Мясо как фактор передачи инфекции при иерсиниозе

Киселева, Ирина Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Мясо как фактор передачи инфекции при иерсиниозе
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Мясо как фактор передачи инфекции при иерсиниозе"

На правах рукописи

КИСЕЛЕВА ИРИНА СЕРГЕЕВНА

МЯСО

КАК ФАКТОР ПЕРЕДАЧИ ИНФЕКЦИИ ПРИ ИЕРСИНИОЗЕ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саратов 2005

Работа выполнена на кафедре микробиологии и ветсанэксперти-зы Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова».

доктор медицинских наук, профессор Зыкин Леонид Федорович;

доктор биологических наук, профессор Попов Юрий Алексеевич;

доктор медицинских наук, профессор Швиденко Инна Григорьевна;

Всероссийский научно-исследовательский институт мясной промышленности (г. Москва)

Защита состоится « /У» ¡.¡¿(Х^Ю^^ 2005 г. в 00. часов на заседании диссертационного совета Д 220.061.04 в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И.Вавилова» по адресу: 410005, Саратов, ул. Соколовая, 335. Тел./факс (8452) 69-25-32.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» по адресу: 410005, г. Саратов, ул. Соколовая, 335.

Автореферат разослан 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Л.В. Карпунина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В последние годы иерсиниоз привлекает все большее внимание как ветеринарных работников, так и специалистов пищевых производств. Многочисленные источники литературы свидетельствуют о практически повсеместном распространении этой инфекции в России и за рубежом (Garrigue, Poveda, Camiel, 1993; Куликовский, Соснина, 1995; Черкасский, 1995; Logue et al., 1996; Померанцев, Васильев, 1998; Ленченко, 2000).

Многие отечественные и зарубежные исследователи обращают внимание на то, что мясо и мясные продукты нередко инфицированы Y. enterocolitica (Стефанов, 1989; Quaglio et al., 1989; Mickova, 1990; Boer et al., 1991; Kwaga, Iversen, 1992; Кузнецова, Ленченко, Штукарева, 1995). Наиболее частым источником инфекции считают свиней, а свиное мясо ряд авторов рассматривают как важный фактор при заражении (Frederiksson-Ahomaa, 1999; Ющук и соавт., 2003). В связи с психрофильностью и солеустойчивостью иерсиний большим фактором риска являются технологии производства некоторых видов колбас (сыровяленых и сырокопченых), при которых исключается высокотемпературный нагрев, а созревание фарша при низких положительных температурах благоприятствует активному размножению Y. enterocolitica (Гречищева, 1981; Дулатова, 1989; Куликовский, Джентемирова, 1993).

В нашем регионе исследования мяса и мясопродуктов на Y. enterocolitica не проводились. Кроме того, не изучен вопрос о влиянии различных факторов на жизнеспособность кишечных иерсиний при изготовлении мясопродуктов.

Ввиду этого, является актуальным направление по разработке мер, предотвращающих размножение и накопление возбудителя иерсиниоза в мясопродуктах на различных стадиях технологического процесса.

Целью работы явилось выяснение роли мяса и мясопродуктов как факторов передачи возбудителя при иерсиниозной инфекции, а также установление влияния технологических факторов и пищевых добавок на выживаемость У еШегосоИ-Иса в процессе производства колбасных изделий.

Задачи исследования

1. Исследовать мясо и мясопродукты, отобранные из хозяйств Саратовской области и магазинов г. Саратова, на наличие У. еШегосоШка.

2. Изучить динамику размножения кишечных иерсиний в мясном фарше при различных режимах охлаждения и хранения мяса и мясопродуктов.

3. Определить эффективность применения ряда добавок, используемых в мясоперерабатывающей промышленности, для подавления размножения У. еШегосоШка в мясопродуктах.

4. Провести исследование антагонистического действия молочно-кислых микроорганизмов на выживаемость У. еШего-соНИса в условиях производства сыровяленых колбас.

5. Апробировать непрямой метод флуоресцирующих антител для экспресс-индикации У. еШегосоИНса в мясе и мясопродуктах.

Научная новизна

Впервые в Саратовской области из мяса и мясопродуктов изолированы культуры У. еШегосоНИса: 10 штаммов обладали признаками вирулентных иерсиний, у остальных четырех маркеры вирулентности носили вариабельный характер.

Доказано, что сыровяленые и сырокопченые колбасы являются благоприятными объектами для размножения в них кишечных иерсиний.

Показано, что использование некоторых штаммов мо-лочно-кислых бактерий оказывает задерживающее действие на рост У. еШегосо1Шса в сыровяленых колбасах.

Ф Установлено, что при стандартных режимах охлаждения и хранения происходит значительное накопление возбудителя иерсиниоза в мясе, что может способствовать передаче иерсиниозной инфекции.

Ф Пищевые добавки, используемые в технологии изготовления мясопродуктов, в определенных концентрациях оказывают ингибирующее действие на размножение У еШегосо1Шса.

Ш Показано преимущество непрямого метода флуоресцирующих антител для индикации У. вШвгосоШШса в мясе по сравнению с бактериологическим методом по чувствительности и скорости проведения анализа.

Практическая значимость

Впервые показано, что мясо из 10 различных районов Саратовской области, а также мясной фарш из сети магазинов розничной торговли г. Саратова контаминированы иерсиния-ми, то есть могут являться вероятными причинами инфекции. Обращают внимание случаи изоляции иерсиний из мяса, полученного из животноводческих объектов Петровского района, неблагополучного по иерсиниозу.

Установлено, что быстрое охлаждение мяса при - 3... -5 °С и последующее его хранение при -1...-2 °С оказывают задерживающее действие на размножение У. вМвгосоШШса и могут быть рекомендованы технологам мясоперерабатывающих производств как наиболее эффективные для подавления размножения этих бактерий в мясе.

В результате проведенных исследований определены концентрации пищевых добавок, препятствующие накоплению в мясопродуктах возбудителя иерсиниоза: хлорид натрия в концентрации 4,5 %, нитрит натрия - 0,01 %, фосфаты - 0,5 %, лактат натрия - 0,3 %.

Непрямой метод флуоресцирующих антител является более информативным и эффективным методом обнаружения У. вШвгосоШШса в мясе и мясопродуктах по сравнению с куль-туральным методом, позволяет существенно сократить время проведения анализа и рекомендуется как экспресс-метод при выявлении иерсиний в мясе.

Апробированные схемы выявления возбудителя иерсинио-за в мясе и мясопродуктах: экспресс-индикация и бактериологическое исследование рекомендуются к использованию практическим лабораториям при контроле мяса и мясопродуктов.

По результатам исследования подготовлены «Методические рекомендации по обнаружению У. еШегосоИИса в мясе и мясопродуктах», утвержденные УМК ИВМиБ ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» им. Н.И. Вавилова (протокол № 34 от 17 декабря 2004 г.), которые могут быть использованы специалистами всех уровней, связанными с проведением экспертизы мяса и мясопродуктов, а также при обучении студентов специальностей «Технология мяса и мясопродуктов», «Ветеринария» и «Биотехнология».

На защиту выносятся следующие положения:

1. Инфицированность мяса и мясопродуктов У. еШегосоИ-Иса на территории Саратовской области составляет 9,92 %.

2. Наиболее эффективным режимом холодильной обработки для подавления жизнеспособности иерсиний в мясе и мясопродуктах является охлаждение при -3...-5 °С с дальнейшим подмораживанием.

3. Хлорид натрия, нитрит натрия, фосфаты и лактат в определенных концентрациях (4,5 %, 0,01 %, 0,5 %, 0,3 % соответственно) значительно уменьшают количество кишечных иерсиний в мясном фарше.

4. Препарат ПБ-МП, в состав которого входят штаммы Ьр1аШапит, оказывает сильное ингибирующее действие на размножение У. еШегосоНИса.

5. Непрямой метод флуоресцирующих антител обладает высокой чувствительностью (1x10'' КОЕ/мл) и является в два раза более информативным, чем бактериологический метод.

Работа выполнена на кафедре микробиологии и ветсан-экспертизы Института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» в рамках основных тем направления работы кафедры:

1. НИР № 21/02 «Роль сельскохозяйственных животных в распространении некоторых бактериальных и вирусных инфекций в Саратовской области» (2001-2002 гг.).

2. НИР № 21/ОЗВ «Разработка и внедрение эффективных методов дифференциальной диагностики туберкулеза, кишечного иерсиниоза, псевдотуберкулеза, листериоза и лейкоза сельскохозяйственных животных в Саратовской области» (2002-2003 гг.).

Апробация работы

Материалы диссертации изложены на Межрегиональных научных конференциях молодых ученых и специалистов системы АПК Приволжского федерального округа «Вавиловские чтения» за 2003 и 2004 гг., на Международной конференции молодых ученых «От фундаментальной науки - к новым технологиям. Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии» (Тверь, 2003), а также на 2-й региональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой» (Саратов, 2004).

Материалы диссертации представлены в отчетах НИР ИВМиБ в рамках ассоциации аграрного образования и науки за 2003-2004 гг.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, литературного обзора, экспериментальной части, включающей материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение, выводов и списка использованных литературных источников. Обзор литературы включает 10 разделов, посвященных проблеме иерсиниоза как инфекции, факторами передачи при которой являются мясо и мясопродукты. Материалы диссертации изложены на 116 страницах машинописного текста, включают 7 рисунков, 12 таблиц. Список использованных литературных источников включает 182 наименования, в том числе 65 иностранных.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Материалы и методы

Отбор образцов мяса, фарша и лимфоузлов проводили в соответствии с ГОСТ 21237-75 «Мясо. Методы бактериологического анализа», ГОСТ 26668-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических исследо-

ваний», ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов».

Выделение, идентификацию и изучение штаммов Y. еп-terocolitica проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по лабораторной диагностике иерсиниоза и псевдотуберкулеза» (Ценева, 1992), «Инструкциями по эпидемиологии, лабораторной диагностике иерсиниозов, организации и проведении профилактических и противоэпидемических мероприятий» (Москва, 1990) и «Рекомендациями по дифференциальной диагностике бруцеллеза и иерсиниоза и мерам по их профилактике» (2000). Бактериологическое обследование образцов мяса, фарша и лимфоузлов проводили с применением метода холодового обогащения в 1-й % забуференной пеп-тонной воде (ЗПВ), буферно-казеиново-дрожжевой среде (БКД) или фосфатно-буферном растворе (ФБР). Культураль-но-морфологические свойства выделенных штаммов Y. entero-colitica изучали на дифференциально-диагностических средах ЭНДО, иерсиниозно-псевдотуберкулезной среде (ИПС) производства НПЦ ГИП г. Оболенск и цефсулодин-иргазан-новобиоцин - агаре (CIN) производства фирмы Merk, Darmstadt, Germany.

Биохимические свойства выделенных культур изучали с помощью индикаторных бумажных систем для идентификации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae (H. Новгород), а также набора ЭНТЕРОтест 16 производства PLIVA - Lachema (Чехия). Серотипирование культур, обладающих типичными биохимическими свойствами, проводили в РА с диагностическими иерсиниозными О-моновалентными сыворотками производства Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера. Вирулентность выделенных штаммов изучали in vitro при помощи следующих тестов: кальцийзависимость на среде Хигучи-Смита, пигментсорбция на агаре Хоттингера с конго-рот, агглютинация сывороткой СВИ к вирулентным иерсиниям, темпе-ратурозависимый рост на агаре Хоттингера, аутоагглютинация на среде Кларка по общепринятым методикам (Ценева, 1992; Зыкин и соавт., 2002).

С целью изучения влияния режимов холодильной обработки и хранения мяса и мясопродуктов на динамику размножения иерсиний образцы фарша массой 20 г контаминировали культурой Y. enterocolitica 03 серотипа (штамм № 66-82) в дозах 1x103 и 1x104 КОЕ/г и выдерживали при соответствующих режимах. Для сравнительной оценки были использованы три режима охлаждения: быстрый (-3...-5 °С, 12-16 ч), ускоренный (О °С, 20-24 ч), медленный (+2 °С, 26-28 ч) и три режима хранения охлажденного мяса: при +2 °С, О °С и -1...-2 °С. После созревания и хранения мяса при вышеназванных режимах определяли число жизнеспособных клеток Y.enterocolitica методом серийных разведений в 0,85 %-м растворе NaCl. Принадлежность выросших колоний к Y.enterocolitica контролировали постановкой РА на стекле с моновалентной кишечно-иерсиниозной сывороткой.

Воздействие различных пищевых добавок на выживаемость Y.enterocolitica в фарше изучали в соответствии со следующей схемой: заражение фарша =>введение добавок=> выдержка в холодильнике при соответствующих режимах =>оп-ределение числа жизнеспособных клеток методом серийных разведений в 0,85 %-м NaCl с последующим высевом на ИПС или CIN - агар =>инкубация посевов при 26 °С 48 часов=> подсчет колоний.

При исследовании антагонистического действия стартовых культур и сушки на выживаемость возбудителя иерсиниоза при созревании и в условиях производства сыровяленых колбас использовали коммерческие препараты GN-START-67 (Lactobacillus curvatus, Staphylococcus xylosis) производства фирмы GEWURZMUHLE NESSE GMBH и ПБ-МП {Lactobacillusplan-tarium, Lactobacillus casei, Micrococcus variants) производства ВНИИ мясной промышленности, ООО «Препарат-М», г. Москва (Костенко и соавт., 1997). Для изучения динамики размножения иерсиний в сыровяленых колбасах применяли два метода созревания и сушки колбас: холодный и горячий (Кос-тенко и соавт., 1997). Предварительный посол модельных образцов фарша производили по рецептуре сыровяленой колба-

сы «Московская» (ТУ 10 РСФСР 861). Сушку осуществляли в сушильной камере, сконструированной доцентами А. К. Алейниковым и Е.В. Фатьяновым на базе кафедры автоматизации и оборудования пищевых производств Института переработки сельскохозяйственной продукции. Высевы исследуемых образцов делали на среды ИПС и CIN - агар после каждого этапа сушки. Посевы инкубировали при 26 °С 48 часов, подсчитывали колонии, контролируя принадлежность к Y. enterocolitica постановкой РА на стекле.

В непрямом методе флуоресцирующих антител (НМФА) для обнаружения Y. enterocolitica в мясе и мясопродуктах были использованы кроличьи моновалентные диагностические сыворотки к наиболее часто выделяемым из мяса и мясопродуктов сероварам Y.enterocolitica производства Санкт-Петербургского НИИЭМ им. Пастера, а также ослиная флуоресцирующая антикроличья сыворотка в рабочем разведении (1:4) производства ИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи, любезно предоставленная к.м.н. М.С. Веренковым, которому автор выражает свою благодарность.

Для определения чувствительности метода суточную культуру Y.enterocolitica 03 серотипа (штамм № 66-82) рас-титровывали в 0,85 %-м растворе NaCl и мясном экстракте в концентрациях lxl02, ^Ш^хЮ^ 1х105КОЕ/мл. Метод экспресс-диагностики проводили одновременно и параллельно с бактериологическим исследованием. Исследование проб мяса и лимфоузлов с помощью НМФА осуществляли в соответствии с наставлением по применению метода флуоресцирующих антител для специфической индикации биологических средств и диагностики инфекционных заболеваний (Онищенко, 2004), а также рекомендациями Е.Н. Левина (1977). Подготовленные препараты микроскопировали с помощью люминесцентного микроскопа марки «Люмам». Учет результатов производили по четырехбальной системе согласно прилагаемой инструкции. Учитывали 4 + и 3 + свечение.

Статистическую обработку результатов экспериментов производили по общепринятым методам с применением t-

критерия Стьюдента (Лакин, 1980) и пакета прикладных программ Statistica 6.0.

Результаты исследований

Исследование мяса и мясопродуктов на наличие иерсиний

При бактериологическом обследовании 113 проб заглоточных и подчелюстных лимфоузлов от убойных свиней из Питерского, Новоузенского, Федоровского, Ершовского, Краснокутского, Саратовского, Дергачевского, Петровского, Партизанского, Советского, Ровенского районов Саратовской области, а также 28 проб свино-говяжьего фарша, отобранного из розничной сети магазинов г. Саратова было выделено 14 штаммов, идентифицированных как У. вШвгосоШШса: 8 штаммов из лимфоузлов от свиных полутуш, 3 штамма - из лимфоузлов от КРС и 3 штамма - из фарша. Результаты изучения биохимических свойств выделенных штаммов У.вШвгосоШШса представлены в таблице 1.

Все изолированные из мяса и мясопродуктов штаммы обладали типичными культурально-морфологическими, биохимическими и серологическими свойствами. Выделенные штаммы давали характерный рост на дифференциально-диагностических средах, были представлены грамотрицатель-ными палочками, подвижны, обладали уреазой, не выделяли сероводород, давали положительную реакцию Фогеса-Проскауера при 26 °С и отрицательную при 37 °С. Часть штаммов были лактозоотрицательны, за исключением трех изолятов У. вШвгосоШШса (Е57г, Ф69г, Е1372).

Таблица 1

Биохимические свойства изолированных штаммов У.еШетосоНИса

\ № \штамма Гест N. гч </"> м о че сч ^ ЧО е N О 00 а (Ч В го с* о в г* о в Е Е о сч 2 -э- СП Ё (Ч т ш М 138 У.еШегосоН-Чса-66-82

маннит + + + + + + + + + + + + + + +

глюкоза + + + + + + + + + + + + + + +

сахароза + + + + + + + + + + + + + + +

лактоза + - + +

Р-галак- + + + + + + + + + + + + + + +

тозидаза

оксидаза

уреаза + + + + + + + + + + + + + + +

малонат

цитрат

фенил-

аланин

серово-

дород

Реакция

Фогес-

Проска-

уэра:

22 "С + + + + + + + + + + + + + + +

37 °С

индол + + + - - - - + + - - - - -

сорбит - - + - - + - - - + + - - -

орнитин - - - + - - + + + + + + + +

лизин

инозит + + + + + + + + + + + + + + +

целлобиоза + + + + + + + + + + + + + + +

эскулин + +

лецитиназа + + + + + + + + + + + + + + +

нитрат- + + + + - + - + + + + + + +

редуктаза

трегалоза + + + + - + - + + + + + + +

рамноза

Обозначения:

+ положительная реакция; - отрицательная реакция; + (-) большинство реакций положительны.

В результате серотипирования семь штаммов были отнесены к 03 серовару, семь - к 09 серовару. По результатам биотипирования два штамма (Е 57г, М 60) были отнесены к биовару 1А, один штамм (Ф 692) к биовару 1В, два (П 1092, П 113,) - ко 2, семь (П 802, М 97, П 115ь К120,, ПТ 1342, Е 1372, М 138) - к 4 и два (П 812, П 1072) - к 5 биоварам.

На основании тестов на вирулентность большинство изо-лятов отнесены к вирулентным (табл. 2).

Таблица 2

Вирулентность культур Y.enterocolitica, выделенных из мяса, в тестах in vitro

VТест Штамм \ Агглютинация СВИ Кальций-зависимость роста Пигмент-сорбция Темпера-турозави-симость морфологии колоний Аутоаг-глюти-нация

Е572 + + + - +

М60 + + + + -

Ф692 - + + + -

П802 - - - + +

П812 + + + + +

М 97 - - - - -

П 1072 + + + + +

П 1092 + + + + +

П 113, + + + + +

П 115, - - - + -

К 120, + + + + +

ПТ1342 + + + + +

Е 1372 + + + + +

М 138 + + + + +

Обозначения: + тест положительный; - тест отрицательный.

Патогенными для человека считают представителей био-варов 1В, 2, 3 и 4, дающих отрицательные реакции (одновременно) на индол, ферментацию эскулина, рамнозы и являющихся положительными в тестах на сахарозу и сорбит (Кузнецов, 2000; Ценева, Солодовникова, Воскресенская, 2002;

Смирнов, 2004). Согласно нашим данным, 10 штаммов из 14

(Е 572, П 812, П 1072, П 1092, П 113ь К 120ь ПТ 1342, Е 13 72, М

60, М 138) обладали основными признаками вирулентных иерсиний. Остальные изоляты обладали маркерами вирулентности частично (табл. 2).

Необходимо отметить, что 6 штаммов были выделены из лимфоузлов КРС и свиней хозяйств Петровского района. Причем, 4 из этих штаммов были вирулентными по всем признакам. Е.С. Осипчук (2003) из молока КРС различных хозяйств Петровского района изолировала 19 штаммов У.еШегосоШШса, 10 из которых оказались вирулентными. Это подтверждает непрерывную циркуляцию У.еМегосоШШса в животноводческих объектах Петровского района с включением в эпизоотическую цепь, как животных, так и продуктов животного происхождения, что требует, по нашему мнению, более пристального внимания санитарно-эпидемиологической и ветеринарной служб Саратовской области к объектам животноводства этого района.

Таким образом, результаты наших исследований устанавливают, что инфицированные мясо и мясные продукты могут являться возможными факторами передачи при иерсиниозной инфекции человека и животных.

Изучение влияния низких температур на динамику размножения Г. еМегосо1Шса в мясном фарше

Результаты исследования воздействия режимов охлаждения на выживаемость У. еШегосоШШса в мясном фарше представлены в таблице 3.

При изучении влияния режимов охлаждения на жизнеспособность У. еШегосоШШса в мясном фарше установлено, что независимо от заражающей дозы наиболее эффективно подавляют размножение иерсиний быстрый и, в меньшей степени, ускоренный режимы охлаждения мяса и мясопродуктов.

Как видно из таблицы 3, при быстром одностадийном охлаждении скорость размножения иерсиний уменьшается в 1,5

раза, по сравнению с ускоренным одностадийным охлаждением. Медленное одностадийное охлаждение способствует быстрому размножению иерсиний в контаминированном мясе.

Таблица 3

Влияние режимов охлаждения на выживаемость У.еМегосоНЫса в фарше

Ё Режим охлаждения Одностадийное, медленное (+2...+4°С) Одностадийное, ускоренное (0°С) Одностадийное, быстрое (-3...-5 °С)

л с о * Доза заражения, КОЕ/г фарша 1х103 1x104 1х103 1х104 1х103 1х104

1 Количество 14 42 11 25 6 10

2 выросших 17 38 7 30 7 12

3 колоний, К0ЕхЮ7г 16 40 8 25 4 15

4 16 35 9 28 5 13

5 фарша 14 40 12 26 6 10

М + ш 15,4x10'+0,6 39х10'+1,18 9,4x1040,93 26,8х10'+0,97 5,6х10'+0,51 12х10'+0,95

Р, - - <0,01 >0,01 >0,001 <0,05

Обозначения: Р, - достоверность по критерию Стьюдента.

При изучении динамики выживаемости У. еМегосоНйса в мясном фарше при различных режимах хранения установлено, что в первые сутки хранения при температурах +2 °С и О °С отмечено резкое увеличение количества клеток в мясном фарше, а наибольшей концентрации они достигали на 3-е сутки. Затем происходило постепенное, но не полное отмирание бактерий. При режиме хранения -1...-2 °С в первые сутки наблюдалось незначительное увеличение концентрации иерси-ний с последующим интенсивным отмиранием У. еШегосоИ-Нса, а на 5-е сутки эти микроорганизмы не высевались вообще. Динамика размножения иерсиний в мясном фарше при хранении отражена на рисунке 1.

Полученные результаты исследований показали, что мясной фарш является благоприятной средой для интенсивного размножения иерсиний, особенно при стандартных режимах хранения, а температура хранения +2 °С наиболее оптимальна

для их развития. Быстрое охлаждение мяса выгодно отличается с санитарно-гигиенической точки зрения, так как при этом замедляется процесс размножения кишечных иерсиний в фарше.

123456789 10

Время, сутки

Рис. 1. Динамика размножения У.вМвгосоНИса в мясном фарше при различных режимах хранения

Обозначения:

1- мясной фарш при t = -1.. .-2 °С;

2-мясной фарш при t =0 °С;

3-мясной фарш при t = +2 °С.

Важно подчеркнуть, что резкое снижение температуры при хранении мяса практически до криоскопической точки обеспечивает эффект торможения роста У. вШвгосоНИса, а следовательно, уменьшает вероятность заражения иерсиниозом. Поэтому режим хранения с подмораживанием (-1...-2 °С) может быть рекомендован как наиболее эффективный для подавления размножения У. вШвгосоНИса в мясопродуктах при хранении.

250

Определение эффективности пищевых добавок (соли, нитрита натрия, фосфатов, лактата) и стартовых культур для подавления роста У.еМегосоНЫса в мясопродуктах при созревании фарша

Результаты исследования представлены на рисунках 2, 3, 4, 5. Фарш после введения добавок и заражения выдерживался при температуре +2...+4 °С, что соответствует температурному режиму созревания фарша в производственных условиях.

1 2 3 4 5 6 7

Время сутки

►—Соль 2,5 % —■ - Соль 3 5 % —*—Соль 4 5 %

Рис 2 Динамика размножения У еШегоеоИйеа в мясном фарше при различных концентрациях ШО (доза заражения 1х103 КОЕ/г фарша)

и 200

1 2 3 4 5 6 7 Время, сутки

—Соль 2,5 % —Соль 3,5 % —Соль 4,5 %

Рис 3 Динамика размножения УеМегоео1Шеа в мясном фарше при различных концентрациях ШО

(доза заражения 1х104 КОЕ/г фарша)

Из данных, представленных на рисунках 2 и 3, можно заключить, что при всех испытанных концентрациях соли, за исключением 2,5 %, в первые 3 суток происходит резкое увеличение популяции иерсиний. На 4 сутки количество клеток иерсиний постепенно снижается, но они продолжают высеваться даже на 6 сутки. На рисунке 3 видно, что при дозе заражения 1x10'' КОЕ/г фарша и концентрации соли 2,5 % наблюдается стабильный рост и размножение У.еМеюеоННеа. При дозе 1х103 КОЕ/г и вышеуказанной концентрации соли количество иерсиний постепенно снижается.

Результаты эксперимента показали, что возбудитель иер-синиоза относится к умеренно солеустойчивым бактериям, и остается жизнеспособным при концентрации соли 4,5 %.

При исследовании воздействия нитрита натрия на жизнеспособность иерсиний установлено, что этот консервант значительно снижает количество клеток иерсиний уже с первых суток созревания фарша. Независимо от концентрации нитрита натрия на третьи сутки иерсиний в образцах фарша не обнаруживали (рис. 4). Это подтверждает мнение некоторых авторов о том, что нитрит натрия является сильнейшим ингибитором патогенной микрофлоры (Люк, Ягер, 2000).

^^■Нитрит натрия 0,005 % ^НИ^"Нитрит натрия 0,007 % А - Нитрит натрия 0,01 % - Ж - Фосфат 0,3% •-Фосфат 0,5%

Рис. 4. Влияние нитрита натрия и фосфата на выживаемость У. еМегоеоНИеа в фарше

По сравнению с нитритом натрия фосфаты оказывают умеренное подавляющее действие на размножение Y.enterocolitica. В 1-2 сутки созревания отмечали активное нарастание количества иерсиний в фарше. Далее происходил процесс постепенного отмирания иерсиний. Но даже на 7-е сутки иерсинии высевали в количествах 6,8-1,2x103 КОЕ/г фарша при концентрациях фосфата в фарше 0,3 % и 0,5 % соответственно (см. рис. 4).

Из рисунка 5 следует, что лактат натрия обладает сильным ингибирующим действием в отношении Y.enterocolitica. Уже на 2-е сутки отмечали эффект торможения размножения иерсиний, а на 5-й день при содержании лактата натрия в фарше 5 % наблюдали их полное отмирание. Наши данные совпадают с результатами исследований других авторов (Красуля, 2002) и научного центра фирмы «PURAC biochem bv» (Нидерланды), которые показали, что лактат натрия PURASAL в количестве 2-3 % тормозит развитие таких патогенных микроорганизмов, как Listeria monocytogenes, Clostridium botulinum при хранении готовых колбасных изделий в течение 2-4 недель.

Сравнительное изучение влияния ряда добавок на выживаемость Y.enterocolitica в фарше в процессе его созревания показало, что препарат ПБ-МП обладает большим эффектом торможения роста иерсиний, чем GN-StartSL-67. По-видимому, это связано с тем, что в состав ПБ-МП входят штаммы лактоба-цилл, в частности L. plantarium, которые, по мнению Jakubczak et al. (1996) обладают сильным антагонистическим действием по отношению к штаммам Y.enterocolitica 03 сероварианта, выделенных из туш забитых свиней. Сильное ингибирующее действие препарата ПБ-МП на иерсинии отмечалось уже с первых суток созревания, а на 4 сутки происходило полное отмирание Y.enterocolitica. В образцах фарша с добавлением GN-StartSL-67 в первые сутки наблюдали резкое увеличение популяции иер-синий с постепенным, но не полным их отмиранием в последующие дни созревания (рис. 5).

—«— Пактах 3 % —■— Лактат 5 %

ПБ-МП - -СМ^аПЗЬб?

Рис. 5. Динамика развития У.епгегоеоШка в фарше при воздействии лактата натрия и бактериальных препаратов

Влияние стартовых культур и сушки на жизнеспособность У. еМегосо1Шса в традиционных сыровяленых колбасах

С целью установления влияния бактериальных препаратов на рост иерсиний в условиях производства сыровяленых колбас была проведена сравнительная оценка двух методов сушки и созревания (холодного и горячего) на устойчивость У. еп-гегоеоШка в модельных образцах сыровяленой колбасы «Московская» при добавлении коммерческих бактериальных препаратов ПБ-МП и ОК-81аГ:8Ь-67. Результаты исследований полностью совпадают с данными, полученными при исследовании влияния этих препаратов на У. еШегоеоИНеа в процессе созревания фарша, и подтверждают сильное подавляющее действие препарата ПБ-МП на У. еШегоеоИНеа (рис. 6 и 7).

Что касается выбора способа созревания и сушки, то холодный способ рекомендуется нами как наиболее эффективный для подавления жизнедеятельности иерсиний. Из материалов рисунка 6 следует, что в течение первых 10 суток созревания наблюдается постепенное увеличение количества иерсиний в 10 раз. Затем их количество снижается, и концу процесса сушки они полностью отмирают. Это связано, по-видимому, с активным антагонистическим действием старто-

Время, сутки

вых культур. При горячем способе уже на 3-е сутки происходит резкое увеличение концентрации иерсиний в 102 раз, затем их концентрация также снижается, но они продолжают высеваться даже в конце процесса сушки (рис. 7). При холодном способе отмирание иерсиний происходит быстрее, чем при горячем, а общая концентрация клеток У. вntвrocolitica в продукте на протяжении всего процесса меньше в среднем на два порядка.

1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21

Время, сутки ИПБ-МП ■О^аг^М^

Рис.6. Антагонистическое действие двух бактериальных препаратов на развитие У. вМвгосоШка в процессе сушки сыровяленых колбас (холодный способ)

Таким образом, наши материалы свидетельствуют, что стартовые культуры активно подавляют развитие иерсиний. Это подтверждает мнение некоторых зарубежных авторов, что У. вШвгосоШка 0:3 сероварианта чувствительны к антагонистическому действию лактобацилл (Jakubczak et э1., 1996).

я 20000

5000 - .......- - ^ ■ ■ ■------------------------

0 в__И И Л Л шД —<■

Рис.7. Антагонистическое действие двух бактериальных препаратов на развитие У. еШегосоНИса в процессе сушки сыровяленых колбас (горячий способ)

Анализируя результаты исследования влияния бактериальных препаратов при созревании фарша и в процессе сушки, можно заключить, что при совместном применении культур-антагонистов и процесса сушки наблюдается более сильный эффект торможения роста иерсиний.

Таким образом, изученные пищевые добавки являются надежными средствами, которые, предотвращая размножение У.еМегосоНИса, препятствуют накоплению в мясопродуктах этого микроорганизма. Используя их в совокупности, технологи мясоперерабатывающих производств могут предотвратить размножение У.еШегосоИйса в процессе созревания фаршей колбасных изделий.

Индикация У.еМегосоНЫса в мясе непрямым методом флуоресцирующих антител

Чувствительность метода была исследована в 0,85 %-м растворе №С1 и мясном экстракте, которые искусственно кон-

таминировали суточной культурой У. еМегосоНПса 66-82 в дозах от 1х102 до 1х105 КОЕ/мл.

Установлено, что чувствительность метода независимо от исследованного субстрата составляет 1х104 КОЕ/мл, что согласуется с данными других авторов (Ценева, 1992; 1997).

С помощью НМФА исследовано 34 пробы заглоточных лимфоузлов от убойных свиней из различных районов Саратовской области. Все опыты по изучению проб мяса с помощью НМФА сопровождались бактериологическим контролем. Результаты исследования представлены в таблице 4.

Таблица 4

Результаты исследования проб лимфоузлов свиней из различных районов Саратовской области с помощью НМФА и бактериологически на наличие в них К е^егосоИйса

№ проб Результаты № проб Результаты

НМФА Бактериологический контроль НМФА Бактериологический контроль

1 - - 18 - -

2 - - 19 + -

3 + - 20 - -

4 + + 21 - -

5 - - 22 + +

6 - - 23 - -

7 - - 24 - -

8 - - 25 - -

9 + - 26 - -

10 + + 27 - -

11 - - 28 - -

12 - - 29 - -

13 - - 30 - -

14 - - 31 - -

15 + - 32 - -

16 - - 33 - -

17 - - 34 - -

Обозначения: (+) положительный результат;

(-) отрицательный результат.

Как видно из таблицы 4, НМФА оказался в два раза эффективнее по сравнению с культуральным методом. Из 34 образцов лимфатических узлов культуральным методом антигены Y. enterocolitica обнаружены в 3 пробах (8,57 %), тогда как с помощью НМФА - в 7 образцах лимфоузлов (20 %). Наши результаты соответствуют сообщениям других авторов (Joshi, Singh, 1999).

Помимо более высокой чувствительности НМФА дал большую экономию во времени проведения анализа, так как отпала необходимость после холодового обогащения прибегать к высевам на чашки с последующим выделением чистой культуры Y. enterocolitica. Необходимо отметить, что обработка мазков альбумином, меченым родамином, гася неспецифическую флуоресценцию, не снижала чувствительности метода при исследовании такого сложного объекта как мясной экстракт. Поэтому результаты, полученные с двумя объектами: 0,85 %-м NaCl и мясным экстрактом полностью совпали.

Таким образом, результаты исследования показали, что НМФА более информативен, чем бактериологический метод и позволяет сократить время проведения анализа от 3 недель до 7 дней. Кроме того, преимуществом НМФА является возможность определения сероварианта обнаруженной культуры Y. enterocolitica, так как используются моновалентные диагностические сыворотки к заведомо известным антигенам. Все это делает возможным сократить затраты на дорогостоящие коммерческие среды и препараты.

На основании вышеизложенного, НМФА может быть рекомендован в качестве экспресс-метода индикации возбудителя иерсиниоза при исследовании мяса и мясопродуктов.

Необходимо отметить, что в современной литературе нет четкой, единой схемы обнаружения Y. enterocolitica в мясе и мясопродуктах, которая давала бы полное представление об основных этапах проведения анализов и содержала подробную методику выполнения всех операций исследования. В связи с этим, возникла необходимость в систематизировании этапов исследования.

На этом основании предлагаются две схемы выявления возбудителя иерсиниоза в мясе и мясопродуктах, которые в зависимости от поставленной задачи могут быть использованы в лабораториях, занятых экспертизой мяса, а также для контроля степени обсемененности мясопродуктов У. еШегоеоИИеа в процессе их производства и хранения.

1) ЭКСПРЕСС-ИНДИКАЦИЯ:

ОТБОР ПРОБ => ХОЛОДОВОЕ ОБОГАЩЕНИЕ => НМФА;

2) БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ:

ОТБОР ПРОБ => ХОЛОДОВОЕ ОБОГАЩЕНИЕ => ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ => БИОХИМИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ => СЕРОТИПИРОВАНИЕ.

Данные схемы рекомендуются для применения в лабораториях убойных цехов, птицефабрик и мясоперерабатывающих предприятий.

Выводы

1. При исследовании 113 проб заглоточных и подчелюстных лимфоузлов от убойных свиней и крупного рогатого скота из различных районов Саратовской области и 28 проб свино-говяжьего фарша, отобранных из розничной сети магазинов г. Саратова, выделено 14 культур У.епгегоеоНИеа: 11 штаммов - из лимфоузлов (9,7 %) и 3 штамма - из фарша (10,7 %). Общий процент инфицированности составил 9,92 %.

2. Серотипирование показало: семь штаммов относились к серовару 03, семь - к 09. Биотипирование позволило отнести два штамма к биовару 1 А, один к 1Б, два к биовару 2, семь - к 4 и два - к 5 биоварам. Установлено, что 10 культур УеШегоеоИНеа обладали основными маркерами вирулентности, у 4-х штаммов признаки вирулентности носили вариабельный характер.

3. Из пищевых добавок, используемых в технологии изготовления колбас, наиболее сильным ингибирующим действием

на У.еМегосоНПса обладали 4,5 %-й хлорид натрия, 0,01 %-й нитрит натрия, 0,5 %-й тринатриевый пирофосфат и лактат натрия в концентрации 3 %.

4. Наиболее эффективным температурным режимом холодильной обработки, препятствующим накоплению У.еМегосоНИса в мясопродуктах является быстрое охлаждение (-3...-5 °С) с подмораживанием (-1...-2 °С).

5. Установлено, что бактериальный препарат ПБ-МП, в состав которого входят штаммы Ь. р1аШапыт, обладает более сильным антагонистичесим действием в отношении У.еШегосоНИса, чем ОК-81ай8Ь-67, который ингибирует рост иерсиний лишь частично. В совокупности с холодным способом созревания и сушки сыровяленых колбас ПБ-МП может быть рекомендован для предотвращения размножения У.еШегосоИИса.

6. Для ускоренной индикации У.еШегосоНИса в мясе и мясопродуктах рекомендуется непрямой метод флуоресцирующих антител, который позволяет сократить время исследования от 3 недель до 7 дней и в два раза повысить эффективность обнаружения возбудителя иерсиниоза.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Киселева И.С. Кишечный иерсиниоз как опасная инфекция для мясной промышленности //От фундаментальной науки - к новым технологиям. Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии: Тезисы международной конференции молодых ученых. Тверь, 2003. С. 60-61.

2. Киселева И.С. Мясо и мясопродукты как факторы передачи при кишечном иерсиниозе // Вавиловские чтения -2003: Тезисы межрегиональной научной конференции молодых ученых и специалистов системы АПК Приволжского федерального округа. Саратов, 2003. С. 18-20.

3. Киселева И.С. Иерсиниоз - инфекция, передающаяся через мясо и мясопродукты // Вестник Саратовского госагро-университета. 2004. № 2. С. 18-22.

4. Киселева И.С, Зыкин Л.Ф. Выделение У.еШегосоНИса из мяса и мясопродуктов // Практик. 2004. № 5-6. С. 10-13.

5. Киселева И.С, Зыкин Л.Ф. Первый случай выделения У. еШегосоНИса из мяса в Саратовской области // Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой: Тезисы 2-ой региональной конференции молодых ученых. Саратов, 2004. С. 30-31.

6. Киселева И.С, Зыкин Л.Ф. Изучение влияния параметров холодильной обработки на выживаемость У. еШегосоНИса II Ветеринария Поволжья. 2004. №. 1 С 19-21.

7. Киселева И.С Исследование влияния пищевых добавок на жизнеспособность У. еШегосоНИса в мясном фарше // Вавиловские чтения: Тезисы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 117-й годовщине со дня рождения Н.И. Вавилова. Саратов, 2004. С. 59-62.

Подписано в печать 01.02.05. Формат 1Д6 Бумага офсетная Гарнитура Times. Печ. л. 1,0. Тираж 100. Заказ 31/90.

Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им. Н И. Вавилова» 410600, Саратов, Театральная пл., 1.

J J V О

ft'* \ (. И

15 ÓR psi

1480

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Киселева, Ирина Сергеевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Краткие сведения о возбудителе кишечного иерсиниоза.

1.2. Культурально-морфологические свойства Y. enterocolitica.

1.3. Биохимические свойства иерсиний.

1.4. Антигенное строение и серологические свойства иерсиний.

1.5. Патогенность У. enterocolitica.

1.6. Психрофильные свойства иерсиний.

1.7. Устойчивость во внешней среде и влияние на Y. enterocolitica различных факторов.

1.8. Роль сельскохозяйственных животных в эпидемиологии и эпизоотологии иерсиниоза.

1.9. Y enterocolitica в мясе и мясопродуктах.

1.10. Лабораторная диагностика иерсиниоза.

Глава 2. Экспериментальная часть.

2.1. Материалы и методы.

2.1.1. Штаммы и биопрепараты.

2.1.2. Питательные среды.

2.1.3. Тест-системы для изучения биохимических свойств.

2.1.4. Методика выделения Y. enterocolitica из мяса и мясопродуктов, изучение и идентификация выделенных штаммов.

2.1.5. Изучение влияния параметров холодильной обработки и режимов хранения мяса на выживаемость Y.enterocolitica.

2.1.6. Исследование выживаемости Y.enterocolitica при температурах +2.+4 °С в мясном фарше в зависимости от различных концентраций NaCl.

2.1.7. Методика определения влияния нитрита натрия, фосфатов и лактата на жизнеспособность У.еМегосо1Шса в мясном фарше.

2.1.8. Исследование антагонистического действия стартовых культур и сушки на выживаемость У.еШегосоИНса в традиционных сыровяленых колбасах.

2.1.9. Непрямой метод флуоресцирующих антител для быстрого обнаружения У.еЫегосоИИса в мясе.

2.2. Результаты исследования и их обсуждение.

2.2.1. Исследование мяса и мясопродуктов на наличие иерсиний.

2.2.2. Изучение влияния низких температур на динамику размножения У.еМегосоИНса в мясном фарше.

2.2.3. Определение эффективности пищевых добавок (соли, нитрита натрия, фосфатов, лактата) и стартовых культур для подавления роста У.еШегосо1Шса в мясопродуктах при созревании фарша.

2.2.4. Влияние стартовых культур и сушки на жизнеспособность У.еМегосоИНса в традиционных сыровяленых колбасах.

2.2.5. Индикация У.еМегосоИНса в мясе непрямым методом флуоресцирующих антител.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Мясо как фактор передачи инфекции при иерсиниозе"

Актуальность темы

Интерес к проблеме кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза возрастает с каждым годом, что обусловлено не только широким распространением этих заболеваний, но и большим экологическим значением их возбудителей. До недавнего времени они считались достаточно редкими и не привлекали к себе особого внимания специалистов. Но с 60-70 гг. ситуация изменилась, когда была доказана их повсеместная распространенность.

Для специалистов мясной промышленности важно то, что мясо и мясопродукты являются частыми факторами передачи при иерсиниозе. По современным представлениям, кишечный иерсиниоз относится к пищевым зооно-зам, то есть к болезням, источником инфекции при которых являются больные сельскохозяйственные, домашние и дикие животные, а факторами передачи — пищевые продукты. Установлено, что при кишечном иерсиниозе потенциальными факторами передачи бактерий являются пищевые продукты животного происхождения (мясо, молоко), а также корма, овощи, фрукты, которые могут быть контаминированы на всех этапах их получения, хранения и реализации (Покровский, 1993; Ющенко, 1997; Ленченко, 2002).

По данным ВОЗ (1977) распространенность иерсиниоза носит глобальный характер, и эта болезнь регистрируется более чем в 30 странах мира, но чаще в странах с более прохладным климатом. В частности, в Финляндии абсолютное число заболевших в 1999 г. составило 634 человека, в 2001г.- 720 человек; в Швеции в 1999 г.—549 человек, в 2001 г.-579 человек; в Дании соответственно 337 и 285 человек. В Латвии, Литве, Эстонии и Архангельской области уровень заболеваемости характеризуется средними показателями, но имеет тенденцию к повышению. Например, в Латвии в 1999 г. абсолютное число заболевших составило 181 человек, а 2001 г. — 204 человека, в Архангельской области 100 и 220 человек. Число заболевших иерсиниозом в Санкт-Петербурге в 1999 г. - 478 человек, в 2001 - 321 человек.

Заболеваемость иерсиниозом в РФ на протяжении многих лет остается на достаточно высоком уровне. По данным Центрального НИИ Эпидемиологии Минздрава России этот показатель варьирует по отдельным регионам страны и на некоторых территориях сохраняется достаточно высоким — до 40-50 и даже 138 на 100 тыс. населения.

В странах северного полушария - Нидерландах, Бельгии, Дании, Норвегии, Финляндии, а также в Германии, Канаде, Австралии кишечный иерси-ниоз по уровню заболеваемости занимает третье место среди ОКИ после сальмонеллеза и кампилобактериоза (Garrigue, Poveda, Carniel, 1993; Logue et al., 1996; Померанцев, Васильев, 1998; Ленченко, 2000). В России иерсинио-зы занимают второе место после сальмонеллезов, а в некоторых странах превосходят по распространенности сальмонеллез, колибактериоз и шигеллез (Куликовский, Джентемирова, 1993; Куликовский, Соснина, 1995; Черкасский, 1995; Померанцев, Васильев, 1998; Шумилов, Мельниченко, 1998).

По данным Саратовского областного центра санэпиднадзора за период с 1997 по 2002 гг. в области систематически регистрируется иерсиниоз среди людей, причем доля детей среди заболевших составляет 60 %. Наблюдается рост заболеваемости: 1999 г. - 10 случаев, 2000 г. - 26, 2001 г. — 18. В 2001 г. с целью изучения иммунной прослойки среди населения по иерси-ниозам в 17 районах Саратовской области сотрудниками областного центра санэпиднадзора г. Саратова были обследованы 534 человека. Из них у 13 человек (2,4 %) обнаружены антитела к Y. enterocolitica ОЗ серовара в диагностических титрах, в том числе у 10 человек — 1:200: у 2 — 1:400, у 1 — 1:800. Лица с диагностическими титрами были выявлены в Аркадакском районе — 3, в Хвалынском - 4, в Петровском - 6. Причем, отмечается профессиональная принадлежность серопозитивных лиц в Петровском районе - доярки, свинарки, конюхи, что хорошо согласуется с данными Е.С. Осипчук (2003) о широком распространении кишечного иерсиниоза среди сельскохозяйственных животных в этом районе и подтверждает мнение некоторых авторов об иер-синиозе как о профессиональном заболевании (Колос, 1989).

Проблема иерсиниозов является актуальной как для здравоохранения, так и для предприятий пищевой промышленности. Центр Госсанэпиднадзора г. Москвы сообщает, что экономический ущерб, нанесенный иерсиниозами в 1997 г., составил 1 млрд. 208 млн. рублей (Зайцев и соавт., 1999; Шаханина, Осипова, Радуто, 2001). Н.М. Хакимов (1999) указывает, что 3-15 % всех ОКИ приходится на долю иерсиниоза и псевдотуберкулеза. Однако следует отметить, что по количеству выявленных случаев нельзя судить об истинном распространении заболеваний, так как в связи с клиническим полиморфизмом они нередко проходят под другими диагнозами: дизентерия, сальмонел-лез, вирусный гепатит А, аппендицит и др. (Догель, Карплюк, 1984; Ценева, 1997; Зайцев и соавт., 1999; Ленченко, 2002). В.И. Покровский (1999) отмечает, что, несмотря на выраженную тенденцию к увеличению числа заболеваний иерсиниозами, данные часто являются заниженными из-за недостаточно полной их регистрации.

Официальная регистрация иерсиниоза животных в РФ стала проводиться лишь с 1996 г. (Санитарные правила СП 3.1. 094 - 96; Ветеринарные правила ВП 13.3.1318 - 96). До этого появлялись только единичные публикации об изоляции Г. enterocolitica от сельскохозяйственных животных (Васильев, 1986; Кирьянов, Савчук, 1989; Стефанов, 1989; Писаренко, Куцева-лов, Проценко, 1990; Каландадзе, 1991).

Иерсиниоз сельскохозяйственных животных впервые был обнаружен в Саратовской области Л.Ф. Зыкиным и соавт. в 1997 году. В течение последних семи лет на кафедре микробиологии и ветсанэкспертизы Саратовского государственного аграрного университета проводятся исследования по иер-синиозу сельскохозяйственных животных. Их результаты обобщены в диссертациях З.Ю. Хапцева, C.B. Иващенко, Е.С. Гвинджилия, многочисленных отчетах, докладах и публикациях.

За последние десятилетия отечественными и зарубежными исследователями получены новые результаты, позволяющие иначе рассматривать некоторые вопросы этиологии, патогенеза и эпидемиологии иерсиниоза.

Но, несмотря на определенные успехи в проблеме изучения кишечного иерсиниоза, особенно в медицинском аспекте, остается много неизученных вопросов, например, касающихся роли мяса и мясопродуктов как факторов передачи при этой инфекции.

Анализируя современную литературу, можно сделать выводы, что исследования по обнаружению иерсиний в мясе и мясопродуктах проводятся постоянно. Также опубликованы данные по влиянию различных факторов: рН, упаковки, молочно-кислых бактерий, СВЧ-энергии на выживаемость иерсиний в мясе и мясопродуктах.

Но эти сведения носят несистематизированный, разрозненный характер и не создают цельного представления обо всех аспектах проблемы. В связи со свойством психрофильности, стандартные условия хранения мясопродуктов при низких положительных температурах способствуют размножению и накоплению У. еМегосоНИса. Поэтому актуальна выработка условий хранения мясопродуктов, препятствующих накоплению в них возбудителя. Как было сказано выше, иерсиниоз был включен в перечень официально регистрируемых лишь в 1996 году (СП 3.1.094-96, ВП 13.3.1318-96). В связи с этим работники животноводческих хозяйств и мясоперерабатывающих предприятий мало информированы о кишечном иерсиниозе и путях его распространения. В основную группу риска попадают ветеринарные работники (работники хозяйств по уходу и обслуживанию скота, животноводы, зоотехники) и работники мясокомбинатов, птицеферм, птицефабрик, мясоперерабатывающих предприятий.

В Саратовской области исследования по обнаружению иерсиний в мясе и мясопродуктах не проводились. Кроме того, не изучен вопрос о механизмах контаминации иерсиниями мясопродуктов и разработке методов, препятствующих этому процессу. Выяснение всех этих вопросов представляет научный и практический интерес.

Целью диссертационной работы явилось выяснение роли мяса и мясопродуктов как факторов передачи возбудителя при иерсиниозной инфекции, а также установление влияния различных технологических факторов и пищевых добавок на выживаемость У. enterocolitica в процессе производства колбасных изделий.

Задачи исследования:

1. Исследовать мясо и мясопродукты, отобранные из хозяйств Саратовской области и магазинов г. Саратова, на наличие Y. enterocolitica.

3. Определить эффективность применения ряда добавок, используемых в мясоперерабатывающей промышленности, для подавления размножения Y. enterocolitica в мясопродуктах.

4. Провести исследование антагонистического действия молочнокислых микроорганизмов на выживаемость Y. enterocolitica в условиях производства сыровяленых колбас.

5. Апробировать непрямой метод флуоресцирующих антител для экспресс-индикации Y. enterocolitica в мясе и мясопродуктах.

Научная новизна

1. Впервые в Саратовской области из мяса и мясопродуктов изолированы культуры Y. enterocolitica: 10 штаммов обладали признаками вирулентных иерсиний, у остальных четырех маркеры вирулентности носили вариабельный характер.

2. Доказано, что сыровяленые и сырокопченые колбасы являются благоприятными объектами для размножения в них кишечных иерсиний.

3. Показано, что использование некоторых штаммов молочно-кислых бактерий оказывает задерживающее действие на рост Y. enterocolitica в сыро-вяленых колбасах.

4. Установлено, что при стандартных режимах охлаждения и хранения происходит значительное накопление возбудителя иерсиниоза в мясе, что может способствовать передаче иерсиниозной инфекции.

5. Пищевые добавки, используемые в технологии изготовления мясопродуктов, в определенных концентрациях оказывают ингибирующее действие на размножение У. еМегосоНИса.

6. Показано преимущество непрямого метода флуоресцирующих антител для индикации У. еШегосо1Шса в мясе по сравнению с бактериологическим методом по чувствительности и скорости проведения анализа.

Практическая значимость

Впервые показано, что мясо из 10 различных районов Саратовской области, а также мясной фарш из сети магазинов розничной торговли г. Саратова контаминированы иерсиниями, то есть могут являться вероятными причинами инфекции. Обращают внимание случаи изоляции иерсиний из мяса, полученного из животноводческих объектов Петровского района, неблагополучного по иерсиниозу.

Установлено, что быстрое охлаждение мяса при —3.—5 °С и последующее его хранение при —1.-2 °С оказывают задерживающее действие на размножение У. еМегосоИйса и могут быть рекомендованы технологам мясоперерабатывающих производств как наиболее эффективные для подавления размножения этих бактерий в мясе.

В результате проведенных исследований определены концентрации пищевых добавок, препятствующие накоплению в мясопродуктах возбудителя иерсиниоза: хлорид натрия в концентрации 4,5 %, нитрит натрия — 0,01 %, фосфаты - 0,5 %, лактат натрия - 0,3 %.

Непрямой метод флуоресцирующих антител является более информативным и эффективным методом обнаружения У. епгегосоИйса в мясе и мясопродуктах по сравнению с культуральным методом, позволяет существенно сократить время проведения анализа и рекомендуется как экспресс-метод при выявлении иерсиний в мясе.

Апробированные схемы выявления возбудителя иерсиниоза в мясе и мясопродуктах: экспресс-индикация и бактериологическое исследование рекомендуются к использованию практическим лабораториям при контроле мяса и мясопродуктов.

По результатам исследования подготовлены «Методические рекомендации по обнаружению У. еМегосоИНса в мясе и мясопродуктах», утвержденные УМК Института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» им. Н.И. Вавилова (протокол № 34 от 17 декабря 2004 г.). Разработанные методические рекомендации позволяют получить полное представление о проведении исследования мяса на наличие К еМего-соННса и могут быть использованы специалистами всех уровней, связанными с проведением экспертизы мяса и мясопродуктов, а также при обучении студентов специальностей «Технология мяса и мясопродуктов», «Ветеринария» и «Биотехнология».

На защиту выносятся следующие положения:

1. Инфицированность мяса и мясопродуктов К еМегосоИИса на территории Саратовской области составляет 9, 92 %.

2. Наиболее эффективным режимом холодильной обработки для подавления жизнеспособности иерсиний в мясе и мясопродуктах является охлаждение при —3.-5 °С с дальнейшим подмораживанием.

4. Препарат ПБ-МП, в состав которого входят штаммы Ь.р1аМагшт, оказывает сильное ингибирующее действие на размножение У.еШегосо1Шса.

5. Непрямой метод флуоресцирующих антител обладает высокой чувствительностью (1x104 КОЕ/мл) и является в два раза более информативным, чем бактериологический метод.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на Межрегиональных научных конференциях молодых ученых и специалистов системы АПК Приволжского федерального округа «Вавиловские чтения» (Саратов, 2003; 2004), на Международной конференции молодых ученых «От фундаментальной науки — к новым технологиям. Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии» (Тверь, 2003), а также на 2-ой региональной конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой» (Саратов, 2004).

Материалы диссертации представлены в отчетах НИР Института ветеринарной медицины и биотехнологии в рамках ассоциации аграрного образования и науки за 2003 - 2004 гг.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Структура и объем диссертации

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Киселева, Ирина Сергеевна

Выводы

1. При исследовании 113 проб заглоточных и подчелюстных лимфоузлов от убойных свиней и крупного рогатого скота из различных районов Саратовской области и 28 проб свино-говяжьего фарша, отобранных из розничной сети магазинов г. Саратова выделено 14 культур У.еШегосоИИса: 11 штаммов - из лимфоузлов (9,7 %) и 3 штамма - из фарша (10,7 %). Общий процент инфицированности составил 9,92 % проб.

2. Серотипирование показало: семь штаммов относились к серовару ОЗ, семь — к 09. Биотипирование позволило отнести два штамма к биовару 1А, один к 1Б, два к биовару 2, семь — к 4 и два- к 5 биоварам. Установлено, что 10 культур У.еМегосо1Шса обладали основными маркерами вирулентности, у 4 штаммов признаки вирулентности носили вариабельный характер.

3. Из пищевых добавок, используемых в технологии изготовления колбас, наиболее сильным ингибирующим действием на У.еМегосо1Шса обладали 4,5 %-й хлорид натрия, 0,01 %-й нитрит натрия, 0,5 %-й тринатриевый пи-рофосфат и лактат натрия в концентрации 3 %.

4. Наиболее эффективным температурным режимом холодильной обработки, препятствующим накоплению У.еМегосоИИса в мясопродуктах является быстрое охлаждение (-3.-5 °С) с подмораживанием (-1.-2 °С).

5. Установлено, что бактериальный препарат ПБ-МП, в состав которого входят штаммы Ь. р1аШагшт, обладает более сильным антагонистичесим действием в отношении У.еМегосоИНса, чем СН-81аг18Ь-67, который ингиби-рует рост иерсиний лишь частично. В совокупности с холодным способом созревания и сушки сыровяленых колбас ПБ-МП может быть рекомендован для предотвращения размножения У.еМегосоННса.

Заключение

Проблема иереиниозов в настоящее время остается актуальной как для здравоохранения, так и для ветеринарии и пищевой промышленности. Многочисленные зарубежные и отечественные источники свидетельствуют о практически повсеместном распространении этой инфекции в России и за рубежом.

Исследователями Центрального НИИ Эпидемиологии Минздрава России отмечается высокий уровень заболеваемости иерсиниозами в РФ — 50 —138 на 100 тыс. населения. Большинство заболеваний регистрируется в странах с умеренным и прохладным климатом, что связано, по-видимому, с психрофильностью возбудителя иерсиниоза (ВОЗ, 1977).

В Саратовской области иерсиниоз среди населения регистрируется постоянно, что находит подтверждение в материалах статистической отчетности Саратовского областного центра санэпиднадзора. За период с 1997 по 2003 г.г. в области постоянно выявляются случаи иерсиниоза среди людей: 1997 г.- 6 случаев; 1998 г. - 14; 1999 г. - 10; 2000 - 26; 2001 - 18; 2002 - 4. Необходимо отметить, что из-за разнообразия клинических проявлений кишечный иерсиниоз нередко проходит под другими диагнозами (вирусный гепатит А, аппендицит, дизентерия и др.); это приводит к большому количеству диагностических ошибок и недостаточно полной регистрации заболеваемости среди людей (Ценева, 1997; Зайцев и соавт., 1999; Ленченко, 2002). По этой причине, как отмечает В.И. Покровский (1997), данные по заболеваемости иерсиниозами нередко являются заниженными.

Согласно данным Саратовского областного центра санэпиднадзора источники заболевания, пути и факторы передачи инфекции точно не были установлены. Многие отечественные и зарубежные исследователи привлекают внимание к тому, что мясо и мясные продукты часто инфицированы Y.enterocolitica (Стефанов, 1989; Quaglio et al., 1989; Mickova, 1990; Boer et al.,1991; Kwaga Jacob et al., 1992; Кузнецова и соавт., 1995). Возбудитель иерсиниоза высевается из мясных продуктов на мясокомбинатах в 8 % случаев, из полуфабрикатов — 10, 7 %, из мяса и особенно субпродуктов на санитарной бойне в 19,5 %, из мясных изделий, изъятых в магазинах — в 10 % случаев (Ющенко, 1986).

Большим фактором риска контаминации иерсиниями продукции является технология изготовления некоторых видов колбасных изделий (сыровя-леных и сырокопченых колбас), при которой исключается высокотемпературный нагрев. В связи с психрофильностью и солеустойчивостью иерси-ний, созревание фарша при низких положительных температурах благоприятствует активному размножению иерсиний, а дальнейшие режимы обработки этих видов колбас могут быть недостаточными для устранения Т.еШегосоИНса (Гречищева, 1981; Дулатова, 1989; Куликовский и соавт., 1993).

Наиболее частым источником инфекции для человека считают свиней, а свиное мясо многие авторы рассматривают как важный фактор при инфицировании человека (РгеёепкБЗОп-АЬошаа, 1999; Ющук и соавт., 2003). В связи со всем вышесказанным в основную группу риска попадают ветеринарные работники (работники хозяйств по уходу и обслуживанию скота, животноводы, зоотехники), работники мясокомбинатов и мясоперерабатывающих предприятий, птицеферм, птицефабрик, которые вследствие недостаточной информированности об иерсиниозе слабо представляют пути заражения и меры профилактики этой инфекции.

В Саратовской области иерсиниоз сельскохозяйственных животных впервые был обнаружен Л.Ф. Зыкиным и соавт. (1997). В нашем регионе исследования мяса и мясопродуктов на У.еМегосоИНса не проводились. Между тем, случаи иерсиниоза в Саратовской области, как было отмечено выше, систематически регистрируются как у людей, так и у животных.

Сотрудниками кафедры микробиологии и ветсанэкспертизы СГАУ имени Н.И. Вавилова постоянно проводятся целенаправленные исследования по изучению свойств иерсиний и выделению возбудителя от сельскохозяйственных животных и из продуктов животноводства, результаты которых позволяют сделать выводы о широком распространении иерсиниоза на территории области, особенно в свиноводческих хозяйствах, а также среди поголовья крупного рогатого скота. Иерсинии были изолированы не только от самих животных, но и из молока, причем большинство этих штаммов относились к вирулентным, то есть были способны вызвать инфекционный процесс (Хапцев, 1999; Осипчук, 2003).

За период с 5.09.02 по 1.09.2004 было исследовано 113 проб заглоточных и подчелюстных лимфоузлов от убойных свиней и крупного рогатого скота из 10 районов Саратовской области и 28 проб свино-говяжьего фарша, изъятых из розничной сети магазинов г. Саратова. В результате с помощью бактериологического метода было выделено 14 культур У.еп1егосо1Шса: 3 штамма из лимфоузлов от КРС, 8 штаммов — из лимфоузлов от свиных полу-туш и 3 штамма — из фарша. Все изолированные из мяса и мясопродуктов штаммы У.еМегосоННса обладали типичными культурально-морфо-логическими, биохимическими и серологическими свойствами. Большинство были лактозоотрицательны, за исключением двух изолятов У еЫегосоНиса (Е572, Ф692, Е 1372). Это совпадает с мнением некоторых авторов о том, что иногда могут выявляться и лактозопозитивные варианты У.еШегосоИНса (Це-нева, 1997). По результатам биотипирования два штамма (Е 572, М 60) были отнесены к биовару 1А, один штамм (Ф 692) к биовару 1В, два (П 1092, П 113,) - ко 2, семь (П 802, М 97, П 115,, К120,, ПТ 1342, Е 1372, М 138) - к 4 и два (П 812, П 107г) - к 5 биоварам. Наши данные совпадают с результатами исследований Т.В. Спиряхиной (2004), которая при изучении 45 штаммов У.еМегосоИНса, выделенных от сельскохозяйственных животных Саратовской области определила, что культуры от павших и больных поросят чаще относились к четвертому биовару.

На основании биохимических реакций и тестов на вирулентность большинство изолятов отнесены к вирулентным. Определяющим является установленный факт, что патогенными для человека считают представителей биоваров 1 В, 2, 3 и 4, дающих отрицательные реакции (одновременно) на индол, ферментацию эскулина, рамнозы и являющихся положительными в тестах на сахарозу и сорбит (Кузнецов, 2000; Ценева, Солодовникова, Воскресенская, 2002; Смирнов, 2004). Согласно нашим данным, 10 штаммов из 14 (Е 572,П812,П 1072,П 1092,П 113ЬК 120,, ПТ 1342, Е 1372, М 60, М 138) обладали рядом признаков вирулентных иерсиний и являлись патогенными. У остальных изолятов признаки вирулентности носили вариабельный характер.

Обращает также на себя внимание тот факт, что 6 штаммов были выделены из лифоузлов КРС и свиней хозяйств Петровского района. Е.С. Осипчук (2003) из молока КРС различных хозяйств Петровского района изолировала 29 штаммов У.еШегосоНИса, 8 из которых были отнесены к серовару ОЗ, три к 09. Это подтверждает непрерывную циркуляцию УеШегосоПИса вышеназванных сероваров в животноводческих объектах Петровского района с включением в эпизоотическую цепь, как животных, так и продуктов животного происхождения.

Таким образом, результаты наших исследований позволяют утверждать, что мясо и мясные продукты могут являться возможными факторами передачи при иерсиниозной инфекции человека и животных.

Следующим этапом явилось изучение влияния низких положительных температур на динамику развития У.еп1егосо1Шса в фарше колбасных изделий при различных режимах охлаждения и хранения мяса. Известно, что иер-синии относятся к психрофильным, неприхотливым бактериям, обладающим способностью длительно существовать и накапливаться в пищевых продуктах, а температура +2.+4 °С, являющаяся стандартной при хранении и охлаждении мяса и мясопродуктов, наиболее благоприятна для интенсивного размножения У.еМегосо1Шса (Сомов, Литвин, 1988; Сомов, Тимченко, 1997). В связи с этим, возникла необходимость в подборе режимов холодильной обработки и хранения мяса, способствующих подавлению жизнедеятельности иерсиний.

При изучении влияния режимов охлаждения на жизнеспособность У. еШегосоИНса в мясном фарше установлено, что более эффективными являются быстрый и, в меньшей степени, ускоренный режимы охлаждения мяса. Медленное одностадийное охлаждение (+2.+4 °С, 26 — 28 ч) благоприятствует быстрому увеличению количества иерсиний в фарше.

Исследование динамики выживаемости У. еМегосоНИса в мясном фарше при различных режимах хранения показало, что режим хранения с подмораживанием (-1.-2 °С) по сравнению со стандартными технологиями хранения мяса (0.+2 °С) обеспечивает быстрый эффект торможения роста иерсиний и значительно снижает риск заражения иерсиниозом.

Таким образом, результаты исследований позволяют заключить, что стандартные режимы хранения мяса при температуре +2 °С создают условия для интенсивного размножения иерсиний в фарше, что соответствует мнению многих авторов о психрофильной природе возбудителя иерсиниоза (Сомов, Варвашевич, Тимченко, 1991; Кузнецов, Багрянцев, Клименко, 1992). Поэтому быстрое одностадийное охлаждение (—3.-5 °С, 12-16 ч) и последующее хранение охлажденного мяса при температуре —1.-2 °С могут быть рекомендованы как эффективный способ ингибирования У. еШегосоШюа в мясе.

С целью предотвращения размножения иерсиний в фарше в процессе его созревания было проведено исследование влияния ряда пищевых добавок на выживаемость иерсиний и изучена динамика изменения их количества в зависимости от введения различных концентраций соли, нитрита натрия, фосфата и лактата натрия. Анализируя результаты эксперимента, мы заключили, что возбудитель иерсиниоза относится к умеренно солеустойчивым бактериям и размножается при концентрациях соли 2-4 %. Медленное подавление роста У. еШегосо1Шса происходит лишь при концентрации соли 4,5 %. Наши результаты частично расходятся с литературными источниками, в которых указано, что иерсинии в условиях низких положительных температур выдерживают концентрации соли 10 % (СП 3.1. 094-96, ВП 13.3131896).

Установлено, что независимо от концентрации нитрита натрия на третьи сутки иерсинии в образцах фарша не обнаруживали, что соответствует сообщениям некоторых исследователей о том, что NaNC>2 является сильнейшим ингибитором патогенной микрофлоры (Люк, Ягер, 2000). По сравнению с нитритом натрия фосфаты оказывают умеренное подавляющее действие на размножение Y. enterocolitica. Даже при максимальной концентрации фосфата (0,5 %) иерсинии высевали в количестве 1,2 х 103 КОЕ/г фарша.

В результате исследования действия лактата натрия было установлено его сильное ингибирующее действие в отношении Y. enterocolitica. Уже на 2-е сутки отмечали эффект торможения роста иерсиний, а на 5-й день при содержании лактата натрия в фарше 5 % наблюдали их полное отмирание. Наши данные соответствуют результатам исследований других авторов (Сарай-кина, Козина, Лебедева, 2001; Красуля, 2002), которые показали, что лактат натрия PURASAL производства фирмы «PURAC biochem bv» (Нидерланды) тормозит развитие таких патогенов, как листерии, клостридии, сальмонеллы, псевдомонады, и является безопасным консервантом с сильным антибактериальным эффектом. Необходимо отметить, что L. monocytogenes, так же как и Y enterocolitica является психрофильным микрорганизмом.

С целью установления степени влияния бактериальных препаратов на рост иерсиний в условиях производства традиционных сыровяленых колбас была проведена сравнительная оценка двух методов сушки и созревания (холодного и горячего) на устойчивость Y. enterocolitica в модельных образцах сыровяленой колбасы «Московская» при добавлении коммерческих бактериальных препаратов ПБ-МП и GN-StartSL-67. Результаты исследований показали, что препарат ПБ-МП оказался более сильным ингибитором роста Y. enterocolitica, чем GN-StartSL-67. Это связано, по-видимому, с тем, что в состав ПБ-МП входят штаммы L. plantarium. По мнению Jakubczak et al. (1996) штаммы лактобацилл обладают сильным антагонистическим действием по отношению к Y. enterocolitica ОЗ сероварианта, выделенных из туш забитых свиней. Что касается выбора способа созревания и сушки, то холодный способ рекомендуется как наиболее эффективный для подавления жизнедеятельности иерсиний, так как общая концентрация иерсиний в продукте в процессе холодного созревания меньше в среднем на два порядка. Таким образом, анализируя результаты исследования о влиянии бактериальных препаратов при созревании фарша и в процессе сушки, можно заключить, что при совокупном использовании культур-антагонистов и процесса сушки можно обеспечить достаточно сильный эффект торможения роста Y. enterocolitica. Сообщения других авторов о том, что штаммы Lactobacillus plantarium и Leuconostoc spp. (продуценты молочной кислоты) при определенных условиях могут проявлять антагонизм в отношении Y.enterocolitica (Смирнов, 2004), также согласуются с нашими данными.

Необходимо отметить, что возможность заражения иерсиниозом при употреблении колбас без термической обработки является малоизученным вопросом. Многие авторы обращают внимание на то, что большим фактором риска при иерсиниозной инфекции человека является нарушение технологии приготовления некоторых колбас с процессом созревания мясного фарша с добавлением 3 %-го хлористого натрия в условиях хранения в холодильнике в течение 2-3 суток (Дулатова, 1989; Куликовский, Джентемирова, 1993). Такими изделиями как раз являются сыровяленые и сырокопченые колбасы, режимы термической обработки которых недостаточны для подавления Y. enterocolitica.

Таким образом, в результате проведенной работы нам удалось выяснить условия, которые препятствуют размножению Y. enterocolitica в сырье в процессе производства сыровяленых и сырокопченых колбас.

Заключительным этапом исследования явилось определение возможности и целесообразности использования НМФА для быстрого обнаружения Y. enterocolitica в мясе. Установлено, что НМФА, выгодно сочетающий принципы иммунологического и морфологического исследований с люминесцентным анализом, отличается высокой чувствительностью и информативностью. Чувствительность метода составила 1x104 КОЕ/мл, что соответствует данным литературы. С помощью НМФА исследовано 34 пробы заглоточных лимфоузлов свиней. Паралельно с НМФА проводили бактериологическое исследование отобранных проб, в результате которого было выделено три культуры У. еМегосоИНса. НМФА дал положительные результаты в 7 случаях, включая культуры, выделенные культуральным методом. Установлено, что два штамма принадлежали к ОЗ серогруппе, пять - к 09. Необходимо отметить, что три штамма выделены из лимфоузлов свиней из хозяйств Петровского района, где ранее изолировались У. еп1егосо1Шса. Эти данные совпадают с результатами других авторов (Ценева, 1992) и подтверждают, что НМФА в два раза более эффективен для быстрой индикации У еМегосо1Шса в мясе, чем бактериологический метод.

Таким образом, показано, что основными преимуществами НМФА являются высокая чувствительность и возможность быстрого выявления возбудителя кишечного иерсиниоза при исследовании в материале со среды накопления.

Резюмируя результаты исследований, можно констатировать тот факт, что одними из факторов передачи иерсиниозной инфекции являются мясо и мясопродукты. Об этом свидетельствуют данные, полученные при исследовании мяса и мясопродуктов из хозяйств Саратовской области и магазинов г. Саратова. Бактериологическим методом из мяса изолировано 14 штаммов У еШегосоНИса (9,92 %), причем большая часть культур являлись вирулентными. Можно также утверждать, что применение стандартных режимов холодильной обработки не только не подавляют рост кишечных иереиний в мясном сырье, но и значительно увеличивают количество клеток У. еШегосо-1Шса, и как следствие повышают вероятность заражения иерсиниозом. Изучение влияния пищевых добавок на выживаемость возбудителя кишечного иерсиниоза в процессе производства колбасных изделий показало, что ЫаС1, нитрит натрия, фосфаты, лактат натрия и бактериальные препараты в определенных концентрациях обладают ингибирующим действием на размножение кишечных иерсиний.

Таким образом, в результате проведенных исследований нам удалось выявить условия, которые препятствуют накоплению в мясопродуктах возбудителя кишечного иерсиниоза и подавляют дальнейшее размножение У.еМегосоИНса в процессе производства и хранения колбасных изделий. Для идентификации У. еМегосоИНса в мясе и мясопродуктах можно рекомендовать НМФА, который имеет ряд преимуществ перед классическим бактериологическим методом.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Киселева, Ирина Сергеевна, Саратов

1. Актуальные проблемы эпидемиологии инфекционных болезней в Сибири // под ред. Г.Г. Онищенко М., 1999. - С. 128 - 132.

2. Белая О.Ф., Черкасов В.Л., Белая Ю.А. и др. Реакция коагглюти-нации при кишечных инфекционных заболеваниях // Методические рекомендации. — М., 1990. — 12 с.

3. Белова М.А., Ющенко Г.В. Случай выделения У.еМегосоИНса от человека // ЖМЭИ. 1968. - № 9. - С. 148 - 150.

4. Березкина Г.В. Иерсиниозы в Омской области // Актуальные аспекты природно-очаговых болезней. — Омск, 2001. — С. 201 — 203.

5. Бузолева Л.С., Сомов Г.П. Об эпидемиологической опасности хранения пищевых продуктов при низкой температуре // Гиг. и санитария. — 2000.- №3. —С. 31 -34.

6. Ващенок Г.И. Болезни с природной очаговостью // Труды ЛНИИЭМ им. Пастера. Л., 1983. - С. 82 - 87.

7. Головчак Г.С. Проблема иерсиниозов. Эколого-эпидемиологические аспекты // Междунар. мед. журн. — Харьков, 1999. -№2.-С. 128- 130.

8. Гордейко В.А., Воронцова Т.А., Литвин В.Ю. Сероэпидемиоло-гическое изучение кишечного иерсиниоза у работников свинокомплексов // ЖМЭИ. 1990. - №3. - С. 111 - 112.

9. Гордейко В.А., Литвин В.Ю., Шустрова И.М. Иерсинии в почве полей, орошаемых сточными водами свинокомплекса // Гиг. и санитария. -1991.-№1.-С. 28-30.

10. Гречищева Т.С. Кишечные иерсиниозы (псевдотуберкулез и иер-синиоз) у людей в Егорьевском районе Московской области // Актуал. вопр. инф; патологии. Саратов, 1981. - С. 46 - 48.

11. Гурлева Г.Г. Упрощенный способ определения серологических вариантов У.еШегосоИНса II Лаб. дело. 1989. - №7. - С. 70 — 72.

12. Гурлева Г.Г., Колпинова Л.Д. Сравнительная оценка роста Y.enterocolitica на различных элективных средах // Лаб. дело. — 1989. — №4. — С. 71-72.

13. Джентемирова К.М. Экология Y.enterocolitica во внешней среде // Автореф. дисс. . канд. вет. наук. — М., 1990. 24 с.

14. Догель Л.З., Карплюк И.A. Y.enterocolitica как возможный возбудитель пищевых токсикоинфекций // Вопр. питания. — 1984. — № 3. — С. 3 — 6.

15. Дулатова М.В. Кишечный иерсиниоз. Л., 1989. - 126 с.

16. Дунаев В.И., Амиркулов А.И. Антигенное родство Y.enterocolitica с родом Brucella II Актуал. вопр. инф. патологии. — Саратов, 1981 С. 58-60.

17. Зайцев Б.Е., Маненкова Г.М., Лыткина И.Н., Родина Л.В. Заболеваемость псевдотуберкулезом и иерсиниозом в г. Москве // Актуал. вопр. эпидемиол. инф. заболеваний. Сборник научных трудов (вып.З). — М., 1999. — С. 67-77.

18. Зыкин Л.Ф., Оркин В.Ф., Щербаков А.А. и др. Распространение иерсиниозов сельскохозяйственных животных в Саратовской области // Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных. — Воронеж, 1999.-С. 22-24.

19. Зыкин Л.Ф., Щербаков A.A. Кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулез в патологии сельскохозяйственных животных // Матер, научно-производ. конфер. по актуал. проблемам ветеринарии и зоотехнии. — Казань, 2001. 4.1. — С. 35-38.

20. Зыкин Л.Ф., Щербаков A.A., Хапцев З.Ю. Иерсиниоз и псевдотуберкулез сельскохозяйственных животных. — Саратов, 2002. — 67 с.

21. Иерсиниоз // Учебно-методическое пособие / Под ред. Ющук Н.Д., Галимзянова Х.М. Астрахань-Москва, 2001. - 48 с.

22. Иерсиниозы // Лекции по инфекционным болезням/ Под ред. Н.Д. Ющук, В.Я. Венгерова. М., 1999. - Т. 1. - С. 339 - 354.

23. Инструкция по эпидемиологии, лабораторной диагностике иер-синиозов, организации и проведении профилактических и противоэпидемических мероприятий // Утв. зам. нач. ГЭУ МЗ СССР Онищенко Г.Г., приказ № 15-6/42 от 30.10.90.-48 с.

24. Иммунолюминесценция в медицине // Под ред. E.H. Левина. — М.: Медицина, 1977. С. 46 - 71.

25. Каландадзе Е.П. Псевдотуберкулез и иерсиниоз в крупном птицеводческом комплексе // Автореф. дисс. . канд. мед. наук. — М., 1991. — 21 с.

26. Кожаева Д.К., Померанцев Д.А. Разработка оптимальной схемы выделения У.enterocolitica из мясопродуктов // Сб. научных работ Ульяновской сельскохозяйственной академии. — Ульяновск, 2000. — С. 23 — 25.

27. Колос E.H., Тутов H.H., Ющенко Г.В., Дунаев В.И. Сельскохозяйственные животные как источник иерсиниозов // ЖМЭИ. — 1985. — № 4. — С. 77-79.

28. Корчагин Г.А. Сравнительная характеристика лабораторных методов диагностики кишечного иерсиниоза // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. — Ульяновск, 2002. —16 с.

29. Красуля О.Н. Соли молочной кислоты надежный барьер для безопасности мясных продуктов. - Мясн. индустрия. - 2002. - № 5. — С. 19-21.

30. Костенко Ю.Г., Солодовникова Г.И., Кузнецова Г.А., Самойлен-ко В.А. Новый бактериальный препарат — основа ускоренной технологии производства сырокопченых колбас. — Мясн. индустрия. — 1997. № 1. — С. 9-10.

31. Кузнецов В.Г. Сигнальная идентификация потенциально патогенных иерсиний // Клин. лаб. диагн. 2000. - №. 1. - С. 46 - 48.

32. Кузнецов В.Г., Багрянцев В.Н., Клименко В.В. Роль рефрижераторов в распространении бактерий рода Yersinia II Гиг. и санитария. 1992. -№ 2. - С. 43 - 46.

33. Кузнецова Т.Г., Ленченко Е.М., Штукарева М.Ю. О роли пищевого пути передачи возбудителя иерсиниоза // Пища, экология, человек: Матер. Междунар. научно-практ. конф. М., 1995. - С. 208.

34. Куликовский A.B., Джентемирова K.M. Иерсиниоз актуальная проблема ветеринарной медицины // Ветеринария. - 1993. - №11 -12. -С. 28-35.

35. Куликовский A.B., Соснина В.В. Пищевые зоонозы — актуальная проблема ветеринарии // Актуал. проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции. — М., 1995. С. 3 - 4.

36. Лакин Г.Ф. Биометрия // Учебное пособие для биологических специальностей вузов. М.: Высш. школа, 1980. - 293 с.

37. Ленченко Е.М. Биология и экология иерсиний — возбудителей пищевых токсикоинфекций // Дисс. докт. вет. наук МГУПБМ. — 2000. — 300 с.

38. Ленченко Е.М. Иерсиниоз. Этиология, диагностика, меры борьбы и профилактика (проблемная лекция). М., 2002. — 42 с.

39. Ленченко Е.М., Штукарева М.Ю. Сравнительная оценка трех методов выделения иерсиний из пищевых продуктов // Пища, экология, человек: Матер. Междунар. научно-технич. конф. М., 1995. — С. 215.

40. Литвин В.Ю. Сапрофитическая фаза в экологии возбудителей инфекционных заболеваний // ЖМЭИ. 1985. - № 6. - С. 98 - 101.

41. Литвин В.Ю. Экология возбудителей сапронозов. М., 1998. -С. 20-34.

42. Литвин В.Ю. Эколого-эпидемиологические аспекты случайного паразитизма некоторых патогенных бактерий // ЖМЭИ. — 1986. — № 1. — С. 85-91.

43. Люк Э., Ягер М., Консерванты в пищевой промышленности. — СПб.: ГИОРД, 2000. 256 с.

44. Мясо. Методы бактериологического анализа. ГОСТ 21237 — 75. М., «Издательство стандартов», 1976. — 45 с.

45. Наставление по диагностике бруцеллеза животных. Рекомендации по дифференциальной диагностике бруцеллеза и иерсиниоза и меры по их профилактике. М.: ФГИУ «Росинформагротех», 2000. - 96 с.

46. Наттерман X. Этиология и патогенез инфекции Y.enterocolitica // Ветеринария. 1987. -№ 10. - С. 20 - 24.

47. Опочинский Э.Ф., Мохов Ю.В., Лукина З.А. Лабораторная диагностика иерсиниозов // Матер. VIII съезда ЭМП. — М. — 2002. — С. 307 — 308.

48. Определитель бактерий Берджи. М.: Мир, 1997. - Т.1. - С. 195 -196, 227-229.

49. Осипчук Е.С. Молоко как фактор передачи возбудителя кишечного иерсиниоза // Дисс. канд. биол. наук. — Саратов, 2003. 114 с.

50. Петрова H.A. В кн.: Эпидемиология и профилактика инфекционных болезней. Л., 1982. - С. 37 - 39.

51. Писаренко И.И., Куцевалов С.И., Проценко С.Л. Характеристика иерсиний, выделенных от овец // Ветеринария. 1990. — №2. - С. 43 - 46.

52. Медицинская микробиология // Под ред. В.И. Покровского. — М., 1999.- С. 105- 153.

53. Покровский В.И. Руководство по зоонозам. — СПб., 1983. — С. 150- 153.

54. Померанцев Д.А., Васильев Д.А. Золотухин С.Н. Разработка ускоренной схемы выделения и идентификации бактерий вида Y enterocolitica II Вопросы микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы. Ульяновск, 2000. — С. 19-21.

55. Попов Ю.А. Конструирование и использование ДНК зондов на представителях рода Yersinia II Генетика, микробиология и совершенствование методов лабораторной диагностики ООИ. — Саратов, 1991. - С. 3 — 13.

56. Практическое пособие для подготовки врачей-бактериологов и эпидемиологов по вопросам противодействия биотерроризму // Под ред. Г.Г. Онищенко. Волгоград, 2004. - С. 179 - 191.

57. Профилактика инфекционных болезней. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Иерсиниозы. Санитарные правила СП 3.1. 094 — 96. Ветеринарные правила ВП 13.3.1318 — 96. -М., 1996.-С. 175-188.

58. Распространение инфекций, вызываемых Y.enterocolitica II Хроника ВОЗ, 1977. -Т.31. —№ 4 — С. 216 — 218.

59. Руководство по профилактике чумы // Под ред. A.B. Наумова и JI.B. Самойловой. Саратов, 1996. - 278 с.

60. Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней // Под ред. В.И Покровского. М.: Медицина, 1993. - Т.2. - С. 133 -148.

61. Сабурин В.А. Иерсиниоз животных в правобережной части Среднего Поволжья: (эпизоотология, меры борьбы) // Автореф. дисс. . канд. вет. наук. СПб., 1995. - 23 С.

62. Сапрыкина Н.В. Распространенность иерсиний редких видов и эпидемиология иерсиниозов в условиях крупного города // Автореф. дисс. . канд. мед. наук. М., 1990. - 21 С.

63. Сарайкина Е.А., Козина З.А., Лебедева Л.И. Лактат натрия повышает срок хранения продукта. — М., Мясная индустрия. — 2001. — № 9. — С. 19-21.

64. Системы анализов рисков и определение критических контрольных точек: НАССР/ХАССП. Государственные стандарты США и России. — М., 2003. -594 с.

65. Смирнов И.В. Возбудитель иерсиниоза и близкие к нему микроорганизмы // Клин, микробиол. и антимикроб, химиотерапия. 2004. — Т.6. — №1. — С. 10-21.

66. Смирнов И.В. Генетические аспекты вирулентности Yersinia еп-terocolitica и их значение для микробиологической диагностики иерсиниоза. -Рязань, 1991.-290 с.

67. Смирнов И.В., Горохов В.И. Диагностическая сыворотка с антителами к вирулентным иерсиниям // Лаб. дело. — 1990. № 10. - С. 66 — 68.

68. Смирнов И.В., Ценева Г.Я. Культуральные свойства и вирулентность иерсиний //ЖМЭИ. 1991. - № 9. - С. 13 - 16.

69. Сомов Г.П. Выделение группы сапрозоонозов // Тез. докл. XII Всесоюзн. конфер. по природной очаговости болезней. — Новосибирск, 1989.-С. 42-44.

70. Сомов Г.П. Особенности экологии внеорганизменных популяции патогенных бактерий и их отражение в эпидемиологии инфекций // ЖМЭИ. — 1997. № 5. — С. 7 - 11.

71. Сомов Г.П., Варвашевич Т.Н., Тимченко Н.Ф. Психрофильность патогенных бактерий // Новосибирск, «Наука». 1991. - С. 14-16.

72. Сомов Г.П., Литвин В.Ю. Сапрофитизм и паразитизм патогенных бактерий // Экологические аспекты. Новосибирск, 1988. - С. 35 — 38.

73. Сомов Г.П., Тимченко Н.Ф. Основные итоги изучения психро-фильности патогенных бактерий // ЖМЭИ. — 1997. — № 5. — С. 12 — 16.

74. Спиряхина Т.В. Биотипирование Yersinia enterocolitica, изолированных от сельскохозяйственных животных в Саратовской области // Ветеринарная практика. 2004. - № 9. — С. 26 —29.

75. Спиряхина Т.В., Хапцев З.Ю., Осипчук Е.С., Зыкин Л.Ф. Характеристика свойств Yersinia enterocolitica, выделенных от животных из хозяйств Саратовской области // Практик. 2004. — № 9-10. - С. 12 —14.

76. Сыпченко А .Я., Прокопьева Л.С., Гаранина Е.И. и др. Распространение во внешней среде иерсиний и роль иерсиниоза в кишечной патологии больных // Пищевые зоонозы: Матер, междунар. симпоз. — М., 1995. — С. 73-75.

77. Тимченко Н.Ф. Патогенетическое значение психрофильности Y. pseudotuberculosis // Автореф. дисс. . докт. мед. наук Владивосток, 1989.-44 с.

78. Тимченко Н.Ф., Павлова Т.Н., Андрюков Б.Г. Опыт клинического использования родоспецифического иерсиниозного эритроцитарного ди-агностикума для РНГА // Клин. лаб. диагн. — 1998. № 7. - С. 24 — 34.

79. Хайруллина Р.Г., Черепанова Г.В., Нафеев А.А. Изоляция культур Yersinia enterocolitica с объектов внешней среды за период с 1994 по 1999 гг. // ЖМЭИ. 2002. - № 3. - С. 111 - 112.

80. Хакимов Н.М. Проявление эпидемиологического процесса иерсиниоза и псевдотуберкулеза в Казани // Гиг. окруж. среды и экол. чел. — Саратов, 1999.-С. 81-82.

81. Хапцев З.Ю. Усовершенствование лабораторной диагностики кишечного иерсиниоза сельскохозяйственных животных // Дисс. канд. биол. наук. — Саратов, 2000. — 124 с.

82. Хотько Н.И., Коломиец В.В., Добло А.Д. и др. Опыт диагностики диарейных заболеваний иерсиниозной этиологии в Среднем Поволжье // Инфекции, обусловленные иерсиниями: Матер. Междунар. конфер. СПб., 2000.-С. 64-65.

83. Ценева ГЛ. Варианты проявления основных патогенных свойств иерсиний в эксперименте и их сопоставление с изменениями у больных // Инфекции, обусловленные иерсиниями: Матер, междунар. конфер., СПб., 2000.-С. 66.

84. Ценева Г.Я. Иерсиниоз и псевдотуберкулез. СПб., 1992. — 60 с.

85. Ценева Г.Я. Лабораторная диагностика псевдотуберкулеза и иерсиниоза. СПб., 1997. - 62 С.

86. Ценева Г.Я., Солодовникова Н.Ю., Воскресенская Е.А. Молекулярные аспекты вирулентности иерсиний // Клин, микробиол. и антимикроб, химиотерапия. 2002. - № 3 - Т.4. - С. 248 - 266.

87. Черкасский Б.Л. Теоретические аспекты проблемы надзора за пищевыми зоонозами // «Пищевые зоонозы». — М., 1995. — С. 16 17.

88. Шаханина И.А., Осипова Л.А., Радуто О.И. Экономический ущерб, наносимый инфекционными болезнями в РФ по состоянию на декабрь 2000 г. // Эпид. и инф. бол. 2001. - № 6. - С. 58.

89. Шеффер А.П., Шишкина H.H., Белоусов A.A. Сверхбыстрое охлаждение и его влияние на качество мяса. — Мясн. индустрия. — 1973. -№4.-С. 20-23.

90. Шпилюк Г.Ф., Головешкина Т.Н., Володина И.К. и др. Имму-ноглобулиновые латексные препараты для экспресс-диагностики иерсинио-зов // ЖМЭИ. 1993. - № 6. - С. 92 - 93.

91. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни. М., 1982. — С. 376-383.

92. Шумилов К.В., Мельниченко Л.П., Селиверстов В.В. Современные данные об иерсиниозе животных // Ветеринария. — 1998. — № 4. — С. 7-13.

93. ЮничеваЮ.В., Брудный P.A., Буланова Е.Е. и др. Природно-очаговые инфекции в субтропической зоне Краснодарского края // Актуальные аспекты природно-очаговых болезней: Матер, межрегион, научно-практич. конфер. Омск, 16-17 октября 2001. — С. 284.

94. Ющенко Г.В. Актуальные вопросы эпидемиологии и клиники иерсиниоза (обзорная лекция). — М., 1984. — 52 с.

95. Ющенко Г.В. К проблеме острых кишечных инфекций, вызываемых некоторыми условно патогенными микробами // Пищевые токсико-инфекции. Саратов, 1997.- С. 220-225.

96. Ющенко Г.В. Некоторые аспекты эпидемиологии и экологии иерсиниоза // Современные проблемы зоонозных инфекций: Тез. докл. Все-союзн. межведом, конфер. — Симферополь. М., 1981. — С. 69 — 70.

97. Ющенко Г.В. Род Yersinia // Энтеробактерии (Руководство для врачей под ред. В.И. Покровского).— М.: Медицина, 1985. — С. 220 — 239.

98. Ющенко Г.В. Современное состояние проблемы иерсинио-зов // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 1998. № 6. - С. 8 — 11.

99. Ющенко Г.В. Экологические аспекты эпидемиологии иерсиниоза и псевдотуберкулеза // Автореф. дисс. . докт. мед. наук. М., 1989. — 43 с.

100. Ющенко Г.В., Дунаев В.И. Методика выделения и идентификации Y. enterocolitica и Y.pseudotuberculosis II Лаб. дело. — 1980. — № 6. — С. 367-370.

101. Ющенко Г.В., Дунаев В.И. Новый метод выделения иерсиний от больных и из объектов окружающей среды и сравнительная оценка его с общепринятыми // Вопросы физиологии, метаболизма и идентификации микроорганизмов.-М., 1987.-С. 115-119.

102. Ющук Н.Д., Венгерова В .Я. Иерсиниозы // Лекции по инфекционным болезням. М., 1999.-Т.1.-С. 339-354.

103. Ющук Н.Д., Кареткина Г.Н. Иерсиниоз // Советская медицина. 1987. - № 9. - С. 54-58.

104. Ющук Н.Д., Ценева Г.Я., Кареткина Г.Н., Бродов Л.Е. Иерсиниозы. М.: Медицина, 2003. - 208 С.

105. Янковский К.С., Костенко Ю.Г., Ерофеева Ю.К. Контроль пищевых продуктов на наличие листерий М., Мясная индустрия — 2003. — № 1- С. 26 -29.

106. Andersen G.K. Contamination of freshly slaughtered pig carcases with human pathogenic Yersinia enterocolitica II Food Microbiol. 1988. — Vol. 7, №3.- P. 193-202.

107. Aulisio C.C.G., Lanier J. M., Chappel M.A. Yersinia enterocolitica 013 associated with outbreaks in three southern states // J. Food Prot. 1982. -Vol. 45.-P. 1263.

108. Aulisio C.C.G., Mehlman I.J., Sanders A.C. Alcali method for rapid recovery of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis from foods//Appl. Environ. Microbiol. 1980.-Vol. 39.-P. 135-140.

109. Aulisio C.C.G., Stanfield J.T., Hill W.E. Yersiniosis associated with tofu consumption: serological, biochemical and pathogenicity stadies of Yersinia enterocolitica isolates // J. Food Prot. 1983. - Vol. 46. - P. 226 - 230.

110. Black R.E., Jackson R.J., Tsai T. Epidemic Yersinia enterocolitica infection due to contaminated chocolate milk // N. Engl. J. Med. 1978. -Vol. 278.-P. 76-79.

111. Bockemuhl J., Wong J. Yersinia. In: Murray P.R., Baron E.J., Jor-gansen J.H., Pfaller M.A. Yolken R.H. // Manual of clinical microbiology. 8th ed. Washington (DC): ASM Press, 2003. P. 672 - 683.

112. Boer de E., Nows J.F.M., Nijland E., Smulders A.N.S. Varkens (Vlees) als bron van pathogene Yersinia enterocolitica // Tijdschr. Diergenels. — 1991.-Vol. 116, №6.-P. 227-280.

113. Bottone E.J. Yersinia enterocolitica: overview and epidemiologic correlates// Microb. Infect. 1999. - Vol. 1. - P. 323 - 333.

114. Bozhkova K. Production of haemolysins by Yersinia enterocolitica strains // Scr. sei. med. 1996. - Vol. 29. - P. 71 - 73.

115. Bult M. et al. Является ли мясо, контаминированное Y.enterocolitica, патогенным для человека? // Fleischwirtschaft. 1992. — Vol. 72. - №9. - P. 1267 - 1270. Цит. РЖБ. -1993. - ЗБ, 4052.

116. Cabedo L., Sofos J.N., Schmidt G.R., G.C. Smith. Attachment of Escherichia coli 0157:H7 and other bacterial cells grown in two media to beef adipose and muscle tissues // J. Food Prot. 1997. - Vol. 60. - P. 102 - 106.

117. Carter P.B., Collins F.M. Experimental Y.enterocolitica infection in mice: kinetics of growth // Infect. Immun. 1974. - Vol. 9. — P. 851 - 857.

118. Cornelis G.R., Boland A., Boyd A.P., et al. The virulence plasmid of Yersinia, antihost genome // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. - Vol. 62. -P. 1315- 1352.

119. Cox P., Rossel R., Gaya A., Prats G. Research not: the presence of Yersinia enterocolitica and other Yersinia species on the carcasses of market broilers // Poultry Sei. 1990. - Vol. 69, № 3. - P. 482 - 485.

120. Czernomysy-Furowicz D., Furowicz A. J, Karakulska J., Nawro-tek P., Peruzynska A., Kalisinska E. A case of isolation Yersinia enterocolitica from dack muscles // Adv. Agr. Sei. 1999. - Vol. 6, № 1. - P. 19 - 23.

121. De Boer E. Characteristion of Y. enterocolitica in the Netherland // Int. J. Food Microbiol. 1986. - №3. - P. 217 -224.

122. Doyle M.P., Hagdahl M.B., Taylor S.L. Isolation of virulent Yersinia enterocolitica from porcine tongues // Appl. Environ. Microbiol. — 1981. -Vol. 42.-P. 661-666.

123. Frederiksson — Ahomaa M. Contamination carcasse, oflals and environment with Yad- A positive Y.enterocolitica in pig slaughterhouse // J. Food Prot.-2000.-Vol. 63, № l.-P. 31 -35.

124. Frederiksson Ahomaa M. High prevalence Yad - A positive Y.enterocolitica in pig tongues and minsedmeat at retail level in Finland I I J. Food Prot. - 1999. - Vol.62, № 2. - P. 123 - 127.

125. Fukushima I., Hoshina K., Itogowa H., Gomyoda M. Introduction into Japan of pathogenic Yersinia through imported pork, beef and towe // Int. J. Food Microbiol. 1997. - Vol.35, № 3. - P. 205 - 212.

126. Fukushima I., Marugama K. Omori I. et al. Kontamination von Schweinen mit Yersinia im Schlachthaus // Fleischwirtschaft. 1990. - Vol.70, № 10.-P. 1330-1332.

127. Garrigue G., Poveda F., Carniel E. Yersiniosis: Rappel bacteriologique, epidemiologique et clinique. Etude de serologic en France // Feniel. Biol. 1993. - Vol. 190. - P. 25 - 28.

128. Gemski P., Lazere J. R., Casey T. Plasmid associated with pathogenicity and calcium dependence of Yersinia enterocolitica // Infect. Immun. — 1980. Vol. 27. - P. 682 - 685.

129. Greer G.G. Acid decontamination of pork // W. Hog. J. 1995. -Vol. 16,№4.-P. 36-46.

130. Heesemann J. Enteropathogenic yersiniosis: pathogenicity factors and new diagnostic methods Germany. // Infect. Immun. 1990. - Vol.18. -P. 186-191.

131. Heesemann J., Keller C., Morawa R., Schmidt N., Seimens H.J., Laufs R. Plasmid of human strains of Yersinia enterocolitica: molecular related-ness and possible importance// J. Infect. Dis. 1983. — Vol. 147. — P. 107 — 115.

132. Jagow J., Hill Walter E. Enumiration by DNA colony hybridization of virulent Yersinia enterocolitica colonies in artificially contaminated food // Appl. and Environ. Microbiol. 1986. - Vol. 51, № 2. - P. 441 - 443.

133. Jakubczak A., Kot В., Bukowski К. Antagonistic activity of lactic acid bacteria on strains of Yersinia enterocolitica ОЗ, isolated from slaughtered pigs//Adv. Agr. Sei. 1996.-Vol. 5, № 1.-P. 31 -35.

134. Joshi N., Singh A. Detection of Yersinia enterocolitica by isolation and fluorescent antibody test from meat and infected tissues // J. Res. / Punjab. Agr. Univ. 1999. - Vol. 36, № 3-4. - P. 257 - 262.

135. Kandolo K., Wauters G. Pyrazinamidase activity in Yersinia enterocolitica and related organisms // J. Clin. Microbiol. 1985. - Vol. 21. —1. P. 980-982.

136. Kwaga Jacob K.P., Iversen John O. Laboratory investigation of virulence among strains of Yersinia enterocolitica and related species isolated from pigs and pork products // Can. J. Microbiol. 1992. - Vol. 38, № 2. - P. 92 - 97.

137. Lian C.J., Hwang W.S., Kelly J.K., Pai C.H. Invasiveness of Yersinia enterocolitica lacking the virulence plasmid: an in vivo study // J. Med. Microbiol. 1987. - Vol. 24. - P. 219-226.

138. Logue C.M., Sheridan J. J., McDowell D.A., Blair I.S. The use of a sarface adhesion immunofluorescent (SAIF) method for the rapid detection of Yersinia enterocolitica serotype 03 in meat // J. Appl. Microbiol. — 1998. — Vol. 85, №4. -P. 737 -745.

139. Marth E. H. Extended Shelf life refrigerated foods: Microbiological quality and safety. Food Tech., 1998. - Vol. 52. - P. 59 - 66.

140. Mickova V. Vyskyf Yersinia enterocolitica, zvlaste serovaru 0:3, biovaru 4 ve veprovem a hovezim mase // Cs. Epidemiol., microbial., immunol. — 1990. Vol. 39, № 4. - P. 222-227.

141. Miller V.L., Falkow S. Evidens for two genetic loci from Yersinia enterocolitica that can promote invasion of epithelian cells // Infect. Immun. —1988. Vol. 56. - P. 1242 - 1248.

142. Naktin J., Beavis K.G. Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis II Clin. Lab. Med. 1999. - Vol. 19. - P. 523 - 536.

143. Nattermann H., Horsch F., Seeger M., Schingmann H. Orientierend Untersuchungen zur Immunprophylaxe der Yersinia-enterocolitica-lnfoktion des Schweines II Mh. Veter.-Med. 1990. - Vol. 45. - P. 709 - 713.

144. Nesbakken T., Jensen J.S. Salmonella, Campylobacter and Yersinia in pork // 4 th Intern. Symposium on the Epidemiology and Control of

145. Salmonella and Other Food Pathogens in pork, 2-5 September 2001, Polish. -Leipzig, 2001.-P. 26-28.

146. Nilehn B., Ericson C. Studies on Yersinia enterocolitica bacteriophages liberated from chloroform treated cultures // Acta path. Microbial. Scand., Sect. B. 1969. - Vol.75, № 1. - P. 177 - 187.

147. Norbert K., Untermann F., Beissher H. Zum vorkommen von Salmonella und Yersinia spezies sowie Listeria monocitogenes in Harkfleisch // Fleischwirtschaft. 1989. - Vol. 69, № 9. - P. 1474 - 1476.

148. Pederson K.J., Carlson S., Pierson D.E. The ClpP protein, a subunit of the Clp protease, modulating ail gene expression in Yersinia enterocolitica II Mol. Microbiol. 1997. - Vol. 26. - P. 99 - 107.

149. Pierson D.E., Falkow S. The ail gene of Yersinia enterocolitica has a role in the ability of the organism to survive serum killing// Infect. Immun. — 1993.-Vol. 61.-P. 1846-1852.

150. Quaglio P., Aggazzotti G., Fabio A. et al. Presenza di batteri ap-partenenti al genere Yersinia in agna superficiali e di falda //Ann. Ig.: Med. prev. comunita- 1989. -Vol. 1,№ 1,2.-P. 157-162.

151. Quaglio P., Aggazzotti G., Messi P. et al. Presenza di batteri ap-partenenti al genere Yersinia in alimenti carnie in vendita al dettaglio // Ril. Ital. Ig. 1988. - Vol. 48, № 5, 6. - P. 376-378.

152. Saikia G.K., Thapliyal D.C. Enterotoxigenicity as an attribute of virulence in Yersinia enterocolitica I I Indian. J. Experiment.Biol. — 1997. — Vol. 35.-P. 1108-1110.

153. Schiemann D.A. Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis II In: Foodborne Bacterial Pathogens. 1989. — P. 601 — 672.

154. Segomelo К., Kain M.L., Belk K.E., Belliger G.R., Scanga J.A., Sofos J.N., Smith G.C. Changes in inoculated bacterial pathogens on fresh pork stored at temperatures to simulate mild distribution abuse // J. Food Prot. — 2000. — Vol. 31.-96-99.

155. Slee K.J., Skilbeck N.W. Epidemiology of Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis infection in ship in Australia // J. Clin. Microbiol. 1992.-Vol. 30,№3.-P. 712-715.

156. Straley S.C., Perry R.D. Environmental modulation of gene expre-tion and pathogenesis in Yersinia II Trends in Microbiology. — 1995. № 3. — P. 310-317.

157. Wauters G., Goosens V., Janssens M., Vandepitte J. New enrichment method for isolation of pathogenic Yersinia enterocolitica serogroup ОЗ from pork I I Appl. Environ. Microbiol. 1988. - Vol. 54. - P. 851 - 854.

158. Wauters G., Kandolo K., Janssens M. Revised biogrouping scheme of Yersinia enterocolitica II Contrib. Microbiol. Immunol. — 1987. № 9. -P. 14-21.

159. Wauters G., Le Minor L., Chalon A.M., Lassen J. Supplement au Schema antigenique de Yersinia enterocolitica II Ann. Inst. Pasteur. — 1972. — Vol. 122. -№ 5.-P. 951 -956.

160. Weagant S. D. A screening procedure and medium for the presumptive identification of Yersinia enterocolitica II FDA Laboratory Information Bulletin.- 1982.-№2617.

161. Васильев П. Йерсиния ентероколитика в гърлени секрета на свине//Ветеринарнасбирка.- 1986. — № 2.-С. 30-31.

162. Стефанов И. Изолирана на Yersinia spp. от тонзили и езици на рядовно заклани свине // Ветеринарна сбирка. — 1989. — № 8. С. 41 — 43.

163. Стефанов И. Йерсинии и йерсиниози по животните // Ветеринарна сбирка. 1989. - № 7. - С. 39 - 40.

164. Zutter L., de, van Hoff J. Isolation Yersinia enterocolitica from meat and meat products. Flegschwirtschafl, 1988. — Vol. 68. - № 1. - P. 73.

Информация о работе

Киселева, Ирина Сергеевна
кандидата биологических наук
Саратов, 2005
ВАК 03.00.07

Диссертация

Мясо как фактор передачи инфекции при иерсиниозе - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы