Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Развитие и приживляемость эмбрионов у овец в связи с их гормональной стимуляцией

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Развитие и приживляемость эмбрионов у овец в связи с их гормональной стимуляцией"

РГБ ОД - 8 ИЮН 1393

На правах рукописи

УДК: 636.32/38:612.64.089.67(571.54) МУРУЕВ Анатолий Владимирович

РАЗВИТИЕ И ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ ЭМБРИОНОВ У ОВЕЦ В СВЯЗИ С ИХ ГОРМОНАЛЬНОЙ СТИМУЛЯЦИЕЙ

06.02.01 — разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук

Санкт-Петербург - Пушкин 1998

Работа выполнена в Бурятском научно-исследовательском институте сельского хозяйства Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук.

Научные консультанты: заслуженный деятель науки Российской Федерации,

доктор ветеринарных наук, профессор Кононов Г.А.; заслуженный деятель науки Российской Федерации, доктор ветеринарных наук, профессор Игнатьев P.P.

Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Завертяев Б.П.;

доктор биологических наук, профессор Сергеев Н.И.;

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Цырендондоков Н.Д.

Ведущая организация — Забайкальский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук.

Защита диссертации состоится « 1998 г. в

часов на заседании диссертационного совета Д.020.07.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и разведения сельскохозяйственных животных.

Адрес: 189620, Санкт-Петербург-Пушкин, Московское шоссе, 55а, ВНИИГРЖ С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИГРЖ Автореферат разослан « ¡^¿/¿¿¿■Р 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор сельскохозяйственных

наук, профессор В.И.Волгин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В Республике Бурятия овцеводство является традиционной отраслью животноводства. За последние годы в республике, как и по всей России произошло значительное сокращение поголовья овец при одновременном спаде производства продукции отрасли. Так, в 1996 году в хозяйствах России получено всего 55 ягнят на 100 овцематок, что свидетельствует о крайне низком уровне воспроизводства стада и неэффективном ведении отрасли. В связи с этим основным направлением дальнейшего развития отрасли является интенсивное воспроизводство стада, обеспечивающее получение от каждой высокопродуктивной овцематки максимального приплода с хозяйственно полезными признаками родителей.

Искусственное осеменение сельскохозяйственных животных обеспечило огромный успех в генетическом улучшении их породных и продуктивных качеств. Внедрение же перспективного биотехнологического метода и особенно технологии длительного хранения семени животных с ценным генотипом в замороженном состоянии открыли возможность получения десятков тысяч потомков от одного производителя в год. Существующие методы разведения высокопродуктивных самок позволяют получать от них всего лишь несколько потомков за всю их жизнь (Завертяев Б.П., 1989; Эрнст JI.K., Сергеев Н.И., 1989). Низкий уровень воспроизводства ценных по генотипу самок сельскохозяйственных животных и длительный интервал времени между поколениями (в среднем 6-7 лет) сдерживает генетический прогресс в животноводстве. В развитых странах мира и в некоторых регионах России интенсивное ведение животноводства осуществляется в значительной мере за счет внедрения новых более перспективных биотехнологических методов разведения животных с ценным генотипом, отвечающих мировым стандартам - трансплантации эмбрионов (Тойшибеков М.М. с со-авт., 1987; Голубев А.К., 1988; Варнавский А.Н. с соавт., 1990; Решетникова Н.М., 1990; Сергеев Н.И. с соавт., 1990 и 1991; Ахмадиев Г.М. с соавт., 1991; Мадиссон В.Л., 1991; Пассицкий Н.Д. с соавт.,1991; Бойдио К.А. с соавт., 1992; Довгопол В.Ф. с соавт., 1992; Эрнст JI.K. с соавт.,1995; Гольдман Й.Л. с соавт., 1996; Прокофьев М.И. с соавт., 1996; Эрнст JI.K., 1996 и другие). В селекционной работе трансплантация эмбрионов обеспечивает более интенсивное разведение животных с высокой генетической ценностью, а также животных малочисленных пород, сокращает генерационный интервал, дает возможность более строгой селекции овцематок и племенных производителей. Помимо этого, трансплантация эмбрионов создает более благоприятные условия для использования ценных мировых генетических ресурсов. Транспортировка глубоко замороженных эмбрионов вместо животных облегчает выполнение и соблюдение ветеринарных требований, предусмотренных в международной торговле, исключает необходимость карантинирования. Метод позволяет быстро увеличить поголовье импортируемых групп животных и на их основе создавать крупные стада более адаптированных к местным условиям среды обитания (Завертяев Б.П., 1989; Эрнст JI.K., Сергеев Н.И.Д989; Муромцев Г.С. с соавт., 1990). При этом исключается ве-

роятносгь ввоза и заноса в страну инфекций, так как народившиеся ягнята приобретают колостральный иммунитет от матерей-реципиентов и адаптация новорожденных в новых условиях протекает легче, чем у завезенных взрослых животных. Возможности же дальнейшего развития этого направления велики. Если генная инженерия в микробиологии уже стала реальностью и приобретает все большее практическое значение, то в животноводстве внедрение этих прогрессивных методов только начинается. Сегодня появилась реальная перспектива по заранее намеченному плану реконструировать геном домашних животных, придать ему желаемые, заданные свойства в генотипе. Продолжаются научные исследования по разработке и совершенствованию новых высокоэффективных методов гормональной стимуляции овец и повышению прижив-ляемости эмбрионов.

Учитывая недостаточную разработанность методов индуцирования суперовуляции у овцематок-доноров и фронтального осеменения овец в синхронизированную половую охоту, а также низкую приживляемость эмбрионов после их пересадки реципиентам мы решили заняться более глубоким изучением и внедрением данного биотехнологического метода и выдать соответствующую рекомендацию производству.

Цель и задачи исследования. Цель настоящих исследований заключалась в определении степени развития эмбрионов и их приживляемости у овец в связи с их гормональной стимуляцией и установлении оптимального времени для фронтального их осеменения в синхронизированную половую охоту. Исходя из вышеуказанного в задачу настоящей работы входили:

1. Определение фиксированного времени для фронтального осеменения овец в синхронизированную половую охоту;

2. Изучение суперовуляторной реакции яичников овцематок доноров, морфологическая оценка эмбрионов и определение их приживляемости у реципиентов в зависимости от дозы, кратности и сроков введения некоторых гонадотропных гормонов (ФСГ, СЖК, ФСГ + СЖК);

3. Определение приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов в зависимости от дозы, кратности и сроков введения экзогенного гормона прогестерона, а также у предварительно осемененных реципиентов;

4. Определение влияния количества спонтанно и искусственно сформированных желтых тел в яичниках овцематок-реципиентов на приживляемость эмбрионов у них;

5. Изучение суперовуляторной реакции яичников в индуцированную половую охоту овцематок-доноров, оценка биологической полноценности эмбрионов от них и их приживляемость у реципиентов в синхронизированную половую охоту;

6. Определение приживляемости эмбрионов у реципиентов, полученных от доноров, осемененных естественным и искусственным методами;

7. Определение приживляемости эмбрионов разной стадии морфологического развития в зависимости от дня астрального цикла реципиентов;

8. Изучение параметров роста, развития и продуктивности ярок-трансплан-

татов.

Научная новизна. Новыми в диссертационной работе являются разработка способов повышения приживляемосги эмбрионов у овцематок-реципиентов путем введения экзогенного прогестерона (положительное решение о выдаче патента Российской Федерации на изобретение по заявке № 97110374/13 /010604/ от 13.02.98 г.), формирования добавочных желтых тел в яичниках реципиентов и подсадки зигот в контрлатеральный рог матки, предварительно осемененных реципиентов. Впервые изучена суперовуляторная реакция яичников овцематок-доноров в зависимости от дозы, кратности и сроков введения гонадотропных гормонов. Разработанные способы повышения приживляемости эмбрионов могут быть использованы при изыскании новых эффективных методов дальнейшей оптимизации приживляемости зигот. Впервые изучено пролонгирующее действие фолликулостимулирующего гормона на рост и развитие фолликулов в яичниках овцематок-доноров последующим введением сывороточного гонадотропина. На основании полученных результатов, разработан способ пролонгации действия фолликулостимулирующего гормона для суперовуляции яичников овцематок-доноров. Впервые в технологии трансплантации эмбрионов овец изучена суперовуляторная реакция яичников доноров после индуцированной половой охоты и определена приживляемость эмбрионов, полученных от них. Впервые получены данные по приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов после индуцированного эструса у них. Показана зависимость приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов от количества желтых тел в их яичниках. Разработан способ искусственного формирования добавочных желтых тел в яичниках реципиентов для повышения приживляемости эмбрионов. По результатам исследования обоснованы принципы искусственной регуляции воспроизводительной функции овцематок и разработан способ синхронизации и стимуляции половой охоты у них, а также определено фиксированное время для их фронтального осеменения. В работе показана также возможность использования искусственного осеменения овцематок-доноров после суперовуляции для получения эмбрионов от них.

Практическая значимость работы. Материалы исследования имеют теоретическое и важное практическое значение и послужат основанием для дальнейших поисков и разработок новых эффективных способов иццуцирования суперовуляции яичников у доноров и повышения приживляемости эмбрионов у реципиентов при трансплантации им зародышей. Способы индуцирования эструса, повышения приживляемости эмбрионов и пролонгации действия фолликулостимулирующего гормона при суперовуляции, разработанные нами, могут быть применены при интенсификации воспроизводства в овцеводстве, повысят эффективность биотехнологических приемов, используемых в селекционно-племенной работе. Возрастающий уровень приживляемости эмбрионов у овец в зависимости от количества добавочно сформированных желтых тел в яичниках реципиентов, имеет существенное практическое значение в технологии трансплантации зигот. Разработанный в настоящей работе способ повышения приживляемости эмбрионов путем введения экзогенного прогестерона может быть использован для дальнейшего поиска новых гормональных препаратов и оценки их

фармакологической эффективности.

Кроме того, результаты наших исследований могут быть использованы не только в научно-исследовательской работе и животноводческой практике, но и в учебном процессе при изучении физиологии, разведения сельскохозяйственных животных, акушерства и фармакологии в зооинженерных и ветеринарных и факультетах высших учебных заведений, а также при написании справочных пособий и рекомендаций по технологии трансплантации эмбрионов и селекционно-племенной работе в овцеводстве.

Внедрение результатов научных исследований. Материалы диссертационной работы использованы при разработке и составлении «Плана племенной работы с овцами бурятского типа забайкальской породы на 1990-2000 годы», «Системы ведения агропромышленного производства Республики Бурятия на 1996-2000 годы», республиканской целевой Программы стабилизации и развития агропромышленного производства в Республике Бурятия на 1996-2000 годы, вошли в Республиканский закон «О племенном деле в животноводстве» и используются Министерством сельского хозяйства и продовольствия Республики Бурятия в программах стабилизации и развития животноводства, а также Государственным племенным заводом опытно-производственного хозяйства «Иволпшское» Бурятского научно-исследовательского института сельского хозяйства Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук с 1987 года. Получены 6 удостоверений на рационализаторские предложения. В соответствии с полученными в ходе исследований данными выданы 10 рекомендаций по линии Бурятского центра научно-технической информации.

По результатам исследований оформлены заявки на получение патента Российской Федерации по следующим изобретениям: Способ повышения приживляе-мости эмбрионов у овцематок-реципиентов введением прогестерона (положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 97110374/13 /010604/ от 13.02.98 г.); Способ пролонгации действия фолликулостимулирующего гормона при суперовуляции у овец (зарегистрировано в ВНИИГПЭ № 97118484 от 17.11.97г.); Способ формирования добавочных желтых тел в яичниках овцематок-реципиентов для повышения приживляемости эмбрионов (зарегистрировано в ВНИИГПЭ № 97117779 от 23.12.97 г.).

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на годичных собраниях Президиума Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук (1988-1995 гг.), всесоюзной научной конференции "Биотехнология в животноводстве" (Москва, ВДНХ, 1989), международной научно-производственной конференции по трансплантации и криокон-сервирования эмбрионов сельскохозяйственных животных (г. Раздан, Армянская ССР, 1990), ежегодных научно-производственных конференциях Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока и Сибирского научно-исследовательского проекгно-технологического института животноводства СО РАСХН (Новосибирск, 1988 - 1995 гг.), научно-производственной конференции

«Пути увеличения продуктов животноводства в колхозах и совхозах области и повышение их качества» (г. Иркутск, 1990 г.), научно-производственных конференциях Бурятской государственной сельскохозяйственной академии (г. Улан-Удэ, 1988-1997 гг.), научной конференции Бурятского научного центра СО РАН «Биотехнология и биологически активные вещества» (г. Улан-Удэ, 1990 г.), научных конференциях Бурятского научно-исследовательского института сельского хозяйства СО РАСХН (г. Улан-Удэ, 1988-1995 гг.), ежегодных заседаниях Методического и Ученого Советов Бурятского научно-исследовательского института сельского хозяйства СО РАСХН (г. Улан-Удэ, 1986-1995 гг.). Кроме того, результаты работы выставлялись на международной выставке-ярмарке «Байкалагро-94» (г. Улан-Удэ, 1994 г.), выставке-ярмарке «Дни Бурятии в Москве» 1995 г., выставке-ярмарке «Сибэкспоцентр» Иркутск, 1997 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 36 научных работ. Изданы «План племенной работы с овцами бурятского типа забайкальской породы на 1990 - 2000 годы» и «Система ведения агропромышленного производства Республики Бурятия на 1996 - 2000 годы». Получены 1 положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 97110374/13 (010604) от 13.02.98 г. на «Способ повышения приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов введением прогестерона» и 6 удостоверений на рационализаторские предложения, изданы 10 информационных листков и зарегистрированы 2 заявки в ВНИИГПЭ на получение патентов Российской Федерации на изобретения.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 325 страницах компьютерного текста, состоит из введения и 4 глав, включающих обзор литературы, материал и методы исследований, результаты исследования и их обсуждение, выводы, практические предложения, приложения и список литературы, содержащий 373 отечественных и иностранных источников. Диссертация иллюстрирована 37 таблицами и 40 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Синхронизация и стимуляция половой охоты у овец и оптимальное фиксированное время для фронтального их осеменения;

2. Суперовуляторная реакция яичников овцематок-доноров и стадии морфологического развития эмбрионов в зависимости от дозы, кратности и сроков введения некоторых гонадотропных гормонов (ФСГ, СЖК, ФСГ + СЖК);

3. Особенности приживляемости эмбрионов в зависимости от количества спонтанно и искусственно сформированных желтых тел в яичниках овцематок-реципиентов, а также от дозы, кратности и сроков введения экзогенного прогестерона и подсадки зишт в юошрлатеральный рог матки, предварительно осемененных реципиентов.

4. Суперовуляция овцематок-доноров в индуцированный эструс, биологическая полноценность эмбрионов от них и их приживляемость у реципиентов в синхронизированную половую охоту.

5. Приживляемость эмбрионов от доноров, осемененных естественным и

искусственным методами и разной стадии морфологического развития их в зависимости от дня эстралыюго цикла реципиентов.

6. Особенности роста, развития и продуктивности ярок-трансплантатов в по-стнаггальном онтогенезе.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материал и методы исследований

Работа выполнена в лабораториях овцеводства и ветеринарии Бурятского научно-исследовательского инстотуга сельского хозяйства Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук в соответствии с Государственной научно-технической программой «Разработать и внедрить ресурсосберегающие и экологически чистые технологии производства продукции животноводства, птицеводства, рыбоводства и пчеловодства в Сибири» по темам: «Разработать и внедрить способ синхронизации и стимуляции половой охоты у овец путем применения синтетического аналога простагландина Ф-2-альфа» и «Разработать высокопроизводительную технологию производства продукции овцеводства с учетом сохранения экологической системы бассейна озера Байкал и биотехнологический способ ускорения селекционного процесса на основе трансплантации эмбрионов», утвержденных Президиумом Сибирского отделения РАСХН.

Экспериментальные исследования проведены с 1988 года по 1995 год в опьгг-но-производственном хозяйстве «Иволгинское» Бурятского НИИСХ СО РАСХН, вде на одной из отар был построен и оснащен необходимым оборудованием специальный пункт трансплантации эмбрионов, отвечающий соответствующим ветеринарно-санигарным требованиям. Ежегодно в период бонитировки и стрижки овец отбирались высокопродуктивные овцематки-доноры, бараны-производители и низкопро-дукгавные овцематки-реципиенты. Овцематки-доноры имели настриг шерсти выше 8 кг в физическом весе, а продуктивность руна баран-производителей была выше 12 кг. В качестве овцематок-реципиентов отбирались животные с настригом шерсти в пределах 4-5 кг. Трансплантация эмбрионов проводилась на овцах бурятского типа забайкальской тонкорунной породы, а также забайкальской тонкорунной и алтайской пород с высокой шерстной продуктивностью и живой массой 60-65 кг. Для осеменения овцематок-доноров были подобраны выдающиеся бараны-производители с высоким настригом шерсти и живой массой 80-90 кг и положительно оцененные по качеству потомства. Овцематок-доноров и -реципиентов, находящихся в половой охоте, выявляли баранами-пробниками в возрасте 2-3 лег, дважды - утром и вечером. После шздуцировашм суперовуляции у овцематок-доноров выявляли у них половую охоту и осеменяли их искусственным методом свежеполученной спермой выдающихся баран-производителей в дозе 0,15 - 0,30 мл, дважды с интервалом 8-12 часов между ними. Значительное поголовье доноров осеменялось естественно баранами-производителями с ценным генотипом. Овцема-

ток-реципиетов после выявления у них эструса таврировапи и через 5 дней находили их и пересаживали им эмбрионы, которые получали от доноров через 5 суток после их осеменения. Трансплантация эмбрионов осуществлялась хирургическим методом путем лапаротомии по белой линии живота. Для индуцирования суперовуляции у овцематок-доноров использовался фолликулостимулирующий гормон (ФСГ) и сывороточный гонадотропин (СЖК).

Биологическую полноценность и жизнеспособность эмбрионов определяли визуально при помощи микроскопа МБС-9 с бинокулярной лупой, оценивали стадию морфологического развития зародышей по методике Эрнста JI.K. и Сергеева Н.И. (1989).

Полученные в ходе исследования результаты подвергались математической обработке по методикам Е.К. Меркурьевой (1964) и Г.Ф. Лакина (1980).

Методика синхронизации и стимуляции эструса у овец и определения фиксированного времени для их фронтального искусственного осеменения

Для искусственного осеменения были подобраны 3 группы овец по 25 голов в каждой, из которых 2 группы были опытными и 1- контрольной. Овцематкам первой группы независимо от фазы их полового цикла был введен эстрофан в дозе 1 мл внутримышечно. Животным 2-й группы препарат в такой же дозе инъецировался двукратно с интервалом 8-9 дней. Овцы 3-й группы обработке эстрофаном не подвергались, а находились под наблюдением на протяжении полового цикла. Овцематок, проявивших эструс, после инъекции эстрофана га опытных групп и, находящихся в стадии спонтанной половой охоты, из контрольной группы выявляли рефлексологическим методом баранами-пробниками ежедневно, утром и вечером в одно и то же время. Всех овцематок, находящихся в стадии эструса, осеменяли свежеполученной спермой баран-производителей с ценным генотипом дважды, с интервалом 12 часов.

Учет клинического состояния (температура тела, частота дыхания и пульса) животных проводился согласно методики, принятой в зооветеринарной практике. Исследования клинического статуса, морфологии и биохимии крови проведены у 5-ти овцематок опытных и контрольной групп до введения и через б, 12, 24, 48, 72 и 96 часов после инъекции им эстрофана

Производственную проверку эффективности способа синхронизации и стимуляции половой охоты у овец проводили на 2470 овцематках. Для сравнительного анализа были сформированы 3 группы овец. Овцематкам 1-й группы в количестве 1736 голов независимо от фазы полового цикла был введен эстрофан в дозе 1 мл внутримышечно. 2-й группе овец в количестве 734 головы был инъецирован препарат в такой же дозе двукратно с интервалом 8-9 дней. Овцы 3-й группы в количестве 100 голов обработке эстрофаном не подвергались, а находились под наблюде-

нием в течение одного полового цикла для выявления у них эструса.

Выявление овец, находящихся в стадии эструса, проводилось рефлексологическим методом баранами-пробниками ежедневно - утром и вечером в одно и то же время и осеменяли их свежеполученной спермой производителей с ценным генотипом с интервалом 8-12 часов.

Методика индуцирования суперовуляции яичников у овцематок-доноров, извлечения (вымывания), морфологической оценки эмбрионов их хранения и трансплантации

Гормональная обработка овцематок-доноров начиналась с 7-10 дня полового цикла Первый день эстрального цикла (0-день) устанавливался у овцематок-доноров рефлексологическим методом баранами-пробниками. Сывороточный гона-дотропин (СЖК) инъецировался овцематкам-донорам в дозе 27-35 мл (активность 100-180 м.е.) на 7-10 день полового цикла. Через 2 дня после инъекции СЖК вводился им эстрофан в дозе 2 мл для регрессии желтого тела яичников и индуцирования эструса у них. Индуцирование множественной овуляции у овцематок-доноров фолликулостимулирующим гормоном проводилось в течение 4-х дней с интервалом 12 часов между инъекциями 10-40 мг гипофизарного гормона. На 3-й день от начала гормональной обработки доноров инъецировали им эстрофан в дозе 2 мл для лютеолиза желтого тела.

Методика комплексного применения фолликулостимулирующего гормона и сывороточного гонадотропина заключалась в том, что вначале однократно вводился гипофизарный гормон в дозе 40 мг на 7-10 день эстрального цикла доноров и через 8-10 часов после введения этого гормона инъецировался сывороточный гонадотро-пин в дозе 32 мл. Через 48 часов после введения сывороточного гонадотропина инъецировался донорам эстрофан в дозе 2 мл для индуцирования у них эструса.

В день проявления эструса овцематок-доноров их осеменяли и через 5 дней вымывали у них эмбрионы хирургическим методом, оценивали биологическую полноценность и пересаживали в рога матки овцематок-реципиентов. Для вымывания эмбрионов из рогов матки доноров использовался двухканальный катетер Фоллея производства Великобритании, изготовленный из латексной резины. После осмотра и подсчета числа морфологически полноценных желтых тел в яичниках овцематок-доноров в одной из рогов матки иглой прокалывали небольшое отверстие и верхний конец катетера Фоллея вставляли в полость рога матки через это отверстие до маточного изгиба в сторону верхушки рогов матки. В баллон вводили 15-20 мл воздуха и промывали рога матки двумя путями: маточным, при котором иглу вводили в просвет верхушки рога матки, вводя через нее промывную среду и выводили ее через второй канал катетера Фоллея; маточно-трубным, при котором в яйцевод (в его ампульную часть) вставляли канюлю и через нее подавали промывную среду Дюльбекко, проходящую через яйцевод, рога и матку, и выходящую также через канал катетера Фоллея. Промывную среду с эмбрионами собирали в стерильные

- и -

стаканчики объемом 40 мл и переносили в стерильный бокс, где ее разливали по 1015 мл в стерильные чашки Петри с дном, расчерченным на квадраты. При помощи микроскопа МБС-9 с бинокулярной лупой при 15-20-ти кратном увеличении находили эмбрионы, отсасывали в пастеровскую пипетку и переносили на часовые стекла со средой Дгольбекко и помещали в стерильный термостат при температуре +37°С для кратковременного хранения.

После окончания процесса вымывания эмбрионов из репродуктивных органов овцематок-доноров для предупреждения параметрита и перитонита места проколов рогов матки обрабатывали раствором гепарина и орошали оксикортом. Затем на все слои брюшной стенки (операционной раны) животных накладывали швы из кетгута с последующим депонированием антибиотиков и физиологического раствора в брюшную полость. Наружный шов обрабатывали септонексом, орошали кубатолом и смазывали ихтиолом.

Эмбрионы, полученные от доноров, пересаживали овцематкам-реципиентам хирургическим методом. Операционное поле у реципиентов готовили также, как и у доноров. После выведения матки с яичниками наружу через операционный разрез брюшной стенки реципиентов прокалывали тупой иглой отверстие в области верхушки рогов матки на стороне желтого тела в 3-5 см от места ее соединения с яйцеводом. Через это отверстие вводили кончик пипетки с эмбрионом и апплицировали его в просвет рога матки реципиентов. После пересадки эмбрионов реципиентам сначала на ез брюшину и затем на кожу накладывали швы по общепринятой в ветеринарной практике методике.

Методика некоторых способов повышения прнживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов

В целях шучения прнживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов были подобраны несколько групп подопытных животных. Первой группе реципиентов за 5 дней до трансплантации вводили 1%-й масляный раствор прогестерона в дозе 10 мл внутримышечно; второй группе реципиентов инъецировали этот гормон в дозе 1 мл в день проявления эструса и на протяжении последующих 8-ми дней подряд. Следующие две группы животных подвергались инъекциям стероидного гормона прогестерона за 1 сутки до пересадки им зигот в дозе 5 и 10 мл соответственно; пятой группе подопытных животных гормональная стимуляция проводилась в момент трансплантации им эмбрионов и через 3 дня после пересадки зигот в дозе 5 мл; шестой и седьмой группам животных прогестерон вводился только в день трансплантации им эмбрионов в дозе 5 и 20 мл соответственно; восьмой группе реципиентов вводили гормон прогестерон в комплексе с 5 мл тривигамина. Контрольная группа овцематок-реципиентов не подвергалась гормональной стимуляции и трансплантация эмбрионов осуществлялась по традиционной методике.

Влияние числа желтых тел яичников реципиентов на приживляемость эмбрионов у них определялась на 3-х группах животных. В первую группу входили

овцематки-реципиенгы с 1-им желтым телом. Во второй груше подбирались овцематки-реципиенты с 2-мя желтыми телами и соответственно в третью группу входили реципиенты с 3-мя желтыми телами в яичниках.

В целях стимуляции формирования добавочных желтых тел в яичниках реципиентов инъецировали им в лютеиновую фазу полового цикла сывороточный гона-дотропин в дозе 20-25 мл (активность 100 м.е.).

Для определения прижив ля емости эмбрионов, трансплантированных в контрлатеральный рог матки предварительно осемененных реципиентов, были подобраны 2 группы овцематок. Первая группа реципиентов по мере выявления у них половой охоты осеменялась бараном монгольской черноголовой породы для последующей идентификации приплода во время ягнения. На 5-6 день после осеменения реципиентов трансплантировали им в контрлатеральный рог матки эмбрион, полученный от овцематок-доноров бурятского типа забайкальской тонкорунной породы. Контрольная группа реципиентов не подвергалась осеменению, а трансплантировались им эмбрионы традиционным методом.

Индуцирование эструса у овцематок-доноров и реципиентов проводилось путем 2-х кратного введения эстрофана в дозе по 1 мл с интервалом 8-9 дней между инъекциями. Через 72 часа после повторной инъекции этого препарата овцематки-доноры и реципиенты считались проявившими половую охоту, т.е. фиксировался у них 0-день полового цикла. Через 7-8 дней после фиксирования 0-двд начиналась обработка доноров гипофизарным гормоном или сывороточным гонадотропином согласно указанной выше методике для индуцирования у них суперовуляции.

Приживляемосгь эмбрионов у овцематок-реципиентов определялась рефлексологическим методом путем выявления у них половой охоты баранами-пробниками ежедневно утром и вечером в течение 40-50 дней после пересадки им зародышей. Предварительная приживляемосгь эмбрионов у овцематок-реципиентов считалась положительной, если в течение указанного периода они не проявляли признаков эструса. Окончательная приживляемосгь эмбрионов у реципиентов уточнялась путем сверки результатов фактического ягнения их с данными рефлексологического метода исследования животных на суягность.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 1.Синхронизация н стимуляция половой охоты у овец

Наши исследования показали, что внутримышечное введение эстрофана не оказывало отрицательного влияния на общее состояние животных. Клинический статус (пульс, дыхание, температура тела), морфология и биохимия крови подопытных животных находились в пределах: физиологической нормы. Так, температура тела у подопытных овцематок перед введением эстрофана была в пределах 38,6±0,08°С. Затем у них отмечалось некоторое повышение температуры тела в первые часы после инъекции эстрофана и она сохранялась на этом уровне в течение

96 часов после введения препарата.

До введения эстрофана у подопытных овцематок количество пульсовых ударов сердца составляло 71,2±0,80 в минуту. Через 6 часов после инъекции препарата систолическое сокращение сердца замедлялось и составляло соответственно 66,4±0,98 пульсовых ударов в минуту. Через 24 часа сокращения сердца достигали 73,1±0,63 пульсовых ударов в минуту и 70,2±0,05 ударов через 96 часов после инъекции препарата этим животным.

Число дыхательных движений подопытных животных, как до введения, так и на протяжении 96 часов после инъекции препарата существенных изменений не претерпевало.

Некоторое уменьшение общего количества лейкоцитов отмечалось у подопытных животных через 6 часов после введения этого препарата, (6,640^0,28 тыс), но через 48 часов мы отметили заметное повышение их числа (10,420±0,74 тыс), что, по-видимому, объясняется соответствующими сдвигами, происходящими в организме овцематок, в период половой охоты. Известно, что в период эструса у самок сельскохозяйственных животных происходит гиперфункция надпочечников, что, несомненно, сказывается на функции сердечно-сосудистой системы этих животных. Аналогичные изменения мы наблюдали и со стороны красных кровяных клеток, число которых через 6 часов после введения препарата снижалось (7,586±0,12 млн), а через 48 часов после инъекции препарата количество их увеличивалось (8,780±0,42 млн). Некоторое повышение концентрации гемоглобина в эритроцитах отмечалось у животных через 72 часа после введения препарата (12,4±0,92 г%).

Биохимические исследования сыворотки крови подопытных животных показали, что концентрация кальция заметно снизилась через 6 часов после введения препарата (9,5±0,28 мг%), а через 12 часов отмечалось значительное повышение его содержания (10,5±0,09 мг%). Спустя 24 часа после инъекции эстрофана вновь происходило понижение уровня кальция (8,1±0,11 мг%), сохранявшийся до 72 часов, но через 96 часов вновь отмечался незначительный подъем его уровня (Ю,3±0,38 мг%).

Незначительное повышение концентрации неорганического фосфора в крови овцематок отмечалось через 12 часов после внутримышечного введения эстрофана. Установлено нами достоверное повышение концентрации резервно-щелочных веществ в крови подопытных овцематок через 6 часов после внутримышечной инъекции эстрофана. Содержание общего белка в сыворотке крови подопытных животных на протяжении всего периода исследований было более высоким, чем в норме, а концентрация же сахара у них находилась в пределах 11,20±0,13 -11,84±0,08 мг/%.

Клинические показатели, морфология и биохимия крови у подопытных овцематок в течение полового цикла значительных изменений по сравнению с нормой не претерпевали, за исключением незначительных колебаний, обусловленных, по-видимому, стадией возбуждения в период половой охоты.

Таким образом, результаты клинико-гематологичееких и биохимических исследований крови в индуцированную половую охоту и в течение полового цикла убедительно показали отсутствие каких-либо физиологических отклонений в организме подопытных овцематок под влиянием эстрофана.

Для выявления эстральной реакции у овцематок на однократное введение эстрофана было обработано 28 овец, а 25 овцематок находились в контроле. В ходе исследования установлено, что у 21 овцематки (75%) эструс проявился в течение 96 часов после введения эстрофана. Причем, у 50% животных эструс проявился через 48 часов после инъекции препарата, у 21,4% животных через 72 часа и у 3,6% овцематок через 96 часов после инъекции данного препарата. "У 25% овцематок половое возбуждение не наступило в течение 96 часов после введения эстрофана. По-видимому, у этих животных желтые тела яичников находились в стадии регрессии и не подверглись лютеолиггаческому воздействию эстрофана. Всех овцематок, проявивших эструс, осеменили искусственным методом.

При синхронизации и стимуляции овудяторного процесса у 25 овцематок путем двукратной инъекции эстрофана с интервалом 8-9 дней установлено, что про-стагландин Ф-2-альфа индуцировал эструс у 24 овцематок (96%) в течение 96 часов после повторного введения этого препарата. Так, у 12 овцематок (48,0%) стадия возбуждения полового цикла наступила через 48 часов после повторного введения препарата, у 2 животных (8,0%) через 24 часа и у 8 овец (32,0%) через 96 часов после инъекции препарата. У 1 овцематки (4,0%) стадия возбуждения полового цикла проявилась только в промежутке между 5-11 днями после повторного введения препарата.

Из контрольной группы животных в течение 96 часового наблюдения эструс был зафиксирован только у 1 овцематки (4%). В промежутках между 5 и 11 днями наблюдения проявили половую охоту 16 овцематок (64%) и между 12 и 19 днями 6 животных (24%). Одна овцематка в течение 25 дней наблюдения не проявила стадию полового возбуждения.

Таким образом, для эффективной синхронизации и стимуляции эструса у овцематок эстрофан следует инъецировать дважды с интервалом 8-9 дней между инъекциями, что подтверждается результатами производственной проверки. Так, при однократной инъекции эстрофана 1736 овцематкам более половины из них проявляли эструс через 48 часов после инъекции препарата (50,6%). Через 24 часа после инъекции препарата эструс наступил только у 150 животных (15%), а у 230 овцематок (23,2%) через 72 часа и через 96 часов у 112 овцематок (11.2%). Наибольшее поголовье овцематок, проявивших эструс, при однократной инъекции препарата выявляется в первые четыре дня - 995 голов (57,3%). Причем, из 1736 овцематок, обработанных эстрофаном, 741 овцематка (43,1%) не среагировала на инъекцию эстрофана в течение 4-х дней после его введения, а проявила эструс спонтанно в последующие дни наблюдения. По-видимому, у овец, как и у коров желтое тело чувствительно к лютеолитическому воздействию эстрофана только в течение определенного периода полового цикла. В проведенном нами эксперимен-

те, лишь 57,3% животных реагировали на введение эстрофана, который был инъецирован внутримышечно однократно без учета дня и стадии полового цикла. Очевидно, остальные животные, которые не реагировали проявлением эструса находились в фолликулярной фазе эстрального цикла. Чтобы индуцировать у всех овцематок эструс всем им двукратно инъецировали эстрофан с 8-9 дневным интервалом. Половая охота у большинства овцематок (52,4%) наступала через 48 часов после повторного введения эстрофана. В течение 96 часов после повторной инъекции эстрофана проявили эструс 625 овцематок (85Д%). В контрольной группе из 100 овцематок в течение 96 часового наблюдения проявили эструс спонтанно всего 12 овцематок (12,0%). Остальные овцематки проявили эструс спонтанно в течение 1619 дней. Высокая точность времени синхронизации эструса и овуляции у овец, индуцированной эстрофаном, позволила определить оптимальное фиксированное время для фронтального искусственного осеменения овец без выявления у них половой охоты баранами-пробниками.

Таким образом, синтетический аналог простаглаидина Ф-2-альфа (эстрофан) является достаточно эффективным препаратом для синхронизации и стимуляции половой охоты и овуляторного процесса у овец, а оптимальное фиксированное время для фронтального искусственного осеменения их определено 48 и 72 часами после повторной инъекции эстрофана.

2. Суперовуляторная реакция яичников овцематок-доноров, морфологическая оценка эмбрионов и их приживляемость в зависимости от дозы, кратности и сроков введения некоторых гонадотропипов (ФСГ, СЯСК, ФСГ + СЖК).

Результаты исследований по индуцированию суперовуляции яичников овцематок-доноров сывороточным гонадотропином приведены в табл.1. Из результатов исследований видно, что экзогенное введение сывороточного гонадотропина в дозе 32 мл является наиболее оптимальной.

При инъекции такой дозы сывороточного гонадотропина у овцематок-доноров сформировались значительно больше желтых тел, а коэффициент вариации в суперовуляторной реакции в этой группе животных оказался ниже по сравнению с соответствующими показателями подопытных доноров, обработанных в дозах 27 мл и 35 мл. Низкий коэффициент вариации в суперовуляторной реакции яичников указывает на более синхронную реакцию яичников подопытных животных на внутримышечную инъекцию указанной дозы гонадотропного гормона С повышением дозы сывороточного гонадотропина отмечалось ргзкое понижение уровня суперовуляторной реакции яичников у подопытных животных. Сформировавшихся морфологически полноценных желтых тел в яичниках на одного донора приходилось в среднем 6,3±1,57. Вариабельность гонадотропной реакции яичников доноров при инъекции им сывороточного гонадотропина СЖК в дозе 35 мл была достаточно высокой - в пределах 99,8%.

\

Таблица 1

Реакция яичников доноров на инъекцию СЖК

№ п/п Показатели Доза ганадотропина СЖК (мл)

27 32 35

1. Количество доноров, обра-

ботанных гонадотро пином 10 9 16

2. Количество сформировав-

шихся желтых тел в яич-

никах 83 91 101

3. В среднем желтых тел

яичников на одного донора 8,3±2,05 10,1±1,79* 6,31±1,57*

4. Коэффициент вариации 78,1 53,3 99,8

Примечание: * - разность недостоверна

Таким образом, результаты исследований свидетельствуют о том, что оптимальной дозой сывороточного гонадотрогшна (СЖК) для индуцирования суперовуляции у овцематок-доноров является доза в 32 мл.

Однако, основным достоверным показателем положительной суперовулятор-ной реакции яичников доноров в конечном счете является выход морфологически полноценных эмбрионов от них (табл.2).

Таблица 2

Результаты извлечения эмбрионов

№ п/п Показатели Доза гонадотропина СЖК (мл)

27 32 35

1. Обработано доноров 10 9 16

2. Общее кол-во желтых тел в

яичниках доноров 83 91 101

3. Вымыто эмбрионов 13 16 32

4. В % от общего кол-ва желгых

тел 12 17,6 31,7

5. Вымыто эмбрионов в среднем

на 1-го донора 1,3±0,45 1,77±0,98* 2,0±0,77*

6. Коэффициент вариации 145 166,1 154,5

Примечание: * - разность недостоверна.

Данные, представленные в таблице 2, свидетельствуют о том, что с повышением дозы сывороточного гонадотропина СЖК, введенного овцематкам-донорам, увеличивается выход эмбрионов. Разница между данными показателями статис-

тически недостоверна. Коэффициент вариации по выходу эмбрионов от доноров колебался в пределах 145% и 160%. Такая низкая эффективность вымывания (извлечения) эмбрионов от доноров после суперовуляции, вызванной инъекцией сывороточного гонадотропина, объясняется, на наш взгляд, асинхронностыо роста и развития фолликулов под действием сывороточного гонадотропина. Полученные нами, экспериментальные данные свидетельствуют о неодинаковой реактивности яичников доноров к экзогенному сывороточному гонадотропину СЖК и, поэтому, следует индивидуально подходить к отбору и подбору овцематок в качестве доноров для получения от них эмбрионов. Анализ качества эмбрионов от доноров, об-ра5отанных разными дозами сывороточного гонадотропина, показывает, что число зигот, оцененных на «отлично», уменьшается с 38,4% до 12,5% с увеличением дозы сывороточного гонадотропина. Аналогичное снижение выхода эмбрионов наблюдалось среди зигот, оцененных на «хорошо». Незначительные различия в качестве эмбрионов отмечались в фазе блаегоцисга. У дегенерированных эмбрионов, непригодных для трансплантации, наблюдалось выраженное неравномерное дробление бластомер с явлениями их дегенерации.

В задачу наших исследований входило также изучение суперовуляторной реакции яичников у овцематок-доноров на экзогенное введение чистого пшофизар-ного гонадотрогаюго фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), результаты которых представлены в таблице 3.

Таблица 3

Суперовуляторная реакция яичников доноров в зависимости от дозы фолликулостимулирующего гормона (ФСГ)

№ п/п Показатели Доза гормона ФСГ (мг)

20 40 80

1. Всего обработано доноров 25 б 36

2. Общее количество желтых

тел в яичниках 125 45 418

3. В среднем желтых тел на 1-

го донора 5,0±0,50 7,50±2,53* 11,6+1,14

Р<0,001

4. Коэффициент вариации 50,0 83,0 59,4

Примечание: Р - достоверность разности между показателями сфор-

мировавшихся желтых тел в зависимости от дозы ФСГ; * - недостоверно.

Как ввдно го таблицы 3, с повышением дозы фолликулостимулирующего гормона отмечалась четкая тенденция усиления суперовуляторной реакции яичников у овцематок-доноров, сопровождающейся увеличением количества сформировавшихся желтых тел в яичниках подопытных животных после их гормональной обработки. По нашим данным оптимальной

дозой го надотро иного гормона ФСГ, индуцирующей множественную овуляцию у овцемапгок-доноров является доза 80 мг. При инъекции гормона в такой дозе отмечалось формирование наибольшего количества морфологически полноценных желтых тел в яичниках доноров и, к тому же, вариабельность ответной реакции яичников на введение этой дозы была сравнительно низкой. Такой низкий коэффициент вариации в суперовуляторной реакции яичников животных в этой группе по сравнению с такими же показателями других групп доноров свидетельствует о более однородной синхронной ответной реакции яичников на инъекцию гормона ФСГ в дозе 80 мг. Другим, более убедительным подтверждением синхронной ответной реакции яичников у овцематок-доноров на инъекцию ФСГ является не только количество извлеченных эмбрионов, но и качественные морфологические признаки развития эмбрионов, которые отражены в результатах наших исследований. Разница между средними арифметическими показателями по выходу эмбрионов от доноров, обработанных пшофизарным фолликулостимулирующим гормоном в дозе 80 мг и аналогичными показателями выхода эмбрионов у овцематок-доноров, но обработанных этим гормоном в других дозах, статистически достоверна Р < 0,001. При обработке животных такой дозой фолликулостимулирующего гормона 75,6% эмбрионов были получены в фазе бластоцисты, что указывает на быструю и синхронную суперовуляторную реакцию яичников овцематок-доноров на инъекцию этого гипофизарного гормона. Отсюда следует, что эффективной и оптимальной дозой фолликулостимулирующего гормона для стимуляции суперовуляции яичников овцематок-доноров является доза 80 мг.

Следующей, очень важной и актуальной проблемой при трансплантации эмбрионов не только в научном, но и практическом плане является поиск и разработка более доступной, дешевой и нетрудоемкой, но эффективной методики гормональной обработки доноров для достижения у них результативной оптимальной суперовуляторной реакции яичников. Использование фолликулостимулирующего гормона для суперовуляции яичников у животных трудоемко и требует строгого соблюдения времени и кратности его введения донорам и, к тому же, стоимость указанного препарата высока. Попытки исследователей продлить действие однократной инъекции фолликулостимулирующего гормона на суперовуляторную реакцию яичников животных с использованием различных пролонгаторов оказались малоэффективными. Учитывая практическую значимость проблемы, мы изучили действие фолликулостимулирующего гормона в комплексе с сывороточным гонадотропином СЖК в целях индуцирования суперовуляции яичников у овцематок-доноров (табл.4). Данные, представленные в таблице 4, свидетельствуют о формировании значительного количества морфологически полноценных желтых тел у подопытных доноров, образовавшихся после овуляции множественных фолликулов, под воздействием гонадотропных гормонов. О высокой синхронной ответной суперовуляторной реакции яичников овцематок-донороз на гормональную стимуляцию указывает и коэффициент вариации (табл.4). 45,8% эмбрионов по морфологическим признакам роста и развития находились в стадии бластоцисты, которые были получены на

5-й день после осеменения доноров. 44,4% эмбрионов по своему морфологическому развитию находились в стадии морулы и были оценены на «хорошо», а 55,5% зигот были оценены на «удовлетворительно», 16,6% эмбрионов находились на стадии дегенерации.

Таблица 4

Суперовуляторная реакция яичников доноров, обработанных ФСГ + СЖК

№ Гормон и доза

п/п Показатели ФСГ (40 мг) +

+ СЖК (30 мл)

1. Количество обработанных доноров 7

2. Количество желтых тел в яичниках доноров 70

3. Количество желтых тел в среднем на 1-го донора 10,0±2,02

4. Коэффициент вариации 52,1

Таким образом, рекомендуемая нами комплексная гормональная обработка овцематок-доноров для индуцирования у них суперовуляции значительно дешевле и экономически выгодна.

Экспериментальные исследования по изучению эффективности действия фол-ликулостимулирующего гормона на суперовуляторную реакцию яичников овцематок-доноров в разные дни их полового цикла (с 7 по 11 день) не выявили четкой закономерности в повышении выхода и различий в морфологическом развитии эмбрионов (табл.5).

Таблица 5

Суперовуляторная реакция яичников доноров в разные дни их полового цикла

№ п/п Показатели Дни полового цикла

7 8 9 10 11

1. Количество обработанных доно-

ров 14 3 32 14 3

2. Количество желтых тел в яични-

ках доноров 146 48 373 112 47

3. В % от общего количества жел-

тых тел за все дни исследования 20,1 6,6 51,4 15,4 6,4

4. В среднем желтых тел на 1-го

донора 10,4 16,4 11,6 8,0 13,1

5. Коэффициент вариации 65 54 78 57 78

Вариабелыюсть суперовуляторной реакции яичников овцематок-доноров на экзогенное введение фолликулостимулирующего гормона колебалась в пределах от 54% до 78% за все дни обработки в лютеиновой фазе полового цикла, что свидетельствует о более однородной реакции яичников подопытных животных на инъекцию этого гипофизарного гормона. Напротив, большая вариация отмечалась в выходе эмбрионов от овцематок-доноров после суперовуляции и последующего их осеменения. Такая значительная вариабельность вымываемости эмбрионов от доноров по отношению к их сформировавшимся морфологически полноценным желтым телам яичников, на наш взгляд, объясняется издержками технологии извлечения зародышей (табл.6).

Таблица 6

Выход эмбрионов от доноров, обработанных ФСГ в разные дни полового цикла

№ п/п Показатели Дни полового цикла

7 8 9 10 11

1. Количество обработанных доно-

ров 14 3 32 14 3

2. Количество желтых тел в яични-

ках доноров 146 48 373 112 47

3. Вымыто эмбрионов всего 48 16 165 38 14

4. В среднем вымыто эмбрионов на

1-го донора 3,4 5,3 5,1 2,7 4,6

5. В % от общего количества жел-

тых тел яичников 32,8 33,8 44,2 33,9 29,8

6. Коэффициент вариации 150 52 118 127 140

Отсюда следует, что гормональную обработку овцематок-доноров для индуцирования у них суперовуляции необходимо начинать с 7-го дня полового цикла, а не с 10-12-го дня астрального цикла по действующей ныне технологии и этот доказанный нами факт имеет огромное значение в интенсификации работ по трансплантации эмбрионов от животных с ценным генотипом.

3. Суперовуляторная реакция яичников овцематок-допоров после индуцированной половой охоты в биологическая полноценность эмбрионов

При традиционной технологии трансплантации эмбрионов у сельскохозяйственных животных необходимо обязательное установление 0-дня естественного эстрального цикла доноров за 30-35 дней до начала их гормональной обра-

ботки для индуцирования у них суперовуляции и она продолжительна по времени и трудоемка. Специалисты, занимающиеся трансплантацией эмбрионов у овец, постоянно находятся в зависимости от времени спонтанного проявления половой охоты овцематок-доноров. Мы же разрешили эту проблему путем ежедневного планового искусственного индуцирования эструса у овцематок-доноров в необходимом нам количестве 2-х кратной обработкой их эстрофаном с интервалом 8-9 дней между ними. Через 72 часа после второго введения эстрофана овцематки-доноры считались проявившим половую охоту, т.е. фиксировали у них 0-день эст-ралыюго цикла. С этого дня (0-дня) полового цикла начинался отсчет дней эст-рального цикла и на 10-й - 12-й день лютеиновой фазы начиналась их гормональная обработка гонадотропными гормонами в целях индуцирования у них суперовуляции.

В результате проведенных исследований нами установлено, что суперовуля-торная реакция яичников у овцематок-доноров, после индуцированной половой охоты, произошла на довольно высоком уровне. В среднем на 1-го донора, у которых до гормональной обработки индуцировали эструс, образовалось по 12,9±0,15 желтых тел, что свидетельствует о высоком уровне суперовуляции у них. О синхронной ответной реакции яичников овцематок-доноров на экзогенное введение гонадотропного гормона указывает и коэффициент вариации (3,64%).

Оценка положительной ответной реакции яичников овцематок-доноров на экзогенную гонадотропную стимуляцию только по числу свершившихся овуляций, по-видимому, недостаточна и поэтому основным достоверным показателем супер-овуляторной реакции яичников является выход морфологически полноценных эмбрионов. Так, вымываемость эмбрионов у овцематок-доноров опытной группы, у которых эструс был индуцирован введением эстрофана до начала гормональной обработки в целях суперовуляции, составила 39,5%, а в контрольной группе животных- 22,7%. Получено на одного донора в опытной группе 5,1 • / эмбриона, а в контрольной группе - 2,0. Биологическая полноценность эмбрионов, полученных от овцематок-доноров, в индуцированную половую охоту с последующей их экзогенной гормональной стимуляцией характеризовалась правильной шарообразной формой, гомогенной светлой цитоплазмой, целостной прозрачной оболочкой, одинаковыми размерами бласгомеров.

Таким образом, индуцирование эструса у овцематок-доноров не оказывает отрицательного влияния на суперовуляторную реакцию яичников и последующее морфологическое развитие эмбрионов у них.

4. Прижнвлясмость эмбрионов у овцематок-реципиентов в зависимости от дозы, кратности и сроков введения экзогенного гормона-прогестерона

Эффективность трансплантации эмбрионов зависит не только от генотипа овцематок-доноров и баран-производителей, результативности индуцирования суперовуляции у доноров и их осеменения, методов извлечения и пересадки эмбрионов,

краггковременного или длительного их хранения, но и от реализации и обеспечения успешной приживляемости эмбрионов при пересадке, которая, к сожалению, остается еще на очень низком уровне. Известно, что у самок млекопитающих оптимальная концентрация гормона прогестерона в крови является основным фактором раннего сохранения беременности и у большинства видов сельскохозяйственных животных она обеспечивает имплантацию зигот. С учетом этого мы в своих исследованиях применили 1 %-ный масляный раствор прогестерона для повышения приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов. Стероидный гормон прогестерон вводился реципиентам в разной дозе, кратность и сроки инъекции этого гормона также были иными. Из данных, представленных в таблице 7, видно, что наибольший процент приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов по результатам фактического их ягнения отмечался у реципиентов, которым был введен раствор прогестерона в дозе 10 мл на 4-ый день полового цикла, т.е. за сутки до пересадки им зигот (57,1%). Очевидно, экзогенное введение прогестерона овцематкам-реципиентам явилось определяющим фактором в предимплантационный период развитая зародыша, так как этот период является одним из самых критических. Полученные в ходе исследований результаты свидетельствуют о том, что оптимальными дозами прогестерона являются 5 и 10 мл, и инъекция которых осуществляется на 4-й - 5-й день полового цикла, т.е. накануне пересадки им эмбрионов. Очевидно, экзогенный прогестерон усиливает секрецию желез генитального тракта и тем самым создает оптимальную маточную среду для дальнейшего роста, развития и приживляемости трансплантированных эмбрионов. В то же время следует отметить, что чрезмерная аккумуляция прогестерона организмом овцематок-реципиентов в предимплантационный период отрицательно влияет на процесс приживляемости пересаженных зигот (табл.7).

Таблица 7

Приживляемость эмбрионов у реципиентов в зависимости от дозы, кратности и сроков введенного прогестерона

Доза гор- Кол-во Прижилось эм-

№ Дни мона реципи- брионов

п/п введения прогестерона ентов

(мл) (гол) (шт) (%)

1 2 3 4 5 6

1. 0-день полового цикла и в

течение 8 дней подряд 1,0 16 2 12,5

2. В 0-день полового цикла 10,0 9 4 44,4

3. На 5-б-й день полового

цикла 5,0 34 19 55,8

4. На 5-б-й день полового 4,0+5,0

цикла тривига 14 7 50,0

(Продолжение таблицы 7)

1 2 3 4 5 6

5. На 5-6-й день полового

цикла и через 3 дня 5,0 27 12 44,4

6. На 5-6-й день полового

цикла 20,0 5 2 40,0

7. На 4-й день полового

цикла 5,0 40 20 50,0

8. На 4-й день полового

цикла 10,0 14 8 57,1

9. Контроль - 151 63 41,8

По-видимому, избыток этого стероидного гормона у некоторых животных вызывает переразвитие эндометрия матки, что, в свою очередь, отрицательно сказывается на росте и развитие трансплантированных эмбрионов и на последующую их приживляемость. Возможно, выводы такого рода преждевременны, но тем не менее уже сейчас совершенно очевидно, что оптимальный уровень прогестерона в крови реципиентов служит решающим фактором успешной приживляемости эмбрионов и дальнейшего течения беременности, что подтверждено нашими исследованиями.

5. Приживляемость эмбрионов у предварительно осемененных овцематок-реципиентов

В результате проведенных нами исследований, выявлена определенная закономерность в повышении приживляемости эмбрионов, подсаженных в конгрлате-ральный рог матки предварительно осемененных реципиентов (табл.8).

Таблица 8

Приживляемость эмбрионов у предварительно осемененных реципиентов

№ п/п Показатели Группы животных

опытная контрольная

1. Количество овцематок-реципиентов 73 26

2. Пересажено эмбрионов 73 26

3. Прижилось эмбрионов 39 9

4. Процент приживляемости 53,4 34,6

Приживляемость эмбрионов у предварительно осемененных реципиентов оказалась выше уровня приживляемости зигот у овцематок-реципиентов контрольной

группы на 18,8%. Эти данные подтверждают наше предположение о том, что после плодотворного оплодотворения яйцеклеток сперматозоидами барана монгольской черноголовой породы, сформировавшиеся эмбрионы прошли процесс нидации и имплантировались в слизистую оболочку рогов матки реципиентов. Следовательно, желтые тела яичников у них не регрессировали, а продолжали усиленно синтезировать гормон прогестерон, который, очевидно, оказал благотворное действие на дальнейшее течение беременности и на приживляемость подсаженных зародышей. Кроме того, зигота, сформировавшаяся после предварительного естественного осеменения реципиента, контактируя со слизистой оболочкой рогов матки препятствовала синтезу эндометрием простагландинов Ф-2-альфа, обладающих лютеолигиче-ским действием на желтое тело яичников и, возможно, по этой причине не происходило изгнание трансплантированных нами эмбрионов из репродуктивных органов овцематок-реципиентов.

Таким образом, приживляемость эмбрионов, подсаженных в небеременный рог матки, предварительно осемененных овцематок-реципиентов была высокой, по сравнению с приживляемостью зигот, пересаженных традиционным методом.

6. Приживляемость эмбрионов в зависимости от количества спонтанно и искусственно сформированных желтых тел в яичниках овцематок-реципиентов

Активное функционирование желтого тела связано с длительной секрецией прогестерона, необходимого для создания миометральной неподвижности и эццо-метральной чувствительности при беременности. Поэтому, для нормального течения беременности особо важное значение имеет желтое тело яичников беременных животных и выделяемый им гормон - прогестерон, именуемый еще и «гормоном беременности». В связи с этим нам было необходимо изучить и определить уровень приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов в зависимости от числа полноценных желтых тел в их яичниках. Для реализации этой проблемы были отобраны овцематки-реципиенты с 1-м, 2-мя и 3-мя желтыми телами яичников во время пересадки им эмбрионов (табл.9).

Таблица 9

Приживляемость эмбрионов у реципиентов в зависимости от количества желтых тел

№ п/п Показатели Кол-во желтых тел в яичниках

1 2 3

1. Количество реципиентов 40 26 7

2. Пересажено эмбрионов 44 29 10

3. Процент приживляемости 40,9 55,1 70,0

Из данных, представленных в таблице 9, видна четкая тенденция повышения процента приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов в зависимости от возрастания числа желтых тел в их яичниках. Очевидно, формирование добавочных желтых тел в яичниках реципиентов сопровождалось повышенным синтезом ими прогестерона, под влиянием которого произошли пролиферативные процессы в эндометрии матки и создались оптимальные условия для приживления и дальнейшего развития эмбрионов.

Результаты этих исследований позволили нам провести специальные исследования по искусственному индуцированию процесса образования и роста добавочных желтых тел в яичниках реципиентов. Реализация этой проблемы осуществлялась путем индуцирования суперовуляции у реципиентов сывороточным гонадо-тропином в комплексе с 2-х кратным введением эстрофана с интервалом 8-9 дней между инъекциями. Индуцированием суперовуляции у реципиентов введением 27 мл сывороточного гонадотропина за два дня до повторного введения эстрофана мы добились образования и формирования нескольких желтых тел в яичниках, которые, безусловно, повысили синтез и продукцию этого стероидного гормона- прогестерона. В свою очередь, под воздействием прогестерона создались оптимальные условия в эндометрии матки реципиентов для гщцации и имплантации трансплантируемых нами эмбрионов. Результаты наших исследований показывают четкую тенденцию повышения уровня приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов в зависимости от искусственного индуцирования формировашм добавочных желтых тел в их яичниках. Так, у реципиентов с 2-мя желтыми телами яичников приживляемость зигот была выше на 16%, чем у реципиентов с 1-им желтым телом.

Таким образом, нам удалось добиться усиления инкреции прогестерона и его аналогов, способствовавших нцдации и имплантации пересаженной нами зиготы, формированию плаценты и поддержанию ее функции в этот критический период роста и развития эмбриона.

7. Приживляемость эмбрионов у овцематок-реципиентов после индуцированной половой охоты

Основная цель этого исследования заключалась в получении в необходимом нам количестве овцематок-реципиентов путем искусственного индуцирования у них эструса. Для реализации этой задачи за 13-14 дней до намечаемой пересадки эмбрионов реципиентам обрабатывали их про-стаглаццином Ф-2-альфа с интервалом 7-8 дней между инъекциями. Через 72 часа после второго введения эстрофана, обработанное поголовье реципиентов считалось проявившим половую охоту (0-день полового цикла) и через 5 дней трансплантировались им эмбрионы. В результате мы добились повышения уровня приживляемости эмбрионов на 11% у овцематок-реципиентов с индуцированной половой охотой, чем у реципиентов, проявивших эструс спонтанно. Индуцированный эстрофаном эструс у овцематок-реципиентов и доноров, а также физиологические, морфологические и биохимические процессы,

происходящие в организме этих животных, протекали более синхронно, чем у реципиентов, проявивших половую охоту спонтанно и более разрозненно по времени. Синхронность течения этих процессов в организме реципиентов и доноров объясняется, на наш взгляд, влиянием простагландина Ф-2-альфа.

Таким образом, приживляемость эмбрионов у реципиентов после индуцирования у них половой охоты находится на уровне приживляемости зигот у овцематок-реципиентов, проявивших эструс спонтанно. Вновь образовавшиеся желтые тела яичников овцематок-реципиентов после индуцирования у них половой охоты про-сгаглацдином Ф-2-альфа не различались морфологически от желтых тел, сформировавшихся у реципиентов после спонтанного эструса.

8. Приживляемость эмбрионов в зависимости от стадии их морфологического развития и дня астрального цикла реципиентов

Приживляемость эмбрионов при трансплантации зависит в основном от синхронности морфологического развития их с днем эстрального цикла реципиентов. Высокий уровень приживляемости зигот, по данным исследователей, достигается при точном совпадении дня эстрального цикла реципиента с возрастом морфологического развития эмбрионов. Результаты исследования по приживляемое™ эмбрионов у овцематок-реципиентов в зависимости от стадии их морфологического развития представлены в таблице 10.

Таблица 10

Приживляемость эмбрионов у реципиентов в зависимости от стадии их морфологического развития

№ п/п Показатели Стадия морфологического развития эмбрионов

Морулы Бластоцисты

М5 М4 Б5

ранние поздние ранние поздние

1. Пересажено эмб-

рионов 8 И 15 12 19 9

2. Получено ягнят 4 5 7 5 8 4

3. Приживляемость

эмбрионов 50,0 45,4 46,6 41,6 42,1 44,4

Примечание: М5 и М4 - морулы, оцененные по качеству развития на «отлично» и «хорошо», соответственно Б5 и Б4 - бластоцисты, оцененные на «отлично» и «хорошо»

Из данных, представленных в таблице 10 видно, что существует определенная зависимость между приживляемостью эмбрионов и стадией морфологического их развития. С повышением возраста морфологического развития зигот прослеживается четкая тенденция снижения уровня их приживляемости у реципиентов. Эмбрионы в стадии морулы имели более высокую приживляемосгь по сравнению с зиготами, находящимися в стадии бластоцисты. Очевидно, морулы, находящиеся на более ранней стадии морфологического развития,легче адаптируются и лучше развиваются в маточной среде 5-ти дневного астрального цикла реципиентов и нормально приживляются. Наибольший процент приживляемости отмечается у тех эмбрионов, возраст которых был синхронным с днем эстрального цикла реципиентов (табл.11). У эмбрионов, которые по своему морфологическому развитию были старше по отношению к внутриматочной среде реципиента, очевидно, замедлялся их рост и развитие и терялась способность приживляться в эндометрий матки реципиентов. А те эмбрионы, которые были слишком асинхронны с днем эстрального цикла реципиентов (48 ч), по-видимому, попадают в неблагоприятную для них маточную среду реципиентов и многие из них становятся аномальными, теряют способность к дальнейшему росту и развитию, разрушаются и соответственно уровень их приживляемости снижается.

Таблица 11

Приживляемосгь эмбрионов в зависимости от дня эстрального цикла реципиентов

Возраст эмбрионов от дня

№ Показатели эстрального цикла

п/п день в день старше на старше на

1 сутки 2 сутки

1. Количество реципиентов 48 6 9

2. Пересажено эмбрионов 48 6 9

3. Процент приживляемости 56,2 50,0 33,3

Таким образом, уровень приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов зависит от стадии морфологического их развития и от синхронности эстрального цикла реципиентов с фазой развития зигот.

9. Приживляемосгь эмбрионов от доноров, осемененных естественным и искусственным методами

Существующая технология трансплантации эмбрионов у овец предусматривает естественное осеменение доноров после индуцирования у них суперовуляции, в результате которой чрезмерной эксплуатации подвергаются бараны-производители с ценным генотипом, приводящей к импотенции или выпадению у них некоторых

безусловных половых рефлексов. Учитывая дефицит в баранах-производителях с ценным генотипом нами был использован метод искусственного осеменения овцематок-доноров свежеполученной спермой высокопродуктивных баран-производителей. В результате проведенных исследований установлено, что количество и качество извлеченных эмбрионов, а также уровень приживляемости зигот у реципиентов, полученных от доноров после искусственного метода осеменения их, оказался на 21,8% выше, чем у овцематок-реципиентов, которым пересаживали зиготы, вымытые от доноров после естественного их осеменения этим же бараном-производителем.

Таким образом, наши исследования показали, что оплодотворяемость яйцеклеток после индуцирования суперовуляции бывает лучшей при искусственном методе осеменения овцематок-доноров и приживляемость эмбрионов, полученных от них несколько выше, по сравнению с аналогичными показателями доноров, осемененных естественным путем. По-видимому, рост и развитие эмбрионов, полученных от овцематок-доноров, после искусственного осеменения протекали более синхронно по сравнению со скоростью дробления зигот от доноров, осемененных естественным путем.

10. Рост, развитие и продуктивность ярок-трансплантатов

Анализ возрастной динамики роста и развития ярочек-трансплантатов по сравнению с ягнятами, родившимися от искусственного осеменения, показал, что преимущество в живой массе оказалось у трансплантатов - 42,3 кг (табл.12).

Таблица 12

Динамика живой массы ярок-трансплантатов и ярок от искусственного осеменения (кг)

№ п/п Возраст ярок Группы ярок

ярок-трансплантаты (л = 58) ярки от искусственного осеменения (п = 75)

1. При рождении 4,1±0,07 3,9±0,05

2. 4 месяца 21,4±0,83 20,7±0,41

3. 8 месяцев 28,7±0,75 28,4±0,37

4. 12 месяцев 38,4±0,46 37,6±0,11

5. 16 месяцев 42,3±0,56 41.8±0,49

В 16-ти месячном возрасте постнатального онтогенеза ярки-трансплантаты в сравнении с матерями-донорами и -реципиентами достигали в живой массе соответственно 74,9-78,3% и 75,5-82,9% от живой массы взрослой особи. Интенсивность суточного прироста живой массы у ярок-трансплангатов и ярок, полученных в результате искусственного осеменения овец, была наиболее высокой в первые 4

месяца постнатального развития - в период подсоса (табл.13).

Таблица 13

Суточный прирост живой массы ярок (г)

№ п/п Возрастной период Ярки-трансплангаты (п = 58) Ярки от искусственного осеменения (п = 75)

1. 0-4 мес. 154±5,95 127±0,03

2. 4 - 8 мес. 77±3,60 81±1,85

3. 8 -12 мес. 61±2,96 66+1,41

4. 12-16 мес. 34±1,91 31±1,27

5. 0 - 16 мес. 79±0,97 7 6±0,66

При изучении качества шерсти ярочек-трансплантатов и ярок, полученных от искусственного осеменения овец, нами выявлено, что наибольшей длиной штапеля отличалось потомство, полученное от трансплантации, показатель которых в возрасте 12-ти и 16-ти месяцев составил - 9,3 и 12,3 см и превосходил длину штапеля у сверстниц, полученных от искусственного осеменения (табл.14).

Таблица 14

Длина штапеля подопытных ярок

Группы ярок

Показатель Возраст ярок ярки-трансплантаты ярки от искусствен.

(мес) (п = 58) осеменения (п = 75)

Длина штапе- 12 9,3±0,09 8,5±0,07

ля (см) 16 12,3±0,15 11,7±0,11

Оценка заводской ценности подопытных животных (качество и количество шерсти) показала, что у ярочек-трансплантатов данные показатели были выше, чем у ярочек, полученных в результате искусственного осеменения овец (табл. 15).

Результаты исследований показали, что ярки-трансплантаты в возрасте 16-ти месяцев постнатального развития превосходили сверстниц, полученных от искусственного осеменения овцематок, по настригу шерсти в оригинале и мьггом волокне (табл.15). Исследования показали, что значительно большее влияние на настриг шерсти оказывала длина штапеля, увеличение которой на 1 см повышало продуктивность шерсти по группе ярок-трансплантатов в среднем на 0,39 кг, а по группе ярок, полученных в результате искусственного осеменения овец, на 0,37 кг.

Таблица15

Настриг шерсти ярок в возрасте 12-ти месяцев

№ п/п Показатели Группы ярок

ярки-трансплантаты (п = 58) ярки от искусственного осеменения (п = 75)

1. Настриг в физическом

весе, (кг) 5,2 4,6

2. Настриг в чистом во-

локне, (кг) 2,68 2,35

3. Выход чистой шерсти,

(%) 51,5 51,0

4. Шерстный коэффици-

ент, (г) 70 63

Таким образом, трансплантация эмбрионов от овцематок-доноров, обладающих выдающейся продуктивностью, создает возможность интенсивного получения значительного количества аналогичного приплода, что позволяет более чем в 2 раза ускорять селекционный процесс по совершенствованию племенных и продуктивных качеств овец.

ВЫВОДЫ

1. Синтетический аналог простагландина Ф-2-альфа (эстрофан) является эффективным препаратом для синхронизации и стимуляции эструса и овуляторного процесса у овец. Он индуцирует эструс у овцематок, находящихся в лютеиновой фазе полового цикла (с 6-го по 15-ые дни эстрального цикла). Двукратная инъекция эстрофана (интервал 8-9 дней) индуцирует синхронизацию эструса у 85,2% овцематок в течение 96 часов после введения препарата.

2. Установлено оптимальное фиксированное время для фронтального искусственного осеменения овец (48 и 72 часа после повторной инъекции эстрофана).

3. Сывороточный гонадотропин вызывает у овцематок-доноров су-перовуляторную реакцию яичников значительной вариабельности, чем фолликуло-стимудирующий гормон.

4. Установлено, что рост и развитие эмбрионов овцематок-доноров зависит от дозы, введенного им сывороточного гонадотропина СЖК.

5. Суперовуляторная реакция яичников овцематок-доноров, обработанных фолликулостимулирующим гормоном, на 7, 8, 9, 10 и 11-ые дни их эстрального цикла характеризуется незначительными различиями.

6. Фолликулосгамулирующий гормон в комплексе с сывороточным гонадо-тропином индуцирует суперовушгторную реакцию яичников овцематок-доноров и

не оказывает отрицательного влияния на рост и развитие эмбрионов.

7. Сывороточный гонадотропин пролонгирует действие фолликулостимули-рующего гормона.

8. Разработан способ, пролонгирующий действие фолликулостимулирующе-го гормона, при суперовуляции у овец (зарегистрировано в ВНИИГПЭ № 97118484 от 17.11.97).

9. Приживляемость эмбрионов у овцематок-реципиентов повышается при введении им экзогенного прогестерона. С учетом этого разработан способ повышения приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов путем введения прогестерона (положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 97110374/13 /010604/ от 13.02.98 г).

10. Выявлено повышение уровня приживляемости эмбрионов у предварительно осемененных овцематок-реципиентов.

11. Установлена зависимость приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов от количества сформировавшихся в их яичниках желтых тел и на этой основе разработан способ, стимулирующий формирование добавочных желтых тел (зарегистрировано в ВНИИГПЭ № 97117779 от 23.12.97 г.).

12. Приживляемость эмбрионов у овцематок-реципиентов после индуцирования у них эструса соответствовала уровню имплантации зигот у реципиентов, проявивших эструс спонтанно, что позволяет синхронизировать половую охоту у реципиентов в необходимом количестве перед пересадкой им зародышей.

13. Повышение выхода эмбрионов на 16,5% от овцематок-доноров, осемененных искусственным методом, свидетельствует о возможности использования этого способа для осеменения доноров.

14. Ярки-трансплантаты обладают более выраженной энергией роста и развития и в 16-ти месячном возрасте они достигают (42,3 кг) свыше 70% живой массы овцематок-родителей. Наибольшей энергией роста обладают ярки в первые 4 месяца посгнатального развития.

15. Наследуемость селекционных признаков (длина штапеля, настриг шерсти и живая масса) у ярок-трансплантатов выражена сильнее (Ь2 = 0,42; 0,25; 0,72), чем у ярок, полученных от искусственного осеменения овец (Ь2 = 0,31; 0,18; 0,29). Высокий коэффициент наследуемости основных селекционных признаков (длина штапеля, настриг шерсти и живая масса) у потомства, полученного методом трансплантации, свидетельствует о целесообразности использования данного метода воспроизводства в овцеводстве, что позволит в 2 раза и более ускорить селекцию овец по их племенным и продуктивным качествам.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Селекционная работа с овцами бурятского типа забайкальской тонокорун-ной и другими породами Восточной Сибири должна проводиться по целевой для каждой породы программе. При этом особое внимание должно быть уделено на

дальнейшее развитие овцеводства, породное совершенствование, разведение их в чистоте, разработку и внедрение методов интенсификации воспроизводства.

2. Хозяйствам, сохранившим овец разных пород, разводимых в чистоте, следует придать статус генофондных и утвердить на них сертификаты и организовать селекционно-племенную работу по государственной программе.

3. Разработанные нами способы синхронизации эструса, фронтального искусственного осеменения овец в фиксированное время, пролонгации действия фолликуло-стимулирующего гормона, повышения приживляемости эмбрионов введением прогестерона и искусственным формированием добавочных желтых тел в яичниках реципиентов предлагаются для интенсификации воспроизводства овец с ценным генотипом.

4. Пересадка зигот в небеременный рог матки предварительно осемененным овцематкам-реципиентам рекомендуется для повышения приживляемости эмбрионов и получения двоен.

5. Материалы диссертации рекомендуются для интенсификации селекционно-племенной работы в овцеводстве, быстрого и качественного увеличения поголовья высокопродуктивных и исчезающих пород овец, чтения лекций и проведения практических занятий студентам, специалистам животноводства, написания учебников и руководств по биологии размножения, разведения и генетики сельскохозяйственных животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бадмажапов Б.Б., Муруев А.В., Мугдуев В.Ю. Приживляемость эмбрионов при трансплантации //Тезисы докл. к конф. «Пути увеличения продуктов животноводства в колхозах и совхозах области и повышения их качества» - Иркутск, 1990. -С.57-59.

2. Раднаев Ц.Ц., Муруев А.В., Мугдуев В.Ю. Сравнительная оценка эмбрионов, полученных от овец-доноров, осемененных естественным и искусственным путем //Тезисы докл. к конф. «Пути увеличения продуктов животноводства в колхозах и совхозах области и повышения их качества» - Иркутск, 1990. -С.59-60.

3. Нагаев Ю.М., Маркаков Н.Е., Муруев А.В. и др. «План племенной работы с овцами Бурятского типа забайкальской породы на 1990-2000 годы» //Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Бурятия, Бурятский НИИ сельского хозяйства СО ВАСХНИЛ, Производственное объединение «Бурятское» по племенной работе. -Улан-Удэ, 1990. -91 с.

4. Муруев А.В., Игнатьев P.P. Трансплантация эмбрионов биотехнологический метод ускоренного воспроизведения высокопродуктивных животных. Информационный листок Бурятского ЦНТИ, № 49-96,1 с.

5. Муруев A.B., Игнатьев P.P. Стимуляция и синхронизация половой охоты у овцематок-реципиентов для трансплантации эмбрионов. Информационный листок Бурятского ЦНТИ, № 50-96,2 с.

6. Муруев A.B., Игнатьев P.P. Суперовуляторная реакция яичников овцематок-доноров в зависимости от дозы введения гонадотропинов. Информационный листок Бурятского ЦНТИ, № 55-96, 2 с.

7. Муруев A.B., Игнатьев P.P. Трансплантация эмбрионов у овец. Информационный листок Бурятского ЦНТИ, № 56-96,2 с.

8. Муруев A.B. Приживляемость эмбрионов у овцематок-реципиентов после индуцирования половой охоты //Сб.науч.тр. Бурятского НИИ сельского хозяйства СО РАСХН, вып. VI. ч. II -1996, -С. 63-65.

9. Муруев A.B. Суперовуляторная реакция яичников доноров, обработанных фолликулостимулирующим гормоном, в разные дни их полового цикла //Сб.науч.тр. Бурятского НИИ сельского хозяйства СО РАСХН, вып. VI. ч.П -Улан-Удэ, -1996, -С. 65-68.

10. Муруев A.B. Влияние разных гонадотропинов на морфологические показатели эмбрионов, полученных при суперовуляции, в зависимости от дозы и кратности их введения //Сб.науч.тр. Бурятского НИИ сельского хозяйства СО РАСХН, вып. VI. ч.П -Улан-Удэ, -1996. с.68-74.

11. Муруев A.B. Коррегирующее влияние экзогенного прогестерона на приживляемость эмбрионов у овцематок-реципиентов //Сб.науч.тр. Бурятского НИИ сельского хозяйства СО РАСХН, вып. VI. ч.П -Улан-Удэ, -1996. -С.74-78.

12. Муруев A.B. Некоторые методы повышения приживляемости эмбрионов у овцематок-реципиентов //Сб.науч.тр. Бурятского НИИ сельского хозяйства СО РАСХН, вып. VI. ч.П -Улан-Удэ, -1996. -С.78-82.

13. Николаев Б.И., Балдуев А.Ц., Муруев A.B. и др. Система ведения агропромышленного производства Республики Бурятия на 1996-2000 годы. -Улан-Удэ. -1996. 248 с.

14. Муруев A.B. Перспективы развития биотехнологии в животноводстве и ветеринарии //Сб.науч.тр. Дальневосточного государственного аграрного университета, -1996. -С.91-93.

15. Муруев A.B. Суперовуляторная реакция яичников овцематок-доноров и их биологическая полноценность эмбрионов в индуцированную половую охоту //Сб.науч.тр. Дальневосточного государственного аграрного университета, -1996. -С.93-97.

16. Муруев A.B., Васильев К.А., Игнатьев Р.Р. Морфологическая оценка эмбрионов овец //Сб.науч.тр. Дальневосточного государственного аграрного университета, -1996. -С.97-100.

17. Муруев А.В Использование биотехнологических методов в овцеводстве. Информационный листок Бурятского ЦНТИ, №14-97,2 с.

18. Муруев A.B. Синхронизация половых циклов овец. Информационный листок Бурятского ЦНТИ, № 16-97, 1 с.

19. МуруевА.В. Способ фронтального искусственного осеменения овец в фиксированное время. Информационный листок Бурятского ЦНТИ № 18-97,1 с.

20. Муруев A.B. Способ индуцирования полового возбуждения у овец. Информационный листок Бурятского ЦНТИ, Кг 19-97,2 с.

21. Муруев A.B. Способ формирования нескольких желтых тел у реципиентов для повышения приживляемосги эмбрионов у них. Информационный листок Бурятского ЦНТИ, № 22-97,2 с.

22. Муруев A.B. Динамика роста и развития ярочек-трансплантатов. Информационный листок Бурятского ЦНТИ, № 23-97,2 с.

23. Муруев A.B., Игнатьев P.P. Реакция яичников овцематок-доноров на инъекцию ФСГ и СЖК //Сб.науч.тр. Бурятской государственной сельскохозяйственной академии. -1997.-С.71-72

24. Муруев A.B. Биологическая полноценность эмбрионов овцематок-доноров, обработанных гонадотропином СЖК //Сб.науч.тр. Бурятской государственной сельскохозяйственной академии. -1997.-С.72-74.

25. Муруев A.B., Игнатьев P.P. Трансплантация эмбрионов ускоренный метод воспроизводства высокопродуктивных животных //Сб.науч.тр. Бурятской государсг венной сельскохозяйственной академии. -1997.-С.74-76.

26. Муруев A.B. Некоторые способы повышения приживляемосги эмбрионов у овцематок-реципиентов //Сб.науч.тр. Бурятской государственной сельскохозяйственной академии. -1997.С.76-79.

27. Муруев A.B., Нагаев Ю.М., Доцдитов У.Ж. Постнатальное развитие ярок-трансплантатов и наследование селекционных признаков //Сб.науч.тр. Бурятской государственной сельскохозяйственной академии,- 1997. -С.79-81.

28. Муруев A.B. Коррекция приживляемосги эмбрионов у овец путем экзогенной инъекции прогестерона //Сб.науч.тр. Дальневосточного государственного аграрного университета, -1997. -С.97-105.

29. Муруев A.B., Васильев К.А., Игнатьев P.P. Зависимость приживляемосги зигот при пересадке от количества желтых тел в яичниках реципиентов //Сб.науч.тр. Дальневосточного государственного аграрного университета, -1997. -С.105-109.

30. Муруев A.B. Способ повышения приживляемосги эмбрионов у овцематок-реципиентов введением прогестерона. Положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 97110374/13 (010604) от 13.02.98 г.

31. Муруев A.B. Приживляемость эмбрионов у предварительно осемененных овцематок-реципиентов. Ж. Сибирский вестник сельскохозяйственных наук (в печати).