Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином

Прибыткова, Ксения Васильевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином"

»вах рукописи

485'гаоз

ПРИБЫТКОВА КСЕНИЯ ВАСИЛЬЕВНА

Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивирован-ных вакцин в сочетании с мирамистином

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология.

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 5 СЕН 2011

Воронеж - 2011

4852969

Работа выполнена в ФГОУ ВПО "Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д. Глинки "

Научный руководитель -

доктор ветеринарных наук, профессор Кузьмин Геннадий Николаевич

Официальные оппоненты -

доктор ветеринарных наук Скворцов Владимир Николаевич

доктор ветеринарных наук Масьянов Юрий Николаевич

Ведущая организация -

ФГОУ ВПО "Московская государст-

венная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина"

Защита состоится «28» сентября 2011 г. в «/3 » часов на заседании диссертационного совета ДМ 006.004.02 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН (394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН.

Автореферат разослан августа 2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

Г. Н. Близнецова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Среди инфекционных болезней, наносящих значительный экономический ущерб птицеводству, особое место занимают грипп птиц и болезнь Ньюкасла из-за их высокой контагиозности.

Ведущая роль в комплексе противоэпизоотических мероприятий при инфекционных болезнях птиц принадлежит иммунопрофилактике (Лагуткин H.A., 1989; Грошева Г.А., 2000; Бочарников A.B., 2004; Куляшбекова Ш.К., 2005; Джавадов Э.Д. с соавт., 2005; Коломыцев A.A., 2007; Придыбайло Н.Д., 2008), однако производственные инактивированные вакцины против гриппа и болезни Ньюкасла, не всегда обеспечивают птице полноценную специфическую защиту (Мезенцев C.B., 2006; Деева A.B. с соавт., 2007; Зотова З.В., 2008; Варкентин A.B. с соавт., 2009).

Повышение иммуногенности вакцин может быть достигнуто путем сочетания их с иммуномодулирующими веществами, используя для этого разные методы введения. В птицеводстве наибольшую актуальность приобретает ин-траназальный способ (Придыбайло Н.Д., 1991; Бессарабов Б.Ф., Сушкова Н.К., 1994; Комиссаров В.Б., 2004; Трескин М.С., 2006; Алексеева С.А., 2008). В тоже время известно, что эффективность вакцинации могут снижать бактерии и вирусы, находящиеся на слизистой оболочке дыхательных путей, вызывая респираторную реакцию (Кожевников Е.М., 1975; Болотников И.А., 1983)

В этой связи нами велся поиск иммуномодулятора двойного действия, обладающего ассоциированной антибактериальной и иммуномодулирующей активностью на слизистые оболочки верхнего отдела респираторного тракта птицы, наиболее доступного для медикаментозных инстилляций.

В качестве такого средства был выбран мирамистин, препарат из класса катионных поверхностно-активных веществ, выпускаемый ЗАО "Инфамед" (г. Москва), широко применяемый в различных областях медицинской практики (Кривошеин Ю.С., 1985; Шатров В.А., 1992; Свистов В.В., 1998; Гришин М.Н., 2001; Агафонов А.П., 2005). В ветеринарной медицине мирамистин малоизучен (Кузьмин Г.Н. с соавт, 2006).

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является изучение возможности использования мирамистина в качестве иммуномодулятора при иммунизации птицы инактивированными вакцинами против гриппа и болезни Ньюкасла для повышения их иммуногенности.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Установить оптимальные дозы мирамистина для разных способов введения и сроки его выведения из организма кур.

2. Определить санирующее и иммуномодулирующее действие препарата на слизистую оболочку верхнего отдела дыхательной системы птиц.

3. Изучить в сравнительном аспекте иммуногенную эффективность инак-тивированных вакцин против болезни Ньюкасла и гриппа птиц в сочетании с мирамистином и фоспренилом.

4. Определить влияние мирамистина на вирус болезни Ньюкасла в развивающихся куриных эмбрионах.

5. Изучить сочетанное действие мирамистина и инактивированной вакцины против гриппа у уток.

6. Рассчитать экономическую эффективность применения мирамистина при иммунизации кур.

Научная новизна. Впервые определены оптимальные дозы и способы введения мирамистина при иммунизации кур инактивированными вакцинами против гриппа и болезни Ньюкасла. Выявлено вьграженное антимикробное и иммуномодулирующее действие препарата при интраназальном введении на слизистую оболочку верхнего отдела респираторного тракта птиц. Установлена эффективность мирамистина в качестве иммуномодулирующего средства при вакцинации против гриппа цыплят-бройлеров и уток, а также при иммунизации против болезни Ньюкасла кур-несушек. Показана вирулицидная активность препарата в отношении вируса болезни Ньюкасла, контаминирую-щего развивающиеся куриные эмбрионы. Определены сроки выведения мирамистина из организма птиц.

Научная новизна исследований подтверждена получением в соавторстве патента на изобретение № 2408370 «Способ вакцинации птицы против гриппа» заявл. 17.04.2009 г; опубл. 10.01 2011 г.

Практическая значимость работы. Результаты исследований позволяют рекомендовать для широкого практического применения мирамистин в качестве иммуномодулятора при иммунизации птиц инактивированными вакцинами против гриппа и болезни Ньюкасла.

Данные, полученные при выполнении диссертационной работы, используются в учебном процессе на кафедре эпизоотологии и вирусологии ФГОУ ВПО Воронежского ГАУ им К.Д. Глинки.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и получили положительную оценку на ежегодных отчетных ученых советах факультета ветеринарной медицины Воронежского ГАУ им. К.Д. Глинки 20062009 годов; научных конференциях профессорско-преподавательского состава ФВМ ВГАУ им. К.Д. Глинки 2007-2009 гг; межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Достижения молодых ученых -будущее в развитии АПК»' (Воронеж, 2007); межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Инновационные технологии и технические средства для АПК» (Воронеж, 2009).

Основные положения, выносимые на защиту диссертации:

— влияние различных доз и способов сочетанного применения мирамистина и

инактивированных вакцин против гриппа и болезни Ньюкасла на иммунный ответ птиц;

— определение сроков выведения мирамистина из организма кур;

— влияние мирамистина на показатели естественной резистентности верхнего

отдела респираторного тракта кур;

— сравнительная иммуногенная эффективность инактивированных вакцин

против гриппа и болезни Ньюкасла - в сочетании с мирамистином и

фоспренилом;

_вирулицидная активность мирамистина в отношении вируса болезни Ньюкасла;

_сравнительное действие применения мирамистина и фоспренила на фоне

иммунизации уток против гриппа.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 147 страницах компьютерного текста, включает 16 таблиц, 7 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений. Список литературы включает 217 наименований, в том числе 162 работ отечественных и 55 - иностранных авторов. В приложении представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы исследований

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии и вирусологии ФГОУ ВПО Воронежского государственного аграрного университета им. К.Д. Глинки в

период с 2006 по 2009 гг.

При проведении исследований были использованы следующие производственные вакцины и диагностические наборы:

1.Вакцина против гриппа птиц инактивированная эмульгированная штамм Н5№. Серия № 4 М, контроль № 4, изготовленная 08.2007 г. ОАО "Покровский завод биопрепаратов").

2 Набор антигенов и сывороток для диагностики гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) произведенный ОАО "Покровским заводом биопрепаратов" 06.2006 г. (серия № 9, контроль № 9).

3 Вакцина против болезни Ньюкасла инактивированная эмульгированная выпускаемая ФГУ ВНИИЗЖ (г. Владимир). Серия № 16, контроль № 16, изготовлена 02. 2008 г.

4 Набор для выявления антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции

торможения гемагглютинации, изготовленный ФГУ "ВНИИЗЖ" г.Владимир 11 2007 г. (серия № 12, контроль №12).

В качестве иммуномодулирующих средств применяли:

1. Мирамистин - бензилдиметил[3-(миристоиламино)пропил] аммонии хлорид моногидрат, принадлежащий к классу поверхностно-активных веществ (детергентов), группе катионных четвертичных аммониевых соединении. Препарат разработан группой ученых под руководством Ю. С. Кривошеина в восьмидесятые годы XX века по закрытой программе "Космические биотехнологии" и выпускается ЗАО "Инфамед" г. Москва. Мирамистин обладает уникальным спектром иммуномодулирующих, антимикробных, противогрибковых и вирулицидных свойств, относится к веществам с низкой токсичностью (4 класс).

2. «Фоспренил» - продукт фосфорилирования полипренолов хвои со-

сны, основной компонент - динатриевая соль фосфата полипренолов, изготавливаемый ЗАО «Микро-плюс» г. Москва. Препарат широко используется в ветеринарной практике в качестве иммуномодулятора, согласно наставлению 0,05 мл/кг массы тела перорально или внутримышечно.

Кровь для гематологических и иммунологических исследований у кур и уток отбирали путем прокола подкрыльцовой вены. Общий анализ крови (гемоглобин, эритроциты, лейкоциты, лейкоформула) проводили по общепринятым методикам. Фагоцитарную способность лейкоцитов оценивали по их фагоцитарной активности, показателям общей фагоцитарной емкости и числа (Митюшников В.М., 1985, Болотников И.А. с соавт., 1980.). Т- и В-лимфоциты в крови определяли методом Е - розеткообразования (Jondal M.et al., 1973, в модификации Цымбала А.И. с соавт., 1983), нулевых клеток - по Froland S.S., Natvig L.B., 1973; Jondal М. et al., 1973; общий белок и его фракции определяли с помощью рефрактометра по Кудрявцеву А.А.(1952).

Остаточное количество мирамистина определяли экстракционно-фотометрическим методом в пробах мышечной ткани птиц, подготовленных по разработанной нами методике, для измерения оптической плотности исследуемого материала использовали спектрофотометр СФ-46.

Количественное определение лизоцима в слизистой носовой полости проводили по методу Гранда Х.Я., Яворского J1.M., Блумберга И.Я. (1973). Цитограмму слизистой оболочки носовой полости определяли с помощью подсчета 100 клеточных элементов в мазках по методу О.Г.Алексеевой (1986). Микробную обсемененность верхнего отдела респираторного тракта птиц и поверхности скорлупы яиц определяли по общепринятой бактериологической методике.

Изучение возможного эмбриотоксического действия мирамистина проводили на 12 дневных развивающихся куриных эмбрионах (п=24), которым вводили препарат в аллантоисную полость в дозах 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 мл. Учитывали выводимость цыплят, видимые аномалии развития, живую массу, при вскрытии визуально оценивали размеры и строение внутренних органов.

Для определения вирулицидного действия мирамистина на вирус болезни Ньюкасла использовали куриные эмбрионы (п=66) в возрасте 13 дней, которых инфицировали в аллантоисную полость вакцинным штаммом вируса НБ "Ла-Сота" в разведениях от 1:2 до 1:128 с включением 0,2 мл физиологического раствора для контрольной группы и 0,2 мл мирамистина для опытной. Оценку вирулицидного действия мирамистина проводили по количеству выживших куриных эмбрионов и характеру патологоанатомических изменений. Определение специфичности гибели куриных эмбрионов устанавливали в РТГА.

Изучение иммуномодулирующего действия мирамистина и фоспренила при вакцинации птиц против гриппа проводили на цыплятах (п=75) в возрасте 40 дней, а при иммунизации против болезни Ньюкасла на курах (п=75) в возрасте 90 дней.

Напряженность иммунного ответа у птиц оценивали при исследовании сыворотки в РТГА до вакцинации, а также через 21, 28 дней и через 6 месяцев после нее.

В экспериментах использовано - 465 цыплят и кур, 35 уток и 90 куриных эмбрионов, проведено 827 исследований сыворотки в РТГА, 331 гематологических и иммунологических исследований. Опыты проведены согласно требованиям к врачебно-биологическому эксперименту (Фролов И.Т., 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания птицы в период исследований. Схемы проведения опытов изложены в каждом разделе при изучении конкретно поставленных задач.

Экономическая эффективность рассчитана в соответствии с "Методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий", М., 1997 год.

Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики с применением критерия Стьюдента на персональном компьютере, с использованием интегрального пакета Excel.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Определение оптимальных доз и способов введения мирамистина курам

Предварительно были изучены возможные раздражающие свойства мирамистина при внутримышечном и интраназальном введении курам, при этом учитывались местная реакция, температура тела, общее состояние птицы, свидетельствующие об отсутствии негативного действия препарата (п=10).

Определение оптимальной иммуномодулирующей дозы мирамистина в сочетании с вакцинацией против гриппа проводили на 30 цыплятах 40 дневного возраста, которых сформировали в 6 групп по 5 голов в каждой. Цыплятам первой, второй и третьей групп вводили соответственно по 0,1 мл, 0,5 мл и 1,0 мл 0,01% раствора мирамистина в смеси с 0,5 мл вакцины - внутримышечно в область грудной мышцы. Четвертой группе применяли вакцину в том же объеме в сочетании с инсталляцией на слизистую оболочку носовой полости раствора мирамистина в количестве 2-3 капель. Пятой группе на фоне иммунизации интраназально вводили 4-5 капель мирамистина. Шестая группа служила контролем и была иммунизирована только вакциной в дозе 0,5 мл в соответствии с наставлением.

Из представленных данных в табл. 1 следует, что до иммунизации в сыворотке крови цыплят уровень антител составлял в среднем - 0,8±0Д log2.

Результаты, полученные в ходе исследования, показали зависимость иммунного ответа у птиц от дозы мирамистина и способа его введения. Так, наиболее высокие показатели титра антител были установлены во второй и четвертой опытных группах, в частности, при внутримышечном введении цыплятам 0,5 мл мирамистина - 6,8iO,7 log2 и интраназальном применении -7,0±0,9 log2, соответственно. Наиболее низкий уровень антител по группам -2,4±0,5 log2, отмечали при сочетании вакцины с 1,0 мл препарата. Титр антител,

индуцированный у птиц после применения 0,1 мл мирамистина - 3,6±0,4 1о§2, несущественно превышал показатели контрольной группы, которые составляли 2,8±0,7 ^2.

Менее выраженное влияние на уровень антител у цыплят оказывала ин-граназальная инстилляция мирамистина в дозе 4-5 капель, в среднем титр ан-тигемагглютининов в этой группе составил - 5,8±1,5

Таблица 1

Уровень антител в сыворотке крови птицы, иммунизированной против гриппа и болезни Ньюкасла в сочетании с мирамистином

(п=60)

№ группы Препарат титр антител на 28 день

фон № 1 до иммунизации 0,8±0,2 1о§2

1 вакцина ГП + 0,1 мл мирамистина *** 3,6±0,41оё2"

2 вакцина ГП + 0,5 мл мирамистина 6,8±0,71оё2"*

3 вакцина ГП + 1,0 мл мирамистина 2,4±0,5^г

4 вакцина ГП +интраназально 2-3 капли мирамистина 7,0±0,9 1о§2*"

5 вакцина ГП+ интраназально 4-5 капель мирамистина 5,8±1,51ОЙ""0

6 вакцина ГП контроль *** 2,8±0,71о§2

фон № 2 до иммунизации 0,5±0,3 1ОЙ2

7 вакцина БН + 0,1 мл мирамистин *** 4,3±1,11оВ2

8 вакцина БН + 0,5 мл мирамистин *** 9,б±1,41о&м*

9 вакцина БН + 1,0 мл мирамистин 3,6±0,5 1о§2

10 вакцина БН +интраназально 2-3 капли мирамистина 9,7±1,01оБ2*"

11 вакцина БН +интраназально 4-5 капель мирамистина 6,9±1,3 1о§2**

12 вакцина" БН контроль 4,4±0,71оё2

******

Примечание: достоверность различий , , - к фону;*,",*"- к контрольной группе -Р<0,05; 0,01; 0,001, соответственно.

По аналогичной методике определяли оптимальную иммуномодули-рующую дозу мирамистина в комбинации с вакцинацией кур инактивирован-ной вакциной против болезни Ньюкасла. При этом были получены схожие результаты, подтверждающие целесообразность внутримышечного введения препарата в объеме 0,5 мл, а при интраназальном 2-3 капли в каждый носовой ход птице.

Подобный дозозависимый характер действия мирамистина на иммуногенез впервые был установлен Шатровым В.А. (1992), который отмечал выраженную стимуляцию у мышей гуморального и клеточного иммунного ответа при введении препарата в дозе 100 мкг/мышь, а в дозе 1000 мкг мирами-стин угнетал антителообразование, что в значительной мере подтверждено

нами на птице при внутримышечном и интраназальном введениях этого им-муномодулятора. Причем более выраженный стимулирующий эффект на ан-тителогенез у кур при вакцинации их против гриппа и болезни Ньюкасла оказывала интраназалькая инсталляция мирамистина, что, по-видимому, связано с непосредственным влиянием препарата на участвующую в иммуногенезе лимфоидную ткань, сосредоточенную у птиц под эпителием слизистых покровов дыхательной системы.

По данным медицинских исследователей (Кривошеин Ю.С. с соавт., 2000) в основе иммуномодулирующего действия мирамистина лежит повышение проницаемости мембран иммунных клеток (лимфоцитов), что приводит к запуску механизмов активации неспецифического иммунного ответа.

3.2.0пределение сроков выведения мирамистина из организма кур

Среди основных требований, предъявляемых к фармакологическим препаратам при внедрении в ветеринарную практику, является отсутствие у них кумулятивных свойств, выведение из организма животных и птиц в течение короткого времени и возможность использования продуктов убоя для пищевых целей.

Нами был разработан способ подготовки проб для экстракционно-фотометрического метода определения содержания остаточных количеств ка-тионных поверхностно-активных веществ в мышечной ткани животных и птиц. Он включает дополнительное удаление липидов из суспензии мышечной ткани с помощью двойной обработки диэтиловым эфиром и освобождение от белков с использованием метода Карреза.

Таблица 2

Определение остаточных количеств мирамистина в мышечной ткани

птиц

(п=30)

№ группы Сроки отбора проб мяса Содержание мирамистина, мг/кг

1. Через трое суток после интраназального введения дозы 0,03 мг 0,0050±0,003

2. Через трое суток после внутримышечного введения дозы 0,05 мг 0,0160±0,006**

3. Контроль через трое суток 0,0046±0,010

4. Через пять суток после интраназального введения дозы 0,03 мг 0,0048±0,003

5. Через пять суток после внутримышечного введения дозы 0,05 мг 0,0053±0,007

6. Контроль через пять суток 0,0045±0,008

Примечание: достоверность различий *,**,***- к контрольной группе - Р<0,05; 0,01; 0,001,

соответственно.

Измерение оптической плотности полученной суспензии проводили на спектрофотометре СФ-46. Результаты учитывали через 3 и 5 дней после ин-траназального и внутримышечного введения препарата курам опытных и контрольных групп (табл. 2). При этом установлено полное выведение мирами-стина из организма кур через 3 дня при интраназальном введении и 5 дней после внутримышечного, что свидетельствует об отсутствии накопления препарата в организме птицы и позволяет в необходимых случаях проводить забой птиц через указанные сроки.

3.3. Влияние интраназальной инсталляции мирамистииа на микробный пейзаж и показатели естественной резистентности слизистой оболочки верхних дыхательных путей у кур

Видовой состав микрофлоры слизистой оболочки верхних дыхательных путей у кур (п=15) при фоновом бактериологическом исследовании был представлен в основном стафилококками, стрептококками (75%) и реже бактериями группы кишечной палочки (25 %).

Через 24 часа после интраназального введения мирамистина курам, отмечено снижение высевов кокковой микрофлоры на 94 %, а в отношении гра-мотрицательных микроорганизмов на 87 % по сравнению с группой, которой применяли препарат сравнения фоспренил и группой контроля.

Наряду с этим установили состояние естественной резистентности верхних дыхательных путей у кур (рис. 1).

Ифон 0 фоспренил ■ мирамистин 0 контроль Рис. 1 Показатели фагоцитарной и адсорбционной способности эпителия слизистой носовой полости кур

Инсталляция мирамистина в сравнении с контролем повысила количество фагоцитирующих лейкоцитов на 4,4%, и уменьшила число не фагоцитирующих и разрушенных на 1,9% и 2,9%, соответственно.

Адсорбирующая способность эпителия возросла на 4 %, при этом значение не адсорбирующих клеток снизилось на 2,3 %, количество секреторного лизо-цима возросло на 31 ед. Фагоцитарное число увеличилось на 1 ед, а адсорбционное на 2,3 ед, по сравнению с группой контроля, Интраназальное введение фоспренила в носовую полость курам не оказывало существенного влияния на микробную обсемененность и показатели цитограммы респираторного тракта.

ФЧ

АЧ

Полученные данные обусловлены способностью мирамистина, обладающего свойствами поверхностно-активного вещества, образовывать при нанесении на слизистую оболочку биоцидной микропленки, тогда как многие лекарственные препараты быстро эвакуируются из полости носа за счет высокой скорости биения ресничек эпителия (Виевский А.Н. 1991; Гуревич К.Г. 2002). Следовательно, мирамистин позволяет не только эффективно санировать верхние дыхательные пути птицы от контаминирующей микрофлоры, но и активизирует защитные функции органов дыхания, что положительно влияет на формирование иммунного ответа и предупреждает развитие на фоне возможного поствакцинального стресса респираторной реакции, вызванной эндогенной микрофлорой.

3.4. Определение влияния мирамистина на специфический противогриппозный иммунный ответ у цыплят

Для изучения иммуногенности инактивированной вакцины против гриппа птиц в сочетании с введением мирамистина из 75 голов цыплят 40 дневного возраста, сформировали 1 контрольную и 4 опытные группы, по 15 голов в каждой. Первой опытной группе применяли инактивированную противогриппозную вакцину в сочетании с интраназальной инстилляцией мирамистина в количестве 2-3 капель. Вторую группу цыплят иммунизировали с одновременным пероральным введением фоспренила из расчета 0,05мл/кг. Третьей группе птиц вводили вакцину в смеси с 0,5 мл мирамистина. Четвертой опытной группе вводили фоспренил в объеме 0,05мл/кг, согласно наставлению не смешивая с вакциной. Пятая группа цыплят служила контролем и иммунизировалась с добавлением к вакцине физиологического раствора в объеме 0,5 мл. Результаты исследования представлены в таблице 3.

Показатели антигемагглютининов на 21 день после вакцинации птицы указывали на более высокую эффективность мирамистина в сравнении с фос-пренилом, а также введением вакцины в чистом виде. Вместе с тем эффект действия препарата во многом определялся способом его введения: более выраженное влияние мирамистин проявлял при интраназальной инсталляции -5,2±0,43 log2, превышая значения группы, вакцинированной в смеси с мирами-стином на 0,4 log2, а по отношению к контролю на 3,2 log2. Изучая действие мирамистина на отдельные звенья клеточного иммунитета выявили достоверный рост (Р<0,05) количества моноцитов к контролю на 2,5 % при интрана-зальном и на 1,7 % при внутримышечном введении, а также Т- лимфоцитов на 12,4 % и 6,23 %, соответственно. Кроме того, интраназальное и внутримышечное введение сопровождалось увеличением общего белка на 8,9 г/л и 6,5 г/л, соответственно, при этом существенного влияния на фракционный состав белков препарат не оказывал. Напряженность иммунного ответа в опытных группах, которым применяли фоспренил, также отличалась по интенсивности в зависимости от способа введения препарата. Пероральное применение фоспренила на 21 день после иммунизации достоверно (Р<0,001) повышало титр антигемагглютининов по отношению к контролю на 2,2 log2, но оставалось ниже на 1,0 log2 в сравнении с интраназальным введением мирамисти-

на. В наименьшей степени на фоне вакцинации индуцировало выработку антител внутримышечное введение фоспренила - 4,0±0,51 \og2- Наряду с этим независимо от способа его введения, фоспренил мало влиял на рост количества лейкоцитов и белка в сравнении с использованием мирамистина.

Таблица 3

Динамика антигемагглютининов в крови птицы вакцинированной против

гриппа

(п=75)

Группы цыплят Препарат Титр антигемагглютининов

21 день 28 день через 6 мес.

фон на момент иммунизации 1,2±0,32 lofo

1 опытная Вакцина ГП + мирамистин интраназально 5,2±0,43 ••• log2 7,8±0,67 *** "* log2 4,6±0,75 bg2

2 опытная Вакцина ГП + фоспренил peros 4,2±0,32*** • •• log2 5,8±0,8***" log2 4,0±0,58 log2

3 опытная Вакцина ГП + мирамистин внутримышечно (в смеси) 4,8±0,45 log2 7,2±0,54 *** "* bg2 3,9±0,52 bg2

4 опытная Вакцина ГП + фоспренил внутримышечно, не смешивая 4,0±0,51*** • l0g2 5,6±0,69***# log2 3,5±0,76 ** • log2

5 контроль Вакцина ГП + физиологический раствор 2,0±0,53 log2 3,4±0,7* bg2 2,9±0,37* bg2

Примечание: достоверность различий , , - к фону;*,","*- к контрольной группе -Р<0,05; 0,01; 0,001, соответственно.

Максимальное накопление антител во всех опытных группах происходило на 28 день исследования. Наиболее выраженный модулирующий эффект отмечали в первой опытной группе (при инсталляции мирамистина в носовую полость), количество защитных антител при этом составило 7,8±0,67 Менее эффективно влияло применение мирамистина в смеси с вакциной, средние значения титра антител при данном способе были 7,2±0,54 1о§2. Через 28 дней после интраназального введения мирамистина количество лейкоцитов возросло на 11,4*109/л (Р<0,001), а внутримышечного на 10,9*109/л (Р<0,001) к группе контроля. С повышением общего числа лейкоцитов, произошло изменение содержания Т-лимфоцитов, количество которых при интраназальном использовании препарата увеличилось на 14,1 % по отношению к контролю. Содержание общего белка в сыворотке крови цыплят первой группы увеличилось на 23,1 г/л (Р<0,001), при этом количество у-глобулиновой фракции повысилось на 7 % (Р<0,001). Применение фоспренила сопровождалось увеличением титра антител при пероральном использовании на 2,4 к^2, а при внутримышечном на

2,2 log2 в сравнении с контролем. Эти результаты согласуются с данными, полученными Деевой А.В. с соавт. (2007), установившей, что к 28 дню средние геометрические титры противогриппозных антител у кур при использовании фоспренила были выше, чем при введении вакцины без иммуномодулятора.

Рассматривая другие показатели иммунологической защиты цыплят необходимо отметить, что пероральное введение фоспренила к 28 дню стимулирует повышение количества лейкоцитов по отношению к контролю на 10,8* 109/л (Р<0,001) из них в большей степени моно- и лимфоцитов до 4±1,38% и 71,86±0,97 %, соответственно. Общий белок также возрастал, в основном за счет синтеза у-глобулинов. На количество а- и (J- глобулинов препарат существенного влияния не оказывал, значения опытных групп птицы незначительно отличались от контрольных.

Исследования сыворотки крови кур, проведенные через 6 мес после вакцинации, выявили значительное снижение уровня антител против гриппа во всех группах. Протективный титр сохранился при использовании иммуномо-дуляторов интраназальным и пероральным способами, составив 4,6±0,75 log2 и 4,0±0,58 log2, соответственно. Титры антигемагглютининов в крови цыплят, вакцинированных в сочетании с иммуномодуляторами внутримышечным способом, были ниже показателей защиты. Исследования, проведенные Куляшбе-ковой Ш. К. с соавт. (2009) в отношении вакцины против болезни Марека, также обнаружили наиболее низкие результаты титра антител при введении вакцины с фоспренилом по сравнению с другими применяемыми иммуномодуляторами - тимогеном и ПДЭ.

3.4.1. Иммуногенная эффективность инактивированной вакцины против гриппа птиц в сочетании с мирамистином (производственный опыт)

В связи с тем, что иммунизация птицы против гриппа на птицефабриках РФ запрещена Россельхознадзором, производственный опыт нами был проведен на курах 3 фермерских хозяйств в трех районах Липецкой области.

В опыте были использованы куры 120-140 дневного возраста, которым совместно с вакциной против гриппа интраназально вводили мирамистин по 2-3 капли в каждую новую полость, птиц контрольной группы вакцинировали без иммуномодулятора. Количество кур в хозяйстве Хлевенского района составило 21 в опытной и 20 голов в контрольной, Чаплыгинского района - 17 и 10 голов, Грязинского - 80 и 40 голов, соответственно. Исследования, проведенные на 28-й день после вакцинации, показали, что интраназальное введение курам мирамистина сопровождалось повышением уровня специфических противогриппозных антител до протективного уровня во всех хозяйствах. В среднем защитный титр антигемагглютининов в крови опытной группы кур Хлевенского района повысился до 7,2±2,3 log2, Чаплыгинского до б,8±2,17 log2, а Грязинского до 5,7±2,17 log2, в то время как в группах контроля уровень антител не достиг протективного значения и был равен 3,6±1,93 log2, 3,3±1,15 log2 и 3,3±2,39 log2, соответственно. Рассматривая количество птиц по группам, уровень антител в сыворотке которых был >4 log2 (протективный титр), установлено (рис.2), что интраназальная инсталляция мирамистина обеспечи-

вала формирование иммунитета в группе в пределах, обусловленных требованиями к вакцине по иммуногенности (не менее 80%) в Хлевенском 85,7%, Ча-плыгинском 88 % и Грязинском 82,5 %, эффективность введения вакцины без иммуномодулятора в контрольных группах птиц этих же районов составила соответственно 51,3 %, 30 % и 55 %.

100,00%

80,00%

60,00%

40,00%

20,00%

0,00%

Вакцина Вакцина+мирамистин

11 Хлевенский р-он И Чаплыгинский р-он 0 Грязинский р-он Ш Наставление

Рис.2 Иммуногенная эффективность сочетанной вакцинации кур против гриппа

На основании проведенных исследований установлено, что в группах кур, вакцинированных с мирамистином, отмечен более высокий титр специфических противогриппозных антител по сравнению с группой контроля.

. 3.5. Определение влияния мирамистина на специфический иммунный ответ у кур при вакцинации против болезни Ньюкасла

Опыты по определению влияния мирамистина на образование специфических антител были проведены на курах (п=75) с использованием икактиви-рованной эмульгированной вакцины против болезни Ньюкасла. Для этого одновременно с вакцинацией курам первой группы применяли мирамиетин ин-траназально 2-3 капли, второй - фоспренил перорально, третьей группе 0,5 мл мирамистина внутримышечно (в смеси с вакциной), четвертой фоспренил внутримышечно, пятая группа служила контролем.

Через 21 день после иммунизации отмечали наличие антител в защитных титрах во всех группах, кроме контроля (табл.4). При этом у птицы, вакцинированной с введением мирамистина интраназальным и внутримышечным способом, уровень антигемагглютининов увеличился на 1,0 log2 и 0,6 в сравнении с пероральным введением фоспренила, и на 1,2 и 0,8 l0g2П0 отношению к введению фоспренила внутримышечно.

При исследовании гематологических и иммунологических показателей у привитых кур было установлено, что фоспренил оказывал менее выраженное влияние на содержание лейкоцитов, чем мирамиетин. Их общее количество у кур после интраназального введения мирамистина возросло на 11,0*10 9/л от исходного уровня и на 7,2* 10 9/л по отношению к пероральному введению

фоспренила. С повышением общего количества лейкоцитов у подопытных птиц в группе с интраназальным введением мирамистина и группе, в которой перорально применяли фоспренил, изменялось и содержание лимфоцитов, в основном за счет повышения Т- клеток на 10,2 % и 5,8 % по отношению к контролю. Содержание общего белка в сыворотке крови кур всех подопытных групп достоверно выросло в сравнении с исходным уровнем.

Таблица 4

Динамика антител в крови кур, вакцинированных против болезни Ньюкасла _(п=75)

Группы кур Препарат Титр антигемагглютининов

21день 28день 6 мес

фон На момент иммунизации 1,4±0Д logj

1 опытная Вакцина НБ + ми-рамистин интраназально 8,2±1,01 log2 10,6±1,12 log2 6,2±1Д2 log2

2 опытная Вакцина НБ + фоспренил peros 7,2±0^6Jog2 *** 8,4±1351og2 *** 5,4±1,58 log2

3 опытная Вакцина НБ + ми-рамистин внутримышечно (в смеси) 7,8±0,77 log2 10,0±1Д2 log2 *** • 5,4±1,44 log2

4 опытная Вакцина НБ + фоспренил внутримышечно (не смешивая) 7,0± 1,0 log2 * * * 7,8±1,52 log2 5,2*1,73 log2

5 контрольная Вакцина НБ + физиологический раствор 3,8±1,78 log2 5,0± 1,77 log2 * 4,8±1,62 log2

Примечание: достоверность различий *,»♦,***. к фону;',",*"- к контрольной группе; -Р<0,05; 0,01; 0,001, соответственно.

В сыворотке крови кур, иммунизированных в смеси с мирамистином, на 28 день исследований средний геометрический титр антител превышал значения группы контроля в 2,0 раза, а при введении мирамистина интраназально в 2,1 раза. Использование инактивированной вакцины в сочетании с перораль-ным применением фоспренила превышало контроль в 1,7 раза, а при введении внутримышечным способом в 1,6 раза. Необходимо подчеркнуть, что к 28 дню наравне с усилением синтеза специфических антител в группах с интраназальным применением мирамистина, пероральным использованием фоспренила и внутримышечным введением мирамистина увеличивалось и количество лейкоцитов на 1,8, 0,4, 1,5х109/л, главным образом, за счет повышения лимфо- и моноцитов. Количество общего белка достоверно возросло (Р<0,01) к группе контроля, при интраназальном способе использования мирамистина на 7,1 и внутримышечном на 5,7 г/л. Изучая фракционный состав белка у кур

опытных групп, что большая его часть приходилось на содержание у-глобулинов.

При исследовании сывороток крови, проведенных через 6 месяцев после вакцинации, констатировали сохранность специфических антител у кур на протективном уровне, во всех группах кроме контроля. Наиболее высокие значения антител сохранились при закапывании мирамистина в носовую полость - 6,2±1,22 log2, что в 1,3 раза выше показаний группы контроля.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о положительном влиянии мирамистина и фоспренила на стимуляцию антителопродукции при вакцинации кур против болезни Ньюкасла, при этом максимальное накопление антигемагглютининов, а также длительная их циркуляция в протек-тивных титрах отмечена при сочетании вакцины с интраназальным введением мирамистина.

З.б. Ингибирующее действие мирамистина на вирус болезни Ньюкасла в развивающихся куриных эмбрионах

Большую проблему для диагностических лабораторий и предприятий биологической промышленности, использующих в работе куриные эмбрионы (КЭ), представляет носительство вирусов у птиц и контаминация ими КЭ. В связи с этим, нами были проведены исследования по влиянию мирамистина на жизнеспособность КЭ и его вирулицидное действие in vivo на вирус болезни Ньюкасла.

В начале исследований изучали влияние мирамистина на развивающиеся КЭ (п=24) в дозах 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 мл/КЭ, инокулируемых в алланто-исную полость. В результате установили отсутствие эмбриотоксического действия препарата, что подтверждалось 100 % выводом цыплят опытных групп и отсутствием у них каких-либо аномалий развития.

Введение смеси из 0,2 мл мирамистина и вируса БН в двукратных разведениях от 100 до 1,5 доз в аллантоисную полость (п=66) КЭ, вызывало гибель одного эмбриона инфицированного 100-и дозами вируса. В то же время, в группе эмбрионов зараженных смесью вируса с физраствором, отмечали 100 % гибель при 100, 50 и 25 введенных дозах, при введении меньших доз на теле некоторых выживших эмбрионов присутствовали характерные для болезни Ньюкасла изменения: гиперемия, отечность, на голове и теле массовые точечные кровоизлияния. Наличие вируса определяли качественной РГА, с подтверждением специфичности вируса в РТГА.

Кроме того, установлено, что обработка скорлупы инкубационных яиц слабыми концентрациями раствора мирамистина 0,01 % и 0,005 % снижает бактериальную обсемененность в первый день инкубации на 99,80 % и 97,17% соответственно, но не способна удержать ее на этом уровне до конца инкубации. В то время как использование 0,1 % раствора мирамистина не только эффективно санирует поверхность скорлупы, но и в течение всего периода инкубации не допускает ее повторной контаминации.

3.7. Влияние мирамистина на специфический противогриппозный иммунный ответ у уток

Известно, что основным резервуаром вируса гриппа являются водоплавающие птицы, обладающие иммунологическими особенностями.

Практика использования инактивированных противогриппозных вакцин выявила их более низкую иммуногенную эффективность у гусей и уток. В связи с этим нами было проведено изучение иммуногенной активности противогриппозной вакцины у уток в сочетании с иммуномодулятором мирами-стином.

Из 30 уток были сформированы две опытные и одна контрольная группа по 10 голов в каждой. Уток всех групп иммунизировали внутримышечно в объеме 0,5 мл инактивированной вакцины. При этом первой группе одновременно вводили в каждую носовую полость по 2-3 капли раствора мирамистина, а второй - перорально 0,05 мл/кг раствора фоспренила. Контролем служила третья группа, которая вакцинировалась без использования иммуномодуля-.тора.

Исследования сыворотки крови, проведенные на 21 и 28 день после вакцинации, не выявили наличия антигемагглютининов в протективных титрах. Такая своеобразная ареактивность организма описана в работе Митюшникова В.М. (1985), где он указывает, что причиной пониженной способности к выработке антител является видовая и возрастная особенность утят. Учитывая эти данные, вся птица была подвергнута ревакцинации в двойном объеме прививной дозы с повторным введением мирамистина и фоспренила.

На 28 день титр специфических противогриппозных антител в сыворотке крови у уток после введения мирамистина вырос до 4,6±0,83 1о§2, а групповой иммунный ответ составил 82 %. Пероральное применение фоспренила на фоне иммунизации, позволило повысить титр до 4,2±0,90 1о&, в то же время защитные титры имели только 78 % от вакцинированных уток, что требует проведения повторной вакцинации. При этом в группе контроля средний титр антител составил 3,2±0,77, а количество иммунной птицы не превышало 34 %.

Эффективность двукратного введения вакцины связана не только с эффектом иммунологической памяти (в реакцию на антиген вступают уже подготовленные клетки с высокоаффинными антигенраспознающими рецепторами (Воробьев А.А., 2002)), но также с активностью В-клеток памяти и функциональной подготовленностью Т- клеточного звена подвергнутого влиянию мирамистина (Кучеренко Ю.А., 1990).

4. ВЫВОДЫ

2. Изучение влияния на антителогенез птицы разных доз мирамистина применяемых совместно с инактивированными вакцинами против гриппа и болезни Ньюкасла выявило выраженный дозозависимый характер его действия: введение курам 0,5 мл препарата приводило к достоверному росту уровня антител, тогда как использование 1,0 мл угнетало их синтез.

3. Мирамистин при интраназальной инсталляции курам ингибирует пер-систирующую кокковую микрофлору носовой полости на 94 %, грамотри-цательную флору на 87%, одновременно повышает уровень секреторного лизоцима до 210 ± 2 ед/мл, фагоцитирующих лейкоцитов на 4,4 %. Комплексное санирующее и стимулирующее действие мирамистина на слизистую носовой полости птицы предупреждает развитие возможного вакцинального стресса обусловленного респираторной эндогенной микрофлорой, что позитивно влияет на формирование иммунного ответа.

4. Мирамистин при интраназальном введении курам в сочетании с вакцинацией против гриппа повышает уровень сероконверсии на 2,0 log2, а при иммунизации против болезни Ньюкасла - на 2,2 1о§2 и обеспечивает в организме птиц более длительную циркуляцию антител в протективных титрах по сравнению с иммуномодулятором фоспренилом.

5. Специфический противогриппозный иммунный ответ у уток вырабатывался после двукратного введения вакцины в сочетании с интраназальной инсталляцией мирамистина со средним титром антител 4,6±0,83 1о§2 и групповым иммунитетом 82 %, при этом повторно вакцину вводили в двойном объеме. Тогда как двукратная иммунизация уток против гриппа с пероральным введением фоспренила не обеспечивала достаточного группового иммунитета.

6. Установлено, что инокуляция мирамистина в дозах от 0,1 до 0,5 мл/КЭ не оказывает эмбриотоксического действия, а введение развивающимся куриным эмбрионам 0,2 мл мирамистина в сочетании с 50 ИД вакцинного штамма "Ла-Сота" против болезни Ньюкасла обеспечивало его инактивацию.

7. Экономическая эффективность вакцинации против гриппа и -болезни Ньюкасла в сочетании с мирамистином составила на 1 рубль затрат 25,9 и 29,6 руб соответственно, а при использовании фоспренила - 17,5 и 19,5 руб.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для повышения иммуногенной эффективности инактивированных вакцин против гриппа и болезни Ньюкасла рекомендуем применять птице инсталляцию мирамистина в количестве 2-3 капли в каждый носовой ход одновременно с вакцинацией. Данный препарат оказывает иммуномодули-рующее действие, способствуя созданию напряженного иммунитета и продлевает циркуляцию антител в организме птицы в протективных титрах.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. * Кузьмин Г.Н. Действие мирамистина на вирус ньюкаслской болезни / Г.Н. Кузьмин, A.M. Скогорева, К.В. Прибыткова, О.В. Попова// Птицеводство. - 2008. - №06. - С.29-30

2. * Кузьмин Г.Н. Влияние мирамистина и фоспренила на иммунитет птицы при гриппе и ньюкаслской болезни / Г.Н. Кузьмин, A.M. Скогорева, К.В. Прибыткова, О.В. Попова // Птицеводство. - 2009. - №05. - С.35-37

3. Кузьмин Г.Н. Использование мирамистина для предынкубационной дезинфекции яиц / Г.Н. Кузьмин, A.M. Скогорева, К.В. Прибыткова, О.В. Попова // Вестник Воронежского государственного аграрного университета. - 2009. - 2 (21). - С.49-53

4. Прибыткова К.В. Совершенствование специфической профилактики гриппа птиц / К.В. Прибыткова //Материалы межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых "Достижения молодых ученых - будущее в развитии АПК".-ЧЛ1. - Воронеж: ФГОУ ВПО ВГАУ, 2007. - С.245-248.

5. Прибыткова К.В. Повышение иммуногенной активности вакцины против гриппа с использованием мирамистина / К.В. Прибыткова // Материалы межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых "Инновационные технологии и технические средства для АПК". -Ч. III. - Воронеж ФГОУ ВПО ВГАУ, 2009. - С.136-141.

6. Прибыткова К.В. Способ вакцинации птицы против гриппа / К.В. Прибыткова, О.В. Попова, Г.Н. Кузьмин, A.M. Скогорева, В.В. Свистов, И.В. Жуков // Патент № 2408370; заявитель и патентообладатель ФГОУ ВПО "Воронежский государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки". -2009114430/15; заявл. 17.04.2009 г; опубл. 10.01 2011 Бюл.№1

- статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ.

Подписано в печать 08.08.2011 г. Формат 60 х 84/16 . Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100 экз. Заказ №2153

Отпечатано в типографии Воронежский ЦНТИ - филиал ФГУ «РЭА» Минэнерго России 394036, г. Воронеж, пр. Революции, 30

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Прибыткова, Ксения Васильевна

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Эпизоотическая ситуация в Российской Федерации по гриппу и 9 болезни Ньюкасла

1.2. Специфическая профилактика при гриппе и болезни Ньюкасла

1.3. Особенности иммунной системы и естественной резистентности у птиц

1.4. Этиология иммунодефицитов у птиц и пути их коррекции

1.5. Классификация и применение иммуномодуляторов в птицеводстве

1.6. Применение поверхностно-активных веществ в животноводстве и птицеводстве

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином"

Актуальность темы. Среди инфекционных болезней, наносящих значительный экономический ущерб птицеводству, особое место занимают грипп птиц и болезнь Ньюкасла, из-за их высокой контагиозности.

Ведущая роль в комплексе противоэпизоотических мероприятий при инфекционных болезнях птиц принадлежит иммунопрофилактике (Лагуткин H.A., 1989; Грошева Г.А., 2000; Бочарников A.B., 2004; Куляшбекова Ш.К., 2005; Джавадов Э.Д. с соавт., 2005; Коломыцев A.A., 2007; Придыбайло Н.Д., 2008); однако производственные инактивированные вакцины против гриппа и болезни Ньюкасла, не всегда обеспечивают птице полноценную специфическую защиту (Мезенцев C.B., 2006; Деева A.B. с соавт., 2007; Зотова З.В., 2008; Варкентин A.B. с соавт., 2009).

В последние годы в иммунопрофилактике болезней птиц стало актуальным применение иммуномодулирующих веществ интраназальным способом в сочетании с вакцинными препаратами с целью повышения их иммуноген-ности (Придыбайло Н.Д., 1991; Бессарабов'Б.Ф., Сушкова Н.К., 1994; Комиссаров В.Б., 2004; Трескин М.С., 2006; Алексеева С.А., 2008).

В качестве такого средства был выбран мирамистин, препарат из класса катионных поверхностно-активных веществ, выпускаемый ЗАО "Инфамед" (г. Москва), широко применяемый в различных областях медицинской практики (Кривошеин Ю.С. 1985; Шатров В. А. 1992; Свистов В.В 1998; Гришин M. Н. 2001; Агафонов А.П. 2005). В ветеринарной медицине мирамистин мало изучен (Кузьмин Г.Н., Скогорева A.M., Пояркова Т.В. 2006 с соавт.).

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является изучение возможности использования мирамистина в качестве иммуномодуля-тора при иммунизации птицы инактивированными вакцинами против гриппа и болезни Ньюкасла для повышения их иммуногенности.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

2. Определить санирующее и иммуномодулирующее действие препарата-на слизистую оболочку верхнего отдела дыхательной системы птиц.

3. Изучить в сравнительном аспекте иммуногенную эффективность инак-тивированных вакцин против болезни Ньюкасла и гриппа-птиц в сочетании с мирамистином и фоспренилом.

4. Определить влияние мирамистина на вирус болезни Ньюкасла в развивающихся куриных эмбрионах.

5. Изучить сочетанное действие мирамистина'и инактивированной вакцины против гриппа у уток.

6. Рассчитать экономическую эффективность применения мирамистина при иммунизации кур.

Научная новизна. Впервые определены оптимальные дозы и способы введения мирамистина при иммунизации кур инактивированными вакцинами против гриппа и болезни Ньюкасла. Выявлено выраженное антимикробное и иммуномодулирующее действие препарата при интраназальном введении на слизистую оболочку верхнего отдела респираторного тракта птиц. Установлена эффективность мирамистина в качестве иммуномодули-, рующего средства при вакцинации против гриппа цыплят-бройлеров и уток, а также при иммунизации против болезни Ньюкасла кур-несушек. Показана вирулицидная активность препарата в отношении вируса болезни Ньюкасла, контаминирующего развивающиеся куриные эмбрионы. Определены сроки выведения мирамистина из организма птиц.

Данные, полученные при выполнении диссертационной работы, используются в учебном процессе на кафедре эпизоотологии и вирусологии ФГОУ ВПО Воронежского ГАУ им К.Д: Глинки.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и получили положительную оценку на ежегодных отчетных ученых советах факультета ветеринарной медицины Воронежского ГАУ им. К.Д. Глинки 2006-2009 годов; научных конференциях профессорско-преподавательского состава ФВМ ВГАУ им. К.Д. Глинки 2007-2009 гг; межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Достижения молодых ученых будущее в развитии АПК» (Воронеж, 2007); межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Инновационные технологии и технические средства для АПК» (Воронеж, 2009).

Публикация результатов исследований. Основные положения работы изложены в 5 опубликованных научных работах, в том числе 2 в журналах рекомендованных ВАК РФ, получен 1 патент РФ на изобретение. Основные положения, выносимые на защиту диссертации: влияние различных доз и способов сочетанного применения мирамистина и инактивированных вакцин против гриппа и болезни Ньюкасла на иммунный ответ птиц; определение сроков выведения мирамистина из организма кур; влияние мирамистина на показатели естественной-резистентности верхнего отдела респираторного тракта кур; сравнительная иммуногенная эффективность инактивированных вакцин против гриппа и болезни Ньюкасла - в сочетании с мирамистином и фоспренилом; вирулицидная активность мирамистина в отношении вируса болезни

Ньюкасла; сравнительное действие применения мирамистина и фоспренила на фоне иммунизации уток против гриппа.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 147 страницах компьютерного текста, включает 16 таблиц, 7 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений. Список литературы включает 217 наименований, в том числе 162 работы отечественных и 55 -иностранных авторов. В приложении представлены документы, подтверждающие достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Прибыткова, Ксения Васильевна

5. ВЫВОДЫ

1. Препарат комплексного действия мирамистин из группы катионных поверхностно-активных веществ не оказывает раздражающего действия при парентеральном и интраназальном введении, курам, не токсичен, при интраназальном введении полностью выводится из организма птицы через; З дня^а при внулгримышечном/через 5 дней. . 2. Изучение -влияния? на- антителогенез птицы разных доз мирамистина применяемых совместно-с инактивированными вакцинами против-. гриппа и болезни Ньюкасла выявило выраженный* дозозависимый характер его действия: введение: курам 0,5. мл препарата приводило' к достоверному росту уровня антител, тогда как использование 1,0 мл угнетало их синтез.

3. Мирамистин при интраназальной инсталляции курам ингибирует пер-систирующую кокковую микрофлору носовой полости на; 94 %, грамотри-цательную флору на. 87 %, одновременно повышает уровень секреторного лизоцима до. 210 ± 2 ед/мл, фагоцитирующих лейкоцитов на 4,4 %. Комплексное санирующее и стимулирующее; действие мирамистина. на; слизистую' носовой; полости птицы ^предупреждает развитие возможного вакцинального стресса обусловленного респираторной эндогенной микрофлорой, что позитивно влияет на формирование иммунного ответа.

4. Мирамистин при интраназальном введении курам в сочетании с вакцинацией против гриппа повышает уровень сероконверсиина2,0 а при иммунизации против болезни Ньюкасла - на 2,2 log2 и обеспечивает в организме птиц более длительную циркуляцию. антител в протективных титрах по сравнению с иммуномодулятором фоспренилом.

5. Специфический противогриппозный иммунный ответ у уток вырабатывался после двукратного введения вакцины в сочетании с интраназаль-ной инсталляцией мирамистина со средним титром антител 4,6±0,83 ^2и групповым иммунитетом 82 %, при этом повторно вакцину вводили в двойном объеме. Тогда как двукратная иммунизация уток против гриппа с пероральным введением фоспренила не обеспечивала достаточного группового иммунитета.

6. Установлено, что инокуляция мирамистина в дозах от 0,1 до 0,5 мл/КЭ не оказывает эмбриотоксического действия, а введение развивающимся куриным эмбрионам 0,2 мл мирамистина в сочетании с 50 ИД вакцинного штамма "Ла Сота" против болезни Ньюкасла обеспечивало его инактивацию.

7. Экономическая эффективность вакцинации против гриппа и болезни Ньюкасла в сочетании с мирамистином составила на 1 рубль затрат 25,9 и 29,6 руб соответственно, а при использовании фоспренила - 17,5 и 19,5 руб.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для повышения иммуногенной эффективности инактивированных вакцин против гриппа и болезни Ньюкасла рекомендуем применять птице инсталляцию мирамистина в количестве 2-3 капли в каждый носовой ход одновременно с вакцинацией. Данный препарат оказывает иммуномоду-лирующее действие, способствуя созданию напряженного иммунитета и продлевает циркуляцию антител в организме птицы в протективных титрах.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Прибыткова, Ксения Васильевна, Воронеж

1. Агафонов А.П. Изучение in vitro антивирусных свойств Мирамистина® в отношении вирусов кори и паротита / А. П. Агафонов, М. О. Скарно-вич, В. А. Петрищенко и соавт. // Антибиотики и химиотерапия.- 2005.- Вып. 50. №№ 5-6. - С. 17-19.

2. Алексеева С.А. Резистентность органов дыхания у кур в промышленном птицеводстве : автореф. дис. . канд. биол. наук / O.A. Алексеева.- Воронеж, 1993. 24 с.

3. Алексеева С.А. Влияние «Лигногумата КД» калиевого и натриевого, на защитные свойства организма кур-несушек / С.А. Алексеева, Д.П. Глебов // Ветеринарная патология. 2008. - № 2. - С. 10-13.

4. Амер М.С. Фармакологические свойства апралана и этония при коли-бактериозе птиц : автореф. дис. . канд. вет. наук / М.С. Амер Ленинградский ветеринарный институт. Ленинград, 1991.- 15с.

5. Андреева Н.Л. Сравнительная оценка иммуностимуляторов / Андреева Н.Л. // Новые фармокологические средства в ветеринарии: Мат. 17 межд. межвуз. науч.-практ. конф. СПб., - 2005. — С. 107-108

6. Апатенко В.М. Иммунодефицит у животных / В.М. Апатенко // Ветеринария. 1992. - № 5. - С. 29-30.

7. Аржаков В. Н. Оценка туберкулоцидного действия препаратов на основе четвертичных аммониевых соединений / В.Н. Аржаков, В.Г. Ощепков, П.В. Аржаков // Ветеринарная патология. 2007. - № 3. - С. 172-178.

8. Афиногенов Г. Е. Антисептики в хирургии / Г. Е. Афиногенов, Н. П. Елинов. Л.: Медицина, 1987. - 144 с.

9. Ю.Бабаян Ж.Р. Антимикробная и дезинфицирующая активность четвертичных аммониевых соединений и композиций на их основе. : автореф. дис. . канд. мед. наук / Ж.Р. Бабаян. Москва, 1990. - 27 с.

10. Байматов В.Н. Влияние крезацина на состояние птицы / В.Н. Байматов, М:М. Латыпов // Ветеринария. 2006. - № 11. - С. 49-51.

11. Балковой И.И. Хроника борьбы с распространением гриппа птиц в Алтайском крае / И.И Балковой, Д.Н. Прошунин // Ветеринарный консультант. 2005. - № 17. - С. 5-7.

12. И.Бессарабов Б.Ф. Применение новых химиотерапевтических препаратов, биологически и поверхностно-активных веществ аэрозольным методом для профилактики и лечения респираторных болезней птиц /Б.Ф. Бес-сарабов, Н.К. Сушкова // Лекция. Москва. - 1994. - 18с.

13. Биологические свойства вируса* гриппа птиц подтипа H5N1, выделенного в Российской-Федерации в 2006 году / И.А. Чвалова и др. // Ветеринарная патология. 2007. - № 4. - С. 118-121.

14. Боев Б.В. Ветеринарные и медицинские аспекты птичьего гриппа / Б.В. Боев, В.В. Макаров // Ветеринарный консультант. №17. 2005.

15. Болотников И.А. Гематология птиц / И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев. Л: Наука, 1980. - 204 с.

16. Болотников И. А. Иммунопрофилактика инфекционных болезней птиц. / И.А. Болотников; -М.: Россельхозиздат, 1982 183 е.,ил.

17. Болотников И.А. Стресс и иммунитет у птиц / И.А. Болотников, B.C. Михкиева, Е.К. Олейник. Л.: Наука, 1983. - 118 с.

18. Болотников И.А. Физиолого-биохимические основы иммунитета с/х птицы / И.А. Болотников, Ю.В. Конопатов. Л.: Наука, 1987. - 164с.

19. Бузлама A.B. Антиоксидантная защита и иммунологическая резистентность у кур при технологическом стрессе и его коррекции препаратамифумаровой и янтарной кислот : автореф. дис. . канд. биол. наук / A.B. Бузлама ВНИВИПФиТ. Воронеж. 2000. - 26 с.

20. Бузлама A.B., Рецкий М.И. «Перекисное окисление липидов и состояние системы антиоксидантной защиты у кур при вакцинации» // Материалы международной конференции, посвященной 30-летию ВНИВИПФиТ Том1 Воронеж 2000 г.

21. Воронин Е.С. Контаминанты ветеринарных вирусных вакцин / Е.С. Воронин // М. Агропромиздат. - 1986. - 164с.

22. Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа А птиц // Ветеринарный консультант. 2006. - № 12.- С. 8-9.

23. Виевский А. Н. Механизмы биологического влияния катионных поверхностно-активных веществ / А. Н. Виевский. Киев, 1991. - 250с.

24. Винцерская Г.А. Применение мирамистина для лечения вирусных заболеваний кожи/ Винцерская Г.А., Милявский A.M.// В кн.: Идеи И.И. Мечникова и развитие современного естествознания. Тез. докл. Харьков, 1995.-С.57-58.

25. Вирус болезни Ньюкасла в популяциях диких птиц на территории юга Приморского края в период осенних миграций 2001-2004 гг. / М.Ю. Щелканов и др. // Вопросы вирусологии. 2006. - № 4. - С. 37-41.

26. Влияние иммунобиостимуляторов на продуктивность несушек / A.B. Деева и др. // Ветеринария. 2006. - № 9. - С. 8-9.

27. Влияние производных пиримидина на гематологические показатели и иммунную систему кур / А.Ф. Исмагилова и др. // Ветеринария. -1997.- №4.-С. 29-31.

28. Войтенко В.Д. Фармако-токсикологические свойства диарина для цыплят раннего возраста : автореф. дис. . канд. вет. наук / В.Д. Войтенко С- Петерб. гос. акад. вет. медицины. Санкт-Петербург, 2001. - 21 с.

29. Герунова JI.K. Стратегия применения иммуноактивных средств / JI.K. Герунова, Ю.В. Редькин // Новые фармокологические средства в ветеринарии: Мат. 19 межд. науч.-практ. конф. СПб., - 2007. - С. 47-49.

30. Григорьева JI.B. Санитарная бактериология и вирусология синтетических моющих веществ / JI. В. Григорьева. Киев: Здоров'я, 1980. - 160 с.

31. Грошева Г.А. Профилактика респираторных заболеваний птиц / Г.А. Грошева, A.C. Серебряков. Москва.: Россельхозиздат, 1978.

32. Грошева Г.А. Взаимосвязь факторов естественной устойчивости организма птиц и иммунитета при вакцинации / Г.А. Грошева, Н.Р. Есакова // Ветеринария.- 2000. № 8. С. 24-27.

33. Гуревич К.Г Разработка систем интраназальной доставки лекарственных средств / К.Г.Гуревич //Качественная клиническая практика -2002. № 1.-С. 8-12.

34. Двунаправленное действие гуморальных факторов / A.A. Коломыцев и др. // Ветеринария.- 1990.- № 5. С. 24-27.

35. Джавадов Э. Специфическая профилактика птичьего гриппа перспективна / Э. Джавадов, Н. Придыбайло // Птицеводство. 2005. - № 12. -С.-33-35.

36. Диагностика иммунодефицита птиц (иммунологические методы) / Э.Д. Джавадов и др. // Ветеринария.- 2003. № 10. - С. 11-16.

37. Дурыхина О.Н. Антивирусная и антибактериальная активность препаратов ВВ-1 и ВВ-5 и применение их для дезинфекции инкубационных яиц и инкубаторов : автореф. дис. . канд. вет. наук / О.Н. Дурыхина* Белгор. гос.с.-х. акад. Воронеж. - 2003. - 20 с.

38. Егоров И. Поверхностно-активные вещества в кормлении бройлеров / И. Егоров, Ю. Понаморенко // Птицеводство. 1997. - № 5. - С. 28-29.

39. Егоров И. Иммунитет бройлеров современных кроссов / И. Егоров // Птицеводство. 2007. - № 12. - С. 10-11.

40. Ерисанова O.E. Влияние препаратов биотроник Се-форте и каролин на организм бройлеров / O.E. Ерисанова // Ветеринария. 2006. - № 9. - С. 45-49.

41. Есин Е. Обработка эмбрионов лекарственными препаратами / Е. Есин // Птицеводство. 1986. - № 6. - С. 43-45.

42. Ефанова Л.И. Защитные механизмы организма. Иммунодиагностика и иммунопрофилактика инфекционных болезней животных / Л.И. Ефанова, Е.Т. Сайдулдин // ВГАУ. Воронеж. - 2004. - 391 с.

43. Жаков М.С. Иммуноморфологические реакции у утят, перорально вакцинированных против сальмонеллеза с алюмо-калиевыми квасцами /

44. М.С. Жаков, A.A. Горбунов // Ученые записки УО Витебской государственной академии ветеринарной медицины. 1995. - т. 32. - С. 95-97.

45. Иванова Н.В. Патогенетическое обоснование применения мирамистина при лечении хронических конъюнктивитов : автореф. дис. . канд. мед. наук / Н.В. Иванова Институт глазных болезней и тканевой терапии им. В.П. Филатова. Одесса, 1999. - 24 с.

46. Изучение динамики иммунного ответа после применения* экспериментальной вакцины против гриппа и ньюкаслской болезни птиц / Иголкин A.C. и др. // Ветеринарная патология. 2007. - № 4. - С. 152-154.

47. Информационное письмо /Дополнения по вакцинации против гриппа // Россельхознадзор Минсельхоза РФ от 05. 09.07г. № ФС-АС-2/8881

48. Карпуть И.М. Иммунный статус цыплят бройлеров/ И.М. Карпуть, М.П. Бабина // Ученые записки У О ВГАВМ. 1995. - т.32. - С.22 -23.

49. Карпуть И.М. Профилактика иммунных дефицитов и желудочно-кишечных болезней у цыплят-бройлеров / И.М. Карпуть, М.П. Бабина // Ветеринария.- 2000 № 11. - С. 41-44.

50. Киршина A.A. Значение преаналитического этапа лабораторных исследований в обеспечении качества диагностики птичьего гриппа / A.A. Киршина, A.M. Пустырникова // Российский ветеринарный журнал. — 2007. -№3.~ С. 35-39.

51. Клетикова JI.B Исследование лизоцимной активности слизистой носа птиц / Клетикова JI.B// Ученные записки Шуйского государственного педагогического университета.- 2009.- №1.- С.5-6.

52. Ковалев М.М. Совершенствование мер санации инкубационного яйца автореф. дис. . канд. вет. наук / М.М. Ковалев Волгогр. науч. исслед. технолог, ин-т мясо-молоч. скотоводства и переработки животноводства. Воронеж.- 2000. — 22 с.

53. Кожемяка <Н. Дезинфекция инкубационных яиц / Н. Кожемяка // Птицеводство. 1996. - № 1. - С. 26-27. Эволюция вирусов гриппа птиц H5N1 с 1997 по 2004 г. в Южной и Юго-Восточной Азии / A.C. Липатов и др. // Вопросы вирусологии. - 2005. - № 4. - С. 11-17.

54. Кожевников Е.М. Бактерионосительство, его значение в экологии PASTEURELLA MULTOCIDA и борьбе с пастереллезом птиц : автореф. дис. . док. вет. наук / Е.М. Кожевников Воронежский с/х институт им. К. Д. Глинки Воронеж.- 1975. - 34 с.

55. Коломыцев A.A. Современные средства борьбы при болезни Ньюкасла в странах мира, использованные в 2004-2005 гг. / А. Коломыцев, В. Филоматова, А. Орлов, А. Книзе // Ветеринарная патология. 2007. - № 2. - С. 77-79.

56. Комиссаров В.Б. Совершенствование специфической профилактики ньюкаслской болезни у цыплят на основе применения иммуностимуляторов: дис. . канд. вет. наук : 16.00.03. / В.Б. Комиссаров Кострома. -2004.- 168 с.

57. Косенко О. Адекватная замена традиционным дезсредствам / О. Косен-ко, И. Кривопишин // Птицеводство. 2002. - № 5. - С. 7-8.

58. Криворутченко IO.JI. Дозозависимая инактивация мирамистином внеклеточного вируса иммунодефицита человека. Вопр. вирусол. 1998. -№ 3. - С. 122-124.

59. Кривошеин Ю.С. Противомикробные свойства новых ПАВ и обоснование их медицинского применения : автореф. дис. . док. мед. наук / Ю1С. Кривошеин; Киев. - 1985. - 24 с.

60. Кривошеин IOIC. Иммуноадьювантное действие:; синтетических поверхностно-активных веществ / Ю;С. Кривошеин, В.А. Шатров // Иммунология. 1990. - № 2. - С. 38-40;

61. Кудрявцев A.A. Исследование: крови в ветеринарной диагностике / A.A. Кудрявцев// М. Ч. 1. 1952. - 375с.

62. Кузьмин Г.Н. Грипп птиц: эпизоотология, диагностика, меры профилактики / Г.Н. Кузьмин, Т.Е. Соловьева // Вестник Воронежского государственного аграрного университета /ФГ0У ВПО ВГАУ им. К. Д. Глинки. Воронеж. - 2006. - С. 123-131.

63. Кузьмин Г.Н. Применение мирамистина- при энтеробактериозах поросят./ Кузьмин Г.Н., Свистов В.В., Скогорева A.M., Пояркова Т.В. -Монография. Воронеж.- 2006. 126 с.

64. Кузьмин Г.Н. Сальмонеллез у черепах / Кузьмин Г.Н., Скогорева A.M., Попова О.В. // Ветеринария. 2006. - № 3. - С. 58-59.

65. Куляшбекова Ш.К. Действие иммуностимуляторов в составе вакцины против болезни Марека ПЛ. Куляшбекова, А. Пяткина, А Борисов, А. Меныцикова // Птицеводство. 2009. - № 5. - С. 37-38.

66. Кучеренко Ю.А.1990 Клинико-иммунологическое обоснование профилактики и лечения послеродовых воспалительных заболеваний промежности и влагалища./ Ю.А. Кучеренко //Дисс. канд. мед. наук. Киев. 1990.-27с.

67. Лабораторные исследования в ветеринарии / под. ред. В.Я. Антонова, П.Н. Блинова // М. Колос. - 1974. - 320 с.

68. Лагуткин H.A. Грипп А птиц опасный зооноз /H.A. Лагуткин, Д.В. Колбасов // Ветеринария. - 2005. - № 10. - С. 16-18.

69. Ляпохов Г.В. Эффективность использования препаратов пербаксан, пербаксан- арома и бактерицид в птицеводстве. : автореф. дис. . канд. вет. наук / Г.Н. Ляпохов Ставрополь.- 2005. - 25 с.

70. Макаров В.В. Высокопатогенный грипп птиц / В.В. Макаров // Ветеринарный консультант. 2004. - № 1. - С.5-6.

71. Маркова О.С. Исследование концентрирования, разделения и токсичных свойств поверхностно-активных веществ и их метаболитов в воде: автореф. дис. . канд. биол. наук / О.С. Маркова Астраханский Государственный Университет. Астрахань. - 2004. — 15 с.

72. Мартынов Г.Н. Фармако-токсикология дезинфектантов на основе четвертичных аммониевых соединений, и их применение в птицеводстве автореф. дис. . док. вет. наук / Г.Н.Мартынов; Белгор. гос. с.-х. акад. -Казань.- 2002.-36 с.

73. Матиас Фосс Победит ли вакцинация птичий грипп?/ Матиас Фосс // Животноводство России. апрель. - 2004. - С. 22-24.

74. Мезенцев C.B. Грипп птиц: эпизоотология и безопасность продукции / C.B. Мезенцев // Ветеринарный консультант. 2006. - № 20. - С.6.

75. Мельник И.Ю. Антимикробные свойства некоторых поверхностно-активных веществ и антисептическое действие настойки ломадена автореф. дис. . канд. вет. наук / ИДО. Мельник. Воронеж. - 1992. - 20 с.

76. Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий /Ю.Е. Шатохин, И.Н. Никитин, П.А. Чулков, В.Ф. Воскобойник. М: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина.- 1997. 36 с.

77. Мирамистин. Регистр лекарственных средств России / Энциклопедия лекарств. Издание шестое M.: «PJ1C-2000». - 1999. - С. 656.

78. Митюшников В.М. Естественная резистентность сельскохозяйственной птицы / В.М. Миюшников. М.: Россельхозиздат, 1985. -160 с.

79. Непоклонов Е.А. Можно ли победить птичий грипп? / Е. А. Непоклонов // Ветеринарная жизнь. 2006. - № 7-8. — С.- 2-3, 6.

80. Николаенко В. П. Высокоэффективные препараты / В. Николаенко // Птицеводство.- 1997. № 2. - С. 25-26.

81. Николаенко В.П. Токсичность бактерицида и его количественное определение / В.П. Николаенко, И.Н. Щедров // Ветеринария. 2005. - № 4. -С. 38-41.

82. Ниязов Ф.А. Действие иммуностимулятора ковилона на цыплят / Ф.А. Ниязов, Б.Н. Ахмедов, С.А. Ашуров // Ветеринария. 2001. -№ 9. - С. 22-23.

83. Ноздрин Г.А. Иммунотропные препараты и направления их использования в ветеринарии / Г.А. Ноздрин // Новые фармакологические средства в ветеринарии: Мат. 7 межд. межвуз. науч.-практ. конф. СПб., -1995.-С. 51-52.

84. Ныокаслская болезнь и парамиксовирусы (Обзор литературы) /H.A. Лагуткин и др. // Ветеринария.- 1989.- № 9. С. 30-33.

85. Обухов И.Л ПЦР тест-системы для диагностики гриппа птиц / И.Л. Обухов и др. // Ветеринария. 2006. - № 7. - С. 25-30.

86. Онищенко Г.Г Борьба с инфекционными болезнями приоритетная тема председательства Российской Федерации на саммите группы восьми в 2006 г. / Г.Г. Онищенко // ЖМЭИ. - 2006.7. С. 3-7.

87. Осадченко A.A. Применение синтетических дипептидов при вакцинации птиц против ныокаслской и инфекционной бурсальной болезни автореф. дис. . канд. вет. наук / А.А Осадченко ФГУ ВПО ИГСХА -Иваново. 2007. 23 с.

88. Осидзе Д.Ф. Факторы резистентности организма животных/ Осидзе Д.Ф., Простяков А.П.// Ветеринария. 1983. - №3. - С. 32-34.

89. Пат. РФ Способ лечения колибактериоза и сальмонеллеза у поросят / Г.Н. Кузьмин, Т.В. Пояркова, A.M. Скогорева, В.В.Свистов, С.Г. Кузьмина, Л.Г.Ухина.; заявитель ипатентообладатель BFÀV. № 2239425; заявл. опубл., Был. №. - 6 с.

90. Пахмутов В.М. Грипп-птиц, меры защиты и профилактики / В.М. Пахмутов // Ветеринарный консультант. 2006. - № 15. - С. 3-8.

91. Пелипенко Т. В Воронежской области куры гибнут от загадочной болезни / Пелипенко Т. // газета «Моё».- 2007.- 13 ноября.

92. Пелипенко Т. Кур подкосила болезнь Ньюкасла / Пелипенко Т. // газета «Моё».- 2007.- 11 декабря.

93. Перчиков И.В. Применение лигногумата калия в качестве иммуно-модулятора для специфической профилактики болезни Марека у цыплят : дис. . канд. вет. наук : 16.00.03. / И.В. Перчиков. Москва. -2005. - 142 с.

94. ПЗ.Першина С.И. Антивирусная и бактериостатическая активность поверхностно-активных веществ и применение их при респираторных болезнях телят и поросят : автореф. дис. . канд. вет. наук / С.И. Пер-шина ВНИВИПФиТ. Воронеж, 1996. - 29 с.

95. Першин Б. Б. Вакцинация и местный иммунитет / Б.Б. Першин Л.: М., 1980.-232 с.

96. Писько Г.Т. Этоний / Г. Т. Писько // Врачебное дело. 1977. - № 3. -С. 4-9.

97. Повышение эффективности специфической профилактики против гриппа птиц / О.Н. Виткова и др. // Ветеринария. 2007. - № 10. - С. 14-16.

98. Поствакцинальный иммунитет к гриппу птиц у гусей / A.B. Варкен-тин и др. // Ветеринария. 2009. - № 3. - С.25-27.

99. Пояркова Т.В Антимикробная активность^ и лечебная эффективность мирамистина при колибактериозе и*сальмонеллезе поросят. : дис.;. канд.вет. наук : 16.00.03. /.Т.В. Пояркова-Воронеж-2005^-174 е.,

100. Придыбайло Н;Д. Повышение эффективности вакцинации кур против болезни Марека иммуномодулятором тималином / Н.Д. Придыбайло, Р.Н. Коровин / Доклады ВАСХНИЛ; 1991.-№ 2.- С.54-56.

101. Придыбайло Н.Д. Эффективность сочетанного применения вакцины против болезни Марека и иммуномодулятора тималина./ Придыбайло Н.Д., Коровин Р.Н;, Афанасьев Г.Е.// Вест. с.-х. науки. 1991. -№ 7. С. 136-138.

102. Придыбайло Н.Д. Иммунодефицита у сельскохозяйственных животных и птиц, профилактика и лечение их иммуномодуляторами / Лекция '.-Москва. 2008. С-10.

103. Применение иммуномодуляторов продуктивным животным / A.B. Деева и др.}// Ветеринария. 2008. - № 6. - С. 8-12.

104. Разработка вакцины против высокопатогенного вируса гриппа птиц H5N1 / A.C. Донченко и др. // Ветеринария. 2008. - № 2. - С. 23-26.

105. Разработка средств молекулярной диагностики гриппа А / Т.В. Гребенникова и др. // Ветеринария. 2006. -№ 5,- С. 30-33.

106. Ракова Т.Н. Использование адъювантов в системе специфической профилактики болезни Ньюкасла / Т.Н. Ракова, , О.И. Горкавцова // Диагностика и профилактика инфекционных болезней с/х животных. Сборник научных трудов. Воронеж. - 1990. - С. 21-27.

107. Рева E.H. Обеззараживание яиц глубинным методом при респираторном микоплазмозе и сальмонеллезе индеек : автореф. дис. . канд. вет. наук / E.H. Рева Московская Ветеринарная Академия им. К.И. Скрябина. Москва, 1982. - 22 с.

108. Садомов H.A. Использование биологических стимуляторов для повышения продуктивности и естественной резистентности организма птиц / H.A. Садомов; Белорусская государственная с/х академия. — Горки.-2003.-252 с.

109. Свистов В.В. Мирамистин отечественный антисептик широкого спектра действия // Военно-медицинский журнал, 1998. -№ 5. -С.57-59. '

110. Середа А.Д. Иммуностимуляторы. Классификация, характеристика, область применения. /А.Д. Середа, B.C. Кропотов, М.М. Зубаиров// С-х. биология. Сер. Биология животных. - 2001. - № 4. - С. 83-92.

111. Склярова JI.B. Фармако-биологическое изучение новых ПАВ: белкового гидролизата, сульфопона и сульфоуредина: автореф. дис. . канд. биол. наук / JI.B. Склярова Харьковский Медицинский Институт. — Харьков, 1974.-17 с.

112. Смирнов A.M. Грипп птиц. Задачи ветеринарной науки / A.M. Смирнов // Ветеринария. 2003. - № 1. - С. 3-6.

113. Смирнов A.M. Задачи ветеринарной науки и практики в рамках национальной программы защиты населения от пандемии и панзоотии гриппа птиц / A.M. Смирнов // Ветеринарный консультант. 2006. - № 11.-С. 4-7.

114. Соколов В.Д. Иммуностимуляторы в ветеринарии / В.Д. Соколов, Н.Л. Андреева, A.B. Соколов // Ветеринария.- 1992.- № 7-8. С. 49-50.

115. Соломатин М.В Влияние рибава на иммунитет цыплят против болезни Марека / М.В. Соломатин, Н.Т. Татаринцев, М.М. Горячева // Ветеринария.-2006.-№ 11.-С. 15-16.

116. Сосновская Т.А. Фармакологические свойства иммуностимулятора изамбена : автореф. дис. . канд. вет. наук / Т.А. Сосновская Витебская государственная академия ветеринарной медицины. Витебск, 2000. - 24 с.

117. Старов С. Болезнь Ньюкасла: ее формы, проявления и диагностика / С. Старов // Животноводство России. 2002. - № 2. - С. 32-33.

118. Сюрин В.Н. Псевдочума птиц (Ньюкаслская болезнь) / В.Н. Сюрин; М.: 1963.-С.

119. Терюханов А.Б. Антигенная активность вируса болезни Ньюкасла, инактивированного разными средствами / А.Б. Терюханов, C.B. Панкратов, С.А. Емельянова // Российский ветеринарный журнал. 2007. -№4.-С. 40-41

120. Трескин М.С. Влияние тимогена на иммунный ответ при вакцинации против Ньюкаслской болезни : автореф. дис. . канд. вет. наук / М.С. Трескин Ивановская государственный сельскохозяйственная академия. Иваново, 2006. - 23 с.

121. Тихонова З.В. Грипп птиц в Москве: опыт ликвидации эпизоотического очага / З.В. Тихонова // Ветеринария. 2007. - № 8. - С. 12-14.

122. Турицына Е.Г. Патоморфология поствакцинальных осложнений у кур иммунизированных против болезни Ньюкасла : автореф. дис. . канд. вет. наук / Е.Г. Турицына Омский. Государственный Ветеринарный Институт. Омск, 1988. - 18 с.

123. Умитжанов М. Микрофлора дыхательного и пищеварительного трактов у цыплят-бройлеров и пути ее коррекции при колибактериозе : автореф. дис. . канд. вет. наук / М. Умитжанов ВНИИВСГЭ. Москва, 1993.-28 с.

124. Федоров A.A. Влияние катионных, анионных и неионных поверхностно-активных веществ на процессы мочеобразования : автореф. дис. . канд. мед. наук / A.A. Федоров Казанский Государственный Медицинский Институт им. C.B. Курашова. Казань, 1983. - 14 с.

125. Фисинин В.И. Стратегические тенденции развития яичного и мясного птицеводства России / Ветеринарная жизнь. 2008. - № 10. - С. 2-3.

126. Хаустов В.Н. Влияние аскорбиновой кислоты на продуктивность и естественную резистентность уток / В.Н. Хаустов // Ветеринария.2003. № 1. — С. 52-53.

127. Хаустов В.Н. Продуктивность и естественная резистентность утят при включении в рацион витамина К / В.Н. Хаустов // Ветеринария.2004. -№ 1.-С.60-61.

128. Хоботова С.Н. Разработка и исследование дезинфектанта инкубационных яиц : автореф. дис. . канд. вет. наук / С.Н. Хоботова Курская гос. с.-х. акад. . Курск, 2004. - 19 с.

129. Хоргуани Э.Г. Эффективность различных методов вакцинации птиц против ньюкаслской болезни // Ветеринария.- 1999. № 6. С. 32-34.

130. Чекмарев А.Д. Влияние сывороточных антител и антибиотиков на де-контаминацию птиц и1 куриных эмбрионов от возбудителя респираторного микоплазмоза : автореф. дис. . канд. вет. наук / А.Д. Чекмарев* ВИЭВ им. Я. Р. Коваленко. Москва, 1985. - 19 с.

131. Шатров В.А. Влияние мирамистина на фагоцитарную активность уретральных нейтрофильных гранулоцитов / В.А. Шатров, Ю.С. Кри-вошеин, В.В. Коваленко // Лабораторное дело. 1990. - № 4. - С. 55-56.

132. Шатров В.А. Иммуноадъювантные свойства новых антимикробных синтетических поверхностно-активных веществ : автореф. дис. . док. мед. наук / В.А. Шатров Киевский Медицинский Институт им. академика Л. А. Богомольца. Киев, 1992. - 24 с.

133. Эволюция вирусов гриппа птиц H5N1 с 1997 по 2004 г. в Южной и Юго Восточной Азии / A.C. Липатов, Ю.А. Смирнов, Н.В. Каверин, р.Г. Вебстер // Вопросы вирусологии. 2005. - № 4. - С. 11-17.

134. Экология и эволюция вирусов гриппа в России (1979-2002 гг.) / Д.К. Львов и др. // Вопросы вирусологии. 2004. - № 3. - С. 17-24.*

135. Эпизоотическая ситуация в Российской Федерации за 2007 год / И.К. Рождественский и др. // Ветеринарная жизнь. 2008. - № 9. - С. 6-7.

136. Эффективность инактивированной эмульгированной вакцины против гриппа птиц (H5N2) / А.В. Борисов и др. // Ветеринария. 2008. - № 6.-С. 14-17.

137. Яковенко П. П. Фармакология и применение препарата бромацид в ветеринарии: автореф. дис. . канд. вет. наук / П.П. Яковенко Кубанский Государственный Аграрный Институт. Краснодар, 2005. - 23 с.

138. Agarwal V., Mishra В. Recent trends in drug delivery systems: intranasal drug delivery // Indian J. Exp. Biol., 1999. V. 37. N. U P. 6-16.

139. Aldous E. W., Alexander D. J. Technical review: Detection and* differen-tion of Newcastle disease virus (avian paramyxovirus type 1) // Avian Pathol.- 2001.- V. 30, № 2 P. 117-129.

140. Alexander D. J. Newcastle Disease and Other Paramyxovirus infection // Disease of Poultry: 9th edn. Ames, iowa state Univ. Prees. USA, 1991. -P. 496-519.

141. Alexander D. J., Allan W. J. Newcastle disease virus pathotypes // Avian Pathol.- 1974.- V. 3, № 2 P. 269-278.

142. Alexander D. J. Paramyxovirinae (Newcastle Disease and Other Viruses) // Poultry Discasis: 5th edn. 2001. - P. 257-268.

143. Allan W. J., Faragher J.T., Cullen G.A. Immunosuppression by the infectious bursal agent in chickens immunized against Newcastle disease // Vet. Rec. 1972. - V. 90. - P. 511-512.

144. Antigenic and phylogenetic studies on a variant Newcastle disease virus antfusion protein monoclonal antibodies and partialseguencing of the fusion protein gene / M.S. Collins, S. Frauklin, I. Strong et. al. // Avian Pathol.-1998,- V. 27.-P. 90-96.

145. Avian influenza in Italy 1997-2001 / Capua I., -Marangon S.// Avian Pathol.- 2003.- V. 10. P. 281-293.

146. Aviare Influenza in Asien: Eine Ernst zu nehmende Bedrohung// BVET-Magazin. 2005. - N 3. - 3-4.

147. Awan M.A., Otte M. J., James A.D. The epidemiology of Newcastle Disease in rural poultry: a review// Avian Pathol.- 1994.- Vol. 27. P. 405-423.

148. Blalock J.E., Smith E.M. A complete regulatory loop betwven the immune and neuroendocrine systems// Federation Proc., 1985. V. 4. N. 1. Pt. 1. P. I OK- III.

149. Collins M.S., Bashiruddin G. B., Alexander D. J. Deduced amino acidi se-guences at the fusion protein oleavage site of Newcastle disease variation in antigenicity and patogenicity // Arch. Virol. 1993.- V. 128. - P. 363-370:

150. Capua I., Alexander DJ. The challenge of avian influenza to the veterinary community // Avian Pathol:.- 2006.- Vol. 35. P. 189-205.

151. Day-old vaccination with live-in-oil vaccines: Newcastle disease (ND) and infectious bursal disease (iBD) in chicks and ND in turkey poults / I. Sa-mina, J. Khinich, B. Guffer et. al. // Avian Pathol.- 1999.- V. 28. № 1- p. 73-79.

152. Embryo vaccination of turkeys against Newcastle disease infectious with recombinant fowlpox virus constructs containing interferons as adjavants / S. Rantenschlein, J.M. Sharma, B.J. Winslow et. al. // Vaccine.- 2000.- V. 18.- P. 426-433.

153. Faragher J.T., Allan W. J., Wyeth C. J. Immunosuppressive effect of bursal agent on vaccination against Newcastle disease // Vet. Rec. 1974. - V. 95. -P:385-388.

154. Froland S.S., Natvig J.B. Identification of different human lymphocyte populations by surface markers // Transpl. Rev. — 1973.- V.- 16;N 116. P-114-162.

155. Giambrone J J., Eidson C. S., Page R.K. et. al. Effect of infectious bursal agent on the response of chickens to Newcastle disease and Marek"s disease vaccination // Avian Dis. 1976.- V. - 20, № 3 . - P. - 534-544.

156. Generation of recombinant chimeric Newcastle disease virus vaccine that allows serological differentiation between vaccinated and infected animals / B.P. Peeters, O.S. Verstegen i. et. al.// Vaccine.- 2001.- V. 19.- P. 1616-1 1627.

157. Génération of velogenic newcastle disease virus from a nonpathogenic wa-terfowe isolate by passaging in chickens / Yu Shengqing, Norico Kishida, Hiroshi ito et. al. // Virology. 2002'. - V.301. - P. 206-211.

158. Hadden J.W. Immunostimulauts // Immunol. Todey.- 1993.- Vol.14.- P. 275-280.

159. Immunomodulatory effects of indomethacin and prostaglandin E2 on primary and secondary antibody response in growing layer hues / J.W.C. Si-jben, J.W. Schama, M.G.B. Nieuwland, H.K. Parmentier // Poultry Sc. -2000. Vol. 79, № 7. - P. 949 - 955.

160. Jondal M., Aiuti F., Wigner A. Human limhhocyte subpopulation classification according to surfact markers and or functional characteristics //Transpl. Red. 1973. - V. 16, N163. - P. 95-113.

161. Jondal M., Holm G., Wigrell A. Surface markers on human T- and B-limhhocytes J.A. Large population of limhhocytes forming nonimmune rns-setes with sheep red blood cells // Exp. Med. 1972.- Vol.136, N2.- P.207-215.

162. Kobayashi Y., Horimoto T., Kawaoka Y., Alexander D. J, Itakura C. Pathological studies of chickens experimentally infected with two highly pathogenic avian influenza viruses.// Avian Pathol.- 1996.- V. 25 — P. 285304.

163. Mast J., Goddeeris B. M. Development of immunocompetence of broiles chickens // Veter. immunol. immunopathol.- 1999.-Vol. 70, № 3/4.- P.254-256.

164. Microorganisms with may by Presents in the Chickens Eggs // Poultry Dis-easis: 5th edn. -2001. P. 540-541.

165. Nakatani H., Nakamura K., Yamamoto Y., Yamada M. Epidemiology, pathology, and immunohistochemistry of layer hens naturally affected with H5N1 highly pathogenic avian influenza in Japan. // Avian Dis. — 2005. -Vol. 49. — N 3. — P. 436-441.

166. New efficient subunit Newcastle disease virus vaccine / S. Cajavec, D. Nemaznik, S. Cvetnic et al. // Praxis vet. 1994. - V.42. - №3.- P. 143-155.

167. Panda S.K., Rao A.T. Effect of infectious bursal disease virus infection on immunity to ranikheit diseasein chickens // Poultri Adviser. 1993. - V. 26, № 10.-P. 35-38.

168. Pathogenesis of chicken passaged Newcastle disease virusy isolated from chickens and wild and exotic birds / G. D. Commers, D.J. King, D.S. Seal et al. // Avian Dis. - 2003. - Vol. 47. № 2. - P. 319-329.

169. Pathological changes in turkeys experimentally infected with different doses of A/ostrich/Italy/984/2000 H7N1 avian influenza virus // Iranian Journal of Veterinary Research. 2008. - Vol. 9. - No. 4. - Ser. No. 25. -P.330-335.

170. Perdue ML., Swayne De. Public health risk from avian influenza viruses // Avian Dis.- 2005. Vol. 49. - P. - 317-327.

171. Perkins Lei., Swayne De. Pathology of A/Chicken/ Hong Kong/220/97 (H5N1) Avian influenza virus in seven Gallinaceous species. // Vet. Pathol.-2001.-Vol. 38.-P. 149-164.

172. Perkins Lei., Swayne De. Comparative susceptibility of selected avian and mammalian species to a Hong Kong- origin H5N1 Avian Influenza Virus. // Avian Dis. 2003.- Vol. 47. - P. 951-955.

173. Plamadeala S., Blidariu I., Baadiu D. Lasota and LS 79 Newcastle vaccines: Novel data. Note II. Some Lasota and LS 79'vaccine batches potency control upon shelf life termination // Stud. Res. Vet. Med. Pasteur. Inst. -1992.-V. 1, N 1. - P. 51-52.

174. Protective efficacy of a adjuvanted Newcastle disease virus vaccine / Sivanandan V., Halvorson D., Newman J. A et al. // Proc.42th West. Poultri Dis. Conf. Febr. 28, March 1-2, 1993. Sacramento, California, 1993. - P. 56.

175. Reynoeds D.L., Maraga A.D. Protective immunity against Newcastl disease: the roe of cell mediated immunity // Avian Dis. - 2000. - Vol. 44. № l.-P. 144-145.

176. Reynoeds D.L., Maraga A.D. Protective immunity against Newcastl disease: the role of antibodies specific to Newcastle disease virus polypeptides //Avian Dis. 2000. - Vol. 44. № 1.-P. 138-144.

177. Robertson G.M., Egerton J.R. Replication of infectious laryngotracheitis virus in chickens following vaccination // Australian Vet. J. 1981. - V. 57. -P. 119-123.

178. Stone H.D. Newcastle disease oil emulsion vaccines prepared with animal, vegetable and synthetic oils // Avian Dis. 1997. - Vol. 41. № 3. - P. 591597.

179. Teletcov P., Genova K., Djambazova N. Preparation of trivalent inactivate vaccine against Newcastle disease infections bursal disease and infections bronchitis in chickeus // Exp. Pathol. Parasitol. 2000. № 4.- P 31-34.

180. Velhner M., Gagic M., Babic M. Niektore doswiadczenia w stosowaniu inaktywowanych szczepionek olejowych przeciwko chorobie Newcastle // Weterynaria.- 1991.-V. 49., № 203.- P.51-58.

181. Virulence of pigeon-origin Newcastle disease virus isolates for domestic chickens / G.D. Commers, D.J. King, D.S. Seal, C.C. Brown // Avian Dis. -2001. Vol. 45. № 4. - P. 906-921.

182. Virulent Newcastle disease in Australia: Molecular epidemiological analysis of viruses isolated prior to and during the outbreaks of 1998-2000 / A.R. Gould, J.A. Kattenbelt, P. Selleck et al. // Virus Res. 2001.-Vol.77.-P. 117129.

183. Werner G.H., Jolles P. Immunostimulating agents: what next? A review of their presont and potential medical applications // Eur. J. Immunol. 1996.-242.-P. 1-19.

Информация о работе

Прибыткова, Ксения Васильевна
кандидата ветеринарных наук
Воронеж, 2011
ВАК 06.02.02

Диссертация

Совершенствование иммунопрофилактики гриппа и болезни Ньюкасла у птиц с применением инактивированных вакцин в сочетании с мирамистином - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы