Разработка средств и совершенствование методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц

Пименов, Николай Васильевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка средств и совершенствование методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц
ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Разработка средств и совершенствование методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц"

005053260

На правах рукописи

ПИМЕНОВ Николай Васильевич

Разработка средств и совершенствование методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц

03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии), 06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

11 окт ті

005053260

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина» (ФГБОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Субботин Владимир Викторович

Официальные оппоненты:

Бессарабов Борис Филиппович - доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, профессор кафедры птицеводства и болезней птиц;

Золотухин Сергей Николаевич - доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А.Столыпина», профессор кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы, заведующий лабораторией прикладной микробиологии и бактериофагии Научно-исследовательского инновационного центра микробиологии и биотехнологии;

Ирза Виктор Николаевич - доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», заведующий лабораторией эпизоотологии и мониторинга.

Ведущая организация: Государственное научное учреждение «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности».

Защита состоится « 2012 г. в /^часов на за-

седании диссертационного сов&а Д 220.042.01 при ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23; тел. (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО МГАВМиБ (109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23).

Автореферат разослан

г. и размещен на сайте

http://www.vak.ed.gov.ru.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Грязнева Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. По заключению экспертов Всемирной организации здравоохранения сальмонеллез, как зоонозная инфекция, не имеет себе равных по сложности эпизоотологии, эпидемиологии и трудностям борьбы с ним. Хозяйства, сталкиваясь с проблемой сальмонеллеза, несут большие потери из-за смертности молодняка, снижения продуктивности, качества продукции и наложения ограничительных мероприятий на выпуск продукции. Обсемененные сальмонеллами яйца и мясо птиц являются основными причинами пищевых токсикоинфекций у людей.

Требует совершенствования специфическая профилактика сальмонеллеза птиц с использованием средств активной иммунизации. Не разработана эффективная система специфических мероприятий по борьбе с саль-монеллезом в условиях непромышленного, мелкофермерского, частного птицеводства разных направлений и голубеводства.

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований являлись разработка средств и методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц, совершенствование системы противоэпизоотических мероприятий, направленных на борьбу с сальмонеллезом птиц.

Для достижения поставленной цели были определены задачи:

1. Выяснить этиологическую структуру сальмонеллеза птиц разных видов, изучить биологические свойства и антибиотикорезистентность возбудителя.

2. Определить вирулентные и иммуногенные изоляты возбудителя со свойствами производственных и контрольных штаммов, провести их депонирование.

3. Определить технологические параметры изготовления и эффективность применения инактивированной вакцины против сальмонеллеза го-

лубей.

4. Выделить и провести селекцию, изучение морфологической структуры и биологических свойств бактериофагов со свойствами производственных штаммов.

5. Сконструировать препараты бактериофагов против сальмонеллеза птиц, оценить их терапевтическую эффективность.

6. Разработать метод для лечения сальмонеллеза птиц с использованием препаратов бактериофагов и пробиотика.

7. Сконструировать и определить оптимальную иммунизирующую дозу ассоциированной вакцины против сальмонеллеза и ньюкаслской болезни птиц.

8. Разработать технологическую схему производства вакцины ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц.

9. Провести доклинические и клинические испытания предложенной вакцины с целью ее регистрации и сертификации на территории РФ.

10. Усовершенствовать систему противоэпизоотических мероприятий по борьбе с сальмонеллезом птиц разных видов путем введения в нее разработанных средств и методов лечения и профилактики болезни.

Научная новизна. Изучена современная эпизоотическая ситуация по сальмонеллезу у птиц разных видов и направлений содержания.

Впервые проведен анализ свойств большого числа изолятов возбудителей сальмонеллеза голубей и декоративных птиц. Производственные и производственно-контрольные штаммы сальмонелл, выделенные автором, депонированы в коллекции ФГУ ВГНКИ и впервые использованы для создания средств специфической профилактики. Впервые разработана и апробирована вакцина инактивированная полиэтиленгликолевая против сальмонеллеза голубей.

Выделены бактериофаги с высокими литическими свойствами, адсорбционными свойствами, специфичностью действия, изучена их морфологическая структура, антигенное родство. Производственные штаммы бактериофагов, выделенные под руководством и с участием автора, депонированы в коллекции ФГУ ВГНКИ и впервые использованы для созда-

ния лечебно-профилактических препаратов против сальмонеллеза птиц. Впервые разработан препарат Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей. Усовершенствованы лечебные средства против сальмонеллеза птиц. Впервые разработан метод селективной деконтаминации для лечения сальмонеллеза птиц с использованием предложенных препаратов бактериофагов и пробиотика лактобифадол.

Разработана и внедрена в производство и ветеринарную медицину вакцина «Виросальм» ассоциированная инактивированная против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц - новый эффективный биопрепарат, не имеющий аналогов в Российской Федерации. Изучены биологические свойства нового вируса болезни Ньюкасла, выделенного автором, обладающего свойствами производственного штамма.

Усовершенствована система лечебно-профилактических мероприятий при сальмонеллезе птиц с использованием новых средств и методов, разработанных автором или под руководством автора.

Научная новизна работы подтверждена патентами: «Вакцина инактивированная против сальмонеллеза голубей и способ ее применения», «Препарат против сальмонеллеза голубей и способ лечения сальмонеллеза голубей», «Способ лечения птиц при сальмонеллезе, вызванном Salmonella typhimurium».

Практическая значимость. По результатам исследований разработаны «Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур» и «Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей», одобренные Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации.

Вакцина «Виросальм» ассоциированная инактивированная против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц сертифицирована, зарегистрирована на территории Российской Федерации и внедрена в практику ветеринарной медицины.

профилактики сальмонеллеза. Предложенные новые средства, а также способы их применения и метод селективной деконтаминации позволяют совершенствовать борьбу с сальмонеллезом птиц.

Материалы работы включены в «Методические рекомендации по недопущению распространения гриппа птиц и болезни Ньюкасла голубей в частных подворьях, птицеводческих хозяйствах и голубятнях», утвержденные Учебно-методическим советом ФГБОУ ВПО МГАВМиБ (пр. №11 от 25.10.11).

Личный вклад соискателя. Автору принадлежат непосредственное осуществление исследований этиологического профиля сальмонеллеза птиц, выделение и изучение биологических свойств изолятов сальмонелл, определение и депонирование производственных штаммов, создание вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей, создание и внедрение вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц, создание бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц.

Автору принадлежат организация и проведение работ по выделению бактериофагов, совместно с аспирантом Чирковой И.В. изучение их биологических свойств и депонирование производственных штаммов, разработка и испытание препарата Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей.

Автор принимал непосредственное участие во всех доклинических, клинических регистрационных испытаниях новых, предложенных им, средств и методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц.

Автору принадлежат анализ и обобщение полученных результатов, концепция совершенствования системы лечебно-профилактических мероприятий против сальмонеллеза птиц с использованием новых средств и методов.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований доложены на XI Московском международном ветеринарном конгрессе (2003), Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Вклад молодых ученых в решение проблем аграрной нау-

кн» (Воронеж, 2005), на Международной школе-конференции молодых ученых «Проблемы рационального природопользования техногенного региона» (Кемерово, 2005), II Открытой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века» (Ульяновск, 2007), V Международном симпозиуме «ЕС-Россия: сотрудничество в области биотехнологии, сельского, лесного, рыбного хозяйства и пищи» (Пущино, 2008), Междунар. научно-практической конференции «Вопросы ветеринарии и биотехнологий» (Москва, 2009), VII Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (Москва, 2010), Международной научно-практической конференции «Молодость, талант, знания - ветеринарной медицине и животноводству» (Троицк, 2010), IV Международной научно-практической конференции молодых ученых «Инновационные тенденции развития Российской науки» (Красноярск, 2011), Международной научно-практической конференции «Молодежь и инновации - 2011» (Горки, Беларусь, 2011), Международной российско-чешской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии» (Москва, 2012) и других.

Результаты исследований также доложены на международных, всероссийских и академических школах молодых ученых, научно-практических семинарах, методических совещаниях факультета ветеринарной медицины и факультета повышения квалификации, кафедральном и межкафедральных заседаниях ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

Публикации. По теме диссертации и материалам исследований опубликованы 48 научных работ, в т.ч. 20 статей в научных журналах, из которых 18 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, в т.ч. 3 патента, а также 1 монография, 3 рекомендации, 24 статьи в сборниках научных трудов.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 307 листах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, сведения о практическом использовании результатов исследований, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (301 источник, в т.ч. 153 — иностранных авторов). Диссертационная работа содержит 42 таблицы, 19 рисунков, 114 листов при-

ложений.

На защиту выносятся следующие положения и результаты:

1. Этиологическая структура сальмонеллеза птиц разных видов в сравнительном аспекте.

2. Технология производства вакцины инактивированной полиэтиленг-ликолевой против сальмонеллеза голубей, ее свойства и эффективность применения.

3. Морфологическая характеристика, биологические, адсорбционные свойства и антигенное родство бактериофагов Phagum Salmonella typhi-murium.

4. Технология производства и эффективность применения Бактериофага тифимуриум против сальмонеллеза голубей и бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц.

5. Биологические свойства вируса ньюкаслской болезни «PN-T».

6. Технология производства и протективная эффективность вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц.

7. Усовершенствованная система противоэпизоотических мероприятий против сальмонеллеза птиц разных видов, включающая метод селективной деконтаминации и способы профилактики сальмонеллеза птиц с использованием разработанных препаратов бактериофагов и вакцин.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2002-2012 гг. на базе ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

Изучение эпизоотической ситуации, диагностические исследования, взятие материала и испытания препаратов проводили на голубятнях, в зоопарках и птицеводческих хозяйствах г. Москвы, Московской, Тульской, Владимирской, Калужской, Тверской областей, Краснодарского края, а также на базе ФГУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория». Выделение и изучение биологических свойств изолятов сальмонелл и бактериофагов проводили на базе МГАВМиБ, ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ ВГНКИ), НПФ «Бионит».

Электронно-микроскопические исследования проводили на базе ГУ «Научно-исследовательский институт вирусологии имени Д.И.Ивановского РАМН». Молекулярно-генетические исследования проводили на базе ФГУ ВГНКИ. Испытания разработанных препаратов проводили на базе ФГБОУ ВПО МГАВМиБ и ООО «Торговый дом БиАгро».

В работе использованы 71 музейный штамм бактерий, 4 производственных штамма и 129 полевых изолятов сальмонелл, 42 бактериофага, диагностические сыворотки, питательные среды, реактивы, лабораторная посуда и оборудование, животные: 2820 белых мышей, 9 кроликов, 5500 голубей, 15655 кур и цыплят, 103 утки, 95 гусей, 60 фазанов и другие птицы, СПФ куриные эмбрионы в количестве 3300, а также эпизоотологиче-ские, бактериологические, серологические, вирусологические, статистические методы исследований, методы молекулярной диагностики, электронной микроскопии и другие.

Бактериологическое исследование проводили согласно методическим указаниям по лабораторной диагностике сальмонеллезов животных и человека, утвержденным Департаментом ветеринарии МСХ РФ и Госком-санэпиднадзором Минздрава РФ 18.06.96. Для выделения бактериофагов использовали метод обогащения, описанный Адамсом, активность фагов определяли методами Аппельмана и Грациа, адсорбционные свойства - по Адамсу, изучение морфологии вирионов фагов проводили по методике A.C. Тихоненко, определение способности бактериофагов к образованию литического фермента проводили по методу В.А. Зуева и В.В. Желтовой в модификации Л.Б. Борисова.

Контроль препаратов на стерильность, безвредность, определение токсичности биомассы и остаточной вирулентности проводили в соответствии с ГОСТами на препараты биологические. Определение антигенной активности проводили в РТГА, РИГА и РА, иммуногенной активности -путем инфицирования тест-объектов контрольными штаммами сальмонелл в дозах 5 LD50.

Результаты исследований обрабатывали методами корреляционного, вариационного и факторного статистического анализа с использованием

пакета компьютерных программ «Biostat» и «Statistica 6,0» и анализом результатов по Ашмарину И.П. и Воробьеву A.A.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Этиологический профиль сальмонеллеза птиц

При изучении эпизоотической ситуации и этиологической структуры сальмонеллеза птиц S. typhimurium выделяли в 189 из 194 случаев сальмонеллеза у голубей в 2003 г., что составило 97,4 %, 228 (93,1 %) из 245 в 2004 г., 198 (98,5 %) из 201 в 2005 г., 111 (97,4 %) из 114 в 2006 г., 128 (99,2 %) из 129 в 2007 г. и 133 из 146 случаев в 2008 году, что составило 91,2 %. Т.о. доля сероварианта S. typhimurium в этиопатогенезе сальмонеллеза голубей за 6 лет наблюдений составила в среднем 96,1 %. Доля сероварианта S. enteritidis составила за 6 лет 28 случаев из 1029 - 2,7 %. Остальные сероварианты встречались единично и эпизоотического значения не имели.

Доля S. typhimurium от общего количества положительных исследований на сальмонеллез водоплавающих птиц составила 97,7 %. Доля других серовариантов не превышает 1 % (S. enteritidis - 0,8 % в среднем за 6 лет наблюдений). Анализ результатов исследований патологического материала от попугаев, фазанов, ворон, журавлей, страусов, индеек, перепелов и других диких, экзотических и вольерных птиц, показал также доминирующую роль S. typhimurium - 87,5 %.

Доля S. typhimurium в этиологии сальмонеллеза кур составляла 9,5 % в 2002 г.; 15,4 % в 2003 г.; 10,8 % в 2004 г.; 18,2 % в 2005 г. и 17,7 % в 2006 году. Доля S. enteritidis в этиологии сальмонеллеза кур - превалирующая (31,2%-51,2%).

Культуры сальмонелл, выделенные от птицы, обладали характерными морфологическими, тинкториапьными, культуральными, биохимическими свойствами для своего рода и сероварианта. Все изоляты обладали пато-генностью и широкой антибиотикорезистентностью. Спектр определения составлял по большинству изолятов не менее 25 антибактериальных препаратов различных фармакологических групп. Высокую или среднюю чувствительность среди 28 исследованных изолятов S. typhimurium отме-

чали только к имипенему, у половины культур - к клафорану, левомице-тину, байтрилу, фурагину. К мономицину, ципрофлоксацину, азитромици-ну, клотримазолу, доксициклину, метронидазолу, карбенициллину, коли-стину, стрептомицину, белкоспире, рифампицину, канамицину, тетрациклину, линкомицину, неомицину, эритромицину большинство выделенных изолятов сальмонелл обладали резистентностью или низкой чувствительностью.

Исследованиями на белых мышах выявили наиболее вирулентные и иммуногенные штаммы сальмонелл, что в дальнейшем подтвердили и на голубях (табл. 1).

Таблица 1. Показатели 1Л)50 и ТшБ^о производственных штаммов сальмонелл для белых мышей и голубей (к=0-1,57)

Величина LDS0 ImD50

для бел. мышей, мкр. кл. для голубей, ТЫС. мкр. кл. для белых мышей, тыс.мкр.кл. для голубей, тыс. мкр. кл.

Способ иммунизации - - подкожно в/мышечно

Способ инфицирования подкожно в/мышечно подкожно в/мышечно

Б. 1урЫтигшт М-5в 1 647 1122 12,6 7943

Б. 1урЫтигшт М-2ф 1 4074 2089 7,9 12589

Б. гурЫтипит Д-1в г 5495 2291 12,6 12589

Б. етегШсНэ 25 Яв 14125 49545 20,0 50119

Штаммы Б. 1урЫтипит М-2ф I, 5. 1урЫтипит М-5в 8. (урЫтипит Д-1в I, Б. етегШсПБ 25 Яв е были депонированы в ФГУ ВГНКИ в качестве производственных и производственно-контрольных.

Изготовление вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей, контроль вакцины

Необходимость создания эффективной инактивированной вакцины против сальмонеллеза голубей была продиктована отсутствием сертифицированного аналогового препарата в нашей стране и насущной востребованностью со стороны голубеводов и ветеринарной службы.

Операционная схема изготовления вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против салмонеллеза голубей включала следующие этапы (рис. 1):

1. Исследование свойств штаммов, контроль заявленных свойств штаммов Б. 1урЫтипит М-5в I -ДЕП, Б. 1урЫтипит Д-1в I -ДЕП, Б. еп-1егШсН8 25 Яв е -ДЕП, используемых в качестве производственных.

2. Для накопления бактериальной массы посев лиофильно высушенной культуры производственных штаммов осуществляли внесением стерильного физраствора во вскрытые ампулы и переносом в пробирки с бульоном Хотгингера. Через 24 часа инкубации при 37°С проводили пересев, а на третий день - высев во флаконы с бульоном Хотгингера в соотношении 1:10.

3. Культивирование штаммов в 6-литровых бутылях с добавлением через 4 часа 40 %-ного раствора глюкозы до 0,5 %-ной концентрации. Дальнейшее культивирование 18-24 часов с периодическим контролем чистоты роста.

4. Инактивация бульонных культур формалином из расчета 0,3 % к общему объему в течение 19-21 суток при 20°С.

6. Концентрирование и декантация антигенов в приведенных ниже оптимальных условиях.

7. Определение концентрации бактериальной массы.

8. Составление серии вакцины.

9. Фасовка вакцины.

10. Упаковка и маркировка (этикетирование) вакцины.

11. Контроль вакцины на стерильность.

12. Контроль вакцины на безвредность.

13. Контроль вакцины на активность.

Опытные образцы препарата - вакцины инактивированной против сальмонеллеза голубей готовили в нескольких вариантах. Всего было изготовлено 9 опытных серий: 3 из них (серии № 1, № 2, № 3) изготовили, используя в качестве средства концентрирования антигена 50 % полиэти-ленгликоль-6000 (ПЭГ-6000); серии № 4, № 5, № 6 с использованием геля гидрата окиси алюминия; серии № 7, № 8, № 9 были эмульгированными с использованием масляного адъюванта на основе масла «Магко1-52» и эмульгатора №134 (Франция).

Рис.1. Операционная схема изготовления вакцины инактивиро-ванной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей

Через 18-24 часов культивирования производственных штаммов определяли концентрацию биомассы и инактивировали бульонные культуры формалином, внося его до концентрации в биомассе 0,3 %. Инактивацию проводили, выдерживая бутыли в темном месте при комнатной температуре и перемешивая их содержимое ежедневно.

Осаждение бактериальных клеток проводили внесением растворов ПЭГ-6000 или геля гидрата окиси алюминия в объеме 18-20 % к объему среды. Через 72 часа проводили декантацию надосадочной жидкости в количестве 75-80 % от первоначального объема, а оставшуюся в виде осадка бактериальную массу ресуспендировали в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия до концентрации каждого штамма 6 млрд. мкр. кл. в 1 см3 в образцах № 2 и № 5, в образцах № 1 и № 4 - 3 млрд. мкр. кл., в образцах № 3 и № 6 - 9 млрд. мкр. кл.

Для получения экспериментальных образцов № 7, № 8, № 9 бактериальную суспензию центрифугировали в течение 30 минут при 4000 тыс. об./мин. Надосадочную жидкость полностью удаляли, а осадок ресуспендировали в физиологическом фосфатно-буферном растворе с pH 7,2. Бактериальную массу разводили с тем расчетом, чтобы в последующем при добавлении минерального масла в качестве эмульгатора концентрация в

готовом препарате также составила 6 млрд. мкр. кл. в 1 см3 вакцины (№ 8), 3 млрд. мкр. кл. (№ 7) и 9 млрд. мкр. кл. (№ 9).

Для проверки безвредности препарата использовали беспородных взрослых голубей, которым образцы вакцины вводили в удвоенной дозе. При этом образцы № 1-6 вводили внутримышечно, образцы масляной вакцины № 7-9 вводили подкожно.

Наблюдения показали, что после введения голубям образцов № 1-3 у птицы не было отмечено системных реакций. При индивидуальном осмотре местных негативных признаков реакции организма на введение препарата не выявлено.

Введение голубям экспериментальных образцов № 4-6 также не провоцировало каких либо системных реакций. Однако, при индивидуальном осмотре вакцинированной птицы, у отдельных голубей на месте введения вакцины выявляли болезненные уплотнения диаметром 0,8-1,6 см. Их пальпация доставляла птице четко выраженное беспокойство. В течение последующего после вакцинации месяца у таких птиц наблюдалось отсутствие стремления к полету.

Введение образцов № 7-9 голубям в двукратной дозе подкожно в области средней трети шеи было отмечено образованием быстро развивающихся асептических абсцедирующих припуханий. При этом появившееся образование быстро смещалось в область спины, голуби становились вялыми, адинамичными. У отдельных особей отмечали искривление шеи и прогрессирующее исхудание. В последующем на месте введения отмечали фиброзные образования. Таким образом, проведенные исследования показали, что оптимальным средством концентрирования антигенов для вакцины инактивированной против сальмонеллеза голубей является полиэти-ленгликоль-6000. Его использование не вызывало негативных воздействий

на организм птиц.

Для определения оптимальной концентрации бактериальной массы в одной вакцинальной дозе, способной вызвать формирование напряженного иммунитета, проводили вакцинацию голубей препаратом с разной плотностью бактерийного антигена. Были сделаны опытные образцы по-

лиэтиленгликолевой вакцины с содержанием 9х109; 7,5х109; 6х109; 4,5х109; 3x109 мкр. кл. в 1 см3.

Вакцинировали голубей беспородных массой 280-320 г внутримышечно двукратно в дозе 0,5 см3 с интервалом 30 дней. Через 18 дней после повторной вакцинации у иммунизированных голубей брали кровь, которую исследовали в ККРА с эритроцитарными антигенами. После этого птицу инфицировали внутримышечно контрольными штаммами Б. 1урЫтипиш Д-1в I в дозе 11,5 млн. мкр. кл. (5 ЬО50) и Б. е^егШсНэ 25 Яв е в дозе 247,7 млн. мкр. кл. (5 иЭ50). В качестве контрольной группы использовали 8 не-вакцинированных голубей, по 4 на каждый штамм. Результаты опыта отражены в таблице 2.

Таблица 2. Определение оптимальной концентрации микробных клеток сальмонелл в вакцинальной дозе

Заражающая культура Количество выживших голубей, гол. к количеству голубей в группе, гол.

Контроль 1 группа (9109 мкр.кл.) 2 группа (7,5-109 мкр.кл.) 3 группа (6-1О9 мкр.кл.) 4 группа (4,5-Ю9 мкр.кл.) 5 группа (3-Ю9 мкр.кл.)

Б. 1урЫтигшт Д-1В1 0/4 4/4 4/4 4/4 4/4 3/4

Б. еШегШсИэ 25 Яв е 0/4 4/4 4/4 4/4 4/4 3/4

В соответствии с данными, отраженными в таблице 2, оптимальной иммунизирующей дозой является 4,5 и 6,0 млрд. мкр. кл. в 1 см3 вакцины. Однако в течение 3-7 дней после заражения у голубей 4 группы отмечали признаки подострого заболевания: незначительное угнетение, вялость, снижение аппетита, усиленную жажду, иногда разжиженную консистенцию помета. Признаки самопроизвольно заканчивались в течение 1 недели. Т.о., в качестве иммунизирующей дозы мы определили 6,0 млрд. мкр. кл. инактивированных сальмонелл. При введении вакцины в дозе, содержащей данное количество клеток, у птиц вырабатывался иммунитет, способный предохранить от гибели 100 % голубей в лабораторных условиях.

На всех этапах работы по получению экспериментальных серий вакцины проводили проверки стерильности и безвредности препарата.

Лабораторное испытание вакцины инактивированной полиэтилен-гликолевой против сальмонеллеза голубей (контроль иммуногенности) проводили на 20 голубях, беспородных, массой 250-280 г. Голубей опытной группы прививали вакциной в дозе 0,5 см3, голубям контрольной группы вводили стерильный изотонический раствор хлорида натрия в той же дозе. Через 21 день после инъекции проводили инфицирование голубей обеих групп внутримышечно штаммом Б. 1урЫтипит М-2ф г в дозе 5 млн. мкр. кл (2,5 ЬО50). В течение 14 дней наблюдения отмечали сохранность в опытной группе - 90 % при 80 %-ной летальности в контроле.

Определение эффективности вакцины осуществляли на голубятне с поголовьем 160 птиц, в т.ч. молодняка до года - 104. В течение предшествующего исследованию года у птиц периодически отмечали случаи болезни с отказом от корма, угнетением, расстройством дефекации, появлением зеленой окраски фекальных масс. У взрослых голубей болезнь носила хронический характер, проявляясь поражением суставов ног и крыльев, у молодняка в возрасте до 3-4 месяцев - явлениями в виде дрожи, судорожных подергиваний головы, нарушения естествен-ного положения головы, опистотонуса.

Для оздоровления данной голубятни наряду с комплексом ветеринарно-санитарных мероприятий проводили вакцинацию птицы вакциной инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей двукратно с интервалом 40 дней в дозе 0,5 см3. Больных и подозрительных по заболеванию голубей лечили цефалексином в течение 10 дней согласно результатам исследований чувствительности возбудителя к антибиотикам. В качестве контроля нами были оставлены 20 взрослых голубей без вакцинации, имевших до лечения признаки, характерные для сальмонеллеза. После лечения эти голуби были помечены и оставлены в общем помещении с основным вакцинированным поголовьем. Наблюдение вели в течение 12 месяцев. Среди контрольных птиц периодически наблюдали признаки заболевания в виде угнетения, отказа от корма, появления артритов и т.д. Первые клинические явления отмечали через 4,5 месяца после начала эксперимента. При проведении бактериологического исследования фекалий и содержимого внутри-

суставных абсцессов от заболевших голубей выделяли S. typhimurium -всего от 6 птиц. При этом два голубя были вынужденно убиты. При бактериологическом исследовании из печени, селезенки, красного костного мозга выделена S. typhimurium от обоих голубей.

Среди вакцинированных птиц не было выявлено голубей с поражением суставов и другими признаками, характерными для сапьмо-неллеза. Случаев заболевания сальмонеллезом среди моло-дняка голубей также не выявили. Сальмонелл не выделяли.

Селекция и изучение биологических свойств высокоактивных бактериофагов к S. typhimurium

Для выделения бактериофагов к S. typhimurium были отобраны и исследованы по методу обогащения пробы пометных вод и фекалий из голубятен и птицеферм Московской области, Москвы, Тулы и Тульской области в общем количестве 116. Выделены 39 бактериофагов Phagum Salmonella typhimurium, 16 из которых по методу Аппельмана обладали активностью 10"8-10"'°, еще 2 бактериофага - 10 5-10"7.

Отобранные фаги обладали широким спектром действия в отношении сальмонелл специфичного сероварианта, лизируя не менее 81 % полевых изолятов и музейных штаммов S. typhimurium, а преимущественно 90-100 % культур сальмонеллы тифимуриум (15 из 18 фагов).

Высокие результаты литической активности у исследованных бактериофагов отмечены и к другим серовариантам сальмонеллы, этиопатоген-ным для птиц: к S. enteritidis лизис культур на уровне 73-93 % отмечен у 16 фагов, еще 2 бактериофага - Ph. S. typhimurium №14 ПП и №17Ф2М лизировали все 15 тестовых культур. Лизис штаммов S. gallinarum-pullorum фагами отмечен на уровне 5-6 из 7 (71-85 %), S. dublin - преимущественно 3 из 4, S. newlands — 1-2 из 3. В то же время проведенные исследования не выявили ни одного случая литической активности у исследованных изолятов фагов к бактериям других родов семейства Enterobacte-riaceae - Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Yersinia pseudotuberculesis, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis и к бактериям других семейств - Pas-teurella multocida, Bordetella bronchiseptica, Listeria monocytogenes, Streptococcus pyogenes, Staphilococcus aureus. Результаты данных исследований

констатируют специфичность литического действия отобранных фагов вариантами вида Salmonella enterica.

Выделенные бактериофаги характеризовались проявлением роста в виде негативных колоний преимущественно типа «А». При электронно-микроскопическом исследовании мы получали ультрафотографии фагов с инструментальным увеличением в 53018 раз и фотографическом увеличении - в 1,8-4,9 раз. По морфологии структурных элементов бактериофаги отнесены к семейству Siphoviridae и четвертой морфологической группе по A.C. Тихоненко.

При исследовании адсорбционных свойств фагов на депонированных штаммах сальмонелл, выявлены выраженные свойства адсорбции на клетках хозяев. При этом наибольшие показатели скорости адсорбции -(4,96±0,05)х10"9 см3мин"' и количества адсорбировавшихся фаговых частиц -91,7±0,25 %, отмечены у бактериофага Ph. S. typhimurium №8 ME, который также наиболее интенсивно формировал литический фермент.

При проведении опытов одиночного цикла развития фага Ph. S. typhimurium №5 ТЗ среднее число негативных колоний в разведении 1:40 составляло 30-32 на протяжении 22 минут, с 26 минуты отмечался выраженный рост, на 28 минуте появлялись негативные колонии в чашках, засеянных из разведения 1:100, и на 30 минуте проявляется полный лизис колоний в посевах из второго разведения (1:40). Таким образом, конец латентного периода начинает проявляться на 24-25 минутах и стабилизируется за 8 минут. Среднее число негативных колоний, полученных из разведения фага 1:100 - 132, т.е. по окончании лизиса бактерий количество фаговых частиц составило 13200 в 0,1 мл материала. Средний выход фага рассчитывали отношением количества выхода бактериофага к исходному количеству в латентный период. Для Ph. S. typhimurium №5 ТЗ он составил 426. Штаммы Ph. S. typhimurium №8 ME, Ph. S. typhimurium №9 ММ аналогично обладали выраженной интенсивностью формирования литического фермента, минимальным латентным периодом внутриклеточного развития, высокой урожайностью, периодом стабилизации лизиса 6-8 минут, скоростью адсорбции 4,0-4,96 х 10~9 см3мин"'. Полученные результаты

свидетельствует о том, что данные штаммы могут быть использованы в

качестве производственных, в связи с этим они были депонированы в коллекции ФГУ ВГНКИ.

Полученные гипериммунные сыворотки на производственные штаммы бактериофагов проявляли нейтрализующую активность в разведениях 1:51:400. Константы скорости нейтрализации фагов с гомологичными антисыворотками были 240,21-270,26 мин'1, с гетерологичными антисыворотками - 124,42-163,67 мин'1. Т.о. штаммы РИ. Б. 1урЫтипит №5 ТЗ, РЬ. Б. 1урЫтипит №8 МЕ, РЬ. Б. 1урЫшипиш №9 ММ являются родственными и обладают выраженной иммуногенностью.

Создание фагового препарата против сальмонеллеза голубей

Работа по разработке и созданию препарата выполнялась совместно с Чирковой И.В. Препарат Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей готовили, производя высев в разные емкости с предварительно нагретым до 37°С и разведенным 1:5 МПБ суспензий 6-часовой культуры 8.гурЫтигшт М-2ф I и фильтрата каждого из депонированных бактериофагов.

Культивирование фагов на молодых культурах сальмонелл проводили 18 часов, после чего осуществляли очистку культуральной жидкости от биомассы сальмонелл, остатков клеток и компонентов питательной среды. Следующим этапом осуществляли центрифугирование при 6000 об./мин. в течение 30 минут, фильтрацию через системы бактериальных фильтров Шамберленда и приготовление концентрированной суспензии бактериофагов. Контролем служили отсутствие роста при посеве суспензии бактериофагов в разведенный МПБ и рост сальмонеллы без фагов по выраженной мутности питательной среды.

В качестве консерванта приготовленной суспензии фагов применяли раствор хинозола до его конечной концентрации в фаголизате - 0,01 %. Готовый препарат формировали смешиванием консервированных суспензий бактериофагов РЬ. Б. 1урЫтигшт №5 ТЗ, РЬ. Б. 1урЫтипит №8 МЕ и РЬ. Б. 1урЫтипит №9 ММ в соотношении 1:1:1. Контроль на стерильность осуществляли высевом на МПА и в МПБ по отсутствию роста после 18-20-часовой инкубации при температуре 37°С. Контроль на активность осуществляли на белых мышах массой 14-16 г, для чего 10 мышам под-

кожно вводили S. typhimurium М-2ф t в дозе 10 тыс. мкр. кл. (5 LD5o)-Спустя 20 минут мышам подкожно вводили Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей в дозе 0,5 см3, что соответствует 104 фаговых частиц. Контрольной группе - 10 голов белых мышей, вводили только культуру сальмонеллы в аналогичной дозе. За лабораторными животными наблюдали 8-10 дней, павших мышей вскрывали, проводили бактериологический анализ.

Контроль осуществляли для каждой экспериментальной серии приготовленного препарата (всего более 24). При контроле активности сохранность белых мышей в опытных группах составляла 100 %, в контрольных группах отмечали гибель 90-100 % мышей, из патологического материала которых была выделена S. typhimurium.

Создание бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц

Для создания бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц были использованы фаги к S. enteritidis, выделенные нами при исследовании по методу обогащения 52 проб сточных вод из цехов содержания молодняка и маточного поголовья птицефабрик и депонированные ранее в ФГУ ВГНКИ в качестве производственных.

Бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц готовили по аналогичной схеме, смешивая в конечный препарат консервированные суспензии 3 фагов тифимуриум и 3 фагов энтеритидис в равных соотношениях (рис. 2).

Исследования на активность бивалентного бактериофага осуществляли на белых мышах массой 14-16 г. Для этого формировали 3 опытные и 3 контрольные группы мышей по 10 голов. В первых группах инфицирование перед фагообработкой проводили S. typhimurium М-2ф t в дозе 10 тыс. мкр. кл. (5 LD5o), во вторых - S. enteritidis 25 Яв е в дозе 70 тыс. мкр. кл. (5 LD50), в третьих - обоими штаммами в дозах по 2,5 LD50.

В опытных группах, где вслед за летальной дозой культуры возбудителя вводили бивалентный бактериофаг, сохранность составила 90-100%. При этом, по окончании периода наблюдения - 14 дней и бактериологическом исследовании всех мышей опытных групп, бактерий рода Salmonella не выделяли. В контрольных группах, инфицированных как монокульту-

рами, так и (в третьей группе) смесью штаммов обоих серовариантов, гибель мышей была максимальной, составила 90-100 %. Аналогичные исследования провели с голубями.

Рис. 2. Схема изготовления бивалентного бактериофага против сальмоиеллеза птиц

Сохранность голубей в опытных группах стабильно составляла 90-100 % при сохранности в контрольных группах без фагообработки - 0-10 %. Летальные случаи в опытных группах могли быть спровоцированы саль-монеллезными токсинами, т.к. гибель птицы отмечали в первые (2 опытная группа) и вторые (3 опытная группа) сутки после начала эксперимента, что не характеризует развитие инфекционного процесса.

Проведенные исследования бактериологическими методами материала от птицы в опытных группах спустя 14 дней после начала эксперимента не выявили культуры сальмонелл ни у павших, ни у выживших голубей, тогда как у всех птиц в контрольных группах были выделены изоляты рода Salmonella серовариантов соответственных инфицированию. Причем в третьей опытной группе, где заражение проводилось культурами двух серовариантов, в 60% была выделена S.typhimurium, не смотря на меньшее количество введенных микробов. Гибель голубей в контрольных группах проходила, начиная с 3-4 до 10-12 суток эксперимента, как правило, после развития клиники угнетения, одышки, отказа от корма, быстрой потери массы, диареи серо-зеленого цвета, потери координации движений, развития опистотонуса или нехарактерных колебательных движений головой.

Эффективность метода селективной деконтаминации для лечения сальмонеллеза птиц с использованием бактериофагов и пробиотика лактобифадол

Для эффективного оздоровления хозяйств от сальмонеллеза нами разработан метод селективной деконтаминации, основанный на санировании организма птиц разных видов с одновременным использованием препаратов бактериофагов против сальмонеллеза и пробиотика лактобифадол. Лактобифадол содержит живые микробные клетки бифидобактерий вида Bifidobacterium adolescentis и живые микробные клетки лактобактерий Lactobacillus acidophilum. Штаммы отличаются выраженными антагонистическими свойствами к патогенным бактериям, имеют выраженные адгезивные свойства, устойчивы к широкому диапазону рН, устойчивы к желчи, фенолу, повышенной концентрации хлорида натрия, имеют выраженную кислотообразующую, антагонистическую, биохимическую и ферментативную активность, образуют органические кислоты, витамины,

ферменты, повышающие продуктивность и конверсию корма у животных и птиц. Сочетание конкурентного действия на патогенную микрофлору лактобифадола со специфическим литическим действием Бактериофага тифимуриум или бивалентного бактериофага обеспечивает выраженный лечебный и профилактический эффект против сальмонеллеза птиц.

Метод селективной деконтаминации был апробирован при перораль-ном применении птице Бактериофага тифимуриум и лактобифадола.

Испытание метода в остром опыте проводили на 30 цыплятах 14-дневного возраста, для чего были созданы 3 группы по 10 голов - 2 опытные и контрольная. Птицу в группах кормили и содержали по принципу аналогов. Инфицирование цыплят проводили смесью из свежих культур штаммов 5. 1урЫтипит Д-1в I и Б. 1урЫтипит М-2ф I орально в дозе 2 млрд. мкр. кл.

После появления клинических признаков заболевания, проявлявшихся в потере аппетита, одышке, взъерошенности оперения, иногда - диарее, цыплятам первой опытной группы орально вводили Бактериофаг тифимуриум из расчета 0,5 см3, что соответствует 104-105 фаговых частиц, индивидуально при помощи автоматической пипетки-дозатора. Обработку проводили трижды с интервалом 12 часов, а затем еще дважды с интервалом 48 часов. За три часа до выпойки препарата цыплят выдерживали без поения. Лактобифадол вводили в корм из расчета 1,0 г на всех цыплят опытной группы ежедневно в течение 10 дней в виде формы препарата на отрубях. Цыплятам второй опытной группы использовали метод лечения с применением энрофлоксацина - энрофлон 10 %-ный раствор в дозе 0,5 см3 на 1 л воды 5 дней согласно «Наставлению по применению энрофлона 10 % раствора для орального применения», утвержденному Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 14.07.98 г. Цыплят контрольной группы препаратами не обрабатывали.

За птицей наблюдали 15 дней, после чего проводили убой. Исследования показали, что в контрольной группе цыплят летальность составила 90%. Павшие цыплята имели характерные патологоанатомические изменения. При бактериологическом исследовании у всех 10 цыплят контрольной группы была выделена Б. 1урЫтипит (табл. 3).

Таблица 3. Эффективность применения Бактериофага тифимуриум и лактобифадола в лабораторных условиях

Группа Кол-во гол. Пало, гол. Сохранность, % Кол-во цыплят, из которых выделена культура Б. 1урЫтипит

голов %

Опытная 1 (Бактериофаг тифимуриум + лактобифадол) 10 0 100 0 0

Опытная 2 (энрофлоксацин) 10 3 70 2 20

Контрольная 10 9 10 10 100

Испытание метода селективной деконтаминации в «полевых» условиях проводили на неблагополучных по сальмонеллезу голубятнях Подольского и Домодедовского районов Московской области. Диагноз был подтвержден бактериологически - выделена культура S. typhimurium, и методом молекулярной диагностики - положительные результаты ПЦР с пометом и смывами из клоаки у клинически больных и здоровых птиц.

В голубятне Домодедово отмечали полную заболеваемость среди молодняка 2-3-месячного возраста, полученного от основных самок. Общая заболеваемость по птицепоголовью голубятни составила 80 % (120 из 150 голубей). Летальность составила 65 % (пали 78 из 120 заболевших голубей). До начала терапевтических мероприятий методом селективной деконтаминации владельцем голубятни принимались попытки по лечению птицы в виде выпоек энрофлона и бактисубтила, что ослабило развитие эпизоотического процесса, но не остановило инфекцию и появление новых случаев болезни.

Выпойку Бактериофага тифимуриум в неблагополучной голубятне проводили согласно разработанной и использованной в лабораторном эксперименте схеме. Лактобифадол в виде мучной формы давали с кормом из расчета 0,4 г на 1 кг массы птицы в течение первых 10 дней лечения, далее - в дозе 0,2 г на 1 кг массы птицы еще в течение 20 суток.

Случаи гибели птицы прекратились со вторых суток применения предложенного способа лечения. В течение 4 суток состояние птицы нормализовалось. При бакисследованиях смывов из клоаки от 50 голубей через 30 дней бактерий рода Salmonella не выявляли.

В двух голубятнях Подольского района на поголовье в 175 голубей пород пермские, свердловские, гривуны и синие выявили заболеваемость 14,3 %. Ежедневный отход составлял до 3 голубей (1,7 %). При этом вспышка была отмечена на фоне применения владельцем байтрила. С третьих суток после начала лечения Бактериофагом тифимуриум против сальмонеллеза голубей и лактобифадолом состояние больных голубей стабилизировалось, появилась активность, восстановился аппетит, дефе-кациия нормализовалась. Через 14 дней при исследовании 47 проб (27,3 %) фекалий от голубей бактерий рода Salmonella не выделяли. Через 30 дней после проведения терапевтических мероприятий в ПЦР с 20 пробами материала от излеченных голубей и со сборными пробами помета положительных результатов на сальмонеллез не регистрировали.

Пример терапевтической эффективности применения Бактериофага тифимуриум и пробиотика лактобифадол отмечали на птице разных видов вольерного содержания передвижного частного зоопарка «Ташир». У фазанов 4-5-месячного возраста проявлялся жидкий помет зеленого цвета, птицы отставали в росте и развитии. Взрослая птица имела матовое взъерошенное оперение. Из 28 фазанов разных пород у 6 (21 %) отмечали картину острого заболевания - повышение температуры тела до 43,0 °С, угнетение, снижение аппетита, взъерошенность оперения, одышку, диарею. 2 фазана 3-месячного возраста пали. В 25-40-дневном возрасте среди утят отмечали развитие угнетения, анорексию, диарею серо-желтого цвета с примесью крови. Летальность молодняка составила 62,5 %. Из патологического материала выделена S. typhimurium.

Выпойку Бактериофага тифимуриум против сальмонеллеза осуществляли групповым способом всей птице зоопарка «Ташир» из расчета: перепелам - по 0,5 см3 препарата, фазанам, уткам - по 1,0 cmj, селезням, павлинам - по 3,0 см3, гусям и лебедям - по 5,0 см3 трижды с интервалом 12 часов, затем четвертую и пятую выпойки - через 48 часов. Препарат растворяли в воде из расчета 1:20. Лактобифадол давали ежедневно всей птице в формах, сорбированных на муке и на отрубях, по схеме.

Констатировали улучшение состояния птицы на 3 сутки, температура тела стабилизировалась в пределах физиологических норм, восстановился

аппетит, помет оформился и приобрел характерную серо-коричневую окраску. Заболеваемость и гибель птицы больше не отмечали в течение 5-месячного периода наблюдения.

Создание вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивирован-ной против сальмонеллеза и ньюкаслской болезни птиц

Создание ассоциированной инактивированной вакцины против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц обосновано удобством применения и контроля иммунизации, возможностью точного дозирования, что является основополагающим фактором при профилактической противоэпизоотиче-ской работе с малыми поголовьями и ценной птицей. Такая вакцина обеспечивает напряженный иммунитет на длительный период против двух основных инфекционных болезней птиц, протекающих нередко совместно, снижение трудоемкости и повышение экономической эффективности ветеринарных мероприятий, снижение вероятности поствакцинальных осложнений, реактогенности и развития суперинфекции при иммунизации по инфицированному фону. При применении инактивированной вакцины исключается циркуляция живых вакцинных штаммов, провоцирующих положительные результаты контрольных, надзорных и мониторинговых исследований с наложением ограничений на хозяйство (ферму, вольер), а также провоцирующих снижение воспроизводительных качеств декоративных птиц.

Схема технологического процесса производства вакцины ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц представлена на рисунке 3. Производственный процесс включал следующие этапы:

1. Приготовление питательной среды для культивирования штаммов сальмонелл - бульона Хоттингера или триптон-соевого бульона.

2. Приготовление посевного материала. Производственные штаммы высевали в МПБ, а через 2-3 часа пересевали во флаконы с бульоном Хоттингера или триптон-соевым бульоном. Затем проводили посевы второй и третьей генерации до получения максимальной концентрации сальмонелл. Одновременно делали контрольные посевы на МПБ, МПА, МППБ под вазелиновым маслом, среду Сабуро.

3. Инактивация микробных клеток сальмонелл. Полученную в результате культивирования бактериальную массу сальмонелл перекачивали в стерильные ёмкости разного объема, добавляли 0,3 % формалина (с содержанием формальдегида не менее 37 %) по объёму и тщательно перемешивали. Инактивацию бактериальной массы проводили в течение 21 дня при температуре 20-22°С с ежедневным перемешиванием. Контроль полноты инактивации проверяли путем посевов бактериальной массы на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро, а также путем инокуляции полученной взвеси белым мышам подкожно в объеме 0,5 см3. Белые мыши при этом оставались живыми и клинически здоровыми в течение 10 суток наблюдения. При выявлении нарушений стерильности объем полученного антигена забраковывали.

4. Концентрирование, очистку и стандартизацию сальмонеллезных антигенов проводили путем осаждения микробных клеток 50 %-ным раствором ПЭГ-6000 в течение 48-72 часов и декантирования надосадочной жидкости, удаляя 80-85 % объёма. В полученной массе устанавливали концентрацию микробных клеток (для каждого штамма отдельно) и разводили стерильным фосфатно-буферным раствором до конечной концентрации 6x109 мкр. кл. в 1,0 см3.

5. Исследование токсичности биомассы. Для этого бактериальную суспензию сальмонелл, осажденную полиэтиленгликолем, ресуспендиро-вали до концентрации 12х109 мкр. кл. в 1 см3 0,85 %-ного раствора хлорида натрия. Токсичность инактивированной бактериальной массы определяли на 30 белых мышах массой 16-18 г в трех группах путем подкожной инъекции суспензии в объеме 0,5 см3 с концентрацией Зх109мкр. кл./см3, 6х109мкр. кл./см3, 12х109мкр. кл./см3. Также токсичность определяли на 10 голубях 3-4-месячного возраста породы тульские синие массой 160-180 г путем подкожной инъекции суспензии в аналогичных концентрациях. Все мыши и голуби оставались живы и клинически здоровы в течение 10 дней наблюдения.

Приготовление питательной среды

Є з

N Ч

_ _

Д=А

т Сч ш

Культивирование штаммов, накопление бактериальной массы

Инактивация микробных клеток

Исследование токсичности биомассы

вМН __

Штамм

вируса

ньюкасл

касл-

скои

болезни

«Н» или

«РК-Т»

Культивирование вируса на куриных эмбрионах

Сбор ви-руссо-держащего материала, исследование титра вируса

Концентрирование, очистка и стандартизация сальмонеллезных антигенов

Инактивирование суспензии вируса

і # ШсШ

аашелчв» вдагэтж ¡яли?

Ї.1 МСХв бм^ИИУі»*.:

кгйШлпи'Я ;

'ЧИ ар

^ИЕ^ієіі'КІЕТ«^

эгикети-рование

Контроль качества готового препарата

Контроль ге-магглютинирую-щей активности

фасовка

Изготовление

серии

вакцины

«дам«;

Рис.4. Технологическая схема производства вакцины «Виросальм»

6. Получение вируссодержащей эмбриональной жидкости. Для изготовления опытных образцов вакцины использовали штамм вируса нью-каслской болезни «Н» или его аналог - авторский штамм, названный «PN-Т». Вирус болезни Ньюкасла (голубиный вариант) PN-T выделен нами из трупа голубя в 2003 году, активен в РН, РТГА, патогенен для СПФ куриных эмбрионов, реактогенен для цыплят моложе 2-х месяцев. В качестве оптимальной защитной среды для вируса PN-T нами экспериментально определено обезжиренное молоко, сохраняющее титр после сушки инфекционное™ вируса 7 ЭЛД50/ см3 и титр в РГА 6,0 log2.

При сравнении нуклеотидных последовательностей в области F0 гена и сопоставлении аминокислотных последовательностей фрагмента F0 предшественника выявлено, что штамм PN-T имеет сайт, характерный для вирулентных штаммов 112-RRQKRF-117. Уровень гомологии проанализированного нуклеотидного фрагмента штамма PN-T с аналогичными областями производственных вакцинных штаммов вируса ньюкаслской болезни колеблется от 80 % до 87 %, что является показателем высокой степени отличий авторского штамма PN-T.

Для получения вируссодержащего материала в аллантоисную полость заражали 9-10-тисуточные куриные эмбрионы, которые затем помещали в термостат с температурой 37,0±0,5°С и относительной влажностью 60-70 % на 47-48 часов. Овоскопирование проводили 2 раза в сутки. Эмбрионы, павшие в течение 24 часов, утилизировали.

Перед сбором вируссодержащего материала эмбрионы охлаждали при температуре 4-6°С в течение 12 часов. Экстраэмбриональную вируссо-держащую жидкость собирали во флаконы в стерильных условиях. Исследовали титр вируса. Для дальнейшей работы и инактивации допускали вируссодержащий материал с исходным титром в пределах от 8,5 log2 до 9,0 log2 вируса «Н» и от 7,5 до 9,0 log2 вируса «PN-Т».

Из полученного вируссодержащего материала отбирали пробы для проведения контролей, а оставшуюся часть инактивировапи путем добавления в нее 0,1 %-ного раствора формалина с содержанием активного формальдегида не менее 37 %. Контроль на наличие контаминации проводили посевами на МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом, тиоглико-

левую среду, среду Эдвардса, среду Сабуро. Параллельно проводили проверку гемагглютинирующей активности экстраэмбриональной жидкости. Для изготовления вакцины допускали вируссодержащий материал с ге-магглютинирующим титром не ниже 6,0 1о§2.

7. Контроль качества готового препарата осуществляли исследованиями стерильности, безвредности, антигенности и иммуногенности.

8. Изготовление серии вакцины. Для изготовления серии вакцины проводили объединение суспензии сальмонелл (при концентрации 6x109 мкр. кл. и соотношении штаммов 1:1:1) и вируссодержащей эмбриональной жидкости до получения в готовом препарате 90 % суспензии бактериальных клеток и 10 % эмбриональной жидкости по объему.

9. Фасовка. Полученную серию вакцины расфасовывали в стерильных условиях на базе биопредприятия ООО «Торговый дом «БиАгро» в стерильные стеклянные флаконы по 10,0 и 20,0 см3 (20 и 40 доз соответственно) по ТУ 9467-003-05749470-94 или в ампулы соответствующей вместимости. При регистрации в ФГУ ВГНКИ вакцине определено название «Вакцина «Виросальм» ассоциированная инактивированная против саль-монеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц».

Исследования по безопасности рекомендуемой прививочной дозы, при передозировке и повторном введении вакцины проводили при подкожном введении препарата 10-и белым мышам весом 18-20 г в объёме 0,3 см , 0,5 см3 по 5 голов на каждую дозу, взрослым беспородным голубям массой 250-350 г, 3-4-месячным голубям породы синий массой 120-150 г путем внутримышечного введения вакцины в объеме 0,5 см3; 1,0 см3; 2,0 см . Использовали по 5 голубей в каждой группе. Учет результатов проводили на 1, 2, 10 сутки. Все лабораторные объекты оставались живы и здоровы. При убое в месте инъекции вакцины не отмечали никаких морфологических изменений. Исследования подтвердили безвредность вакцины и при повторном введении в рекомендуемой и удвоенной дозах.

Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины «Виросальм»

Для изучения антигенных и иммуногенных свойств вакцины «Виросальм» формировали по принципу аналогов 2 группы голубей, беспород-

ных, 3-8-месячного возраста, массой 220-350 г. Опытной группе (10 голов) вводили внутримышечно вакцину «Виросальм» в рекомендованной дозе с последующей ревакцинацией через 30 дней. Контрольной группе (5 голубей) инъецировали стерильный физиологический раствор. До инъекции и на 14, 30, 60, 90, 150, 210, 270 сутки после повторного введения у голубей из подкрыльцовой вены брали кровь для серологических исследований.

Исследования в РТГА к вирусу ньюкаслской болезни показали, что средний титр антител в опытной группе составил на 14 сутки - 6,4±0,22 log2, 30 сутки - 6,5±0,17 log2, 60 сутки - 5,8±0,20 log2, 90 сутки - 5,5±0,27 log2, 150 сутки - 4,3±0,15 log2, 210 сутки - 3,5±0,17 log2, 270 сутки -2,6±0,31 log2. В контрольной группе титры были нулевыми весь период наблюдения. Данные исследования были проведены на птице других видов и подтвердили выраженные антигенные свойства вакцины «Виросальм». Максимальные титры отмечали у перепелов и цыплят, в течение всего периода наблюдения они превышали 5 log2. Уровень антигенной напряженности у остальных птиц плавно снижался от 7-9 log2 в первый месяц после вакцинации до 2-5 log2 к одиннадцатому месяцу.

Антигенную активность вакцины «Виросальм» по сальмонеллезным компонентам оценивали при постановке РА. Положительной оценкой считали наличие титра антител не менее чем на два креста. На 14, 30, 60, 90, 150, 210 и 270 сутки после повторного введения вакцины у голубей опытной группы отмечали положительные результаты в РА с антигенами S. typhimurium и S. enteritidis, оцененные на I и I и +++. В сыворотке крови голубей контрольной группы при аналогичных исследованиях отмечали отрицательные и сомнительные результаты в РА.

При определении иммуногенной активности вакцину в дозе 0,5 см3 вводили 20 интактным голубям опытных групп внутримышечно двукратно с интервалом 35 дней. В качестве контрольных использовали 10 невак-цинированных голубей, которым вводили стерильный физраствор в той же дозе и содержали в аналогичных опытной группе условиях. Через 1214 суток после повторной иммунизации голубей инфицировали контроль-но-производственны-ми штаммами в дозах 5 LD50. В опытных группах получена сохранность 90-100 % при полной гибели птицы в контрольных

группах. При бактериологическом исследовании из патматериала от трупов голубей были выделены в соответствующих группах культуры S. ty-phimurium и S. enteritidis. Опыт был проведен в аналоговых условиях еще дважды, полученные результаты были аналогичными, что свидетельствует о высоких иммуногенных свойствах вакцины «Виросальм».

При использовании вакцины «Виросальм», хранившейся согласно инструкции по применению при 4°С в течение 6, 12, 18, 24 месяцев, не выявлено достоверных изменений значений антигенных и иммуногенных свойств, что характеризует стабильность вакцины при хранении.

Эффективность применения вакцины «Виросальм» в производственных условиях

В КФХ «Барбасов» Наро-Фоминского района Московской области вакцинации подвергли 76 голубей породы типлеры разных возрастных групп, 52 молодки и курицы кросса Ломан-браун, 23 утки породы пекинские, гусей породы горьковские и индеек породы белые широкогрудые (легкий кросс). Вакцину «Виросальм» вводили дважды с интервалом 28 дней по одной вакцинной дозе 0,5 см3 голубям, курам и уткам, 43 гусятам в возрасте 3-4 мес., 19 индюшатам в возрасте 62 дней; по 1,0 см3 взрослой птице массой более 4 кг - 14 гусям и 7 индейкам. Наблюдение за птицей вели в течение 8 месяцев, фиксировали случаи заболеваемости. Перед применением вакцины и на 30, 100, 150 и 200-е сутки после повторной вакцинации у голубей и кур (по 4 пробы) исследовали кровь в РТГА, определяли титры антител к вирусу ньюкаслской болезни и к парамиксови-русу типа 2. Результаты исследований приведены в таблице 4.

Таблица 4. Антигенная активность вакцины «Виросальм» к вирусу ньюкаслской болезни в условиях КФХ «Барбасов»

Вид птицы Средние титры антител в РТГА к вирусу болезни Ньюкасла в период исследований,

До вакцинации 30 сутки 100 сутки 150 сутки 200 сутки

Куры 0 9,00±0,41 8,75±0,25 7,75±0,25 7,00±0,41

Голуби 0 5,75±0,63 5,25±0,25 5,25±0,25 4,00±0,41

Как видно из таблицы 4, титры антител к вирусу болезни Ньюкасла в период исследований находились на высоком уровне. Титры антител к па-рамиксовирусу типа 2 не менялись и оставались в пределах 0-2 log2.

До вакцинации у птицы КФК «Барбасов» отмечали отход молодняка с признаками расстройства пищеварения, «вертячки» у голубей, одышки, угнетения. После вакцинации в период наблюдения 8 месяцев не отмечено ни одного случая заболевания кур, голубей, уток, гусей и индеек ньюкасл-ской болезнью и сальмонеллезом, в т.ч. - у полученного в период наблюдения молодняка.

Сохранность птиц составила: цыплят и кур - 100 % (к 93,4 % в период предыдущих 9 месяцев), голубей - 100 % (к 61,8 %), уток - 100 % (к 96,6 %), гусей - 98,2 % (1 случай гибели гусенка по причинам травматического характера) к 81,6 % в аналогичный период, индеек 100 %. Контрольные исследования на сальмонеллез со сборными пробами помета на 30, 100, 150 и 200 сутки после повторной вакцинации в ПЦР и бактериологическими методами были отрицательными.

В условиях ОАО «Птицефабрика «Тульская» вакцину применяли на группе 15500 цыплят кросса Ломан-браун 20-суточного возраста внутримышечно дважды с интервалом 30 дней в дозе 0,5 см3. Предварительно у 40 произвольно выбранных цыплят из группы были отобраны пробы крови для получения сыворотки и исследования на наличие остаточных антител к вирусу болезни Ньюкасла. Цыплят с титрами антител 2 и более log2 до вакцинации из группы исследуемых исключали. 10 цыплят были сформированы в качестве контрольной группы, их не вакцинировали. Сыворотку крови исследовали в РНГА на наличие антител к вирусу ньюкасл-ской болезни на 14, 30, 60 и 100-е сутки после проведения вакцинации. Результаты исследований представлены в таблице 5.

Титры цыплят контрольной группы, содержавшихся совместно со всей птицей, показывают, что в цехе отсутствует циркуляция вируса болезни Ньюкасла и рост титров антител в опытной группе не спровоцирован эпизоотическим процессом. При применении вакцины «Виросальм» в производственных условиях птицефабрики не отмечали признаков реактогенно-сти, любого рода изменений физиологического статуса птицы и местных

морфологических изменений в области инъекции препарата.

Таблица 5. Антигенная активность вакцины «Виросальм» к вирусу ньюкаслской болезни в условиях ОАО «Птицефабрика «Тульская»

Группа Средние титры антител в РИГА к вирусу болезни Ньюкасла в период исследований, 1о£2

До вакцинации 14 сутки 30 сутки 60 сутки 100 сутки

Опытная, 30 цыплят 0,57±0,15 8,07±0,13 8,00±0,11 7,17±0,14 6,70±0,14

Контрольная, 10 цыплят 0,50±0,22 0,30±0,21 0,30±0,21 0,20±0,20 0,20±0,13

Под контролем специалистов СББЖ ЗАО г. Москвы были проведены испытания вакцины «Виросальм» в условиях неблагополучных голубятен. Вакцину вводили клинически здоровым голубям в дозе 0,5 см3 двукратно с интервалом 28 дней. Исследования титров антител проводили через 14, 60, 90, 150 и 210 дней после повторной вакцинации (по 10 проб сыворотки крови голубей). Динамика изменений титров антител к S. enteritidis и S. typhimurium представлена в таблице 6.

Таблица 6. Антигенная активность вакцины «Виросальм» к Я. іурЬішигіит и в. епіегШіІів в условиях голубятен ЗАО г. Москвы

Номер группы. Голубятня До вак цин а- ции Дней после вакцинации

14 60 90 150 21 0

S.t. S.e. S.t. S.e. S.t. S.e. S.t. S.e. S.t. S.e.

1. Средний титр на голубятне по ул. Пивченкова, 0 7,17 ± 0,17 7,00 ±0 7,00 ±0 6,83 ± 0,17 6,67 ± 0,21 6,83 ± 0,17 6,33 ± 0,21 6,17 ± 0,17 5,83 ± 0,17 5,83 ± 0,17

2. Средний титр на голубятне по ул. Б. Фонченко, 10§2 0 7,40 ± 0,16 7,30 ± 0,15 7,10 ± 0,18 6,80 ± 0,13 6,80 ± 0,13 6,50 ± 0,17 6,30 ± 0,15 6,20 ± 0,13 5,90 ± 0,10 5,80 ± 0,13

Условные обозначения: S.t. - Salmonella typhimurium, S.e. - Salmonella enteritidis

В течении 10 месяцев наблюдения заболеваемости и гибели голубей не отмечали. По окончании срока наблюдения 6 вакцинированных и 6 невак-цинированных голубей контрольной группы инфицировали штаммом Б. гурЫтипшп М-5в I в дозе 4 млн. мкр. кл. (2,5 ЬО50). В течение последующих 10 дней в опытной группе пал 1 голубь с клинической картиной энтероколита. 5 голубей опытной группы не заболели, сохранность составила 83,3 %. В контрольной группе, напротив, - заболели и пали 5 голубей, сохранность составила 16,7 %.

В условиях индивидуальных подсобных хозяйств и частных подворий деревни Мошок Гусевского района Владимирской области были провак-цинированы 24 индоутки, 44 утки, 22 гуся, 19 цесарок, 36 индеек в возрасте 25-35 дней. Отмечены безвредность, ареактогенность вакцины «Виро-сальм» при применении, высокие антигенные свойства (табл. 7).

Таблица 7. Титры антител в РТГА к вирусу ньюкаслской болезни при применении вакцины «Виросальм» в условиях индивидуальных подсобных хозяйств и частных подворий

Вид птицы, кол-во проб Титры антител до вакцинации, 10§2 Средние титры антител в РТГА на день исследования после вакцинации, 1о§2

30 90 180 330

Индоутки, 24 0,13± 0,09 7,04±0,16 7,58±0,17 7,25±0,14 6,08±0,13

Утки, 44 0,07± 0,04 6,98±0,09 6,77±0,14 6,05±0,15 4,71 ±0,16

Гуси, 22 0±0,0 6,90±0,13 5,82±0,22 5,32±0,23 4,27±0,24

Цесарки, 19 0±0,0 6,63±0,11 6,74±0,23 6,47±0,26 6,05±0,18

Индейки, 36 0,28± 0,12 6,94±0,11 7,97±0,12 7,39±0,16 6,41 ±0,13

Применение вакцины «Виросальм» вызывало образование защитных антител на уровне, достаточном для предотвращения возникновения инфекции. До иммунизации у невакцинированных птиц в РТГА титр антител против болезни Ньюкасла и сальмонеллеза был на уровне менее 1 после вакцинации уровень антител вырос в несколько раз и в среднем по

поголовью колебался в диапазоне от 6 до 7 Индекс нейтрализации у

птиц, участвовавших в эксперименте, до вакцинации составил 0,2-0,42, после ревакцинации - 4,4-7,2. Уровень антител был стабильно высоким через 3 и 6 мес. после применения вакцины «Виросальм».

Схема лечебно-профилактических мероприятий, направленных против сальмонеллеза птиц

Согласно представленным данным комплекс эффективных мероприятий по профилактике сальмонеллеза птиц был дополнен специфической иммунизацией вакциной «Виросальм» инактивированной ассоциированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц. Осуществление вакцинации необходимо проводить по санированному фону, для чего рекомендуется применение бактериофага против сальмонеллеза (бивалентного или моновалентного в зависимости от вида птиц и эпизоотической ситуации в районе).

Апробированная схема специфической профилактики сальмонеллеза голубей, а также водоплавающих птиц, где доминирующим возбудителем является серовариант Б. 1урЫгтшпит, состоит из выпойки Бактериофага тифимуриум против сальмонеллеза голубей в дозе 0,5 см3 двукратно с интервалом 72 часа и последующей иммунизацией вакциной инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей или вакциной «Виросальм» двукратно с интервалом 28-30 дней внутримышечно в дозе 0,5 см3.

Схема специфической профилактики сальмонеллеза кур и других птиц (индеек, индоуток, фазанов, перепелов, страусов, попугаев и т.д.) в условиях частных подворий, мелких ферм, вольеров, зоопарков, квартирно-клеточного содержания включает выпойку бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц двукратно в дозе 0,5 см3 с интервалом 72 часа и последующей двукратной иммунизацией вакциной «Виросальм» с 20-дневного возраста с интервалом 28-30 дней.

Предложенная комплексная схема лечения и профилактики сальмонеллеза птиц успешно апробирована в условиях зоопарка ООО «Парк живой природы «До-До» Анапского района Краснодарского края, где была зафиксирована заболеваемость сальмонеллезом водоплавающих и фазаньих птиц. Болезнь отмечали в острой клинической форме у 2 фазанов охот-

ничьих (Phasianus venaticus) трехмесячного возраста, у уток-мандаринок (Aix galericulata), пеганок (Tadorna tadorna) и каролинок (Aix sponsa) - всего 24 голов. 2 утенка 44-дневного возраста и 1 фазан 27-дневного возраста пали. При патологоанатомическом вскрытии выявлена картина катараль-но-геморрагического энтероколита, дистрофии печени с очагами некроза, зернистой дистрофии селезенки и почек, острой застойной гиперемии и отека легких, инъекции сосудов в головном мозге и отека мозговых оболочек. При лабораторной диагностике выделена S. typhimurium. Кроме того, из помета журавлей-красавок (Anthropoides virgo) была выделена S. enteritidis.

Для борьбы с сальмонеллезной инфекцией были организованы и проведены общие санитарные мероприятия: дезинфекция вольеров, кормушек, предметов ухода и смотровых зон 1 %-ным раствором виркона. Для лечения и профилактики сальмонеллеза применен метод селективной де-контаминации с использованием бивалентного бактериофага и пробиотика лактобифадола. Препараты использовали всем птицам зоопарка: больным и клинически здоровым.

Проведенные мероприятия оказали выраженный терапевтический эффект. Заболеваемость птицы прекратилась уже после первичной выпойки бактериофага. Выздоровление больной птицы отмечали в течение 6-8 суток. Через 20 дней после проведения лечения были взяты контрольные анализы, культуры рода Salmonella из помета и смывов не выделяли. Спустя 3 недели была осуществлена иммунизация клинически здоровых птиц вакциной «Виросальм» внутримышечно: уток-мандаринок - 7 голов, уток-каролинок - 4, пеганок - 2 головы в дозе по 0,5 см3; аистов белых (Ciconia ciconia) - 2 гол., журавлей: стерхов (Grus leucogeranus) - 2, серого (G. grus) - 1, японского (G. japonensis) - 1, красавок (Anthropoides virgo) -3, черношейных (G. nigricollis) - 2; пеликанов розовых (Pelecanus onocrota-lus) - 2 гол., больших гокко (кракс, Pauxi rubra) - 2 в дозе 1,0 см3; фазанов: серебряных (Phasianus nycthemera) - 2, кавказских (Р. colchicus) - 4, желто-золотых (Р. flavus) - 5 голов в дозе 0,5 см3; майн: обыкновенных (Acridotheres tristis) - 2, священных (Gracula religiosa) - 5; розовых скорцов

(Sturnus roseus) - 4; турако: перса (Tauraco persa) - 2, фиолетовочубых (Т.

porphyreolophus) - 2 в дозе 0,5 см3; попугаев: зеленокрылых apa (Ara chloroptera) - 4, сине-желтых apa (A. ararauna) - 4, венесуэльских амазонов (Amazona amazónica) - 2, веерных (Deroptyus accipitrinus) - 5, бразильских черноухих (Pionus menstruus) - 2 голов в дозе 0,5 см3; африканских страусов (Struthio camelus) - 3 в дозе 5,0 см3; кур (Gallus gallus) декоративных: шамо - 17, сибрайт - 7, китайских шелковых - 12, орпингтон - 11 голов в дозе 0,5 см3. Повторную вакцинацию проводили согласно временному наставлению через 30 дней. Ревакцинации проводили каждые 11 мес. Полученных птенцов вакцинировали с 20-дневного возраста по аналогичной схеме в половинных дозах. Перед вакцинациями птице групповым способом выпаивали бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц дважды с интервалом 72 часа и задавали с кормом лактобифадол 10 дней.

Случаев заболеваемости и падежа птицы в зоопарке ООО «Парк живой природы «До-До» с начала наблюдения и в течение 3 лет не отмечали. При контрольных исследованиях на сальмонеллез и сальмонеллоноси-тельство, проводимых ежеквартально бактериологическими методами и в ПЦР с пометом птицы разных видов из всех вольеров, положительных результатов не отмечали, культуры сальмонелл не выделяли.

ВЫВОДЫ

1. Для лечения и профилактики сальмонеллеза птиц научно обоснованы и клинически подтверждены метод селективной деконтамина-ции и последующая вакцинация, эффективность которых доказана полным оздоровлением неблагополучных по сальмонеллезу пунктов с формированием у птиц стойкого иммунитета.

2. Преобладающим этиотропным серовариантом возбудителя сальмонеллеза (87,5-97,7 %) у голубей, уток, мускусных уток, гусей, фазанов, перепелов, декоративных птиц является Salmonella typhimurium. Роль S. typhimurium в возникновении сальмонеллеза кур является основной после S. enteritidis и S. gallinarum-pullorum. Выделенные изоляты сальмонелл обладают широкой антибиотикорезистентностью.

3. Культуры штаммов S. typhimurium М-2ф t, S. typhimurium М-5в t, S. typhimurium Д-1в t, S. enteritidis 25 Яв e обладают типичными биологи-

ческими, высокими вирулентными и иммуногенными свойствами для белых мышей и голубей, отвечают требованиям, предъявляемым к производственным и контрольно-производственным штаммам.

4. На основе штаммов S. typhimurium М-5в t -ДЕП, S. typhimurium Д-1в t -ДЕП, S. enteritidis 25 Яв е -ДЕП создана вакцина инактивированная полиэтиленгликолевая против сальмонеллеза голубей. Определены биотехнологические параметры изготовления вакцины и оптимальное средство концентрирования антигенов - полиэтиленгликоль-6000. Готовый вакцинный препарат с оптимальной иммунизирующей дозой 6,0 млрд. мкр. кл. в 1 см3 является безвредным и ареактогенным для голубей, обладает выраженной иммуногенностью и протективной активностью в течение 12 месяцев.

5. Выделенные бактериофаги Phagum S almonella typhimurium №5 ТЗ, Ph. S. typhimurium №8 ME, Ph. S. typhimurium №9 MM обладают свойствами производственных штаммов: высокой литической активностью, специфичностью в отношении вида Salmonella enterica, широким диапазоном литической активности, минимальным латентным периодом внутриклеточного развития, высокой урожайностью, периодом стабилизации лизиса в течение 6-8 минут, скоростью адсорбции 4,0-4,96 х 10"9 см3мин"'. По своей структурной организации они относятся к семейству Siphoviridae, В1 морфотипу и четвертой морфологической группе по A.C. Тихоненко.

6. Полученные гипериммунные сыворотки на производственные штаммы бактериофагов проявляли нейтрализующую активность в разведениях 1:5-1:400. Константы скорости нейтрализации фагов с гомологичными антисыворотками составили 240,21-270,26 мин"1, с гетероло-гичными антисыворотками - 124,42-163,67 мин"1. Штаммы Ph. S. typhimurium №5 ТЗ, Ph. S. typhimurium №8 ME, Ph. S. typhimurium №9 MM являются родственными и обладают выраженной иммуногенностью.

7. На основе производственных штаммов Ph. S. typhimurium создан препарат Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей, обладающий выраженной активностью на модельных объектах (белых мышах): сохранность в опытных группах составила 100 % при 90-100 %

гибели в контроле.

8. На основе производственных штаммов фагов тифимуриум и эн-теритидис сконструирован бивалентный бактериофаг против сальмо-неллеза птиц, определены технологические параметры его производства и контроля. Эффективность препарата при инфицировании контрольными штаммами S. typhimurium и S. enteritidis в дозах 5 LD50 характеризовалась 90-100 %-ной сохранностью лабораторных объектов (белых мышей, голубей) в опытных группах при 90-100 %-ной гибели в контроле.

9. Разработан метод селективной деконтаминации поголовья птиц, основанный на применении Бактериофага тифимуриум против сальмо-неллеза голубей или бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц с водой и пробиотика лактобифадол с кормом. Использование данного метода обеспечило высокий терапевтический эффект при сальмо-неллезе птиц разных видов в условиях лаборатории, голубятен, вольеров зоопарка «Ташир».

10. Выделенный вирус болезни Ньюкасла «PN-T» относится к ме-зогенным парамиксовирусам типа 1, имеет высокую степень отличий от штаммов «Н», «ГАМ-61», «Bl», «La Sota», «Бор-74 ВГНКИ» и обладает высокой иммуногенностью. Оптимальной защитной средой для штамма является обезжиренное молоко.

11. На основе штаммов сальмонелл S. typhimurium М-5в t -ДЕП, S. typhimurium Д-1в t -ДЕП, S. enteritidis 25 Яв е -ДЕП и вируса болезни Ньюкасла штамма «Н» или «PN-T» сконструирована вакцина «Виро-сальм» ассоциированная инактивированная против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц. Разработаны технология ее производства, методы контроля и способ применения.

12. У голубей, иммунизированных вакциной «Виросальм», титры антител к вирусу ньюкаслской болезни составили 6,4-2,05 log2 в течение 320 суток наблюдения, у уток, фазанов, мускусных уток, гусей, индеек, цесарок 7,7-3,5 log2, у цыплят, перепелов - 9,6-5,15 log2. Антигенная активность по сальмонеллезным компонентам характеризовалась выраженной агглютинацией антигенов S. typhimurium и S. enteritidis с сыворотками

крови вакцинированных птиц. Сохранность иммунизированных голубей при инфицировании в летальных дозах 5 LDS0 составила 90-100 % при полной гибели птицы в контроле.

13. Доказана эффективность применения вакцины «Виросальм» на птице разных видов в условиях ОАО «Птицефабрика «Тульская», птицеферм, голубятен и индивидуальных подсобных хозяйств. Антигенная активность вакцины «Виросальм» к S. typhimurium и S. enteritidis на голубях в «полевых» условиях составила 8-5 log2 в РНГА в течение 210 дней наблюдения.

14. Усовершенствована система противоэпизоотических мероприятий для борьбы с сальмонеллезом птиц разных видов, родов и семейств. Помимо неспецифических ветеринарно-санитарных мероприятий система предусматривает использование препаратов бактериофагов и пробиотика лактобифадол для лечения больных птиц и ликвидации сальмонеллоноси-тельства с последующей иммунизацией вакциной «Виросальм». В условиях зоопарка ООО «Парк живой природы «До-До» Краснодарского края разработанная система позволила со 100 %-ной эффективностью ликвидировать сальмонеллез и сальмонеллоносительство у птиц, обеспечить профилактику болезни в течение трехлетнего периода наблюдения.

СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Результаты, полученные в ходе исследований, включены в «Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур», одобренные Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации (№13-3-6/1965 от 04.11.2002).

2. Штаммы сальмонелл Salmonella typhimurium М-2ф t -ДЕП, S. typhimurium М-5в t -ДЕП, S. typhimurium Д-1в t -ДЕП, Salmonella enteritidis 25 Яв е -ДЕП паспортизированы и депонированы в ФГУ ВГНКИ в качестве производственных, контрольно-производственных и использованы для изготовления биопрепаратов.

3. Способы изготовления и применения вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей запатентованы, па-

тент №2377015 от 27.12.09.

4. Бактериофаги Phagum Salmonella typhimurium №5 ТЗ -ДЕП, Ph. S. typhimurium №8 ME -ДЕП, Ph. S. typhimurium №9 MM -ДЕП, Ph. S. en-teritidis A-l -ДЕП, Ph. S. enteritidis ЮН-1 -ДЕП, Ph. S. enteritidis IOH-2 -ДЕП паспортизированы, депонированы в ФГУ ВГНКИ в качестве производственных и использованы для изготовления биопрепаратов.

5. Полученные дополнительно 15 бактериофагов с высокой литиче-ской активностью к S. typhimurium сохранены в качестве резервных, 6 из них с исследованной морфологией структурных элементов паспортизированы.

6. Способы изготовления и применения Бактериофага тифимуриум против сальмонеллеза голубей запатентованы, патент №2366456 от 10.09.09.

7. Разработаны инструкции по применению и другая научно-техническая документация на Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей и бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц.

8. Метод селективной деконтамицации для лечения сальмонеллеза птиц с использованием Бактериофага тифимуриум и пробиотика лактоби-фадол запатентован, патент №2375075 от 10.12.09.

9. Результаты, полученные в ходе исследований, включены в «Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей», одобренные Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации (№25-25/162 от 11.04.2008).

10. Вирус болезни Ньюкасла «PN-T» (парамиксовирус типа 1 голубиный вариант) паспортизирован и использован для изготовления экспериментальных серий инактивированной вакцины против сальмонеллеза и ньюкаслской болезни птиц.

11. Способы изготовления, производства и применения вакцины «Ви-росальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц использованы для составления отчета о доклинических исследованиях и научно-технической документации для регистрации и сертификации препарата.

12. Вакцина «Виросальм» ассоциированная инактивированная против

сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц сертифицирована и зарегистрирована на территории Российской Федерации.

13. Результаты, полученные в ходе исследований, включены в «Методические рекомендации по недопущению распространения гриппа птиц и болезни Ньюкасла голубей в частных подворьях, птицеводческих хозяйствах и голубятнях», утвержденные учебно-методическим советом ФГБОУ ВПО МГАВМиБ (протокол №11 от 25.10.2011).

14. Результаты, полученные при исследовании иммунобиологических и протективных свойств новых методов и средств против сальмонеллеза и ньюкаслской болезни, внедрены в ветеринарную практику голубеводства и птицеводства.

15. Материалы научных исследований, представленные в диссертационной работе, используются в учебном процессе во ФГБОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплинам: «Эпизоотология и ифекционные болезни животных», «Болезни птиц», «Фармакология», «Болезни молодняка сельскохозяйственных животных», «Болезни лабораторных животных», «Болезни экзотических животных».

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Ветеринарным специалистам, заводчикам голубей, владельцам ферм, вольеров, частных индивидуальных хозяйств и мест содержания птицы рекомендуется проводить мониторинг сальмонеллезной инфекции бактериологическими методами и совершенствовать лечебно-профилактические мероприятия, направленные против сальмонеллеза птиц, с применением новых средств и методов, предложенных в данной работе.

2. Штаммы Salmonella typhimurium М-2ф t -ДЕП, S. typhimurium М-5в t -ДЕП, S. typhimurium Д-1в t -ДЕП, S. enteritidis 25 Яв е -ДЕП рекомендуется использовать в качестве производственных и контрольно-производственных для создания ветеринарных препаратов.

3. Для профилактики сальмонеллеза голубей рекомендуется использовать вакцину инактивированную полиэтиленгликолевую против сальмо-

неллеза голубей в дозе 0,5 см3 с 20-30-дневного возраста двукратно с интервалом 30-40 дней.

4. Для профилактики сальмонеллеза и ньюкаслской болезни птиц рекомендуется применение вакцины «Виросальм» ассоциированной инакти-вированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц с 20-дневного возраста двукратно с интервалом 30 дней.

5. Специалистам биотехнологических предприятий рекомендуется использовать производственный регламент вакцины «Виросальм».

6. Штаммы бактериофагов Phagum Salmonella typhimurium №5 ТЗ -ДЕП, Ph. S. typhimurium №8 ME -ДЕП, Ph. S. typhimurium №9 MM -ДЕП, Ph. S. enteritidis A-l -ДЕП, Ph. S. enteritidis ЮН-1 -ДЕП, Ph. S. enteritidis ЮН-2 -ДЕП рекомендуется использовать в качестве производственных для создания ветеринарных препаратов.

7. Для лечения и профилактики сальмонеллеза голубей рекомендуется использовать Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей орально индивидуально или с водой групповым способом в дозе 0,5 см3 на голову при концентрации фага 108 и в дозе 0,25 см3 голубятам до 14-дневного возраста с первых дней жизни. Для лечения и профилактики сальмонеллеза птиц рекомендуется использовать бивалентный бактериофаг согласно инструкции по применению.

8. Для лечения и профилактики сальмонеллеза птиц рекомендуется использовать метод селективной деконтаминации, включающий применение Бактериофага тифимуриум или бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц и пробиотика лактобифадол.

9. Штамм вируса ньюкаслской болезни «PN-T» рекомендуется депонировать в ФГБУ ВГНКИ и использовать в качестве производственного. Данные по свойствам вакцины «Виросальм» в новом варианте с включением антигена инактивированного штамма «PN-T» рекомендуется использовать для дальнейшего совершенствования средств специфической профилактики болезни Ньюкасла птиц.

10. При организации противоэпизоотической борьбы с сальмонелле-зом птиц необходимо использовать «Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур» и «Рекомендации по диагно-

стике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей», одобренные Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев C.B., Толпыгин М.А. Специфическая профилактика сальмонеллеза кур // Ветеринарная медицина. -2002,-№2. -С. 29-30.

2. Пименов Н.В., Бубнова Л.В. Бактерии рода Salmonella - этиологический фактор острых кишечных расстройств у серых ворон // Ветеринарная медицина. - 2002. - № 2. - С. 29.

3. Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев C.B., Малахов Ю.А., Яковлев С.С. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур. - М.: МСХ-МГАВМиБ. - 2002. - 34 с.

4. Пименов Н.В., Ленев C.B., Куриленко А.Н. Протективная активность бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пул-лороза-тифа кур // Сб. науч. трудов ВГНКИ. - М.: ФГУ ВГНКИ, 2003. - Т. 64.-С. 178-182.

5. Пименов Н.В., Ленев C.B., Малахов Ю.А., Куриленко А.Н. Новый этап в совершенствовании профилактики и лечения сальмонеллеза кур // Мат-лы XI Московского международного вет. конгресса. - М.: Асс. практ. вет. врачей, 2003. - С. 228-229.

6. Пименов Н.В., Капустин A.B. Смешанная инфекция - сальмонеллез и болезнь Нью-Касла голубей // Ветеринарная медицина. - 2004. - № 4. -С. 23-24.

*7. Данилевская Н.В., Пименов Н.В. Проблема антибиотикорезистент-ности на примере лечения сальмонеллеза у домашних голубей // Российский ветеринарный журнал. - 2005. -№ 4. - С. 21-24.

8. Пименов Н.В. Основные направления борьбы с сальмонеллезом голубей // Вклад молодых ученых в решение проблем аграрной науки: Мат-лы межрег. науч.-практ. конф. мол. уч. - Воронеж: ФГОУ ВПО «ВГАУ им. К.Д. Глинки», 2005. - Ч. 2. - С. 144-147.

*9. Пименов Н.В., Данилевская Н.В. Антибиотикорезистентность сальмонелл, выделенных у домашних голубей // Ветеринария. - 2006. - №

9. - С. 20-24.

10. Пименов H.B. Эпизоотологические особенности сальмонеллеза голубей // Мат-лы XIII Московского международного конгресса по бол. мелк. дом. жив. - М.: Асс. практ. вет. врачей, 2005. - С. 153-155.

11. Пименов Н.В. Сальмонеллез синантропных птиц - проблема ток-сикоинфекций человека // Проблемы рационального природопользования техногенного региона: Сб. науч. тр. Междунар. шк.-конф. - Кемерово: ФГОУ ВПО КГСХИ, 2006. - С. 206-210.

12. Данилевская Н.В., Пименов Н.В. Новое в антибиотикотерапии: ан-тибиотикорезистентность - угроза реальна // Новейшие разработки в ветеринарии. Клеточная терапия: Мат-лы совм. конф. - М.: ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, 2006. - С. 16-22.

13. Пименов Н.В., Чиркова И.В. Биологические свойства бактериофагов Salmonella typhimurium и их терапевтическая эффективность против сальмонеллеза голубей // Молодежь и наука XXI века: Мат-лы II Открытой Всеросс. науч.-практ. конф. мол. уч. - Ульяновск: ФГОУ ВПО УГС-ХА, 2007.-Ч. 1.-С. 336-340.

14. Пименов Н.В., Чиркова И.В. Специфическая профилактика сальмонеллеза голубей // Голубеводство.-2007.-№ 12.-С.29; 2008,- №1,- С.29.

*15. Пименов Н.В., Чиркова И.В. Фаговыделение, профилактика и терапия сальмонеллеза голубей // Ветеринария. - 2007. - № 10. - С. 24-28.

*16. Пименов Н.В. Создание и необходимость применения инактиви-рованной вакцины против сальмонеллеза и болезни Нью-Касла голубей // Ветеринарная медицина. - 2008. - № 2-3. - С. 11-12.

17. Пименов Н.В., Куриленко А.Н., Чиркова И.В., Яковлев С.С. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей. - М.: МСХ; «МегАрт» - 2008. - 43 с.

♦18. Чиркова И.В., Пименов Н.В. Биологические свойства бактериофагов против сальмонелл тифимуриум и их использование в борьбе с саль-монеллезом птиц // Ветеринария и кормление.- 2008 - № 3. - С.32-34.

*19. Пименов Н.В. Перспективы применения бактериофагов в ветеринарии // Ветеринария и кормление. - 2009. - № 5. - С. 34-35.

20. Желудева Е.В., Пименов Н.В. Человек и природа: «биологическое» и «социальное» // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. на-

уч. тр. мол. уч. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2009. - Вып. 5. - С. 206-210.

21. Пименов Н.В., Бурико Б.Ю. Основные методы борьбы с ньюкасл-ской болезнью в голубеводстве // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2009. -Вып. 5.-С. 132-138.

*22. Пименов Н.В., Чиркова И.В. Препарат против сальмонеллеза голубей и способ лечения сальмонеллеза голубей: Патент на изобретение №2366456 // Официальный бюллетень Федеральной службы по интеллектуальной собственности. - 2009. - № 25.

23. Пименов Н.В. Вирус для изготовления инактивированной поли-этиленгликолевой вакцины против сальмонеллеза и болезни Нью-Касла голубей // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2009. - Вып. 5. - С. 138-141.

*24. Пименов Н.В. Распространенность инфекционных болезней в голубеводстве // Ветеринария и кормление. - 2009. - № 6. - С. 69-70.

*25. Пименов Н.В., Чиркова И.В., Субботин В.В., Данилевская Н.В. Способ лечения птиц при сальмонеллезе, вызванном Salmonella typhi-murium: Патент на изобретение №2375075 // Официальный бюллетень Федеральной службы по интеллектуальной собственности - 2009. - №34.

*26. Пименов Н.В. Вакцина инактивированная против сальмонеллеза голубей и способ ее применения: Патент на изобретение №2377015 // Официальный бюллетень Федеральной службы по интеллектуальной собственности. - 2009. - № 36.

27. Пименов Н.В. Антигенные и иммуногенные свойства вакцины «Виросальм» инактивированной ассоциированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц // Мат-лы междунар. науч.-практ. конф. «Молодость, талант, знания - ветеринарной медицине и животноводству». - М.Троицк: ФГОУ ВПО УГАВМ, 2010. - Т. 3. - С. 107-112.

28. Пименов Н.В. Молодые предлагают новые методы и препараты // Информационный бюллетень Минсельхоза России - 2010 - № 4,- С.50-52.

*29. Пименов Н.В. Сальмонеллез птиц: перспективные направления в лечебно-оздоровительных мероприятиях // Ветеринария и кормление. -2010.-№3.-С. 24-25.

30. Пименов Н.В. Диагностика, профилактика и меры борьбы с основ-

ными инфекциями в голубеводстве. - М.: Колос, 2010. - 96 с.

31. Желудева Е.В., Пименов Н.В. Проблемы экологии: способность мыслить в общепланетарном масштабе // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011.-Вып. 7.-С. 275-277.

32. Пименов Н.В. Инновационный метод профилактики сальмонеллеза и ньюкаслской болезни птиц в условиях мелких и средних хозяйств // Актуальные проблемы развития АПК в научных исследованиях молодых ученых: Труды Всерос. совета мол. уч. и спец-тов аграрных образовательных и научных учреждений. - М.: МСХ РФ, 2011. - С. 146-149.

33. Пименов Н.В., Зотова З.В. Иммунобиологические свойства вакцины «Виросальм» в сравнении с живыми вакцинами против ньюкаслской болезни у голубей // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011.- Вып.7 - С. 164-178.

34. Желудева Е.В., Пименов Н.В. Социальная экология: аксиологическая переориентация сциентизированного мышления // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011. - Вып. 7. - С. 278-280.

*35. Зотова З.В., Пименов Н.В. Проблема ньюкаслской болезни голубей и пути ее решения // Ветеринария и кормление.- 2011.- № 5- С.35-36.

36. Пименов Н.В. Бивалентный сальмофаг против сальмонеллеза птиц // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. -М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011. - Вып. 7. - С. 168-174.

37. Пименов Н.В. Вакцина «Виросальм» - новый биопрепарат для специфической профилактики сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц // Инновационные тенденции развития Российской науки: Мат-лы IV Между-нар. науч.-практ. конф. мол. уч. - Красноярск: ФГОУ ВПО «Красноярский ГАУ», 2011. -Ч. 1.-С. 139-142.

38. Зотова З.В., Пименов Н.В. Факторы риска распространения эпизоотии ортомиксвирусной и парамиксвирусной инфекций птиц в Московской области // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч.- М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2011. - Вып. 7. - С. 145-151.

39. Пименов Н.В. Специфическая эффективность вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и бо-

лезни Ньюкасла птиц // Молодежь и инновации - 2011: Мат-лы Междунар. науч.-пр. конф. - Горки: Белорусская ГСХА, 2011. - Ч. 1. - С.309-312.

*40. Пименов Н.В. Новые пути решения медико-социальной проблемы сальмонеллеза птиц // Жизнь без опасностей - 2011.- № 2,- Т. 6 - С. 56-60.

*41. Пименов Н.В., Зотова З.В. Конструирование вакцины «Виро-сальм» на основе парамиксовируса типа 1 голубиного варианта штамма «РМ-Т» // Ветеринарный врач. - 2011. - № 4. - С. 2-4.

42. Пименов Н.В., Зотова З.В. Методические рекомендации по недопущению распространения гриппа птиц и болезни Ньюкасла голубей в частных подворьях, птицеводческих хозяйствах и голубятнях. - М.: ФГБОУ ВПО МГАВМиБ. - 2011. - 56 с.

43. Пименов Н.В. Новые методы и средства в борьбе с сальмонеллезом птиц // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч.-М.: ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, 2012.-Вып. 8.-С. 138-143.

*44. Пименов Н.В. Эффективность оздоровительных мероприятий против сальмонеллеза птиц в условиях зоопарка // Российский ветеринарный журнал. - 2012. - № 3. - С. 22-24.

*45. Пименов Н.В. Вакцинопрофилактика сальмонеллеза голубей и декоративных птиц // Ветеринария. - 2012. - № 8. - С. 20-22.

*46. Пименов Н.В. Совершенствование средств и методов борьбы с сальмонеллезом птиц // Ветеринария и кормление. - 2012. - № 4 - С.32-33.

47. Пименов Н.В. Эффективность метода селективной деконтаминации в условиях пунктов содержания птицы, неблагополучных по сальмонелле-зу // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. науч. тр. мол. уч. - М.: ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, 2012. - Вып. 8. - С. 143-147.

*48. Пименов Н.В. Совершенствование системы противоэпизоотиче-ской борьбы с сальмонеллезом птиц // Ветеринарная медицина. — 2012. — № 3. - С. 38-40.

* - издания, рекомендованные ВАК РФ

Отпечатано в ООО «Издательство Спутник+» ПД№ 1-00007 от 26.09.2000 г. Подписано в печать 24.09.2012 г. Тираж 150 экз. Усл. п.л. 2,0 Печать авторефератов (495)730-47-74, 778-45-60

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Пименов, Николай Васильевич

СОКРАЩЕНИЯ, ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ В ТЕКСТЕ

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Этиологические особенности сальмонеллеза птиц

2.1.1. Характеристика возбудителя

2.1.2. Сохранность возбудителя

2.1.3. Резистентность к антибиотикам

2.1.4. Факторы патогенности сальмонелл

2.1.5. Эпизоотологические данные

2.1.6. Патогенез

2.2. Клинико-патоморфологические характеристики и диагностика сальмонеллеза птиц

2.2.1. Клинические признаки

2.2.2. Патологоанатомические изменения

2.2.3. Лабораторная диагностика

2.3. Средства и методы лечения и профилактики сальмонеллеза птиц

2.3.1. Принципы противоэпизоотической работы с птицепоголовьем, неблагополучным по сальмонеллезу

2.3.2. Лечебные мероприятия при сальмонеллезе птиц

2.3.3. Профилактика сальмонеллеза птиц

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материалы и методы

3.2. Результаты собственных исследований

3.2.1. Этиологический профиль сальмонеллеза птиц

3.2.2. Характеристика изолятов сальмонелл

3.2.3. Антибиотикорезистентность возбудителей сальмонеллеза

3.2.4. Определение наиболее вирулентных изолятов сальмонелл

3.2.5. Определение наиболее иммуногенных изолятов сальмонелл

3.2.6. Отбор и депонирование производственных штаммов сальмонелл

3.2.7. Исследование вирулентности и иммуногенности производственных штаммов сальмонелл для голубей

3.2.8. Изготовление вакцины инактивированной полиэтиленглико-левой против сальмонеллеза голубей

3.2.9. Определение оптимальной иммунизирующей дозы вакцины

3.2.10. Изучение безвредности и ареактогенности готового образца вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей

3.2.11. Доказательство отсутствия потенциальных рисков для человека и окружающей среды

3.2.12. Эффективность применения вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей в остром лабораторном опыте, контроль иммуногенности

3.2.13. Испытания вакцины инактивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей в условиях голубятен

3.2.14. Селекция и изучение биологических свойств высокоактивных бактериофагов к S. typhimurium

3.2.15. Отбор производственных штаммов бактериофагов, изучение их адсорбционных свойств и антигенного родства

3.2.16. Создание бактериофагового препарата против сальмонеллеза голубей

3.2.17. Создание бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц

3.2.18. Эффективность метода селективной деконтаминации с использованием бактериофагов и пробиотика лактобифадол для лечения сальмонеллеза птиц

3.2.19. Создание вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц

3.2.19а. Обоснование необходимости создания и применения вакцины ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла птиц

3.2.196. Приготовление питательной среды для культивирования штаммов сальмонелл и посевного материала

3.2.19в. Инактивация микробных клеток сальмонелл

3.2.19г. Концентрирование, очистка и стандартизация сальмонеллезных антигенов

3.2.19д. Исследование токсичности биомассы 181 3.2.19е. Характеристика производственных штаммов вируса ньюкаслской болезни

3.2.19ж. Получение вируссодержащей эмбриональной жидкости

3.2.19з. Изготовление серии вакцины

3.2.19и. Фасовка вакцины

3.2.20. Исследования по безопасности рекомендуемой прививочной дозы при передозировке и повторном введении вакцины

3.2.21. Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцины «Виросальм»

3.2.22. Изучение стабильности при хранении вакцины «Виросальм»

3.2.23. Эффективность применения вакцины «Виросальм» в производственных условиях

3.2.22а. Применение вакцины «Виросальм» на голубях, курах, утках, гусях и индейках в условиях КФХ «Барбасов» Наро-Фоминского района Московской области

3.2.226. Применение вакцины «Виросальм» на цыплятах в условиях ОАО «Птицефабрика «Тульская» Ленинского района Тульской области 205 3.2.22в. Применение вакцины «Виросальм» на голубях в условиях частных голубятен Западного административного округа города Москвы 207 3.2.22г. Применение вакцины «Виросальм» на индоутках, утках, гусях, цесарках и индейках в условиях индивидуальных подсобных хозяйств деревни Мошок Гусевского района Владимирской области

3.2.23. Схема лечебно-профилактических мероприятий, направленных против сальмонеллеза птиц

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка средств и совершенствование методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц"

Актуальность темы. Сальмонеллез - одна из ведущих проблем промышленного и частного птицеводства, инфекционная болезнь птиц и животных, опасная для человека пищевым токсикоинфицированием.

Сальмонеллез получил широкое распространение во всех отраслях промышленного и непромышленного птицеводства. Наибольшие ущербы от болезни и сальмонеллоносительства отмечают в голубеводстве, промышленном птицеводстве кур, уток, гусей. Участились вспышки в пунктах разведения и содержания фазанов, индеек, перепелов и других птиц.

По заключению экспертов Всемирной организации здравоохранения сальмонеллез, как зоонозная инфекция, не имеет себе равных по сложности эпизоотологии, эпидемиологии и трудностям борьбы с ним [81].

Развитие производства продуктов питания, получаемых от сельскохозяйственной и промысловой птицы, неизбежно связано с интенсификацией промышленного птицеводства, увеличением производственных мощностей и плотности птицепоголовья. Хозяйства (птицефабрики, утиные, гусиные, фазаньи, страусиные фермы, индейкофермы, голубефермы и другие), сталкиваясь с проблемой сальмонеллеза, несут большие потери из-за смертности молодняка, снижения продуктивности, качества продукции и наложения ограничительных мероприятий на выпуск продукции. Зоопарки, вольеры и голубятни теряют птицу, ее выставочные и летные качества, кроме того, становятся объектами угрозы инфицирования человека [15; 30; 69; 75; 78; 98; 110; 140; 144; 193; 213; 295].

В этих условиях несоблюдение личной гигиены чревато заражением. Обсемененные сальмонеллами яйца и мясо птиц являются основными причинами пищевых токсикоинфекций у людей. Согласно медицинской статистике токсикоинфекции сальмонеллезной этиологии распространены почти во всех странах мира, причем за последнее двадцатилетие медицина отмечает рост сальмонеллезных заболеваний среди людей, что обусловлено, в первую очередь, ростом инфицированности домашних животных и птиц [13; 27; 74; 76; 108; 120; 125; 139; 147; 270].

Так, в Великобритании в 1989 году, было зарегистрировано 5 саль-монеллезных вспышек; обсемененные сальмонеллой яйца и тушки птицы обнаружили в магазинах, что привело к отставке министра сельского хозяйства Е. Curie [182]. Американские ученые Т.К. Kolferstein и D.W. Bettcher отмечают, что за 1993 г. только в США число случаев токсикоинфицирова-ния человека составило 224 тыс., из них 96 % - сальмонеллез, причиной которого были в 65 % случаев зараженное мясо птицы и яичные продукты [247]. S. Lukinmaa, R. Schildt, T. Rinttila сообщали о 12 вспышках сальмонел-леза в Финляндии в 1997 году [237]. В 1998 году было отмечено более 20 вспышек сальмонеллеза в США [76; 274].

В Российской Федерации статистический мониторинг выявил возрастание числа неблагополучных пунктов по сальмонеллезу людей с 60 в 1991 г. до 170 в 2001 г. [136]. Показатель заболеваемости составляет в среднем по стране 35,0, достигая 200 на 100000 детей раннего возраста [81].

В нашей стране, по данным Роспотребнадзора, заболеваемость пищевыми токсикоинфекциями сальмонеллезной этиологии у людей в 2006 г. стабилизировалась на уровне 31,96 на 100 тыс. населения, что на 9 % выше, чем в 2005 г. Сальмонеллез занимает второе место после дизентерии в структуре острых кишечных инфекций людей. В этиологической структуре сальмонеллеза, как и в предыдущие годы, преобладают сальмонеллы группы D (около 80 %) - Salmonella enteritidis и серогруппы В - Salmonella typhimurium (более 15 %). Ежегодно в нашей стране регистрируется до 30 крупных вспышек сальмонеллеза пищевого характера с числом пострадавших от 500 до 1500 человек [41].

В 2002 году доля S. enteritidis составила 65 % от всех изолятов сальмонелл, выделенных от человека по всему миру, на втором месте S. typhimurium - 12 % [106]. По данным C.B. Цыгановой, в 2000-2002 гг. S. enteritidis и 8. 1урЫтипит вместе составили 90 % от всех сальмонелл, выделенных от человека [136].

По данным ветеринарной отчетности Россельхознадзора в России за последние пять лет выявлено снижение количества неблагополучных по сальмонеллезу пунктов. В то же время число заболевших сальмонеллезом птиц возросло с 2003 года более чем в 40 раз [59]. Существует проблема недостаточного мониторинга и выявления неблагополучия в условиях частных подворий, голубятен, вольеров. В этой связи реальное число неблагополучных пунктов может быть гораздо выше, чем показывают данные официальной статистики.

В 2005-2010 гг. Европейской комиссией по безопасности продуктов (ЕР 8А) были определены уровни распространенности сальмонелл в птицеводческих хозяйствах Европейского Союза, показавшие, что бактериологически положительными по основным патогенным серовариантам сальмонелл были 20,3 % крупных яичных хозяйств с вариациями между странами - членами ЕС до 62,5 % [106].

Борьба с сальмонеллезом птиц заключается в проведении организационных, санитарно-гигиенических мероприятий, серологическом выявлении подозреваемых в заражении или бактерионосительстве птиц, проведении терапевтических мероприятий (профилактические и лечебные обработки птиц антибиотиками и другими химиотерапевтическими препаратами) [11; 15; 16; 33; 45; 58; 68; 74; 76; 86; 88; 92; 107; 108; 110; 112; 113; 142]. К сожалению, инструкции по борьбе с сальмонеллезом птиц и пуллорозом-тифом, которые имеются для промышленного птицеводства [26; 105], на сегодняшний день не рассматривают всех аспектов противоэпизоотической борьбы. Для малых форм разведения птицы: голубятен, частных вольеров, ферм систематизация мероприятий, разработка средств эффективной биологической защиты и терапии больных птиц являются актуальной задачей.

Эффективность проводимых мероприятий против сальмонеллеза птиц недостаточна. Антибиотикообработки не позволяют избавить птицу от сальмоносительства, не способны профилактировать и ликвидировать инфекцию, а предотвращают лишь массовое клиническое проявление заболевания. Кроме того, применение антибактериальных и других химиотерапевтических препаратов влияет на качество продукции, остаточные количества антибиотиков, сульфаниламидов, нитрофуранов вносят ограничения на использование продукции. Постоянное их применение нарушает биоэкологию окружающей среды и провоцирует появление антибиотикоустойчивых форм вирулентных сальмонелл [2; 3; 34; 61; 63; 76; 83; 84; 85; 140; 168; 188; 214; 236; 265; 297; 301].

Широкое использование антибиотиков в промышленном птицеводстве должно быть ограничено в рамках принимаемых на себя обязательств стран-участниц Всемирной торговой организации. Новые требования к качеству продукции предусматривают повышение ее безопасности: санитарной, экологической, токсической и других [62].

Применяемые меры не обеспечивают благополучие птицеводческих хозяйств и питомников по сальмонеллезу. По мнению ряда экспертов ВОЗ проблема не может быть решена без применения эффективных средств специфической иммунопрофилактики сальмонеллеза [301]. В разных странах были предложены живые, инактивированные и химические вакцины против сальмонеллеза кур, разработана вакцина и в нашей стране [21; 32; 33; 41; 44; 47; 73; 110; 145; 146; 160; 183; 208; 212; 243; 263; 267; 295]. Однако только применением вакцин не решалась проблема защиты цыплят первых дней жизни и освобождения птицепоголовья от бактерионосительства. По этой причине в последнее время возрастает интерес к фаговым препаратам, которые обладают лечебным эффектом и обеспечивают санирование организма от бактерионосительства. Так, для профилактики и ликвидации сальмонеллеза кур были предложены сальмофаг энтеритидис и бивалентный сальмофаг, позволяющие обеспечивать раннюю защиту молодняка и ликвидацию неблагополучия птичников по сальмонеллезу и пуллорозу [76; 83; 85; 101; 181].

Иначе обстоят дела в других отраслях птицеводства. Для уток, гусей, индеек, фазанов, голубей и других птиц основным этиологическим серовари-антом является Salmonella typhimurium. Предложенная живая вакцина из ат-тенуированных штаммов S. typhimurium для водоплавающей птицы не обеспечивает санитарное благополучие в полном объеме по ряду причин, в т.ч. по причине провокаций положительных результатов при контрольных анализах на сальмонеллез [86; 98; 112]. До настоящей работы в России не было сертифицированных инактивированных вакцин против сальмонеллеза голубей (где применение живой вакцины чревато снижением плодовитости), не предложено унифицированных средств иммунопрофилактики, составляющих комплекс антигенов по нескольким эпизоотическим штаммам и серовариан-там для разводимых птиц разных видов.

Существующая потребность научных изысканий в этой сфере обозначила необходимость систематизации мероприятий по борьбе с сальмонел-лезом в голубеводстве и других отраслях птицеводства, необходимость создания биологически активных средств и способов лечения сальмонеллеза птиц, новых экологически и санитарно безопасных методов борьбы с инфекцией сальмонеллеза. Актуальным является необходимость создания средств специфической профилактики сальмонеллеза птиц разных видов, исходя из эпизоотической ситуации и результатов внутривидового мониторинга на современном этапе. Кроме того, важной практической востребованностью является разработка и создание комплексных средств иммунизации, обеспечивающих удобство применения и высокие протективные свойства против основных инфекций в конкретных отраслях промышленного и непромышленного птицеводства.

Цель и задачи исследования. Целью настоящих исследований являлись разработка средств и методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц, совершенствование системы противоэпизоотических мероприятий, направленных на борьбу с сальмонеллезом птиц.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

3. Определить технологические параметры изготовления и эффективность применения инактивированной вакцины против сальмонеллеза голубей.

6. Разработать метод для лечения сальмонеллеза птиц с использованием препаратов бактериофагов и пробиотика.

9. Провести доклинические и клинические испытания предложенной вакцины с целью ее регистрации и сертификации на территории Российской Федерации.

Впервые разработана и апробирована вакцина инактивированная по-лиэтиленгликолевая против сальмонеллеза голубей.

Производственные штаммы бактериофагов, выделенные под руководством и с участием автора, депонированы в коллекции ФГУ ВГНКИ и впервые использованы для создания лечебно-профилактических препаратов против сальмонеллеза птиц. Впервые разработан препарат Бактериофаг тифиму-риум против сальмонеллеза голубей. Совершенствованы лечебные средства против сальмонеллеза птиц. Впервые разработан метод селективной декон-таминации для лечения сальмонеллеза птиц с использованием предложенных препаратов бактериофагов и пробиотика Лактобифадол.

Научная новизна работы подтверждена патентами на изобретение: №2377015 «Вакцина инактивированная против сальмонеллеза голубей и способ ее применения», №2366456 «Препарат против сальмонеллеза голубей и способ лечения сальмонеллеза голубей», №2375075 «Способ лечения птиц при сальмонеллезе, вызванном Salmonella typhimurium».

Разработанные в ходе работы Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей, Бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц, вакцина инактивированная полиэтиленгликолевая против сальмонеллеза голубей рекомендованы для применения в качестве средств лечения и профилактики сальмонеллеза. Их применение позволяет эффективно ликвидировать очаг инфекции, снимает сальмонеллоносительство у птиц, препятствует инфицированию и предотвращает заболеваемость и гибель птиц от сальмонеллеза.

Предложенные новые средства, а также способы их применения и метод селективной деконтаминации позволяют совершенствовать борьбу с сальмонеллезом птиц.

Также материалы работы включены в «Методические рекомендации по недопущению распространения гриппа птиц и болезни Ньюкасла голубей в частных подворьях, птицеводческих хозяйствах и голубятнях», утвержденные Учебно-методическим советом ФГБОУ ВПО МГАВМиБ (пр. №11 от 25.10.11).

Личный вклад соискателя. Автору принадлежат непосредственное осуществление исследований этиологического профиля сальмонеллеза птиц, выделение и изучение биологических свойств изолятов сальмонелл, определение и депонирование производственных штаммов, создание вакцины инак-тивированной полиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей, создание и внедрение вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц, создание Бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц.

Автору принадлежат организация и проведение работ по выделению бактериофагов, совместно с Чирковой И.В. - изучение их биологических свойств и депонирование производственных штаммов, разработка и испытания препарата Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей.

Автор принимал личное участие во всех доклинических, клинических апробационных испытаниях новых, предложенных им, средств и методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц.

Автору принадлежат анализ и обобщение полученных результатов, концепция совершенствования системы лечебно-профилактических мероприятий против сальмонеллеза птиц.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследований доложены на XI Московском международном ветеринарном конгрессе 17-19 апреля 2003 г.; Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых «Вклад молодых ученых в решение проблем аграрной науки» 12-13 мая 2005 г. во ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет имени К.Д. Глинки», г. Воронеж; на XIII Московском международном конгрессе по болезням мелких домашних животных 23-25 апреля 2005 г.; на Международной школе-конференции молодых ученых «Проблемы рационального природопользования техногенного региона» 1517 декабря 2005 г. в ФГОУ ВПО «Кемеровский государственный сельскохозяйственный институт», г. Кемерово; на совместной конференции компании Hill's и Российского онкологического научного центра имени H.H. Блохина

21 апреля 2006 г., г. Москва; на II Открытой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века» 24-26 апреля 2007 г. в ФГОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия», г. Ульяновск; на V Международном симпозиуме «ЕС-Россия: сотрудничество в области биотехнологии, сельского, лесного, рыбного хозяйства и пищи в 7 Рамочной программе ЕС» 1-3 октября 2008 года в г. Пущино; на Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Вопросы ветеринарии и биотехнологий», посвященной 90-летию МГАВМиБ, 11-13 ноября 2009 г. в ФГОУ ВПО МГАВ-МиБ, г. Москва; на VII Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству 26-29 апреля 2010 года в г. Москва; на Международной научно-практической конференции «Молодость, талант, знания - ветеринарной медицине и животноводству» 21-24 сентября 2010 г. в ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины», г. Троицк; на IV Международной научно-практической конференции молодых ученых «Инновационные тенденции развития Российской науки» 15-20 апреля 2011 г. в ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет», г. Красноярск; на Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и инновации - 2011» 25-27 мая 2011 г. в Белорусской государственной сельскохозяйственной академии, г. Горки Республики Беларусь; на Международной российско-чешской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Актуальные вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии» 25 апреля 2012 года в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ г. Москва и других.

Результаты исследований доложены также на международных, всероссийских и академических школах молодых ученых, научно-практических семинарах, методических совещаниях факультета ветеринарной медицины и факультета повышения квалификации, кафедральном и межкафедральных заседаниях ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 307 листах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждения полученных результатов, выводы, сведения о практическом использовании результатов исследований, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (301 источник, в т.ч. 153 - иностранных авторов). Диссертационная работа содержит 42 таблицы, 19 рисунков, 114 листов приложений.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Пименов, Николай Васильевич

5. ВЫВОДЫ

1. Для лечения и профилактики сальмонеллеза птиц научно обоснованы и клинически подтверждены метод селективной деконтаминации и последующая вакцинация, эффективность которых доказана полным оздоровлением неблагополучных по сальмонеллезу пунктов с формированием у птиц стойкого иммунитета.

3. Культуры штаммов S. typhimurium М-2ф t, S. typhimurium М-5в t, S. typhimurium Д-1в t, S. enteritidis 25 Яв e обладают типичными биологическими, высокими вирулентными и иммуногенными свойствами для белых мышей и голубей, отвечают требованиям, предъявляемым к производственным и контрольно-производственным штаммам.

4. На основе штаммов S. typhimurium М-5 в t -ДЕП, S. typhimurium Д-1в t -ДЕП, S. enteritidis 25 Яв е -ДЕП создана вакцина инактивированная полиэти-ленгликолевая против сальмонеллеза голубей. Определены биотехнологические параметры изготовления вакцины и оптимальное средство концентрирования антигенов - полиэтиленгликоль-6000. Готовый вакцинный препарат о с оптимальной иммунизирующей дозой 6,0 млрд. мкр. кл. в 1 см является безвредным и ареактогенным для голубей, обладает выраженной иммуноген-ностью и протективной активностью в течение 12 месяцев.

5. Выделенные бактериофаги Phagum Salmonella typhimurium №5 ТЗ, Ph. S. typhimurium №8 ME, Ph. S. typhimurium №9 MM обладают свойствами производственных штаммов: высокой литической активностью, специфичностью в отношении вида Salmonella enterica, широким диапазоном литической активности, минимальным латентным периодом внутриклеточного развития, высокой урожайностью, периодом стабилизации лизиса в течение 6-8 минут, скоростью адсорбции 4,0-4,96 х 10"9 см3мин"\ По своей структурной организации они относятся к семейству Siphoviridae, Bl морфотипу и четвертой морфологической группе по A.C. Тихоненко.

6. Полученные гипериммунные сыворотки на производственные штаммы бактериофагов проявляли нейтрализующую активность в разведениях 1:51:400. Константы скорости нейтрализации фагов с гомологичными антисыворотками составили 240,21-270,26 мин"1, с гетерологичными антисыворотками - 124,42-163,67 мин"1. Штаммы Ph. S. typhimurium №5 ТЗ, Ph. S. ty-phimurium №8 ME, Ph. S. typhimurium №9 MM являются родственными и обладают выраженной иммуногенностью.

8. На основе производственных штаммов фагов тифимуриум и энтерити-дис сконструирован бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц, определены технологические параметры его производства и контроля. Эффективность препарата при инфицировании контрольными штаммами S. typhimurium и S. enteritidis в дозах 5 LD50 характеризовалась 90-100 %-ной сохранностью лабораторных объектов (белых мышей, голубей) в опытных группах при 90-100 %-ной гибели в контроле.

9. Разработан метод селективной деконтаминации поголовья птиц, основанный на применении Бактериофага тифимуриум против сальмонеллеза голубей или бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц с водой и пробиотика лактобифадол с кормом. Использование данного метода обеспечило высокий терапевтический эффект при сальмонеллезе птиц разных видов в условиях лаборатории, голубятен, вольеров зоопарка «Ташир».

10. Выделенный вирус болезни Ньюкасла «PN-T» относится к мезогенным парамиксовирусам типа 1, имеет высокую степень отличий от штаммов «Н», «ГАМ-61», «Bl», «La Sota», «Бор-74 ВГНКИ» и обладает высокой иммуно-генностью. Оптимальной защитной средой для штамма является обезжиренное молоко.

11. На основе штаммов сальмонелл S. typhimurium М-5в t -ДЕП, S. typhimurium Д-1в t -ДЕП, S. enteritidis 25 Яв е -ДЕП и вируса болезни Ньюкасла штамма «Н» или «PN-T» сконструирована вакцина «Виросальм» ассоциированная инактивированная против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц. Разработаны технология ее производства, методы контроля и способ применения.

12. У голубей, иммунизированных вакциной «Виросальм», титры антител к вирусу ньюкаслской болезни составили 6,4-2,05 log2 в течение 320 суток наблюдения, у уток, фазанов, мускусных уток, гусей, индеек, цесарок 7,7-3,5 log2, у цыплят, перепелов - 9,6-5,15 log2. Антигенная активность по сальмо-неллезным компонентам характеризовалась выраженной агглютинацией антигенов S. typhimurium и S. enteritidis с сыворотками крови вакцинированных птиц. Сохранность иммунизированных голубей при инфицировании в летальных дозах 5 LD50 составила 90-100 % при полной гибели птицы в контроле.

14. Усовершенствована система противоэпизоотических мероприятий для борьбы с сальмонеллезом птиц разных видов, родов и семейств. Помимо неспецифических ветеринарно-санитарных мероприятий система предусматривает использование препаратов бактериофагов и пробиотика лактобифадол для лечения больных птиц и ликвидации сальмонеллоносительства с последующей иммунизацией вакциной «Виросальм». В условиях зоопарка ООО «Парк живой природы «До-До» Краснодарского края разработанная система позволила со 100 %-ной эффективностью ликвидировать сальмонеллез и сальмонеллоносительство у птиц, обеспечить профилактику болезни в течение трехлетнего периода наблюдения.

6. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

2. Штаммы сальмонелл Salmonella typhimurium М-2ф t -ДЕП, S. typhimu-rium М-5в t -ДЕП, S. typhimurium Д-1в t -ДЕП, Salmonella enteritidis 25 Яв e -ДЕП паспортизированы и депонированы в ФГУ ВГНКИ в качестве производственных, контрольно-производственных и использованы для изготовления биопрепаратов.

3. Способы изготовления и применения вакцины инактивированной по-лиэтиленгликолевой против сальмонеллеза голубей запатентованы, патент №2377015 от 27.12.09.

4. Бактериофаги Phagum Salmonella typhimurium №5 ТЗ -ДЕП, Ph. S. typhimurium №8 ME -ДЕП, Ph. S. typhimurium №9 MM -ДЕП, Ph. S. enteritidis A-l -ДЕП, Ph. S. enteritidis ЮН-1 -ДЕП, Ph. S. enteritidis ЮН-2 -ДЕП паспортизированы, депонированы в ФГУ ВГНКИ в качестве производственных и использованы для изготовления биопрепаратов.

5. Полученные дополнительно 15 бактериофагов с высокой литической активностью к S. typhimurium сохранены в качестве резервных, 6 из них с исследованной морфологией структурных элементов паспортизированы.

8. Метод селективной деконтамицации для лечения сальмонеллеза птиц с использованием Бактериофага тифимуриум и пробиотика лактобифадол запатентован, патент №2375075 от 10.12.09.

10. Вирус болезни Ньюкасла «РИ-Т» (парамиксовирус типа 1 голубиный вариант) паспортизирован и использован для изготовления экспериментальных серий инактивированной вакцины против сальмонеллеза и ньюкаслской болезни птиц.

11. Способы изготовления, производства и применения вакцины «Виро-сальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц использованы для составления отчета о доклинических исследованиях и научно-технической документации для регистрации и сертификации препарата.

12. Вакцина «Виросальм» ассоциированная инактивированная против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц сертифицирована и зарегистрирована на территории Российской Федерации.

15. Материалы научных исследований, представленные в диссертационной работе, используются в учебном процессе во ФГБОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплинам «Эпизоотология и ифекционные болезни животных», «Болезни птиц», «Фармакология», «Болезни молодняка сельскохозяйственных животных», «Болезни лабораторных животных», «Болезни экзотических животных».

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

2. Штаммы Salmonella typhimurium М-2ф t -ДЕП, S. typhimurium М-5в t -ДЕП, S. typhimurium Д-1в t -ДЕП, Salmonella enteritidis 25 Яв e -ДЕП рекомендуется использовать в качестве производственных и контрольно-производственных для создания ветеринарных препаратов.

3. Для профилактики сальмонеллеза голубей рекомендуется использовать вакцину инактивированную полиэтиленгликолёвую против сальмонеллеза голубей в дозе 0,5 см с 20-30-дневного возраста двукратно с интервалом 3040 дней.

4. Для профилактики сальмонеллеза и ньюкаслской болезни птиц рекомендуется применение вакцины «Виросальм» ассоциированной инактивированной против сальмонеллеза и болезни Ньюкасла голубей и декоративных птиц с 20-дневного возраста двукратно с интервалом 30 дней.

7. Для лечения и профилактики сальмонеллеза голубей рекомендуется использовать Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей Л орально индивидуально или с водой групповым способом в дозе 0,5 см на

8 3 голову при концентрации фага 10 ив дозе 0,25 см голубятам до 14-дневного возраста с первых дней жизни. Для лечения и профилактики сальмонеллеза птиц рекомендуется использовать бивалентный бактериофаг согласно инструкции по применению.

10. При организации противоэпизоотической борьбы с сальмонеллезом птиц необходимо использовать «Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур» и «Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей», одобренные Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Пименов, Николай Васильевич, Москва

1. Адаме М. Бактериофаги. М.: Издательство иностранной литературы, 1961.-587 с.

2. Алямкин Ю.В. Пробиотики вместо антибиотиков это реально // Птицеводство. - 2005. - № 2. - С. 17-18.

3. Амнон М. Сальмонеллез Вопросы и ответы? / VI Междунар. вет. конгресс по птицеводству, 26-29 апр. 2010, г. Москва - М., 2010. - С. 114-120.

4. Антипов В.А. Симбионтные микроорганизмы пищеварительного тракта, их роль и состав // Сельское хозяйство за рубежом. 1989. -№12.-С. 40-45.

5. Арбузова В.А. К вопросу о современных методах идентификации сальмонелл. Результаты изучения трудно идентифицируемых культур // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1963. -№2.-С. 8-12.

6. Арбузова В.А. Материалы к биологии сальмонелл, патогенезу и эпидемиологии сальмонеллезов: Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук (далее Автореф. дисс. докт. мед. наук) / ЛГСМИ. - Л., 1974. - 36 с.

7. Ахмедов A.M. Сальмонеллезы (паратифы) молодняка. М.: Колос, 1983.-256 с.

8. Ахмедов М.М., Аллахвердиев М.С., Салихова Н.И., Муслев Д.Г. Некоторые вопросы эпизоотологии сальмонеллеза птиц // Вестник ветеринарии. 1996. - №2. - С. 15-17.

9. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. М., 1962. - 179 с.

10. Байдевлятов А.Б., Биллоус А.Ф. Научные аспекты этиологии и патогенеза сальмонеллеза птиц // Интенсификация птицеводства: Сб. науч. тр. Харьков: Харьковский ГАУ, 1991.-С. 13-16.

11. Бакулин В.А. Болезни птиц. СПб, 2006. - 688 с. (С. 294-295).

12. Балинер JI.M., Опарин Ю.Г., Багаутдинов З.Ф., Ленёв C.B. Влияние некоторых факторов на выживаемость Salmonella typhimurium в процессе изготовления сухого препарата // Сб. науч. тр. ВГНКИ. М., 2001.-т. 62.-С. 65-68.

13. Бой Кикимото Баширу Бависе. Профилактика токсикоинфекции сальмонеллезной этиологии тушек птицы с использованием бактериофагов: Автореф. дис. канд. вет. наук / РУДН. М., 2001. - С. 37-90.

14. Бессарабов Б.Ф. Болезни голубей. М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2004.- 158 с.

15. Бессарабов Б.Ф. Болезни кур. М.: Россельхозиздат, 1983. - 135 с.

16. Бессарабов Б.Ф., Мельникова И.И., Сушкова Н.К., Сафиков С.Ю. Болезни птиц. СПб.: Лань, 2009. - 445 с.

17. Бессарабов Б.Ф., Садчиков С.Ю. Эмбриональные и постэмбриональные заболевания сельскохозяйственных птиц. М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2003. - 120 с.

18. Бойченко М.Н. Сальмонеллез: распространение возбудителя в организме // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -1984.-№10.-С. 3-6.

19. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц / Под ред. Б.У. Кел-нека и Джона X. Барнса, Ч.У. Биэрда, Л.Р. Макдугалда, И.М. Сэйфа; Пер. с англ. М.: «АКВАРИУМ БУК», 2003. - 1232 с.

20. Борисов Л.Б., Хан-Фомина В.А. Биологическая характеристика фагов энтеропатогенных кишечных палочек // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1970. - №6. - С. 34-37.

21. Булатов A.C. Биологические особенности сальмонелл, выделенных с объектов внешней среды птицефабрик, и пути снижения ее контаминации: Автореф. дисс. канд. вет. наук / ВНИИ Санитарии. М., 1999. -С. 8-12.

22. Ваганова Л.Ю. Лечебно-профилактическое и биостимулирующее действие галлиферма на цыплят при сальмонеллёзе: Автореф. дисс. канд. вет. наук / МГАВМиБ. М., 1993. - 17 с.

23. Выдрина Е.И. Куры как резервуар сальмонеллеза // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1962. - Т. 10. - вып. 1. - С. 151-155.

24. Ганюшкин В.Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии // Вопросы ветеринарной микробиологии, эпизоотологии, вете-ринарно-санитарной экспертизы. Ульяновск: УГСХА, 1988. - Ч. 1. — С. 84.

25. Ганюшкин В.Я. Специфичность литического действия сальмонеллез-ных бактериофагов // Вопросы ветеринарной микробиологии, эпизоотологии, ветеринарно-санитарной экспертизы. Ульяновск, 1994. - Ч. 2. - С.22-26.

26. Гласкович A.A. Длительность бактерионосительства у гусей при экспериментальном сальмонеллезе // Ветеринарная наука производству. -М, 1989.-Т. 27.-С. 58-61.

27. Грязнева Т.Н. Технология производства пробиотика «Биод-5» и его применение в ветеринарии // Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов. Покров: ГПУ ВНИИВВМ, 2003. - С. 609-614.

28. Гусев В.В. Разработка технологии производства вакцины против сальмонеллеза голубей: Автореф. дисс. канд. биол. наук / ФГУ ВНИ-ТИБП. Щелково, 2005. - 21 с.

29. Гусев В.В., Гусев Вик.В. Сальмонеллезная инфекция у голубей // Птицеводство. 2003. - №5. - С. 48-53.

30. Данилевская Н.В. Фармакостимуляция продуктивности животных пробиотическими препаратами: Дисс. докт. вет. наук / ФГОУ ВПО МГАВМиБ. М., 2007. - 330 с.

31. Данилов М.М. Сальмонеллезные инфекции: Сб. научн. тр. М.: Мед-издат, 1963. - С. 18-42.

32. Девришов Д.А. Разработка и изучение свойств иммуномодуляторов и биологических препаратов для профилактики и лечения болезней молодняка сельскохозяйственных животных: Автореф. дисс. докт. биол. наук / МГАВМиБ. М., 2000. - 53 с.

33. Дёмкин Г.П., Салаутин В.В. Диагностика и профилактика сальмонеллеза птиц // Тезисы докл. Междунар. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции». Саратов: СГАУ, 1995. - С. 66-67.

34. Джамбулатов З.М. Сальмонеллез овец в южных регионах России: Автореф. дисс. докт. вет. наук; МГАВМиБ. М., 2004. - 34 с.

35. Добрина М.Н. Роль голубей в распространении Salmonella enteritidis инфекции птиц на птицефабриках // Ветеринария и кормление. 2011. - № 3. - С. 22.

36. Дональд К.П. Фармакологические препараты в ветеринарной медицине. М.: Аквариум ЛТД, 2002. - 856 с.

37. Дрогалина H.A. Селекция бактериофагов и фагоустойчивых аттенуи-рованных штаммов Salmonella typhimurium для производства лечебно-профилактического препарата против сальмонеллеза кур: Автореф. дисс. канд. биол. наук / ФГУ ВГНКИ. М., 2008. - 33 с.

38. Ельников В.В. Диагностика и вакцинопрофилактика болезни Ньюкасла // Российский ветеринарный журнал. 2007. - №1. - С. 22-23.

39. Ендондорж А., Сарантула Б., Урбан В.П. Сальмонеллезный аборт кобыл // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: Сб. науч. тр. СПбГАВМ. СПб, 1997. - С. 54-56.

40. Ефремов В.Е., Кузьмин В.А., Бондаренко В.М., Смирнова Г.В. Применение живой сальмонеллёзной бивалентной вакцины для снижения циркуляции сальмонелл на птицефабрике // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1996. - №5. - С. 36-39.

41. Женихова Н.И., Кормщикова A.C., Кондратьева Е.С. Патоморфология сальмонеллеза голубей // Ветеринарный доктор. 2011. - № 1. — С. 1516.

42. Загаевский И.С. Сальмонеллезы животных. Киев: Урожай, 1977. -143 с.

43. Заерко В.И. Опыт промышленного применения вакцины для профилактики сальмонеллеза животных и птиц // Актуальные проблемы ветеринарии. Барнаул, 1995. - №2. - С. 29-34.

44. Заерко В.И., Лемешко Л.В. Промышленная технология изготовления бактериофагов // Актуальные проблемы повышения продуктивности и охраны здоровья животных. Ставрополь: Ставропольский ГАУ, 2006. -С. 351-353.

45. Зинченко Е.В., Панин А.Н. Иммунобиотики в ветеринарной практике. Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 2000. - 164 с.

46. Зинченко Е.В. Практические аспекты применения пробиотических препаратов в птицеводстве // Ветеринария и кормление. 2006. - № 2. -С. 22.

47. Золотухин С.Н. Создание и разработка схем применения диагностических биопрепаратов на основе выделенных и изученных бактериофагов энтеробактерий: Автореф. дисс. докт. биол. наук / ФГОУ ВПО УГСХА. Ульяновск, 2007. - 40 с.

48. Зотова З.В. Антигенные свойства средств специфической профилактики ортомиксо- и парамиксовирусных инфекций у голубей: Дисс. канд. биол. наук / ФГБОУ ВПО МГАВМиБ. М., 2011. - 173 с.

49. Зудова Т.А., Зудов А.А. Фаготерапия и иммунные реакции макроорганизма // Актуальные проблемы и перспективы развития животноводства. Самара: Самарская ГСХА, 2002. - С. 125-129.

50. Зуев В.А. Использование признака лизинообразования (Е признак) для внутривидовой дифференциации фагов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1965. - №9 . - С.42-44.

51. Зуев В.А. Литическая активность бактериальных вирусов. М., 1969. - 184 с.

52. Иванов А.С. Антибиотикорезистентность и антибактериальная терапия сальмонеллезов // Клиническая микробиология, антимикробная химиотерапия. 2009. - т. 11. - №4. - С. 305-326.

53. Инкубация яиц сельскохозяйственной птицы: Методические рекомендации / Под общ. ред. В.И. Фисинина; ВНИТИП. Сергиев Посад, 2005.- 118 с.

54. Кайтмазова М.Г. Сальмонеллез кур в условиях промышленного птицеводства Дагестана: Дисс. канд. вет. наук / Ставропольский ГАУ. -Ставрополь, 2004. 100 с.

55. Кальницкая О.И. Ветеринарно-санитарный контроль остаточных количеств антибиотиков в сырье и продуктах животного происхождения: Автореф. дисс. докт. вет. наук; ГОУ ВПО МГУПБ. М., 2008. - 45 с.

56. Кальницкая О.И., Петрова Е.И. Влияние антибиотиков, обнаруженных в продуктах животноводства, на здоровье человека // Качество, стандартизация, контроль: теория и практика: Мат-лы 6-ой Междунар. науч.-практ. конф. Ялта, 2006. - С. 60-63.

57. Кальницкая О.И., Баранов М.А. Нормативные акты в области обеспечения безопасности сырья // Живые системы и биологическая безопасность населения: Мат-лы 4-ой Междунар. науч. конф. студентов и мол. уч. М.: ГОУ ВПО МГУПБ. - 17 ноября 2005. - С. 199-201.

58. Кальницкая О.И. Проблема применения антибиотиков // Проблемы биодеструкции техногенных загрязнителей окружающей среды: Мат-лы Междунар. конф. 14-16 сент. 2005 г. Саратов: ИБФРМ РАН, 2005. -С. 132-133.

59. Карпов В.П. Болезни птиц. М.: Агропромиздат, 1985. - С. 23-40.

60. Качмазов Г.С., Дарченко В.А. Патоморфологические изменения у цыплят при экспериментальном сальмонеллезе, вызванном S. Enteritidis // Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных и птиц: Сб. науч. тр. ЛВИ. Л., 1990. - С. 44-46.

61. Кикнадзе Г.П., Чапишвили Т.Г. Фагопрофилактика экспериментального мышиного тифа // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1972. - №12. - С. 131-132.

62. Кожемяка Н.В. Предупреждение заболеваний, влияющих на качество яиц и продуктивность кур // Ветеринария. 2008. - №4. - С. 52-54.

63. Козак С.С., Гусев A.A. Профилактика сальмонеллеза в птицеперерабатывающей промышленности // Мясная промышленность. Обзор информации. Минск, 1992. - С. 52.

64. Коломыцев A.JL, Филоматова В.А., Орлов A.A., Книзе A.B. Современные средства борьбы при болезни Ньюкасла в странах мира, использованные в 2004-2005 гг. // Ветеринарная патология. 2007. - №2. -С. 77-78.

65. Красильникова В.М., Верехин В.В., Воложанцев Н.В. Изучение плаз-мид Salmonella enteritidis // Сб. науч. тр. ВГНКИ. М.: ВГНКИ, 1996. -Т. 59.-С. 69-75.

66. Кузин А.И., Смирнова Т.А., Володина Л.И., Нетыкса Е.М., Мазанов А.Л., Азизбекян P.P. Вариабльность фагов Bassicus thuringiensis С-2 морфологии // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1988. -№ 12.-С. 29-33.

67. Кузьмин В.А. Сальмонеллез птиц остается проблемой // Архив вет. наук.-СПб, 2003.-С. 213-221.

68. Кузьмин В.А. Сальмонеллёзная инфекция в условиях птицефабрики, методы профилактики и оздоровления: Автореф. дисс. докт. вет. наук; СПбАВМ. СПб., 1995. - 16 с.

69. Куликовский A.B. Совещание ВОЗ по проблеме сальмонеллеза в животноводстве // Ветеринария. 1999. - №11. - С. 67-69.

70. Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев С.В., Малахов Ю.Н., Яковлев С.С. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур. М.: МСХ/ МГАВМиБ, 2002. - 34 с.

71. Черкасский Б.Л., Рожнова С.Ш., Тендетник Ю.А. и др. Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды. М.: ЦНИИ эпидемиологии Минздрава СССР, 1990. - 58 с.

72. Левшин А.Е. Система безопасности НАССР расширяет рынок продукции птицеводства // Птица и птицепродукты. 2006. - № 1. - С. 2426.

73. Лекарственные средства для животных. Кормовые добавки. Корма: Справочник / Под редакцией Б.В. Виолина. М.: Издательский дом «Медол». - 2006. - 259 с.

74. Ленев C.B. Мероприятия по профилактике сальмонеллеза птиц / II Междунар. вет. конгресс, VIII Междунар. вет. конгресс по птицеводству, г. Москва, 19-22 апреля 2012 г. М, 2012. - С. 102-106.

75. Ленёв C.B., Киселёв П.В, Профилактика сальмонеллеза энтеритидис у цыплят-бройлеров: Сб. науч. тр. ВГНКИ. М.: ФГУ ВГНКИ, 1995. - Т. 57.-С. 47-53.

76. Ленёв C.B., Виткова О.Н., Калмыкова М.В. Сальмонеллез птиц и его специфическая профилактика /1 Междунар. вет. конгресс по птицеводству. М., 2005. - С. 181-183.

77. Ленёв C.B., Малахов Ю.А., Шорохов В.В. Сальмофаг лечебно-профилактический препарат // Мат-лы науч. конф., посвящ. 50-летию Краснодарской НИВС. - Краснодар, 1996. - Ч. 1. - С.26-30.

78. Лимаренко A.A., Дубров И.С., Таймасуков A.A., Забашта С.Н. Болезни сельскохозяйственных птиц. СПб.: Лань, 2005. - С. 231-241.

79. Малик Н.И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: Автореф. дисс. докт. биол. наук / ФГУ ВГНКИ. М., 2002. -53 с.

80. Мащенко A.C., Алутин В.В., Тутов С.А. Эффективная и своевременная диагностика сальмонеллезов гарантия безопасности // Междунар. вет. конгресс по птицеводству, 21-23 марта 2006 г. - М., 2006. - С.87-88.

81. Михайлова В.В., Виткова О.Н., Белоусова Р.В. Изучение некоторых биологических свойств изолятов вируса ньюкаслской болезни, выделенных от голубей // Мат-лы 3-й конф. по уч.-мет. и науч.-практ. раб. акад. М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2006. - С. 20-23.

82. Мишурнова Н.В., Киржаева Ф.С. Препарат СТФ-1/56 эффективное средство профилактики сальмонеллёза птиц // Ветеринария. - 1993. -№10. - С.26-30.

83. Муромцев К.Н. Современное состояние фагопрофилактики и фаготерапии сельскохозяйственных животных // Бактериофаги в ветеринарной практике. М., 1947.-С. 11-18.

84. Натензон Б.Н. Рекомендации по диагностике, профилактике и борьбе с сальмонеллезом птиц. Кишинев: Госагропром МССР, «Молдптице-пром», 1979.-С. 5-11.

85. Нияз Н.М. Выделение бактериофагов из сточных вод и изучение их литического действия на стафилококки при маститах // Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных. Бюллетень ВИЭВ. М., 1988.-Т. 65.-С. 35-37.

86. Определитель бактерий Берджи / Под ред. Дж. Хоулт, Н. Криг, П. Снит, Д.Ж. Стейли, С. Уильяме; в 2-х т. М.: Мир, 1997. -Т.1.-432 с.

87. Павлов С.И. Мониторинг и совершенствование специфической профилактики сальмонеллеза свиней и птиц: Автореф. дисс. канд. биол. наук / ФБУН ГНЦ ПМБ. Оболенск, 2004. - 22 с.

88. Панин А.Н., Малик Н.И., Малик Е.В. Иммунобиология и кишечная микрофлора. М.: Аграрная наука, 1998. - 48 с.

89. Петрашин В.П. Вакцинопрофилактика сальмонеллеза водоплавающей птицы // Болезни сельскохозяйственных животных. 1987. - С. 95-112.

90. Пименов Н.В., Куриленко А.П., Ленев С.В. Совершенствование борьбы с сальмонеллезом кур // Научные основы технологии производства ветеринарных биопрепаратов: Сб. докл. Междунар. конф. мол. ученых, 5-6 дек. 2002. Щелково: ВНИТИБП, 2002. - С. 102-105.

91. Пименов Н.В. Эффективность бивалентного сальмофага против сальмонеллеза энтеритидис и пуллороза-тифа кур: Дисс. канд. биол. наук / МГАВМиБ. М., 2003. - 126 с.

92. Плохинский H.A. Математические методы в биологии. М.: Изд. МГУ, 1978.-265 с.

93. Покровский В.И., Черкасский Б.Л. Сальмонеллезы. М.: Медицина, 1995.-221 с.

94. Правила ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарная экспертиза мяса и мясных продуктов. М.: ВО «Агропром-издат», 1988. - 61 с.

95. Прандини Ф. Контроль Salmonella enteritidis и Salmonella typhimurium у коммерческих несушек в Европе / VII Международный ветеринарныйконгресс по птицеводству, Москва, 12-15 апреля 2011 г. М., 2011. - С. 112-116.

96. Проведение ветеринарной дезинфекции объектов животноводства: инструкция / Под ред. Г.А. Зайцевой. М.: ВО «Агропромиздат», 1989. -68 с.

97. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных: Сб. санит. и вет. правил / Госкомсанэпиднадзор РФ, Департамент ветеринарии РФ. М., 1996. - С. 50-70.

98. Прудников B.C. Болезни голубей, певчих и декоративных птиц. -Минск, 2001.-75 с.

99. Радченко В.А. S. enteritidis инфекция у кур (эпизоотология, патогенез, меры профилактики): Автореф. дисс. канд. вет. наук / СПбГАВМ. -СПб, 1993.-17 с.

100. Ревенко И.П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике. Киев: Урожай, 1978. - 87 с.

101. Рекомендации по оздоровлению птицеводческих хозяйств от сальмонелла тифимуриум инфекции / Ф.С. Киржаев, A.C. Персов, Ю.А. Малахов и др. JL, 1986. - 18 с.

102. Рекомендации по получению стад кур, свободных от пуллороза-тифа. Кишинев: Госагропром МССР, «Молдптицепром». - 1987. - 5 с.

103. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология / Пер. с англ. М.: Мир, 2000. - 592 с.

104. Ромин A.B. Испытание пуллорного бактериофога в широком производственном опыте // Сб. науч. тр. ВГНКИ. М.: ВГНКИ, 1955. - Т. 5. -С. 120-128.

105. Русалеев B.C. Разработка инактивированных вакцин против сальмо-неллеза и пастереллеза свиней // Современные аспекты патологии животных: Тезисы докл. Владимир: ВНИИЗЖ, 1999. - С. 141-144.

106. Салаутин В.В. Патоморфология и дифференциальная диагностика сальмонеллеза птиц, вызванного различными серовариантами возбудителя: Дисс. докт. вет. наук; ФГОУ ВПО Саратовский ГАУ. Саратов, 2004. - 443 с.

107. Салаутин В.В. Дифференциальная диагностика сальмонеллеза птиц // Ветеринария. 2004. - №2. - С. 22-25.

108. Салаутин В.В. Распространенность сальмонеллезов птиц и их связь с возникновением пищевых токсикоинфекций у людей // Ветеринария и зоотехния: Юбилейный сб. науч. тр. Саратов, 2000. - С. 69.

109. Сергевнин В.И. Научно-методические основы эпизоотолого-эпидемиологического надзора за сальмонеллёзной инфекцией // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1997. - №4. - С. 32-34.

110. Сидоров М.А., Скородумов Д.П., В.Б. Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. М.: Колос, 1995. - С. 194-204.

111. Скородумов Д.И., Субботин В.В., Сидоров М.А., Костенко Т.С. Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных. -М.: ИзографЪ, 2005. 656 с.

112. Смирнов Д., Рождественская Т., Кононенко Е., Светоч Э. Инактиви-рованные вакцины против сальмонеллеза птиц // Птицеводство. 2011. - №8. - С. 35-39.

113. Солодовников Ю.П., Тибекин А.Т., Черкасова JI.B., Лыткима И.Н., Зайцев Б.Е. Распространение сальмонеллезов в Москве и пути их профилактики // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -2004. -№5. с. 36-39.

114. Степанова JI.K. Антигенная структура сальмонелл и роль поверхностных антигенов в вирулентности и иммуногенности: Автореф. дисс. докт. мед. наук / ПМГМИ. М.,1980 - 36 с.

115. Столляр Т.А. Болезни голубей. М.: ВНИТИП, 2001. - 205 с.

116. Субботин B.B. Биотехнология пробиотика Лактобифадола (бифаци-добактерина) и его лечебно-профилактическая эффективность: Дисс. докт. вет. наук / МГУПБ. М., 1999. - 315 с.

117. Субботин В.В., Данилевская Н.В. Опыт разработки и применения пробиотика ветеринарного назначения в промышленном птицеводстве: Руководство. М., 2008. - 35 с.

118. Субботин В.М. Современные лекарственные средства в ветеринарии. Ростов-на-Дону: Феникс, 2000. - 592 с.

119. Сюрин В. Н. Псевдочума птиц (ньюкаслская болезнь). М.: Сель-хозиздат, 1963. - 304 с.

120. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. М.: ВНИИТиБП, 1998. - 928 с.

121. Тихоненко A.C. Ультраструктура вирусов бактерий. М., 1968. - 89 с.

122. Топурия Л.Ю. Пробиотикотерапия сальмонеллезов сельскохозяйственной птицы // Актуальные вопросы ветеринарии: Сб. науч. тр. -Оренбург, 1997.-С. 51-52.

123. Цыганова C.B. Бактериофаг IBP-1 против сальмонелла энтеритидис-инфекции кур / II Междунар. вет. конгресс, VIII Междунар. вет. конгресс по птицеводству, г. Москва, 19-22 апреля 2012 г. М, 2012. - С. 84-87.

124. Чанишвили Т.Г. К механизму образования фагоустойчивых форм микроорганизмов // Вопросы молекулярной генетики и генетики микроорганизмов. М., ГНИИСКМБП, 1968. - С. 225-241.

125. Чанишвили Т.Г. Некоторые теоретические и практические аспекты использования бактериофагов в борьбе с кишечными инфекциями //

126. Актуальные вопросы стафилококковых и кишечных инфекций. Алма-Ата, 1980.-С. 220-221.

127. Черкасский Б.Л. Современная эволюция сальмонеллезов // Тезисы докл. Междунар. симп. по пищевым зоонозам. М.: МГМИ, 1995. - С. 18-19.

128. Чиркова И.В. Биологические свойства бактериофагов к Salmonella ty-phimurium и их применение в борьбе с сальмонеллезом голубей: Дисс. канд. биол. наук / ФГОУ ВПО МГАВМиБ. М., 2008. - 136 с.

129. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии // Антибиотики и медицинская биотехнология. 1987. - Т. 32. - № 3. - С. 38-41.

130. Шорохов P.P., Сусский Е.В., Абарцумян Г.А. Меры борьбы и профилактики сальмонеллеза домашних голубей // Сб. науч. тр. ВГНКИ. -М.: ФГУ ВГНКИ, 2005. Т. 65. - С. 135-140.

131. Шумский Н.И. Основы профилактики болезней голубей. Воронеж: ГУ ВорОВЛ, 1997.-48 с.

132. Шур И.В. Заболевания сальмонеллезной этиологии. М.: Медицина, 1970.-335 с.

133. Шустер Б.Ю., Малахов Ю.А., Киржаев Ф.С., Персов A.C., Зуев В.Г. Вакцина против сальмонеллеза водоплавающих птиц // Новое в борьбе с болезнями птиц. Л., 1984. - С. 24-26.

134. Шустер Б.Ю. Специфическая профилактика сальмонеллеза сельскохозяйственных животных // Ветеринария. 1994. - №2. - С.24-26.

135. Энтеробактерии: Руководство для врачей / И.В. Голубева, В.А. Ки-лессо, Б.С. Киселева и др.; Под ред. В.И. Покровского. -М.: Медицина, 1983.-321 с.

136. Якупова Р.Ш., Шафеев М.Ш., Зорина Л.М. Сальмонеллезы. Эпидемиология и профилактика. Казань: КГМУ, 2001. - 34 с.

137. Aarestrup F.M., Wiuff C., Molbak K., Threlfall E.J. Is it time to change fluoroquinolone breakpoints for Salmonella spp.? // Antimicrob. Agents. Chemother. 2003. - №47. - P. 827-829.

138. Ackermann H.W. Frequency of morphological phage descriptions // Arch. Virol.-2001.-№146.-P. 843-857.

139. Alexander D.J., Kaleta E.F., Baldauf C. Newcastle Disease // Kluwer. Academic. Publishers. Boston, MA, 1988. - 366 p.

140. Alexander D.J., Russell P.H., Parsons G. et al. Antigenic and biological characterisation of avian paramyxovirus type 1 isolates from pigeons an international collaborative study // Avian Pathology. - 1985. - № 14. - P. 365-376.

141. Alexander D.J., Wilson G.W., Russell P.H., Lister S.A., Parsons G. Newcastle disease outbreaks in fowl in Great Britain during 1984 // Vet. Rec. -1985.-№117.-P. 429-434.

142. Anderson P.A. The 1990-1991 Salmonella pullorum outbreak overview and evaluation // Animal Health. Insight VSA Departament of Agriculture Animal and Plant Health Inspection Service, Veterinary Services Summer, 1992.-P. 1-12.

143. Archambaud M., Gerbaud G., Labau E., Marty N., Courvalin P. Possible in-vivo transfer of (3-lactamase TEM-3 from Klebsiella pneumoniae to Salmonella kedougou // J. Antimicrob. Chemother. 1991. - №27. - P. 427436.

144. Barrow P.A. Experimental infection of chickens with Salmonella enteriti-dis // Avian Pathol. 1991. -№20. -P. 145-153.

145. Barrow P.A., Tucker J.F., Simpson J.M. Inhibition of colonization of the chicken alimentary tract with Salmonella typhimurium gram-negative facultatively anaerobic bacteria // Epidem. Inf. 1987. - №98(3). - P. 311-322.

146. Barrow P.A., Huggins M.B., Lovell M.A., Simpson J.M. Observation on the pathogenesis of experimental Salmonella typhimurium infection in chickens // Research in Veterinary Scince. 1987. - №42(2). - P. 194-199.

147. Barrow P.A., Smith H.W., Tucker J.F. The effect of feeding diets containing avoparcin on the excretion of Salmonella by chickens experimentally infected with natural sources of Salmonella organism // J. Hyg (Lond). 1984. -P. 444.

148. Barrow P.A., Lovell M.A., Berchieri A. The use of two live attenuated vaccines to, immunize egg-laying hens against Salmonella enteritidis phage type 4 // Avian. Pathol. 1991. - №20. - P. 681-692.

149. Berchier A., De Carvalho Jr. A.M., Femandes S.A., Iba A.M. Detection of Salmonella typhimurium in a broiler chicken flock // Rev. Microbiol. Sao. Paulo. 1993.-№24.-P. 212-213.

150. Noel R.K., John G.H., Bergeys. Manual of systematic bacteriology. -1984.-P. 7-713.

151. Biancifiori F., Fioroni A. An occurrence of Newcastle disease in pigeons: virological and serological studies on the isolates // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 1983. - №6. - C. 247-252.

152. Bjerrum L., Engberg R.M., Pedersen K. Infection models for Salmonella typhimurium DT 110 in day-old and 14- day-old broiler chickens kept in isolators // Avian Diseases. 2003. - №47. - P. 1474-1480.

153. Bole-Hribovsek V., Zorman-Rojs O., Zdovc L., Urbanicic A. Vcinkovitost preparata Enroxil 10 % Krkav, terapiji piscancev eksperimentalno ocuzynih S. Enteritidis // Kongres microbiologov Slovenije z mednarodno udelezbo. Portoroz. 1998. - S. 138-141.

154. Bovzovbaa K., Nagaraja K.V., Newman J.A., Pomeroy B.S. Vse of membrane proteins from Salmonella gallinarum for prevention of fowl typhoid infection in chickens // Avian Diseases. 1987. - № 31. - P. 699-704.

155. Bowe F., Lipps C.J., Tsolis R.M., Groisman E., Heffron F., Kusters J.G. At Least Four Percent of the Salmonella typhimurium Genome Is Required for Fatal Infection of Mice // Infect. Immun. 1998. - Vol. 66. - №7. - P. 3372-3377.

156. Brown D.D., Ross J.G., Smith A.F.G. Experimental infection of poultry with Salmonella infantis // Res. Vet. Sci. 1976. - № 20. - P. 273- 243.

157. Btaszczak B., Rzewuska M., Binek M. Czestosc zakazen drobin i lekoo-pomosc pateczek Salmonella // Med. Wet. 1996. - №52 (6). - S. 392-395.

158. Bukholm G., Degre M. Effect of human gamma interferon on invasiveness of Salmonella typhimurium in HEp-2 cell Cultures // S. Interferon Res. -1985.-Vol. 5. -№1. P. 45-53.

159. Chambers D.L., Hulse A.C. Das Salmonella Serovars in the Herpetofauna of Indiana County, Pennsylvania // Appl. Environ Microbiol. 2006. - Vol. 72. -№5.-P. 3771-3773.

160. Charles S.D., Hussain I., Choi C.U., Nagaraja K.V., Sivanandan V. Adju-vanted subunit vaccines for the control of Salmonella enteritidis infection in fiirkeys // Am. J. Res. 1994. - №55. - P. 636- 642.

161. Chart H., Griffiths E. The availability of iron and the growth of vibrio vulnificus in sera from patients with haemochromatosis // FEMS Microbiol. Lett. 1985.- №26. - P. 227-231.

162. Chiu C.H., Su L.H., Chu C., et al. Isolation of Salmonella enterica serotype choleraesuis resistant to ceftriaxone and ciprofloxacin // The Lancet. 2004. -№363.-P. 1285-1286.

163. Cooper G.L., Venables L.M., Nicholas R.A., Cullen G.A. Further studies of the application of live Salmonella enteritidis aro A vaccines in chickens // Vet. rec. 1993. - Vol. 133. - №2. - P. 31-36.

164. Cooper G.L., Venables L.M., Woodward M.S., Hormaeche C.E. Vaccination of chicken with strain CVL30, a genetically defined Salmonella enteritidis aro A live oral vaccine candidate // Infect. Immun. 1994. - №62. - P. 4747. 4754.

165. Cooper G.L., Venablis L.M., Nicholas R.A.L., Cullen G.A. Vaccination of chickens with chicken-derived Salmonella enteritidis phage type 4 aro A live oral Salmonella vaccines // Vaccine. 1992. - №10. - P. 247-254.

166. Cowden J.M., Lynch P., Joseph C.A. et al. Case-control study of infection with Salmonella enteritidis phage type 4 in England // Brit. Ned. J. 1998. -Vol. 299. - №6702. - P. 771-773.

167. Cox N. A. Salmonella and other Enterobacteriaceae found in commercial poultry Sect // Poultry Sci. 1983. - Vol. 62. - P. 2169-2175.

168. Craven S.E. Altered colonizing ability for the ceca of broiler chicks by lipopolysaccharide-deficient mutants of Salmonella typhimurium // Avian. Dis. 1994. - №38. - P. 401-408.

169. Cross G. Paramyxovirus-1 Infection (Newcastle Disease) of Pigeons // Seminars in Avian and Exotic Pet Medicine. 1995. - №4(2). - P. 92-95.

170. D'Aoust J.-Y., Sewell A.M., Daley E., Greco P. Antibiotic resistance of agricultural and foodbome Salmonella in Canada // J. Food. Prot. 1986-1989.-№55.-P. 428-434.

171. Delbruck M. The growth of bacteriophages and lysis of the host // J. Gen. Physiol. 1940. - № 23. - P. 643-647.

172. Dorn P. Experimenteller und Feld-einsatz von enrofloxacin (Baytril) bein Gelfugel // Tagung der Fachgruppe Geflugelkrankheiten in Verbindung mit. 1988. - S. 166-179.

173. Dueger E.L., House J.K., Heithoff D.M., Mahan M.J. Salmonella DNA Adenina Methylase Mutants Elicit Protective Immune Respounses to Homologous and Heterologous Serovars in Chickens // Infect Immun. 2001. -№69(12).-P. 7950-7954.

174. Erbeck D.H., Melaughlin B.G., Singh S.N. Pullorum Disease with Unusual Signs in Two Backyard Chicken Flocks // Avian. Dis. 1993. - Vol. 37. -№3. - P. 895-897.

175. Ernst R.K., Dombroski D.M., Merrick S.M. Anaerobiosis, type I fimbriae and growth phase are factors that affect invasion of HEp-Z cells by Salmonella typhimurium // Infect. Immun. 1990. - №58. - P. 2014-2016.

176. Gast R.K., Beard C.W. Age-related changel in the persistence and pathogenicity of Salmonella typhimurium in chicks // Poult. Sei. 1989. - № 68. -P. 1454-1460.

177. Gast R.K., Stephens J.F., Foster D.N. Effect of kanamycin administration to poultry on the inter-species transmission of drug-resistant Salmonella // Poult. Sei. 1988. - №67. - P. 699-706.

178. Gast R.K., Stephens J.F. Effect of kanamycin administration to poultry on the proliferation of drug-resistant Salmonella // Poult. Sei. 1988. - №67. -P. 689-698.

179. Gast R.K., Stone H.D., Holt P.S. Evaluation of the efficacy of oil-emulsion bacterins, for reducing fecal shedding of Salmonella enteritidis by laying hens // Aviant. Dis. 1993. - № 37. - P. 1085-1091.

180. Gast R.K., Beard C.W. Isolation of Salmonella enteritidis from internal organs of experimentally infected hens // Avian. Dis. 1990. - №34. - P. 991993.

181. Gast R. Paratyphoid infections // Diseases of poultry. 1997. - P. 98-110.

182. Gast R.K., Beard C.W. Production of Salmonella enteritidis-contaminated eggs by experimentally infected hens // Avian. Dis. 1990. - №34. - P. 438-446.

183. Georgiades G.K. Prevalence of Salmonella in pigeon, canaries and psit-tacines // Hellenic Veterinary Medical Society. 2002. - № 53(2). - P. 113118.

184. Glynn M.K., Bopp C., Dewitt W., et al. Emergence of multidrug-resistant Salmonella enterica serotype typhimurium DTI04 infections in the United States // N. Engl. J. Med. 1998. - №338. - P. 1333-1338.

185. Gooderham K. Biocecurity and Vaccination in eradicating Salmonella enteritidis // Selez. Veter. 1998. -№8/9. - P. 561-571.

186. Goodnough M.C., Sohnson E.A. Control of Salmonella enteritidis infections in poultry by polymyxin B and frimethoprim // Appi. Environ. Microbiol. 1991. - №57.-P. 785-788.

187. Gorham S.L., Kadavil K., Vaughan E., Lambert H., Abel J., Pert B. Gross and microscopic lesions in young chickens experimentally in fected with Salmonella enteritidis // Avian. Dis. 1994. - №38. - P. 816-821.

188. Gratia A. Des Relation numerigues entre bacterins lygogenes et particules de bacteriophages // Ann. Instit. Pasteur. 1936. - V. 57. - №6. - P. 652676.

189. Griffin H.G., Barrow P.A. Construction of aro-A mutant of Salmonella serotype gallinarum: Its effectiveness in immunization against experimental fow typhoid // Vaccine. 1993. - № 11. - P. 457-462.

190. Gross W.B. Factors affecting the development of respiratory disease complex in chickens // Avian. Dis. 1990. - №34. - P. 607-610.

191. Grund S., Springer S. Zur Schutzimpfund gegen die Taubensalmonellose // Berl. U. munch. Tierarzti. Wschr, 1997. - Jg. 110.-H. 5.-S. 171-175.

192. Haddow J.R., Idnani J.A. Vaccination against Newcastle (Ranikhet) disease // Indian J. Vet. Sci. 1946. - № 16. - P. 45-53.

193. Hanson N.D., Moland E.S., Hossain A., et al. Unusual Salmonella enterica serotype tyrphimurium isolate producing CMY-7, SHV-9 and OXA-30 (3-lactamases // J. Antimicrob. Chemother. 2002. - №49. - P. 1011-1014.

194. Harry E.G. The effect on embryonic and chick mortality of yolk contamination with bacteria from the hen // Vet. Rec. 1957. - №69. - P. 14331440.

195. Hassan J.O., Curtiss R. Effect of vaccination of hens with an avirulent strain of Salmonella typhimurium on immurity of progeny challenged with wild-Type Salmonella strains // Infect. Immun. 1996. - №64(3). - P. 938944.

196. He X.Q., Pan R.N. Bacteriophage lytic patterns for identification of Salmonella, Shigella, E.coli, Citrobacter freudi and Enterobacter cloacae // J. of Clinical microbiology. 1992. - Vol. 30. - №3. - P. 590-594.

197. Helmuth R., Stephan R., Bunge C., Hoog B., Steinbeck A., Bnlling E. Epidemiology of virulence-associated plasmids and outer membrane protein patterns within seven common Salmonella serotypes // Infect Immun. -1985.-Vol. 48. №1. - P. 75-182.

198. Hoiseth S.K., Stocker B.A. Genes arof serCof Salmonella typhimurium constitute an operon // J. Bacteriol. 1985. - Vol. 63. - №1. -P. 355-361.

199. Hoop R.K., Pospischil A. Bacteriological, serological, histological and immunohistochemical finding' in laying hens with naturally acquired Salmonella enteritidis phage type 4 infection // Vet. Rec. 1993. - № 133. - P. 391-393.

200. Horiushi S., Inagaki Y., Oramura N., Nakaya R., Yamamoto N. Type 1 pili enhance the invasion of Salmonella braenderup and Salmonella typhi-murium to Hela cells // Microbiol. Immunol. 1992. - Vol. 36. - №6. - P. 593-602.

201. Hoszowski A., Wasul D., Truszszynska. Lekoopornosc sczewpow Salmonella izolowanych ot zwierzat iz pasz na terenie Polski wlafach 1994-1996 // Med. Wet. 1998. - № 54(1). - S. 33-37.

202. Humbert F., Carraminana J.J., Lalande F., Salvat G. Bacteriological monitoring of Salmonella enteritidis carrier birda after decontamination using en-roflokxicin, competitive exlusion and movement of birds // Vet. Rec. -1997.-№141.-P. 297-299.

203. Iyer S.G., Dobson N. A successful method of immunization against Newcastle disease of fowls // Vet. Rec. 1940. - № 52. - P. 889-894.

204. Jaromlan H.I., Shirk R.J. Effect of chlortetracycline feeding on the Salmonella reservoir in chickens // J. Appl. Bacteriol. 1976. - №40. - 61 p.

205. Jean S.-S., Wng P.-R., Hsueh J.-Y. Bacteremia caused by Salmonella enterica serotype Choleraesuis in Taiwan // J. Microbiol. Immunol. Infect. -2006.-№39.-P. 358-365.

206. Kauffman F. Das Salmonella Sub-genus IV // Ann. Immunol. Hung. -1966. №9. - P.77-80.

207. Kauffmann F. Zur Differential Diagnose der Salmomella-Subgenus I, II, and III // Acta Parhol. Micribiol. Scand. 1964. - № 58. - P. 109-113.

208. Kauri P., Chopra K. Probiotics: Potential pharmaceutical applications // Eur. J. Pharm. Sciens. 2002. - Vol. 15. - № 1. - P. 1-9.

209. Kohler B., Poppel M. Reproduktion Salmonella enteritidis freier Kuken aus einem enfizienten Grosselterntierbestand durch Selection infizierter Tiere und Herden-behandlung mit Enrofloxacin // Tierarztl Umschau. - 1994. -№49. - S. 387-399.

210. Koo F.C., Peterson J.W., Houston C.W., Molina N.C. Pathogenesis of experimental salmonellosis inhibition of protein synthesis by cytotoxin // Infect. Immun. 1984. - Vol. 43. - №1. - P. 93-101.

211. Kovpal L.P., Diebel R.H. Assay, characterization, and localization of an enterotoxin produced by Salmonella // Infect. Immun. 1975. - Vol. 11.-№ 1. - P. 14-22.

212. Le Minor L., Popoff M.Y., Bochemuhl C. Supplement 1989. 33 to the Kaufmann-White scheme // Res. Microbiol. 1990. - №141. - P. 11731177.

213. Lee C.A. Pathogenicity island and the evolution of bacterial pathogens // Infect. Agents. Dis. 1996. - Vol. 5. - №1. - P. 1-7.

214. Leung K.Y., Pinlay B.B. Intracellular replication is essential for the virulence of Salmonella typhimurium // Proc. Natl. Acad. Sei USA. 1991. -Vol. 88. - №24. - P. 11470-11474.

215. Lorch H. Bacteriophages: An alternative to antibiotics? // Biotechnology and Development Monitor. №39. - P. 14-17.

216. Lukinmaa S., Shilat R., Rinttila T., Siitonien A. Salmonella enteritidis phage types 1 and 4 pheno and genotypic epidemiology of recent ontbreaks in Finland // S. of clinical microbiology. 1999. - Vol. 37. - №7. - P. 21762182.

217. Mallinson E.T., Snoeyenbos G.H. Salmonellosis // A Laboratory Manual for the Isolation and Identification of Aviana Pathogens, 3 rd ed. Kendall // Hunt Publishing, Dubugue, IA. 1989. - P. 3-11.

218. Manning J.G., Hargis B.M., Hinton A., Corner D.E. et al. Effect of selected antibioties and anticoccidials on Salmonella enteritidis cecal colonization and organ invasion in leghorn chicks // Avian. Dis. 1994. - №38. - P. 256-261.

219. Mayo M.A. Virus Taxonomy // Archives of Virology. 2002. - №147. -P. 1071-1076.

220. McDonough P.L., Timoney J.F., Jacobson R.H., Khakhria R.J. Clonal groups of Salmonella typhimurium in New York State // Clin. Microbiol. -1989. Vol. 27. - №4. - P. 622-627.

221. Merril C.K., Biswas B., Carton R., Sensen N.C., Creed G.S., Zullo S., Adhya S. Long circulating bacteriophage as antibacterial agents // P. Roc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - №93(8). - P. 3188-3192.

222. Milic L., Mijatov L., Budincevic I., Katrinka M. Imunoprofilaksa paratifa gulubova // Veter. Glasnik, Prethodna laboratorijska. 1985. - T.39. -№9/10,- P. 1027-1033.

223. Minor L., Veron. M., Popoff M. Taxonomie des Salmonella / Proposition pour ane nomenclature des Salmonella // Ann. Microbiol.: Inst. Pasteur. -1982.- 133 B.-P. 223-254.

224. Mitsuoka T. Recent trends in research on intestinal flora // Bifidobacterium and Microflora. 1982. - Vol. 1. - P. 3-24.

225. Molbak K., Baggesen D.L., Aarestrup F.M., et al. An outbreak of mul-tidrug-resistant, quinolone-resistant Salmonella enterica serotype typhimurium DTI04 // N. Engl. J. Med. 1999. - №341. - P. 1420-1425.

226. Motarjemi Y., Kdferstein F.K., Moya G. et al. Importance of HACCP (Ha-rard Analisis and Critical Control points) for Public Health and development // The role of the world health organization: Food Control. 1997. - № 7. -P. 77-85.

227. Mulder R.W. Impact of transport on the incidence of human pathogens in poulty. — 1995. — P. 18-19.

228. Nakamura M., Nagamine N., Takahashi T., Suzuki S., Sato S. Evaluation of the efficacy of a bacterin against Salmonella enteritidis infection and the effect of stress after vaccination // Avian. Dis. 1994. - Vol. 38. - P. 717724.

229. Nancy J., Thomas A., Hunter B.D., Carter T. Infectious Diseases of Wild Birds // Blackwell Publishing. 2007. - P. 457.

230. Normaech V. Salmonellosis // Clinical medicine. 1971. - № 1. - P. 78.

231. Nuotio L., Schneitz C., Halonen U., Nurmi E. Use of competitive exlusion to protect newly-hatched chicks against intestinal colonisation and invasion by Salmonella enteritidis PT4 // Br. Poult. Sci. 1992. - №33. - P. 775-779.

232. Ochman H., Soncini F.C., Solomon F., Groisman E.A. Identification of a pathogenicity island required for Salmonella survival in host cells // Pric. Natl. Acad. Sci USA. 1996. - №93. - P.7800-7804.

233. Olesiuk O.M., Snoeyenbos G.H., Smyser C.F. Chemotherapy studies of Salmonella typhimurium in chickens // Avian. Dis. 1973. - №17. - P. 379389.

234. Padron M.N. Salmonella typhimurium outbreak in broiler chicken flocks in Mexico // Avian. Dis. 1990. - №34. - P. 221-223.

235. Pal P.V.C. Probiotics benefits // Poultry international. 1999. - № 10. - P. 40-44.

236. Parkhill J., Dugan G., James K.D. et al. Complete genome sequence f a multiple drug resistant Salmonella enterica serovar Typhi CT18 // Nature. -2001.-№413.-P. 848-852.

237. Parry C.M., Hien T.T., Dugan G., White N.J, Farrar J.J. Typhoid fever // N. Engi J. Ned. 2002. - №347. - P. 1770-1782.

238. Perry J.D., Ford M., Tayloref J. et al. ABC medium, a new Chromogenic Agar for selective isolation of Salmonella spp. // J. of Clinical infection diseases. 1999. - Vol. 37. - № 3. - P.766-768.

239. Popiel I., Tumbull P.C.B. Passage of Salmonella enteritidis end Salmonella Thompson through chick ileocecal mucosa // Infect Immun. 1985. - №47. -P. 786-792.

240. Popoff M.Y., Bockemuhl J., Gheesling L.L. Supplement 2001 (no. 45) to the Kauffmann-White scheme // Res. Microbiol. 2003. - №154. - P. 173174.

241. Popovic M., Kozlina B. Resultati primene eksperimentalne Salmonella vaccine za golubove // J. Veterinarski Clasnik. Belgrad, 1990. - №12. - P. 1123-1127.

242. Proux K. Vaccination du pigeon contre Salmonella typhimurium // Avian. Pathology. 1998. - №2. - P. 161-167.

243. Redmann T., Glunder G., Schilder B., Gobel T., Kaleta E.F. Therapiver-such mit Enterofloxacin (Baytril) in einer Legehennenherde mit Pullorum-Salmonellose // Dtsch. Tierarztl. Wochsshr. 1989. - №96(3). - S. 137-138.

244. Reynolds M.C., Ribeiro A.A., McGrath S.C., Cotter R.S., Raetz C.R.H., Trent M.S. An Outer Membrane Enzyme Encoded by Salmonella typhimurium lpxR that Removes the 3' Acyloxyacyl Moiety of Lipid A. // S. Biol. Chom. - 2006. - Vol. 281. - P. 21974-21987.

245. Ricci R., Marangon S. Tifosi aviareiaspetti diagnostici // Selez. Vet. -1999.-№8/9.-P. 567-572.

246. Rigby C.E., Pettit. J.R. Observations on competitive exclysion for preventing Salmonella typhimurium infection of broiler chickens. 1980. - №24. -P. 604-615.

247. Salmonella // Misset World Poultry. 1969. - Vol. 12. - Sipp. 1. - P. 2835.

248. Salmonellesis Control the role of animal and product fygiene. Report of a WHO Expert Commitec Technical Report Series // Geneva. 1988. -№774.-P. 12-23.

249. Schneitz C. Automated droplet application of a competitive exlusion preparation // Poult. Sci. 1992. - №71. - P. 2125-2128.

250. Schneitz C., Nuptio L. Efficacy of different microbial preparations for controlling Salmonella colonization in chicks and turkey poults by competitive exclusion // Br. Poult. Sci. 1992. - №33. - P. 207-211.

251. Schleifer J.H. A Review of the Efficacy and Mechanism of Competitive Exclusion for the Control of Salmonella in Poultry // Georgia Poultry Laboratory, Oakwood, Georgia. 1990. - №30. - P. 72-81.

252. Schroeder C.M., Naugle A.L., Schlosser W.D. et al. Estimate of illnesses from Salmonella Enteritidis in eggs, United Statea, 2000 // Emerd. Infece Dis.- 1999.-Vol. 11.-P. 113-115.

253. Shanahan P.M.A., Karamat K.A., Thomson C.J., Amyes S.G.B. Characterization f multi-drug resistant Salmonella typhi isolated from Pakistan // Epidemiol. Infect. 2000. - №124. - P. 9-16.

254. Smith H.W., Huggins M.B. Effectiveness of phages in treating experimental E.coli infection in mice vsing phagen: its general superiority over antibiotics //J. Gen. Microbiol. 1982. - Vol. 128 - №2. - P. 307-318.

255. Smith S.M., Stocker B.A.D. Colicinogeny and recombination // Brit. Med. Bull. 1962.-№18.-P. 46-51.

256. Snoeyenbos G.H. Salmonellosis, pullorum disease // Diseases of poultry. -9 Th. Eds. Iowa State University Press. Ames, Iowa, 1991. - P. 72-86.

257. Snolyenbos G.H., Weinack O.M., Soerjadi-Liem A.S., Miller B.M., Miller D.E., Woodward D.E., Weston C.R. Largescale trial to study competitive exlusions of Salmonella in chickens // Avian. Dis. 1985. - № 29. - P. 1004-1011.

258. Spaerel N.A., Herrich P., Bicle T.A. Novel bacteriophages defence mechanism the antirestriction protein // Nature. 1979. - Vol. 1. - №5699. - P. 30-34.

259. Stocker A.D. Abortire transduction of motility in Salmonella: a non-replicated gene transmitted through many generations to a single descendant // S. Gen. Microbiol. 1956. -№ 15. - P. 575-598.

260. Stone H.D. Efficacy of oil-emulsion vaccines prepared with Pigeon Paramyxovirus-1, Ulster and La Sota Newcastle Disease Viruses // Avian Diseases. 1989. - №33. - P. 157-162.

261. Szych J., Cieslik A., Paciorek J., Kaluzewski S. Antibiotic resistance in Salmonella enterica subsp. // Enterica strains isolated in Poland from 1998 to 1999. Int. J. Antimicrob. Agents. 2001. - №18. - P. 37-42.

262. Taira S., Rhen M. Identification and genetic analysis of mka A-a gene of the Salmonella typhimurium virulence plasmid necessary for intracellular growth // Microb. Pathog. 1989. - vol. 7. - P. 165-173.

263. Threlfall E.J., Rowe B., Ward L.R. A comparison of multiple drug resistance in salmonellas from humans and food animals in England and Wales, 1981 and 1990 // Epidemiol. Infect. 1993. - № 111. - P. 189-197.

264. Threlfall E.J. Multiresistant Salmonella typhimurium DTI04: a truly international clone // J. Antimicrob. Chemother. 2000. - №46. - P. 7-10.

265. Timms L.M., Marshall R.N., Breslin M.F. Laboratory and field trial assessment of profection given by a Salmonella enteritidis PT4 inactivated, adjuvant vaccine // Br.Vet.J. 1994. -№ 150. - P. 93-102.

266. Timms L.M., Marshall R.N., Breslin M.F. Laboratory assessment of protection given by an experimental Salmonella enteritidis PT4 inactivated, adjuvant vaccine // Vet. Rex. 1990. - №127. - P. 611- 614.

267. Toro H., Hoerr F.J., Farmer K. et al. Pigeon Paramyxovirus: Association with Common Avian Pathogens in Chickens and Serologic Survey in Wild Birds // Avian Diseases. 2005. - №49. - P. 92-98.

268. Tumbull P.C.B., Snoeyenbos G.H. Experimental salmonellosis in the chicken Fate and host response in alimentary canal, liver, and spleen // Avian Dis. 1974. -№18. - P. 153-177.

269. Uyttebroek E., Devriese L.A., Gevaerts D. et al. Protective effects of vaccines against experimental Salmonellosis in racing pigeons // The Veterinary Record, February, 16. 1991.-№128.-P. 152-153.

270. Vielitz E., Vob M. Experiences with a commercial CAV-Vaccine // Proceedings of the international symposium on Infectious Bursal Disease and Chicken Anaemia-Rauischol-zhausen, Germany, Giessen, Institut fur Ge-fliigelkrankheifen. 1994. - P. 465-481.

271. Wang L., Romana L.K., Reeves R.R. Molecular analysis of a Salmonella enterica group El rfb gene cluster: O antigen and the genetic basis of the major polymorphism // Genetics. 1992. - P. 429-443.

272. Williams J.E., Whitlemore A.D. Bacteriostatic effect of five antimicrobial agents on Salmonella in the intestinal tract of chickens // Poult. Sci. 1980. -№59.-P. 44-53.

273. Williams J.E. Observation on Salmonella Thompson as a poultry pathogen // Avian Pathol. 1972. - № 1. - P. 69-73.

274. Williamson C.M., Pullinger G.O., Lax A.S. Identification of an essential virulence region on Salmonella plasmids // Microb. Pathog. 1988. - Vol. 5.-№6.-P. 469-473.

275. Winstanley M. Give salmonella the eiton // New Scientist. 1987. - T. 115.-№1578.-P. 52-55.

276. World Health organization (WHO). Control of Salmonellosis: Part Played by Veterinary Science and Nutrition Hygiene. 11-12 June 1991. - Geneva, Switzerland: WHO, 1991. - (WHO/CDD/SER/91.14) - P. 436-437.

Информация о работе

Пименов, Николай Васильевич
доктора биологических наук
Москва, 2012
ВАК 03.01.06

Диссертация

Разработка средств и совершенствование методов лечения и профилактики сальмонеллеза птиц - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы