Диссертации » Зоотехния » Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Иммунобиологические свойства инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Иммунобиологические свойства инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей"

МИХАЙЛОВ АЛЕКСАНДР ОЛЕГОВИЧ

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА ГУСЕЙ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Санкт-Петербург — 2010

004602926

Работа выполнена в Государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства» Российской сельскохозяйственной академии.

Защита диссертации состоится «27» мая 2010 года в 11.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.03 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, Санкт-Петербург, ул. Черниговская, 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат разослан «27» апреля 2010 г.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

доктор ветеринарных наук, главный научный сотрудник Трефилов Борис Борисович доктор ветеринарных наук, профессор

Придыбайло Николай Дмитриевич

доктор ветеринарных наук Авилов Вячеслав Михаилович

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко»

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук У^/уУ

Белова Лариса Михаиловиа

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Одним из основных направлений национального проекта «Развитие ЛПК» является ускоренное развитие гусеводства, цель которого - увеличение производства мяса на 7%. «Отраслевая целевая программа развития птицеводства в Российской Федерации на 2005-2007 гг. и на период до 2010 года» предусматривает произвести к 2010 году 2,2 млн.т. мяса шины, в том числе lycmioro мяса до 5 тыс.т.

Серьезным препятствием на пути развития промышленного гусеводства наряду с факторами нарушения технологического режима выращивания являются различные инфекционные болезни молодняка, среди которых особое место занимает вирусный энтерит (нарвовирусная инфекция) гусей. Это заболевание до настоящего времени имеет широкое распространение среди молодняка 1-30-су точного возраста, протекает остро и характеризуется высокой смертностью,достигая до 90-100% (В.В. Малушко, 1982; Л.М. Контримавичус, 1983; Б.Б. Трсфилов, 2000; А. Белецкая, 2003; Б.Б. Трефилов с соавт., 2009; Derzsy D. ct al., 1966; Varga J., 2000).

С профилактической и терапевтической целью при вирусном энтерите |-усей применяют цитратную кровь и сыворотку крови гусей - рсконвалесцеитов (Л.М. Контримавичус, 1984; B.C. Фадни, 1975; Б.Б. Трефилов, 2009; Coudcrt М. et al, 1973), гипериммунную сыворотку млекопитающих ( В.В. Малушко с соавт., 1980; А.Ф. Бондаренко, 1982) и гипериммушгую гусиную сыворотку крови ( Б.Б. Трефилов, 2008; Derzsy D., 1970; Bcniath S., Szaiai F., 1970).

Однако в комплексе мероприятий по предупреждению и ликвидации вирусного энтерита гусей (ВЭГ) важная роль отведена вакцинопрофилактике.

Несмотря на широкое применение вирусвакцины ВНИВИП сухой кулыуральной против ВЭГ в Российской Федерации и странах СНГ, проблема борьбы с этой болезнью остается весьма актуальной.

Исходя из изложенного, разработка высокоэффективной и технологичной инактивированной вакцины против ВЭГ, применяемой в условиях промышленного гусеводства, фермерских хозяйств и личного подворья - остается востребованной в спи с;

- отсутствием отечественного ннактивиропаиного вакцинного препарата против вирусного энтерита гусей;

- недостаточно длительным напряженным иммунитетом при применении живых вакцин против вирусного энтерита гусей;

- сокращением количества вакцинаций с целью уменьшения стрессов и нагрузки на

иммунную систему;

- потребностью в вакцинном препарате, не содержащем живого вируса.

Цели к задачи исследования. Целью настоящей работы являлась разработка технологии изготовления инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей и изучение ее иммунобиологических характеристик.

Для достижения ее было необходимо решить следующие задачи:

- подобрать производственный штамм вируса энтерита гусей и изучить его биологические характеристики;

- изучить оптимальные системы культивирования вируса и его инактивацию;

- разработать компонентный состав инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей;

- изучить физические параметры и иммунобиологические свойства инактивированной вакцины;

изучить динамику формирования поствакцнонального иммунитета у вакцинированных гусей.

Научная новизна. Впервые разработана отечественная инакгивированная эмульсионная вакцина против вирусного энтерита гусей.

Отработана оптимальная схема получения вируссодержашего сырья из вакцинного производственного «клона 6» вируса энтерита гусей, депонированного в ФГУ ВГНКИ №71, патент РФ №1499917 «Штамм Goosa parvovirus для приготовления вакцинных препаратов против вирусного энтерита гусей», с использованием культуры клеток эмбрионов гусей.

Обоснованы режимы инактивации вируса энтерита гусей формальдегидом и димерэтнленимшюм. Изучена кинетика инактивации вируса.

Научно обоснован компонентный состав инактивированной сорбированной и эмульсионной вакцины, определены оптимальные соотношения антигена и адыовантов. Доказана ее безвредность и высокая аитигешюсть и способность индуцировать длительный поствакцинальный иммунитет у гусынь по сравнению с вирусвакциной ВНИВИП.

Практическая значимость работы. Полученные результаты исследований послужили основанием для разработки технологии изготовления инактивированной вакцины и подготовки нормативной документации на вакцину против вирусного энтерита гусей:

- «Стандарт организации на вакцину против вирусного энтерита гусей инакгивированную эмульсионную» (проекг).

- «Инструкция по применению вакцины против вирусного энтерита гусей инактивированной эмульсионной», временная утверждена директором ГНУ «ВНИВИП»

Роесельхозаклдемпи, 2010 года.

Основные положении диссертационной работ ы, выносимые на защиту:

• Характеристика производственного вакцинного «клона б» вируса энтерита гусей;

•Схема получения вируссодсржащего сырья для изготовления ннактивированной вакцины;

• Инактивация вируса энтерита гусей днмерэтиленимином;

•Компонентный состав ннактивированной сорбированной и эмульсионной вакцины;

•Физические и иммуногашые характеристики ннактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Методического совета отдела вирусологии, опухолевых болезней птиц н пммупофармакологин и Ученого совета ГНУ «ВНИВИП» (2006-2009), на Международных агропромышленных конгрессах (СПб, 2007,2009), Международных конференциях ВНАП (2009), науно-пракгическон конференции 3-4 июня 2008 (СПб, пЛомоносов, 2008).

Личный вклал соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с ведущим научным сотрудником Никитиной Н.В., за что автор выражает ей сердечную благодарность.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных статей, в том числе одна работа в издании, рекомендованном ВАК РФ, уведомление о поступления и регистрации заявки Л'»201010045б от 12.01.2010 г.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена па 109 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения и список литературы, приложения. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами, б рисунками. Список использованной литературы включает 243 источника, из них 121 зарубежный.

2, Собственные исследования

2.1. Материалы и методы

Работа выполнена в 2006-2009 гг. в соответствии с отраслевым планом НИР ГНУ ВНИВИП Росссльхозакадемии по заданию 08.07.06.

В работе использовали следующие материалы:

Вирус, вакцина и диагиостикум:

- производственный вакцинный «клон 6» параовируеа гусей, получен в ГНУ ВНИВИП (Штамм Goosa parvovirus для приготовления вакцинных препаратов против вирусного энтерита гусей, патент РФ №1499917.-1993).

Хранение метровой расплодки вируса осуществляли во флаконах при температуре минус 2Q°C и поддерживали в культуре клеток гусиных эмбрионов.

- вирусвакцина сухая культуральная ВНИВИП против вирусного энтерита гусей (СТО 00495674-0008-2008).

- набор для выявления антител к вирусу энтерита гусей иммупоферментным методом (ГНУ ВНИВИП), [ патент РФ №2323743 от 10.12.2007, RU].

Постановку ИФА и обработку результатов проводили согласно инструкции по применению и «Методическим указаниям для лабораторной диагностики вирусного энтерита (парвовирусной инфекции) гусей методом ИФА», 2005.

Инкубационное яйцо, птицы:

- яйца инкубационные гусиные 200 штук, ООО «Утиный бройлер»;

- гуси взрослые 100 голов ОАО «Утиный бройлер»;

- гуси родительское стадо ООО «Катайский гусекомплекс».

Культура клеток. Для проведения исследований была выбрана первично-трипсинизированная культура клеток гусиных эмбрионов (КЭГ), которую готовили из кожно-мышечной ткани 14-15 - суточных гусиных эмбрионов по методике Dtilbecco R. & Vogt М. (1954) в модификации Youngner J.S. (¡954). В качестве ростовой питательной среды использовали среду Игла MEM и №199 в соотиошеиии 2:1 с добавлением 10% нормальной сыворотки крупного рогатого скота, а также антибиотиков: пенициллина - 100 ЕД/см3 и стрептомицина - 100 мкг/см3.

Раствор, использованный для диспергирования ткани, состоял из 0,25%-ного раствора трипсина, 0,02%-ного раствора версена и раствора Хенкса в соотношении 1:2:2.

Клеточную суспензию разливали в пробирки , матрасы и роллерные сосуды по 2, 250 и 500 см3 соответственно и инкубировали в термостате под углом - 5" (пробирки) при температуре 37°С, а баллоны на роллере. В течение 24-48 часов иа поверхности стекла формировался клеточный монослой, пригодный для инфицирования.

Титрование вируса на культуре клеток по цитопэтогепному действию (ЦПД) проводили в чувствительной культуре КЭГ методом десятикратных разведений и с соответствующими контроля ми. Из культуральной вируссодсржашси жидкости готовили 10-

кратные разведения Ю'+Ю* иа поддерживающей среде без добавления сыворотки.

Каждым разведением вируса заражали 4 пробирки с культурой КЭГ. Время контакта вируса с клеточным монослоем составляло 30 минут при комнатной температуре. Затем во все пробирки добавляли по 1,8 см1 поддерживающей среды Игла MEM. Зараженные и контрольные культуры инкубировали при температуре 37°С. Ежедневно в течение 5-7 суток проводили учет ЦИД, выражая сто по 4-крсстовой системе.

Величину титра вычисляли по методу Reed L.J. & Mnench (1938) и выражали в lg ТИД50 в 1,0 см'(тканевая цитопатогашая доза).

Проведение серологических исследовании.

Реакция нейтрализации (РН). В основу РН брали стандартный, классический метод, описанный я руководствах но вирусологии.

РН ставили в культуре клеток со специфическими сыворотками, полученными от вакцинированных гусей.

Вариантами реакции были:

¡.Прямая РН с постоянной дозой гомологичной сыворотки и десятикратным разведением вируса (а-вариант);

2.Прямая РН с постоянной дозой вируса 100 или 1000 ТЦД50 с двукратными разведениями гомологичной сыворотки (р-вариант).

Для выявления в сыворотке крови специфических антител к ВЭГ и при оценке динамики поствакциоиалыюго иммунитета, применяли иммунофермеитный анализ (ИФА).

В исследованиях использовали диагностический набор производства ВНИВИП. Постановку реакции осуществляли согласно инструкции по применению. Результаты реакции учитывали на иммуноферментном анализаторе «УНИНЛАН - 2000» при длине волны -4S0 им.

Культивирование вируса энтерита гусей. Процесс культивирования ВЭГ включал следующие этапы:

- выращивание культуры клеток гусиных эмбрионов в 1,5-лнтровых матрасах или 5-литровых роллерных сосудах;

- инфицирование культуры КЭГ вирусом энтерита;

- культивирование инфицированной культуры в стационарных условиях или на роллерах;

- микроскопия инфицированной культуры клеток;

- снятие матрасов или роллерных сосудов доя замораживания при температуре минус

(20±2)°С;

- трехкратное замораживание и оттаивание вируссодержашего материала (ВСМ);

- отбор проб для контроля на стерильность и инфекционную активность.

Из роллерных сосудов (матрасов) с плотным монослоем культуры КЭГ сливали ростовую среду н вносили ВСМ в поддерживающей среде pH 7,2-7,3 с множественностью заражения 0,1-1,0 ТЦД50/клетку. Инфицированную культуру культивировали в течение 3-4 суток при температуре (37±0,5)°С. При микроскопироваини учитывали интенсивность проявления цитопатогешюго действия вируса на клетки. При полной деструкции клеточного монослоя сосуды переносили в низкотемпературный холодипьник (минус 20±2С°). Перед инактивацией ВСМ подвергали трехкратному замораживанию и оттаиванию.

Определение стирилыюсти проводили в соответствии с ГОСТом 28085-90 «Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности» и согласно «Руководству МЭБ по стандартам для диагностических тестов и вакцин» на бактериальное загрязнение, исключение контаминации грибами и мнкоплазмами (Manual of Diagnostic Tests and Vaccine for Terrestrial Animals, 2004).

Проверку материалов на бактериальную контаминацию проводили путем высевов на питательные среды МПА, МПБ , Китт-Тароццн, а грибковую - на агар или бульон Сабуро.

О стерильности материалов судили по отсутствии роста микроорганизмов на этих питательных средах.

Инактивацию ВЭГ осуществляли путем добавления в ВСМ раствора формальдегида или димерэтиленимина в различных концентрациях при постоянном перемешивании на магнитной мешалке инкубированием при температуре (37,0±0,5)°С в течение 24 часов. Через каждые б часов инкубирования отбирали пробы для определения снижения титра и полноты инактивации вируса.

Полноту инактивации проверяли методом трехкратных «слепых» пассажей ВСМ в культуре КЭГ на питательной среде Игла MEM с 2% сывороткой крупного рогатого скота. Отсутствие цитопатических изменений в культуре клеток в течение 5-7 суток подтверждает полноту инактивации ВЭГ.

Изготовление сорбированной формы инактнвироваиной вакцины. Лабораторные образцы сорбированной вакцины против ВЭГ готовили с использованием б% геля гидроокиси алюминия (ГОА), конечная концентрация составляла 0,2 и 0,3% в инактивировапной вируссодержащей суспензии. ГОА добавляли при постоянном перемешивании на магнитной мешалке при комнатной температуре в течение 30 минут.

Изготовление эмульсионной формы ниактивнрованной вакшшы. При изготовлении

лабораторных образцов »»активированной эмульсионной вакцины использовали масляный адъювант Montanide ISA 70 производства фирмы «SEPP1C», образующий эмульсию обратного типа. Инактивнровапный ВСМ и масло смешивали, в соотношении рекомендованном производителем адыованта, на гомогенизаторе в течение 5-10 минут при скорости вращения винта 3000 оборотов/минуту л температуре 10°С.

Готовые образцы инактивировашгой вакцины хранили при температуре +(2 - 8)°С.

Контроль ни активированной вакцины против ВЭГ. Контроль сорбированной и эмульсионной форм инактивированной вакцины против ВЭГ осуществляли определением физических (кинетическая вязкость, стабильность эмульсии) и иммунобиологических свойств (стерильность, безвредность, антигенная и иммуногснная активность).

Определение типа вакцинной эмульсии осуществляли «капельным методом» (Stone H.D., 1997).

Стабильность эмульсии определяли центрифугированием при 3000 оборотов/минуту в течение 30 минут, методом «быстрого старения» в течение 14-суточной выдержки при температуре (37,5±0,5)С и экспресс-методом, при котором эмульсии выдерживали при температуре минус 20"С в течение 1 часа, а затем при температуре (37,5±0,5)С° в течение 1 часа с последующей визуальной оценкой на предмет расслоения эмульсии.

Эмульсию считали стабильной, если после выше перечисленных испытаний в процессе визуального контроля не обнаружено никаких изменений содержимого во флаконе или высота столба прозрачной фракции, сформировавшейся в верхней части флакона, не превышала 10% от обшей высоты столба эмульсии.

Кинематическую вязкость измеряли капиллярным вискозиметорм ВПЖ-2 и выражали в мм'/сек-. Определение вязкости проводили при температуре вакцины +20"С, измеряя время истечения вакцины от первого до второго мениска с точностью 0,2 сек. Кинематическую вязкость вычисляли но формуле В = СТ, где В - кинематическая вязкость, мм'/сск; С -постоянная вискозиметра; Г - средняя арифметическая времени истечения вакцины, сек.

Гранулометрический состав вакцины определяли методом световой микроскопии. Вакцину перед микроскопией разбавляли масляным адъювантом в соотношении 1:3, затем 20 мкл препарата помещали под покровное стекло и исследовали под микроскопом.

Эмульсию считали хорошего качества, если в поле зрения микроскопа наблюдали равномерную мелкозернистую структуру.

Определение безвредности вакцины. Визуальную оценку степени поражения тканей в месте введения эмульсионной вакцины проводили через 28 и 42 сут после иммунизации в прививочной и пятикратной дозе вакцины по критериям, предложенным Stone H.D. (1991).

Определение антигенной и иммуиогеинои активности вакцины. Сущность метода заключалась в изучении способности вакцины индуцировать у вакцинированных гусей выработку специфических антител к ниактнвироватюму антигену, уровень которых определяли в РН или ИФА с применением диагностического набора ВНИВИГТ согласно «Методическим указаниям для лабораторной диагностики вирусного энтерита (парвовирусной инфекции) гусей методом иммуноферментного анализа», а иммуногеннуга активность — по результатам контрольного заражения гусят эпизоотическим штаммом П-75 вируса энтерита гусей.

Статистическая обработка результатов исследований.. При анализе и обобщении результатов исследований использовали статистические методы, описаиные И.П. Ашмарииым с соавт. (1975) и компьютерную программу Microsoft Excel.

2.2. Результаты собственных исследований 2.2.{Характеристика производственного вакиишюго «клона 6» вируса энтерита

гусей

В разработке технологии изготовления инактивнрованной вакцины важное место занимает получение вирусного сырья, что, в свою очередь, зависит от выбора штамма вируса, обеспечивающего выработку напряженного и продолжительного иммунитета у вакцинированной птицы.

На первом этапе исследований нами проведена работа по изучению некоторых иммунобиологических параметров «клона 6», характеризующих как парвовирус гусей, и определению его стабильности в процессе лабораторных пассажей при изготовлении живой вирусвакцины.

На различных биологических моделях нами установлено, что вакцинный «клоп б» ДНК-содержаший вирус, размер вирусной частицы составлял 19-22 nm, апатогенный для гусиных эмбрионов и суточных гусят, ареверснбелышй, резистентный к воздействию эфира, хлороформа н нагреванию при температуре 60°С, генетически однородный (сформировывал мелкие однотипные бляшки под агаром), в культурах клеток вызывал острую форму вирусной инфекции и накапливался в высоких титрах (7,5±0,5) Ig ТЦДт/см'. У гусей вызывал формирование напряженного иммунитета, обеспечивающего невосприимчивость гусят к заражению.

На основании полученных данных в качестве производственного штамма вируса энтерита

гусей (ВЭГ) был выбран вакцинный «клон 6», депонированный во ФГУ ВГ11КИ №71, который предложен для изготовления внрусвакцины против вирусного энтерита гусей (Б.Б. Трефилов, 2000)

2.2.2Газработка оптимальной схемы получения вирусного сырья

Успех производства вакцины во многом обусловлен качеством исходного биологического сырья, Поэтому культивирование вируса является одним нэ основных этапов в технологии изготовления биопрепарата.

Главной задачей данного этапа работы было изыскание оптимального метода культивирования вируса, множественности инфицирования культуры ЮГ и времени накопления вируса.

С целью максимального накопления антигена были определены оптимальные условия репродукции вируса в стандартных, суспензионных и роллерных культурах при различных концентрациях клеток 1 ■ 10Г* - 1,5 10'' см' и множественности инокуляции. Результаты опытов представлены в табл. 2.2.2.

Данные, приведенные в табл. 2.2.2.1 показывают, что при роллерном способе культивирования, множественности заражения 1,0 ТЦД50/кл и концентрация 1,5-10® клеток в 1,0 см1 вирус накапливался в наибольшем титре (7,5±0,5 ^ ТЦД50/см3 при Р<(),05).

Таблица 2.2.2.1

Результаты культивирования вируса при различной множественности инфицирования

культуры и посевной концентрации клеток (время культивирования 96 часов)

Метод Множественность Активность вируса, lg ТЦД50/см5 (М±т)

культивирования заражения, При концентрации клеток в 1 см5

ТЦД50/клетку МО" 1,5-106

0,01 2,5±0,25 3,75±0,3

Стационарный 0,1 4,3:1:0,5 4,5±0,5

1.0 6,0±0,2 б,75±0,1

0.01 4,75±0,3 5,3±0,2

Суспензионный 0,1 5,3±0,5 5,5±0,6

1,0 6,1 ±0,1 6,8±0,3

0,01 5,25±0,1 5,75:к0,3

Роллерный 0,1 5,75±0,5 6,25±0,5

1,0 6,75±0,75* 7.5±0,5*

* Примечание: Р<0,05

Таким образом, для репродукции вакцинного «клона б» ВЭГ, которого можно использовать для наработки вирусного сырья в больших количествах, культуру ЮГ культивировали в роллерных сосудах объемом 5,0 дм'. В качестве ростовой среды

использовали питательные среды Игла MEM или ДМЕМ и Л» 199 в соотношении 2:1 с 10% сыворотки крупного рогатого скота (КРС).

Сосуды помещали в роллерный аппарат стеллажного типа при скорости вращения 12 оборотов/час. Культуру клеток выращивали при температуре (37,5±0,5)°С в течение 2-3 суток-до формирования сплошного монослоя. Затем вносили вируссодержащий материал с множественностью инфицирования 0,1-1,0 ТЦЦ50/клетку и культивировали в тех же условиях до полной дегенерации клеточного монослоя (72-96 часов). Вируссодержащую суспензию трехкратно замораживали и оттаивали и определяли биологическую активность методом титрования в пробирочных культурах КЭГ.

На основании проведенных исследований определена оптимальная схема наработки вирусного сырья в культуре КЭГ с биологической активностью 7,5±0,5 lg ТЦД50/см', пригодного для изготовления инактивированной вакцины против ВЭГ.

2.2.3 Инактивации вируса энтерита гусей с использованием различных ннактнваитов

После разработки оптимальной схемы получения высокоактивной вирусной биомассы проведена работа по выбору эффективного инактивируюшего средства, его концентрации и оптимальных параметров инактивации, обеспечивающих полное подавление инфекционных свойств вируса при максимальном сохранении аитигениых структур вирионов.

В опытах изучали ииакгивирующее действие формальдегида и димерзтиленимина (ДЭН) на вирус энтерита гусей.

В экспериментах по инактивации вируса энтерита использовали вируссодержащую культурадьиую суспензию «клона б» с инфекционным титром (7,5t0,5) lg ТЦДЗО/см', Изучали воздействие формальдегида в конечных концентрациях 0,02; 0,05; 0,1 и 0,2%. Инактивацию проводили при температуре 37"С в течение 24 часов при рН 7,4-7,6 в режиме постоянного перемешивания.

В процессе инактивации через б, 12, 18 и 24 часов отбирали пробы вируссодержащей суспензии параллельно с контролем для определения биологической активности вируса в культуре КЭГ. По окончании времени инактивации остаточный формальдегид нейтрализовали 2М раствором тиосульфата натрия до шнечной его концентрации 0,01-0,03 М/дм'.

Снижение титра вируса после обработки выражали отношением

, ь.

lg jr . где

V(. - титр вируса до обработки; V, - титр вируса после обработки в течение

определенного времени. Константу скорости инактивации К„.) в соответствии с уравнением:

, Г< Л.

'е ?7 = 2,3 • гае

2,3 - основание натуральных логарифмов; I - время обрабогкн вируса.

Полноту инактивации вируса определяли путем 3-кратных последовательных пассажей в культуре КЭГ.

Известно, что от правильного выбора режима инактивации зависит антигенная активность получаемого препарата. Поэтому при проведении опытов учитывали концентрацию инактиванта в ВСМ, рН суспензии, температуру и время экспозиции. Полученные результаты представлены в табл. 2.2.3.2 и 2.2.3.3.

Таблица 2.2.3.2

Данные кинетики инактивации ВЭГ формальдегидом

Концентрация инактиванта Значения У/У^ ¡£

Время экспозиции, ч

6 12 18 24

0,02 0,81 0,72 0,49 0,19

0,05 0,67 0,56 0.33 0,07

0,1 0,55 0,49 0,16 0

0,2 0,32 0,26 0 0

Данные, приведенные в табл. 2.2.3.2. показывают, что формальдегид в зависимости от концентрации в вирусеодержащей суспензии обладал различной степенью шшктивируюшим действием на вирус.

Так, инактнвант в концентрации 0,1% инактивировал вирус через 24 часа, в то время как при содержании 0,2% препарата потеря его инфекционной активности наступала уже через 18 часов.

V,

Значения снижения активности вируса (1ц тг" ) н константы его скорости инактивации

' о

К «а) пропорционально уменьшались в зависимости от концентрации формальдегида и времени инактивации. При 24-часовой экспозиции они равнялись нулю, что подтверждает полную потерю инфекционной активности вирусом.

Таблица 2.2.3.3

Данные кинетики инактивации ВЭГдимерэтиленимином

Концентрация ДЭИ,% Значения ■у- инактивации, ^

Время экспозиции, ч

6 12 18 24

0,02 0,9 0,8 0,62 0.36

0,05 0,74 0,69 0,46 0,1

0,1 0,55 0,5 0,39 0

0,2 0.46 0,33 0,23 0

Данные, приведенные в табл. 2.2.3.3 свидетельствуют о том, что скорость икативации вируса энтерита димерэтиленимииом находилась в прямой зависимости от концентрации препарата и времени воздействия. При обработке инактивантом в 0,1%-ной концентрации вирус инактивировался через 24 часа.

Таким образом, полученные данные кинетики инактивации вируса энтерита гусей, обработанного формальдегидом и ДЭИ в различных концентрациях при температуре 37°С, показали, что скорость инактивации вируса повышалась по мере увеличения концентрации препаратов в вируссодсржашей суспензии и времени их воздействия.

Исследованиями ряда авторов показано, что производные класса азиридииов минимально изменяли, ответственные за антшенность, белковую структуру вириона, а антигены продолжительное время сохраняли свои свойства при хранении (А.Н. Куриленко с еоавт.,1990; Э.Д. Джавадов, 2004; И.А. Борисова, 2008; Оое1 Т.К., 1985).

Исходя из вышесказанного, в качестве инакгиванта при изготовлении ннактивированной вакцины против ВЭГ был использован димерэтиленимин в 0,1% концентрации при температуре 37"С и экспозиции в течение 24 часа.

2.2.4. Выбор оптимального компонентного состава инакгипиропянной вакцины против вирусного энтерита гусей

Иммупогенная активность инактивнрованных противовирусных вакцин зависит от качества и количества основных компонентов препарата: антигенов и адъювантов. Ипактивированные антигены в сочетании с адъювантами обладают более выраженной иммуногепной активностью по сравнению с их водными растворами. В ветеринарной практике птицеводческой отрасли применяют две формы инактивнрованных вакцин: сорбированную и эмульсионную. Для изготовления сорбированной формы использовали широко применяемый в производстве вакцин гель гидроокиси алюминия.

Многими исследованиями (В.А. Ирза, 2000; В.В. Ельников, 2004; Э.Д. Джавадов, 2004; В.В. Борисов, 2007; И.А. Борисова, 2008) при испытании широкого спектра масляных

адыоваитон и эмульсий различных типов было покачано, что вакцины против вирусных болезнен птиц на основе масляного адыованта Montanide ISA 70, образующего эмульсию обратного типа, имели наиболее оптимальные физические показатели и высокие иммунобиологические свойства.

Для изготовления эмульсионных вакцин в РФ используют масляные адъюванты, которые образуют с водными суспензиями антигена эмульсию обратного типа «вода/масло», которая вызывает у привитых птиц образование напряженного и продолжительного иммунитета.

В связи с этим при конструировании эмульсионной формы вакцины против вирусного энтерита гусей использовали масляный адъювант Montanide ISA 70 производства фирмы «SEPPIC» Франция.

При изготовлении обеих форм вакцины против ВЭГ использовали инакпшированное ДЭИ вирусное сырье с биологической активностью 7,0-8,0 lg ТЦД so /см' .

Сорбированную форму ГОЛ вакцины готовили ври постоянном перемешивании пнактивированного антигена и 0,2 и 0,3% конечной концентрации адыованта на магнитной мешалке в течение 30 минут при комнатной температуре.

Эмульсионную форму вакцины готовили на гомогенизаторе в течение 5-10 минут при скорости вращения винта 3000 оборотов/минуту и температуре +10"С. Соотношение антигена и адыованта составило 30:70 соответственно (табл. 2.2.4.4).

Таблица 2.2.4.4

Компонентный состав сорбированной и эмульсионной форм ипактивировапиой вакцины против ВЭГ.

Наименование форм вакцины Титр вируса до инактивации, 1а ТЩЫсм' Соотношение, %

антигена адыованта

Сорбированная вакцина 7,5±(),5 остальное 0,2 и 0,3% ГОЛ

Эмульсионная 7,5±0,5 20 80

вакцина 30 70*

40 60

* примечание : тсляишй адьювант Montanide ISA 70.

Таким образом, установлено, что наиболее оптимальным процентным соотношением антигена к адъюваиту в водной фазе эмульсионной вакцины должно быть 30 к 70 при активности вируса до инактивации 7,5±0,5 ТЦЦо/см'. Инакгивнрованные препараты, изготовленные в приведенных соотношениях, сохраняли антигенные и иммуногешше свойства.

2,2.5. Изучение физических свойств ииактивированной эмульсионной вакцины в зависимости от продолжительности ее хранения

Существенное значение в контроле эмульсионных вакцин имеют их физические свойства, такие как стабильность эмульсии, гранулометрический состав VI кинематическая вязкость.

Нами были изучены физические свойства эмульсионной вакцины против ВЭГ после изготовления и в процессе хранения (6 месяцев) при указанной температуре: тип вакцинной эмульсии, ее стабильность, гранулометрический состав и кинематическая вязкость (табл. 2.2.5.5).

Таблица 2.2.5.5

Физические свойства инактивированной эмульсионной вакцины против ВЭГ

Срок хранения Вязкость, мм'/с Стабильность эмульсии,%

цетрифугирование Экспресс метод Быстрое старение

Свежензготовлегшая 52.2 100 100 100

б месяцев хранения 55.2 98,5 98,5 98,5

Данные, приведенные в табл. 2.2.5.5, показываю!, что параметры физических свойств свежеприготовленной вакцины и через 6 месяцев хранення при температуре +(2 - 8)"С существенно не изменились, что свидетельствует о высокой стабильности эмульсии в вакцине.

Результаты изучения гранулометрического состава вакцинной эмульсии до и после хранения в течение 6 месяцев с помощью световой микроскопии показали мелкозернистую равномерную структуру эмульсии (индекс гомогенности составил 0,94).

«Капельный метод» показал, что вакцинная эмульсия как до, так и после 6-месячного хранения представляла собой «обратный» тип, т.е. «вода-масло».

Таким образом, результаты исследований физических свойств образцов эмульсионной вакцины показали высокую стабильность и гомогенность вакцинной эмульсии.

При определении безвредности визуально оценивали степень поражения тканей в месте введения вакцины в 5-кратной вакцинальной дозе (2,5 см') по критериям, предложенным Stone H.D. (1997) для ииактивированиой вакцины против ныокаслской болезни.

В наших опытах экспериментальные образцы вакцины не вызывали воспалительных реакций в месте введения препарата, что подтверждало его безвредность.

2.2.6. Изучение антигенных свойств инакпшировашши сорбировании» и эмульсионной вакцины в зависимости ог продолжительности ее хранения

Важным показателем вакцин является их антигенная и протеюивпая активность. Оценку антигенных свойств обеих форм вакцины проводили на гусях 12 - и 24 - месячного возраста, которым подкожно в нижнюю треть шеи вводили в объеме 0,5 см3 свежеприготовленную и хранившуюся в течение б месяцев при температуре +(2-8)°С вакцину.

Через 28 и 42 суток после иммунизации от вакцинированных и контрольных гусей брали кровь с целью определения уровня антител в сыворотке крови в реакции нейтрализации и ИФА. Полученные результата представлены в табл. 2.2.6.6.

Таблица 2.2.6.6

Уровень специфических антител в сыворотке крови вакцинированных против вирусного

энтерита гусей »»активированной сорбированной и эмульсионной вакциной (п=5)

Сроки после вакцинации, сутки

Наименование групп 28 42

п/п Уровень антител в сыворотки крови. (М±т)

1 Гуси, привитые сорбированной 0,2% ГОА вакциной 9454 + 231 7,3 6136 ±252 7,0

2 Гуси, привитые сорбированной 0,3% ГОА вакциной 107891-72 7,3 6Ю7±82 7,3

3 Гуси, привитые эмульсионной вакциной 14120±125 9,0* 12060±217 9.0*

4 Гуси, привитые инактивированным вирусом + физ.раствор (30:70) 5591 ±221 6,3 2089 ±230 6,0

5 Гуси, привитые вирусвакциной сухой культуралыюй ВНПВИП против ВЭГ 1579+151 6,5 2884±21б 8,0

6 Нсвакщшированныс гуси 248 ±54 <3,0 214А-52 <3,0

Примечание: в числителе - титры антител в ИФА (значения обратные); в знаменателе-титры вирусиейтрализующих антител в РН, log2 (Р<0,05)*.

Данные, приведенные в табл. 2.2.6.6, показывают, что сорбированная и эмульсионная формы штктивированной вакцины индуцируют образование специфических антител в высоких титрах. Однако эмульсионная вакцина вызывает образование антител в 1,5-2,0 раза больших титрах по сравнению сорбированной вакциной. Результаты реакции нейтрализации

и ИФА значимо коррелировали.

Результаты изучения антигенной активности сорбированной и эмульсионной форм вакцины через б месяцев хранения представлены в табл. 22.6.1.

Таблица 2.2.6.7

Титр специфических антител в сыворотке крови гусей, вакцинированных сорбированной и эмульсионной вакциной после 6-мссячного хранения

Сроки после вакцинации

Наименование групп 10 ... .20 __ 30...... 60

Уровень антител в ИФА, значения обратные (М±.т)

Гуси, привитые ГОА — 0.3% вакциной 5483*127 6107*231 4894*187 3517*125

Гуси, привитые эмульсионной вакциной 2700*83 2810*172 3222*121 3775*105

Невакцинированные 1уси 300*25 300*25 . 300*25 300*25

Данные серологических исследований сыворотки крови вакцинированных гусей, приведенные в табл. 2.2.6.7, свидетельствуют о том, что хранение обеих форм инактивировашюй вакцины против ВЭГ в течение б месяцев при температуре +(2-8)°С не привело к существенному снижению антигенной активности препаратов. Отмечено, что сорбированная ГОА вакцина индуцирует выработку антител в максимальных титрах в течение 10-20 сут после иммунизации, а затем они уменьшаются. Эмульсионная вакцина инициирует нарастание тигров антител в течение 30-60 сут, оставаясь на этом уровне продолжительное время.

2.2.7. Изучение динамики формировании ноствакцконального иммунитета у гусей, иммунизированных сорбированной и эмульсионной вакциной против вирусного

энтерита

О времени появления специфических антител в крови вакцинированной птицы инактивированными вакцинами мнения исследователей разноречивы.

Формирование поствакционапыгого иммунитета у гусей родительского стада изучали после однократного применения инактивировашюй сорбированной и эмульсионной вакцины в объеме 0,5 см' в условиях вивария института. Опыты показали, что обе вакцины в испытанных дозах не вызывали местных воспалительных и общих реакций. Данные сероконверсии у гусей представлены в табл.2.2.7.8.

Да иные, приведенные в табл. 2.2.7.8 свидетельствуют о том, что в организме вакцинированных гусей наступала выраженная серокоиверсня. Так, у гусей, иммунизированных сорбированной ГОЛ вакциной она была регистрирована к 10 сут в 2 раза выше, чем у птицы, вакцинированной эмульсионной вакциной (табл. 2,2.6.7). Тигры антител достигали максимальной величины на 30 сут у привитых гусей. После этого уровень антител в сыворотке крови вакцинированных сорбированной вакциной гусей, начиная с 30 сут по 120 сут снижался на 15-18%, хотя он оставался высоким в течение 7 месяцев (срок наблюдения).

У гусей, привитых ипактивироваиной эмульсионной вакциной, тигры антител были максимальными в течение 5 месяцев, а через 6 месяцев после иммунизации они уменьшались на 23%. В то же время уровень специфических антител превышал в 2,5-3,0 раза уровня антител в сыворотке крови гусей, привитых как сорбированной, так и ахтенуированной вирусвакциной ВНИВ1Ш против вирусного энтерита гусей в течение 7 месяцев (срок наблюдения).

От вакцинированных гусынь получали инкубационные яйца, в их желтке и в сыворотке крови суточных гусят определяли уровень материнских антител в реакции нейтрализации. Опыты показали, что титры антител в желтке были в пределах 7,0 и 9,0 log;, а в сыворотке крови суточных гусят — 7,0 и 8,0 logs через 30 и 90 сут после иммунизации гусынь соответственно.

При контрольном заражении 2-сугочных гусят полученных от вакцинированных гусей через 30 и 180 суг после иммунизации, эпизоотическим штаммом П-75 в дозе 1000 ЛД.ад гусята не заболели, коэффициент корреляции равнялся г - - I,0, что указывает на хорошую их защиту и свидетельствует о том, что инактивировшшая вакцина вызывает иммунологическую перестройку в организме гусынь, а материнские антитела передаются трансовариально потомству, обеспечивая устойчивость гусят к инфицированию полевым вирусом энтерита гусей.

Таким образом, испытанные инактивнрованпые как сорбированная, так и эмульсионная формы вакцины против вирусного энтерита индуцировали напряженный поствакцинальный иммунитет у вакцинированных гусей продолжительностью в течение репродуктивного периода.

Таблица 2.2.7.8

Титр специфических антител у вакцинированных против вирусного энтерита гусей инактивированиой сорбированной и

эмульсионной формами вакцины

Наименование групп Титры антител к ИФА, значения обратные (М±т)

Сроки после вакцинации, сут

30 60 90 120 150 180 210

Гуси, привитые ГОА - 0,2% вакциной 7550*342 3905*115 3064*107 3025*105 2569*47 2492*136 2309±97

Гуси, привитые ГОА - 0,3% вакциной 8448*276 4894*225 3652*152 3500*121 2990*85 3325*145 4076*108

Гуси, привитые эмульсионной вакциной 12710±321 13028*325 14016*243 11799*136 11105*124 8539*137 8519*156

Гуси, привитые вирусвакцииой сухой культуральной ВНИВИП против ВЭГ 1579*127 2175*253 2325*178 2852*175 2808*127 512*38 128*27

Гуси, привитые янактивированным вирусом + физ. раствор (30:70) 4501*223 1936*56 1774*96 1425*101 1357*104 1100*57 679*48

Невакцинированные гуси 247±27 247*27 247*27 247*27 297*53 247*27 247*27

3. Выводы

1 .Разработана технология изготовления ннактивированной эмульсионной вакцины прогни вирусного энтерита гусей, Вакцина предназначена для специфической профилактики болезни в стационарно неблагополучных гусеводческих комплексах п фермерских хозяйствах.

2.В качестве производственного штамма предложен вакцинный «клон 6», который по основным генетическим маркерам (морфологической и антигенной структуре и биологическим свойствам) соответствует эталонным штаммам парвовнруса гусей, он апатогепен для гусят, ареверсибелеи и обладает выраженной антигенной и иммуногенпой активностью.

3.Вакцинныи «клон б» способен к репродукции в культуре клеток гусиных эмбрионов и при крупномасштабном культивировании накапливается в высоких титрах (7,5-8,0 lg ТЦДя/см3), необходимых для изготовления ннактивированной вакцины.

4.Изучена кинетика полной инактивации вируса энтерита гусей формальдегидом и ДЭИ и определены оптимальные параметры процесса инактивации (конечная концентрация ииактиванта в ВСМ 0,1%, время экспозиции 24 часа при температуре 37±0,5°С),

5.Изготовлепы и испытаны сорбированная и эмульсионная формы инактивировашюй вакцины. Показана их высокая антигенность и иммуногенная активность. Эмульсионная вакцина по иммунобиологическим показателям и продолжительности иммунитета признана наиболее перспективной.

6.Установлено оптимальное соотношение антигена в водной фазе вакцины с маслянным адъювантом Montanide ISA 70 (30:70) с биологической активностью вируса до инактивации не ниже 7,5 log ТПДя/см3.

7.Эксперименталыю показано, что эмульсионная инактивированная вакцина по антигенной и иммуногенпой активности и продолжительности иммунитета значительно превосходит вирусвакцину сухую культураяьную ВИИВИП против вирусного энтерита гусей.

8.Инактивированная эмульсионная вакцина против вирусного энтерита гусей безвредна при однократном парэптеральном применении и индуцирует формирование поствакциоиалыюго напряженного иммунитета у гусей, вызывая иммунологическую перестройку на весь репродуктивный период.

4. Практические предложения

1.Результаты научных исследований но разработке технологии изготовления ниактивированноП вакцины и ее лабораторных испытаний войдут в нормативную документацию на новый вакцинный препарат:

- СТО на ннактивнровапную эмульсионную вакцину против вирусного энтерита гусей (проект);

- инструкция по применению штитшировашюй вакцины против вирусного энтерита гусей, рассмотрена на Ученом совете ГПУ «ВИИВИП» Россельхозакадемии и утверждена директором.

2. Материалы, изложенные в диссертации, используются в учебном процессе на курсах

повышения квалификации ветеринарных специалистов, работающих в области промышленного птицеводства.

5. Список опубликованных работ по теме диссертации Статья в журпиле, рекомендованном ВАК Минобразования и науки РФ:

^Чувствительность парвовируса гусей к формальдегиду и лимерэтиленнмину / Михаилов А.О. II Вопр. нормативно-правового регулировании в ветеринарии.-СПб,200?.-ЛН-СЛ 04-106.

Статьи, опубликованные в сборниках материалов различных конференций:

2.Вирусный энтерит гусей (диагностика и профилактика) / Трефилов Б.Б., Михайлов Л.О., Никитина П.В. И Актуал. пробл. вет. мед.: научно-практич. конгресс 24-25 авгуета.-СПб, 2007.-С.211-213.

З.Основы профилактики вирусного энтерита (парвовирусной инфекции) гусей / Трефилов Б.Б., Никитина Н.В., Михаилов А.О. // Новое в диагн. и профил. болезней птиц: матер. Научио-практ. конф. 3-4 июня 2008,-СПб, Г.Ломоносов, 2008.-С.87-93.

4.Геиетичеекие маркеры вакцинного клона парвовируса гусей / Трефилов Б.Б., Михайлов А.О. // Достиж. в соврем, птицеводстве: исследования и инновации: матер. XVI конф.-Сергиев Посад, 2009.-С.400-402.

5.Усовершепствошшие средств специфической профилактики парвовирусной инфекции гусей / Трефилов Б.Б., Никитина Н.В., Михайлов А.О. //Матер. Междунар. Агропром. Конгрссса.-СПб, 2009.-С.40.

Подписано в печать с оригинал-макета 16.03.2010 Формат 60х84;1/16. Печать цифровая. Усл.печл. 1.06. Тираж 100. Заказ №29/с Отпечатано в "Сан Принт" Санкт-Петербург, 1-ая Красноармейская ул., д24/21 Тел.: 316-31-83

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Михайлов, Александр Олегович

Список сокращений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Значение и предпосылки развития продуктивного гусеводства.

1.2. Вирусный энтерит (парвовирусная инфекция, болезнь Держи) гусей, распространение и ущерб, причиняемый этой болезнью.

1.3. Этиология болезни и характеристика семейства парвовирусов (сем. Parvoviridac).

1.4. Эпизоотологические особенности вирусного энтерита гусей.

1.5. Клинико-патоморфологические признаки болезни.

1.6. Диагностика болезни.

1.7. Профилактика и меры борьбы.

1.8. Инактивированные вакцины и их применение в промышленном птицеводстве.

2. Собственные исследования.

2.1. Материалы и методы.

2.1.1. Материалы исследований.

2.1.2. Методы исследований.

2.2. Результаты собственных исследований.

2.2.1 Характеристика производственного вакцинного «клона 6» вируса энтерита гусей.

2.2.2. Разработка оптимальной схемы получения вирусного сырья.

2.2.3. Инактивация вируса энтерита гусей.

2.2.3.1. Изучение инактивирующего действия формальдегида.

2.2.3.2. Изучение инактивирующего действия димерэтиленимина (ДЭИ).

2.2.4. Выбор оптимального компонентного состава инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей.

2.2.5. Изучение физических свойств инактивированной эмульсионной вакцины в зависимости от продолжительности ее хранения.

2.2.6. Изучение антигенных свойств инактивированной сорбированной и эмульсионной вакцины в зависимости от продолжительности ее хранения.

2.2.7. Изучение динамики формирования поствакцинального иммунитета у гусей, иммунизированных сорбированной и эмульсионной вакциной против вирусного энтерита.

3.Обсуждение результатов исследований.

4. Выводы.

5. Практические предложения.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Иммунобиологические свойства инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей"

Актуальность темы. Одним из основных направлений национального проекта «Развитие АПК» является ускоренное развитие гусеводства, цель которого — увеличение производства мяса на 7%. «Отраслевая целевая программа развития птицеводства в Российской Федерации на 2005-2007 гг. и на период до 2010 года» предусматривает произвести к 2010 году 2,2 млн.т. мяса птицы, в том числе гусиного мяса до 5 тыс.т.

Серьезным препятствием на пути развития промышленного гусеводства наряду с факторами нарушения технологического режима выращивания являются различные инфекционные болезни молодняка, среди которых особое место занимает вирусный энтерит (парвовирусная инфекция) гусей. Это заболевание до настоящего времени имеет широкое распространение среди молодняка 1-30-суточного возраста, протекает остро и характеризуется высокой смертностью,достигая до 90-100% (В.В. Малушко, 1982; JI.M. Контримавичус, 1983; Б.Б. Трефилов., 2000, Derzsy et al., 1966.).

С профилактической и терапевтической целью при пневмовирусном энтерите гусей применяют цитратную кровь и сыворотку крови гусей -реконвалесцентов (Л.М. Контримавичус, 1984; B.C. Фадин, 1975; Б.Б. Трефилов, 2009; Coudert et al, 1973), гипериммунную сыворотку млекопитающих ( В.В. Малушко с соавт., 1980; А.Ф. Бондаренко, 1982) и гипериммунную гусиную сыворотку крови ( Б.Б. Трефилов, 2008; Derzsy, 1970; Bernath, Szalai, 1970).

Однако в комплексе мероприятий по предупреждению и ликвидации вирусного энтерита гусей (ВЭГ) важная роль отведена вакцинопрофилактике.

Несмотря на широкое применение вирусвакцины ВНИВИП сухой культуральной против ВЭГ в Российской Федерации и странах СНГ, проблема борьбы с этой болезнью остается весьма актуальной.

Исходя из изложенного, разработка высокоэффективной и технологичной инактивированной вакцины против ВЭГ, применяемой в условиях промышленного гусеводства, фермерских хозяйств и личного подворья - остается востребованной в связи с:

- отсутствим отечественного инактивированного вакцинного препарата против вирусного энтерита гусей; недостаточным длительным напряженным иммунитетом при применении живых вакцин против вирусного энтерита гусей;

- сокращением количества вакцинаций с целью уменьшения стрессов и нагрузки на иммунную систему;

- потребностью в вакцинном препарате, не содержащем живого вируса.

Цели и задачи исследования. Целью настоящей работы являлась разработка технологии изготовления инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей и изучение ее иммунобиологических характеристик.

Для достижения ее было необходимо решить следующие задачи:

- подобрать производственный штамм вируса энтерита гусей и изучить его биологические характеристикй;

- изучить оптимальные системы культивирования вируса и его инактивацию;

- разработать компонентный состав инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей;

- изучить физические параметры и иммунобиологические свойства инактивированной вакцины;

- изучить динамику формирования поствакцинального иммунитета у вакцинированных гусей.

Научная новизна. Впервые разработана отечественная инактивированная эмульсионная вакцина против вирусного энтерита гусей.

Отработана оптимальная схема получения вируссодержащего сырья из вакцинного производственного «клона 6» вируса энтерита гусей, депонированного в ФГУ ВГНКИ №71, патент РФ №1499917 «Штамм Goosa parvovirus для приготовления вакцинных препаратов против вирусного энтерита гусей», с использованием культуры клеток эмбрионов гусей.

Обоснованы режимы инактивации вируса энтерита гусей формальдегидом и димерэтиленимином. Изучена кинетика инактивации вируса.

Научно обоснован компонентный состав инактивированной сорбированной и эмульсионной вакцины, определены оптимальные соотношения антигена и адъювантов. Доказана ее безвредность и высокая антигенность и способность индуцировать длительный поствакцинальный иммунитет у гусынь по сравнению с вирусвакциной ВНИВИП.

Практическая значимость работы. Полученные результаты исследований послужили основанием для разработки технологии изготовления инактивированной вакцины и подготовки нормативной документации на вакцину против вирусного энтерита гусей:

- «Стандарт организации на вакцину против вирусного энтерита гусей инактивированную эмульсионную» (проект).

- «Инструкция по применению вакцины против вирусного энтерита гусей инактивированной эмульсионной», временная утверждена директором ГНУ «ВНИВИП» Россельхозакадемии, 2010 года.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

• Характеристика производственного вакцинного «клона 6» вируса энтерита гусей;

• Схема получения вируссодержащего сырья для изготовления инактивированной вакцины;

• Инактивация вируса энтерита гусей димерэтиленимином;

• Компонентный состав инактивированной сорбированной и эмульсионной вакцины;

• Физические и иммуногенные характеристики инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Методического совета отдела вирусологии, опухолевых болезней птиц и иммунофармакологии и Ученого совета ГНУ «ВНИВИП» (2006-2009), на Международных агропромышленных конгрессах (СПб, 2007,2009), Международных конференциях ВНАП (2009), науно-практической конференции 3-4 июня 2008 (СПб, г.Ломоносов, 2008).

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы выполнены совместно с ведущим научным сотрудником Никитиной Н.В., за что автор выражает ей сердечную благодарность.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных статей, в том числе одна работа в издании, рекомендованном ВАК РФ, уведомление р поступлении и регистрации заявки №2010100456 от 12.01.2010 г.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 109 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов: обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения и список литературы. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами, 6 рисунками. Список использованной литературы включает 243 источника, из них 121 зарубежный.

Место выполнения работы. Исследования по диссертационной работе выполнены в 2006-2009 гг. в соответствии с отраслевым планом НИР ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства» Россельхозакадемии по заданию 08.07.06.

1. Обзор литературы

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Михайлов, Александр Олегович

4. Выводы

1. Разработана технология изготовления инактивированной эмульсионной вакцины против вирусного энтерита гусей. Вакцина предназначена для специфической профилактики болезни в стационарно неблагополучных гусеводческих комплексах и фермерских хозяйствах.

2. В качестве производственного штамма предложен вакцинный «клон 6», который по основным генетическим маркерам (морфологической и антигенной структуре и биологическим свойствам) соответствует эталонным штаммам парвовируса гусей, он апатогенен для гусят, ареверсибелен и обладает выраженной антигенной и иммуногенной активностью.

3. Вакцинный «клон 6» способен к репродукции в культуре клеток гусиных эмбрионов и при крупномасштабном культивировании накапливается в высоких титрах (7,5-8,0 lg ТЦД50/СМ3), необходимых для изготовления инактивированной вакцины.

4. Изучена кинетика полной инактивации вируса энтерита гусей формальдегидом и ДЭИ и определены оптимальные параметры процесса инактивации (конечная концентрация инактиванта в ВСМ 0,1%, время экспозиции 24 часа при температуре 37±0,5°С).

5. Изготовлены и испытаны сорбированная и эмульсионная формы инактивированной вакцины. Показана их высокая антигенность и иммуногенная активность. Эмульсионная вакцина по иммунобиологическим показателям и продолжительности иммунитета признана наиболее перспективной.

6. Установлено оптимальное соотношение антигена в водной фазе вакцины с маслянным адъювантом Montanide ISA 70 (30:70) с биологической активностью вируса до инактивации не ниже 7,5 log ТЦД5о/см3.

7. Экспериментально показано, что эмульсионная инактивированная вакцина по антигенной и иммуногенной активности и продолжительности иммунитета значительно превосходит вирусвакцину сухую культуральную ВНИВИП против вирусного энтерита гусей.

8. Инактивированная эмульсионная вакцина против вирусного энтерита гусей безвредна при однократном парэнтеральном применении. Индуцирует формирование поствакционального напряженного иммунитета у гусей, вызывая иммунологическую перестройку на весь репродуктивный период.

5. Практические предложения

1. Результаты научных исследований по разработке технологии изготовления инактивированной вакцины и ее лабораторных испытаний войдут в нормативную документацию на новый вакцинный препарат:

- СТО на инактивированную эмульсионную вакцину против вирусного энтерита гусей (проект);

- Инструкция по применению инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей, рассмотрена на ученом совете ГНУ «ВНИВИП» Россельхозакадемии и утверждена директором.

2. Материалы, изложенные в диссертации, используются в учебном процессе на курсах повышения квалификации ветеринарных специалистов, работающих в области промышленного птицеводства.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Михайлов, Александр Олегович, Санкт-Петербург

1. Акулов А.В. Патоморфологические изменения у гусят при вирусном энтерите / Акулов А.В., Контримавичус JI.M. // Тр. ВИЭВ,- 1975.- Т.43,-С.384-392.

2. Алиев А.С. Изучение инактивирующего действия формалина и димерэтиленимина на вирус инфекционной бурсальной болезни /Алиев А.С., Алиев Т.С. // Вет. профилак. в пром. птицеводстве (сб. науч. тр.). -СПб., 1996. С.12-18.

3. Ашмарин И.П. Быстрые методы статистической обработки и планирование экспериментов / Ашмарин И.П., Васильев Н.Н., Амбросов В.А. Л. : Изд-во ЛГУ, 1975.-78 с.

4. Байдевлятов А.Ф. Заболевание гусей невыясненной этиологии / Байдевлятов А.Ф. // Ветеринария.- 1966.-№ 4.- С.42-44.

5. Белецкая А. Вирусный энтерит под контроль / Белецкая А. // Птицеводство.- 2003.- №8.- С.17.

6. Божко О. Гусеводство Харьковщины /Божко О. // Ж. Птицеводство, 1998. - №10. - С.22-23.

7. Бондаренко А.Ф. Вирусный энтерит на Кубани / Бондаренко А.Ф., Капитанаки М.В. // Сб. науч. тр. СКЗНИВИ,- Краснодар, 1975.- С.132-135.

8. Бондаренко А.Ф. Изучение массовых заболеваний гусят на гусеводческих фермах Краснодарского края / Бондаренко А.Ф., Капитанаки М.В., Сажнев В.Н. // Сб. науч. тр. СКЗНИВИ.- Краснодар, 1975.- С.135-138.

9. Бондаренко А.Ф. Течение смешанной инфекции у гусят / Бондаренко А.Ф., Капитанаки М.В. // Ветеринария.- 1975.- №2.-С. 63-64.

10. Бондаренко А.Ф. Об этиологии вирусного энтерита гусят /Бондаренко А.Ф. // Болезни птиц : тр. СКЗНИВИ.- 1977. -С.67-69.

11. Бондаренко А.Ф. Усовершенствование методов диагностики и профилактики вирусного энтерита гусей: автореф. дис. . канд. вет. наук / Бондаренко А.Ф. -Краснодар, 1982.- 18 с.

12. Борисова И.А. Разработка технологии изготовления и контроля инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и метапневмовирусной инфекции птиц: дис. . канд. биол. наук / Борисова И.А.-Владимир, 2008.-167 с.

13. И.Борисов В.В. Разработка средств и методов диагностики и специфической профилактики аденовирусных болезней кур: автореф. дис. . д-ра. вет. наук / Борисов В.В. Иваново, 2007.

14. Н.Борисов В.В. Инактивированные вакцины возможные варианты применения в промышленном птицеводстве / Борисов В.В., Борисов А.В., Старов С.К. и др. // Матер, конф. по птицеводству.-М.,2003.-С.208-209.

15. Бородина О.В. Разработка инактивированной эмульсионной вакцины против пастериллеза птиц: дис. . канд. биол. наук / Бородина О.В.Ульяновск, 2005.-122 с.

16. Вертинский К.И. Малоизученное вирусное заболевание гусей / Вертинский К.И., Бессарабов Б.Ф., Стрельников А.П. и др. // Ветеринария.-1973а. №3.-С.64-66.

17. Вертинский К.И. Клинико-анатомическая характеристика малоизученного вирусного заболевания гусей / Вертинский К.И., Стрельников А.П., Куриленко А.Н. // Тр. 5-ой Всесоюзной конф. по патолог, анатом, ж-х.-МВА.-19736.-С. 179-181.

18. Вертинский К.И. Чувствительность некоторых видов животных к возбудителю малоизученного заболевания гусей / Вертинский К.И., Сюрин В.Н., Сосов Р.Ф. и др. // Вопр. вет. науки и практики: сб. научн. труд.-1 974.-t.73 .-ч. 1 .-С. 139-142.

19. Вирусные болезни животных: учеб. пособие / Сюрин В.Н. и др.З.Москва : ВНИТИБП, 1998.-С. 17-20.

20. Вирусный энтерит и меры борьбы с ним / Малушко В.В., Иващенко В.Г., Щеглова И.В., Трефилов Б.Б. // Актуальные вопросы вет. вирусологии : тез. докл. 5 Всерос. конф. 1980.-С.32.

21. Глейзер Д. А. Ролучение инактивированного вируса инфекционного бронхита кур (штамм «Калужский») / Глейзер Д.А., Фролов С.В., Борисов А.В., Кулаков В.Ю. // Ветеринарная патология.-2008.-№4(27).-С.75-79.

22. Государственная фармокопия СССР.-изд. 11.-вып.1. Общие методы анализа.-М.: Медицина, 1987.-336 с.

23. Держи Д. Культуральные свойства, антигенное родство и морфология различных штаммов вируса энтерита гусей / Держи Д., Контримавичус JI.M., Надточей Г.А. // Доклады ВАСХНИЛ.- 1975.-№ 7.-С.36-37.

24. Джавадов Э.Д. Вирус-индуцированные иммуносупрессии и способы их предупреждения в промышленном птицеводстве: дис. . д-ра. вет. наук / Джавадов Э.Д.-Москва., 2004.-345 с.

25. Джавадов Э.Д. Профилактика болезней птиц инактивированными вакцинами серии «Авикрон» / Джавадов Э.Д., Вихрева И.Н., Дмитриева М.Е.и др. // Матер. Междунар. конг.-СПб, 2009.-С.30-31.

26. Ельников В.В. Технология изготовления ассоциированной инактивированной вакцины против ньюкаслской болезни и реовирусного теносиновита птиц: автореф. дис. . канд. веет, наук / Ельников В.В.Владимир,2003 .-24 с.

27. Земсков A.M. Некоторые механизмы адъювантов / Земсков A.M. // Иммунология.-1982.-№ 1 .-С.6-12.

28. Иващенко В.Г. Усовершенствование диагностики, мер борьбы и профилактики вирусного энтерита гусей : автореф. дис. . канд. вет. наук / Иващенко В.Г.-Л., 1986.-25 с.

29. Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция /Игнатов П.Е. // М.,: Время, 2002.352 с.

30. Изучение массового заболевания гусят невыясненной этиологии и опыт его профилактики (по материалам 1963-1965гг.) / Контримавичус Л.М., Семилит И.Л., Клейхменева Л.Н., Карпов Г.М. // Тр. Горьковской НИВС,- 1968.-№3.-C.33-39.

31. Капитанаки М.В. Эпизоотия вирусного энтерита на Кубани / Капитанаки М.В., Чечула Л.Д. // Бюл. НТИ / Краснодарская НИВС.-1970.- Вып.2.- С.82-85.

32. Капитанаки М.В. К вопросу этиологии энзоотического энтеро-кутикулита гусят / Капитанаки М.В., Бондаренко А.Ф., Чечула Л.Д. // Бюл. НТИ / Краснодарская НИВС.- 1970,- Вып.2.- С.79-82.

33. Капитанаки М.В. Вирусный энтерит гусят / Капитанаки М.В., Бондаренко А.Ф., Чечула Л.Д. //Ветеринария.- 1971.-№7.-С. 58-59.

34. Капитанаки М.В. Лечение гусят при вирусном гастроэнтерите / Капитанаки М.В., Чечула Л.Д., Манохин А.В. // Птицеводство.-1971.-№12.- С.46-47.

35. Капитанаки М.В. Опыт применения лечебно-профилактических средств при инфекционном гастроэнтерите гусей / Капитанаки М.В., Чечула Л.Д., Манохин А.В. // Науч. тр. / Краснодарская НИВС.- 1972.- Т.5.- С.28-27.

36. Капитанаки М.В. О вирусном гастроэнтерите гусят / Капитанаки М.В., Чечула Л.Д. // Сб. тр. / ВНИВИП,- 1976.- Вып.11.- С. 231-236.

37. Кислюк С. Оптимальный набор кормовых добавок в условиях повышения цен на сырье / Кислюк С. // Птицеводство,2008.-№7.-С.21-22.

38. Ковацкий Н. Резервы 1усеводства / Ковацкий Н. // Птицеводство,1988,-№10.-С.10-13.

39. Кондаков М.П. Патологоанатомические изменения у гусят при вирусном энтерите / Кондаков М.П. // Сб. науч. тр. Дон. СХИ.-1973.- Т.8, вып.1 .-С.139-140.

40. Кондаков М.П. Патоморфологические изменения у гусят при вирусном энтерите / Кондаков М.П., Фадин B.C. // Тр. 5 Всесоюз. науч. метод.конф. по патолог, анатомии животных (Тбилиси, 1972 г.) / МВА.-М., 1973.- С.37-40.

41. Кондаков М.П. Морфологическая реакция у гусят на введение крови переболевших вирусным энтеритом гусей / Кондаков М.П., Фадин B.C. // Материалы 6 Всесоюз. конф. по патолог, анатомии животных.- Тарту, 1977.- Т. 2.- С.158-160.

42. Контримавичус Л.М. Предварительные данные о культивировании вируса энтерита гусят в культуре ткани / Контримавичус JI.M., Майборода А.Д. //Бюл. ВИЭВ.- 1968.- Вып. 4.-С. 11-12.

43. Контримавичус JI.M. Инфекционный энтерит гусят /Контримавичус Л.М. // Тр. ВИЭВ.- М., 1968. -Т.35.- С.292-301.

44. Контримавичус Л.М. Инфекционный энтерит гусят / Контримавичус Л.М. // Эпизоотология. М. : Колос, 1969.- С. 355-356.

45. Контримавичус Л.М. Некоторые биологические свойства вируса энтерита гусят / Контримавичус Л.М. // Бюл. ВИЭВ.- 1970а.- Вып.7,-С.32-35.

46. Контримавичус Л.М. К эпизоотологии вируса энтерита гусят /Контримавичус Л.М. //Бюл. ВИЭВ.- 19706.- Вып. 7.-С.36-38.

47. Контримавичус Л.М. Вирусный энтерит гусей (Enteritis virosa anserculorum) / Контримавичус Л.М. // Болезни птиц.-М.: Колос, 1971.-С.77-82.

48. Контримавичус Л.М. Некоторые вопросы инфекционной патологии гусят / Контримавичус Л.М.// Ветеринария.- 1972,- №8.-С.66-68.

49. Контримавичус Л.М. Распространение Enteritis virosa anserculorum у гусят и ГЭ / Контримавичус Л.М., Шуляк А. // Передовой науч.-производ. отчет в птицеводстве : экспресс-информ.- 1973.-№5.-С.28-30.

50. Контримавичус Л.М. К лабораторной диагностике вирусного энтерита гусят / Контримавичус Л.М. // Ветеринария.- 1974а.- № 8. -С. 108-110.

51. Контримавичус Л.М. Вирусный энтерит гусей и меры борьбы с ним / Контримавичус Л.М. // Птицеводство.- 19746.- №6.- С.45-46.

52. Контримавичус Л.М. Сравнительная характеристика штаммов вируса, выделенных от больных энтеритом гусят / Контримавичус Л.М. // Тр. ВИЭВ.- 1975а.-Т.43.-С.212-224.

53. Контримавичус Л.М. Оценка активности гипериммунных сывороток против вируса энтерита гусей / Контримавичус Л.М. // Ветеринария.-1975б.-№1.-С.37-38.

54. Контримавичус Л.М. Стандартизация сывороток против вирусного энтерита гусей / Контримавичус Л.М., Кишари Я. II Ветеринария,- 1976.-№8.-С.50-51.

55. Контримавичус Л.М. Вирусный энтерит гусей : дис. . д-ра вет. наук /Контримавичус Л.М. -1978.- 320 с.

56. Контримавичус Л.М. Эпизоотологические и клинико-анатомические вирусного энтерита гусят / Контримавичус Л.М., Макогон В.Ф., Навроцкий В.В. //Ветеринария.- 1980.-№7.-С.34.

57. Контримавичус Л.М. Усовершенствование диагностики вирусного энтерита гусей / Контримавичус Л.М., Суворов A.M. // Ветеринария.-1982.-№11.-С.67-68.

58. Корнеева В.И. Лабораторная диагностика вирусного энтерита на гусиных эмбрионах / Корнеева В.И., Фадин B.C., Куриленко А.В. // Материалы I Сибирской зональной науч.-произв. конф.- Омск, 1973,- С.27-30.

59. Кравченко Т.М. К этиологии массового заболевания гусят / Кравченко Т.М., Липская В.В. // Ветеринария.- 1966.-№8.-С.88-90.

60. Крылов М.В. Инфекционные и инвазионные болезни водоплавающих птиц / Крылов М.В., Терюханов А.Б. Л. : Колос, 1975.-С. 14-18.

61. Куриленко А.Н. Инфекционный бронхит кур (обзор литературы) / Куриленко А.Н., Крупальник B.JI, Якимчук Б.А. // Ветеринария.-1990.-№8.-С.36-43.

62. Курс эпизоотологии: учебное пособие / Ганнушкин М.С. // Москва, 1952.423 с.

63. Макаров В. Основы инфекционной иммунологии / Макаров В., Гусев А., Гусев У., Сухаров О. // Владимир-Москва: Фолиант,2000.-176 с.

64. Макогон В.Ф. Массовое заболевание гусят энтеритом / Макогон В.Ф., Болдырев Д.Н., Поворознюк В.Ф. // Ветеринария.- 1974.-№8.-С.55-56.

65. Макогон В.Ф. Захворювання гусенят енеритом у господарствах Кримсько1 областш / Макогон В.Ф. // Ветеринария.- 1975.- Вип.40.-С.58-61.

66. Макогон В.Ф. Профилактика вирусного энтерита / Макогон В.Ф. // Птицеводство.- 1979.-№3 .-С.42-43.

67. Малушко В.В. Изучение этиологии, разработка мер борьбы с малоизвестными вирусными болезнями водоплавающей птицы / Малушко В.В. // Сб. рефератов НИР и ОКР.-1976.-№3.-С.ЗО.

68. Малушко В.В. Вирусный энтерит гусей / Малушко В.В. // Справочник вет. врача птицеводческих предприятий.- М. : Колос, 1982.-С.103-105.

69. Мамаев В. Прижизненная ощипка гусей / Мамаев В., Ковацкий Н., Кабанова О., и др. // Птицеводство, 1998.-№10.-С.23-24.

70. Маслов Д.В. Серологическая диагностика вирусного энтерита гусей методом иммуноферментного анализа: автореф. дис. . канд. вет. наук / Маслов Д.В.-СПб,2006.-17 с.

71. Маслов Д.В. Диагностика вирусного энтерита гусей методом иммуноферментного анализа / Маслов Д.В., Никитина Н.В., Трефилов Б.Б.

72. Новые фармакологические средства в ветеринарии: матер. XVIII Междунар. межвуз. науч.-практ. конф. СПбГАВМ.-СПб,2006.-57 с.

73. Махалов А.Г. Научное обоснование использования биологически активных веществ в кормлении гусей: автореф. дис. . д-ра с/х наук / Махалов А.Г.-Сергиев-Посад,2008.-43 с.

74. Монашон Т. Изучение, проведенное научно-исследовательской станцией «Артигер» по улучшению выращивания гусей / Монашон Т. // Тр. XIII Всемир. конгресса по птицеводству.- 1966.

75. Недобуга С. С минимальными затратами / Недобуга С. // Птицеводство, 1988.-№ 10.-С. 17-18.

76. Оноприенко Я. Растет поголовье гусей / Онопренко Я. // Птицеводство, 1988.-№ 10.-С.21 -22.

77. Паникар И.И. Заболевание гусят с признаками энцефаломиэлита / Паникар И.И., Белицкий Б.И. // Вюник сшьстко-господ. науку,- 1971.-№3.-С.105-107.

78. Петелина Е.А. Морфологические изменения в энтероцитах тонкого отдела кишечника гусят при вирусном энтерите / Петелина Е.А. // Бюл. ВИЭВ.-М, 1983.- Вып. 50.-С.58-60.

79. Петелина Е.А. Биологические и физико-химические свойства вируса энтерита гусей : автореф. дис. . канд. вет. наук / Петелина Е.А. М., 1984.

80. Рак И. Наш многолетний опыт / Рак И., Стрекалова Л., Доброродный А. // Птицеводство, 1988.-№ 10.-С. 18-21.

81. Результаты изучения инфекционного энтерита гусят / Контримавичус Л.М., Семилит И.Л., Клейхменева Л.Н., Карпов Г.М., Козлова Е.И., Кудрявцев Ф.С. //Ветеринария.- 1966.-№12.-С.34-36.

82. Руднякова В.Г. Вирусный энтерит гусят в Новосибирской области / Руднякова В.Г. // Профилактика болезней с.-х. животных / ВАСХНИЛ. Сиб. отд.- 1976.- Вып. 1.-С.83-86.

83. Сарбасов А.Б. Изучение антигенных свойств пневмовируса птиц на циплятах / Сарбасов А.Б., Старов С.К., Борисов А.В. и др. // Акту ал. пробл. инфекц. патол. с.-х. ж-х: матер. Междун. науч. конф., посвящ. 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ».-Владимир,2003.-С.353-356.

84. Суворов A.M. Антигенные свойства парвовируса гусей / Суворов A.M. // Бюл. ВИЭВ,- М., 1982.-Вып. 48.-С.16-18.

85. Суворов A.M. Антигенные и иммуногенные свойства аттенуированных штаммов вируса энтерита (парвовируса) гусей : автореф. дис. . канд. вет. наук / Суворов A.M. М., 1986.- 22 с.

86. Сюрин В.Н. Руководство по ветеринарной вирусологии / Сюрин В.Н. -М. : Колос, 1966.-С.141-185, 206, 207.

87. Тобоев Г. Оценка мясных качеств гусей линдовской породы / Тобоев Г. // Птицеводство,2008.-№7.-С.26-27.

88. Трефилов Б.Б. Изучение формолвакцины против вирусного энтерита гусей в производственных условиях / Трефилов Б.Б. // Перед, науч.-производ. опыт в птицеводстве.-М.,1982.-3(Ш).-С.40-41.

89. Трефилов Б.Б. Разработка средств профилактики вирусного энтерита гусей / Трефилов Б.Б. // Ветеринария. -1990.-№6.-С.6.

90. Трефилов Б.Б. Производственные испытания вирусвакцины ВНИВИП против вирусного энтерита гусей / Трефилов Б.Б. // Система мероприятий обеспечения эпизоотического благополучия птицеводческих предприятий : сб. науч. тр.- СПб., 1993 .-С.41-49.

91. Трефилов Б.Б. Эпизоотологические особенности вирусного энтерита гусей / Б.Б. Трефилов // Ветеринарная профилактика в промышленном птицеводстве : сб. науч. тр. / СПб-Ломоносов, 1996.-С.48-56.

92. Трефилов Б.Б. Проблема вирусного энтерита гусей в промышленном птицеводстве / Трефилов Б.Б. // Материалы науч.-производ. конф.,посвящ. 190-летию высш. вет. образования в России и 100-летию вет. науки.- СПб., 1998. -Т.2.- С.99.

93. Трефилов Б.Б. Основы профилактики вирусных болезней птиц / Трефилов Б.Б., Коровин Р.Н., Придыбайло Н.Д. // Матер. Междунар. юбил. научно-прат. конф.-СПб,2004.

94. Трефилов Б.Б. Вирусный энтерит гусей (диагностика и профилактика) / Трефилов Б.Б., Никитина Н.В., Явдошак JI.H. и др. // Актал. проб. вет. мед.: научно-прак. конгр. 24-25 авг.-СПб,2007.-С.211-213.

95. Улупов Н.А. Аминоэтилэтиленимин средство инактивации инфекционности вируса ящура / Улупов Н.А., Михалишин В.В., Гусев А.А., Лезова Т.Н. // Соврем, аспекты вет. патол. ж-х: матер, конф., посвящ. 40-летию ФГУ «ВНИИЗЖ».-Владимир,1988.-С.53-62.

96. Фадин B.C. Применение сыворотки от гусей-реконвалесцентов при инфекционном энтерите гусят / Фадин B.C., Дедкова Л. // Земля Сибирская Дальневосточная.- 1970.-№7.-С.35.

97. Фадин B.C. Цитратная кровь гусей-реконвалесцентов в профилактике вирусного энтерита / Фадин B.C., Романовская А., Вронская М. // Птицеводство.- 1971.-№5.-С.45.

98. Фадин B.C. Вирусный энтерит гусят / Фадин B.C. // Земля Сибирская Дальневосточная.- 1972.-№5.-С.32.

99. Фадин B.C. Некоторые данные по эпизоотологии вирусного энтерита гусят / Фадин B.C. // Итоги науч. исследований и рекомендаций попрофилактике болезней птиц в хозяйствах промышленного типа : тез. докл. (Куйбышев, 12-15 ноября 1973а г.).

100. Фадин B.C. Экспериментальное заражение гусят вирусным энтеритом / Фадин B.C., Погуляева JI.B., Жданова М.Е. // Профилактика заразных и незаразных заболеваний животных в Сибири.-1973.-С.122-125.

101. Фадин B.C. Профилактика вирусного энтерита цитратной кровью / Фадин B.C., Мельников Н.М. // Науч. тр. Омского вет. ин-та.- 1973.-Т.29, вып. 3.-С.27-30.

102. Фадин B.C. Методика диагностики и профилактики вирусного энтерита гусят / Фадин B.C. // Вет. профилактика болезней с.-х. животных в Сибири. Новосибирск, 19736.-С.157-161.

103. Фадин B.C. Эпизоотология вирусного энтерита гусят / Фадин B.C., Лапин Б.И. // Земля Сибирская Дальневосточная.- 1974.-№10. -С.36-37.

104. Фадин B.C. Производственное испытание цитратной крови гусей -реконвалесцентов в профилактике вирусного заболевания гусят / Фадин B.C. // Сб. науч. работ СибНИВИ.- 1975а.-Вып. 22. -С. 168-175.

105. Фадин B.C. Вопросы эпизоотологии и диагностики вирусного заболевания гусят / Фадин B.C. // Сб. науч. работ СибНИВИ.- 19756,-Вып. 22.-С.160-167.

106. Фадин B.C. Вопросы этиологии и профилактики вирусного энтерита гусят в птицеводческих комплексах / Фадин B.C., Куриленко А.В., Корнеева В.И. // Профил. инфекц. болезней ж-х в промыш. комплексах.-Омск, 1916-С. 107-108.

107. Фадин B.C. Вирусоносительство при вирусном энтерите гусей / Фадин B.C., Куриленко А.В., Корнеева В.И. // Сб. науч. работ СибНИВИ.- 1977.- Вып. 29.-С.61-62.

108. Фадин B.C. Материалы по эпизоотологии вирусного энтерита / Фадин B.C. // Науч. основы вет.-профилакт. мероприятий впромышленном производстве : тез. докл. Всесоюз. конф. (3-6 окт. 1977 г.).-Кишинев, 1977.

109. Фадин B.C. Экспериментальный вирусный энтерит гусят / Фадин B.C. //Сб. науч. работ СибНИВИ,- 1979а.-Вып. 34.-С.134-137.

110. Фадин B.C. Экономический ущерб при вирусном энтерите гусей и экономическая эффективность серопрофилактики / Фадин B.C. // Сб. науч. работ СибНИВИ,- 19796.- Вып.34.-С.138-141.

111. Фадин B.C. Профилактика вирусного энтерита гусят / Фадин B.C. // Актуальные вопросы вирусологии : тез. докл. 5 Всесоюз. конф. — Казань, 1980.-С.31-32.

112. Чекшиев В.М. Влияние гипериммунизации гусей вируссодержащей аллантоисной жидкостью на белковый спектр крови / Чекшиев В.М., Фадин B.C. // Сб. науч. работ / СибНИВИ .- 1976.- Вып. 26.-С.99-104.

113. Чечула Л.Д. Испытание цитратной крови переболевших гусят и гусынь, желудочного сока с фуразолидоном и уросала при вирусном гастроэнтерите / Чечула Л.Д., Капитанаки М.В. // Сельск. зори-1971.-№8.-С.53.

114. Шлапаченко А. Профилактика энтерита гусят / Шлапаченко А., Гострик В., Грабовский П. // Птицеводство.- 1981.-№ 6.-С.34.

115. Щеглова И.В. Чувствительность возбудителя к некоторым химиотерапевтическим препаратам / Щеглова И.В., Малушко В.В. // Передовой науч.-производ. опыт в птицеводстве : экспресс-информ.-1975.-№4.-С.26.

116. Эльберт Г. Перспективная технология / Эльберт Г., Сниткин М. // Птицеводство.-1988.-№10.-С.14-17.

117. Ahmed A.A.S. Wirusinfectionen bei Gansen / Ahmed A.A.S. // Berlin und Munchen tierart. Wochenschr.- 1973.-Jg. 86, H.2.-S.28-32.

118. Aktiv immunizalasi kiserletek a kisliban Derzsy- fele befegsege (un libainfluenza) ellen. 1. Csoklcent viry lenciajn virustorzs vizgalata / Kisary J., Derzsy D., Kontrimavichus L.M., Bezsilla E. // Magyar Allatorv. Lapja.-1977.- T.32, №12.- S.785-787.

119. Anderson M. J. The human parvovirus / Anderson M. J., Pattison J. R. // Arch. Virol.- 1984.-Vol.82, №3/4.-P. 137-148.

120. Andrewes C.H. The susceptibility of viruses to ethyl ether. / Andrewes C.H., Horstmann D.M. // J. Gen. Microbiol.-1949.-Vol.3.-№2.-P.290-297.

121. Application of the immunoperoxidase technique for the detection of Derzsy's desease virus antigen in cell culture and goslings / Roszkowski J., Gardzinski P., Kozaczynski W., Bartoszoze M. // Avian Pathol.- 1982.- Vol.11, №4.-P. 571-578.

122. Audibert F.M. Adjuvants: current status, clinical perspectives and future prospects / Audibert F.M., Lise L.D. // Immunology Today.-1993.-Vol. 14.-№6.-P.281-284.

123. Autonomous parvovirus Lu3 encapsidates equal amounts of plus minus DNA strands / Bates R. C., Snyder С. E., Banerjee P.T. et al. // J. Virol.- 1984.-Vol. 49, №2.-P. 319-324.

124. Barnett P.V. International bank for food and - mouth disease vaccine: assessment of Montanide JSA 25 and JSA 206, two commercially available oil adjuvants / Barnett P.V., Pullen L., Williams L., Doel T.R.// Vaccine.-1996.-Vol. 14.-№13.-P.1187-1198.

125. Bergmann V. Pathologie und elektroneumikroskopischer virusnachweis im Gevebe bei der Derzsyschen Krankheit (Parvovirus Infection) der Gossel / Bergmann V. // Arch, exper. Vet. Med.- 1987.-Jg.41, H.2.-S. 212-221.

126. Bernath S. Visgalator libapipek kozott 1969 ben jelentrezett megbetegedes koroktananak tisztazasara. 1. Fertozesi kiserletek / Bernath S., Szalai F. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1970.- T.25, № 10.- S.531-536.

127. Bernath S. A busa Fabric! eltavolitasanak hatasa kislibar virus olcoztra veromleses bel-es vesegyalladas ban megnyilvenullo betegsegenek korfe.lodeseben / Bernath S., Pethes G. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1971.- T.26, №7,- S.366-367.

128. Bidin Z. Protection of broiler breeders by an inactivated combined water-in-oil-in water viral vaccine / Bidin Z., Cajavec S., Sladic D. et al. // Acta Vet. Hung.-1998.-Vol. 46.-№l.-P.25-34.

129. Brown K.E. Goose parvovirus an autonomous member of the dependovirus genus? / Brown K.E., Green S.W., Young N.S. // Virology.-1995.-Vol. 210.-Р.283-291.'

130. Carter B. J. Parvovirus transcription / Carter В .J., Laughlin C.A., Marcus-Secura C.J. //Parvoviruses. -N. Y.; London, 1984.-P.153-207.

131. Carter B.J. Adeno-associated virus defectiveness and the nature of the adenovirus helper function / Carter В J., Laughlin C.A. // Parvoviruses. N. Y.; London, 1984.-P.67-128.

132. Characteristics and taxonomy of Parvoviridae / Siegl G., Bates R.C., Berns К. I. et al. // Intervirology.- 1985.- Vol.23, №2.- P.61-73.

133. Cleef S.A.M. Sen ernstige acta verlopende virusziekte bij ganzekuikens, gepaard gaande met grote sterfte / Cleef S.A.M., Van Miltenburg J. Th. // Tijdschr. diergeneeskunde.- 1966.- Bd.91, H.6.- S.372-382.

134. Coudert M. Symptomes et lesions de la maladie a virus de l'oison / Coudert M. // S'aviculture.- Rec. Med. Vet.-1973.- T.197, №12.- P.15-16.

135. Crighton G.W. A disease of goslings new to Britain / Crighton G.W., Wilkinson G.T. //Vet. Rec.- 1970.-Vol.87, №2.- P.58-59.

136. Csatari M. A libainfluenza jarvanyos elofordulasa hazankban / Csatari M. //Magyar Allatorv. Lapja.- 1965.- T.20, №4.- S.148-151.

137. Csatari M. A libainfluenza korokzoja — hak bakteriologiai jellemzoi / Csatari M., Nyiredy I. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1966.- T.21, № 4.- S. 16-18.

138. Csontos L. Etiological studies on gosling influenza. Isolation of virus / Csontos L., M-K. Csatari M. // Acta Vet. Acad. Sci. Hung.- 1967a.-T.17, №1.- P.107-113.

139. Csontos L. Experimental infections with the isolated virus / Csontos L., Csatari M-K.M. // Acta Vet. Acad. Sci. Hung.- 1967b.- T.17, № l.-P.l 15-120.

140. Csontos L. Labalc influenzajanak kozoktani vizsgalata. 1. Virusilalas. 2. Fertozesi kiserletek az izolalt virussal / Csontos L., M-K. Csatari M. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1967c.- T.22, №1.- P. 9-14.

141. Derzsy D. A viral desiease of goslings. 1. Epidemiological, clinical, pathological and aetiological studies / Derzsy D. // Acta Vet. Acad. Sci. Hung.-1967.- T. 17, № 4,- P.443-445.

142. Derzsy D. Napirenden: a libainfluenza // Derzsy D. // Magyar Nezogazdasan.- 1968.- Vol.23, №19.-P.16-17.

143. Derzsy D. Az un libainfluenza egges jarvanytani kerdesei es a vedekezes lehetosegei / Derzsy D., Meszaros J. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1969.-№10.-S.537-541.

144. Derzsy D. A viral disease of goslings / Derzsy D. // Jear book of the Vet. Med. Res. Inst. Hung. Res. Inst. Hung. Ac. of Sci. (1964-1969).-1970.-Vol.lL-P.79-88.

145. Derzsy D. A kislibak virusos betegsogei / Derzsy D. // Barom Baromfiipar.-1971.- Hg.18, №11.- S.513-520.

146. Derzsy D. A viziszarnyasok fertozo betegsegei elleni vedekezes immunologiai kerdesei / Derzsy D., Szedo M. // Magyar Allatorv. Lapja.-1973.- T.28, №8.- S. 423-430.

147. Derzsy D. Aetiologie und Bexampfung der Ganseinfluenza / Derzsy D. // Monatsch vet. med.- 1973.-Hg. 28, №24.- S. 956.

148. Derzsy D. Eine virusbedingte Erkrankung der Gansekiiken / Derzsy D. // IV. Intern. Kongress der W.V.P.A. (Beograd, 15-17 IX 1969).- S.423-428.

149. Derzsy D. Introductory Report / Derzsy D. // Goose virus work meeting (Febr. 20-22). Budapest, 1973.

150. Detection of antibodies against goose parvovirus by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) / Kwang, M.J., Tsai H.J., Lu Y.S. et al. // J. Chin. Soc. Vet. Sci.- 1987.- Vol.13, № 1.- P.17-23.

151. Detection of antibodies against goose parvovirus by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) / Kwang, M.J., Tsai H.J., Lu Y.S. et al. // Vet. Bull.- 1988.-Vol.58, №5.-P. 334.

152. Doman I. Fiatal libak ismeretlen oktanu belgyulladasa / Doman I. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1970.- T.25, №10,- S.529-531.

153. Dulbecco R. Plaque formation and isolation of pure lines with poliomyelitis viruses / Dulbecco R., Vogt M. // J. Exp. Med.- 1954.-Vol. 99, №2.-S. 167-182.

154. Dvorak B. Infekcni hepatitida housat (Derszyno choroda) diagnostica, prevence a profylaxe / Dvorak В., Dvorakova D. // Veterinarstvi.- 1980,- T.30, № 8.-S.365-366.

155. Edwards K.R. Duration of immunosupperession caused by a vaccine strain of infectious bursal disease virus / Edwards K.R., Muskett Y.C., Jhornthon D.H. //Res. Vet. Sci.-1982.-Vol. 32.-№l.-P.79-83.

156. Eine Viruskrankheit bei Gansekiiken (virushepatitis der Ganse, Ganse-hepafitis) / Fenske G., Kiihne L. Mienhart H., Wilhelm A. // Monatsch. Veter. Med.- 1975.- Bd.30, H.5.- S.192-196.

157. Electron microscopic comparison of the sequenses of single-stranded genomes of mammalian parvoviruses by heteroduplex mapping / Banerjee P. Т., Olson W. H., Allison D. P. et al. // J. Mol. Biol.- 1983.-Vol.166, №3.-P.257-272.

158. Eterradossi N. Limited antigenic variation among recent infectious bursal disease virus isolated from France."/ Eterradossi N., Rivaiian Y., Toquin D., Yuittet M. //Arch. Virol.-1997.-Vol. 142.-№10.P.2079-2087.

159. Etiologie de la maladie a virus de l'oison / Dannacher G., Coudert M., Fedida M., Peillon M., Fonillett X. // Rec. Med. Vet.- 1972.-T.148, №12.-P.1333-1349.

160. Fang D.U. Studies on the aetiology and specific control of goose parvovirus infection/Fang D. U., Wang U. K. // Sci. Agricult. sinica.- 1981.-№4.- P.l-8.

161. Feldman H.A. Sensitivity of various viruses to chloroform / Feldman H.A., Wang S.S. //Proc. Soc. Exp. Biol. a. Med.-1961.-Vol. 106.-№4.-P.736-738.

162. Gao G.P. Novel adeno-associatid viruses from rhesus monkeys as vectors for human gene therapy / Gao G.P., Alvira M.R., Wang L. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2002.-Yol. 99.-P.11854-11859.

163. Gard S. Inactivation of poliovirus by formaldehyde. Analysis of inactivation curves / Gard S. // Arch. Ges. Virus Forsch.-1957.-Vol. 7.-P.471-493.

164. Gough R.E. Isolation and Characterisation of a parvovirus from goslings / Gough R.E., Sparckman D., Collins M.S. // Vet. Rec.- 1981.-Vol. 108, №18.-P.399-400.

165. Gough R.E. Studies with a duck embryo adapted goose parvovirus vaccine / Gough R. E., Sparckman D.//Avian Pathol.- 1982.-Vol. 11, № 3.-P.503-510.

166. Gough R.E. Application of the agar gel precipitin and virus neutralisati on test to the serological study of goose parvovirus / Gough R.E. // Avian Pathol.-1984.-Vol.3. -P.501-509.

167. Gough R.E. Persistence of parvovirus antibody in geese that have survived Derzsy's disease / Gough R.E. // Avian Pathol.- 1987. Vol.16, №2,-P.327-330.

168. Hanh N.V. Fiatal libalc megbetegedese Vietnamban / Hanh N.V. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1974.- T.29, № 4.- S.262-267.

169. Hansen H. Derzsy's desease (pervavirus infection has gaes) / Hansen H. // Dansk Erhversfjerkrt.- 1979.-Vol. 8.- S.423-425.

170. Hansen H.Ch. Derzsy's disease (Parvovirusinfection has gaes) / Hansen H. Ch. // Dan. Veterinaertiedsskr.- 1980.- Bd.63, №5.- S. 191-194.

171. Hauswirth W.W. Autonomous parvovirus DNA structure and replication / Hauswirth W.W. // Parvoviruses. N. Y.; London, 1984.- P. 129-152.

172. Have P. Detection of goose Parvovirus antibodies by microneutralisation and enzyme-linked immunosorbent assay / Have P., Hansen H.C. // Proc. 7th World. Vet. Poult. Assoc.- 1981.- P.60.

173. Hoekstra J. Observations on host range and control of goose virus hepatitis / Hoekstra J., Smit Т. H., Corrie van Brakel // Av. Pathology.- 1973.- Vol.2, №3.- P.169-178.

174. Hoekstra J. Gansenvirushepatitis Vortrag / Hoekstra J., Yadin W.A. // 5. Internat. Kongr. Welt-Gefliigel-Vereinigung. Munchen.- 1973.- № 2.

175. Johnson F.B. Parvovirus proteins / Johnson F.B. // Parvoviruses. N.Y.; London, 1984.- P.259-295.

176. Kardi V. Use of ELISA procedures for the detection of Derzsy's disease virus of geese and of antibodies produced against it / Kardi V., Szegletes E. // Avian Pathologie.-1996.-№25 .-P.25-34.

177. Kisary J. Viral disease of goslings. IV. Characterization of the causal agent in tissue culture system / Kisary J., Derzsy D. // Acta Vet. Acad. Sci. Hung.-1974.- T.24, №3.- P. 287-292.

178. Kisary J. Az un libainfluenza korokotana a korokotana, korolcozo rendszertani besorolasa / Kisary J., Derzsy D., Demokos // Magyar Allatorv. Lapja.- 1975.- T. 30, №3.- S.199-201.

179. Kisary J. Az un libainfluenza elleni szikimmunitas jarvanytani je lentosege / Kisary J., Derzsy D., Horvath E. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1975.- T.30, №10.- S.721-723.

180. Kisary J. Aktiv immunizalasi kiserletek a kisliban Derzsy- fele befegsege (un libainfluenza) ellen.2. Laboratoriumi es nagyuzemi vedesi kiserletek / Kisary J., Meszaros J. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1977.- T.32, №12.-S.788-792.

181. Kisary J. Immunnological of Derzsy's, diseases in goslings / Kisary J. // Avian pathol.- 1977.- Vol. 6, №4.- P.327-334.

182. Kisary J. Indirect Immunofluorescence as a diagnostic tool for parvovirus infection of chickens / Kisary J. // Avian Pathology.-1985.-№14. P.269.

183. Kolcles R. Zur Parvovirusinfection der Gungganse (Derzy'she Krankheit) (Kurzmitteilung) / Kokles R., Kinpel A., Reckling K.H. // Mh. Vet. Med.-1985.- S.707-708.

184. Krauss H. Eine verlustreiche Aufzuchtkrankheit bei Gansekiiken (Erste Mitteilung) / Krauss H. // Berl. und Munch. Tierarztl. Wochenschrift.- 1965.-Jg.78, H.19.- S.372-375.

185. Krauss H. Aviare REO Viren / Krauss H. // Berl. und Munch, tierarztl. Wschr.- 1967.-Jg.80, H.23.- S.458-461.

186. La maladie a parvovirus de l'oison. La forme tardive Coudert M., Fedida M., Dannacher G., Peillon M. // Rec. Med. Vet.- 1974.- T. 150, № 10,-P. 899-906.

187. La maladie dite: "maladie a virus de l'oison" / Coudert M., Dannacher G., Peillon M., Sabatut R., Ferlin P. // Rec. Med. Vet.- 1972.-Vol.148, №4.-P.455-472.

188. Labie Ch. Hepato-nephrite-ascite (HNA) des Oisons histopathologie et histoimmunofluorescence / Labie Ch. // Ann. Rech. Veter.- 1972.- Vol.3, №3,-P. 483-492.

189. Liao Y.K. Detection of Derzsy's disease viral antigen by ELISA and latex agglutination / Liao Y.K., Lu Y.S. // Proceedings of the 5th Asian-Australasian Association of Animal Production Societies Congress, Taipei, ROC on Taiwan. 1990.-Vol.3.-P.208.

190. Majaniemi I. Early events in the replication of parvovirus Lu3 / Majaniemi I., Siegl G. //Arch. Virol.- 1984.-Vol.81, №3/4.-P.285-302.

191. Mandelli G. Aspetti ultrastructurali della cosiddetta «Influenza» (Miocardite infettiva) delfoca / Mandelli G., Rinaldi A., Cessi D. et al. // Affi della Soc. Italiana delle Sci. Veter.-1970.-XXIV.-S.654-656.

192. Matthews R.E.F. Classification and nomenclature of viruses / Matthews R.E.F. // Intervirology.- 1982.- Vol.17, №l/3.-P.72-75.

193. Mendelewska J. Proba analizy upadkow gesi w chowie intensywnym / Mendelewska J., Mendelewska F. // Med. Weter. -1980.- T.36, №1.- P.42-45.

194. Molitor T.W. Porcine parvovirus: virus purification and structural and antigenic properties of virion polypeptides / Molitor T.W., Joo IT.S., Collet M.S. // J. Virol.- 1983.- Vol.45, №2.-P.842-854.

195. Miiller D. E. Maturation of parvovirus Lu3 in a subcellular system.I. Optimal conditions for in vitro synthesis and encapsidation of viral DNA / Miiller D. E., Siegl G. //J. Gen. Virol.- 1983.-Vol. 64, №5.-P.1043-1054.

196. Nagy Z. A viral disease of goslings. 2. Microscopic lesions / Nagy Z., Derzsy D. // Acta Veter. Acad. Sci. Hung.- 1968.- T.18, №1,- P.3-18.

197. Osebold Y.W. Mechanisms of action by immunologic anjuvants / Osebold Y.W. //J. Amer. Vet. Med. Assoc.-1982.-V. 181.-№10.-P.983-987.

198. Peter W. Virologische Arbeiten zur Gancehepatitis / Peter W. Monatsh. Veterinarmed.- 1982.- H. 22.- S.847-849.

199. Peter W. Parvovirusinfection bei Gansen / Peter W. // Mh. Vet.-Med.-1985.-Jg.40, H.19.- S.63-68.

200. Presence of reoviruses in centain goose embryo isolates obtained from outbreaks of viral gosling disease and in chickens embryos / Derzsy D., Kisary J., Kontrimavichus L. M., Nadtochey G.A. // Acta Veter. Acad. Sci. Hung.- 1975.- T.25, №4.- S.383-391.

201. Prophylaxie de la "maladie a virus de 1'oison" / Coudert M., Dannacher G., FedidaM., Peillon//Rec. Med. Vet.-'1973. -T. 149, № 2.- S.197-208.

202. Ree H. Jnactivation of antigens for veterinary vaccines / Ree H. // Vaccine Manual. The Production and Quality Control of veterinary Vaccines for use in Developing Countries.-Rome, 1997.-P273-276.

203. Reed L.J. A simple method of estimating fifty per cent endpoints / Reed L.J., MuenchH. //Amer. J. of Hyg.-193 8.-Vol. 27.-P.493-497.

204. Resultats d'une enquete serologique effectuce en France (Vendee) chez canard a rotiz / Marius V., Bonnaud P., Gultet M. et al. // Av. Pathol.- 1983,-Vol.12, №4.- P.412-435.

205. Salt J.S. Emergecy vaccination of pigs against foot and - mouth disease: protection against disease and reduction in contact transmission / Salt J.S., Barnett P.V., Dani P., Williams L. // Vaccine.-1998.-Vol. 16.-№7.-P.746-754.

206. Samberg G. A new infections disease of goslings in Israel / Samberg G., Bock R., Perlstein Z. // Refuah Veterinarith.- 1972.- Vol.29, № 1.- P.29-33.

207. Schettler C.H. Virushepatitis bei Gansen. I. Mittellung:Untersuchungen zur Klarung der Atiologie / Schettler C.H. // Tierarztl. Umsahau.- 1971a.-Jg.26, № 2.- S.60-66.

208. Schettler C.H. Virus hepatitis of Geese II. Host Range of goose hepatitis virus / Schettler C.H. // Avian Dis.- 1971b.- Vol.15, №4.- P.809-823.

209. Schettler C.H. Gansezucht wird wieder sttraktiv / Schettler C.H. // Dt. Gefltigelwirsch.- 1971c.- Jg.23, H.3.-S.55-74.

210. Schettler C.H. Goose virus hepatitis in the Canada goose and snow goose / Schettler C.H. // J. Wildlife Desease.- 1971d.-Vol.7, №3.- P. 147-148.

211. Schettler C.H. Isolation of a highly pathogenic virus from geese wiht hepatitis / Schettler C.H. // Avian Dis.- 1971e.- Vol.15, №2.- P.323-325.

212. Schettler C.H. Nachweis der vertikalen ubertragung des virus der Ganschepatitis / Schettler C.H. // Dt. Tierarztl. wschr.- 1972.- Hg.79, № 8.-S.202-203.

213. Schettler C.H. Virus hepatitis of Geese III. Propertis of the cause agent / Schettler C.H. // Av. Pathol.- 1973,- Vol.2.- P. 179-193.

214. Siegl G. Biology and pathogeneticity of autonomous parvoviruses / Siegl G. // Parvoviruses.-N.Y.; London, 1984a.-P.297-362.

215. Siegl G. The human parvovirus / Siegl G. // Parvoviruses. -N.Y.; London, 1984b.-P.389-395.v V

216. Snoflak J. Vakcina proti chorobi / Snoflak J., Vachova H. // Veterinarstvi.-1982.- Vol.32, №1.- P. 33-35.

217. Srivastava A. Nucleotide sequence and organization of the adenoassociated virus 2 genome / Srivastava A., Lusby E.W., Berns K.I. // J. Virol.- 1983.-Vol.45, №2.-P.555-564.

218. Stone H.D. The preparation and efficacy of manually emujsified Newcastle disease oil-emulsion vaccines / Stone H.D. // Avian Dis.-1991.-Vol. 35.-P.8-16.

219. Stone H.D. Newcastle disease oil-emulsion vaccines prepared with animal, vegetable and synthetic oils / Stone H.D. // Avian Dis.-1997.-Vol. 41.-P.591-597.

220. Structure and replication of minute virus of mice DNA / Astell C. R., Thomson M., Chow M. B. et. al. // Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol.-1983.- Vol.47, №2.-P. 751-762.

221. Suveges T. Kislobak tomeges elhullasanak koroktani vizsagalata / Suveges Т., Szencsenyi I. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1970.- T.20, №10.-S.541-545.

222. Szedo M. Laboratory ad practical serotherapeutie experiments against the so called goose influeza with special reference to be the antigenic variante / Szedo M. // Report delivered at the Internat. Symposium Geese. -Budapest, 1971.

223. Szencsenyi I. Adatok az " un libainfluenza" jarvanytanahoz, es a vedekezes lehetosege / Szencsenyi I. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1967.- T.22, №11.-S.516-524.

224. Szenczenyi I. Attempts to create breeding flocks of geese free from "influenza" / Szenczenyi I. // Magyar Allatorv. Lapja.- 1971.- T.26, №11.-S.637-640.

225. Tattersall P. The parvoviruses an introduction / Tattersall P., Ward D. // Replication of mammalian parvoviruses, Cold Spring Harbor.- 1978.- P.3-12.

226. Temesi Z. Kiserletek a libainfluenza koroktanaval kapesolatban /Temesi Z. //Magyar Allatorv. Lapja.- 1966.- T.21, № 9.- S.385-388.

227. The complete DNA sequence of minute virus of mice, an autonomous parvovirus / Astell C. R., Thompson M., Merchlinsky M. et al. // Nucl. Acids Res.- 1983.-Vol. 2, №4.-P. 999-1018.

228. Viral desease of goslings III. Isolation, properties and antigenic pattern of the virus strains / Derzsy D. Dren Cs., Szedo M. et al. // Acta Veter. Acad. Sci. Hung.- 1970.-T.20, №4.- S.419-428.

229. Virusinfectionen bei Gansen-eine ubersicht / Fenske G., Kiihne L., Mienhart H., Wilhelm A. // Monatsch. Veter. Med.- 1974.- Jg.22.- S. 860-863.

230. Vuillaume A. A propos de la maladie des oisons d'apparition tardive on nephrite hemorragigue — enterite de l'oie (N.H.E.O.) / Vuillaume A., Tournut J., Banon H. // Rev. Med. Vet.- 1982.- T.133, №5.- P.341-346.

231. Wyeth P.J. Comparison of the efficacy of four inactivated infections bursal disease oil emulsion vaccines / Wyeth P.J., Chette N.J. // Vet. Rec.-1982.-Vol. 110.-P.359-361.

232. Yamanaka M. Local pathological reactions and immune response of chickens to JSA 70 and other adjuvants containing Newcastle disease virus antigen / Yamanaka M., Okabe Т., Nakai M., Esoto N. // Avian. Dis.-1993.-Vol. 37.-P.459-466.

233. Younger J.S. Monolayer tissue cultures: preparation and standardization of suspensions of trypsin-dispersed monkey kidney cells / Younger J.S. // Prac. Soc. Exp. Biol, and Med.-N.Y., 1954.-Vol.85, №2.- P.202-209.

234. Zander D.V. Principle of prophylaxis disease: diagnostics and control / Zander D.V., Bermudes E.D., Mallinson E.T. // In Calnek B.W. (eds). Diseases of Poultry, Jowa state Univ. Press, Ames, Jowa,-2003.-P.l 1-60.

235. Zalay J. Az "un libainfluenza" elofordulasa Bekes medyci termeloszovetkzetek libaallomnyaban / Zalay J. // Magyar Allatorv. Lapja.-1967.- T.22, №11.- S.525-528.

236. Zum auttreten einer virusbedingten Ekrankung bei Moschusenten / Ziedler K., Marx G., Heidrich R., Sobanski E. // Mh. Vet.-Med. 1978. - Jg.33, H.45.

Информация о работе
  • Михайлов, Александр Олегович
  • кандидата ветеринарных наук
  • Санкт-Петербург, 2010
  • ВАК 06.02.02
Диссертация
Иммунобиологические свойства инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно
Автореферат
Иммунобиологические свойства инактивированной вакцины против вирусного энтерита гусей - тема автореферата по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно автореферат диссертации
Похожие работы