Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Шистосоматиды - возбудители церкариозов в урбанизированных экосистемах

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Шистосоматиды - возбудители церкариозов в урбанизированных экосистемах"

На правах рукописи

Воронин Михаил Владимирович

ШИСТОСОМАТИДЫ - ВОЗБУДИТЕЛИ ЦЕРКАРИОЗОВ В УРБАНИЗИРОВАННЫХ ЭКОСИСТЕМАХ (на примере мегаполиса Москвы)

Специальность 03.00.19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2003

Работа выполнена

в Институте Паразитологии РАН (г. Москва)

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор С.А. БЕЭР, доктор медицинских наук, профессор, академик РАО Н.В. ЧЕБЫШЕВ

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Н. Б. Теренина

кандидат биологических наук Л. А. Гиченок

Ведущее учреждение:

Кафедра Зоологии беспозвоночных Биологического факультета Санкт-Петербургского Государственного Университета.

Защита диссертации состоится: 16 сентября 2003 г. в 12:00 на заседании Диссертационного совета Д 002.065.01 при Институте Паразитологии РАН по адресу: 117071, Москва, Ленинский проспект, 33.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института Паразитологии РАН

Автореферат разослан:

Ученый секретарь Диссертационного Совета,

кандидат биологических наук ^ Е. Г. Сергеева

Т¥зоТ~

3

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Церкариозы - паразитарные заболевания, вызываемые личинками (церкариями) трематод семейства Зс^Ьвотайдае, которые во взрослом состоянии паразитируют в кровеносной системе водоплавающих птиц: утиные чайковых. Биохимическое сходство некоторых липид-ных фракций кожи человека и уток, а также наличие у церкарий шисто-соматид эйкосаноидов, облегчающих личинкам проникновение в кожу специфического окончательного хозяина (утки), или неспецифического абортивного хозяина (человека) - позволяют церкариям активно "нападать" на человека при пользовании водой водоёмов (купании, играх в воде, стирке белья, ловле и разведении рыбы и др.), вызывая тяжелые дерматиты. Проникая через кожные покровы, церкарии вызывают их механические (часто множественные) поражения, оказывают токсическое и сенсибилизирующее воздействие на организм продуктами обмена и распада, способствуют заносу вторичной инфекции.

Одними из первых исследований церкариозов на территории бывшего СССР, были работы К. И. Скрябина (1951), Ю. А. Березанцева и Ю. В. Курочкина (1956 «а», «б»), Р. С. Чеботарёва (1957). Ю. В. Ку-рочкина (1958, 1959, 1963), Ю. В. Курочкина и Ю. А. Березанцева (1963, 1964, 1969). Авторами описывался характер заболевания человека, вызываемого церкариями шистосоматид, и приводились некоторые сведения по экспериментальным заражениям животных, особенностям экологии и морфологии трематод и их промежуточных хозяев - лёгочных моллюсков.

В дальнейшем, в работах С. А. Беэра (1992, 1993. 1994. 1996 «а», «б», 1998. 2000,2001); С. А. Беэра и С. М Герман (1993 «а», «б», 1994, 1997 «а», «б»); С. А. Беэра, Т. И. Солонец, и др. (1995 «а», «б») и ряде других, уже приводятся современные данные относительно экологических предпосылок обострения ситуации по церкариозам на некоторых урбанизированных территориях России и Белоруссии,

В последние 20 лет резко обострилась ситуация по церкариозам в мегаполисах Москвы и Санкт-Петербурга. Официальная статистика по церкариозам до сих пор отсутствует, однако по экспертным оценкам (Беэр. 1996) в Москве церкариозом. вызываемым шистосоматвдами р, ТтпсНоЫШаша, ежегодно заражается не менее 2000 человек. В годы с жаркими летними сезонами эта цифра значоте^^^и^аиаь^ ншдш-мер, в 1995 г. только за первую половину июня в пру-

дов (Восточный округ Москвы), церкариозом заразилось (обратились за врачебной помощью) более 500 человек, из них более 300 - детей (Беэр и соавт.,1995: Качанов и соавт., 1995). Интенсивное изучение причин возрастания риска заражения людей церкариями шистосоматид в урбанизированных экосистемах на примере мегаполиса Москвы продолжается в Институте паразитологии РАН, при финансовой поддержке Российского Фонда Фундаментальных Исследований (гранты: 98-04-48079 и 01-0448204).

В то же время, многие аспекты проблемы оставались малоизученными. Из биологических аспектов к ним, прежде всего, относятся:

• эколого-этологические особенности промежуточных хозяев и лар-вальных фаз развития шистосоматид.

• морфологические особенности личинок шистосоматид р. Trichobilharzia (в последнее время, даже при описании новооткрытых видов, зачастую не описывается морфология личинок, в то время как имеющиеся старые описания не всегда пригодны для сравнения)

• установление основных видов этого рода, "ответственных" за распространение церкариозов в мегаполисе Москвы.

• Необходимо было также изучить динамику риска заражения шисто-соматидами промежуточных хозяев - моллюсков, и уточнить (а для многих водоёмов определить впервые) риск попадания церкарий шистосоматид - в человека.

Цепь и задачи исследования

Целью работы явилось восполнение существующих пробелов в изучении "биологической составляющей" проблемы церкариозов, имеющей решающее значение в прогнозировании степени риска заражения людей этим паразитозом в урбанизированных экосистемах России (на примере мегаполиса Москвы).

Для достижения этой цели решались следующие задачи:

1. Изучить экологические условия, способствующие существованию популяций промежуточных хозяев шистосоматид, - лёгочных моллюсков р. Lyrrmaea в различных типах водоёмов мегаполиса Москвы;

2. Изучить особенности морфологии и установить видовую принадлежность церкарий шистосоматид р. Trichobilharzia, распространенных на территории мегаполиса Москвы.

3. Изучить популяционную структуру шистосоматид Trichobilharzia ocellata La Valette, 1855

4. В режиме мониторинга изучить годичную динамику риска заражения шистосоматидами основных видов промежуточных хозяев -моллюсков и оценить риск заражения человека в конкретных водоёмах (и их отдельных зонах) в мегаполисе Москвы;

Научная новизна работы

В результате выполнения работы получен ряд новых научных данных:

• впервые, на основании собственных и литературных данных даётся описание морфологии церкарий шистосоматид р. ТпсИоЫИшта, группы осеПШа, сравнительно, для российских (на материале Москвы и Санкт-Петербурга) и европейских форм;

• уточнена формула выделительной системы церкарий, некоторые особенности хетотаксии и строения глазков;

• уточнены параметры подвидовой географической дифференциации по морфологическим признакам «московской» и «санкт-петербургской» популяций Т. осе1Ша, а также, параметры отличий признаков, характерных для обеих популяций, от таковых у церкарий «среднеевропейских» видов трихобильгарций;

• изучена (в режиме мониторинга) годичная динамика численности популяций основных видов димнеид - промежуточных хозяев шистосоматид и риска их заражения трематодами р. Тпс)юЫ1кап1а,

• определены основные параметры, для расчётов «коридоров сдерживания» риска заражения человека церкариями шистосоматид в водоемах мегаполиса Москвы.

• составлена подробная карта-схема внутренних водоёмов разного типа г. Москвы, классифицированных по степени риска попадания церкарий трихобильгарций в человека:

Практическая значимость работы

В результате проведенных исследований получены новые данные, которые могут быть использованы в личной профилактике церкариозов и при разработке экологически безопасных методов общей профилактики, направленной на сокращение риска заражения церкариозами человека:

- использование составленных карт-схем риска заражения церка-риозом в целом по мегаполису, в отдельных водоемах или их отдельных зонах, само по себе даёт хорошие результаты, "сигнализируя" об опасности заражения.

- одним из эффективных и наиболее простых способов личной профилактики церкариозов. является умение распознавать (по экологическим показателям) участей внутри конкретных водоемов, наиболее опасные с точки зрения "нападения" церкарий шистосоматид

- одним из наиболее безопасных способов общей профилактики церкариозов, может стать контроль численности инвазированных основных специфических окончательных хозяев шистосоматид (при санации уток микродозами высокоэффективных антигельминтиков с пищевыми добавками в местах массовых зимних скоплений птиц), или численности промежуточных хозяев шистосоматид (например, регулируя степень зарастания внутренних водоёмов).

Положения, выносимые на защиту:

1. Морфология церкарий шистосоматид сем Schistosomatidae, р Trichobilharzia, группы ocettata, полученных от инвазированных моллюсков Lymnaea stagnalis из водоёмов мегаполисов Москвы и Санкт-Петербурга.

2. Круг промежуточных хозяев шистосоматид p. Trichobilharzia в мегаполисе Москвы - лёгочных моллюсков.

3. Исследования фаз жизненного цикла (связанных с развитием в промежуточных хозяевах) шистосоматид p. Trichobilharzia, группы ocellata из мегаполиса Москвы с помощью PCR-анализа

4. Эпидемиологические аспекты проблемы церкариозов в урбанизированных экосистемах, на примере мегаполиса Москвы.

Апробация работы

Основные материалы диссертации были доложены и обсуждены на: Всероссийской научной конференции "История развития и современные проблемы гельминтологии в России" (посвященной 275-летию РАН) (Москва, 1999), Конференции паразитологов, посвященной 110-летию открытия проф. К Н. Виноградовым сибирской двуустки (Томск, 2001 ). Конференциях ВИГИС «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (зоонозы)» 2002 и 2003 гг., на XI-ом Национальном Симпозиуме по Паразитологии с Международным Составом Участников в Таргу Мурес (Румыния, 2001) (XI-th National Symposium of Parasitology with International Participations in Romania), а также на Кафедре Биологии и Общей Генетики Московской Медицинской Академии им. И. М. Сеченова.

Публикации:

По материалам диссертации опубликовано/й работ.

Объем и структура работы:

Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из следующих частей: введения, обзора литературы, изложения материалов и методов, глав, посвященных, соответственно, биологии шисто-соматид ("морфология церкарий, промежуточные и окончательные хозяева), популяционному разнообразию (и молекуяярно-генетическим методам исследования) и рискам заражения церкариозами в водоемах Москвы, выводов и списка литературы. Работа проиллюстрирована 30 рисунками и 15 таблицами. Библиография включает в себя 194 источника.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ:

Обзор Литературы

содержит краткое изложение истории изучения исследуемой группы. описание имеющихся на настоящий момент сведений о ее биологии и систематическом положении. Сведения, касающиеся морфологии, по-пуляционного разнообразия возбудителей, а также их экологических особенностей, обуславливающих риск заражения церкариозами, приведены в кратких литературных справках в начале соответствующих глав. Также в состав литературного обзора входит изложение истории исследований церкариозов как медико-экологической проблемы (и истории ее возникновения) и связанной с тгим терминологии, данные по их распространенности в мире и ситуации в мегаполисе Москвы, в пределах которого преимущественно и проводились исследования.

Материалы и методы:

Основным источником материала для нашей работы послужили спонтанно инвазированные лёгочные моллюски из природных и искусственных водоемов, расположенных на территории мегаполиса Москвы. Основными исследуемыми видами промежуточных хозяев явились I .Ма^раНя. Ь. аипсикгпа, Ь. п\а1а. Было собрано также некоторое количество моллюсков других видов, о которых было известно, что они являются промежуточными хозяевами шистосоматвд оцеллятной группы. Сбор моллюсков осуществлялся при помощи модифицированного бен-тосного сачка на металлической раме диаметром 300 мм, с размером

ячеек сетки около 1 мм. Моллюски собирались из прибрежной зоны водоемов, на расстоянии до 3-5 метров от берега, в зонах максимального потенциального риска заражения церкариозами: неглубоких, сильно заросших участках с незначительным течением

Плотность популяции моллюсков в прибрежной полосе водоемов (где и сосредоточена основная часть популяции) определялась путем облова участка определенной площади.

Всего было исследовано 541 экземпляров Ь. вХадпаИъ, 343 Ь. аипси1апа, 1383 Ь. пгаГа Основным источником Ь. stagnalis для морфологических исследований послужила популяция из Алтуфьевских каскадных озер на севере Москвы, близ МКАД («Московская популяция») I. аипси1апа преимущественно отбирались из Путяевских прудов Сокольников, I. оуд/ог - из них же, и из Фермерских прудов на севере Москвы Сбор моллюсков - промежуточных хозяев шистосоматид Санкт-Петербургской популяции осуществлялся из каскадных озёр в Петергофе. в р-не биостанции СпБГУ и водоемах возле поселка Верево. в окрестностях Гатчины. Среди моллюсков из Ст-Петербурга зараженными были нами обнаружены только Ь. stagnalis.

При исследовании пораженности применяли метод прижизненной диагностики, основанный на положительном фототаксисе церка-рий и позволяющий использовать при исследовании живых моллюсков.

Личиночные стадии трематод исследовались на временных и постоянных препаратах, с просмотром как живых, так и фиксированных церкарий. При этом исследованию подвергались, как церкарии, вышедшие из зараженных моллюсков (зрелые), так и выделенные из компрессированных тканей зараженных моллюсков (т. е., фактически, эмбрионы). Церкарии исследовались как неокрашенными (с целью изучения железистого аппарата и выделительной системы), так и окрашенными прижизненно уксуснокислым кармином (для изучения полового зачатка) Для исследования сенсорных папилл использовалось окрашивание церкарий азотистым серебром с одновременной фиксацией Фиксация с целью приготовления постоянных препаратов осуществлялась при помощи формальдегида, а для измерения - в капле воды на стекле.

Церкарии исследовались по следующим группам признаков:

• общая морфологическая характеристика;

• размеры церкарий;

• орган проникновения;

• железы проникновения и их содержимое;

• вариации строения выделительной системы;

• особенности сенсорного аппарата (хетотаксия);

• особенности строения глазков.

Биология церкарий шистосоматид - возбудителей церкариозов в мегаполисе Москвы:

В краткой литературной справке, содержащейся в начале главы, анализируются исторические (принятие многими авторами поспешных выводов Брумпта об идентичности видов Т коюагец>1 и С. осе!Ша) и методологические (сложность сравнения шистосоматид по отдельным признакам, недостаточное внимание, уделявшееся большинством систематиков наиболее часто встречаемой в природе фазе развития шистосоматид - церкариям) причины возникновения путаницы в отношении видов исследуемой группы, а также предлагаются подходы к ее устранению. Отмечается значимость как развития традиционных микроскопических методов исследования, так и появления новых: хетотаксии по Ришар, а также молекулярно-генетических методов Подчеркивается важность комплексного подхода к видовой дифференциации шистосоматид, а также использования эколого-этологических признаков (в частности, характера движения церкарий).

Исследованные нами церкарии имеют характерную форму, с продолговатым телом, утолщенным чуть позади брюшной присоски, имеющей характерное для шистосоматидных церкарий строение и способной выдвигаться и втягиваться обратно в тело (см. рис. 1). Хвост относительно тонкий, с довольно короткими фурками, соединен с телом своеобразным «замком». При возможности парения в толще воды, для изучаемых церкарий была все же более характерной другая «поза подкарау-ливания»: прикрепление при помощи брюшной присоски к стенкам сосуда, подводной растительности, или к пленке поверхностного натяжения воды. Он оснащен сильно развитой мускулатурой. У наблюдавшихся церкарий мышечные волокна лежат под углом к продольной оси хвоста. Паренхима хвоста представлена крупными клетками (каузальными телами) округлой формы. Вдоль боковой поверхности хвоста и фурок лежит складчатая плавниковая мембрана. Фурки заканчиваются капсулами, в которые выходят протоки выделительной системы.

На окрашенных препаратах хорошо видны ганглий, расположенный чуть позади глаз, и половой зачаток, расположенный вентрально, в задней части тела и представляющий собой массу слабидифференциро-ванных клеток, располагающихся вытянутым треугольником. Тегумент

тела и хвоста содержит шипики, переходящие на пробосцисе в своеобразное «кутикулярное вооружение», способствующее проникновению через покровы хозяина.

Передняя часть тела почти целиком занята органом проникновения, состоящим из задней мускулистой части и передней, в юно-чающей резервуар с крупногранулирован-ным секретом. За счет сокращения мышц задней части из органа проникновения может выдвигаться хоботок-пробосцис, несущий на поверхности кутикулярное вооружение и большое число сенсилл, в который частично заходит резервуар с секретом. Примерно на уровне перехода от задней части к передней в орган проникновения заходят протоки желез проникновения, проходят далее по бокам «мешка» с секретом и выходят, на поверхность пробосциса двумя группами.

Чуть дальше середины тела, между двумя передними парами желез проникновения расположена брюшная присоска - ацетабулюм. Она имеет характерное для шистосоматид строение, то есть располагается в специальном «кармане», из которого может выдвигаться и в который

Рис. 1. Общий вид исследованных церкарий. а) общий вид церкарии сбоку; б) вид тела сверху (протоки желез слева не показаны); в) -выделительная система.

втягивается посредс гвом сокращения мышц, соединяющих ее основание с дорсальной стороной церкарии Поверхность присоски гакже снабжена кутикулярным вооружением и несет своеобразно расположенные сенсиллы. Сенсиллы расположены и на «кармане» присоски, причем места их расположение там и там — постоянны.

Большую часть объема задней части тела занимают 5 пар желез проникновения. Практически всегда 2 передние пары отличаются от задних по характеру секрета (как правило, передние пары желез заполнены более крупногранулированным секретом) Передняя пара часто (особенно у церкарий из Санкт-Петербургской популяции) имеет складчатое строение, из-за чего количество желез проникновения может быть ошибочно охарактеризовано как «6 пар» От желез проникновения к головному органу ведут протоки, причем протоки двух передних пар желез у зрелых церкарий наблюдаются с трудом вследствие меньшей толщины Эти протоки, по-видимому, не связаны с центральным резервуаром органа проникновения.

Кроме желез проникновения как таковых, у церкарий, полученных из тканей гепатопанкреаса зараженных моллюсков, обнаружены многочисленные мелкие одноклеточные железы с протоками, направленными к переднему концу тела. У зрелых церкарий таких желез не наблюдалось.

В строении головной части: церкарий обнаружены отличия между представителями популяций Москвы и Санкт-Петербурга, выражающиеся в частности, в характерном расположении протоков желез проникновения, видимых «на изломе».

В строении желез проникновения выделены 3 морфологические вариации, характерные для церкарий из московской популяции, и одна, характерная для церкарий из санкт-петербургской популяции. Это:

- вариация с почти неразличимыми передними и задними железами проникновения, заполненными крупногранулированным секретом и образующими своеобразный резервуар;

- вариация с тонкозернистым, прозрачным стеклянистым секретом;

- промежуточная вариация с крупногранулированным секретом передних пар желез и тонкогранулированным - задних пар. Наблюдавшиеся нами в 1999 г «осенние» церкарии из московской популяции принадлежали ко 2-ой, «промежуточной» вариации, как и церкарии из петербургской популяции.

Средние размеры исследовавшихся церкарий составляли: длина тела- 340 мкм, ширина в передней части тела - 62, на уровне присоски -

90 мкм, длина стебля хвоста - 470 мкм, максимальная толщина стебля хвоста (у основания) - 65 мкм, размах фурок - 350 мкм, длина органа проникновения с вытянутым пробосцисом достигает - 120 мкм; длина брюшной присоски в вытянутом состоянии - 60-65 мкм.

Эти размеры наиболее близки к приведенным автором для С. рагосе1Ша - предположительно синонима Т. ^ИоН. Фактически, основным отличием является длина фурок. Однако при этом данные, приведенные для Т. Колларовой и Гораком, существенно от них отличаются.

Выделительная система относится к типу "Ме8о.^ота", т.е. главные собирательные каналы не заходят вперед далее уровня брюшной присоски. Мочевой пузырь тонкостенный, образуется в онтогенезе в результате слияния дистальной части первичных экскреторных каналов. У представителей обеих популяций отмечены вариации в строении выделительной системы, наиболее отчетливо выраженные в постацетабуляр-ной части тела (передний и хвостовой участки весьма консервативны) Здесь нарвду с вариациями в расположении петель, наблюдались вариации в количестве и расположении пламевидных клеток. При этом для московских церкарий более характерна редукция одной из клеток (№2

б Рис. 2. Вариации строения выделительной системы: а) Санкт-Петербург; б) Москва.

а

Выделены варьирующие эле-

менты; 1-4 - условные обо-

значения пламевидных клеток

постацетабулярного отдела.

согласно обозначению на рис. 2). в то время как наличие дополнительной 4-й мерцательной клетки в задней части тела (и связанный с этим «горб» на спинной стороне церкарии). характерны исключительно для Санкт-Петербургской популяции.

Характерный для петербургской популяции вариант появления 4-й (по расположению - считая с хвоста) гогамевидной клетки, всегда впадающей в собирательный проток совместно с 3-й, а нередко замещающей ее, заставляет предположить, что эти клетки образуют отдельную группу, из которой у большинства церкарий присутствует только клетка 3. Встречающиеся как в петербургской, так и, чаще, в московской популяции варианты выпадения 2-й клетки дают основания для предположения о том, что 1-я и 2-я клетки также образуют отдельную группу. Таким образом, несмотря на то, что у многих церкарий 1-я, 2-я и 3-я клетки постацетабулярного участка впадают в собирательный канал в одной точке, мы можем сделать вывод о том, что фактически они представляют собой две группы, и формула пламевидных клеток, характерная для данного вида, будет выглядеть следующим образом:

2 [<2+1)+(1+2)+11,

без учета кластеров ресничек в петлях каналов (которые все же не представляют собой терминальных пламевидных клеток).

Строение глаз у церкарий из московской и петербургской популяций достаточно четко различимо: для церкарий из московской популяции в целом характерна более глубокая ямка с более толстым светопреломляющим слоем, отчего глаз на препарате часто приобретает форму, близкую к полумесяцу.

Что касается различной толщины протоков желез проникновения, то, на основании как наших собственных наблюдений, так и литературных источников (БэшИгш, 1910), мы можем сделать вывод, что она не случайна, и, вероятно, связана с неодновременным задействованием 2-х типов секрета, выделяемых передними и задними парами желез при внедрении церкарии сквозь покровы основного хозяина. Эти протоки, по-видимому, не связаны с центральным резервуаром органа проникновения, заполнение которой, вероятно, происходит в период эмбрионального развития церкарий (возможно, в этом участвуют наблюдаемые у незрелых церкарий многочисленные мелкие железы, отмеченные еще В. Нейгаузом). Другой возможный вариант - заполнение центрального резервуара за счет деятельности задних пар желез проникновения, которые, освободившись от секрета, приобретают прозрачность.

Расположение сенсилл, являясь достаточно изменчивым признаком, требует дальнейших исследований для выявления наиболее закономерных вариаций. Тем не менее, уже сейчас мы можем сказать, что наряду с весьма изменчивыми зонами расположения сенсилл, включающими пробосцис головного органа, имеются и весьма консервативные, а именно брюшная присоска и хвост. В этих двух областях различия между исследуемыми популяциями отсутствуют. Более того, имеющиеся сведения о расположении сенсилл в этих областях у церкарий среднеевропейских популяций также соответствуют полученной для российских популяций картине. Общая схема расположения сенсилл, полученная преимущественно на материале церкарий из московской популяции, приведена на рисунке 3 (см. также табл. 1).

Таблица 1. Хетотаксия церкарий группы осе!Ша из популяций Москвы и Санкт-Петербурга

Тело

Дорсальные Латеральные папиллы Вентральные

папиллы папиллы

ICI 3(?> СI ICI

1(?)CII 3CII 2 СII

1С1П 3CIII ОС III

ОС IV 1С IV 1С IV

2 AI 1 AI 2 AI

0 АН 1 AII 1 АН

1 АIII 1 А1П 1 А1П

1 MI 2 MI 1 MI

1 PI 1 PI 2 PI

ОРН 1 PII OPII

Ацетабулюм

5Б1 2 SII

Хвост

4UD 6UV 1 FV

СП

сш

С IV А1

ли

' АШ

РП РШ

// х\

// \ \ \ \

// // \\ \\

\\

/ \

Рис. 3. Хетотаксия церкарий. А - сенсиллы брюшной присоски, й, V, I - сенсиллы на спинной, брюшной и латеральной поверхностях тела. Обозначение зон общелриня-

Ч тое (см. Главу 3). \

При сравнении расположения сенсилл у исследованных нами церкарий с церкариями из средне- и западноевропейских популяций (табл. 2) мы не можем не отметить наличие довольно значительных различий. Они соответствуют, или даже превышают, таковые для разных выделяемых видов церкарий Европы. По количеству сенсилл в некоторых зонах (А I V, М I Ь) изучаемые церкарии стоят ближе к новоописанной Т. ге%епИ, хотя и отличаются от нее в других аспектах (к сожалению, невозможность в данный момент прямого изучения локализации марит в

окончательном хозяине не дает нам оснований для каких-либо утверждений о необходимости более внимательного сравнения между ними).

Табл. 2. Сравнительные данные по хетотамсни

церкарий группы ocellata _ из различных популяций_

Зона T. ocellata T. cf. T. szidati T. regenti Наши

Richard ocellata Kolarova, Horak, дан-

(1971) Eklu-Natey Horak Kolarova, ные

et al. (1985) (1996) Dvorak (1998)

C1UD 2 2 2 2 1

С IIIL 2 3 3 3 3

AID 1 1 1 1 2

A IV 1 1 1 2 2(?)

MIL 0 1 0 1 2

PIL 1 0 1 I 1

PIIL 1 1 1 0 1

SI 3 5 5 (?) 5

FV 1 2 2 2 1(7)

Таким образом, наряду с подтверждением нашей гипотезы о высокой консервативности расположения сенсилл на некоторых участках поверхности тела церкарий p. Trichob ilharzia, выявляется также и существенное отличие церкарий из российских популяций от центральноевро-пейских. Хотя недостаточность имеющихся данных по центральноевро-пейским формам затрудняет сравнение, тем не менее, наряду с морфологическими различиями, указанными выше, приведенные оишчия в плане хетотаксии позволяют с уверенностью предположить, что изучаемые нами церкарии из российских популяций принадлежат, как минимум, к значительно отличающейся географической расе T. cf. ocellata, а, скорее всего - к виду рода Tnchobilharzia, отличающемуся от известных для Западной и Центральной Европы.

В качестве промежуточных хозяев T. ocellata в средней полосе России литературные источники указывают разные виды моллюсков, отчасти в связи с неточной диагностикой самого паразита. Тем не менее, согласно большинству источников, в основном эту роль выполняют моллюски рода Lymmea: L. stagnalis, L. ovata Drap., L. auricularia L., L.

psilia psilia Bourg., L balthica, L fragilis, L. palustris (рис. 20); относительно редко: L intermedia Lam., L monnardi, L. fontinalis Stud., L. atra Основное значение (с учётом распространенности, плотности популяций, общей численности в водоемах разных типов, инвазированности возбудителями тистосоматид) - имеют первые 4 вида В ходе нашей работы наиболее высокая инвазированность была выявлена у L. stagnalis (до 7%), затем у L. ovata (до 6%) и L. auricularia (3-4%).

Наиболее типичным окончательным хозяином шистосоматид оцеллятной группы является кряква Anas platyrhynchus. Ее распространение в регионе имеет ряд особенностей, связанных с приуроченностью зимовок преимущественно к крупным городам

Популяционное разнообразие Trichobilharzia ocellata:

Глава посвящена преимущественно использованию молекулярно-генетических методов (в частности, ПЦР-анализа) для изучения изменчивости шистосоматид. Приводятся основания гипотезы о наличии у изучаемых форм сложной популяционной структуры (наличие в жизненном цикле двух хозяев с разной степенью подвижности, своеобразие популяционной структуры, по крайней мере, одного из хозяев). В главе содержится краткая информационная и методическая справка относительно применения ПЦР при изучении изменчивости трематод.

С помощью PCR-анализа с универсальными праймерами (разновидность метода RAPD-PCR. разработанная С. А. Булатом) исследовались фазы жизненного цикла шистосоматид, связанные с развитием в промежуточных хозяевах - легочных моллюсках (спороцисты, церка-рии) Trichobilharzia, группы ocellata из мегаполиса Москвы. Для этого были исследованы моллюски р. Lyrrmaea из 4-х условных групп водоемов: "северной" (Алтуфьевские пруды), "северо-восточной" (Путяев-ские пруды Сокольников), "восточной" (Терлецкие и Лебедянские пруды), "южной" (Битцевские пруды). В дальнейшем анализе фигурировали церкарии Т. ocellata, полученные от 4 инвазированных L. stagnalis, 4 - L. auricularia, б - L. ovata, 4-1.. psilia psilia.

Каждая проба, подготовленная для исследованная методом PCR, содержала не менее 1000 (в большинстве проб - существенно больше) церкарий Т. ocellata. Такие пробы были получены от моллюсков из каждой условной группы водоемов.

Для амплификации использовалась 7а#-полимераза, а в качестве праймера - хорошо зарекомендовавший себя в предшествовавших исследованиях (Беэр, Булат. 1998) фрагмент АА2М2:

5' — GAGCGACCCAGAGCGG — 3'

В результате были получены PCR-паттерны. сходные с полученными ранее (Беэр, Булат, 1998). При этом отмечалась довольно высокая степень повторяемости результатов для материала, собранного в разные годы результаты повторных PCR-анализов церкарий трихобильгарций из моллюсков, собранных в тех же водоёмах, что и в 1996-1998 гг. (см. Беэр, Булат, 1998), дали сходные результаты (картины паттернов в быстро и медленно мигрирующих фракциях различались несущественно). Наблюдалось также довольно высокое сходство между генетическим материалом, полученным из церкарий и материнских спороцист.

В то же время, церкарии Т. ocellata полученные от ииБазированных моллюсков р. Lyrtmaea (L. stagnalis, L. auricularia, L. ovataj из водоемов. отстоящих друг от друга на разное расстояние 10-40 км, различаются по PCR- паттернам.

По различиям в геномной ДНК, исследуемой фазы развития Т. ocellata, можно выделить три территориальных группы внутривидовой изменчивости: 1 - Терлецкие и Битцевские водоемы; 2 - Пугаевские каскадные сообщающиеся пруды Сокольников; 3 - близко расположенные Алтуфьевские пруды.

Терлецкие и Битцевские водоемы отстоят друг от друга на расстояние около 22 км. однако, ранее было установлено (Авилова. Корбут, Фокин, 1994), что один из миграционных потоков Московской городской популяции кряквы - проходит из Перово (система Терлецких прудов) в Юго-Восточную часть Москвы (Борисовские и Царицынские пруды, расположенные всего в 3-4 км от Битцевского лесопарка).

Таким образом, наблюдаемое сходство церкарий Т. ocellata "тер-лецко-битцевской" группы и ее отличия по профилям амилифицирован-ной в УП-ПЦР геномной ДНК церкарий паразитов от двух других групп: "путяевской" и "алтуфьевской", может свидетельствовать, с одной стороны, о генетическом сходстве шистосоматид, паразитирующих на стадии мариты в одной "городской, замкнутой, развивающейся и существующей по типу островной" (цит по Авиловой, Корбут, Фокину, 1994. с. 61) популяции кряквы, а с другой стороны, о различиях паразитов из разных субпопуляций специфических окончательных и промежуточных хозяев. Полученные результаты анализируются с точки зрения истории развития изучаемых популяций

Проведены также исследования методом RAPD-PCR с использованием более коротких олигонуклеогидов, также подтвердившие наличие значительной изменчивости и указавшие на необычайно высокую изменчивость Т. ocellata (свыше 50°о полиморфных локусов).

Риск заражения людей церкариозами в водоёмах разного типа мегаполиса Москвы:

Материал, изложенный в этой главе, имеет, прежде всего, прикладное значение - изложение принципов профилактики церкариозов. Здесь изложены причинно-следственные связи, определяющие изменения церкариозной обстановки в мегаполисах и превращение церкариозов из «редких» в «проблемные» заболевания. Это, прежде всего (Беэр. 2000):

1. ослабление санитарного контроля за внутренними городскими водоемами, их загрязнение бытовыми и пищевыми отходами и зарастание водной растительностью, а, как следствие, значительное увеличение в их биоценозах численности легочных моллюсков промежуточных хозяев шисгосоматид.

2. резкое увеличение численности специфических окончательных хозяев паразитов - уток (прежде всего кряквы Anas platyrhynchus), а среди них и инвазированных птиц. Подавление их миграционных способностей в городских популяциях, вследствие "предоставления им" на местах зимовок незамерзающих водоёмов и обильной кормовой базы по мнению орнитологов (Авилова, Корбут, Фокин, 1994 и др.) даже привело к формированию городских популяций кряквы.

3. практически бесконтрольное использование населением в тёплое время года в рекреационных целях внутренних городских водоёмов, практически всех типов (озер, проточных и стоячих прудов, участков малых рек. отстойников и др.) и массовый контакт людей при купании с церкариями шистосоматид в "паразитологически опасных зонах".

4. доказано, что церкарии шистосоматид (например, р. Trichobilharzia) продуцируют те же эйкосаноиды (простогландины. лей-котриены), что и Schistosoma mansoni (Fusco et ai.. 1988; Nevhutalu et al., 1990). Стимуляторами для прикрепления церкарий к коже уток являются водорастворимые фракции липидов кожи — холестерол и церамиды, присутствующие и в жирах поверхности кожи человека. В силу некоторых поведенческих и указанных биохимических особенностей способность церкарий к опознанию своей «мишени» дает сбои. Следует учесть, что "человеческая мишень" является по площади гораздо большей и,

следовательно, более предпочтительной (с точки зрения церкарий) по сравнению с утиной. Часто (особенно у детей) заболевание отягощается легочным синдромом, при вероятном попадании церкарий в кровяное русло.

Выстраиваясь в общую цепь последовательно и параллельно протекающих событий, эта основные группы факторов приводят в конечном итоге к обострению церкариозной обстановки.

Рассматриваются также зоны потенциального риска заражения церкариозами, его сезонные изменения и группы риска. Описаны методы исследования водоемов на предмет выявления риска заражения церкариозами. Указываются параметры, на основе которых составляется экспертное заключение. Приведены примеры прогнозирования церкариозной обстановки в от дельных водоемах и их комплексах г. Москвы.

ВЫВОДЫ:

1. Проведены исследования морфологии, популяционной изменчивости, экологических особенностей церкарий трематод сем. БсЫйово-таЬс1ае, р. Тпс]юЫ\Ьаг2'ш в мегаполисе Москвы и, сравнительно, в мегаполисе Санкт-Петербурга. Установлен круг их промежуточных хозяев - лёгочных моллюсков. Исследованы некоторые эпидемиологические аспекты проблемы церкариозов, в урбанизированных экосистемах, на примере мегаполиса Москвы, в частности, риск попадания церкарий шистосоматид в человека в водоёмах разного типа и различных их зонах.

2. На основании анализа собственных материалов и литературных данных даётся описание морфологии церкарий шистосоматид р. ТпсЬоЫ1Нап.га, группы осе11а(а, полученных от инвазированных моллюсков Ьутпаеа зк^паИа из водоёмов мегаполисов Москвы и Санкт-Петербурга.

3. Выделительная система церкарий - неоднородна по степени изменчивости. Наряд> с консервативными участками - передним и хвостовым. имеегся постацетабулярный участок, характеризующийся довольно высокой степенью изменчивости Уточненная формула выделительной системы церкарий шистосоматид р. ТпсЪоЫПюкт имеет следующий вид:

2 [(2+1)+(1+2)+1] (без учета кластеров ресничек в каналах).

4. Изменчивость в расположении сенсилл на теле церкарий неодинакова на разных участках его поверхности. Районом с наибольшей измен-

чивостью по этому признаку является пробосцис головного органа, наиболее консервативными - брюшная присоска и хвост

5. Морфология и хетотаксия хвостового отдела, как правило, характеризуется высокой степенью стабильности и возможно, является родос-пецифичной.

6. "Московская" и "петербургская" группы церкарий оцеллятного типа (Т. осе1Ша) принадлежат к разным географическим изолятам, а возможно имеют и различия более высокого ранга Имеются признаки, характерные для церкарий из обеих популяций, позволяющие отличать их от церкарий "среднеевропейских" видов трихобильгарций (Т. жШаЛ, Т. ге%епИ). Такими признаками являются: -относительные размеры тела церкарии; -некоторые детали и вариации строения выделительной системы; -хетотаксия.

7. С помощью РСЯ-анализа исследованы фазы (связанные с развитием в промежуточных хозяевах) жизненного цикла шистосоматид ТпсИоЬИЪата, группы осе!Ша из мегаполиса Москвы Установлена высокая степень повторяемости результатов (картины паттернов в быстро и медленно мигрирующих фракциях различались несущественно). Наблюдалось высокое сходство между генетическим материалом, полученным из церкарий и материнских спороцист. Выявлено заметное совпадение некоторых полос в РСИ-паттернах между паразитами и тканями моллюска хозяина. Совпадение имело место, как для ДНК, полученной из материнских спороцист, так и, отчасти, для ДНК, полученной из церкарий. Результаты РСЯ-анализа. могут свидетельствовать о проявлением конвергентной эволюции паразита и хозяина, а также о соответствии исследованных фрагментов, генам, связанным с иммунным ответом моллюска.

8. Основными ("несущими основной поток инвазии") промежуточными хозяевами шистосоматид р. ТпсИоЫ1Иагг1а, в мегаполисе Москвы, являются моллюски р. Ьутпаесг Ь .^а^аИх, Ь. сп'Ша, Ь. агапси1апа, £ рххЫа ршИа. Численность их популяций колеблется от 0,1-1 до 200300 экз.'ч2, а инвазированностъ ларвальными формами Т. осеПсЛа -достигает 2%.

9. На основании результатов 3-х лешего мониторинга, выявлен ряд водоёмов на территории г. Москвы (а в них — ряд зон) с высоким риском заражения людей церкариозом. Показана необходимость проведения ежегодного обследования конкретных водоёмов с целью уточнения риска заражения церкариозом человека. Это следует из ежегодно наблюдающихся изменений ряда показателей (ввдового соста-

ва промежуточных хозяев, численности их популяций; численности специфических окончательных хозяев шистосоматид — кряквы Anas platyrhynchus, вмешательства природоохранных организаций в очистку водоёмов и др.)

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ: „

резулб/пать/ i/ccy/e^qSa^i/O я&т-хэ/за. -

1. использовать в качестве учебных материалов в институтах медико-биологического профиля и на курсах повышения квалификации, при подготовке работников медицинской и санитарной служб.

2. Использовать в работе Московского Городского, а также, пре~ фектурных и окружных Центров Госсанэпиднадзора г Москвы результаты исследований по выявлению риска заражения человека церкарио-зами в водоёмах разного типа г. Москвы.

3. Провести (биологами паразитологических отделений региональных Центров Мосгорсанзпиднадзора, совместно с ЙНПА РАН) серию дополнительных исследований с целью установления динамики изменения степени риска заражения человека церкариозом во внутренних водоёмах (прежде всего — имеющих рекреационное значение) во всех округах г. Москвы.

4. Провести необходимые мероприятия по благоустройству городских водоёмов (прежде всего — имеющих рекреационное значение), направленные на общую профилактику церкариозов (предотвращение разрушения и заболачивания берегов водоемов; бетонирование береговой линии; очистка от бытовых и хозяйственных отходов и водной растительности; оснащение водоемов щитами - плакатами, запрещающими купание и подкармливание уток в прибрежной зоне).

5. провести в Московском Городском и во всех окружных Центрах Госсанэпиднадзора серию лекций и практических занятий с сотрудниками паразитологических отделов по проблеме церкариоза.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Беэр С. А, Герман С. М. Зазорнова О. П., Воронин М. В. Результаты мониторинга риска заражения человека церкариозами в мегаполисе Москвы 11 Мат Всероссийской научн конф. "История развития и современные проблемы гельминтологии в России" (посвященной 275-летию РАН), М.. ИНПАРАН. 1999 С. 8.

2. Воронин М В.. Беэр С А., Авилова К. В Экологические предпосылки "нормализации" паразитологической ситуации в отношении цер-

кариозов человека в мегаполисе Москвы 11 Мат. Всероссийск. научн. конф. "История развития и современные проблемы гельминтологии в России" (посвященной 275-летию РАН), М.. ИНПА РАН. 1999. С. 11

3. С. А Беэр. С. М Герман, М. В Воронин Церкариозы - медико-экологическая проблема мегаполисов России. Некоторые итоги мониторинга. <" Материалы конференции паразитологов, посвященной 110- летаю открытия проф. К. Н. Виноградовым сибирской двуустки. Томск, 2001

4. Voronin М. V., Dobrovolskij A A., Be'er S. A On Clarification of Flame Cell Formula of Т. ocellata Group Cercariae From Megalopolises of Russia. // Journal of Romanian Parasitology 2001, Vol. XI, №2.

5. Беэр С. А., Авилова К. В., Воронин М. В., Герман С. М. Проблема церкариозов в урбанизированных экосистемах // Теоретические и прикладные проблемы паразитологии. Труды Института Паразитологии РАН, т. 43. М: Наука, 2002, с. 47-60.

6. Воронин М В., Беэр С А Особенности морфологии шистосомагид-ных церкарий группы Trichobilharzia cf. ocellata из популяций мегаполисов Москвы и Санк!-Петербурга " Паразитология 2002, т. 36, №1. с. 60-70.

7. Воронин М. В., Беэр С. А., Добровольский А. А. Шистосоматидные церкарии группы Trichobilharzia cf. ocellata из популяций мегаполисов Москвы и Санкт-Петербурга '! Теоретические и прикладные проблемы паразитологии. Труды Института Паразитологии РАН. т. 43 М.: Наука, 2002, с. 61-75.

8. Воронин М. В. Молекулярно-генетические исследования фаз жизненного цикла шистосоматид группы Trichobilharzia ocellata. !' Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (зоонозы). Выпуск 3. М.: Наука, 2002. с. 82-83

9. Беэр С.А, Воронин М.В., Хрисанфова Г Г., Семенова С К. Молекулярно-генетические исследования церкарий трематод Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями (зоонозы) Посвящ 125-летию со дня рождения К И Скрябина, в. 4, М.: Наука, 2003, с. 85-87.

Seinyenova S К. Chmanphova GG, Fibppova ЕК, Vororan MV. Be'er S A Analysis of '''ercarije RAPT) Variability and Geruht,

DiveiMty of Bird Schistosome Trichobilharzia ocellata H Helxnilltlb, Helmmthoses and Environment. Ninth International Helmmthological Symposium Programme and Abstucts J Iigh Tatrat., Staia t,esna, 2003

Подписано в печать 01.07.03. Заказ №81 ТиражНОэкз. ООО "Фирма Печатный двор"

РНБ Русский фонд

2006-4 37301

v\ ч

Чдд

\ г

? 3 f-.

/

9 Г ?nf)3

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Воронин, Михаил Владимирович

1. Введение. Актуальность проблемы, степень изученности, теоретическое и прикладное значение

2. Церкариозы как медико-экологическая проблема (обзор литературы)

2.1. Семейство Schistosomatidae Looss, 1899 - история изучения

2.2. Семейство Schistosomatidae - биология, систематическое положение

2.2.1. Диагноз группы ввдов

2.2.2. Жизненный цикл

2.3. Исследования церкариозов. Уточнение терминологии.

2.4. Распространение церкариозов в мире

2.5. Церкариозы - медико-экологическая проблема крупных городов России.

2.5.1. Ситуация по церкариозам в мегаполисе Москвы.

2.5.1.1. Городская популяция кряквы

2.5.1.2. Современная ситуация

3. Материалы и методы

3.1. Принципы и места сбора промежуточных хозяев шистосома-тид; объём собранного материала.

3.2. Методы исследований инвазированности промежуточных хозяев.

3.3. Морфологические исследования. 56 3.3.1. Хетотаксия по Ришар.

3.3.1.1. Изучение хетотаксии церкарий

3.4. Исследования окончательных хозяев.

4. Биология церкарий шистосоматид - возбудителей церкариозов в мегаполисе Москвы

4.1. Таксономический статус, особенности морфологии церкарий p. Trichobilharzia Skijabin et Zakharow, 1920 (Scliistosomatidae, Trematoda)

4.1.1. История исследований.

4.1.2. Значимость признаков.

4.2. Общая морфология церкарий шистосоматид р. Trichobilharzia, характерная для московской и санкт-петербургской популяций.

4.2.1. Расположение сенсилл.

4.3. Общий характер распространения основных ("несущих основной поток инвазии") промежуточных хозяев шистосоматид рода Trichobilharzia - легочных моллюсков рода Lymnaea (Lamarck, 1799) в мегаполисе Москвы.

4.4. Общий характер распространения основного окончательного хозяина шистосоматид -Anasplatyrhynchus Lamark, 1799.

5. Популяционное разнообразие Trichobilharzia ocellata

5.1. Проблема популяционного разнообразия Т. ocellata в мегаполисе Москвы

5.2. Краткая информационная и методическая справка.

5.3. Оценка субпопуляционных группировок Т. ocellata г. Москвы молекулярно-генетическими методами

5.3.1. ПЦР-анализ с универсальными праймерами.

5.3.2. Анализ единичных церкарий методом RAPD-PCR

6. Риск заражения людей церкариозами в водоемах разного типа мегаполиса Москвы

6.1. Экологические и поведенческие особенности моллюсков и церкарий шистосоматид, имеющие значение для прогнозирования риска заражения людей церкариозами.

6.1.1. Причинно-следственные связи, определяющие изменения церкариозной обстановки в мегаполисах.

6.1.2. Зоны риска, контингенты риска, сезон риска.

6.1.3. Необходимые для практики сведения о биологии возбудителей церкариозов

6.1.4. Методы исследований инвазированности моллюсков

6.2. Зоны различного риска заражения церкариозами в водоемах разного типа (естественных и искусственных; стоячих и проточных; изолированных и сообщающихся; подвергавшихся и не подвергавшихся очистке; имеющих и не имеющих рекреационного значение)

6.2.1. Разработка экспертного заключения

6.3. Примеры прогнозирования изменений церкариозной обстановки в отдельных водоемах и их комплексах мегаполиса Москвы.

6.3.1. Комплекс "Терлецко-Лебедянских" водоемов.

6.3.2. Комплекс "Путяевских" водоемов.

6.3.3. Комплекс водоёмов вокруг Олимпийской деревни.

6.3.4. Калитниковский пруд.

6.4. Основные результаты паразитологического мониторинга в отношении церкариозов человека и некоторые прогнозы.

7. Выводы.

7.1. Практические предложения

Введение Диссертация по биологии, на тему "Шистосоматиды - возбудители церкариозов в урбанизированных экосистемах"

Глава 1. Введение. Актуальность проблемы, степень изученности, теоретическое и прикладное значение.

Церкариозы - паразитарные заболевания, вызываемые личинками (церкариями) трематод семейства Schistosomatidae, которые во взрослом состоянии паразитируют в кровеносной системе водоплавающих птиц: утиных, чайковых. Биохимическое сходство некоторых липидных фракций кожи человека и уток, а также наличие у церкарий шистосоматид эйкосаноидов, облегчающих личинкам проникновение в кожу специфического окончательного хозяина (птицы), или неспецифического абортивного хозяина (человека) -позволяют церкариям активно "нападать" на человека при пользовании водой водоёмов (купании, играх в воде, стирке белья, ловле и разведении рыбы и др.), вызывая тяжелые поражения кожи (дерматиты), аллергические реакции, а в некоторых случаях (в основном, у детей) и поражения внутренних органов (Березанцев, Курочкин, 1966, Беэр, 1996 «а»). Проникая через кожные покровы, церкарии вызывают их механические (часто множественные) поражения, оказывают токсическое и сенсибилизирующее воздействие на организм продуктами обмена и распада, способствуют заносу вторичной инфекции.

Впервые изучением этих паразитарных заболеваний занялся Cort (1928) в США, в районе Великих озер. Позднее стало ясно, что они встречаются в обоих полушариях, в самых разных климатических поясах (см. обзор Cort, 1950). На территории бывшего СССР первым сообщением о церкариальном поражении кожи людей была работа Р.С. Чеботарёва (1957).

Затем, в работах Ю.А. Березанцева и Ю.В. Курочкина (1956 «а», «б»), Ю.В. Курочкина (1958, 1959, 1963), Ю.В. Курочкина и Ю.А. Березанцева (1960, 1964, 1969), авторами описывался характер заболевания человека, вызываемого церкариями шистосоматид и приводились некоторые сведения по экспериментальным заражениям животных, особенностям экологии и морфологии трематод и их промежуточных хозяев - лёгочных моллюсков.

Тем не менее, на период середины 20го века география церкариозов в мире оставалась слабоизученной. Подробнее других регионов в отношении церкариозов в СССР была изучена дельта Волги (Березанцев, Курочкин, 1968). В тот же период регистрировались «чесотка ловцов устриц» (Веагир, 1955, 1958), и обнаруженные несколько позже поражения работников рисовых полей (Веагир and Langsford, 1966, McMillan, 1964).

В дальнейшем, церкариозы постепенно превращались из • проблемы поражения людей в дикой природе в экологическую проблему больших городов, что было, в первую очередь, связано с интродукцией кряквы и других водоплавающих птиц (являющихся дефинитивными хозяевами шистосоматид) в города (Беэр, 1993 «а», «б», 1994, 1996 «а», «б», 1998, 2000, 2001; Беэр и Герман 1993 «а», «б», 1994, 1997 «а», «б»; Беэр, Солонец и др. 1995 «а», «б»).

В этих работах уже приводятся современные данные относительно экологических предпосылок обострения ситуации по церкариозам на некоторых урбанизированных территориях, в частности, России и Белоруссии.

В последние 20-30 лет резко обострилась ситуация по церкариозам в мегаполисах Москвы и Санкт-Петербурга. Официальная статистика по церкариозам до сих пор отсутствует, однако по экспертным оценкам

Беэр, 1996) в Москве церкариозом, вызываемым шистосоматвдами р. Trichobilharzia, ежегодно заражается не менее 2000 человек. В годы с жаркими летними сезонами эта цифра значительно возрастает, например, в 1995 г. только за первую половину июня в группе Терлецких прудов (Восточный округ Москвы), церкариозом заразилось (обратились за врачебной помощью) более 500 человек, из них более 300 - детей (Беэр и др., 1995; Качанов и др., 1995).

Изучение причин возрастания риска заражения людей церкариями шистосоматид в урбанизированных экосистемах на примере мегаполиса Москвы продолжается в Институте паразитологии РАН, при финансовой поддержке Российского Фонда Фундаментальных Исследований (гранты: 98-04-48079 и 01-04-48204).

В то же время, многие аспекты проблемы церкариозов оставались малоизученными. Из биологических аспектов к ним, прежде всего, относятся: эколого-этологические особенности промежуточных хозяев и ларвальных фаз развития шистосоматид; морфологические особенности шистосоматид p. Trichobilharzia, установление основных видов этого рода, "ответственных" за распространение церкариозов в мегаполисе Москвы. Необходимо было также изучить динамику риска заражения шистосоматидами промежуточных хозяев - моллюсков, и уточнить (а для многих водоёмов определить впервые) степень риска заражения человека.

Целью работы явилось восполнение существующих пробелов в изучении "биологической составляющей" проблемы церкариозов, имеющей решающее значение в прогнозировании степени риска заражения людей этим паразитозом в урбанизированных экосистемах России (на примере мегаполиса Москвы).

Для достижения этой цели решались следующие задачи:

1. Изучение экологических условий, способствующих существованию популяций промежуточных хозяев шистосоматид, - лёгочных моллюсков p. Lynmaea в различных типах водоёмов мегаполиса Москвы;

2. Изучение особенностей морфологии церкарий шистосоматид р. Trichobilharzia, распространенных на территории мегаполиса Москвы, и установление видовой принадлежности этих шистосоматид.

3. Изучение популяционной структуры шистосоматид из группы Trichobilharzia ocellata La Valette, 1855.

4. Изучение в режиме мониторинга годичной динамики риска заражения шистосоматидами основных видов промежуточных хозяев - моллюсков; оценка риска заражения человека в конкретных водоёмах (и их отдельных зонах) в мегаполисе Москвы.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Воронин, Михаил Владимирович

7. ВЫВОДЫ

1. Проведены исследования морфологии, популяционной изменчивости, экологических особенностей церкарий трематод сем. Schistoso-matidae, p.Trichobilharzia в мегаполисе Москвы и, сравнительно, в мегаполисе Санкт-Петербурга. Установлен крут их промежуточных хозяев - лёгочных моллюсков. Исследованы некоторые эпидемиологические аспекты проблемы церкариозов, в урбанизированных экосистемах, на примере мегаполиса Москвы, в частности, риск попадания церкарий шистосоматид в человека в водоёмах разного типа и различных их зонах.

2. На основании анализа собственных материалов и литературных данных даётся описание морфологии церкарий шистосоматид p. Trichobilharzia, группы ocellata, полученных от инвазированных моллюсков Lymnaea stagnalis из водоёмов мегаполисов Москвы и Санкт-Петербурга.

3. Выделительная система церкарий - неоднородна по степени изменчивости. Наряду с консервативными участками - передним и хвостовым, имеется постацетабулярный участок, характеризующийся довольно высокой степенью изменчивости. Уточненная формула выделительной системы церкарий шистосоматид p. Trichobilharzia имеет следующий вид:

2 [(2+1)+(1+2)+1] без учета кластеров ресничек в каналах).

4. Изменчивость в расположении сенсилл на теле церкарий неодинакова на разных участках его поверхности. Районом с наибольшей изменчивостью по этому признаку является пробосцис головного органа, наиболее консервативными - брюшная присоска и хвост.

5. Морфология и хетотаксия хвостового отдела, как правило, характеризуется высокой степенью стабильности и возможно, является родоспецифич-ной.

6. "Московская" и "петербургская" группы церкарий оцеллятного типа (Т. ocellata) принадлежат к разным географическим изолятам, а возможно имеют и различия более высокого ранга. Имеются признаки, характерные для церкарий из обеих популяций, позволяющие отличать их от церкарий "среднеевропейских" видов трихобильгарций (Т. szidati, Т.regenti). Такими признаками являются: -относительные размеры тела церкарии; -некоторые детали и вариации строения выделительной системы; -хетотаксия.

7. С помощью PCR-анализа исследованы фазы (связанные с развитием в промежуточных хозяевах) жизненного цикла шистосоматид Trichobilharzia, группы ocellata из мегаполиса Москвы. Установлена высокая степень повторяемости результатов. При этом отмечалась довольно высокая степень повторяемости результатов для материала, собранного в разные годы: результаты повторных PCR-анализов церкарий трихобильгарций из моллюсков, собранных в тех же водоёмах, что и в 1996-1998 гг. (см. Беэр, Булат, 1998), дали сходные результаты (картины паттернов в быстро и медленно мигрирующих фракциях различались несущественно). Наблюдалось высокое сходство между генетическим материалом, полученным из церкарий и материнских спороцист. Выявлено заметное совпадение некоторых полос в PCR-паттернах между паразитами и тканями моллюска хозяина. Совпадение имело место, как для ДНК, полученной из материнских спороцист, так и, отчасти, для ДНК, полученной из церкарий. Результаты PCR-анализа, могут свидетельствовать о проявлением конвергентной эволюции паразита и хозяина, а также о соответствии исследованных фрагментов, генам, связанным с иммунным ответом моллюска.

8. Основными ("несущими основной поток инвазии") промежуточными хозяевами шистосоматид p. Trichobilharzia, в мегаполисе Москвы, являются моллюски p. Lymnaa: L. stagnalis, L. ovata, L. auricularia, L.psilia psilia.

Численность их популяций колеблется от 0,1-1 до 200-300 экз./мА, а инва-зированность ларвальными формами Т. ocellata - достигает 2%.

9. На основании результатов 3-х летнего мониторинга, выявлен ряд водоёмов на территории г. Москвы (а в них — ряд зон) с высоким риском заражения людей церкариозом. Показана необходимость проведения ежегодного обследования конкретных водоёмов с целью уточнения риска заражения церкариозом человека. Это определяется ежегодно наблюдающимися изменениями по ряду показателей (видовому составу промежуточных хозяев; численности их популяций; численности специфических окончательных хозяев шистосоматид — кряквы Anas platyrhynchos, вмешательству природоохранных организаций в очистку водоёмов и др.),.

7.1. Практические предложения

1. Использовать результаты исследований в качестве учебных материалов в институтах и на курсах повышения квалификации, при подготовке работников медицинской и санитарной служб.

2. Использовать в работе Московского Городского, а также, Префектурных и Окружных Центров Госсанэпиднадзора г. Москвы результаты исследований по выявлению риска заражения человека церкариозом, вызываемым церкариями шистосоматид p. Trichobilharzia в водоёмах разного типа г. Москвы.

3. Провести (биологами Паразитологических отделений региональных Центров Мосгорсанэпиднадзора, совместно с ИНПА РАН) серию дополнительных исследований с целью установления динамики изменения степени риска заражения человека церкариозом во внутренних водоёмах (прежде всего — имеющих рекреационное значение) во всех округах г. Москвы.

4. Провести необходимые мероприятия по благоустройству городских водоёмов (прежде всего — имеющих рекреационное значение), направленные на общую профилактику церкариозов (предотвращение разрушения и заболачивания берегов водоемов; бетонирование береговой линии; очистка от бытовых и хозяйственных отходов и водной растительности; оснащение водоемов щитами - плакатами, запрещающими купание и подкармливания уток в береговой зоне).

5. Провести в Московском городском и во всех Окружных Центрах Госсанэпиднадзора серию лекций и практических занятий с сотрудниками пара-зитологических отделов по проблеме церкариоза.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Воронин, Михаил Владимирович, Москва

1. Авилова К.В. История формирования городской группировки кряквы в Москве. // Казарка №7, 2001, С. 240-255.

2. Авилова К.В. Зимовка водоплавающих птиц в городах России. И Мир птиц, (январь-май) 2002, С. 15-16.

3. Авилова К.В., Корбут В.В., Фокин С.Ю. Урбанизированная популяция водоплавающих (Anas platyrhynchos) г. Москвы. // МГУ., М., 1994.175 с.

4. Азимов Д. А. Шистосоматиды животных и человека. Ташкент, ФАН, 1975.-140 с.

5. Азимов Д. А. Биология трематоды Trichobilharzia ocellata в Узбекистане // Узбекский Биологический Журнал №3, 1977, с. 4446.

6. Азимов Д. А., Арифджанов 3. К. Изучение шистосоматидных церкариозов в Узбекистане // в кн.с. 4-14.

7. Алтухов Ю. П., Салменкова Е. А., Омельченко В. Т. Популяционная генетика лососевых рыб. М.: Наука, 1997. 288с.

8. Арыстанов Е. Моллюски дельты Аму-Дарьи и юга Аральского моря как промежуточные хозяева трематод // Автореф. канд. дисс., Л., 1969.

9. Ю.Арыстанов Е. Фауна партенит и личинок трематод моллюсков дельты Аму-Дарьи и юга Аральского моря // Вестн. ЛГУ, 1986, вып. 2, №3.

10. Березанцев Ю. А., Курочкин Ю. В. Изучение шистосоматидных церкариозов в СССР. Сообщение 1. Распространение церкариозов и их возбудители. // Мед. паразитол., 1966, №3, С. 332-337.

11. Березанцев Ю. А., Курочкин Ю. В. Изучение шистосоматидных церкариозов в СССР. Сообщение 2. Клиника, патогенез, профилактика церкариозов. // Мед. паразитол., 1966, № 4. С. 434438.

12. БеэрС.А. Зуд купальщика // Медицинская газета, 1992, июль 31, №60, с. 3.

13. Беэр С.А. Зонирование внутренних водоемов г. Москвы по степени опасности заражения людей шистосоматидными дерматитами // Государственный доклад «О состоянии окружающей природной среды г. Москвы в 1992 г.» М., 1993. С. 73, С. 87-90.

14. Беэр С. А. Зуд купальщика. П Здоровье, 1993, № 6, С. 18-19.

15. БеэрС. А. Подходы к паразитологическому мониторингу (на примере мегаполиса Москвы). // В сб. «Паразитарное загрязнение мегаполиса Москвы», Москва, 1994, С. 12-30.

16. Беэр С.А. Региональные причинно-следственные связи между различными загрязнениями и заболеваемостью людей паразитозами // В книге: Региональные проблемы и управление здоровьем населения России. М., РАЕН. 1996. С. 116-123.

17. Беэр С.А. Моделирование "опасных зон контактов" хозяев с церкариями трематод // В кн.:"Вопросы популяционной биологии паразитов". М., ИНПА РАН.1996. С.31-46.

18. Беэр С. А. Среда мегаполиса и экологические проблемы паразитологии // В книге "Проблемы биомедицины на рубеже XXI века" М., РАЕН. 2000. С. 50-63.

19. Беэр С. А., Авилова К. В., Воронин М. В., Герман С. М. Проблема церкариозов в урбанизированных экосистемах // Теоретические и прикладные проблемы паразитологии. М.: Наука, 2002, с. 47-60.

20. Беэр С. А., Белякова Ю. В., Сидоров Е. Г. Методы изучения промежуточных хозяев возбудителя описторхоза. Алма-Ата: Наука, 1987. 88с.

21. Беэр С.А., Булат С.А. Исследование полиморфизма геномной ДНК трематод в разных фазах развития//Паразитология. 1998. Т.32. N 3. С. 213-220.

22. Беэр С.А., Герман С.М. Экологические предпосылки обострения ситуации по церкариозам в городах России (на примере Московского региона) // Паразитология. 1993. Т. 27. № 6. С.441-449.

23. Беэр С. А., Герман С. М. Церкариозы: новый аспект проблемы. Н Тез. докл. международ, паразитол. конф. «Актуальные проблемы медицинской и ветеринарной паразитологии», Витебск, 1993, С. 25-26.

24. Беэр С. А., Герман С. М. Экологические предпосылки распространения шистосоматидных дерматитов (церкариозов) в Москве и Подмосковье. // Мед. паразитол., 1994, № 1, С. 16-19.

25. Беэр С. А., Герман С. М., Гороненкова О. М. и др. Церкариозный дерматит как медико-экологическая проблема мегаполиса Москвы IJ Современные особенности протекания эпидемического процесса в условиях города: Материалы конф., М., 1995, с. 23-26.

26. Беэр С. А., Герман С. М., Иващенко Е. А. Церкариозы в Москве: причины обострения и прогноз изменения ситуации. И В сб. «Паразитарное загрязнение мегаполиса Москвы», Москва, 1994, С. 4-5.

27. Беэр С. А., Иващенко Е. А., Полетаева О. Г., Подопригода Г. И., Герман С. М. Подходы и развитие иммунодиагностической тест-системы в отношении церкариозов. // В сб. «Паразитарное загрязнение мегаполиса Москвы», Москва, 1994, С. 4-5.

28. Беэр С.А., Солонец Т.М., Дороженкова Т.Е., Жукова Т.В. Церкариозы, вызываемые церкариями шистосоматид в Нарочанской рекреационной зоне (Белоруссия) // Мед,паразитол. 1995. N3. С.8-11.

29. Беэр С.А., Тикунов B.C., Чистов С.В. Территориальная оценка риска заражения людей церкариозами в водоемах Москвы 1! Вестник МГУ, Сер.5. География., 1997. N 4. С. 37-42.

30. Булат С.А., Мироненко Н.В., Кабоев O.K. Способ идентификации вида организма. Патент России. N 1833644 от 20.11.89.

31. Булат С.А., Мироненко Н.В. Видовая идентичность фитопатогенного гриба Pyrenophpora teres и Pyretiophora graminea НМикол. и фшпопстюл. 1990. Т.24. N 5. С.435-441.

32. Булат С.А., Кабоев O.K., Мироненко Н.В., Ибатуллин Ф.М., Лучки на Л.А., Суслов А.В. Полимеразная цепная реакция с универсальными праймерами для изучения геномов // Генетика. 1992, Т.28, N 5. С. 19-28.

33. Булат С.А., Мироненко Н.В., Жарова В.П., Нагорная С.С. Видоидентификация грибов методом полимеразной цепной реакции с универсальными олигонуклеотидами // Цитология и генетика (Киев) 1992, Т.26, N 2. С.25-31.

34. Булат С. А, Мироненко Н.В. Идентификация грибов и анализ их генетической изменчивости методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с геноспецифическими и неспецифическими праймерами // Генетика. 1996. Т.32, №2. С. 165-183

35. Булат С.А., Стрелкова М.В., Сысоев В.В. Идентификация маркерных штаммов Leishmania major, L. turanica, L. gerbilli методом полимеразной цепной реакции с универсальным праймером Н Мед. паразитол. 1992, № 1. С.21-22.

36. Бутенко Ю. В. Пресноводные моллюски Южного и Югл-Восточного Казахстана как промежуточные хозяева трематод Н Автореферат канд. дисс., Алма-Ата, 1969.

37. Быховская-Павловская И. Е., Рыжиков К. М. Шистосоматиды гусиных птиц Якутии. // Паразитол. сб. Зоол. Ин-та АН СССР 1958, т. 18, с. 281-294.

38. Воронин М. В., Беэр С. А., Добровольский А. А. Шистосоматидные церкарии группы Trichobilharzia cf. ocellata из популяций сегаполисов Мосвы и Санкт-Петербурга // Теоретические и прикладные проблемы паразитологии. М.: Наука, 2002, с. 61-75.

39. Галактионов К. В., Добровольский А. А. Гермафродитное поколение трематод // Л.: «Наука», 1987, 192 с.

40. Галактионов К. В., Добровольский А. А. Происхождение и эволюция жизненных циклов трематод. С-П: Наука, 1998. -403 с.

41. Гвоздев М. А., Атаев Г. Л. Шистозоматозный церкариоз человека в Ленинградской области. // X Конф. Укр. Общ-ва паразитологов, Материалы, ч. 1, Киев, 1986, с. 136.

42. Герман С.М., Беэр С.А. Методы определения жизнеспособности яиц описторхиса, основанные на стимуляции выхода мирацидиев; экспериментальное заражение моллюсков // Методы исследования при описторхозе. Омск, 1986. С.101-108.

43. Гинецинская Т. А. Трематоды, их жизненные циклы, биология и эволюция. „Наука", Ленингр. отд., 1968, 410 с.

44. Гинецинская Т. А., Добровольский А. А. К фауне личинок трематод из пресноводных моллюсков дельты Волги. 1. Фуркоцеркарии (семейства Strigeidae и Diplostomatidae) И Тр. Астраханск. заповеди., Астрахань, 1962, в. 6, с. 45-91.

45. Добровольский А. А., Галактионов К. В., Мухамедов Г. К., Синха Б. К., Тихомиров И. А. Редии и дочерние спороцисты // в сб. Партеногенетические поколения трематод (Труды Лен. об-ва Естеств-лей), т. 82 (1983), в. 4., с.52-74.

46. Добровольский А. А., Мухамедов Г. К. Развитие трематод // в сб. Партеногенетические поколения трематод (Труды Лен. об-ва Естеств-лей), т. 82 (1983), в. 4., с.82-97.

47. Добровольский А. А., Тихомиров И. А. Взаимоотношения в паразито-хозяинной системе партениты-моллюск /У в сб. Партеногенетические поколения трематод (Труды Лен. об-ва Естеств-лей), т. 82 (1983), в. 4., с.75-81.

48. Исаков Ю. А. Учет и прогнозирование численности водоплавающих птиц. П Организация учета численности птиц и вредных грызунов. Изд-во АН СССР. М., 1963. Стр. 36-90.

49. Котельников Г. А. Роль диких водоплавающих птиц в заражении населения Москвы церкариями шистосоматид. // Тез. начн. практич. совещ. «Паразитарное загрязнение мегаполиса Москвы», М., РАН, 1994 б С. 25-26.

50. Краснодембский Е. Г. Железистые образования трематод: Дис. канд. биол. наук. М., 1977.

51. Курочкин Ю. В. Церкариальные дерматиты человека в дельте Волги. // Мат. научн. конф. ВОГ 1958, С. 75-76.

52. Курочкин Ю. В. О церкариальных дерматитах человека в дельте Волги. // Helminthologia 1959, № 1-4, С. 225.

53. Курочкин Ю. В. О шистосоматидных церкариях, вызывающих церкариозы человека в дельте Волги. // Труды Астраханского Гос. заповедника в. V, Астрахань, 1961, С. 319-325.

54. Курочкин Ю. В. Неспецифические церкариозы позвоночных. // Мат. научн. конф. ВОГ 1963 (U С. 173-175.

55. Курочкин Ю. В., Березанцев Ю. А. Шистосоматидные церкариозы. // Мат. научн. конф. ВОГ 1960, С. 64-65.

56. Курочкин Ю. В., Березанцев Ю. А. Природная очаговость шистосоматидных церкариозов. // В сб. «Природная очаговость болезней и вопросы паразитологии», Фрунзе, 1964, в. 4, с. 344-346.

57. Курочкин Ю. В., Березанцев Ю. А. Природная очаговость шистосоматидных церкариозов. /У В сб. «Проблемы природной очаговости гельминтозов человека», Тюмень, 1969, С. 41-45.

58. Мехрамеев А. А., Михайлов Т. К. Фауна личинок трематод отдельных видов моллюсков Дивиченского лимана // Биология озер и водохранилищ Азербайджана, Баку, 1980, с. 116-127.

59. Молев Е. В., Молева Р. А. Случаи шистосоматидного дерматита в Курской области.!! Мед. паразитол. и паразитарн. болезни, Т. 46 № 6, 1977, С. 741-742.

60. Райшите Д. О шистосоматидных церкариях в дельте р. Неман И Проблемы паразитологии, ч. 2, Киев, 1972, с. 151-153.

61. Райшите Д. О шистосоматидных церкариях в дельте р. Нямунаса // Acta parasitologica Lituanica, 1974, vol. 12, p. 125-129.

62. Романова E. А. Идентификация гельминтов методами молекулярной биологии. Автореф. дисс. канд.биол.наук. М., 1995. 24 с.

63. Романова Е. А., Семенова С. К., Бенедиктов И. И., Рысков А. П. Использование полимеразной цепной реакции для идентификации ДНК гельминтов из рода Trichinella, Fasciola, Echinococcus, Nematodirus, Taenia И Паразитология 1997. Том 31, вып.1. С.53-65.

64. Рыжиков К. М. Гельминтофауна утиных птиц Рыбинского водохранилища // Труды Гельминт. Лаб., 1956, с. 112-130.

65. Семенова С. К., Романова Е. А., Бенедиктов И. И. Анализ генетической изменчивости печеночного сосальщика Fasciola hepatica с помощью полимеразной цепной реакции со случайными праймерами // Генетика. 1995. T.31,N2. С.273-275.

66. Семенова С.К., Романова Е.А., Рысков А.П. Генетическая дифференциация гельминтов на основе данных полимеразной цепной реакции со случайными праймерами. Н Генетика. 1996. Т.32, № 2. С.304-309.

67. Скрябин К.И. Семейство Schistosomatidae, род Trichobilharzia. // Трематоды животных и с человека. М. Изд. АН СССР. Т.5. 1951. С.377-387.

68. Скрябин К. И., Гушанская Л. X. Новая система крупных таксономических категорий класса trematoda Rudolphi, 1808, Helminthologi, т. 4, вып. 14 с. 427-478.

69. Сонин М.Д., Беэр С.А., Ройтман В.А. Паразитарные системы в условиях антропопрессии (проблемы паразитарного загрязнения) //Паразитология. 1997. Т.31. N.5. С. 453-457.

70. Фролова Е. Н. Зараженность моллюсков из озера Пертозера партеногенетическими поколениями и личинками трематод // Уч. зап. Лен. гос. ин-та им. Герцена. 1958. т. 143, стр. 217-259.

71. Фролова Е. Н. Личинки трематод в моллюсках озер Карелии. Изд. «Наука», 1975.

72. Халтурин К. В. Генетическая неоднородность природных популяций Microphallus piriformes и Microphallus pygmaeus (Trematoda: Microphallidae). Магистерская диссертация. // Санкт-Петербург, 1999.

73. Цыркунов Л. П., Беэр С. А., Яроцкий Л. С. Профилактика,диагностика и лечение шистосоматидных (церкариальных) дерматитов. Методические рекомендации. // МЗ УССР, Киев, 1987, 14 с.

74. Чеботарев Р. С. Шистосоматидный дерматит у человека. // Мед. паразитол., 1957, №2, С. 172-175.

75. Шевцов А. А., Заскинд Л. Н. Гельминты и гельминтозы домашних водоплавающих птиц // Изд. Харьковск. ун-та, Харьков, 1960,450 с.

76. Athari A., Amini H., Sahba G. H., Jalali H., Farrokni K.1.vestigation of cercarial dermatitis in Iran. // Bull. soc. fr. parasitol.1990, 8, Suppl. #2, C. 888.

77. Avilova K.V., Eremkin G.S. (2001): Waterfowl wintering in Moscow (1985-1999): dependence on air temperature and the prosperity of the human population. H Acta ornitologica, v.36, N 1: 65-71.

78. Basch, P. F., and Lie, K. J. (1966 b). Infection of single snails with two different trematodes. II. Dual exposure to a schistosome and an echinostome at staggered intervals. // Zeitschrift fur Parasitenkunde, 27, 260-270.

79. Bayer, F. A. H. (1954). Larval trematodes in some freshwater snails: a suggested biological method of Bilharzia control. // Transactions of the Royal Society for Tropical Medicine and Hygiene, 48,414-418.

80. Bearup A. J. A Schistosome Larva From the Matine Snail Pyrazus Australis As a Cause of Vercarial Dermatitis in Man // Med. J. Australia, June 1955, p. 955.

81. Bearup A. J. Bather's Itch ii Ampoule Vol. 1 No 1, December 1958, pp. 8-10.

82. Велег S.A. Factors of anthropogenic influence on the environment as parasitic organisms'diversity regulators in water ecosystems of the megapolis. // 3 Int. Congress: "Water: ecology and Technology". Moscov. 1998., V.l, P. 625.

83. Be4erS.A. Cercarial dermatitis in the former USSR: a review // Theoretical and Applied Problems of Parasitology, M: Nauka, 2002, pp. 37-46.

84. Be'er S.A., Romanenko N.A., Shigin A.A., Novosiltsev G.I., e.a. Parasitology related problems of inland reservoirs of Moscow. II 3 Int. Congress: "Water: ecology and Technology". Moscov. 1998., V.l., P.625; V.2, P.423.

85. Blankespoor, H. D. and Reimink, R. L. Control of swimmer's itch in Michigan: Past, present and future. // The Michigan Riparian, 10 (1988), 19.

86. Blankespoor, H. D. and Reimink, R. L. The control of swimmer's itch in Michigan: past, present and future. Л Michigan Academician, 24 (1991), 7-23.

87. Bonsel J. et al. Schistosoma Dermatitis in the Hague. // Trop. Geogr. Med. Vol. 10 (1958), pp. 239-244.

88. Bourns T. K.R. Schistosome Cercaria in Ontario // Can. J. ZooL, Vol. 39 (1960), pp. 43-46.

89. Brackett, S. Pathology of Schistosome dermatitis. // Archives of Dermatology and Syphilology, 42, 1940,410-418.

90. Brooks F. G. Studies on the germ-cell cycle of Trematodes И Amer. J.Hyg. 1930, Vol. 12, pp.299-340.

91. Brumpt E. Cercaria ocellata determinant la dermatite des nageurs, provient d'une bilharzie des canards. H Compt. Rend. Acad. Sci. Paris, 193:612-614,1931.

92. CherfasJ. New weapon in the war against schistosomiasis. H Science 1989, 246, # 4935, C. 1242-1243.

93. ChuG. W. Т. C. Pacific Area Distribution of Freshwater and Marine Cercarial Dermatitis 11 Rep. Рас. Sci. 12 (4), 1958, pp. 299-312.

94. Chu G. W. Т. C. The problem of swimmer's Itch in Hawaii // Ann. Meet, of Hawaii Pub. Hlth. Assc., 1959.

95. Chu G. W. Т. C. and Cutress С. E. Austrobilharzia variglandis (Miller and Northup, 1926) Penner, 1953, (Trematoda: Schistosomatidae) in Hawaii with Notes on Its Biology. // Joum. of Paras., Vol. 40 No 5 Sec. 1, 1954, pp. 515-523.

96. Cort, W. W. Schistosome dermatitis in the United States (Michigan). Journal of the American Medical Association, 90,1928, 1027-1029.

97. CortW.W. Studies on Schistosome Dermatitis. Status of Knowledge After More Than Twenty Years H The American Journal of Hygiene vol. 52, #3, November 1950, pp. 251-276.

98. Cribb Т. H., Bray R. A., Littlewood D. T. J. The nature and evolution of the association among digeneans,molluscs and fishes // International Journal for Parasitology 31 (2001) 997± 1011.

99. Davis, N. E. Interesting field trials with Bayluscide™ granules. // Public Health (Bayer), 9 (1993), 44-49.

100. Davis, N. E. Population dynamics and larval trematode interactions with Lymnaea tomentosa and the potential for biological control of schistosome dermatitis in Bremner Bay, Lake Wanaka, New Zealand. // Journal of Helminthology, 72 (1998), 319-324.

101. Dvorak J. Molecular analysis of European Trichobilharzia species. // Helminthologia, 38, 4: 243-250, 2001

102. Dvorak J., Vanacova S., Hampl V., Flegr J., Horak P. Comparison of European Trichobilharzia species based on ITS1 and ITS2 sequences // Parasitology 2002,124, 307±313.

103. Ejsmont L. Uber zwei Schistosomatidengattungen der Vogel // Bull. Acad. Pol Sc. Lettr. CI. Sc. Math Nat., 1929,2:389-403.

104. Fain A. Une nouvelle bilharziose des oiseaux: La trichobilharziose nasale. Remarque sur Pimportance des schistosomes d'oiseaux en pathologie humaine. 11 Extr. Am. de la Soc. Beige Med. Trop. Tome XXXV No 3, 1955, pp. 323-328.

105. Fain A. Sur une furcocercaire du groupe „Ocellata" ptoduisant experimentalement la „dermatite des nageurs" a Astrida (Ruanda-Urundi) // Extr. Ann. de la Soc. Beige Med. Trop. Tome XXXV No 6, 1955, pp. 701-708.

106. Farley, J. A review of the family Schistosomatidae: excluding the Genus Schistosoma from mammals. Journal of Helminthology 1971, 4, 289-320.

107. Feiler W., Haas W. Trichobilharzia ocellata: chemical stimuli of duck skin for cercarial attachment. H Parasitology, 1988 Jun. Vol 96 (Pt3)P 507-17.

108. Feiler W; Haas W. Host-finding in Trichobilharzia ocellata cercariae: swimming and attachment to the host. U Parasitology, 1988 Jun. Vol 96 (Pt 3) P 493-505.

109. Fusco A.G., Salafsky В., Ellenberger B. e.a. Schistosoma mansoni correlation between mouse strain skin eicosanoid production and cercarial skin penetration П J. Parasitol. 1988. V. 74. N. 2. P. 253-261.

110. Gottstein В., Deplazes P., Tanner I., Skaggs J.S. Diagnostic identification of Taenia saginata with the polymerase chain reaction // Trans. Royal. Soc. Trop. Med andHyg. 1991. Vol.85, N2.P.248-249.

111. Guannan Shao Preliminary Investigation on Cercarial Dermatitis in All Area of Xizang Autonomous Region, China // . 1988, pp. 169-170. Chinese, abstr. English.

112. Haas W; van de Roemer A. Invasion of the vertebrate skin by cercariae of Trichobilharzia ocellata: penetration processes and stimulating host signals. // Parasitol Resr, 1998 Oct. Vol 84 Issue 10 P 787-95.

113. Hanning G. W. and Leedom W. S. Schistosome Dermatitis from Pomacea Paludosa (Say) (Prosobranchia: Pilidae // The Nautilus, Vol. 92 (3), July 1978, pp. 105-106.

114. Hertel J., Hamburger J., Haberl В., Haas W. Diagnostic markers for tandem repeated bird schistosome DNA // Helminthologia, 38, 4: 246, 2001.

115. Heyneman, D. (1984). Development and disease: A dual dilemma. U Journal of Parasitology, 70, 3-17.

116. Heyneman, D. and Umathevy, T. Interaction of trematodes by predation within natural double infections in the host snail Indoplanorbis exustus. // Nature, 217 (1968), 283-285.

117. Horak, P, Kolarova, L, Dvorak, J. Trichobilharzia regenti n. sp. (Schistosomatidae, Bilharziellinae), a new nasal schistosome from Europe. // Parasite-Journ. de la Soc.Franc. de Parasit., 22: 349-357, 1998.

118. Horak, P. and Kolarova, L. Survival of bird schistosomes in mammalian lungs. H International Journal for Parasitology. 30, 2000, 65-68.

119. Hutton R. E.Marine Dermatosis // Archives of Dermatology Vol. 82, December 1960, pp. 951-956.

120. Islam, K. S. and Copeman, D. B. The morphology and life-cycle of Trichobilharzia parocellata (Johnston & Simpson, 1939) from thevisceral blood vessels of Australian anatids. H Systematic Parasitology, 8, 1986, 39-50.

121. Johnston Т. H. and Cleland E. R. Larval Trematodes from Australian Terestrial and Freshwater Molluscs // Trans. Roy. Soc. S. Australia, vol. LXI (1937), pp.202-206.

122. Kalbe M., Haber R. L., Haad W. Miracidial host-finding in Fasciola hepatica and T. ocellata is stimulated by species-specific glycoconjugates released from the host snails // Parasitology Res. 1997, vol. 83, # 8.

123. Kock S., Byockeler W. Observations on cercarial chaetotaxy as a means for the identification of European species of Trichobilharzia Skijabin & Zakharow, 1920 (Digenea: Schistosomatidae) II Syst Parasitol.-, 1999 Jul. Vol 43 Issue 3 P 159-66.

124. Kolarova L., Horak P. Moiphology and chaetotaxy of Trichobilharzia szidati Neuhaus, 1952 cercariae (Trematoda: Schistosomatidae: Bilharziellinae). // Helminthologia, 33,1: 3-7, 1996.

125. Kolarova L., Horak P., Sitko J. Cercarial dermatitis in focus: schistosomes in the Czech Republick // Helminthologia, 34, 3: 127-139, 1997.

126. La Rue G. R. The Classification of Digenetic Trematoda: A Review and a New System ft Exp. Parasitol., 6,1957, 3: 306-344.

127. La Valette St. George A. J. II. Symbolae ad trematodum evolutionis historiam. U Dissertation (1855):, Leipzig, Berolius.

128. Leedom W. S. and Short R. B. Cercaria pomaceae sp.n., a Dermatitis-producing Schistosome Cercaria from Pomacea Paludosa, the Florida Apple Snail H J. Parasitol. 67 (2), 1981, pp. 257-261.

129. Leigh W. H. Cercaria huttoni, sp. nov., a dermatite-producing schistosome larva from the marine snail Haminoea antillarum guadalupensis Sowerby// .(?) May 1953.

130. Lie, К. J. (1966). Antagonistic interaction between Schistosoma mansoni sporocysts and Echinostome rediae in the snail Australorbis glabratits. HNature, 211,1213-1215.

131. Lie, K. J., Basch, P. F., Heyneman, D., Beck, A. J. and Audy, J. R. (1968). Implications for trematode control of interspecific larval antagonism within snail hosts. Transactions of the Royal Society for Tropical Medicine and Hygiene, 62, 299-319.

132. Lie, K. J., К wo, E. H. and Owyang, С. K. (1971). Further field trial to control Schistosoma spitidale by trematode antagonism. South East Asian Journal of Tropical Medicine arid Public Health, 2, 237-243.

133. Lie, K. J. (1973). Larval trematode antagonism: principles and possible application as a control method. Experimental Parasitology, 33, 343-349.

134. Lie, K. J., and Owyang, С. K. (1973). A field trial to control Trichobilharzia brevis by dispersing eggs of Echinostoma audyi. South East Asian Journal of Tropical Medicine and Public Health, 4, 208 -217.

135. Lim, H. K. and Heyneman, D. Intramolluscan intertrematode antagonism: A review of factors influencing the host-parasite system and its possible role in biological control. // Advances in Parasitology, 10(1972)., 191-268.

136. MacFarlane W. V. Schistosome dennatitis in New Zealand: II. Pathology and immunology of cercarial lesions. /7 Am. J. Hyg., 1949, 50:133-137.

137. MacFarlane W. V. Schistosome Dermatitis in Australia И The Med. Journ. ofAustr. Vol. I (20) May 1952, pp. 669-672.

138. Macko J. K. Flat worms and their importance in common free-living birds in eastern Slovakia H Sbor. Vych-slov. muz. II-III, 1961-1962, A: 129-154.

139. Matsumura T. et al. Avian Schistosomiasis (Paddy Field Dermatitis) in a Rural City of Hyogo Prefecture, Japan. // Kobe J. Med. Sci. 29 (5), October 1983, pp. 161-169.

140. McDonald, M. E. (1981). Key to Trematodes Reported in Waterfowl. // Resource Publication 142, United States Department of the Interior, Fish and Wildlife Service. Washington, D.C.

141. McMahon, J. E. Kolstrup, N. (1979). Praziquantel; a new schistosomicide against Schistosoma haematobium. British Medical Journal, 2,1396-1399.

142. McMillan B. Experimenting with the Itch !I Health Vol. 14 No 4, December 1964, pp. 18-20.

143. McMullen, D. В., Beaver P. C. Studies on schistosome dermatitis IX. The life cycles of three dermatitis-producing schistosomes from birds and a discussion of the subfamily Bilharziellinae (Trematoda: Schistosomatidae). (1945)

144. Meuleman, E. A., Huyer, A. R. and Mooij, J. H. (1984). Maintenance of the life cycle of Trichobilharzia ocellata via the duck Anas platyrynchos and the pond snail Lymnaea stagnalis. Netherlands Journal of Zoology, 34,414-417.

145. Muller V., Kimmig P. (1994): Trichobilharzia franki n. sp. die Ursache fur Badedermatitiden in sudwestdeutschen Baggerseen. // Appl. Parasitol, 35: 12-31.

146. Neto D. E., Souza C. P., Rollinson D. D., Katz S. D., Pena A. J.,Simpson A. J. The random amplification of polimorphic DNA allows the identification of strains and species of Schistosome H Mol. andBiochem. Parasitol. 1993. Vol.57, N 1. P.83-88.

147. NeuhausW. Biologie und Entwiclung von Trichobilharzia szidati n. sp. (Trematoda, Schistosomatidae), einen Erreger von Dermatitis beim Menschen. // Z. Parasitenkde 1952,15: 203-266.

148. NeuhausW. Der Einfluss des Zwischenwirtes auf die Gestalt der Cercarie von Trichobilharzia szidati Neuhaus, 1951, und ihre systematische Kennzeichung // Zool. Anz. 1952, 148, 9 (10): 275-285.

149. Nevhutalu P., Salatsky В., Haas W. Eicosanoid production by cercaria/schistosomules of Trichobilharzia ocellata. // Bull soc. Jr. parasitol 1990, 8, Suppl. # 1, C. 171.

150. Nevhutalu P. A.; Salafsky В.; Haas W.; Conway T. Schistosoma mansoni and Trichobilharzia ocellata: comparison of secreted cercarial eicosanoids. II J. Parasitol.-, 1993 Feb. Vol 79 Issue 1 P 130-3.

151. Obwaller A, Sattman H., Konecny R., Horweg C., Auer H., Aspock H. Cercarial dermatitis in Austria: the recent situation and future aspects II Helminthologia, 38,4: 245, 2001.

152. PillayD., Pillay B. Schistosoma mansoni: PCR amplification shows intraspecific variation among geographical isolates // Exp. Parasitol. 1994. Vol.79,N l.P.57-58.

153. Pirila V. ja Wikgren Bo-J. Jarvisyyhysta // Duodecim 71 (1955) No 12, pp. 1198-1211.

154. Pirila V. and Wikgren Bo-J. Cases of Swimmer's Itch in Finland IIActaDetm-Vener., Vol. 37 (1957), pp. 140-148

155. Price, E. W. A synopsis of the Trematode family Schistosomatidae with descriptions of new genera and species. // Proc. U. S. Nat. Mus., 1929 v. 75 - art.l 8 - pp. 1-39.

156. Redman, C. A, Robertson, A., Fallon, P. G., Modha, J., Kusel, J. R., Doenhoft M. J. and Martin, R. J. (1996). Praziquantel: An urgent and exciting challenge. Parasitology Today, 12, 14-20.

157. Richard J. (1971): La chaetotaxic des cercaries. Valeur systematique et phyletique. it Mem. Mus.Nat Hist., Serie A Zool. 67:1-179.

158. Sandosham A. A. Cercarial Dermatitis Caused by a Member of the „Elvae" Group IIMalaya, No 26,1953, pp. 195-198.

159. Schell S. C. Cercaria robinsonensis n.sp. and Other Schistosome Cercariae Occurring in the Inland Empire of the Pacific Northwest // Northwest Science Vol. 33, No 3,1959, pp. 121-128.

160. Scott J.C., McManus D.P. The random amplification of polymorphic DNA can discriminate species and strains of Echinococcus И Trop. Med Parasitol. 1994. Vol.45, P.l^L

161. Sindermann C. J. Ecological Studies of Marine Dermatitis-producing Schistosome Larvae in Northern New England // Ecology Vol. 41, No 3, July 1960, pp. 678-684.

162. Sluiters J. F. Parasite-host Relationship of the Avian Schistosome Trichobilharzia ocellata and the Hermaphrodite Gastropod Lynmaea stagnalis. И ICG Printing Dordrecht, Amsterdam, 1983., 108 p.

163. Sonin M.D., Be'er S.A., Roitman V.A. Parasitic contamination" of urbanizated ecosystem. // Mat. 7 Int. Helminthol. Symposium. Kosice, Slovak Rep., 1995. P.29.

164. Ssinitzin D. Th. Studien uber die Phylogenie derTrematoden: 2. Bucephalus v. Baer und Cercaria ocellata de la Vail. // Zeit. f. wissensch. Zool. 94 (1910): 299-325.

165. Strelkova M. V., Bulat S. A. Implementation of PCR with universal praimers for Leishmania major group differentiation // 8th Anter. Congress of Parasitology, Turkey 1995. Vol.2. Po3.06(90). P.257.

166. Szidat L. Zur Revision der Trematodengattung Strigea Abilgaard. // Zbl. Bakteriol. Iena, 1920, Orig., 105:204-215.

167. Szidat L. Beitrage zum Aufbadeneines naturlichen Systems der Trematoden. I. // Zeitschr. f. Parasitenkunde 1 (2-3) 1939, p. 239-283.

168. Szidat L. Was ist Cercaria ocellata La Valette? Morphologische und entwicklungsgeschichtliche Untersuchungen uber den Erreger der europaischen Cercaren-Dermatitis des Menschen. П Dtsch. Tropmed. Zeitsch46 (1942): 481-497, 504-524

169. Szidat L. und Czibulinski de Szidat U. Eine Neue, Dermatitis Erzeugende Cercarie der Trematoden-familie Schistosomatidae aus Tropicorbis Peregrinus (d'Orbigny) des Rio Quequen // Z. fur Parasitenkunde 20 (1960), 359-367.

170. TanakaM. Studies on Trichobilharzie physellae in Oki Islands (1-4)1/ . 9 (1960). Japanese, abstr. English.

171. Taylor E. L. and Baylis H. A. Observations and Experiments on a Dermatitis-producing Cercaria and on Other Cercariae from Lymnaea stagnalis in Great Britain. // Trans. Roy. Soc. Trop. Med andHyg. Vol. XXIV, No 2, August 1930, pp. 219-242.

172. Vogel H. Cercarien-dermatitis in Deutchland // Klin. Wschr., 1930, 9: 883-886.

173. Wall R. C. An analysis of the current status of the Schistosome Dermatitis Problem in Michigan // Sterkiana 63-64, September 1976, 64 P

174. Welsh J. McClelland M. Fingerprinting genoms using PCR with arbitrary primers // Nucl. Acids Res. 1990. Vol. 18, P.7213-7235.

175. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J., Rafalski J.A., Tingey S.V. DNA polimorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers 1 I Nucl Acids Res. 1990. Vol.18, P.6531-6535.

176. Yamaguti S. Systema helminthum. The Digenetic trematodes of vertebrates, L., 1958 v. 1, p. 1-979.