Разработка технологии изготовления радиоинактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (псевдобешенства) и изучение ее эффективности в производственных условиях

Магсумов, Рустем Зуфарович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка технологии изготовления радиоинактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (псевдобешенства) и изучение ее эффективности в производственных условиях
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка технологии изготовления радиоинактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (псевдобешенства) и изучение ее эффективности в производственных условиях"

Пи примах, рукописи

Магсумов Рустем Зуфарович

Разработка технологии изготовления радиоинактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (псевдобешенства) и изучение ее эффективности в производственных условиях

03.00.07 - микробиология

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань - 2004

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (г. Казань).

Научный руководитель:

Заслуженный деятель науки РТ, доктор биологических наук, профессор Ильясова Гальфия Халиулловна

Научный консультант:

Заслуженный деятель науки РТ и РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Угрюмова Валентина Степановна

Официальные оппоненты:

Доктор ветеринарных наук, профессор Низамов Рамзи Низамович

Кандидат ветеринарных наук, доцент Сибгатуллин Рафаэль Сагидуллович

Ведущее учреждение:

Центр по охране здоровья животных (ВНИИЗЖ)

Защита состоится

заседании диссертационного совета Д-226.012.01 при Всероссийском научно-исследовательском ветеринарном институте (420075, г. Казань, Научный городок - 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (г. Казань).

Автореферат разослан «_/

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, л Л

ст. научный сотрудник

тгугт

В.И.Степанов

I Общая характеристика работ

Актуальность темы. Болезнь Ауески (псевдобешенство) Pseudorabies - является одним из наиболее распространенных вирусных заболеваний сельскохозяйственных и диких животных и наносит значительный экономический ущерб хозяйствам с развитым свиноводством (Сергеев В.А.,1993; Wittman G.et.al., 1989; Gustafson P.D., . 1970). Заболевание вызывается вирусом болезни Ауески (ВБА, Suicl Herpesvirus), относящимся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, род Varicellovirus (Мэрфи Ф.А., 1989). Летальный исход болезни наблюдается у поросят, у взрослых свиней сопровождается установлением длительного или пожизненного носительства вируса. Н определенных условиях латентный герпесвирус способен реактивироваться и животное вновь становится источником инфекции (Сергеев В.А., 1993; Моренков О.С., 2000; Wittman G.et.al., 1989; Pietzarka G., 1991).

Отход молодняка свиней и пушных зверей при проявлении заболевания достигает 80-90% (Щелчков П.И., 1990; Сюрин В.Н. и др., 1991; Мищенко В.А. и др., 1995; Норе Н, 1984; Barragry T.B., 1991; Lipowsky A., Pejsak Z., 1996). -

Создание иммунитета при болезни Ауески - очень сложный процесс (Лаптев Ю.В., Сергеев В.А., 1991). Гуморальный и клеточный иммунитет проявляется на 7-10 день после инфицирования или вакцинации животных, достигает пика через 30 дней и сохраняется в течение 5-6 месяцев (Сергеев В.А.,1993). Вакцинированные свиньи оказываются только частично защищенными и выделяют вирус при повторном инфицировании (Сергеев В.А., 1993; Thacker B.J. et.al., 1992).

Следует отметить, что и спустя 40 лет после начала разработки и множества предложенных вакцинных препаратов, проблема создания эффективных защитных препаратов остается весьма актуальной. Это обусловлено особенностями патологии, эпизоотологии и иммунологии герпесвирусных инфекций, среди которых необходимо выделить следующие определяющие требования к современным вакцинам против Б А: 1) способность герпесвирусов персистировать в макрофагах, лимфоцитах и нервных клетках, ингибировать их функции, повышать уровни IgE, простагландинов, стимулировать иммунопатологию, реакцию гиперчувствительности и оказывать на организм иммуносупрессивное действие; 2) латенция и персистенция ВБА в иммунном организме животного - экологическое свойство вируса, неразрывно связанное как с недостаточностью иммунной системы организма, обусловленное вирусом, так и экологическими факторами; 3) иммунопрофилактика снижает экономические потери от БА, но и порождает латентные формы и спорадическое течение, и распространение БА. Влияние вакцинации на

РОС. НАЦИОНАЛЬНА.-8ЦДЛ ПОТЕКА |

выделение, латентность и реактивацию ВБА, модификацию клинической картины болезни и спорадическое ее распространение определяют ужесточение требований к эффективности вакцин против болезни Ауески.

Исходя из этого, вирус болезни Ауески занимает особое положение среди агентов латентной персистенции и проблема разработки и оценки новых профилактических средств защиты является актуальной задачей.

Цель и задачи исследований. Целью исследования явилось экспериментальное изучение иммунобиологических свойств и научно-практическое обоснование эффективности применения

радиоинактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (в лабораторных и производственных условиях).

Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить возможность конструирования инактивированной вакцины для свиней на основе отбора облученных у-лучами вирулентного или вакцинного штаммов вируса болезни Ауески;

2. Изучить иммуногенную активность радиоинактивированной вакцины против болезни Ауески на свиньях в лабораторных условиях;

3. Установить условия применения радиоинактивированной вакцины с учетом сроков наступления иммунитета после одно- и двукратной вакцинации;

4. Оценить эффективность радиоинактивированной вакцины против болезни Ауески на свиньях в производственных условиях.

Научная новизна исследований. Впервые разработана технология изготовления инактивированной гамма лучами культуральной вакцины Таммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески. Получены экспериментальные данные об иммунобиологических свойствах инактивированной вакцины против болезни Ауески на свиньях различного возраста и на овцах. Установлена принципиальная возможность использования инактивированной вакцины против болезни Ауески для экстренной защиты сельскохозяйственных животных (свиньи и овцы) от болезни Ауески. Изучена продолжительность иммунитета у сельскохозяйственных животных при иммунизации инактивированной вакциной "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески.

Практическая ценность работы. На основании результатов экспериментальных исследований в лабораторных и производственных условиях разработана нормативно техническая документация на применение инактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ", которая утверждена начальником ГУВ КМ Республики Татарстан в 2001г.

Эффективность вакцинопрофилактики с положительными результатами проверена в комиссионных испытаниях с участием районных ветспециалистов РТ.

Практическая реализация разработок определена следующими нормативно-техническими документами:

- Методические рекомендации по изготовлению и применению радиоинактивированного антигена вируса болезни Ауески, утвержденные директором ВНИВИ 19 февраля 2002 года;

- Временное наставление по применению инактивированной сухой культуральной вакцины "Гаммавак- ВНИВИ" против болезни Ауески, утвержденные начальником Главного управления ветеринарии КМ Республики Татарстан 12 ноября 2001 года.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Технология изготовления радиоинактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (псевдобешенства);

2. Иммунобиологические свойства инактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески на различных видах животных;

3. Возможность использования инактивированной вакцины для экстренной защиты сельскохозяйственных животных (свиньи и овцы) от болезни Ауески;

4. Сроки наступления иммунитета и установление минимального уровня защиты поголовья против болезни Ауески с целью определения стратегии вакцинопрофилактики болезни Ауески.

Апробация работы. Результаты выполненных исследований доложены и обсуждены на отчетных сессиях ВНИВИ (2001-2004) на: международной научно-практической конференции, посвященной 45-летию создания ВНИИЗЖ "Актуальные вопросы патологии животных" (Владимир,2003); международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ФГУП «Щелковский биокомбинат» "Ветеринарная биотехнология: настоящее и будущее" (Щелково,2004) и объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург,2004).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации опубликованы в 6-ти печатных работах, в числе которых статья в журнале «Ветеринарная патология», "Временное наставление по применению сухой культуральной вакцины «Гаммавак-ВНИВИ» против болезни Ауески", "Методические рекомендации по изготовлению и применению радиоинактивированного антигена вируса болезни Ауески" и 2 работы сданы в редакцию журнала "Вопросы вирусологии".

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 133 страницах компьютерного текста. Состоит из введения, обзора литературы,

описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 18 таблицами. Указатель литературы содержит 210 отечественных и 120 иностранных источников.

II Материалы и методы исследований

Работа выполнена в лаборатории иммунологического контроля и мониторинга болезней свиней и лаборатории контроля и индикации возбудителей вирусных и хламидийных инфекций в объектах ветеринарного надзора ВНИВИ (г. Казань), № гос. Регистрации 01200202602 в 2001-2004 гг.

В качестве вируса использовали: вирулентный вирус болезни Ауески штамма "Производственный", имеющий типичную таксономическую характеристику, прошедший 14-18 пассажей на различных перевиваемых культурах клеток с активностью 7,75 - 8,0 ^ ТЦДзд/о.имЗ. вакцинный штамм вируса болезни Ауески "БУК-628" (ВНИВИ) ТУ 46-21-380-77, прошедший 19 пассажей на различных перевиваемых культурах клеток с активностью 6,75-7,25 ^ ТЦДзодМсмз; радиоинактивированный гамма излучением вирулентный штамм "Производственный" вируса болезни Ауески;

радиоинактивированный гамма излучением вакцинный штамм "БУК-628" вируса болезни Ауески.

Для отбора наиболее оптимального штамма вируса болезни Ауески использовали экспериментальную серию инактивированной вакцины Таммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески, изготовленную нами из штамма "Производственный" и экспериментальную серию инактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески, изготовленную нами из вакцинного штамма "БУК-628".

В качестве монослоя клеток использовали перевиваемые культуры клеток: невриномы гассерова узла крысы (НГУК-1); почек сирийского хомячка (ВНК-21); почек поросенка (РК-15); почек эмбрионов овец (ППЭО); почек эмбриона свиней (СПЭВ).

В работе использовали следующие иммунотропные препараты:

ксимедон (1,2-дигидро-4,6-диметил п- (р-оксоэтил) -пиримидон-2), синтезированный в Институте органической и физической химии (ИОФХ) имени А.Е.Арбузова КНЦ РАН РФ; полный адъювант Фрейнда (ПАФ), содержащий 0,85 см3 минерального масла, 0,15 см3 естественных восков, 1 мг/см3 убитых М. Tubeгculesis; ридостин, индуктор интерферона на основе натриевой соли дрожжевой двуспиральной РНК (дс РНК), производства "Вектор - Фарм" (Новосибирск); вакцинное масло - марки ПЭС ЗМ, ТУ-6-02-4-5-98.

В качестве экспериментальных животных служили: 8 белых мышей, 133 белых крыс, 30 кроликов, 11 овец, 244 поросят 30-60-90 - дневного возраста.

В работе использованы вирусологические, радиобиологические и статистические методы.

Вирус болезни Ауески выращивали в культуре клеток. При выращивании вируса болезни Ауески, сформировавшийся монослой и стационарных сосудах заражали вирусом в разведении 1:30 к исходному объему культуральной среды. Сосуды с зараженной культурой инкубировали при 37"С в течение 1-1,5 ч, затем добавляли среду Игла с 2% сывороткой крови плодов коров или сывороткой крови кур и продолжали инкубировать при 37±0,5 °С в течение 18-30 ч на культуре клеток НГУК-1 и 24-48 часов на культуре клеток ВНК-21, РК-15, ППЭО и СПЭВ. Инфекционную активность вируса оценивали по методу Рида и Менча и выражали в культуральных инфекционных дозах ^ ТЦДзо/о.1смЗ

Инактивацию вируса болезни Ауески проводили на гамма-установке «Исследователь», в которой источником ионизирующего излучения является радиоактивный изотоп

Полноту инактивации вируса проверяли на чувствительной культуре клеток невриномы гассерова узла крысы (НГУК-1) при нанесении на монослой клеток инактивированного антигена в цельном виде и в разведениях от 1:2 до 1:16 по 0,1 мл, после чего во флаконы вносили питательную среду (без сыворотки). На каждое разведение использовали 8 флаконов и не менее 4 оставляли незараженными в качестве контроля. Инкубировали в термостате при 37°С в течение 96 часов. Полное исключение размножения и цитопатогенного действия (ЦПД) вируса определяли путем трех последовательных пассажей инактивированного вируса.

Для приготовления инактивированной вакцины к инактивированному вирусному сырью добавляли 30% ксимедона, тщательно перемешивали и подвергали лиофилизации.

Контроль на стерильность общей пробы вакцины проводили в соответствии с ГОСТом 280085-89 «Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности». Вакцину считали стерильной при отсутствии роста микрофлоры в посевах.

Определение безвредности вакцинного препарата проводили на белых мышах, крысах, кроликах, овцах и поросятах. Для этого инактивированный и лиофилизированный вирус болезни Ауески ресуспендировали в стерильном физиологическом растворе и вводили подопытным животным по 0,3-3,0 см3 в дозе 150 мг/кг, что составило не менее 3 прививочных доз. За животными вели клиническое наблюдение в течение 21 дня, наблюдали за местной реакцией в месте инокуляции вакцины с измерением температуры тела.

Для оценки иммуногенности вакцины использовали неиммунных серонегативных к вирусу болезни Ауески поросят и подсвинков массой 25-65 кг, овец массой 45-50 кг, которых прививали внутримышечно двукратно в объеме 3 см3 с интервалом 14 и 21 день.

За животными в течение всего периода опытов вели клиническое наблюдение с термометрией, определением динамики синтеза специфических антител. Выборочно проводили исследования внутренних органов и головного мозга на вирусовыделение с использованием чувствительных культур клеток, иммуноферментного анализа (ИФА) и биопробы на кроликах.

Через 14, 21 сутки после вакцинации у всех иммунизированных животных индивидуально отбирали кровь и контролировали сыворотки на наличие антител к вирусу болезни Ауески в РВН, РНГА и ИФА. Обработку полученных результатов в ИФА и РНГА проводили согласно прилагаемым к тестам инструкциям. Вакцину считали иммуногенной, если титр антител не менее, чем у 80% вакцинированных животных через 14 и 21 сутки после вакцинации был не ниже, чем 3,5 в РВН и РНГА и 7,59,0 1ой2 в ИФА.

Контрольное заражение вирулентным вирусом болезни Ауески проводили через 7, 14 суток, а также через 1, 3, 6 месяцев после повторной иммунизации путем интрацеребрального или внутримышечного введения вируса в дозе 0,2x104'0 ЛДзо или 1,0x1040 ЛД50 (штамм «Производственный» Арский) соответственно.

Наблюдение за вакцинированными и зараженными животными вели в течение 30 дней, проводя ежедневную термометрию.

Реакцию вируснейтрализации (РВН) ставили по общепринятой методике на культурах клеток НГУК-1 при постоянной дозе вируса болезни Ауески, равной 100 ТЦЦ50 в 0,1 см3 (ГОСТ 257.53).

Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) ставили согласно "Методическим указаниям по применению набора препаратов для определения в РНГА специфических антител у свиней при болезни Ауески", утвержденным директором ВНИВИ академиком АН РТ Равиловым А.З. 24.11.1998г.

Иммуноферментный анализ (ИФА) для выявления специфических антител к вирусу болезни Ауески С1авили по методу Цибулькина А.П, Юсупова Р.Х. и др.(1998) с использованием антигенного пероксидазного конъюгата в соответствии с "Методическими указаниями по применению набора препаратов для оценки в ИФА эффективности вакцинопрофилактики и фармакологической коррекции иммунитета при болезни Ауески", утвержденным директором ВНИВИ академиком АН РТ Равиловым А.З. 29.06.1998 г.

Для обработки результатов исследований при сравнении показателей опытных и контрольных групп для каждого вариационного

ряда вычисляли среднее арифметическое значение (М), среднюю квадратичную ошибку (ошибку репрезентативности) (м), критерий достоверности (Р) определяли по таблице Стьюдента - Фишера по методике Ойвин И.А. (1960).

III Результаты собственных исследований и их обсуждение

1. Разработка технологии изготовления инактивированной вакцины против болезни Ауески

Для этого проводили отбор наиболее иммуногенного и генетически полноценного штамма вируса болезни Ауески. С этой целью мы изучали влияние ионизирующего излучения на антигенные и иммуногенные свойства вирулентного штамма «Производственный» (Арский) и вакцинного штамма «БУК-628». Учитывая предыдущие исследования по адаптации и репродукции вируса болезни Ауески на различных культурах клеток, проведенных в лаборатории иммунологии, для этих целей мы использовали известные данные и в свою очередь проводили дополнительный анализ культур клеток свиного и овечьего происхождения с целью дальнейшего сбора биомассы и изготовления инактивированной вакцины против болезни Ауески для свиней и овец. В этих же сериях опытов предполагались сравнительные исследования и отбор наиболее перспективного штамма вируса болезни Ауески для дальнейшего конструирования инактивированной вакцины. Исследования по изучению оптимальных условий размножения вакцинного («Производственный» Арский) и вирулентного («БУК-628») вируса болезни Ауески на различных культурах клеток проводили с использованием перевиваемых культур клеток невриномы гассерова узла крысы (НГУК -1). почек сирийского хомячка (ВНК-21), почек поросят (РК-15), почек эмбрионов овец (ППЭО) и почек эмбрионов свиней (СПЭВ). Выращивание клеток культур тканей и репликацию вируса проводили в стационарных \ словиях инкубацией при 37±0,5°С.

Проведенные исследования по сравнительной оценке чувствительности клеток к вирусу болезни Ауески показали, что наивысший инфекционный титр вируса болезни Ауески штамма «Производственный» регистрировался на культурах клеток НГУК-1, ППЭО и СПЭВ. В этих же культурах в процессе репликации вакцинный штамм вируса, болезни Ауески, достигал титра 7,0-7,75 ^ ТЦД 5«л.М1. Однако, представленные данные в то же время показывают о необходимости разного времени для репродукции и накопления вируса в высоких титрах. Так, вирус в культуре клеток НГУК-1 накапливался к 1820 ч в титре 8,0 ^ ТЦДзо/шЗ, а в культурах ППЭО, СПЭВ, ВНК-21 и РК-15 вирус достигал титра 7,25-6,25 ^ ТЦД5о/шз к 48 ч инкубации. Это

показывает, что из исследованных культур клеток наиболее чувствительными и перспективными являются НГУК-1, ППЭО и СПЭВ.

На основании вышеизложенного можно заключить, что для репликации и накопления вируса болезни Ауески вирулентного и вакцинного штаммов пригодны в различной степени культуры клеток НГУК-1, ППЭО и СПЭВ, требующие 18-20 и 48-72 ч инкубации вируса для необходимого выхода и сбора его биомассы.

Эти данные позволили использовать в опытах для накопления вирусного материала штаммы «Производственный» и «БУК-628» в установленном режиме культивирования.

Определение порога радиочувствительности вируса штаммов «Производственный» и «БУК-628» проводили на установке «Исследователь». С этой целью взятые в опытах образцы вирусрепликации штаммов инактивировали при режиме экспозиции от 5 до 35 кГр. Установлено, что гамма-облучение в дозе 25-30 кГр обеспечивает полную инактивацию вирулентности вирионов независимо от видовой принадлежности культур клеток, на которой репродуцировались вирулентный и вакцинный штаммы вируса болезни Ауески. Эти результаты согласуются с данными, полученными Юсуповым Р.Х.(1988), Цибулькиным А.П. и др. (1999), Сафиным М.В. (2002) и расширяют спектр культур клеток различного видового происхождения, на которых удается получать вирусную биомассу с высоким титром инфекционности. Данные представлены в табл. 1.

Таблица 1 - Радиочувствительность вируса болезни Ауески штаммов «Производственный» и «БУК-628»_

Доза гамма-облучения кГр Штаммы вируса Титрование вируса на культурах клеток, ^ ТЦЦ50/СМЭ

НГУК-1 ППЭО СПЭВ ВНК-21 РК-15

До облучения «Производственный» 8,0 7,75 7,75 6,75 6,50

«БУК-628» 7,75 7,25 7,0 6,50 6,25

10 «Производственный» 5,25 5,0 5,0 4,75 4,75

«БУК-628» 5,0 4,75 4,5 4,5 4,0

20 «Производственный» 3,0 2,75 2,75 2,5 2,5

«БУК-628» 2.75 2,25 2,25 2,0 2.0

25 «Производственный» 0 0 0 0 0

«БУК-628» 0 0 0 . 0 0

Определение полноты инактивации радиооблученною вируса болезни Ауески проверяли на чувствительной культуре клеток невриномы гассерова узла крысы (НГУК-1). Для полного исключения размножения вируса и отсутствия цитопатогенного действия проводили второй и третий пассажи.

Результаты исследований показали, что во всех трех «слепых» пассажах радиоинактивированный вирус не реплицировался и не вызывал цитопатогенного действия в монослое. Это указывало на отсутствие живого вируса.

Серологическую (антигенную) активность радиоинактиви-рованного вируса исследовали в иммуноферментном анализе.

Анализ данных показал, что наиболее выраженной антигенной активностью обладал радиоинактивированный антиген вируса болезни Ауески, штамм «Производственный» и достигал значений и

671 ±64. Вакцинный вирус болезни Ауески штамм «БУК-628» по антигенности уступал вирулентному штамму независимо от вида культуры клеток, в которой реплицировался и достигал значений

Инактивация и лиофилизация не оказывали существенного влияния на антигенную активность вакцины, что выразилось недостоверной разницей между титрами антигена до инактивации, до лиофилизации и после этих манипуляций.

Безвредность радиоинактивированного вируса проверяли на взрослых белых мышах, крысах, кроликах и поросятах. Для этого инактивированный и лиофилизированный вирус штаммов «Производственный» и «БУК-628» болезни Ауески ресуспендировали в стерильном физиологическом растворе и вводили подопытным животным по 0,3-3,0 см в дозе 150 мг/кг, что составило не менее 3 прививочных доз. За животными вели клиническое наблюдение в течение 21 дня, наблюдали за местной реакцией в месте инокуляции вакцины с измерением температуры тела у кроликов и поросят. При определении безвредности 3-х экспериментальных серий радиоинактивированной вакцины общее физиологическое состояние животных и температура тела были в пределах нормы, и не выявлено местной реакции на инъекцию вакцины.

Исследованиями установлено, что высокочувствительные к возбудителю болезни Ауески животные в течение указанного срока наблюдения не заболели, что подтверждает безвредность и полную инактивацию вируса. Опыты по выделению вируса на чувствительных культурах клеток (1-3 пассажа) и биопробой на кроликах были отрицательны.

Изготовление и изучение иммуногеиной активности радиоинактивированной вакцины в экспериментальных условиях

Разработка оптимальных режимов культивирования эпизоотического и вакцинного штаммов вируса болезни Ауески, режимов инактивации инфекционности вируса путем гамма-облучения, установление сохранения антигенной и иммуногенной активности вирионов, а также безвредность радиоинактивированного вируса позволили разработать технологию изготовления радиоинактивированной вакцины «Гаммавак-ВНИВИ», которая при контроле на белых крысах, кроликах и овцах оказалась безвредной, ареактогенной, не обладающей аллергезирующими свойствами. При этом нами установлено, что для конструирования инактивированной вакцины может быть с успехом использован эпизоотический вирус штамма «Производственный» (Арский).

При оценке иммуногенности радиоинактивированной вакцины в лабораторных условиях на чувствительных животных установлено, что однократное введение вакцинного препарата, изготовленного на основе гамма-инактивированного вируса штамма «Производственный», при контрольном заражении обеспечивает защиту от заболевания 79,7% крыс, а при ревакцинации эта цифра достигает 91,3%. При применении же инактивированного вакцинного препарата, изготовленного на основе гамма-облученного вакцинного вируса штамма «БУК-628», защита от заболевания болезнью Ауески достигала 73,1% белых крыс.

Заключительный отбор штамма вируса для заложения в основу технологии изготовления вакцины и ее иммуногенность изучали путем исследования устойчивости привитых животных к контрольному заражению вирулентным вирусом болезни Ауески штамма «Производственный» (Арский).

Для подбора качественного иммуностимулятора с целью повышения иммуногенности радиоинактивированной вакцины против болезни Ауески использовали средства различного класса: ксимедон, полный адъювант Фрейнда, ридостин и вакцинное масло.

В опытах использовали белых крыс и кроликов, разделенных на группы по видам изучаемых стимуляторов иммуногенеза.

Определение титров специфических антител проводили в РИГА и ИФА через 2 недели после первой и второй иммунизации опытных животных.

Полученные данные показали, что специфические антитела к вирусу болезни Ауески были выявлены у белых крыс, иммунизированных инактивированным вакцинным препаратом с адъювантами в титрах, превышающих контрольные данные в РИГА -1,4-1,8 раза, в 11ФА 2,8-2,9 раза. Такая же закономерность наблюдалась и у кроликов. Так, при однократной их вакцинации с иммунотропными препаратами титры

специфических антител у опытных животных превышали и ИИ Л и 2 раза, в ИФА - в 2,9 раза.

Повторное введение антигена с адъювантами стимулировало более высокую иммуногенность антигена. Гак, через 2 недели послее иммунизации, титр антител у кроликов, иммунизированных вакциной с адъювантами, превышал таковые у контрольных животных в РНГЛ - 2,9 раза и в ИФА - 4,4 раза.

В опытах отмечено существенное различие адъювантных свойств ксимедона, ПАФ и ридостина по сравнению с вакцинным маслом. При этом титр антител в сыворотке крови кроликов, регистрированных в иммуноферментном анализе, превышал в 2,5 раза таковые, полученные при введении вакцины с вакцинным маслом. На белых крысах существенных различий не было выявлено.

Наиболее перспективными иммуностимуляторами, играющими защитную роль в паре с инактивированной вакциной при наступлении ранней защиты животных от болезни Ауески, оказались ксимедон и ридостин, характеризующиеся интерфероногенностью.

Для окончательного отбора наиболее перспективного штамма вируса болезни Ауески проводили определение сроков наступления иммунитета после одно- и двукратной вакцинации, а также контроль напряженности иммунитета в различные сроки после прививки. Для этого использовали 20 поросят 30-45-дневного возраста, полученных из благополучных по инфекционным болезням хозяйств. Животных (8 гол) вакцинировали по 3 см3 внутримышечно в область шеи, за ухом в дозе 50 мг/кг инактивированной вакциной на основе штамма

«Производственный» (I и II группы), 8 голов (III и IV группы) -инактивированной вакциной на основе штамма «БУК-628» и 4 головы служили контролем. Схема иммунизации включала двукратную вакцинацию с интервалом в 14 дней (I и III группы) и 21 день (II и IV группы). Клиническое наблюдение и определение антител в крови вели в течение от 3 до 21 дня после первой иммунизации и от 3 до 180 дней после второй иммунизации животных. Через 14 дней после второй вакцинации поросят из каждой группы, а также контрольных заражали вирулентным вирусом штамма «Производственный» (Арский). Оставшихся подопытных животных всех 4-х групп и контрольных особей инфицировали вирулентным вирусом болезни Ауески через 6 месяцев после окончания иммунизации и вели наблюдение в течение 1 месяца после заражения.

Опыты показали, что оба варианта инактивированных гамма-лучами вакцинных препарата при болезни Ауески индуцировали в организме привитых поросят образование антител, в различных титрах выявляемых в серологических реакциях. Двукратная вакцинация животных с интервалом 14 дней приводила к подъему титра антител до требуемого уровня лишь

на 30-е сутки. А двукратная вакцинация с интервалом 21 день позволяла выработку антител в сыворотке крови поросят в титрах, превышающих минимальный уровень защиты, уже на 7-е сутки, что указывало на возможность экстренной защиты животных при болезни Ауески. В процессе дальнейших исследований установлено, что титры антител в течение 6 месяцев после вакцинации не снижались. При этом 100% вакцинированных животных, подвергнутые инфицированию в указанные сроки (табл. 2), противостояли контрольному заражению, не вакцинированные животные пали от заражения болезнью Ауески на 7-14 сутки.

Таблица 2 - Иммуногенность инактивированной гамма-лучами сухой культуральной вакцины «Гаммавак-ВНИВИ» против болезни Ауески

Кол-во ж-х в группе

Характер воздействия

Наименование экспериментальной вакцины

Заражающая доза вируса

Результат заражения

Кол-во зараж-х / кол-во павших

Кол-во иммунных (%)

Экспериментальная радиоинактивиро ванная

вакцина на основе вируса болезни Ауески,

штамм «Производственный» с иммуностимулятором ксимедоном

0,2х104 ЛД50

и/ц или 1,ОХЮ4ЛД5О в/м

¡/0

100

Экспериментальная радиоинактивированная

вакцина на основе вируса болезни Ауески,

штамм «БУК - 628» с иммуностимулятором ксимедоном

-II-

8/1

87,5

Не вакцинированные

-И-

4/4

Анализ данных подопытных животных, иммунизированных инактивированной вакциной на основе штамма вируса «БУК-628» показал, что в этой серии опытов 87,5% животных противостояли контрольному заражению, произведенному через 14 дней и 6 месяцев.

Проведенные нами сравнительные исследования вакцинных препаратов показали, что наиболее антигенной, иммуногенной оказалась радиоинактивированная вакцина, изготовленная на основе эпизоотического штамма вируса болезни Ауески. Это обусловлено, по-видимому, определенной организацией генома эпизоотического штамма

возбудителя, его генетической полнотой представительств антигенной структуры.

Для оценки иммуногенной активности радиоинактивированной вакцины, изготовленной на основе инактивированного вируса болезни Ауески штамма «Производственный» с иммуностимулятором ксимедоном, использовали овец живой массой 40-45 кг в количестве 11 голов. Вакцину вводили внутримышечно с интервалом 14 (I группа п=4) и 30 дней (II группа п=4) в дозе 50 мг/кг в двукратной повторности. 3 головы служили контролем. Титр антител определяли в РВН, РИГА и ИФА в течение от 3 до 30 дней после I иммунизации и от 3 до 180 дней после II иммунизации животных.

После второй вакцинации по 2 головы овец из каждой группы (I и II) и контрольных животных через 14 дней заражали вирулентным вирусом штамма «Производственный» (Арский) в дозе 0,2 х 104 ЛД50 интрацеребрально или 1,0 х внутримышечно. Оставшихся овец

обеих групп по вариантам опыта и контрольных животных через 6 месяцев после окончания иммунизации инфицировали вирусом болезни Ауески в соответствующих дозах, вели наблюдение и термометрию в течение 1 месяца после заражения.

Опыты показали яркую иммунологическую реактивность овец к введению радиоинактивированной вакцины. При этом титры антител, выявленные серологическими реакциями, в несколько раз превышали минимальный уровень данных при болезни Ауески, полученных на свиньях. Титры специфических антител в сыворотке крови овец на 7 день после однократной иммунизации вакцинным препаратом составляли

Двукратная вакцинация животных (I группа) с интервалом 14 дней приводила к высокому подъем) титра антител до 1:63,9±6,<4; 1:209,9±26,4; 1:62,9±3,8, выявляемых в РИГА, ИФА и РВН уже на 7-й день после прививки. А у двукратно вакцинированных овец с интервалом в 30 дней между прививками титры антител относительно были ниже. При этом титры антител в сыворотке крови у этих животных на 7 день после иммунизации составил 1:198,4±17,2; 1:51,4±2,4, выявляемых в РНГА, ИФА и РВН соответственно. Дальнейшие наблюдения (в течение 180 дней) за привитыми животными обеих групп с разными интервалами введения вакцины показали, что титры антител в I группе, где животные получали вакцину двукратно с интервалом в 14 дней, не подвергались резкому снижению их уровня в крови И составляли 1:31,4±2,1 в РНГА, 1:288,9±19,4 в ИФА и 1:30.4±!,9 в РВН (р<0,05).

Через 14 и 180 дней после второй иммунизации животные были заражены вирулентным вирусом болезни Ауески. Все вакцинированные овцы противостояли контрольному заражению. При этом можно отметить.

что показатели титров антител, при которых овцы противостояли контрольному заражению вирулентным вирусом болезни Ауески на 180-й день исследований, составили в РВН 1:30,4±1,9 (I группа) и 1:21,6±1,4 (II фуппа).

Результаты исследований подтвердили интересную закономерность влияния интервала введения инактивированной вакцины овцам. Так, титры антител, накапливающиеся в кровяном русле у животных, иммунизированных с интервалом в 14 дней, в 2 - 3 раза превышали минимальный уровень защиты таковых у животных, иммунизированных в отдаленные сроки (через 30 дней) Эти данные, подтвержденные 100%-ной выживаемостью овец при их заражении вирусом болезни Ауески через 14 и 180 дней, показывают, что радиоинактивированная вакцина может обеспечить экстренную защиту животных от этой инфекции.

2. Испытание иммуногенной активности радиоинактивированной вакцины «Гаммавак — ВНИВИ» против болезни Ауески в производственных условиях

Для испытания иммуногенной активности вакцины против болезни Ауески и определения сроков наступления иммунитета использовали 240 поросят в возрасте 30 и 60 дней. Животных обеих групп (I и II) вакцинировали двукратно через 21 день, согласно наставлению по применению. Животных аналогичных возрастных групп (III и IV) -вакциной ВГНКИ также согласно наставлению.

В ходе исследований было привито 240 поросят 30 и 60 - дневного возраста. Наблюдение за животными вели в течение 6 месяцев после прививки. Исследования показали, что радиоинактивированная вакцина против болезни Ауески безвредна и иммуногенна. От момента прививки и по срокам наблюдения среди поросят, привитых в возрасте 30 и 60 дней видимых клинических отклонений от нормы не отмечено. Однократная вакцинация поросят в этом возрасте сопровождалась индукцией поствакцинальных антител. Средние титры антител через 21 день в РНГА составляли 1:8, в ИФА 1:69,4±19,7. Результаты исследований представлены в табл. 3.

Двукратная вакцинация поросят, привитых в возрасте 30 дней, сопровождалась повышением уровня специфических антител до в РНГА и до 1:216±24,8 в ИФА, который сохранялся до 6 месяцев после вакцинации, несколько снижаясь к концу срока наблюдения (в РНГА -

1:18,4±1,4 и в ИФА 1:196,8±16,4).

Прививка поросят в 60 дневном возрасте с двукратным введением вакцины обеспечивала более интенсивную иммунологическою реакцию организма животных. При этом титры антител повышались до в

РИГА и до 1:256,8±24,6 в ИФА, что указывала на наиболее благоприятный возраст поросят для их иммунизации.

Таблица 3 - Иммуногенная активность радиоинактивированной вакцины «Гаммавак - ВНИВИ» в производственных условиях

ИФЛ

196.ХГ1 16.4 ! 228.4± | 21.4 I 126.91 | 12.4 148.7* !

14.4 |

-1

I I

Таким образом, проведенные исследования и полученные результаты свидетельствуют о том, что вакцина, изготовленная из вирулентного штамма возбудителя болезни Ауески («Производственный» Арский), инактивированная радиоизлучением 60Со, при иммунизации в объеме 3,0 см3 вызывает синтез специфических антител в количестве. обеспечивающем защиту привитых животных уже на 14-й день прививки. Изучение сроков наступления иммунитета и установление минимального уровня защиты поголовья свиней в возрасте 30 и 60 дней открывают перспективу применения инактивированной вакцины и определяют стратегию эффективности вакцинопрофилактики болезни Ауески. Исследования указывают, что для успешной иммунизации поросят с месячного возраста их необходимо повторно вакцинировать через 30 суток. Вакцина безвредна, экологически безопасна и ареактогенна.

При оценке напряженности иммунитета и эффективности вакцины исследовали устойчивость привитых животных к контрольному заражению вирулентным вирусом болезни Ауески. Контрольное заражение

(обратные значения)

,Группы животных

Кол-во ж-х

11аимено-вание вакцин

Сроки наблюдения и жфы аши 1сл

14 дней

РИГА

ИФА

1 - 3 месяца

РИГА

ИФА

6 мес

РНГА

I группа (30 дн.)

«Гаммавак-ВНИВИ»

28,9± 3,4

216± 24,8

17.8± 1.9

222± 23,7

18,4± 1,4

II группа (60 дн.)

«Гаммавак-ВНИВИ»

30,4± 2,7

256,8± 24,6

22,4± 2,1

236,9± 24,6

21,4± 1,6

III группа (30 дн.)

ВГНКИ

16,4± 2.7

186,9± 24,7

15,4± 1.7

114,8± 10,9

12,4± 1,9

IV группа (60 дн.)

V группа (не вакц.-ванные)

ВГНКИ

17,9± 2,9

205,4± 21,5

14,7± 1,1

124,8± 11,4

14,3± 1,1

вакцинированных животных вирулентным вирусом штамма «Производственный» в дозе 1,0 X 10 ЛД5(|/1Мч объемом 1 см3 производили внутримышечно через 14 дней и 1, 3 и 6 месяцев после вакцинации в условиях института. В качестве контроля использовали 4 головы невакцинированных поросят (V группы), которые пали на 7 - 14 день после заражения.

Таблица 4 - Результаты производственных испытаний эффективности инактивированной вакцины против болезни Ауески_

Группы и возраст жив-х Кол-во жив-х Наименование вакцин Кол-во зараж-х / кол-во павших Напряженность иммунитета по срокам исследований (%)

14 дней 1-6 мес 14 дней 1-6 мес

I гр (30 дн.) 52 «Гаммавак-ВНИВИ» 11/3 11/2 72,8 84,7

Игр (60 ДН.) 64 «Гаммавак-ВНИВИ» ' 13/2 13/1 84,7 92,4

III гр (30 дн.) 52 ВГНКИ 12/4 12/3 66,7 75,0

IV гр (60 ДН.) 64 ВГНКИ 12/4 12/3 66,7 75,0

Уф (не вакц.) 4 - 4/4 4/4 0 0

Как видно из результатов исследований (табл. 4), вакцинация радиоинактивированной вакциной против болезни Ауески поросят 30 и 60- дневного возраста, которые составляют наиболее уязвимое звено в технологической схеме ведения свиноводства, обеспечивала выработку полноценного иммунитета у этой группы животных. Так, контрольное заражение вирулентным вирусом привитые животные выдержали в 84,7 и 92,4 % случаях.

Таким образом, испытания «Инактивированной сухой культуральной вакцины «Гаммавак - ВНИВИ» против болезни Ауески (псевдобешенства)» показали, что разработана и получена высокоиммуногенная, экологически безопасная инактивированная гамма-облучением вакцина, применение которой в сочетании с отечественным иммуностимулятором ксимедоном создает напряженный иммунитет у 84,7 и 92,4 % привитых животных.

Определение стабильности иммуногенных свойств вакцины в процессе хранения является важным критерием оценки качества

вакцинных препаратов. С этой целью вакцину хранили в лиофилизированном виде при

Антигенные и иммуногенные свойства радиоинактивированнои вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески определяли на белых крысах с использованием РВН и ИФА через 6, 12, 18, 24 и 30 месяцев хранения (срок наблюдения).

В результате проведенных опытов установлено, что титры антител в сыворотке крови белых крыс после их иммунизации радиоинактивированнои вакциной, хранившейся при температуре +4°С в течение указанных сроков, практически не изменялись. Аналогичные данные получены при хранении радиоинактивированнои вакцины при температуре минус 20°С.

Таким образом, в течение длительного хранения радиоинактивированная вакцина Таммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески не теряла свою антигенную и иммуногенную активность.

IV Выводы

1. Использование перевиваемых культур клеток невриномы Гассерова узла крысы (НГУК-1) и почек эмбрионов овец (ППЭО) обеспечивает получение полноценного технологического сырья (вируссодержащего материала) с максимальным выходом конечного продукта.

2. Полная инактивация вирулентного и вакцинного штаммов вируса болезни Ауески с сохранением антигенных и иммуногенных свойств вирионов достигается при облучении их гамма-лучами при поглощенных дозах 25-30 кГр.

3. Установленные экспериментальным путем оптимальные условия культивирования отобранного тест-штамма вирулентного вируса и режимы радиоинактивации легли в основу разработанной нами технологии изготовления радиоинактивированнои вакцины для специфической профилактики болезни Ауески.

4. Согласно разработанной технологии изготовлены экспериментальные серии радиоинактивированнои сухой культ\ральной вакцины «Гаммавак-ВНИВИ» против болезни Ауески и испытаны на различных видах животных.

5. Испытание полученной радиоинактивированнои вакцины на лабораторных (белые мыши, крысы) и сельскохозяйственных (мелкий рогатый скот, свиньи) животных показали ее ареактогенность, экологическую безопасность и высокую иммуногенную активность.

6. Использование радиоинактивированнои вакцины и иммуностимулирующих препаратов ридостина и ксимедона, обладающих свойствами интерфероногенов, позволяют достигнуть у вакцинированных животных ранней иммунологической защиты их при болезни Аусски

7. Двукратное внутримышечное введение радиоинактивированной вакцины «Гаммавак-ВНИВИ» поросятам 30- и 60-дневного возраста в дозе 3,0 см3 обеспечивает 84,7-92,4 %-ную защиту их в течение 6 месяцев от летального заражения вирулентным вирусом возбудителя болезни Ауески штамма «Производственный».

8. Разработана технология изготовления опытных серий радиоинактивированной вакцины «Гаммавак-ВНИВИ», которые прошли успешные производственные испытания в хозяйствах Республики Татарстан.

9. На основании полезной эффективности, иммуногенности, экологической безопасности радиоинактивированная вакцина, рекомендована для применения в репродуктивных хозяйствах в угрожаемой и не благополучной зонах по болезни Ауески.

V Практические предложения

Для практической реализации полученных результатов разработаны следующие нормативно-технические документы:

1. «Методические рекомендации по изготовлению и применению радиоинактивированного вируса болезни Ауески», утвержденные директором ВНИВИ "19" февраля 2002 года;

2. «Временное наставление по применению инактивированной сухой культуральной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески», утвержденные начальником Главного управления ветеринарии КМ Республики Татарстан "12" ноября 2001 года.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Магсумов Р.З., Ильясова Г.Ф., Угрюмова B.C., Ильясова Г.Х., Гильмутдинов Р.Я., Конюхов Г.В., Кузнецова Е.А. Получение и оценка иммуногенности сухой культуральной инактивированной гамма-лучами вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (псевдобешенства) // Современные достижения и проблемы клеточной биотехнологии и иммунологии в вет. медицине / Ветеринарная патология №1(5).-2003.-С.117-119.

2. Ильясова Г.Ф., Цибулькин А.П., Угрюмова B.C., Юсупов Р.Х., Латфуллин Д.Н., Ильясова Г.Х., Магсумов Р.З. Иммунобиологическая характеристика инактивированной гамма-лучами вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески // Материалы международной научной конференции, посвященной 45-летию ФГУ "ВНИИЗЖ" (30-31 октября 2003г.).-Владимир,2003.-С.420-422.

3. Магсумов Р.З., Ильясова Г.Ф., Цибулькин А.П., Угрюмова B.C., Ильясова Г.Х., Юсупов Р.Х. Инактивированная -лучами

вакцина против псевдобешенства // Иммунопатология.: тезисы докладом объединенного иммунологического форума (31 мая - 4 июня 2004г.). Russian Journal of Immunology (г.Екатеринбург).-Volume 9, S. 1.-2004.-P.335.

4. Юсупов Р.Х., Цибулькин А.П., Ильясова Г.Ф., Угрюмова B.C., Ильясова Г.Х., Гафарова A3., Магсумов Р.З. Эффективность экстренной профилактики герпетической инфекции с использованием стимулятора и составе радиоинактивированной вакцины // Ветеринарная биотехнология: настоящее и будущее / Материалы международной научно-практической конференции посвященной 80-летию ФГУП "Щелковский биокомбинат" (20-23 сентября 2004г.).- Щелково.-2004.-С.100-103.

5. Магсумов Р.З., Угрюмова B.C., Ильясова Г.Х., Цибулькин А.П., Конюхов Г.В., Латфуллин Д.Н., Ильясова Г.Ф. Антигенная активность инактивированного вируса болезни Ауески на различных видах животных // В ПЕЧАТИ.-2004.

6. Магсумов Р.З., Латфуллин Д.Н., Ильясова Г.Ф. Угрюмова B.C.. Ильясова Г.Х. Контроль репродукции вируса болезни Ачески на различных клетках в МКА-ИФА тесте // В ПЕЧАТИ.-2004.

Подписано к печати £ 1%. О ty Заказ 3 / f Тираж 160 ЭКЗ.

Бумага офсетная

Формат 60x84/16 Усл.-печ. л. Печать RISO

Центр информационных технологий КГАВМ 420074, Казань, Сибирский тракт, 35.

»--285

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Магсумов, Рустем Зуфарович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Краткая характеристика возбудителя болезни Ауески.

2.2. Биология вируса. Новые данные об антигенной структуре, полипептидном составе. 2.3. Средства профилактики болезни Ауески.

2.4. Методы изготовления инактивированных вакцин против болезни Ауески.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы.

3.2. Методы исследования.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Разработка технологии изготовления инактивированной вакцины против болезни Ауески.

4.1.1. Выбор клеточной системы и штамма вируса болезни Ауески. ^

4.1.2. Изучение влияния ионизирующего излучения на антигенные и иммуногенные свойства вакцинного и вирулентного штаммов вируса болезни Ауески.

4.1.2.1. Определение порога радиочувствительности различных культур клеток, инфицированных вирусом болезни Ауески.

4.1.2.2. Определение полноты инактивации радиооблученного вируса болезни Ауески.

4.1.2.3. Определение серологической (антигенной) активности радиоинактивированного вируса.

4.1.2.4. Определение безвредности радиоинактивированного вируса.

4.2. Изучение иммуногенной активности вакцинного препарата в экспериментальных условиях.

4.2.1. Отбор штаммов вируса болезни Ауески для конструирования инактивированной вакцины для поросят.

4.2.1.1. Подбор качественного иммуностимулятора для повышения иммуногенности радиоинактивированной вакцины против болезни Ауески.

4.2.2. Определение сроков наступления иммунитета после одно- и двукратной вакцинации. Контроль напряженности иммунитета в различные сроки после прививки.

4.2.3. Оценка иммуногенности радиоинактивированной вакцины на овцах.

4.3. Испытание иммуногенной активности радиоинактивированной вакцины "Гаммавак - ВНИВИ" против болезни Ауески в производственных условиях.

4.3.1. Определение сроков наступления иммунитета после двукратной вакцинации свиней.

4.4. Определение эффективности инактивированной вакцины "Гаммавак - ВНИВИ" против болезни Ауески.

4.4.1. Контроль напряженности иммунитета после прививки свиней

4.5. Изучение стабильности иммуногенных свойств вакцины в ^ процессе хранения.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

6. ВЫВОДЫ.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка технологии изготовления радиоинактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (псевдобешенства) и изучение ее эффективности в производственных условиях"

1.1.Актуальность темы. Болезнь Ауески (псевдобешенство) Pseudorabies - является одним из наиболее распространенных вирусных заболеваний сельскохозяйственных и диких животных и наносит значительный экономический ущерб хозяйствам с развитым свиноводством (Сергеев В.А.,1993; Wittman G.et.al., 1989; Gustafson P.D., 1970). Заболевание вызывается вирусом болезни Ауески (ВБА, Suid Herpesvirusl, относящимся к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, род Varicellovirus (Мэрфи Ф.А., 1989). Летальный исход болезни наблюдается у поросят, у взрослых свиней сопроваждается установлением длительного или пожизненного носительства вируса. В определенных условиях латентный герпесвирус способен реактивироваться и животное вновь становится источником инфекции (Сергеев В. А., 1993; Моренков О.С., 2000; Wittman G.et.al., 1989; Pietzarka G., 1991).

Отход молодняка свиней и пушных зверей при проявлении заболевания достигает 80-90% (Щелчков П.И., 1990; Сюрин В.Н. и др., 1991; Мищенко В.А. и др., 1995; Норе Н., 1984; Barragry Т.В., 1991; Lipowsky А., Pejsak Z., 1996).

Следует отметить, что и спустя 40 лет после начала разработки и множества предложенных вакцинных препаратов, проблема создания эффективных защитных препаратов остается весьма актуальной. Это обусловлено особенностями патологии, эпизоотологии и иммунологии герпесвирусных инфекций, среди которых необходимо выделить следующие определяющие требования к современным вакцинам против БА: 1) способность герпесвирусов персистировать в макрофагах, лимфоцитах и нервных клетках, ингибировать их функции, повышать уровни 1§Е, простагландинов, стимулировать иммунопатологию, реакцию гиперчувствительности и оказывать на организм иммуносупрессивное действие; 2) латенция и персистенция ВБА в иммунном организме животного - экологическое свойство вируса, неразрывно связанное как с недостаточностью иммунной системы организма, обусловленное вирусом, так и экологическими факторами; 3) иммунопрофилактика снижает экономические потери от БА, но и порождает латентные формы и спорадическое течение, и распространение БА. Влияние вакцинации на персистенцию возбудителя инфекции, клиническую картину болезни и широкое ее распространение определяют ужесточение требований к эффективности вакцин против болезни Ауески.

1.2.Цели и задачи исследований. Целью исследования явилось экспериментальное изучение иммунобиологических свойств и научно-практическое обоснование эффективности применения радиоинактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (в лабораторных и производственных условиях).

Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:

- определить возможность конструирования инактивированной вакцины для свиней на основе отбора облученных у-лучами вирулентного или вакцинного штаммов вируса болезни Ауески;

- изучить иммуногенную активность радиоинактивированной вакцины против болезни Ауески на свиньях в лабораторных условиях;

- установить условия применения радиоинактивированной вакцины с учетом сроков наступления иммунитета после одно- и двукратной вакцинации;

- оценить эффективность радиоинактивированной вакцины против болезни Ауески на свиньях в производственных условиях;

1.3.Научная новизна. Впервые разработана технология изготовления инактивированной гамма лучами культуральной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески. Получены экспериментальные данные об ц иммунобиологических свойствах инактивированной вакцины против болезни

Ауески на свиньях различного возраста и на овцах. Установлена принципиальная возможность использования инактивированной вакцины против болезни Ауески для экстренной защиты сельскохозяйственных животных (свиньи и овцы) от болезни Ауески. Изучена продолжительность иммунитета у сельскохозяйственных животных при иммунизации инактивированной вакциной "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески.

1.4.Практическая ценность. На основании результатов 4 экспериментальных исследований в лабораторных и производственных условиях разработана НТД на применение инактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ", которая утверждена ГУВ Республики Татарстан в 2001г.

Практическая реализация разработок определена следующими нормативно-техническими документами:

- Методические рекомендации по изготовлению и применению радиоинактивированного антигена вируса болезни Ауески, утвержденные директором ВНИВИ 19 февраля 2002 года.

- Временное наставление по применению инактивированной сухой культуральной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески, утвержденные начальником Главного управления ветеринарии Республики Татарстан 12 ноября 2001 года.

1.5.0сновные положения, выносимые на защиту:

1. Технология изготовления радиоинактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (псевдобешенства).

2. Иммунобиологические свойства инактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески на различных видах животных.

3. Возможность использования инактивированной вакцины для экстренной защиты сельскохозяйственных животных (свиньи и овцы) от болезни Ауески.

1.6. Апробация работы. Результаты выполненных исследований доложены и обсуждены на отчетных сессиях ВНИВИ (2001-2004), на международной научно-практической конференции посвященной 45-летию создания ВНИИЗЖ "Актуальные вопросы патологии животных" (Владимир,2003), на международной научно-практической конференции посвященной 80-летию ФГУП «Щелковский биокомбинат» "Ветеринарная биотехнология: настоящее и будущее" (Щелково,2004) и на объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург,2004)

1.7.Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации опубликованы в 6-ти печатных работах, в числе которых статья в журнале «Ветеринарная патология», "Временное наставление по применению сухой культуральной вакцины «Гаммавак-ВНИВИ» против болезни Ауески", "Методические рекомендации по изготовлению и применению радиоинактивированного антигена вируса болезни Ауески" и 2 работы сданы в редакцию журнала "Вопросы вирусологии".

1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 18 таблицами. Указатель литературы содержит 210 отечественных и 120 иностранных источников.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Магсумов, Рустем Зуфарович

б. ВЫВОДЫ

2. Полная инактивация вирулентного и вакцинного штаммов вируса болезни Ауески с сохранением антигенных и иммуногенных свойств вирионов достигается при облучении их гамма-лучами 60Со При поглощенных дозах 25-30 кГр.

3. Установленные экспериментальным путем оптимальные условия культивирования отобранного тест-иггамма вирулентного вируса и режимы радиоинактивации легли в основу разработанной нами технологии изготовления радиоинактивированной вакцины для специфической профилактики болезни Ауески.

4. Согласно разработанной технологии изготовлены экспериментальные серии радиоинактивированной сухой культуральной вакцины «Гаммавак-ВНИВИ», которые показали высокую эффективность против болезни Ауески.

5. Испытание полученной радиоинактивированной вакцины на лабораторных (белые мыши, крысы) и сельскохозяйственных (овцы и свиньи) животных показали ее ареактогенность, авирулентность, безвредность и высокую иммуногенную активность.

6. Использование радиоинактивированной вакцины и иммуностимулирующих препаратов ридостина и ксимедона, обладающих свойствами интерфероногенов, позволяют достигнуть у вакцинированных животных ранней иммунологической защиты их при болезни Ауески.

Двукратное внутримышечное введение радиоинактивированной вакцины л

Гаммавак-ВНИВИ» поросятам 30- и 60-дневного возраста в дозе 3,0 см обеспечивает 84,7-92,4 %-ную защиту их в течение 6 месяцев от летального заражения вирулентным вирусом возбудителя болезни Ауески.

Разработана технология изготовления опытных серий радиоинактивированной вакцины «Гаммавак-ВНИВИ», которые прошли успешные производственные испытания в хозяйствах Республики Татарстан.

На основании высокой эффективности, авирулентности, безвредности и иммуногенности радиоинактивированная вакцина рекомендована для применения в репродуктивных хозяйствах в угрожаемой и не благополучной зонах по болезни Ауески.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.«Методические рекомендации по изготовлению и применению радиоинактивированного антигена вируса болезни Ауески», утвержденные директором ВНИВИ "19" февраля 2002 года.

2.«Временное наставление по применению инактивированной сухой культуральной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески», утвержденные начальником Главного управления ветеринарии КМ Республики Татарстан "12" ноября 2001 года.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Магсумов, Рустем Зуфарович, Казань

1. Айрапетян В.Г., Чобанян М.С. Инактивированная культуральная вакцина против болезни Ауески пушных зверей // Акт. вопросы вет. вирусологии.-1980.- С.131.

2. Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Нифантьев Н.Э., Фоменко A.C., Фролова М.Л., Шинкарев С.М. Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана // Материалы 5-й конференции.-М.: ВНИРО, 1999.- С. 115-117.

3. Алехин Е.К. Сравнительная эффективность продигиозана и левамизола при аллотрансплантации // Антибиотики.-1982.-№3.- С.5.

4. Алехин Е.К., Лазарева Д.Н., Богданова А.Ш. и др. Сочетание иммуностимуляторов как метод коррекции вторичных иммунодефицитов // Экспериментальн. и клиническая фармакология.-1993.-№2.- С.39-42.

5. Аминев А.Г., Аминева С.П., Баборенко Е.П., Мищенко В.А., Гусев A.A. Рестрикционное картирование генома и нуклеотидное секвенирование выделенных в СНГ штаммов вируса БА // Вопр. вирусол.-1999.- №6,-С.254-257.

6. Архипов В.В., Богданова К.С. Испытание вакцин против пуллороза- тифа птиц, изготовленной с применением ионизирующих излучений // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 8-й конф.- М.,1972.-СЛ01.

7. Архипов В.В., Нечаева Л. А. Изучение экспериментальных серий туберкулиновых препаратов, изготовленных с применением ионизирующих излучений // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. /Матер. 8-й конф.- М.,1972.-С.102.

8. Атауллаханов Р.И., Холмс Р.Д., Катлинский A.B. и др. Иммуномодулятор «Гепон» подавляет репликацию вируса гепатита С в культуре клеток человека in vitro // Антибиотики и химиотерапия.-2002.-т.47.-№8.-С.9-11.

9. Бабичева Т.В., Силина Л.В. Лечение рецедивирующего генитального герпеса иммуномодулятором «Гепон» // Тез. докл. 9-го Росс. нац. конгресса «Человек и лекарство».-2002.-С.55-56.

10. Базылев П.М., Тюльпанова А.Р. Эмбрионгидроокисьалюминиевая формолвакцина против болезни Ауески // Ветеринария.- 1963.- №9.- С.22.

11. Бакиров A.B. Влияние продигиозана и произьодных пиримидина на эффективность антибиотикотерапии экспериментальных инфекций // Антибиотики.-1979.-№9.-С.673-678.

12. Бакиров A.B. Сравнительное действие продигиозана и производных пиримидина и их комбинации на иммунологические свойства организма.: Автореф. дисс. канд. мед. наук.-Уфа, 1980.-19 с.

13. Бакулов И.А., Чевелев C.B., Макаров В.В. Классификация и номенклатура вирусов животных // Ветеринария.- 1985.- №6.- С.26-34.

14. Баринский И.Ф., Алимбарова JIM., Лазаренко A.A., Атауллаханов Р.И. Противовирусная активность пептидного иммуномодулятора "Гепон" при экспериментальных инфекциях вызванных вирусами простого герпеса типов 1 и 2 // Вопр. вирусол.-2003.-№5.-Т.48.-С.30-33.

15. Баринский И.Ф., Нестерчук C.JI. Эффективность иммуномодуляторов при экспериментальных вирусных инфекциях // Вопросы вирусологии,-1989.-№6.-С.34.

16. Баринский И.Ф., Шубладзе А.К., Каспаров A.A., Гребнюк В.Н. Герпес (этиология, диагностика, лечение).-М.,1986.-55С.

17. Беклемишев Н.Д. Иммунопатология и иммунорегуляция. М.: Медицина, 1986.-256с.

18. Белоконь B.C., Корниенко Л.Е., Волкова М.В., Бондаренко А.Ф., Мищенко В.А., Корниенко Л.Н. Концентрирование вируса болезни Ауески // Вопр. вет. вирусол., микроб, и эпизоотол.: Мат. науч. конф. ВНИИВВиМ окт. 1992г. -Покров.-1992.-С. 195-196.

19. Белоконь B.C., Корниенко Л.Е., Мищенко В.А., Корниенко Л.М. Способы очистки и концентрирования антигена вируса болезни Ауески // Вет. медицина.-1993.-Вып.68.-С.81-85.

20. Белоконь B.C., Мищенко В.А., Корниенко JI.E. Сравнительная оценка чувствительности к вирусу болезни Ауески разных систем культивирования // Биотехн. Вет. преп.: Мат. науч.-практ. конф. 25-26 окт. 1993.- Харьков, 1993.-С.14.

21. Бергольц В.М., Кисляк Н.С., Еремеев B.C. Иммунология и иммунотерапия лейкоза. М.: Медицина, 1978.-С.38-128.

22. Берус П.Т. Влияние интерферона на эффективность вакцинации против БА // Общ. эпизоот.: иммунологические, эколог, и методол. пробл.: Мат. междун. науч. конф. 20-22 сент. 1995г.-Харьков,1995.-С.522-525.

23. Борисова A.M., Артемова О.П., Заболотская О. Д. Клинико-иммунологическая оценка эффективности применения арбидола у больных вторичными иммунодефектами // Иммунология.-1996.-№2.-С.58-61.

24. Брагин Г.И. Патолого-анатомическаая диагностика вирусных болезней животных. М.: Колос, 1984.

25. Васильев П.Г. Актуальные проблемы сибирской язвы: биология и индикация возбудителя, клиника, патоморфология и диагностика заболевания: Автореф. дисс. докт. биол. наук.- Казань, 2001.- 36с.

26. Величкова М., Петков П., Тодорова У., Симеонов И. Проучивания върху размножаването на вируса на болестта на Ауески щам "МК-35" в ролерна система // Селскостоп. Наука. Производство.- 1995.-33; 6.- С.32-34.

27. Веревкина К.Н., Даниленко Е.Д., Костомаха А.Н. и др. Изменение показателей неспецифической защиты организма мышей при введении двуспиральной РНК из дрожжей Saccharomyces cerevisiae // Вопр. вирусол.-1989.-№ 1 .-С.69-72.

28. Виноградова В.И., Кузнецов В.В. Оценка колострального иммунитета у свиней против болезни Ауески // Акт. вопр. вет. вирусол.: Тез. докл. пятой Всесоюз. Вет. вирусол. конф.13-15 мая 1980.- Казань. 1980.С.-109.

29. Вихриев Б.С., Матвеенко A.B. Клиническое применение препарата ксимедон в лечении ожоговой болезни // Сб. науч. тр. ИОФХ им. А.Е. Арбузова КФАН СССР.-Казань, 1986.-С.41-45.

30. Воробьев A.A. Механизмы действия адъювантов // Усп. совр. биол.-1969.-№68,1.-С.72-89.

31. Гафарова А.З. Влияние тимолизата и лиенолизата на иммунный статус животных: Дис. канд. вет. наук.-Казань, 2003.-163 с.

32. Гетта Г.А. Гидроокисьалюминиевая формолвакцина против болезни Ауески из эмбрионального штамма вируса, выращенного в культуре клеток куриных эмбрионов.: Автореф. дисс. канд. вет. наук.- Харьков, 1972.- 29 с.

33. Гилмуллина Ф.С., Фазилов В.Х. Ксимедон в комплексной терапии рецидивирующей рожи // Фармакология и токсикология фосфорорганических и других биологически активных веществ. Казань, 1996, - Вып.3.-С.40.

34. Горбунов С.М. Фармако-токсикологическая характеристика ксимедона и влияние его на заживление термических ожогов кожи: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Казань, 1979.-21с.

35. Горбунов С.М., Измайлов С.Г. Результаты экспериментальных исследований ксимедона // Ксимедон. Казань, 1986,-С.26-30.

36. Госманов Р.Г., Юсупов Р.Х. Прижизненная диагностика больных и переболевших болезнью Ауески свиней // Инфекц. болезни сельхоз. животных.-1983 .-99 с.

37. Грибенча C.B., Холмс Р.Д., Атауллаханов Р.И., Баринский И.Ф. Противовирусная активность пептидного иммуномодулятора «Гепон№ в экспериментах на модели уличного вируса бешенства // Вопр. вирусол.-2003.-Т.48.-№4.-С.40-45.

38. Гродзенский Д.Э. Радиобиология. Биологическое действие ионизирующих излучений.-М. : Атомиздат.-1966.-247с.

39. Гусева М.Н. Исследование инактивированных вакцин против болезни Ауески с различными адъювантами // Эколог, аспекты эпизоотологии и патологии животных (19-21 мая 1999г.).-Воронеж.-1999.-С.99-100.

40. Гутенева Г.С. Иммунотропное действие новых производных 4-оксопиримидина: Автореф. дисс. . канд. фармац. наук.- Пятигорск,-1993.-24с.

41. Дроздов С.Г., Горин Н.С., Джанцоян Л.С. и др. Основы техники безопасности в микробиологических и вирусологических лабораториях -М., 1987.

42. Дудников А.И., Камалова Н.Е., Мищенко В.А., Захаров В.М., Хухоров В.М. и др. Испытание инактивированной эмульсионной вакцины против болезни Ауески на норках // Ветеринария.- 1995.-№7.-С.29-30.

43. Дудников А.И., Мищенко В.А., Захаров В.М., Белоконь B.C., Корниенко Л.Е., Костюченко М.Г., Хухоров В.М. Инактивированные вакцины против болезни Ауески //Ветеринария.-1993.-№10.-С.21-23.

44. Дуплищева А.П., Синилова Н.Г. Влияние ионизирующей радиации на токсические свойства антигенов семейства Enterobacteriaceae // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 8-й конф.- М.Д972.-С.96-97.

45. Дымин М.А., Князев B.C., Чичканов В.П., Дымина Г.П., Сафронов Г.А. К вопросу профилактики болезни Ауески норок // Акт. вопросы вет. вирусологии.-1980.-С. 133.

46. Ершов Ф.Н., Григорян С.С., Кремерман И.В., Николаева О.В. Интерферониндуцирующая и противовирусная активность левамизола // Антибиотики.-1981 .-№8.-С.617-620.

47. Ершов Ф.Н., Малиновская В.В. Иммуномодуляторы в профилактике и терапии вирусных инфекций // Журн. микробиол.-1996.-№3.-С.122-125.

48. Жаков М.С., Прудников B.C., Анисим И.А., Вантеев В.В., Жуков А.И. Влияние иммуностимуляторов на иммуноморфогенез у животных привакцинации против сальмонеллеза / Диагностика, патогенез, патоморф. и профил. болезней с.-х. животных.-Воронеж.-1993.-С.57.

49. Железникова Г.Ф. Иммуномодулирующее действие вакцин: новые аспекты известной проблемы // Иммунология.-2000.-№4.-С.20-24.

50. Жестерев В.И., Мищанин В.А., Хрипунов Е.М., Вдовина Р.В., Исакова Н.Б., Вишняков И.Ф., Евсеева С.Д., Шевченко A.A. и др. Вирусвакцина против болезни Ауески // ВНИИВВиМ.- описание изобретения к патенту РФ. -noKpoB.-1999.-RU 2138289 С1.

51. Зарипов М.М., Моренков О.С., Шматченко В.В., Смирнов С.В., Фунтиков В.А., Фунтиков В.А., Фодор И. Иммунологическая и функциональная характеристика эпитопов и областей гликопротеина gB вируса болезни Ауески // Вопр. вирусол. 2001 .-№2.-С.41-45.

52. Захаров В.М., Дудников А.И., Мищенко В.А. Экологические аспекты и перспективы вакцинопрофилактики ящура и болезни Ауески // Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. Вирус, болезни с.-х. ж.-х (17-21 апреля 1995г.).-Владимир.-1995 .-С. 162.

53. Земсков A.M. Иммуномодулирующее действие дрожжевой РНК // Актуальные вопросы вирусологии. М.-1981 .-Т. 1 .-С.29-30.

54. Земсков A.M., Земсков В.М., Перидирий В.Г. Коррекция вторичной иммунологической недостаточности с помощью дрожжевой РНК // ЖМЭИ,-1984.-№9.-С.77-82.

55. Земсков A.M., Земсков В.М., Полякова С.Д., Бжовски Е. Методы оценки эффективности иммунокоррекции // Журн. микробиол.-1997.-№1.-С.51-53.

56. Земсков A.M., Соломахин Г.Г., Рычнев В.А. и др. Итоги применения нуклеината натрия как иммунокорректора // Компоненты нуклеиновых кислот: Тез. "докл. VIII Всесоюз. симпоз. по целенаправленному изысканию лекарственных веществ. Рига,-1989.-С.116-117.

57. Земсков В.М., Земсков A.M. Низкомолекулярный РНК-перспективный иммуномодулятор // Иммуномодуляторы: Сб. тр.- Центр. НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова. М.-1987.-С.55-56.

58. Зинченко Е.В., Санин A.B., Груздев К.Н. и др. Возможности фенотипической коррекции иммунного ответа // Сборник научных трудов ВГНКИ.- М.,2001.-Т.63.-С.21-27.

59. Иванов A.B. Оценка антигенности, иммуногенности, безвредности и реактогенности инактивированной вакцины на новорожденных телятах.: Дисс. . канд. вет. наук.-Казань,-1995.-144 е.- Фонд ВНИВИ.

60. Иванов В.Т., Вольгина О.М., Андронова Т.М. Пептидные антигены и адъюванты в синтетических вакцинах // ЖВХО им. Д.М. Менделеева.-1988,-Т.ХХХШ.-№5.-С.523-530.

61. Иванов К.К., Синилова Н.Г., Дуплищева А.П. Влияние радиации на О-соматические антигены бактерий Sty 0-901 // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол.: матер. 8-й конф.-М.-1972.-С.95-96.

62. Измайлова Г.А., Измайлов С.Г., Терещенко В.Ю. и др. Клиническая эффективность ксимедона при лечении и профилактики инфекционно воспалительных заболеваний // Фармакол. и токсик. фосфорорганических и др. биологических веществ.-Казань.-1994.-Вып.З-С.73.

63. Измайлова Г.А., Эвранова Г.В., Измайлов С.Г., Горбунов С.М. и др. Использование ксимедона в лечении трофических язв нижних конечностей // Вестн. хирургии им. И.И.Грекова.-1993.-т.51.-№7-С.43-44.

64. Ильясова Г.Ф. , Цибулькин А.П., Юсупов Р.Х., Угрюмова B.C., Ксимедон как средство повышения эффективности специфической профилактикигерпесвирусных инфекций // Матер. VI Российского национал. Конгресса «Человек и лекарство»- Москва, 1999. -С.297-298.

65. Ильясова Г.Ф. Влияние ксимедона на гуморальный иммунный ответ при вакцинации живой вирусвакциной. // Тез. доклад, научно-практической конференции молодых ученых. Казань, 1998.-С.26-27.

66. Ильясова Г.Ф. Иммуностимулирующее действие ксимедона (экспериментальные исследования) // Тез. докл. научн. практич. конф. молодых ученых КГМА, Казань.-1999.-С.55-56.

67. Ильясова Г.Ф. Ксимедон как средство повышения эффективности противовирусной вакцинации: Автореф. . дисс. канд. мед. наук. — Казань, 2000. -23с.

68. Ильясова Г.Ф., Цибулькин А.П., Юсупов Р.Х. Стимуляция ксимедоном вакцинального противовирусного иммунитета // Матер. V Российского национал, конгресса «Человек и лекарство».-Москва,1998.-С.239.

69. Ильясова Г.Ф., Юсупов Р.Х., Угрюмова B.C., Конюхов Г.В. Энергия ионизирующего излучения новый способ получения иммуногенного антигена вируса псевдобешенства // Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. посвящ. 30-летию инстшута.-Щелково, 2000.- С.231.

70. Исакова Н.И., Евсеева С.Д., Мищанин В.А., Хрипунов Е.М., Жестерев В.И. и др. Разработка вакцины против болезни Ауески для пероральной иммунизации свиней // Матер, междунар. науч.практ. конф. посвящ. 40-летию ВНИИВВиМ.- Покров,-1998.-С.216-217.

71. Калимуллин Ф.Х., Баранов В.А. Тималин как иммуномодулятор при экспериментальной вакцинации // Каз. Мед. Журнал.-1999.-Т.ХХХ.-№3.-С.226.

72. Камалова Н.Е., Мищенко В.А., Некрасов В.И., Власов Ю.В., Дудников А.И. и др. Течение болезни Ауески у норок // Вирусн. и микроб, болезни ж.-х.: Сборн. науч. трудов.-Владимир,1995.-С.110-113.

73. Качанова С.П. Болезнь Ауески // Москва : ВНИИТЭИСХ.- 1985.-52с.

74. Киршин Б.А., Юсупов Р.Х., Матросова В.Р., Маринкова В.В. Разработать и испытать инактивированную вакцину из шт. ОБ // Отчет НИР. за 1988г.-Казань 1988,-Фонд ВНИВИ.

75. Кладова О.В., Харламова Ф.С., Щербакова A.A. и др. Первый опыт интраназального применения «Гепона» у детей с респираторными заболеваниями // Педиатрия.-2002.-№2.-С.86-88.

76. Кладова О.В., Харламова Ф.С., Щербакова A.A. и др. Эффективное лечение синдрома крупа с помощью иммуномодулятора «Гепон» // Рес. Мед. журн,-2002.-№3-С. 138-141.

77. Ковалев И.Е. Левамизол как иммуностимулятор. // Химико-фармакологический журнал. - 1980.-№4.-С.115-121.

78. Коготкова О.И. Экспериментальное и клиническое применение неспецифических иммуностимуляторов в инфекционной патологии // Сб. трудов НИИ противочумного ин-та Кавказа и Закавказья.-Ставрополь, 1986.-С.23-25.

79. Коломыцев A.A., Бабаян В.А., Вишняков И.Ф. и др. Оценка вирусвакцины для профилактики болезни Ауески свиней // Ветеринария.-1991.-№1.-С.З1-33.

80. Коломыцев A.A., Срибный Н.И., Бабаян В.А., Евсеев В.М. Оценка вирусвакцины против болезни Ауески // Ветеринария-1990.-№ 11.-С.20-22.

81. Конаржевский К.Е. Инактивированная культуральная вакцина против болезни Ауески.: Автореф. дисс. .докт. вет. наук.-Харьков.-1992.-35 с.

82. Конопаткин A.A. Болезнь Ауески // Эпизоотология и инфекционные болезни с.-х животных.-М.,1984.-С.189-197.

83. Корниенко JI.E. Разработка технологии изготовления инактивированной концентрированной вакцины против болезни Ауески.: Дисс. . канд. вет. наук.-Харьков.-1992.-136С.

84. Корниенко JI.E., Белоконь B.C., Бондаренко А.Ф. и др. Инактивация вируса болезни Ауески веществами азиридинового ряда // Всесоюзн. научн. конф., посвящ. 140-летию ХЗВИ.: Тез. докл.-Харьков.-1991.-С. 124.

85. Корниенко JI.H. Разработка средств и методов лабораторной диагности болезни Ауески //Автореф. дисс. канд. вет. наук.-Владимир.-1992.-23 с.

86. Корпусова Т.И., Шипилов В.И., Гриценко А.И., Онищенко P.M. и др. Обработка оптимальных режимов хранения матрового вируса БА для крупномасштабного культивирования // Вирус, и микроб, болезни животных. -Владимир.-1995.-С.211-217.

87. Кочергина Н.И., Ярилин A.A., Земсков В.М., Микстайс У.Я. Анализ клеточных основ действия нуклеината натрия, пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов на гуморальный иммунный ответ // Иммунология.-1986.-№5.-С.34-37.

88. Кочнев О.С., Измайлов С.Г. Применение ксимедона для стимуляции заживления и профилактики нагноений операционных ран // хирургия,-1991.-С.27-30.

89. Куриленко А.Н., Крупальник В.Т. Лечение с.-х. животных при инфекционных болезнях // М.: Агропромиздат.-1986.-192С.

90. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К. Стимуляторы иммунитета: -М. Медицина, 1985.256 С.

91. Лаптев Ю.В. Антигенность и иммуногенность вируса болезни Ауески в составе инактивированных моно- и комбинированных вакцин.: Автореф. дисс. канд. вет. наук.- М.,1990- 24 с.

92. Лаптев Ю.В., Сергеев В.А. Вирус болезни Ауески: Выращивание и иммуногенные свойства // Достижения науки и техники А.П.К.-1991.-№10.-С.19.

93. Латфуллин Д.Н. Получение и изучение иммунобиологической активности радиоинактивированной вакцины «Гаммавак-ВНИВИ» против болезни Ауески // Автореферат дисс. канд. вет. наук.-Казань.-2003.-20с.

94. Лезова Т.Н., Рыбаков С.С., Дудников А.И. Влияние структуры производных этиленимина на динамику инактивации вируса ящура // Акт пробл. вет. вирус.:Тез. докл. конф. молодых уч.-Владимир.-1987.-С.92-94.

95. Лифшиц Р.И., Кляцкин С.А., Однопозов А.К. и др. Клинико-лабораторное исследование эффективности ксимедона в лечении больных с термическими ожогами // Сб. науч. тр. ИОФХ им. А.Е. Арбузова КФАН СССР.-Казань, 1986.-С.47-73.

96. Лихолетов С.М. Современные аспекты разработки вакцин, адъювантов и иммуностимуляторов // Усп. совр. биол.-1988.-№195,1.-С.83-99.

97. Львов Н.Д., Мельниченко A.B., Львов Д.Н., Никитина A.A. Лабораторная диагностика герпесвирусной инфекции человека // Вопр. вирусологии.-2000.-№4.-С.7-13.

98. Макаров В.В., Сухарев О.И. Современная классификация зоопатогенных вирусов // Ветеринарная газета.-№20,октябрь.-2000.-С.6-7.

99. Масычева В.И., Даниленко Е.Д., Игнатьев Г.М. и др. Особенности формирования состояния противовирусной устойчивости при местном применении индуктора интерферона ридостина // Вопр. вирусол.-1997.-№3.-С.126-129.

100. Мигунов А.И., Арон P.A., Сироткин А.К., Чернина Л.Ф., Кузнецов O.K. Физико-химическая характеристика популяции вируса гриппа, инактивированного гамма-лучами // Радиобиология.-1986.-Т.26.-Вып.5.-С.647-651.

101. Мищенко В.А., Баборенко Е.П., Корниенко Л.Н., Дудников А.И и др. Чувствительность животных разных видов к вирусу болезни Ауески // Ветеринария.-1994.-№11.-С.20-22.

102. Мищенко В.А., Дудников А.И., Баборенко Е.П. Иммунизация жвачных животных вакцинами против болезни Ауески // Вирусные и микробные болезни животных.: Сб. научн. трудов.-Владимир.-1995.-№ 1 .-С.201 -204.

103. Мищенко В.А., Дудников А.И., Хухоров В.М., Захаров В.М. Новый взгляд на болезнь Ауески // Ветеринария.-1995.-№1.-С.11-12.

104. Мищенко В.А., Корниенко Л.Н., Корниенко Л.Е. и др. Иммунобиологические свойства производственного штамма вируса болезни Ауески // Вирусн. и микроб, болезни ж.-х.: Сборн. науч. трудов.-Владимир,1995.-С.205-208.

105. Мищенко В.А., Яременко H.A., Сухарев О.И., Ручнов Ю.Е. Экологические особенности герпесвирусов КРС // Эколог, аспекты эпизоотологии и патологии животных (19-21 мая 1999г.).-Воронеж.-1999.-С.125-126.

106. Мищенко Н.К. Специфические средства профилактики КЧС и методы их контроля // Акт. вопр. вет. вирусол.: Мат. науч.-технол. конф. ВНИИВВиМ (9-11 ноября 1994г).-Покров.-1995.-С. 108-109.

107. Моренков О.С. Разработка иммуноферментных методов выявления антител к гликопротеину gB вируса БА в сыворотке свиней // Вопр. вирусол.-2000.-№3.-С.45-48.

108. Моренков О.С., Манцыгин Ю.А., Сергеев В.А., Собко Ю.А. и др. Получение и характеристика моноклональных антител к гликопротеину G II вируса БА и их использование для эпитопного картирования // Вопр. вирусол.-1994.-№4.-С. 174-177.

109. Мотовски А., Белоножка П., Томов Д. и др. Случай на боллеста на Ауески при овце // Ветер. С6.-1988.-86; 9/10.- С.41.

110. Мэрфи Ф.А. Таксономия вирусов // В.¡Вирусология / Под ред. Б. Филдса и Д. Найпа .-М.:Мир.-1989.-Т.1 .-№1 .-С.29.

111. Нахмансон В.М., Бурба Л.Г. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных: Справочник М.,1990.-255с.

112. Недосеков В.В. Современные вакцины против бешенства животных // Ветеринария.-2003.-№8.-С.23-25.

113. Никитин М.Г., Базылев П.М. Болезнь Ауески .-М.: Колос, 1967.-261с.

114. Николаева Л.А., Синилова Н.Г. О возможности применения корпускулярных радиовакцин для энтеральной иммунизации мышей против брюшного тифа // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 8-й конф.-М., 1972.-С.99-100.

115. Нурмухаметова Э.Б. Клинико-экспериментальное обоснование применения ксимедона при ревматизме: Дисс. канд. .мед. наук. Казань, 1993.-158 с.

116. Обросова-Серова Н.П., Счастный Э.И., Куприянова Л.М., Слепушкин А.Н., Шендерович С.Ф. Иммуномодулирующее действие левамизола при его сочетанном применении с гриппозными вакцинами // Вопр. вирусол.-1984,-№4.-С.454-458.

117. Орлянкин Б.Г. Вестник РАСХН.-1998.-№5.-С.74-76.

118. Пар А. Левамизол как иммуностимулятор.-Будапешт, 1980.-С.38.

119. Першина З.Г., Самойленко И.И. Вариация радиочувствительности микроорганизмов // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 7-й конф.-1969.- С.69-74.

120. Петков П., Величкова М. Сравнителни проучван върху динамиката на намножаване на два ваксинални щама на вируса на болестта на Ауески в ролерни условия // Селектоскоп. Наука Производство.-1995.-Г.33,бр.2/3.-С.51-53.

121. Петров Р.В., Хаитов P.M., Манько В.М., Михайлова А.А. Контроль и регуляция иммунного ответа // М.:Медицина.-1981.-С.310.

122. Петров Р.В., Хаитов P.M., Некрасов А.В., Атауллаханов Р.И., Пучкова Н.Г., Иванова А.С. Гриппол гриппозная вакцина нового поколения // Rassian Journal of Immunology.-1999.-V.4.-Suppl. 1 .-P.339.

123. Погорельцев В.И., Валимухаметова Д.А. Изучение фармакокинетики ксимедона в крови // Мат. респ. науч. конф., Нижнекамск. Казань.-1994.-С.80-81.

124. Поздеев O.K. Антивирусные свойства фосфор и сероорганических соединений : Автореф. дис. . докт. мед. наук. Казань, 1993,-31с.

125. Поздеев O.K., Шулаева М.П. Коррекция фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов ксимедоном при экспериментальной гриппозной инфекции // Новые методы диагностики и лечения.: Тез. докл.-Казань.-1996.-Ч.И.-С.63-64.

126. Простяков А.П., Селиванов A.B., Цыганкова С.И. и др. Контроль и стандартизация средств специфической профилактики и диагностики инфекционных болезней животных // Сб. науч. трудов ВГНКИ.- 1984.-С.125-127.

127. Прохорова Э.М., Селиванов A.B. Вирусвакцина ВГНКИ против болезни Ауески сельскохозяйственных животных // Труды ВГНКИ.-1980.-С.198-204.

128. Прунтова О.В., Русалеев B.C., Гневашев В.М., Селиверстов В.В., Колотилова Т.Г., Потехин A.B. Инактивация pasteurella multocida димером этиленимина // Ветеринария.-2003.-№7.-С.22-24.

129. Равилов А.З., Цибулькин А.П., Юсупов Р.Х., Макаев Х.Н., Угрюмова B.C., Ильясова Г.Ф. Методические рекомендации по применению ксимедона в качестве иммуностимулятора при вакцинации животных против инфекционных болезней.-Казань.-1999.-С.4.

130. Растунова Г.А., Щербакова Э.Г., Круглова И.О. Продигиозан как активатор перитонеальных макрофагов // Антибиотики.-1981.-№6.-С.-6-9.

131. Ройзман Б., Баттерсон. Герпесвирусы и их репликация // Вирусология / Под ред. Б. Филдса Б. и Д. Найпа.- М.: Мир. 1989. Т.З.- Гл. 29. С.190.

132. Сафин М.А., Равилов А.З., Спиридонова Г.Н. Стимуляция специфического противотуберкулезного иммунитета // Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в вет. медицине.-М.,1990.-С.208-210.

133. Сенникова Ю.А., Ширинский B.C. Сравнительная клинико-иммунологическая эффективность применения иммуностимуляторов в лечении больных хроническим бронхитом // Иммунология. 1996.-№3.-С.44-47.

134. Сергеев В.А. Вирусные вакцины // Киев: Урожай. 1993.-С.368.

135. Сергеев В.А. Способ изготовления инактивированной эмульгированной вакцины против болезни Ауески (вакцина «БАК») // Описание изобретения к патенту.-MocKBa.-1993.-SU 1822345 A3.

136. Сергеев В.В., Михайлов И.Ф., Глейберман С.Е., Юдицкая Н.М., Кавтарадзе К.Н. Иммуногенные свойства живой лиофилизированной дезинтерийной вакцины в опыте на обезьянах // ЖМЭИ.-1968.-№11.-С.26-32.

137. Симонова J1.B., Пашук JI.K. Хитин и хитозан // Косметика.-Медицина.-№1.-1998.-С.15.

138. Скороходкина О.В., Цибулькина В.Н., Цибулькин А.П. Иммунологические механизмы терапевтического эффекта ксимедона у больных с атопическими аллергическими заболеваниями // Иммунология.-2002.-№5.-С.271-274.

139. Смиян Ю.П. Справочник специалиста ветеринарной лаборатории // Киев.-1987.-78с.

140. Собко Ю.А. Новые адъюванты для генно-инженерных систем // Общ. эпизоот.: иммунологические, эколог, и методол. пробл.: Мат. междун. науч. конф. 20-22 сент. 1995г.-Харьков,1995.-С412-413.

141. Сосов Р.Ф., Ведерников В.А. Болезнь Ауески. Болезни свиней // 3-е изд. М.-1980.-С.62-69.

142. Суриков Б.П., Исаева В.Г., Влияние нуклеината натрия на кооперацию и супрессию иммунокомпетентных клеток // Иммунология.-1997.-№4.-С.63-64.

143. Сюрин В.Н., Белоусова Р.В., Фомина Н.В. Диагностика вирусных болезней животных.: Справочник-М., 1991 .-528С.

144. Сюрин В.Н., Самуйленко А .Я., Соловьев Б.Р., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных.:-М.: ВНИИТЭБП, 1998.-С.601-630.

145. Терещенко В.Ю., Измайлова Г.А., Измайлов С.Г., Габасов Р.Н. Ксимедон как неспецифический стимулятор процессов остеогенеза // Новые методы диагностики и лечения.: Тез. докл.-Казань, 1995.-С.359-361.

146. Терещенко В.Ю., Кулаков Е.П., Малышев К.В. Использование ксимедона в сочетании с лазерной терапией в комплексном лечении хронического остеомиелита // Новые методы диагностики и лечения. Тез.докл.-Казань, 1996.-Ч.2.-С.77-78.

147. Троицкий B.JL, Туманян М.А., Першина З.Г. и др. // Матер 2-й Междунар. конф. ООН по применению атомной энергии в мирных целях.- 1958.-С.343.

148. Туманян М.А., Каушанский Д.А. Радиационная стерилизация.-М.: Медицина, 1974.- 303 с.

149. Уласов В., Ольшанская А. Болезнь Ауески свиней // Ветеринарная газета.-1988.-июль.-№ 13 .-С.2-5.

150. Улупов H.A., Михайлишин В.В., Гусев A.A., Лезова Т.Н. Аминоэтиленимин средство инактивации инфекционности вируса ящура // Совр. асп. ветер, пат. жив.: Мат. межд. конф.-Владимир.-1998.-С.53.

151. Фролов В.М., Пересадин H.A., Ененко Ю.А. и др. Иммуно-модулирующий эффект нуклеаната и спленина у больных вирусами и токсическими гепатитами // Иммунология. 1994.-№6.-С.64-65.

152. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения // Иммунология.- 2000.- №5.-С.4-7.

153. Хайруллов Г.А., Юсупов Р.Х. Определение уровня комплементсвязывающих антител у вакцинированных против болезни Ауески свиней // Актуальн. вопросы ветеринарии и зоотехнии (4-5 июня 1992г.).: Тез. докл. Респ. научн.-произв. конф.-Казань.-1992.-С.51.

154. Хамитов Х.С., Валимухаметов Д.А., Цибулькин А.П., Заиконникова И.В, Билич И.Л. К механизму действия ксимедона // КФАН СССР.-Казань.-1986.-С.9-25.

155. Христова В. Вирусы, геном и структурни протеини на вируса на псевдобеса // Вет. Сбирка.-1989.-№7.-С.27-29.

156. Цибулькин А.П., Валимухаметова Д.А., Слабнов Ю.Д., Хамитов Х.С. Эффективность применения пиримидиновых производных в профилактике затяжного течения острых пневмоний // Пульмонология.-1992.-№4.-С.736.

157. Цибулькин А.П., Ильясова Г.Ф., Угрюмова B.C. Способ повышения эффективности противовирусной вакцинации // П-й съезд иммунологов России.-Тез. докл.-Сочи.-1999.-4.-№1.-С.340-342.

158. Цибулькин А.П., Слабнов Ю.Д., Валимухаметова Д.А. Влияние ксимедона на лимфопоэтическую способность и дозревание лимфоцитов // Науч. сборник мат. эксперимент, и клинических исследований ксимедона.-1986.-С30-33.

159. Цион P.A. Дифференциальная диагностика болезней свиней. Л., 1970.-96с.

160. Цыбанова Л.Я., Кадыкоев Р.Т., Цыбанов С.Ж., Калабеков М.И. Изучение динамики инактивации вируса ринопневмонии лошадей.: Тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. посвящ. 30-летию института.- Щелково.- 2000.-С.61-62.

161. Шибаева И.В., Денисова Н.П., Иванов К.К., Васильева И.В. Изучение возможности применения гамма-облучения для лучевой стерилизации столбнячного анатоксина // Вопр. радиац. иммунол. и микробиол. / Матер. 8-й конф.- М.Д972.-С.103.

162. Шиков А.Т., Гришок Л.П., Пицик П.П. и др. Напряженность поствакцинального иммунитета против болезни Ауески, КЧС и рожи в промышленных свинокомплексах // Тез. докл. 3 всесоюз. конф. по эпизоотологии.-Новосибирск.-1991 .-С.313-314.

163. Шкиря В.И., Старов С.К., Сарбасов А.Б., Филиппова Н.П. Изучение условий инактивации реовируса птиц // Достижения молодых ученых в ветеринарную практику (16-18 ноября 2000г.).-Владимир.-2000.-С.12-15.

164. Шубладзе А.К., Маевская Т.М. Герпес.-М., 1971 .-32с.

165. Щелчков П.И. Экономическая оценка ветеринарных мероприятий при ликвидации болезни Ауески свиней // Разработка эффективных методов диагностики особо опасных инфекционных болезней животных.: Межвуз. сб. науч. трудов. -Казань. -1990.-С.102-105.

166. Эмануэль Н.М. Химическая физика старения и стабилизации полимеров. М.: Химия, 1982.-С.282-287.

167. Юсупов Р.Х., Госманов Р.Г., Ильясова Г.Х. Значение вирусоносительства в эпизоотологии болезни Ауески // Ветеринарный врач.-2001.-№4.-С.40-41.

168. Юсупов Р.Х., Ильясова Г.Х. Значение иммунологического мониторинга в профилактике и ликвидации инфекционных болезней животных // Мат. междунар. науч.-практ. конф. по пробл. ветер, и животноводства (25-27мая 1994г.).-Казань.-1994.-С .12-13.

169. Юсупов Р.Х., Угрюмова B.C., Ильясова Г.Ф. и др. Адаптация вируса болезни Ауески на новой культуре клеток // Ветеринария.-2003.-№11.-С.22-25.

170. Юсупов Р.Х., Шошонин В.А., Ионова О.П. О патогенезе вируса болезни Ауески свиней // Ветеринария.-1984.-№10.-С.28-31.

171. Aibara К., Miyaki К. Aflatoxin and its radiosensivity // Nat.Inst.OfHealth Dep.Of FoodRes.-Tokio.-1969.-N.4.-P.64-69.

172. Allison A.C. An adjuvant formulation that elicitis antibodies of protective isotypes and cell-mediated immunity // Retrovirus. Hum. AIDS and Relat. Anim. Deseas.; Collog. Cent Gardes, Marnes-la-Coquette, Lyon, 1987.- P. 172-173.

173. Amir J., Nussinovitch M., Kleper R. et.al. Primary herpes simplex virus type 1 gingivostomatitis in pediatrics personnel // Infection.-1997.-V.25.-P.310-311.

174. Barragry T.B. Pig diseases and modern vaccines // Irish veter. News.-1991 .-T. 13.-N.3.-P.28-33.

175. Bartha A. Experiments to reduce the virulence of Aujeszky's virus // Magy. Allarto V.Lapja.- 1961. V. 16.-P.42-45.

176. Becker C.H. Die Multiplication des Aujeszkys chen Virus in den Spinalgonglien des Kaninghens // Arch. Exper. Vet. Med.-1968.-Bd.22.-S.363-381.

177. Bellamy W.D., Lawton E.Y., Cordon Y. Цит. По Антонии Ф., Козинец Г. Atomic energy review // JAEA.-Vienna.-1966.-N.4.-V.3.-P.39-44.

178. Ben-Porat Т., De Nachi J.M., Lomniczi В. Role of glicoproteins of Pseudorabies virus in eliciting neutralizing antibodies // Virology.-1986.-V.154.,N.2.-P.325-334.

179. Bonativo V. Brain nucleotides and processes // Acta Neurol. -1975. -Vol.3.-N. 1 .-P.30-34.

180. Bonet-Maury P., Oliver H.R., Gallut., Lepine P., Mollaret H. e.a. Radiosterilisation of Medical Prodacts // JAEA.-Vienna.-1967.-P.209-214.

181. Caroli C.E. Deludente il "piano" contro I'Aujeszky // Riv. Suinic.-1995.-V.36.-N.4.-P.35-36.

182. Chappuis G., Fargeaud D., Brun A. Industrial production and control of a subunid vaccine against Aujeszky s disease // Vaccination and Control of Aujeszky s disease. J.T.Van Oirscnot (ed).- 1989. -P. 67-68.

183. Chinsakchai S., Molitor T.W. Immunobiology of Pseudorabies virus infection // Vet. Immun. Immunopathol.- 1994.- V.43.-P.107-116.

184. Christensen L.S., Medveczky I., Standbygaard B.S., Pejsak Z. Characterization of field isolated of suid herpesvirus l(Aujeszky's disease virus) as derivatives of attenuated vaccine strains // Arch.Virol.-1992.-V.124.-P.225-234.

185. Cowen P., Li S., Guy J.S., Ericson G.A., Blanchard D. Reactivation of Pseudorabies virus infection in vaccinated commercial sows // Am. J. Vet. Res.-1990. -V.51.-P.334-338.

186. Cristensen L.S., Mousing J., Mortensen S. Evidence of long distance airborne transmission of Aujeszky's disease (Pseudorabies) virus // Veter. Rec.-1990.-T.127.-N.1.-P.471-474.

187. Dangler C.A., Henderson L.M., Bowman L.A., Deaver R.E. Direct isolation and indefication recombinant Pseudorabies virus streins from tissues of experimentally co-infected swine // Am.J.Vet.Res.-1993.-V.54.-P.540-545.

188. Dangler C.A., Henderson L.M., Deaver R.E., Bowman L.A. Recovery oe Aujeszky's disease virus recombinants from experimentally co-infected swine // Acta Vet. Hungaria.-1994.-V.42.-P.209-213.

189. Dedek L., Jerabek I. Experince with preparation of an inactivated vaccine against Aujeszky's disease//Acta. Vet.Brno.-1981.-V.50.-N. 3-4.-P.221-227.

190. Doil T.K. Inactivation of viruses producted in animal // Animal Cell Biotechnology. -London ect. -1985. V.2. -P.124-149.

191. Engel V., Wierup M. Vaccination and eradiation programme against Aujeszky's disease in Sweden, based on a g 1 ELISA test // Vet. Record. 1989.- V.125. -P. 236-237.

192. Fleming B. PRV: Why wait. Nat. Hog Farmer.-1990.-V.35.-N7.-P.26-29.

193. Goldstien A.L., Lown T.L.K., Rossio J.L. et.al. In immune Modulation and Control by Adjuvanty Therapy // Ed.M.A.Chirigos.-New York.-1978.-P.281-291.

194. Granzow H., Weiland F., Jons A., Klupp B.G., Kaiger A., Mettenleiter T.C. Ultrastructural analyses of the replication cycle of Pseudorabies virus in cell culture: a reassessment // J.Virol.-1997.-V.71,3.-P.2072-2082.

195. Gustafson P.D. Pseudorabies. Disease of swine // Ed. By H.W. Dune. Iowa State University Press. 3rd edition, 1970.- P.337-355.

196. Henderson L.M., Levibugs R.L., Dasvis A.I., Sturtz D.R. Recombination of pseudorabies virus vaccine strains in swine // Am. J.Vet.Res.-1991.-V.51.-N.10.-P.820-825.

197. Hope H. Control at a high price // Farmers Weekly.-1984.-V. 101 .-N. 11 .-P.31.

198. Hopp W., Jungblut R. Constancy of Aujeszky's field virus antibody titres in sows repeatedly vaccinated with a g I-negative vaccine // Acta veterinaria Hungarica.-1994.- V.42.-P.409-413.

199. Hosa Kawa Yasushi Resístanse of Sendai virus (HVJ) F-protein against irradiations // Annu. Rept. Radiat. Center Osaka Prefect.-1979.-Vol.20.-P. 129-133.

200. Huff V., Cai W., Glorioso J.C., Levine M. The carboxy terminal 41 amino acids of herpes simplex virus type 1 glycoprotein B are not essential for production infectious virus particles // J. Virol.- 1988. -V.62.-P.4403-4406.

201. Jacobs C. E. Role of glycoprotein I of pseudorabies virus in virulence end immunogenicity De fiinctie van het gl eiwit van pseudorabies virus in virulentie en immunogeniciteit: Proefschrift. .-Ultrecht.,1993.-119P.

202. Jacobs L., Rziha H.J., Kimman T.G., Gielkens AI. J. Deleting two amino acids in glycoprotein gl of Pseudorabies virus decreases virulence and neurotropism for pigs, but does not affect immunogenecity // J. Gen. Virol.- 1993.- V.74.-P.2201-2206.

203. Jentsch K.D., Apostoloff E. Human susceptibility to herpesvirus suis(Aujeszky-virus).4.Serological determinations in persons in infection endangered occupational groups // Z Gesamte Hyg.-1970.-V.16.-N9.-P.692-696.

204. Kaeffer B. Immortal porcine lymphoblastoid cell lines: interest for veterinary and medical research //Veter. Res.-1994.-V.25.-P.425-441.

205. Kallings L.O. Radiosterilizations of Medical Products // JAEA. -Vienna, 1967. -P.433-439.

206. Kimman T.G. Immunological protection against Pseudorabies virus // Proc. OIE Symposium Bangkok. Tailand, 1994.- P. 11-22.

207. Kit S. Genetically engineered vaccines for control of Aujeszky's disease (Pseudorabies) // Vaccine.-1990.-V.8.-P.420-424.

208. Knopp A., Mettenleiter T.C. Stable rescues of a glycoprotein gll deletion mutant of Pseudorabies virus by glycoprotein I of bovine herpesvirus 1 // J. Virol.- 1992.-V.66.-P.2754-2764.

209. Koltay Z. Aujeszky mentesites 1000 kocas sertestelepen. Szarvasmarha-Sertestenyesztes Gyakorlata // Budapest.-1987.-V.74.-P.68-70.

210. Lipowski A. Znaczenie gospodarcze choroby Aujeszkyego // Med. Weter.-1992.-R.48.-N.8.-S.329-341.

211. Lipowsky A., Pejsak Z. Choraba Aujeszkye goznana i nieznana // Met. Weter.-1996.-V.52.-N.8.-S.490-494.

212. Lodetti E., Amadori M. Eradicazone della pseudorabbia // Selez.veter.-1992.-Vol.33.-N.4.-P.343-349.

213. Lomniczi B., Kaplan A.S., Ben-Porat. Multiple defects in the genome of genome of pseudorabies virus can affect virulence without detectable affecting replication in cell culture // Virol.- 1987.-V.161. -P. 181-189.

214. Lomniczi B., Watanabe S., Ben-Porat T., Kaplan A.S. Genetic basis of the neurovirulence of pseudorabies virus // J.Virology.-1984.-V.52.-N.10.-P. 198-205.

215. Lukacs N., Triel H.J., Mettenleiter T.C., Rziha H.J. Demonstration of three major species of pseudorabies virus glycoproteins and identification of disulfide- linked glycoprotein complex // J. Virol.- 1985.- V.49.-P.970-979.

216. Marchioli C.C., Yancey R.J., Wardley R.C., Thomsen D.R., Post L.E. A vaccine strain of Pseudorabies virus with deletions in the thymidine kinase and glycoprotein X genes // Am. J. Vet. Res.- 1987.- V. 48. -P.1577-1583.

217. Mayo M.A., Pringle C.R. Virus taxonomy 1997 // J. Gen. Virol.-1998.-V.79.-P.646-657.

218. Mayrhofer E., Henninger W., Hittmair K., Kneissl S. Rohtgenstrahlen, Ultraschall, Magnetresonanz -Moglicheiten ihres Einsatzes inder Veterrinar medizin // Wien, tierarztl. Mschr. 1995.-Jg.82.-H.9.-S.276-288.

219. Meignier B., Longnecker R., Mavromara-Naros P., Sears A.E., Roizman B. Virulence of and establishment of latency by genetically engineered deletion mutants of herpes simplex virus 1 // Virology.- 1988.- V.162. -P. 251-254.

220. Mengeling W.L. Virus reactivation in pigs latently infected with a thymidine kinase negative strain of Pseudorabies virus // Arch Virol.- 1991.-V.120.-P.57-70.

221. Mettenleiter T.C. Molecular biology of Pseudorabies (Aujeszky's disease) virus // Compar. Immunol, Microbiol., Infect. Dis.-1991.-V.14.-N.2.-P.151-163.

222. Mettenleiter T.C. Pseudorabies (Aujeszky's disease) virus: state of the art // Acta Vet. Hang.-1994.-V.42(2-3).-P. 153-177.

223. Molitor T., Thawley D. Pseudorabies vaccines: past, present and future // comped contin. Educ. Pract.- 1987. -V.9. -P.409-416.

224. Nauwynck H.J., Pensaert M.B. Effect of specific antibodies on the cell-associated spread of pseudorabies virus in monolayers of different cell types // Arch. Virol. -1995.- V.140.-P.1137-1146.

225. Nauwynck H.J., Zonnekeyn V., Pensaert M.B. // Virological protection of sows upon challenge with Aujeszky's disease virus after multiple vaccinations with attenuated or inactivated vaccines // J. Vet. Med.-1997.-V.44. -P.609-615.

226. Navarro D., Paz P., Penera L. Domains of herpes simplex virus 1 glycoprotein B that function in virus penetration, cell-to-cell spread, cell fusion // Virology.- 1992. -V. 186.-P.99-112.

227. Neubauer A., Braun B., Brandmeller C., Kaaden O.R., Osterrieder M. Analysis of the contributions of the equine herpesvirus 1 glycoprotein gB homolog to virus entry and direct cell-to-cell spread// Virology.- 1997.- V. 227.-P.281-294.

228. Nockels C.F. Trace elements increase disease resistance // Proc. Of the meet.-1986.-P.7-13.f

229. Peeters B., De Wind N., Hosima M., Wagenaar F., Gielkens A., Moormann R. Pseudorabies virus envelope glycoproteins gp 50 and gll are essential for virus penetration, but only gll is in V. ved in membrane fusion // J. Virol.- 1992.-V.66.-P.894-905.

230. Pensaert M., Gielkens A.L.J., Lomniczi B., Kimman T.G., Vannier P., Eloit M. Round table on controle of Aujeszky's disease and vaccine development based onmolecular biology // Vet. Microbiol.- 1992.- V.33. -P. 53-67.

231. Pereira L. Function of glycoprotein B homologues of the family herpesviridae // Infect. Agents. Dis.- 1994.- V.3.-P.9-28.

232. Pittler H. Mit newer Aujesziy-Impfstrategie mehr Chancen EG-Binnenmarkt // Schwein. Schweinemast.-1990.-T.38.-N. 1 .-S. 132-133.

233. Polley J.R. Gamma Irrad. Can.-1964.-N.3.-P.5-8.

234. Post L.E., Thomsen D.R., Petrovskis E.A., Meyer A.L., Berlinski P J., Wardley R.C. Genetic engineering of the Pseudorabies virus genome to construct live vaccines // J. Reprod. Fert.- 1990.- V.41. -P. 97-104.

235. Quint W.G.V., Gielkens A.L.J., Van Oirshot J.T., Berns A.J.M., Cuypers H.T.

236. Construction and characterization of deletion mutants of Pseudorabies virus a new generation of "live" vaccines // J. Gen. Virol.- 1987.- V. 68.- P. 523-534.

237. Sandaram K., Philop J., Bhatt M.B. Radiation effects on Naja-Naja venom and polivabut antisera // Bhabha Atomic Res.Center.-Bombey.-1969.-P.90-96.

238. Schneiden H. Levamisole a general pharmacological respective // Int. J.Immunopharmacol.-1981 .-V.3 .-P.9-13.

239. Schoenbaum M.A., Beran G.V., Murhy D.P. Pseudorabies virus latency andtireactivation in vaccinated swine // Am. J. Vet. Res. -1990.-V.51.-P.334-338.

240. Schranner J., Wurdinger M., Klump N. et.al. Be influssung ler aviaren numoralen immunreactonen durch influex und E cheracea Angustifolia Extrakt // J.Veter.Med.Ser.B.-1989.-V.36.-N.5.-S.353-364.

241. Schreurs Ch., Mettenleiter T.C., Zuckerman F., Sugg N., Ben-Porat T., Glycoprotein g III of Pseudorabies virus is multifunctional // J.Virol.- 1988. V.62. -P.2251-2257.r

242. Scoda R., Wittman G. Die Immunisierung von Scweinen mit vakzinen aus inactivierten Aujeszky virus // Zbe.Vet.Med.-1973.-Bd.20.-N.2.-S.127-138.

243. Spear P.G. Entry of alphaherpesviruses into cells // Semin. Virol.- 1993.- V.4.-P. 167-180.

244. Stellman C., Vannier P., Chappuis G. et.al. The potency testing of pseudorabies vaccines in pigs. A proposal for a quantitative criterion and a minimum requirement // J.Biol. Stand.-1989.-V. 17.-N. 1 .-P/l 7-27.

245. Stewart-Tull D.E.S. New vaccine presentation approaches // World Biotech. Rept.-1986.-V. 1.0P.231 -237.

246. Stoll N.R. Production and Utilization of Radiation vaccines against Helmintic Diseases // Techn/Rep. Ser. JAEA.-Vienna.-1964.-V.30.-P.l-7.

247. Takashima Y., Otsuka H. Pathogenesis of animal herpesviruses to human // Nippon Rinsho.-2000.-V.58.-N.4.-P.957-961.

248. Thacker B.J., Maes R.K., Han C. Comparsion of single versus double immunization with A gX negative, gene-altered pseudorabies virus vaccine //12th Int. Pig Vet. Soc. Netherlands.-1992.-Proc. 1 .-P.69.

249. Thomsen D.R., Marchioli C.C., Yancey R.J., Post L.E. Replication and virulence of pseudorabies virus mutants lacking glycoprotein gX // J.Virol.- 1987. -V.61. -P.229-232.

250. Toma B., Delagneau J.F., Loguerie R. e.a. Etude dun nouveau vaccin a virus inactive et adjuve controla Maladie d'Aujeszky' // Bull. Off. Int. Epiz.-1975.- V.85.-P.223-237.

251. Traub F.B., Friedman U., Brash A., Huber W. // J. Immunol.-1951 .-N.5.-P.23-27.

252. Van Nes A., Stegeman J.A., De Jong M.C.M., Loeffcn W.L.A., Kimman T.G., Verheijden J.H.M. No massive spread of pseudorabies virus in vaccinated sow herds // Vet. Microbiol. -1997.- V.55.-P.147-151.

253. Van Oirschot J.T. Properties of g I-negative and companion diagnostic tests for the eradication of Aujeszky's disease // In: Proc. Ninety-Sixth Ann. Meeting of the

254. United States Animal Health Association. -1992. -P. 405-416.

255. Van Oirschot J.T. The antibody response to glycoprotein g I and the control of Aujeszky's disease virus // J.T.Van Oirschot (Ed). Vaccination and control of Aujeszky's disease. Kluwer Academic Publications. Dordrecht.- 1989.- P.129-138.

256. Van Oirschot J.T., Daus F., Kimman T.G., Van Zaane D. Antibody responce to glicoprotein I in maternaly immune pigs to a mildy virulent strain of pseudorabies virus // Am J.Vet.Res.-1991 .-V.52. -P. 159-163.

257. Van Oirschot J.T., Wijsmuller J.M., de Waal C.A.H., Van Lith P.M. A novel concert for the control of Aujeszky's disease: experience in two vaccinated pig herds //Veterinary Record.- 1990. -V.126. -P. 159-163.

258. Van Oirshot J.T., Moormann R.J.M., Berns A.J.M., Gielkens A.L.J. Efficacy ofppseudorabies virus vaccine based on deletion mutant strain that does not expressed thymidine kinase and glicoprotein I // Am. J. Vet. Res.- 1991.-V.52.-P. 1056-1060.

259. Vandeputte J., Chappuis G., Fargeaud D. Vaccination against pseudorabies with glicoprotein glsup (+) or glicoprotein glsup (-) vaccine // Am. J. Veter. Res.-1990.-T.51.-N.7.-P.1100-1106.

260. Vannier P. The control programme of Aujesky's disease in France: Main result and difficulties // Vaccin. And Control Aujaszky's Dis.: Semin.Commun. Progr. Coord. Agr.,Res., Brussels,5-6 July, 1988,-Dordrecht etc., 1989.-P.215-226

261. Vannier P., Hütet E., Bourgueil E., Cariolet R. Level of virulent virus excreted by infected pigs previously vaccinated with different glycoprotein deleted Aujeszky's disease vaccines // Vet. Microbiol.-1991.-V.29.-P.213-223.

262. Vannier P., Vedeau F., Allemersch C. Eradication and control programs against Aujeszky's disease (Pseudorabies) in France // Vet. Microbiol. -1997-V.-55.-N lA.-P.167-173.

263. Viel L. Plus be 300 pores a I'heure // Nouv. Agr. -1998.-V.- 74.-P.36-38.

264. Visser N. Vaccination strategies for improving the efficacy of programs to eradicate Aujeszky's disease virus // Vet. Microbiol. -1997.- V.55.-P.61-74.

265. Wittman G. Aujeszky's Diseases (Pseudorabies) in ruminants // Herpesvirus diseases in cattle, horses and pigs.-Boston. Etc., 1989.-P.163-175.

266. Wittman G. Spread and control of Aujeszky's disease // Comp. Immun. Microbiol. Infect. Dis.-1991.- V.14.-P.165-173.

267. Wittman G., Ohlinger V. Zellvermittelts Zytotoxizität und Lymphozytenstimulierung bei Saugfekeln mit und onhe Kolostrale Immunitat gegen Aujeszky virus // Zbl. Vet.-med.R.B.-1984.-Bd.31.-N.4.-S.303-318.

268. Wittman G., Ohlinger V., Rziha HJ. Occurrence and reactivation of latent Aujeszky's disease virus following challenge in previously vaccinated pigs // Arch. Virol.- 1983. -V. 75. -P. 29-41.

269. Wittman G., Rziha H.J. Aujeszky's disease (Pseudorabies) in pigs // Herpesvirus disease in cattle, horses and pigs (Ed. by. Wittman G). Kluver, Boston.-1989.-P.230-325.

Информация о работе

Магсумов, Рустем Зуфарович
кандидата ветеринарных наук
Казань, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Разработка технологии изготовления радиоинактивированной вакцины "Гаммавак-ВНИВИ" против болезни Ауески (псевдобешенства) и изучение ее эффективности в производственных условиях - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы