Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Разработка тест-системы на основе маркированного штамма "ВК" для диагностики болезни Ауески

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Разработка тест-системы на основе маркированного штамма "ВК" для диагностики болезни Ауески"

На правах рукописи

МИФТАХОВ НИЯЗ РАФИСОВИЧ

РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ МАРКИРОВАННОГО ШТАММА «ВК» ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БОЛЕЗНИ АУЕСКИ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань-2010

003493278

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» (ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ) г.Казань.

Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук,

доцент

Чернов Альберт Николаевич

Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор

Гильмутдинов Рустам Якубович

доктор ветеринарных наук, доцент Плотпикова Эдия Миначетдиновна

Ведущая организация: ФГУ «Федеральный центр охраны

здоровья животных» г.Владимир

Защита состоится " 30 " марта 2010 года в Ючасов на заседании диссертационного совета Д - 220.012.01 при Федеральном центре токсикологической и радиационной безопасности животных (420075, г.Казань, Научный городок-2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г.Казань).

Электронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещен на сайте организации: www.vnivi.ru

Автореферат разослан "25"февраля 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, ^

старший научный сотрудник с^0361^7^ В.И.Степанов

1.0БЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность проблемы. Болезнь Ауески (БА) - контагиозное остро протекающее в виде эпизоотии и спорадических случаев заболевание, наносящее значительный экономический ущерб животноводству, особенно в странах с интенсивно развитым свиноводством и пушным звероводством (Gustafson Р.,1970; Wittman G. et.al.,1989; Байбиков Т.З., 2008; Иванов A.B., 2008). Летальный исход болезйи наблюдается у поросят, а у взрослых свиней сопровождается установлением длительного или пожизненного носительства вируса. В определенных условиях латентный герпесвирус способен реактивироваться и животное вновь становится источником инфекции (Wittman G. et.al., 1989; Сергеев В.А., 1993; Юсупов Р.Х., 2002). У свиноматок наблюдаются мертворождение, мумификация и эмбриональная смертность, бесплодие (Уласов В.И. и др. 2001).

Болезнь Ауески трудно искоренить с помощью прививок традиционными вакцинными препаратами, так как не предотвращается инфицирование поголовья и распространение вируса среди свиней (Моренков О.С., 2000).

Международный опыт показывает, что искоренение заболевания возможно при применений стратегии борьбы, включающее выявление инфицированных животных (в том числе латентно инфицированных) и их выбраковку, а также реализацию комплекса санитарно-эпидемиологических и других мер. Выявление инфицированных животных проводится с использованием маркированных вакцинных штаммов вируса Б А и дискриминирующих тестов, позволяющих дифференцировать вакцинальный и инфекционный иммунитет (Моренков О.С., 2002; Komaromi М., 2005). При этом дискриминирующие тесты основаны на использовании гликопротеинов или моноклональных антител, что определяет высокую себестоимость соответствующих исследований. В связи с вышеизложенным дальнейшее усовершенствование тест-системы для дифференциации поствакцинальных и постинфекционных антител остается актуальной задачей.

1.2 Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась разработка тест-системы на основе РНГА с использованием антигена делеционного по гликопротеину gE вируса болезни Ауески, оценка и дифференциация постинфекционных и поствакцинальных антител в сыворотках крови вакцинированных свиней. ; 1

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Адаптировать маркированный (делеционный по гликопротеину gE) вирус болезни Ауески к культуре клеток.

2. Отработать условия изготовления эритроцитарного реагента ¡на основе использования делеционного по гликопротеину gE вируса болезни \ Ауески.

3. Получить различные варианты сывороток крови животньрс» ч , иммунизированных: а) маркированным антигеном- вируса' БА; б) вирус-\

вакциной ВГНКИ против БЛ; в) радиоинактивированным (эпизоотическим) антигеном вируса Б А (ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ»),

4. Провести сравнительную оценку 3-х вариантов сывороток крови иммунизированных животных и 2-х вариантов эритроцитарных реагентов на основе вакцин «ВК» и «ВГНКИ» для выявления постинфекционных и поствакцинальных антител к вирусу БА.

5. Разработать инструкцию по применению набора препаратов для дифференциальной диагностики в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК».

1.3 Научная новизна работы. Впервые создан эритроцитарный диагностикум на основе делеционного по гликолротеину ¿Б вируса болезни Ауески, обеспечивающий дифференцированное выявление поствакцинальных и постинфекционных антител при указанной инфекции.

Впервые адаптирован вакцинный штамм «ВК» вируса болезни Ауески к культуре клеток невриномы Гассерова узла крысы (НГУК -1). Разработанный метод культивирования вакцинного штамма «ВК» вируса болезни Ауески на указанной клеточной системе сокращает время репродукции и обеспечивает увеличение его титра в 2-3 раза по сравнению с другими изученными культурами клеток.

1.4 Практическая ценность работы. На основании проведенных исследований предложен для внедрения в ветеринарную практику новый диагностикум для дифференциации поствакцинальных и постинфекционных антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК». По результатам исследований разработаны и утверждены:

1. Инструкция по применению «Набора препаратов для определения в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески», утв. Россельхознадзором РФ 25.04.2008 г.

2. Инструкция по применению «Набора препаратов для дифференциальной диагностики в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК», утв. директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» профессором А.В.Ивановым 22.10.2009 г.

1.5 Основные положения диссертации выносимые на защиту.

- адаптация вакцинного штамма «ВК» вируса болезни Ауески делеционного по гликопротеину ф к культуре клеток.

- технология изготовления диагностического набора препаратов для РНГА на основе делеционного по гликопротеину £>Е вируса болезни Ауески.

-экспериментальное подтверждение дифференциации

поствакцинальных и постинфекционных антител при болезни Ауески, с помощью разработанного диагностического набора.

1.6 Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ -

ВНИВИ» по итогам НИР за 2006 - 2009 гг., на научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦГРБ - ВНИВИ» (г. Казань, 2007-2008 г.). Результаты основных этапов работы подтверждены внутрилабораторными комиссионными испытаниями с положительной оценкой.

1.7 Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации изложены в. 5 научных работах, которые отражают содержание диссертации, в том числе 1 статья в рекомендованных ВАК РФ издании.

1.8 Объем и структура диссертации, Диссертация изложена на 117 страницах компьютерного включает общую характеристику, обзор литературы, собственные исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, приложения. Работа иллюстрирована 14 таблицами .Список литературы включает 262 библиографических источника в том числе 104 -зарубежных авторов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследований. Работа выполнена в 2006-2009 гг в лаборатории иммунологии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань) и в ряде хозяйств Республики Татарстан по заданию З.1.- «Изучить новые серологические методы (ИФА, РНГА, РИА, РВН и др.) с целью определения напряженности поствакцинального иммунитета у животных при болезни Ауески и чуме свиней». (№ гос. регистрации 01200202602).

В исследованиях использовали следующие штаммы вируса болезни Ауески: вакцинный авирулентный штамм ВГНКИ (вирусвакцина ВГНКИ сухая культуральная против болезни Ауески производства ФГУП "Покровский завод биопрепаратов"); маркированный (делеционный по гликопротеину §Е) штамм "ВК" вируса болезни Ауески, полученный из ВНИИЗЖ (г. Владимир); вирулентный штамм "Производственный"; радиоинактивированный вирус, штамм "Производственный".

С целью накопления различных штаммов вируса и адаптации маркированного штамма "ВК" использовали перевиваемые культуры клеток почек эмбрионов свиней (СПЭВ), почек золотистого хомячка (ВНК-21) и невриномы Гассерова узла крысы (НГУК-1), а так же первичнотрипсинизированные клетки куриных фибробластов (ККФ). При выращивании вируса болезни Ауески, монослой культур клеток в стационарных условиях заражали указанными штаммами вируса цБА в разведении 1:30 к исходному объему культуральной среды в титре. Инфекционную активность вируса оценивали по методу Рида и Менча (1938 г.) и выражали в культуральных инфекционных дозах ТЦД5о/см3.

Очистку и концентрирование вируса болезни Ауески, штаммы "ВК" и "ВГНКИ", выращенных на культуре клеток НГУК-1, проводили согласно схеме очистки герпесвирусов.

Для экспериментов использовали лабораторных и сельскохозяйственных животных: 60 белых крыс, живой массой 180-200 г, 20 кроликов, массой 1,5-2 кг; б баранов породы "Прекос" массой тела 75 - 90 кг; 160 подсвинков массой тела 20-100 кг.

В работе использовали следующие реактивы: формальдегид, хлорный хром, таниновую кислоту, сахарозу, фетальную сыворотку плодов коров, антибиотики, глутамин, полиэтиленгликоль, среду Игла МЭМ и др.

Исследования проводили с применением следующей аппаратуры, приборов,-и оборудования: вакуум - сушильная • установка "Edwards", микроскоп ; биологический МБИ-3, микротитратор системы "Takachi", спектрофотометр . "Titertek multiscan", термостаты, водяную баню, центрифуги; (разные), пипетки 8-12 канальные автоматические "Flow laboratories".

Реакцию вируснейтрализадии (РВН) ставили на культуре клеток НГУК-1 при постоянной дозе вируса болезни Ауески, равной 100 ТЦЦ50/ см3 по общепринятой методике.

Реакцию непрямой гемагглютинадии (РИГА) ставили согласно "Инструкции по применению набора препаратов для определения в РИГА специфических антител у свиней при болезни Ауески", утвержденных МСХ РФ 25 апреля 2008 г.

Исследованию подвергнуто 500 проб сывороток крови ■ свиней различного пола и возраста, иммунизированных против болезни Ауески: в том числе 180 проб получены от свиней вакцинированных аттенуированной вирус-вакциной ВГНКИ в условиях СХП «Синтез-Колос» и ОАО П/З «Бирюлинский» Высокогорского района РТ; 320 проб сывороток крови свиней, иммунизированных нами вакциной из маркированного штамма «ВК» против болезни Ауески, в ОАО «Вамин» Лаишевского района РТ, кроме того исследовали 168 проб сывороток крови лабораторных животных, иммунизированных вакциной ВГНКИ и инактивированной вакцины против БА разработанной в лаборатории иммунологии ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ», а также вакциной из маркированного штамма «ВК», для изучения динамики накопления специфических антител.

Статистическая обработка результатов исследований проводилась с использованием пакета прикладных программ.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Разработка технологии изготовления антигена вируса болезни Ауески, делеционного по гликопротеину gE. Важнейшим условием изготовления качественных диагностикумов при вирусных болезнях, в том числе при БА является получение вируса с высоким титром инфекционности. Для сравнительной оценки чуствительности культур клеток к вирусу болезни Ауески, делеционного по гликопротеину gE, использовали следующие культуры клеток: перевиваемые культуры клеток ВНК-21 , СПЭВ,НГУК-1, а

также первичнотрилсшшзированную культуру ККФ. При этом определяли цитопатогенное действие (ЦПД), а также титр вируса в культуральной жидкости в динамике инфекционного процесса.

Оценку эффективности цитопатического эффекта (ЦПД) проводили по четырех крестовой системе, где один плюс означает ЦПД с хорошо различимыми очагами, примерно на 25% всего монослоя клеток, два плюса около 50%, а четыре плюса соответствует полному изменению всех клеток.При этом дополнительным показателем наличия вируса болезни Ауески в исследуемом материале являлось наличие гигантских многоядерных клеток - симпластов, образующихся в результате нарушения процесса деления клеток культур или растворения оболочек клеток ферментом лецитиназой вируса. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Результаты изучения репродукции вируса болезни Ауески _ штаммов «ВК» и «ВГНКИ» на культурах клеток_

Культура клеток Срок исследования,ч Штаммы ВБА

ВК ВГНКИ

ЦОД ЦОД

СПЭВ 12 — —

24 — +—

48 —

72 — Ч-1 н

НГУК-1 12 н--- +—

24 ++++ 1111 ГГ

48 -н-н- ++++

72 ++++ -н-н-

ВНК-21 12 — . —'

24 +— +—

48 ++»

72 ++++ ++++'

ККФ 12 — —

24 ■ — —-

...... 48

72 ++++ .1111 Т 1 Г.{. . . .,

Примечание: + - показатель ЦПД - - ЦПД отсутствует Из данных таблицы 1 видно, что вакцинный штамм «ВК» вируса болезни Ауески способен размножаться в культуре клеток НГУК-1. С характерным ЦПД (++++) креста наблюдали через 18-24 ч после заражения культуры данным штаммом. При этом ЦПД вируса через 24 ч после заражения культуры клеток ВНК-21 отмечено незначительно что

соответствует лишь одному плюсу, а на культурах клеток СПЭВ и ККФ к этому сроку ЦПД вовсе не наблюдалось.

В последующих экспериментах были проведены многократные пассажи для оценки чувствительности различных культур клеток к вирусу болезни Ауески. Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Сравнительная оценка чувствительности различных культур клеток к возбудителю болезни Ауески в динамике инфекционного процесса

№ пассажа Титр вируса в культурах клеток, ТЦД 50/см3, (М±т)

СПЭВ, через 72 ч НГУК-1, через 24 ч ВНК-21, через 72 ч ККФ, через 72 ч

ВК ВПЖИ ВК ВГНКИ ВК ВГНКИ ВК ВПЖИ

1 - 5,0±0,2 5,25±0,3 5,0±0,3 2,25±0,2 5,0±0,2 2,25±0,2 5,0±0,2

2 - 5,0±0,2 5,25±0,3 5,25±0,3 3,5±ОД 5,0±0,2 3,5±0,2 5 ,(>±0.2

3 - 5,25±0,3 5,5±0,5 5,5±0,3 3,5±0,3 5Д5±0,2 3,5±0,3 5,25±0,2

5 - 6,25±0,3 6,0±0,5 6,5±0,4 4,6±0,2 J 6,0±0,5 4,7±0,2 5,75±0,5

7 - б,75±0,4 6,25±0,5 7,0±0,5 5,75±0,2 6,5±0,4 4,75±0Д 6,0±0,4

Примечание: р<0,05

Из данныхТаблицы 2 следует значительная чувствительность клеток НГУК-1 к вирусу БА по сравнению с клетками СПЭВ, ВНК-21,ККФ. Так, вирус в культуре клеток НГУК-1 накапливался к 18-24 ч после заражения в титре 6,25 ^ ТЦДда см3, а в культуре клеток ВНК-21, ККФ и СПЭВ вирус достигал титра 4,50 - 5,25 ^ ТЦЦ50/ см3 лишь к 72 ч инкубации соответственно. Репродукция и накопление вируса в первые часы после инфицирования позволяют сделать заключение о высокой чувствительности культуры клеток НГУК-1 по сравнению с другими культурами клеток таких как СПЭВ, ВНК-21 и ККФ к нейротропному герпесвирусу болезни Ауески.Установлена перспективность културы клеток НГУК-1 для первичного выделения вируса из экспертизных проб за 18-24 ч против 72 ч на исследованных культурах клетках, а также репродукции его с высоким титром вирусной биомассы (6,25 ^ ТЦД^), что обеспечивает достаточое колличество, необходимое в производстве средств диагностики.

Таким образом в результате исследований, представленные в таблице 2, показано, что из всех использованных культур клеток вирус болезни Ауески, штамм "ВК" "маркированный" по гликопротеину удалось адаптировать на культуре клеток НГУК-1 и получить наибольший титр, по сравнению с культурами ВНК-21 и ККФ, тогда как на культуре клеток СПЭВ адаптировать вирус не удалось.

Для получения высокоспецифичных диагностических препаратов необходимы антигены с высокой степенью очистки. Наибольшую сложность представляет очистка вирусов с липидной оболочкой, так как вирус болезни Ауески имеет липидную оболочку клеточного происхождения, и в этой связи

большинство химических веществ применяемых для очистки безоболочеч-ных вирусов, непригодны.

Очистку культурального вируса болезни Ауески штаммы «ВК» и «ВГНКИ» от клеточного детрита осуществляли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20-30 минут. При этом активность вируса сохранялась на уровне исходного.

Лиофилизацию вакцинных штаммов вируса болезни Ауески осуществляли на установке "Edwards" (Англия) по общепринятой методике в три этапа: предварительное замораживание материала, возгонка кристаллов льда из замороженного материала в условиях глубокого вакуума (сублимация), тепловая сушка до необходимой влажности.

Инфекционную активность вакцинного вирусосодержащего материала после очистки и лиофилизации определяли на культуре клеток НГУК-1 методом титрования. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Титр вируса болезни Ауески штаммов «ВГНКИ» и «ВК», выращенных на культуре клеток НГУК-1 до и после лиофилизации.

Штамм вируса Титр вируса в lg ТЦЦ 50/ см3

до лиофилизации после лиофилизации

ВК 6,25 6,0

ВГНКИ 7,0 . 6,25

Как видно из таблицы 3, инфекционная активность вируса после лиофилизации снижалась незначительно, в среднем на 0,5 ^ ТЦЦ ¡0/ см3. В дальнейшем для изготовления диагностического набора использовали лиофилизированный вирус.

3.2 Разработка технологии изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для РНГА на основе делеционного по гликопротенну |>Е штамма "ВК" вируса болезни Ауески.

Одним из наиболее чувствительных и экспрессных серологических методов обнаружения и титрования специфических антител при многих инфекционных заболеваниях сельскохозяйственных животных и человека является реакция непрямой гемагглюгинации (РНГА).

Получение эритроцитарного реагента

Процесс изготовления эритроцитарного диагностикума для РНГА для определения антител в сыворотке крови животных включает в себя 3 этапа:

1 этап. Подготовка формалинизированных эритроцитов:

- получение эритроцитов барана;

- формалинизация эритроцитов;

- контроль формалинизированных эритроцитов.

2 этап. Танизация формалинизированных эритроцитов:

- приготовление рабочего раствора танина;

- обработка эритроцитов т?чигто"-

контроль тонизированных эритроцитов. . 3 этап. Сенсибилизация антигеном формалинизированных танизироваиных эритроцитов.

м . Для приготовления антигенного эритроцитарного диагностикума исходный материалом служили эритроциты барана.

При изготовлении антигенных эритроцитариых диагностикумов сенсибилизацию эритроцитов проводили вирусом болезни Ауески штаммы "ВК" и"ВГНКИ" при температуре среды в широком диапазоне - от 20 до 56° С; при концентрации антигенного белка 0,25; 0,5; 0,75; 1,0; 1,25 и 1,5 мг на 1 мл эритроцитарной суспензии и при длительности экспозиции начиная с 30 до 90 минут. Исследование активности изготовленных антигенных эритроцитариых диагностикумов определяли по выявлению антител в РИГА со специфической иммунной сывороткой крови кроликов, иммунизированных двукратно вирусвакциной ВГНКИ против болезни Ауески производства ФГУП "Покровского завода биопрепаратов". Результаты исследований представлены в таблице 4

Таблица 4 - Активность эртроцигарных препаратов, приготовленных при

различных условиях сенсибилизации эритроцитов

Концешр ация антигена (мг/мл) Время, мин. Тигры анпггел в РИГА при различных температурных режимах сенсибилизации эритроцитов

20 "С 37 иС 56°С

ВК ВГНКИ ВК ВГНКИ ВК ВГНКИ

1 2 3 4 5 6 7 8

0,25 30 - - - - - -

0,5 - - - - - -

0,75 - ■ - 1:16 1:16 1:8 1:8

1,0 1:4 1:4 1:32 1:32 1:16 1:16

1,25 "1:8 1:8 1:16 1:16 1:8 1:8

1,5 " с/а с/а с/а с/а с/а с/а

0,25 45 - - - - - -

0.5 _ _ _ 1:8 1:8

0,75 1:4 1:4 1:8 1:8 1:16 1:16

1.0 1:8 1:8 1:64 1:64 1:32 1:32

1,25 1:8 1:8 , 1:32 . .1:32 1:8 1:8

1,5 1:4 1:4 с/а с/а с/а с/а

0,25 60 - - 1:4 1:4 1:8 1:8

0,5 1:4 1:4 1:8 1:8 1:8 1:8

0.75 1:8 1:8 1:32 ■ 1:32 1:64 1:64

1,0 1:64 1:64 1:256 1:256 1:256 1:256

1,25 1:32 1:32 1:128 1:128 1:64 1:64

1,5 1:16 1:16 с/а с/а с/а с/а

_L_

0,25

0,75

~üö~

1,25

~T5~

Продолжение таблицы 4

90

1:8 1:16 1:4 с/а

1:8 1:16 1:4 с/а

1:16 1:32 1:16 с/а

1:16 il: 32 1:16 с/а

1:8

178"

с/а

8

1:8

1:8

Примечание «-» - антитела не выявлялись;

с/а-самоагглютинация.

Из данных таблицы 4 видно, что нарастание температуры среды ускоряет процесс сенсибилизации эритроцитов и приводит к повышению активности препаратов, что подтверждается нарастанием титра антител, улавливаемых в РИГА. Однако увеличение температуры выше 37 °С до 56 °С вызвало снижение активности эритроцитариых антигенных препаратов. В то же время увеличение времени экспозиции и концентрации белка в реагирующей смеси оказывало благоприятное действие на процесс связывания' эритроцитов с белком вируса болезни Ауески, о чем свидетельствует нарастание титра антител, выявляемых в РИГА с помощью эритроцитариых диагностикумов. Так, наиболее оптимальным оказалось время связывания в течение 60 мин. при концентрации белка 1,0 мг/мл 3%-ной взвеси формалинизированных тцг визированных эритроцитов.

■ ■ ■■■(■

3.3 Определение активности и специфичности антигенных эритроцитариых диагностикумов, изготовленных на основе антигенов из различных штаммов вируса болезни Ауески.

Определение активности и специфичности изготовленных антигенных эритроцитариых диагностикумов проводили в РИГА с использованием сывороток крови крыс и кроликов, иммунизированных против болезни Ауески различными антигенами.

Получение специфических сывороток крови кроликов и крыс осуществляли путем иммунизации их различными вакцинами против болезни Ауески. Для этого животных каждого вида по принципу аналогов разделили на 4 группы по 10 голов в каждой.

- I группа животных получала вирусвакцину ВГНКИ против болезни Ауески производства ФГУП "Покровского завода биопрепаратов";

П группа животных получала эпизоотический радиоинактивированный вирус БА, штамм " Производственный";

III группа животных получала маркированный (делеционный по гликопротеину gE) штамм "ВК" вируса БА;

IV группа - интактные животные (контроль).

Лиофилизированный вирусный антиген ресуспендировали в стерильном физиологическом растворе и вводили подопытным животным (крысам и кроликам) по 0,5 см3 подкожно в область спины,иммунизирующая доза составляла 30 мг/кг.

Иммунизацию животных проводили двукратно с интервалом 14 дней.

В качестве отрицательного контроля использовали нормальную сыворотку крови свиней, не содержащую антитела к вирусу болезни Ауески.

Учет результатов проводили при полном оседании эритроцитов в контроле с отрицательной и гетерологичными сыворотками крови в виде компактной точки на дне лунки.

Результаты исследований эритроцитарных диагностикумов в РНГА представлены в таблице 5.

Таблица 5 Испытание специфической активности эритроцитарных диагностикумов, изготовленных на основе различных штаммов вируса болезни Ауески _. ._

••■ Группа животные Титр антител в РНГА

ВК ВГНКИ

I -ВГНКИ „ . ,, крысы 1 32 1:32

кролики 1 32 1:32

II радиоинакти-вированный, д вирус . БА, штамм ... "Производственный"; крысы 1 32 1:32

кролики 1:32 1:32

Ш-маркированный (делеционный по гликопротеину gE) штамм ¡. "ВК" вируса БА; крысы 1:32 1:4

кролики 1:32 1:4

IV - интактные животные крысы - -

кролики - -

Разбавитель без сыворотки - -

Из данных таблицы 5 видно, что эритроцитарный диагностикум, изготовленный на основе вируса болезни Ауески из штамма "ВГНКИ" («Набор препаратов для диагностики в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески», утвержденный Россельхознадзором 12 мая 2008 г,), выявлял наличие антител, в сыворотках Крови животных, иммунизированных вирусвакциной ВГНКИ против болезни Ауески производства ФГУП "Покровского завода биопрепаратов" и радиоинактивированным вирусом БА, штамм "Производственный", в титрах 1:32 и выше, тогда как титр антител в сыворотках крови,животных, иммунизированных маркированным (делеционным по гликопротеину §Е) штаммом "ВК" вируса БА не превышал 1:4.

Одновременно с этим эритроцитарный диагностикум, изготовленный нами на основе маркированного (делеционного по гликопротеину §Е) штамма "ВК" вируса Б А выявлял наличие антител в сыворотках крови всех вакцинированных животных в титрах 1:32, при отсутствии агглютинации с сывороткой интахгаых животных.

Для комиссионных испытаний с целью определения чувствительности и специфичности изготовленного нами эритроцитарного диагностикума на основе маркированного (делеционного по гликопротеину £Е) штамма "ВК" вируса БА были исследованы в РНГА:

- сыворотки крови крыс, иммунизированных двукратно с интервалом 21 день подкожно с использованием маркированной вакцины против ВБА, делеционной по (ВНИИЗЖ, г.Владимир)

-сыворотки крови крыс, неиммунных к ВБА;

- сыворотки крови, специфические к вирусу КЧС и инфекционного ринотрахеита (гетеролошчные контроля). .

Комиссионные испытания проведены на базе лаборатории иммунологии 19 февраля 2008 года. Результаты представлены в таблице 6.

Таблица 6 - Активность и специфичность эритроцитарного диагностикума, изготовленного на основе делеционного вируса БА _ ._

Исследуемые пробы - РНГА

«Набор препаратов...», утвержденных МСХ РФ ЭД на основе делец, вируса, штамма «ВК»

1а отр 1:8-16 .,,.

2а отр 1:8-16

26 отр 1:8-16

2в отр 1:8

2г отр . . 1:8

Контрольная неиммунная сыворотка №1 отр. отр.

Контрольная неиммунная сыворотка №2 отр. отр.

Гетерол. контроль (КЧС) отр. отр.

Из приведенных данных комиссионной апробации чувствительности и специфичности эршроцитарного диагностикума, изготовленного на основе маркированного штамма ВБА, делеционного по гликопротеину ¿Е видно, что РНГА позволяет проводить оценку эффективности противовирусной вакцинации при болезни Ауески с использованием маркированной вакцины

против ВБА, делеционной по gE (ВНИИЗЖ, Г.Владимир) и не реагирует с неиммунными и гетерологичными контролями.

Сыворотки крови крыс, вакцинированных gE-негативной вакциной, давали отрицательные результаты в РНГА с использованием эритроцитарного диагностикума на основе штамма «ВШКИ» («Набора препаратов ...», утвержденного Россельхознадзором 12 мая 2008 г), но были положительными в тестах с использованием эритроцитарных диагностикумов на основе маркерного антигена. Эти результаты свидетельствуют о возможности выявления антител, направленных против gE, что позволяет дифференцировать поствакцинальный и постинфекционный иммунитет.

3.4 Испытание активности и специфичности эритроцитарных диагностикумов на свиньях в условиях хозяйства, с целью дифференциации поствакцинальных антител.

Для определения активности и специфичности эритроцитарных диагностикумов на свиньях использовали 120 поросят 2-6 месячного возраста, полученных из благополучных по инфекционным болезням хозяйств. Поросята были от свиноматок, вакцинированных вирусвакциной ВГНКИ против болезни Ауески.

Перед проведением иммунизации маркированной вакциной против ВБА, делеционной по gE (ВНИИЗЖ, г.Владимир) у поросят брали кровь для исследования сывороток крови на наличие антител к вирусу болезни Ауески.

Все пробы показали отрицательный результат на наличие антител в сыворотке крови, т.е. титр антител не превышал 1:4.

Далее животных по принципу аналогов разделили на 3 группы по 40 голов в каждой.

- I группа получала вирусвакцину ВГНКИ против болезни Ауески производства ФГУП "Покровского завода биопрепаратов";

- II группа получала вирусвакцину против болезни Ауески свиней и овец сухую культуральную из маркированного штамма «ВК»;

- III группа - интактные животные (контроль).

хема иммунизации включала двукратную иммунизацию с интервалом в 14 дней. Клиническое наблюдение и определение антител в крови вели в течение от 3 до 14 дней после I иммунизации и от 3 до 180 дней после II иммунизации животных. Животных 1 -й и 2-й группы иммунизировали вирусвакцинами согласно наставлениям по их применению внутримышечно. Результаты исследования сывороток крови в РНГА с использованием различных диагностических наборов представлены в таблице 7.

Таблица 7. - Титры антител в сыворотке крови иммунизированных против __болезни Ауески поросят в РИГА_ ' "''

Вакцинированные животные Дни исследований Титры антител в, (М±ш)

РНГА с использование «Набора препаратов...» РНГА на основе маркированного шт. «ВК»

Поросята I группы До опыта - -

I иммунизация

3 - -

7 3,7±1,1 3,7±1,1 .

14 5,1 ±0,7 5,I±O,7

П иммунизация V-.

3 7,6±0,9 7,б±0,9

7 13,3±1,3 13,3±1,3

14 15,4±1,3 15,4±1,3

21 16,1±1,4 .' , 16,1±1,4

30 16,3±2,3 16,3±2,3

60 14,2±1,9 ..... 14,2±1,9

90 10,2±1,8 10,2±1,8

180 8,4±1,1 8,4±1,1

Поросята II группы До опыта -

Гиммуни-зация

3

7 , - 3,6±0,9 л;

14 ■ '•;■...!' ' 3,9±0,9

II иммунизация

3 ....-. • 8,2±1,9 -у-

7 v.- ■»■ 9,6±2,1

14 . •'-■ • О'i 10,6±2,2 -

21 14,2±1,9

30 ' 14,4±1,9 -

60 - 10,8±1Д

90 19,4±1,2

180 . л..,- - - . ... . . 1 7,1±0,9

Поросята III группы " :i оч ' - ...

Примечание: р<Р, 05

Результаты испытаний показали, что" титры антител в РНГА у поросят, иммунизированных вирусвакциной ВГНКИ против болезни Ауески,

находились в пределах 1:8 и выше при использовании как «Набора препаратов ...», утвержденного Россельхознадзором 12 мая 2008 г., так и диагностического набору, , изготовленного на основе маркированного (делеционного по гликопротеину ёЕ) штамма "ВК" вируса БА. , Научно обосновано, что поголовье свиней может быть защищено от возникновения болезни Ауески при наличии в стаде 84% и более вакцинированных животных, положительно реагирующих в РНГА в титре 1:8 и выше.

Однако сыворотки крови поросят, иммунизированных ^-негативной вакциной, давали отрицательные результаты в РНГА с использованием «Набора препаратов ...», утвержденного Россельхознадзором 12 мая 2008 г., но давали титры 1:8 и выше в тестах с использованием эритроцитарного диагностикума на основе маркерного антигена, что свидетельствует о возможности выявления антител, направленных против ¿Б, что позволяет ■дифференцировать поствакцинальный и постинфекционный иммунитет. 3.5 Сопоставление данных, полученных в РВН с данными, полученными при использовании диагностического набора на основе маркированного штамма «ВК» вируса болезни Ауески в сыворотках крови иммунизированных животных.

Среди факторов гуморального противовирусного иммунитета основная роль принадлежит специфическим вируснейтрализующим антителам.

Внедрение в вирусологических лабораториях многих современных методов изучения биологической активности вируса и напряженности иммунитета, не уменьшает значимости методов, применяемых ранее для . диагностики болезни Ауески. Одним из таких серологических тестов является постановка РВН. В основе реакции лежит способность специфических иммунных сывороток нейтрализовать инфекционное действие вирусов на чувствительной системе (лабораторных животных, культурах клеток).

РВН ставили на культуре клеток НГУК-1, выращенных в пеницшшшовых флаконах (первоначальный рассев во флаконы был 1,2 мл суспензии клеток во флакон) при постоянной дозе вируса болезни Ауески равной 100 ТЦЦзй/ см3 по ГОСТу 257,53.

Для постановки реакции вируснейтрализации брали 100 ТЦД50/о.1 см3 доз вируса, штамм «Производственный», (первоначальный титр вируса составлял 6,251£ТЦД5о/см3).

В качестве специфических сывороток использовали сыворотки крови двукратно иммунизированных поросят 2-6 месячного возраста:

- вирусвакциной ВГНКИ против болезни Ауески производства ФГУП "Покровского завода биопрепаратов";

вирусвакциной против болезни Ауески свиней и овец сухую культуральную из маркированного штамма «ВК»;

В качестве контроля использовались сыворотки крови интактных животных.

Разведения сывороток крови готовили на поддерживающей среде для культуры клеток НГУК-1 (1:2,1:4,1:8, 1:16,1:32).

В качестве контроля использовали культуру клеток, в которую вносили поддерживающую среду;, а так же культуру клеток, в которую вносили постоянную дозу вируса (0,1 мл вируса на 0,9 мл поддерживающей среды).

Параллельно с постановкой РВН сыворотки крови подвергали исследованию на определение антител с помощью диагностического набора, изготовленный на основе маркированного (делеционного по гликопротеину §Е) штамма "ВК" вируса БА и «Набора препаратов для определения в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески» утвержденного Россельхознадзором 12 мая 2008 г. Результаты исследований представлены в таблице 8.

Таблица 8 - Сравнительный анализ эффективности эритроцитарных диагностикумов и РВН. ___

Тест-система Сыворотки крови двукратно иммунизированных вакциной животных Интакт-ные животные

ВК ВГНКИ

РНГА с использованием диагностического набора, изготовленного на основе маркированного (делеционного по гликопротеину $*Е) штамма "ВК" вируса БА 46,9±2,3 46,5±1,8

РНГА с использованием «Набора препаратов для определения в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески» 3,8±1,4 46,7±2,4

РВН 18,9±2,2 19,2±2,2 -

Примечание: р<0,05

Как видно из данных таблицы 8, сыворотки крови иммунизированных как традиционной, так и маркированной вакцинами животных содержат антитела против вируса болезни Ауески в титрах 19,2±7,2 и 18,9±7,2, что обеспечивает защиту от заболевания болезнью Ауески. Научно обосновано, что минимальный титр антител в сыворотке крови, определяемый в РВН, предохраняющий от заражения вирусом болезни Ауески, составляет 1:8.

При этом в контрольной культуре клеток, зараженной вирусом Б А, штамм «Производственный», ЦПД на 4 креста (H i I) наблюдалось через

24-48 часа, тогда жак в контрольной культуре клеток, не зараженной вирусом монослой полностью сохранился.

Титры же антител в сыворотках крови, иммунизированных как традиционной, так и маркированной вакцинами, при исследовании с помощью диагностического набора, изготовленного на основе маркированного (деяеционного по гликопротеину gE) штамма "ВК" вируса БА, составляют 46,5±1.8 и выше.

При этом титр антител в сыворотках крови иммунизированных традиционной вакциной животных, выявленных с помощью «Набора препаратов для определения в РИГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески», составил 46,7±2,4, тогда как титр антител в сыворотках крови животных,иммунизированных маркированной вакциной составил 3,8±1,4.

Таким образом, в результате исследований установлено, что с помощью разработанного диагностического набора, на основе маркированного штамма "ВК" вируса БА возможность, ; дифференцировать антитела в сыворотках крови свиней вакцинированных маркированной вакциной от вакцинированных традиционной вакциной или инфицированных полевым штаммом вируса БА.

4. ВЫВОДЫ

1. Впервые установлена ускоренная репродукция вируса болезни Ауески, штамм «ВК» в перевиваемой культуре клеток НГУК-1,

! обеспечивающая репродукцию вируса в течение 24 ч, вместо 48-72 ч на ! культурах клеток СПЭВ, ВНК-2 1и ККФ с конечной концентрацией вируса 6,25 ТЩЬ/см3.

2. Отработана технология сенсибилизации формалинизированных эритроцитов делеционным по гликопротеину gE вирусом болезни Ауески для изготовления эритроуитарного реагента.

3.У становлении оптимальные условия культивирования вакцинных штаммов вируса болезни Ауески, сенсибилизации формалинизированых эритроцитов которые вошли в основу разработанной технологии изготовления диагностической тест-системы для выявления поствакцинальных антител при болезни Ауески.

4.Разработан набор препаратов для дифференциальной диагностики в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК».

5. Разработанный диагностический набор, изготовленный на основе маркированного штамма "ВК" вируса Б А, позволяет дифференцировать антитела у свиней вакцинированных маркированной вакциной от вакцинированных традиционной вакциной, а также от инфицированных полевым вируса Б А.

6. Результаты исследований, полученные в РНГА с помощью разработанного .набора препаратов, сопоставимы и подтверждаются с данными РВН в 94,8% случаев.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Полученные результаты исследований вошли в два нормативно-технические документы, утвержденных Россельхознадзором.

Разработанный «Набор препаратов для дифференциальной диагностики в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК» рекомендуется для применению в свиноводческих хозяйствах, использующих для иммунизации маркированную вакцину из штамма «ВК» " против болезни Ауески.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Мифтахов, Н.Р. Возможность дифференциации постинфекционных и поствакцинальных антител при болезни Ауески Юсупов Р.Х., БайбиковТ.З., Ильясова Г.Х., Насыров Ш.М., Латфуллин Д.Н., Чернов А.Н., Мифтахов Н.Р. - Покров, 2008. -Т. 1. - С. 129.

2. Мифтахов, Н.Р. Сравнительная оценка иммунотерапевтических препаратов природного и синтетического происхождения при индуцированном иммунодефиците. Идрисов Г.Г., Ильясова Г.Х., Госманов Р.Г., Чернов А.Н., Мифтахов Н.Р. - Покров, 2008. -Т.П. - С. 83.

3. Мифтахов, Н.Р. Индуцированная иммунная недостаточность - одна из проблем здоровья скота, завозимого в Россию /A.B. Иванов, К.Х. Папунади, Р.Х. Юсупов, Д.Н. Латфуллин, Г.Х. Ильясова, А.Н. Чернов, Н.Р. Мифтахов, Г.Г. Идрисов // Актуальные проблемы здоровья скота, завозимого в Россию в рамках нацпроекта «Развитие агропромышленного комплекса» Материалы Международной конференции 28-30 ноября 2007 г. - Казань, 2008.-С. 60-63.

4. Мифтахов, Н.Р. Эритроцитарные реагенты для дифференциации постинфекционных и поствакцинальных антител при болезни Ауески / Н.Р. Мифтахов// Достижения молодых ученых в производство: Научно -практическая конференция молодых ученых и специалистов, посвященная 100 - летию со дня рождения профессора Х.Х. Абдуллина. - Казань, 2008.-С. 164- 168.

5. Мифтахов, Н.Р. Разработка диагностикума на основе маркированного штамма «ВК» вируса болезни ауески / Н.Р. Мифтахов,А.Н. Чернов. // Ветеринарный врач - 2010. - №1 - С. 31-32.

Подписано к печати 27.02 ]0. Формат 60x84/1 б

Заказ 74 Тираж |И*зы. Усл.-печ.л.(.О

Б>мага офсетна* Печать JUSO

Центр информационных технологам КГАВМ 420074, Казань, Снб&рский зршет, 35.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мифтахов, Нияз Рафисович

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Характеристика болезни Ауески и биология возбудителя.

2.2. Иммунитет и вакцинопрофилактика при болезни Ауески.

2.3. Методы лабораторной диагностики болезни Ауески.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы исследований.

3.1.1. Материалы.

3.1.2. Методы исследований.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1 Разработка технологии изготовления антигена вируса болезни Ауески, делеционного по гликопротеину gE.

4.1.1. Сравнительное изучение чувствительности культур клеток к варианту вируса болезни Ауески делеционного по гликопротеину и ВГНКИ.

4.1.2. Очистка и концентрирование вируса псевдобешенства.

4.2. Разработка технологии изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для РНГА на основе делеционного по гликопротеину gE штамма "ВК" вируса болезни Ауески.

4.2.1. Получение специфических сывороток крови кроликов и крыс, иммунизированных против болезни Ауески различными вакцинными штаммами.

4.2.2. Получение эритроцитарного реагента.

4.2.3. Сенсибилизация эритроцитов антигеном различных штаммов вируса болезни Ауески.

4.2.4. Определение активности и специфичности серий эритроцитарных диагностикумов в межлабораторных комиссионных испытаниях.

4.3. Испытание активности и специфичности эритроцитарных диагностикумов в условиях хозяйства, с целью дифференциации поствакцинальных антител у свиней.

4.4. Сопоставительный анализ результатов РВН с данными, полученными при использовании диагностического набора на основе маркированного штамма вируса болезни Ауески штамма «ВК» при определении антител в сыворотках крови иммунизированных животных.

4.5. Практическое использование существующих и разработанных методов и средств для иммунологического мониторинга эффективности вакцинопрофилактики при болезни Ауески.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

6. ВЫВОДЫ.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Разработка тест-системы на основе маркированного штамма "ВК" для диагностики болезни Ауески"

Актуальность проблемы. Болезнь Ауески - это остро протекающее в виде эпизоотий и спорадических случаев контагиозное заболевание. Оно наносит значительный экономический ущерб животноводству, особенно в странах с интенсивно развитым свиноводством и пушным звероводством (Gustafson P.D.,1970; Wittman G. et.al.,1989; Юсупов P.X., 2002; Байбиков T.3., 2008; Иванов А.В., 2008). Заболевание вызывается вирусом болезни Ауески (ВБА, Suid Herpesvirus 1), относящимся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, род Varicellovirus (Мэрфи Ф.А., 1989). Летальный исход болезни наблюдается у поросят, у взрослых свиней сопровождается установлением длительного или пожизненного носительства вируса. В определенных условиях латентный герпесвирус способен реактивироваться и животное вновь становится источником инфекции (Wittman G. et.al., 1989; Сергеев В.А., 1993; Юсупов Р.Х., 2001). Заболевание, и смертность снижаются с возрастом. У откормочных и племенных свиней болезнь чаще всего характеризуется респираторными явлениями. Смертность не превышает 10%. У свиноматок наблюдается рождение мертвого плода, мумификация и эмбриональная смертность плодов, бесплодие (Уласов В.И. и др. 2001).

Из-за многообразия форм течения болезни лабораторное подтверждение диагноза является обязательным условием при подозрении на болезнь Ауески во всех случаях (Annual. Reports OIE Reber. Laboratories and Coll. Center, 1996, 1997).

У свиней болезнь Ауески чаще всего характеризуемся нарушением репродуктивных функций и респираторным синдромом (кашель, одышка, лихорадка и т.д.). Смертность новорожденных поросят достигает 90 - 100 %, у месячных - 60%. С увеличением возраста животных проявление клинических признаков уменьшается (Моренков О.С. 2002).

Болезнь Ауески трудно искоренить с помощью прививок традиционными вакцинными препаратами, так как не предотвращается инфицирование поголовья и распространение вируса среди свиней (Моренков О.С., 2000).

Международный опыт показывает, что искоренение заболевания возможно при применении стратегии борьбы, включающее выявление инфицированных животных (в том числе латентно инфицированных) и их выбраковку, а также реализацию комплекса санитарно-эпидемиологических и других мер. В ряде стран (Великобритания, Дания) было проведено искоренение заболевания посредством выявления и забоя больных и подозрительных в заболевании свиней (Batza, H.-J., 2004). Такие программы искоренения невозможны в странах и областях с высоким процентом инфицированных животных, так как это приведет к огромным экономическим потерям. Очевидно, что единственно возможным способом решения проблемы искоренения болезни Ауески в таких странах является выявление и выбраковка инфицированных животных без прекращения вакцинации. Такие мероприятия проводятся с использованием маркированных вакцин и дискриминирующих тестов, позволяющих дифференцировать вакцинальный и инфекционный иммунитет (Моренков 1 О.С., 2002; Komaromi М., 2005). При этом все известные диагностические наборы, позволяющие дифференцировать вакцинальный и инфекционный иммунитет основаны на использовании гликопротеинов или моноклональных антител, что определяет высокую себестоимость соответствующих исследований. Таким образом, усовершенствование тест-системы для выявления антител на основе РНГА с иммобилизируемым антигеном в виде структурно-целостного вируса болезни Ауески штамма «ВК», которая обладала бы достаточной чувствительностью и специфичностью для дифференциации , поствакцинальных и постинфекционных антител является актуальноц задачей.

Цель и задачи исследований. Целью исследований являлась разработка тест-системы на основе РНГА с иммобилизируемым антигеном в виде делеционного по гликопротеину gE вируса болезни Ауески, котороая позволяет проводить оценку и дифференциацию постинфекционных и поствакцинальных антител в сыворотках крови свиней.

• Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Адаптировать маркированный (делеционный по гликопротеину gE) вирус болезни Ауески к культуре клеток.

2. Отработать условия изготовления эритроцитарного реагента на основе использования делеционного по гликопротеину gE вируса болезни Ауески.

3. Получить различные варианты сывороток крови животных, иммунизированных: а) маркированным антигеном вируса БА, б) вирусвакциной ВГНКИ против БА, в) радиоинактивированным (эпизоотическим) антигеном вируса БА (ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ»).

4. Провести сравнительную оценку 3 вариантов сывороток крови иммунизированных животных и 2 вариантов эритроцитарных реагентов на основе вакцин «ВК» и «ВГНКИ» для выявления постинфекционных и поствакципальных антител к вирусу БА.

5. Разработать методические указания по применению набора препаратов для дифференциальной диагностики в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК».

Научная новизна.

Впервые создан эритроцитарный диагностикум на основе делеционного по гликопротеину gE вируса болезни Ауески, обеспечивающий дифференцированное выявление поствакцинальных и постинфекционных антител при указанной инфекции.

Впервые адаптирован вакцинный штамм «ВК» вируса болезни Ауески к культуре клеток невриномы Гассерова узла крысы (НГУК -1). Разработанный метод культивирования вакцинный штамм «ВК» вируса болезни Ауески на указанной клеточной системе сокращает время репродукции и обеспечивает увеличение его титра в 2-3 раза по сравнению с другими изученными культурами клеток.

Практическая ценность работы определяется тем, что на основании проведенных исследований предложен для внедрения в ветеринарную практику новый диагностикум для дифференциации поствакцинальных и постинфекционных антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК». По результатам исследований нами разработаны и утверждены:

1. Инструкция по применению «Набора препаратов для определения в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески» (утв. Россельхознадзором МСХ РФ 25.04.2008);

3. Инструкция по применению «Набора препаратов для дифференциальной диагностики в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК» (утв. директором ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» А.В.Ивановым 22.10.2009).

Основные положения выносимые на защиту.

- адаптация вакцинного штамма «ВК» вируса болезни Ауески ' делеционного по гликопротеину gE к культуре клеток.

- технология изготовления диагностического набора препаратов для РНГА на основе делеционного по гликопротеину gE вируса болезни Ауески. эксперементальное подтверждение дифференциации поствакцинальных и постинфекционных антител при болезни Ауески.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на ежегодных научных сессиях ученого совета ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» по итогам НИР за 2006 - 2009 гг., на научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ» (г. Казань, 2007-2008 г.). Результаты основных этапов работы подтверждены внутрилабораторными комиссионными испытаниями с положительной оценкой.

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации изложены в 5 научных работах, одна из которых в рекомендованных ВАК РФ издании.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертация изложена на 117 страницах компьютерного текста (текстовый редактор «Microsoft Word 2003»), содержит 14 таблиц и включают общую характеристику работы, обзор литературы, собственные исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, приложения. Список литературы включает 262 библиографических источника в т.ч. 104 - зарубежных авторов

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Мифтахов, Нияз Рафисович

6 ВЫВОДЫ

1. Впервые установлена ускоренная репродукция вируса болезни Ауески, штамм «ВК» в перевиваемой культуре клеток НГУК-1, обеспечивающая репродукцию вируса в течение 24 ч, вместо 48-72 ч на культурах клеток СПЭВ, ВНК-2 1и ККФ с конечной концентрацией вируса 6,25 ТЦДзо/СМ3.

2. Отработана технология сенсибилизации формалинизированных эритроцитов делеционным по гликопротеину gE вирусом болезни Ауески для изготовления эритроцитарного реагента.

3.Установленны оптимальные условия культивирования вакцинных штаммов вируса болезни Ауески, сенсибилизации формалинизированых эритроцитов которые вошли в основу разработанной технологии изготовления диагностической тест-системы для выявления поствакцинальных антител при болезни Ауески.

4.Разработан набор препаратов для дифференциальной диагностики в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК».

5. Разработанный диагностический набор, изготовленный на основе маркированного штамма "ВК" вируса БА, позволяет дифференцировать антитела у свиней вакцинированных маркированной вакциной от вакцинированных традиционной вакциной, а также от инфицированных полевым вируса БА.

6. Результаты исследований, полученные в РНГА с помощью разработанного набора препаратов, сопоставимы и подтверждаются с данными РВН в 94,8% случаев.

7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Полученные результаты исследований вошли в два нормативно-технические документы, утвержденных Россельхознадзором.

Разработанный «Набор препаратов для дифференциальной диагностики в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК» рекомендуется для применению в свиноводческих хозяйствах, использующих для иммунизации маркированную вакцину из штамма «ВК» против болезни Ауески.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Мифтахов, Нияз Рафисович, Казань

1. Абдрахманов, С.К. Изучение возможности размножения вируса болезни Ауески штамма ВГНКИ в культуре клеток КФ при суспензионном способе культивирования / С.К. Абдрахманов // Акт. пробл. вирусол.-Гвардейский, -1994.- 4.1, 64 с.

2. Абдрахманов, С.К. Разработка технологии получения в ысокоактивной вирусвакцины против болезни Ауески и ее применение / С.К. Абдрахманов//Автореф. Канд. Дисс. Алматы, 1997.- 26 с.

3. Авербах, М.М. Иммуногенетика инфекционных заболеваний / М.М. Авербах, A.M. Мороз, A.C. Апт, Б.В. Никоненко //- М.: Медицина, 1985. -С. 253.

4. Авцын, А.П. Новая нейрогенная клеточная линия НГУК-1 и ее применение в биотехнологии и медико-биологических исследованиях // Культивирование клеток животных и человека/ А.П. Авцын,

5. B.Я. Карамышева, Л.И. Кондакова, Н.В. Овсянникова, М.А. Селимов, А.Г. Татаров, A.C. Халанский // Тез. Докл. Всесоюз. совещ.- Пущино, 1985.1. C. 75-76.

6. Авцын, А.П. Новая клеточная линия невриномы Гассерова узла крысы НГУК-1 /А.П. Авцын, Л.И. Кондакова, A.C. Халанский, Г.П. Полякова, Н.В. Чудиновская // Цитология. 1989. Т.31. - №1. - С. 97-102.

7. Айрапетян, В.Г., Чобанян М.С. Инактивированная культуральная вакцина против болезни Ауески пушных зверей / В.Г. Айрапетян, М.С. Чобанян // Акт. вопросы вет. вирусологии.- 1980. С. 131.

8. Алехин, Е.К. Сравнительная эффективность продигиозана и левамизола при аллотрансплантации / Е.К. Алехин // Антибиотики. 1982. - №3. - 5 с.

9. Амирова, И.В. Серологический мониторинг болезни Ауески в Смоленской области / И.В. Амирова, A.A. Стрижаков // Ветеринария, -2008, №9, С.26-28.

10. Ю.Архипов, В.В. Испытание вакцин против пуллороза- тифа птиц, изготовленной с применением ионизирующих излучений /В.В. Архипов, К.С. Богданова // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 8-й конф. -М.:, 1972. С.101.

11. П.Архипов, В.В. Изучение экспериментальных серий туберкулиновых препаратов, изготовленных с применением ионизирующих излучений / В.В. Архипов, JI.A. Нечаева // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. /Матер. 8-й конф. М.:, 1972. - С. 102.

12. Базыле, П.М. Эмбрионгидроокисьалюминиевая формолвакцина против болезни Ауески / П.М. Базылев, А.Р.Тюльпанова // Ветеринария. 1963. -№9. -С. 22.

13. Бакиров, A.B. Влияние продигиозана и производных пиримидина на эффективность антибиотикотерапии экспериментальных инфекций /A.B. Бакиров // Антибиотики.- 1979.- №9. С.673-678.

14. Бакиров, A.B. Сравнительное действие продигиозана и производных пиримидина и их комбинации на иммунологические свойства организма / A.B. Бакиров // Автореф. Канд. Дисс. Уфа, 1980. - С. 19.

15. Бакулов, И.А. Чевелев С.В., Макаров В.В. Классификация и номенклатура вирусов животных / И.А. Бакулов, С.В. Чевелев, В.В. Макаров // Ветеринария. 1985. - №6. - С.26 - 34.

16. Балышева, В.И. Некоторые аспекты культивирования вирусов болезней свиней / В.И. Балышева, Т.Н. Чурбанова, В.М. Балышев, H.A. Чермашенцева // Материалы междунар. научно-практич. конф., посвящ. 40-летию ВНИИВВиМ. Покров, 1998. - С.108.

17. Баринский, И.Ф. Эффективность иммуномодуляторов при экспериментальных вирусных инфекциях / И.Ф. Баринский, C.JI. Нестерчук // Вопросы вирусологии. 1989 - №6,- С.34.

18. Беклемишев, Н.Д. Иммунопатология и иммунорегуляция / Н.Д. Беклемишев / — М.: Медицина, 1986. С. 256.

19. Белоконь, B.C. Использование перевиваемых клеток СПЭВ для репродукции вируса болезни Ауески / B.C. Белоконь, П.Т. Берус, A.M. Цымбал // Тез. докл. Республиканской научно-практической конференции НИИЖЛиП. Харьков. - 1988. - С. 228-229.

20. Белоконь, B.C. Сравнительная оценка чувствительности к вирусу болезни Ауески разных систем культивирования / B.C. Белоконь, В.А. Мищенко, Л.Е. Корниенко // Биотехн. Вет. преп.: Мат. науч.-практ. конф. 25-26 окт. 1993.-Харьков, 1993.-С. 14.

21. Бергольц, В.М. Иммунология и иммунотерапия лейкоза / В.М. Бергольц, Н.С. Кисляк, B.C. Еремеев // М.: Медицина, 1978. - С.38-128.

22. Борисова, A.M. Клинико-иммунологическая оценка эффективности применения арбидола у больных вторичными иммунодефектами / A.M. Борисова, О.П. Артемова, О.Д. Заболотская // Иммунология. 1996. - №2. - С.58-61.

23. Бусол, В.А. Иммунологические свойства производственного штамма УНИИЭВ 18 ВС вируса болезни Ауески / В.А. Бусол, В.А. Мищенко, B.C. Белоконь // Биотехн. вет. преп,: Мат. науч.- практ. конф. 25-26 окт. 1993.-Харьков, 1993.- С. 17.

24. Бьярдовская, О.П. Применение дифференцирующего ИФА при болезни Ауески свиней / О.П. Бьярдовская, О.Г. Андреева, A.C. Оганесян, Л.Б. Прохорова // Труды Федерального центра охраны здоровья животных / 2006, -Т. 4., С. 225-232.

25. Васильев П.Г. Актуальные проблемы сибирской язвы: биология и индикация возбудителя, клиника, патоморфология и диагностика заболевания.: Автореф. дисс. . докт. биол. наук.- Казань, 2001.- С.36.

26. Величкова, М. Проучивания върху размножаването на вируса на болестта на Ауески щам "МК-35" в ролерна система / М. Величкова, П. Петков, У. Тодорова, И. Симеонов // Селскостоп. Наука. Производство. 1995. -33; 6.-С.32-34.

27. Виноградова, В.И. Оценка колострального иммунитета у свиней против болезни Ауески / В.И. Виноградова, В.В. Кузнецов // Акт. вопр. вет. вирусол.: Тез. докл. Пятой Всесоюз. Вет. вирусол. конф. 13-15 мая 1980. -Казань. 1980.-С. 109.

28. Вихриев, Б.С. Клиническое применение препарата ксимедон в лечении ожоговой болезни / Б.С. Вихриев, A.B. Матвеенко // Сб. науч. тр. ИОФХ им. А.Е. Арбузова КФАН СССР. Казань, 1986. - С. 41-45.

29. Воробьев, A.A. Механизмы действия адъювантов / A.A. Воробьев // Усп. совр. биол., 1969, 68, 1:72-С. 89.

30. Гаврилов, В.А. Изучение иммуностимулирующих и пролонгирующих свойств высокомолекулярных полимеров в эксперименте на животных

31. В.А. Гаврилов, М.М. Зубаиров, Н.Б. Матвеева, С.А. Кедик // Вопр. вет. вирусологии, микробиологии и эпизоотологии. Покров, 1992. - 4.2. - С. 219-220.

32. Гетта, Г.А. Гидроокисьалюминиевая формолвакцина против болезни Ауески из эмбрионального штамма вируса, выращенного в культуре клеток куриных эмбрионов / Г.А. Гетта / Автореф. Канд. Дисс. Харьков, 1972.- С. 29.

33. Гилмуллина, Ф.С. Естественный ингибирующий фактор в патогенезе иммунных дисфункций при роже и их коррекция ксимедоном / Ф.С. Гилмуллина // Автореф. Канд. Дисс. Казань, 1997.- С. 22.

34. Гилмуллина, Ф.С. Ксимедон в комплексной терапии рецидивирующей рожи / Ф.С Гилмуллина., В.Х. Фазилов // Фармакология и токсикология фосфорорганических и других биологически активных веществ. — Казань, 1996, Вып.З. - С. 40.

35. Горбунов, С.М. Фармако-токсикологическая характеристика ксимедона и влияние его на заживление термических ожогов кожи / С.М. Горбунов // Автореф. Канд. Дисс. Казань, 1979. - С. 21.

36. Горбунов, С.М. Результаты экспериментальных исследований ксимедона / С.М. Горбунов, С.Г. Измайлов // Ксимедон. Казань, 1986, - С. 26-30.

37. Госманов, Р.Г. Аллергическая и серологическая диагностика инфекционных болезней животных (ящур, болезнь Ауески и лихорадка Ку) /Р.Г. Госманов // Дисс. . докт. вет. наук. Казань, 1986, - С. 444.

38. Гродзенский, Д.Э. Радиобиология. Биологическое действие ионизирующих излучений / Д.Э. Гродзенский // М.: Атомиздат. 1966. -С. 247.

39. Гусева, М.Н. Разработка технологии изготовления инактивированной вакцины против болезни Ауески из штамма, делеционного по гликопротеину Е / М.Н. Гусева // Автореф. Канд. Дисс. Владимир, 1999. -С. 23.

40. Дудников, А.И. Испытание инактивированной эмульсионной вакцины против болезни Ауески на норках / А.И. Дудников, Н.Е. Камалова, В.А. Мищенко, В.М. Захаров, В.М. Хухоров // Ветеринария. 1995. - №7. -С. 29-30.

41. Дуплищева, А.П. Влияние ионизирующей радиации на токсические свойства антигенов семейства Enterobacteriaceae / А.П. Дуплищева, Н.Г. Синилова / Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 8-й конф.-М., 1972. С.96-97.

42. Дымин, М.А. К вопросу профилактики болезни Ауески норок / М.А. Дымин, B.C. Князев, В.П. Чичканов, Г.П. Дымина, Г.А. Сафронов // Акт. вопросы, вет. вирусологии.-1980.- С. 133.

43. Ершов, В.И. Интерферониндуцирующая и противовирусная активность левамизола / В.И. Ершов, С.С. Григорян, И.В. Кремерман., О.В. Николаева // Антибиотики. 1981. - №8. - С. 617-620.

44. Ершов, В.И. Иммуномодуляторы в профилактике и терапии вирусных инфекций / В.И. Ершов, В.В. Малиновская // Журн. микробиол. 1996. -№3.-С. 122-125.

45. Земсков, A.M. Способ выбора адекватной иммунокоррегирующей терапии для устранения приобретенной иммунологической недостаточности / A.M. Земсков // Иммунология. 1988.- №4. - С. 83-86.

46. Земсков, A.M. Коррекция вторичной иммунологической недостаточности с помощью дрожжевой РНК / A.M. Земсков, В.М. Земсков, В.Г. Перидирий // ЖМЭИ. 1984.- №9. - С. 77-82.

47. Земсков, A.M. Методы оценки эффективности иммунокоррекции / A.M. Земсков, В.М. Земсков, С.Д. Полякова, Е. Бжовски // Журн. микробиол. 1997. -№1.-С. 51-53.

48. Земсков, В.М. Низкомолекулярный РНК-перспективный иммуномодулятор / В.М. Земсков, A.M. Земсков // Иммуномодуляторы: Сб. тр.- Центр. НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова. М.- 1987. -С. 55-56.

49. Земсков, В.М. К механизму стимуляции иммуногенеза нуклеинатом натрия / В.М. Земсков, A.M. Земсков, A.B. Петров, A.B. Никитин // Иммунология. 1981. - №1. - С. 52-55.

50. Иванов, A.B. Оценка антигенности, иммуногенности, безвредности и реактогенности инактивированной вакцины на новорожденных телятах / A.B. Иванов// Дисс. . канд. вет. наук.- Казань,- 1995.- С. 144.- Фонд ВНИВИ.

51. Иванов, A.B. Болезнь Ауески/ A.B. Иванов, Р.Х. Юсупов // Инфекционные болезни свиней (этиология, эпизоотология, диагностика, профилактика).-2006.- С. 17-24.

52. Иванов, A.B. Биологическая и химическая безопасность животноводства в современных условиях/ A.B. Иванов// Ветеринарный Врач.-2007.-№1. С. 2-4.

53. Иванов, A.B. Обеспечение ветеринарного благополучия свиноводческих хозяйств от особо опасных инфекционных болезней/А.В. Иванов, Р.Х. Юсупов// Ветеринарный Врач.- 2008.-№3.- С. 2 6.

54. Иванов, К.К. Влияние радиации на О-соматические антигены бактерий Sty 0-901 / K.K. Иванов, Н.Г. Синилова, А.П. Дуплищева // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 8-й конф М., 1972. - С. 95-96.

55. Ильясова, Г.Ф. Влияние ксимедона на гуморальный иммунный ответ при вакцинации живой вирусвакциной / Г.Ф. Ильясова // Тез. доклад, научно-практической конференции молодых ученых. Казань, 1998. - С. 26-27.

56. Ильясова, Г.Ф. Ксимедон как средство повышения эффективности противовирусной вакцинации / Г.Ф. Ильясова // Автореф. Канд. Дисс. Казань, 2000-С. 23.

57. Камалов, Г.Х. Чувствительность лабораторных животных и культуры ткани к вирусу болезни Ауески / Г.Х. Камалов, В.Н. Сюрин // Ветеринария. 1964. - №6. - С. 24.

58. Карандашев, И.Г. Иммуноморфологические изменения у свиней, переболевших болезнью Ауески / И.Г. Карандашев, Р.Г. Госманов // Науч. труды Казанского вет. института. Казань, 1980. - Т. 133. - С. 15-17.

59. Качанова, С.П. Болезнь Ауески / С.П. Качанова // Москва: ВНИИТЭИСХ.-1985.-С. 52.

60. Киршин, Б.А. Разработать и испытать инактивированную вакцину из шт. ОБ / Б.А. Киршин, Р.Х. Юсупов, В.Р. Матросова, В.В. Маринкова // Отчет НИР. за 1989г.- Казань, 1989.- Фонд ВНИВИ.

61. Ковалев, И.Е. Левамизол как иммуностимулятор. // Химико-фармакологический журнал / И.Е. Ковалев // - 1980. - №4. — С. 115-121.

62. Коготкова, О.И. Экспериментальное и клиническое применение неспецифических иммуностимуляторов в инфекционной патологии / О.И. Коготкова // Сб. трудов НИИ противочумного ин-та Кавказа и Закавказья Ставрополь, 1986. - С. 23-25.

63. Коломыцев, A.A. Оценка вирусвакцины для профилактики болезни Ауески свиней / A.A. Коломыцев, В.А. Бабаян, И.Ф. Вишняков, В.В. Куриннов, Н.И. Срибный, A.JI. Семенихин, Ф.Ф. Малышев // Ветеринария. 1991 - № 1. - С.31-33.

64. Коломыцев, A.A. Оценка вирусвакцины против болезни Ауески / A.A. Коломыцев, Н.И. Срибный, В.А. Бабаян, В.М. Евсеев // Ветеринария 1990. -№11.- С.20-22.

65. Конаржевский, К.Е. Инактивированная культуральная вакцина против болезни Ауески / К.Е. Конаржевский // Автореф. Докт. Дисс. Харьков.1992.- С. 35.

66. Корниенко, JI.E. Разработка технологии изготовления инактивированной концентрированной вакцины против болезни Ауески / JI.E. Корниенко// Дисс. . канд. вет. наук.- Харьков, 1992- С. 136.

67. Корниенко, JT.H. Разработка средств и методов лабораторной диагностики болезни Ауески / Корниенко JI.H. // Дисс. . канд. вет. наук. Владимир,1993.-С.128.

68. Корниенко, J1.H. Разработка средств и методов лабораторной диагностики болезни Ауески / Корниенко JI.H. // Автореф. Канд. Дисс. Владимир.-1992.- С. 23.

69. Костина, JI.B. Эпитопное картирование белка Е2 вируса классической чумы свиней шаг к созданию маркированной вакцины / JI.B. Костина // Ветеринария, 2008, №11,- С.20-24.

70. Кочергина, Н.И. Анализ клеточных основ действия нуклеината натрия, пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов на гуморальный иммунный ответ / Н.И. Кочергина, A.A. Ярилин, В.М. Земсков, У.Я. Микстайс // Иммунология. 1986. - №5. - С. 34-37.

71. Куриленко, А.Н. Лечение с.х. животных при инфекционных болезнях / А.Н. Куриленко, В.Т. Крупальник // М.: Агропромиздат.- 1986.- С. 192.

72. Лазарева, Д.Н. Стимуляторы иммунитета / Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин // М.: Медицина, 1985. С. 256.

73. Лаптев, Ю.В. Антигенность и иммуногенность вируса болезни Ауески в составе инактивированных моно- и комбинированных вакцин / Ю.В. Лаптев // Автореф. Канд. Дисс.- М.,1990 С. 24 .

74. Лифшиц, Р.И. Клинико-лабораторное исследование эффективности ксимедона в лечении больных с термическими ожогами / Р.И. Лифшиц,

75. С.А. Кляцкин, А.К. Однопозов // Сб. науч. тр. ИОФХ им. А.Е. Арбузова КФАН СССР. Казань, 1986.- С. 47-73.

76. Лифшиц, Р.И. Современные аспекты разработки вакцин, адъювантов и иммуностимуляторов / Р.И. Лифшиц // Усп. совр. биол., 1988. - Т. 105. -Вып.1. - С. 83-99.

77. Мещерякова, И.С. Токсичность суспензий туляремийного микроба, убитых ионизирующей радиацией / Мещерякова И.С.// Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 8-й конф.- М.,1972.- С. 97-98.

78. Мигунов, А.И. Физико-химическая характеристика популяции вируса гриппа, инактивированного гамма-лучами / А.И.Мигунов, Р.А.Арок, А.К.Сироткин, Л.Ф.Чернина, О.К.Кузнецов / Радиобиология.-1986.-Т.26.-Вып.5.- С. 647-651.

79. Мищенко, В.А. Чувствительность животных разных видов к вирусу болезни Ауески / В.А.Мищенко, Е.П.Боборенко, Л.Н.Корниенко, А.И.Дудников, В.Н. Хухоров // Ветеринария.- 1994.-№11С. 20-22.

80. Мищенко, В.А. Иммунизация жвачных животных вакцинами против болезни Ауески / В.А.Мищенко, А.И Дудников., Е.П.Баборенко // Вирусные и микробные болезни животных: Сб. науч. трудов.-Владимир.-1995. -№ 1-С. 201-204.

81. Мищенко, В.А. Новый взгляд на болезнь Ауески / В.А. Мищенко, А.И.Дудников, В.Н.Хухоров, В.М. Захаров // Ветеринария.-1995.- №1.- С. 11-12.

82. Мищенко, В.А. Инактивированная вакцина против болезни Ауески для иммунизации с.х. животных и пушных зверей / В.А.Мищенко,

83. В.М.Захаров, А.И.Дудников, B.C. Белоконь // Вирусные и микробные болезни животных: Сб. науч трудов.- Владимир. 1995.- С. 48-49.

84. Мищенко, В.А. Иммунобиологические свойства производственного штамма вируса болезни Ауески / В.А. Мищенко, JI.H. Корниенко, J1.E. Корниенко // Вирусные и микробные болезни животных.: Сб. науч. трудов.- Владимир, 1995.- С. 205-208.

85. Моренков, О.С. Разработка иммуноферментных методов выявления антител к гликопротеину gB вируса болезни Ауески в сыворотке свиней / О.С. Моренков // Вопр. вирусологии.- 2000. №3.- С. 45-48.

86. Мотовски, А. Случай на боллеста на Ауески при овце / А.Мотовски, П.Белоножка, Д.Томов // Ветер. С6.-1988.-86; 9/10.- С.41.

87. Никитин, М.Г. Болезнь Ауески / М.Г.Никитин, П.М. Базылев // М.: Колос, 1967.-С. 261.

88. Николаева, JI.A. О возможности применения корпускулярных радиовакцин для энтеральной иммунизации мышей против брюшного тифа / Л.А.Николаева, Н.Г.Синилова // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол / Матер. 8-й конф.- М.,1972.-С. 99-100.

89. Нурмухаметова, Э.Б. Клинико-экспериментальное обоснование применения ксимедона при ревматизме / Э.Б. Нурмухаметова // Дисс. канд. .мед. наук. Казань, 1993.- С. 158.

90. Оганесян, A.C. Разработка непрямого варианта иммунофементного анализа для определения титра антител к вирусу болезни Ауески в сыворотках крови свиней / A.C. Оганесян // Ветеринарная патология -2006 -№4.- С. 103-106.

91. Осидзе, Д.Т. Сравнительное изучение репродукции вируса болезни Ауески / Д.Т.Осидзе, С.А.Фисенко, И.А. Хорьков // Ветеринария.-1975.-№10.-С. 39-42.

92. Осидзе, Д.Т. Сравнительное изучение репродукции вируса болезни Ауески в суспензии клеток и тканей эмбрионов птиц / Д.Т.Осидзе, С.А.Фисенко, И.А. Хорьков // Вопросы вирусологии.- 1975.-№5.- С. 581586.

93. Пар, А. Левамизол как иммуностимулятор / А.Пар //.-Будапешт, 1980.-С. 38.

94. Першина, З.Г. Вариация радиочувствительности микроорганизмов / З.Г.Першина, И.И. Самойленко // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 7-й конф.- 1969.- С. 69-74.

95. Поздеев, O.K. Антивирусные свойства фосфор и сероорганических соединений / O.K. Поздеев // Автореф. дис. докт. мед. наук. Казань, 1993,-С. 1.

96. Поздняков, A.A. Чувствительность к вирусам новых перевиваемых клеток / А.А.Поздняков, В.С.Авилов, Н.Т.Голобова // Акт. вопр. вет. вирусол.: Тез. докл. науч.-практ. конф. ВНИЯИ.- Владимир, 1976.- 4.1. -С. 103-104.

97. Попов, В.И. Специфическая профилактика КЧС и болезни Ауески / В.И. Попов // Ветеринария.- 1992. -№7 С. 21-22.

98. Прейс, И.Е. Культивирование вируса болезни Ауески в однослойных культурах тканей / И.Е. Прейс // Мат. 13 науч. конф. Ленингр. Вет. ин-та.-Л., 1964.- С.35-37.

99. Простяков, А.П. Контроль и стандартизация средств специфической профилактики и диагностики инфекционных болезней животных / А.П.Простяков, А.В.Селиванов, С.И. Цыганкова // Сб. науч. трудов ВГНКИ.- 1984.-С. 125-127.

100. Прохорова, Э.М. Вирусвакцина ВГНКИ против болезни Ауески сельскохозяйственных животных / Э.М. Прохорова, A.B. Селиванов // Труды ВГНКИ.-1980.- С. 198-204.

101. Райзман, Б. Герпесвирусы и их репликация / Б.Раизман, Баттерсон. // Вирусология / Под ред. Б. Филдса и Д. Найпа.- М.: Мир. 1989. Т.З.-Гл. 29. С. 190.

102. Растунова, Г.А. Продигиозан как активатор перитонеальных макрофагов / Г.А.Растунова, Э.Г.Щербакова, И.О. Круглова // Антибиотики.-1981.-№6.- С. 6-9.

103. Сенникова, Ю.А. Сравнительная клинико-иммунологическая эффективность применения иммуностимуляторов в лечении больных хроническим бронхитом / Ю.А.Сенникова, В.С.Ширинский // Иммунология. 1996.-№3.- С. 44-47.

104. Сергеев, В.А. Вирусные вакцины / В.А. Сергеев // Киев: Урожай, 1993. С. 368.

105. Сергеев, В.А. Способ изготовления инактивированной вакцины против болезни Ауески (Вакцина "БАК") // Патент 1822345 A3 СССР, МКИ А61К 39/295.

106. Сергеев, В.А. Выращивание вируса болезни Ауески в различных культурах клеток и его иммуногенные свойства / В.А.Сергеев, Ю.В.Лаптев, В.И. Жестерев // Тр. ВИЭВ.-М, 1987.- Вып. 64.- С. 24-28.

107. Сергеев, В.А. Структура и биология вирусов животных / В.А.Сергеев, В.Г.Орлянкин // М.: Колос.-1983.- С. 24.

108. Спиер, P.E. Биотехнология клеток животных / Р.Е.Спиер, Г.Д.Адаме, Д.Б.Гриффитс // -Т.2.-М.: Агропромиздат, 1989.- С.520.

109. Суриков, Б.П. Влияние нуклеината натрия на кооперацию и супрессию иммунокомпетентных клеток / Б.П.Суриков, В.Г.Исаева // Иммунология.-1997.-№4.- С. 63-64.

110. Сурин, Б.И. Культивирование вируса болезни Ауески в культурах ткани / Б.И. Сурин // Тр. ВИЭВ.-М., 1962.-Т.29.- С. 221-230.

111. Сюрин, В.Н. Диагностика вирусных болезней животных / В.Н.Сюрин, Р.В.Белоусова, Н.В.Фомина // Справочник- М.,1991.- С. 528.

112. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных / В.Н.Сюрин,

113. A.Я.Самуйленко, Б.Р.Соловьев, Н.В.Фомина // -М.: ВНИИТЭБП, 1998.- С. 928.

114. Тахаутдинов, Ф.Б. О репродукции вируса болезни Ауески в культурах ткани / Ф.Б. Тахаутдинов // Акт. вопр. вет. вирусологии: Тез. докл. науч. конф.-М., 1967.-Ч.1.- С. 64.

115. Терещенко, В.Ю. Ксимедон как неспецифический стимулятор процессов остеогенеза / В.Ю.Терещенко, Г.А. Измайлова, С.Г.Измайлов, Р.Н. Габасов // Новые методы диагностики и лечения. Тез. докл.-Казань, 1995.-С. 359-361.

116. Терещенко, В.Ю. Использование ксимедона в сочетании с лазерной терапией в комплексном лечении хронического остеомиелита / В.Ю.Терещенко, Е.П.Кулаков, К.В. Малышев // Новые методы диагностики и лечения. Тез.докл.-Казань, 1996.-Ч.2.- С. 77-78.

117. Тимакина, К.Т. Выращивание вируса болезни Ауески в суспензии тканевых эксплантантов куриных эмбрионов / К.Т.Тимакина,

118. B.Т.Ночевный // Акт. вопр. вет. вирусологии: Тез. докл. науч. конф. ВНИЯИ.- Владимир.-1976.- Ч.1.- С. 108-109.

119. Троицкий, В.JT. Матер 2-й Междунар. конф. ООН по применению атомной энергии в мирных целях / В.Л.Троицкий, М.А.Туманян, З.Г. Першина// и др. 1958.- С. 343.

120. Туманян, М.А. Радиационная стерилизация / М.А.Туманян, Д.А. Каушанский // М.: Медицина, 1974.- С. 303.

121. Уайли, Д. Оболочки вирусов / Д. Уайли // Вирусология / Под ред. Б. Филдса и Д. Найпа. М.: Мир. 1989.- Т.1.- С. 109.

122. Уласов, В.И. Болезнь Ауески свиней / В.И.Уласов, A.A. Ольшанская // Болезни Ауески свиней.: Сборник научных работ. Владимир, 2001- С. 53-55.

123. Уласов, В.И. Проблемы борьбы с болезнью Ауески у свиней / В.И.Уласов, A.A. Ольшанская // Ветеринария, 2009, - №4, - С. 21-23.

124. Фролов, В.М. Иммуномодулирующий эффект нуклеаната и спленина у больных вирусами и токсическими гепатитами / В.М.Фролов, H.A. Пересадин, Ю.А. Ененко // Иммунология. 1994.-№6.- С. 64-65.

125. Хаитов, P.M. Актуальные вопросы практической аллергологии и иммунологии / Р.М.Хаитов, В.Н.Федосеева, Л.В.Лусс, Е.Б.Андреева,

126. B.Д.Проклпенко, Н.И.Ильина, А.В.Богова, О.Н.Ларина // Иммунология.-1996.-№2.- С. 70-71.

127. Хаитов, P.M. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология.- 2000.- №5.1. C. 4-7.

128. Цибулькин, А.П. Способ повышения эффективности противовирусной вакцинации / А.П.Цибулькин, Г.Ф.Ильясова, В.С.Угрюмова // Russian Journal of Immunology, 1999. V.4. Suppl.I.-P.- С. 340-342.

129. Цыбанова, Л.Я. Изучение динамики инактивации вируса ринопневмонии лошадей / Л.Я. Цыбанова, Р.Т. Кадыкоев, С.Ж. Цыбанов, М.И. Калабеков // Тез. докл. всерос. науч. практ. конф. посвящ. 30-летию института Щелково, 2000. - С. 61-62.

130. Шибаева, И.В. Изучение возможности применения гамма-облучения для лучевой стерилизации столбнячного анатоксина / И.В. Шибаева, Н.П. Денисова, К.К. Иванов, И.В. Васильева //' Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 8-й конф.- М.,1972. С. 103.

131. Юсупов, Р.Х. Рациональная схема гипериммунизации при получении диагностических сывороток / Р.Х. Юсупов // Ветеринария,- 1984.- №2.-С. 34-36.

132. Юсупов, Р.Х. Значение вирусоносительства в эпизоотологии болезни Ауески свиней / Р.Х.Юсупов, Р.Г. Госманов, Г.Х. Ильясова // Ветеринарный Врач.- 2001.-№4.- С. 40 41.

133. Юсупов, Р.Х. Вирус вакцина против болезни Ауески / Р.Х. Юсупов // Татарская энциклопедия.- г. Казань. 2002.- Т-1,- С. 591.

134. Юсупов, Р.Х. Болезни Ауески / Р.Х. Юсупов // Татарская энциклопедия,- г. Казань. 2002.- Т-1,- С. 429.

135. Юсупов, Р.Х. Обнаружение вируса болезни Ауески электронно-микроскопическим методом в организме эксперементально зараженных свиней /Р.Х. Юсупов //Ветеринарный Врач.- Казань. 2002.- №2,- С. 68 -70.

136. Юсупов, Р.Х. Обнаружение вируса болезни Ауески электронно-микроскопическим методом в организме эксперементально зараженных свиней / Р.Х. Юсупов, B.C. Угрюмова, Г.Ф. Ильясова и др.// Ветеринария.- 2003,-№11,- С. 22-25.

137. Яснева, Е.А. Динамика накопления полноценного вируса болезни Ауески маркированного штамма «ВК» в перевиваемой линии клеток BHK-21 / Е.А. Яснева // Ветеринарная патология.- 2006. №4, - С. 107108

138. Annelli, J.F. Status of Aujeszky's disease (Pseudorabies) in the Americans / J.F. Annelli // OIE Symposium Bangkok, Thailand, 1994. P.71-75.

139. Bartha, A. Experiments to reduce the virulence of Aujeszkys virus / A. Bartha // Magy. Allarto V.Lapja. 1961.- V. 16. - P. 42-45.

140. Batza, H.J. Eradication of Aujeszky's disease in Germany / H.J. Batza // Proc. 16th International Pig Veterinary Society Congress. Melbome. Australia, 2000. -P.611.

141. Becker, C.H. Die Multiplication des Aujeszkys chen Virus in den Spinalgonglien des Kaninghens / C.H. Becker// Arch. Exper. Vet. Med. -1968. -Bd. 22.-S. 386-381.

142. Bonativo, V. Brain nucleotides and processes / V. Bonativo // Acta Neurol. -1975.-Vol.3.-N.1.-P.30-34.

143. Bonativo, V. Detection of pseudorabies virus DNA sequences by the polymerase chain reaction / V. Bonativo, A. Ballagi-Pordany, J. Flensburg, A. Virtanen // Archs. Virol. 1989. - V.108. - P. 279-286.

144. Ben-Porat, T. Molecular biology of pseudorabies virus / T. Ben-Porat, A.S. Kaplan // The herpesviruses (B. Roizman ed.). Plenum №4. 1985. - P. 105173.

145. Caroli, C. E. deludente il "piano" contro TAujeszky / C. E. Caroli // Riv.Suinic. -1995. 36; 4. - P. 35-36.

146. Chappuis, G. Industrial production and control of a subunid vaccine against

147. Aujeszky s disease / G. Chappuis, D. Fargeaud, A. Bran // Vaccination and Control of Aujeszky s disease. J.T.Van Oirscnot (ed). 1989. - P. 67-68. .

148. Chinsakchai, S. Immunobiology of pseudorabies virus infection / S. Chinsakchai, T.W. Molitor // Vet. Immun. Immunopathol. 1994.- V.43.-P.107-116.

149. Cowen, P. Reactivation of pseudorabies virus infection in vaccinated commercial sows / P. Cowen, S. Li, J.S. Guy, G.A. Ericson, D. Blanchard // Am. J. Vet. Res. 1990. - V.51. - P. 334-338.

150. Dedek, L. Experince with preparation of an inactivated vaccine against Aujeszky's disease / L. Dedek, I., Jerabek // Acta. Vet.Bmo.-1981 .-V.50.- №3 -4. P.221-227.

151. Dijkstra, J.M. Identification and characterization of pseudorabies virus glycoprotein g M as a nonessential virion component / J.M. Dijkstra, N. Visser, T.C. Mettenleiter, B.G. Klupp // J.Virol, 1996. V.70. - P. 5684-5688.

152. Doil, T.K. Inactivation of viruses producted in animal / T.K. Doil // Animal Cell Biotechnology. London ect. - 1985. - V.2. - P.124-149.

153. Engel, V. Vaccination and eradiation programme against Aujeszky's disease in Sweden, based on a g 1 ELISA test / V. Engel, M. Wierup // Vet. Record. 1989.-V.125.-P. 236-237.

154. Flynn, S.J. The receptor — binding domain of Pseudorabies virus glycoprotein gC is composed of multiple discrete units that are functionally redundant / S.J. Flynn, P. Ryan // J. Virol. 1996. - V.70. - P. 1355-1364.

155. Fujita, T. Aujeszky's disease control program in Japan / T. Fujita // OIE Symposium Bangkok, Thailand. 1994. - P. 85-96.

156. Gustafson, D.P. Pseudorabies / D.P. Gustafson // Manual of small animal infections disease N.Y. Etc, 1988. - P. 25-30.

157. Gustafson, P.D. Pseudorabies. Disease of swine / D.P. Gustafson // Ed. By H.W. Dune. Iowa State University Press. 3rd edition, 1970. P. 337-355.

158. Herold, B.C. Glycoprotein C of herpesvirus simplex virus type 1 plays a principal role in the adsorption of virus to cell and in infectivity / B.C. Herold, D. Wu Dunn, N. Soltys, P.G. Spear//J. Virol. 1991. - V.65.- P. 1090-1098.

159. Hirose, O. Current situation of Aujeszky's disease vaccination program / O. Hirose // 44th Japan Workshop on pig diseases held at Kitazato institute, Japan. 1993.-P. 320-327.

160. Hopp, W. Constancy of Aujeszky's field virus antibody titres in sows repeatedly vaccinated with a g I-negative vaccine / W. Hopp, R. Jungblut // Acta veterinaria Hungarica. 1994. - V.42. - P. 409-413.

161. Hosa Kawa Yasushi Resistanse of Sendai virus (HVJ) F-protein against irradiations /Hosa Kawa Yasushi // Annu. Rept. Radiat. Center Osaka Prefect.-1979.-Vol.20.-P. 129-133.

162. Huff, V. The carboxy terminal 41 amino acids of herpes simplex virus type 1 glycoprotein B are not essential for production infectious virus particles

163. V. Huff, W. Cai, J.C. Glorioso, M. Levine // J. Virol.- 1988. V.62. - P. 44034406.

164. Hwa-Tsung, S. Eradication of Aujeszky's disease in Taipei, China / S. Hwa-Tsung, Y. Ping-Gheng // OIE Symposium Bangkok, Thailand. 1994. - P. 97103.

165. Jacobs, L. Glicoprotein E of pseudorabies virus and homologous proteins in other alphaherpesvirinae / L. Jacobs // Arch. Virol.- 1994. V.137. - P. 209228.

166. Kallings, L.O. Radiosterilizations of Medical Products / L.O. Kallings // JAEA. Vienna, 1967. - P. 433-439.

167. Kimman, T.G. Immunological protection against pseudorabies virus / T.G. Kimman // Proc. OIE Symposium Bangkok. Tailand, 1994. P. 11-22.

168. Kit, S. Safety and efficacy of genetically engineered Aujeszkys disease vaccines / S. Kit // Vaccination and control of Aujeszky s disease // J.T. Van Oirshot ed. Brussel, Luxenburg, 1989. P. 45-55.

169. Kit, S. Secondgeneration pseudorabies virus vaccine with deletion in thymidine kinase and glycoprotein genes / S. Kit, M. Sheppard, H. Ichimura, M. Kit, // Am. J. Vet. Res. 1987. - V.48. - P. 780-793.

170. Knopp, A. Stable rescues of a glycoprotein gll deletion mutant of pseudorabies virus by glycoprotein I of bovine heipesvirus 1 / A. Knopp, T.C. Mettenleiter // J. Virol.- 1992.- V.66. P. 2754-2764.

171. Koltay, Z. Aujeszky mentesites 1000 kocas sertestelepen. Szarvasmarha-Sertestenyesztes Gyakorlata / Z. Koltay // Budapest, 1987. V.74. - P. 68-70.

172. Lipowsky, A. Choraba Aujeszkye goznana i nieznana / A. Lipowsky, Z. Pejsak // Met.Weter. 1996. - Bd.52. - S. 490-494.

173. Lomniczi, B. Multiple defects in the genome of genome of pseudorabies virus can affect virulence without detectable affecting replication in cell culture / B. Lomniczi, A.S. Kaplan, Ben-Porat. // Virol. 1987. - V. 161. - P. 181-189.

174. Lukacs, N. Demonstration of three major species of pseudorabies virus glycoproteins and identification of disulfide- linked glycoprotein complex / N. Lukacs, H.J. Triel, T.C. Mettenleiter, H.J. Rziha // J. Virol. 1985. - V.49. - P. 970-979.

175. Marchioli, C.C. A vaccine strain of Pseudorabies virus with deletions in the thymidine kinase and glycoprotein X genes / C.C. Marchioli, R.J. Yancey, R.C. Wardley, D.R. Thomsen, L.E. Post // Am. J. Vet. Res. 1987. - V. 48. -P. 1577-1583.

176. Matsuda, A. The adsorption Pseudorabies virus glycoprotein gill to the host cells / A. Matsuda, N. Okada, S. Katayama, T. Okabe, N. Sasaki // J. Vet. Med. Sei. 1991.-V.53.-P. 957-958.

177. McCaw, M.B. An IgM antibody capture ELISA for detection Pseudorabies specific IgM antibody / M.B. McCaw, H.S. Joo, I.M. Molitor // Proc. 10th Internat. Congress of the Int. Pig. Vet. Soc. 1988. Rio de Janeiro, Brazil. -P. 174.

178. Meignier, B. Virulence of and establishment of latency by genetically engineered deletion mutants of herpes simplex virus 1 / B. Meignier, R. Longnecker, P. Mavromara-Naros, A.E. Sears, B. Roizman // Virology.-1988. V.162.-P. 251-254.

179. Mengeling, W.L. Virus reactivation in pigs latently infected with a thymidine kinase negative strain of Pseudorabies virus / W.L. Mengeling // Arch Virol. 1991. - V.120. - P. 57-70.

180. Mettenleiter, T.C. Glycoprotein gill deletion mutants of Pseudorabies virus are impared in virus entry / T.C. Mettenleiter // Virology. 1989. - V.171. -№2. - P. 623-625.

181. Mettenleiter, T.C. Molecular biology of Pseudorabies (Aujeszky s disease) virus / T.C. Mettenleiter // Com P. Immun. Microbiol. Infect. Dis. 1991. -V.14. P. 151-163.

182. Mettenleiter, T.C. Pseudorabies virus avirulent strains fail to express a major glycoprotein / T.C. Mettenleiter, N. Lukacs, H.J. Rziha // J. Virol. V. 56. -P. 307-311.

183. Mettenleiter, T.C. Role of Pseudorabies virus glycoprotein gl in virus releases from infected cells / T.C. Mettenleiter, C. Schreurs, F. Zuckermann, T. Ben Porat // J.Virol. 1987. - V.61. - P. 2764-2769.

184. Mettenteiter, T.C. Immunobiology of Pseudorabies (Aujeszky's disease) / T.C. Mettenteiter // Vet. Immunol. Immunopathol. 1996. - V.54. - P. 221229.

185. Mettenteiter, T.C. Pseudorabies (Aujeszkys disease virus): State of the art August 1993 / T.C. Mettenteiter // Acta Veterinaria Hungarica. 1994. - V.42. -P. 153-177.

186. Molitor, T. Pseudorabies vaccines: past, present and future / T. Molitor, D. Thawley // comped contin. Educ. Pract. 1987. - V.9. - P. 409-416.

187. Morein, B. Iscom of viral envelope proteins protects against Aujeszkys disease / B. Morein, S. Belac, T. Soos // Vet. Microbiol. 1989. V.20; - P. 143154.

188. Nauwynck, H.J. Effect of specific antibodies on the cell-associated spread of Pseudorabies virus in monolayers of different cell types / H.J. Nauwynck, M.B. Pensaert//Arch. Virol. 1995. - V. 140. - P. 1137-1146.

189. Nauwynck, H.J. Programs for the eradication of Aujeszky's disease virus (Pseudorabies virus) in the member states of the European Union / H.J.Nauwynck, M.B. Pensaert // OIE Symposium Bangkok, Thailand, 1994. -P. 55-65.

190. Nauwynck, H.J. Virological protection of sows upon challenge with Aujeszky s disease virus after multiple vaccinations with attenuated or inactivated vaccines / H.J. Nauwynck, V. Zonnekeyn, M.B. Pensaert // J. Vet. Med. 1997. - V.44. - P. 609-615.

191. Navarro, D. Domains of herpes simplex virus 1 glycoprotein B that function in virus penetration, cell-to-cell spread, cell fusion / D. Navarro, P. Paz, L. Periera // Virology.- 1992. V. 186. - P. 99-112.

192. Neubauer, A. Analysis of the contributions of the equine herpesvirus 1 glycoprotein gB homolog to virus entry and direct cell-to-cell spread / A. Neubauer, B. Braun, C. Brandmeller, O.R. Kaaden, M. Osterrieder // Virology.- 1997.- V. 227. P. 281-294.

193. Nieuwenhuis, H.U.R. The eradication of Aujeszky's disease in the Netherlandes / H.U.R. Nieuwenhuis // Acta Get. Scand. 1988. - V.22. -P. 161-163.

194. Nokamura, T. A complement-dependent neutralising monoclonal antibody against glycoprotein II of pseudorabies virus / T. Nokamura, T. Ihara, T. Nagata, A. Ishihama, S. Ueda // Vet. Microbiol. 1990. - V.24. - P. 193198.

195. Pensaert, M. Round table on controle of Aujeszky s disease and vaccine development based on molecular biology / Pensaert M., Gielkens A.L.J., Lomniczi B., Kimman T.G., Vannier P., Eloit M. // Vet. Microbiol.- 1992.-V.33. -P. 53-67.

196. Pensaert, M.B. Extent and duration of virulent virus excretion upon challenge of pigs vaccinated with different glycoprotein- deleted Aujeszky s disease vaccines / M.B. Pensaert, K. De Smet, K. De Waele // Vet. Microbiol. -1990. V.22.-P. 1-11.

197. Pereira, L. Function of glycoprotein B homologues of the family herpesviridae / / L. Pereira / Infect. Agents. Dis. 1994. - V.3. - P. 9-28.

198. Petrovskis, E.A. Deletions in vaccine strains of Pseudorabies virus and their effect of synthesis of glicoprotein gp 63 / E.A. Petrovskis, J.G. Timmins, T.M. Giermann, L.E. Post, // J. Virol. 1986. - V.60. - P. 1166-1169.

199. Pol, J.M. Morphogehesis of three-pseudorabies virus strains in porcine nasal mucous / J.M. Pol, F. Wagenaar, A. Gielkens // Intervirology. 1991. - V.32. №6. - P. 327-337.

200. Post, L.E. Genetic engineering of the Pseudorabies virus genome to construct live vaccines / L.E. Post, D.R. Thomsen, E.A. Petrovskis, A.L. Meyer, P.J. Berlinski, R.C. Wardley // J. Reprod. Fert. 1990. - V.41. -P. 97-104.

201. Quint, W.G.V. Construction and characterization of deletion mutants of Pseudorabies virus a new generation of "live" vaccines / W.G.V. Quint, A.L.J. Gielkens, J.T. Van Oirshot, A.J.M. Berns, H.T. Cuypers // J. Gen. Virol. 1987. -V. 68. - P. 523-534.

202. Rauh, I. Pseudorabies virus mutants lacking the essentional glycoprotein gll can be complemented by glycoprotein gl of bovine herpesvirus 1 / I. Rauh // J.Virol. 1991.-V.65.-P. 621-631.

203. Rea, T.J. Mapping and sequence of the gene for the Pseudorabies virus glycoprotein which accumulates in of the infected cells / T.J. Rea, J.G. Timmins, L.E. Post // J. Virol. 1985. - V.54. - P. 21-29.

204. Robins, A.K. The gene encoding the g III envelope protein of Pseudorabies virus vaccine strain Bartha contains a mutation affecting protein localization / A.K. Robins, L.P. Ryan, M.E. Whealy, L.W. Enquist // J. Virol. 1988. -V.63. - P. 250-258.

205. Robins, A.K. Pseudorabies virus gene encoding glycoprotein gill is not essential for growth in tissue culture / A.K. Robins, M.E. Whealy, R.J. Watson, L.W. Enquist//J. Virol. 1986. - V.59. - P. 635-645.

206. Schreurs, Ch. Glycoprotein g III of Pseudorabies virus is multifunctional / Ch. Schreurs, T.C. Mettenleiter, F. Zuckerman, N. Sugg, T. Ben-Porat, // J.Virol. 1988. - V.62. - P. 2251-2257.

207. Scoda, R. Die Immunisierung von Scweinen mit vakzinen aus inactivierten Aujeszky virus / R. Scoda, G. Wittman // Zbe. Vet. Med. 1973. - Bd. 20, №2. -S. 127-138.

208. Spear, P.G. Entry of alphaherpesviruses into cells / P.G. Spear // Semin. Virol. 1993. - V.4. - P. 167-180.

209. Taft, A.C. The eradication of Aujeszky's disease in the United States / A.C. Taft // Proc. 16th International Pig Veterinary Society Congress. Melbourne. Australia, 2000. P. 559.

210. Thomsen, D.R. Replication and virulence of Pseudorabies virus mutants lacking glycoprotein gX / D.R. Thomsen, C.C. Marchioli, R.J. Yancey, L.E. Post // J.Virol. 1987. - V.61. - P. 229-232.

211. Torna, B. Etude dun nouveau vaccin a virus inactive et adjuve controla Maladie d Aujeszky' / B. Torna, J.F. Delagneau, R. Loguerie // Bull. Off. Int. Epiz. 1975. - V.85. - P. 223-237.

212. Traub, E. Cultivation of Pseudorabies virus / E. Traub // J. Exp. Med. 1993.- V.58. P. 663-681.

213. Valicek, L. Vliv kolostalni imunity na aktivni tvorbi profilatek u prasat po uplicaci inaktivovane vakciny proti Aujeszkyho chorobe (ACH) / L. Valicek,

214. E. Jurak, L. Rodak, B. Smid // Yeter. Med. (Praga). 1987. - V.32; №5. -P. 289-300.

215. Van der Valk, P.C. Efficacy of intradermal vaccination with Suvaxyn Aujeszky's i.n. / i.m. Suspended in Suvaxyn o/w emulsion / P.C. Van der Valk, Ph. Baudin, J.M. Blanchart // 12th Int. Pig. Vet Soc. Netherlands, 1992., Prog. 1 - P. 68.

216. Van Nes, A. No massive spread of pseudorabies virus in vaccinated sow herds / A. Van Nes, J.A. Stegeman, M.C.M. De Jong, W.L.A. Loeffen, T.G. Kimman, J.H.M. Verheijden // Vet. Microbiol. 1997. - V.55. - P. 147151.

217. Van Oirschot, J.T. Properties of g I-negative and companion diagnostic tests for the eradication of Aujeszky's disease / J.T. Van Oirschot // In: Proc. Ninety-Sixth Ann.Meeting of the United States Animal Health Association. -1992. P. 405-416.

218. Van Oirschot, J.T. The antibody response to glycoprotein g I and the control of Aujeszky's disease virus / J.T.Van Oirschot (Ed).// Vaccination and control of Aujeszky's disease. Kluwer Academic Publications. Dordrecht. 1989. -P. 129-138.

219. Van Oirschot, J.T. Antibody responce to glicoprotein I in maternaly immune pigs to a mildy virulent strain of pseudorabies virus / J.T. Van Oirschot,

220. F. Daus, T.G. Kimman, D. Van Zaane // Am J.Vet.Res. 1991. - V.52. -P. 159-163.

221. Van Oirschot, J.T. A novel concert for the control of Aujeszky's disease: experience in two vaccinated pig herds / J.T. Van Oirschot, J.M. Wijsmuller,

222. C.A.H. de Waal, P.M. Van Lith // Veterinary Record. 1990. - V.126. - P. 159163.

223. Vannier, P. Vaccination of pigs against Aujeszky s disease by the intrabermal routs live attenuated and inactivated virus vaccines / P. Vannier, R. Cariolet // Vet. Microbiol. 1991. - V.26; '/2 - P. 11-23.

224. Vannier, P. Level of virulent virus excreted by infected pigs previously vaccinated with different glycoprotein deleted Aujeszky s disease vaccines / P. Vannier, E. Hutet, E. Bourgueil, R. Cariolet // Vet. Microbiol. 1991. -V.29. - P. 213-223.

225. Vannier, P. Eradication and control programs against Aujeszky s disease (pseudorabies) in France / P. Vannier, F. Vedeau, C. Allemersch // Vet. Microbiol. 1997 - V. - 55; lA. - P. 167-173.

226. Viel, L. Plus be 300 pores a Iheure /L. Viel //Nouv. Agr. 1998. - V.- 74.-P. 36-38.

227. Visser, N. Vaccination strategies for improving the efficacy of programs to eradicate Aujeszky's disease virus / N. Visser // Vet. Microbiol. — 1997.- V.55.-P. 61-74.

228. Wijaska, T. Effect inactivation on polypeptide structure of transmissible gastroenteritis virus on its immunogenic properties / T. Wijaska // Bull. Vet. Inst. Pulawy. 1979.-V.23. - № 34. - P. 62-80.

229. Wittman, G. Spread and control of Aujeszky's disease / G. Wittman // Comp. Immun. Microbiol. Infect. Dis.-1991. V.14. - P.165-173.

230. O Wittman, G. ccurrence and reactivation of latent Aujeszky s disease virus following challenge in previously vaccinated pigs / G. Wittman, V. Oilinger, H.J. Rziha // Arch. Virol. 1983. - V. 75. - P. 29-41.

231. Wittman, G. Aujeszky's disease (Pseudorabies) in pigs / G. Wittman, HJ. Rziha // Herpesvirus disease in cattle. Horses and pigs (Ed. by. Wittman G.). Kluver, Boston. 1989. - P. 230-325.

232. На флаконы с компонентами набора наклеивают этикетки с указанием наименования и товарного знака организации-изготовителя, названия

233. Директор ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»41. А В.ИВАНОВ2008 г.1. АКТо проведении внутри институтских комиссионных испытаний эритроцитарного диагностикума, изготовленного на основе маркированного штамма ВБА, делеционного про гликопро'хеинуг. Казань1902.2008 г.

234. Комиссионные испытания проведены на базе лаборатории иммунологии 19 февраля 2008 года. В работе использовались:

235. Эритроцитарный диагностикум на основе маркированного штамма ВБА, делеционного про гликопротеину gE;

236. Эритроцитарный диагностикум на основе вакцины «Гаммавак-ВНИВИ» против болезни Ауески (радиоинактивированный антиген вируса БА штамм «Арский»);

237. Сыворотки крови крыс, вакцинированных двукратно с интервалом 21 день подкожно с использованием маркированной вакцины проти'в ВБА, делеционной по gE (ВНИИЗЖ, г. Владимир).

238. Сыворотки крови крыс, неиммунных к ВБА (контроль);

239. Сыворотки крови, специфичные к вирусу КЧС и инфекционного ринотрахеита (ИРТ) (гетерологичные контроли)

240. Определение активности и специфичности эритроц^тарных диагностикумов проводили в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА). Постановку реакции и учет результатов осуществляли согласно «Инструкции по применению.», утв. ГУВ КМ РТ 15.01.2007 г.

241. Результаты проведенных испытаний представлены в таблице

242. Результаты определения активности и специфичности эритроцитарного диагностикума. изготовленного на основе делеционного вируса БАп/п Исследуемые пробы РНГА

243. Контрольная неиммунная сыворотка №1 отр. отр. 4

244. Контрольная неиммунная сыворотка №2 отр. отр.

245. Гетерол. контроль (КЧС) отр. отр.

246. Гетеролог. контроль (ИРТ) отр. отр. 4

247. Проведенная работа подтверждает возможность создания эритроцитарных диагностикумов для РИГА с целью дифференциации постинфекционных и поствакцинальных антител.

248. Комиссия рекомендует одобрить проделанную работу и продолжить изыскания.

249. Подписи: Зав.отделом, д.в.н., профессор Зав.лаб. иммунологии, к.в.н.

250. B.н.с., д.б.н., профессор Государственный контролер, с.н.с.,к.в.н.

251. C.н.с., к.в.н. С.н.с., к.в.н. асп. асп.и //к1. Р.Х.Юсупов1. А.Н.Чернов1. Г.Х.Ильясова,1. Л.А.Барбарова,1. Ш.М.Насыров1. Д.Н. Латфуллин1. Н.Р.Мифтахов1. Г.Г.Идрисову

252. О проведении оценки эффективности вакцинопрофилактики классической чумы свиней и болезни Ауески у свинопоголовья в ООО СХП «Озерный» Высокогорского района Республики Татарстан

253. ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г.Казань) Лаборатория иммунологии- поросят 0-2 месячного возраста — 624 гол.,- поросят 2-4 месячного возраста — 315 гол.,- поросят группы откорма 620 гол.

254. Результаты исследований представлены в таблице.