 1995. N2. - С. 21 - 26.

9. П.Беседнова Н.Н., Тимченко Н.Ф., Горшкова Р.П., Сомов Г.П. Взаимодействие возбудителя псевдотуберкулеза с перитонеальными макрофагами иммунного и неиммунного организма // Журн. Микробиол. 1975. -№ 10.-С.38-44.

10. Беседнова Н.Е., Сомов Г.П. //Эпидемиол. и инфекц. бол. -2000. №2.-С.52-56.

11. Бобров А.Г., Филиппов А.А, Распространенность IS285 и IS 100 в геномах Yersinia pestis и Yersinia pseudotuberculosis. //Молекулярн. генет., микробиол. и вирусол. 1997. - №2. - С 36-40.

12. Боголепова М.Б., Адоньева JI.M., Плотникова В.И., Мисник С.Г. Лабораторная диагностика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза в Новосибирске// Журн. микробиол.- 1982.- № 7.- С. 96-97.

13. Богоявленский Г.В., Ващенок Г.И., Лютов Ю.Г. и др. Псевдотуберкулез в Ленинграде // Эпидемиол. и профилактика природноочаговых инфекций: Труды НИИЭМ им. Пастера.- 1980. Т. 55.-С. 54-58.

14. Бондаренко В.М. Острова патогенности бактерий. // Журн. Микробиол. -2001. №4. - С. 67-74.

15. Бондаренко В.М., Мавзютов А.Р., Голкочева Е.Н. Секретируемые факторы патогенности энтеробактерий. // Журн. микробиол. 2001. - № 1.-С. 84-90.

16. Борисова М.А. Висцеральная патология, патогенез, диагностика и лечение псевдотуберкулеза (ДСЛ): Автореф. дис.д-ра мед. наук. -М., 1971.-26с.

17. Буланьков Ю.И. Ранняя клиническая и лабораторная диагностика спорадического псевдотуберкулеза: Автореф. дис.д-ра мед. наук. М., 1971.-26с.

18. Быданов М.Л., Якушева Е.Е., Титова Л.В. Изучение катамнеза детей, перенесших псевдотуберкулёз // Инфекции, обусловленные иерсиниями (иерсиниоз, псевдотуберкулез) и другие актуальные инфекции: Мат. Международной конф.-СПб, 2000. -С.8.

19. Быстрова А.Н. Протективный антиген псевдотуберкулезного микроба. Автореф. дисс.канд. мед. наук. Владивосток, 1991. -28с.

20. Варвашевич Т.Н., Дзадзиева М.Ф., Сомов Г.П. О неоднородности популяции культур псевдотуберкулезного микроба // Журнал микробиол. 1977. - №9. - С. 141-142.

21. Ващенок Г.И., Андрейчик Э.П., Ващенок B.C. и др. Иерсиниозы в Ленинграде // Болезни с природной очаговостью: Тр. НИИЭМ им. Пастера. С.-Петербург, 1983. -Т. 60. -С. 82-87.

22. Венедиктов B.C. Изучение хемотаксиса у Yersinia pseudotuberculosis //Вопр. микробиол., патогенеза и лабораторной диагностики иерсиниозов. Новосибирск, 1985. - С. 26-28.

23. Воскресенская Е.А., Сварваль А.В., Ценева Г.Я., Смирнова Е.Ю. Микробиологический мониторинг за иерсиниями. //Аналитический обзор. -Санкт-Петербург, 2002. 30с.

24. Гинцбург A.JI., Зигангирова Н.А., Романов Ю.М. Современное состояние и перспективы молекулярно генетических методов в решении задач медицинской микробиологии // Журн. микробиол. -1999. - N5. - С.22 - 26.

25. Головачева В.Я. Сохранение возбудителей псевдотуберкулеза, листериоза и эризипелоида в почве из нор грызунов // Особо опасные инфекции Сибири и Дальнего Востока: Докл. Иркутского ГНИНИ. Кызыл, 1966. - Вып.7. - С. 73-75.

26. Голубева И.В., Килессо В.Л., Киселева B.C. и др. Энтеробактерии. -М: Медицина, 1985.-321с.

27. Гордейко В.А., Шустрова Н.М. Применение висмут-сульфит агара в качестве плотной дифференциальной среды для выделения бактерий видов Y. enterocolitica, Y. frederiksenii // Лабораторное дело. 1989. -№ 4. - С. 64-65.

28. Гордейко В.А., Шустрова Н.М. Применение упрощенной методики выделения и идентификации некоторых видов иерсиний из экологического и клинического материала // Журн. микробиол. 1990. -№ 1.-С. 100-101.

29. Гречещева Т.С. Кишечные иерсиниозы (псевдотуберкулез и иерсиниоз) у людей в Егорьевском районе Московской области. //Актуальные вопросы инфекционной патологии. -Саратов, 1981. 4.1. - С. 46-48.

30. Гурлева Г.Г., Смоликова Л.М., Варивода А.Г. и др. Новые серологические варианты Yersinia enterocolitica и Yersinia kristensenii. //Журн. микробиол. 1997. - № 5. - С. 117-120.

31. Гурлеева Г.Г., Колпикова Л.Д. Сравнительная оценка роста Y. enterocolitica на разных элективных средах // Лабораторное дело. -1989. -№ 4. -С. 71-72.

32. Долин М.В., Фиш Н.Г. Адгезины микроорганизмов // Итоги науки и техники ВИНИТИ. Серия микробиология. - М.- 1986.-Т. 16.-С.106.

33. Дунаев В.И., Ющенко Г.В. Биологические свойства выделенных от людей штаммов Yersinia enterocolitica// Журнал микробиол.- 1977.-№7.- С. 85-88.

34. Елезов М.П. Иерсиниоз крупного рогатого скота в условиях Северного экономического района Российской Федерации (эпизоотология, меры борьбы): Автореф. Дис.канд. вет. наук. СПб., 1994. - 27 с.

35. Знаменский В. А., Вишняков А.К. Этиология дальневосточной скарлатиноподобной лихорадки // Журн. микробиол. 1967.- № 2. — С. 125-130.

36. Каломина Н.В., Ющенко Г.В., Шестопалов Н.В. и др. Эпизооотический процесс псевдотуберкулеза и иерсиниоза в популяции грызунов крупного города// Тез. Докл. XI Всесоюзн. конф. по природной очаговости болезней. Новосибирск, 1989. С. 83-84.

37. Капищев П.А., Маганчук В.П., Затопа А.В. Выживаемость кишечных иерсиний при различных способах культивирования // Журн. микробиол. 1988. - № 6. - С. 115-116.

38. Кирьянов Е.А., Савчук И.И. Роль Yersinia enterocolitica в патологии сельскохозяйственных животных // Иерсиниозы (микробиол., эпидемиол., клиника, патогенез, лаб. диагностика): Тез. Всес. науч.-практ. конф. Владивосток, 1989. - С. 89-91.

39. Колос Е.Н., Гнутов И.Н., Ющенко Г.В., Дунаев В.И. Клинико-эпидемиологическая характеристика иерсиниоза в условиях интенсивно развитого животноводства// Здр. Казахстана.- 1982.- №12. -С. 46-48.

40. Кузнецов В.Г. Новые данные к эпидемиологии и профилактике Дальневосточной скарлатиноподобной лихорадки // Дальневосточнаяскарлатиноподобная лихорадка (псевдотуберкулез человека). Санкт-Петербург, 1987. - Вып.2. - С. 24-31.

41. Кузнецов В.Г. Адгезия и аутоадгезия иерсиний: выявление и роль в экологии //Инфекции, обусловленные иерсиниями: Тез. докл. международной конф.- Санкт-Петербург, 2000. -С.28.

42. Кузнецов В.Г. Дифференциально-диагностическая среда для выделения бактерий рода Yersinia // Лаб. дело. 1991.-№3.-С. 77-78.

43. Кузнецов В.Г. Источники выделения иерсиний на территории Приморского края // Журн. микробил. 1987. -№11.- С.30.

44. Кузнецов В.Г. Модификация щелочного метода обработки материала для выделения бактерий рода Yersinia // Лабораторное дело.-1984. -№11.-С. 622-624.

45. Кузнецов В.Г. Температурный фактор в экологии бактерий рода Yersinia // Психрофильность патогенных микроорганизмов. -Новосибирск, 1986. -С. 71-78.

46. Кузнецов В.Г. Роль местообитания внеорганизменной популяции возбудителя в эпидемиологии псевдотуберкулеза //Журн. микробиол.-1997.- № 5. -С.17-21.

47. Кузнецов В.Г. Модификация метода выявления вирулентных иерсиний с кристаллическим фиолетовым //Клин, лабор. диагн. -2000. №2. - С.41-44.

48. Куляшова Л.Б., Епифанова К.И., Полоцкий В.Ю. и др. Эпидемиология и клиническая характеристика групповых заболеваний детей в Ленинграде // Острые кишечные инфекции. Л., 1984. - С. 141-144.

49. Куляшова Л.Б., Ценёва Г.Я., Буйневич Ю.Б. Роль антигенов наружной мембраны Yersinia pseudotuberculosis в патогенезе и диагностике псевдотуберкулеза // Журн. микробиол. 1997. -№ 1. - С. 14-18.

50. Лонгвиненко А.А., Кузнецова Т.А., Тимченко Н.Ф. Влияние токсина Yersinia pseudotuberculosis на систему поли- и мононуклеарных лейкоцитов крови человека //Инфекции, обусловленные иерсиниями: Тез. докл. международной конф.- Санкт-Петербург, 2000. -С.35.

51. Матковский B.C., Антонов B.C., Бочоришвили В.Г. Псевдотуберкулез. Тбилиси: "Сабчота Сакартвелло", 1976.-100с.

52. Мессорош В.Г. Характеристика вирулентности возбудителя псевдотуберкулеза, изолированного от грызунов в очагах инфекций // XI Всесоюзн. конф. по природной очаговости (18-20 сент. 1984 г.).-М.'Тюмень, 1984. С. 108-109.

53. Мессорош В.Г. Биологические свойства Yersinia pseudotuberculosis и совершенствование лабораторной диагностики псевдотуберкулеза: Дисс.канд. мед. наук. СПб, 1993.

54. Миронова Л.П. О метаболизме Yersinia pseudotuberculosis // Современные аспекты профилактики зоонозных инфекций. Иркутск, 1984.-С. 33-34.бб.Определитель бактерий Берджи / Под редакцией Г.А. Заварзина.- 9 издание. Том 1.- Москва: "Мир", 1997. С. 195-196.

55. Покровская В.И. Распространение иерсиниозов на территории Новгородской области // Актуальные проблемы инфекционной патологии: Мат. юбилейной научно-практ. конф. НИИЭМ им. Пастера (25-27 мая 1993, Санкт-Петербург). -Санкт-Петербург, 1993. -Ч. 2. С. 48.

56. Покровский В.И., Ющенко Г.В. Иерсиниоз // Руководство по инфекционным болезням. М.: Медицина, 1986.-С. 158-164.

57. Покровский В.И., Ющенко Г.В. Псевдотуберкулез //Руководство по инфекционным болезням.-М., 1986.-С. 148-158.

58. Полоцкий Ю.Е., Ценева Г.Я., Ефремов В.К. Моделирование псевдотуберкулезной инфекции // Болезни с природной очаговостью.-Л., 1983.-С. 91-103.

59. Романенкова Н.И., Авдеева Т.А. Способы определения энтеротоксигенности кишечных палочек на мышах-сосунках. //Метод, реком.: Л., 1980.-19с.

60. Романова Ю.М. Выявление некультивируемых форм бактерий с помощью ПЦР // Генодиагностика в современной медицине: сб. тез. докл. 3-й Всероссийской научно-практической конференции. М., 2000. — С.7-11.

61. Сазанов Н.С. Псевдотуберкулез. Киев: "Здоров'я", 1984. -120с.

62. Саяпина Л.В., Анисимова Т.И., Сергеева Г.М. и др. Диагностическая ценность новой питательной среды для выделения и культивирования возбудителей кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза //Журн. микробиол. 2000. -№6. -С. 15-18.

63. Сбойчаков В.Б. Применение твердофазного иммуноферментного анализа для диагностики псевдотуберкулеза //Автореф.дис. канд. мед. наук.-Л.,1986.-21с.

64. Серов Г.Д. Экспериментальные материалы по усовершенствованию бактериологической диагностики псевдотуберкулеза (ДСЛ): Автореф. дис. канд. мед. наук. Владивосток, 1969. - 18с.

65. Серов Г.Д., Знаменский В.А., Вишняков А.К. Дифференциальная среда для выделения микроба псевдотуберкулеза // Журн. микробиол. -1991.-№9.-С. 13-16.

66. Смирнов И.В., Ценева Г.Я., Митрикова Л.А. Выявление маркеров вирулентности у клинических штаммов иерсиний // Молекул, генет. микробиол. и вирусол. -1991.-№ З.-С. 19-21.

67. Смирнов И.В. Методические рекомендации по определению связанных с вирулентностью признаков иерсиний. Рязань , 1988.-18с.

68. Смирнов И.В., Ценева Г.Я. Фенотип возбудителя иерсиниоза и его значение для диагностики. // Журн. микробиол.- 1992. № 7. - С. 60-65.

69. Сомов Г.П. О психрофильных свойствах псевдотуберкулезного микроба и значении этого феномена в эпидемиологии Дальневосточной лихорадки // Дальневосточная скарлатиноподобная лихорадка (псевдотуберкулез человека). Л., 1978.- С. 3-13.

70. Сомов Г.П. Дальневосточная скарлатиноподобная лихорадка (псевдотуберкулез человека).-Владивосток, 1974.- 120 с.

71. Сомов Г.П. Дальневосточная скарлатиноподобная лихорадка. М.: Медицина, 1979.-182с.

72. Сомов Г.П., Литвин В.Ю. Экологические основы эпидемиологии сапронозов // Матер. XYIII съезда микробиол., эпидемиол. и паразитологов (Алма-Ата, 26-29 сент. 1989 г.). Алма-Ата, 1989. - С. 112-119.

73. Сомов Г.П., Покровский В.И., Беседнова Н.Н., Антоненко Ф.Ф. Псевдотуберкулез. М.: Медицина, 2001. - С. 46-56.

74. Сомов Г.П., Бурцева Т.И., Бузолева JI.C. Биохимические механизмы энергообеспечения клеток Y.pseudotuberculosis при низкой температуре культивирования // Журн. микробиол.-2000.- № 1. С.3-6.

75. Сомов Г.П., Тимченко Н.Ф. Основные итоги изучения психрофильности патогенных бактерий// Журн. микробиол.-1997.- № 5. С. 12-16.

76. Тимченко Н.Ф., Антоненко Ф.Ф. О входных воротах и путях проникновения Yersinia pseudotuberculosis в теплокровный организм // Журн. микробиол. -1990. №10.- С.15-19.

77. Тимченко Н.Ф., Недашковская Е.П., Венедиктов B.C. и др. Токсины Yersinia pseudotuberculosis. // Иерсиниозы: Тез. докл. всесоюзн. научно-практич. конф. Владивосток, 1989. - С.59-61.

78. Фёдоров Н.А., Суханов Ю.С., Асади Мобархан А.Х., Артемьев М.И. Полимеразная цепная реакция (ПЦР). М., 1996.-33с.

79. Федорова В.А., Самелия Ж.Г., Девдариани 3.JI. Изучение и характеристика видоспецифического эпитопа Yersinia pseudotuberculosis с помощью моноклональных антител. //Биотехнология. -2001. № 6 -С. 8 -13.

80. Фролова Г.М., Горшкова Р.П., Калмыкова Е.Н., Оводов Ю.С. Иммунохимическое изучение липополисахаридов Yersinia enterocolitica сероваров О: и 0:5,27. // Журн. микробиол.- 1988. № 12. - С. 90-94.

81. Хотько Н.И., Коломиец В.В., Добло А. Д., Матусевич A.JI. К характеристике носительства в эпидемическом процессе при иерсиниозах. // Инфекции, обусловленные иерсиниями: Тез. Докл. Международной конф. Санкт-Петербург, 2000. - С.64.

82. Ценева Г.Я. Лабораторная диагностика псевдотуберкулеза и иерсиниоза. Санкт-Петербург, 1997. - 33с.

83. Ценева Г .Я. , Полоцкий Ю.Е., Ефремов В.Е. и др. Характеристика инвазивности возбудителя псевдотуберкулеза // Журн. микробиол. -1984. №5.- С.26-30.

84. Ценева Г.Я., Бондаренко В.М., Полоцкий Ю.Е. Инвазивность и цитотоксичность как критерии оценки аттенуации иерсиний // Журн. микробиол. -1988. №9.- С. 10-15.

85. Ценева Г.Я., Дайтар А.Б., Носков Ф.С. и др. Лабораторная диагностика псевдотуберкулеза //Сов. мед. 1984.-№ 1- С.

86. ЮО.Ценева Г.Я. Варианты проявления основных патогенных свойств иерсиний в эксперименте и их сопоставление с изменениями у больных // Инфекции, обусловленные иерсиниями: Тез. докл. международной конф.- Санкт-Петербург, 2000. -С.66.

87. Ценева Г.Я. Биология возбудителя, вопросы патогенеза ииммунодиагностики псевдотуберкулеза: Дисс.д-ра мед. Наук. Л.,1987. 336с.

88. Ценева Г.Я., Воскресенская Е.А., Солодовникова Н.Ю. Биологические свойства иерсиний и лабораторная диагностика псевдотуберкулеза и иерсиниоза. Пособие для врачей. СПб,2001. -60 с.

89. ЮЗ.Ценева Г.Я., Дятлов Ф.Г., Идина М.С., Курова Г.А. //Жидкая питательная среда для выделения иерсиний //Лабораторное дело. -1990. -№5 С.66-68.

90. Ценёва Г.Я., Полоцкий Ю.Е., Клеганов В.К., Ефремов В.Е. Выбор моделей для определения патогенных свойств возбудителей псевдотуберкулеза // Журн. микробиол. 1982. - №11.- С.68-71.

91. Юб.Ценева Г.Я., Солодовникова Н.Ю., Воскресенская Е.А. Молекулярные аспекты вирулентности иерсиний. // Клинич. микробиол. и антимикроб, терапия. 2002. - Том 4.- № 3. - С. 248-266

92. НО.Шурыгина И.А., Чеснокова М.В., Климов В.Т., Малов И.В., Марамович А.С.// Псевдотуберкулез. Новосибирск, 2003. - 319с.

93. Эпидемиология, лабораторная диагностика иерсиниозов, организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий: Инструкция МЗ СССР утв. 30.10.90 № 15-6/42.

94. Ющенко Г.В. Иерсиниоз и псевдотуберкулез // Эпидемический процесс как социально-экологическая система.-М., 1986. С.67-78.

95. ИЗ.Ющенко Г.В. Некоторые аспекты в эпидемиологии и клинике псевдотуберкулеза // Актуальные вопросы эпидемиологии и инфекционных болезней: Сб. науч. трудов НИИЭМ им. Пастера. М., 1976. -Вып. 5. - 4.1. - С.141-145.

96. Ющенко Г.В. Псевдотуберкулез и иерсиниоз: эпидемиологические и экологические аспекты// Инфекции, обусловленные иерсиниями: Тез. докл. международной конф.- Санкт-Петербург, 2000. -С.2.

97. Ющенко Г.В. Род Yersinia // Энтеробактерии. М.: Медицина, 1985. - С.220-239.

98. Нб.Ющенко Г.В. Значение для лабораторного подтверждения иерсиниоза и псевдотуберкулеза исследования различных субстратов от больных // Микробиология и иммунология иерсиниозов. Рязань, 1985. - С. 4956.

99. Ющенко Г.В., Дунаев В.И. Новый метод выделения иерсиний от больных и из объектов окружающей среды и сравнительная оценка его с общепринятым // Вопр. физиол., метаболизма и идентиф микроорг.-М., 1987. -С. 115-119.

100. Ющенко Г.В. Современное состояние проблемы иерсиниозов //Эпидемиол. и инф. болезни. -1998. № 6. -С.8-11.

101. Ющенко Г.В., Дунаев В.И., Гречищева Т.С., Некрасова Л.И. Тарасова Л.Г. Серологический пейзаж Yersinia enterocolitica, выделяемых от людей и из окружающей среды. // Журн. микробиол.- 1982. № 2. - С. 34-37.

102. Ющук Н.Д., Кареткина Г.Н., Ценева Г.Я. и др. Иерсиниозы: итоги изучения и задачи научных исследований // Инфекции, обусловленные иерсиниями (иерсиниоз, псевдотуберкулез) и другие актуальные инфекции: Мат. Международной конф.-СПб, 2000. -СЛ.

103. Янькова В.И., Бениова С.Н., Андреева Л.А., Дзадзиева М.Ф. Разработка и характеристика эритроцитарных антигенных диагностикумов для выявления кишечного иерсиниоза //Журн. микробиол.- 1991.- № 4.-С. 83-84.

104. Яфаев Р.Ч., Воробьев И.Г., Еременко В.А. и др. Эпидемиологическая характеристика псевдотуберкулеза в условияхкрупного административного центра на Северо-Западе страны // Тез. Всес. науч.-практ. конф. -Владивосток, 1986. С. 144-146.

105. Adesiuyun A., Agbonlahor D., Lomgin L., Kwaga I. Occurence of virulence marhrrs in species of Yersinia isolated from animals in Nigeria // Vest. Microbiol. 1986. - Vol. 12. -N 3.- P. 289-294.

106. Agbalica F., Soltandallal V., Hartemann P. Isolation of Yersinia from surface water comparative study of three selective media // Water Res. -1985. -V. 19. N 10. - P. 1255-1258.

107. Agbonlahor D. Characteristics of Yersinia intermedialike bacteria isolated from patients with diarrea in Nigeria // J. Clin. Microbiol. 1986. - V. 23.-N5.-P. 891-896.

108. Ahnover P. Human yersiniosis in Finland// J. Bacteriology and serology. Ann. Clin. Res.- 1972.- V. 4.- N 1.- P. 30-38.

109. Aleksic S., Bockemuhi J., Proposed revision of the Wauters et al. antigenic scheme for serotyping of Yersinia enterocolitica // J. clin. Microbial. 1984. -Vol.20.-Nl.- P.99-102.

110. Aulisio C., Mehlman J., Sanders A. Alkali method for rapid recovery of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis from foods // Appl. And Environ. Microbiol.- 1980.- V. 39.- N l.-P. 135-140.

111. Bercovier H., Brault J., Cohen S. et al. A new isolation medium for the recovery of Yersinia enterocolitica from environmrntal sources // Curr. Microbiol. -1984. -V.10. N 3. - P. 121-124.

112. Bercovier H., Alonso J.M., Bentaiba Z.N. et al. Contribution to the definition and the taxonomy of Yersinia enterocolitica // Contrib. Microbiol. Immunol. -1979.-N5.-P. 15-22.

113. Bhaduri S., Conway L.K., Lachica R.V. Assay of crystal violet binding for rapid identification of virulent plasmid-bearing clones of Yersinia enterocolitica.//J. Clin. Microbiol. -1987. -N 6. P. 1039-1042.

114. Bitzan M., Hack H., Mauff G. Yersinia enterocolitica serogiagnosis: a dual role of specific Ig A. Evoluation of microagglutination and ELISA // Zbl. Bact. Hug. A. 1987. - V. 267. - N 2. - P. 194-205.

115. Boer E., De Seldam W.M., Oosterom J. Characterization of Yersinia enterocolitica and related species isolated from foods and porcine tansil in the Netherlands /Ant. J. Food Microbiol. 1986. - V. 3. -N 4. - P. 72177224.

116. Bonsdorff M., Friman C. Infection due to Yersinia enterocolitica and thyroid deseases// Lancet-1974.-N 7896.-P. 1565-1566.

117. Bottone E. Yersinia enterocolitica: overview and epidemiologic correlates //Microbs and Infect. -1999. Vol.1.- N4. - P.323-333.

118. Bulte M., Klein J., Reuter G. Is the meat contraminated by Yersinia enterocolitica strains pathogenic to man ? // Fleischwirtschaft.- 1992. -72. -N9.-P. 1267-1270.

119. Cafferkey M.T., Buckley T. F. Comparison of saline agglutination, antibody to human gammaglobulin and immunofluorescence tests in the rountine serological diagnosis of yersiniosis //J. Infect. Dis. 1987. - V.156. - N 5. - P. 845-848.

120. Carniel E. The Yersinia high-pathogenicity island. //In. microbial. 1999. -N2.-P. 161-167.

121. Coons A.N. Fluorescent antibody methods. // General cytochemical methods. Ed.T.P. Denietti, 1958.- P. 399-422.

122. Delmus C., Vidon D. Isolation of Yersinia enterocolitica and related species from foods in France // Appl. Environm. Microbiol. 1985. - V. 50. -N4.-P. 767-771.

123. Diaz R., Urra E., Toyos J. Characterization of Yersinia enterocolitica antigen common to enterocolitis-assosiated serotypes //J.Clin, microbial. -1985. -Vol.22.-№ 6.-P.1035-1039.

124. Donnely C.W. Concerns of microbiol. pathogens in association with dairy foods // J. Dairy Sci.- 1990. 73.-N 6. - P. 1656-1661.145 .Edwards P.R., Ewing W.H. Identification of Enterobacteriaceaea. 3rd ed. Minneapolis: Burgers Publishing Co, 1972.-452p.

125. Eisenstein B.I., Engleberg N.C. Applied molecular genetics: new tools for microbiologists and clinicans // J. Infect. Dis. 1986. -Vol. 153.- N.3.- P. 416-430.

126. Eiss J. Selective culturing of Yersinia enterocolitica at low temperature // Scand.J.Inf. Dis.- 1975.- N 7.- P. 249-251.

127. Elisabeth M., Kalman M., Rajary J. et al. Isolation from food and characterization be virulence tests of Yersinia enterocolitica associated with an outbreac // Acta Microbiol. Hung. 1987. -V. 34. - N 2. - P. 97-109.

128. Erich H.A., Celfand D., Sninsky J.J. Recent Advances in Polimerase Chain Reaction // Science. 1991. - Vol. 252. - P. 1643 - 1651.

129. Farmer J.J. and Michael T. Kelly // Manual of clinical microbiology, fifth edition.- 1991.- P.360-383.

130. Feeley J.C., Wells J.G., Tsai T.F., Puhr N.D. Detection of enterotoxigenic and invasive strains of Yersinia enterocolitica// Contribs-Microbiol. Immunol.- 1979.- Vol.5.- P. 329-334.

131. Fernandez L., Rodriguez N., Chordi A. Rapid serotyping of enteropathogenic Yersisinia enterocolitica strains by coagglutination // Ann. Inst. Pasteur. Microbiol. 1988. -V. 139. - N 4. - P. 461-472.

132. Figura N., Rossolini A. A prospective etiological and clinical study on gasroenteteritis in Italian children //Bol. 1st. Sieroter. Milan. -1985. -Vol.64.-N. 4,- P. 302-310.

133. Frederiksen W. A study of some Yersinia pseudotuberculosis-like bacteria (Bacterium enterocoliticum and «Pasteurella X»)// Proc. Of 14th Scandinavica Congress on Pathology and Microbiology. -Oslo, 1964.-P. 103-104.

134. Fukushima H. Direct isolation of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis from meat // Appl and Environ. Microbiol. 1985. -Vol. 50.-N3.-P. 710-712.

135. Fukushima H. New selective agar medium for isolation of virulent Yersinia enterocolitica //J. Clin. Microbiol. 1987. - V. 25. - N 6. - P. 10681073.

136. Fukushima H., Nakatura R., Iitsuka S. et al. Presence zoonotic pathogens (Yersinia spp., Campilobacter jejuni, Salmonella shh., Leptospira spp.) simultaneously in dogs and cats // Zbl. Bact. Hyg. Abt. Orig. -1985. Bd. 181.- N 3-5. - S. 430-440.

137. Fukushima H., Tsubokura M., Otsuki K. et al. Epidemiological study of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis infections in Shimane Prefecture, Japan // Zbl. Bact. -1985. Abt. IB. - Vol. 180.- N 5-6.-P. 517-527.

138. Fukushima H., Gomyoda M., Kaneko S. et al. Restriction endonuclease of virulence plasmids for molecular epidemiology of Yersinia pseudotuberculosis infections. //J. Clin. Microbiol. -1994. -Vol 32. -N 5. P. 1410-1413.

139. Fukushima H., Hoshina К. Selective isolation from Hela cell lines of Yersinia pseudotuberculosis, pathogenic Yersinia enterocolitica and enteroinvasive Escherichia coli. // Zbl. Bacteriol. -1994. -Vol. 280. N 3. -P. 332-337.

140. Fukushima H., Sato Т., Nagasaco R., Takeda I. Acute mesenteric lymphadenitis due to Yersinia pseudotuberculosis lasking a virulence plasmid // J. Clin. Microbiol.-1991.- V. 29.- № 6. P. 1271-1275.

141. Grant Т., Bennet-Wood V., Robins-Browne R.M. Identification// Infect. And Immun. -1998. -Vol.66.- N3. -P. 1113-1120.

142. Greenwood M.H., Hooper W.L. Improved methods for the isolation of Yersinia species from milk and foods // Food Microbiol.- 1989. -V. 6. -N2.-P. 99-104.

143. Harmon M., Swaminathan B. An evaluation of selective differential planting media for experimentally inoculated fresh ground homogenate // J. Food Sci. 1983. - V. 48. - N 1. - P. 6-9.

144. Head C.B., Whitty D.A., Ratnam S. Comparative study of selective media for recovery of Yersinia enterocolitica //J. Clin. Microbiol. 1982. - V. 16.-N4.-P. 615-621.

145. Heesemann J., Eggers C., Schoroder J. Serological diagnosis of yersiniosis by immunoblot techgue using virulence- associated antigen of enteropathogenic Yersisinia // Contrib. Microbiol, immunol. 1987.

146. Heyma P., Harrison L., Robins-browne R. Thyrotrophin (TSH) binding sites on Yersinia enterocolitica recognised by immunoglobulins from human with Graves'disease // Clin. And Exp. Immunol. 1986.- V. 64. -№2. -P. 249-254.

147. Hoogkamp-Koratanje J., de Koning J., Samsom J. Incidence of Human infection with Yersinia enterocolitica serotypes 0:3,0:8 and 0:9, and the use of indirect immunofluorescenci in diagnosis // J. Infect. Dis. 1986. - V. 153.-Nl.-P. 138-141.

148. Jurkson P. Isolation of Campilobacter spp. and Yersinia enterocolitica from domtstic animals and human patients in Kenya // APMFS. -1988. -Vol. 96.-N2.-P. 141-146.

149. Kansouzidon A., Litke Kanakouki O.M., Labropoulou M. et al. Occurance isolating of Yersinia spp. in pasteurisated and notpasteurisated milk // Acta microbiol. hell.- 1990. 35. - N 2. - P. 168-175

150. Larson J. The srectrum of clinical manifistation of infection with Yersinia enterocolitica and their pathogenesis// Contribs. Microbiol. and Immunol.- 1979.-V. 5. P. 257-269.

151. Lee W. Testing for recovery of Yersinia enterocolitica in foods and their ability to invade Hela cells// Contribs. Microbiol. and Immunol.- 1979. -N. 5.-P. 228-233.

152. Lee W. Two plating media modified with Tween 80 for isolation Yersinia enterocolitica// Appl. Environ. Microbiol.- 1977.- V. 33.- P. 215216.

153. Lucangeli C., Morabito S., Caprioli A. et al. Molecular fingerprinting of strains of Yersinia ruckeri serovar 01 and Photobacterium damsela subsp. Piscicida isolated in Italy. //Vet. Microbiol. 2000. - Vol. 76. - N 3. - P. 273281.

154. Mazigh D., Quilici M., Mollaret Y. Immunogenecity of Yersinia // Contrib. Microbiol. Immunol.- 1987. N 9.- P.304-311.

155. Mazigh D., Chalvignae M., Quilici M., Mollaret Y. Lask of correlation between plasmid-encoded outer membrane proteins and virulence of Yersinia enterocolitica // Ann. Inst. Pasteur Microbiol. 1985. - V. 1363. -N 1. - P. 39-47.

156. Mehlman L., Aulisio C., Sanders A. Problems in recovery and identification of Yersinia from food // J. of Ass. Offic. Analit. Chem.-1978.- V. 61.- P. 761-771.

157. Miller V., Farmer L., Walter H., Stenley F. The ail locus in found uniguely in Yersinia enterocolitica serotypes commonly associated with disease // Infec. and Immunol. 1989. - Vol. 57.- N 1. - P. 121-131.

158. Miskova V. Vyskyt Yersinia enterocolitica, zvolaste serovaru 03, biovaru 4 ve veprovem a hoverim mase // Cs. Fridemiol., microbiop., immunol.-1990. -39. -N4. P. 222-227.

159. Najdenski H., Iteman I., Carniel E. Efficient subtyping of pathogenic Yersinia enterocolitica strains by pulsed-field gel electrophoresis. // J. Clin. Microbiol. -1994. -N 32. P. 2913-2920.

160. Narinden K., Sharma, Patrick W.D. et al. Identification of Yersinia species by the API 20E //J. Clin. Microbiol. 1990. - Vol.28.-N6.-P.1443-1444.

161. Pai C., Solger S., Lafleur L. et al. Efficacy of cold enrichment technique for recovery of Yersinia enterocolitica from human stools // J. Clin. Microbiol.-1979.- N 9.- P. 712-715.

162. Park C. A new sensitive technique for isolation of Yersinia enterocolitica from foods // Psychrotrophic Microorganisms in Spoilage and Pathogenesity. London, 1982.-P. 120-128.

163. Paterson J.S., Cook R.A. A metod for the recovery of Pasteurella pseudotuberculosis from faeses // J. Path. Bact.- 1963. Vol. 85. - P. 241242.

164. Paucu L., Rusu V., Capruru N. Improved method of Yersinia enterocolitica isolation in faeces // Arch. Roum. Patrol. Exp. Microbiol. -1987.- V.46. -Nl. P. 5-15.

165. Peterson Т. Keeping quality of sefsulodin-ingasan-novobiocin (CIN) medium for detection and enumeration of Yersinia enterocolitica // Int. J. Food Microbiol. -1985. -V. 2. -Nl-2. P. 49-50.

166. Picard-Pasquier N., Picard В., Heeralal S. et al. Correlation between ribosomal DNA polymorphism and electrophoretic enzyme polymorphism in Yersinia. // J. General Microbiol. -1990. -N 136. P. 1655-1666.

167. Pierson D.E., Falkow S. The ail gene ofYersisinia enterocolitica has a role in the ability of the organism to survive serum killing infect. Immun. -1993. N 61 (5). - P. 1846-1852.

168. Ram S., Khurana S., Singh R. et al. Yersinia enterocolitica diarrhoea in north India // Ind. J. Med. Res. 1987. - Vol. 86.-N July. - P. 9-13.

169. Ramamurthy Т., Yoshino K., Huang X. et al. //Microb. Pathogen. 1997. -Vol.23.-N4.-H.189-200.

170. Rolfs A., Schuller I., Finckh V., Weber Rolfs I. PCR: clinical diagnostics and research. Part 1: PCR principles and reaction components. -N.J.: Springer - Verlag, 1993. - 21p.

171. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., Mullis K.B., Horn G.T., Erlich H.A., Arnheim N. Enzymatic amplification of B- globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia // Science. -1985.- N. 230. P. 1350 - 1354.

172. Schiemann D. Enrichment methods for recovery of Yersinia enterocolitica// Contribs. Microbiol, and Immunol.-1979.- N 5.- P. 212-217.

173. Schiemann D. Effect of Dyes on the Quantitation recovery of Yersinia enterocolitica// Appl. And Environ. Microbiol.- 1979.- V. 38.- N 2.-P. 205211.

174. Schiemann D. Yersinia enterocolitica: observation on some grows characteristics and response to selective agents// Can. J. Microbiol. -1980.-V. 26.-N 10.-P. 1232-1240.

175. Schleifstein J., Coleman N. An unidentified microorganism ressembling B. Lignieri and Pasteurella pseudotuberculosis and pathogenic for man // New-York State J. Med. 1939.- V. 39.- P.1749-1753.

176. Shavegani M., Stone W., Deforge J. et al. Yersinia enterocolitica and related species isolated from wildlife in New Yore State // Appl. And Environ. Microbiol. 1986. - Vol. 52.- N 3. - P. 420-424.

177. Sory M-P., Tollenaere J., Laszlo C. et al. Detection of pYV+ Yersinia enterocolitica isolates by PI slaid agglutination. // J. Clin. Microbiol. -1990. -N11.-P. 2403-2408.

178. Stanblerg Т., Granfors K., Toivanen A. Immunoblot analysis of human IgM, IgG and IgA responses to plasmid-encoded antigens of Yersisinia enterocolitica serovar 0:3 // J. Med. Microbiol. 1987. - V. 24. - N 2. - P. 157-164.

179. Stull Т., LiPuma J.J., Edlind T.D. A broadspectrum probe for molecular epidemiology of bacteria: ribosomal RNA. // J. Infect. Dis. -1998. -N 157. P. 280-286.

180. Szita J., Svidro A. A five-year survey of human, Yersinia enterocolitica infection in Hugary// Acta Microbiol. Fcfd. Sci., Hung.- 1976.- V. 27.-P. 103-110.

181. Thiele D. The Technique of Polymerase Chain Reaction a new Diagnostic Tool in Microbiology and other scientific Fields (Review) // Zbl. Bact. -1990. - Vol. 273.- N. 4. - P. 431 - 454.

182. Tsubokura M., Aleksis S. A simplified antigenic scheme for serotyping of Yersinia pseudotuberculosis: phenotypic characterization of reference strains and preparation of О and H factor sera // Contrib. Microbiol. Immunol. 1995. -N13.-P. 99-105.

183. Van Pee W., Stragier J. Evalution of some cold enrichment and isolation media for the recovery of Yersinia enterocolitica // Antonie van Leewenhoek.- 1979.- V. 45.- P. 465-477.

184. Wannet W.J.B., Reessink M., Brunings H.A., Maas H.M.E. Detection of pathogenic Yersinia enterocolitica by a rapid and sensitive duplex PCR assay. //J. clin. microbiol. 2001. - Vol. 39. -N 12. - P. 4483-4486.

185. Wauters G. Improved methods for the isolation and recognition of Yersinia enterocolitica// Contribs. Microbiol. And Immunol.- 1973.- N2,- P. 68-70.

186. Wauters G. Contribution a l'etude de Yersinia enterocolitica.- Belgium, 1970.-167 p.

187. Weissfeld S., Sonnenwirth A. Yersinia enterocolitica in adults with gastrointestinal disturbances need of cold enrichment // J. Clin. Microbiol.-1980.-N11.-P. 196-197.

188. Young V. В., Miller V.L., Falkow S., Schoolnik G. K. Sequence, localization and function of the invasin protein ofYersisinia enterocolitica // Molecular Microbiology. 1990. - N 4(7). - P. 1119-1128.

189. Zaremba M. Standartization of the agglutination test in the diagnosis of Yersinia enterocolitica //Arch. Immunol. Ther. Exp. 1978. - Vol. 26. - N1-6. -P. 631-636.

190. Zen-Yoli H., Sakai S., Maruyama T. et al. Isolation of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis from swine, cattle and rats at an abattoir//Jap. J. Microbiol. -1974. V. 18. -N 1. - P. 103-104.

Информация о работе

Смирнова, Елена Юрьевна
кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Совершенствование лабораторного обеспечения системы эпидемиологического надзора за иерсиниозами - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы