Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка технологии получения протеолитического ферментного комплекса из бактерий рода Bacillis

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Холодная, Жанна Валерьевна

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Гидролитические ферменты бактерий рода Bacillus, их получение и применение

Глава 2. Способы выделения и очистки ферментов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 3. Материалы и методы

Глава 4. Оптимизация способа получения Протеолитического ферментного комплекса (ПФК) с целью увеличения его активности

4.1. Создание нового штамма Bacillus subtilis - эффективного продуцента протеолитических ферментов

4.2. Оптимизация состава питательной среды для промышленного получения ПФК

4.3. Отработка физико-химических параметров культивирования

Глава 5. Разработка способов стабилизации, выделения и очистки ПФК

5.1. Стабилизация ПФК

5.2. Выделение ферментсодержащего материала

5.3. Очистка и концентрирование ПФК

Глава 6. Изучение свойств ПФК

6.1. Определение оптимумов рН, температуры и термостабильность ПФК

6.2. Изучение влияния ингибиторов на активность ПФК

6.3. Определение изоэлектрической точки ПФК

6.4. Определение молекулярной массы

6.5. Определение субстратной специфичности 89 6.6 Изучение стабильности ПФК при хранении 92 6.7. Изучение безвредности и токсичности ПФК

Глава 7. Практическое использование ПФК

7.1. Изучение возможности применения Бактилина для гидролиза мозговой ткани в производстве медико-биологического препарата «Церебролизат» 97 7.1. Изучение возможности гидролиза белковых основ питательных сред с использованием Бактилина

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка технологии получения протеолитического ферментного комплекса из бактерий рода Bacillis"

Бактерии рода Bacillus, одна из наиболее разнообразных и широко распространенных групп микроорганизмов, являются важными компонентами экзогенной нормофлоры человека и животных (Смирнов В.В. и др., 1982).

Разнообразие метаболических процессов, генетическая и биохимическая вариабельность, устойчивость к литическим и пищеварительным ферментам, послужили причиной использования бацилл в различных областях промышленности и медицины. Управление по контролю за качеством продовольственных и лекарственных средств США, присвоило роду Bacillus статус GRAS (generally regarded as safe) - вполне безопасных организмов, что является обязательным условием для применения этих бактерий в производстве лекарственных препаратов (Харвуд К., 1992).

В последнее десятилетие широко используются биопрепараты на основе живых микробных культур аэробных спорообразующих бактерий для профилактики и лечения заболеваний желудочно - кишечного тракта (Грачева Н.М. и др., 1996; Никитенко В.И., 1991; Никитенко Л.И., Никитенко В.И., 1992; Поберий И.А. и др., 1998; Резник С.Р. и др., 1995; Слабоспицкая А.Т. и др., 1990; Смирнов В.В. и др., 1992; Смирнов В.В. и др., 1995; Смирнов В.В. и др., 1993; Шендеров В.А. и др., 1997; Чернякова В.И. и др., 1993).

При пероральном применении бациллы существенно повышают неспецифическую резистентность макроорганизма; антагонистическая активность их ярко выражена и проявляется к широкому спектру патогенных и условно патогенных микроорганизмов; они характеризуются высокой ферментативной активностью, благодаря чему регулируют и стимулируют пищеварение, оказывают противоаллергенное и антитоксическое действие. Эти микроорганизмы технологичны в производстве, стабильны прихранении и, что существенно важно, экологически безопасны (Сорокулова И.Б., 1996).

Известными препаратами-пробиотиками являются: биоспорин, споробактерин, бактиспорин, субалин, споролакт, и др.

Следует отметить, что бактерии рода Bacillus - важнейшие объекты современной биотехнологии, как продуценты самых разнообразных биологически активных веществ. Их используют для получения ферментов, антибиотиков, инсектицидов (Ахапкина И.Г.и др., 1995; Выборных С.Н. и др., 1990; Слабоспицкая А.Т. и др., 1990; Мартьянов В.А. и др., 1989; Харвуд К., 1992; Клепикова Ф.С. и др., 1988; Паршина С.Н. и др., 1990). По мнению ряда зарубежных специалистов, именно ферментам и, в особенности гидролазам, принадлежит большое будущее в перспективном развитии лекарственных препаратов (Ильин Г.И., Москвичев Б.В., 1989; Рансбергер К., Ной С., 1994).

Гидролитические ферменты медицинского назначения широко используются в лечении болезней органов пищеварения (Слабоспицкая А.Т. и др., 1990; Сорокулова И.Б., 1996); сердечно - сосудистой системы (Демина Н.С., Лысенко С.В., 1991; Паршина С.Н. и др., 1990; Егоров Н.С., 1996; Выборных С.Н. и др., 1990); в хирургии - для обработки гнойных ран, ожоговых и обмороженных поверхностей, с противоспалительной целью (Глянцев С.П., Саввина Т.В., 1996; Слабоспицкая А.Т., Крымовская С.С., Резник С.Р., 1990), а также для лечения некоторых опухолей (Vogler W., 1988; Schleicher P. et al., 1989). Эти препараты могут обладать как широкой субстратной специфичностью, так и узкой направленностью.

В научной литературе имеются сообщения о способах культивирования штаммов рода Bacillus, продуцирующих протеолитические ферменты в лабораторных условиях и условиях крупномасштабных процессов (Мартьянов В.А. и др., 1989; Ицкович E.JI. и др., 1995;Знаменская JI.В. и др., 1995; Дембровская Е.М. и др., 1996; Северин А.И. и др., 1990; Говорунова В.А. и др., 1991; Паршина С.Н. и др., 1990).

Однако столь широкое применение протеолитических ферментных препаратов в медицине и промышленности требуют, с одной стороны, увеличения объема их выпуска, с другой - разработки и внедрения новых препаратов с полезными для человека свойствами. Самые существенные достижения в продуктивности ферментаций объясняются улучшением свойств микроорганизмов - продуцентов путем введения мутаций и соответствующей селекции (Дебабов В.Г., Лившиц В.А., 1988). Получение новых штаммов позволяет решить задачу создания безотходной технологии в микробиологическом производстве: одновременного использования бактериальной массы и культуральной жидкости - в качестве сырья для биопрепаратов. Необходимо учитывать, что подбор условий культивирования, а также методы, применяемые для выделения продукта и его очистки, имеют чрезвычайно важное значение для увеличения объемов выхода целевых продуктов.

Все вышеизложенное обуславливает актуальность исследований, целью которых явилась разработка технологии получения нового протеолитического ферментного комплекса (ПФК) из бактерий рода Bacillus.

Задачи исследования:1.Изучение динамики синтеза протеолитических ферментов в процессе гомогенного глубинного культивирования Bacillus subtilis2.Получение штамма Bacillus subtilis - продуцента протеолитических ферментов3.Оптимизация способа получения ПФК с целью увеличения его активности4. Разработка способов выделения и очистки ПФК5. Изучение свойств полученного нового ПФК.

Научная новизна.

Впервые селекционирован рифампицинустойчивый штамм B.subtilis ЗН, являющийся продуцентом протеолитических ферментов.

Создана технология получения ПФК, включающая процесс периодического гомогенного глубинного культивирования и мембранные методы очистки целевого продукта.

Определены пути оптимизации процесса культивирования B.subtilis штамма ЗН, на основе подбора состава питательной среды, источника углевода, посевной дозы культуры, условий аэрации и скорости перемешивания.

Разработаны способы выделения и очистки ПФК с использованием методов микрофильтрации и ультрафильтрации на биоинертных мембранах фирмы «Ра11», с диаметром пор 1 ООО kD и 1 kD соответственно.

Изучены свойства полученного ПФК, названного Бактилином и установлено, что он состоит из нейтральной металлсодержащей и щелочной сериновой протеаз с молекулярной массой (29±2) kD и (15±1) kD соответственно; обладает широкой субстратной специфичностью; активностью в интервале рН от 5,0 до 12,0.

Новизна проведенных исследований подтверждена патентом РФ N 2112035 «Способ получения протеолитических ферментов из бактерий рода Bacillus», зарегистрированным 27.05.98 г.

Практическая значимость работыВ результате проведенных исследований разработана промышленная технология получения сухой и жидкой форм Бактилина из культуральной жидкости, являющейся отходом при производстве препарата-пробиотика -Бактиспорина.

Показана возможность применения Бактилина для гидролиза мозговой ткани в производстве медико-биологического препарата «Церебролизат» и белковых основ при производстве питательных сред.

По материалам исследований составлена и утверждена нормативно-техническая документация:1. Промышленный регламент на производство Бактилина (09.06.1997)2. Технические условия на Бактилин жидкий (ТУ 9381-001-04863057-97)3. Технические условия на Бактилин сухой (ТУ-005-04863057-97). Полученные экспериментально-производственные серии«Церебролизата» с использованием Бактилина соответствовали требованиям ВФС-42-2219-93 на данный препарат, прошли контроль в ГНИИСК им. Л.А.Тарасевича.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Холодная, Жанна Валерьевна

выводы

1. Получен и охарактеризован новый ПФК бактериальной природы Бактилин, состоящий, в основном, из нейтральной металлсодержащей протеиназы с молекулярной массой (29 ±2) kD, имеющий изоэлектрическую точку в пределах рН 3,5 - 4,0, проявляющий активность в диапазоне области значений рН от 5,0 до 12,0, обладающий широкой субстратной специфичностью.

2. Создана промышленная технология получения Бактилина, включающая оптимизированный, на основе подбора состава питательной среды и физико - химических параметров, процесс гомогенного глубинного культивирования производственного штамма - продуцента, а также выделение и очистку фермента с помощью мембранных методов.

3. Селекционирован новый штамм Bacillus subtilis 3 Н, который в результате приобретенной хромосомной мутации обладает стабильной антибиотикоустойчивостью к рифампицину, полимиксину, стрептомицину, линкомицину, пенициллину и, способностью к сверхсинтезу протеолитических ферментов. Он использован в качестве производственного штамма - продуцента протеиназ в производстве Бактилина.

4. Доказана возможность его промышленного использования в качестве протеолитического фермента в производстве медико биологического препарата «Церебролизат» и для гидролиза белковых основ питательных сред.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Широкая область применения протеолитических ферментов с полезными для человека свойствами требует увеличения объема их промышленного выпуска на основе разработок новых технологий.

Наиболее перспективными продуцентами протеаз являются бактерии рода Bacillus, благодаря ряду имеющихся свойств: они нетоксигенны, авирулентны, генетически и биохимически вариабельны, а, следовательно, перспективны в плане создания новых производственных штаммов.

Возможность управления образованием ферментов в процессе гомогенного глубинного культивирования штаммов - продуцентов позволяет значительно увеличить их выход, а также получать целевые продукты с определенными свойствами. Все вышеизложенное обуславливает актуальность проведенных исследований с целью создания технологии получения ПФК - Бактилина из Bacillus subtilis.

Для достижении указанной цели нами проведены экспериментальные исследования в следующих направлениях:

1. Оптимизация способа получения ПФК с целью увеличения его активности

2. Разработка способов выделения и очистки ПФК

3. Изучение свойств полученного ПФК: определение оптимальных значений рН и температуры, изоэлектрической точки, субстратной специфичности, влияние ингибиторов, молекулярной массы

4. Изучение возможности использования ПФК для гидролиза мозговой ткани в производстве медико - биологического препарата «Церебролизат» и гидролиза белковых основ питательных сред.

Материалом исследований явились штаммы Bacillus subtilis; культуральные жидкости, полученные в процессе гомогенного глубинного культивирования, а также препараты на основе Бактилина.

В создании технологии получения ферментов важное значение имеет подбор штамма - продуцента.

Из литературы известно, что существует много способов создания штаммов - продуцентов, но самые существенные достижения в продуктивности ферментаций обычно объясняют улучшением свойств микроорганизма путем введения мутаций и соответствующей селекции для достижения антибиотикоустойчивости у микроорганизмов (Дебабов В.Г., Лившиц В.А., 1988). Механизм усиления секреции в связи с приобретением этого признака пока неизвестен. Предполагается, что это не прямое воздействие на синтез или секрецию фермента, а опосредованное влияние через нарушение системы, контролирующей спорообразование, например, в случае выработки устойчивости бацилл к антибиотику рифампицину, благодаря чему выход протеолитических ферментов повышается в 2 - 2,5 раза. Основываясь на данных литературы (Настасян И.Н. и др., 1990; Шарипова М.Р. и др., 1994; Навашин С.М., Навашин П.С., 1990) нами проведена селекция антагонистически активного штамма В.subtilis 534 и получен штамм Bacillus subtilis ЗН, несущий хромосомную мутацию устойчивости к рифампицину, подтвержденную сравнительным рестрикционным анализом бактериальных ДНК исходного и селекционированного штаммов.

Экспериментальные данные показали, что в процессе гомогенного глубинного культивирования нового штамма в 2-3 раза увеличивался уровень протеолитической активности культуральной жидкости, кроме того, сократилось время культивирования с 24 до 15,5 ч. Поэтому данный штамм использовался нами в дальнейших исследованиях по оптимизации состава питательной среды и условий культивирования.

Известно, что накопление биомассы, а следовательно, и уровень продукции протеолитических ферментов напрямую зависят от использованных в составе питательной среды источников азота и углевода.

Нами получены результаты, согласующиеся с данными литературы (Коваленко Э.А. и др., 1990; Егоров Н.С., 1983), о предпочтительном использовании в качестве основного органического источника азота -пептона совместно с добавками аммонийных неорганических солей в питательной среде, используемой для выращивания штамма Bacillus subtilis 3 Н - продуцента протеаз.

Большинство авторов, основываясь на результатах проведенных исследований по оптимизации питательных сред считают, что наиболее оптимальными источниками углевода, обеспечивающие высокий выход протеолитических ферментов, является крахмал и мальтоза (Коваленко Э.А. и др., 1990; Петрова К.П. и др., 1991; Бондарчук А.А. и др., 1983).

Для оптимизации питательной среды по источникам углевода нами использованы следующие углеводы: мальтоза, глюкоза, лактоза, маннит, сахароза, крахмал. В ходе экспериментальных исследований установлено, что только крахмал и мальтоза способствовали повышению уровня протеолитической активности в культуральной жидкости, что согласуется с литературными данными. Остальные углеводы подавляли синтез протеаз.

В процессе культивирования селекционированного штамма -продуцента Bacillus subtilis 3 Н с использованием крахмала наблюдался диауксический рост микробной популяции и, связанный с ним переход на другой источник питания, который индуцировал синтез протеазы. Этот переход, возможно, связан с расщеплением крахмала а-амилазой до мальтозы, более доступного для микроорганизмов источника углевода. Поэтому наиболее оптимальным источником углевода для синтеза протеолитических ферментов является мальтоза, оптимальная концентрация которой составила 0,5 %.

В ходе проведенных исследований установлены оптимальные значения параметров процесса культивирования: посевная доза (4,7± 0,3)х109 кл/мл, л содержание растворенного в среде кислорода от (1,1 ±0,2) мг/дм до

0,6±0,1) мг/дм3, скорости перемешивания (450±10) об/мин. При данных условиях получали биомассу с концентрацией (23±2)х109 микробных клеток в мл и культуральную жидкость с протеолитической активностью (2±0,5) ПЕ/мл.

Таким образом, оптимизация процесса получения Бактилина позволила увеличить выход протеолитических ферментов в 5 раз и сократить время культивирования в 2 раза.

Следующая задача наших исследований состояла в выборе методов выделения и очистки экзопротеаз, полученных в процессе гомогенного глубинного культивирования.

Предложенные рядом авторов (Колтукова Н.В., Васкивнюк В.Т., 1980; Сассон А., 1987; Амирханян М.М. и др., 1989; Нехотяева Е.В. и др., 1995; Демина Н.С. и др., 1990; Веселов И.Я. и др., 1975; Морозова И.П. и др., 1993; Шагинян К.Ю. и др., 1980) методы для выделения и очистки ферментов (сепарирование, центрифугирование, фракционирование) оказались нетехнологичными в силу ряда недостатков: больших потерь объемов материала, трудоемкости, энергоемкости, значительной продолжительности процессов, отсутствия возможности масштабировать.

Полученные нами данные подтвердили надежность, эффективность мембранных методов разделения и послужили основой для введения в технологию выделения и очистки ПФК методов микрофильтрации и ультрафильтрации. Эффективность проведения этих процессов зависела от рационального подбора материала и размера пор используемых мембран. На микропористых капроновых мембранах фирмы Мифил с размерами пор 0,22 мкм при микрофильтрации наблюдалось резкое падение протеолитической активности в культуральной жидкости из-за сорбции белка. Устранить потери продукта удалось, заменив мембраны Мифил на мембраны фирмы «Ра11», изготовленные на основе несорбирующих белок материалов с диаметром пор 1 000 kD. При этом в процессе микрофильтрации нам удалось получить материал без потерь протеолитической активности.

В дальнейшем ферментсодержащий материал подвергали очистке от балластных примесей методом ультрафильтрации. Процесс проводили на отечественных мембранах ВПУ - 15 и на пилотной фильтрационной установке фирмы «Ра11». В процессе концентрирования ферментсодержащего материала на отечественной установке наблюдались большие потери фермента из-за сорбции белка на мембранах. Для снижении сорбции последние обрабатывали 0,5 % раствором альбумина, что позволило повысить удельную активность продукта в 1,32 раза, при выходе протеолитических ферментов - 66,4 %. Эффективность работы мембраны ВПУ - 15 резко падала при пропускании через нее 60-70 л ферментсодержащего материала, что явилось основанием нецелесообразности использования данных мембран при ультрафильтрации.

Проведенная в процессе ультрафильтрации апробация мембран фирмы «Ра11», имеющие разный диаметр пор позволила нам убедиться в эффективности проведения процесса концентрирования и очистки Бактилина. Проведенные исследования показали, что наибольшей эффективностью обладают мембраны с диаметром пор 1 kD, обеспечивающие высокий выход протеолитических ферментов (90 ±5) % и повышающие его удельную активность в 3 раза.

Таким образом, в процессе гомогенного глубинного культивирования селекционированного штамма B.subtilis 3 Н получен ферментсодержащий материал, который выделен и очищен методами микро- и ультрафильтрации. Изучение свойств Бактилина явилось следующем этапом наших исследований.

Установлено, что активность Бактилина сохраняется в широком интервале рН от 5,0 до 12,0; для проявления максимальной протеолитической активности оптимумами рН являются значения 7,6 и 9,2, а температуры (37 - 40) °С. Изучение термостабильности Бактилина показало, что при 60 °С в течение 30 мин. происходит инактивация фермента, добавление ионов металлов: Са2+ и Zn2+ в концентрации (1х10~3) М повышает термостабильность и сохраняет протеолитическую активность даже при 70 °С в течение 30 мин.

Бактилин имеет широкую субстратную специфичность: гидролизует казеин, альбумин, желатин, коллаген, трипсин, гемоглобин только в присутствии Са , а также обладает фибринолитической и тромболитической активностями.

Изоэлектрическая точка Бактилина находится в интервале рН 3,5 - 4,0.

Из литературных источников (Мосолов В.В., 1971) известно, что бактерии рода Bacillus продуцируют протеолитические ферменты, относящиеся к классам нейтральных и щелочных протеаз. Общим свойством нейтральных - является инактивация при обработке ЭДТА, щелочных - ДФФ. Проведенные исследования показали, что Бактилин содержит в основном нейтральную металлсодержащую протеиназу, кроме того в его состав входит 15-20 % сериновой щелочной протеиназы.

Молекулярную массу Бактилина определяли двумя способами: гель -фильтрацией и электрофорезом. Основная часть Бактилина представлена белком с молекулярной массой (29±2) kD, некоторая протеолитическая активность обнаруживалась во фракциях с молекулярной массой 15 kD.

Изучение стабильности Бактилина при хранении показало, что жидкий Бактилин нестабилен. При температуре от -40 до 4 °С протеолитическая активность сохранялась только в течение 1 месяца. Добавление Са2+ позволило стабилизировать Бактилин и увеличить срок его хранения до 6 месяцев. Лиофильно высушенный Бактилин сохранял свою активность при хранении его в интервале температур от -10 до 20 °С в течение двух лет.

Изучение свойств Бактилина показало, что он сходен с нейтральными протеиназами бактерий рода Bacillus, а также протеазами, выделенными из других микроорганизмов, в частности, с нейтральным протеолитическим ферментом Террилитином, являющийся продуктом жизнедеятельности плесневого гриба Aspergillus terricola. Это открыло перспективу дальнейших исследований по практическому применению полученного Бактилина в производстве медико - биологического препарата «Церебролизат» и для гидролиза белковых основ питательных сред.

Сравнительное изучение процесов гидролиза мозговой ткани с использованием Бактилина и Террилитина при регламентных значениях параметров процесса показало, что применение Бактилина позволило увеличить скорость реакции и получить требуемую концентрацию аминного азота за 3 ч гидролиза вместо 4 ч. Основной показатель качества -аминокислотный состав оказался идентичным у гидролизатов, полученных с использованием Террилитина и Бактилина.

Применение Бактилина в производстве медико - биологического препарата «Церебролизат» позволило сократить время гидролиза с 4 до 3 ч, и уменьшить концентрацию фермента с 1,6 до 1,2 ПЕ/г. Полученные экспериментально - производственные серии «Церебролизата» соответствовали всем требованиям ВФС-42-2219-93.

С целью расширения сферы применения Бактилина изучена возможность его использования для гидролиза белковых основ питательных сред - мясного фарша, а также для получения ферментолизата пекарских дрожжей. Приготовленная на основе экспериментального гидролизата среда Тароцци признана пригодной для контроля стерильности препаратов, а ферментолизат рассматривали как альтернативу используемому в настоящее врем дрожжевому диализату.

Таким образом, в результате проведенной работы нами селекционирован новый штамм Bacillus subtilis ЗН, несущий хромосомную мутацию устойчивости к рифампицииу, что является основой стабильности признаков антибиотикоустойчивости и связанного с ним сверхсинтеза протеазы. На штамм получен патент РФ N 2067616. Штамм депонирован в коллекции ГНИИСК им. Л.А.Тарасевича под N 248 и использован нами в качестве производственного штамма-продуцента протеолитических ферментов.

Разработана технология получения Бактилина, включающая оптимизацию процесса периодического гомогенного глубинного культивирования селекционированного штамма, в результате которой выход протеолитических ферментов увеличился в 5 раз и сократилось время культивирования в 2 раза; мембранные методы выделения и очистки Бактилина: микрофильтрация и ультрафильтрация с использованием мембран фирмы «Ра11» с диаметром пор 1 ООО kD и 1 kD соответственно, что позволило увеличить удельную активность Бактилина в 3 раза при выходе фермента 95 %. Полученный ПФК - Бактилин обладает широкой субстратной специфичностью, оптимумом рН действия при 7,6 и 9,2, содержит в основном нейтральную металлсодержащую протеиназу. Показана возможность его использования для гидролиза мозговой ткани в производстве медико - биологического препарата «Церебролизат» и получения белковых основ питательных сред. В дальнейшем возможно расширение сферы применения Бактилина.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Холодная, Жанна Валерьевна, Уфа

1. Абрамов В.П., Сороцкин И.М., Лукавый Л.С. Способ непрерывной очистки растворов биологически активных веществ // А.С. N 1009097, S.U. -публ. 1980.

2. Абрамов З.Т., Степанов В.М., Шагинян К.А., Стронгин А .Я., Янонис В.В. Способ получения амилазы и протеиназы // А.С. N 1118064, S.U.-публ. 1982.

3. Алексеева В.В., Калунянц К.А., Овчаров А.К. Выделение и исследование некоторых свойств протеолитических ферментов Bac.subtilis штамма 103 // М/б промышленность. Реф. сб. 1975. - 10. - С. 24-26.

4. Алексеева В.В., Калунянц К.А. Применение ультрафильтрации для концентрирования ферментного комплекса Bacillus subtilis 103 // Ферментная и спиртовая промышленность. 1977. - N 4. - С. 28-33.

5. Аль-Нури М.А., Острошко Т.А., Егоров Н.С. Некоторые свойства экзопротеазы Bac.subtilis var.amyloliguefaciens, способная свертывать плазму крови // Микробиология. 1978. - 47. - N 5. - С. 900-905.

6. Амирханян М.М., Степанов В.М., Амирханян О.М., Еланян М.Ф. Способ выделения ферментных препаратов аминоацилазы, амилаз и протеаз из Aspergillus oryzae // А.С. N 1654335, опубл. 1989.

7. Антипова И., Дагис А., Василяускас Ю. Морфологическая изменчивость бактерий Bacillus subtilis продуцента амилазы // Производство и применение микробных ферментных препаратов. - Вильнюс, - 1974.-Вып.N 1.-С. 3-9.

8. Ахапкина И.Г., Бутова Л.Г., Фомкина И.П. Штамм Bacillus subtilis -продуцент фунгицидного вещества // ЖМЭИ. 1995. - N 17. - С. 91-92.

9. Ашмарин И.П., Воробьев А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.

10. Ю.Баснакьян И. А., Бирюков В.В., Кантере В.М. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза. М.: Наука, 1985. -291 с.

11. П.Баснакьян И.А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами. М.: Медицина, 1992. - 188 с.

12. Бахматова И.В., Жарикова Г.Г. Физиолого-биохимические особенности вариантов Bacillus subtilis, образующих амилазу // Микробиология. 1978.- Т. 47, N 5. - С. 893-899.

13. Бахматова И.В., Жарикова Г.Г. Биосинтез а-амилазы вариантами Bacillus subtilis RG 23 // Микробиология. 1979. - Т. 50, N 3. - С. 514-516.

14. Белокрицкая Г.Ф., Дичешко Ю.В. Протеаза как усилитель иммунного ответа при иммунизации адсорбированным стафилококковым анатоксином // ЖМЭИ. - 1980. - N 11. - С. 49-52.

15. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. М.: Медицина, 1982. - С. 180.

16. Бондарчук А.А., Колтукова И.В., Васкивнюк В.Т. Ферментные свойства комплексных препаратов из Bacillus mesentericus в зависимости от состава питательных сред // Микроб. Журнал. 1983. - Т 45, N 2. - С. 92.

17. Василевская И.А., Бондарчук А.А., Сергейчук М.Т. Эластазная активность бактерий рода Bacillus // М/б журнал. 1979. - 41. N 6. -С. 607-612.

18. Василяускас Ф.Ф. Штамм Bacillus subtilis F-65 продуцент протеазы и а-амилазы // А.С. N 1369289. - публ. 1985.

19. Веселов И.Я., Смирнова Т.А., Балашова Н.А. Протеолитический препарат из культур бактерий Bac.polymyxa штамма 13-13 // Прикл. биох. и микроб. 1975.- 11.-N6. -С. 824.

20. Веремеенко К.Н. Ферменты протеолиза и их ингибиторы в медицинской практике. Киев, 1971.

21. Выборных С.Н., Ландау Н.С., Егоров Н.С. Биосинтез микроорганизмами рода Bacillus фибринолитических ферментов различного механизма действия // Микробиология. 1990. - Т. 59. - Вып. 5. - С. 782-789.

22. Гамалея Н.Б., Левашев B.C. Биологические свойства и механизмы возникновения бактерий, устойчивых к фузидину, эритромицину, хлорамфениколу // ЖМЭИ. 1978. - N 3. - С. 8.

23. Гейл Э. Молекулярные основы действия антибиотиков. М.: Наука, 1975. - С. 323-437.

24. Глянцев С.П., Саввина Т.В. Сравнительное изучение активности протеолитических ферментов, применяемых в хирургии для очищения гнойных ран // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1996. -N6.-С. 716-720.

25. Говорунова В.А., Бабаева П.В., Шевцов В.В. Способ получения протеолитических ферментов // А.С. N 3794948. публ.30.07.91. Бюл. N 28.

26. Голушко Ф.П., Говорунова В.А., Нестеренко А.В. Штамм Bacillus thuringiensis var. gallertae GEP-51 продуцент протеолитических ферментов // A.C.N 1181316, S.U. -публ. 1986. Бюл. N 48.

27. Грачева Н.М., Гаврилов А.Ф., Соловьева А.И. Эффективность нового бактерийного препарата биоспорина при лечении острых кишечных инфекций // ЖМЭИ. 1996. - N 1. - С. 75-77.

28. Данющенкова Н.М., Кардович Г.А., Беренштейн Т.Ф. Действие линкомицина, химотрипсина и их сочетаний на течение экспериментальной стафилококковой инфекции // Антибиотики. 1978. - N 4. - С. 330-333.

29. Дебабов В.Г., Лившиц В.А. Современные методы создания промышленных штаммов. М.: Изд-во Высш. школа, 1988. - С. 81.

30. Дембровская Е.М., Кузнецова О.С., Яковлева Е.П. Способ получения комплекса амилолитических и протеолитических ферментов // Патент N 2054479, R.U. публ. 1996. Бюл. N 5.

31. Демидюк И.В., Звонкова Е.Н., Носовская Е.А. Вариант очистки генно-инженерной металлопротеиназы Bacillus amyloliguefaciens // Биотехнология. 1994. -N 11-12. - С. 13-15.

32. Демина Н.С., Веслова Е.Ф., Гаенко Г.П. Морская бактерия Alteromonas piscicida продуцент ферментов тромболитического действия // Известия АН СССР, серия биология. - 1990. - N 3. - С. 415-419.

33. Демина И.С., Лысенко С.В. Микроорганизмы, синтезируемые ферменты тромболитического действия // Биологические науки. 1991. -N9.-С. 136-153.

34. Демина Н.С., Лысенко С.В. Экзопротеазы культуры Streptomyces lovendulae // Микробиология. 1995. - Т. 64. - N 4. - С. 458-460.

35. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты (в 3-х томах). Москва.: Мир, 1982.1. Т. 1.

36. Долгова Г.В., Бережинская В.В., Егоренко Г.Г. Экспериментальное исследование нового лекарственного препарата для местного применения на основе гентамицина, эритромицина и протеазы С // Антибиотики. 1990. -Т. 35, N9.-С. 28-29.

37. Долгова Г.В., Бережинская В.В., Свиногеева Т.П. Экспериментальное изучение протеазы С протеолитического фермента микробного происхождения // Антибиотики. - 1991. - Т. 36, N 1.- С. 29-31.

38. Долидзе Д.А., Петрова И.С., Фениксова Р.В. Исследование комплекса протеолитических ферментов Actinomyces fradiae 119 // Прикл. биохимия и микроб. 1974. - Т. 10. - N 5. - С. 721.

39. Дорохов В.В., Гладких Т.А., Коршунов И.С. Специфичность щелочной протеиназы Bac.mesentericus // Тр. фермент, отд. ВНИИ, биосинтеза белковых веществ. 1972. - N 1. - С. 64-270.

40. Дубяга В.П., Перепечкин Л.П., Каталевский Е.Е. Полимерные мембраны. М.: Химия, 1981. - 232 с.

41. Дытнерский Ю.И. Баромембранные процессы. М.: Химия, 1986.272 с.

42. Егоров Н.С. Метод диффузии протеолитических ферментов из блоков агара с культурами микроорганизмов. М.: Наука, 1971.

43. Егоров Н.С., Аль-Нури М.А., Острошко Т.А. Очистка i geflki властвост1 протеази Bac.subtilis var.amyloliguefaciens, здатно i згортати плазму KpoBi // М/б журнал. 1977. - N 4. - С. 507-509.

44. Егоров Н.С. Протеолитические ферменты микроорганизмов, обладающие фибринолитиеской и коагулазной активностями // Итоги науки и техники. 1978. -N 9. - С. 5-40.

45. Егоров Н.С., Юдина Т.Г., Лория Ж.К. Способ получения очищенного протеолитического фермента // Патент N 732382, опубл. 1980, бюлл. N 17.

46. Егоров Н.С., Лория Ж.К., Юдина Т.Г. Влияние аминокислот на синтез экзопротеазы Bacillus thuringiensis // Прикладная биохимия и микробиология. 1983. - Т. 19, N 5. - С. 610.

47. Ежов В.А., Троицкая Л.В., Рухлова П.П. Способ выделения комплекса литических ферментов // А.С. N 1755581, S.U. публ. 1995. Бюл. N23.

48. Ермолицкий В.Н., Астапович Н.И. Кислая протеиназа Aspergillus foctidus, выделение и некоторые свойства // Прикл. биохимия и микробиология. 1992. - Т. 28. - N 5. - С. 674.

49. Знаменская Л.В., Ромахина Е.Р., Филатова С.В. Биосинтез внеклеточных ферментов Bacillus intermedius // Микробиология. 1986. -Т. 55.-Вып. 3.-С. 449-454.

50. Иванова Л.Г., Варгина А.К., Горбачев И.Д. Содержание растворенного кислорода в микробиологических питательных средах // ЖМЭИ. 1985.-N 8.-С. 22.

51. Ильин Г.И., Москвичев Б.В. Производство ферментных препаратов микробного синтеза для медицины // Сб.науч.ст. Ферменты микроорганизмов. Ленинград. - 1987. - ч 2. - С. 320.

52. Имшенецкий А.А., Черкесова Г.В., Касаткина И.Д. О фибринолитической активности естественных вариантов Bacillus mesentericus // Микробиология. 1987. - Т. 56, N 9. - С. 947-950.

53. Ирген A.M., Ермолаев Е.Д., Яворковский Л.Л. Способ выделения ферментных препаратов // А.С. N 543670. публ. 1977. Бюл. N 3.

54. Ирматов А.И., Хасанов Х.Т. Влияние различных твердых сорбентов на каталитические свойства кислых протеаз // Тезисы докл. Ташкент. -1991.-С. 365.

55. Ицкович Е.Л., Знаменская Л.В., Балабан Н.П. Биосинтез щелочной внеклеточной протеазы Bacillus intermedius // Микробиология. 1995. - Т. 64, N5.-С. 623-629.о

56. Иомантас Ю.В., Гервинскас В.В., Козлов Ю.И. Клонирование и экспрессия гена секретируемого металлопротеиназу Bac.amyloliguefaciens в клетки Bacillus subtilis // Биотехнология. 1988. - Т. 4, N 6. - С. 692.

57. Кайдалова Н.В., Акимкина Т.В., Ходова О.Д. Анализ структуры протеиназы Bacillus brevis и ее биосинтез в клетки Bacillus subtilis // Молекулярная биология. 1990. - Т. 24, N 5. - С. 1381-1392.

58. Карачевцев В.Г., Куц Г.И., Гаврилова Е.В. Ультрафильтрационные мембраны на основе фторопластов // Тезисы докл. 4 Всесоюз. конф. По мембран, методам разделения смесей. Москва. - 1987. - Т. 2С. 41.

59. Кичакова Н.А. Выделение и изучение свойств термостабильной а-амилазы Вас. sp. 86 / Автореф. дисс. канд. биол. наук. Киев, 1991. - 16 с.

60. Кичакова Н.А., Павлова И.Н., Захарова И.Я. Действие термостабильной а-амилазы Bacillus licheniformis на крахмал и другие субстраты // Микробиологический журн. 1996. - Т.58. - N 5. - С. 24.

61. Клепикова Ф.С., Честухина Г.Г., Борматова М.Е. Штамм бактерий Bacillus megaterium продуцент металлопротеиназы // А.С. N 1440921, S.U. -публ. 1988. Бюл. N 44.

62. Коваленко Э.А., Колтукова Н.В., Стрельчина Т.В. Закономерности биосинтеза гидролаз Bacillus mesentericus на разных средах // Прикл. биохимия и микробиология. 1990. - Т. 26. - N 4. - С. 528-533.

63. Койдуш Г.А. Очистка и концентрирование кислой протеазы // Ферментная и спиртовая промышленность. 1982. - N 5.

64. Колодзейская М.В., Кудинов С.А., Веревка С.В. Способ очистки протеолитического комплекса// А.С. N 1381986, S.U. публ. 1985.

65. Колтукова Н.В., Васкивнюк В.Т. Подбор методов выделения протеолитического ферментного комплекса из Bacillus mesentericus, штамма 316 при глубинном выращивании // Микробиол. Журнал. 1980. - Т. 42. -N2.-С. 245.

66. Колтукова Н.В. Стабилизация комплексного ферментного препарата из Bacillus mesentericus двух валентными катионами металлов // Микробиологический журнал. 1983. - Т. 45. - N 2. - С. 94-95.

67. Корнилов А.А., Петрушкин В.Д., Радовский Е.Д. Способ концентрирования растворов амилолитических и пектолитических ферментов // А.С. N 1064626, S.U. публ. 1981.

68. Кривова А.Ю., Егоров Н.С., Аль-Нури М.А. Влияние аэрации и некоторых восстановителей на биосинтез протеаз и новобиоцина при глубинном культивировании Actinomyces spheroides штамма 35 // Прикл. биохимия и микробиология. 1977. - Т. 13, N 4. - С. 493.

69. Кръстева М., Ганчев К., Месроб Б. Влияние на кальция върху свойства на млекосъеправащенцим от Bac.mesentericus // София. 1972 (1974).-20.-N1.-C. 111-118.

70. Ландау Н.С., Егоров Н.С. Особенности накопления в среде и некоторые свойства протеолитических ферментов, образуемых Nocardia minima // Микробиология. 1996. - Т. 65, N 1. - С. 42-47.

71. Логинова Л.Г., Бабакина В.Г., Калмыкова Г.Я. Использование ферментных препаратов (протеазы и амилазы), выделенных из термоустойчивого штамма Bac.mesentericus // Прикл.биох. и микроб. 1965. -1.-N3.-С. 263-268.

72. Лория Ж.К., Брюкмер Б., Егоров Н.С. Влияние аминокислот на синтез внеклеточных протеаз у Serratia marcescens // Микробиология. -1977. N 1. - С. 41.

73. Лысенко С.В., Демина Н.С. Действие солей металлов на экзопротеазную активность культуры Streptomyces lavendulae // Прикл. биохимия и микробиология. 1996. - Т. 32. - N 2. - С. 228-230.

74. Маркарян А.Н., Остославская В.И., Швядас В.К. О субстратной специфичности внутриклеточной сериновой протеиназы Вас.subtilis // Биохимия. 1980. - 45. - N 7. С.

75. Мартьянов В.А., Зябрев А.Ф., Финогенов Б.П. Получение высокоактивных препаратов нейтральной протеазы Bacillus subtilis / Сб. ст. «Ферменты микроорганизмов» Москва, ВНИИСЭНТИ. - 1989. - С. 175-185.

76. Мишунин И.Ф., Богуславский В.А., Трофимова С.И. Способ получения комплекса протеолитических ферментов // А.С. N 1027206, S.U. -публ. 1983. Бюл. N25.

77. Морозова И.П., Честухина Г.Г., Борматова М.Е. Выделение и характеристика металлопротеиназы Вас. megaterium // Биохимия. 1993. -48.-N6.-С. 896-907.

78. Морозова И.П., Юсупова М.П., Гололобов М.Ю. Металлопротеиназа Вас .mesentericus штамма В-313 // Биохимия. 1993. -58. - N 9. - С.1420-1429.

79. Навашин С.М., Навашин П.С. Рифампицин в современной химиотерапии бактериальных инфекций // Антибиотики и химиотерапия. -1990.-Т. 35,N12.-С. 15-19.

80. Начинкин О.И. Современное состояние теории и практики получения и применения микрофильтрационных мембран // Тезисы докл. 4 Всесоюз. конф. По мембранным методам разделения смесей. 1989. - Т. 2. -С. 13.

81. Нестерова Н.Г., Черкесова Г.В., Кириллова Н.Ф. Субстратная специфичность ферментов Bacillus mesentericus // Микробиология. 1989. -Т. 58.-N4.

82. Нехотяева Е.В., Шарипова М.Р., Балабан Н.П. Внеклеточные гидролазы Bacillus intermedius. Выделение и свойства. Казань.: Казан. Университет, 1995. - 18 с.

83. Никитенко В.И. Вместо лекарств бактерии // Наука в СССР. -1991. - N 4. - С. 116-121.

84. Никитенко Л.И., Никитенко В.И. Штамм бактерий Bacillus sp. -компонент лечебно-профилактического препарата против дисбактериозов и аллергии // А.С. N 1710575, S.U. публ. 1992.

85. Никитенко В.И., Никитенко И.К. Штамм бактерий Bacillus subtilis, используемый для получения препарата для профилактики и лечения воспалительных процессов и аллергических заболеваний // А.С. N 1723116, S.U. публ. 1992.

86. Никифоров В.Г., Зограф Ю.Н. Регуляция активности генов у бактерий. М., 1977.

87. Новый комплексный эубиотик «Биоспорин» для детей и взрослых / Поберий И.А., Харечко А.Т., Садовой Н.В., Литусов Н.В. // Здравоохранение Башкортостана. 1998. - N 1. - С. 97-99.

88. Паберит Н.Ю., Панк М.С., Ааавиксаар А.А. Способ выделения нейтральной металлопротеазы // А.С. N 908088, S.U. публ. 1980.

89. Паберит Н.Ю.,Панк М.С., Лийдерс Очистка и свойства нейтральной металлопротеиназы из термофильной бактерии Bac.brevis // Биохимия. -1984.-49.-N2.-С. 275.

90. Павлова Е.С., Кудряшова В.А., Погоржельская Н.С. Очистка культуры Bacillus subtilis 82 перед концентрированием методом ультрафильтрации. М.: ВНИИ Пищ. Биотехн., 1989. - 14 с.

91. Парр Г.С., Рожанская Т.И. Ультрафильтрационные процессы выделения биологически активных веществ. М.: ЦБНТИ Медбиопрома, 1986.-Вып. 6. - 32с.

92. Паршина С.Н., Имшенецкий А.А., Нестерова Н.Г. Штамм бактерий Bacillus cereus продуцент протеолитических ферментов с тромболитическим действием // А.С. N 1615177, S.U. - публ. 1990. Бюл. N 47.

93. ЮО.Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. -М.: Мир, 1978.-33.

94. Петрова И.С., Винцюкайте М.М. Протеолитическая активность // Прикладная биох. и микроб. 1966. - N 2. - С. 322.

95. Петрова К.П., Антонова Т.Н., Николаева У.А. Влияние углеводов на биосинтез внеклеточных протеиназ с молокосвертывающим действием М-вариантом Bacillus subtilis штамма 76 // Act. microbiol. bulg. 1991. - N 28. -С. 40-45.

96. Полиморфизм как закономерность развития популяций прокариотных организмов / Высоцкий В.В., Заславская П.Л., Машковцева А.В., Баулина О.И. // Биол. науки. 1991. N 12. - С. 5-18.

97. Получение активного варианта бактериальной культуры -продуцента стабильной а-амилазы / Нефедова Л.И., Устинников Б.А., Цурикова И.В., Ермакова Г.Н. // Хранение и переработка сельхозсырья. -1996.-N2.-С. 42-43.

98. Получение и характеристика рифампицинустойчивых мутантов у штамма Streptomyces erythraeus / Настасяк И.Н., Федоренко В.А., Кириченко Н.В., Даниленко В.Н. // Антибиотики и химиотерапия. 1990. -Т. 35, N 12.-С. 15-19.

99. Юб.Прист Ф. Внеклеточные ферменты микроорганизмов. М.: Мир, 1987.- 113 с.

100. Пробиотики и функциональное питание / Шендеров Б. А., Манвелова М.А., Степанчук Ю.Б., Скиба Н.Э. // Антибиотики и химиотерапия. 1997. - Т.42. - N 7. - С. 30-34.

101. Производство белковых веществ. Технология ферментных препаратов. Биотехнология Т. 5 / Быков В.А., Манаков М.Н., Панфилов В.И. и др. Высш. школа, 1987. - 105 с.

102. Прокопенко Л.Г., Чалый Г.А. Влияние трипсина на иммунный ответ при локализованной стафилококковой инфекции // ЖМЭИ. 1984. -N4.-С. 104-108.

103. Резник С.Р., Сорокулова И.Б., Вьюницкая В.А. Профилактический биопрепарат «Споролакт» // Патент N 2035186, R.U. публ. 1995. Бюл. N 14.

104. Рост и спорообразование Bacillus subtilis в различных условиях аэрации / Смирнов В.В., Осадчая А.И., Кудрявцев В.А., Сафронова Л.А. // Микробиологический журнал. 1993. - Т. 55.-N3.-C. 38-44.

105. Н.Рустамбекова Т.С., Голгер Л.И., Калунянц К.А. Способ получения гранулированного ферментного препарата // А.С. N 872549. публ. 1981. Бюл. N 38.

106. Рухлядева А., Чередниченко В., Абрамова И. Утонченный метод определения амилолитической активности в бактериальных препаратах // Международ. Агропром. Журн. 1991. - N 4. - С. 66-68.

107. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды. М.: Мир, 1987.411 с.

108. Свитцов А.А., Орлов Н.С., Кузнецов А.Е. Полупроницаемые мембраны в биотехнологии. Обзор информации. М.: ОНТИТЭИ микробиопром, 1987. - 40 с.

109. Северин А.И., Степная О.А., Кулаев И.С. Металлопротеиназа // А.С. N 1594214, S.U. публ. 1990. - Бюл. N 35.

110. Скоупс Р. Методы очистки белков. Москва.: Мир, 1985. - 358 с.

111. Слабоспицкая А.Т., Крымовская С.С., Резник С.Р. Ферментативная активность бацилл, перспективных для включения в состав биопрепаратов // Микроб. Журнал. 1990. - Т. 52, N 2. - С. 9-14.

112. Смирнов В.В, Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ. - Киев.: Наукова Думка, 1982.-280с.

113. Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б Препарат «Биоспорин» для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний человека // А.С. N 1722502, S.U. публ. 1992.

114. Смирнов В.В., Резник С.Р., Вьюницкая В.А. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus // Микробиол. Журнал. 1993. - Т. 55.-N4.-С. 92-112.

115. Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б Профилактический биопрепарат «Субалин» // ПатентЫ 2035185, R.U. публ. 1995. Бюл. N 14.

116. Сорокулова И.Б. Перспективы применения бактерий p. Bacillus для конструирования новых биопрепаратов // Антибиотики и химиотерапия. -1996.-Т. 41,N10.-С. 13.

117. Способ выделения протеаз // А.С. N 243322 ЧССР (CS), 1986.

118. Способ выделения протеолитических знзимов // А.С. N 241812 ЧССР (CS), 1986.

119. Способ выделения протеолитических ферментов // А.С. N 249200 ЧССР (CS), 1987.

120. Стабилизация пива с помощью ферментного препарата проторизин П 10 х: Сборник трудов НИЛ Санкт-Петерб. комб. пивовар, и безалкогол. пром. им. С. Разина / Калашникова A.M. и др., 1994. Т. 2.1. С. 1-7.

121. Стручков В.И., Григорян А.В., Гостинцев В.К. Протеолитические ферменты в гнойной хирургии. М.: 1970.

122. Субтилизин 72 сериновая протеиназа Bacillus subtilis штамма 72, близкая субтилизину Карлсберг / Акмарова В.Х., Белянова Л.Г., Баратова Л.А., Степанов В.М. // Биохимия. - 1979. - 44. - N 5. - С. 886.

123. Тимковская А.Ф., Ортенберг Э.Ш., Парр Р.С. Способ получения а-амилазы // А.С. N 997454, S.U. публ. 1981.

124. Устинников Б.А., Бурцева Э.И., Васильева Н.Я. Свойства и применение а-амилазы Bac.subtilis 82 // Сб. ст. Ферменты микроорганизмов. - 1989. - ч 1. - С. 186-194.

125. Фетисов Е.А., Чагаровский А.П. Мембранные и молекулярно-ситовые методы переработки молока. М.: Агропромиздат, 1991. - 267 с.

126. Харвуд К. Бациллы. Генетика и биотехнология. М.: Мир, 1992,472 с.

127. Хванг С.Т., Коммермейкер К. Мембранные процессы разделения. -М.: Химия, 1981. -464 с.

128. Цаплина И. А., Ковалевская И. Д. Термофильные бактерии, образующие активные протеиназы // Прикл биох. и микроб. 1969. - 5. -N 6. - С. 657-662.

129. Цаплина И.А., Егорова Л.А. Некоторые особенности роста, развития и синтеза внеклеточной протеазы термофильной бактерии Bac.brevis // Микробиология. 1972. - 41. - N 5. - С. 798-804.

130. НО.Чалый Г. А., Прокопенко Л.Г., Вельский В.В. Иммуностимулирующее и протективное действие препаратов террилитинапри стафилококковой инфекции // Антибиотики и химиотерапия. 1988. -Т. 33, N5.-С. 362.

131. Черкасов А.Н., Полоцкий А.Е., Чечина В.В. Хроматографические и фильтрационные методы очистки и концентрирования биологических препаратов. М., 1983. - С. 35-51.

132. Черкасов А.Н., Пасечник В.А. Мембраны и сорбенты в биотехнологии. Ленинград.: Химия, 1991. - 240 с.

133. Чернякова Н.Ф., Береза Н.М., Селезнева С.И. Бактериологическая и иммунологическая эффективность препарата биоспорина при неспецифическом язвенном колите // Микробиол. Журнал. 1993. - Т. 55. -N3.-C. 63-67.

134. Шагинян К.А., Изотова Л.С., Йомантас Ю.В. Металлопротеиназа из Bacillus subtilis внеклеточные и внутриклеточные ферменты // Биохимия. - 1980. - 45.- N 11. - С. 2083-2095.

135. Шарипова М.Р., Балабан Н.П., Лещинская И.Б. Продукция внеклеточной фосфатазы антибиотикоустойчивыми штаммами Bacillus intermedius // Микробиологи. 1994. - Т. 63, N 1. - С. 52.

136. Шишкова Э.А., Фокина С.С., Орещенко Л.И. Способ получения очищенной щелочной протеиназы Bacillus subtilis // А.С. N 942428, S.U. -публ. 1980.

137. Шишкова Э.А., Фокина С.С. Концентрирование и очистка щелочной протеазы методом ультрафильтрации // Прикладная биохимия и микробиология. 1981. - Т. 17. - N 2.

138. Barel A.O., Glazer A.M. Comparative studies of the enzymatic properties of Novo and Carlsberg subtilisins // J. Biol. Chem. 1968. - V. 243. -N7.-P. 1344.

139. Bernlohr R.W. Postlogarithmic phase metabolism of sporulating microorganisms. Protease of Bacillus licheniformis // J. Biol.Chem. 1964.1. V. 239.-P. 538.

140. Bernlohr R.W., Novelli G.D. Bacitracin biosynthesis and spore formation: the phisiological role of an antibiotic // Arch. Biochem. Biophys. -1963.-V. 103.-P. 94.

141. Boyer E.W., Ingle M.B., Mercer G.D. Isolation and characterization of unusual amylases //Die Starke. 1979. - V. 31. - P. 166-171.

142. Chang Qinghoug, Chen Jia-Jong Effect of the type cosolvent on the extraction process for separation and purification of two ehzymes from Bacillus subtilis using Aliguat 336 reversed miselles // Separ. Sci and Technol. 1995. -V. 30.-N13.-P. 2679-2693.

143. Damodaran M., Govindarajan V.S., Subramanian S.S. The proteolytic system of Bacillus licheniformis // Biochim. Biophys. Acta. 1955. - V. 17. -P. 99.

144. Debabov V.G. The molecular biology of Bacillus // Ed. D. Dubhau. Acad. Press, N.Y. 1982. - V. 1. - P. 331-370.

145. Ehrenberg, R.C., Dritter Beitrag zur Erkennthiss grosser organisation in der Richtung des kleinsten Raumes. Abh. Preuss. Acad. Wiss. Phys. KI. Baelin ausder Jahre. - 1833-1835. - pp. 143-336.

146. Eveleigh D.E. Montenencourt Вас. subt. Isolation of Bacillus subtilis mutants pleiotropicalli insensitive to glucose catabolite repression // Bacteriol. -1979. -N 157. P. 942-944.

147. Fogarty W.M., Kelly C.T. Starch degrading enzymes of microbiol. origin // Prog. Industr. Microbiol. 1979. - N 15. - P. 87-150.

148. Fogarty W.M. Microbiol, amylases, in: Microbiol. Enzymes and Biotechnology // Applied Sciens. 1983. - P. 1-92.

149. Fukumoto J., Yamamoto Т., Ickikacva K. Studies on bacterial proteinases. Part. 8. Purification and some properties of a neutral proteinase of Вас. subtilis // J. Agric. Chem. Soc. 1958. - V. 32. - P. 230.

150. Gordon R.E., Hyde J.L. The Bacillus firmus Bacillus lentus complex andpH 7,0 variants of some alkalophilic strains//J. Gen. Microbiol. - 1982.-V. 28.-P. 1101-1107.

151. Guntelberg A.V., Ottesen M. Preparation of crystals containing the plakalbumin forming enzyme from Bacillus subtilis // Nature. - 1952. - V. 170. -P. 802.

152. Guntelberg A.V., Ottesen M. Purification of the proteolytic enzyme from Вас. subtilis // Compt. rend. trav. lab. Carlsberg, Ser. Chim. // 1954. -V. 29. P. 36.

153. Hagihara В., Matsubara H., Nakai M. Crystalline bacterial proteinase. I. Preparation of crystalline proteinase of Вас. subtilis // J. Biochem. 1958. -V. 45.-P. 185.

154. Hagihara B. Bacterial and mold proteases // in: The Enzymes. 1960. -V. 4.-P. 193.

155. Hall F.F., Kunkel H.O., Prescott J.M. Multiple proteolytic enzymes of Bacillus licheniformis // Arch. Biochem. Biophys. 1966. - V. 114. - P. 145.

156. Hartley B.S. Proteolitic enzymes // Annual Rev. Biochem. 1960. -V. 29. P. 45-72.

157. Keay L. Neutral proteases of the genus Bacillus // Biochem. Biophys. Res. Communs. 1969. - V. 36. - P. 257.

158. Kohlmann K.L., Nielsen S.S., Ladisch M.R. Purification and characterization of an extracellular protease produced by Pseudomonas fluorescens // J. Dai rysci. 1991. - V. 74. - N 12. - P. 4125-4136.

159. Lowry O.H., Rosenbrough H.I., Faar A.L. Protein measurement with the folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. - V. 193. - P. 265-275.

160. Maceda-Coronel L., Orillaza V.E., Arguelles L. Production of proteolytic enzyme from a local strain of Bacillus subtilis // Philipp. J. Sci. -1974.-V. 103. N 3. - P. 149-163.

161. Matsubara H.Crystalline bacterial proteinase. Phosphopeptides from a bacterial proteinase inhibited by diisopropylflyorophosphat // J. Biochem. 1959. -V. 46.-P. 107.

162. Matsubara H., Nishimura S. Crystalline bacterial proteinase. On the reaction with diisoproppyl fluorophosphate // J. Biochem. 1958. - V. 45.- P.503.

163. McConn I.D., Tsuru D., Yasunobu K.T. Вас.subtilis neutral proteinase. A zinc enzyme of high specific activity // J. Biol. Chem. 1964. - V. 239. -P. 3706.

164. Michotey Valerie, Blanco Carlos. Characterization of an endoserine protease secreted by Arthrobacter aureus // Appl. and Environ. Microbiol. -1994. -V. 60. -N 1. P. 341-343.

165. Midler M.I., Finn R.K. Ultrafiltration in snzyme production // Biotechnol. Bioeng. 1966. - N 8.

166. Miyake S., Shimizu J. The studies on Bacillus natto protease. On crystallization of protease // Sci.Repts Hyogo Univ. Agric. Ser. Agric. Chem. -1953.-V. l.-P. 11.

167. Neet K.E., Koshland D.E. The conversion of serin at the active site of subtilisin to cysteine: a chemical mutation // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1966. -V. 56.-P. 1606.

168. Ottesen M., Schellman G.G. The preparation of a crystalline diisopropyl fluorophosphat derivative of subtilisin and the determination of its free amino end group // Compt. rend. trav. Lab. Carlsberg. Ser. Chim. 1957. -V. 30.-P. 157.

169. Pazlarova I., Fens L. Changes in Bacillus subtilis population during continious cultivation // Folia microbiol. 1977. - V. 22. - N 6. - P. 477-482.

170. Peek Keith, Daniel Roym, Menk Colin, Purker Lynne, Coolbear Tim. Thermus sp. purification and characterization of a thermostable proteinase isolated from thermus sp. strain Rf 41 A // Eur. J. Biochem. 1992. - V. 207. - N 3. -P. 1035-1044.

171. Phamthi Т., Urbanek H. Serin neutral proteinase from Bacillus pumilis as metalloenzyme // Acta microbiol. pol. 1974. - V. 36. - N 1. - P. 21-25.

172. Polgar L., Bender M.L. The reactivity of thiol-subtilisin an enzyme containing a synthetic functional group // Biochemistry. 1967. - V. 6. - P. 610.

173. Priest, F.G. Extracellular enzyme synthesis in the genus Bacillus // Bacteriol. Rev. 1977. - V. 41. - P. 711-753.

174. Qiu Xiubao, Gao Dong, Wang Yingda, Weishengwu Xuebao. Изучение очистки и ряда свойств протеазы из Bacillus pumilis // Acta microbiol. sin. 1994. - V. 34. - N 4. - P. 293-300.

175. Rappaport H.P., Riggsby W.S., Holden D.A. А Вас. subt. proteinase. Production, purification and characterization of a proteinase from a transformable strain of Bac.subtilis //J. Biol. Chem. 1965. - V. 240. - P. 78.

176. Ruttlof H. Proteasen aus thermophilen microorganismen // Naturwiss. R. 1978. - V. 27. - N 2. - P. 123-133.

177. Santos I.A.L., Cabral I.M.S., Cooney C.C. Recovery of alkaline proteases by membrane filtration. Effect of membrane type and addition of submicron sized charged particles // Bioprocess. Eng. 1992. - V. 7. - N 5. -P. 205-211.

178. Stoeva S.T. Studies on the inhibition of a zinc proteinase from Bacillus mesentericus strain 76 by 1,10 phenanthroline //Докл. A.H. 1991. - T. 44.-N6.-C. 41-44.

179. Streichhan P., Pollnger W., Van Schaik W., Vogler W. Zur intestinalen Resorption oral applizierter Enzymtherapeutica, insbesondere Wobenzym // Zeitschrift fur Allgemeinmedizin. 1989. - N 65. - P. 716-722.

180. Strongin A.Y. Dicect comparison of the subtilisin like intracellular protease of the Bacillus licheniformis with the homologous enzymes of Bacillus subtilis // J. Bacteriol. - 1979. - V. 137. - N 2. - P. 1017-1019.

181. Takegawa Kaoru, Мои Le Hong, Miyauchi Chiemi, Iwahara Shojiro. Purification and characterization of alkaline proteinase from Arthrobacter protophormiae // Tech. Bull. Fac. Agr. Kagawa Univ. 1993. - V. 45. - N 2. -P. 115-120.

182. Tsuru D., Kira H, Yamamoto T. Studies on bacterial protease. Part. 16. Purification, crystallization and some enzymatic properties of alkaline protease of Вас. subtilis var. amylosaccharticus // Agric. Biol. Chem. 1966. - V. 30.1. P. 1261.

183. Tsuru D., Yamamoto Т., Fukumoto J. Studies on bacterial protease. Part. 13. Purification, crystallization and some enzymatic properties of neutral protease of Вас. subtilis var. amylosaccharticus // Agric. Biol. Chem. 1966. -V. 30. - P. 651.

184. Vogler W. Enzymtherapie bei Weichteilrheumatismus // Natur und GanzheitsMedizin. - 1988. - N 1. - P. 123-125.

185. Ward, O.P. Proteinases // in: Microbiol Enzymes and Biotechnology. Applied Science. 1983, London. - P. 251-317.

186. Welker N.E., Campbell L.L. Unrelatedness of Bacillus amyloliguefaciens and Вас. subtilis // J. Bacteriol. 1967. - V. 94. - P. 1124.