Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль убихинона как антиоксиданта в структуре и функции мембран в норме и при действии облучения

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Заславский, Юрий Самуилович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Система природных антиоксидантов в норме и в условиях облучения

2. Влияние ионизирующей радиации на процессы окислительного фосфорилирования

3. Биологическая роль убихинона и его антиокси-дантная функция.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

1. Выделение митохондрий.

2. Регистрация дыхания и фосфорилирования.

3. Определение количества убихинона.

4.* Определение антиокислительной активности липидов

5. Изучение изменения микровязкости мембран 46 митохондрий

6. Приготовление и исследование свойств леци-тиновых везикул.

7. Определение продуктов перекисного окисления с помощью тиобарбитуровой кислоты

8. Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Динамика процессов окислительного фосфорили-рования в митохондриях после действия облучения

2. Действие облучения на систему природных анти-оксидантов в митохондриях печени

3. Влияние фд на систему природных антиоксидан-тов в митохондриях печени мышей и крыс.

4. Действие радиации на уровень убихинона в митохондриях и печени мышей и крыс.

5. Влияние убихинона на функциональное состояние митохондрий после облучения

6. Исследование радиопротекторного действия убихинона как одного из представителей антиокси-дантов. Ю

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль убихинона как антиоксиданта в структуре и функции мембран в норме и при действии облучения"

В настоящее время большое внимание привлечено к изучению роли окислительных реакций в липидах мембран в регуляции клеточного метаболизма, поскольку изменение физико-химического состояния липидов может влиять на скорость процессов, протекающих на мембранах. Известно, что необходимым условием окислительного фосфорилирования является наличие целостной неповрежденной структуры внутренней мембраны митохондрий, при этом протеканию окислительного фосфорилирования способствует общая подвижность липид-ного слоя митохондриальной мембраны /Микельсаар и др., 1975/. Источником изменения состояния липидной фазы может служить пере-кисное окисление липидов. Большинство исследователей придерживается представления о том, что перекисное окисление липидов развивается по свободнорадикальному механизму /А.И.Арчаков, Ю.А. Владимиров, 1972/. Была высказана точка зрения о том, что наблюдаемое после облучения разобщение дыхания и фосфорилирования может быть причиной активации окисления липидов в постлучевой период. Описано появление продуктов окисления липидов в митохондриях тканей облученных животных /Ю.Б.Кудряшов, 1974/. Однако скорость перекисного окисления липидов находится под контролем механизмов различного действия, в том числе антиоксидантов.

Исходя из развиваемых в последние годы представлений можно полагать, что антиоксиданты, как физиологически активные вещества, играют существенную роль в поддержании функции митохондрий.

На основании литературных данных и большого экспериментального материала Е.Б.Бурлаковой и сотрудниками была предложена гипотеза о том, что одним из способов поддержания гомеостаза является участие природных антиоксидантов в физико-химических механизмах регуляции клеточного обмена. Согласно этой гипотезе, в липидах клеток, как в норме, так и при экстремальных воздействиях, развиваются свободнорадикальные окислительные реакции, в ходе которых образуются продукты, тормозящие процессы метаболизма в клетках.

Показано, что в клетках и органах животных существует непосредственная связь между уровнем ингибиторов окисления липи-дов (антиокисдантов) и концентрацией свободных радикалов /Е.Б. Бурлакова, 1975/. Их соотношение является специфичным для разных органов животных и различается у разных видов. На любые экстремальные воздействия эта система отвечает однотипно, различия заключаются лишь в количественных изменениях. При этом связь между скоростью окисления липидов и уровнем свободных радикалов носит обратный характер, т.е. уменьшение уровня свободных радикалов сопровождается активацией антиокислительных процессов, и наоборот. Иными словами, изменение концентрации свободных радикалов представляет собой зеркальное отражение уровня антиоксидантов. Чтобы система антиоксидантов могла выполнять регулятор-ные функции, необходимо наличие обратной связи, которая позволяла бы эту систему возвратить в исходное состояние после стрессового воздействия.

В клетке содержится довольно сложный набор антиоксидантов, из которых к настоящему времени достаточно полно охарактеризован по антиокислительным и антирадикальным свойствам лишь токоферол /С.А.Аристрахова, 1972, И.И.Иванов, 1975, М.И.Мерзляк, 1975, Тарре1, 1974/.

Высказывались предположения, что такую же роль могут играть

1980/. убихиноны / Тарре!, 1973» киагата, Однако их антиокислительные и антирадикальные свойства мало изучены. С другой стороны, для более глубокого понимания роли биоантиоксидантов в развитии лучевой патологии представляет интерес изучение способности модифицировать радиационное поражение убихиноном как предполагаемым антиоксидантом.

Так как к началу наших исследований практически отсутствовали данные по действию радиации на кинетику антиоксидантов митохондрий, значительный интерес представляло изучение кинетики ми-тохондриальных антиоксидантов и влияния на них убихинона.

В настоящей работе поставлены следующие задачи:

Задачи исследования:

Целью настоящей работы являлось изучение количественных физико-химических характеристик общих природных антиоксидантов липидов и убихинона; исследование роли и места убихинона среди них и связь между физико-химическими константами окисленной и восстановленной форм убихинона в процессе развития перекисного окисления липидов в мембране при радиационном поражении, а также изучение радиозащитных свойств убихинона.

Научная новизна.

Настоящая работа является первым шагом в комплексном исследовании роли убихинона как одного из представителей многокомпонентной системы антиоксидантов. Сделана попытка охарактеризовать физико-химические свойства убихинона как антиоксиданта и одновременно как протектора на клеточном и организменном уровнях.

Практическое значение.

Полученные в настоящей работе данные вносят существенный вклад в понимание закономерностей лучевого поражения и механизмов его модификации. Одновременно они углубляют и расширяют современные представления о механизме действия биоантиоксидантов как радиомодификаторов.

Нагрузка организма убихиноном нормализует вызванные гамма-облучением изменения общего уровня антиокисдантов и по критерию выживаемости дает положительный эффект. Это может быть полезным как в фундаментальной радиобиологии, так и при практическом применении в клинике радиационного поражения.

Заключение Диссертация по теме "Радиобиология", Заславский, Юрий Самуилович

ВЫВОДЫ

1. Проведено изучение антиокислительных и антирадикальных свойств липидов митохондрий печени и селезенки крыс и мышей после тотального облучения. Показано увеличение антиокислительной активности в ранние сроки /4-6 ч/ после облучения с последующим возвратом к исходным значениям.

2. Проведено комплексное исследование вклада убихинона в антиокислительнеы и антирадикальные свойства природных антиоксидантов. Показано, что антиокислительные свойства окисленного и восстановленного убихинона существенно отличаются и составляют 5-10% от всей суммы природных антиоксидантов.

3. Тотальное -облучение мышей и крыс приводит к перераспределению убихинона между митохондриями и цитоплазмой в пострадиационный период. Увеличение количества убихинона в митохондриях сопровождается восстановлением окислительного фосфори-лирования.

4. В модельных экспериментах на препаратах митохондрий и липосом выявлено нормализующее действие восстановленной формы убихинона на перекисное окисление липидов.

5. Обнаружено, что введение убихинона животным увеличивает дыхательный контроль как в интактных, так и в облученных митохондриях. Увеличение коэффициента ДК, ДДФ/0, Р/0 в митохондриях происходит за счет активации дыхания, что ослабляет выраженность поражения.

6. Показано, что радиозащитное действие убихинона совпадает с его действием на систему природных антиоксидантов, то есть максимальный радиозащитный эффект наблюдается при его введении за 6-12 ч до облучения, что отличает этот препарат от обычных химико-фармакологических протекторов. При этом убихи-нон изменяет форму радиационной гибели животных из желудочно-кишечной на костно-мозговую.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Возможность модификации лучевых повреждений связана со способностью клеток восстанавливать в определенных условиях потенциальные повреждения, возникающие в них при облучении ионизирующей радиацией. К концу 60-70-х годов стало очевидным, что защитное действие радиопротекторов на клетки нельзя объяснить снижением первичного повреждения (например, за счет перехвата продуктов радиолиза воды и т.п.). Были высказаны предположения об их влиянии на радиочувствительность /Е.Ф.Романцев, 1967; Бак, 1968; А.М.Кузин, 1972; Е.Б.Бурлакова, 1975; Ю.Б.Кудряшов, 1975; Но^ап, 1956/. Перед этими исследователями стояла задача выяснения физико-химического механизма первичных процессов при облучении и установления природы начальных повреждений в клетках. При этом, если принять, что физико-химические параметры клетки существенны в обеспечении ее устойчивости к действию облучения, то введение веществ направленно изменяющих эти физико-химические характеристики, позволяет изменять радиочувствительность в нужную сторону.

По теории свободнорадикального окисления радикалы, возникающие при облучении в клеточных органеллах, могут вызывать реакции, не свойственные организму в норме, изменять интенсивность свободнорадикальных реакций, повреждать компоненты клеток, нарушать целостность мембран и надмолекулярных структур клеток /Н.М.Эмануэль, 1974/. В связи с этим вещества, способные реагировать со свободными радикалами и заменять активные радикалы на неактивные, могут уменьшать масштаб повреждений и тем самым оказывать защитное действие /Е.Б.Бурлакова, 1975/.

Как было показано выше, действие облучения на липиды в опытах in vivo и in vitro приводит к интенсификации окислительных свободнорадикальных реакций в них и к уменьшению уровня природных антиоксидантов. При этом обнаружено, что в ранние сроки после воздействия ионизирующей радиации происходят повреждения мембранных структур на фоне измененного уровня анти-окисдантов относительно контроля. При облучении животных уменьшение АОА липидов (как в гомогенате, так и в митохондриях) в радиочувствительных органах, согласно нашим и литературным данным, происходит быстрее, чем в радиоустойчивых. Подобная связь обнаружена и для различных видов животных (мыши, крысы), хотя направленность процесса однотипна, уровень отклонений у радиочувствительных животных был выше относительно нормы.

Главным условием нормального функционирования мембраны мито хондрий является наличие целостной, неповрежденной ее структуры. Из представленных данных видно, что облучение модифицирует митохондриальную мембрану; при этом происходит нарушение функций окислительного фосфорилирования и изменение антиокислительной активности липидов.

В литературе уделяется большое внимание убихинону как ли-пидному антиоксиданту, однако его основная роль и место в общей системе природных антиоксидантов окончательно не установлены. Проведенные нами исследования на липосомах показали, что антиокислительные свойства восстановленного убихинона и токоферола существенно не различаются, хотя убихинон оказался несколько менее активным, чем токоферол. Окисленная форма убихинона была практически неактивной. Антиокислительные свойства убихинона согласуются с его антирадикальной активностью. Константа реакции К^ для окисленной формы оказалась небольшой и составляла о

5»10 л/моль.сек, для восстановленной формы она равнялась 2,1*10^ л/моль.сек. Таким образом, константа К^ для убихинона на порядок ниже, чем для токоферола /Е.Б.Бурлакова, 1975/. Ю.М.Петрусевич /1975/ получил значения антирадикальной активности рэд выше, чем для токоферола, однако автор применил для определения антирадикальной активности косвенный метод.

Убихинон является не единственным и не сёмым эффективным липидным антиокисдантом. При сравнении кинетических характеристик антиокислительного и антирадикального действия липидов и убихинона было показано, что убихинон вносит вклад в эти характеристики липидов печени не более 5-10$, и что в липидах присутствуют другие природные антиокисданты, имеющие константы К^ и Е, сравнимые с таковыми для убихинона.

При исследованных нами воздействиях радиации на организм животного наблюдалось изменение абсолютного количества убихинона. При этом отношение окисленной и восстановленной форм не менялось; следовательно, на фоне общего увеличения содержания убихинона происходил и абсолютный рост количества восстановленной формы.

В работах Е.Б.Бурлаковой /1975/ показано, что произведение Кг,*С (где С - концентрация ингибиторов в липидах) является стационарной величиной для конкретных органов. Из этого следует, что изменение уровня одного из природных антиокисдантов (например, восстановленного убихинона, обнаруженного нами) может повлечь за собой изменение уровня других антиокисдантов.

Обнаруженная возможность изменения вклада убихинона в антиокислительные и антирадикальные характеристики липидов находятся в хорошем соответствии с известным фактом, что в организме животных с авитаминозом А и Е происходит изменение содержания не только убихинона, но и некоторых других антиокисдантов /Г.В, Донченко, 1980;

Установлено, что, в зависимости от физико-химических свойств вводимых животным антиокисдантов, можно направленно влиять на уровень природных антиокисдантов в липидах, то есть не только подменять, но и осуществлять их преимущественное расходование в реакциях клеточного метаболизма. /С.А.Аристархова, 1976/.

Вводимые животным антиокисданты способны заменять эндогенные ПА в окислительных реакциях липидов и увеличивать таким образом стационарную концентрацию эндогенных ПА. Естественно предположить, что в норме в организме взаимодействие между эндогенными ПА липидов и их взаимозаменяемость осуществляются также в соответствии с их величинами Кг,*С.

При введении животным убихинона было установлено, что, несмотря на незначительное увеличение его абсолютного количества, повышается уровень природных антиокисдантов. При этом возможно влияние убихинона и на некоторые внутриклеточные процессы. Так, И.К.Коломийцева, Е.Г.Новоселова /1978/ обнаружили, что нагрузка животных убихиноном Од ведет а активации биосинтеза эндогенного убихинона и подавляет биосинтез холестерина. Авторы обращают внимание на возрастание количества фосфолипидов в митохондриях при нагрузке убихиноном и облучении. Убихинон модифицирует ли-пидный состав мембран по неизвестным в настоящее время механизмам, однако, как указывают авторы, можно думать, что встраивание Од в мембраны органелл, влияние на белок-липидные взаимодействия и заряд мембран играют значительную роль наряду с влиянием на синтез и распад липидов.

Сравнивая собственные экспериментальные результаты с литературными данными по изучению ингибирования митохондриального перекисного окисления убихиноном и убихинолом, можно заключить, что именно восстановленная форма убихинона может активно функционировать в митохондриях как антиоксидант. Как показано нами на липосомах, убихинол Qg почти так же активен в процессах перекисного окисления липидов, как и токоферол.

Другой аспект данной работы связан с возможностью использования убихинона как стабилизатора мембранных процессов при лучевом воздействии. При добавлении убихинона к митохондриям увеличивается скорость потребления кислорода по сравнению с исходной величиной как у облученных, так и у контрольных животных. Разобщающий эффект классических ингибиторов окислительного фосфорили-рования снижается в присутствии убихинона как в облученных, так и в контрольных митохондриях. Защитное действие заключается, по всей вероятности, в торможении процесса перекисного окисления фосфолипидов мембран.

В заключение хотелось бы отметить, что концентрация убихинона в клетке на порядок превышает концентрацию токоферола, и, следовательно, убихинон является важным звеном в системе анти-оксидантов. Поскольку в организме только токоферол существует преимущественно в фенольной форме, имеющей наибольшее значение Кг», то можно ожидать, что в первую очередь среди ПА будет расходоваться токоферол. Недостаток одного антиокисданта вызывает расходование других ПА, имеющих даже более низкие константы К^, но присутствующие в большем количестве. При этом важно учитывать, что убихинон как природный антиокисдант может синтезироваться в организме de novo,тогда как токоферол in vi-уоне синтезируется, а поступает в готовом виде./Т.Терруан, 1969/. Поэтому при недостатке токоферола убихинон и витамин К могут переходить в восстановленные формы, которые в организме осуществляют роль эффективных антиокисдантов.

Согласно представленным в работе данным, восстановленный убихинон по своей антиокислительной активности сравним с токоферолом, а вклад убихинона в сумму антиокисдантов клетки будет зависеть от соотношения окисленной и восстановленной форм. Вполне очевидно, что в митохондриях уровень восстановленного убихинона находится в связи с концентрацией восстановленных эквивалентов в клетке, то есть зависит от восстановленности цепи транспорта электронов. Возможно, что в этом заключается суть установленной зависимости устойчивости клеток и организма к повреждающим воздействиям от уровня в них восстановленных эквивалентов /

Особый интерес вызывает выдвинутое на основании теоретических данных и обнаруженное в эксперименте радиозащитное действие убихинона. Наиболее эффективным было введение убихинона задолго до облучения (4-10 часов) на фоне активированной многокомпонентной системы антиоксидантов. Введение его на пролонгирующем растворителе делает его эффективным препаратом в случае комплексной защиты от лучевого повреждения как на молекулярном уровне, так и на уровне всего организма. Обнаруженный нами защитный эффект убихинона углубляет и расширяет современные представления о механизме его действия как одного из представителей биоантиоксидантов, выступающего в роли радиомодификатора. Это может быть полезным как в фундаментальной радиобиологии, так и при практическом применении в клинике радиационных поражений.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Заславский, Юрий Самуилович, Пущино

1. Аристархова С.А., Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Изучение ингибирующей активности токоферола. Изв. АН СССР, сер. хим. 1972, № 12, с.2714-2718.

2. Аристархова С.А., Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Вклад токоферола в антирадикальные и антиокислительные свойства липидов печени. Биофизика, 1973, т.18, в.5, с.857-861.

3. Архипенко Ю.В., Добрина С.К., Каган В.Е., Козлов Ю.П., Надиров Н.К., Писарев В.А., Ритов В.Б., Хафизов Р.Х. Стабилизирующее действие витамина Е на биологические мембраны при пере-кисном окислении липидов. Биохимия, 1977, т.42, № 8, с.1525-1531.

4. Архипова Г.В. Исследование состава липидов различных по радиочувствительности органов и клеточных органелл на ранних стадиях лучевого поражения. Дис.канд.биол.наук. М., 1975, с.192.

5. Бурлакова Е.Б., Дзантиев Б.Г., Зефирова А.К., Сергеев Г.В., Эмануэль Н.М. Термическое и радиолитическое окисление метил-олеата. Изв. ВУЗ. Сер. хим. и хим.техн., i960, № 2, с.265-269.

6. Бурлакова Е.Б., Дзюба Н.М., Пальмина Н.П. Синтетические ингибиторы и природные антиоксиданты. Биофизика, 1965, т.10, № 5, с.766-769.

7. Бурлакова Е.Б., Дзюба Н.М., Пальмина Н.П. Свободнорадикаль-ные процессы в биологических системах. М., Наука, 1966, с.202.

8. Бурлакова Е.Б. Связь изменений структуры и функций мембран с окислительными реакциями в липидах. 3-й Всесоюзн. биохим.съезд: тезисы симп. докл., Рига: Зинатне, 1974, с.184.

9. Бурлакова Е.Б., Алесенко A.B., Молочкина Е.М. Биоакти-оксвданты в лучевом поражении и злокачественном росте. М., Наука, 1975, с.212.

10. Бурлакова Е.Б. Биоактиоксвданты и синтетические ингибиторы радикальных реакций. Успехи химии. 1975а, т.44, № 10,) с.874-886.

11. Бейли Н. Статистические методы в биологии. М.: ИЛ, 1964. - 317 с.

12. Биленко М.В. Теоретические и экспериментальные обоснования применения антиоксидантной терапии для профилактики остарых ишемических повреждений в органах. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука, 1982, с.195.

13. Бинюков В.И., Барунова С.Ф., Гольфельд М.Т., Жукова Л.Г., Кудлай Д.Г., Кузнецов А.Н., Шапиро А.Б., Островский Д.Н. Исследование структурных переходов в биологических мембранах методом спинового зонда. Биохимия, 1971, т.36, № 6, с.1149-1152.

14. Бинюков В.И. Исследование состояния и пространственной структуры компонентов биологических мембран методом радиоспектроскопии. Автореф.дис.канд.биол.наук. Москва, 1974, 124 с.

15. Будницкая Е.В., Борисова И.Г. В кн.: "Роль перекисей и кислорода в начальных стадиях радиобиологического эффекта". М., i960, с.85.

16. Вассерман А.Н. Элементарное строение, реакционная способность стабильных радикалов и их использование в качестве парамагнитного зонда. Дис.канд.хим.наук. - Москва, 1968, 152 с.

17. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липи-дов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972, 252 с.

18. Владимиров Ю.А., Оленев В.И., Суслова Т.Б., Потапенко А.Я. Механизмы перекисного окисления липидов и его действие на биологические мембраны. Биофизика - итоги науки и техники. 1975, с.5, с.56-117.

19. Воскобойников Г.В. Окислительный ресинтез и некоторые реакции АТФ в тканях облученных животных. Автореф. Дис.докт. биол.наук. - Ленинград, 1971, 245 с.

20. Голощапов А.Н., Бурлакова Е.Б. Исследование микровязкости и структурных переходов в липидах и белках клеточных мембран методом спиновых зондов. Биофизика, 1975, т.20, с,816-620.

21. Гольдфельд Н.Г. Исследование биологических.мембран и модельных гетерогенных микрогетерогенных систем с помощью иминоксиль-ных стабильных свободных радикалов. Дис.канд.хим.наук. - Москва, 1970, - 125 с.

22. Грибанов Г.А. Структура и биологическое значение фосфоли-пидов. Успехи современной биологии. 1975, т.80, в.З, с.382-399.

23. Губский Ю.И. Регуляция перекисного окисления липидов в биологических мембранах. Биохимия животных и человека. Киев, 1978, вып.2, с.72-84.

24. Даниленко М.В., 1урневич A.M. В кн.: Клиническое применение димексида. Киев: Здоровье, 1976, с.25-31.

25. Данилов B.C., Козлов Ю.П. 0 механизмах природной и модифицированной радиочувствительности. МГУ, 1973, с.14.

26. Демидова Г.Г., Ткаченко З.И., Чеботарев Е.Е. Реакция мито- . хондрий при лучевых поражениях. Радиобиология, 1974, 14, 6, 847-851.

27. Донченко Г.В., Чаговец Р.В., Чернухина Л.А., Золоташко О.М. Взаимопревращения убихинона и убихроменола в печени крыс под влиянием -токоферола. Биохимия, 1978, т.43, в.2, с.221-228.

28. Донченко Г.В., Метальникова Н.П., Кругликова A.A., Чаговец Р.В. Изучение взаимосвязи витамина Е с биосинтезом убихинона из различных предшественников. Докл. АН УССР, 1980, т.6, № 9, с.71-73.

29. Журавлев А.И. Роль перекиси и кислорода в начальных стадиях радиобиологического эффекта. М., Изд-во АН СССР, I960, с.56.

30. Журавлев А.И. Биоантиокислители в животном организме. -М.: Наука, 1975, с.240.

31. Иванов И.И., Мерзляк М.Н., Тарусов Б.Н. Витамин Е, биологическая роль в связи с антиоксидантными свойствами. В кн.: Биоантиокислители, М.: Наука, 1975, с.30-53.

32. Иванов И.Ф. 0 роли токоферола в допоражагацем эффекте пострадиационной гипероксии. Радиобиология, 1976, т.16, № 5, с.773-776.

33. Казначеев Ю.С., Коломийцева И.К. Ранние радиационные нарушения обмена холестерина в органеллах клеток печени крыс. Радиобиология, 1975, в.15, № 3, с.452-454.

34. Калмыкова В.И. Витамины-антиоксиданты в патогенезе и терапии атеросклероза и ишемической болезни сердца. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука, 1982, с.181.

35. Карножицкий В.А. Биохимическое значение перекисей липидов.« Успехи химии, 1972, т.41, вып.8, с.1392-1430.

36. Козлов Ю.П., Данилов B.C., Каган В.Е., Ситковский М.В. Свободнорадикальное окисление липидов в биологических мембранах.-Изд. МГУ, 1972, с.88.

37. Коломийцева И.Е., Васильев A.B., Кузин A.M. Исследование включения ацетата 2"~^-С в фосфолипиды и холестерин субклеточных структур печени крыс после рентгеновского облучения. -Радиобиология, 1972, т.12, в.5, с.746-748.

38. Кудряшов Ю.Б. Роль липидных радиотоксинов в лучевом токсическом эффекте. М.: Атомиздат, 1966, - 105 с.

39. Кудряшов Ю.Б., Гончаренко E.H. Роль биологически активных веществ радиотоксинов в лучевом поражении. Радиобиология, 1970, т.10, в.2, с.212-229.

40. Кузин A.M. Структурно-метаболическая гипотеза в радиобиологии. М., Наука, 1970, с.112

41. Кузин A.M., Копылов В.А. Радиотоксины. М. Наука, 1983, с.175.

42. Кузнецов A.M. Метод спинового зонда. М.: Наука, 1976.204 с.

43. Литовченко И.Н. Окислительное фосфорилирование и аденило-вые нуклеотиды при воздействии рентгеновских лучей. Автореф. дис. на соиск. учен, степени канд.мед.наук. Одесса, 1973.

44. Манойлов С.Е. Первичные механизмы биологического действия проникающей радиации. С., "Медицина", 1968.

45. Медведев Б.И. Роль липидов биомембран митохондрий в радиационном нарушении транспорта ионов. Дис.канд.биол.наук.- Пущино, 1975, 145 с.

46. Мерзляк М.Н., Гольддатейн Н.И., Бекенева Г.П., Бузас С.К., Иванов И.И., Тарусов Б.Н. В сб.: Механизмы природной и модифицированной радиочувствительности, М., Изд-во МГУ, 1973, с.25-30.

47. Мерзляк М.Н., Басенова А.Т., Кауров Ю.Н., Иванов И.И. Участие токоферола в процессах перекисного окисления. В кн.: Биоантиокислители, М.: Наука, 1975, с.161-175.

48. Матусис И.И. Некоторые вопросы эволюции функций витаминов группы К. Витамины, I97Q* вып.5, с.154-168.

49. Матусис И.И., Грубе^С.Б., КирееваВ.Ф., Дергунова Н.Д. 0 значении антиоксидантных свойств -токоферола для его действия в животном организме. В кн.: Биоантиокислители, М.: Наука, 1975, с.82-87.

50. Микельсаар X., Северина И.И., Скулачев В.П. Фосфолипиды и окислительное фосфорилирование. Успехи современной биологии.1974, т.78, в.З, с.348-371.

51. Наумов В.А., Хралова Н.Г. Исследование взаимодействия убихинона и убихинола с перекисными радикалами хемилюминесцентным методом. Биофизика, 1983, вып.5, с.730-736

52. Новоселова Е.Г., Коломийцева И.К. Ранние радиационные нарушения метаболизма холестерина, сквалена и убихинона в печени крыс. Радиобиология, 1976, т.16, вып.4, с.606.

53. Новоселова Ё.Г. Регуляция метаболизма холестерина биомембран печени при лучевом поражении. Дис.канд,биол.наук. - Пущино, 1978, - 120 с.

54. Обухова JI.K. Химические геропротекторы и проблемы увеличения продолжительности жизни. Успехи химии, 1975, т.44, вып.10, с.1914-1929.

55. Островский Д.Н. Молекулярная организация биологических мембран. В кн.: Биомембраны: структура, функции, методы исследования, Рига: Зинатне, 1977, с.5-27.

56. Павловская Т.Е., Топчур A.M., Волкова Н.С., Слободская В.П., Харченко Л.И.„Некоторые вопросы радиационных повреждений в тонких слоях, включающих биополимеры. Радиобиология. Инф.бюлл. 1974, № 14, с.35-39.

57. Пальмина Н.П. Изучение изменения антиокислительной активности липидов некоторых органов мышей в ранние сроки после облучения и действие ингибиторов радикальных процессов. Радиобиология, 1972, т.12, № 5, с.737-742.

58. Петрусевич Ю.М. Антиокислительные свойства фенолов растительного и животного происхождения. В кн.: Биоантиокислители. М.: Наука, 1975, с.247-251.

59. Покровский A.A., Лашнева Н.В., Конь И.Я. Ингибирукяцее действие ретинола на ПОЛ в микросомах печени. ДАН СССР, 1974, т.217, № 3, с.1435-1438.

60. Райхман Л.М. Участие хинонов в окислительном фосфорилиро-вании. Дис.канд.хим.наук. Москва, 1967, - 183 с.

61. Розанцев Э.Г. Препаративный синтез 2,2,6,6-тетраметил-4--оксипиперидин-1-оксила. Изв. АН СССР, сер. хим., 1964, т.6, № 12, с.2218-2321.

62. Романцев Е.Ф., Козырева Е.В., Митюшин В.М. Коэффициент дыхательного контроля и ультраструктура митохондрий печени облученных крыс. Радиобиология, 1969, в.9, № 2, с.213-217.

63. Савицкий И.В., Литовченко И.Н. Окислительное фосфорилиро-вание и адениловые нуклеотиды в печени крыс при лучевой болезни. Радиобиология, 1976, L6, I, с.16-20.

64. Сергеев П.В., Сейфулла Р.Д., Майский А.И. Молекулярные аспекты действия стероидных гормонов. М.: Наука, I97J, с.220.

65. Ситковский М.В. Изучение перекисного окисления липидов в связи с липид-белковыми взаимодействиями в биологических мембранах. Дис.канд.биол.наук. - Москва, 1973, - 158 с.

66. В.П.Скулачев. Соотношение окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи, М. Наука, 1962.

67. В.П.Скулачев. Аккумуляция энергии в клетке, М. Наука,1969.

68. Стрелина A.B., Манина A.A., Ватюто Т.Д. Извращение тканевого дыхания и реактивные изменения ультраструктуры митохондрийклеток кишечника при транспорте аминокислот у облученных животных. Радиобиология, 1973, ^13, 4, 559-564.

69. Тарусов Б.Н. Основы биологического действия радиоактивных излучений. М.: Медгиз, 1954, с.140.

70. Т.Терруан. Взаимодействия витаминов. М. Мир, 1969, с.348.

71. Федуров В.В., Кузьменко И.В. Внутриклеточное распределение убихинона-9 в регенерирующей печени. Вопросы мед.химии. 1974, т.XX, вып.2, с.172-178.

72. Халмурадов А.Г., Тоцкий В.Н., Чаговец Р.В. Транспорт жирорастворимых витаминов. Киев.: Наукова думка. 1980, 213 с.

73. Хамидов Д.Х., Саихов Р.Т., Мирахмедов А.К. Ультраструктура клеток аденогипофизаь при действии ионизирующей радиации. -Радиобиология, 1973, 13, 4, 537-540.

74. Хансон К.П. К вопросу о влиянии общего рентгеновского облучения на процессы сопряженного окислительного фосфорилирования и некоторые механизмы их регуляции в митохондриях печени крыс. -Радиобиология, 1965, 5, I, 44-48.

75. Храпова Н.Г. Кинетические характеристики токоферолов как регуляторов ПОЛ. В кн.: Липиды, структура, биосинтез, превращения и функции. М.: Наука, 1977, с.157-169.

76. Чаговец Р.В., Лахно Е.В. Актуальные вопросы биохимии витамина Е. Витамины, Киев, 1975, с.3-7.

77. Б.Чане. Количественная сторона регуляции дыхания. В кн.: Регуляция клеточного обмена, М. 1962, с.Ш-154.

78. Чернухина Л.А., Донченко Г.В., Коваленко В.Н. Содержание и распределение убихинона и убихроменола в фракции субклеточных структур печени нормальных и А-Е-авитаминозных крыс. Укр.биохим. журнал, 1974, т.46, с.514-518.

79. Шишкина Л.Н., Пальмина Н.П., Бурлакова Е.Б. Радиочувствительность нормальной и опухолевой ткани. Алма-Ата, Наука, 1974, с.78.

80. Шишкина Л.Н., Пальмина Н.П., Бурлакова Е.Б. Антиокислительная активность липидов и радиочувствительность. Радиобиология, 1976, т.16, № 2, с.230-234.

81. Шляпинтох В.Я., Карпухин О.Н., Постников Л.М., Захаров И.В., Вичутинский А.А., Уепалов В.Ф. Хемилюминесцентные методы исследования медленных химических процессов. М.: Наука, с.300, 1966.

82. Мануэль Н.М., Денисов Е.Т., Майзус З.К. Цепные реакции окисления углеводородов в жидкой фазе. М.: Наука, 1965, с.375.

83. Мануэль Н.М. Кинетика и механизм цепных реакций жидкофаз-ного окисления углеводородов. Изв. АН СССР, сер.хим., 1974, № 5, с.1056-1072.

84. Мануэль Н.М. Свободные радикалы и старение. В кн.: Геронтология и гериатрия, 1975, с.103-109.

85. Aiyar A.S., Gopalaswamy G., Sreenivasan A. Stimulation of ubiquinone biosynthesis in irradiated rats. Environ.Physiol, and Biochem. 1972, v.2, N 2, p.86-95.

86. Aiyar A.S. The effect of ionizing radiation on the transport ions and phosphorus metabolism in mitochondria. Curr. Sci., 1973, v.42, N 2, p„45.

87. Atsuta I., Okajama S. Effect of x-irradiation on phosphorus metabolism in mitochondrial. Rad.Res., 1976, v.55» N1, p.427-432.

88. Benjamin T.I., Yost H.T. The mechanism of uncoupling of oxidative phosphorilation in rat spleen and liver mitochondriaafter whole-bogy irradiation. Radiat. Res.1960, J2, 6, 613625.

89. Casey A., Bliznakov E. Ubiquinone content in peritoneal macrophages of mice. Bioch.Bioph.Acta, 1973» v.326, p.141-144.

90. Changan Yu. Ubiquinone-binding proteins. Biochimica et Biophysica Acta. 1981, v.639, p.99-128.

91. Coleman R. Physical properties of membrane lipids. -- Biochim. et biophys. Acta, 1973, v.300, N1, p.1.

92. Cu L.-Q., Yu L., Yu C.-A. Syntheses and biological activities of azido ubiquinone derivatives. Biochem. and Biophys. Res.Communs. 1983, 113, 2, 477-482.

93. M.Degli Esposti, E.Bertoli, G.lenaz. Interaction Between Ubiquinone and ATPase in Mitochondrial Membranes. Journal of Bioenergetics and Biomembranes. 1981, v.13, N1/2, 37 50.

94. Demopoulos H.B. The basic of free radical pathology.-Fed.Proc., 1973, v.32, N8, p.1859-1861.

95. Diaz I., Agana E. Oxidative phosphorylation index P/0 in developing mitochondria and gamma whole bogy irradiation.-Rad.Res., 1972, v.51, N2, p.500-501.

96. Diplock A.T. Possible stabilizing effect of vitamin E on microsomal membrane-bound, selenide-containing proteins and drug metabolozing enzyme system. Amer. J.Clin.Nutr., 1974, vol.27, N10, p.995-1004.

97. Duck-Cnong G. A reasesment of the phospholipid dependence of membrane-bound enzymes, with special reference of glucose--6-phosphatase and Na+, K+- dependent adenosine triphosphatase. -Enzyme, 1976, v.21, p.174-192.

98. Esposti M.D., Bertoli E., Lenaz G. Studies on incorporation of CoQ-homologos in mitochondrial membranes. Boll. Soc. ital• Biol.sper • 1979, v.55, 2T16, p.1612-1617.

99. Esposti M., Degli E., Bertoli E., Lenaz G. Interaction between ubiquinone and ATPase in mitochondrial membranes. J. Bioenerge biomembr. 1981, v.13, (1/2), p.37-50.

100. Emster L., Jones L.G. A study of the nucleoside tri-and diphosphate activities of rat liver mitochondrial. J.Cell. Biol., 1969, v.15, p.563-573.

101. Pestenstein G.N., Heaton P.W., Lowe I.S., Morton. A consistent of the unsaponifiable Portion of Animal tissue Lipids. Biochem. J. 1955, v.59, p.558.

102. Flamigni, Guarnieri C., Toni R., Caldarera C.M. Effect of oxygen radicals on heart mitochondrial function in -tocopherol deficient rabbits. Internat.J.Vit.Nutr.Res. 1982, v.52, p.402-406.

103. Polch L., Lees M.S., Sloane-Stanley G.H. A simple method for isolation and purification of total lipids from animal tissues. J.Biol.Chem., 1957, v.22, p.497-500.

104. Porkers K., Moore H., Lenaz G., Szarkowska K. Organic structural specificity of ubiquinone for biological activity.-Bioch.Biophys.Res.Comm. 1966, v.23, p.386.

105. Polkers K., Hakamura R., Littaru G.P., Zellweger H., Brunkhorst I.B., Williams C.W., Langston I.H. Effect of coenzyme Q on serum levels of creatine Phosphokinase in preclinical muskulär dystrophy. Proc.Nat.Acad.Sei.USA, 1974, v.71» N5, p.2098-2102.

106. Polkers K., Yamammura Y. Biomedical and clinical aspects of coenzyme Q. 1977, p.243.

107. Frankel E.H., Lipid oxidation. Progr.Lipid.Res., 1980, vol.19, N1, p.1-22.

108. Eritz J. Molecular theory of lipid membrane order. -J.Chem.Phys., 1979, vol.70, FT, p.3279-3290.

109. Gale P.H., Arison B.H., Page A.G., Folkers. Isolation and Characterisation of Q1Q. Biochemistry, 1963» v.2, p.196.

110. Grane F.L., Lester R.L., Hatefi G. Studies on the Electrone transport System.Chemical and Physical properties of the coenzyme Q. Biochem.Biophys.Acta, 1959» v.33, p.169.

111. Green D. Biochemistry of Quinones. 1965, p.405.

112. Gruger E.H., Tappel A.L. Reactions of biological antioxidants. Composition of biological membranes. Lipids, 1971, v.6, U2, p.147-158.

113. Hall I.C., Goldstein A.L., Sonnenblick B.P. Recovery of oxidative phosphorilation in rat liver mitochondria after whole body irradiation. J.Biol.Chem., 1963, 238, 3, 1137-1140.

114. HoF, H. Inability of ubiquinones to stimulate resistance of mice against infection with Listeria monocytogenes. Agents actions, 1981, v.11, N3, p.250-253.

115. Hoffmann P.C., Kunz H.W., Schmid W., Siess M. The determination of the level and redox quotient of ubiquinone. -Biochem.Zeitsch., 1964, v.339, p.54Q-558.

116. Kartha V.N.R., Krishnamurthy S. Antioxidant function of vitamin A. Int.J.Vitamin and Nutr. Res., 1978, v.47, N3, p.394-401.

117. Katiskas H., Guinn P. The polyisoprenoid chain leught influences the interaction of ubiquinone with phospholipid bilayers. BiochinuBiophys. Acta, 1982, v.689, p.363-369.

118. Kitazawa S.S.M., Ozawa T., Suzuki K., Izawa Y. Antioxidative effect of coenzyme Q-jq« Experientia, 1980, vol.36, N8, p.1002-1003.

119. Klingenberg M., Kroger A. Biochemistry of mitochondria. Acad.Press. Hew York, 1967, p.340.

120. Klingenberg M., Szarkowska L. On the role of ubiquinone in mitochondria. Biochemische Zeitschrift, 1963, v.338, p.674-697.

121. Kolomiytseva I.K., Novoselova E.G., Kuzin A.M. Parti-cipaMono of isoprenoids in primary radiation reactions of an organism. Studia Biophysica, 1975, v.53» p.141»

122. Konings A.T., Driyver E.B. Radiation effects on membranes. Vitamin E deficiency and lipid peroxidation. Radiat. Res. 1979, v.80, p.494-501.

123. Kroeger A., Klingenberg M. On the role of ubiquinone in mitochondria. Biochem.Z., 1966, v.344, p.317.

124. Masotti, A.Spisni, C.Rampohi, G.Sartor, A.Boicelli. Conformational and functional studies on CoQ. Arch. Biochem. Biophys. 1978, v.125» p.262-265.

125. Mellors A., Tappel A. The inhibition of mitochondrial peroxidation by ubiquinone and ubiquinol. J.Biol.Chem. 1966, v.241, N19, p.4353-4356.

126. Mitchell P. Coupling of phosphorylation to electron and hydrogen transfer by a chemi-osmotic type of mechanism.-Nature, 1965, v.208, p.141.

127. Morton R.A. Ubiquinones, plastoquinones and vitamins K.- Biol.Revs.Camb.Phis.Soc. 1971, v.46, N1, p.47.

128. Nilsson I., Parley T., Folkers R. Biosynthesis and levels of coenzyme Q in genetically distrophie mice. Archiv. Biochem. Biophys., 1968, v.123, p.422.

129. Olcott M.S., Van der Veen I. Comparation of antioxidant activities of tocol and its methyl derivatives. Lipids, 1968, vol.3, N4, p.331-344.

130. Olson R.E. Anabolism of the coenzyme Q family and their biological activities. Fed.Proc.1965, v.24, N1, p.85-92.

131. Olson R.E., Biosynthesis of ubiquinone in Animal. -Vitamins and Hormones, 1966, v.24, p.566.

132. Potter R.L., Bethel F.H. Oxidative phosphorilation in spleen mitochondria. Federation Proc. 1952, 1J, 3» 270274.

133. M.Pumphrey, R.Redfeam. A method for Determining the concentration of ubiquinone in mitochondrial Preparations.-- Biochem.J. 1960, 76, 61-64.•Ramasarma T. Some aspects of the metabolism of coenzyme Q in the rat. Biochem. J. 1963» v.88, p.369.

134. Ramasarma T. Studies on ubiquinone. J.Scient. and Industr. Res., 1968, v.27, p.147.

135. Ramasarma T. Lipid quinones. In "Advances in lipid research". 1968, v.6, p.170.

136. Ramasarma T. Lipid quinones • Adv.Lipid Res., 1968, v.6, p.107-180.

137. Razin S. Reconstitution of Biological membranes. -- Biochim. et biophys. acta, 1972, v.265, p.241-296.

138. Redfearu E.R., Pumphrey. Oxidation-reduction levels of ubiquinone (coenzyme Q) in different metabolic states of rat liver mitochondria. Biochem. Biophys.Res.Commun., 1961, v.3, p.650.

139. Ross E., Norling B., Person B., Ernster L. Studies with ubiquinone-depleted submitochondrial particles. Eur. J.Bio-chem. , 1970, v.lf, N3, p.508-523.

140. Sanadi D.R. Energy-linked reactions in mitochondria.-Ann.Rew.Biochem. 1965, v.31, p.21.

141. Scaife J.P. The nature of the radiation-induced lesion of the electron transport chain of thymus mitochondria. -Canad.J.Biochem., 1964, v.42, N3, p.431-434.

142. Scaife J.E. The effect of lethal doses of -irradiation on the enzymatic activity of mitochondrial cytochrome C. -Canad.J.Biochem., 1966, v,^4, H4, p.433-448.

143. Sentsuo W. Effects of irradiation on lipid peroxidation in rat organs. Okayama-igakkai-zasshi, 1973» v.85, N3, p.129-143«

144. Slater E.C. The Q cycle, anc:ubi quinones mechanism of electron transfer. Trends in Biochem.Sci. 1983, v.8, F7, p.239-242.

145. Stacpeole P.W. Mitochondria and Lipid metabolism. Plant Physiol., 1983, v.72, H1, p.170-173.

146. Suzuki, Hiroshi, King E. Evidence of an ubisemiquinone radical(s) from the NADH-ubiquinone reductase of the mitochondrial respiratory chain. J.Biol.Chem., 1983, v.258, p.352-358.

147. Takaoa M., Ikenoya S., Guzuriha T., Katayama K. Studies on reduced and oxidized coenzyme Q (ubiquinones). Biochim. et biophys. acta. 1982, v.679, N2, p.308-314.

148. Tappel A.L. Vitamin E as the biological Lipid antioxidants.- Vitamins and Hormones, 1962, vol.20, p.493-510.

149. Tappel A.L. !Dhe inhibition of mitochondrial peroxidation by ubiquinones. J.Biol.Chem. 1971, v.24, N19, p.4353-4356.

150. Tappel A.L. Lipid peroxidation damage to cell components. Ped.Proc., 1973, v.32, p.1870-1874.

151. Thomson I.S., Nahce S.L. Bordner L.P. Oxidative pho-sphorilation in liver mitochondria from -irradiated rats.-Radiat. Res., 1966, v.2£, N1, p.121-130.

152. Trumpower B.L. New Concepts on the Role of ubiquinone in the mitochondrial Respiratory chain. Journal of Bio-energetics and Biomembranes. 1981, v.13, p.1-23.

153. Van Bekkum D.W. Oxidative phosphorylation in irradiated tissues. Chem.Weckbl., 1957, v.53, p.233-235.

154. Van Bekkum D.W. Oxidative phosphorilation in some radiosensitive tissues after irradiation. Ciba Pound. Symp. Jonizing Radiation Cell Metab. 1965, p. 77-89.

155. Vinas E.J., 2-e long.interaat. Bioch, Paris, 1952,p.320.

156. Wallin L., Gow H.- Biochemistry of Quinones. 1965, p.

157. Whistance G.R., Field. Observations on the "biosynthesis of ubiquinones by animals. Europ. J. Biochem. 1971, v.18, p.46-52.

158. Witting L.A. The interrelationship of polyunsaturated fatty acids and antioxidants in vivo. Progress in the chemistry of fats and other lipids. 1970, v.9, H4, p.517-524.

159. В заключение считаю приятной возможностью выразить глубокую признательность и уважение моим научным руководителям д.б.н. профессору И.Г.Акоеву и д.б.н. профессору Е.Б.Бурлаковой, за предложенную тему и руководство работой.

160. Я благодарю к.б.н. Б.С.Фоменко, к.б.н. А.Ф.Кожокару, к.х.н. Н.Г.Храпову, к.х.н. Л.И.Шишкину и всех сотрудников лаборатории, где выполнялась диссертационная работа за постоянное внимание и помощь в работе.