Регуляция активности цитохромов Р450 химическими и физическими факторами

Гришаева, Алевтина Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Регуляция активности цитохромов Р450 химическими и физическими факторами
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Регуляция активности цитохромов Р450 химическими и физическими факторами"

□03068581

На правах рукописи

Гришанова Алевтина Юрьевна

РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ ЦИТОХРОМОВ Р450 ХИМИЧЕСКИМИ И ФИЗИЧЕСКИМИ ФАКТОРАМИ

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Новосибирск - 2007

003068581

Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательском институте молекулярной биологии и биофизики СО РАМН (Новосибирск, Россия)

Научный консультант: академик РАМН,

доктор биологических наук, профессор Ляхович Вячеслав Валентинович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор

Дыгало Николай Николаевич

доктор биологических наук Бунева Валентина Николаевна

доктор медицинских наук Кузьменко Дмитрий Иванович

Ведущая организация

Институт цитологии и генетики СО РАН (Новосибирск).

Защита диссертации состоится « » £ 2007 г. в ^^ часов на

заседании диссертационного совета Д.001.034.01 в ГУ Научно-исследовательском институте биохимии СО РАМН (630117, Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2; тел. 8 (383) 333-54-81.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Научно-исследовательского института биохимии СО РАМН.

ШУ /ua.fi П^ Автореферат диссертации разослан «_»_' 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук,

старший научный сотрудник Г.С.Русских

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Клеточные мембраны являются эффективным барьером для защиты клетки от многих токсических водорастворимых соединений, но не защищают от липофильных ксенобиотиков, которые, легко преодолевая эту границу, могут накапливаться как в самой клетке, так и ее мембране. Одним из важных механизмов защиты клетки и организма в целом от таких ксенобиотиков является биотрансформация - превращение липофильных соединений в гидрофильные и легко удаляемые из организма соединения. Метаболизм огромного числа липофильных ксенобиотиков (лекарств, канцерогенов, пищевых добавок, компонентов загрязнения окружающей среды и др.) осуществляет ферментная система, названная микросомной монооксигеназной системой со смешанными функциями (Omura, Sato, 1964). Монооксигеназная система участвует также в метаболизме гидрофобных эндогенных соединений, включающих стероиды, простагландины, жирные и желчные кислоты и другие. Биотрансформация в большинстве случаев ведет к детоксикации - образованию биологически неактивных метаболитов, однако возможна и активация - превращение нетоксичных и проканцерогеных соединений в продукты с токсическими и канцерогенными свойствами.

Широкая субстратная специфичность монооксигеназной системы обеспечивается множественными формами цитохрома Р450 (CYP) -гемопротеинами, кодируемыми суперсемейством генов CYP (Nelson et al., 1996, Nebert, Rüssel, 2002). Важным свойством многих цитохромов Р450 является их способность к увеличению активности в ответ на введение различных ксенобиотиков. С описания более 40 лет назад феномена индукции цитохрома Р450 (Conney et al., 1960, Remmer, Merker, 1963) впервые возникло представление о множественности форм цитохрома Р450. По современной номенклатуре все многообразие цитохромов Р450 разделено на семейства и подсемейства (Nebert, Rüssel, 2002). У млекопитающих насчитывается 17 различных семейств, 4 из которых (СУР 1-4) кодируют ферменты, метаболизирующие ксенобиотики. Особый интерес представляют подсемейства CYP1 A, CYP2B, CYP2C и CYP3A, которые являются главными компонентами микросомной монооксигеназной системы печени млекопитающих. CYP3A, CYP2C и CYP2B участвуют в метаболизме подавляющего числа лекарств, a CYP1A осуществляют метаболическую активацию многих соединений, превращая их в продукты с токсическими и канцерогенными свойствами.

Среди индукторов цитохромов Р450 выделяют несколько групп, различающихся по спектру индуцируемых ими форм цитохрома Р450, типичными представителями которых являются полициклические ароматические углеводороды (ПАУ) и галогенированные диоксины, барбитураты, рифампицин и дексаметазон, этанол, клофибрат.

К настоящему времени накоплены обширные сведения об индукции цитохромов Р450 подсемейства 1А (CYP1A1 и CYP1A2) такими ксенобиотками, как ПАУ и галогенированные диоксины, которые активируют транскрипцию генов CYP1A через путь сигнальной трансдукции, зависимый от арилгидрокарбонового рецептора (AhR). Индукторами цитохромов Р450 подсемейства 2В является огромное число структурно неродственных соединений. В механизмах регуляции генов CYP2B главную роль транскрипционных факторов играют ядерные рецепторы - CAR (конститутивный андростановый рецептор) и PXR (прегнановый X рецептор). Гены CYP2A, CYP2C и CYP3A регулируются с участием GR (глюкокортикоидный рецептор), а также PXR и CAR (Honkakoski P., Negishi M., 2000).

С тех пор, как был описан феномен индукции цитохрома Р450, в список индукторов включены уже сотни химических соединений. Однако исследование спектра соединений, которые могут индуцировать различные формы цитохрома Р450, по-прежнему актуально. Исследования последних десятилетий показывают, что индукторами CYP1A являются не только ПАУ и диоксины с планарной структурой, но и соединения иных химических классов (индолы, каротиноиды) (Denison M.S., Nagy S.R., 2003; Krusekopf S. et al., 2003).

Необходимость изучения индуцирующих свойств ранее не исследовавшихся химических соединений определяется функциональной значимостью цитохромов Р450 в детоксикации разнообразных ксенобиотиков и метаболической активации многих соединений в активные канцерогены. Важно знать, как влияют на активность цитохромов Р450 те соединения, которые будут использовать в медицине в качестве лекарственных препаратов или ином качестве, потому что в результате индукции или ингибирования цитохромов Р450 могут изменяться фармакокинетические характеристики лекарств, развиваться токсические последствия. Особый интерес представляют витамины, которые используются не только в качестве микронутриентов, но и в лечебных целях.

Вопрос о том, как физические воздействия на организм влияют на ферменты монооксигеназной системы, долгое время был вне интересов исследователей. Первые сообщения об изменении активности цитохрома Р450 в печени экспериментальных животных в отсутствие химических индукторов появилось в 1988 году (Marin, et al., 1988, Okamoto, et al., 1993). Индукция P450 в отсутствие экзогенного химического индуктора была получена также на культурах клеток (кератиноцитах, клетках гепатом). Такие воздействия, как гидродинамический сдвиг, суспендирование культуры в среде с метилцеллюлозой, ультрафиолет и температура приводили к увеличению в клетках активности CYP1A1 (Monk, et al., 2001, Gonzalez, et al., 2001, Feng, et al., 2002). Одним из главных условий формирования физиологического ответа на физические воздействия является запуск биохимических реакций биологически активными продуктами, полученными

или освобожденными из физиологического «депо» под действием физических факторов. В случае индукции цитохромов Р450 при действии физических факторов логично предполагать наличие эндогенных медиаторов, опосредующих запуск экспрессии соответствующих генов.

Целью настоящей работы являлось исследование влияния химических соединений и физических воздействий на монооксигеназную систему печени экспериментальных животных и выяснение механизмов, лежащих в основе возможного модулирующего действия этих факторов на цитохромы Р450 подсемейства1А.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Охарактеризовать влияние на микросомную монооксигеназную систему печени крыс химических соединений, важных для медицинской практики (перфтордекалина, нифедипина, менадиона, а-токоферола, кверцетина, билирубина), и сравнить с характеристиками монооксигеназной системы при введении животным классических индукторов цитохромов Р450 подсемейства 2В (фенобарбитала) и подсемейства 1А (бензо(а)пирена или 3-метилхолантрена).

2. Исследовать механизм индукции цитохромов Р450 подсемейства 1А под действием тех соединений, которые обнаружат способность увеличивать активность этих ферментов. Для этого оценить способность таких соединений вызывать изменение уровней мРНК СУР1А1 и СУР1А2 и белка СУР1А1 и СУР1А2 и исследовать влияние этих соединений на ДНК-связывающую способность АЬ рецептора.

3. Исследовать активность цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени крыс при совместном введении классического индуктора и тех соединений, которые обнаружат способность индуцировать цитохромы Р450 подсемейства 1А.

4. Охарактеризовать микросомную монооксигеназную систему печени крыс, подвергавшихся действию физических факторов, различных по своей природе: сверхвысокочастотных электромагнитных колебаний сантиметрового диапазона, низкоинтенсивного лазерного импульсного излучения инфракрасной области спектра, низкоинтенсивного ультразвука, ионизирующего излучения в малых дозах, умеренно низкой температуры.

5. Исследовать механизм индукции цитохромов Р450 подсемейства 1А под действием тех физических факторов, которые будут влиять на активность этих ферментов, и исследовать роль эндогенных соединений в индукции Р450 подсемейства 1А под действием физических факторов.

Основные положения работы, выносимые на защиту.

1. Перфтордекалин, основной компонент искусственной кровезамещающей среды с газотранспортными свойствами, и лекарственный препарат нифедипин оказывают влияние на ферменты монооксигеназной системы, сходное с действием фенобарбитала, увеличивая содержание CYP2B1/2B2 в микросомах печени экспериментальных животных и активность CYP2B1. Кроме этого, нифедипин при длительном введении увеличивает активность CYP3A. a-Токоферол, менадион, пиридин, и пиридин-К-оксид, являются индукторами ферментов биотрансформации ксенобиотиков смешанного типа, увеличивая активность CYP1A1, CYP1A2 и CYP2B1 в печени крыс.

2. Индукция CYP1A1 и CYP1A2 менадионом и CYP1A1 билирубином в печени крыс осуществляется на транскрипционном уровне с вовлечением сигнального пути Ah-рецептора. Под действием а-токоферола индукция CYP1A1 реализуется как на транскрипционном уровне с участием AhR-зависимого пути сигнальной трансдукции, так и на посттранскрипционном, а индукция CYP1A2 — на посттранскрипционном уровне.

3. a-Токоферол, менадион и кверцетин гп vivo снижают индуцирующее действие бензо(а)пирена на активность CYP1A1 и CYP1A2. Ингибирование БП-индуцированных активностей CYP1A1 и CYP1A2 менадионом и кверцетином происходит вследствие снижения уровней мРНК CYP1A1 и CYP1A2. Ингибирующий эффект менадиона и кверцетина на экспрессию генов CYP1A1 и CYP1A2 может быть следствием снижения ДНК-связывающей способности AhR.

4. Физические факторы, различные по своей природе, при воздействии на организм экспериментальных животных вызывают изменение активности различных форм цитохрома Р450 в печени: под влиянием электромагнитных колебаний сантиметрового диапазона изменяются активности CYP2A, CYP2C11, CYP3A, лазерного импульсного ИК излучения - CYP2B1, CYP2A, CYP2C11, CYP3A, низкоинтенсивного ультразвука - CYP1A1, CYP2A, CYP2C11, ионизирующего излучения в малых дозах - CYP1A2, CYP2A, CYP2C11, умеренно низкой температуры - CYP1 Al, CYP1A2, CYP2B1, CYP2C, CYP3A, CYP2E1.

6. Роль эндогенных посредников в индукции CYP1A1 в печени под действием холода может выполнять а-токоферол, a под действием ультразвука - билирубин.

Научная новизна

В работе впервые проведено исследование влияния перфтордекалина и нифедипина на ферменты монооксигеназной системы печени. Показано, что перфтордекалин является мощным индуктором фенобарбиталового типа, значительно увеличивающим активность CYP2B1. Показано, что нифедипин при длительном введении вызывает индукцию CYP2B1 и CYP3A.

Впервые показана способность пиридина, пиридин-№оксида, а-токоферола и менадиона - соединений, непохожих по структуре на классические индукторы CYP1A, увеличивать активность CYP1A1 и CYP1A2 в печени крыс. Установлены механизмы увеличения активности CYP1AI и CYPIA2 под действием менадиона и а-токоферола: индуцирующее влияние менадиона реализуется на транскрипционном уровне через AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции, а индукция а-токоферолом осуществляется как на транскрипционном уровне через AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции, так и на посттранскрипционном уровне.

Впервые установлено, что билирубин in vivo регулирует экспрессию гена CYP1A1 AhR-зависимым путем.

Показана способность а-токоферола, менадиона и кверцетина ингибировать in vivo индуцируемые бензо(а)пиреном активности CYP1A1 и CYP1A2. Установлен механизм, лежащий в основе ингибирующего эффекта менадиона и кверцетина на бензо(а)пирен-опосредованную индукцию CYP1A1 и CYP1A2, который реализуется на транскрипционном уровне. Ингибирование менадионом и кверцетином бензо(а)пирен-индуцируемых CYP1A1 и CYP1A2 связано со снижения ДНК-связывающей способности AhR.

В работе проведено исследование in vivo влияния различных по природе физических факторов на ферменты монооксигеназной системы печени и впервые показано, что действие физических факторов на организм вызывает изменение активности различных форм цитохрома Р450 в печени.

Обнаружено индуцирующее влияние ультразвука и холода на активность CYP1A1 печени крыс. Показано, что регуляция CYP1A1 в печени при ультразвуковом воздействии осуществляется на транскрипционном уровне AhR-зависимым путем, и одним из эндогенных посредников в индукции CYP1A1 под действием ультразвука является билирубин. Установлен механизм индукции CYP1A1 в печени при воздействии на организм холода, который состоит в транскрипционной активации гена CYP1A1 с участием AhR. Показано, что эндогенным посредником в индукции CYP1 Al под действием холода может быть а-токоферол.

Научная и практическая значимость.

Настоящая работа вносит вклад в развитие фундаментальных знаний об индукции цитохромов Р450. В результате исследования влияния химических соединений на активность монооксигеназной системы в список индукторов

цитохромов Р450 подсемейства 1А включены соединения, отличающиеся по химической структуре от классических ПАУ и диоксинов - это пиридин и пиридин-М-оксид, обладающие сильными индуцирующими свойствами, а также а-токоферол (витамин Е), менадион (витамин К3) и билирубин, являющиеся слабыми индукторами СУР1 А.

Полученные в работе данные демонстрируют неизвестные ранее последствия длительного применения витаминов Е и К3 в больших дозах -активацию экспрессии генов СУРЫ подсемейства, имеющего отношение к метаболизму проканцерогенов.

Данные о снижении индуцирующего действия бензо(а)пирена на экспрессию генов СУР1А1 и СУР1А2 менадионом и кверцетином могут служить теоретической основой для исследования природных слабых индукторов СУР1А и/или активаторов АЬЯ-зависимого пути сигнальной трансдукции. Такие соединения могут быть использованы для предотвращения возникновения и пролиферации гормон-зависимых опухолей за счет перекреста АИЯ-зависимого пути с путями сигнальной трансдукции рецепторов стероидных гормонов, и, возможно, возникновения опухолей, индуцированных полициклическими ароматическими углеводоролами.

Данные об индукции цитохромов Р450 подсемейств 2В и ЗА нифедипином, широко использующимся лекарственным препаратом, указывают на возможность изменения фармакокинетики лекарств, являющихся субстратами этих форм цитохрома Р450, при одновременном их применении с нифедипином.

Полученные в период доклинических исследований данные о характере влияния перфтордеклина - одного из главных компонентов препарата искусственной крови «Перфторан», на монооксигеназную систему печени, позволили исключить возможность негативных последствий действия препарата на ферменты метаболизма ксенобиотиков. Показан фенобарбиталовый тип индукции цитохрома Р450 перфтордекалином и доказано отсутствие индукции форм цитохрома Р450, ответственных за активацию проканцерогенов и протоксинов.

Исследование активности монооксигеназной системы в печени экспериментальных животных, подвергавшихся воздействию физическими факторами, показало, что индукция цитохромов Р450 является адаптивным ответом не только на чужеродные соединения, попадающие в клетки печени, но и на физические факторы, воздействующие на организм. В отсутствие экзогенных химических соединений роль индукторов цитохромов Р450 могут выполнять эндогенные соединения, уровень которых в организме повышается в ответ на физическое воздействие. Это необходимо учитывать при использовании физических воздействий в терапии. В комплексном лечении с использованием лекарственных препаратов и физиотерапии возможно изменение активности ряда форм цитохрома Р450 и, как следствие,

изменении фармакокинетики лекарств, что может сказаться на эффективности лекарственной терапии.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены на 7-й, 8-й Международных конференциях по биохимии, биофизике цитохрома Р450 (Москва, Россия, 1991; Лиссабон, Португалия, 1993); 5-й Всесоюзной конференции "Цитохром Р450 и модификация макромолекул" (Ялта, 1989); 3-м Международном симпозиуме по метаболизму чужеродных соединений (Лондон, Англия, 1989); 8-й Международном симпозиуме по микросомам и окислению лекарств (Стокгольм, Швеция,1990); 3-м Международном КБХ симпозиуме по метаболизму лекарств (Амстердам, Голландия, 1991); Международном симпозиуме «Прогресс во внепеченочном метаболизме (Роннеби, Швеция, 1991); Международной конференции "Изоферменты: Организация и роль в эволюции» (Новосибирск,1991); Республиканском симпозиуме "Монооксигеназная система - теоретические и прикладные аспекты" (Ташкент, Узбекистан, 1992); 4-м, 5-м Европейских 188Х симпозиумах (Болонья, Италия, 1992; Тур, Франция, 1993); 3-м Всемирном конгрессе международного общества по адаптивной медицине (Токио, Япония, 1993); 2-м Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2000); 18-м Международном конгрессе по биохимии и молекулярной биологии (Бирменгем, Англия, 2000); 10-м Греческом фармакологическом конгрессе (Афины, Греция, 2001); Национальной научно-практической конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск,

2001); 3-м Съезде биохимического общества России (Санкт-Петербург,

2002); 4-м Съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2002); 7-й Конференции международного общества по биохимии и молекулярной биологии «Лиганд-рецепторные взаимодейстсвия» (Берген, Норвегия, 2002); Международной конференции «Реактивные формы кислорода и азота, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 2003); 13-й Международной конференции по биохимии и биофизике цитохрома Р450 и метаболизму лекарств (Прага, Чешская Республика, 2003).

Работа выполнена при частичной финансовой поддержке грантов РФФИ N 96-04-50209, N 02-04-48639, N 05-04-48327.

Публикации. По теме диссертации опубликована 71 научная работа. В ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК, опубликовано 35 статей.

Структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, литературного обзора, главы "Материалы и методы", 6 глав результатов исследований и их обсуждения, заключения и выводов. Она изложена на 219 страницах машинописного текста, включая 30 таблиц и 42 рисунка. Список цитируемой литературы содержит 499 источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на крысах самцах линии Вистар, массой 100 - 250 г из питомников ГУ НИИ цитологии и генетики СО РАН (Новосибирск) и СО РАМН (Новосибирск). Животных содержали на стандартной лабораторной диете и давали воду ad libitum. Крысы голодали сутки перед забоем и животных декапитировали под легким эфирным наркозом.

Экспериментальные процедуры с животными

Классические индукторы цитохромов Р450 вводили внутрибрюшинно: фенобарбитал — по 80 мг на кг массы тела в физиологическом растворе внутрибрюшинно в течение 4 дней ежедневно, бензо(а)пирен - 5 мг на кг массы тела в масле внутрибрюшинно в течение 3 суток, 3-метилхолантрен -25 мг на кг массы тела в масле внутрибрюшинно в течение 3 суток.

Перфтордекалин в виде 10% эмульсии, приготовленной из блок-сополимера этилен и пропилен оксидов (2,6 г на 100 мл раствора) в солевом растворе, содержащем Na+, К+, Са2+, Mg2+, НСОЗ", СГ глюкозу и в концентрациях, сходных с таковыми в плазме крови крыс, рН 7,4, вводили внутривенно однократно за 3 дня до забоя в дозе 10 мл на кг массы тела.

Пиридин в дозе 200 мг/кг массы тела и пиридин-ТЯ-оксид в дозе 100 мг/кг массы в физиологическом растворе вводили однократно внутрибрюшинно. Через 24 ч после инъекции животных забивали.

Нифедипин, растворенный в воде с несколькими каплями Твин-80, вводили внутрибрюшинно в дозе 10 мг на кг массы тела ежедневно в течение 20 дней. Контрольные животные получали такой же объем воды с несколькими каплями Твин-80.

Билирубин в физиологическом растворе вводили крысам Вистар внутривенно в хвостовую вену из расчета 0,25 мг на кг массы и декапитировали через 1, 2, 4, 8, 16 и 24 ч под эфирным наркозом. Контрольным животным вводили такой же объем 0,9% раствора NaCl.

Для исследования дозовой и временной зависимости эффектов а-токоферола на ферменты монооксигеназной системы, экспериментальным животным вводили per os 30% раствор а-токоферол-ацетата в масле в дозе 150 мг/кг массы тела в сутки в течение 1, 4, 8 и 12 суток, либо в течение 4 суток в дозах 10, 30, 70, 150 и 300 мг/кг.

Для исследования дозовой и временной зависимости эффектов менадиона на ферменты монооксигеназной системы, экспериментальным животным вводили per os 5% раствор менадиона в масле в дозе 30 мг/кг массы тела в сутки в течение 1, 4, 8, 12 и 17 суток, либо в течение 4 суток в дозах 1, 3, 7, 15 и 30 мг/кг.

Кверцетин экспериментальные животные получали per os в виде 5% раствора в масле в дозе 80 мг/кг массы тела ежедневно в течение 3 суток.

При исследовании активности CYP1A1 и CYP1A2 при совместном введении бензо(а)пирена и а-токоферола или менадиона, или кверцетина животным вводили одновременно внутрибрюшинно бензо(а)пирен в течение

3-х суток в дозе 5 мг/кг массы тела и per os в течение 4-х суток а-токоферол (70 мг/кг массы тела), или менадион (15 мг/кг массы тела), или кверцетин (80 мг/кг массы тела), начиная с первых суток введения бензо(а)пирена. Доза и длительность введения а-токоферола и менадиона были выбраны на основании полученных данных об их максимальном индуцирующем эффекте на исследуемые ферменты.

Источником ультразвука был аппарат «Ультразвук 102» (Россия). Ультразвуковое воздействие частотой 0,87 МГц и интенсивностью 0,4 Вт/см осуществляли контактным способом на депилированную область печени крыс (площадь ~ 2 см2) крыс 10 мин ежедневно в течение 5 дней. В отдельной серии экспериментов такое воздействием осуществляли однократно и животных забивали через 1, 2, 4, 8, 12, 16 и 24 ч. Контрольным животным депилировали область правого подреберья и прикладывали ультразвуковой излучатель на 10 мин, не включая аппарат.

Источником сантиметровых волн служил аппарат для микроволновой терапии «Луч-3» с цилиндрическим излучателем диаметром 1 см. Крысам облучали депилированую область правого подреберья контактным способом в течение 2 мин через день, всего 5 воздействий мощностью 2,5 Вт. Контрольным животным депилировали область правого подреберья и прикладывали излучатель на 2 минуты, не включая аппарат.

Источником лазерного излучения (длина волны 0,89 мкм, частота 300 Гц) служила установка "Узор" с полупроводниковым излучателем галлий-арсенид. Воздействовали на депилированную область печени крыс контактно, всего 5 ежедневных процедур экспозицией 4 минуты, интенсивностью 3 мВт/см2. Контрольным животным депилировали область правого подреберья и прикладывали излучатель на 4 мин, не включая аппарат.

Источником ионизирующего излучения был рентгеновский аппарат РУМ-57. Общее облучение осуществляли пять раз в неделю по 25 с ежедневно на протяжении четырех недель. Суммарная доза облучения - 200 мГр.

В исследованиях влияния холода животных содержали при +5°С (классическая модель холодовой адаптации по Харту (Hart J.S., Jansky L.. 1963) в одиночных клетках в течение 1,5, 10 суток. Контрольные животные находились при комнатной температуре.

В работе были использованы следующие методы:

1. Изолирование микросом печени крыс методом дифференциального центрифугирования.

2. Определение количества цитохромов Р450 (Omura Т., Sato R., 1964) и активности НАДФН-цитохром Р450 редуктазы(РЫШрз А.Н., Langdon R.G., 1962) .

3. Изолирование и очистка CYP2B1 и CYP1A1 из микросом печени крыс, индуцированных фенобарбиталом или 3-метилхолантреном, соответственно (Guengerich F.P., Martin M.V., 1980).

4. Получение моноклональных антител (Grishanova A.Y., Lyakhovich V.V., 1992).

5. Иммунохимический анализ белков микросом с использованием моноклональных антител против иммунохимически идентичных CYP1A1 и CYP1A2 (клон 14Н5) или иммунохимически идентичных CYP2B1 и CYP2B2 (клон 12С10) (Grishanova A.Y., Lyakhovich V.V., 1992): количественный иммуноферментный анализ (Lubet R., et al., 1985), иммуноблот-анализ (Towbin H., Staehelin T., Gordon G., 1979).

6. Определение активности цитохромов P450 в микросомах печени с использованием специфичных субстратов. Активности CYP1A1, CYP1A2, CYP2B1, CYP2B+CYP2C определяли по скорости О-деалкилирования алкоксирезоруфинов (7-этокси-, 7-метокси-, 7-пентокси-, 7-бензилоксирезоруфин, соответственно) флюориметрическим методом (Burke M.D. et al., 1985). Активности CYP2A, CYP2C11, CYP2B1, CYP3A определяли по скорости гидроксилирования андростендиона в 7а-, 16а, 16Р- и бр-положениях, соответственно, методом высокоэффективной жидкостной хроматографии высокого давления (Wood A.W., et al., 1983). Активность CYP3A определяли также по скорости образования формальдегида -продукта реакции N-деметилирования эритромицина (Nash Т., 1953). Активность CYP2E1 определяли по скорости образования 6-гидрокси метаболита хлорзоксазона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии высокого давления (Peter R., et al., 1990), а также по скорости гидроксилирования «-нитрофенола (Козловская Н.Е и др., 1992).

7. Выделение суммарной РНК из клеток печени крыс.

8. Определение относительного содержания мРНК CYP1A1, CYP1A2 методом ОТ-ПЦР.

9. Выделение экстракта ядер клеток печени (Gorski K.et al., 1986, Меркулова Т.И. и др., 1998).

10. Анализ ДНК/белковых комплексов методом задержки в геле (Denison M.S., Deal R.M., 1990).

11. Определение токоферолов в микросомах печени крыс

12. Определение концентрации внеэритроцитарного гемоглобина в сыворотке крови (Тонкошкурова О.А. и др., 1996).

13. Определение общего и конъюгированного билирубина (Акинчиц М.А., Павловская Н.А., 1986).

14. Статистическую обработку полученных данных (среднее, ошибку среднего, стандартное отклонение, достоверность различий между двумя выборками) проводили по критериям Стьюдента и Манна-Уитни при помощи программы Statistica 5,0.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование влияния химических соединений на ферменты монооксигеназной системы печени

В работе исследованы следующие химические соединения: перфтордекалин, нифедипин, пиридин, пиридин-Ы-оксид, а-токоферол, менадион, кверцетин, билирубин. Выбор химических соединений для тестирования их индуцирующих возможностей был определен несколькими критериями. Во-первых, выбор определяла значимость соединений для медицинской практики. Этими соединениями являются перфтордекалин -основной компонент кровезамещающего раствора, лекарственный препарат нифедипин - производное дигидропиридина, пиридин - основа для синтеза многих лекарств, витамины Е, К3 и Р в форме а-токоферола, менадиона и кверцетина. Во-вторых, важны были особенности химической структуры соединений и, прежде всего, отсутствие сходства с полициклической ароматической структурой классических индукторов цитохрома Р450 подсемейства 1А. И, в-третьих, в круг исследуемых соединений были включены как субстраты цитохрома Р450 (ими являются нифедипин, пиридин, билирубин), так и такие соединения, в метаболизме которых цитохром Р450 участия не принимает (перфтордекалин, пиридин-Ы-оксид, а-токоферол, менадион).

Исследование изменений содержания и активности ферментов монооксигеназной системы печени в ответ на внутривенное введение экспериментальным животным перфтордекалина и их сравнение с аналогичными параметрами под действием фенобарбитала и 3-метилхолантрена показало, что перфтордекалин оказывает влияние, сходное с действием фенобарбитала (рис.1).

Под действием перфтордекалина увеличивается содержание CYP2B1/2B2, активности CYP2B1 и НАДФН-цитохром Р450 редуктазы, и индуцирующий эффект сопоставим с эффектом фенобарбитала. При этом не изменяется активность CYP1A1, характерная для ответа на метилхолантрен и другие ПАУ.

Известно, что пиридин оказывает индуцирующее влияние на CYP2E1 в микросомах печени кроликов и крыс (Kaal R.I., Novak R.F., 1987, Kim S.G., et al., 1988, Kirn S.G., Novak R.F., 1990) и на CYP2B1 в печени кроликов (Kim SG, et al., 1991). Известно также, что пиридин метаболизируется в печени с образованием нескольких окисленных продуктов, основным из которых является пиридин-Ы-оксид (Kaul K.L., Novak R.F., 1987), который образуется в результате СYP2E1-зависимого метаболизма (Kim S.G., et al., 1988). Полученные нами результаты показали, что как пиридин, так и пиридин-N-оксид, наряду с индуцирующим влиянием на CYP2E1, проявляют индуцирующие свойства в отношении CYP1А1 и CYP1A2, а также CYP2B1, увеличивая их активности в микросомах печени крыс (рис. 2).

А ш л""1

"'Ш .'Л

ш гооо № Ш 1400

1000 № Кй

«о 200 о

* п 1 * П г. _С=Я-

1 л ¿Й а® ¿О'

„V ¿Ч1 (V О

Рис. 1. Влияние перфтордекалина, фенобарбитала и мстилходантрепа на содержание и активности ферментов монооксигенщной системы печени крыс (% от контрольных значений).

Р450 - общее содержание цитохромов Р450,

СУР2Н1/2И2 - общее содержание

СУР2В,

Редуктаза,СУР1А1, СУР2В1, СУРЗА -активности ферментов. * р< 0,05

2100 1Ш 1500 1200 «ю

КО 300

П]|||[цнн-\-1акт1и

* * и * Й

П ГЧ П № I I

Р4М Рмуктзза С№!Е1 СУ1МД1 СУР1А2 СУР2Б1

Рис. 2. Влияние пиридина и п и р и ли 11-И-оке и да на содержание и активности ферментов монооксигепазпой системы печени крыс (% от контрольных значений).* р< 0,05

1450 -общее содержание цитохромоп Р450,

Редуктаза, СУРЬМ, С\Т1Л2, СУР2В1, СУР2Е1, СУРЗА - активности ферментов.

Таким образом, пиридин, являясь субстратом и индуктором CYP2E1, оказывает индуцирующее действие на CYPIA и CYP2B1, и индуцирующий эффект пиридина может быть обусловлен действием как самого пиридина, так и его метаболита пиридин-N-оксида.

Результаты исследования длительного введения нифедипина показали, что при этом увеличивается содержание CYP2BI/2B2 и активность CYP2B1, а также активность CYP3A (рис. 3), то есть нифедипин является не только специфическим субстратом CYP3A (Guengerich F.P., et ai., 1986), но и индуктором этой формы Р450, а также индуктором CYP2B1.

Рис. 3. Влияние нифедипина на содержание активности ферментов монооксигеназн! системы печени крыс (% от контрольных значений).

['450 - общее содержание цитохромов Р450 CYP2B1/2B2 - общее содержание CYF2B, Редуктаза, CYP1A1, CYP2B1, CYP3A -активности ферментов. * р< 0,05

Индуцирующие свойства нифедипина в отношении CYP2B! получили в дальнейшем подтверждение в исследованиях как на крысах (Zangar R.C., et a¡., 1999, Konno Y., et аЦ 2003, 2004a), так и на мышах (Konno Y., et al., 20045), Нифедипин в отличие от пиридина, структурным аналогом которого он является, не индуцирует CYP1 А!. Что касается индукции CYP2B и CYP1A веществами, содержащими пиридиновое кольцо, то было показано, что CYP2B1/2 and CYP1A1/2 индуцируются 4-бензил пиридином (Kobayashi Y., et al., 1992). Эти же авторы предположили, что вещества с некопланарной ароматической структурой предпочтительнее индуцируют CYP2B (Kobayashi Y,, et al,, 1903). Действительно, есть пример производного пиридина с некопланарной структурой - 4-(4-хлорбензил)пиридин, которое оказывает индуцирующее действие на CYP2B!, но не индуцирует CYPlAt (Kobayashi Y., et al., 2001),

При исследовании влияния витаминов а-токоферола, менадиона и кверцетина на активность ферментов монооксигеназной системы в печепи животных показано, что под действием а-токоферола и менадиона происходит увеличение активности CYP1 Al, CYP1А2 и CYP2BÍ (рис.4).

Результаты о повышении активности CYP2B1 при действии а-токоферола согласуются с данными других исследований, полученными на животных, Содержащихся на диете с разным количеством a-токоферола и не противоречат данным, полученным при исследовании влияния дефицита а-токоферола па активность CYP2B1 (Lii С.К, et al., 1998, Cassand et al.. 1993). Наши данные о повышении активности CYP1A, определяемой по скорости метаболизма специфичных субстратов, под действием а-токоферола и

Нифгиинш

6И ж т *

- м 3» г *

200 П

100 0 П П п

менадиона согласуются с данными исследований, проведенных на культурах клеток, в которых наблюдалось повышение скорости гидроксилирования бензо(а)пирена - субстрата, менее специфичного для CYP1A (Chen Y.T., Ding J.II., 1987).

Многие флавоноиды, и в том числе кверцетин, являются, как было показано in vitro, лигандами Ali рецептора (Ciolino Н.Р., et al., 1999). В нашем исследовании кверцетин при выбранной дозе 80 мг/кг массы тела не изменял активность CYP1AI и CYP1A2 (рис. 4), гены которых регулируются с участием AhR.

я-То|;офс]мл

— w~

ил

Mii Рвд>™а OYP1A1 CYPiBt

* I

1 *

л. *

* П г^

п п . И п.

Рвдрспэ! CYP1A1 CVP1A2 CYPJS1

Рис. 4, Влияние ^-токоферола, мейадйОна и кверцетина на Содержание и активности ферментов монооксигеназпой системы печени крыс (% от контрольных значений).

Р450 - общее содержание цитохромов Р450,

Редукта, CYPl.M, CY14A2,CYP2B1 -

активности ферментов.

* р< 0,05

Таким образом, исследование эффектов химических соединений на ферменты монооксигеназной системы печени экспериментальных животных показало, что перфтордекалин и нифедипин по влиянию на активность CYP2BI являются индукторами фенобарбиталового типа, а пиридин. «иридин-М-окснд, а-токоферол и менадион являются индукторами смешанного типа. По эффективности индукции CYP2BI эти соединения располагаются в ряду ФБ > Пиридин > а-токоферол > пиридин-Ы-оксид > нифедипин > менадион. По степени индукции CYPI АI ряд выглядит как MX > пиридин > пиридин-Ы-оксид > менадион > а-токоферол.

Полученные данные о том, что индукция CYP1A происходила под действием соединений, которые отличаются по химической структуре От классических индукторов CYP1A (ПАУ и диоксинов), не соответствуют критериям для лигашюв Ah-рецептора, дали основание для выяснения механизмов индукции слабыми индукторами - менадионом и а-токоферол ом.

% KK^iatw«

200 150 300 50 п п

P4S0 0ГР1А1 CYP1A2 CYP2B1

Молекулярные механизмы, лежащие в основе индукции СУР1А «слабыми» индукторами менадионом и а-токоферолом

Детальное исследование индуцирующего влияния менадиона на активность СУР1А1 и СУР1А2 выявило определенные закономерности изменения активности в зависимости от дозы и длительности его введения (рис. 5).

СУР1А2

800 • 400 -|

СУР1А1 " ^

600 - Ж £ / \ 5 300 -

400 - V \ * 200 -

V I -5

200 - 100 -

* 2

0 ii.il ^ 0 -

Лоза менадиона. мг/кг массы

я 800 >8 600 -

СУР1А2

Длительность введения менадиона, сутки

Рис. 5. Дозовые и временные зависимости изменения активности СУР1А1 и СУР1А2 под действием менадиона. По осям ординат - активности. * р<0,05, ** р<0,001.

Сопоставление изменения активности СУР1А1 и СУР1А2 и апоферментов СУР1А1 и СУР1А2 с изменением уровня мРНК СУР1А1 и СУР1А2 под действием менадиона выявило взаимосвязь между уровнем мРНК и активностью ферментов как для СУР1А1, так и СУР1А2. При всех дозах и времени наряду с увеличением активности СУР1А1 и СУР1А2 в печени крыс, получавших менадион, наблюдалось возрастание уровня мРНК СУР1А1 и СУР1А2 и увеличение интенсивности полос соответствующих белков при иммуноблоттинге. На рис. 6 представлена типичная картина взаимосвязи между всеми уровнями регуляции СУР1А1 и СУР1А2. Таким образом, индуцирующий эффект менадиона реализуется на транскрипционном уровне, как для СУР1А1, так и для СУР1А2.

| 800 1

™ «00 -ш

и 40) -

I 200 -

I 0 - ■

Лктиености СУР1А

!.мм> и: |"лх: СУР1А

Относи-

тслыгое

содержание N . мЕНК

супа "Й0-5 1

С¥Р1А1

стл2

~-1

щ ^^

Рис. 6. Изменения активности С\'Р1 А1 (ЭРОД) и СУР1А2 (МРОД). апоферментов

^Р1А и мР11К СУР1А пол действием менадиопа. - СУР 1А1, Н-СУР1А2. * р<0,05, ** р<(),001. I — контроль. 2 — мемадион, 15 мг/кг, 4 суток.

~ к я о я % 'и р| л /\1 г белка

12О0

СУПА!

10 30 150 $00

пкм О ль/ч И н/м г белка

СУР1А2

I 200

I ооо НПО ООО •100 200

10 70 150 ЗОО

Доза а-токоферола, мг/кг массы

С\Р1А2

4 8 12

Длительность введения а-токоферода, сутки

Рис. 7. Дозовые и временные зависимости изменения активности СУР1А1 и СУР1А2 под действием мепадиона, 11о осям ординат - активности. * р<0,05, ** р<0,001.

Исследование индуцирующего влияния различных доз и длительности введения а-токоферола на активность CYP1A1 и CYPIA2 выявило определенные закономерности изменения активностей (рис. 7).

Сопоставление изменений активности CYP1А1 и CYP1А2 и апоферментов CYP1A! и CYPIA2 с изменением уровня мРНК CYPIAI и CYP1A2 под действием а-токоферола показало, что эффект а-токоферола на уровне мРНК является краткосрочным (150 мг на кг массы, I сутки), и в то же время зависит от дозы (30 и 70 мг на кг массы, 4 суток) (рис. 8). Уровень мРНК CYP1A2 под действием а-токоферола не изменяется, несмотря на увеличение активности фермента (рис. 8). То есть, активность CYPIA1 под действием а-токоферола в зависимости от дозы/длительности введения регулируется как на транскрипционном, так и на посттранскрипционном уровнях, a CYP1А2 - на йосттранскрипционНОМ.

^ 601) ,

Активности Л ■

СУПА

3 100 ■

. j -.:MVH(? блат

СУР1А

Относи- ^

содержание

иРНК Sx м CYP1A

1.2 ■

§ £ 0.!

Активности CYP1A

Г а .

СТР1А1

Имкуноблот CYP1A2 CYP1A

Is и

мРНК США

Рис. 8. Изменения активности CYP1AI (ЭРОД) и CYPIA2 (МРОД), апоферментов CYP1A и мРНК СУР1А пол действием а-токоферола: А - в зависимости от длительности введения; 1> - в зависимости от дозы.

□ -CYP1AI, И-СУР1А2. Н.Д. - не детектировался. *-р<0,001. t - контроль, 2 - а-токоферол, 150 мг/кг, 1 сутки, 3 - а-токоферол, 30 мг/кг, 4 суток, 4 - а-токоферол, 70 мг/кг, 4 суток,

а-Токоферол может влиять на активность м ем бранно-связанных ферментов, в том числе и цитохромов Р450, изменяя физико-химические характеристики мембран (Ше1апеп Е. й а1., 1975; БаЛо М, й а1., 1990). Возможно это свойство объясняет повышение активности СУР1А при введении 70 мг а-токоферола на кг массы, поскольку в этом случае не наблюдается ни увеличения уровня синтеза мРНК, ни возрастания содержания апофермента. Снижение экспрессии гена при этой дозе, а также обратная зависимость активности СУР1А1 от длительности введения а-

токоферола, может свидетельствовать о его способности запускать механизм негативной транскрипционной регуляции соответствующего гена при повышении содержания а-токоферола в печени.

Для CYP1A1 AhR-зависимый путь индукции является единственным доказанным на сегодняшний день (Whitlock J.Р., 1999; Ma Q., 2001), хотя в литературе обсуждается существование других способов регуляции (Vecchini F. et al., 1994). CYPIA2 может индуцироваться как на транскрипционном уровне через AhR-зависимый (Gonzalez F,J. et al., 1985) или AhR-независимый пути сигнальной трансдукции (Jiang W. et al., 2004), так и па посттранскрипционном (Xu L.C., Bresnick Е, 1990).

Исследование ДНК-связывающсй способности белковых экстрактов ядер клеток печени :<рыс с '^P-XRE3 показало усиление связывания ядерных белков с "'"P-XRE3 при введении а-тежоферола и менадиона. В качестве положительного контроля использовали экстракты ядер печени крыс, Получавших БП (рис. 9). Специфичность образованного комплекса была подтверждена его истощением при добавлении избытка немеченого XRE3 к экстрактам ядер печени индуцированных БП крыс и отсутствием изменений при избытке гетеро логичного олигонуклеотида (рис. 9). Полученные данные свидетельствуют о вовлечении AhR-зависимого пути сигнальной трансдукции в индукцию активности CYP1А а-токоферолом и менад ионом.

Рис. 9. Радиоавтографы электрофоре грамм, полученных после электрофореза в 8 % полиакриламидиом геле Р-меченноГС ХКЬЗ, инкубированного с белками ядер клеток печени крыс (но 4 мкг суммарного белка на дорожку): К -контрольных; Тф — получавших а-то кофе рол; Мсм - получавших менадион; ВП — получавших бензо(а)пирен. ВВ - неспецифический олигонуклеотид. 'гР—меченный XREЗ присутствовал во всех дорожках. Числами указан избыток немеченых ол и гону клеотидой.

Следует отметить, что усиление взаимодействия димера АЫ1/Агп1 с ХЯЕЗ наблюдалось в следующем ряду: а-токоферол < менадион < бензо(а)пирен (рис 9). Поэтому слабая индукция СУПА а-токоферолом и менадионом в сравнении с БП может, по крайней мере частично, являться следствием слабой активации ДНК-связывающей способности АЬЯ.

Ингибирование бензо(а)пирен-индуцируемых активностей СУР1А1 и СУР1А2 а-токоферолом, менадионом и кверцетином и молекулярные механизмы, лежащие в основе ингибирования

При совместном введении двух химических соединений, одно из которых является сильным, а другое - слабым индуктором СУР1А (га-токоферол и менадион) или лигандом АЬЯ (кверцетин), было обнаружено, что все три соединения снижают индуцирующий эффект бензо(а)пирена на активности СУР1А1 и СУР1А2. Так, в микросомах печени крыс, получавших бензо(а)пирен совместно с менадионом или кверцетином, значительно снижались активности СУР1А1 и СУР1А2 (рис. 10, 11), а при совместном введении бензо(а)пирена и а-токоферола снижалась только активность СУР1А1 и гораздо менее выражено (рис. 10).

Для выяснения механизма ингибирования БП-индуцированных активностей СУР1А исследовали экспрессию соответствующих генов, определяя относительное содержание мРНК и апоферментов СУР1А1 и СУР1А2. Иммуноблот анализ белков микросом с антителами против СУР1А1/СУР1А2 не показал значительных различий в интенсивности окраски полос, соответствущих СУР1А1 и СУР1А2, у крыс, получавших бензо(а)пирен совместно с а-токоферолом и у крыс, получавших один бензо(а)пирен, а в микросомах печени крыс, получавшх бензо(а)пирен совместно с менадионом, интенсивность окраски значительно снижалась (рис. 10).

Наблюдаемое снижение активности СУР1А1 при совместном введении бензо(а)пирена с а-токоферолом и отстуствие эффекта на уровне апофермента может объясняться аллостерическим действием а-токоферола на фермент. Причиной ингибирующего действия менадиона и кверцетина на бензо(а)пирен-индуцируемые активности СУР1А1/1А2 в микросомах печени крыс, как показали результаты, является снижение уровней мРНК СУР1А1 и СУР1А2(рис. 10, 11).

Активности

СХИА

Имгчуноблот С1Т1А

Относительное содержание

СУР1А

<3 к А £ 2.1

2 и

^ 7 1.8

^ л

и м

^ м 2 Рч 0.9

БП

Ш ■,

ЕП

БП + Тф БП +Мен

БП + Тф БП+Мен

СУР! АI СУР1А2

БП

БП + Тф БП+Мен

Рис. 10. Активность СУР1А1 (ЭРОД) и СУР1А2 (МРОД), иммунОблот белков мнкроеом печена (по 0.5 мкг суммарного белка микросом на дорожку), получавших БП, БП одновременно с а-токоферол ом (БП+Тф) или менадионом (БП+Мен) и относительное содержание мРНК СУР1А1 и СУР1Л2 в печени крыс, пол у чаши их бензо(а)пирен и бензо(«)пирен совместно с менадионом. * р <0,05, ** р<0,00!.

|—1 - СУР1А1, Щ- СУР1А2, И.О.-не определяли.

СУР1А1 СУР1А2

| ™ » гьоо 3 150 1 МО -1-

| 7000 * 1 750 > «И) *

| 150

900 гл 50 гл

БП 1>11+Кл с рцс 1 и 11 БП {»П+Кксрцстнн

СУРШ

СУР1А2

БП+К псрЦсТЫМ

Рис. 11. Активность СУР1А1 (ЭРОД) и СУР1А2 (МРОД) (А) и относительный уровень мРНК СУР!А! и СУР1А2 (Ь) и печени крыс, Получавших бсмзо(а)нирен и 6ензо(а)пиреН совместно с кверцетином. * р<0,05

Исследование ДНК-связывающеЙ способности белковых экстрактов ядер клеток печени крыс с °Р-ХЯЕЗ показало уменьшение связывания ядерных белков с Р-ХКЕЗ у крыс получавших бензо(а)пирен совместно с кверцетином (рис. 12) или менадионом (рис.13) в сравнении с крысами, получавших один бензо(а)пирен. Таким образом, механизмом негативной регуляции бензо(а)пирен-индуцируемых активностей СУР1А1 и СУР1А2 менадионом или кверцетином является снижение ДНК-связывающей способности АНЯ.

Рис. 12. Радиоавтограф эл ектрофоретического разделения в 4%

пОлиакр и ламидн ом геле Р-меченного Х11Е,

инкубированного е ядерными белками клеток печени крыс (по 4 мкг суммарного белка на дорожку), получавших

бензо(а)пирен (1>П) и совместно бензо(«)пирен и кверцетип (БП+Кв).

Числами указа!! избыток немеченого ХК113.

К Мен БП БП+Мен

12 3 4 5 6

AbK/ArntT' P-XRE3

Рис. 13. Радиоавтограф э л рофорет и чсск ого разделения и 4%

поднакриламидном геле J:P-меченного XRE,

инкубированного с ядерными белками клеток печени крыс: К - контрольных, Меи - получавших менадйон, Ы1 - получавших 8ензо(а)пирен (дорожки 3, 4), БП+Мен -получавших бензо(а)иирен

совместно с менадионом (дорожки 5, 6).

+ +■ + + + + + +

- \20 х75 х100

+ ЬП + 31P-XRE3 \15)1 XRE3

AhR/Arnt/®* -P-XRV.3

Вероятно, при совместном введении бензо(а)пирена с менадионом или кверцетином некоторая часть клеточного пула AhR связывается с первым соединением, а оставшаяся - со вторым. Если сильные и слабые индукторы (или лиганды AhR) взаимодействуют с разными аминокислотными остатками гидрофобного кармана AhR, как это показано недавно (Backlund М., Ingelman-Sundberg М., 2004), то такие взаимодействия могут, например, повлиять на конформацию активной формы этого рецептора. А разные конформации AhR могут иметь отличную друг от друга способность связывания с промоторами AhR-зависимых генов (Hestermann E.V., Brown М., 2003). Возможно, конформационные изменения AhR после связывания одновременно с бензопиреном и менадионом или кверцетином не позволяют проявлять высокую активность AhR как транскрипционному фактору. Вследствие этого и наблюдается ингибирующий эффект на индукцию CYP1А классическим индуктором.

Предлагаемое выше объяснение не является единственно возможным. Негативная регуляция экспрессии гена CYP1A1 может осуществляться несколькими другими путями, например, через негативный регуляторный элемент, взаимодействие которого с ядерным белком Oct-1 приводит к понижению активности промотора (Bhat R. et al., 1996). Кроме того, недавно был открыт белок - репрессор AhR (AhRR), который находится под контролем AhR, его количество в клетке повышается при введении лигандов AhR. Этот белок способен взаимодействовать с Amt, образуя гегеродимер, который связывается с XRE, но не приводит к активации транскрипции гена (Karchner S.I., et al., 2002; Tsuchiya Y. et al., 2003). Было показано, что активация ССААТ/энхансер-связывающего белка ß, приводит к понижению степени индукции CYP1A1 гена 3-метилхолантреном (Cho I.J., Kim S.G., 2003). Можно считать доказанным, что в регуляции самого AhR принимают участие другие транскрипционные факторы, как это показано, например, для PPARa (Shaban Z. et al., 2004). Исследованные нами соединения имеют структуру, отличную от структуры классических лигандов AhR. Возможно, они способны активировать другие пути сигнальной трансдукции, помимо AhR-зависимого, которые могут либо взаимно ослаблять друг друга из-за конкуренции за совместные коактиваторы, либо один может негативно регулировать другой.

Ферменты монооксигеназной системы печени в условиях физических воздействий на организм

В работе исследовано, как физические воздействия на организм экспериментальных животных влияют на монооксигеназную систему печени. В число таких воздействий вошли сверхвысокочастоные электромагнитные колебания сантиметрового диапазона, низкоинтенсивное лазерное импульсное излучение инфракрасной области спектра, низкоинтенсивный ультразвук, ионизирующее излучение в малых дозах, умеренно низкая температура. Интерес они представляют в связи с тем, что, во-первых, часть

из них широко используется в медицине для диагностики и терапии (лазерное излучение, сантиметровые волны и ультразвук) и, во-вторых, эти факторы различаются по своей физической природе и по механизму реализации биологического действия в организме.

При исследовании ферментов монооксигеназмой системы печени н ответ па физическое воздействие на организм показано, что прослеживается специфичность реакции различных форм Р450 на действие физических факторов (рис. 14).

Рис. 14. Общее содержаний цитох ромов Р450 и активности СУР1А1, СУР2В1, СУРЗА, СУР2А, СУР2С11 и микросомах печени крыс при воздействие на г г их ШС лазером, сантиметровыми волнами,

ультразвуком, радиацией и холодам (10 суток при +4°С) (% от контрольных значений). 1*450 - общее содержание цитохромов Р450,

Редуктаза, СУР IЛI, СУР 1А2, СУР2В1, СУРЗА, СУР2А , СУР2С11, СУР2Г.1 - активности ферментов. * р< 0,05

Сравнение действия физических факторов, применяемых в терапии, обнаруживает, что активность СУР 1А1 повышается только под влиянием ультразвука, СУР2В1 и СУР2А - только под влиянием инфракрасного лазерного излучения. Что касается активности СУРЗА, то она изменяется в

условиях воздействия всех трех физиотерапевтических факторов, однако, влияние ультразвука проявляется угнетением ее активности, а действие факторов, в известном смысле близких по физической природе, но принадлежащих к различным диапазонам спектра электромагнитных колебаний, - СМВ и лазерного излучения, сопровождается индукцией активности CYP3A.

Ионизирующая радиация в малых дозах оказывает индуцирующее влияние на CYP1A2 и CYP2A и CYP2C11. Длительное пребывание при умеренно низкой температуре (10 суток при +4°С) приводит к увеличению активности НАДФ-цитохром Р450 редуктазы и CYP1A1, CYP1A2, CYP2B1, CYP2E1 и CYP3A.

Таким образом, индукция цитохромов Р450 является адаптивным ответом не только на чужеродные соединения, попадающие в клетки печени, но и на физические факторы, воздействующие на организм. Формирование ответной реакции монооксигеназной системы печени в условиях воздействия физическии факторами на организм может быть обусловлено, по крайней мере, двумя причинами. С одной стороны, физиологическое действие физических факторов на организм человека и животных опосредовано механизмом нейрогуморальной регуляции. Например, физиотерапевтические средства малых интенсивностей, как правило, оказывают стимулирующее влияние на железы внутренней секреции, особенно гипофиз-тиреоид-адреналовой оси (Улащик B.C., 1983), а активность некоторых цитохромов Р450 печени зависит от гормонального статуса организма, поскольку стероидные гормоны участвуют в регуляции активности некоторых форм цитохрома Р450 (CYP2A, CYP2C, CYP3A) (Tamasi V. et al., 2003). С другой стороны, метаболическая утилизация гормонов и синтез некоторых из них, осуществляется при участии таких цитохромов Р450, как CYP2A, CYP2C11, CYP3A, и, следовательно, изменения их активности могут модулировать гормональные взаимоотношения в организме.

Под действием двух различных по природе физических факторов -ультразвука и холода, было зарегистрировано увеличение активности CYP1A1. Под действием холода увеличивалась также активность CYP1A2. И хотя индукция была несопоставимо меньше, чем под действием классических индукторов, этот феномен вызвал особый интерес, поскольку цитохромы Р450 подсемейства 1А являются одними из основных ферментов, участвующих в активации проканцерогенов, а о их физиологической роли известно не было. Кроме того, индукция CYP1A в отсутствие экзогенных химического индуктора предполагает существвование эндогенные посредников, играющих роль индуктора. Сведений об эндогенных соединениях, которые могут выполнять эту функцию, к началу настоящего исследования также не было.

Исследование механизмов индукции активности СУР1Л1 при воздействии ультразвуком

Исследование параметров индукции СУР5А1 в первые 24 ч после воздействия ультразвуком показало, что мРНК СУР 1А1 начинает экспрессироваться уже в самые первые часы, и уровень ее достигает максимума к 4 ч. Одновременно начинается синтез белка СУР1А1 и увеличивается ферментативная активность СУР1А1 (рис. 15). Эти данные позволяют заключить, что механизм индукции СУР 1А( под действием ультразвука транскрипционный.

« 13 16 го

[Зремя после воздействия, ч

1 1 5 Л 5 Л 7 к

Ультразвук

мх

1ч 2ч 4ч 8ч 1бч 24ч

а а

з: =

3 I

= у

< ® 3 5 ю |

к 3 У

и Е Е

У 5 3

Е к §

Рч н С

г Б

II .2 а .у

Время после воздействия, ч Рис. 15. Активность, СУР1А1 (ЭРОД активность, пкмоль/мин/мг белка) (А), иммуноблот белков микросом печени (Б) и относительное содержание мРНК СУР1А1 (относительные единицы, мРНК СУР1 А1/мРНК Р2 микроглобулина) (В) в печени крыс, подвергавшихся действию ультразвука, МХ - микросомы печени 3-метилхолантрен-обработанных крыс, * р < 0,05 по отношению к контролю

Исследование ДНК-Связывающей способности белковых экстрактов ядер клеток печени крыс с "'"Р-ХКЕЗ показало наличие связывания ядерных белков с "':Р-ХЯЕЗ печени крыс, получивших воздействие ультразвуком. В качестве положительного контроля использовали экстракты ядер печени крыс, получавших (эезо(а)пирен (рис. 16, А). Специфичность образованного комплекса была подтверждена его истощением при добавлении избытка немеченого ХЙЕЗ к экстрактам ядер печени индуцированных БП крыс (рис. 16, Б). Полученные данные свидетельствуют о вовлечении АЬ-рецептора в индукцию активности СУР1А в печени крыс под действием ультразвука. Эти данные позволяют полагать, что индукция СУР1А1 в печени под действием ультразвука происходит классическим АЬЯ-зависимым путем, и опосредуют эту индукцию эндогенный(е) лиганд(ы).

"Р-ХЯЕ + МХ НО -ХЯ1ЕЗ -

32Р-ХШ£3 К МХ 24ч Ультразвук 1ч 2ч 4ч 8ч 16ч + + - х50 + + - х25 х100 - - +

* т * ^ 1« щ 1 3 3 >1 5 6 7

АЬЙ/Ат^ ИР-ХГ<ЕЗ

Мне. 10, Л. Радиоавтограф электрофоретического разделения в 10% ПЛЛГ 32 Р-

мечепиого ХЯЕЗ, инкубированного с белками ядер клеток печени крыс контрольных

(К), индуцированных метилхолаптреном (МХ) и Подвергнутых действию

ультразвука. Р-уеченный ХКЕЗ присутствует во всех дорожках.

Дорожки: 1 - Р меченный ХКЕЗ, 2 - печень контрольных крыс; 3 - печень крыс,

индуцированных метилхолаптреном; 5-9 - печень крыс после воздействия

ультразвуком.

Рис. 10, 1>. Радиоавтограф электрофоретического разделения в 10% ПААГ 32 Р-меченного ХЯЕЗ, инкубированного с белками ядер клеток печени крыс, индуцированных метилхолаптреном. 32Р-меченный ХКЕЗ присутствует во всех дорожках.

МО - неспецифический олигонуклеотид.

Числами указан избыток немеченых олигонуклеотидов.

Известно, что при озвучивании абдоминальной области ультразвуком с частотой 0,87 МГц наблюдается внутрисосудистый гемолиз, степень

которого зависит от интенсивности и продолжительности ультразвукового воздействия (Saad H.H., 1986). ß настоящее времени доказано in vitro, что билирубин - продукта деградации гема, является лигандом Ah-рецептора (Phelan D. et al., 1998).

100

350 300 250 200 150 100 S0:jr О

•к

t ^ I \

\ *

--------

ili

4 8 12 16 20

Впсмя после введения билиоубипа.ч

гм оа. нО

Ы г: 0 к

X X

с. Ч 0,6

< Е и 3 0,4

Р й о | 0,2

и Ь 0,0 1

^ Си а о

а. 5 5 2 &

2ч 4ч 8ч Билирубин

16ч

24ч

Время после введения билирубина, ч

Рис. 17. Активность СУРIА1 (ЭРОД, пкмоль продукта/мнп/мг белка) (Л), иммуноблот белков микросом печени (Б) и относительное содержание мРНК СУР1А1 ^относительные единицы, МРНК СУ]11АI /мРНК [}2 микроглобул и на) (В) в печени крыс при внутривенном введении билирубина. * р < 0.05 по отношению к контролю

К - микросомы контрольных крыс, МХ - микросомы печени 3-мстилхолзнтрен-обработанных крыс

Исследование динамики появления в крови внеэритроцитарного гемоглобина и свободного билирубина после воздействия ультразвуком на область печени экспериментальных животных показало, что через ! ч в сыворотке крови регистрируется пик увеличения концентрации

внеэритроцитлрного гемоглобина, а через 2 ч увеличивается концетрация свободного билирубина. Сопоставление временных закономерностей увеличения уровня свободного билирубина в сыворотке кроки и параметров индукции CYP1A1 в печени под действием ультразвука (рис. 15) показывает, что увеличение концентрации свободного билирубина в сыворотке крови крыс сопровождается увеличением уровня мРНК CYP1АI, появлением апопротеина и функционально активного белка CYP1 Al.

Было исследовано влияние экзогенно введенного в кровь билирубина на активность CYP1АI в печени крыс и показано, что при увеличении концентрации билирубина в крови увеличивался уровень мРНК CYP1AI, появлялся белок CYPI АI и увеличивалась активность CYP1 Al (рис, 17).

Эти данные свидетельствуют, что в ответ на введение в кровь билирубина происходит транскрипционная активация CYP1A1,

Исследование ДНК-связывающей способности белковых экстрактов ядер клеток печени крыс после введения билирубина с "'2P-XRE3 показало наличие связывания ядерных белков с "P-XRE3 (рис. 18), что доказывает регуляцию экспрессии гепа CYPIA1 билирубином в условиях in vivo AhR-зависимым путем.

"P-XRE3 lí Билирубин

1ч 2ч 4ч 8ч 16ч

-AhR/Aml' 32P-XRE3

Рис. 18. Радиоавтограф электрофоретического разделения в 10% ПААГ 12 Р-меченного ХК.ЕЗ, инкубированного с белками ядер клеток печени крыс

контрольных (К) и после введения

билирубина.

Таким образом, билирубин, повышение уровня которого наблюдается при ультразвуковом воздействии, может быть эндогенным посредником в индукции СУР1А1 в ответ на воздействие ультразвуком на область печени.

Сопоставление временных параметров индукции СУР1 АI, достигаемой при повышении уровня билирубина в крови в результате внутривенного введения билирубина и при ультразвуковом воздействии показывает, что при введении билирубина индукция СУР1А1 более скоротечна. Это может служить косвенным доказательством того, что индукция СУР IАI под действием ультразвука опосредуется не только билирубином.

Исследование механизмов индукции активности СУР1А1 и СУР1А2 под

действием холода

Исследование индукции СУР1А1 и СУР1А2 в печени крыс при их пребывании на холоде в течение 1, 5 и 10 суток при +4°С было проведено на уровне транскрипции генов, синтеза апоферментов и функциональной активности ферментов (рис, 19).

СУ Р1А1

СУР1А2

< *

Время воздействия холодом, сутки

СУР1Л1

Холод 1с 5с

10с

МХ

СУР1А2

СУР1А1

2,5

СУР1А2

Время воздействия холодом, сутки Рис. 19. Активность СУР1АI и СУР1А2 (Л), Нммуноблотанализ белков макросом печени (Б) и относительное содержание мРНК СУР1А1 и С У14,42 (I!) в печени крыс, подвергавшихся холодовому воздействию. МХ - микросомы печени З-метилхолантрен-обрйбстанных крыс, * р < 0.01. ** р<0,005. *** р < 0,001 по отношению к контролю

Результаты исследования показали, что увеличение активности СУР1А1 под действием холода связано с увеличением мРНК СУР1А1, появлением апофермента СУР IА1. Увеличение активности СУР1А2 при этом не согласовалось с уровнем мРНК СУР1А2, который не только не повышался, но даже снижался. Полученные данные позволяют заключить, что механизм

индукции СУР1А1 под действием холода - транскрипционный, а регуляция экспрессии СУР1А2 происходит на посттранскрипционном уровне.

Исследование ДНК^связывающей активности белковых экстрактов ядер клеток печени крыс с " Р-ХЯЕЗ показало наличие связывания ядерных белков с '"Р-ХЯЕЗ из печени крыс, находившихся на холоде 5 и 10 суток. В качестве положительного контроля использовали экстракты ядер печени крыс, получавших безо(а)пирен (рис. 20, А). Специфичность образованного комплекса была подтверждена его истощением при добавлении избытка немеченого ХЯЕЗ к экстрактам ядер печени индуцированных БП крыс (рис. 20, Б). Полученные данные свидетельствуют о вовлечении АНИ-зависимого пути в индукцию активности СУР1А в печени крыс под действием холода.

"Р-ХЯЕЗ К К Холод 5с БП Холод 10с

"Р-ХЯЕЗ + + + + + БП + + + + + ХКЕЗ - \20 х50 х75 х!00

АМУАШ/ -4-Р-Х11ЕЗ

12 3 4 5 6 7 89 10 II ¡2 13 14 15

А Б

Рис. 20. Радиоавтограф электрофоретического разделения в 4% пол и акрил амид ном геле Р-меченййШ ХЯЕ, инкубированного с ядерными белками клеток печени крыс, находившихся при +4°С в течение 5 и 10 суток (А). Радиограф электрофоретического разделения в 4% ПААГ 32 Р-мечеиного ХКЕЗ, инкубированного с белками ядер клеток печени крыс, индуцированных БП. Р-меченный ХЯЕЗ присутствовал во всех дорожках: Числами указан избыток немеченого олигонуклеотида. (К)

Известно, что в динамике адаптации организма к холоду изменяются параметры свободно-радикальных процесов и антиоксидантной защиты. Данные о накоплении а-токоферола как фактора антиоксидантной защиты при холодовом воздействии (Колосова Н.Г., Колпаков А,Р., Панин Л.Е., 1995), а также полученные в настоящем исследовании данные об а-

токофероле как индукторе цитохромов Р450 СУР1А1, СУР1А2 и СУР2В1 и индукции этих форм цитохрома Р450 в печени крыс при длительном пребывании в холоде позволяют предположить, что роль эндогенного посредника в индукции цитохромов Р450 может выполнять а-токоферол.

Анализ взаимосвязи между между содержанием токоферола и активностью СУР1А1 выявил корреляцию с коэффициентом 0,65 (р<0,05).

я • ____-- Рис. 21. Корреляция между

.1 содержанием токоферола и

активностью СУР1А1 в микросомах печени крыс при холодовом воздействии

ООО 0,04 00в 012 016 0.20

Токоферол, мкг/мг белка

Представленные данные, а также одинаковый механизм индукции CYP1A1 под действием а-токоферола и при холодовом воздействии, дают основания полагать, что а-токоферол является одним из эндогенных соединений, опосредующих действие холода на активность CYP1A1 в печени.

выводы

1. Химические соединения (пиридин, пиридин-М-оксид, менадион, а-токоферол, билирубин), структуры которых отличаются от полициклической ароматической структуры классических индукторов цитохромов Р450 подсемейства 1А, вызывают индукцию цитохромов Р4501А. в печени экспериментальных животных. Пиридин и пиридин-Ы-оксид обладают сильными индуцирующими свойствами. а-Токоферол, менадион и билирубин проявляют менее выраженную способность индуцировать цитохромы Р4501А.

2. Установлены механизмы увеличения активности СУР1А1 и СУР1А2 под действием менадиона, а-токоферола и билирубина. Регуляция активности СУР1А1 и СУР1А2 менадионом осуществляется на транскрипционном уровне через АЬЯ-зависимый путь сигнальной трансдукции. Регуляция активности СУР1А1 а-токоферолом осуществляется на транскрипционном уровне через АЫ1-зависимый путь, а также на посттранскрипционном уровне; активность СУР1А2 регулируется а-токоферолом на посттранскрипционном уровне. Регуляция активности СУР1А1 билирубином происходит на уровне транскрипции гена СУР1А1 АЬЯ-зависимым путем сигнальной трансдукции.

3. Менадион, а-токоферол и кверцетин предотвращают индуцирующее действие бензо(а)пирена на активность СУР1А1 и СУР1А2 в печени крыс: а-токоферол снижает бензо(а)пирен-индуцируемую активность СУР1А1, а менадион и кверцетин снижают активности как СУР1А1, так и СУР1А2, индуцированные бензо(а)пиреном. Ингибирование бензо(а)пирен-индуцированных активностей СУР1А1 и СУР1А2 менадионом и кверцетином происходит вследствие снижения уровней мРНК СУР1А1 и СУР1А2, обусловленного снижением ДНК-связывающей способности АЫ1.

4. Активность СУР2В1 индуцируется в печени экспериментальных животных химически неродственными соединениями -перфторорганическим соединением перфтордекалином, аналогом дигидропиридина нифедипином, пиридином, пиридин-Ы-оксидом, менадионом, а-токоферолом. Нифедипин оказывает индуцирующее действие также на активность СУРЗА.

5. Физические факторы, различные по своей природе (сверхвысокочастотные электромагнитные колебания сантиметрового диапазона, низкоинтенсивное лазерное импульсное излучение инфракрасной области спектра, низкоинтенсивный ультразвук, ионизирующее излучение в малых дозах, умеренно низкая температура), при воздействии на организм экспериментальных животных способны изменять активность различных форм цитохрома Р450 в печени:

- активность СУР2В1 в печени экспериментальных животных увеличивается под действием лазерного излучения и холода;

- активность СУР2А увеличивается под действием лазерного и ионизирующего излучений;

- активность СУР2С11 увеличивается под действием лазерного и ионизирующего излучений и электромагнитных волн сантиметрового диапазона, но снижается под действием ультразвука;

- активность СУР2Е1 увеличивается под действием электромагнитных волн сантиметрового диапазона;

- активность СУРЗА увеличивается под действием лазерного излучения, электромагнитных волн сантиметрового диапазона, холода, но снижается под действием ультразвука;

- активность СУР1А1 увеличивается под действием ультразвука и холода;

- активность СУР1А2 увеличивается под действием холода.

6. Увеличение активности СУР1А1 в печени крыс при воздействии ультразвуком происходит в результате активации транскрипции гена СУР1А1 АЬЯ-зависимым путем сигнальной трансдукции. Роль одного из эндогенных индукторов СУР1А1 в печени крыс под действием ультразвука выполняет билирубин, профиль изменения концентрации которого в крови совпадает с изменением уровня мРНК СУР1А1 и активности СУР1А1.

7. Увеличение активности СУР1А1 в печени крыс, находящихся на холоде (при +4°С) в течение 10 суток происходит в результате активации транскрипции гена СУР1А1 с вовлечением АЬЯ-сигнального пути, а увеличение активности СУР1А2 регулируется на посттранскрипционном уровне. Роль одного из эндогенных посредников в индукции СУР1А1 в печени под действием холода выполняет а-токоферол, который накапливается в микросомах печени в процессе адаптации к холоду.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

Публикации в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Мишин В.М., Макарова С.И., Гуткина Н.И., Гришанова А.Ю., Ляхович В.В. Соотношение содержания цитохрома Р448 и бензпиренгидроксилазной активности при индукции микросомной монооксигеназы ксенобиотиками МХ-типа // Биохимия. - 1984. - Т. 49. - N 3. - С. 464-469.

2. Мишин В.М., Гришанова А.Ю., Ляхович В.В. Изменение соотношения микросомных переносчиков электронов в реконструированных микросомных мембранах // Биохимия. - 1984. - Т. 49. - N 4. - С. 686-691.

3. Гришанова А.Ю., Мишин В.М., Ляхович В.В. Каталитическая активность цитохрома Р448 в нативных и реконструированных микросомных мембранах с микросомальной системой окисления в печени крыс // Биохимия. - 1984. - Т. 49. -Ы 8. - С. 1343-1349.

4. Гришанова А.Ю., Мишин В.М., Ляхович В.В. Взаимодействие цитохрома Р448 и НАДФНцитохром Р450 редуктазы в реконструированных микросомных мембранах//Биохимия. - 1985.- Т. 50. -N3.- С. 369-374.

5. Grishanova A.Yu., Mishin V..M., Lyakhovich V.V. Catalytic activity of the membrane-bound methylcholanthrene-inducible cytochrome P450. // FEBS Letters. 1985.-V. 179.-N l.-P. 74-76.

6. Цырлов И.Б., Часовникова О.Б., Гришанова А.Ю., Ляхович В.В. Биосинтез в печени крыс общей формы монооксигеназы, индуцируемой ксенобиотиками метилхолантренового типа // Биохимия. - 1986. - Т. 51. - N 4.-С. 579-589.

7. Образцов В.В., Шехтман Д.Г. Ляхович В.В. Фенобарбиталовый тип индукции цитохрома Р-450 микросом печени перфтордекалином. // Биохимия. - 1.987. - Т. 52. - N 7. - С. 1138 - 1143.

8. Гришанова А.Ю., Гуткина Н.И., Мишин В.М. Сравнительная характеристика изолированных форм цитохрома Р450, индуцированных фенобарбиталом и перфтордекалином. // Биохимия. 1988. - Т. 53. - N 3.-С.368-376.

9. Гришанова А.Ю., Перегоедова Е.Л., Мишин В.М., Ляхович В.В. Соотношение между 7-этоксирезоруфин-О-деэтилазной активностью микросомальной монооксигеназной системы и уровнем метилхолантрен-индуцируемой формы цитохрома Р-450. // Биохимия. - 1988. - Т. 53. — N 6. -С. 956-959.

10. Mishin V.M., Obraztsov V.V., Grishanova A.Yu., Gutkina N.I., Shekhtman D.G., Khatsenko O.G., Lyakhovich V.V. The phenobarbital-type induction of rat liver microsomal monooxygenases by perfluorodecalin // Chem. Biol. Interact. - 1989. - V. 72. - P. 143 -155.

11. Образцов B.B., Гришанова А.Ю., Мишин В.М. Индукция микросомальных монооксигеназ полностью фторированными органическими соединениями // Вопр. Мед. Хим. - 1989. - Т. 35,- N 3. - С. 9-18.

12. Образцов В.В., Шехтман Д.Г., Гришанова А.Ю., Мишин В.М. Перфтордекалин не индуцирует цитохром Р-448 в печени крыс // Биофизика. - 1989. -Т. 34.-N1. - С. 146-147.

13. Гуляева Л.Ф., Гришанова А.Ю., Мишин В.М., Колева М., Стойчев Ц. Ляхович В.В. Индукция форм цитохрома Р450 при длительном введении нифедипина // Бюлл. экспер. биол. - 1990. - N 2. - С. 148-150.

14. Вавилин В.А., Гришанова А.Ю., Гуляева Л.Ф., Мишин В.М. Ляхович В.В. Метаболизм теофиллина микросомными монооксигеназами печени крыс // Биохимия. - 1990. - Т. 55. - В. 9. - С. 1786-1793.

15. Файбушевич А.А., Гуляева Л.Ф., Гришанова А.Ю., Мишин В.М., Ляхович В.В. Метаболизм диазепама множественными формами цитохрома Р-450 микросом печени крыс // Биохимия. - 1990. - Т. 55. - В. 7. - С. 12101215.

16. Koleva М., Stoytchev Ts., Gulyaeva L.F., Grishanova A., Mishin V. M., Lyakhovich V.V. Induction of cytochrome P-450 isozymes upon repeated

administration of nifedipine. // Eur. J. Drug Metab. Pharm. - 1991. - V. 16. - P. 103-106.

17. Новожеева Т.П., Саратиков A.C., Гришанова А.Ю., Гуткина Н.И., Ахмеджанов P.P., Хаценко О.Г., Козловская Н.Е. Бензонал - индуктор монооксигеназной системы фенобарбиталового типа // Бюлл. Эксперим. Биол. Мед. - 1991. - T.. 111.-N.2.-C. 163-165.

18. Золотарева Т.А., Горчакова Г.А., Коноваленко B.JL, Коноваленко Л.Н., Гришанова А.Ю., Гуляева Л.Ф. Ляхович В.В. Активность цитохромов Р-450р и P-450h микросом печени и уровень кортикостероидов в крови экспериментальных животных в условиях воздействия физическими факторами. // Бюлл. экспер. биол. мед. - 1992. - Т. 63. - N 5. - С. 498-500.

19. Козловская Н.Е., Гришанова А.Ю., Мишин В.М. Ляхович В.В. Влияние тетрагидрофурана на микросомную монооксигеназную систему in vitro и in vivo. //Биохимия,- 1992.-T. 57.-В. 12.-С. 1841-1846.

20. Козловская Н.Е., Гришанова А.Ю., Мишин В.М. Ляхович В.В. Влияние пиридина и пиридин-М-оксида на монооксигеназную систему микросом печени крыс // Биохимия. - 1992. - Т. 57. - В. 10. - С. 1592-1596.

21. Образцов В.В., Гришанова А.Ю., Гудкова О.Б., Шехтман Д.Г. Механизм ингибирования цитохром Р450-зависимой монооксигеназной системы в печени фторуглеродами. // Биохимия. - 1992. - Т. 57. - В. 7. - С. 1011-1020.

22. Образцов В.В., Гришанова А.Ю., Шехтман Д.Г., Склифас А.Н., Макаров К.Н. Взаимодействие перфтороктилбромида с микросомалной монооксигеназой печени. // Биохимия. - 1993. - Т. 58. - В. 8. - С. 1234-1239.

23. Гуляева Л.Ф., Гришанова А.Ю., Ляхович В.В.Индукция цитохромов Р4501А и 2В в разных органах крыс, получавших гексахлорбензол и Арохлор 1254 // Биохимия. - 1994. — Т. 59. - В. 4. - С. 531536.

24. Гуляева Л.Ф., Гришанова А.Ю., Золотарева Т.А., Ляхович В.В. Индукция цитохрома 1А1 в печени крыс ультразвуком. // Биохимия - 1994. -Т. 59.-С. 804-807.

25. Золотарева Т.А.., Гришанова А.Ю., Гуляева Л.Ф., Ляхович В.В., Горчакова Г.А. Характеристика эффектов сантиметровых волн на фармакоктнетику лекарств в организме экспериментальных животных. // Вопр. Курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры. - 1994. - Т. 3. -С. 15-17.

26. Золотарева Т.А., Гришанова А.Ю., Гуляева Л.Ф., Ляхович В.В., Олешко АЛ. Влияние низкоинтенсивных физических лечебных факторов на микросомальные окислительные системы печени в эксперименте // Вопр. Курортологии, Физиотерапии и лечебной физкультуры. - 1998. - Т. 3. - С. 34-37.

27. Гришанова А.Ю., Т.В. Зуева. Билирубин как эндогенный посредник в активации экспрессии CYP1A1 под действием ультразвука. // Вопр. Мед. Химии,-2000.-N. 2.-С. 117-126.

28. Зуева Т.В., Гришанова А.Ю., Колосова Н.Г. Активность цитохрома Р450 1А1 и ПОЛ в микросомах печени кыс Вистар и OXYS при действии ультразвука. // Бюл. экспер. биол. Мед. - 2001. - прил. 1. - С. 26-29.

29. Сидорова Ю.А., Иванова Е.В., Гришанова А.Ю., Ляхович В.В. Дозовая зависимость влияния а-токоферола на активность ферментов метаболизма ксенобиотиков в печени крыс. // Бюлл. экспер. биол. мед. -2003.-Т. 136.-N7.-C. 45-48.

30. Сидорова Ю.А., Гришанова А.Ю. Дозовая и временная зависимости эффектов менадиона на ферменты метаболизма ксенобиотиков в печени крыс // Бюлл. эксп. биол. и мед. - 2004. - Т.137. - N 3. - С. 260-264.

31. Сидорова Ю.А., Гришанова А.Ю., Ляхович В.В Транскрипционная активация цитохрома Р4501А1 альфа-токоферолом // Бюл. экспер. биол. мед. - 2004. - Т. 137. - N 9. - С. 264-267.

32. Громова О.А., Гришанова А.Ю., Перепечаева М.Л., Колосова Н.Г., Колпаков А.Р. Влияние длительного холодового воздействия на активность цитохром Р450 содержащих монооксигеназ и глутатион-Б-трансферазы в микросомах печени крыс. // Бюлл. эксп. биол. и мед. - 2004. - Т.137. - N 9. -С. 268-271.

33. Сидорова Ю.А., Гришанова А.Ю.. Ингибирующее влияние а-токоферола на индуцируемую бензо(а)пиреном активность CYP1A1 в печени крыс//Бюлл. Эксп. Биол. Мед.-2005,- Т. 140.-N 11.-С. 526-529.

34. Перепечаева М.Л., Сидорова Ю.А., Гришанова А.Ю. Влияние холодового стресса на экспрессию генов AhR-зависимого пути регуляции CYP1 в печени крыс // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. - 2006. - Т. 141. - N 3. - С. 287-291.

35. Sidorova Yu.A., Lyakhovich V.V. Rat Hepatic CYP1A1 and CYP1A2 Induction by Menadione. // Toxicology Letters. - 2005. - V. 155. - P. 253-258.

Публикации в научных журналах, сборниках статей, материалах конференций:

36. Гуляева Л.Ф., Гришанова А.Ю., Громова О.А., Слынько Н.М., Вавилин В.А. Ляхович В.В. Микросомная монооксигеназная система живых организмов в биомониторинге окружающей среды. Аналитический обзор, серия «Экология» // Новосибирск, ГПНТБ СО РАН. - 1994. - 101 с.

37. Золотарева Т.А., Гришанова А.Ю., Гуляева Л.Ф., Ляхович В.В. Изменение активности микросомальных цитохром Р450-зависимых монооксигеназ печени крыс под влиянием хронического воздействия малых доз радиации. // Украинский биохимический журнал. - 1996. - Т. 68. -N 3. -С. 58-61.

38. Grishanova A.Yu., Gulyaeva L.F., Mishin V.M., Lyakhovich V.V. Correlation between amounts and catalytic activities of multiple forms of cytochrome P-450. // In: Cytochrome P-450: Biochemistry and Biophysics / Ed.I. Schuster. - London-New York-Philadelphia: Taylor & Francis, 1989. - P. 89-92

39. Vavilin V., Grishanova A.Yu., Gromova O., Makarova S.I., Gulyaeva L.F. Lyakhovich V.V. Theophylline metabolism features in liver microsomes in Wistar rats treated with Aroclor 1254. // In: Cytochrome P-450: Biochemistry and Biophysics / Eds. Archakov A., Bachmanova G., Russia, Moscow, INCO-TNC, 1992. - P. 641-643.

40. Gulyaeva L.F., Grishanova A.Yu., Zolotaryova T.A. Lyakhovich V.V. Nonchemical induction of rat liver cytochrome P-450IA1. // J. Basic & Clin Physiol. & Pharmacol. - 1992. - V. 3.-P. 188.

41. Vavilin V., Grishanova A.Yu., Gromova O., Makarova S.I., Gulyaeva L.F. Lyakhovich V.V. Intra- and interindividual correlations between microsomal cytochromes P-450 IA1 and IA2 contents, its specific activity and theophylline metabolites production in vitro and in vivo. // J. Basic & Clin. Physiol. & Pharmacol. - 1992.-V.3.-P. 191.

42. Gromova O.A., Polyakova N.E., Kozlovskaya N.E., Grishnova A.Yu., Vavilin V.A., Kolpakov A.R., Lyakhovich V.V. Effects ofexposure to cold on cytochromes P450 and monooxygenase activities in rat liver microsomes.! Basic & Clin. Physiol. & Pharmacol.- 1992,- V. 3. - P. 189

43. Zolotaryova T.A., Grishanova A.Yu., Gulyaeva L.F., Lyakhovich V.V. Effects of semiconductor GA-AS laser on hepatic microsomal monooxygenases in rats. // J. Basic & Clin. Physiol. & Pharmacol. - 1992. - V. 3. - P. 192.

44. Kozlovskaya N.E., Grishanova A.Yu., Lyakhovich V.V. Pyridine Noxide effects on rat liver cytochromes P-450 // Proc. 4th Eur. ISSX Meeting, Bologna, Italy. - 1992. - P. 89.

45. Гуляева Л.Ф., Гришанова А.Ю., Золотарева Т.А., Козловская Н.Е. Ляхович В.В. Действие физиотерапевтических факторов на активность монооксигеназной системы печени крыс // Материалы Республ. симп. "Монооксигеназная система - теоретические и прикланые аспекты", Ташкент, Узбекистан. - 1992 - С. 5-7.

46. Шургая A.M., Вавилин В.А., Музыченко Л.М., Гришанова А.Ю., Макарова С.И., Ляхович В.В. Влияние лазерного излучения на активность монооксигеназной системы печени. Клинико-экспериментальное исследование. //Материалы Республ. симп. "Монооксигеназная система -теоретические и прикланые аспекты", Ташкент, Узбекистан. - 1992. - С. 1921.

47. Gulyaeva L., Grishanova A.Yu., Lyakhovich V.V. Strain- and tissue dependent induction of cytochrome P-450IA and IIB subfamilies induction. // In: Cytochrome P-450: Biochemistry and Biophysics / Eds. Archakov A., Bachmanova G., Russia, Moscow, INCO-TNC. - 1992. - P. 338-390.

48. Grishanova A.Yu., Lyakhovich V.V. Using of antibodies to cytochrome P-450 library in xenobioticmetabolism studies. // In: Cytochrome P-450: Biochemistry and Biophysics / Eds. Archakov A., Bachmanova G., Russia, Moscow, INCO-TNC. - 1992. - P. 525-527.

49. Kozlovskaya N.E., Grishanova A.Yu., Mishin V.M. Lyakhovich V.V. Effects of organic solvents on rat liver monooxygenase system. // In: Cytochrome

P-450: Biochemistry and Biophysics / Eds. Archakov A., Bachmanova G., Russia, Moscow, INCO-TNC. - 1992. - P. 552-554.

50. Gulyaeva L.F., Grishanova A.Yu., Petchkovski E., Lyakhovich V.V. Expression of rat cytochrome P450 IA in lung and liver during inductions by methylcholanthrene and Aroclor 1254 . // Proc. 5th European ISSX Meeting, Tours, France. - 1993. - P. 190.

51. Gulyaeva L., Grishanova A.Yu., Zolotaryova Т., Kozlovskaya N . Lyakhovich V.V. Effects of different physical factors on rat liver microsomal monooxygenases. // 3rd World Congr. Intern. Soc.Adap Tive Med., Abstr., Tokyo, Japan.- 1993.-P. 86.

52. Gromova O.A., Grishanova A.Yu., Gulyaeva L.F. Lyakhovich V.V. Nonchemical induction of rat liver CYP1A. // 8th Intern. Conf. on Cyt.P-450, Abstr., Lisbon, Portugal. - 1993. - P. 302.

53. Gulyaeva L., Grishanova A.Yu., Petchkovski E. Lyakhovich V.V. Regulation of the rat liver and lung CYP1A expression by different inducers P-450. // 8th Int.Conf. on Cyt.P-450, Abstr. Lisbon,Portugal. - 1993. - P. 303.

54. Gulyaeva L. F., Grishanova A.Yu., Petchkovski E.V. Lyakhovich V.V. Strain- and tissue-specific expression of rat CYP2B. // 8th Intern.Conf. on Cyt. P-450, Abstr., Lisbon, Portugal. 1993. P. 305.

55. Gromova O.A., Grishanova A.Yu., Gulyaeva L.F., Lyakhovich V.V. Nonchemical induction of rat liver CYP1A. // Cytochrome P450. Biochemistry, Biophysics and Molecular Biology / John Libey, Eurotext, Paris. - 1994. - P. 873 -875.

56. Зуева T.B., Гришанова А.Ю., Колосова Н.Г. Влияние токоферола на цитохром Р4501А1 печени крыс OXYS с врожденным повышенным радикалообразованием. // 2ой Российский Конгресс по патофизиологии с междунар. участием. - 2000. - С. 188.

57. Зуева Т.В., Гришанова А.Ю., Богданкевич Н.В. Зависимость активности цитохрома Р4501А1 от состояния оксидантной и антиоксидантной систем в лечении крыс, подвергнутых действию ультразвука. // 2ой Российский Конгресс по патофизиологии с междунар. участием. - 2000. - С. 188-189.

58. Zueva T.V., Grishanova A.Yu., Bilirubin and activation of CYPIA1 expression under ultrasound action. // 18th Intern. Congress of Biochemistry and Mol. Biol. "Beyond the Genome", Birmingham, UK. - 2000. - P. 785.

59. Sidorova Y.A., Grishanova A.Yu., Effects of the vitamin К on the hepatic cytochrome P450 of different rat strains. // 18th Intern. Congress of Biochemistry and Mol. Biol. "Beyond the Genome", Birmingham, UK. - 2000. -P. 1606.

60. Sidorova Y., Grishanova A.Yu., Inducing effect of vitamin КЗ on rat hepatic CYP1A1. // 1st Intern Pharmac. Congr./lOth Panhellenic Pharmac. Congress. CRS meetings. Athenes, Greece. - 2001. - N2079.

61. Сидорова Ю.А., Зуева T.B., Гришанова А.Ю., Колосова Н.Г. Индукция цитохрома р450 1а1 в печени под действием а-токоферола у двух

линий крыс, отличающихся по способности к радикалообразованию. // Нац. Научно-практич. конференция «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека», Смоленск. - 2001. - С. 59-60.

62. Зуева Т.В., Гришанова А.Ю., Влияние терапевтического ультразвука на ПОЛ и индукцию цитохрома Р450 1А1 в печени крыс двух линий Вистар и OXYS, отличающихся по способности к радикалообразованию. // Нац. Научно-практич. конференция «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека», Смоленск. - 2001. - С. 301303.

63. Сидорова Ю.А., Зуева Т.В. Гришанова А.Ю., Эффект а-токоферола на цитохром Р4501А1 печени крыс. // 3-ий съезд биохим. об-ва, Санкт-Петербург, Россия. - 2002. - С. 105-106

64. Гришанова А.Ю., Зуева Т.В., Ляхович В.В. Роль Ah-рецептора в транскрипционной активации гена CYP1A1 в печени крыс под действием ультразвука. // 3-ий съезд биохим. об-ва, Санкт-Петербург, Россия. - 2002. -С. 396.

65. Громова О.А., Гришанова А.Ю., Гуляева Л.Ф.,Колпаков А.Р. Ляхович В.В. Влияние холодового воздействия на цитохромы Р450 в микросомах печени крыс. // Тез. докл. IV-ro съезда физиологов Сибири, Новосибирск. - 2002. - С. 64.

66. Grishanova A.Yu., Zueva T.V. The role of Ah receptor in transcriptional activation of the CYP1A1 gene under therapeutic ultrasound action on liver in vivo. // Abstr. 7th IUBMB conference "Receptor-ligand interactions", Bergen, Norway. - 2002.

67. Сидорова Ю.А Гришанова А.Ю., Индуцирующий эффект менадиона на цитохром Р4501А1 печени крыс 7-я Пущинская школа-конф. молодых ученых «Биология - наука XXI века». - 2003. - С. 376-377.

68. Kolosova N.G., Grishanova A.Yu., Kolpakov A.R. a-Tocopherol content and functions in the rat liver mitochondrias and microsomes at cold acclimation. // Intern. Conf. "Reactive Oxygen and Nitrogen Species, Antioxidants and Human Health",Smolensk, Russia. - 2003.

69. Sidorova Y.A., Grishanova A.Yu.,. CYP1A regulation by a-tokopherol. // 13th Intern.l Conf. on Cyt. P450, Biochemistry, Biophysics and Drug Metabolism, Prague, Czech Republic. - 2003.

70. Сидорова Ю.А. Гришанова А.Ю., CYP1A печени крыс при совместном введении менадиона с бензо(а)пиреном in vivo и добавлении менадиона к бензо(а)пирен-индуцированным микросомам in vitro. // УШя Дальневосточная школа-конф. по актуальным проблемам химии и биологии, Владивосток. - 2004. - С. 53.

71. Середина Т.А., Гришанова А.Ю. Ингибирующее влияние кверцетина на бензопирен-индуцированную активность CYP1A в печени крыс. // 10-я Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология -наука 21 века», Пущино. - 2006. - С. 47-48

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

AhR - арилгидрокарбоновый рецептор Amt - переносчик AhR в клеточном ядре

CYP - принятое по современной номенклатуре обозначение цитохрома Р450 XRE - ксенобиотик-чувствительный элемент БП - бензо(а)пирен MX - 3-метилхолантрен

ЭРОД - этоксирезоруфин-О-деэтилазная активность МРОД — метоксирезоруфин-О-деметилазная активность

Автор считает приятным долгом выразить благодарность научному консультанту, академику РАМН Ляховичу В.В. за постоянный интерес и поддержку этих исследований, коллегам сотрудникам Института молекулярной биологии и биофизики СО РАМН к.б.н. Гуткиной Н.И., к.б.н. Громовой O.A., д.б.н. Гуляевой Л.Ф., к.б.н. Макаровой С.И., Зуевой Т.В., Сидоровой Ю.А., Перепечаевой М.Л. за плодотворную совместную работу, сотрудникам Института биологической физики РАН Пущинского научного центра к.б.н. Образцову В.В. и к.б.н. Шехтман Д.Г. за возможность участия в исследовании уникальных перфторорганических соединений и сотруднику Одесского института курортологии д.м.н. Золотаревой Т.А. за интересное творческое сотрудничество.

Соискатель Гришанова А.Ю.

Подписано к печати 27 марта 2007 г. Тираж 100 экз. Заказ № 542. Отпечатано "Документ-Сервис", 630090, Новосибирск, Институтская 4/1, тел. 335-66-00

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Гришаева, Алевтина Юрьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ферменты моноокснгеназпой системы

1.1.1. Суоерсемейство цктохромов Р

1.1.1.1. Индукция цнтохромов Р450 ксенобиотиками 1 б

1.1.1.2. Подсемейство CYP1А

1.2.1.3. Подсемейство CYP2A

1.1.1.4. Подсемейство СYP2B

1.2.1.5. Подсемейство CYP2C

1.2.1.6. Подсемейство CYP3A

1.2.2. НАДФН-цитохром Р450 редуктаза

1.2. Механизмы регуляции экспрессии цнтохромов P45Q

1.2.1 Регуляция генов CYP1A

I.2.1.1. Индукция CYP1А полициклическими ароматическими углеводородами

II.1.2. Некласснческие экзогенные индукторы CYP1А

1.2.1.3. Эндогенные индукторы CYP 1А1.

1.2.1.4. Негативная регуляция CYP 1А

1.2.2. Регуляция генов CYP2B

1.2.2.1. Индукция экспрессии СУР2В через дистальный промотор

1.2.2.2. Участие проксимального промотора в индукции генов CYP2B 39 1.2.2.3 Другие регу ляториые элементы генов CYP2B

1.2.3. Регуляция генов CYP2C

1.2.4. Регуляция генов CYP2A

1.3.5. Регуляция генов CYP3A

1.3. Химические соединения, влияние которых на моноокенгеназную систему печени исследовалось в настоящей работе

1.3.1. Полностью фторированное органическое соединение перфтордекалин

1.3.2. Пиридин и пиридин-И-оксид 49 1.3 3. Ннфеднпин

1.3.4. Витамин Е (а-токоферол)

1.3.5. Витамин К. функции в организме и влияние на цитохром Р

1.3.6. Кверцетии 60 13.7. Билирубин

1.4. Физические факторы, влияние которых на монооксигеназиую систему печени исследовалось в настоящей работе

1.5.1. Лазерное излучение

1.5.2. Электромагнитные колебания сантиметрового диапазона

1.5.3. Ультразвук низкой интенсивности

1.5.4. Радиация

1.5.5. ХоиодовоК фактор

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

22. Животные

2.2.1- Экспериментальные процедуры с животными

2.3. Методы исследования

2.3.1. Выделение микросом из печени крыс

2.3.2. Определение количества белка в микросомах

2.3.3. Определение количества цитохромов Р

2.3.4. Определение активности НАДФН-цитохром Р450 редуктазы

2.3.5. Выделение и очистка CYP2B1 и CYP2B2 из микросом печени крыс, индуцированных фенобарбиталом

2.3.6. Выделение и очистка CYP1A1 и CYP1А2 из микросом печени крыс, индуцированных 3-метилхолантреном

2.3.7. Получение моноспецнфических поликлональных антител

2.3.8. Получение моноклональных антител

2.3.9. Иммунохимический анализ белков микросом

2.3.10. Определение активности CYP1A, CYP2A, CYP2B, CYP2C и CYP3A в микросомах печени крыс

2.3.11. Выделение суммарной РНК из клеток печени крыс

2.3.12. Электрофорез РНК в частично денатурирующих условиях.

2.3.13. Определение концентрации и чистоты РНК 95 2-3.14. Определение относительного содержания мРНК CYP1A1, СУР1А2 95 2.3.15- Выделение экстракта ядер клеток печени

2.3.16. Определение белка в экстрактах ядер

2.3.17. Приготовление зонда для ДНК/белкового связывания

2.3.18. Анализ ДНК/белковых комплексов

2.3.19. Количественное определение малонового диальдегида 99 2.3.19. Определение токоферолов в микросомах печени крыс 99 2 3.20. Определение концентрации внеэрнтроцнтарного гемоглобина 100 2.3.21. Определение общего и коньюгированного билирубина

2.4. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Исследование влняния химических соединений на ферменты монооксигеназной системы печени

3.1.1. Влияние перфтордекалина на активности ферментов монооксигеназной

3.1.2. Влияние пиридина и пиридин-Ы-оксида ш монооксигеназной системы печени 10:

3.1.3. Влияние нифеднпина на активность ферментов монооксигеназной системы

3.1.4. Влияние а-токоферола на активность ферментов монооксигеназной системы печени 1К

3.1.5. Влияние менадиоиа на активность ферментов монооксигеназной системы

3.1.6. Влияние кверцетина на активность CYP1A в микросомах печени 1 Г

3.1.7. Влияние билирубина на активность CYPl А! в микросомах печени 11!

3.2. Исследование механизмов индукции активности CYP1A1 и CYP1A2 в печени крыс «некласснческнмн» нндукторамн

3.2,1. Молекулярные механизмы, лежащие в основе индукции активности CYP1А а-токоферолом

3-2.2. Молекулярные механизмы, лежащие в основе индукции активности CYPIA менадионом

3.2.3. Молекулярный механизм, лежащий в основе индукции активности CYP1AI билирубином

3.2.4. Исследование способности а-токоферола, менадиоиа и билирубина активировать AhR.

3.3. Исследование цитохромов Р450 подсемейства 1А при совместном введении классического индуктора бснзо(а)пнрена и «слабых» индукторов а-токоферола и менадиоиа и лнганда AhR кверцетпна.

3.3.1. Влияние а-токоферола и менаднона на экспрессию генов CYP1A при совместном введении с бензо(а)пиреном т vivo

3.3.2. Влияние кверцетина на экспрессию генов CYP1A при совместном введении с бензо(а)пиреном in vivo

3.3.3. Влияние менадиоиа и кверцетина на ДНК-связывающую способность AhR

3.4. Ферменты моноокенгеназной системы печени в условиях действия физических факторов

3.4.1. Влияние низкоинтенсивного инфракрасного лазерного излучения на ферменты моноокенгеназной системы печени

3.4.2. Влияние ультразвука низкой интенсивности на ферменты моноокенгеназной системы печени

3.4.3. Влияние электромагнитного излучения сантиметрового диапазона на ферменты моноокенгеназной системы печени 145 3 4 4 Влияние ионизирующего излучения на ферменты моноокенгеназной системы печени

3.4.5. Влияние холодового воздействия на ферменты биотрансформации в печени крыс

3.5. Исследование механизмов индукции активности CYP1A в печени крыс под действием физических факторов

3.5.1. Исследование механизма индукции CYP1A1 под действием ультразвука

3.5.2. Исследование механизма индукции CYPIA1 под действием холода

3.6. Роль эндогенных соединений в индукции CYP1А под действием физических факторов.

3.6.1. Исследование роли билирубина в индукции CYP1А1 в печени под действием ультразвука

3.6.2. Исследование роли а-токофероя и билирубина в индукции CYP1А1 в печени под действием холода

Введение Диссертация по биологии, на тему "Регуляция активности цитохромов Р450 химическими и физическими факторами"

Актуальность проблемы. Клеточные мембраны являются эффективным барьером для защиты клетки от многих токсических водорастворимых соединений, но яе защищают от липофильных ксенобиотиков, которые, яегко преодолевая эту границу, могут накапливаться как в самой клетке, так и ее мембране. Одним из важных механизмов защиты клетки и организма в целом от таких ксенобиотиков является биотрансформация - превращение липофильных соединений в более гидрофильные и легко удаляемые из организма соединения. Метаболизм огромного числа липофильных ксенобиотиков (лекарств, канцерогенов, пищевых добавок, компонентов загрязнения окружающей среды и др.) осуществляет ферментная система, названная микросомной монооксигеназной системой со смешанными функциями (Omura, Sato, 1964). Монооксигеназная система участвует также в метаболизме гидрофобных эндогенных соединений, включающих стероиды, простагландины. жирные и желчные кислоты и другие. Биотрансформация в большинстве случаев ведет к детоксикации образованию биологически неактивных метаболитов, однако возможна и активация превращение нетоксичных и проканцерогеных соединений в продукты с токсическими и канцерогенными свойствами.

Широкая субстратная специфичность монооксигеназной системы обеспечивается множественными формами цитохрома Р450 (CYP) гемопротеинами. кодируемыми суперсемейством генов CYP (Nelson el аЦ 1996, Nebert. Russel, 2002). Важным свойством многих цитохромов Р450 является их способность к увеличению активности в ответ на введение различных ксенобиотиков. С описания более 40 лет назад феномена индукции цитохрома Р450 (Conney et al., 1960, Remmer. Merker, 1963) впервые возникло представление о множественности форм цитохрома Р450. По современной номенклатуре все многообразие цитохромов Р450 разделено на семейства и подсемейства (Nebert, Russel, 2002). У млекопитающих насчитывается 17 различных семейств. 4 из которых (СУР 1-4) кодируют ферменты, метаболизирующие ксенобиотики. Особый интерес представляют подсемейства CYP1A, CYP2B, CYP2C и CYP3A. которые являются главными компонентами микросомной монооксигеназной системы печени млекопитающих. CYP3A, CYP2C и CYP2B участвуют в метаболизме подавляющего числа лекарств, a CYP1A осуществляют метаболическую активацию многих соединений, превращая их в продукты с токсическими и канцерогенными свойствами.

Среди индукторов цитохромов Р450 выделяют несколько групп, различающихся по спектру индуцируемых ими форм цитохрома Р450, типичными представителями которых являются полициклические ароматические углеводороды (Г1АУ) и галогенированные диоксины, барбитураты, рифампиции и дексаметазон. этанол, клофибрат.

К настоящему времени накоплены обширные сведения об индукции цитохромов Р450 подсемейства 1А (CYP1AI и CYP1A2) такими ксенобиотками, как ПАУ и галогенированные диоксины, которые активируют транскрипцию генов CYP1A через путь сигнальной трансдукции, зависимый от арилгидрокарбонового рецептора (AhR). Индукторами цитохромов P4S0 подсемейства 2В является огромное число структурно неродственных соединений. В механизмах регуляции генов СУР2В главную роль транскрипционных факторов играют ядерные рецепторы - CAR (конститутивный аядростановый рецептор) и PXR (прегнановый X рецептор). Гены CYP2A. СУР2С и CYP3A регулируются с участием GR (глюкокортикоидный рецептор), а также PXR и CAR (Honkakoski P., Negishi M„ 2000).

С тех пор, как был описан феномен индукции цитохрома Р450, в список индукторов включены уже сотни химических соединений. Однако исследование спектра соединений, которые могут индуцировать различные формы цитохрома Р450, по-прежнему актуально. Исследования последних десятилетий показывают, что нндукторами CYP1A являются не только ПАУ и диоксины с пленарной структурой, но и соединения иных химических классов (индолы, каротиноиды) (Denison M.S-, Nagy S.R., 2003; Krusekopf S. et al„ 2003).

Необходимость изучения индуцирующих свойств ранее не исследовавшихся химических соединений определяется функциональной значимостью цитохромов Р450 в детокснкации разнообразных ксенобиотиков и метаболической активации многих соединений в активные канцерогены. Важно знать, как влияют на активность цитохромов Р450 те соединения, которые будут использовать в медицине в качестве лекарственных препаратов илн ином качестве, потому что в результате индукции или ингибирования цитохромов Р450 могут изменяться фармакокинетические характеристики лекарств, развиваться токсические последствия. Особый интерес представляют витамины, которые используются не только в качестве микронутриентов, но и в лечебных целях.

Вопрос о том, как физические воздействия на организм влияют на ферменты монооксигеназной системы, долгое время был вне интересов исследователей. Первые сообщения об изменении активности цитохрома Р450 в печени экспериментальных животных в отсутствие химических индукторов появилось в 198В году (Mann, et al., 1988, Okamoto, el al., 1993). Индукция P450 в отсутствие экзогенного химического индуктора были получены также на культурах клеток (кератиношггах, клетках гепатом). Такие воздействия, как гидродинамический сдвиг, суспеидирование культуры в среде с метилцеллюлозой, ультрафиолет н температура приводили к увеличению в клетках активности CYP1A1 (Monk, et al., 2001. Gonzalez, et al., 2001, Feng, et al., 2002). Одним из главных условий формирования физиологического ответа на физические воздействия является запуск биохимических реакций биологически активными продуктами, полученными или освобожденными из физиологического «депо» под действием физических факторов. В случае индукции цитохромов Р450 при действии физических факторов логично предполагать наличие эндогенных медиаторов, опосредующих запуск экспрессии соответствуюших генов.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Охарактеризовать влияние на микросомную монооксигеназную систему печени крыс химических соединений, важных для медицинской практики (псрфтордекалина, нифедипина, менадиона, а-токоферола, кверцетина, билирубина), и сравнить с характеристиками монооксигеназной системы при введении животным классических индукторов цитохромов Р450 подсемейства 2В (фенобарбитала) и подсемейства 1А (бензо(а)пирена или 3-метилхолантрена).

2. Исследовать механизм индукции цитохромов Р450 подсемейства 1А под действием тех соединений, которые обнаружат способность увеличивать активность этих ферментов. Для этого оценить способность таких соединений вызывать изменение уровней мРНК CYP1A1 и CYP1A2 и белка CYP1A1 и CYP1A2 и исследовать влияние этих соединений на ДНК-связывающую активность Ah рецептора.

3. Исследовать активности цитохромов Р450 подсемейства 1А в печени крыс при совместном введении классического индуктора и тех соединений, которые обнаружат способность индуцировать цитохромы P4S0 подсемейства 1 А.

4 Охарактеризовать микросомную монооксигеназную систему печени крыс, подвергавшихся действию физических факторов, различных по своей природе: сверхвысокочастотных электромагнитных колебаний сантиметрового диапазона, низкоинтенсивного лазерного импульсного излучения инфракрасной области спектра, щпкоинтенсивкого ультразвука, ионизирующего излучения в малых дозах, умеренно низкой температуры.

5- Исследовать механизм индукции цитохромов Р450 подсемейства IА под действием тех физических факторов, которые будут влиять на активность этих ферментов, и исследовать роль эндогенных соединений в опосредовании индукции Р450 подсемейства 1А под действием физических факторов.

Основные положения работы, выносимые па защиту.

1 Перфтордекалин. основной компонент искусственной кровезамещающей среды с газотранспортными свойствами, и лекарственный препарат нифедипин оказывают влияние на ферменты монооксигеназной системы, сходное с действием фенобарбитала, увеличивая содержание CYP2B1/2B2 в микросомах печени экспериментальных животных и активность CYP2B1. Кроме этого, нифедипин при длительном введении увеличивает активность CYP3A. а-Токоферол. менадион, пиридин, и пиридин-N-оксид, являются индукторами ферментов биотрансформации ксенобиотиков смешанного типа, увеличивая активность CYP1A1, CYP1A2 и CYP2B1 в печени крыс.

2. Индукция CYP1A1 и CYP1A2 менадионом и CYP1A1 билирубином в печени крыс осуществляется на транскрипционном уровне с вовлечением сигнального пути Ah-рецептора. Под действием а-токоферола индукция CYP1A1 реализуется как на транскрипционном уровне с участием AhR-зависнмого пути сигнальной трансдукции. так и на постгранскрипционном. а индукция CYP1A2 - на посттранскрипционном уровне.

3. а-Токоферол. менадион и кверцетин in vivo снижают индуцирующее действие бензо(а)пирена на активность CYP1A1 и CYP1A2. Ингибирование БП-индуцнрованных активностей CYP1A1 и CYP1A2 менадионом и квериетином происходит вследствие снижения уровней мРНК CYP1A1 и CYP1A2. Ингибирующий эффект менадиона и кверцетина на экспрессию генов CYPIAJ и CYP1A2 может быть следствием снижения ДНК-связывающей способности AhR.

4. Физические факторы, различные по своей природе, при воздействии на организм экспериментальных животных вызывают изменение активностей различных форм цитохрома Р450 в печени: под влиянием электромагнитных колебаний сантиметрового диапазона изменяются активности CYP2A, CYP2C11. CYP3A, лазерного импульсного ИК излучения - CYP2B1, CYP2A, CYP2C11, CYP3A, низкоинтенсивного ультразвука - CYP1A1, CYP2A, CYP2C11, ионизирующего излучения в малых дозах - CYP1A2. CYP2A. CYP2CI1, умеренно низкой температуры - CYP1AI. CYP1A2. CYP2B1. CYP2C. CYP3A, CYPZEI.

5. Увеличение активности CYP1A1 в печени крыс под действием ультразвука и холода осуществляется на транскрипционном уровне с вовлечением AhR сигнального пути, а индукция CYP1A2 под действием холода - на посттранскрипционном уровне. 6 Роль эндогенных посредников в индукции CYP1А1 в печени под действием холода может выполнять а-токоферол, а под действием ультразвука - билирубин.

Научная новизна

Впервые показана способность пиридина, пиридин-Ы-оксида, а-токоферола и менадиоиа - соединений, непохожих по структуре на классические индукторы CYP1 А, увеличивать активности CYP1A1 и CYP1A2 в печени крыс. Установлены механизмы увеличения активностей CYP1A1 и CYP1A2 под действием менадиона и сх-токоферола: индуцирующее влияние менадиона реализуется на транскрипционном уровне через AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции, а индукция а-токоферолом осуществляется как на транскрипционном уровне через AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции. так и на посттранскрипционном уровне.

Впервые установлено, что билирубин in vivo регулирует экспрессию гена CYP1AI AhR-зависимым путем.

Показана способность а-токоферола, менадиона и кверцетнна ингибировать in vivo индуцируемые бензо(о.)пиреном активности CYP1A1 и CYPIA2. Установлен механизм, лежащий в основе ингибирующего эффекта менадиоиа и кверцетнна на бензо(а)пирен-опоередованную индукцию CYP1A1 и CYP1А2, который реализуется на транскрипционном уровне. Ингибнрование менадионом и кверцетином бензо(а)пирен-индуцируемых CYP1A1 и CYP1A2 связано со снижения ДНК-связывающей способности AhR.

Обнаружено индуцирующее влияние ультразвука и холода на активность CYP1A1 печени крыс. Показано, что регуляция CYP1A1 в печени при ультразвуковом воздействии осуществляется на транскрипционном уровне AhR-зависимым путем, и одним из эндогенных посредников в индукции CYP1A1 под действием ультразвука является билирубин. Установлен механизм индукции CYP1A1 в печени при воздействии на организм холода, который состоит в транскрипционной активации гена CYPIAI с участием AhR. Показано, что эндогенным посредником в индукции CYP1A1 под действием холода может быть а-токоферол.

Научная и практическая значимость.

Настоящая работа вносит вклад в развитие фундаментальных знаний об индукции цнтохромов Р450. В результате исследования влияния химических соединений на активность монооксигеназной системы в список индукторов цнтохромов Р450 подсемейства 1А включены соединения, отличающиеся по химической структуре от классических ПАУ и диоксинов - это пиридин и пириднн-N-oKcwi, обладающие сильными индуцирующими свойствами, а также а-токоферол (витамин Е). менадион (витамин Кз) и билирубин, являющиеся слабыми индукторами CYP1A.

Полученные в работе данные демонстрируют неизвестные ранее последствия длительного применения витаминов Е и Kj в больших дозах - активацию экспрессии генов CYP1A подсемейства, имеющего отношение к метаболизму проканцерогенов.

Данные о снижении индуцирующего действия бензо(а)пирена на экспрессию генов CYP1A1 и CYP1A2 менадионом и кверцетином могут служить теоретической основой для исследования природных слабых индукторов CYP1A и/или активаторов AhR-зависимого пути сигнальной трансдукции. Такие соединения могут быть использованы для предотвращения возникновения и пролиферации гормон-зависимых опухолей за счет перекреста AhR-зависимого пути с путями сигнальной трансдукции рецепторов стероидных гормонов, и. возможно, возникновения опухолей, индуцированных полициклическими ароматическими углеводоролами.

Данные об индукции цнтохромов Р450 подсемейств 2В и ЗА нифедипином, широко использующимся лекарственным препаратом, указывают на возможность изменения фармакокинетики лекарств, являющихся субстратами этих форм цитохрома Р450, при одновременном их применении с нифедипином.

Полученные в период доклинических исследований данные о характере влияния перфтордеклина - одного из главных компонентов препарата искусственной крови «Перфторан». на монооксигеназную систему печени, позволили исключить возможность негативных последствий действия препарата на ферменты метаболизма ксенобиотиков. Показан фенобарбиталовый тип индукции цитохрома Р450 перфтордекалином и доказано отсутствие индукции форм цитохрома Р450. ответственных за активацию проканцерогенов и протоксинов.

Исследование активности моноокенгеназной системы в печени экспериментальных животных, подвергавшихся воздействию физическими факторами, показало, что индукция цитохромов Р450 является адаптивным ответом не только на чужеродные соединения, попадающие в клетки печени, но и на физические факторы, воздействующие на организм. В отсутствие экзогенных химических соединений роль индукторов цитохромов Р450 могут выполнять эндогенные соединения, уровень которых в организме повышается в ответ на физическое воздействие. Это необходимо учитывать при использовании физических воздействий в терапии. В комплексном лечении с использованием лекарственных препаратов и физиотерапии возможно изменение активности ряда форм цитохрома Р450 и, как следствие, изменении фармакокинетики лекарств, что может сказаться на эффективности лекарственной терапии.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были представлены на 7-Й. 8-й Международных конференциях по биохимии, биофизике цитохрома Р450 (Москва, Россия, 1991; Лиссабон, Португалия. 1993); 5-й Всесоюзной конференции "Цитохром Р450 и модификация макромолекул" (Ялта, 1989); 3-м Международном симпозиуме по метаболизму чужеродных соединений (Лондон. Англия. 1989); 8-й Международном симпозиуме по микросомам и окислению лекарств (Стокгольм. Швеция. 1990); 3-м Международном ISSX симпозиуме по метаболизму лекарств (Амстердам. Голландия. 1991); Международном симпозиуме «Прогресс во внепеченочном метаболизме (Роннеби. Швеция, 1991); Международной конференции "Изоферменты: Организация и роль в эволюции» (Новосибирск.1991); Республиканском симпозиуме "Монооксигеназная система теоретические и прикладные аспекты" (Ташкент. Узбекистан, 1992); 4-м. 5-м Европейских ISSX симпозиумах (Болонья. Италия. 1992; Тур. Франция. 1993); 3-м Всемирном конгрессе международного общества по адаптивной медицине (Токио. Япония. 1993); 2-м Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2000); 18-м Международном конгрессе по биохимии и молекулярной биологии (Бнрменгем, Англия. 2000); 10-м Греческом фармакологическом конгрессе (Афины. Греция, 2001); Национальной научно-практической конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека»

Смоленск, 2001); 3-м Съезде биохимического общества России (Санкт-Петербург,

2002); 4-м Съезде физиологов Сибири (Новосибирск, 2002); 7-Й Конференции международного общества по биохимии и молекулярной биологии «Лиганд-рецепторные взанмодейстсвия» (Берген, Норвегия, 2002); Международной конференции «Реактивные формы кислорода и азота, антиокснданты и болезни человека» (Смоленск, 2003); 13-й Международной конференции по биохимии и биофизике цитохрома Р450 и метаболизму лекарств (Прага, Чешская Республика,

2003).

Работа выполнена при частичной финансовой поддержке грантов РФФИ N 96-0450209, N 02-04-48639, N 05-04-48327.

Автор выражает благодарность научному консультанту, академику РАМН Ляховичу В.В. за постоянный интерес и поддержку этих исследований, коллегам сотрудникам Института молекулярной биологии и биофизики СО РАМН к.б.н. Гуткиной Н.И., к.б.н. Громовой О.А, д.б.н. Гуляевой Л.Ф., к.б.н. Макаровой С.И., Зуевой Т.В., Сидоровой Ю.А-, Перепечаевой М.Л. за плодотворную совместную работу, сотрудникам Института биологической физики РАН Пущинского научного центра к.б.н. Образцову В.В. и к.б.н. Шехтман Д.Г. за возможность участия в исследовании уникальных перфторорганических соединений и сотруднику Одесского института курортологии д.м.н. Золотаревой ТА. за интересное творческое сотрудничество

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гришаева, Алевтина Юрьевна

Выводы

1. Химические соединения (пиридин, пиридин-N-oKCna. менадион. а-токоферол, билирубин), структуры которых отличаются от полициклической ароматической структуры классических индукторов цитохромов Р450 подсемейства 1А, вызывают индукцию цитохромов Р450 1А в печени экспериментальных животных. Пиридин и пиридин-Ы-оксид обладают сильными индуцирующими свойствами. а-Токоферол. менадион и билирубин проявляют менее выраженную способность индуцировать цитохромы Р450 1А.

2. Установлены механизмы увеличения активности CYP1A1 и CYP1A2 под действием менадиона, a-токофсрола и билирубина. Регуляция активности CYPIAI и CYP1A2 менадионом осуществляется на транскрипционном уровне через AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции. Регуляция активности CYPIAI а-токоферолом осуществляется на транскрипционном уровне через AhR-зависимый путь, а также на посттранскрипционном уровне; активность CYP1A2 регулируется а-токоферолом на посттранскрипционном уровне. Регуляция активности CYP1A1 билирубином происходит на уровне транскрипции гена CYP1A1 AhR-зависимым путем сигнальной трансдукции.

3. Менадион. a-токоферол и кверцетин предотвращают индуцирующее действие бензо(а)пирена на активности CYP1A1 и CYP1A2 в печени крыс: а-токоферол снижает бензо(а)пирен-индуцируемую активность CYP1A1. а менадион и кверцетин снижают активность как CYP1A1. так и CYP1A2. индуцированные бензо(а)пиреном. Ингибирование бензо(а)пирен-индуцированных активностей CYP1A1 и CYP1A2 менадионом и кверцетииом происходит вследствие снижения уровней мРНК CYPIAI и CYPIA2. обусловленного снижением ДНК-связывающей способности AhR.

4. Активность CYP2B1 индуцируется в печени экспериментальных животных химически неродственными соединениями - перфторорганическим соединением перфтордекалином. аналогом дигидропиридина нифедипином. пиридином. пиридин-N-оксидом. менадионом, a-токоферолом. Нифедипин оказывает индуцирующее действие также на активность CYP3A.

• активность CYP2B1 в печени экспериментальных животных увеличивается под действием лазерного излучения и холода;

- активность CYP2A увеличивается под действием лазерного и ионизирующего излучений;

- активность CYP2C11 увеличивается под действием лазерного и ионизирующего излучений и электромагнитных волн сантиметрового диапазона, но снижается под действием ультразвука;

- активность CYP2E1 увеличивается под действием электромагнитных волн сантиметрового диапазона;

- активность CYP3A увеличивается под действием лазерного излучения, электромагнитных волн сантиметрового диапазона, холода, но снижается под действием ультразвука;

- активность CYP1А1 увеличивается под действием ультразвука и холода;

- активность CYP1A2 увеличивается под действием холода.

6. Увеличение активности CYP1A1 в печени крыс при воздействии ультразвуком происходит в результате активации транскрипции гена CYP1A1 AhR-зависимым путем сигнальной трансдукции. Роль одного из эндогенных индукторов CYP1A1 в печени крыс под действием ультразвука выполняет билирубин, профиль изменения концентрации которого в крови совпадает с изменением уровня мРНК CYP1AI и активности CYP1A1.

7. Увеличение активности CYP1A1 в печени крыс, находящихся на холоде (при +4°С) в течение 10 суток происходит в результате активации транскрипции гена CYP1A1 с вовлечением AhR-сигнального пути, а увеличение активности CYP1A2 регулируется на посттранскрипционном уровне. Роль одного из эндогенных посредников в индукции CYP1A1 в печени под действием холода выполняет а-токоферол. который накапливается в микросомах печени в процессе адаптации к холоду.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Индукция ферментов моноокенгеназной системы печенн химическими соединениями. Результаты исследования влияния химических соединений на монооксигеназную систему печени экспериментальных животных внесли в список индукторов цитохромов Р450 новые соединения. Перфтордекалин по влиянию на активность CYP2BI и НАДФН-цитохром Р450 редуктазы оказался индуктором ФБ типа, усиливающим детокекцирующую функцию печени. Степень индукции CYP2BI под действием перфтордекалина соизмерима с индукцией фенобарбиталом, причем наступает после однократного введения.

Нифедипин также оказался индуктором CYP2B1, но более слабым, чем фенобарбитал. Нифедипин оказывал также индуцирующее действие на CYP3A и CYP2A. Поскольку CYP2BI и CYP3A являются главными ферментами биотрансформации множества лекарств, индукция их нифедипином может влиять на скорость метаболизма принимаемых одновременно с нифедипином лекарств -субстратов этих цитохромов Р450.

Пиридин, пиридин-Ы-оксид. а-токоферол и менадион оказались индукторами смешанного типа, увеличивая активность как CYP2B1. так и CYP1A1. По степени индукции CYP2B1 эти соединения можно расположить в ряд: ФБ > пиридин > а-токоферол > пиридин-№-оксид > нифедипин > менадион. По степени индукции CYP1A1 ряд выглядит как MX > пиридин > пиридин-Ы-оксид > менадион > а-токоферол.

Индуцибельность CYP2B1. CYP1A1 и CYP1A2 под действием пиридин-Н-оксида метаболита пиридина, была в несколько раз меньше, чем под действием пиридина. Это означает, что в клетке индуцировать цитохромы Р450 могут как сам пиридин, так и его окисленный продукт, и что незначительная модификация структуры приводит к снижению индуцирующей способности гетероциклического соединения. Аналог пиридина нифедипин. приобретя в структуре заместитель нитрофенил в 4 положении, вообще утратил способность к индукции цитохромов Р450 подсемейства 1 А.

Полученные данные о том, что в ответ на введение перфтордекалина, нифедипнна, пиридина, менадиона и а-токоферола синтезируется С\ Р2В1. подтверждают, что индукция этого цитохрома Р450 может быть вызвана химически неродственными

Кверцетин и билирубин, принадлежность которых к лигандам Ah рецептора была ранее доказана in vitro, при исследовании in vivo обнаружили различные свойства в отношении индукции CYP1А1. Введение in vivo кверцетина в достаточно большой дозе не приводило к изменению активности CYP1A1/1A2. а билирубин увеличивал активность CYP1A1. Исследование механизма индуцирующего влияния билирубина на CYP1A1 печени экспериментальных животных показало, что регуляция осуществляется на транскрипционном уровне через AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции.

Индуцмбельность CYP1A под действием а-токоферола, менадиона и билирубина. Индукция CYP1А1 происходила под действием соединений, химические структуры которых непохожи на структуру классических индукторов CYP1A1. Полученные нами результаты свидетельствуют, что а-токоферол. менадион и билирубин индуцируют CYP1A в значительно меньшей степени, чем классические индукторы метилхолантрен и бензо(а)приен. Так. при введении а-токоферола, менадиона или билирубина активность CYP1A1 возрастала максимум в 5.4 раза по сравнению с контролем. При введении а-токоферола и менадиона активность CYP1A2 увеличивалась примерно в 3 раза. Для сравнения, при введении БП активность CYP1A1 возрастала более чем в 100 раз. а активность CYP1A2 - в 10 раз. То есть а-токоферол. менадион и билирубин являются относительно слабыми индукторами CYP1A1.

Вероятным объяснением слабой индукции CYP1A а-токоферолом, менадионом и билирубином по сравнению с классическим индуктором может быть их низкая аффинность к AhR и/или сниженная способность AhR к трансактивации после связывания с этими веществами.

Проведенные нами исследования не позволяют однозначно определить, являются ли а-токоферол и менадион лигандамн AhR. С этим рецептором могут связываться как сами а-токоферол и менадион. так и их метаболиты. На основе анализа литературных данных об известных на сегодняшний день лигандах AhR гипотеза о непосредственном взаимодействии самого а-токоферола с этим рецептором представляется сомнительной, поскольку это вещество имеет в своей структуре длинную алифатическую цепь. Более вероятными кандидатами на роль лиганда AhR в этом случае являются метаболиты а-токоферола с укороченной цепью. В случае менадиона лигандом может являться как само вещество, так и его метаболиты. Кроме того, может иметь место косвенная активация AhR а-токоферолом и менадионом за счет изменения метаболизма других веществ, приводящего к образованию эндогенных пнгандов этого рецептора.

Исследование ДНК-связывающей способности AhR в ядрах клеток печени крыс показало усиление взаимодействия димера AhR/Amt с XRE3 в следующем ряду: атокоферол < менадион < бензо(а)пирен. Таким образом, слабая индукция CYP1A а-токоферолом и менадионом в сравнении с БП может, по крайней мере, частично, являться следствием слабой активации ДНК-связывающей способности AhR. Кроме того, существуют литературные данные о низкой способности растительных лигандов AhR активировать взаимодействие базовых факторов транскрипции (в частности РНК-полимеразы) с промотором (Hestermann E.V. Brown М . 2003). Это явление может также вносить вклад в наблюдаемую нами низкую степень индукции активности CYP1A под действием а-токоферола и менадиона.

Механизмы иидукцин CYP1A1 и CYP1A2 а-токоферолом. Изменения активности CYP1A1 и CYP1A2 в ответ на введение а-токоферола имеют различные время- и дозо-зависимые закономерности, что свидетельствует о комплексности механизмов регуляции, лежащих в их основе. Картина регуляции активности CYP1A1 и IA2 а-токоферолом оказалась сложной. Анализ время- и дозо-зависимых закономерностей увеличения относительного содержания мРНК. апофермента и сопоставление этих параметров с активностью CYP1A1, а также исследование ДНК-связывающей способности AhR показали, что а-токоферол способен увеличивать активность этого фермента разными способами. Во-первых, это активация транскрипции гена CYP1A1 с участием AhR. наблюдаемая при коротких сроках введения большой дозы (1 сутки, 150 мг/кг) и. вероятно, при более длительном введении, но малых доз а-токоферола. Во-вторых, это посттрансляционный механизм, вступающий в действие при увеличении дозы а-токоферола. Механизм индукции CYP1A2 под действием а-токоферола нетранскрипционный, поскольку, несмотря на повышение активности этого фермента, накопления мРНК CYP1A2 не зарегистрировано. а-Токоферол способен изменять физико-химические характеристики мембран, влияя таким образом на активность мембранно-связаиных ферментов, в том числе и цитохромов Р450 (Hietanen Е. et al, 1975; Saito М. et al. 1990), а также может предотвращать повреждение ферментов, вызванное процессами перекисного окисления, за счет своих широко известных антиоксидантных способностей (Azzi A. et al., 2000). наблюдаемых и нами в данном исследовании. Возможно, оба этих свойства, или одно из них, объясняют повышение активности CYP1A при введении 70 мг а-токоферола на кг массы, поскольку в этом случае не наблюдается ни увеличения уровня синтеза мРНК. ни возрастания содержания апофермента. Снижение экспрессии гена при этой дозе, а также обратная зависимость активности CYP1А1 от длительности введения а-токоферола, может свидетельствовать о его способности запускать механизм негативной транскрипционной регуляции этого гена при повышении содержания а-токоферола в тканях.

Хотя а-токоферол изучался ранее в основном как антиоксидант, исследования последнего десятилетия выявили некоторые другие его функции в клеточном метаболизме, не связанные с антирадикальной активностью (Azzi A. el al., 2000; Birgelius-Flohe R-, Traber M.G., 1999). Показано, что а-токоферол способен изменять экспрессию некоторых генов н модулировать активность некоторых ферментов на посттранскрипционном уровне, в частности, ингибировать протеинкиназу С (Boscoboinik D. et al., 1991; Ricciarelli R. et al., 1998), которая, судя по литературным данным, играет важную роль в регуляции AhR-зависмого пути сигнальной трансдукции (Long W.P. et al., 1998; Chen Y.H., Tukey R.H., 1996). Возможно, высокие концентрации а-токоферола могут супрессировать экспрессию гена CYP1A1. снижая степень фосфорилирования AhR и/или Ami.

Механизмы нндукцни CYP1A1 и CYP1A2 менадионом. Изменения активности CYP1A1 и CYP1A2 под действием менадиона также характеризуются различные дозовыми и временными зависимостями, что говорит о разнообразии механизмов формирования ответа ферментов на введение менадиона. Исследование механизма индукции CYP1A показало, что индуцирующее влияние менадиона реализуется на транскрипционном уровне, как для CYP1A1, так и для CYP1A2, поскольку сопровождается возрастанием уровня синтеза мРНК соответствующих генов и увеличением содержания апоферментов. Данные, полученные при исследовании ДНК-связывающей способности AhR и показавшие усиление связывание димера AhR/Arnt с XRE в экстрактах ядер клеток печени крыс, получавших менадион, свидетельствует о способности этого вещества активировать AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции.

Таким образом, механизм индукции CYP1A1 и CYP1A2 под действием менадиона является транскрипционным (и реализуется через AhR-зависимый путь сигнальной трансдукции).

Механизм нндукцни CYP1A1 в печени экспериментальных животных билирубином. Моделирование ситуации повышения уровня билирубина в крови путем его внутривенного введения показало, что при этом в печени крыс наряду с увеличением активности CYP1A1 увеличивается уровень мРНК CYPIAI. появляется белок CYP1A1 и AhR становится транскрипционно активным. Все эти параметры изменяются с одинаковыми временными закономерностями, и это показывает, что в условиях in vivo билирубин регулирует экспрессию гена CYP1A1 AhR-зависимым

Возможные механизмы индукции CYP2B1, CYP2C, НАДФН-цитохром Р450 редуктазы сс-токоферолом н менадионом. Классический механизм регуляции ксенобиотиками генов, принадлежащих к семейству СYP2. предполагает активацию транскрипции с участием одного из двух рецепторов CAR и PXR (Honkakoski Р., Negishi М., 2000).

Поскольку известно, что активность многих ядерных рецепторов зависит от статуса их фосфорилирования (Shao D., Lazar М.А. 1999, Long W.P. et al, 1998 Chen Y.H., Tukey R.H., 1996, Sidhu J.S., Omiecinski C.J., 1995). а а-токоферол способен влиять на активность некоторых киназ и фосфатаз (Boscoboinik D. et al., 1991; Ricciarelli R. et al., 1998), можно предположить, что рецепторы, регулирующие экспрессию генов цитохромов Р450 разных семейств, возможно, активируются этим веществом опосредовано через общий для них механизм, связанный с изменением процессов фосфорилироваиия/дефосфорилирования. В пользу этого предположения говорит схожий характер изменений активности CYP1A, CYP2B н CYP2C при введении разных доз а-токоферола.

Механизм индукции генов CYP2B и CYP2C не выяснен до конца даже для классических индукторов ФБ-типа. Из литературных данных известно, что в регуляции экспрессии генов CYP2B и CYP2C принимает участие PXR (Tamasi V. et al., 2003). Показано также, что а-токоферол и менадион могут активировать этот рецептор (Landes N. et al., 2003), таким образом, индукция CYP2B и CYP2C под действием исследуемых веществ, может опосредоваться PXR. Значение умеренного повышения активности этих ферментов неизвестно, однако, они метаболизнруют многочисленные лекарственные соединения, а исследуемые нами вещества часто применяются в медицине в комплексе с другими препаратами. Можно предположить, что время полужизни лекарств изменяется под действием менадиона и а-токоферола.

Анализ дозовых и временных зависимостей изменений общего содержания цитохромов Р450 и активности CYP1A, CYP2B и CYP2C под действием а-токоферола и менадиона, показывает отсутствие взаимосвязи между этими параметрами, что позволяет предположить индукцию и других форм цитохромов Р450, не исследованных нами, при введении этих веществ. Например, недавно было показано, что а-токоферол увеличивает экспрессию генов CYP3A (метаболизирующих многие лекарственные препараты), которые находятся под контролем PXR (Kluth D. et al.,2005).

В регуляции активности НАДФН-цитохром Р450 редуктазы принимают участие как транскрипционные (O'Leary К.А. et al- 1997), так и посттранскрипционные механизмы (Kam P.A., Waxman D.J., 1992; Li Н.С. et al., 2001). а-Токоферол и менадион являются лнпофильными соединениями, следовательно, они могут встраиваться в мембраны эндоппазматического ретикулума и изменять их физико-химические характеристики, которые в свою очередь могут влиять на активность мембрано-связанного фермента НАДФН-цитохром Р450 редуктазы. Кроме того, а-токоферол может предотвращать повреждение этого фермента свободными радикалами за счет своих антиоксидантных свойств.

Ингибнрующне эффекты а-токоферола, менадиона и кверцетина на индуцируемые бс11зо(а)пнрсном активности CYP1A н механизмы, лежащие в их основе. При совместном введении двух химических соединений, одно из которых является сильным индуктором CYP1A, а другое - слабым индуктором CYP1A (а-токоферол и менадион) или лигандом AhR (кверцетин), было обнаружено, что все три соединения снижают индуцирующий эффект бензо(а)пирена на активность CYP1A1 и CYP1A2. Так, в микросомах печени крыс, получавших бензо(а)пирен совместно с менадионом или кверцетином, значительно снижалась активность CYP1A1 и CYP1A2, а при совместном введении бензо(а)пирена и а-токоферола снижалась только активность CYP1A1 и гораздо менее выражено.

Бензо(а)пирен, а-токоферол, менадион и кверцетин могут обладать антиоксндантными/лрооксидантными свойствами (Birgelius-Flohe R., Traber M.G.,1999; Canfield L.M. et al., 1985; Johnson B.C., 1988) и процессы перекисного окисления могут влиять на активность цитохромов Р450 (Murray М., 1991; Lee S.M., Clemens M.G., 1992; Morel Y., Barouki R., 1998). В нашем исследовании менаднон в использованной дозе не влиял на процессы ПОЛ, тогда как а-токоферол проявлял выраженные антиоксидантные свойства, поэтому нельзя объяснить ингибирование бензо(а)пирен-индуцированных активностей CYP1A /л vivo повреждением фермента свободными радикалами, поскольку эти вещества в использованных дозах не являются проокендантами.

Существует вероятность того, что а-токоферол при совместном введении с бензо(а)пиреном может стабилизировать белок CYP1A1 за счет своих антиоксидантных свойств. Нами было показано, что последнее предположение неверно, поскольку иммуноблот анализ белков микросом с антителами против CYP1A1/CYP1A2 не показал значительных различий в интенсивности окраски полос. соответствующих CYP1A1/1A2. у крыс, получавших бензо(«)пирен совместно с а-токоферолом, и у крыс, получавших бензо(а)пирен, а в микросомах печени крыс, получавших бензо(а)пирен совместно с менадноном, интенсивность окраски

Причиной ингибирующего действия менадиона или кверцетина на бензо(а)пирен-индуцируемую активность CYP1A1 и CYP1A2 в микросомах печени крыс, как показали результаты, является снижение экспрессии генов CYP1A1 и CYP1A2, и механизмом негативной регуляции является снижение ДНК-связывающей способности AhR. Вероятно, при совместном введении бензо(а)пирена с менадноном или кверцетином некоторая часть клеточного пула AhR связывается с первым соединением, а оставшаяся - со вторым. Если сильные и слабые индукторы (или лиганды AhR) взаимодействуют с разными аминокислотными остатками гидрофобного кармана AhR, как это показано недавно (Backlund М., Ingelman-Sundberg М., 2004), то такие взаимодействия могут, например, повлиять на конформацию активной формы этого рецептора. А разные конформации AhR могут иметь отличную друг от друга способность связывания с промоторами AhR-зависимых генов (Hestermann E.V., Brown М., 2003). Возможно конформация AhR после связывания одновременно с бензопиреном и менадноном или кверцетином не позволяет проявлять AhR высокую трансактивационную способность, вследствие чего и наблюдается ингибирующий эффект на индукцию CYP1А классическим индуктором.

Предлагаемое выше объяснение не является единственно возможным. Негативная регуляция экспрессии гена CYPIAI может осуществляться несколькими другими путями, например, через негативный регуляторный элемент, взаимодействие которого с ядерным белком Oct-1 приводит к понижению активности промотора (Bhat R. et al., 1996). Кроме того, недавно был открыт белок - репрессор AhR (AhRR), который находится под контролем AhR, его количество в клетке повышается при введении лигаидов AhR. Этот белок способен взаимодействовать с Amt, образуя гетеродимер, который связывается с XRE, но не приводит к активации транскрипции гена (Karchner S.I. et aL, 2002; Tsuchiya Y. el al, 2003). Было показано, что активация ССААТ/энхансер-связывающего белка р. приводит к понижению степени индукции гена CYPIAI З-метилхолантреном (Cho I.J., Kim S.G., 2003). Можно считать доказанным, что в регуляции самого AhR принимают участие другие транскрипционные факторы, как это показано, например, для PPARa (Shaban Z. et al., 2004). Исследуемые нами вещества имеют структуру, отличную от структуры классических лигандов AhR. Возможно, они способны активировать другие пути сигнальной трансдукции помимо AhR-зависимого. которые могут либо взаимно ослаблять друг друга из-за конкуренции за совместные коактиваторы, либо один может негативно регулировать другой.

Наблюдаемое снижение активности CYP1A1 при совместном введении бензо(а)пирена с а-токоферолом in vivo может объясняться аллостерическим действием на фермент, поскольку в печени таких животных не регистрируется изменение содержания апофермента.

Идентификация и детальное исследование механизмов действия природных активаторов AhR-зависимого пути сигнальной трансдукции имеют важное значение, поскольку такие соединения могут предотвращать возникновение опухолей. Это может происходить, во-первых, за счет перекреста AhR-зависимого пути сигнальной трансдукции с другими, как это доказано для андроген- и эстроген-зависимых опухолей (Wormke М. et а!. 2003; Morrow D. el al. 2004) и. vw-вторых, за счет снижения степени индукции активности CYP1A. метаболизирующих проканцерогены в канцерогены (Cho U, Kim S.G., 2003; Hestermann E.V. Brown M. 2003).

Индукция ферментов моноокенгеназной системы печени физическими факторами. Результаты исследования влияния на монооксигеназную систему печени физических воздействий, которым подвергались экспериментальные животные, показали, что под действием физических факторов, различных по природе и механизму действия на организм, индуцируются или ингибируются различные формы цитохрома Р450. Сравнение действия физических факторов, применяемых для терапии (ультразвука низкой интенсивности, микроволн сантиметрового диапазона и низкоинтенсивного лазерного излучения инфракрасного диапазона), показывает, что активность CYP1AI повышается только под влиянием ультразвука, CYP2B1 и CYP2A - только под влиянием лазерного излучения. Что касается активности CYP3A, то она изменяется в условиях воздействия всех трех физических факторов, однако, влияние ультразвука проявляется угнетением ее активности, а действие факторов, в известном смысле близких по физической природе, но принадлежащих к различным диапазонам спектра электромагнитных колебаний - СМВ и лазерного излучения, сопровождается индукцией активности CYP3A. Радиация в малых дозах оказывает индуцирующее влияние на CYP1A2 и гормон-регулируемые CYP2A и CYP2C11 Длительное пребывание при умеренно низкой температуре приводит к увеличению активности НАДФ-Цитохром Р450 редуктазы и CYP1A1, CYP1A2, CYP2B1. CYP2E1 и CYP3A.

Формирование ответной реакции моноокенгеназной системы печени в условиях воздействия физическии факторами на организм может быть обусловлено, по крайней мере, двумя причинами. С одной стороны, физиологическое действие физических факторов на организм человека и животных опосредовано механизмом нейрогуморальной регуляции. Например, физиотерапевтические средства малых интенсивностей. как правило, оказывают стимулирующее влияние на железы внутренней секреции, особенно гипофиз-тиреоид-адреналовой оси (Улащик B.C., 1983), а активность некоторых цитохромов Р450 печени зависит от гормонального статуса организма, поскольку стероидные гормоны участвуют в регуляции активности некоторых форм цитохрома Р450 (CYP2A. CYP2C, CYP3A) (Tamasi V. et al., 2003). С другой стороны, метаболическая утилизация гормонов и синтез некоторых га них, осуществляется при участии цитохромов Р450 (CYP2A, CYP2C11, CYP3A) и, следовательно, изменения их активности могут модулировать гормональные взаимоотношения в организме.

Условием формирования физиологического ответа на физическое воздействие является запуск биохимических реакций биологически активными продуктами, образованными или освобожденными из физиологического депо под действием физических факторов. В случае индукции цитохромов Р450 под действием физических факторов логично предполагать наличие эндогенных соединений, которые опосредуют запуск экспрессии соответствующих генов.

Под действием двух различных по природе физических факторов - ультразвука и холода было зарегистрировано увеличение активности CYP1A1. И хотя индукция была несопоставимо меньше, чем под действием классических индукторов, этот феномен вызвал особый интерес в связи со значимостью фермента в активации проканцерогенов.

Механизм индукции CYP1A1 ультразвуком и эндогенный посредник индукции. Исследование параметров индукции CYP1A1 в течение 24 часов после воздействия ультразвуком показало, что мРНК CYP1A1 начинает экспрессироваться уже в самые первые часы, и уровень ее достигает максимума к 4 часам. Одновременно начинается синтез белка CYP1A1 и увеличивается ферментативная активность CYP1A1. К концу первых суток степень индукции CYP1A1 сопоставима с таковой после ежедневного в течение 5 дней воздействия ультразвуком. Важным в настоящей работе представлялся вопрос о роли AhR в индукции CYP1A1 под действием ультразвука. Показано, что в результате воздействия ультразвуком AhR в печени крыс принимает активную форму для связывания с XRE в эихансерной области гена CYP1A1, что позволяет говорить о том, что транскрипционная активация CYP1AJ под действием ультразвука происходит классическим AhR-зависимым путем.

Одним из эндогенных посредников в индукции CYP1A1 под действием ультразвука может быть билирубин - продукт деградации гема. Доказательством этого является тот факт, что после ультразвукового воздействия в сыворотке крови повышается содержание билирубина, а предшествует этому повышение уровня внеэритроцитарного гемоглобина. Это может быть связано с тем, что ультразвук при воздействии на область печени вызывает внутрисосудистый гемолиз вследствие кавитации и/или активации свободнорадикальных процессов, и гем освободившегося гемоглобина становится источником билирубина.

Следует заметить, что сопоставление временных параметров индукции CYP1A1, достигаемых при повышении уровня билирубина в крови в результате внутривенного введения и при ультразвуковом воздействии, показывает, что при внутривенном введении билирубина индукция CYP1A1 более скоротечна. Это может служить косвенным доказательством того, что индукция CYP1A1 под действием ультразвука опосредуется не только билирубином.

Механизм индукции CYP1A1 и CYP1A2 под влиянием умеренно низкой температуры и эндогенные посредники нндукцни. Исследование индукции CYP1A1 и CYP1A2 в печени крыс при их длительном пребывании на холоде (5 и 10 суток при +4°С) на уровне транскрипции генов, синтеза апоферментов и функциональной активности ферментов, а также ДНК-связывающей способности AhR показало, что индукция CYP1A1 в печени крыс осуществляется на транскрипционном уровне с вовлечением AhR сигнального пути, а индукция CYP1A2 реализуется на посттранскрипционном уровне.

На основании данных о содержании а-токоферола как фактора антиоксидантной защиты при воздействии холодом можно предположить, что а-токоферол. накапливающийся в печени в процессе адаптации организма к холоду, может играть роль эндогенного посредника в индукции цитохрома CYP1A1. Действительно, при тех уровнях токоферолов в печени, которые достигаются через 5 и 10 суток пребывания на холоде, и сходных по значениям уровнях, но достигнутых экспериментально при кормлении животных а-токоферолом. регистрируются близкие по значениям степени увеличения активности CYP1A1.

Роль эндогенного посредника индукции CYP1A1 при длительном пребывании животных на холоде, но не на ранних этапах, может выполнить билирубин, содержание которого возрастает, видимо, в результате спровоцированного холодом внутрисосудистого гемолиза.

Таким образом, представленные результаты позволяют сделать следующие выводы:

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Гришаева, Алевтина Юрьевна, Новосибирск

1. Акинчиц М.А., Павловская Н.А. Модификация метода определения билирубина в сыворотке крови. // Лаб. Дело. 1986. - N. 2. - С. 727- 730.

2. Андреева Л.И. Количественное определение малонового диальдегида. // Лабораторное дело. 1988. - Т. 11. - С. 41 -43.

3. Ахалия М.Я., Деев Л.И. Платонов А.Г., Хакимов А. Влияние Х-облучения на цитохром Р450-зависимую монооксигеназную систему печени различных видов животных. // Научные Доклады Высшей Школы. Биол. Науки. 1990. - Т. 11. - С. 47-52.

4. Боровикова Г.В. Эффекты различных доз рентгеновского облучения на содержание микросомальиых гемопротеинов в печени крыс // Радиац. Биол Радиоэкол. 1999. - Т. 39. - N. 4. - С. 399-403.

5. Владимиров Ю.А, Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М. Наука, 1972. — 252 с.

6. Владимиров. Ю. А. Клебанов Г. И. Борисенко Г Г., Осипов А.Н. Молекулярные и клеточные механизмы действия низкоинтенсивного лазерного излучения // Биофизика. 2004. Т. 49. - N. 2. - С. 339-350.

7. Винер Р.И., Новиков К.Н. Архипенко Ю.В., Скрипин В.И., Козлов Ю.П. Неантиоксидантный механизм стабилизации цитохрома Р-450 а-токоферолом: эффективность при авитаминозе Е. // Биохимия. 1986. - Т. 51. - Вып. 9. - С. 1549-1553.

8. Гамалея Н.Ф. Лазеры в эксперименте и клинике. М.: Медицина. 1972. 232 с.

9. Городовикова Е.Н. Гудзь Т.И., Гончаренко Е.Н. Влияние Х-облучения на генерацию О2 в микросомах печени крыс // Радиобиология. 1985. - Т. 25. - N. 5. -С. 165-168.

10. Губанов Н И. Утепбергенов А.А. Медицинская биофизика. М: Медицина, 1978. -336 с.

11. Гуткина Н И., Мишин В.М., Ляхович В В. Индукция феобарбиталовой формы цитохрома Р450 химически неродственными соединениями. // Биохимия. 1986. -Т. 51.-С. 122314. Деев Л.И., Ахания М.Я., Василенко О.В., Платонов А.Г., Топчишвили Г.И.

12. Влияние Х-лучей на уровень, композицию и пара-нитроанизол-О-деметилазную активность цитохрома Р450 в микросомах печени крыс. // Радиобиология. 1984. -T.24.-N. 5.-С.612-615.

13. Золотарева Т. А. Влияние микроволн сантиметрового диапазона на биотрансформацию лекарственных средств в эксперименте // Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физкультуры.— 1990. — № 3. — С. 5052.

14. Золотарева Т.А., Гришанова, А.Ю., Гуляева Л.Ф., Ляхович В.В., Олешко А.Я Влияние низкоинтенсивных физических лечебных факторов на мнкросомальные окислительные системы печени в эксперименте. // Вопросы курортологии. 1998. - N. 3. - С. 34-37.

15. Иваницкий Г.Р. Биофизика на пороге нового тысячелетия: перфторуглеродные среды и газотранспортные кровезаменители II Биофизика. 2001. - Т. 46. - С. 5-33.

16. Илларионов В.Е. Основы лазерной терапии. М.: Наука, 1992. 123 с.

17. Кавецкий Р.В., Чудаков В.Г., Сидорик Е.П. Гамалея Н.Ф, Когут Т.С. Лазеры в биологии и медицине. М.: Наука, 1969. 260 с.

18. Кнунянц И.Л.; Фокин А.В. Мир фторуглеродов (Новые соединения фтора). М.: Наука, 1968.-63 с.

19. Козловская Н.Е. Гришанова А.Ю., Мишин В.М. Ляхович В.В. Влияние пиридина и пиридин-М-оксида на монооксигеназную систему микросом печени крыс. // Биохимия.-1992.-Т. 57.-Вып. 10.-С. 1592-1596.

20. Колосова Н.Г., Колпаков А.Р., Добронравова О.В. Изменение содержания, структуры и заряда липопротеинов крови при адаптации к холоду. // Биофизика. -1995. Т. 40. - N. 2. - С. 422-427.

21. Колосова Н.Г., Колпаков А.Р., Панин Л.Е. Содержание токоферола и продуктов перекисного окисления липидов в тканях крыс Вистар в динамике адаптации к холоду. // Вопросы мед. Химии. 1995. -N. 6. - С. 16-19.

22. Колпаков А.Р., Колосова Н.Г. Влощинский П.Е. Механизмы адаптации человека и животных к холоду. // Вестник РАМН. -1993. N. 8. - С. 29-31.

23. Колпаков А.Р., Колпаков МЛ., Панин Л.Е Фармакокинетика антипирина и изониазида у крыс в динамике холодовой адаптации // Бюлл. экспер. биол. мед. -1994.-Т. 118.-С. 279-280

24. Крылов Н.Л., Мороз В.В., Белоярцев Ф.Ф Применение фторуглеродного кровезаменителя перфторана в клинике. // Воен. мед. журнал. 1985. - № 8. - С. 36-40.

25. Ляхович В В. Цырлов И.Б. Структурные аспекты биохимии монооксигеназ. Новосибирск: Наука. Сиб.отделение. 1978. -238 с.

26. Маниатис Т. Фрич Э. Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984 -479 с.

27. Маргулис М.А. Звукохимические реакции и сонолюминисценцня. М.: Химия, 1986.-288 с.

28. Мишин В.М., Ляхович В.В. Множественные формы цитохрома Р450. Новосибирск: Наука. Сиб. отделение. 1985. 181 с.

29. Нестерова Т.А., Смирнова Т.Н., Туточкина Л.Т. Гидроксилирующая активность микросом печени крыс в период острой фазы формирования белков под действием радиации // Радиобиология 1983. - Т. 23. - N. 5. С. 672-675

30. Образцов В В., Шехтман Д.Г., Сологуб Г.Р., Белоярцев ФФ Индукция микросомальных цитохромов в печени крыс после внутривенного введения животным эмульсии перфторорганическнх соединений // Биохимия. 1985. - Т. 50. - С. 1220-1224.

31. Парк Д. Биохимия чужеродных соединений. М.: Медицина, 1973. — 287 с.

32. Тонкошкурова О.А. Дмитриев А.И, Дмитриева Р.Е. Определение концентрации внеэритроцитарного гемоглобина плазмы (сыворотки) крови гемоглобинцианндным методом // Клин. Лаб. Диагн. 1996. - N. 2. - С. 21-22.

33. Улашик B.C., Введение в теоретические основы физической терапии // Минск: Наука и техника, 1981. -235 с.

34. Улашик B.C., Чиркин А.А- Ультразвуковая терапия. Минск, 1983, с. 34- 35.

35. Хаар Г. Применение ультразвука в медицине. Москва, Мнр, 1989

36. Шабалина И.Г, Колпаков А.Р, Соловьев В.Н, Колосова Н.Г, Панин Л.Е. Энергентический статус печени крыс в динамике адаптации к холоду. // Биохимия. 1995. - Т. 60. - N. 3 - С. 441-449.

37. Эльпинер И.Е. Биофизика ультразвука. М.: Наука, 1973,260 с.

38. Adams N.H, Levi P.E, Hodgson E. Regulation of cytochrome P-450 isozymes by methylenedioxyphenyl compounds // Chem. Biol. Interact. 1993. - V. 86. - N. 3. - P. 255-274

39. Allen S.W, Mueller L, Williams S.N., Quattrochi L.C, Raucy J. The use of a high-volume screening procedure to assess the effects of dietary flavonoids on human cyplal expression // Drag. Metab. Dispos. 2001. - N 29 - P. 1074-1079.

40. Anderson M, Bandiera S.M, Chang T.K.H, Bellward GD. Effect of androgen administration during puberty on hepatic CYP2CU, CYP3A, and CYP2A1 expression in adult female rats.// Drug Metab. Dispos. 1998. - V. 26. - P. 1031-1038.

41. Aoyama Т., Korzekwa К., Nagata К., Gillette J., Gelboin H.V., Gonzalez F.J. Estradiol metabolism by complementary deoxyribonucleic-acid expressed human cytochrome P4S0 // Endocrinology. 1990. - V.126. - P. 3101-3106.

42. Armstrong, R.N. Structure, catalytic mechanism, and evolution of the glutathione transferases. // Chem. Res. Toxicol. 1997. - V. 10. - P. 2-18.

43. Arpiainen S., Raffalli-Mathieu F., Lang M.A., Pelkonen O., Hakkola J. Regulation of the Cyp2a5 gene involves an aryi hydrocarbon receptor-dependent pathway. // Mol. Pharmacol. 2005. - V. 67. - N. 4. - P. 1325-1333.

44. Ashida H., Fukuda I., Yamashita Т., Kanazaw, K. Flavones and flavonols at dietary levels inhibit a transformation of aryl hydrocarbon receptor induced by dioxin. // FEBS Lett. 2000. - N 476. - P.213-217.

45. Astrom A., DePierre J.W. Rat liver microsomes cytochrome P450, purification, characterization, multiplicity and induction. // Biochem. Biophys. Acta. 1986. - V. 853.-P. 1-27.

46. Azzi A., Boscoboinik D., Fazzio A., Marilley D., Marom P., Ozer N.K., Spycher S., Tasmato A. RRR-alpha-tocopherol regulation of gene transcription in response to the cell oxidant status.//Emahrungswiss. 1998.-V. 37 -Suppl. 1.-P. 21-28

47. Azzi A., Breyer I„ Feher M., Pastori M., Ricciarelli R., Spycher S., Staffieri M., Stoeker A., Zimmer S,, Zingg J.M. Specific cellular responses to alpha-tocopherol. // J. Nutr. -2000. V. 130. - N. 7. - P. 1649-1652.

48. Azzi A., Breyer 1., Feher M., Ricciarelli R., Stoeker A., Zimmer S. Zingg J. Nonantioxidant functions of alpha-tocopherol in smooth muscle cells. // J. Nutr. 2001. -V.131.-N. 2.-P. 378-381.

49. Azzi A., Stoeker A. Vitamin E: non-antioxidant roles // Prog. Lipid Res. 2000. - V. 39.-N. 3--P. 231-255.

50. Backlund M., Ingelman-Sundberg M. Different structural requirements of the ligand binding domain of the aryl hydrocarbon receptor for high- and low-affinity ligand binding and receptor activation. // Mol. Phaimacol. 2004. - V.65. - N. 2. - P. 416425.

51. Backlund M., Ingelman-Sundberg M. Regulation of aryl hydrocarbon receptor signal transduction by protein tyrosine kinases. // Cell Signal. 2005. - V. 17. - N. 1. - P. 3948.

52. Barker C.W., Fagan J.B., Pasco D.S. Down-regulation of P4501A1 and P4501A2 mRNA expression in isolated hepatocytes by oxidative stress. // J. Biol. Chem. 1994. -V. 269. - N. 6. - P. 3985-3990.

53. Bartsch H., Nair U., Risch A., Rojas M., Wikman H., Alexandrov K. Genetic Polymorphism of CYP Genes, Alone or in Combination, as a Risk Modifier of Tobacco-related Cancers. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2000. - V. 9. - N. 1. - P. 328.

54. Bhat R„ Weaver J.A., Sterling K.M., Bresnick E Nuclear transcription factor Oct-1 binds to the 5'-upstream region of CYPIAI and negatively regulates its expression. // Int. J. Biochem. Cell. Biol. 1996. - V. 28. -N. 2. - P. 217-227.

55. Birgelius-Flohe R., Traber M.G. Vitamin E: function and metabolism. // FASEB Journal. 1999 - V.13. - P. 1145-1155.

56. Black S., Coon M.J. Structural features of liver microsomal NADPH-cytochrome P-450 reductase: hydrophobic domain, hydrophilic domain, and connecting region. // J. Biol. Chem. 1982. - V.257. - P. 5929-5938.

57. Blumberg В., Sabbagh W., Jr. Juguilon H., Bolado J., Jr., van Meter C.M., Ong E.S., Evans R.M. SXR, a novel steroid and xenobiotic-sensing nuclear receptor. // Genes Dev. 1998. - V. 12. -N. 20. - P. 3195-3205.

58. Booth S.L., Broe K.E., Gagnon D.R., Tucker K.L., Hannan M.T., McLean R.R., Dawson-Hughes В., Wilson P.W., Cupples L.A., Kiel D.P. Vitamin К intake and bone mineral density in women and men. // Am. J. Clin. Nutr. 2003. - V.77. - N. 2. - P. 512-516.

59. Boscoboinik D., Szewczyk A., Azzi A. Alpha-tocopherol (vitamin E) regulates vascular smooth muscle cell proliferation and protein kinase С activity. // Arch. Biochem. Biophys. 1991. - V. 286. - N. 1. - P. 264-269.

60. Boscoboinik D., Szewczyk A., Hensey C., Azzi A. Inhibition of cell proliferation by alpha-tocopherol. Role of protein kinase C. // J. Biol. Chem. 1991- - V. 266. -N. 10. -P. 6188-6194.

61. Bowry V.W., lngold K.U., Stocker R. Vitamin E in human low-density lipoprotein. When and how this antioxidant becomes a pro-oxidant. // Biochem. J. 1992. - V. 288. -PL 2.-P. 341-344.

62. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilazing the principle of protein-dye binding. // Anal. Biochem. -1976.-V.72.-P. 248-254.

63. Burk O., Wojnowski L. Cytochrome P450 ЗА and their regulation // Naunyn. Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 2004. - V. 369. - N. 1. - P. 105-124.

64. Burke M.D., Thompson S., Mayer R.T. Etoxy-, pentoxy-, benzyloxi-, phenoxazones and homologues a series of substrates to distinguish between different induced cytochrome P450 // Bioehem. Pharmacol. 1985. - V.34. - P. 3337-3346.

65. Campbell T.C., Hayes J.R. Role of nutrition in the drug-metabolizing enzyme system // Pharmacol. Rev. 1974. - V. 26. - N. 3. - P. 171-197.

66. Carlson G.P- Comparison of the effects of pyridine and its metabolites on rat liver and kidney. // Toxicol. Lett. 1996. - V. 85- - N. 3. - P. 173-178.

67. Carlson D.8., Perdew G.H. A dynamic role for the Ah receptor in cell signaling? Insights from a diverse group of Ah receptor interacting proteins. // J. Bioehem. Mol. Toxicol. 2002. - V. 16 - N. 6. - P.317-325.

68. Carpenter M.P., Howard C.N. Jr. Vitamin E, steroids, and liver microsomal hydroxylations // Am. J. Clin. Nutr. 1974. - V. 27 - N 9. - P. 966-979.

69. Carver L.A., Jackiw V. Bradfield C.A. The 90-kDa heat shock protein is essential for Ah receptor signaling in a yeast expression system I/ J- Biol. Chem. 1994. - V. 269. -N. 48. - P. 30109-30112.

70. Cassand P., Decoudu S., Leveque F., Daubeze M., Narbonne J.F. Effect of vitamin E dietary intake on in vitro activation of aflatoxin Bl. // Mutat Res. 1993. - V. 319. - N. 4.-P. 309-316.

71. Chan A.C. Vitamin E and atherosclerosis, // J. Nutr. 1998. - V. 128. - N. 10. - P. 1593-1596.

72. Chan A.C., Wagner M., Kennedy C., Chen E., LanuviHe O., Mezl V.A., Tran K., Choy P.C. Vitamin E up-regulates arachidonic acid release and phospholipase A2 in megakaryocytes. // Mol. Cell. Bioehem. 1998. - V. 189. - N. 1-2. - P.153-159.

73. Chang C.-Y., Puga A. Constitutive activation of the aromatic hydrocarbon receptor. I/ Mol. Cell. Biol. 1998. - V.18. -№1. -P. 525 -535.

74. Chattopadhyay N. Kher R., Godbole M. Inexpensive SDS/phenol method for RNA extraction from tissues. // Biotechniques. 1993. - V. 15. - P. 24-26.

75. Chen H.-S. Perdew G. H. Subunit composition of the heterodimeric cytosolic aryl hydrocarbon receptor complex. // J. Biol. Chem. 1994. - V.69. - №44. - P. 2755427558.

76. Chen H. W. Lii C.K. Sung W.C. Ко Y.J. Effect of vitamin E on rat hepatic cytochrome P-450 activity. // Nutr. Cancer. 1998. - V.31. - N. 3. - P. 178-183.

77. Chen L. Histological changes in rat liver tumours treated with high-intensity focused ultrasound. // Ultrasound Med. Biol. 1993. - V 19. - N 1. - P. 67- 74.

78. Chen Y.H., Tukey R.H. Protein kinase С modulates regulation of the CYPIAI gene by the aryl hydrocarbon receptor. II J. Biol. Chem. 1996. - V. 271. - N. 42. - P 2626126266.

79. CCAAT/enhancer-binding protein activation. // J. Biol. Chem. 2003. - V. 278. - N. 45.-P 44103-44112.

80. Chojkier M. Houglum K. Lee K.S. Buck M. Long- and short-term D-alpha-tocopherol supplementation inhibits liver collagen alphal(l) gene expression. II Am. J. Physiol. 1998. V.275. - N. 6. - P. 1480-1485.

81. Chow С. K. Vitamin E and oxidative stress. // Free Radic. Biol. Med. -1991 V. 11. N. 2.-P. 215-232.

82. Chowdhury R.C. Heme and bile pigment metabolism. II In: The Liver: Biology and Pathology. Raven Press. New York. 1994. - P. 471- 504.

83. Ciolino. H.P. Daschner, P.J. Yen, G.Ch. Dietary flavonols quercetin and kaemferolare ligands of the aryl hydrocarbon receptor that affect CYPIAI transcription differentially II Biochem. Soc. -1999. N 340. -P. 715-722.

84. Ciolino, H.P, Yeh, G.C. The flavonoid galangin is an inhibitor of CYP1A1 activity and an agonist/antagonist of the AhR II Br. J. Cancer. 1999. - N 79. - P. 1340-1346.

85. Cohn W, Kuhn H. The role of the low density lipoprotein receptor for alpha-tocopherol delivery to tissues // Ann. NY Acad. Sci. 1989. - V. 570. - P. 61-71.

86. Conley A., Hinshelwood M. Mammalian aromatases. // Reproduction. 2001 - V.121. -P. 685-695.

87. Conney A.H, DfVison C, Gastel R. Bums J.J. Adaptive increases in drug-metabolizing enzymes induced by pbenobarbital and other drugs. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1960. -V. 130.-P. 1-8.

88. Cribb А.Ё., Delaporte E., Kim S.G, Novak R.F, Renton K.W. Regulation of cytochrome P-4501A and cytochrome P-4502E induction in the rat during the production of interferon alphafteta. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1994. - V. 268 - N. 1. - P. 487-494.

89. Daniels S., Kodama T, Puce D.J. Damage to red blood cells induced by acoustic cavitation. // Ultrasound Med. Biol. 1995. - V. 21. - N 1. - P. 105-111.

90. Daujat M, Peryt B, Lesca P, Fourtanier G, Domergue J, Maurel P. Omeprazole, an inducer of human CYP1A1 and 1A2, is not a ligand of Ah receptor. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992 - V. 188. - P.820-825.

91. Davarinos N.A, Pollenz R.S. Aryl hydrocarbon receptor imported into the nucleus following ligand binding is rapidly degraded via the cytosplasmic proteasome following nuclear export. //J. Biol. Chem 1999.-V.274.-N.40.-P. 28708-28715.

92. Delaporte E, Renton K.W. Cytochrome P4501A1 and cytochrome P4501A2 are downregulated at both transcriptional and post-transcnptional levels by conditions resulting in interferon-alpha/beta induction. II Life Sci. 1997. - V. 60. - N. 10. -P.787-796.

93. Delescluse С., Lemaire G., de Sousa G., Rahmani R. Is CYP1A1 induction always related to AHR signaling pathway? // Toxicology. 2000. - V. 153. - P. 73-82.

94. Denison M. S. and Whitlock J.P Jr. Xenobiotic-inducible transcription of cytochrome P450 genes. Hi. Biol. Chem. 1995. - V.270. -№31. - P. 18175 - 18178.

95. Denison M.S., Deal R.M. The binding of transformed aromatic hydrocarbon (Ah) receptor to its DNA recognition site is not affected by metal depletion. // Mol. Cell. Endocrinol. 1990. - V. 69. - N. 1. - P. 51-57.0

96. Denison M.S., Fisher J.M., Whitlock J.P. Jr. The DNA recognition site for the dioxin-Ah receptor complex. Nucleotide sequence and functional analysis. // J. Biol. Chem. -1988. V. 263. -N. 33. - 17221-17224.

97. Denison M.S., Nagy S.R.D. Activation of the aryl hydrocarbon receptor by structurally diverse exogenous and endogenous chemicals. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. -2003-V. 43.-P. 309-334.

98. Dey A., Nebert D. W. Markedly increased constitutive CYP1A1 mRNA levels in the fertilized ovum of the mouse. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - V.250. N. -2.-P. 657-661.

99. Dogra S.C., Israels L.G. Vitamin K1 amplification of benzo(a)pyrene metabolism in chick embryos. // Int. J. Biochem. 1987. - V. 19- - N. 5. - P. 471-473.

100. Dussault I., Lin M., Hollister K., Wang E.H., Synold T.W., Forman B.M. Peptide mimetic HIV protease inhibitors are ligands for the orphan receptor SXR. // J. Biol. Chem. 2001. -V. 276. -N. 36. -P. 33309-33312.

101. Dyson M., Franks C., Suckling J. Stimulation of healing of varicose ulcers by ultrasound. // Ultrasonics. 1976. - V. 14. - P. 232- 236.

102. Eaton D. L., Bammler Т. K. Concise Review of the Glutathion S-transferases and their significance to toxicology. //Toxicol. Sci. 1999. - V. 49. - P 156-164.

103. Edwards R.J, Adams D.A., Watts P.S., Davies D.S., Boobis A.R. Development of a comprehensive panel of antibodies against the major xenobiotics metabolizing forms of cytochrome P450 in humans. // Biochem. Pharmacol. 1998. - V. 56. - P. 377-387.

104. Emster L., Nordenbrandt K. Oligomycin-induced energization of submitochondrial particlesio // Meth. Enzymol. 1967. - V. 10. - P. 574-580.

105. Feng Q, Kumagai T, Nakamura Y, Uchida K, Osawa T. Induction of cytochrome P4501A1 by autoclavable culture medium change in HepG2 cells. // Xenobiotica. -2002.-V. 32.-N. П.-C. 1033-1043.

106. Floreani M., Carpenedo F Inhibition of rat liver monooxygenase activities by 2-methyl-1,4-naphthoquinone (menadione). // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1990. - V. 105. - N. 2.- P.333-339.

107. Fontaine F., Delescluse C., de Sousa G., Lesca P., Rahmani R. Cytochrome 1A1 induction by primaquine in human hepatocytes and HepG2 cell: absense of binding to the aryl hydrocarbon receptor. // Biochem. Pharmacol. 1999 - V. 57 - P. 255-262.

108. Food and Nutrition Board, Institute of Medicine. Dietary reference intakes for vitamin C, vitamin E. selenium and carotenoids. Washington, DC: National Academy Press, 2000.

109. Freedman J.E., Farhat J.H., Loscalzo J., Keaney J.FJr. Alpha-tocopherol inhibits aggregation of human platelets by a protein kinase C-dependent mechanism // Circulation. -1996. V. 94. - N. 10. - P. 2434-2440.

110. Fujita J. Cold shock response in mammalian cells. // J. Mol. Microbiol. Biotechnol. -1999. V. 1. - N. 2. - P. 243-245.

111. Gairola C., Chen L.H. Effect of dietary vitamin E on the aryl hydrocarbon hydroxylase activity of various tissues in rat. // Nutr. Res. 1982. - V. 52. - N. 4. - P. 398-401.

112. Galbo H. Houston M.E., Christensen N.I., Hoist J.J. et all The effect of water temperature on the hormonal response to prolonged swimming. // Acta. Physiol. Scand.- 1979. N. 105.-P. 326-337.

113. Geyer R.P // In: Oxygen Caning Colloidal Blood Substitutes / Ed. R. Frey et al. Munchen, 1981.-P. 19-29.

114. Gibson G.G. The cytochrome P450 IV family: constitutive and inducible haemoproteins // Biochem. Soc. Transact. 1990. - V. 18. - P. 14 - 15.

115. Gillum J.G., Israel D.S.; Polk R.E. Pharmacokinetic drug interactions with antimicrobial agents. // Clin. Phaimacokinet. 1993.-.V. 25. - N. 6. - P. 450-482.

116. Gonzalez F. J. The molecular biology of cytochrome P450s. // Pharmacol. Rev. 1989. - V.40. - P. 243-288.

117. Gonzalez F.J., Kimura S., Nebert D.W. Comparison of the flanking regions and introns of the mouse 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-inducible cytochrome PI-450 and P3-450 genes. II J. Biol. Chem. 1985. - V. 260. - P. 5040-5049.

118. Gonzalez MC, Marteau C, Franchi J, Migliore-Samour D.Cytochrome P450 4A11 expression in human keratinocytes: effects of ultraviolet irradiation. // Br. J. Dermatol. -2001.-V. 145.-N-5.-P. 749-757.

119. Goodwin В., Hodgson E., Liddle C. The orphan human pregnane X receptor mediates the transcriptional activation of CYP3A4 by rifampicin through a distal enhancer module. // Mol. Pharmacol. 1999. -V. 56. -N. 6. - P. 1329-1339.

120. Goodwin В., Hodgson E., D'Costa D.J., Robertson G.R., Liddle C. ranscriptional regulation of the human CYP3A4 gene by the constitutive androstane receptor. II Mol. Pharmacol. 2002. - V. 62. - N. 2. - P. 359-365.

121. Gorski K., Camiero V., Schilber U. Tissue-specific in viio transcription from the mouse albumin promoter. // Cell. 1986. - V. 47. - P. 767-776.

122. Gradin K., Whiteiaw M.L., Toftgard R., Poellinger L., Berghard A. A tyrosin kinase-dependent pathway regulates ligand-dependent activation of the dioxin receptor in human keratinocytes // J. Biol. Chem. 1994. - V. 269. - P. 23800-23807.

123. Grange J.M., Winstanley P.A., Davies P.D. Clinically significant drug interactions with antituberculosis agents. // Drug Saf. 1994. - V. 11. - N. 4. - P. 242-251.

124. Guengench F.P. Oxidation of toxic and carcinogenic chemicals by human cytochrome P450 // Chem. Res. Toxicol. 1991. - V.4. - P. 391-407.

125. Guengench F.P. Comparisons of catalytic selectivity of cytochrome P450 subfamily enzymes from different species. // Chem.-Biol. Interactions. 1997. - V. 106. - P. 161182.

126. Guengench F.P. Cytochrome P450: What have we learned and what are the future issues? // Drug. Metab. Rev. 2004. - V. 36. - P. 159-197.

127. Guengerich F.P., Martin M.V. Purification of cytochrome P-450, NADPH-cytochrome P-450 reductase, and epoxide hydratase from a single preparation of rat liver microsomes. // Arch. Bioehem. Biophys. 1980. - V. 205. - P. 365-379.

128. Guillaumont M., Sann L., Leclereq M., Dostalova L., Vignal В., Frederich A. Changes in hepatic vitamin K1 levels after prophylactic administration to the newborn. // J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 1993. -V. 16. - P. 10-14.

129. Gut J., Kawato S., Cherry R.J., Winterhalter K.H., Richter C. Lipid peroxidation decreases the rotational mobility of cytochrome P-450 in rat liver microsomes. // Biochim. Biophys. Acta. -1985. -V. 817. -N. 2. -P. 217-228

130. Hahn M. E. Mechanisms of innate and acquired resistance to dioxin-Iike compounds. // Rev. Toxicol. 1998. - V.2. - P. 395-443.

131. Handschin C., Meyer I).A. Regulatory network of lipid-sensing nuclear receptors: roles for CAR, PXR, LXR, and FXR. // Arch. Biochem. Biophys. 2005. - V. 433. - P. 387396.

132. Hansen L. G., Warwick W. J. A fluorometric micromethod for fat tocopherol. II Clin. Biochem. 1970. - V.3 (3). - P. 225-229.

133. Harbome J.B., Mabry T.J., Mabry H. The flavonoids. London: Chapman and Hall, 1975. 621 p.

134. Harrington D.J., Soper R., Edwards C., Savidge G.F., Hodges SJ., Shearer M J. Determination of the urinary aglycone metabolites of vitamin К by HPLC with redox-mode electrochemical detection. II J. Lipid Res. 2005. - V. 46. - N. 5. - P. 1053-1060.

135. Hart J.S. Insulative and metabolic adaptations to cold in vertebrates. // Symp. Soc. Exp. Biol. -1964. V. 18. -P. 31 -48.

136. Hart J.S., Jansky L. Thermogenesis due to exercise and cold in warm- and cold-acclimated rats. // Canad. J. Biochem. Physiol. 1963. - V. 41. - P. 629-634.

137. Hashimoto H., Toide K., Kitamura R., Fujita M., Tagawa S-, Itoh S., Kamataki T. Gene structure of CYP3A4, an adult-specific form of cytochrome P450 in human livers, and its transcriptional control. // Eur. J. Biochem. 1993. - V. 218. - P. 585-595.

138. He J.S., Fulco A.J. A barbiturate-regulated protein binding to a common sequence in the cytochrome P450 genes of rodents and bacteria. // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266. - P 7864-7869.

139. Heath-Pagliuso S„ Rogers W. J., Tullis K., Seidel S.D., Cenijn P.H., Brouwer A., Denison M. S. Activation of the Ah receptor by tryptophan and tryptophan metabolites. II Biochemistry. 1998. - V. 37. - P. 11508-11515.

140. Hedlund E., Gustafsson J.-A., Warner M. Cytochrome P450 in the brain. II CuiTent Drug Metabolism. 2001. - V. 2. - P. 245-263.

141. Heilmann L.J., Sheen Y.-Y., Bigelow S.W., Nebert D.W. The trout P4S01A1 gene: eDNA and deduced protein sequence, expression in liver, and evolutionary significance. // DNA. 1988. - V. 7. - P. 853-857.

142. Helsby N.A., Williams I-. Kerr D., Geseher A., Chipman J K. The isoflavones equol and genistein do not induce xenobiotic-metebolizing enzymes in mouse and human cells. II Xenobiotica. 1997. - N 27. - P. 587-596.

143. Hermanussen M. M., Jensen F., Hirsch N-, Friedel K., et al.Acute and chronic effects of winter swimming on LH, FSH, prolactin, growth hormone, TSH, Cortisol, serum glucose and insulin. // Arct. Med. Res. 1994. - N. 54. - P. 45-51.

144. Hcstermann E.V., Brown M. Agonist and chemopreventative ligands induce differential transcriptional cofactor recruitment by aryl hydrocarbon receptor. // Mol. Cell Biol. -2003. V. 23. - P. 7920-7925.

145. Hietanen E., Laitinen M., Vainio H., Hanmnen O. Dietary fats and properties of endoplasmic reticulum: II. Dietary lipid induced changes in activities of drug metabolizing enzymes in liver and duodenum of rat. II Lipids. 1975. - V. 10. - P. 467472.

146. Hines R. N. Levy J. В., Conrad R. D., Iverson P. L„ Shen P. L., Renil A. M., Bresnick E. Gene structure and nucleotide sequence for rat cytochrome P-450c. // Arch. Biochem. Biophys. 1985. - V. 237. - P. 465-476.

147. Hiramatsu K, Yamada Т., Katakura M. Acute effects of cold on blood pressure, renin-angiotensin-aldosterone system, catecholamines and adrenal steroids in man. II Clin. Exp. Pharmacol. Physiol.- 1984,-N. 11.-P. 171-179.

148. HIavica P., Mietaschk J., Baden I. Interaction of ligands with cytochrome P-450. On the 442 nm spectral species generated during the oxidative metabolism of pyridine. II Biochem.I 1982,-V. 204.-P. 425-432.

149. Hoffman S.M., Femandez-Salguero P., Gonzalez F.J., Mohrenweiser H.W. Organization and evolution of the cytochrome P450 CYP2A-2B-2F subfamily gene cluster on human chromosome 19. // J. Mol. Evol. 1995. - V.41(6). - P. 894-900.

150. Honkakoski P., Moore R., Gynther J., Negishi M. Characterization of phenobarbital-inducible mouse Cyp2bl0 gene transcription in primary hepatocytes. // J. Biol. Chem. -1996.-V. 271.-P. 9746-9753.

151. Honkakoski P., Negishi M. The structure, function and regulation of cytochrome P450 2A enzymes. // Drug Metab. Rev. 1997. - V. 29. - P. 977-996.

152. Honkakoski P., Negishi M. Regulatory DNA elements of phenobarbital-responsive cytochrome P450 CYP2B genes. // J. Biochem. Mol. Toxicol. 1998. - V. 12. - N. 1. -P. 3-9.

153. Honkakoski P. Negishi M. Regulation of cytochrome P450 (CYP) genes by nuclear receptors. // Biochem J. 2000. - V. 347. - Pt. 2. - P. 321-337.

154. Horwitt MX Critique of the requirement for vitamin E. // Am. J. Clin. Nutr. 2001. -V.73.-P. 1003-1005.

155. Huber A.M., Davidson K.W., O'Brien-Morse M.E., Sadowski J.A. Tissue phylloquinone and menaquinones in rats are affected by age and gender. // J. Nutr. 1999. - V. 129. -P. 1039-1044.

156. Hukkanen J., Vaisanen T, Lassila A., Piipari R., Anttila S., Pelkonen O., Raunio H., Hakkola J. Regulation of CYP3A5 by glucocorticoids and cigarette smoke in human lung-derived cells. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003. -V. 304. - P. 745-752.

157. Iba MM, Fung J, Giannone JV, Okey AB. Comparative induction of CYP1A1 expression by pyridine and its metabolites. // Arch. Biochem. Biophys. 2000. - V. 378.-P. 299-310.

158. Iba MM, Nguyen T, Fung J. CYP1A1 induction by pyridine and its metabolites in HepG2 cells. // Arch. Biochem. Biophys. 2002. - V. 404. - P. 326-334.

159. Ibeanu G.C., Goldstein J.A. Transcriptional regulation of human CYP2C genes: functional comparison of CYP2C9 and CYP2C18 promoter regions. // Biochemistry -1995.-V. 34.-P. 8028-8036.

160. Ikuta Т., Kobayashi Y., Kawajiri K. Phosphorylation of nuclear localization signal inhibits the ligand-dependent nuclear import of aryl hydrocarbon receptor. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004, - V. 317. - P. 545-550.

161. Inouye К., Мае Т., Kondo S., Ohkawa H. Inhibitory effects of vitamin A and vitamin К on rat cytochrome P4501Al-dependent monooxygenase activity. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - V. 262. - P. 565-569.

162. Ioannides C. Effect of diet and nutrition on the expression of cytochromes P450 // Xenobiotica. 1999. - V. 29. - P. 109-154.

163. Ioannides C., Lewis D.F.V. Cytochromes P450 in the bioactivation of chemicals // Curr. Top. Med. Chem -2004.-V.4.-N. 16.-P. 1767-1788.

164. Ioannides С, Parke D.V. The cytochrome P450 I gene family of microsomal hemoproteins and their role in the metabolic activation of chemicals. // Drug Metab. Rev 1990.-V. 22. - N. l.-P. 1-85.

165. Ishizuka T, Lazar M.A. The Nuclear Receptor Corepressor Deacetylase Activating Domain is Essential for Repression by Thyroid Hormone Receptor // Mol. Endocrinol. -2005. -V. 19.-N.6.-P. 1443-1451.

166. Jaiswal A. K„ Nebert D. W„ Gonzalez F. J. Human Pj-450: cDNA and complete amino acid sequence. //Nucl. Acids Res. 1986.-V.14.-P. 6773- 6774.

167. Jaiswal A.K, Gonzalez F.J, Nebert D. W. Human dioxin-inducible cytochrome Pt-450: complementary DNA and amino acid sequence // Science. 1985. - V.228. - P. 80-83.

168. Jansky L. Humoral thermogenesis and its role in maintaining energy balance. // Physiol Rev. 1995. - V. 75, N. 2. - P. 237-259

169. Jin В., Park D.W., Nam K.W., Oh G.T., Lee Y.S., Ryu D.Y. CpG methylation of the mouse CYP1A2 promoter II Toxicol. Lett. 2004. - V. 152. - P. 11 -18.

170. Jin B-, Ryu D.Y. Regulation of CYP1A2 by histone deacetylase inhibitors in mouse hepatocytes. // J. Biochem. Mol. Toxicol. 2004. - V. 18. - P. 131-132.

171. Juan C.C. Wu F.Y. Vitamin КЗ inhibits growth of human hepatoma HepG2 cells by decreasing activities of both p34cdc2 kinase and phosphatase // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. - V. 190. - P. 907-913.

172. Kang, Z.C., Tsai, S.J. Lee. H. Quercetm inhibits benzopirene-induced DNA adducts in human HepG2 cells by altering CYP1A expression. // Nutr. Cancer. 1999. - N 35. - P. 175-179.

173. Kapitulnik J., Gonzalez F.J. Marked endogenous activation of the CYPIAI and CYP1A2 genes in the congenitally jaundiced Gunn rats. // Mol. Pharmacol. 1993. - V. 43.-P. 722-725.

174. Kapitulnik J., Hardwick J.P., Ostrow J.D. Webster С С., Park S.S. Gelboin H.V. Increase in a specific cytochrome P-450 isoenzyme in liver of congenitally jaundiced Gunn rats. // Biochem. J. 1987. - V.242. - P. 297-300.

175. Karchner S.I., Franks D.G., Powell W.H. Hahn M.E. Regulatory interactions among three members of the vertebrate aryl hydrocarbon receptor family: AHR repressor. AHR1, and AHR2. // J. Biol. Chem. 2002. - V. 277. - P. 6949-6959.

176. Kastner P., Mark M., Chambon P. Nonsteroid nuclear reseptors: What are genetic studies telling us about their role in real life? // Cell. 1995. - V. 83. - P. 859-869.

177. Kawajiri K., Goton O. Sogawa K., Tagashira Y., Muramatsu M., Fujii-Kuriyama Y. Coding nucleotide sequence of 3-methylcholantrene-inducible cytochrome P-450d cDNA from rat liver. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. - V. 81. - P. 1649-1653.

178. Kazlauskas A., Poellinger L., Pongratz L Evidence That the Co-chaperone p23 Regulates Ligand Responsiveness of the Dioxin (Aryl Hydrocarbon) Receptor // J. Biol. Chem. 1999.-V. 274. - P. 13519-13524.

179. Kazlauskas A., Poellinger L., Pongratz 1. Two Distinct Regions of the Immunophilin-like Protein XAP2 Regulate Dioxin Receptor Function and Interaction with hsp90 // J. Biol. Chem. 2002. - V. 277. - P 11795-11801.

180. Kemner J.M., Snodgrass W.R., Worley S.E. Hodges GR, Clark GM, Hignite CE. Interaction of oxygen-carrying resuscitation fluids with morphine. // J. Lab. Clin. Med. -19846.-V. 104.-P. 433-444.

181. Kensler T W. Chemoprevntion by inducers of carcinogene detoxication enzymes. // Environ. Health. Perspect. 1997. - V. 105. - P. 965-970.

182. Kim S.G., Novak R.F. Induction of rat hepatic P450IIE1 (CYP2E1) by pyridine: Evidence for a role of protein synthesis in the absence of transcriptional activation. // Bioehem. Biophys. Res. Commun. 1990. - V. 166. - P. 1072-1079.

183. Kim S.G., Philpot R.M., Novak R.F. Pyridine effects on Р450ПЕ1, IIB and IVB expression in rabbit liver: characterization of high- and low-affinity pyridine N-oxygenases- // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1991. - V. 259. - N. 1. - P. 470-477.

184. Kim H. Putt D., Reddy S., Hollenberg P.F., Novak R.F. Enhanced expression of rat hepatic CYP2B1/2B2 and 2E1 by pyridine: Differential induction kinetics and molecular basis of expression. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1993. - V. 267. - P. 927936.

185. Kim S.G., Reddy S.L., States J.C., Novak R.F. Pyridine effects on expression and molecular regulation of the cytochrome P450IA gene subfamily. // Mol. Pharmacol. -1992. V. 40. - N. I. - P. 52-57

186. Kim S.G., Williams D.E., Schuelz E.G., Guzelian P.S., Novak R.F. Pyridine induction of cytochrome P-450 in the rat: role of P-450j (alcohol-inducible form) in pyridine N-oxidation. //J. Pharmacol. Exp. Ther. 1988. - V. 246. - N. 3. - P. 1175-1182.

187. Kimura S., Donovan J.C., Nebert D.W. Expression of the mouse Pi 450 gene during differentiation without foreign chemical stimulation. // J. Exp. Pathology. 1987. - V. 3.-P. 61-74.

188. Kimura S., Gonzales F.G., Nebert D.W. The murine Ah locus: comparison of the complete cytochrome Pi 450 and P} - 450 cDNA nucleotide and amino acid sequences. // J. Biol. Chem. - 1984. - V.259. - P. 10705-10713.

189. Kimura S., Kozak C.A., Gonzalez F.J. Identification of a novel P450 expressed in rat lung: cDNA cloning and sequence, chromosome mapping, and induction by 3-methylcholanthrene. // Biochemistry 1989. - V. 28. - N. 9. - P. 3798-803.

190. Kitada M., Komori M. Form-specific degradation of cytochrome P-450 by lipid peroxidation in rat liver microsomes. // Res. Commun. Chem. Pathol. Pharmacol. -1989. -V. 63. N. 2. - P. 175-188.

191. Kloepper-Sams P.J , Stegeman J.J Effects of temperature acclimation on the expression of hepatic cytochrome P4501A mRNA and protein in the fish Fundulus heteroclitus. // Arch. Biochem. Biophys. 1992 - VI. 299, N. 1. - P. 38-46.

192. Knauer Т.Е., Siegfried C.M., Matschiner J.T. Vitamin К requirement and the concentration of vitamin К in rat liver. // J. Nutr. 1976. - V. 106. - P. 1747-1751.

193. Kobayashi K., Numayama-Tsurula K., Sogawa K., Fujii-Kuriyama Y. CBP/p300 functions as a possible transcriptional coactivator of Ah receptor nuclear translocator (Arnt). II J. Biochemistry. 1997. - V. 122. - N. 4. - P. 703-710.

194. Koleva M., Stoytchev T. Liver monooxygenase activity after multiple application of nifedipin, verapamil and diltiazem. // Acta Physiol. Pharmacol. Bulg. 1990. - V. 16-N.4.-P. 16-22.

195. Kondo Т., Riesz P Free radical formation induced by ultrasound and its biological implications. // Free Radical. Biol. Med. 1992. - V. 13. - P. 247- 270.

196. Kondo Т., Riesz P. Effect of gas-containing microspheres and echo contrast agents on free radical formation by ultrasound. // Free Radic Biol Med, 1998, V. 2, P. 605- 612.

197. Konno Y., Sekimoto M., Nemoto K„ Degawa M. Sex difference in induction of hepatic CYP2B and CYP3A subfamily enzymes by nicardipine and nifedipine in rats. // Toxicol Appl Pharmacol. 2004a. - V. 196. - N. 1. - P. 20-28.

198. Konno Y., Sekimoto M., Nemoto K., Degawa M. Induction of hepatic cyp2b and сурЗа subfamily enzymes by nicardipine and nifedipine in mice. // Xenobiotica. 20046. - V. 34.-N. 7.-P. 607-618.

199. Konno Y., Nemoto K., Degawa M. Induction of hepatic cytochrome P450s responsible for the metabolism of xenobiotics by nicardipine and other calcium channel antagonists in the male rat // Xenobiotica. 2003. - V. 33. - N. 2. - P.l 19-129.

200. Kontush A., Finckh В., Karten В., Kohlschutter A., Beisiegel U. Antioxidant and prooxidant activity of alpha-tocopherol in human plasma and low density lipoprotein. // J. Lipid Res. 1996. - V. 37. - N. 7. - P. 1436-1448.

201. Kroemer H.K., Gautier J.C., Beaune P., Henderson C„ Wolf C.R., Eichelbaum M. Identification of P450 enzymes involved in metabolism of verapamil in humans. // Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 1993 - V. 348. - N. 3. - P. 332-337.

202. Krusekopf S., Roots I., Hildebrandt A.G., Kleeberg U. Time-dependent transcriptional induction of CYP1A1. CYP1A2 and CYP1B1 mRNAs by H+/K+ -ATPase inhibitors and other xenobiotics. // Xenobiotica. 2003. - V. 33. - N. 2. - P. 107-118.

203. Kumar M.B., Perdew G.H. Nuclear receptor coactivator SRC-1 interacts with the Q-rich subdomain of the AhR and modulates its ttansactivation potential II Gene Expr. -1999. V. 8. - N. 5-6. - P. 273-286.

204. Kumar R.P., Raju G.S. Ultrasound induced damages and time bound recovery in mouse liver// Indian J. Exp. Biol, 1989, V. 27, N 1, P. 23- 25.

205. Kuno Y„ Adolph E.F., Smith R.E. Metabolic adaptations to temperature and altitude. // Fed Proc. 1966 - V. 25, N. 4. - P. 1427-33.

206. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. // Nature. 1970. - V. 227. - P. 680-685.

207. Lai K.P., Wong M.H., Wong C.K. Modulation of AhR-mediated CYP1A1 mRNA and EROD activities by 17beta-estradiol and dexamethasone in TCDD-induced H41 IE cells. // Toxicol. Sci. 2004. - V. 78. - N. 1. - P. 41-49.

208. Lamon-Fava S., Sadowski J.A., Davidson K.W., O'Brien M.E., McNamara J R., Schaefer E.J. Plasma lipoproteins as carriers of phylloquinone (vitamin Kl) in humans. // Am. J. Clin. Nutr. 1998. - V. 67. - N. 6. - P. 1226-1231.

209. Landes N. Bininger M. Brigelius-Flohe R. Homologous metabolic and gene activating routes for vitamins E and K. // Mol. Aspects Med. 2003. - V. 24. - N. 6. - P.337-344.

210. Landes N, Pfluger P, Kiuth D, Bimnger M„ Ruhl R, Bol G.F, Glatt H, Bngelius-Flohe R. Vitamin E activates gene expression via the pregnane X receptor. // Biochem. Pharmacol. 2003. - V. 65. - N. 2. - P. 269-273.

211. Laurent F, Akel G, Canal P, Soula G.EfTecl of misonidazole (Ro 07-0582) and radiation on the monooxygenases of liver microsomes of the rat. // J. Pharmacol. 1985. - V. 16. -N. 1.-P. 23-30.

212. Lee I.J, Jeong K.S, Roberts B.J, Kallarakal A.T, Femandez-Salguero P, Gonzalez F.J, Song B.J. Transcriptional induction of the cytochrome P450 1A1 gene by a thiazolium compound, YH439. II Mol. Pharmacol. -1996. V. 49. -N. 6. - P. 980-988.

213. Lee K.W, Lee H.J, Lee Ch.Y. Vitamins, Phytochemicals, Diets and their implemention in cancer chemoprevention. // Critical Rew. Food Scien. Nutr. 2004. - N 44. - P. 437452.

214. Lee S.H, Wang X, DeJong J. Functional interaction between atypical NF-kB site from the rat CYP 2B1 promotor and the transcriptional repressor RBP-Jk/CBFI. // Nucl. Acids Res. 2000. - V.28. - P. 2091-2098.

215. Lee S.M, Clemens M G. Effect of alpha-tocopherol on hepatic mixed function oxidases in hepatic ischemia/reperftision. // Hepatology. 1992. - V. 15. - N. 2. - P. 276-281.

216. Lees M.J, Peet D.J, Whitelaw M.L. Defining the role for XAP2 in stabilization of the dioxin receptor. II J. Biol. Chem. 2003. - V. 278. - N. 38. - P. 35878-35888.

217. Li H.C., Liu D„ Waxman D.J Transcriptional induction of hepatic NADPH: cytochrome P450 oxidoreductase by thyroid hormone. // Mol. Pharmacol. 2001. - V. 59.-N. 5. - P. 987-995.

218. Liddle C, Goodwin B.J, George J, Tapner M, Farreli G.C: Separate and interactive regulation of cytochrome P450 by triiodothyronine, dexamethasone, and growthhormone in cultured hepatocytes. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1998. - V. 83. - P. 2411-2416.

219. Lii C.K., Sung W.C., Ко Y.J., Chen H.W. Alpha-Tocopherol acetate supplementation enhances rat hepatic cytochrome PROD activity in the presence of phenobarbital induction. II Nutr. Cancer. 1998. - V. 32. - N. 1. - P. 37-42.

220. Liu C., Zhuo X., Gonzalez F.J., Ding X. Baculovirus-mediated expression and characterization of rat CYP2A3 and human CYP2a6: role in metabolic activation of nasal toxicants. //Mol/ Pharmacol. 1996. - V. 50. - N. 4. - P. 781-788.

221. Liu D,, Waxman D.J. Post-transcnptional regulation of hepatic NADPH-cytochrome P450 reductase by thyroid hormone: independent effects on poly(A) tail length and mRNA stability. // Mol. Pharmacol. 2002. - V. 61. - N. 5 . - P. 1089-1096.

222. Liu T.T., Liang N.S., Li Y. Yang F„ Lu Y„ Meng Z.Q., Zhang L.S. Effects of long-term tea polyphenols consumption on hepatic microsomal drug-metabolizing enzimes and liver fimction in Wistar rats. // World J. Gastroenterol. 2003. - N 9. - P. 27422744.

223. Long W.P., Pray-Grant M. Tsai J.C., Perdew G.H. Protein kinase С activity is required for aryl hydrocarbon receptor pathway-mediated signal transduction. // Mol. Pharmacol. -1998. V. 53. - N. 4. - P. 691-700.

224. Lowry O.U., Rosebrough N.I., Farr A.L., Randall R.I. Protein measurements with the Folin reagent. // J. Biol. Chem. 1951. - V.153. - P. 265-275.

225. Luc P.-V. Т., Adesnik M., Ganguly S., Shaw P. M. Transcriptional regulation of the CYP2B1 and CYP2B2 genes by C/EBP-related proteins. II Biochem. Pharmacol. 1996. -V.51.~P. 345-356.

226. Lutz L, Metzenauer P., Kunz E. et al // In: Oxygen Carring Colloidal Blood Substitutes/Ed. R. Frey et al. Munchen, 1981 P. 73-81.

227. Lutz J., Wagner M. Recovery from pentobarbital-induced sleep after administration of perfluorinated blood substitutes. // Artif. Organs. 1984. - V. 8. - P. 41-43.

228. Ma Q. Induction of CYP1A1. The AhR/DRE paradigm: transcription, receptor regulation and expanding biological roles. II Current Drug. Met. 2001. - V.2. - P. 149164.

229. Maines M.D. Heme oxygenase: function, multiplicity, regulatory mechanisms, and clinical applications IIFASEB J. 1988. - V. 2. - P. 2557-2568.

230. Mangelsdorf D.J., Thummel C., Beato M., Herrlich P., Schutz G., Umesono K., Blumberg В., Kastner P., Mark M., Chambon P., et al. The nuclear receptor superfamily: the second decade. // Cell. -1995. V. 83. - P. 835-839.

231. Masubuchi N. Li A.P., Okazaki O. An evaluation of the cytochrome P450 induction potential of pantoprazole in primary human hepatocytes. // Chem. Biol. Interact. 1998. -V. 114. N. 1-2. - P. 1-13.

232. McKinnon R.A. Cytochrome P450. Multiplicity and Function. // Australian J. Hospital Pharmacy. 2000. - V. 30. - N. 2. - P. 54-56.

233. Meyer B.K., Perdew G.H. Characterization of the AhR-hsp90-XAP2 core complex and the role of the immunophilin-related protein XAP2 in AhR stabilization. // Biochemistry. 1999. - V. 38. -N. 28. - P. 8907-8917.

234. Meyer B.K., Petrulis J.R., Perdew G.H. Aryl hydrocarbon (Ah) receptor levels are selectively modulated by hsp90-associated immunophilin homolog XAP2. // Cell Stress Chaperones. 2000. - V. 5. - N. 3. - P. 243-54.

235. Mitsuno Т., Ohyanagi H„ Naito R. Clinical studies of a perfluorochemical whole blood substitute (Fluosol-DA) Summary of 186 cases. // Ann. Surg. 1982. - V. 195. - P. 6069.

236. Morrow D., Qin C., Smith R. 3rd, Safe S. Aryl hydrocarbon receptor-mediated inhibition of LNCaP prostate cancer cell growth and hormone-induced transactivation. // J/ Steroid/ Biochem/ Mol/ Biol. 2004. - V. 88. - N. 1. - P. 27-36.

237. Ohyanagi H„ Nakaya S., Okumura S., Saitoh Y. Surgical use of fluosol-DA in Jehovah's Witness patients. //Artifio. Organs. 1984. - V. 8. - P. 10-18.

238. Monk S.A., Denison M.S., Rice R.H. Transient expression of CYPIAI in rat epithelial cells cultered in suspension. // Arch. Biochem. Biophys. 2001. - V.393. -P.154-162.

239. Morel Y., Barouki R. Down-regulation of cytochrome P450 1A1 gene promoter by oxidative stress. Critical contribution of nuclear factor 1. // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273. - N. 41 - P. 26969-26976.

240. Morgan E.T. Regulation of cytochromes P450 during inflammation and infection. // Drug Metab. Rev. 1997. - V. 29. - N. 4. - P. 1129-1188.

241. Morris D.L., Davila J.C. Analysis of rat cytochrome P450 isoenzyme expression using semi-quantitive reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). // Biochem. Pharmacol. 1996. - V.52. - P. 781-792.

242. Morrow D., Qin C., Smith R. 3rd, Safe S. Aryl hydrocarbon receptor-mediated inhibition of LNCaP prostate cancer cell growth and hormone-induced transactivation. // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. 2004. - V. 88. - P. 27-36.

243. Mugford CA, Kedderis GL: Sex-dependeni metabolism of xenobiotics. // Drug Metab. Rev. 1998. - V. 30. - P. 441-498.

244. Mukhtar H„ Wang Z.Y. Katiyar S.K., Agarwal R. Tea components: antimutagemc and anticancerogenic effects. // Prev. Med. 1992. - N 21. - P. 351-360.

245. Murray G.I., Foster C.O., Barnes T.S., Weaver R.J, Ewen S.W., Melvin W.T., Burke M.D. Expression of cytochrome P4501A in breast cancer. // Br. J. Cancer. 1991. - V. 63. - P. 1021-1023.

246. Murray M. In vitro and in vivo studies of the effect of vitamin E on microsomal cytochrome P450 in rat liver. II Biochem. Pharmacol. 1991. - V. 42. - P. 2107-2114.

247. Nash T. The colorimetric estimation of formaldehyde by means of the Hantzsch reaction. //Biochem. J. -1953. V. 55.-N.3.-P. 416-421.

248. Nebert D.W., Gonzalez F.J. P450 genes: structure, evolution and regulation. // Annu. Rev.Biochem. 1987. - V.56. - P. 945-993.

249. Nestor K.E. Jr., Conrad H.R. Metabolism of vitamin К and influence on prothrombin time in milk-fed preruminant calves // J. Dairy Sci. 1990. - V. 73. - P. 3291-3296.

250. Novak R.F., Kaul K.L., Kim S.G. Induction of the alcohol-inducible form of cytochrome P-450 by nitrogen-containing heterocycles: effects on pyridine N-oxide production. // Drug Metab. Rev. 1989. - V. 20. - N. 2-4. - P. 781-792.

251. Ohyanagi H., Nakaya S., Okumura S., Saitoh Y. Surgical use of fluosoI-DA in Jehovah's Witness patients. //Artific. Organs. 1984. - V. 8. - P. 10-18.

252. Okamoto Т., Mitsuhashi M., Fujita I., Sindhu R.K., Kikkawa Y. Induction of cytochrome P450 1A1 and 1A2 by hyperoxia. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1993.-V.197.-P. 878-885.

253. Okey A.B. Enzyme induction in the cytochrome P-450 system. // Pharmac Ther. — 1990. —V. 45. — P. 241—298.

254. O'Leary K.A., McQuiddy P. Kasper C.B. Transcriptional regulation of the TATA-less NADPH cytochrome P-450 oxidoreduetase gene. // Arch. Biochem. Biophys. 1996. -V. 330.-N. 2.-P.271-280.

255. Omiechinski C.J. Tissue-specific expression of rat mRNAs homologous to cytochromes P-450b and P-450e. //Nuel. Acids. Res 1986. - V.14. - P. 1525-1539.

256. Omura Т., Sato R. The carbon monooxide binding pigment of liver microsomes. Solubilization, purification and properties. // J. Biol. Chem. - 1964. - V. 239. - P. 23702385.

257. Pampori N.A-, and Shapiro B.H. Gender differences in the responsiveness of the sex-dependent isoforms of hepatic P450 to the feminine plasma growth hormone profile. // Endocrinology. 1999. - V. 140. - P. 1245-1254

258. Panin L.E., Polyakov L.M., Kolosova N.G. Russkikh G.S., Poteryaeva O.N. Distribution of tocopherol and apolipoprotein A-I immunoreactivity in rat liver chromatin. // Membr. Cell. Biol. 1998. - V. 11. - N. 5. - P. 631-640.

259. Park Y., Kemper B. The CYP2B1 proxymal promoter contains a functional C/EBP regulatory element. II DNA Cell. Biol. 1996. - V. 15- - P. 693-701.

260. Park Y., Li H., Kemper B. Phenobarbital induction mediated by a distal CYP2B2 sequence in rat liver transiently transfected in situ. // J. Biol. Chem. 1996. - V. 271. -N. 39. -P. 23725-23728.

261. Parke D.V., Ioannides C. Effect of nutrition on chemical toxicity. II Drug Metab Rev -1994.-V.26.-P. 739-765.

262. Parkinson A. Biotransformation of xenobiotics. //In: Casaret & Doll's toxicology: the basic science of poisons, ed. by Klaassen C. 5.ed. New York: Mc Graw Hill. 1996. -P. 113-186.

263. Pascussi J.M., Ger bal-Chaioin S. Drocourt L., Maurel P., Vilarem M.J. The expression of CYP2B6, CYP2C9 and CYP3A4 genes: a tangle of networks of nuclear and steroid receptors. // Biochim. Biophys. Acta. 2003. - V. 1619. - N. 3. - P.243-245.

264. Paton Т.Е., Renton K.W. Cytokine-mediated down-regulation of CYP1A1 in Hepal cells. II Bioehem. Pharmacol. 1998. - V. 55. - N. 11. - P. 1791-1796.

265. Pelkonen O-, Rautio A. Raunio H., Pasanen M. CYP2A6: a human coumarin 7-hydroxylase. II Toxicology. 2000. - N. 144. - P. 139-147.

266. Pentiuk A.A. Bogdanov N.G., Lutsiuk N.B. Effect of different supplies of vitamin К on the biotransformation of amidopyrine and benzoic acid in the rat. II Vopr. Pitan. 1987. -V.2.-P. 50-53.

267. Peter R., Bocker R., Iwasaki M., Guengerich F. // Abstracts of 8th International Symposium on Microsomes and Drug Oxidation, Stockholm. 1990. 435 p.

268. Pezzuto J.M. Plant-derived anticancer agents. // Bioehem. Pharmacol. 1997. - V. 53. -P. 121-133.

269. Pfannkuch F., Schnoy N. Ohlachlegel Ch. et al II In: Oxygen Carring Colloidal Blood Substitutes/Ed. R. Frey et al.Munchen. 1981. P. 61-65.

270. Phelan D., Winter G.M., Rogers W.J., Lam J.C., Denison M.S. Activation of the Ah receptor signal transduction pathway by bilirubin and biliverdin- II Arch. Btochem. Biophys. 1998. - V.375. - N. 1. - P. 155-163.

271. Phillips A.H., Langdon R.G. Hepatic triphosphopyridine nucleotide-cytochrome с reductase: isolation, characterization and kinetic studies. II J. Biol. Chem. 1962. -V.237.-P. 2652-2660.

272. Pickett C.B., Jeter R.L., Morin J., Lu A.Y.H. Electroimmunochemical quantitation of cytochrome P-450, cytochrome P-448, and epoxide hydrolase in rat liver microsomes. // J. Biol. Chem. 1981 -V. 256. - P. 8815-8820.

273. Piechocki M P, Hines R.N. Functional characterization of the human CYP1A1 negative regulatory element: modulation of Ah receptor mediated transcriptional activity. // Carcinogenesis. 1998. - V. 19. - N. 5. - P. 771-780.

274. Pineau T, Femandez-Salguero P, Susanna S.T.L. Lee S.S, McPhail T, Ward G.M, Gonzalez FJ. Neonatal lethality associated with respiratory distress in mice lacking cytochrome P450 1A2. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - V. 92. - P. 5134-5138.

275. Poland A, Knutson J.C. 2,3,7,8- tetrachlorodibenzo-p-dioxin and related halogenated aromatic hydrocarbons: examination of the mechanism of toxicity. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1982. -V. 22. -P. 517-542.

276. Porter T.D. Jud Coon: 35 years of P450 research, a synopsis of P450 history // Drug Metab. Dispos. 2004. - V. 32. -N. 1. - P. 1-6

277. Quadri Sh.A, Quadr, A.N, Hahn M.E, Mann K.K, Sherr D.H. The bioflavonoid Galangin blocks AhR activation and polycyclic aromatic hydrocarbon -induced pre-B-cell apoptosis. // Mol. Pharmacol 2000. - N 58. - P. 515-525.

278. Quatrochi L.S, Guzelian P.S. CYP3A regulation: from pharmacology to nuclear receptors. // Drug Metab. Dispos. 2001. -V. 29. - P. 615-622.

279. Quattrochi L.C, Vu T, Tukey R.H. The human CYP1A2 gene and induction by 3-methylcholanthrene: A region of DNA that supports Ah receptor binding andpromoter-specific induction. // J. Biol. Chem. 1994. - V. 269. - P. 6949-6954.

280. Rahden-Staron I., Czeczot H., Szumilo M. Induction of rat liver cytochrome P450 isoenzymes CYP 1A and CYP 2B by different fungicides, nitrofurans, and quercetin. // Mutat. Res. 2001. - V. 498. - P. 57-66.

281. Ram P.A., Waxman D.J. Thyroid hormone stimulation of NADPH P450 reductase expression in liver and extrahepatic tissues. Regulation by multiple mechanisms. // J. Biol. Chem. 1992. - V. 267. - N. 5. - P. 3294-3301

282. Ramadass, P., Meerarani, P., Toborek, M., Robertson, L.W., Hennig, B. Dietary flavonoids modulate PCB-induced oxidative stress, CYPIAI induction, and AhR-DNA binding activity in vascular endothelial cells. // Toxicol Scien. -2003. V. 76. - P. 212219.

283. Ramsden R., Beck N.B., Sommer K.M., Omiesinski C.J. Phenobarbital responsiveness, conferred by the 5'-fIanking region of the rat CYP2B2 gene in transgenic mice. // Gene 1999. - V.228. - P. 169-179.

284. Raunio H., Rautio A., Gullsten H. Pelkonen O. Polymorphisms of CYP2A6 and its practical consequences. // Br. J. Clin. Pharmacol. 2001. - V. 52. - P. 357-363.

285. RayChaudhuri В., Nebert D.W., Puga A. The murine Cypla-1 gene negatively regulates its own transcription and that of other members of the aromatic hydrocarbon-responsive Ah. gene battery // Mol. Endocrinol. 1990. - V. 4. - N. 12. - P. 1773-1781.

286. Remmer H., Merker H.J. Drug induced changes in the liver endoplasmatic reticulim association with drug metabolizing enzymes. // Science. 1963. - V. 142. - P. 16571658.

287. Ricciarelli R., Tasinato A., Clement S., Ozer N.K., Boscoboinik D., Azzi A. Alpha-Tocopherol specifically inactivates cellular protein kinase С alpha by changing its phosphorylation state. // Biochem. J. 1998. - V. 334. - Pt. 1. - P. 243-249.

288. Richert D.A. Studies on the detoxification of 2-methyl-l,4-naphthoquinone in rabbits. // J. Biol. Chem. 1951.-V. 189. -N. 2. -P. 763-768.

289. Ro D.K., Ehlting J., Douglas C.J. Cloning, functional expression, and subcellular localization of multiple NADPH-cytochrome P450 reductases from hybrid poplar. // Plant. Physiol. 2002. - V. 130. - P. 1837-1851.

290. Rodrigues A.D. Integrated cytochrome P450 reaction phenotyping: attempting to bridge the gap between cDNA-expressed cytochromes P450 and native human liver microsomes. // Biochem. Pharmacol. 1999. - V. 57. - P. 465-480.

291. Roe A.L., Blouin R.A., Howard G. In vivo phenobarbital treatment increases protein binding to a putative API site in the CYP2B2 promoter // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. - V.228. - P. 110-114.

292. Ronden J.E., Groenen-van Dooren M.M., Homstra G., Vermeer C. Modulation of arterial thrombosis tendency in rats by vitamin К and its side chains // Atherosclerosis- -1997.-V. 132.-P. 61-67.

293. Ryan D.E., Levin W. Purification and characterization of hepatic microsomal cytochrome P-450. // Pharmacol. Ther. 1990. - V. 45. - P. 153-239.

294. Ryan-Harshman M., Aldoori W. Bone health. New role for vitamin К? II Can. Fam. Physician. 2004. - V.50. - P. 993-997.

295. Ryu D.Y., Levi P.E., Hodgson E. Regulation of hepatic CYP1A isozymes by piperonyl butoxide and acenaphthylene in the mouse. // Chem. Biol. Interact. 1997. - V. 105. -P. 53-63.

296. Saad H.H. Therapeutic ultrasound and the liver in vivo: action and possible mechanisms. // Ultrasound Med. Biol. 1986. - V. 12. - N 11. - P. 855- 863.

297. Safe S. Molecular biology of the Ah receptor and its role in carcinogenesis. // Toxicol. Lett.-2001.-V. 120.-P. 1-7.

298. Safe S-, Wormke M., Samudio I. Mechanisms of inhibitory aryl hydrocarbon receptor-estrogen receptor crosstalk in human breast cancer cells // J Mammary Gland Biol. Neoplasia. -2000. V. 5. - P. 295-306.

299. Saito M., Oh-Hashi A., Kubota M., Nishide E., Yamaguchi M Mixed function oxidases in response to different types of dietary lipids in rats. II Br. J. Nutr. 1990. - V. 63. -P. 249-257.

300. Sargent J.W., Seffl R.J. Properties of perfluorinated liquids. II Fed. Proc. 1970. - V. 29. -P. 1699-1703.

301. Sausa R.L., Marietta MA. Inhibition of cytochrome P-450 activity in rat liver microsomes by the naturally occurring flavonoid, quercetin. // Arch. Biochem. Biophys. 1985. - N 240. - P. 345-357.

302. Saxena S.P., Israels E D., Israels L.G. Novel vitamin K-dependent pathways regulating cell survival. // Apoptosis 2001. - V. 6. - P. 57-68.

303. Schaldach С М., Riby J., Bjeldanes L.F. Lipoxin A4: a new class of ligand for the Ah receptor // Biochemistry. 1999. - Vol.38. - P. 7594-7600.

304. Schmelz I., Hoffman D Nitrogen-containing compounds in tobacco smoke. // Chem. Rev. 1977. - V. 77. - P. 295-311.

305. Schmidt J.V., Bradfield C.A. Ah receptor signaling pathways. // Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. 1996. -V. 12. - P. 55-89.

306. Scholl H.R., Iba M.M. Pharmacokinetics of and CYP1A induction by pyridine and acetone in the rat: interactions and effects of route of exposure. // Xenobiotica. 1997. -V.27.-N. 3.-P. 265-277.

307. Schuetz E.G. Induction of cytochromes P450. II Curr. Drug Metab. 2001. - V. 2. - N. 2.-P. 139-147.

308. Schwarz D., Kisselev P., Roots 1. St. John's wort extracts and some of their constituents potently inhibit ultimate carcinogen formation from benzoa.pyrene-7,8-dihydrodioI by human CYP1 Al. // Cancer Res. 2003. - N 63. - P. 8062-8068.

309. Seidel S.D.,Winters G.M., Rogers WJ., Ziccardi M.H., Li V., Keser В., Demson MS. Activation of the Ah receptor signaling pathway by prostaglandins. II J. Biochem. Molec. Toxicol. -2001. -V. 15. -P.187-196.

310. Sen C.K., Khanna S., Roy S., Packer L. Molecular basis of vitamin E action. Tocotnenol potently inhibits glutamate-induced pp60(c-Src) kinase activation and death of HT4 neuronal cells. III. Biol. Chem. 2000. - V. 275. -N. 17. - P. 13049-13055.

311. Shaban Z., El-Shazly S., Abdelhady S. Fattouh I., Muzandu K., Ishizuka M., Kimura K., Kazusaka A., Fujita S. Down regulation of hepatic PPARalpha function by AhR ligand.// J. Vet. Med. Sci. 2004. - V. 66. - N. 11.-P. 1377-1386.

312. Shao D., Lazar M A, Modulating nuclear receptor function: may the phos be with you. // J. Clin. Invest. 1999. - V. 103. -N. 12. -P. 1617-1618.

313. Sheehane D., Meade G., Foley V. M., Dowd C. A. Structure, function and evolution of glutathione transferases: implication for classification of non mammalian members of an ancient enzyme superfamily. // Biochem J. - 2001. - V. 360. - P. 1-16.

314. Shephard E.A., Phillips I.R., Santisteban I., Palmer C.N., Povey S. Cloning, expression and chromosomal localization of a member of the human cytochrome P450IIC gene sub-family. // Ann. Hum. Genet. 1989. - V. 53. - Pt. 1. - P. 23-31.

315. Shephard R.J. Fat metabolism, exercise, and the cold. // Can. J. Sport Sci. 1992. - V. 17.-N. 2.-P. 83-90.

316. Shrewsbury R.P. Effect of Fluosol-DA hemodilution on the kinetics of hepatically eliminated drugs. II Res. Commun. Chem. Path. Pharmacol. 1987. - V. 55. P. 375-396.

317. Shrewsbury R.P., Lewis L. M., Oliver S. R. Effect of moderate haemodilution with Fluosol-DA or normal saline on low-dose phenytoin and (+/-)-5-(4-hydroxyphenyl)-5-phenylhydantoin kinetics. //J. Pharm. Pharmacol. -1987. V. 39. - P. 349-356.

318. Sibille A., Prat F„ Chapelon J.Y., Abou el Fadil F., Henry L„ Theillere Y., Ponchon Т., Cathignol D. Extracorporeal ablation of liver tissue by high-inlensity focused ultrasound. // Oncology. 1993. - V. 50. - N. 5. - P. 375- 379.

319. Sidhu J.S., Omiecinski C.J. An okadaic acid-sensitive pathway involved in the phenobarbital-mediated induction of CYP2B gene expression in primary rat hepatocyte cultures. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997. - V. 282. - N. 2. - P. 1122-1129.

320. Sidhu J.S. Omiecinski C.J. cAMP-associaied inhibition of phenobarbital-mducible cytochrome P450 gene expression in primary rat hepatocyte cultures. // J. Biol. Chem. -1995. V. 270. - N. 21. - P. 12762-12773.

321. Shih H., Pickwell G.V., Quattrochi L.C. Differential effects of flavonoid compounds on tumor promoter-induced activation of the human CYP1A2 enhancer// Arch. Bioehem. Biophys. 2000. - V. 373. - P. 287-294.

322. Siess M.H., Guillermic M., Le Bon A.M., Suschetet M. Induction of monooxygenase and transferase activities in rat by dietary administration of flavonoids. // Xenobiotica. -1989--V. 19.-P. 1379-1386.

323. Silver G., Krauter K.S. Expression of cytochromes P-4S0c and P-450d mRNAs in cultured rat hepatocytes. // J. Biol. Chem. 1988. - V.263. - P. 11802-11807.

324. Sindhu R.K. Mitsuhashi M., Kikkawa Y. Induction of cytochrome P450 1A2 by oxidized tryptophan in Hepa lclc7 cells. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000. - V. 292. 0-N. 3.-P- 1008-1014.

325. Sogawa K., Fujii-Kunyama Y. Ah receptor, a novel ligand activated transcription factor. // J. Bioehem. - 1997. - V.122. - P. 1075-1079.

326. Sommer K.M., Ramsden R., Sidhu J., Costa P., Omiecinski C.J. Promoter region analysis of the rat CYP2BI and CYP2B2 genes // Pharmacogenetics. 1996. - V. 6. - P. 369-374.

327. Song Z., Pollenz R.S. Functional analysis of murine aryl hydrocarbon (AH) receptors defective in nuclear import: impact on AH receptor degradation and gene regulation. // Mol. Pharmacol. 2003. - V. 63. - N. 3. - P. 597-606.

328. Sonna L.A. Fujita J., Gaffin S.L, Lilly C.M. Invited review: effects of heat and cold stress on mammalian gene expression. // J. Appl. Physiol. 2002. - V. 92, N. 4. - P. 1725-1742.

329. Staudt H., Lichtenberger F., Ullrich V The role of NADH in uncoupled microsomal monoxygenations. // Eur. J. Biochem. 1974. - V. 46. - P. 99-106.

330. Stavric B. Quercetin in our diet: from potent mutagen to probable anticarcinogen. // Clin. Biochem. 1994. - V. 27. - P. 245-248.

331. Stephens N.G. Parsons A., Schofield P.M., Kelly F., Cheeseman K, Mitchinson M.J. Randomised controlled trial of vitamin E in patients with coronary disease: Cambridge Heart Antioxidant Study (CHAOS). // Lancet. 1996. - V. 347. - P. 781-786.

332. Sterling K, Bresnick E. Oct-1 transcription factor is a negative regulator of rat CYPIAI expression via an octamer sequence in its negative regulatory element. // Mol. Pharmacol. 1996. - V. 49. - N. 2. - P. 329-337.

333. Sterling K., Weaver J., Ho K.L., Xu L.C., Bresnick E. Rat CYPIAI negative regulatory element: biological activity and interaction with a protein from liver and hepatoma cells // Mol. Pharmacol. 1993. - V. 44. - N. 3. - P. 560-568.

334. Stacker A., Azzi A. Tocopherol-binding proteins: their function and physiological significance // Antioxid. Redox. Signal. 2000. - V. 2. - N. 3. - P 397-404.

335. Stohs S.J., Hassan M.Q., Мигтау W.J. Effects of BHA, d-alpha-tocopherol and retinol acetate on TCDD-mediated changes in lipid peroxidation, glutathione peroxidase activity and survival. // Xenobiotica. 1984. - V. 14. - N. 7. - P. 533-537.

336. Su Т. Ding X. Regulation of the cytochrome P450 2A genes. //Toxicol. Appl. Pharmacol. 2004. - V. 199. - P. 285-294.

337. Sueyoshi Т., Kawamoto Т., Zelko I., Honkakoski P., Negishi M. The repressed nuclear receptor CAR responds to phenobarbital in activating the human CYP2B6 gene. // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274. -N. 10. - P. 6043-6046.

338. Sueyoshi T, Negishi M. Phenobarbital response elements of cytochrome P450 genes and nuclear receptors. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2001. - V. 41. - P. 123-143.

339. Suttie J.W Synthesis of vttamut K-dependent proteins. II FASEB J. 1993. -V. 7. - N. 5.-P. 445-452.

340. Suttie J.W. The importance of menaquinones in human nutrition. // Annu. Rev. Nutr. -1995.-V.15.-P. 399-417.

341. Tachibana K, Sugata K, Meng J. Okumura M. Tachibana S. Liver tissue damage by ultrasound in combination with the photosensitizing drug; Photofrin П. // Cancer Lett. -1994. V. 78. - N 1-3. - P. 177-181.

342. Tamasi V, Vereczkey L, Falus A., Monostory K. Some aspects of tnterindividual variations in the metabolism of xenobiotics. // Inflamm. Res. 2003. - V. 52. - N. 8. -P. 322-333.

343. Teupser D, Thiery J, Seidel D. Alpha-tocopherol down-regulates scavenger receptor activity in macrophages. // Atherosclerosis. 1999. - V. 144. - N. 1. - P. 109-115.

344. Thieringer H.A. Jones P.G, Inouye M. Cold shock and adaptation. // Bioessays. 1998. -V. 20,N. l.-P. 49-57.

345. Thijssen H.H, Drittij-Reijnders M.J. Vitamin К distribution in rat tissues: dietary phylloquinone is a source of tissue menaquinone-4. // Br. J. Nutr. 1994. - V. 72. - N. 3.-P. 415-425.

346. Thomas P.E, Reik L.M., Ryan D.E, Levin W. Regulation of three forms of cytochrome P-450 and epoxide hydrolase in rat liver microsomes. Effects of age. sex and induction. Hi. Biol. Chem. 1981. - V. 256. - P. 1044-1052.

347. Kharasch E, Schuetz J, Scliuetz E. Transcriptional control of intestinal cytochrome P-4503A by 1 alpha,25-dihydroxy vitamin D3.1/ Mol. Pharmacol. 2001. - V. 60. - N. 6. -P. 1399-406.

348. Tian Y„ Ke S., Denison M.S., Rabson A.B., Gallo M.A. Ah receptor and NF-kappaB interactions, a potential mechanism for dioxin toxicity. // J. Biol. Chem. 1999. - V. 274.-N. 1.-P. 510-515.

349. Tikuisis P., Ducharme M.B., Moroz D., Jacobs I. Physiological responses of exercised-fatigued individuals exposed to wet-cold conditions. // J. Appl. Physiol. 1999. - N. 4 -P. 1319-1328.

350. Towbin H., Staehelin Т., Gordon G. Immunoblotting in the clinical laboratory. // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1989. - V. 27. - P. 495-501.

351. Traber M.G. Vitamin E: too much or not enough. // Am. J. Clin. Nutr. 2001. - V.73. -P. 997-998.

352. Traber M.G., Eisner A., Brigclius-Flohe R. Synthetic as compared with natural vitamin E is preferentially excreted as alpha-CEHC in human urine: studies using deuterated alpha-tocopheryl acetates. // FEBS Lett. 1998. - V. 437. - P. 145-148.

353. Traber M.G., Sokol R.J., Ringel S.P., Neville H.E., Thellman C.A., Kayden H.J. Lack of tocopherol in peripheral nerves of vitamin E-deficient patiets with peripheral neuropathy. // N. Eng. J. Med. 1987- - V. 317. - P. 262-265.

354. Tsyrlov I.B., Zakharova N.E., Gromova O.A., Lyakhovich V.V. Possible mechanism of induction of liver microsomal monooxygenases by Phenobarbital // Biochim. Biophys. Acta. 1976. - V. 421. - N. 1. - P. 44-56.

355. Tsyrlov I.В., Mikhailenko V.M., Gelboin H.V. Isoenzyme- and spesies-specific susceptability of cDNA-expressed CYPIA P450s to different flavonoids. // Biochem. Biophys. Acta. 1992. - N 1205.-P. 325-335.

356. Uchida Y., Yano A., Kumakura S., Sakuma Т., Nemoto N. Enhancer elements in the mouse Cypla2 gene for constitutive expression. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -2002. V.297(5). - P. 1297.

357. Varma B.M., Kumor R.P. Some biochemical changes in mouse after in vivo irradiaton of panereas with ultrasound. // Biochem. Int. 1992. - V. 26. - N 5. - P. 879-886.

358. Vermeer С, Knapen M.H., Schurgers L.J. Vitamin К and metabolic bone disease. // J. Clin. Pathol. 1998. - V. 51. - N. 6. - P. 424-426.

359. Vorstman E.B., Anslow P., Keeling D.M., Haythomthwaite G., Bilolikar H., McShane M.T. Brain haemorrhage in five infants with coagulopathy // Arch. Dis. Child. 2003. -V.88(12).-P. 1119-1121.

360. Wanner R., Brommer S., Czametzki B.M., Rosenbach T. The differentiation-related upregulation of aryl hydrocarbon receptor transcript levels is suppressed by retinoid acid. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. - V. 209. - P. 706-711.

361. Waxman D.J. Interactions of hepatic cytochromes P-450 with steroid hormones. Regioselectivity and stereospecificity of steroid metabolism and hormonal regulation of rat P-450 enzyme expression. // Biochem. Pharmacol. 1988. - V. 37. - P. 71-84.

362. Waxman D.J., Azaroff L. Phenobarbital induction of cytochrome P-450 gene expression. // Biochem. J. 1992. - V.281. - P. 577-592.

363. Waxman D.J., Pampori N.A., Ram P.A., Agrawal A.K., Shapiro B. Interpulse interval in circulating growth hormone patterns regulates sexually dimorphic expression of hepatic cytochrome P450. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. - V. 88. - P. 6868-6872.

364. Waxman D.J., Walsh C. Phenobarbital-induced rat liver cytochrome P-450. Purification and characterization of two closely related isozymic forms // J. Biol. Chem. 1982. - V. 257.-P. 10446-10457.

365. Wei C-, Caccavale R.J., Weyand E.H., Chen S., Iba M M. Induction of CYP1A1 and CYP1A2 expressions by prototypic and atypical inducers in the human lung. II Cancer Lett 2002. - V. 178. - N. 1. - P. 25-36.

366. Wei Y.D., Helleberg H., Rannug U-, Rannug A. Rapid and transient induction of CYP1A1 gene expression in human cells by the tryptophan photoproduct 6-formylindolo(3,2-b.carbazole. // Chem. Biol. Interact. 1998. - V.l 10,- P. 39 - 55.

367. Wei Y.D., Rannug U. Rannug A. UV-induced CYP1 Al gene expression in human cells is mediated by tryptophan // Chem. Biol. Interact. 1999. - V.l 18(2). - P. 127 - 140.

368. Whitlock i.P.Jr. Induction of cytochrome P4501A1. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. -1999.-V.39.-P 103-125.

369. Williams A.R., Miller D.L., Gross D.R. Hemolysis in vivo by therapeutic intensities of ultrasound. // Ultrasound Med. Biol. 1986. - V. 12. - N 6. - P- 501- 509.

370. Wiwi C.A., Waxman D.J. Role of hepatocyte nuclear factors in transcriptional regulation of male-specific CYP2A2. // J. Biol. Chem. 2005. - V. 280. - P. 32593268.

371. Wood A.W., Ryan D.E., Thomas P.E., Levin W. Regio- and stereoselective metabolism of two C19 steroids by five highly purified and reconstituted rat hepatic cytochrome P-450 isozymes. // J. Biol. Chem. 1983. - V. 258. - P. 8839-8847.

372. Wolff Т., Demi E., Wanders H. Aldrin epoxidation, a highly sensitive indicator specific for cytochrome Р-450-dependent mono-oxygenase activities. // Drug Metab. Dispos. -1979.-V. 7.-P. 301-305.

373. Wormke M„ Stoner M., Saville В., Walker K. Abdelrahim M., Burghardt R., Safe S. The aryl hydrocarbon receptor mediates degradation of estrogen receptor alpha through activation of proteasomes. // Mol. Cell. Biol. 2003. - V. 23. - N. 6. - P. 1843-1855.

374. Wu F.Y., Liao W.C., Chang H.M. Comparison of antitumor activity of vitamins Kl, K2 and КЗ on human tumor cells by two (MTT and SRB) cell viability assays. II Life Sci. -1993.-V. 52.-N. 22.-P. 1797-1804.

375. Wu D., Ramin S.A., Cederbaum A.I. Effect of pyridine on the expression of cytochrome P450 isozymes in primary rat hepatocyte culture. // Mol Cell. Bioehem. 1997. - V. 173.-N. 1-2.-P. 103-111.

376. Xie W., Barwick J.L., Downes M., Blumberg В., Simon C.M., Nelson M.C.,.Neuschwander-Tetri B.A, Brunt E.M., Guzelian P.S., Evans R.M. Humanized xenobiotic response in mice expressing nuclear receptor SXR. // Nature. 2000A. - V. 406.-P. 435-439.

377. Xie W., Barwick J.L., Simon C.M., Pierce A.M., Safe S. Blumberg В., Guzelian P.S., Evans R.M. Reciprocal activation of xenobiotic response genes by nuclear receptors SXR/PXR and CAR. // Genes Dev. 2000B. - V. 14. - P. 3014-3023.

378. Xu C., Pasco D.S. Suppression of CYP1A1 transacivation by H202 is mediated be xenobiotic-response element. // Arch. Bioehem. Biophys. 1998. - V. 356. - P. 142150.

379. Xu L., Glass C.K. Rosenfeld M.G. Coactivator and corepressor complexes in nuclear receptor function. // Curr. Opin. Genet. Dev. 1999. - V. 9. - N. 2. - P. 140-147.

380. Xu L.C., Bresmck E. Induction of cytochrome P4501A1 in rat hepatoma cell by polycyclic hydrocarbons and a dioxin. // Bioehem. Pharmacol. 1990. - V. 40. -P.1399-1403.

381. Yokoyama K., Yamanouchi K, Ohyanagi H., Mitsuno T. Fate of perfluorochemicals in animals after intravenous injection or hemodilution with their emulsions. // Chem. Pharm. Bull. (Tokyo). 1978. - V. 26. - P. 956-966.

382. Yoshida Т., Kobayashi Y., Masuko Т., Hashimoto Y., Kuroiwa Y. Differential effects of 3 dipyridyl isomers on hepatic microsomal cytochrome P450 and heme oxygenase in rats. // Toxicol. Lett. 1995. - V. 76. - P. 145-153.

383. Yukawa O., Nakazawa T. Radiation-induced lipid peroxidation and membrane-bound enzymes in liver microsomes. II Int. J. Radial. Biol. Relal. Stud. Phys. Chem. Med. -1980. V. - 37. -N. 6. - P. 621-631

384. Zajac J.M., Bernard P Effects of cysteamine and of irradiation on microsomal membrane-bound enzymes // Enzyme. 1982. - V. 28. - N. 4. - P. 382-386.

385. Zang Sh., Qin Ch., Safe S.H. Flavonoids as Aryl Hidrocarbon Receptor Agonists/Antagonists: effects of structure and cell contecst. //Environ. Health Perspect. -2003.-V. lll.-P. 1877-1882.

386. Zarkovic N, Manev H, Pericic D, Skala K. Jurin M, Persin A, Kubovic M Effect of semiconductor GaAs laser irradiation on pain perception in mice. Lasers Surg Med. 1989;9(l):63-6

387. Zelko I., Negishi M. Phenobarbital-elicited activation of nuclear receptor CAR in induction of cytochrome P450 genes. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -2000. V. 277.-N. l.-P. 1-6.

388. Zhang W., Shields J.M., Sogawa K., Fujii-Kuriyama Y., Yang V.W. The Gut-enriched Krilppel-like Factor Suppresses the Activity of the CYPIAI Promoter in an Spl-dependent Fashion. // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273. - P. 17917-17925.

389. Zimmer S., Stocker A., Sarbolouki M.N., Spycher S.E., Sassoon J., Azzi A. A novel human tocopherol-associated protein: cloning, in vitro expression, and characterization. // J. Biol, Chem. 2000. - V. 275. - N. 33. - P. 25672-25680.

Информация о работе

Гришаева, Алевтина Юрьевна
доктора биологических наук
Новосибирск, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Регуляция активности цитохромов Р450 химическими и физическими факторами - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Регуляция активности цитохромов Р450 химическими и физическими факторами ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Регуляция активности цитохромов Р450 химическими и физическими факторами"

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Гришаева, Алевтина Юрьевна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Регуляция активности цитохромов Р450 химическими и физическими факторами"

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гришаева, Алевтина Юрьевна

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Гришаева, Алевтина Юрьевна, Новосибирск

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Регуляция активности цитохромов Р450 химическими и физическими факторами
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия