Разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц

Борисова, Ирина Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц
ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц"

На правах рукописи

БОРИСОВА Ирина Александровна

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ИЗГОТОВЛЕНИЯ И КОНТРОЛЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ НЫОКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ И МЕТАПНЕВМОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ ПТИЦ

03.00.06. - «Вирусология»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Владимир - 2008

003171136

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных», г Владимир

Научный руководитель: - кандидат ветеринарных наук,

старший научный сотрудник СТАРОВ Сергей Константинович

Официальные оппоненты: - доктор биологических наук,

старший научный сотрудник ПОНОМАРЕВ Алексей Петрович

ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», г Владимир

- доктор биологических наук, профессор СМОЛЕНСКИЙ Владимир Иванович ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов», г Москва

Ведущая организация: Государственное научное учреждение

1 «Всероссийский научно-исследовательский

ветеринарйый институт птицеводства» (ГНУ ВНИВИП, г Ломоносов)

Защита диссертации состоится «25» июня 2008 года в 10 часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 220 015 01 при ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» по адресу 600901, г Владимир, мкр Юрьевец, ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»

Автореферат разослан «22» мая 2008 г

Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник хз^ Г М Семенова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Для обеспечения стойкого эпизоотического благополучия по инфекционным болезням птиц в промышленном птицеводстве наряду с общими ветеринарно-санитарными мероприятиями широко применяются различные комплексные схемы специфической профилактики с использованием живых и инактивированных вакцинных препаратов [Смоленский В И, 1999, Борисов В В , 2007]

В последнее десятилетие в Российской Федерации возросло количество случаев проявления новых инфекционных болезней (реовирусная инфекция, метапневмовирусная инфекция (МПВИ) птиц, инфекционный энцефаломиелит, инфекционная анемия), которые ранее в стране не регистрировались, и специфическая профилактика против них не проводилась [Ельников В В с соавт, 2004, Ирза В Н с соавт , 2005]

Сложившаяся ситуация требует применения новых подходов к созданию противовирусных препаратов, в частности, перспективным направлением является разработка ассоциированных инактивированных вакцин [Дубовой А С , 1998, Ирза В Н , 2000, Ельников В В с соавт, 2004, Борисов В В , 2007]

Несмотря на широкое использование средств специфической профилактики и карантинных мероприятий по ньюкаслской болезни (НБ), проблема борьбы с этим особо опасным заболеванием птиц остается весьма актуальной во всем мире [Alexander DJ et al, 1998, Манин ТБ, 2000, Wakamatsu N et al, 2006, Miller et al, 2007, Dilaveris D et al, 2007] В 2007 году, по данным МЭБ, в мире было зарегистрировано более 2000 неблагополучных пунктов по ньюкаслской болезни [бюллетень МЭБ, 2007] В последнее время в Российской Федерации отмечена тенденция к увеличению числа неблагополучных пунктов, которые регистрируются в личных подворьях, где специфическая профилактика НБ не проводилась [Руденко Т В с соавт,

1998, Смоленский В И , 1999, Манин Т Б , 2000]

Серьезную угрозу для птицеводческой отрасли страны представляет метапневмовирусная инфекция птиц, наносящая значительный экономический ущерб, который складывается за счет гибели птиц, потерь мясной и яичной продуктивности, затрат на проведение ветеринарно-санитарных мероприятий [Виноходов В О , 2003, Ирза В Н с соавт, 2003, Хлебовец 3 Б с соавт, 2005]

Случаи возникновения метапневмовирусной инфекции птиц отмечены на птицефабриках многих административно-географических регионов Российской Федерации [Ирза В Н с соавт, 2003, 2005], и можно говорить о повсеместном распространении данной болезни в мире [Naylor С J et al, 1997, Cavanagh D,

1999, Alkhalaf A N, 2002, Jones R С , 2004]

Для специфической профилактики МПВИ птиц за рубежом разработаны и применяются живые и инактивированные вакцинные препараты [Jirjis F Е et al, 2001; Worthington К J et al, 2003, Ganapathy К et al, 2006, 2007]

Необходимость в создании инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц возникла в результате следующих причин

- отсутствие отечественных вакцин против НБ и МПВИ птиц,

- широкое распространение в птицехозяйствах Российской Федерации метапневмовирусной инфекции птиц,

- потребность в вакцинном препарате, не содержащем в своем составе инфекционного вируса,

- сокращение количества прививок с целью уменьшения стрессов и нагрузки на иммунную систему ремонтного молодняка

Таким образом, разработка технологии изготовления и контроля инакгивированной вакцины против НБ и МПВИ птиц является актуальной и требует своего решения

Цель и задачи исследований. Главной целью исследований являлась разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ныокаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц и изучение ее иммунобиологических характеристик

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи

подобрать производственные штаммы вируса НБ и метапневмовируса (МПВ),

выбрать оптимальные системы культивирования производственных штаммов вируса НБ и МПВ,

отработать методики инактивации инфекционных свойств вируса НБ и МПВ с использованием различных инактивантов,

выбрать адъюванты, обеспечивающие повышение иммуногенных свойств вакцины против НБ и МПВИ птиц,

определить оптимальный иммунобиологически сбалансированный компонентный состав инактивированной вакцины против НБ и МПВИ птиц,

изучить физические и иммунобиологические свойства разработанной вакцины против НБ и МПВИ птиц в лабораторных и производственных условиях,

разработать нормативную документацию на инактивированную эмульсионную вакцину против НБ и МПВИ птиц

Научная новизна. Впервые разработана отечественная инактивированная эмульсионная вакцина против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц, отработаны технология ее изготовления и методы биологического контроля

Проведено выделение, изучение, паспортизация и депонирование во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ «ВГНКИ», г Москва), штамма «PV03-B №127 ДЕП» метапневмовируса птиц

Разработана оптимальная схема получения вирусного сырья из штамма «PV03-B» метапневмовируса птиц с использованием перевиваемой культуры клеток почки зеленой мартышки Vero

Обоснованы режимы инактивации вирусов НБ и МПВИ птиц бета-пропиолактоном Изучена динамика инактивации вируса НБ и МПВ

Подобран и научно обоснован компонентный состав инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц

В ходе исследований определены оптимальные соотношения антигенов, адъювантов, входящих в состав инактивированных вакцин против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц, дозы и схемы применения препаратов Доказана безвредность, умеренная реактогенность и высокая иммуногенность инактивированных эмульсионной и сорбированной вакцин при их применении на птицефабриках

Изучены в лабораторных и производственных условиях физические и иммунобиологические свойства инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц

Практическая значимость работы. На основании собственных исследований, а также обобщения данных литературы, в соавторстве разработаны и утверждены в установленном порядке следующие методики

- «Методика культивирования и титрования метапневмовируса птиц в перевиваемой культуре клеток Vero»,

- «Методика инактивации метапневмовируса птиц бета-пропиолактоном», которая позволяет сократить время инактивации по сравнению с традиционными технологиями в 2 раза

Полученные результаты послужили основанием для разработки технологии производства и подготовки нормативной документации на вакцину против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированную эмульгированную, которая одобрена на заседании ученого совета ФГУ «ВНИИЗЖ» {протокол №1 от 08 02 2008 г )

- «Стандарт организации на вакцину против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированную эмульгированную (СТО 00495527-0094-2008)»,

- «Промышленный регламент .на производство вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированной эмульгированной»,

- «Инструкция по применению вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированной эмульгированной»

На основании проведенных исследований в ветеринарную практику для специфической профилактики ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц предложена инактивированная эмульсионная вакцина, которая с 2006 г проходит процедуру внедрения в птицеводческих хозяйствах РФ В период с 2006 г по 2008 г выпущено и применено около 18 млн доз вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированной эмульсионной

Практическая ценность разработанного препарата подтверждается положительными результатами широких производственных испытаний

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

- производственный штамм «PV03-B» метапневмовируса птиц, полученный путем адаптации полевого изолята к системе культивирования в перевиваемой культуре клеток Vero,

- оптимальная схема получения вирусного сырья для изготовления инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц,

- инактивация вируса ньюкаслской болезни и метапневмовируса птиц бета-пропиолактоном,

- компонентный состав инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц,

- технология изготовления и методы контроля инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц,

- физические и иммунобиологические характеристики инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц в лабораторных и производственных условиях.

Апробация результатов работы. Основные материалы диссертации были доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции молодых ученых «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику», посвященной 50-летию ФГУ «ВНИИЗЖ» (г Владимир, 2008 г), а также на заседаниях ученого совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 2005-2008 гг

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно Отдельные этапы выполнены совместно с Сарбасовым А Б, Герасимовой Н И , Волковой М А , Хлебовец 3 Б, Прониным А С , за что автор выражает им сердечную благодарность

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 2 работы в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 167 листах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов и практических предложений, содержит 14 таблиц и 9 рисунков Список использованной литературы включает 290 наименований, из них 38 отечественных и 252 зарубежных В приложении представлены копии титульных листов документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы

В работе использовали следующие материалы

Производственные штаммы вирусов НБ и МПВИ птиц:

- производственный штамм «Ла-Сота» вируса ньюкаслской болезни,

- производственный штамм «PV03-B» метапневмовируса птиц

Вакцины:

- лабораторные образцы инактивированной сорбированной и эмульсионной вакцины против НБ и МПВИ птиц (ФГУ «ВНИИЗЖ»),

- инактивированная вакцина против метапневмовируса птиц Nobilis TRT inac производства фирмы «Intervet» (Голландия)

Диагностикумы:

- набор для выявления антител к вирусу ньюкаслской болезни в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) (ФГУ «ВНИИЗЖ»),

- набор для обнаружения антител к возбудителю метапневмовирусной инфекции птиц Svanovir™ производства фирмы «Svanova» (Швеция),

- набор для определения антител к метапневмовирусу иммуноферментным методом (СИНКО) (ФГУ «ВНИИЗЖ»)

Куриные эмбрионы (КЭ) и инкубационные яйца:

- яйца СПФ-кур фирм «Lohmann Tierzucht» (Германия), «Hy-Vac» (США),

- эмбрионы кур кроссов «Хайсекс белый» и «Хай Лайн» (Россия)

Птицы:

- цыплята различных возрастов яичных кроссов «Хайсекс белый», «Хайсекс коричневый» и «Хай Лайн»,

- цыплята, полученные из СПФ-яиц фирм «Lohmann Tierzucht» (Германия) и «Hy-Vac» (США)

Культуры клеток:

- первично трипсинизированные культуры клеток куриных фибробластов (ФЭК) и почки теленка,

- перевиваемые культуры клеток почки африканской зеленой мартышки, почки теленка, гонад козленка, коронарных сосудов теленка (музей культур клеток ФГУ «ВНИИЗЖ»)

Питательные среды, реактивы, растворы н сыворотки:

- питательные среды ПСП и ПСС (ФГУ «ВНИИЗЖ»),

- гидролизат лактальбумина (ГЛА) фирмы «Sigma»,

- сыворотка крови крупного рогатого скота (КРС),

- трипсин фирмы «Merck»,

- водный раствор димера аминоэтилэтиленимина (ДЭИ) (ООО «Биохим ресурс»),

- бета-пропиолактон (БПЛ) (Organics),

- коллоидный 3%-й раствор гидрата окиси алюминия (ГОА) (ФГУ «ВНИИЗЖ»),

- масляный адъювант Montanide ISA 70 VG, «SEPPIC» (Франция)

2 2 Методы исследований Культивирование вируса нькжаслской болезни

Для культивирования вируса НБ использовали куриные эмбрионы 9-10-сут возраста, которые инфицировали по общепринятой методике в аллантоисную полость и инкубировали в течение 80-99 ч

После охлаждения КЭ вскрывали и отбирали экстраэмбриональную жидкость (ЭЭЖ), которую проверяли на стерильность, гемагглютинирующую активность в РГА и инфекционную активность

Культивирование метапневмовируса птиц

Этапы культивирования метапневмовируса птиц

- заражение перевиваемой клеточной культуры Vero метапневмовирусом птиц,

- культивирование метапневмовируса птиц в течение 3-4 сут,

- охлаждение роллерных сосудов с перевиваемой клеточной культурой Vero, зараженной метапневмовирусом птиц,

- сбор вируссодержащего материала

Определение инфекционной активности вирусов НБ и МПВИ птиц

Инфекционную активность вируса НБ определяли титрованием в эмбрионах СПФ-кур 10-сут инкубации Через 72 ч отбирали ЭЭЖ, которую исследовали в РГА

Инфекционную активность метапневмовируса птиц определяли титрованием, которое проводили в двухсуточной клеточной культуре Vero в течение 7 сут

Титр вирусов НБ и МПВИ птиц рассчитывали по методу В Кербера в модификации И П Ашмарина (1962 г)

Определение стерильности

Определение стерильности проводили по ГОСТ 28085-89 и согласно «Руководству МЭБ по стандартам для диагностических тестов и вакцин» на бактериальное загрязнение, исключение контаминации грибами и микоплазмами.

Инактивация вирусов НБ и МПВИ птиц

Инактивацию вирусов осуществляли путем добавления в вируссодержащие жидкости димера аминоэтилэтиленимина или бета-пропиолактона в различных концентрациях и инкубированием при разных температурах по отработанным для каждого возбудителя временным режимам.

Полноту инактивации вируса НБ определяли методом двукратных последовательных пассажей материала в эмбрионах СПФ-кур Инактивацию вируса ньюкаслской болезни считали полной, если ЭЭЖ после второго пассажа не агглютинировала эритроциты петуха

Полноту инактивации МПВ определяли методом трехкратных «слепых» пассажей биоматериала в перевиваемой клеточной культуре клеток

Vero Отсутствие цитопатических изменений в культуре клеток в течение 7 сут подтверждает авирулентность инактивированного МПВ птиц

Изготовление сорбированной формы вакцины против НБ и МПВИ птиц

Лабораторные образцы вакцины против НБ и МПВИ птиц готовили с использованием 3%-го геля ГОА, который смешивали с инактивированными суспензиями вирусов в различных соотношениях

Изготовление эмульсионной формы (»(активированной вакцины против НБ и МПВИ птиц

Масляный адъювант Монтанид ИЗА 70, образующий эмульсию обратного типа, и инактивированные антигены НБ и МПВИ птиц смешивали в соотношении, рекомендованном производителем адъюванта, на гомогенизаторе в течение 4-6 мин при скорости вращения винта 3000 об/мин и температуре 10°С

Определение физических свойств инактивированной эмульсионной вакцины против НБ и МПВИ птиц

Определение типа вакцинной эмульсии осуществляли «капельным методом»

Стабильность эмульсии определяли следующими методами

Центрифугирование образца вакцины

Эмульсию считали стабильной, если после центрифугирования при 3000 об/мин (1000g) в течение 30 мин в пробирке в процессе визуального контроля не обнаружено никаких изменений содержимого, или если высота столба прозрачной фракции, сформировавшейся в верхней части пробирки, не превышает 10% от общей величины столба эмульсии

Метод «быстрого старения»

Эмульсию считали стабильной, если в течение 14 сут в пробирке в процессе визуального контроля не обнаружено никаких изменений содержимого, или если высота столба прозрачной фракции, сформировавшейся в верхней части пробирки, не превышала 10% от общей высоты столба

Экспресс-метод

Пробирку с эмульсией помещали в низкотемпературную холодильную камеру на 1 ч, затем в термостат на 1 ч, после чего измеряли линейкой высоту столба прозрачной фракции в верхней части пробирки

Эмульсию считали хорошего качества, если в пробирке в процессе визуального контроля величина столба нижней водной фракции не превышала 5% от общей высоты столба или отсутствовала, удовлетворительного качества, если величина столба водной фракции составляла от 5% до 15% Вакцина считалась нестабильной, если величина столба водной фракции составляла 15% от общей величины, и более

Определение гранулометрического состава осуществляли следующими методами

Лазерная дифракционная гранулометрия

Для тестирования вакцины использовали лазерный анализатор частиц Microtrac 3500 (США) Эмульсию считали хорошего качества, если средний диаметр частиц дисперсионной фазы D50 не превышал 5,0 мкм, а индекс гомогенности Span был менее 2,4

Световая микроскопия

Эмульсию считали хорошего качества, если в поле микроскопа наблюдалась равномерная мелкозернистая структура

Кинематическую вязкость определяли с помощью вискозиметра по ГФ XI, т 1, с 87

Определение безвредности инактивированной эмульсионной вакцины против НБ и МПВИ птиц

Визуальную оценку степени поражения тканей в месте введения эмульсионной вакцины проводили через 42 сут после прививки по критериям, предложеннымНD Stone(1997г)

- легкие поражения побледнение тканей, окружающих место инъекции, размером до 1 см в диаметре, признаки воспаления отсутствовали,

- средние поражения зона воспалительной реакции тканей, проявляющаяся отечностью, побледнением или гиперемией имела размеры от 1 до 2 см в диаметре, присутствовала диффузно расположенная вакцина,

- сильные поражения очаг воспаления тканей с вовлечением глубоких и поверхностных мышц и образованием гранулем в диаметре от 3 до 4 см, вакцина вытекала на разрезе или присутствовала в тканях в виде белого творожистого вещества

Проверка иммуногенности инактивированной вакцины против НБ и МПВИ птиц

Сущность метода заключалась в определении способности вакцины вызывать у привитых птиц выработку специфических антител против МПВ, которые обнаруживали методом иммуноферментного анализа (ИФА) и в РТГА - против НБ

Птиц в возрасте 50-80 сут прививали инактивированной эмульсионной вакциной против НБ и МПВИ птиц однократно в грудную мышцу в прививном объеме 0,5 см3

Вакцину считали иммуногенной, если титр антител в сыворотках крови у более чем 80% вакцинированных птиц через 21 сут после иммунизации составлял к вирусу НБ не ниже 5 лог2 в РТГА, и процент блокирования антител к МПВ в ИФА был не ниже 40

Статистическая обработка результатов исследований

Использовали общепринятые способы определения дисперсии, стандартных отклонений и доверительных интервалов варьирующих переменных Вычисляли количественные показатели связи зависимых переменных в виде коэффициентов корреляций, детерминации или

коэффициентов регрессионных уравнений (Закс Л , 1976, Мисюк Н С , 1975, Поллард Дж, 1982)

Оценка значимости проведенных статистических вычислений (или адекватности построенных моделей) представлена в виде значения ошибки прогноза (р<0,05)

2.3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.3.1. Подбор штаммов вируса пыокаслской болезни и метаппевмовируса птиц для изготовления инактивированной вакцины

Получение вирусного сырья занимает важное место в технологии изготовления инактивированной вакцины против НБ и МПВИ птиц

В качестве производственного штамма вируса НБ наш выбор был остановлен на штамме «Ла-Сота», который многими исследователями [Ирза В Н, 2000, Манин Т Б , 2000, Ельников В В , 2003, Борисов В В , 2007] признан по своим биологическим и антигенным свойствам наиболее пригодным

Выбор производственного штамма метапневмовирусной инфекции птиц был осложнен тем, что в мире встречаются 4 подтипа метапневмовируса птиц (А, В, С, И)

Нами была проведена диагностическая работа по выявлению и типированию метапневмовирусов птиц в Российской Федерации, которая включала обнаружение генома вируса методом обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР), выделение вируса и регистрацию вирусспецифических антител в крови птиц

За период 2005-2006 гг на наличие метапневмовируса птиц методом ОТ-ПЦР было исследовано 160 проб из 64 птицеводческих хозяйств различных регионов РФ МПВ подтипа В был выявлен в пробах из 10 птицефабрик 8 регионов РФ

На основании полученных результатов был сделан вывод о преобладании на территории Российской Федерации метапневмовируса птиц подтипа В

Таким образом, для изготовления инактивированной вакцины против НБ и МПВИ птиц с целью дальнейшего применения в Российской Федерации целесообразно использовать штаммы подтипа В метапневмовируса

В 2003 г в ФГУ «ВНМИЗЖ» из патологического материала, полученного от больных цыплят-бройлеров, был выделен полевой изолят метапневмовируса птиц, который адаптировали к размножению в первичных и перевиваемых культурах клеток

После проведения молекулярно-биологических исследований и постановки реакции нейтрализации со специфической и эталонной сыворотками к МПВ птиц было сделано заключение о принадлежности изолята к семейству Рагатухо \чп ¿аа, роду Ме(арпеито\чгиБ, подтипу «В» Полученному штамму дано название «РУОЗ-В» и в 2006 г он был депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ «ВГНКИ», г Москва)

под регистрационным номером - штамм «PV03-B №127 ДЕП» метапневмовируса птиц

Во время работ по депонированию штамм «PV03-B» вируса МПВИ птиц был проверен на морфологическое и видовое соответствие, стерильность, контаминацию микоплазмами, вирусами и грибами, инфекционную активность и иммуногенную активность в составе инактивированной вакцины

2 3 2 Разработка оптимальной схемы получения вирусного сырья для изготовления инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц

Для изготовления инактивированных вакцин против НБ в РФ разработана система получения вирусного сырья с применением лентогенного штамма «Ла-Сота», который накапливается в КЭ с высокой инфекционной активностью

При разработке оптимальной системы культивирования вируса МПВ проводили исследования по получению вирусного сырья в развивающихся куриных эмбрионах, а также в первичных и перевиваемых культурах клеток

Было установлено, что штамм «PV03-B» метапневмовируса птиц подтипа В, независимо от способа введения, в 3 и 4 пассажах накапливался в эмбрионах СПФ-кур в незначительных количествах (титры инфекционной активности вируса - от 3 до 4 lg ТЦД50/см3) - •

В дальнейшем, основное внимание было уделено поиску высокоэффективной клеточной системы для получения МПВ птиц подтипа В в количествах, необходимых для производства вакцины

В результате проведенных исследований установлено, что штамм «PV03-B» лучше всего адаптировался и накапливался в перевиваемой культуре клеток Vero В других культурах клеток показатели инфекционности были ниже

Метапневмовирус птиц подтипа В размножался в культуре клеток ФЭК в незначительных количествах с титром инфекционности от 3,0 до 3,5 lg ТЦД5о/см3 С целью повышения показателя накопления вируса были проведены эксперименты по культивированию в культуре клеток ФЭК с обработкой клеток 0,25% раствором трипсина

После применения этого технологического приема удалось получить вирусное сырье с более высокой инфекционной активностью, достигающей 6,75-7,5 lg ТЦД50/см3

Таким образом, для культивирования метапневмовируса птиц подтипа В нами была выбрана перевиваемая культура клеток Vero, которую можно использовать для наработки вирусного сырья в больших количествах

В качестве альтернативного способа получения вирусного антигена можно рассматривать первично трипсинизированную культуру клеток ФЭК, которая менее технологична и требует наличия эмбрионов СПФ-кур

Перевиваемую культуру клеток Vero культивировали в стационарных условиях в роллерных сосудах объемом 3,0 дм3, по разработанным в ФГУ «ВНИИЗЖ» регламентам В качестве ростовой среды использовали питательные среды ПСС, ПСП с 10% сыворотки крови КРС

Сосуды с зараженной культурой клеток помещали в роллерный аппарат стеллажного типа при скорости вращения барабанов 12 об/ч Культуру клеток выращивали при температуре 37,0-37,5°С в течение 3-4 сут до формирования плотного монослоя без признаков дегенерации клеток Из сосудов сливали ростовую среду, монослой клеток дважды отмывали раствором Хенкса и вносили испытуемый вирус с множественностью заражения 0,1-0,5 ТЦД50/на клетку Инфицированные культуры помещали в роллерный аппарат и для контакта вируса с клетками выдерживали 1 ч при температуре 37,5-38,0°С. Затем вносили поддерживающую среду с 2% инактивированной сыворотки крови КРС и культивировали до поражения монослоя на 80-90%

Установлено, что штамм «PV03-B» метапневмовируса птиц имел максимальное накопление в культуре клеток Vero с посевной концентрацией 120 тыс кл/см3. В этом случае титр инфекционности вируса был наибольшим и колебался от 7,50 до 7,75 lg ТЦД50/см3

Оптимальным временем культивирования культуры клеток Vero, при котором получены высокие титры инфекционности МПВ птиц, является 72 ч

Наивысший титр инфекционности метапневмовируса птиц отмечен при выращивании вируса в течение 72 часов

2.3 3. Инактивация вируса нъюкаслской болезни и метапневмовируса птиц с использованием различных инактивантов

После разработки оптимальных схем получения биомассы вирусов НБ и МПВ, перед нами стояла задача по выбору эффективного инактивирующего средства, его концентрации и оптимальных параметров инактивации, обеспечивающих полное подавление инфекционных свойств вирусов при максимальном сохранении антигенных структур вирионов

В Российской Федерации для инактивации инфекционных свойств многих вирусов широко применяется димер аминоэтилэтиленимина

Следует отметить, что ДЭИ выпускается в Российской Федерации одним предприятием партиями с различным содержанием действующего вещества Поэтому в промышленных условиях для полной гарантированной инактивации вируса ньюкаслской болезни используют более высокую концентрацию ДЭИ -от 0,15 до 0,2%, при температуре процесса 27°С в течение 24 ч

При поиске альтернативного эффективного инактиванта провели исследования по изучению условий инактивации вирусов НБ и МПВИ птиц с помощью бета-пропиолактона

В экспериментах по инактивации вируса НБ использовали эмбриональную суспензию штамма «Ла-Сота» с инфекционным титром 10,5±0,1 1§ЭИД50/см3 (lgT0) Изучали воздействие различных концентраций инактиванта в диапазоне от 0,005 до 0,04% Инактивацию проводили при температуре 20±2°С в режиме перемешивания Исследовали динамику инактивации вируса для каждой концентрации БПЛ С этой целью, через заданные интервалы времени (j), из реактора, где происходил процесс инактивации, отбирали пробы, определяли их инфекционный титр (IgTj) и

вычисляли показатели остаточной инфекционности вируса (^У = ^Т) -Полученные результаты представлены в виде графика на рис 1

га

0 4 8 12 16 20 24

время воздействия, ч

Рис. 1. Распределение оценок остаточной инфекционности вируса НБ (V, ^ ЭИД5о/см3) соответственно экспозиции (ч) и концентрации бета-пропиолактона (%) ♦ -0,005; ш — 0,01; Ж-0,02; «-0,04.

Регрессии вида "1$У«)<12)=(-0,б19)11-б 86 и "^(ом^-ОДвб^-Т^О, где "V - прогнозируемое значение для заданной экспозиции воздействия инактиванта и соответственно его концентрации {значение в фигурных скобках}, Я2 - коэффициент детерминации (характеристика линейности модели)

Установлено, что распределения оценок остаточной инфекционности вируса НБ имели вид убывающих значений, из которых следовало, что эффективность воздействия инактиванта определялась его концентрацией При этом инактивирующий эффект БПЛ в концентрациях свыше 0,01% был более выраженным, и соответствующие графики имели приближение к линейному виду На этом основании для концентраций инактиванта 0,02 и 0,04% были построены линейные регрессионные модели, которые оказались адекватными (р<0,01) и позволяли прогнозировать оценки остаточной инфекционности вируса вне диапазона экспериментальных измерений

Учитывая статистические характеристики приведенных прогнозируемых величин, считали, что для стабильного получения инактивированного вируса НБ целесообразно использовать концентрацию БПЛ, равную 0,04%

Для исследования инактивации МПВ использовали культуральную суспензию штамма «РУОЗ-В» с инфекционным титром 7,3±0,2 ^ ТЦД50/см3 (^Т0) По аналогии с экспериментами по инактивации вируса НБ изучали воздействие различных концентраций инактиванта в диапазоне от 0,005 до 0,04%, при температуре 20±2°С в режиме перемешивания Через заданные интервалы времени О) определяли инфекционный титр (^Т]) вируссодержащей суспензии и вычисляли показатели остаточной инфекционности вируса, (^У = 1еТ] - 1§Т0)

Полученные данные, отраженные на рис 2, показывают, что снижение остаточной инфекционности МПВ зависело от концентрации инактиванта и от времени его воздействия

» -2 £ -3

0 §

1 -5

4»

§ -6 : -7

га

I "8 е -9

0 4 8 12 16 20 24 28

время воздействия,ч

Рис. 2. Распределение оценок остаточной инфекционности МПВ (V, ТЦД50/см3) соответственно экспозиции (ч) и концентрации бета-пропиолакгона (%) ♦ -0,005; ■ -0,01; А-0,02; «-0,04

Регрессии вида '^У1оо2>={-1,036)Ь-3,05 и "1йУ{оо4}=(-1,50)Н-4,30, где "V - прогнозируемое значение для заданной экспозиции воздействия инактиванта и соответственно его концентрации {значение в фигурных скобках}, ¡<" - коэффициент детерминации (характеристика линейности модели)

Построенные регрессионные модели позволили определить, что при концентрации БПЛ 0,02%, после 8 ч экспозиции, ожидаемая величина остаточной инфекционности МПВ составила оценку "1§У(0,о2)=(-1,036)8-3,05=(-11,338) ТЦД50/см3, те около 1093% от исходного инфекционного титра В свою очередь, значение имело величину "1еУ(0<мг(-1,50)8-4,30=(-16,30) ^ ТЦЦ$о/см3, т е около 10"14'3% Очевидно, что такие значения экспериментально установить практически невозможно

Учитывая статистические характеристики прогнозируемых величин для гарантированного получения инактивированного МПВ, считали целесообразным использовать бета-пропиолактон в концентрации 0,04%

Для определения влияния различных инактивантов на иммунобиологические свойства вируса НБ и МПВ из инактивированных вирусных суспензий были изготовлены лабораторные образцы инактивированной эмульсионной вакцины против НБ и МПВИ птиц, которые вводили серонегативным цыплятам внутримышечно в прививном объеме 0,5 см

Перед эмульгированием антигенные компоненты НБ и МПВ смешивали в следующих соотношениях 30 70, 40 60 и 50 50 отдельно по каждому инактиванту

Установлено, что иммуногенная активность образцов вакцины, изготовленных на основе вирусного сырья, инактивированного бета-

пропиолактоном, несколько выше в сравнении с образцами, где вирусные антигены инактивировали ДЭИ

В целом можно заключить, что для инактивации вируса НБ и МПВ при изготовлении вакцины можно использовать как ДЭИ, так и бета-пропиолактон, которые позволяют получить препарат с высокой иммуногенной активностью

Следует отметить, что применение бета-пропиолактона для инактивации вирусов НБ и МПВИ птиц предпочтительнее из-за более короткого, в сравнении с ДЭИ, периода инактивации. Кроме этого, процесс инактивации вирусов БПЛ преимущественен, т к не требуется нейтрализация оставшегося свободного инактиванта в вакцине

2.3.4. Выбор оптимальной формы инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапнввмовирусной инфекции птиц

В ветеринарной практике птицеводческой отрасли применяют две формы инактивированных вакцин сорбированную и эмульсионную. Многими исследователями [Ирза В.Н, 2000, Ельников В В, 2004, Борисов В В , 2007] при испытаниях широкого спектра масляных адъювантов и эмульсий различных типов показано, что вакцины против вирусных болезней птиц на основе масляного адъюванта Монтанид ИЗА 70, образующего эмульсию обратного типа, имели наиболее оптимальные физические показатели и высокие иммунобиологические качества В связи с этим при конструировании эмульсионной формы инактивированной вакцины против НБ и МПВИ птиц наш выбор был остановлен на масляном адьюванте Монтанид ИЗА 70 производства фирмы «БЕРРГС» (Франция).

При подборе адъюванта для изготовления сорбированной формы инактивированной вакцины использовали наиболее широко применяемые в производстве ветеринарных вакцин гель гидроокиси алюминия и водный раствор сапонина Количество этих адъювантов в составе вакцины против НБ и МПВИ птиц было следующим. ГО А - 1% и сапонин - 1,0-1,5 мг/доза Для изготовления обеих форм вакцины против НБ и МПВИ птиц брали инактивированные бета-пропиолактоном вирусные антигены, которые смешивали в равных соотношениях (50 50)

Сравнительные испытания иммуногенной активности биопрепаратов провели на серонегативных цыплятах (по 20 цыплят в группе) Образцы вакцины вводили внутримышечно в область груди в прививном объеме 0,5 см3. Через 28 сут после прививки выполняли взятие проб крови для получения сывороток, которые исследовали на наличие специфических антител к вирусу НБ и МПВ

Результаты сравнительных испытаний двух форм инактивированной вакцины против НБ и МПВИ птиц представлены в табл 1, из которой видно, что оба варианта препарата индуцируют выработку высокого уровня антител

Однако следует отметить, что эмульсионная вакцина вызвала образование более напряженного иммунного ответа к обоим вирусным антигенам Так, при серологических исследованиях сывороток крови в РТГА концентрация антигемагглютининов к вирусу НБ у цыплят, привитых эмульсионной формой

вакцины, была выше Средний титр антител составил 10,7+0,3 лог2, в то время как этот показатель по группе цыплят, привитых сорбированной вакциной, был равен 8,3+0,5 лог2 Аналогичную тенденцию зафиксировали при исследовании сывороток крови на наличие антител к МПВ Средний процент блокирования антител в ИФА в группе цыплят, привитых эмульсионной формой вакцины, составил 87,2 (59,6-89,8), а в группе птиц, вакцинированных сорбированным препаратом, был равен 51,2 (42,0-64,3)

Таблица 1

Титры антител после введения эмульсионной и сорбированной форм инактивированной вакцины против ныокаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц

Форма вакцины Название инфекции и серологической реакции Результаты серологических исследований через 28 сут. после прививки

Эмульсионная НБ, РТГА, лог2 10,7+0,3

МПВИ, ИФА, % 87,2 (59,6-89,8)

Сорбированная НБ, РТГА, лог2 8,3±0,5

МПВИ, ИФА, % 51,2 (42,0-64,3)

Контроль НБ, РТГА, лог2 н/о

МПВИ, ИФА, % н/о

Примечание н/о - не обнаружено

Таким образом, на основании проведенных сравнительных испытаний иммуногенной активности двух форм инактивированной вакцины против НБ и МПВИ птиц наиболее перспективной признана эмульсионная форма препарата с использованием масляного адъюванта Монтанид ИЗА 70 |

23 5 Определение оптимального компонентного состава вакцины против ныокаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц

При конструировании инактивированной эмульсионной вакцины против НБ и МПВИ птиц была поставлена задача по определению оптимального соотношения вирусных антигенов в препарате

При изучении инактивации вирусов НБ и МПВИ птиц в эксперименте на восприимчивых цыплятах была установлена более высокая иммуногенная активность образцов вакцины с соотношением антигенов НБ и МПВ в водной фазе- 30 70, которое в дальнейшем считали оптимальным

Однако, учитывая то, что при культивировании вирусов возможно получение вирусного сырья с различной инфекционной активностью, было принято решение о постановке опытов по изучению иммуногенной активности образцов вакцины, содержащих в прививном объеме антигены с различной инфекционной активностью до инактивации

Сначала были изготовлены 3 образца инактивированной вакцины против МПВИ птиц Инфекционная активность МПВ птиц до инактивации была равна 7,0±0,3 ^ ТЦД50/см3

Вирусный антиген до инактивации был разведен физиологическим раствором с таким расчетом, что инфекционная активность образцов антигенов была равна 6,5 и 6,0 ^ ТЦД5о/см3 После инактивации бета-пропиолактоном все вирусные антигены с различной активностью (7,0, 6,5 и 6,0 ^ ТЦД5о/см3) развели физиологическим раствором (ФР) в соотношении 70 30, объединили с масляным адъювантом Монтанид ИЗА 70 и эмульгировали в гомогенизаторе

Разведения вирусного антигена были сделаны с таким расчетом, что в прививном объеме первого образца содержалось около 6,0, второго - 5,5 и третьего - 5,0 ^ ТЦД50 в пересчете на нативный вирус Аналогичные действия были проведены с вирусом НБ, который до инактивации имел титр инфекционной активности, равный 10,0±0,4 ЭИД50/см3 Разведения физиологическим раствором были проведены так, что инфекционная активность полученных образцов была равна 9,0 и 8,0 ^ ЭИД50/СМ3 После процедуры инактивации вирусные антигены с различной активностью (10, 9 и 8 ^ ЭИД50/см3) развели ФР в соотношении вируса к ФР 30 70, объединили с масляным адъювантом Монтанид ИЗА 70 и эмульгировали в гомогенизаторе Таким образом, изготовили 3 образца инактивированной моновакцины против НБ. В прививном объеме первого образца содержалось 8,6, второго - 7,6 и третьего - 6,6 ^ ТЦД50/см3, соответственно

Представленные в табл. 2 данные свидетельствуют о том, что уровень напряженности иммунитета после прививки образцами инактивированных моновакцин против НБ и МПВИ птиц напрямую зависит от инфекционной активности используемого вирусного сырья

При моделировании процентного соотношения вирусных антигенов НБ и МПВ в водной фазе как 30 70 установлено, что для изготовления эмульсионной вакцины против НБ и МПВИ птиц необходимо использовать вирусный антиген НБ с инфекционной активностью до инактивации не ниже 9,0 ЭИД50/см3, а вирусный антиген МПВ - не ниже 6,5 ТЦД50/см3

Использование для изготовления моновакцины вирусного сырья МПВИ птиц с инфекционной активностью до инактивации 6,0 ^ ТЦД50/см3, обеспечило выработку иммунитета только у 60% привитых птиц с самым низким показателем среднего процента блокирования антител, который по истечении 8 недель после прививки был равен 44,9 с диапазоном положительных результатов от 40,6 до 62,2

Таблица 2

Титры антител после введения инактивированных эмульсионных моновакцнн против ньюкаслской болезни и метапневмовнрусной инфекции птиц

Название инфекции Инфекционная активность вируса в образце Соотношение антигена и водно» фазы Расчетное кол-во вируса в прививном объеме Титры антител в РТГА (лог2) и ИФА (средннй процент блокирования антител) в разные сроки после прививки, сут.

28 56

НБ 10,0 ^ЭЩЬо/см3 30 70 8,6 ]£, ЭИДзо/см1 11,1±0,4 11,9+0,3

НБ 9,0 ^ ЭИДзо/см3 30 70 7,6 ЭИДзо/см' 8,2±0,3 9,4±0,3

НБ 8,0 ^ ЭИД50/см3 30 70 6,6 ЭИДзо/см1 6,8±0,4 7,2±0,5

МПВИ 7,0ТЩЬо/см3 70-30 6,0 1ё ИДЛо/см' 20/20* 73,7 (55,8-80,3) 20/20* 77,8 (69,4-82,3)

МПВИ б.б^ТЦДзо/см3 70 30 5,5 ^ТЩЬ/см3 20/20* 65,6 (57,1-77,1) 20/20* 67,1 (52,3-74,5)

МПВИ 6,0 ТЦДо/см1 70 30 5,0 ТЩЫсм' 12/20* 48,3 (41,4-61,2)' 11/20* 44,9 (40,6-62,2)

Контроль не прививалась - - н/о н/о

Примечание н/о - не обнаружено,

* - количество положительных результатов/общее количество проб

Одновременно с исследованиями по определению иммуногенной активности монопрепаратов из того же вирусного сырья были изготовлены 3 лабораторных образца инактивированной эмульсионной вакцины против НБ и МПВИ птиц с процентным соотношением антигенов 30 70 в водной фазе

Результаты экспериментов по определению иммуногенной активности и возможного взаимного влияния антигенов при введении цыплятам в составе инактивированной эмульсионной вакцины против НБ и МПВИ птиц показали, что титры гуморальных антител к вирусу НБ находились на том же уровне, как и после применения моновакцин против НБ с таким же содержанием антигена в прививном объеме (табл 3)

По результатам исследований в ИФА по обнаружению специфических антител к МПВ установлено, что смешивание вирусных антигенов НБ и МПВ в водной фазе вакцины в пропорции 30 70 приводит к их усиленному взаимному влиянию

Таблица 3

Титры антител после введения инактнвнрованной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц

Лабораторный образец Кол-во цыплят в группе, гол. Название инфекции и серологической реакции Титры антител к вирусам после прививки, сут.

28 56

1 20 НБ, РТГА, лог2 10,9±0,3 11,3±0,4

МПВИ, ИФА, % 91,5 (67,3-94,5) 95,3 (78,9-97,2)

2 1 20 НБ, РТГА, лог2 11,4±0,5 11,7±0,2

МПВИ, ИФА, % 94,2 (73,2-96,1) 96,3 (81,0-98,4)

3 20 НБ, РТГА, лог2 10,7±0,3 10,8±0,5

МПВИ, ИФА, % 92,4 (59,8-94,4) 92,9 (75,8-95,2)

Контроль 10 НБ, РТГА, лог2 н/о н/о

МПВИ, ИФА, % н/о н/о

Примечание н/о - не обнаружено

Средний процент блокирования антител в сыворотках крови птиц, привитых вакциной против НБ и МПВИ птиц, колебался от 92,9 до 96,3, а у цыплят, иммунизированных моновакциной против МПВИ птиц, составил 77,8 (69,4-82,3) %

Таким образом, установлено, что для изготовления инактивированной эмульсионной вакцины против НБ и МПВИ птиц процентное соотношение вирусных антигенов НБ к МПВИ птиц в водной фазе должно быть 30 к 70 Инфекционная активность вируса НБ до инактивации должна быть не ниже 9,0 к ЭИД50/СМ3, а метапневмовируса - не ниже 6,5 ^ТЦД5о/см3

2 3 6 Определение физических свойств инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц в зависимости от продолжительности ее хранения

Нами были изучены физические свойства вакцины против НБ и МПВИ птиц инактивированной эмульсионной после длительного хранения (12 мес) при температуре 2-8°С тип вакцинной эмульсии, стабильность вакцинной эмульсии, гранулометрический состав и вязкость

Установлено, что кинематическая вязкость свежеприготовленной вакцины составляла 48,8 мм2/с, а через 12 мес хранения при температуре 2-8°С незначительно выросла - до 55,2 мм2/с Таким образом, кинематическая вязкость в процессе хранения вакцины почти не изменилась и была в пределах допустимых норм

Изучение стабильности вакцинной эмульсии с помощью центрифугирования, экспресс-методики и «быстрого старения» показало, что свежеприготовленная партия эмульсионной вакцины была стабильна во всех трех тестах: величина верхней фракции составляла 2%, отслоения водной фазы не отмечалось Через 12 мес хранения эти показатели практически не изменились во всех трех тестах величина верхней фракции составляла 2%, отслоения водной фазы также не отмечалось Это свидетельствует о том, что вакцинная эмульсия обладает высокой стабильностью как сразу после изготовления, так и в течение длительного срока хранения

Результаты изучения гранулометрического состава эмульсии до и после хранения с помощью лазерной гранулометрии и световой микроскопии показали, что средний линейный диаметр частиц дисперсной фазы свежеприготовленной вакцины составляет 0,810 мкм, индекс гомогенности эмульсии Span составляет 0,94

В процессе хранения эмульсионной вакцины произошло незначительное укрупнение линейного диаметра частиц дисперсной фазы эмульсии, в среднем эта величина составила 1,621 мкм Вакцина оставалась высокогомогенной -индекс Span составил 0,53

«Капельный метод» показал, что вакцинная эмульсия как до, так и после длительного хранения представляла собой «обратный» тип, т е «вода-масло»

Таким образом, установлено, что в процессе хранения у вакцины против НБ и МПВИ птиц инактивированной эмульсионной физические свойства практически не изменились и остались в рамках нормативных требований Об этом свидетельствуют высокая стабильность вакцинной эмульсии, низкая вязкость, высокая гомогенность и оптимальный средний диаметр частиц дисперсной фазы вакцинной эмульсии как до, так и после 12-мес срока хранения Анализируя результаты исследований физических свойств биопрепарата, можно сделать заключение о высоком качестве вакцины против НБ и МПВИ птиц инактивированной эмульсионной, что косвенно может свидетельствовать о ее эффективности

Параллельно исследованиям физических показателей качества биопрепарата проводили оценку его иммуногенных свойств на цыплятах, которым внутримышечно в грудную мышцу в дозе 0,5 мл вводили свежеприготовленную и хранившуюся в течение 12 мес при температуре 2-8°С инактивированную эмульсионную вакцину против НБ и МПВИ птиц

Установлено, что хранение инактивированной эмульсионной вакцины против НБ и МПВИ птиц в течение 12 мес при температуре от 2 до 8°С не привело в существенному снижению иммуногенной активности препарата

2 3 7 Изучение динамики формирования антител к вирусу ныокаслской болезни и метапневмовирусу после иммунизации инактивированной эмульсионной вакциной

В опыте использовали 30 цыплят яичного кросса «Хайсекс коричневый» в возрасте 50 сут, серонегативных к возбудителям НБ и МПВИ птиц

Исследованиями установлено, что инактивированная эмульсионная вакцина против НБ и МПВИ птиц индуцировала у однократно привитых птиц формирование высокого уровня гуморального иммунитета к вирусу НБ (9,55±0,44 лог2) уже через 14 сут после вакцинации При дальнейшем исследовании в более поздние сроки концентрация антигемагглютининов в крови повысилась до 10,25±1,70 лог2 через 42 сут после прививки и до 10,40±0,78 лог2 через 56 сут (срок наблюдения)

Повторное введение препарата через 28 сут после первой иммунизации не привело к приросту титров антител к вирусу НБ

Так, значение титра антител к вирусу НБ через 21 сутки после двукратной иммунизации составило 10,00±0,56 лог2

Серологические исследования методом ИФА показали, что антитела к МПВ начали регистрироваться в защитных титрах так же, как и при ньюкаслской болезни, те через 14 сут после прививки (средний процент блокирования антител - 46,6%) В дальнейшие сроки наблюдения этот показатель возрос до значений 69,5-72,8% После двукратной иммунизации сероконверсии к МПВ также не обнаружено

Таким образом, установлено, что инактивированная эмульсионная вакцина против НБ и МПВИ птиц индуцирует у привитых птиц образование высоких титров специфических антител к вирусу НБ и МПВ птиц

2.3 8. Сравнение иммунобиологических свойств инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метаппевмовирусной инфекции птиц с зарубежным аналогом

В эксперименте для сравнения иммунобиологических свойств были взяты два биопрепарата

- инактивированная эмульсионная вакцина против НБ и МПВИ птиц (экспериментальная серия № 5, ФГУ «ВНИИЗЖ»),

- инактивированная эмульсионная вакцина против МПВИ птиц Nobilis TRT mac, № серии 05920221, «Интервет», Голландия (образец получен из ФГУ «ВГНКИ»)

Следует отметить, что для сравнения была взята зарубежная моновакцина против МПВИ птиц в связи с тем, что бивалентные вакцины против НБ и МПВИ птиц в Российскую Федерацию не импортируются

Серонегативные к вирусам НБ и МПВИ птиц птицы яичного кросса «Хайсекс коричневый» в количестве 40 голов возрасте 10 недель были привиты внутримышечно в грудную мышцу в дозе 0,5 см3 инактивированными вакцинами отечественного и зарубежного производства Через 6 недель после иммунизации у птиц выполняли взятие проб крови, получали сыворотки, которые исследовали в ИФА на наличие антител к вирусу МПВИ птиц В эти же сроки птиц подвергали эвтаназии для проведения послеубойной оценки состояния тканей в месте инъекции

Установлено, что отечественная инактивированная вакцина против НБ и МПВИ птиц не уступает зарубежному монопрепарату против МПВИ птиц по иммуногенной активности

Средний процент блокирования антител к МПВ в ИФА в сыворотках крови птиц, привитых отечественной вакциной, составил значение 80,1 (74,185,8), а у птиц, иммунизированных зарубежной вакциной, он был равен значению 79,0 (69,1-83,5)

Послеубойная оценка тканевых реакций в месте инъекции вакцин показала, что степень поражения тканей по критериям, предложенным Stone Н D , можно отнести к легким

По результатам проведенного эксперимента можно сделать заключение о том, что инактивированная эмульсионная вакцина против НБ и МПВИ птиц производства ФГУ «ВНИИЗЖ» обладает высокими иммунобиологическими свойствами и не уступает зарубежной инактивированной моновакцине против МПВИ птиц

2.3.9 Изучение иммунобиологических свойств инактивированной эмульсионной вакцины против ныокаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц в производственных условиях

На одном из птицепредприятий яичного направления в 2005 г была зарегистрирована вспышка МПВИ птиц, которая сопровождалась увеличением падежа кур на 3-5%, снижением яичной продуктивности на 7-12% и увеличением затрат на проведение лечебных обработок и дезинфекций

Диагноз на МПВИ птиц был поставлен комплексно, на основании клинических признаков, патологоанатомических изменений, серологических данных и результатов молекулярно-биологических исследований (в ПЦР выявлен геном МПВ подтипа В) I

В производственном эксперименте использовали 770 тыс голов кур яичных кроссов «Хай-лайн» и «Хайсекс коричневый»

По данным серологического мониторинга птицепоголовья и эпизоотологических данных нами был определен срок эффективного применения инактивированной вакцины в возрасте 60 сут, в момент снижения титров антител к НБ до уровня, когда необходимо проводить ревакцинацию против данного заболевания, те когда в сыворотках крови отсутствовали антитела к МПВ и не фиксировались признаки данной инфекции

Птиц прививали инактивированной эмульсионной вакциной против НБ и МПВИ птиц однократно в грудную мышцу в прививном объеме 0,5 см3

Для получения сывороток выполняли взятие крови у кур из подкрыльцовой вены в разные сроки после иммунизации до 18-мес возраста

Напряженность и продолжительность поствакцинального иммунитета у кур-несушек после однократной иммунизации инактивированной эмульсионной вакциной против НБ и МПВИ птиц представлены на рис 3 и 4

Дальнейшие серологические исследования показали, что в возрасте 3 мес у птиц концентрация антител к вирусу НБ в крови после иммунизации повысилась до максимального в экспериментах значения и составила 10,9±0,4 лог2 При серологических исследованиях сывороток крови от птиц в более поздние сроки после иммунизации установлено, что титры

антигемагглютининов в крови у кур находились примерно на одном уровне (10,2-10,5 лог2) до 9-мее. возраста.

......

Прстектиа ный уровень антител -

— -1-1-1-1- —i—!—i— — —

2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Сроки после иммунизации, мес.

• - время отбора проб крови

Рис. 3. Показатели напряженности и продолжительности иммунитета к ньюкаслской болезни после прививки инактивированной эмульсионной вакциной против НБ и МПВИ птиц

В дальнейшем отмечено, что концентрация антигемагглютининов в крови кур с возрастом незначительно снизилась.

Так, при исследовании сывороток крови от кур ¡2-мес. возраста средний титр антигемагглютининов составил 9,4±0,5 лог2, а в возрасте 18 мес. у кур в крови концентрация антител снизилась до значения 8,1±0,6 лог2.

По результатам исследования в РТГА следует заключить, что инактивированная эмульсионная вакцина против НБ и МПВИ птиц индуцирует у привитых птиц формирование высокого уровня гуморального иммунитета к вирусу НБ, обеспечивающего надежную защиту кур от заражения в течение всего периода эксплуатации кур.

Аналогичную тенденцию после прививки наблюдали по напряженности и продолжительности иммунитета к МПВИ птиц (рис. 4).

До вакцинации антитела к МПВ в крови привитых кур отсутствовали, а через 1 мес. после прививки уровень защитных антител был максимальным (средний процент блокирования антител 92,1%). В возрасте кур-несушек от 3 до 13 мес. этот показатель был на высоком уровне и колебался от 85,3 до 91,8%. Минимальный процент блокирования антител в крови, равный 68,2%, был зафиксирован у птиц перед убоем в возрасте 18 мес.

Следует отметить, что антитела к обоим вирусам в защитных титрах были обнаружены во всех исследованных пробах крови. В течение всего периода наблюдения на вакцинированном поголовье признаков заболевания ньюкаслской болезнью и метапневмовирусной инфекцией птиц не обнаружено.

Сроки после вакцинации, мое.

• - время отбора проб крови

Рис. 4. Показатели напряженности и продолжительности иммунитета к метапневмовирусной инфекции птиц после прививки инактивированной эмульсионной вакциной против НБ и МПВИ птиц

Таким образом, в производственных условиях на поголовье кур в 770 тыс. голов установлено, что инактивированная эмульсионная вакцина против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц безвредна для кур и индуцирует у них формирование напряженного продолжительного иммунитета к обеим инфекциям в течение всего технологического периода содержания птиц (18 мес.).

3. ВЫВОДЫ

]. Разработана технология изготовления и контроля инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц. Вакцина безвредна, высокоиммуногенна при парентеральном введении и сохраняет свои иммунобиологические свойства при длительном хранении (12 мес.) при температуре от 2 до 8°С.

2. Получен и изучен производственный штамм «PV03-B» метапневмовируса птиц, обладающий выраженными антигенными и иммуногенными свойствами, который при масштабном культивировании в перевиваемой культуре клеток Vero позволяет получать вирусный материал с высокой инфекционной активностью - до 7,75 lg ТЦД50/см°, пригодный для изготовления инактивированной вакцины.

3. Установлено, что для полной инактивации вируса ньюкаслской болезни и метапневмовируса птиц при температуре 20°С и времени инактивации 8 ч необходима конечная концентрация бета-пропиолактона, равная 0,04 %.

эмульсионная вакцина с использованием масляного адъюванта Монтанид ИЗА 70 признана перспективной по оптимальным физическим и более высоким иммунобиологическим показателям

5 Подобрано оптимальное иммунобиологически сбалансированное соотношение антигенных компонентов ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц (30 70) в водной фазе вакцины с масляным адъювантом Монтанид ИЗА 70 с инфекционной активностью вируса ньюкаслской болезни до инактивации не ниже 9,0 lg ЭИД50/см3, а метапневмовируса - не ниже 6,5 lg ТЦД50/СМ3

6 В сравнительных экспериментах показано, что инактивированная эмульсионная вакцина против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц не уступает по иммуногенной активности зарубежному аналогу фирмы «Интервет» (Голландия)

7 В лабораторных и производственных условиях установлено, что инактивированная эмульсионная вакцина против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц безвредна и индуцирует у однократно привитых кур образование напряженного продолжительного иммунитета к обеим инфекциям в течение всего периода содержания птиц (18 мес)

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 Для практического использования предлагается производственный вакцинный штамм «PV03-B №127 ДЕП» метапневмовируса птиц, который после изучения свойств был депонирован во Всероссийской государственной коллекции культур микроорганизмов ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (справка о депонировании ФГУ «ВГНКИ» от 22 11 2006 г)

2 Предложены, комиссионно проверены, одобрены ученым советом и утверждены директором ФГУ «ВНИИЗЖ» следующие методики

- «Методика культивирования и титрования метапневмовируса птиц в перевиваемой культуре клеток Vero» (2006 г),

- «Методика инактивации метапневмовируса птиц бета-пропиолактоном» (2007 г)

3 Результаты научных исследований по разработке технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц и результаты лабораторных и производственных испытаний вошли в нормативную документацию на новый вакцинный препарат

- «Стандарт организации на вакцину против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц (СТО 00495527-0094-2008)».

- «Промышленный регламент на производство вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированной эмульгированной» одобрен ученым советом и утвержден директором ФГУ «ВНИИЗЖ» (2008 г)

- «Инструкция по применению вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированной эмульсионной» (2008 г)

5. СПИСОК О ПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Пневмовирусная инфекция птиц / И.А. Борисова, С К Старов // Тр Федерального центра охраны здоровья ж-ных - Владимир, 2006 - Т4 -С 281-296

2 Обоснование выбора подтипа пневмовируса птиц в качестве антигена инактивированной вакцины /АС Пронин, Н И Герасимова, М А Волкова, 3 Б Хлебовец, И.А. Борисова //Тр Федерального центра охраны здоровья ж-ных -Владимир, 2006. - Т 4 - С 323-328

3 Антигенная активность экспериментальной инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и пневмовирусной инфекции птиц/ И.А. Борисова // Вет патология - 2006 - №4 (19) -С 135-138

4. Метапневмовирусная инфекция птиц обзор литературы / О А Борисова, И.А. Борисова // Владимир, 2007 - 80 с

5 Выявление и типирование метапневмовирусов птиц в Российской Федерации / 3 Б Хлебовец, И.А. Борисова, А С Пронин, С К Старов, В В Дрыгин // Тр Федерального центра охраны здоровья ж-ных. - Владимир, 2007 -Т5.-С 317-325

6 Изучение иммунобиологических свойств эмульсионной инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц в производственных условиях / И.А. Борисова, С К Старов, А Б Сарбасов // Вет патология - 2007 - №4 (23) - С 137-141

Отпечатано на полиграфической базе ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ») Тираж 90 экземпляров, май 2008 г

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Борисова, Ирина Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Метапневмовирусная инфекция птиц.

1.1.1. История изучения и распространения метапневмовирусной инфекции птиц.

1.1.2. Характеристика и морфология метапневмовируса птиц.

1.1.3. Устойчивость метапневмовируса птиц к физическим и химическим факторам.

1.1.4. Клинические и патологоанатомические признаки метапневмовирусной инфекции птиц.

1.1.5. Патогенность.

1.1.6. Способы передачи инфекции.

1.1.7. Метапневмовирус человека.

1.1.8. Диагностика метапневмовирусной инфекции птиц. 27

1.1.9. Меры профилактики и борьбы.

1.2. Ньюкаслская болезнь птиц.

1.3. Конструирование инактивированных противовирусных вакцин для птицеводства.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц"

Актуальность темы. Для обеспечения стойкого эпизоотического благополучия по инфекционным болезням птиц в промышленном птицеводстве наряду с общими ветеринарно-санитарными мероприятиями широко применяются различные комплексные- схемы специфической профилактики с использованием живых и инактивированных вакцинных препаратов.

В последнее десятилетие в Российской Федерации возросло количество случаев проявления новых инфекционных болезней (реовирусная инфекция, метапневмовирусная инфекция птиц, инфекционный энцефаломиелит, инфекционная анемия), которые ранее в стране не регистрировались, и специфическая профилактика против них не проводилась.

Сложившаяся ситуация требует применения новых подходов к созданию противовирусных препаратов, в частности, перспективным I является разработка ассоциированных инактивированных вакцин в различных комбинациях.

Несмотря на широкое использование средств специфической профилактики и карантинных мероприятий по ньюкаслской болезни, проблема борьбы с этим особо опасным заболеванием птиц остается весьма актуальной во всем мире. В 2007 г., по данным МЭБ, в мире было зарегистрировано более 2ООО неблагополучных пунктов по ньюкаслской болезни [288]. В последнее время в Российской Федерации отмечена тенденция к увеличению числа неблагополучных пунктов, которые в основном регистрируются в личных подворьях, где не проводилась специфическая профилактика НБ.

Серьезную угрозу для птицеводческой отрасли страны представляет метапневмовирусная инфекция птиц, которая проявляется в основном на курах и индейках и наносит серьезный экономический ущерб, который складывается за счет гибели птиц, потерь мясной и яичной продуктивности, затрат на проведение ветеринарно-санитарных мероприятий.

Случаи возникновения метапневмовирусной инфекции птиц отмечены на птицефабриках многих административно-географических регионов Российской Федерации [24, 31], и можно говорить о практически повсеместном распространении данной болезни [46, 68, 73, 95, 172, 173, 186, 203, 215, 259, 264].

Для специфической профилактики МПВИ птиц за рубежом разработаны и применяются живые и инактивированные вакцинные препараты [40, 60, 108, 160, 164, 229, 286].

В настоящее время в Российской Федерации для иммунизации птиц против МПВИ применяют импортные препараты и экспериментальную инактивированную эмульсионную вакцину против МПВИ птиц производства ФГУ «ВНИИЗЖ» [12].

Необходимость в создании инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц возникла в результате следующих причин:

- отсутствие отечественных вакцинных препаратов против НБ и МПВИ птиц;

- широкое распространение в птицехозяйствах Российской Федерации метапневмовирусной инфекции птиц;

- потребность в вакцинном препарате, не содержащем в своем составе инфекционного вируса;

- сокращение количества прививок с целью уменьшения стрессов и нагрузки на иммунную систему ремонтного молодняка.

Таким образом, разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц является актуальной и требует своего решения.

Цель и задачи исследований. Главной целью исследований являлась разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц и изучение её иммунобиологических характеристик.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи: подобрать производственные штаммы вируса НБ и метапневмовируса (МПВ); выбрать оптимальные системы культивирования производственных штаммов вируса НБ и МПВ; отработать методики инактивации инфекционных свойств вируса НБ и МПВ с использованием различных инактивантов; выбрать адъюванты, обеспечивающие повышение иммуногенных свойств вакцины против НБ и МПВИ птиц; определить оптимальный иммунобиологически сбалансированный компонентный состав инактивированной вакцины против НБ и МПВИ птиц; изучить физические и иммунобиологические свойства разработанной вакцины против НБ и МПВИ птиц в лабораторных и производственных условиях; разработать нормативную документацию на инактивированную эмульсионную вакцину против НБ и МПВИ птиц.

Научная новизна. Впервые разработана отечественная инактивированная эмульсионная вакцина против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц, отработаны технология её изготовления и методы биологического контроля.

Проведено выделение, изучение, паспортизация и депонирование во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГУ «ВГНКИ», г. Москва), штамма «PV03-B №127 ДЕП» метапневмовируса птиц.

Обоснованы режимы инактивации вирусов НБ и МПВИ птиц бета-пропиолактоном. Изучена динамика инактивации вируса НБ и МПВ.

Подобран и научно обоснован компонентный состав инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц.

В ходе исследований определены оптимальные соотношения антигенов, адъювантов, входящих в состав инакгивированных вакцин против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц, дозы и схемы применения препаратов. Доказана безвредность, умеренная реактогенность и высокая иммуногенность инактивированных эмульсионной и сорбированной вакцин при их применении на птицефабриках.

- «Методика культивирования и титрования метапневмовируса птиц в перевиваемой культуре клеток Vero»;

- «Методика инактивации метапневмовируса птиц бета-пропиолакгоном», которая позволяет сократить время инактивации по сравнению с традиционными технологиями в 2 раза.

- «Стандарт организации на вакцину против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированную эмульгированную (СТО 00495527-0094-2008)»;

- «Промышленный регламент на производство вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированной эмульгированной»;

- «Инструкция по применению вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированной эмульгированной».

На основании проведенных исследований в ветеринарную практику для - специфической профилактики ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц предложена инактивированная эмульсионная вакцина, которая с 2006 г. проходит процедуру внедрения в птицеводческих хозяйствах РФ-. В период с 2006 г. по 2008 г. выпущено и применено около 18 млн. доз вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированной эмульсионной.

Практическая ценность разработанного препарата подтверждается положительными результатами широких производственных испытаний.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту: /

- производственный штамм «PV03-B» метапневмовируса птиц, полученный путем адаптации полевого изолята к системе культивирования в перевиваемой культуре клеток Vero; - оптимальная схема получения вирусного сырья для изготовления инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц;

- инактивация вируса ньюкаслской болезни и метапневмовируса птиц бета-пропиолактоном;

- компонентный состав инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц;

- технология изготовления и методы контроля инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц;

Апробация результатов работы. Основные материалы диссертации были доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции молодых ученых «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику», посвященной 50-летию ФГУ «ВНИИЗЖ» (г. Владимир, 2008 г.), а также на заседаниях ученого совета ФГУ «ВНИИЗЖ» в 2005-2008 гг.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена V автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с Сарбасовым А.Б., Герасимовой Н.И., Волковой М.А., Хлебовец З.Б., Прониным А.С., за что автор выражает им сердечную благодарность.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 2 работы в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Борисова, Ирина Александровна

4. ВЫВОДЫ

1. Разработана технология изготовления и контроля инактивированной эмульсионной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц. Вакцина безвредна, высокоиммуногенна при парентеральном введении и сохраняет свои иммунобиологические свойства при длительном хранении (12 мес.) при температуре от 2 до 8°С.

2. Получен и изучен производственный штамм «PV03-B» метапневмовируса птиц, обладающий выраженными антигенными и иммуногенными свойствами, который при масштабном культивировании в перевиваемой культуре клеток Vero позволяет получать вирусный материал с высокой инфекционной активностью - до 7,75 lg ТЦД50/см3, пригодный для изготовления инактивированной вакцины.

4. В сравнительных испытаниях по выбору оптимальной формы инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц установлено, что сорбированная и эмульсионная формы препарата обладают выраженной иммуногенностью, но эмульсионная вакцина с использованием масляного адъюванта Монтанид ИЗА 70 признана перспективной по оптимальным физическим и более высоким иммунобиологическим показателям.

5. Подобрано оптимальное иммунобиологически сбалансированное соотношение антигенных компонентов ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц (30:70) в водной фазе вакцины с масляным адъювантом Монтанид ИЗА 70 с инфекционной активностью вируса ньюкаслской болезни до инактивации не ниже 9,0 lg ЭИД50/см3, а метапневмовируса - не ниже 6,5 lg ТЦД50/см3. I

6. В сравнительных экспериментах показано, что инактивированная эмульсионная вакцина против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц не уступает по иммуногенной активности зарубежному аналогу фирмы «Интервет» (Голландия).

7. В лабораторных и производственных условиях установлено, что инактивированная эмульсионная вакцина против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц безвредна и индуцирует у однократно привитых кур образование напряженного продолжительного иммунитета к обеим инфекциям в течение всего периода содержания птиц (18 мес.).

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для практического использования предлагается производственный вакцинный штамм «PV03-B №127 ДЕП» метапневмовируса птиц, который после изучения свойств был депонирован во Всероссийской государственной коллекции культур микроорганизмов ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (справка о депонировании ФГУ «ВГНКИ» от 22.11.2006 г.).

2. Предложены, комиссионно проверены, одобрены ученым советом и утверждены директором ФГУ «ВНИИЗЖ» следующие методики:

- «Методика культивирования и титрования метапневмовируса птиц в перевиваемой культуре клеток Vero» [приложение №3];

- «Методика инактивации метапневмовируса птиц бета-пропиолактоном» [приложение №4].

3. Результаты научных исследований по разработке технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц и результаты лабораторных и производственных испытаний вошли в нормативную документацию на новый вакцинный препарат:

- «Стандарт организации на вакцину против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированную эмульгированную (СТО 00495527-0094-2008)» [приложение №7]. 1

- «Инструкция по применению вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц инактивированной эмульгированной» [приложение №8].

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Борисова, Ирина Александровна, Владимир

1. Аминоэтилэтиленимин средство инактивации инфекционности вируса ящура / Н.А. Улупов, В.В. Михалишин, А.А. Гусев, Т.Н. Лезова // Соврем, аспекты вет. патол. ж-ных: матер, конф., посвящ. 40-летию ФГУ «ВНИИЗЖ». - Владимир, 1998. - С. 53-62.

2. Баран, А.А. Флокулянты в биотехнологии / А.А. Баран, А.Я. Тесленко // Флокулянты в биотехнологии. Л.: Химия, 1990. - 1.43 с.

3. Бомфорд, Р. Адъюванты / Р. Бомфорд // Биотехнология клеток животных. М.,1989. - Т. 2. - С. 264-280.

4. Борисов, В.В. Разработка средств и методов диагностики и специфической профилактики аденовирусных болезней кур: дис. . д-ра вет. наук / Борисов Владимир Владимирович. Иваново, 2007. -357 с.

5. Виноходов, В.О. Синдром «опухшей головы» или введение в отоларингологию птиц / В.О. Виноходов // Ветеринария в птицеводстве. 2003. - №1(7). - С. 14-27.

6. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Е.В. Соловьев, Н.В. Фомина. М.: ВНИИТиБП, 1998. - С. 194-198, 218-233, 868-870.

7. Дубовой, А.С. Ассоциированные инактивированные вакцины в птицеводстве / А.С. Дубовой // Матер, науч.-практ. конф., посвящ. 190-летию высш. вет. образования в России и 100-летию вет. науки. -СПб., 1998.-Ч. 1.-С. 74-75.

8. Дудников, А.И. Перспективы использования адъювантов в противоящурных вакцинах / А.И. Дудников // Матер, семин. спец. стран-членов СЭВ «Разработка и использование новых адъювантов для биотехнологических целей». Владимир, 1990. - С. 3-6.

9. Дунаев, Г.В. Изучение переносчиков вируса болезни Ньюкасла / Г.В. Дунаев,.Е.Н. Назаренко// Вопр. вет. вирусол. 1966. - С. 637-638.

10. Ельников, В.В. Испытания ассоциированной инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и реовирусного теносиновита птиц // Вет. медицина 2004: м1жвщ. тем. наук. сб. - Харюв, 2004. -Вип. 84.-С. 308-312.

11. Изучение антигенных свойств пневмовируса птиц на цыплятах / А.Б. Сарбасов, С.К. Старов, А.В. Борисов и др. // Актуальн. пробл. инфекц. патологии ж-ных: матер. Междунар., науч. конф., посвящ. 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ». Владимир, 2003. - С. 354-356.

12. Изучение особенностей персистенции и тропизма пневмовируса птиц подтипа А с помощью полимеразной цепной реакции / З.Б. Хлебовец, J1.0. Щербакова, Т.Б. Манин и др. // 1-й Междунар. вет. конгр. по птицеводству. М., 2005. - С. 93-97.

13. К вопросу о применении моновалентных инактивированных вакцин в птицеводстве / И.К. Рождественский, Р.Н. Коровин, А.С. Дубовой и др. //Докл. ВАСХНИЛ. 1991. - № 6. - С. 50-52.

14. Киур-Муратов, А.П. О чуме птиц / А.П. Киур-Муратов // Ветеринария. -1944. -№11-12. -С.28-31.

15. Кюне, П. Вакцина NOBILIS ND С2 надежная защита против ньюкаслской болезни / П. Кюне // Ветеринария. - 2007. - № 5. -С. 18-19.

16. Манин, Т.Б. Усовершенствование методов ретроспективной диагностики и оценки поствакцинального иммунитета ньюкаслской болезни птиц: дис. . канд. вет. наук / Манин Тимофей Борисович. -Владимир, 2000. 135 с.

17. Медуницын, Н.В. Вакцинология / Н.В. Медуницын // Вакцинология: -2-е изд., М., 2004. - С. 162-184.

18. Методические указания по диагностике заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц с использованием серологических реакций. Ч. 1. Владимир, 2008. - С. 128-132.

19. Николаева, И.П. Репродукция вируса синдрома снижения яйценоскости-76 в культуре клеток / И.П. Николаева, И.К. Рождественский // Ветеринария. 1982. - № 4. - С. 28-30.

20. Новая вирусвакцина против ньюкаслской болезни и инфекционного ларинготрахеита / Н. Придыбайло, И. Белкина, В. Белкин и др. // Птицеводство. 2007. - № 4. - С. 51-53.

21. Проблемы респираторных заболеваний в современном птицеводстве / В.Н. Ирза, А.В. Борисов, В.В. Борисов и др. // 1-й Междунар. вет. конгр. по птицеводству. М., 2005. - С.14-22.

22. Рождественский, И.К. Химическая инактивация вирусов для получения убитых противовирусных вакцин / И.К. Рождественский, Р.Н. Коровин, А.А. Баранова // Вестник с.-х. науки 1992. - № 1. -С. 139-144.

23. Руденко, Т.В. Иммунопрофилактика ньюкаслской болезни в птицехозяйствах / Т.В. Руденко, В.И. Смоленский // Ветеринария. -1998.-№ 12.-С. 18-20.

24. Сафонов, Г.А. Применение инактивированных вакцин против ньюкаслской болезни / Г.А. Сафонов, Т.А. Калинина // Ветеринария. -1987.-№ 5.-С. 36-37.

25. Свинцов, П.М. Инфекционные болезни птиц / П.М. Свинцов, А.Я. Фомина, И.И. Очкина// Ветеринария. 1947. - № 3. - С. 7.

26. Смоленский, В.И. Средства и методы специфической профилактики болезней птиц вирусной этиологии: дис. в виде науч. докл. . д-ра биол. наук. М., 1999. - С. 28-36.

27. Современные средства борьбы при болезни Ньюкасла в странах мира, использованные в 2004-2005 гг. / А. Коломыцев, В. Филоматова, А. Орлов, А. Книзе // Вет. патол. 2007. - № 2. - С. 77-78.

28. Сюрин, В.Н. Диагностика вирусных болезней животных / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина- М.: Агропромиздат, 1991. 527 с.

29. Сюрин, В.Н. Частная ветеринарная вирусология / В.Н. Сюрин, Н.В. Фомина. М.: Колос, 1979. - С. 233-240, 409-415.

30. Терюханов, А.Б. Антигенная активность вируса болезни Ньюкасла, инактивированного разными препаратами / А.Б. Терюханов, С.В. Панкратов, С.А. Емельянова // Росс. вет. журнал. СХЖ. 2007. • № 4. -С. 40-41.

31. Фомина. Н.В. Аденовирусная инфекция животных. / Н.В. Фомина -М.: Колос, 1995. Т. 2. - С. 117-192.

32. Эпизоотология с микробиологией / И.А. Бакулов, Е.И. Буткин, В.А. Ведерников, Г.Г. Юрков. М.: Колос, 1981. - С. 330-335.

33. A combination in-ovo vaccine for avian influenza virus and Newcastle disease virus / J. Steel, S.V. Burmakina, C. Thomas et al. // Vaccine. -2008. Vol. 26, №4. - P. 522-531.

34. A live attenuated turkey rhinotracheitis virus vaccine / J.K.A. Cook, M.M. Ellis, С .A. Dolby et al. //Avian Pathol. 1989. - Vol. 18. - P. 511-534.

35. A modified enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of avian pneumovirus antibodies / S.J. Chiang, A.M. Dar, S.M. Goyal et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 2000. - Vol. 12. - P. 381-384.

36. A newly discovered human pneumovirus isolated from young children with respiratory tract disease / B.G. Van den Hoogen, J.C. de Jong, J. Groen et al. // Nature Med. 2001. - Vol. 7. - P. 719-724.

37. A preliminary report of investigations into turkey rhinotracheitis in Great Britain / D.J. Alexander, E.D. Borland, C.D. Breacewel et al. // State Vet. J. 1986. - Vol. 40. - P. 161-169.

38. A preliminary vaccine potency trial of a Newcastle disease virus inactivated with binary ethylenimine / C. Buonavoglia, A. Fioretti, M. Tollis et al. // Vet. Res. Comm. 1988. - Vol. 12.-P. 195-197.

39. A sequential histopathologic and immunocytochemical study of chickens, turkey poults and broiler breeders experimentally infected with turkey rhinotracheitis virus / N. Majo, G.M. Allan, C.J. O'Loan et al. //Avian Dis. -1995. Vol. 39. - P. 887-896.

40. A serological survey of turkey rhinotracheitis virus infection in chickens in Japan / M. Tanaka, N. Kokumai, T. Obi et al. // J. Vet. Med. Sci. 1996. -Vol. 58.-P. 689-691.

41. A serosurvey using enzyme-linked immunosorbent assay for antibodies against poultry pathogens in Ostriches (Struthio camelus) from Zimbabwe / H.F. Cadman, P.J. Kelly, R. Zhou et al. // Avian Dis. 1994. - Vol. 38. -P. 621-625.

42. A wild goose metapneumovirus containing a large attachment glycoprotein is avirulent but immunoprotective in domestic turkeys / R.S.

43. Bennett, R. La Rue, D. Shaw et al.J // J. Virol. 2005. - Vol. 79. -P.14834-14842.

44. Abdul-Aziz, T.A. Principles and practice of vaccine-induced immunity / T.A. Abdul-Aziz // World Poultry. 1998. - Vol. 14, № 8. - P. 70-74.

45. Aldous, E.W. Newcastle disease in pheasants (Phasianus colchicus): A review / E.W. Aldous, D.J. Alexander//Vet. J. 2008. - Vol. 175, № 2. - P. 181-185.

46. Alexander, D.J. Newcastle disease and other avian paramyxoviridae infections // Diseases of Poultry / ed. B.W. Calnek et al. 10th ed. - Ames: Iowa, 1997.-P. 541-570.

47. Alexander, D.J. Avian paramyxoviruses / D.J. Alexander // Proc. 34th Western Poultry Dis. Conf. Davis, California, 1985. - P. 121-125.

48. Alexander, D.J. Infection of fowls with Newcastle disease virus by food contaminated with pigeon faeces / D.J. Alexander, G. Parsons, R. Marshall // Vet. Rec. 1984. - Vol. 115. - P. 601 -602.

49. Alexander, D.J. Newcastle disease // State Vet. J. 1995. - Vol.5, № 3. — P.21-24.

50. Alexander, D.J. Newcastle disease virus an avian paramyxovirus // D.J. Alexander// Boston etc., 1988. - P. 11-12.

51. Alexander, D.J. Newcastle disease virus pathotypes / D.J. Alexander, W.H. Allan //Avian Pathol. 1974. - Vol. 3. - P. 269-278.

52. Alexander, D.J. Procedures for the haemagglutination and the haemagglutination inhibition tests for avian infectious bronchitis virus / D.J. Alexander, N.J. Chettle //Avian. Pathol. 1977. - № 6. - P. 9-17.

53. Allan, W.H. The suitability of various challenge strains of Newcastle disease virus for use in potency tests of live and inactivated vaccine / W.H. Allan, D.H. Thornton // J. Biol. Stand. 1980. - Vol. 8. - P. 133-138.

54. Analysis of genome sequence of human metapneumovirus / B.G. Van den Hoogen, T.M. Bestebroer, A.D.M.E. Osterhaus, R.A.M. Foucher // Virology. 2002. - Vol. 295. - P. 119-132.

55. Antibodies to TRT in chickens with swollen heat syndrome / P.J. Wyeth, N.J. Chettle, R.E. Gough et al. // Avian Dis. 1987. - Vol. 31. - P. 286287.

56. Antigenic differentiation of strains of turkey rhinotracheitis virus using monoclonal antibodies / J.K.A. Cook, B.V. Jones, M.M. Ellis et al. // Avian

57. Pathol.- 1993. Vol. 22. - P. 257-273.

58. Appearance of type В avian Pneumovirus in Great Britain / C.J. Naylor, K. Shaw, P. Britton, D. Cavanagh //Avian Pathol. 1997. - Vol. 26. - P. 327-338.

59. Arns, C.W. Swollen head syndrome in poultry flocks in Brazil / C.W. Arns, H.M. Hafez // Proc. 41st Western Poultry Dis. Conf. Sacramento, California, 1992. - P. 81-83.

60. Attempts to reproduce swollen head syndrome in specific pathogen free chickens by inoculating with Escherichia coli and/or turkey rhinotracheitis virus / K. Nakamura, M. Mase, N. Tanimura et al. //Avian Pathol. 1998 -Vol. 27. - P. 21-27.

61. Avian pneumovirus infection in broiler chicks inoculated with Escherichia coli at different time intervals / A.R. Al-Ankari, J.M. Bradbury, C.R. Naylor et al. // Avian Pathol. 2001. - Vol. 30. - P. 257-267.

62. Avian pneumovirus infection in Minnesota turkeys: experimental reproduction of the disease / F.E. Jirjis, S.L. Noll, D.A. Halvorson et al. // Avian Dis. 2000. - Vol. 44. - P. 222-226.

63. Avian pneumovirus infection of laying hens: experimental studies / J.K.A. Cook, J. Chester, F. Orthel et al. // Avian Pathol. 2000. - Vol. 29. - P. 545-556.

64. Avian pneumovirus update / D.A. Senne, R.K. Edson, J.C. Pederson, B. Panigrahy // Proc. 134th Ann. Conf. Am. Vet. Med. Assoc. Schaumburg, Illinois, 1997.-P. 190.

65. Bachnemann, H.G. Inactivation of viruses in serum with binary ethylenimine / H.G. Bachnemann // J. Clin. Microbiol. 1976. - Vol. 3. - P. 209-210.

66. Bachnemann, H.G(. Oil adjuvants vaccine against foot and mouth disease / H.G. Bachnemann, J.A. Mesquite II BoLCPFA. 1987. - Vol. 53. - P. 2530.

67. Banet-Noach, C. Characterization of Israeli avian metapneumovirus strains in turkeys and chickens / C. Banet-Noach, L. Simanov, S. Perk // Avian Pathol. 2005. - Vol.34, № 3. - P. 220-226

68. Barber, T.L. Inactivation of bluetongue virus with binary ethylenimine I T.L. Barber, M.M. Jochim //Ann. Med. Am. Soc. Microbiol. 1978. - Vol. 3. - P. 339.

69. Beach, J.R. Avian pneumoencephalitis / J.R. Beach // Proc. Ann. Meet. US. Livestock Sanit. Assoc. 1942. - Vol. 46. - P. 203-223.

70. Beard, C.W. Serologic procedures / C.W. Beard // Isolation and Identification of Avian Pathogens / ed. S.B. Hitchner et al. Kennett Square, 1980.-P. 129-135.

71. Beard, C.W. Newcastle disease / C.W. Beard, R.P. Hanson // Diseases of poultry I ed. M.S. Hofstad et al. 8th ed. - Ames: Iowa, 1984. - P. 452470.

72. Beaudette, F.R. Newcastle disease in New Jersey / F.R. Beaudette, Black J.J. // Proc. Ann. Meet. US. Livestock Sanit. Assoc. 1946. - Vol. 49.-P.'49-58.

73. Bell, I.G. Failure to detect antibody to turkey rhinotracheitis virus in Australia poultry flocks / I.G. Bell, D.J. Alexander // Austral. Vet. J. 1990. -Vol. 67.-P. 232-233.

74. Bomford, I. Adjuvants in veterinary vaccines / I. Bomford // Vaccinevmanual. The production and quality control of veterinary vaccines fro use in developing countries. FAO. Rome, 1997. - P. 277-284.

75. Box, P.G. Newcastle disease in turkeys / P.G. Box, B.I. Halliwell, P.H. Haliwell //Vet. Rec. 1970. - Vol. 86. - P. 524-527.

76. Buys, S.B. The isolation and attenuation of a virus causing rhinotracheitis in turkeys in South Africa, Onderstepoort / S.B. Buys, J.H. Du Preez, J.H. Els // J. Vet. Res. 1989. - Vol. 56. - P. 87-98

77. Cavanagh, D. Innovation and discovery: the application of nucleic acid-based technology to avian virus detection and characterization / D. Cavanagh//Avian Pathol. 1999.-Vol. 30.-P. 581-598.

78. Cegla, C. Untersuchungen zur Immunogenitaet eines inaktivieten, multivalenten IB/ND Oelemulsionsimpfstoffs in Legehybrid-und-Mastelterntierherden / C. Cegla, D. Luetticken, E.F. Kaleta // Dtsch. tierarztl. Wochenschr. Bd. 93. - S. 465-520.

79. Cessi, D. Requirements for testing oil emulsion inactivated Newcastle disease vaccine / D. Cessi, L. Nardelli // Develop. Biol. Stand. 1974. -Vol. 25. - P. 325-328.

80. Cessi, D. Vaccination against Newcastle disease: Efficacy of an oil emulsion vaccine / Cessi D., Nardelli L. // Avian. Pathol. 1974. - Vol. 3. -P. 247-253.

81. Characterization of human metapneumoviruses isolated from patients in North America / T.C. Peret, G. Biovin, Y. Li et al. // J. Infect. Dis. 2002. -Vol. 185. - P. 1660-1663.

82. Cherry, J-D. Large-quanticy production of chicken embryo tracheal organ cultures and use in virus and mycoplasma studies / J.D. Cherry, D. Taylor-Robinson //Applied Microbiol. 1970. - Vol. 19. - P. 658-662.

83. Chettle, N.J. The use of an ELISA test to detect antibodies to turkey rhinotracheitis / N.J. Chettle, P.J. Wyeth // Brit. Vet. J. 1988. - Vol. 144. -P. 282-287.

84. Cloning and sequencing of the matrix protein (M) gene of turkeyVrhinotracheitis virus reveal a gene order different from that of respiratory syncytial virus /Q. Yu, P.J. David, J. Li, D. Cavanagh //Virology. 1992. -Vol. 186.-P. 426-434.

85. Collins, M.S. Antigenic differentiation of avian pneumovirus isolates using polyclonal antisera and mouse monoclonal antibodies / M.S. Collins, W.J. Cox, N.J. Gettle //Avian Pathol. 1993. - Vol. 22. - P. 469-479.

86. Collins, M.S. Characterization of a virus associated with turkey rhinotracheitis / M.S. Collins, R.E. Gough //J. Gen. Virol. 1988. - Vol. 69. - P. 909-916.

87. Collins, M.S. Experimental infection of turkeys chickens, ducks, geese, guinea fowl, pheasants and pigeons with turkey rhinotracheitis virus / M.S. Collins, W.J. Cox, N.J. Gettle //Vet. Rec. 1988. - Vol. 123. - P. 58-59.

88. Collins, M.S. Respiratory syncytial virus / M.S. Collins, K. Mclntons, R.M. Chanoc // Fields Virology. 3rd ed. - Philadelphia, 1996. - P. 1313-1351.

89. Comparative pathogenesis of a subtype A with a subtype В avian pneumovirus in turkeys / S. Van de Zande, H. Nauwynck, S. De Jonghe et al. //Avian Pathol. -1999. Vol. 28. - P. 329-244.

90. Comparison of F-, G- and N-based RT-PCR protocols with conventional virological procedures for the detection and typing of turkey rhinotracheitis virus / M.H. Bayon-Auboyer, V. Jestin, D. Toquin et a!. // Arch. Virol. -1999.-Vol. 144.-P. 1091-1109.

91. Comparison of the effects of ultrasonic waves, formaldehyde and IJ-propiolactone on inactivation of Newcastle disease virus / N.G.G. Behbahan, H.R. Varshow, Y. Tahamtan, R. Momayez // Proc. 15th World Vet. Poultry Congr. Beijing, 2007. - P. 152.

92. Comparison of the full-length genome sequence of avian metapneumovirus subtype С with other paramyxoviruses / H.C.M. Lwamba, R. Alvarez, M.G. Wise et al. // Virus Res. 2005. - Vol. 107. -P. 83-92.

93. Cook, J.K.A. Attenuation of turkey rhinotracheitis virus by alternative passage in embryonated chicken eggs and tracheal organ cultures / J.K.A. Cook, M.M. Ellis //Avian Pathol. 1990. - Vol. 19. - P. 181-185.

94. Cook, J:K.A. Detection and differentiation of avian pneumoviruses (metapneumoviruses) / J.K.A. Cook, D. Cavanagh // Avian Pathol. 2002. -Vol. 31-P. 117-132.

95. Cook, J.K.A. In vitro and in vivo studies in chickens and turkeys on strains of turkey rhinotracheitis virus isolated from the two species / J.K.A. Cook, S. Kinloch, M.M. Ellis // Avian Pathol. 1993. - Vol. 22. - P. 157170.

96. Council of the European Communities 1993. Commission Decision of 8 Feb. 1993 laying down the criteria to be used against, Newcastle disease in the context of routine vaccination programmes // Off. J. Europ. Commun^ L59.-1998.-P. 35.

97. Dani, M.A. Molecular characterization of Brazilian avian pneumovirus isolates: comparison between immunochemiluminescent Southern blot and nested PCR / M.A. Dani, E.L. Durigon, C.W. Arns // J. Virol. Methods. -1999.-Vol. 79.-P. 237-241.

98. Demonstration of a candidate virus for turkey rhinotracheitis in experimentally inoculated turkeys / R.C. Jones, C. Baxter-Jones, G.P. Wilding et al. // Vet. Rec. 1986. - Vol. 119. - P. 599-600.

99. Demonstration of loss of attenuation and extended field persistence of a live avian metapneumovirus vaccine / E. Catelli, M. Cecchinato, C.E. Savage et al. // Vaccine. 2006. - Vol. 24, № 42-43. - P. 6476-6482.

100. Der monecrotic toxin and tracheial cytotoxin, putative virulence factors of Bordetella avium / C.R. Gentry-Week, B.T. Cookson, W.E. Goldman et al. // Infect. Immun. 1988. - Vol. 56. - P. 1698-1707.

101. Desmettre, P. Tolerance locale et innocuite des vaccins aviaires en adjuvant huileux / P. Desmettre, A. Chevrier // Develop. Biol. Stand. -1981.-Vol. 51.-P. 45-53.

102. Detection of antibodies to avian pneumovirus by a micro indirect immunofluorescence test / Y. Usami, M. Mase, O. Yamaguchi, K. Imai // Avian Dis. -1999. Vol. 43. - P. 384-390.

103. Detection of avian pneumovirus in tissues and swab specimens from infected turkeys / J.C. Pedersen, D.A. Senne,- B. Pannigrafy, D.L. Reynolds//Avian Dis. -2001. Vol. 45, № 3. - P. 581-592.

104. Detection of avian pneumovirus in wild Canada geese (Branta canadensis) and blue-winged teal (Anas discros) / R.S. Bennett, B. McComb, H.J. Shin et al. // Avian Dis. 2002. - Vol. 46, № 4. - P. 10251029.

105. Detection of turkey rhinotracheitis virus in turkeys using the polymerase chain reaction / L. Jing, J.K.A. Cook.T.D.K. Brown et al. //Avian Pathol. -1993.-Vol. 22.-P. 771-783.

106. Development of a vaccine-challenge model for avian metapneumovirus subtype С in turkeys /. B.T. Velayudhan, S.L. Noll, A.J. Thachil et al. // Vaccine. 2007. - Vol. 25, № 10. - P. 1841-1847.

107. Discrepanciens in turkey rhinotracheitis ELISA results using different antigens / N. Eterradossi, D. Toguin, M. Guittet, G. Bennejean //Vet. Rec. 1992. - Vol. 131.-P. 563-564.

108. Doyle, T.M. A hitherto unrecorded disease of fowls due to a filter-passing virus / T.M. Doyle // J. Сотр. Pathol. Therap. 1927. - Vol. 40. - P. 144169.

109. Eidson, C.S. Field trials with an oil emulsion Newcastle disease vaccine in broiler breeders / C.S. Eidson, P. Villegas, S.H. Kleven // Poultry Sci. -1980. Vol. 59. - P. 702-707.

110. Enterradossi, N. Evaluation of different turkey rhinotracheitis viruses used as antigens for serological testing following live vaccination and challenge / N. Enterradossi, D. Toquin, G. Bennejean //Vet. Med. 1995. -Vol. 42.-P. 175-186.

111. European Pharmacopoeia / European Department for the Quality of Medicines within the Council of Europe. 3rd ed. - Strasbourg, France, 1997.-870 p.

112. Evidence of avian pneumovirus spead among wild birds and domestic turkeys in central North America / R.S. Bennett, M.K. Njenga, J. Nezworski et al. // Avian Dis.- 2004. Vol. 48. - P. 902-908.

113. Evidence of human metapneumovirus in Australian children / M.D. Nissen, D.J. Siebert, I.M. Mackay et al. // Med. J. Austral. 2002. - P. 176-188.

114. Experimental and field evaluation of a live vaccine against avian pneumovirus / D.P. Patnayak, M.A. Sheikh, B.R. Gulati et al. II Avian Pathol. 2002. - Vol. 31. - P. 377-382.

115. Experimental infection of laying of turkey with rhinotracheitis virus: distribution of virus in the tissues and serological response / R.C. Jones, R.A. Williams, C. Baxter-Jones et al. //Avian Pathol. 1988. - Vol. 17. -P. 841-850.

116. Experimental infection of turkeys, chickens, ducks, geese, guinea fowl, pheasants, and pigeons with turkey rhinotracheitis virus / R.E. Gough, M.S. Collins, W.J. Cox , N.J. Chettle //Vet. Rec. 1988. - Vol. 123. - P. 5859.

117. Experimental pathogenesis for chickens, turkeys, and pigeons of exotic Newcastle disease virus from an outbreak in California during 2002-2003 / N. Wakamatsu, D.J. King, D.R. Kapczynski et al. // Vet. Pathol. 2006. -Vol. 43, № 6. - P. 925-933.

118. Fraenkel-Conrat, H. Chemical modification of viruses / H. Fraenkel-Conrat // Comprehensive Virology. N.Y.; London, 1981. - Vol. 17. - P. 245-283.

119. Folitse, R. Efficacy of combined killed-in-oil emulsion and live Newcastle disease vaccines in chickens / R. Folitse, D.A. Halvorson, V. Sivanandan // Avian Dis. 1998. - Vol. 42, № 1. - P. 173-178.

120. Gallili, G.E. Newcastle disease vaccines / E. Gallili, D. Ben-Nathan // Biotechnol. Advances. 1998. - Vol. 16, № 2. - P. 343-366.

121. Ganapathy, K. Avian metapneumovirus an elusive pathogen of chickens (Part 1) / K. Ganapathy // World Poultry. - 2007. - Vol. 23, № 4. -P. 36-37.

122. Ganapathy, K. Avian metapneumovirus: diagnosis and prevention (2)/ K. Ganapathy // World Poultry. 2007. - Vol. 23, № 5. - P. 35-37.

123. Gard, S. Theoretical consideration in the inactivation of viruses by chemical meanes / S. Gard // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1960. - Vol. 83. - P. 513-760.

124. Giamborone, J.J. Effect of breeder vaccination on immunization of progeny against Newcastle disease / J.J. Giamborone, J. Closser // Avian Dis. 1990. - Vol. 34, № 1. - P. 114-119.

125. Giamboroner J.J. Laboratory evaluation- of Newcastle disease vaccination programs for broiler chickens / J.J. Giamborone // Avian Dis. -1985. Vol. 29. - P. 479-487.

126. Giamborone, J.J. Laboratory evaluation of the immune response of young broiler chickens vaccinated Newcastle disease under field conditions / J.J. Giamborone // Poultry Sci. 1981. - Vol. 60. - P. 12041208.

127. Glose relationship between TRT virus isolates / C. Baxter-Jones, J.K.A. Cook, J. A. Frazier et al. //Vet. Rec. 1987. - Vol. 120. - P. 562.

128. Goddard, R.D. Serology-based potency test for inactivated Newcastle disease vaccines / R.D. Goddard, R.A.J. Nicholas, P.R. Luff // Vaccine. -1988. Vol. 6, № 6. - P. 530-532.

129. Gold adapted avian pneumovirus for use as live, attenuated vaccine in turkeys / D.P. Patnayak, B.R. Gulati, M.A. Sheikh et al. // Vaccine. 2003. -Vol. 21. -P.-1371-1374.

130. Gough, R.E. Antigenic relationships of three turkey rhinotracheitis viruses / R.E Gough, M.S. Collins // Avian Pathol. 1989. - Vol. 18. - P. 227-238.

131. Gough, R.E. Immune response to monovalent and bivalent Newcastle disease and infectious bronchitis inactivated vaccines I R.E. Gough, W.H. Allan, D. Nedelciu //Avian Pathol. 1977. - Vol. 6. - P. 131-142.

132. Gough, R.E. Isolation of an avian pneumovirus from broiler chickens I R.E. Gough//Vet. Rec. 1994.-Vol. 134.-P. 353-354.

133. Grant, M. An enzyme-linked immunosorbent assay for the serodiagnosis of turkey rhinotracheitis infection I M. Grant, C. Baxter-Jones, G.P. Wilding //Vet. Rec. 1987. - Vol. 120. - P. 279-280.

134. Gross, G.M. Newcastle disease vaccine production // Newcastle Disease / ed. D.J. Alexander. - Boston, 1988. - P. 333-346.

135. Hafez, H.M. Comparative investigation of turkey rhinotracheitis (TRT) virus isolates from different countries / H.M. Hafez // Dtsch. tierarztl. Wochenschr. 1992. - Bd. 99. - S. 489-488.

136. Hafez, H.M. Swollen head syndrome: clinical observations and serological examinations in West Germany / H.M. Hafez, U. Lohren // Dtsch. tierarztl. Wochenschr. 1990. - Bd. 97. - S. 322-324.

137. Hafez, H.M. The role of pneumovirus in swollen head syndrome of chickens: review / H.M. Hafez //Arch. Geflugelkunde. 1993. - Bd. 57. - S. 181-185.

138. Hamid, H. The pathology of infection of chickens with the lentogenic V4 strain of Newcastle disease virus / H. Hamid, R.S.F. Champbell, C. Lamichhane //Avian Pathol.- 1990. Vol. 19. - P. 687-696.

139. Herfst, S. Vaccination approaches to combat human metapneumovirus lower respiratory tract infections I S. Herfst, R.A.M. Fouchier 11 J. Clin. Virol. 2008. - Vol. 41, № 1. - P. 49-52.

140. Higgins, D.A. Nine disease outbreaks associated with myxoviruses among ducks in Hong Kong / D.A. Higgins // Trop. Anim. Health Prod. -1971.-№ 3.-P. 232-240.

141. High genetic diversity of the attachment (C) protein of human metapneumovirus I N. Ishiguro, R. Ebihara, X. Endo et al. // J. Clin. Microbiol. 2004. - Vol. 42. - P. 3406-3414.

142. Hitchner, S.B. A virus of low virulence for immunizing fowls against Newcastle disease (avian pneumoencephalitis) / S.B. Hitchner, E.P. Johnson //Vet. Med. 1948. - Vol. 43. - P. 525-530.

143. Holmes, H.C. Resistance of the respiratory tract of the chicken to Newcastle disease virus infection following vaccination: The effect of passively acquired antibody on its development / H.C. Holmes II J. Сотр. Pathol. 1979. - Vol. 89. - P. 11 -20.

144. Horvath, E. Potency test of inactivated Newcastle disease vaccines by monoclonal antibody blocking ELISA / E. Horvath, G. Czifra, E. Nagy // Vaccine. 1999. - Vol. 17, № 23-24. - P. 2969-2973.

145. Human metapneumovirus and lower respiratory tract disease in otherwise healthy infants and children /J.V. Williams, P.A. Harris, S.J. Tollefson et al. // N. Engl. J. Med. 2004. - Vol. 350. - P. 443-500.

146. Human metapneumovirus as a cause of community-acquired respiratory illness / J. Stockton, I. Stephenson, D. Fleming, M. Zambon // Emerg. Infect. Dis. 2002. - № 8. - P. 897-901.

147. Human metapneumovirus fusion protein vaccines that are immunogenic and protective in cotton rats / G. Cseke, D.W. Wright, S.J. Tollefson et al. // J. Virol. 2007. - Vol. 81. - P. 698-707.

148. Identification of a natural multi-recombinant of Newcastle disease virus / G.-Z. Han, C.-Q. He, N.-Z. Ding, L.-Y. Ma //Virology. 2008. - Vol. 371, № 1. - P. 54-60.

149. Immunity to avian pneumovirus infection in turkeys following in ovo vaccination with an attenuated vaccine / K.J. Worthington, B.A. Sargent, F.G. "Davelaar, R.C. Jones // Vaccine. 2003.' - Vol. 21, № 13-14. - P. 1355-1362.

150. Immunization of macaques with formalin-inactivated human metapneumovirus induces hypersensitivity to hMPV infection / R.L. de Swart, B.G. Van den Hoogen, T. Kuiken et al. // Vaccine. 2007. - Vol. 25, №51.-P. 8518-8528.

151. Infections rhinotracheitis in turkeys: antigenic differences revealed by ELISA / D. Toguin, N. Eterradossi, M. Guittel et al. // New and Evolving Virus Diseases of Poultry: Proc. Seminar / Europ. Comm. Brussels, 1994. -P. 111-121.

152. Infectious bronchitis virus vaccine interferes with the replication of avian pneumovirus vaccine in domestic fowl / J.K.A. Cook, M.B. Huggins, S.J. Orbell et al. // Avian Pathol. 2001. - Vol. 30, № 3. - P. 233-242.

153. Isolation of a pneumovirus from a Muscovy duck / D. Toguin, M.H. Bayon-Auboyer, N. Eterradossi et al. // Vet. Rec. 1999. - Vol. 145. - P. 680.

154. Isolation of a TRT-like virus from chickens with swollen head syndrome / J.P. Picault, P. Girand, P. Drouin et al. //Vet. Rec. 1987. - Vol. 121. -P. 135.

155. Isolation of avian pneumovirus in QT-35 cells / S.L. Chiang, A.M. Dar, S.M. Goyal et al. //Vet. Rec. 1998. - Vol. 143. - P. 596.

156. Isolation of avian pneumovirus in US turkey flocks / S.M. Goyal, S. Chiang, A. Dar et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 2000. - Vol. 12. - P. 116118.

157. Isolation of avian pneumoviruses from mallard ducks that is genetically similar to viruses isolated from neighboring commercial turkeys / H.J. Shin,

158. K.V. Nagaraja, В. McComb et al. // Virus Res. 2002. - Vol. 83. - P. 207212.

159. Isolation of ortho- and paramyxovirus from wild birds in Northern Ireland during the 1997 Newcastle epizootic / D.A. Graham, A. German, D. Abernethy et al. // Vet. Rec. 1999. - Vol. 145. - P. 20-21.

160. Jones, R.C. Avian pneumovirus infections: questions still unanswered / R.C. Jones //Avian Pathol. 1996. - Vol. 23. - P. 639-648.

161. Jones, R.C. Respiratory viral diseases lessons to be learned? / R.C. Jones // Int. Poultry Prod. - 2004. - Vol. 12, № 4. - P. 11-15.

162. Jonson, P.R. The fusion glycoproteins of human respiratory' syncytial virus of subgroups A and В sequence conservation provides a structural basis for antigenic relatedes / P.R. Jonson, P.L. Collins // J. Gen. Virol. -1988. Vol. 69. - P. 2623-2628.

163. Kaleta, E.F. Methoden fiir die Isolierung aviarer Paramyxoviren sowie Virustupisierung mit konventionellen Technicen. Seminar liber Isolierung und Characterizierung von aviaren Paramyxoviren. Gieften, 1989. - S. 825.

164. Kaleta, E.F. Proceedings of the CEC Workshop on Avian Paramyxoviruses / E.F. Kaleta, U. Heffels-Reudmann. Rauischholzhausen, Germany, 1992.

165. Kapczynski, D.R. Immunization of turkeys with a DNA vaccine expressing either the F or N gene of avian metapneumovirus / D.R. Kapczynski, H.S. Sellers // Avian Dis. 2003. - Vol. 47. - P. 1376-1383.

166. King, D.J. Serological profiles of commercial broiler breeders and their progeny. 2. Newcastle disease virus / D.J. King // Avian Dis. 1986. - Vol. 30. - P. 724-727.

167. Lam, K.M. Newcastle disease virus-induced damage to embryonic tracheae and red blood cells / K.M. Lam // Avian Dis. 2003. - Vol. 47, № 1. - P. 197-202.

168. Lancaster J.E. Newcastle disease a review of the geographical incidence and epizootology // World Poultry Sci. J. - 1977. - Vol. 33. - P. 155-165.

169. Lancaster, J.E. Newcastle disease a review 1926-1964 / J.E. Lancaster: Monograph № 3. Canadian Department of Agriculture. -Ottawa, 1966.

170. Latex immunoassay for rapid detection of Newcastle disease virus / G. Thirumurugan, R. Jayakumar, K. Kumanan et al. //Tropical Animal Health and Production. 1997. - Vol. 29, № 4. - P. 227-230.

171. Lister, S.A. Turkey rhinotracheitis: a review / S.A. Lister, D.J. Alexander // Vet. Bull. -1986. Vol. 56. - P. 637-663.

172. Lowda, R.N. Swollen head syndrome in poultry / R.N. Lowda // Poultry Adviser. 1993. - Vol. 26. - P. 21-23.

173. Maas, R.A. Dose-response effects of inactivated Newcastle disease vaccines: Influence of serology assay, time after vaccination, and type of chickens / R.A. Maas, H.L. Oci, S. Venema-Kemper // Avian Dis. 1999. -Vol. 43. - P. 670-677.

174. Maharaj, S.B. Isolation of an avian pneumovirus-like agent from broiler breeder chickens in South Africa / S.B. Maharaj // Vet. Rec. 1994. - Vol. 134.-P. 525-526.

175. Makkay, A.M. Antibody detection-based differential ELISA for NDV-infected or vaccinated chickens versus NDV HN-subunit vaccinated chickens / A.M. Makkay, P.J. Krell, Ё. Nagy//Vet. Microbiol. 1999. - Vol. 66, № 3. - P. 209-222.

176. Manual of Diagnostic Tests and Vaccine for Terrestrial Animals (Mammals, Birds and Bees). 5th ed. - Paris: OIE, 2004. - Vol. 1. - P. 588.

177. McFerran, J.B. Conventional vaccines / J.B. McFerran //Vaccine Manual. The Production and Quality Control of Veterinary Vaccines for use in Developing Countries. Rome, 1997. - P. 113-122.

178. McFerran, J.B. Newcastle disease / J.B. McFerran, R.M. McCracken. -Boston: Kluwer Acad. Publ., 1988. P. 161 -183.

179. McKercher, P.D. Adjuvants immunizing activity / P.D. McKercher // 17th Conf. O.I.E. FMD Com. - Paris, 1986. - P. 389-399.

180. McKercher, P.D. Oil adjuvants: Their use in-veterinary biologist / P.D. McKercher // Advances in Carriers and Adjuvants for Veterinary Biologies. -Ames, USA, 1986.-267 p.

181. McMillan, B.C. Differentiation of exotic strains of Newcastle disease virus by oligonucleotide fingerprinting / B.C. McMillan, R.P. Hanson // Avian Dis. 1982. - Vol. 26. - P. 332-339.

182. Melnick, J.L. Taxonomy-and nomenclature of viruses // Prog Med. Virol. -1982. Vol. 28. - P. 208-221.

183. Metapneumoviruses in birds and humans / M. Kariuki Njenga, M. Humphrey, H. Lwamba, B.S. Seal //Virus. Res. 2003. - Vol. 91. - P. 163169.

184. Miers, L.A. Optimizing the enzyme-linked immunosorbent assay for evaluating immunity in chickens to Newcastle disease / L.A. Miers, R.A. Bankowski, Y.C. Zee // Avian Dis. 1983. - Vol. 27. - P. 1112-1125.

185. Montanide ISA 720 vaccines: quality control of emulsions, stability of formulated antigens, and comparative immunogenicity of vaccine formulations / A.P. Miles, H.A. McClellan, K.M. Rausch et al. //Vaccine. -2005. Vol. 20. - P. 2665-2675.

186. Moreau, Y. Un vaccin viral trivalent inactive en adjuvant huileux. Resultat preliminaries / Y. Moreau, J.F. Bouquet, A. Chevrier // Develop. Biol. Stand. 1981. - Vol. 51 r- P. 309-315.

187. Morley, A.J. Swollen head syndrome in broiler chickens / A.J. Morley, D.K. Thomson //Avian Dis. 1984. - Vol. 28. - P. 238-243.

188. Naylor, C.J. Turkey rhinotracheitis: a review / C.J. Naylor, R.C. Jones // Vet. Bull. 1993. - Vol. 63. - P. 339-349.

189. Neonatal avian pneumovirus infection in commercial turkeys / H.J.'Shin, K.V. Nagaraja, M.C. Kumar et al. // Avian Dis. 2002. - Vol. 46. - P. 239244.

190. Newcastle disease outbreaks in domestic fowl and turkeys in Great Britain during 1997 / D.J. Alexander, H.T. Morris, W.J. Pollitt et al. //Vet. Rec. 1998. - Vol. 143, № 8. - P. 209-212.

191. Newcastle disease outbreaks in recent years in Western Europe were caused by an old (VI) and a novel genotype (VII) / B. Lomniczi, E. Wehmann, J. Herczeg et al. //Arch, of Virol. 1998. - Vol. 143, №1. - P. 49-64.

192. Nucleotide sequences of the F, L and G protein genes of two non-A/non-B avian pneumoviruses (APV) reveal a novel APV subgroup / M.H. Bayon-Auboyer, C. Arnauld, D, Toquin, N. Eterradossi // J. Gen. Virol. 2000. -Vol. 81.-P. 2723-2733.

193. O'Brien, J.D.P. Swollen head syndrome in broiler breeders / J.D.P. O'Brien // Vet. Rec. 1985. - Vol. 117. - P. 619-620.

194. Pages-Mante, A. Studies on swollen head syndrome in Spain / A. Pages-Mante // New and Evolving Virus Diseases of Poultry: Proc. Seminar. Europ. Comm. Brussels, 1994. - P. 89-109.

195. Panigrahy, В. Experimental and serologic observations on avian pneumovirus (APV/turkey/Colorado/97) infection in turkeys / B. Panigrahy, D.A. Senne, J.C. Pedersen //Avian Dis. -2000. Vol. 44. - P.17-22.

196. Paramyxoviridae / R.A. Lamb, P.L. Collins, D. Kolacofsky et al. N.Y.: Acad. Press, 2000. - P. 835-849.

197. Parede, L. The pathogenesis of velogenic Newcastle disease virus infection of chickens of different ages and different levels of immunity / L. Parede, P.L. Young //Avian Dis. 1990. - Vol. 34. - P. 803-808.

198. Pathogenesis of avian pneumovirus infection in turkeys / F.E. Jirjis, S.L. Noll, D.A. Halvorson et al. // Vet. Pathol. 2002. - Vol. 39, № 2. - P. 300310.

199. Pathogenicy, transmissibility, and tissue distribution of avian pneumovirus in turkey poults / A.N. Alkhalaf, L.A. Ward, R.N. Dearth, Y.M. Saif // Avian Dis. 2002. - Vol. 46. - P. 650-659.

200. Patnayak, D.P. Growth of vaccine strains of avian pneumovirus in different cell lines / D.P. Patnayak, A. Tiwari, S.M. Goyal // Avian Pathol. -2005. Vol. 34, № 2. - P. 123-126.

201. Pattison, M. Observations on swollen head syndrome in broiler and broiler breeder chickens / M. Pattison, N. Chettle // Vet. Rec. 1989. - Vol. 125.-P. 229-231.

202. PCR-based detection of an emerging avian pneumovirus in US turkey flocks / A.M. Dar, K. Tune, S. Munir et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 2001. -Vol. 13.-P. 201-205.

203. Pedersen, J.C. The sensitivity and specificity of a reverse transcription -polymerase chain reaction assay for the avian pneumovirus (Colorado strain) / J.C. Pedersen, D.L. Reynolds, A. All //Avian Dis. 2000. - Vol. 44, № 3. — P. 681-685.

204. Pennington, Т.Н. Antigenic differences between strains of NDV / Т.Н. Pennington//Arch. Virol. 1978. - Vol. 56. - P. 345-351.

205. Permissibility of different cell types for the growth of avian metapneumovirus / A. Tiwari, D.P. Patnayak, Y. Chander, S.M. Goyal // J. of Virol. Meth. -2006. Vol. 138, № 1-2. - P. 80-84.

206. Plastic multiwell plates to assay avian infectious bronchitis virus in organ cultures of chickens embryo trachea / S. Yachida, S. Aoyama, N. Takahashi et al. // J. Clinic. Microbiol. 1978. - Vol. 8. - P. 380-387.

207. Preliminary observation on a virus associated with turkey rhinotracheitis / P.J. Wyeth, R.E. Gough, N.J. Chettle et al. // Vet. Rec. 1986. - Vol. 118. -P. 139.

208. Presence of avian pneumovirus type A in continental Europe during the 1980s / H.M. Hafez, M. Hess, C. Prusas et al. // J. Vet. Med. B. 2000. -Vol. 47, № 8 - P. 29-33.

209. Pringle, C.R. Pneumoviruses / C.R. Pringle // Virology A Practical Approach. - Oxford, United Kingdom, 1985. - P. .95-117.

210. Pringle, C.R. Virus taxonomy / C. R. Pringle // Arch. Virol. 1998. - Vol. 143. - P. 1449-1459.

211. Protection in specific pathogen free chickens with live avian metapneumovirus and Newcastle disease virus vaccines applied singly or in combination / K. Ganapathy, W. J. Cox, R. E. Gough et al. // Avian Pathol. 2007. - Vol. 36, № 4. - P. 313-317.

212. Protection provided by a commercially avialable vaccine against different strains of turkey rhinotracheitis virus / J.K.A. Cook, M.B. Huggins, M.A. Woods et al. //Vet. Rec. 1995. - Vol. 136. - P. 392-395.

213. Protective efficacy of high passaged avian pneumovirus (APV/MN/turkey/1 -a/97) in turkeys / B.R. Gulati, D.P. Patnayak, A.M. Sheikh et al. //Avian Dis. 2001. - Vol. 45. - P. 593-597.

214. Randhawa, J.S. Nucleotide sequence of the gene encoding the viral polymerase of avian pneumovirus / J.S. Randhawa, S.D. Wilson, K.P. Tolley // J. Gen. Virol. 1996. - Vol. 77. - P. 3047-3051.

215. Recombinant haemagglutinin neuraminidase antigen-based single serum dilution ELISA for rapid serological profiling of Newcastle disease virus / C.M. Mohan, S. Dey, A. Rai, J.M. Kataria // J. Virol. Meth. 2006. - Vol. 138.-P. 117-122.

216. Reddy, G.S. Comparison of two experimental binary ethylenimine (BEI) inactivated Newcastle disease oil emulsion vaccines / G.S. Reddy, V.A. Srinivasah //Acta Virol. 1991. - Vol! 35, №2. - P. 196-199.

217. Ree, H. Inactivation of antigens for veterinary vaccines / H. Ree // Vaccine Manual. The Production and Quality Control of Veterinary Vaccines for use in Developing Countries. Rome, 1997. - P. 273-276.

218. Rehmani, S.F. The influence of adjuvants on oral vaccination of chickens against Newcastle disease / S.F. Rehmani, P.B. Spradbrow // Vet. Microbiol. 1995. - Vol. 46, № 1-3. - P. 63-68.

219. Renaut, F. Aerosol vaccination of chickens against Newcastle Disease with the attenuated RIT 4085 strain / F. Renaut, N. Zygraich // Journal of Comparative Pathol. 1979. - Vol. 89, № 2. - P. 213-219.

220. Rima, B. Comparison of amino acid sequences of the major structural proteins of the paramixo- and morbilliviruses / B. Rima // Genetics and Pathogenicity of Negative Strand Viruses. Amsterdam, 1989. - P. 254263.

221. Rott, R. Molecular aspects of Newcastle disease virus patogenicity // Proc. Workshop on Avian Paramyxoviruses. Rauischholzhausen, 1992. - P.139-144.

222. Roy, P. Efficacy of live adjuvanted mesogenic Newcastle disease vaccine in chickens / P. Roy, A.T. Venugopalan, A. Koteeswaran // Vaccine. 1999. - Vol. 17, № 20-21. - P. 2674-2676.

223. Russell, P.H. Antigenic variation of Newcastle disease virus strains detected by monoclonal antibodies / P.H. Russell, D.J. Alexander // Arch. Virol. 1983. - Vol. 75. - P. 243-253.

224. Russell, P.H. The Hitchner B1 strain of Newcastle disease virus induces high levels of IgA, IgG and IgM in newly hatched chicks / P.H. Russell, G.O. Ezeifeka //Vaccine. 1995. - Vol. 13, № 1. - P. 61-66.

225. Sahara, M.I. Evaluation of a Japanese quail fibrosarcoma cell line (QT-35) for use in the propagation and detection of metapneumovirus / M.I. Sahara, J.E. Larence // J. Virol. Meth. 2002. - Vol. 102. - P. 73-81.

226. Sander, J. Vaccination reactions / J. Sander // Poultry Int. 1997. - Vol. 36, № 7. - P. 66-73.

227. Schidler, V. Adverse effects of adjuvants in vaccines / V. Schidler // Nexus. -2000. Vol. 8. - P. 12-18.

228. Seal, B.S. Fusion protein predicted amino acid sequence of the first U.S. avian pneumovirus isolate and lack of heterogeneity among other U.S. isolates / B.S. Seal, H.S. Sellers, R.S. Meinersmann // Virus Res. 2000. -Vol. 66.-P. 139-145.

229. Seal, B.S. Matrix protein gene nucleotide and predicted aminoacid that the first U.S. avian pneumovirus isolate is distinet from European strains / B.S. Seal //Virus Res. 1998. - Vol. 58. - P. 45-52.

230. Senne, D.A. Control of Newcastle disease by-vaccination / D.A. Senne, D.J. King, D.R. Kapczynski // Dev. Biol. Standardiz. 2004. - Vol. 119, P. 165-170.

231. Sequence analysis of the nucleocapsid and phosphoprotein genes of avian pneumovirus circulating in the US / A.M. Dar, S. Munir, S.M. Goyal et al. // Virus Res. 2001. - Vol. 79, № 1-2. - P. 15-25.

232. Sequence of the nucleocapsid protein gene of subgroup A and В avian pneumoviruses / J. Li, R. Ling, J.S. Randhawa et al. // Virus Res. 1996. -Vol. 41. - P. 185-191.

233. Serological evidence of avian pneumovirus infection in reared and free-living pheasants / E. Catelli, M.A. De Marco, M. Delogu et al. //Vet. Rec. -2001.-Vol. 149.-P. 56-58.

234. Seroprevalence of avian pneumovirus in Minessota turkeys / S.M. Goyal, D. Lauer, K. Friendshuh et al. // Avian Dis. -1999. Vol. 47. - P. 244250.

235. Spray drying of an attenuated live Newcastle disease vaccine virus intended for respiratory mass vaccination of poultry / E.A. Corbanie, J.P. Remon, K. Van Reeth et al. // Vaccine. 2007. - Vol. 25, № 49. - P. 8306-8317.

236. Stone, H.D. Evaluation of inactivated Newcastle disease oil-emulsion vaccines / H.D. Stone, M. Brugh, C.W. Beard // Avian Dis. 1980. - Vol. 24. - P. 99-111.

237. Stone, H.D. Newcastle disease oil-emulsion vaccines prepared with animal, vegetable and synthetic oils / H.D. Stone // Avian Dis. 1997. -Vol. 41.-P. 591-597.

238. Stone, H.D. The preparation and efficacy of manually emulsified Newcastle disease oil-emulsion vaccines / H.D. Stone // Avian Dis. -1991. -Vol. 35.-P. 8-16.

239. Stuart, J.C. Turkey rhinotracheitis (TRT) in Great Britain / Recent advances in turkey science. C. Nixey, Т. C. Grey, eds. // Poultry Sci. Symp. Series №21. Butterworths, London, 1989. - P. 217-224.

240. Studying the role of house flies (Musca domestica) in transmission of Newcastle disease virus / F.A. Khazaeli, A. Barin, S. Rahbari, S.A. Madani // Proc. 15th World Vet. Poultry Congr. Beijing, 2007. - P. 159.

241. Susceptibility of an avian pneumovirus isolated from Minnesota turkeys to physical and chemical agents / E. Townsend, D.A. Halvorson, K.V. Nagaraja et al. // Avian Dis. 2000. - Vol. 44, № 2. - P. 336-342.

242. Susceptibility of broiler chicks to infection by avian pneumovirus of turkey origin / H.J. Shin, B. McComb, A. Back et al. // Avian Dis. 2000. - Vol. 44. - P. 797-802.

243. Swollen head syndrome in broiler chicken in Morocco / El Houadfi, M. Hamam, J. Vanmarche et al. // Proc. 40th Western Poultry Dis. Conf. Acapulco, Mexico, 1991. P.126-127.

244. The Avian Metapneumovirus Information Website. 2007. - Режим доступа: http://www.avian-pneumovirus.com.

245. The effect of Marek's disease vaccination of day-old chicks against Newcastle disease, using B1 and oil emulsion vaccine / P.G. Box, I.G.S. Furminger, W.W. Robertson, D. Warden //Avian Pathol. 1976. - Vol. 5. -P. 299-305.

246. The pathogenesis of Newcastle disease: A comparison of selected Newcastle disease virus wild-type strains and their infectious clones / N. Wakamatsu, D.J. King, B.S. Seal et al. // Virology. 2006. - Vol. 353, № 2. - P. 333-343.

247. The safety and immunogenicity of an in ovo vaccine against Newcastle disease virus differ between two lines of chicken / D. Dilaveris, C. Chen, P. Kaiser, P.H. Russell // Vaccine. 2007. - Vol. 25, № 19. - P. 3792-3799.

248. The use of binary ethylenimine and formalin as inactivants for production of inactivated Newcastle disease vaccine / S.M. Soliman, A. Hamdy, A. W. Zaghloul, F. El-Bordiny // Assiut Vet. Med. J. 1996. - Vol. 35, № 69. - P. 157-165.

249. The use of virus isolation, histopathology and immunoperoxidase techniques to study the dissemination of a chicken isolate of avian pneumovirus in chickens / E. Catelli, J.K.A. Cook, J. Chesher et al. // Avian Pathol. 1998. - Vol. 27. - P. 632-640.

250. Timms, L.M. Cell-mediated immune response of chickens to Newcastle disease vaccines / L.M. Timms, D.J. Alexander // Avian Pathol. 1977. -Vol. 6.-P. 51-59.

251. Turkey rhinotracheitis in turkey flocks in Israel-virus isolation and serological response / Y. Weisman, C. Strengel, R. Blumenkranz, Y. Segal //Proc. 37th Western Poultry Dis. Conf. Davis, California,1988. - P. 67-69.

252. Turkey rhinotracheitis on a ciliostatic virus / P. Giraud, G. Bennejean, M. Guittet et al. // Vet. Rec. 1986. - Vol. 118. - P. 81.

253. Turkey rhinotracheitis virus and Escherichia coli experimental infection in chickens: histopathological, immunocytochemical and microbiological study / N. Majo.VM. Marti, C.J. O'Loan et al. // Vet. Microbiol. 1997. -Vol. 57. - P. 29-40.

254. Turkey rhinotracheitis virus isolated from broiler chicken with swollen head syndrome in Japan / M.Tanaka, H. Takuma, N. Kokumai et al. // J. Vet. Med. Sci. 1995. - Vol. 57. - P. 939-941.

255. Turkey rhinotracheitis: viral identification of the causal agent / P. Giraud, F.X. Le Gros, D. Toguin et al. // Proc. 37th Western Poultry Dis. Conf. -Davis, California, 1988. P. 61-62.

256. Usami, Y. Detection of antibodies to avian pneumovirus by a micro indirect immunofluorescentes / Y. Usami, M. Mase, O. Yamaguchi, K. Imai //Avian Dis. 1999. - Vol. 43. - P. 384-390.

257. Vaccination of broiler chickens with dry powder vaccines as an alternative for liquid spray and aerosol vaccination / E.A. Corbanie, J.H.H. van Eck, J.P. Remon et al. // Proc. 15th World Vet. Poultry Congr. -Beijing, 2007. P. 281.

258. Vaccination of broiler chicks from breeder flock immunized with a live or inactivated oil emulsion Newcastle disease vaccine / C.S. Eidson, S.G. Thayer, P. Villegas, S.H. Kleven // Poultry Sci. 1982. - Vol. 61. - P. 1309-1313.

259. Vaccination of one-day-old chicks against Newcastle disease using inactivated oil adjuvant vaccine and/or live vaccine / G. Bennejean, M. Guittet, J.P. Picault et al. //Avian Pathol. 1978. - Vol. 7. - P. 15-27.

260. Vaccination of turkeys with an avian pneumovirus isolate from the United States / F.E. Jirjis, S.L. Noll, F. Martin et al. // Avian Dis. 2001. - Vol. 45, №4.-P. 1006-1013.

261. Van de Zande, S. No effect of turkey herpesvirus infections on the outcome of avian pneumovirus infections in turkeys / S. Van de Zande, H. Nauwynck, M. Pensaert // Avian Dis. 2001. - Vol. 45, № 2. - P. 517-521.

262. Vogel, F.R. Improving vaccine performance with adjuvants / F.R. Vogel // Clinic. Infect. Dis. 2000. - Vol. 30. - P. 266-270.

263. Wang, C. Intracellular maturation of the Newcastle disease virus fusion is affected by strain differences in the predicted amphipathic a-helix adjacentvto the fusion domain / C. Wang, M.E. Peeples // Virology. 1995. - Vol. 208, № 2.-P. 827-831.

264. Wilding, G.P. Ciliostatic agent found in rhinotracheitis / G.P. Wilding, C. Baxter-Jones, M. Grant //Vet. Rec. 1986. - Vol. 118. - P. 735.

265. Williams, R.A. Development of a live attenuathed vaccine against turkey rhinotracheitis / R.A. Williams, C.E. Savage, R.C. Jones // Avian Pathol. -1991.-Vol. 20.-P. 45-55.

266. Wittig, K. Geschichtliche Entwicklung der Impfstoffe, Impfmethoden und Impfkontrollen bei der Newcastle-Krankheit des Geflugels so wie die Impfstoff-Anwendung in den Staaten der Europaischen Union: Inaug. Diss. Giessen, 1996.-274 S.

267. World Organization for Animal Health. 2007. - Режим доступа: http://www.oie.int.

268. ZaneIla, A. Inactivated vaccines in oil emulsion in the control of the infectious diseases of poultry / A. Zanella, R. Marchi // Develop. Biol. Stand.-1981.-Vol. 51.-P. 19-32.

Информация о работе

Борисова, Ирина Александровна
кандидата биологических наук
Владимир, 2008
ВАК 03.00.06

Диссертация

Разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы