Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработка нового типа кормовых добавок на основе полимеров и их влияние на здоровье и продуктивность жвачных животных, содержащихся в разных экологических условиях

ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка нового типа кормовых добавок на основе полимеров и их влияние на здоровье и продуктивность жвачных животных, содержащихся в разных экологических условиях"

Разработка нового типа кормовых добавок на основе полимеров и их влияние на здоровье и продуктивность жвачных животных, содержащихся в разных экологических условиях

03.03.01. - Физиология 06.02.05 - Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

4845575

Боровск - 2010

1 2 МАЙ 2011

4845575

Диссертационная работа выполнена в лаборатории радиобиологии сельскохозяйственных животных ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной радиологии и агроэкологии»

Научный консультант - доктор биологических наук, профессор,

академик РАСХН Кальннцкий Борис Дмитриевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Решетов Вадим Борисович

доктор биологических наук, профессор

Грушкин Александр Георгиевич

доктор биологических наук Лавина Светлана Алексеевна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

Зашита диссертации состоится « У/ » 2011 года в К)

часов на заседании диссертационного совета Д 006.030.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных Россельхозакадемии.

Адрес института: 249013, Калужская область, г. Боровск, пос. Институт, ВНИИФБиП, тел.: (495) 9963415, факс - (48438) 42088.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных.

Автореферат разослан «

% » сфЛл

2011 года

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

В.П. Лазареико

1. Общая характеристика работы

Актуальность исследований. Интенсификация животноводства предполагает постоянный поиск новых путей повышения мясной и молочной продуктивности сельскохозяйственных животных, содержащихся в разных экологических условиях. При этом одной из главных проблем является обеспечение животных протеином. Эта проблема актуальна при содержании животных как на экологически чистых, так и на техногенно загрязненных территориях, в том числе на следе Чернобыльской аварии.

В кормовом балансе животноводства дефицит протеина, в среднем, составляет 15-20%, что сдерживает рост продуктивности животных и обусловливает повышение затрат кормов. При этом проблема осложняется тем, что в процессе пищеварения существенная часть протеина высокобелковых кормов теряется, превращаясь в сравнительно малоценные для питания животных вещества (аммиак, мочевина и др.). В связи с этим весьма актуальным является поиск путей и средств для максимального использования питательных веществ традиционных кормов с целью повышения конверсии корма, что позволит более полно обеспечить организм животных заменимыми и незаменимыми аминокислотами и, следовательно, биосинтез белка. Повышение обеспеченности организма протеином приводит к активизации обменных процессов (повышению прироста мышечной массы, увеличению надоев), а также укреплению иммунной системы животных, повышению сохранности молодняка, снижению себестоимости продукции.

На обеспеченность организма жвачных животных протеином и аминокислотами большое влияние оказывают сложные и своеобразные микробиологические процессы, происходящие в сложном желудке жвачных. Особую важность эти вопросы приобретают при нормировании кормления высокопродуктивных коров. Если низкопродуктивным животным достаточно того количества белка, который образуется за счет микробного синтеза в рубце и качественный состав протеина корма не играет существенной роли, то потребность высокопродуктивных животных удовлетворяется как за счет микробного белка, так и за счет высококачественных белков корма, избежавших распада в рубце. Синтез микробного белка в рубце у таких животных может обеспечить лишь 40-50% их потребности, а остальное количество протеина должно поступать с кормом. Для уменьшения распада протеина в преджелудках используются разнообразные методы «защиты» протеина, которые имеют существенные недостатки, ограничивающие их применение.

Следует отметить, что при ведении скотоводства на экологически неблагополучных территориях (в частности, радиоактивно загрязненных), большое значение имеет не только количество произведенной животным продукции, но и ее качество, в том числе соответствие санитарно-гигиеническим нормативам по содержанию в ней радионуклидов. Использующиеся в настоящее время добавки в корм в виде твердых

нерастворимых сорбентов снижают уровни загрязнения продукции животноводства, но при этом не способны повышать молочную и мясную продуктивность животных. Кроме того, твердые сорбенты имеют ряд существенных недостатков, связанных с их агрегатным состоянием.

В связи со сказанным представляется весьма актуальной и перспективной задачей разработка кормовых добавок нового типа, создаваемых на основе высокомолекулярных водорастворимых полимеров (ВВП). Благодаря свойствам этих полимеров добавки будут лишены ряда недостатков известных способов зашиты белка и смогут выполнять две функции: эффективно защищать полноценные кормовые белки от распада в предже-лудках жвачных с целью более полноценного снабжения организма аминокислотами и снижать поступление радиоактивного цезия в молоко и мясо.

Цель п задачи исследований. Целью исследований было -разработать теоретические основы и создать на основе ВВП образец нового типа кормовых добавок для крупного рогатого скота двойного назначения: для повышения продуктивности животных, содержащихся в разных экологических условиях, и для снижения поступления радиоактивного цезия в продукты животноводства.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

• изыскать соединения ВВП, которые теоретически, за счет образования интерполимерных комплексов, способны повысить продуктивность жвачных животных вследствие повышения эффективности использования питательных веществ кормов и снизить поступление радионуклида l37Cs в продукты животноводства;

• исследовать диффузионные и сорбционные свойства ВВП по отношению к молекулам белка и ионам металлов;

• изучить свойства ВВП in vitro и in vivo на оперированных животных с фистулой рубца;

• разработать кормовую добавку нового типа на основе ВВП;

• оценить на лабораторных животных безвредность полимерной добавки;

• исследовать влияние полимерной добавки на здоровье, обмен веществ и продуктивность крупного рогатого скота;

• в условиях производства провести апробацию разработанной полимерной добавки с целью оценки ее эффективности по повышению продуктивности жвачных животных при применении добавки в разных экологических условиях; на условно «чистых» и радиоактивно загрязненных территориях.

• определить в условиях производства способность новой добавки снижать уровень загрязнения продуктов животноводства (молоко, мясо) I37Cs.

Научная новизна работы. Впервые в мировой практике в качестве кормовой добавки для жвачных животных были использованы ВВП, вводимые в организм в весьма малых количествах. С применением

качественных и количественных методов исследования изучены сорбционные и диффузионные свойства ВВП и доказана способность этих полимеров образовывать интерполимерные комплексы с белками и ионами металлов in vitro. Показано, что при использовании ВВП повышается обеспеченность жвачных животных протеином и аминокислотами за счет улучшения использования белка, содержащегося в самом корме, т.к. ВВП не являются питательными веществами. Их применение не привносит в корм дополнительное количество протеина, как это происходит при использовании традиционных кормовых добавок (белково-витамино-минеральных добавок, синтетических азотистых веществ и т.п.). Механизм защиты кормового белка от распада в рубце жвачных животных при применении полимеров отличается от известных способов защиты: молекулы ВВП образуют комплексы с белками кормов при помощи кулоновских взаимодействий. При этом не изменяются химические свойства белковых молекул, как это происходит, например, при обработке корма формалином или при нагревании до высоких температур и т. п.. В процессе защиты кормового белка с применением ВВП не образуется новых химических соединений.

Впервые для снижения поступления l37Cs в продукты животноводства использованы ВВП в качестве растворимого гомогенного сорбента. В этом случае взаимодействие между сорбентом и металлом (в данном случае -B7Cs) в желудочно-кишечном тракте животных происходит не на поверхности твердой (нерастворимой) фазы сорбента (как это бывает при использовании гетерогенных сорбентов), а на уровне активных ионных групп, расположенных на поверхности молекул полимера (растворенного в пищеварительных соках), и ионов металла.

На основе полученных результатов была разработана новая эффективная кормовая добавка на основе ВВП, получившая коммерческое название «Солунат», имеющая двойное назначение: повышать молочную и мясную продуктивность крупного рогатого скота и снижать поступление l37Cs в продукты животноводства.

Научно-практическое значение работы. На базе полученных результатов была разработана эффективная кормовая добавка нового типа -Солунат, действующим веществом которой является ВВП. Эта добавка имеет двойное назначение: повышать молочную и мясную продуктивность жвачных животных и снижать поступление 137Cs в продукты животноводства.

Результаты исследований защищены: патентом на изобретение РФ № 2173057 Способ протектирования белкового корма для сельскохозяйственных животных и протектор для его осуществления» от 10.09.2001; патентом Евросоюза № ЕР 1 198 993 В1 «Verfahren zum Schutz von Eiweissfutter mit Polyacrylamid» от 19.10.2001.

На кормовую добавку Солунат получено: Свидетельство о государственной регистрации - учетная серия 21-2-3.5-0529, регистрационный №

ПВР - 2-3.5/01549 от 24.04.2006г.; Сертификат соответствия № РОСС 1Ш.ПР15.В13729.

Кормовая добавка Солунат внедрена в технологию кормления крупного рогатого скота: в колхозе им. Фрунзе Белгородской области; в ООО «Маяк» Прионежского района, Карелия; ООО «Мясо Калмыкии» Целинного района, Калмыкия; ООО «Агросоюз Удмуртии» Завьяловского района, Удмуртия.

Основные положения, выноснмыс на защиту:

- создано новое направление в животноводстве по использованию высокомолекулярных водорастворимых полимеров в качестве кормовой добавки для крупного рогатого скота;

утверждается, что эффективность таких добавок основана на их сорбционных свойствах и способности образовывать интерполимерные комплексы с молекулами белка и ионами металлов;

- доказано, что высокомолекулярные водорастворимые полимеры с линейной структурой молекул повышают эффективность использования питательных веществ кормов;

- разработана кормовая добавка нового типа, с коммерческим названием Солунат, имеющая двойное назначение: она способна повышать мясную и молочную продуктивность крупного рогатого скота и снижать концентрацию радиоактивного цезия в продуктах животноводства.

Апробация работы. Материалы доложены: на региональном конкурсе научных проектов в области естественных наук, Калуга, 2000; Международной научно-практической конференции "Опыт преодоления последствий катастрофы на Чернобыльской атомной станции. Экология, безопасность и устойчивое развитие - XXI век", г. Новозыбков, Брянская область, 20-21 сентября 2002 г; Всероссийской научно-практической конференции «Агроэкологические проблемы сельскохозяйственного производства в условиях техногенного загрязнения агроэкосистем», Казань, 2002 г.; Всероссийском семинаре «Биотехнология-2003», Пущино, ноябрь, 2003; 2-ой Российской научно-практической конференции «Физико-технические проблемы создания новых технологий в агропромышленном комплексе», Ставрополь, апрель, 2003 г.; 5-ом Международном симпозиуме «Актуальные проблемы дозиметрии», Минск (Республика Беларусь), 20-21 октября 2005 г.; Международной научно-практической конференции, посвященной 50- летаю ВНИИВВиМ 13-14 ноября 2008 г. «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных». Покров, 2008; Международной научно-практической конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства и пути их решения» Дубровицы ВИЖ. 21-23 октября 2008г.; Всероссийской научно-практической конференции «Инновационные пути развития животноводства». КЧР, Черкесск, 2009 г.; 6-ой международный радиобиологический съезд, Москва, 25-28 окт. 2010.

Публикации результатов исследований. Основные положения работы опубликованы в 29 научных статьях, рекомендациях, тезисах, в том

числе в 11 статьях в изданиях, рекомендованных ВАК РФ; на основании полученных результатов защищены: 1 патент РФ и 1 Европатент.

Объем п структура диссертации. Диссертационная работа изложена fia 325 страницах текста компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, предложений производству, приложений. Работа иллюстрирована 90 таблицами, 32 рисунками. Список литературы включает 307 источников, в том числе 105 иностранных.

2. Материал и методы исследований

Экспериментальная работа была выполнена за период 1999-2009 гг на лабораторных животных - белых мышах, белых взрослых крысах, эмбрионах и новорожденных крысятах, а также на коровах и молодняке крупного рогатого скота (КРС) черно-пестрой породы. Всего в работе использовано: около 300 голов коров, 130 бычков в возрасте 6-7 месяцев и 8-9 месяцев; 10 мышей; 56 крыс, 220 эмбрионов крыс, 214 новорожденных крысят.

В качестве высокомолекулярных водорастворимых полимеров были использованы полианионит - ПЭККА, а так же поликатиониты ВПК. Оба полимера не имеют неприятного запаха, не горючи, не взрывоопасны.

Полианионит ПЭККА - натриевая соль сополимера этиленкарбоновой кислоты и ее амида - является высокомолекулярным анионным водорастворимым полимером, который имеет линейную структуру молекулы. Реакционноспособными группами макромолекулы ПЭККА являются амино- и карбоксильные группы, способные к образованию межмолекулярных связей с молекулами белков и ионов металлов и других заряженных ионов. Молекулярная масса полимера в экспериментах, в среднем, составляла 10б Да. В экспериментальной работе использовали водные растворы ПЭККА, которые являются бесцветными слабо опалесцирующимн жидкостями, с вязкостью 20 100 мм2/с, рН 5-8, с температурой хранения от 0 до +25 °С.

Поликатионит ВПК-402 - полиднметилдиаллиламмоний хлорид -высокомолекулярный катионный водорастворимый полимер, имеющий линейно-циклическую структуру молекулы. Активной группой поликатионита ВПК-402 является четвертичная аммонийная группа. В водном растворе полимерная молекула поликатионита, за счет диссоциации четвертичной аммонийной группы на ионы, приобретает положительный заряд и способность связывать отрицательно заряженные ионы. В экспериментах использовали три марки водных растворов ВПК, с молекулярной массой от 3x105 до 106 Да. Внешний вид растворов ВПК-бесцветная или желтого цвета, однородная по консистенции жидкость без посторонних включений, содержит до 10 % хлористого натрия, кинематическая вязкость не менее 2 мм2/с, рН от 5 до 8, устойчивая при температурах от - 40 °С до + 60 °С.

Лабораторные исследования проводили на базе ВНИИСХРАЭ. Определяли физико-химические свойства ВВП; гематологические, биохимические, иммунологические показатели крови КРС. Величина рН растворов

определялась с помощью мономера И-130, измерение оптической плотности растворов - на фотоколориметре КФК-2 при длине волны-540 нм. Концентрацию бычьего сывороточного альбумина в водных растворах определяли с использованием биохимической системы FP - 901М (фирма Labsistems, Финляндия). Измерение концентрации меди, цинка, свинца и кадмия в водных растворах полимерных комплексов, а также содержание микро- и макроэлементов в молоке и сыворотке крови животных проводилось атомно-абсорбционным методом на спектрометре Varían SpectrAA 250 Plus Report; содержание B7Cs в образцах кормов и молока - на гамма-спектрометре марки «InSpector» модель-1250.

Токсические и отдаленные последствия при применении ВВП определяли на крысах в лаборатории токсикологии ВНИИВСГЭ в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке мутагенной активности препаратов, применяемых в животноводстве» (1988) и «Методами определения токсичности и опасности химических веществ» (1970), а также использовали методы Сперанского (1965), Шумской, Карамзиной (1966) и др..

Исследования по физиологии пищеварения были выполнены в условиях вивария ГНУ ВНИИФБиП на базе лаборатории пищеварения. Во всех физиологических экспериментах, в которых изучали влияние Солуната на переваримость основных питательных веществ в преджелудках и кишечнике жвачных животных, использовали оперированных коров, которые имели фистулы рубца и 12-перстной кишки (Алиев, 1985).

С целью изучения влияния ВВП и других химических веществ на процессы, протекающие в рубце, в опытах на быках была определена распадаемость кормов рациона. Распадаемость сырого протеина концентрированных белковых кормов рациона в рубце определяли методом, изложенным в «Методических рекомендациях» (Боровск, 1987). Для этого через фистулу в содержимое рубца помещали нейлоновые мешочки с образцами белковых кормов (шрот сои или жмых подсолнечника), обработанные разными химическими веществами: альдегидами (формальдегид, ацетапьдегид, глутаральдегид); спиртами (этиловый, изопропиловый, бутиловый, изоамиловый); ВВП (полиизопропиленкар-боновая кислота, натриевая соль сополимера этиленкарбоновой кислоты и ее амида), а также клеящими веществами.

В образцах корма и остатках кормов после инкубации определяли количество сухого вещества (СВ) и сырого протеина (СП) (Методы исследования питания с.-х. животных, 1998). Растворимость сырого протеина кормов определяли in vitro по методу, описанному Турчинским с соавт.(1987).

Для изучения влияния Солуната на переваримость основных питательных веществ в сложном желудке и кишечнике жвачных животных были проведены 2 эксперимента на трех> лактирующих коровах с живой массой = 504 кг, со среднесуточным удоем на период опыта около 20 кг, которые были на третьем месяце лактации. Животные получали рационы, общепринятые по структуре и сбалансированные по основным питательным

веществам и энергии согласно действующим нормам кормления (Нормы и рационы кормления с.х. животных, 1985).

1 эксперимент был проведен методом периодов с использованием схемы латинского квадрата. Основной рацион контрольных животных и опытных, получавших Солунат, был одинаковым. В контрольный период животные получали только основной сено-силосно-концентратный рацион, а в опытный период - тот же рацион, но в состав комбикорма для животных опытной группы был включен Солунат, в дозе 500 мг/(гол*сут). В конце каждого периода, продолжительностью 21 день, проводился отбор рубцового содержимого и суточный опыт по сбору дуоденального химуса.

В рубцовой жидкости для оценки влияния Солуната на микробиологические и ферментативные процессы, протекающие в рубце в динамике, определяли общую концентрацию летучих жирных кислот (ЛЖК), концентрацию аммиака; pH; целлюлозолитическую и амилолитическую активность, количество бактерий и инфузорий - по методам, изложенным в руководствах («Методы исследования пищеварения жвачных», 1987; «Изучение пищеварения у жвачных животных», 1987; «Изучение микрофлоры преджелудков у жвачных», 1977). Взятие проб проводили в 7.00 час. (до кормления), в 11.00 час. (через 3 часа после кормления) и в 13.00 час. (через 5 часов) после кормления.

В дуоденальном химусе (в среднесуточной пробе) было определено количество поступившего микробного и кормового белка. Определено поступление из сложного желудка сухого вещества (СВ), органического вещества (OB), микробного и кормового протеина, аммонийного азота, липидов, ЛЖК, клетчатки. В средних пробах химуса была определена также активность ферментов: трипсина, амилазы («Методы анализа пищеварительных ферментов», 1987; «Методы биохимического анализа», 1998); количество СП - по количеству азота, определяемого по Кьельдалю; аммонийный азот - микродиффузным методом в чашках Конвея; протеин микроорганизмов-по диаминопимелиновой кислоте и по пуриновым основаниям (Zinn, 1986). Был проведен балансовый опыт для определения переваримости основных питательных веществ в кишечнике коров на основе анализа химуса и кала.

2 эксперимент был выполнен на тех же коровах при тех же условиях содержания и кормления, что и в эксперименте 1, с использованием метода in sacco. При этом была определена распадаемость протеина кормов рациона, а также переваримость протеина и других питательных веществ в кишечнике. Во всех опытах проведен химический анализ кормов рациона. Регистрировался фон рубцовой ферментации путем определения количества бактерий и инфузорий рубца, целлюлозолитической и амилолитической активности, концентрации основных конечных метаболитов (ЛЖК, NHj). Определение объёма химуса, проходящего через начальную часть двенадцатиперстной кишки, проводили методом инертных индикаторов. В полученных пробах определяли концентрацию хрома на фотоэлектроколориметре согласно общепринятой методике.

Влияние полимерной добавки на эффективность микробного синтеза (по соотношению микробного азота к переваренному OB) и поступление микробного азота в 12-перстную кишку, оценивали по пуриновым основаниям, исходя из предположения, что в общем азоте микробов 15 % N приходится на азот пуриновых оснований (Zinn, 1986). Количество нераспавшегося кормового протеина, поступающего из преджелудков в кишечник, рассчитывали по разнице между количеством общего азота химуса и азотом микроорганизмов и эндогенных поступлений.

Научно-производственные опыты были проведены методом групп-аналогов на базе молочно-товарных ферм: АО «Кривское» Калужской области; ЗАО «Кузнецовский комбинат» Московской области; ООО «Хвалово» Ленинградской области; колхоза им. Фрунзе и «Оскольские просторы» Белгородской области; "Деменки" ГУ «Новозыбковская государственная сельскохозяйственная опытная станция ВНИИА», Новозыбковского района Брянской области; КСУЛ «Дубовый Лог», Добрушского района Гомельской области. В экспериментах использовали клинически здоровых животных. Животные контрольных и опытных групп содержались в одинаковых зооветеринарных условиях. Кормление осуществлялось по рационам, используемым в данном хозяйстве, которые соответствовали действующим нормам (Калашников и др., 2003) и были одинаковыми для контрольной и опытных групп, (Зхемы проведения опытов для удобства восприятия описаны в соответствующих*" разделах перед изложением фактического материала исследований.

Влияние полимерной добавки на здоровье КРС оценивали с применением методов клинического, гематологического и иммунологического исследования, а также биохимического анализа. Клиническое обследование проводили общепринятыми методами. Количество эритроцитов и гемоглобина определяли фотоколориметрическим методом, общее количество лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева, лейкоцитарную формулу определяли в мазках крови (окрашенных по Романовскому) общепринятым методом. Активность ферментов и содержание метаболитов в сыворотке крови, в том числе общего белка, определяли с помощью полуавтоматической биохимической системы FP-901М. Концентрацию витаминов А и Е определяли общепринятыми методами («Лабораторные методы в ветеринарии: биохимические и микологические», 1991). Для оценки иммунного статуса определяли бактерицидную активность крови (Бухарин, 1979); содержание гамма-глобулинов и фагоцитарную активность нейтрофилов (общепринятыми методами), концентрацию циркулирующих иммунных комплексов - с применением полиэтиленгликоля 6000.

Молочную продуктивность коров определяли контрольным измерением утреннего и вечернего удоев (индивидуально каждой коровы). Мясную продуктивность молодняка определяли путем индивидуального взвешивания. Для изучения качества молока определяли: плотность молока-ареометром, жирность - кислотным методом, белок - колориметрическим

методом, механическую загрязненность - фильтрованием, бактериальную загрязненность - редуктазной пробой, термоустойчивость - алкогольной пробой,кислотность - титрованием.

Концентрацию '"Сб в мышечной ткани КРС определяли путем прижизненной дозиметрии животных с использованием прибора СРП-68-01 с коллиматором.

3. Результаты исследований 3.1. Методические подходы по разработке нового типа добавок в рацион

на основе ВВП

Теоретической основой возможности использования ВВП в качестве активного вещества нового типа кормовых добавок, является свойство ВВП образовывать комплексы с молекулами других соединений, имеющих заряд, например, с белками крови животных (бычий сывороточный альбумин) или ионами металлов, за счет группировок - «векторов», которыми могут являться амино - , карбоксильные группы и др.. Очевидно, используя свойство ВВП образовывать комплексы с белками при определенных условиях, можно связать в рубце часть кормового белка (защитить его от распадаемости под действием микрофлоры рубца) и увеличить его усвоение организмом жвачных животных в нижележащих отделах желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). За счет этого возможно добиться увеличения продуктивности жвачных животных. В то же время, способность полимеров образовывать комплексы с ионами металлов, будет препятствовать всасыванию '37Сз в организм и обусловит снижение уровня радиоактивного загрязнения животноводческой продукции.

Для снижения всасывания |37Сз из ЖКТ, в настоящее время, используют добавки в корм, изготавливаемые на основе нерастворимых гетерогенных (твердых) специфических и неспецифическпх сорбентов: ферроцианидов, цеолитов и т.п. соединений. Использование гетерогенных сорбентов для сорбции '"Сб в условиях ЖКТ сельскохозяйственных животных осложняется рядом существенных недостатков, присущих гетерогенным сорбентам, проистекающих из их агрегатного состояния: перенос ионов металлов к поверхности сорбента происходит, главным образом, путем молекулярной диффузии, скорость которой довольно мала. Расстояния, которые необходимо пройти ионам металлов для достижения мест адсорбции, относительно велики и соизмеримы по порядку величины с размерами зерен сорбента (десятки микрометров). Поэтому значительная доля ионов металлов может успевать всасываться стенками ЖКТ раньше, чем произойдет их сорбция гетерогенным сорбентом.

В связи с этим ясно, что наиболее эффективными могут стать сорбенты гомогенно (на молекулярном уровне) распределяющиеся в воде и содержимом пищеварительного тракта. Создание таких сорбентов (растворимый гомогенный сорбент) позволило бы снять диффузионные затруднения в процессе сорбции и тем самым повысить эффективность. Способность ВВП растворяться в воде, а так же образовывать комплексные соединения с ионами металлов, может быть использована для создания

растворимых сорбентов в виде кормовых добавок, сорбирующих радиоактивные изотопы, в том числе радиоактивный цезий. Ввиду того, что крупные молекулы ВВП не способны проникать через клеточные барьеры во внутренние среды организма, комплексы ВВП с ионами металлов не будут проникать в кровь, но будут выводиться с экскрементами, таким образом будет снижаться содержание '"Ся как в организме животных, так и в продуктах животноводства - молоке и мясе.

3.1.1. Химические п биологические свойства ВВП

Химические и биологические свойства ВВП определяются их макромолекулярной природой. Главная особенность ВВП состоит в том, что в водных растворах их макромолекулы приобретают множественные электрические заряды, т.е. превращаются в полиионы, которые могут образовывать комплексы с молекулами белка, аминокислот, ионами металлов и другими соединениями, имеющими заряд, за счет солевых связей, возникающих вследствие кулоновского взаимодействия противоположно заряженных групп указанных выше соединений и растворенного в воде полимера. Образование таких комплексов не приводит к денатурации белка, так как между белковыми молекулами и полимером не образуется стойких необратимых химических соединений с разрушением нативной структуры белковых молекул, и комплексы существуют только за счет кулоновских взаимодействий. Очень важно отметить, что в растворе цепочка линейного полиэлектролита, нагруженная белковыми молекулами, не прилипает к ним всеми своими звеньями. В частице комплекса сохраняются достаточно длинные свободные участки линейной цепи в виде петель или свободных концов, которые обеспечивают потенциальную возможность дополнительного многоточечного связывания с другими молекулами белка.

Важными свойствами интерполимерных комплексов являются, способность легко вступать в реакции макромолекулярного замещения в растворе (поиск оптимума), что характерно и для комплексов полиэлектролитов с глобулярными белками. Прямые экспериментальные доказательства существования макромолекулярного обмена в растворах комплексов глобулярных белков с синтетическими полиэлектролитами получены в системе бычий сывороточный альбумин и поли-М-этил-4-винилпиридиний бромида Изумрудовым с коллегами (1985). Другим не менее важным свойством интерполимерных комплексов является их способность к многоточечному кооперативному взаимодействию с другими химически комплементарными макромолекулами с образованиием устойчивых интерполимерных комплексов или к многоточечной кооперативной сорбции на химически комплементарных поверхностях. В экспериментах Дикова с соавт. (1979) было установлено, что ВВП могут положительно влиять на активность ферментов. Белковая глобула фермента при связывании с ВВП может приобрести новые свойства, подчас важные с практической стороны. Так, при включении БН-содержащих ферментов в комплексы с

ВВП (поликатионами) достигается значительная стабилизация ферментативной активности.

3.1.2. Определение сорбцнонных свойств ВВП in vitro. Для

разработки добавок на основе ВВП с целью применения их в кормлении КРС в лабораторных условиях были изучены сорбционные свойства ВВП: полианионита - ПЭККА по отношению к положительно заряженным ионам (ионам металлов), и свойства поликатионита - ВПК- 402 по отношению к отрицательно заряженным ионам СГи [S04]~2.

Для изучения сорбцнонных свойств ПЭККА по отношению к ионам металлов были разработаны качественные и количественные методы. В опытах in vitro, при изучении сорбцнонных свойств ВВП, с использованием прибора для диализа (горизонтальными ячейками, с размерами пор разделительной мембраны 2,5-4,0 нм) было определено, что степень сорбции ионов меди, цинка, кадмия и свинца при рН раствора - 5,0- 7,5 составляла 90 - 98 %. При понижении рН степень сорбции ионов металлов ПЭККА уменьшалась и при рН <3 большая часть комплексов распадалась на ионы. Таким образом, было показано, что молекулы ПЭККА способны образовывать комплексы с ионами металлов, и процесс образования таких комплексов зависит от кислотности среды. Тем же методом диализационного равновесия проводили оценку сорбцнонных свойств поликатионитов на примере ВПК. Была изучена конкуренция ионов СГ и [S04]~23a связывание с полимером. Установлено, что при рН растворов = 5,5 ионы хлора практически полностью обмениваются на ионы [S04]~~, равновесие наступает через 6 суток в стационарном режиме, без перемешивания. Таким образом, экспериментальные данные показали, что катионный полимер ВПК обладает хорошей сорбционной способностью по отношению к отрицательно заряженным ионам, в данном случае к ионам [S04].

3.1.3. Исследование in vitro диффузионных свойств ВВП по отношению к мембранам клеток. Были сделаны теоретические расчеты радиуса инерции (RG) макромолекулярного клубка полимера ПЭККА на основании величины молекулярной массы полимера, которые показали, что RG указанного полимера составил = 100 нм, что значительно больше размера канальцев клеточных мембран. Если RG существенно превосходит размер канальцев мембран клеток, то макромолекула не сможет преодолеть клеточный барьер. Это было подтверждено в экспериментальных исследованиях по изучению диффузионных свойств ВВП с использованием горизонтальных и вертикальной ячеек, которые показали, что мембраны с размерами пор, соизмеримыми с размерами канальцев клеточных мембран, равные 2,5 - 4,0 нм (в горизонтальных ячейках прибора для диализа) и 40 -50 нм (в вертикальной ячейке) не проницаемы для молекул ВВП. Полученные результаты свидетельствуют о том, что ВВП не смогут преодолеть мембраны клеток эпителия ЖКТ животных.

Результаты проведенных опытов позволяют сделать заключение о том, что исследованный полимер не будет всасываться в кровь и попадать во внутренние органы животных и, следовательно, в продукты животноводства.

По-видимому, постепенно продвигаясь по пищеварительному тракту, ВВП не попадая во внутренние среды, могут полностью выводиться из организма животных.

3.1.4. Изучение механизмов взаимодействия ВВП и белков in vitro и в рубце жвачных животных.

3.1.4.1 Взаимодействие водорастворимых белков с ВВП in vitro.

С целью изучения механизмов взаимодействия белков с ВВП (анионный полимер ПЭККА и катионный ВПК-402) были проведены опыты in vitro по изучению способности полимерных молекул образовывать комплексы с водорастворимым (модельным) белком - бычьим сывороточным альбумином (БСА).

Изучение динамики образования комплексов белка с полимерами ПЭККА и ВПК проводили путем использования метода титрования. Поскольку избыток белка значителен по сравнению с количеством полимера в ЖКТ жвачных животных, использовали 2 % раствор БСА и титровали его 0,1% раствором одного из указанных полимеров. Анализ результатов эксперимента показал, что образование комплексов полимера (ВПК) с БСА происходило в широком интервале избытка белка по отношению к данному полимеру: от 40 до 8000. По данным эксперимента было рассчитано, что 1 г ВПК способен присоединить 21 г белка БСА. В аналогичных опытах с ПЭККА определено, что белок-полимерные комплексы образуются уже при соотношении белка к ПЭККА 40:1 и при рН 7,3 - 7,4 эти комплексы растворимы.

В связи с тем, что содержимое разных отделов ЖКТ имеет различные значения рН, представляло интерес выяснить влияние концентрации водородных ионов на степень связывания белков с полимерными молекулами. Для изучения взаимодействия белков (БСА) с полимерами (на примере ПЭККА) были проведены эксперименты, в которых были заданы параметры, близкие к условиям ЖКТ: кислотность и температура среды, соотношение белок-полимер, длительность взаимодействия полимера с белком. Опыты проводились при температуре 38 °С, при рН среды от 5,0 до 6,5 (кислотность среды, близкая к содержимому рубца) и при рН 1,5 (кислая среда сычуга); длительность взаимодействия равнялась 24 часам. С учетом того, что полимер хорошо сорбируется и удерживается на частицах концентрированного корма, а также высокой вязкости полимера, можно предположить наличие кумуляции ПЭККА, за счет чего присутствующая доза полимера в рубце коров может быть больше, чем ежедневно задаваемая коровам (500 мг) и может составлять не менее 1,0 г. Расчеты показали, что соотношение полимера и сырого протеина в рубце будет составлять, примерно, 0,38» 10~3 . В экспериментах показано, что для образования интерполимерных комплексов ПЭККА с БСА оптимальная кислотность среды (рН) - 5,0-н6,5 (в этом же диапазоне находится и рН рубца у КРС), а при рН = 1,5-комплексы не образуются.

По данным, полученным в экспериментах, было рассчитано, что при рН 5,0^-6,5 и при указанном выше соотношении белок/полимер, 1 г ПЭККА

может присоединить 70+90 г БСА - низкомолекулярного белка животного происхождения. В рубце жвачных животных присутствуют растительные белки, которые в основной своей массе имеют значительно более высокую молекулярную массу, чем белок БСА. В этом случае 1 г ПЭККА, вероятно, сможет удержать (присоединить) большее количество кормового белка (по массе), чем БСА, которое однако, будет мало по сравнению с общим количеством протеина, содержащегося в рубце.

Таким образом, проведенные эксперименты свидетельствуют о том, что в условиях рубца, где наблюдается избыток белка и недостаток полимера, только небольшая часть кормового белка может связаться с полимером. Остальной белок будет доступен для функциональной активности рубцовой микрофлоры. Поэтому, вводимые количества полимера - 500 мг (гол*сут) - не должны нарушать жизнедеятельность микрофлоры рубца.

3.1.4.2. Изучение способности ВВП снижать распадаемость протеинов кормов. В настоящем разделе приводятся результаты собственных исследований влияния ВВП на степень распадаемости сухого вещества (СВ) и протеинов концентрированных белковых кормов в рубце КРС, а также даны результаты по влиянию ВВП на растворимость протеинов кормов в буферных растворах (in vitro). Эффективность ВВП определялась в сравнении с известными защищающими агентами - альдегидами, спиртами, а так же с клеящими веществами. Распадаемость СВ и протеинов кормов определяли методом инкубации в рубце быков нейлоновых мешочков с испытуемыми образцами концентрированных белковых кормов. Мешочки с образцами опускали через фистулу в нижнюю часть рубца.

В опытах показано, что величины степеней защиты СВ и протеина обработанных кормов, инкубированых в рубце, а также степень защиты (СЗ) протеина кормов в буферных растворах коррелирует между собой. Так, СЗ от распада протеина в рубце и его растворимости в буферных растворах для образцов подсолнечного жмыха, обработанных 1% растворами формальдегида и глутарапьдегида и 0,01 % раствором ПЭККА очень близки между собой (78,2 и 74,4 %; 67,1 и 61,5 %; 50,8 и 54,7 %, соответственно). Это свидетельствует в пользу предположения о том, что микробиальному распаду в рубце в значительной степени подвергаются молекулы протеина, перешедшие в раствор и, следовательно, «защитное» действие добавок связано с уменьшением растворимости протеина. Следует отметить также, что при близких значениях СЗ от распада протеинов в рубце, эффект достигается при использовании ПЭККА в концентрациях = 100 раз меньших, чем концентрации альдегидов.

Однако, ввиду высокой токсичности альдегидов, практическое использование их для «защиты» протеинов кормов от разложения в рубце, очевидно, является проблематичным. Более приемлемой представляется защита протеинов в рубце жвачных с использованием ВВП, в частности, испытанного нами в эксперименте полимера ПЭККА. Безвредность для здоровья животных и человека, низкая стоимость, незначительные

концентрации полимера, дающие положительный эффект, простота процесса внесения в корм дают основание считать водорастворимые полимеры перспективными для разработки на их основе принципиально новой экологически чистой высоко рентабельной технологии повышения продуктивности сельскохозяйственных животных.

3.1.4.3. Влияние «склеивающих» свойств ВВП на растворимость кормового белка in vitro. Проведенные эксперименты показали, что обработка кормов клеями, приводящая к «простому» склеиванию (агрегации) частичек корма, явно не дает заметного снижения распадаемости протеина в рубце. В патентной литературе в качестве одного из путей «защиты» (снижения перехода белков в раствор и их распада в рубце) описано покрытие частиц белоксодержащего корма пленками (на основе солей жирных кислот, полимеров и др.), нерастворимых в нейтральных и слабощелочных средах (в рубце), но растворимых в кислых средах (в сычуге) (Патент № 4.181.700, 1980; Патент № 2113121А, 1982). Однако, при этом положительный эффект достигается только при использовании пленкообразователя в количествах, соизмеримых или превышающих количество защищаемого корма, что на несколько порядков превосходит количество ПЭККА, необходимое для эффективной защиты белков корма от деградации в рубце (Грудина, 2006). Представляется весьма маловероятной возможность эффективной защиты кормовых белков вследствие образования на поверхности частиц корма пленок ПЭККА при столь малом количестве применяемого полимера.

Очевидно, наиболее вероятным механизмом уменьшения перехода протеинов кормов в раствор и эффективной защиты их от распада под действием микрофлоры рубца является связывание белков полимером с образованием водонерастворимых комплексов. При этом массовая доля белков в таких комплексах должна многократно превосходить массовую долю полимера (Зайцев и др., 1992; Тенфорд, 1965). Поскольку в ЖКТ всегда присутствует избыточное количество белка по отношению к полимеру, то образуемые интерполимерные комплексы, в частности в рубце, будут нерастворимы, что не позволит протеинам кормов перейти в раствор и сделает недоступными для усвоения микрофлорой рубца.

3.2. Изучение биологических свойств кормовой добавки Солунат, разработанной на основе ВВП

Экспериментальные данные, приведенные в главе 3.1, позволили разработать принципиально новую кормовую добавку на основе ВВП, получившую коммерческое название - «Солунат». Она имеет двойное назначение: повышать продуктивность животных, а также снижать поступление 137Cs в продукцию животноводства. При разработке кормовой добавки Солунат были соблюдены основные требования, предъявляемые к вновь создаваемым препаратам и кормовым добавкам.

3.2.1. Характеристика Солуната - кормовой добавки нового типа. Солунат представляет собой однородную вязкую бесцветную слабо опалесцирующую жидкость, без запаха, со значениями рН, близкими к

нейтральным. Массовая доля основного вещества составляет 1,5 - 3,0%. В рецептуру препарата не входят тяжелые металлы, генно-инженерно-модифицированные организмы, гормоны, антибиотики или какие-либо другие биологически активные вещества, способные оказывать негативное действие на здоровье животных. Препарат предназначен для орального применения жвачными животными в смеси с высокобелковым концентрированным кормом. При этом Солунат не служит источником питательных веществ для животных. Он является лишь фактором повышающим эффективность использования кормового протеина, а также снижающим всасывание ,37С5 из ЖКТ, выполняя функцию частичной защиты кормового белка от распада в рубце жвачных; увеличивая контактную поверхность субстрат-фермент; усиливая процессы всасывания конечных продуктов, образующихся в процессе диссимиляции питательных веществ, а также функцию неспецифического сорбента, снижающего поступление радионуклида 137Сз в продукцию животноводства.

Основное действующее вещество Солуната-полианионит ПЭККА-имеет структурную формулу:

- сн2-сн

где: А - активная полярная группа: -СОО или -NH2

При растворении в воде молекула полимера многократно набухает, значительно увеличивает свой обьем, активные группы оказываются на поверхности и имеют доступ к амино- и карбоксильным группам белков или к ионам металлов, образуя белок - полимерные комплексы или интерполимерные комплексы с ионами металлов. Важным свойством Солуната является создание им большой контактирующей поверхностной площади (за счет функционирования каждой молекулы полимера) в полости пищеварительного тракта.

3.2.2. Изучение влияния Солуната на организм лабораторных животных. Широкое использование и внедрение в практику вновь созданного препарата или кормовой добавки предполагает отсутствие у них токсичности. Для определения безвредности Солуната были изучены его токсические свойства и отдаленные последствия при длительном применении препарата.

3.2.2.1. Токсикологическая оценка Солуната 3.2.2.1.1. Исследование острой токсичности. Исследование острой токсичности проводили на белых мышах, массой 20-25 г. На основании результатов исследований можно сделать вывод, что максимально-действующая доза полимера, взятого для испытаний находится на уровне,

превышающем 5000 мг/кг живой массы. Из этого следует, что Солунат является малотоксичным веществом, и его следует отнести к IV классу опасности по ГОСТ 12.1.0076.

3.2.2.1,2. Изучение показателен субхроннческой тосичности. Субхроническую токсичность Солуната изучали на белых крысах, которым задавали Солунат вместе с кормом, после тщательного предварительного перемешивания, в дозе (по действующему веществу) около 10 мг/кг живой массы. Эксперимент продолжался в течение двух недель. С целью выявления признаков субхронической токсичности Солуната у крыс исследовали показатели, характеризующие как общее состояние организма, так и функциональную активность основных систем организма. В течение периода наблюдения (срок эксперимента) общее состояние крыс оставалось ненарушенным. Они адекватно реагировали на внешние раздражители, полностью поедали корм, пили без особой жадности. Динамика живой массы крыс, получавших ежедневно с кормом Солунат свидетельствует о том, что при кормлении крыс в течение двух недель кормами, содержащими Солунат, относительный прирост живой массы крыс в конце опыта составлял в контрольной группе 29,7%, а в опытной -34,0%.

Действие ВВП, входящего в состав кормовой добавки Солунат, на гемопоэз оценивали путем анализа клеточного состава (количественного) периферической крови животных и уровень гемоглобина. Было показано, что Солунат, в указанных выше дозах (по активному веществу), при введении в корм не оказывал отрицательного влияния на концентрацию гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов.

Изучение влияния Солуната на функциональную активность центральной нервной системы проводили путем определения суммационно-порогового показателя. Величины суммационно-порогового показателя, отражающие состояние нервно-мышечного аппарата, не отличались у животных из обеих групп.

Функциональную активность выделительной системы определяли путем оценки функционального состояния почек. Суточный диурез, удельный вес мочи, содержание белка в моче животных находились в пределах контрольных величин. Это свидетельствует о том, что добавка Солунат не оказывает отрицательного влияния на функциональное состояние почек.

В качестве показателей жизнедеятельности организма животных и наличия отрицательного влияния химических веществ на функции организма является содержание в крови сульфгидрильных групп (БН-групп) и общего белка в периферической крови. БН-группы характеризуют состояние белкового обмена в организме животных. В случае токсического воздействия на организм вредных азотсодержащих веществ, (эндо- или экзогенного происхождения, в том числе, аммиака) сульфгидрильные группы служат антидотами. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии различий в уровне содержания общего белка и 8Н-групп в

1Я

сыворотке крови интактных и опытных животных, получавших в течение 2-х недель Солунат, что является одним из доказательств отсутствия в составе Солуната токсических веществ.

Одним из основных факторов, который отражает состояние естественной резистентности организма, можно считать уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови лабораторных животных. Иммуноглобулины вступают в связь с различными антигенами химической и биологической природы, нейтрализуя их отрицательное действие на организм.

Таблица 1

Влияние Солуната на различные системы организма крыс

Показатель Контроль Оныг

Концентрация гемоглобина, г% 12,4±0,11 12,3 ±0,21

Концентрация лейкоцитов, тыс/мкл 6,32 ±0,21 6,44 ±0,16

Концентрация общего белка в сыворотке крови,г % 8,4 ± 1,1 8,7 ± 1,2

Концентрация иммуноглобулинов, мг/мл 36,2 ±3,6 37,8 ±4,1

Общее количество вН-групп, мкмоль/л 12,3 ±0,6 12,7 ±0,7

Количество межпальцевых сокращений на электродах 3,8 ±0,09 4,0 ± 0,05

Диурез, мл 2,4 ±0,1 2,3 ± 0,2

Белок в моче, мг % 23,8 ±3,7 19,4 ±2,4

Полученные данные свидетельствуют об отсутствии иммунного ответа на введение в организм с кормом добавки Солунат и, следовательно, об отсутствии отрицательного воздействия испытуемой добавки на организм крыс.

Отсутствие выраженных изменений каких-либо показателей исследованных в эксперименте и приведенных выше (табл. 1), характеризующих состояние и функционирование различных систем организма опытных крыс, согласуется с результатами морфологических исследований. Так, весовые коэффициенты печени, почек, сердца, селезенки не отличались от контрольных величин.

3.2.2.2. Исследование отдаленных последствий Солуната 3.2.2.2.1. Мутагенная активность Солуната. Мутагенную активность Солуната изучали in vitro на индикаторных штаммах сальмонелл (тест Эймса) ТА-1535 и ТА-1538 без метаболической активации, а также методом учета хромосомных аберраций в клетках костного мозга белых беспородных крыс.

Полученные данные свидетельствуют о том, что в опытах с ВВП уровень мутаций не отличался от числа мутаций, вызванных дистиллированной водой.

Результаты опытов на белых крысах по исследованию цитогенетичес-ких изменений клеток костного мозга показаны в табл. 2.

Таблица 2

Цитогенетический анализ клеток костного мозга белых крыс, которым ___давали Солунат__

Группа Количе- Количест- Количество клеток, %

живот- ство во просмо- с со с Мптотичес-

ных живот- мотренных истинны- слипания отстава- кни индекс

ных клеток ми аберрациями ми нием

Опыт 8 2000 3,8 ±0,5 0,3±0,08 0,02±0,0 2,1±0,1

Конт- 8 2000 3,6 ±0,4 0,2±0,06 0,02±0,0 2,1 ±0,2

роль

Представленные в табл. 2 данные свидетельствуют о том, что введение в рацион белым крысам Солуната в дозе (по активному веществу) 120 мг/кг корма выход истинных хромосомных аберраций и митотическая активность клеток достоверно не отличались от показателей контрольной группы.

3.2.2.2.2. Изучение эмбрпотокснческого, гонадотокенческого и тератогенного действия Солуната. Репродуктивная функция организма - одна из наиболее интегральных и достаточно лабильных, отражающих общие процессы, происходящие в организме. Изменение показателей этой функции достаточно убедительно выявляется под действием ряда факторов, в том числе и под действием веществ, поступающих в организм с кормом. Для изучения эмбриотоксического, тератогенного и гонадотоксического действия Солуната было подобрано две группы крыс. Крысам подопытной группы (самцы и самки) за неделю до спаривания начали вводить с кормом Солунат в дозе 120 мг/кг корма. В период всей беременности самки продолжали получать Солунат в той же дозе, что и до спаривания.

Таблица 3

Эмбриотоксическое и гонадотоксическое действие Солуната в

пренатальный период

Группа животных Количество оплодотворенных крыс Количество крыс, убитых на 21 день беременности

Количество беременных крыс Количество эмбрионов Количество погибших эмбрионов Масса эмбрионов г Длина туловища, см

Опыт 10 10 112 0 6,3±0Д 6,5±0,1

Контроль 10 10 108 0 6,2±0,2 6,3±0,3

Данные, приведенные в табл. 3 показывают, что не было отмечено существенных различий в количестве эмбрионов, полученных от опытных и контрольных крыс на 21 день беременности, в пренатальный период. Не было также в той или другой группе погибших эмбрионов. При патологоанатомическом обследовании эмбрионов не установлено каких-либо морфологических изменений. Средняя масса эмбрионов и длина туловища в опытной и контрольной группах были аналогичны.

В табл. 4 приведены данные эмбрнотокеического и гонадотоксичес-кого действия Солуната, которые были определены в постнатальный период.

Таблица 4

Эмбриотоксическое и гонадотоксическое действие Солуната в __постнатальный период_

Группа Количество Родивших крыс

животных оплодотворен- Количество Количество Количество Масса

ных крыс беременных крысят погиоших крысят при

крыс крысят рождении, г

Опыт 10 10 110 0 7,2±0,5

Коптроль 10 10 104 0 7,0±0,4

Как видно из таблицы, не было выявлено различий между группами в количестве родившихся крысят и их живой массе. В обеих группах не было мертворожденных крысят. При осмотре эмбрионов и новорожденных крысят не было выявлено аномалий в развитии конечностей, туловища, черепа, глаз, а так же внутренних органов.

На основании выполненных исследований можно сделать заключение, что Солунат, в дозах (по действующему веществу) 120 мг/кг корма, т.е. = 10 мг/кг живой массы) не оказывает мутагенного, эмбриотоксического, гонадотоксического и тератогенного действия на лабораторных животных.

3.2.3. Исследование влияния Солуната на показатели здоровья и обмен веществ у крупного рогатого скота. В данной главе приведены данные, показывающие влияние Солуната на организм КРС с применением клинических, биохимических, гематологических и иммунологических методов исследования. В экспериментах использовали коров черно-пестрой породы в возрасте 4-5 лет. Были составлены две группы коров - аналогов, находящихся в стадии раздоя. Животные из группы 2 не получали Солунат, а животным группы 1 ежедневно однократно давали Солунат в дозе по активному веществу - 500 мг/(гол*сут), т.е. 1 мг/кг живой массы в смеси с 2 кг комбикорма.

Клиническое обследование и гематологические тесты (срок наблюдения 2,5 месяца) не выявили отклонений у животных, получавших Солунат, относительно контроля.

Для оценки влияния Солуната на биохимический статус КРС (срок наблюдения - 35 дней дачи Солуната), в плазме крови определяли активность ферментов аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатамш/отрансферазы (АСТ), а также концентрацию общего белка, альбуминов, глобулинов, мочевины, глюкозы, холестерина, фосфора, кальция, витаминов А и Е. Полученные данные сведены в табл. 5. Анализ полученных данных (табл. 5) показал, что применение Солуната способствовало повышению концентрации общего белка с 72,1±4,3 (г/л) до 80,8±1,95 (г/л), в то время как в контроле этот показатель практически не изменился. Это свидетельствует о более полноценном снабжении организма белком при использовании Солуната. Содержание альбуминов в крови животных различались незначительно по группам, однако следует отметить тенденцию к

повышению их количества в крови животных группы 1 (получавших Солунат) по сравнению с контролем. Это свидетельствует о лучшей конверсии корма, а также о хорошей функциональной активности печени в группе опытных коров, так как альбумины, практически на 100%, синтезируются только гепатоцитами. Содержание кетоновых тел в крови коров опытной группы составляло 2,6 мг %, что не выходит за пределы физиологической нормы (1,0 - 6,0 мг %). Это свидетельствует о том, что добавка Солунат не оказывает негативного действия на функциональную (детоксикационную) активность печени. Концентрация мочевины в крови у коров обеих групп находилась в пределах физиологической нормы. В то же время в крови опытных животных по сравнению с контролем было более низкое содержание мочевины, что может быть связано со снижением распадаемости протеинов кормов при использовании Солуната.

Таблица 5

Показатели Группа 1 (рацион с Солунатом) п = 5 Группа 2 (рацион без Солуната) п = 5

17.03.08. 22.04.08. 17.03.08. 22.04.08.

Общий белок, г/л 78,6 ± 1,3 81,9± 1,9 78,1 ±4,9 78,9 ± 4,4

Альбумины, г/л 30,2 ± 1,2 34,4 ± 1,8 29,8 ±1,8 30,1 ± 1,1

Глобулины, г/л 48,4±2,5 47,5±1,6 48,3±3,1 48,8±2,8

Белковый индекс 0,62±0,01 0,72±0,01 0,61±0,01 0,62±0,02

Мочевина, ммоль/л 4,51±0,1 3,95±0,2 4,42±0,1 4,45±0,1

АЛ'Г, Ед/л 24,9±1,2 25,4±2,3 25,2±3,1 30,14±2,2

ACT, Ед/л 66,2±5,5 67,0±4,7 71,8±5,8 72,3±5,1

Холестерин, ммоль/л 3,25±0,03 3,04±0,02 3,38±0,02 4,6±0,04

Глюкоза ммоль/л 1,96 ±0,32 2,14 ±0,34 2,20 ±0,16 1,74 ±0,24

Кальций, мг % 9,51±0,6 9,60±0,5 9,75±0,6 9,71 ±0,1

Фосфор, мг % 6,0±0,30 6,10±0,15 5,85±0,21 5,80±0,40

Витамин А, мкг % 47,0±4,1 45,0±3,1 46,8±4,6 43,0±2,2

Витамин Е, мкг % 0,95±0,01 0,81 ±0,02 0,98±0,03 0,79±0,04

Изучение активности ферментов переаминирования (ACT и AJIT) показало, что в обеих группах этот показатель был в пределах физиологической нормы, однако, у контрольных коров он был близок к верхнему пределу нормы и был выше, чем у опытных коров, что указывает на большую стабильность клеток печени у коров, получавших Солунат, т.к. АЛТ - фермент, содержащийся в клетках печени (гепатоцитах), a ACT - в клетках сердца, при их повреждении ферменты выходят в сыворотку крови. Таким образом, Солунат не только не повреждает клеток печени и миокарда, но и, возможно, способствует стабилизации клеточных мембран.

Уровень глюкозы в крови коров группы 1 несколько повысился, в то время как в группе 2 - понизился, что свидетельствует о более высоком энергетическом обеспечении организма животных, получавших Солунат. Более низкое содержание холестерина в крови (табл. 5) опытных коров, по сравнению с контролем, свидетельствует о том, что добавка Солунат не оказывает негативного действия на функциональную (детоксикационную) активность печени и подтверждает факт лучшей обеспеченности опытных коров глюкозой, по сравнению с контрольными животными, т.к. при недостатке глюкозы, особенно в 1 фазе лактации, организм стремится компенсировать энергетический дефицит путем мобилизации собственных жиров и окисления аминокислот, в результате чего происходит повышение концентрации холестерина в крови и образование кетоновых тел, что приводит к перерождению печени, снижению продуктивности коров, бесплодию и рождению молодняка с низкой жизнеспособностью. Определение концентрации макро- и микроэлементов в сыворотке крови свидетельствуют о том, что Солунат, не только не снижает содержание элементов в сыворотке крови, но даже несколько увеличивает концентрацию их в сыворотке.

Иммунологический статус животных при длительном применении Солуната оценивали по показателям клеточного и гуморального звеньев иммунитета в весеннее-летний сезон года (с марта по июнь), в период сезонного ослабления иммунитета у животных. Иммунологические тесты включали: определение общего числа лейкоцитов и лимфоцитов, показатели фагоцитоза по результатам опсоно-фагоцитарной реакции (ОФР), значения бактерицидной активности сыворотки крови (БАК), количество общего белка, гамма-глобулинов, концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). В качестве тест-объекта при постановк ОФР - были использованы убитые бактерии стафилококка.

Подсчет общего количества лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови показал отсутствие негативного влияния Солуната на росток белой крови. Результаты подсчета лейкоцитов и лимфоцитов приведены в разделе 3.2.3.2. диссертации, в которой показано, что общее количество лейкоцитов за период эксперимента (с марта по июнь) было в пределах физиологической нормы и составляло в опыте и контроле 6,5 - 6,9

тыс/мм3 и 6,3-7,1 тыс/мм3, соответственно. Количество лимфоцитов в опыте составляло 56,3-64,6 %; а в контроле равнялось 57,4-69,8%.

Анализ результатов ОФР показал, что, количество фагоцитирующих нейтрофилов (ФЧ) в цельной крови контрольных животных было выше на начало опыта и составляло 87,8 % по сравнению с опытной группой (80,2 %). Через 1 месяц от начала дачи Солуната фагоцитарное число (ФЧ) в контрольной группе снизилось до 77,8 %, а в опытной ФЧ - повысилось до 85,8 %. Спустя 2,5 месяца - ФЧ в опытной и контрольной группах стало равно 80,4 % и 78,4 %, соответственно. Учет проводился через 30 минут от начала реакции. Таким образом, снижение активности фагоцитов наблюдалось у контрольных животных - в апреле (раньше, чем у опытных), а у опытных - в июне. Очевидно, применение полимерной кормовой добавки Солунат не только не оказало негативного влияния на иммунный статус КРС, но и способствовало поддержанию иммунитета на более высоком уровне, чем у контрольных животных.

В качестве контролируемых параметров гуморального иммунитета были выбраны БАК сыворотки крови, количество глобулинов, общего белка и ЦИК. Концентрация общего белка и глобулинов в сыворотке крови не выходила за пределы физиологической нормы. В то же время следует отметить тенденцию к тому, что применение Солуната способствовало повышению концентрации общего белка с с 78,6 ± 1,3 (г/л) до 81,9 ± 1,95 (г/л), в то время как в контроле этот показатель, практически, не изменился (табл. 5).

Таблица 6

Динамика бактерицидной активности (%) сыворотки крови коров

Контроль Опыт

20.03.2008 (начало опыта) 22.04.08 04.06.08 20.03.08 (начало опыта) 22.04.08 04.06.08

84,5+1,1 80,9+1,1 78,8+3,2 84,18+1,3 81,45±1,9 82,8+1,1

Изучение динамики БАК активности крови (табл.6), а также образования ЦИК, показало, что добавление в корм Солуната не оказало отрицательного влияния на процесс образования иммунных комплексов, т.к. количество их было не велико и практически не отличалось по группам. БАК крови коров из опытной группы в течение эксперимента была всегда выше, чем у контрольных животных.

Анализ полученных данных показал отсутствие токсических свойств у кормовой добавки Солунат. В результате проведенных исследований у животных опытной и контрольной групп значительных различий в изучаемых показателях не отмечено. Кроме того, выявлено некоторое положительное влияние Солуната на иммунологические показатели. Например, в апреле (период сезонно низкой резистентности организма) у животных., получавших Солунат, была несколько выше концентрация общего

белка в сыворотке крови, ФЧ и относительная поглотительная способность нейтрофилов по сравнению с контролем.

Таким образом, изучение влияния Солуната в дозе 1 мг/кг живой массы на клинические, гематологические биохимические показатели, а так же на иммунный статус КРС, показало что Солунат не оказывает какого - либо негативного воздействия на организм жвачных животных. Использованная в экспериментах доза Солуната (по основному действующему веществу) - 1 мг/кг живой массы была в 10 раз меньше той дозы, которая задавалась лабораторным животным (крысам) при исследовании субхронической токсичности Солуната (раздел 3.2.2.1.2. диссертации), следовательно, дозы в интервале 1+5 мг/кг живой массы КРС, по-видимому, будут безвредны для животных.

Влияние Солуната на развитие плода и отелы коров. Было проведено наблюдение за отелами и новорожденными телятами, родившимися от 10 коров, которым в течение 2-х месяцев сухостойного периода скармливали Солунат в дозе 500 мг по активному веществу. Следует отметить, что роды у коров опытной группы проходили нормально, без осложнений, в то время как коровы из контрольной группы (10 голов) имели осложнения, чаще всего у них с трудом отходил послед: у 6 коров из 10. Новорожденные телята от коров из обеих групп были хорошо развиты, имели правильное сложение, каких - либо уродств или функциональных нарушений у телят не наблюдали.

3.2.4. Исследование влияния Солуната на процессы пищеварения в желудочно-кишечном тракте жвачных животных. Во время проведения экспериментов основной рацион, который получали коровы, состоял из силоса козлятника восточного (30 кг), сена разнотравного (5 кг), патоки кормовой (1,5 кг) и комбикорма (8 кг). Комбикорм для коров состоял из пшеницы, ячменя, кукурузы, пшеничных отрубей, подсолнечного шрота, минеральных добавок. В табл. 7 показано фактическое содержание в рационе сухого вещества, обменной энергии, органического вещества, сырого протеина, БЭВ, сырой клетчатки, сырого жира, сырой золы.

Таблица 7

Показатели Опыт Контроль

Сухое вещество, кг 19,6+0,3 20,1 ±0,2

Обменная энергия, МДж 180,5±25,0 185,5±34,0

Органическое вещество, кг 17,9 + 0,3 18,7 + 2,1

Сырой протеин, г 2614 + 66 2647 ±49

БЭВ, г 10752 + 230 И 357 ±232

Сырая клетчатка, г 4254±166 4416+128

Сырой жир, г 319 ± 17 326 + 21

Сырая зола, г 1683 ±31 1380 + 32

3.2.4.1.Влияние Солуната на процессы пищеварения в рубце КРС.

С целью изучения процессов пищеварения в рубце жвачных животных под влиянием Солуната, было проведено определение уровней образования аммиака и ЛЖК, которые служат показателями интенсивности ферментативных процессов в рубце. В экспериментах выявлено, что введение в рацион коров кормовой добавки Солунат сначала незначительно ускоряло процесс образования аммиака и ЛЖК, а затем - снижало. Таким образом, можно предполагать наличие эффекта частичной защиты белка в рубце. Кроме того, следует отметить выраженную тенденцию (р< 0,2) к увеличению значений рН рубцовой жидкости опытных (6,19) животных, по сравнению с контрольными (5,9), особенно в период самой интенсивной ферментации (1-3 часа после кормления). Спад у животных опытной группы активности ферментации после ее пика через час от начала кормления к третьему часу, судя по снижению уровня аммиака и общего количества ЛЖК в содержимом рубца и постоянно несколько более высокому рН, позволяют предположить действие тормозящего фактора. Можно полагать, что это эффект от полимерной кормовой добавки Солунат.

Изучение микробиологических процессов в рубце коров показало некоторое снижение амаполитической активности, а также увеличение количества бактерий и инфузорий в рубце животных опытной группы по сравнению с контролем (табл. 8). По данным, представленным в табл. 8, видно, что в опытной группе количество бактерий и инфузорий несколько выше, чем в контроле. Изучение эффективности микробного синтеза в рубце коров показало, что Солунат снижает на 10% эффективность микробного синтеза при одновременном снижении распадаемости СП грубых кормов рациона на 8,5%.

Таблица 8

Среднесуточные показатели микробиологических процессов в рубце коров

контрольной и опытной групп

Группа Число бактерий, млрд/мл Число инфузорий, тыс/мл Амилолитическая активность, Е/мл Целлюлозолитическая активность, %

Контроль 8,10 ± 0,16 141,6 ±26,3 41,60 ±1,45 15,6 ±0,3

Опыт 8,50 ±0,16 178,0 ±21,2 36,80 ± 2,48 14,9+1,1

Исследование распадаемости и переваримости СВ и СП комбикормов в рубце при использовании Солуната, выявило, что в опыте по сравнению с контролем распадаемость СП снижалась на 8,2%.

3.2.4.2. Изучение переваримости питательных веществ корма в тонком отделе кишечника. Изучение процессов переваривания питательных веществ корма в тонком отделе кишечника проводили, используя данные, полученные в балансовом опыте на основе анализа химуса и кала.

При добавлении Солуната к комбикормам наблюдалось повышение показателей переваримости для всех питательных веществ в тонком отделе

кишечника коров. Особенно повышалась переваримость СП - на 9,7 % по сравнению с контролем (табл. 9). Повышение переваримости в кишечнике, очевидно, обусловлено активацией трипсина и амилазы химуса полимерной добавкой. Переваримость СП могла увеличиться и за счет изменения соотношения микробного и кормового протеина, поступающего из желудка.

Полученные экспериментальные данные дают определенные основания в пользу представления о том, что воздействие полимерной добавки Солунат на процессы пищеварения у жвачных животных может сопровождаться оптимизацией среды обитания бактериальной флоры рубца и защитой кормового белка от распада в рубце.

Выявленное в экспериментах повышение переваримости сырого протеина и других питательных веществ в тонком отделе кишечника, вероятно, связано с активацией пищеварительных ферментов, иммобилизованных на мембранах эпителиальных клеток тонкого отдела кишечника, а также, возможно, вызвано с некоторым усилением активности растворенных ферментов пищеварительных соков.

Таблица 9.

Переваривание питательных веществ в кишечнике коров_

Показатели Контроль Опыт

Переварено, г Переваримость,% Переварено, г Переваримость,%

Сухое вещество 4287 ±281 36,0 ± 1,3 4928 ±421 39,4 ±2,1

Органическое вещество 2746 ±174 29,2 ±1,2 3224 ±421 32,6 ± 3,4

Сырой протеин 1809 ±92 62,8 ± 0,6 2130 ±59 68,9 ± 1,1

БЭВ 561 ± 18 17,9 ±2,8 679 ± 37 24,9 ± 0,8

Сырой жир 375 ±61 74,4 ±4,1 415 ±48 76,7 ± 1,1

Сырая зола 1540±124 61,6± 1,3 1703 ± 172 64,2 ± 4,6

Важным фактором обеспечения оптимальных условий среды для действия ферментов пищеварительных соков является создание большой поверхностной площади контакта фермента с субстратом, что, очевидно, может обеспечить использование ВВП, молекулы которого растворимы в воде и сохраняют свою активность в качестве сорбента как с наружной поверхности глобулярной молекулы полимера, так и с внутренней, при этом активность ферментов не изменяется. Кроме того, как было отмечено выше, белковая молекула фермента, в интерполимерном комплексе может приобретать новые свойства, например, может стабилизироваться ее ферментативная активность.

Таким образом, основываясь на представленных выше данных, можно предположить, что повышение обеспеченности животных протеином при использовании ВВП осуществляется по двум механизмам посредством образования белок-полимерных комплексов: путем защиты белка от распада в рубце жвачных и путем повышения переваримости в тонком отделе кишечника за счет активизации пищеварительных ферментов.

3.2.5. Механизм влияния ВВП, вводимого с кормом в организм животного, на продуктивность крупного рогатого скота

3.2.5.1. Механизм поведения ВВП в желудочно-кишечном тракте жвачных животных. В ЖКТ животных ВВП (в составе Солуната) попадает с частичками концентрированных кормов, которые предварительно подвергают обработке Солунатом. При этом молекулы полимера обволакивают частички раздробленного зерна концкормов и за счет вязкости удерживаются на них. Поступая в рубец жвачных с кормом, ВВП способны удерживаться на частицах корма, вероятно более суток, постепенно переходя в водную фракцию рубцового содержимого, образуя при этом в рубце комплексные соединения с растворенными белками. Этому способствует кислотность среды рубца, т.к. комплексные соединения ВВП образуются и достаточно устойчивы в нейтральной или слабокислой среде при значениях рН выше 5,0.

Данные, полученные in vivo, показали, что защита протеинов концентрированных кормов в рубце, составляла 8,2%. Степень защиты белка основного рациона (сена и силоса) от распада в рубце составляла 4,8 %. О существовании эффекта защиты белка от распада свидетельствует факт несколько пониженного, по сравнению с контролем, процесса образования аммиака и ЛЖК в рубце в период наиболее активной ферментации (через 3 часа после приема корма). Что касается рубцовой микрофлоры, то очевидно, полимер не только не оказывает отрицательного влияния на ее жизнедеятельность, но и, видимо, оптимизирует среду ее обитания, т.к. количество бактерий и инфузорий в рубце было больше у животных, получавших с кормом ВВП, очевидно за счет нормализации рН в рубце. Оптимизация среды обитания для микрофлоры является важным моментом, т.к. для жвачных животных бактериальный белок - существенный источник белкового питания.

Далее белок-полимерный комплекс поступает из преджелудков в сычуг, где под влиянием высокой кислотности среды комплекс распадается. Защищенный кормовой белок высвобождается и гидролизуется в кислой среде протеолитическими ферментами до полипептидов, которые поступают затем в верхний отдел тонкого кишечника, где окончательно перевариваются до аминокислот и усваиваются организмом. В 12-перстной кишке и тонком отделе кишечника химус имеет среду, близкую к нейтральной или выше. Кислотность этой среды благоприятна для образования интерполимерных комплексов, поэтому здесь, очевидно, снова могут образовываться комплексы ВВП с полипептидами, белками и аминокислотами. Эти комплексы могут находиться как в содержимом тонкого отдела кишечника, так и прикрепляться к белково-липидной цитоплазматической мембране слизистой оболочки кишечника, в структуру которой входят выступающие структурные белковые молекулы. В то же время, ВВП могут взаимодействовать не только со структурными белками мембран, но и с-ферментами, иммобилизованными на поверхности цитоплазматических' мембран эпителиальных клеток тонкого кишечника. При этом ВВП, вероятно, облегчают процесс всасывания конечных продуктов гидролиза белков, за счет того, что интерполимерные комплексы с аминокислотами

позволяют последним довольно быстро перемещаться вдоль клеточной мембраны эпителиальных клеток кишечника за счет реакции межмолекулярного замещения.

Очевидно, под влиянием полимеров усиливается всасывание ионов некоторых металлов, например кальция или калия. Увеличение проницаемости для ионов может быть связано с какими-либо структурными изменениями мембраны (например, падение мембранного потенциала). В то же время образование внутриклеточных градиентов концентрации катионов, в частности кальция, может служить пусковым механизмом регуляции метаболических систем клетки (в частности, активизация мембранных ферментов АТФ-аз).

В толстый отдел кишечника полимеры поступают в неизменном виде, поскольку в эпителиальных клетках кишечника нет ферментов для расщепления ВВП. Завершающим этапом нахождения полимера в ЖКТ является его полное выведение из организма с экскрементами, поскольку ВВП не могут преодолеть мембраны клеток желудочно-кишечного тракта. Об этом свидетельствуют литературные данные и результаты собственных исследований, доказывающие неспособность молекул полимера проходить через фильтры, с размерами пор, равными диаметру канальцев мембран клеток млекопитающих, и на порядок выше.

Следствием всего выше сказанного должен активизироваться обмен веществ и повыситься продуктивности животных.

3.2.5.2. Теоретические расчеты, обосновывающие возможность

повышения продуктивности скота с применением полимерных

соединении

Для проведения теоретических расчетов по прогнозу повышения продуктивности жвачных животных с применением полимерных соединений (на примере образования молока) была проанализирована доступная литература по белковому составу растительных кормов зерновых.

В зерне злаковых растений и жмыхах, из которых готовятся концентрированные корма (комбикорма, зерносмеси, шроты, жмыхи и пр.), используемые в рационах жвачных животных, содержится несколько разновидностей простых белков - протеинов, которые подразделяют на альбумины, глобулины, глютелины, проламины. Глютенин пшеницы, содержание которого в зерне достаточно высокое, является достаточно гетерогенным и имеет широкий спектр молекулярной массы - от 100000 Да до нескольких миллионов Да. Шрот сои и жмых подсолнечника содержат наиболее высокое количество белка. Соевый белок являясь легкоусвояемым, высокоценным, достаточно сбалансированным по аминокислотному составу, в своем составе имеет преимущественно глобулины (60-90%) с молекулярной массой - 100000 до 380000 Да. Можно предположить, что реально в рубце у жвачных присутствующая (равновесная) доза полимера может быть близка 1,0 г, т.к. ввиду своей высокой вязкости ВВП должны медленно выводиться из организма.

Теоретические расчеты показали, что 1 г полимера с молекулярной массы = 1x106 Да может удержать от 150 г белка (с молекулярной массой = 3x105 Да) до 429 г растительного белка (с молекулярной массой, равной 1,5x106 Да), в зависимости от молекулярной массы белковых молекул разных кормов и некоторых других условий. Если считать, что равновесная концентрация полимера, имеющего молекулярную массу =1x10б Да и более (например, ПЭККА), в рубце коровы, равна 1,0 г, то этого будет достаточно для обеспечения образования молока коровой в количестве более 1 литра.

3.2.6. Изучение влияния Солуната на продуктивность крупного рогатого скота в натурных условиях

3.2.6.1. Влияние Солуната на мясную продуктивность молодняка крупного рогатого скота. Изучение влияния Солуната на мясную продуктивность проводили на бычках черно-пестрой породы. В каждой серии экспериментов формировались две-три группы животных (по 15 голов в каждой) по принципу парных аналогов. Содержание бычков было стойловое привязное. Кормление животных проводилось из индивидуальных кормушек по принятой в хозяйстве технологии, с использованием рационов, составленных по действующим нормам. Рационы контрольной и опытной групп различались лишь тем, что в рацион животных опытной группы включали кормовую добавку Солунат, которую давали ежедневно животным в смеси с комбикормом 1 раз в сутки, во время утреннего кормления. Влияние кормовой добавки Солунат на мясную продуктивность бычков оценивали путем индивидуального взвешивания бычков утром (в одно и то же время), до кормления, индивидуально каждое животное, два дня подряд.

Изучение влияния Солуната на привесы у бычков 5-6-ти месячного возраста. Для проведения эксперимента были сформированы 3 группы бычков: одна контрольная и две опытных. В опытах было показано, что применение Солуната в дозах 250 мг/(гол*сут) (1-я опытная группа) и 500 мг/(гол*сут) (2-я опытная группа), способствовало увеличению живой массы бычков по сравнению с контролем. Исходная живая масса бычков в контроле составляла 118 ± 5 кг/(гол*сут), в 1-ой опытной группе-115±7 кг/(гол*сут), в 2-ой опытной группе-116±4 кг/(гол*сут).

За 62 дня выращивания живая масса животных 1-ой и 2-й опытных групп увеличилась на 47,5 кг и 45,1 кг, соответственно. В то время как в контроле увеличение живой массы за тот же период составило 32 кг. Более высоким был этот показатель у животных, получавших с кормом Солунат, в количестве 250 мг /(гол*сут) по активному веществу (опытная группа 1). У этих же бычков была выше и интенсивность роста. Так, увеличение среднесуточного привеса у этих животных за 62 дня опыта составило 766±15 г/(гол*сут), а в контроле- 516±13г /(гол*сут), т.е. привес живой массы у бычков опытной группы 1 (по сравнению с контрольными) был на 250 г/(гол*сут) выше. Бычки второй опытной группы, получавшие Солунат в дозе 500 мг /(гол*сут), дали привесы живой массы 727±10 г/(гол*сут), что на 211 г/(гол*сут) больше по сравнению с контролем.

Влияние добавки Солупат на прпвссы бычков 8-мн месячного возраста. Для проведения эксперимента были сформированы контрольная и опытная группы животных. Влияние кормовой добавки Солунат, в дозе 500 мг/(гол*сут), оценивали путем индивидуального взвешивания бычков в начале опыта (постановочная живая масса), и далее - трижды, каждые 25 дней (I, Г! и 111 периоды). Опыт продолжался 75 дней. Исходная живая масса бычков, в среднем, составляла в контрольной группе - 208,8±5 кг, в опытной - 208,5±6 кг. Увеличение живой массы бычков в опытной группе за первые 25 суток эксперимента (1 период) составило, в среднем, 20,0±1,6 кг/гол, а в контрольной - 17,6± 0,8 кг/гол, т.е. на 2,4 кг в опыте больше, чем в контроле. За II и III периоды выращивания бычков увеличение живой массы в опытной группе было 25±1,3 кг/гол и 29,3±1,6 кг/гол, а в контрольной-20,5±1,5 кг/гол и 23,7±0,9 кг/гол, соответственно. Следовательно, за II период было получено дополнительной живой массы в опытной группе на 4,5 кг, а за III период - на 5,6 кг больше, чем в контроле. За весь период эксперимента (75 суток) увеличение живой массы бычков в опытной группе составило, в среднем 74,3±4 кг/гол, а в контрольной - 61,8±4,5 кг, т.е. в опыте было на 12,5 кг больше, чем в контроле. Интенсивность роста бычков опытной группы была существенно выше, чем контрольной. Так, абсолютная дополнительная ежесуточная прибавка массы тела бычков в расчете на одну голову, в среднем, по опытной группе составила за первые 25 суток (1 период) - 799± 34 г/гол, за II и III периоды - 999±22 г/гол и 1172± 31 г/гол, соответственно, в то время как в контрольной - 704±35 г/гол, 820±25 г/гол и 950±28 г/гол, соответственно. За весь период эксперимента (75 суток) абсолютный среднесуточный прирост живой массы в опытной группе составил 990±21 г/гол, что на 166 г выше, чем в контроле (824±25 г/гол).

Относительная скорость роста бычков за весь период эксперимента составила: в опытной группе 35,6 %, а в контрольной - 29,6 %, т. е. в опытной группе была выше, чем в контроле, на 6,0 %.

3.2.6.2. Эффективность Солуната по повышению молочной продуктивности крупного рогатого скота. Эксперименты проводились на коровах в стадии глубокой стельности (9-й месяц беременности), а также на лактирующих коровах на разных стадиях лактации, с использованием молочной и мясо-молочной пород скота. При проведении опытов формировали контрольную и опытную группы из животных по принципу парных аналогов. Опытная группа получала те же корма и в тех количествах, что и контрольная, отличие было в том, что в комбикорм для коров опытной группы добавляли Солунат из расчета 500 мг/(гол*сут). Молочную продуктивность коров определяли контрольными дойками, путем измерения утреннего и вечернего удоев молока индивидуально от каждой коровы, через определенные интервалы времени.

3.2.6.2.1. Влияние кормовой добавки Солунат на удои коров

3.2.6.2.1.1. Влияние Солуната на удои коров, которые получали Солунат до отела (в стадии глубокой стельности). В стадии глубокой стельности происходит интенсивный рост плода, формируются его ткани и

органы, что требует значительного расхода органических и минеральных веществ. В то же время питательные вещества необходимы и для поддержания жизни животного. При этом следует учитывать, что несмотря на относительно высокие потребности коровы в питательных веществах, особенно в протеине, в этот период, вследствие беременности коровы, сильно уменьшен размере рубца, а значит уменьшается количество корма, который может потребить корова и, следовательно, снижено потребление необходимых питательных веществ, в которых нуждается животное. Кроме того, во время сухостойного периода организм коровы должен накопить достаточное количество питательных веществ, потому что после отела корова должна выработать большое количество молока, на синтез которого не хватает энергии питательных веществ рациона. В связи с этим в начале лактации у коров, особенно высокопродуктивных, часто наблюдается значительный дефицит энергии, для покрытия которого организм интенсивно использует запасы питательных веществ, отложенных в теле в течение сухостойного периода. Особенно в этот период организм животных нуждается в белке.

Применение Солуната на мясо-молочной породе скота. В эксперимент были отобраны коровы айширской породы в стадии глубокой стельности (7,5-8,0 месяцев). Эксперимент был проведен на базе МТФ ООО «Хвалово» Ленинградской области, в пастбищный сезон года. Опыт был начат с 1 июля и длился до конца сентября - всего 9 декад. Были сформорованы 2 группы из коров-аналогов, находящихся в стадии глубокой стельности, по 10 голов в каждой, в возрасте 4-5 лет, с продуктивностью по предыдущей лактации в опытной группе - 3780±770 кг и в контрольной -3770±970 кг. Рацион животных состоял из 35 кг зеленой массы и 2 кг комбикорма марки К-60 (для пастбищного периода). Коровы опытной группы получали кормовую добавку Солунат в течение 30-45 дней до отела и далее - 60 дней после отела. Контрольные дойки проводили ежедекадно.

Полученные данные свидетельствуют о том, что в течение опыта, длившегося в общей сложности 90 дней, среднесуточные удои были всегда выше в опытной группе и плавно нарастали в течение 60 дней лактации. Следует обратить внимание на тот факт, что положительный эффект от применения кормовой добавки Солунат был замечен во время первой контрольной дойки, т.к. коровы, которым начали давать Солунат в период глубокой стельности, уже в первую декаду лактации дали на 2,7 л молока больше, чем контрольные. Особенно большие различия по надоям между группами были получены в 5-ую и 6-ую декады лактации. За весь период эксперимента среднесуточный удой на 1 голову в опытной группе, получавшей Солунат, составил 14,1±1,2 л; в контрольной - 12,2±1,5 л, т. е. коровы опытной группы дали на 1,9 л/(гол*сут.) молока больше, чем контрольные.

Применение Солуната на молочной породе скота. В опыт были отобраны коровы черно-пестрой породы скота в стадии глубокой стельности (8 месяцев). Эксперимент был проведен на базе МТФ АО «Кривское»

Калужской области, с января по июнь. Весь период эксперимента составил 130 дней. Были составлены 2 группы из коров-аналогов, по 5 голов в каждой, в возрасте 4-5 лет, с молочной продуктивностью по предыдущей лактации в опытной группе - 3551 ±230 кг и в контрольной - 3428±239 кг.

Эксперимент показал, что за 100 дней лактации контрольные коровы раздоились с 17,4±2,7 л/(гол*сут) до 20,8±2,9л /(гол*сут), а опытные - с 17,8±1,3 л/(гол*сут) до 26,5±0,8 л/(гол*сут). За весь период эксперимента средний ежесуточный удой контрольных коров составил 20,3±1,4 л, а опытных - 22,1±1,3 л, следовательно, Солунат способствовал получению дополнительного молока в количестве 1,8 л/(гол*сут). Валовый надой молока у коров, получавших Солунат был всегда выше, чем у контрольных и за 100 дней лактации от 5 коров в контрольной группе составил 10135 л, а в опытной - 11050 л, что на 915 л больше, чем в контроле. Следует отметить, что объем молозива, который был измерен в первые сутки после отела, у опытных коров был существенно выше и составлял 68 л от 5 опытных коров и 48 л - от 5 голов контрольных.

3.2.6.2.1.2. Влияние Солуната па молочную продуктивность коров, получавших Солунат в фазе раздоя и в средней фазе лактации

Применение Солуната в рационе иизкопродуктивиых коров, находящихся в стадии раздоя. Эксперимент был проведен в Брянской области Красногорском районе, на базе МТФ СПК «Дубенецкий». Коровы черно-пестрой породы, в возрасте 4-5 лет, второй месяц лактации. Содержание коров стойловое привязное. Животных кормили согласно принятым нормам, из индивидуальных кормушек. Солунат давали животным в течение 75 дней, смешивая с 1 кг зерносмеси. Контрольные дойки проводили через каждые 15 дней.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что применение Солуната способствовало более значительному увеличению удоев у опытных коров по сравнению с контрольными. В конце опыта, на 75-ый день, молочная продуктивность коров опытной группы увеличилась, в среднем, с 7,6±0,2 л/(гол*сут) до 10,8±0,3 л/(гол*сут), т.е .- на 3,2 л/ (гол*сут), в то время, как в контрольной с 7,6+0,1 л/(гол*сут) - до 9,6±0,3 л/(гол*сут), т.е. -в среднем, на 2,0 л /(гол*сут). Таким образом, применение кормовой добавки Солунат в рационе низкопродуктивных коров в первой фазе лактации способствовало получению дополнительного молока на 1,2 л/(гол*сут).

Применение Солуната в рационе низкопродуктивных коров, находящихся в средней стадии лактации. Научно-хозяйственный эксперимент был проведен на базе Бирючанской молочно-товарной фермы ОАО «Оскольские просторы», Белгородской области. Были сформированы 2 группы коров-аналогов, по 7 голов в каждой, в возрасте 4 лет. Коровы получали кормовую добавку Солунат в течение 30 дней. Дачу Солуната начали в феврале, через 3 месяца после отела (90 дней лактации). Контрольные дойки были проведены в начале и конце эксперимента.

Анализ полученных данных показал, что контрольные коровы в течение четвертого месяца лактации не увеличили молочную продуктив-

ность: в начале эксперимента она была равна 13,0±0,4 л, через месяц - 13,0 ± 0,3 л. При этом жирность молока, концентрация белка в нем и плотность молока, практически, не изменились. Лактирующие коровы, в концкорма которых вводили Солунат, увеличили удон молока в физическом объеме с 14,4±1,2 л/(гол*сут) до на 16,6 ±0,9 л/(гол*сут), т. е. на 2,2 л, при этом повысилась (относительно исходного) плотность молока на 1,6 °А; процент содержания жира - на 0,15±0,01; белка - на 0,2±0,02.

Применение Солуната в рационе высокопродуктивных коров

В условиях животноводческих хозяйств Северного и Южного Федеральных округов России, расположенных на территории Ленинградской и Белгородской областей, были проведены эксперименты по изучению влияния Солуната на процессы образования молока у высокопродуктивных коров в первой и средней фазах лактации. Кроме того, в экспериментах изучалось влияние пивной дробины, введенной в рацион, на эффективность кормовой добавки Солунат по повышению молочной продуктивности коров, т.к. пивная дробина широко используется в кормлении дойного стада в животноводческих хозяйствах Ленинградской области и некоторых других областях РФ.

Применение Солуната в рационе высокопродуктивных коров на раздое Скармливание Солуната коровам со среднесуточным удоем молока 24,0

л. Эксперимент продолжительностью 30 дней был проведен в летний сезон года, в условиях молочно-товарной фермы Белгородской области, на коровах черно-пестрой породы, которые выпасались на пастбище и поедали зеленую траву (вволю) и комбикорм К-60 в количестве 6 кг на 1 голову в сутки: из них Солунатом обрабатывали 2 кг комбикорма. В сформированных двух группах-аналогах по 10 голов в каждой коровы находились на 25-30-ом дне лактации. Эксперимент показал, что применение Солуната повысило среднесуточные удои коров с 24,3 ±1,5 л/(гол*сут) до 26,9 ±1,4 л/(гол*сут), т.е. - на 2,4 л/(гол*сут), а валовый надой от 10 коров, в среднем, за 30 дней дачи Солуната увеличился на 630 л.

Скармливание добавки Солунат коровам со среднесуточным удоем молока от 24,0 л до 47,0 л.

1 серия экспериментов, Белгородская область.

Эксперимент был проведен в стойловый период, продолжительностью 16 дней в условиях молочно-товарной фермы колхоза им. Фрунзе, Белгородской области (южный регион). Коровы были черно-пестрой породы (новый - бессоновский тип). Содержание коров стойловое привязное. Дачу Солуната начали первого марта и продолжали в течение 16 дней, один раз в день во время обеденного кормления, в смеси с 2 кг комбикорма (в остальные 10 кг комбикорма Солунат не вносили). Рацион коров содержал: сенаж - 10 кг; силос - 15 кг; сено (многолетние травы) - 3 кг; комбикорм - 12 кг; жом - 5 кг; патока - 1,4 кг. Комбикорм был приготовлен на комбикормовом заводе хозяйства. Имел следующий состав: пшеница - 7 %; ячмень - 5,2 %; кукуруза - 37,7 %; горох - 20 %; шрот подсолнечника 25 %; монокальций фосфат - 2,0 %; поваренная соль 2,0 %; премикс - 2 %. В

опытной группе дополнительный удой молока по сравнению с контролем составил 0,5 л, т.к. в контрольной группе прибавка молока составила 3,0 л, а в опытной - 3,5 л. Приведенные данные получены от коров с лактацией на начало опыта от 24,0 до 31,0 л. Анализ полученных результатов позволяет заключить, что в начале периода раздоя (17-26 дней после отела) при использованном рационе опытпые коровы раздаивались в течение 16 дней (период опыта) несколько быстрее, чем опытные.

2 серия экспериментов, Ленинградская область.

Научно-исследовательская работа была выполнена на базе молочнотоварной фермы «Сосновая горка», Выборгского района. В эксперимент были взяты голштинизированные черно-пестрые коровы в возрасте 4-5 лет. В корм коров, кроме основного рациона, была введена пивная дробина, в количестве 25-30 кг/(гол*сут.). При исходном среднесуточном удое коров 25,2 л/гол- в контроле и 29,2 л/гол - в опыте, в первой фазе лактации, дача Солуната на 35-50-й день лактации позволила за 12 дней увеличить средний суточный удой на 3,2 л/гол, в то время, как в контроле - прибавка молока, в среднем, составила 0,5 л/гол Таким образом, применение кормовой добавки Солунат способствовало увеличению среднесуточных удоев молока на 2,7 л/гол по сравнению с контролем. Удои от коров, находящихся на 60 -70-м дне лактации, которым давали Солунат, увеличились, в среднем, на 2,6 л /(гол*сут.) молока, в то время как в контрольной группе - снизились на 0,6 л за тот же срок.

Применение Солуната в рационе высокопродуктивных коров, находящихся в средней фазе лактации. Полученные в эксперименте сравнительные данные по удоям коров, получавших Солунат и контрольных, свидетельствуют о том, что в конце первой фазы лактации (раздой) - после 100 дней и в течение 40 дней средней фазы лактации у контрольных коров происходит снижение удоев, в среднем, на 0,8 л. В то же время у опытных животных, получавших тот же рацион, что и контрольные, не только не происходит уменьшение удоев молока, но наоборот - у коров повышаются удои, в среднем, на 0,85 л/(гол*сут.).

Таким образом, данные, полученные в натурных условиях хозяйств, по изучению влияния кормовой добавки Солунат на образование молока, свидетельствуют о том, что коровы, получавшие с концентрированными кормами Солунат, имели более высокие удои, чем контрольные животные. Коровы, получавшие Солунат в стадии глубокой стельности, сразу после отела вырабатывали больше молозива и удои молока у них нарастали более быстро, чем у контрольных коров. Коровы, которых не кормили Солунатом в стадии сухостоя, но начали получать Солунат в разные сроки после отела, также прибавляли удои, причем начинали это делать через 10-12 дней от начала дачи Солуната. Поскольку контрольные и опытные коровы содержались в одинаковых условиях и получали одинаковый по составу и количеству рацион, то повышение молочной продуктивности опытных коров можно объяснить только введением в их рацион добавки Солунат. Полученные результаты служат косвенным подтверждением положитель-

ного влияния Солуната (описано в разделе 3.2.4.) на пищеварительные процессы жвачных животных.

3.2.6.2.2. Влияние Солуната на показатели качества молока. Применение Солуната способствовало повышению (относительно исходного) плотности молока на 1,6 °А; процента содержания жира - на 0,15 и белка - на 0,2. Исследование минерального состава молока показало, что содержание некоторых микро- и макроэлементов в молоке животных опытной группы повысилось: калия - на 14%, натрия - на 13,6%, цинка - на 18%, кальция и магния-на 4,0% и 5,0%, соответственно. Концентрация других определяемых элементов, практически, не изменилась.

3.2.7. Изучение эффективности кормовой добавки Солунат на радиоактивно загрязненных территориях

Продукция животноводства (молоко, мясо) является одним из основных источников формирования доз внутреннего облучения населения на радиоактивно загрязненных территориях, что определяет первоочередность и важность решения проблемы обеспечения ее радиационной безопасности. До настоящего времени основные работы были направлены на поиск сорбентов - препаратов, препятствующих поступлению радионуклидов в организм животных, но не увеличивающих их продуктивность. В настоящее время в качестве специфических сорбентов, используются препараты, изготавливаемые на основе ферроцианидов. Однако, обладая достаточно высокой эффективностью, они имеют недостатки, в том числе отсутствие способности у ферроцианидов повышать продуктивность животных. В то же время при ведении скотоводства на радиоактивно загрязненной территории большое значение имеет экономическая эффективность проводимых специальных мероприятий для получения экологически чистой продукции. Одним из способов решения проблемы в этом случае может являться применение добавок в корм, способствующих снижению накопления радионуклидов в организме животных и одновременно увеличивающих их продуктивность. Следует отметить, что литературные источники, практически, не освещают данное направление.

3.2.7.1. Предпосылки использования ПЭККА, основного действующего вещества Солуната, в качестве растворимого сорбента 137Ся.

В настоящее время, по-видимому, единственным нашедшим практическое применение эффективным способом, снижающим поступление '"Се в организм животного, является сорбция в ЖКТ радиоцезия специфическими сорбентами на основе ферроцианидов, которые представляют собой нерастворимые гетерогенные (твердые) сорбенты, имеющие ряд недостатков. Существенными недостатками являются низкая скорость молекулярной диффузии, за счет которой происходит перенос ионов металлов к поверхности твердого сорбента, а также достаточно низкая дисперсность частиц твердого сорбента. Растворимый же сорбент на основе ВВП, в частности полимер ПЭККА, имеет очень высокую степень дисперсности, равную диаметру молекулярного клубка порядка 100 нм.

Поэтому растворимый сорбент нового типа на основе ВВП теоретически должен быть активен в количествах значительно меньших, чем известные ныне твердые нерастворимые (гетерогенные) сорбенты. В то же время макромолекулы ПЭККА, имеющие диаметр ~ 100 нм не смогут преодолеть клеточные барьеры ЖКТ и попасть во внутренние среды организма и, следовательно, - в продукты животноводства.

Теоретической основой возможности использования ВВП в качестве активного вещества нового типа растворимого сорбента для удержания ионов I37Cs, является свойство ПЭККА образовывать комплексы не только с белками, но и с ионами металлов.

В экспериментах in vitro, было показано, что полимер ПЭККА в нейтральной (или слегка кислой) среде, способен за счет достаточно прочных связей, образовывать комплексы с ионами металлов, в том числе с ионами РЬ+2, близкого по размеру атома к радиоактивному изотопу ,37Cs+2. Как показано в экспериментах, даже под давлением эти комплексы не распадаются в течение 3-х суток (срок наблюдения), при этом степень удержания полимером ионов свинца в вертикальной ячейке достаточно высока и составляла 93,35 - 95,6 %. Способность ВВП образовывать комплексные соединения с ионами металлов была использована для создания растворимого гомогенно распределяющегося сорбента, образующего нерастворимые комплексы с радиоактивным изотопом ,37Cs+2.

Поскольку ПЭККА, входящий в состав Солуната в качестве основного действующего вещества, показал себя как хороший сорбент ионов металлов и белка in vitro, а так же показал высокую эффективность в научно-производственных экспериментах in vivo, по увеличению продуктивности скота, то были проведены исследования в условиях животноводческих хозяйств по изучению эффективности кормовой добавки Солунат в плане снижения концентрации радионуклидов в продукции животноводства, и одновременно способствующего увеличению продуктивности животных.

3.2.7.2. Радиологическая обстановка в опорных животноводческих хозяйствах. Испытания Солуната на радиоактивно загрязненной территории (плотность загрязнения почв 137Cs от 15 до 40 Ки/км2) были проведены в Брянской области, Новозыбковском районе, на базе молочно-товарной фермы «Деменки» ГУ «Новозыбковская государственная сельскохозяйственная опытная станция ВНИИА» (Россия), а так же на базе хозяйства КСУП «Дубовый Лог», Гомельская область, Добрушский район ( Беларусь).

3.2.7.3. Эффективность применения кормовой добавки Солунат в рационе дойного стада, содержащегося на радиоактивно загрязненной территории.

3.2.7.3.1. Научно - производственные эксперименты на базе фермы «Деменки», Брянская область. Для определения эффективности Солуната по снижению концентрации 137Cs в молоке в хозяйстве Брянской области были проведены 2 серии производственных испытаний на дойных коровах, черно-пестрой породы, в стадии раздоя.

1 серия экспериментов.

Содержание коров стойловое, привязное, кормление из индивидуальных кормушек. Уровень загрязнения молока '"Сб па начало эксперимента составлял = 120 Бк/кг. Анализ данных спектрометрии образцов молока показал, что при концентрации |37Сб в кормах, равной 10-12 кБк/сут, добавление Солуната в дозе по активному веществу = 0,5 г/(гол*сут), снижало концентрацию 137Сз в молоке на 24, 16 и 13 % по сравнению с контролем. Скармливание кормов, содержащих более низкие концентрации ,37Сз - 2-3 кБк/сут, снижало концентрацию радиоцезия в молоке коров опытной группы на 14-20 %, относительно контроля. За весь период опыта (~ 2 мес.) применение Солуната при кормлении коров, снижало концентрации в7Сз в молоке, в среднем, на 17 %.

2 серия экспериментов.

Содержание коров пастбищное, кормление концентрированными кормами с добавлением Солуната проводилось из индивидуальных кормушек, во время обеденной дойки. До начала эксперимента концентрация 137Сэ в молоке составляла, в среднем, 275±95 Бк/кг. Солунат давали животным в смеси с концентрированными кормами в дозе 1,0 г действующего вещества на I голову в сутки. Первые 4 суток эксперимента зеленые корма, которые поедали коровы, содержали '"Се 1464 ± 190,6 Бк/кг; в следующие 4 суток - концентрация '"Се в кормах стала ниже и стала равна 652,2 +108,6 Бк/кг; в последующие 7 суток она составила 475198,2 Бк/кг. Эксперимент показал (рис. 1), что через 4 суток от начала применения Солуната началось снижение концентрации ''"Сй в молоке коров относительно контроля до 98,6% (-1,4 %), через следующие 4 суток - до 89,9% (-10,1%), а еще через 7 суток - до 78,3% (-21,7%). В контрольной группе в те же сроки отбора спектрометрические измерения образцов молока показали не снижение, а повышение концентраций '"Сэ в молоке контрольных коров до 137,9 % (+37,9%); 117,9 % (+17,9) и 102,7 % (+2,7%), соответственно.

160

а*

Й 1« ^^~Рацион без Солучата

1 120

1 100

» во

| Рацион с Солдатом

8 60

5 40

8 20

5 0

ИСХ 4 & 15

П ериод отбора проб, сутки

Рис. 1- Динамика относительного содержания "'Се в молоке коров

3.2.7.3.2. Производственные эксперименты на базе хозяйства КСУП «Дубовый Лог», Гомельская область. На молочно-товарной ферме КСУП «Дубовый Лог» были проведены испытания эффективности кормовой добавки Солунат в натурных условиях по снижению поступления l37Cs в молоко коров в сравнении со специфическим сорбентом радиоактивного цезия - ферроцианидом. Изучалось влияние Солуната при скармливании его с подсолнечным шротом и комбикормом на молочную продуктивность и уровни загрязнения l37Cs молока коров. Были сформированы 3 группы стельных коров черно-пестрой породы второго и третьего года лактации на 9-ом месяце стельности по 10 голов в каждой.

1 серия экспериментов.

Изучение влияния кормовой добавки Солунат на поступление 137Cs в молоко коров проводили в течение 40 дней. Содержание l37Cs в суточном рационе в течение первых 20 суток опыта было в пределах 15-25 кБк, далее- 8-10 кБк. Были сформированы 3 группы животных, по 10 голов в каждой: одна группа была контрольная, не получавшая Солунат, две -опытных. 1 опытная группа получала концкорма с добавлением 3 г /(гол*сут) ферроцианида Vossen Blau; 2 опытная группа - Солунат в дозе 0,5 г /(гол*сут.) Как показали эксперименты (табл. 10), применение Солуната (с 20 по 40 сутки) способствовало снижению содержания 137Cs в молоке коров с 255±10 до 103±11 Бк/кг. В группе коров, получавших ферроцианид, за тот же промежуток времени содержание l37Cs в молоке коров снижалось с 182±16 до 81±6 Бк/кг; в контроле - с 302±9 до 111±8 Бк/кг. Необходимо отметить, что при увеличении содержания IJ7Cs в кормах коров (с 0 до 20 суток), больше всего wCs содержалось в молоке контрольных коров и составляло 302±12 Бк/кг. Ниже концентрация 137Cs была в молоке коров, получавших Солунат и была равна 255±12 Бк/кг; самое низкое количество ,37Cs было в молоке коров, которым давали ферроцианид - 182±16 Бк/кг.

Таблица 10

Динамика содержания 137Cs в молоке коров, Бк/кг_

Срок эксперимента, дни Среднее содержание по группе

Контрольная ферроцианид Солунат

0 (исх.) 36±4 26±4 26±4

20 302±12 182±16 255±10

30 115±11 78±11 101±11

40 111±8 81±6 103±11

2 серия экспериментов.

В следующей серии экспериментов, продолжавшейся 8 суток, были испытаны две дозы Солуната (по активному веществу, в сравнении с ферроцианидом, при скармливали кормов (сенажа), с суммарной активностью суточного рациона по |37Сы от 14,1 до 24,4 кБк/сутки. По принципу парных аналогов были сформированы контрольная и три опытные группы коров по 4 головы в каждой. Животные всех групп получали по 0,5 кг комбикорма. В комбикорм 1-ой опытной группы вводили с ферроцианид в дозе 3,0 г/(гол*сут), 2-ой опытной группы - Солунат в дозе 0,5 г/(гол*сут),

3-ей опытной группы Солунат - в дозе 1,0 г /(гол*сут). Контрольная группа получала комбикорм без указанных добавок.

За период эксперимента в контроле концентрация '"Се в молоке, в среднем, составила 300±12 Бк/кг, в 1-ой опытной группе - 139±9 Бк/кг, во 2-ой опытной группе - 250±8 Бк/кг, в 3-ей опытной группе -220±6 Бк/кг. Таким образом, по сравнению с контролем, применение ферроцианида с комбикормом снизило поступление 137Сз в молоко на 54%, Солуната - на 17% (доза Солуната - 0,5 г/(гол*сут) и на 27 % (при дозе Солуната - 1,0 г/(гол*сут).

Влияние Солуната на молочную продуктивность коров. В связи с тем, что кормовая добавка Солунат разрабатывалась как добавка двойного назначения, то одновременно с измерением радиоактивности молока, проводился учет молочной продуктивности коров. Данные, полученные в ходе эксперимента, свидетельствуют о том, что за период опыта (10 декад) среднесуточный удой от одной лактирующей коровы в опытной группе, получавшей Солунат, составил - 12,8±1,5 л; в контрольной - 11,3±2,3 л. При применении ферроцианида среднесуточные удои коров, достоверно, не отличались от контрольной группы. В опытах было показано, что применение Солуната на радиоактивно загрязненной территории при традиционных условиях содержания и кормления животных, способствовало повышению удоев в физическом объеме, а также увеличивало продукцию коровой молочного жира и белка.

3.2.7.4.Применение Солуната в кормлении молодняка крупного рогатого скота, выращиваемого на радиоактивно загрязненной территории.

3.2.7.4.1. Брянская область, МТФ «Деменки». В эксперименте была отработана оптимальная доза основного действующего вещества Солуната, способная в условиях радиоактивного загрязнения территории, повышать продуктивность животных и снижать накопление '"Се в мышечной ткани.

Влияние Солуната на динамику накопления ШС« в мышечной ткани молодняка КРС. Производственные испытания по влиянию Солуната на снижение перехода 137Сэ в мышечную ткань молодняка КРС проводили на бычках в течение 60 дней, в стойловый период, с февраля по апрель. Для опыта было отобрано 30 голов, в возрасте 8-9 месяцев. Были сформированы 3 группы бычков по 10 голов в каждой. Одна группа была контрольной и две опытных: опытная группа 1 получала Солунат (по активному веществу) в дозе 0,5 г /(гол*сут), опытная группа 2 получала Солунат в дозе 1,0 г /(гол*сут). Всем животным скармливали одинаковый по питательности и составу рацион, согласно принятым нормам. Во время проведения опыта в рацион бычков, в качестве радиоактивной компоненты, было включено сено в количестве 2,0 - 2,5 кг/(гол*сут), которое в первые 20 суток эксперимента имело концентрацию 137С$, равную 1200 - 1550 Бк/кг, далее и до конца опыта 2962 - 5410 Бк/кг. В эксперименте было выявлено (табл. 10), что доза Солуната 0,5 г/(гол*сут) предотвращала поступление радионуклида в мышечную ткань бычков на 8 % по сравнению с контролем, а доза 1,0 г/(гол*сут) - на 38% (табл. 11).

Таблица

Концентрация '"Сб в мышечной ткани бычков, Бк/кг

Группа бычков Суточная доза Солуната. г/гол Исходная концентрация '"Се Концентрация '"С5 на 30 день Когщсчггра-ция Се па 60 день Снижение концентрации '"Св относительно контроля,%

Контроль 0 205,0±19,1 270,7±23,0 511,2±11,1 0

Опытмая 1 0,5 225,0±21,0 267,2±12,1 508,6±18,1 8,0

Опытная 2 1,0 230,5±] 8,0 247,0±19,4 420,8±24,3 38,0

Следовательно, наиболее эффективной суточной дозой Солуната по снижению уровней накопления 13 Се в мышечной ткани бычков является 1,0 г/(гол*сут).

3.2.7.4.2. Гомельская область, КСУП «Дубовый Лог». Научно-производственный эксперимент в условиях хозяйства КСУП «Дубовый Лог» был посвящен изучению влияния кормовой добавки Солунат на динамику накопления '"Сб в мышцах и приросту живой массы молодняка КРС (бычки). Целью эксперимента было выяснить возможно ли, используя ничтожно малое количество полимера (0,5 и 1,0 г/гол*сут), одновременно снижать поступление '"Сб в организм животного и повышать мясную продуктивность молодняка КРС. В хозяйстве были сформированы по принципу парных аналогов три группы (одна контрольная и две опытных) бычков черно-пестрой породы, в количестве 15 голов, по пять голов в каждой группе, в возрасте 7 месяцев, с живой массой 167-175 кг. На протяжении эксперимента рацион подопытных животных всех трех групп состоял из силоса кукурузного-22 кг, сена злакового-2,5 кг, зернофуража (овес+ячмень+рожь) -2кг, белково-витамино-минералыюй добавки -0,5 кг. Первая опытная группа, кроме основного рациона, вместе с зернофуражом получала Солунат из расчета (по активному веществу): 0,5 г/(на гол*сут); вторая опытная группа - 1,0 г/(на гол*сут). Контрольная группа получала тот же рацион, но в зернофураж Солунат не вводили. Эксперимент длился около трех месяцев.

Влияние Солуната на динамику накопления '"Сэ в мышечной ткани молодняка КРС. В качестве радиоактивного компонента корма бычки получали разнотравное луговое сено со средней активностью по |37Сз , равной 52,1 кБк/кг - в первые 30 дней по 200 г, а затем 20 дней - по 400 г на голову в сутки. На 51-е сутки эксперимента высокоактивное сено было изъято из рациона. На первом этапе эксперимента (сено луговое 0,2 кг), равновесие в организме между поступлением радионуклида и его выведением наступило между 12-15 -м днем опыта. На втором этапе, когда в рационе количество сена было увеличено до 0,4 кг аналогичная картина наблюдалась так же между 12-15-ми сутками. Эксперимент показал (табл. 12), что к 24-м суткам концентрация в мышечной ткани контрольных бычков составляла 348±31 Бк/кг, в 1-ой опытной группе - 358±19 Бк/кг, а во 2-ой опытной группе - 369±23 Бк/кг. После отмены затравки, через 57 суток от

начала опыта (срок наблюдения) активность мышечной ткани бычков возвратилась к первоначальным исходным значениям и оставалась таковой до 90 дней опыта (срок наблюдения).

Таблица 12

Концентрация 137Сз в организме бычков

Группа Содержание IJiCs, Бк/кг

24 день 33-50 дни 57-90 дни

Контрольная 348±31 482±13 254±8

Опытная 1 358±19 427±12 190±5

Опытная 2 369±23 436±17 169±7

организма животных показало, что на 57 сутки опыта содержание его в мышечной ткани бычков первой опытной группы на 25%, а второй опытной -на 35% было ниже, относительно контроля.

Влняние кормовой добавки Солунат при выращивании молодняка КРС. Одновременно с изучением способности кормовой добавки Солунат снижать уровни радиоактивных элементов в организме скота (|37Сз), в том же опыте, что описан выше исследовалось влияние Солуната на приросты живой массы молодняка КРС. Взвешивание животных проводили ежемесячно. За весь период эксперимента (90 дней) контроль, в среднем, прибавил 51,6 кг и живая масса бычков, в среднем, стала равна 224±4 кг/гол, в то время как бычки 1-ой опытной группы прибавили - 67 кг/гол и 2-ой опытной группы - 64 кг/гол При этом живая масса бычков 1-ой опытной группы стала равна 240,0±3,2 кг/гол; 2-ой опытной группы - 236±3,8 кг/гол. Среднесуточный привес живой массы за 90 дней эксперимента составил: в контрольной группе-573 г/(гол*сут); в 1-ой опытной груипе-746 г/(гол*сут); в 2-ой опытной группе-710 г/(гол*сут). Следовательно, увеличение привесов живой массы животных по сравнению с контролем составило, в среднем, 173 г/(гол*сут) в 1-ой опытной группе и 137 г/(гол*сут) - во второй опытной группе.

Таким образом, в проведенных экспериментах было показано, что длительное применение кормовой добавки Солунат, при использовании ничтожно малого количества полимера (0,5 и 1,0 г/гол*сут), обеспечивает

одновременно снижение поступления повышение мясной продуктивности КРС.

Cs в организм животного и

Выводы

1. В экспериментах in vitro показано, что исследованные полимеры ВПК и ПЭККА с молекулярной массой 106 Да и размером молекулярного клубка ~ ЮОнм образуют интерполимерные комплексы с модельным белком - бычьим сывороточным альбумином. Образование комплексов происходило в широком интервале избытка белка от 1 до 2000 по отношению к полимеру. Расчеты показали, что 1 г полимера ВПК при рН 7,26 - 6,74 может удержать 21-25 г бычьего сывороточного альбумина, имеющего молекулярную массу 105 Да, а 1 г полимера ПЭККА (при рН 6,0-6,5) -86 + 91 г. Поскольку бычий

сывороточный альбумин является низкомолекулярным белком сыворотки крови животных, то были проведены теоретические расчеты по количеству удержания полимером ПЭККА молекул растительных белков, которые имеют значительно более высокую молекулярную массу, чем бычий альбумин. Расчеты показали, что 1 г ПЭККА, с молекулярной массой 106 Да, может удержать в комплексе от 150 до 400 г растительного белка в зависимости от вида белка и его молекулярной массы.

2. В исследованиях in vitro было установлено, что высокомолекулярные водорастворимые полимеры, так же как некоторые химические вещества (альдегиды, спирты), хорошо «защищают» протеин концентрированных кормов. Степень защиты в буферных растворах от растворимости протеина подсолнечного жмыха, обработанного 1% растворами формальдегида и глутаральдегида, а также 0,01% раствором ПЭККА, составляла 78,2; 67,1%; 50,8%, соответственно. При исследовании инкубированных в рубце таких же образцов подсолнечного жмыха, обработанных альдегидами: 1% растворами формальдегида и глутаральдегида, атак же 0,01% раствором ПЭККА степень защиты составляет 74,4%; 61,5%; 54,7%, соответственно. Следует отметить, что при сопоставимом эффекте количество ПЭККА было в 100 раз меньше, чем альдегидов.

3. Механизм защиты кормового белка от распада в рубце жвачных животных с применением высокомолекулярных полимеров отличается от известных способов защиты: молекулы полимеров образуют комплексы с протеинами концентрированных кормов при помощи кулоновских взаимодействий, при этом не изменяют химических свойств белковых молекул как это происходит, например при обработке корма формалином или при нагревании до высоких температур.

4. Установлено, что полимер ПЭККА, обладает хорошо выраженными сорбционными свойствами по отношению к ионам металлов. В опытах in vitro было показано, что степень сорбции молекулами ПЭККА ионов металлов: Cu+2, Zn+2, Cd42, Pb+2 составляла 90-98%.

5. В опытах с ПЭККА было установлено, что интерполимерные комплексы с белком и ионами металлов образуются при рН среды 5,0 + 7,5. В кислой среде при рН 1,5 комплексы не существуют.

6. На основании лабораторных исследований свойств высокомолекулярных водорастворимых полимеров, была разработана кормовая добавка нового типа для крупного рогатого скота, получившая коммерческое название «Солунат», двойного назначения: повышающая продуктивность животных и снижающая поступление радиоактивного цезия в продукцию животноводства. Основное действующее вещество Солуната - натриевая соль сополимера этиленкарбоновой кислоты и ее амида (ПЭККА). ПЭККА вносится в организм крупного рогатого скота с концентрированным кормом в ничтожно малых количествах, из расчета 500 мг или 1000 мг на 1 животное, с живой массой ~ 500 кг.

7. При использовании Солуната обеспечение жвачных животных аминокислотами происходит не за счет питательных компонентов добавки,

как это происходит при применении традиционных кормовых добавок, а за счет лучшего усвоения белка, содержащегося в основном корме.

8. Добавление Солуната в концентрированные корма приводило к снижению распадаемости сырого протеина в рубце коров на 8,2 в абс. %, что подтверждает существование эффекта «защиты» и объясняется тем, что активные центры полимерных молекул могут связываться с активными центрами части белковых молекул корма, что делает их недоступными для протеолитических бактерий рубцовой микрофлоры. При применении Солуната отмечена тенденция повышения рН содержимого рубца (рН=5,9 в контроле, против рН=6,1 в опыте).

9. При использовании Солуната несколько понижается амилолитическая активность рубцового содержимого, что позволяет увеличить поступление крахмала в кишечник, где он переварится без ферментативных потерь.

10. Введение Солуната в рацион коров увеличивает переваримость питательных веществ в кишечнике. Особенно повышалась переваримость сырого протеина - на 9,7 % относительно контроля. По-видимому, это связано с увеличением поверхности контакта ферментов с субстратом, посредством образования белок (фермент) - полимерных комплексов. Это, очевидно, способствует повышению эффективности полостного и пристеночного пищеварения в тонком отделе кишечника.

11. Изучение показателей субхронической токсичности полимерной добавки Солунат показало отсутствие выраженных изменений каких-либо показателей, характеризующих состояние и функционирование различных систем организма крыс: кроветворную, центральную нервную систему, выделительную, иммунную и др. В экспериментах установлено, что Солунат в дозах ~-10мг/кг живой массы не оказывает эмбриотоксического, гонадотоксического и тератогенного действия на организм лабораторных животных, атак же не обладает мутагенной активностью.

12. Анализ экспериментальных данных показал отсутствие токсических свойств у кормовой добавки Солунат. У подопытных животных установлен высокий уровень естественной резистентности и иммунного статуса, о чем свидетельствует соответствие нормативным значениям показателей лейкоформулы, а так же характеристик функциональной активности нейтрофилов крови, бактерицидной активности сыворотки крови, концентрации общего белка, его фракций. Выявлено некоторое положительное влияние Солуната на иммунологические показатели: в период сезонно низкой резистентности у животных, получавших Солунат, была несколько выше концентрация общего белка в сыворотке крови, фагоцитарное число и относительная поглотительная способность нейтрофилов по сравнению с контролем.

13. В серии производственных опытов в условиях хозяйств Белгородской, Ленинградской, Московской, Калужской, Брянской, Гомельской и других областей показано положительное влияние Солуната на повышение молочной и мясной продуктивности крупного рогатого скота.

При одинаковом основном рационе животных применение Солуната обеспечивало увеличение привесов молодняка крупного рогатого скота на I бб 250 г/(гол*сут) п удоев - 1,5-К2,5 л/(гол*сут).

14. Впервые для снижения поступления l37Cs в продукты животноводства предлагается использовать высокомолекулярные водорастворимые полимеры (ПЭККА), с молекулярной массой = 106 Да, в виде растворимого гомогенного сорбента. В этом случае эффективная доза Солуната составляет 1,0 г/(гол*сут) и взаимодействие между сорбентом и металлом (в данном случае, с l37Cs) происходит не на поверхности твердой фазы сорбента (как при применении твердых нерастворимых сорбентов), а на уровне активных ионных групп, расположенных на поверхности молекул полимера (растворимый гомогенный сорбент), и ионов металла.

15. В исследованиях, проведенных в условиях хозяйств, расположенных на радиоактивно загрязненных территориях, применение Солуната в эффективной дозе (1,0 г/(гол*сут) показало снижение содержания l37Cs в мышечной ткани бычков на 35- 38 % относительно контроля. Использование Солуната в рационе дойных коров в эффективной дозе снижало (относительно контроля), в среднем, поступление l37Cs в молоко на 30%; что было на 24% меньше, чем при применение ферроцианидов (специфического сорбента l37Cs в дозе 3 г/(гол*сут) - на 54%). При этом молочная продуктивность при применении Солуната повышалась, в среднем на 1,5 л/(гол*сут), а мясная - на 137 - 173 г/(гол*сут).

Предложения производству

1. Рекомендовать хозяйствам, находящимся как в условно «чистых» регионах, так и на радиоактивно загрязненных ( Cs) территориях, использовать кормовую добавку Солунат в рационе крупного рогатого скота.

2. С целью повышения молочной продуктивности скота предлагается использовать Солунат в смеси с концентрированным белковым кормом в дозе 500 мг/(гол*сут) (по активному веществу) как на

137 _

территориях загрязненных Cs, так и на территориях, не подверженных загрязнению радионуклидами. Для получения максимального эффекта рекомендуется начинать дачу Солуната стельным сухостойным коровам за месяц до отела и продолжать в течение всей лактации.

3. Для повышения мясной продуктивности молодняка крупного рогатого скота производству предлагается вводить в концентрированные белковые корма Солунат в дозе по активному веществу - 250 мг/(гол*сут.) телятам с живой массой менее 200 кг и 500 мг/(гол*сут) телятам с живой массой более 200 кг.

137

4. Для снижения уровней накопления Cs в молоке коров наиболее эффективной дозой (по активному веществу) является 1,0 г/(гол*сут).

При уровнях загрязнения молока 137Cs с невысоким превышением санитарно-гигиенических нормативов (до 150 Бк/кг) , целесообразно использовать Солунат в дозах 0,5 г/(гол*сут). При содержании 13?Cs в молоке коров выше 150 Бк/кг, рекомендуемая суточная доза Солуната - 1,0 г/гол.

5. Для снижения концентрации Cs в мышечной ткани молодняка крупного рогатого скота наиболее эффективной дозой Солуната (по активному веществу) является - 0,5 г/(гол*сут) телятам с живой массой менее 200 кг и 1,0 г/(гол*сут) телятам с живой массой более 200 кг.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации Публикации в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Грудина Н.В. Повышение эффективности высококонцентрированных белковых кормов путем применения защищающих агентов/ Н.В. Грудина, В.И. Луховицкий, P.M. Алексахин, Н.С. Грудин, Б.Д. Кальницкий, A.M. Соловьев //Доклады РАСХН.- 2005.-№2- С.33-35.

2. Грудина Н.В. Механизм «защитного» действия высокомолекулярных водорастворимых полимеров на распадаемость протеина кормов в рубце жвачных животных/ Н.В. Грудина, В.И. Луховицкий, P.M. Алексахин, Н.С. Грудин, Б.Д. Кальницкий, A.M. Соловьев //Доклады РАСХН.- 2006.-№1.- С.34-36.

3. Грудина Н.В. Роль техногенного загрязнения радионуклидами и тяжелыми металлами в скотоводстве/ Н.В. Грудина, H.H. Исамов, B.C. Анисимов, Е.Х. Ткачук // Вестник РАСХН,- 2003,- №1.- С. 2021.

4. Грудина Н.В. Метод определения бета-литической активности крови крупного рогатого скота/ Н.В. Грудина, В.Я. Саруханов, H.H. Исамов, П.Г. Царин //Сельскохозяйственная биология.- № 2005,- № 6,- С. 115-117.

5. Грудина Н.В., Солунат - это ежесуточная прибавка молока/ Н.В. Грудина, В.И. Луховицкий, Б.Д., Кальницкий //Животноводство России.- 2008.- №5.- С. 54 - 55.

6. Грудина Н.В. Влияние полимерной добавки Солунат на пищеварение жвачных животных/Н.В.Грудина//Проблемы биологии продуктивных животных.- 2009.- №2,- С. 106-110.

7. Грудина Н.В. Использование препарата Солунат, созданного на основе полимеров, при выращивании бычков / Н.В. Грудина //Доклады РАСХН.- 2009,- №6,- С.39- 40.

8. Grudina N.V. Use of trePolymer-Based Drag Solunat in Raising Calves. (Применение полимерной добавки Солунат при выращивании

телят)/ N.V. Grudina // «Russian Agricultural Sciences.- 2009.- Vol. 35, №6,- P. 404 -406. Грудина H.B.

9. Грудина H.B. Влияние полимерной кормовой добавки на продуктивность телят /Н.В.Грудина// Проблемы биологии продуктивных животных.-2011.-№1.-С. 102-105.

10.Грудина Н.В. Оценка влияния полимерной кормовой добавки на показатели здоровья крупного рогатого скота/ Н.В. Грудина, Н.С. Грудин// Проблемы биологии продуктивных животных.-2011.- №1,-С. 106-110.

11.Грудина Н.В. Оценка сорбционных и диффузионных свойств высокомолекулярных водорастворимых полимеров, используемых в составе новой кормовой добавки/ Н.В. Грудина, В.В. Быданова //Проблемы биологии продуктивных животных.-2011 .-№1.- С. 111116.

Патенты:

12.Грудина Н.В. Способ протектирования белкового корма для сельскохозяйственных животных и протектор для его осуществления / Н.В.Грудина, В.И. Луховицкий, И.В. Добров, A.M. Соловьев, В.Н. Федичкин, В.Р. Дуфлот, P.M. Алексахин, Б.Д. Кальницкий, В.В. Дубовик //Заявка № 2000126336, Патент РФ № 2173057,2001.

13.Grudina N.W. Verfahren zum Schutz von Eiweissfutter mit Polyacrylamid / N. Grudina, W. Luchowizkij, I. Dobrow, A.Solowjow, , W. Feditschkin, W Duflot, R. Alexachin, B. Kalnizkiy, W. Dubovvik //Патент Европейского Союза № 1 198 993 Bl, 2001. Опубликован в Пат. бюлл. №2002/17 от 24.04.2002.

В сборниках научных трудов институтов и материалах

конференций:

14.Грудина Н.В. Оценка защитных свойств сорбентов и ингибиторов при получении экологически чистой продукции животноводства/ Н.В. Грудина, A.B. Васильев, А.Н. Ратников, Е.Г. Краснова, H.H. Исамов// Регионал. конкурс научных проектов в области естественных наук: сб. трудов конкурса (Калуга, 2000 г).- (Калуга, 2000). -Вып.1.- С. 213-221.

15.Грудина Н.В. Оценка состояния здоровья животных, содержащихся на территориях, загрязняемых тяжелыми металлами/ Н.В. Грудина, J1.A. Бастракова, В.Н. Исакова, В.Я. Саруханов, В.А. Козлов, И.В. Жуков //Агроэкологические проблемы сельскохозяйственного производст-ва в условиях техногенного загрязнения агроэкосистем: сборник докладов Всерос. научно-практ. конф. (Казань, 2002 г).-Часть II. - Казань, 2002,- С. 248-250.

16.Грудина H.B. Использование кормовой добавки Солунат для снижения концентрации l37Cs в молоке лактирующих коров в хозяйстве Брянской области/ Н.В. Грудина, В.И. Луховицкий, A.M. Соловьев, Н.С. Грудин/Юпыт преодоления последствий катастрофы на Чернобыльской атомной станции. Экология, безопасность и устойчивое развитие - XXI век: тезисы докл. на междун. научно-практ. конф. (Новозыбков, 20-21 сентября 2002 г.).- Брянск, 2002.-С. 127-131.

17.Грудина Н.В. Биолого-экологические эффекты у животных при загрязнении пастбищ радионуклидами и тяжелыми металлами/ Н.В. Грудина, H.H. Исамов, B.C. Анисимов, Е.Х. Ткачук// Опыт преодоления последствий катастрофы на Чернобыльской атомной станции. Экология, безопасность и устойчивое развитие - XXI век: тезисы докл. на междун. научно-практ. конф. (Новозыбков, 20-21 сентября 2002 г.).- Брянск, 2002.- С. 122-125.

18.Грудина Н.В., Рациональное использование протеина при кормлении скота/ Н.В. Грудина, Н.С. Грудин, В.И. Луховицкий, A.M. Соловьев// Физико-технические проблемы создания новых технологий в агро-промышленном комплексе: тезисы докл. 2-ой Российс. научно-практ. конф. (Ставрополь, апрель, 2003 г.).-Ставрополь, 2003,- Т.1.- С. 173-175.

19.Грудина Н.В. Кормовая добавка Солунат - высокоэффективное средство повышения продуктивности сельскохозяйственных животных/ Н.В. Грудина, P.M. Алексахин, Н.С. Грудин, Б.Д. Кальницкий, В.И. Луховицкий, A.M. Соловьев, В.Н. Федичкин // Био-технология-2003: тезисы докл. конф. (Пущино, ноябрь 2003 г.).-Пущино, 2003,- С. 71.

20.Грудина Н.В. Технологии реабилитации загрязненных земель и производства экологически безопасной продукции/ Н.В. Грудина, Л.Н.Ульяненко, Н.И.Санжарова, Т.Л.Жигарева, А.А.Зейналов, А.В.Васильев //Экология предприятий, жилья и окружающей среды: сб. тезисов научно-практ. конф. (Обнинск, 9-10 декабря, 2004 г.).-Обнинск, 2004,- С.24-25.

21.Грудина Н.В. Применение полимерной кормовой добавки Солунат на радиоактивно загрязненной территории / Н.В. Грудина, В.И. Луховицкий, Н.С. Грудин, П.Н. Цыгвинцев, A.A. Царенок, А.Ф. Гвоздик, Н.В. Телицына //Актуальные проблемы дозиметрии: тезисы докл. 5-го междун. симпозиума (Республика Беларусь, Минск, 20-21 окт. 2005 г). - Минск, 2005.- С.69-71.

22.Грудина Н.В. в соавт. Методические указания по получению экологически чистой продукции на техногенно загрязненных территориях. Обнинск, 2005 г. - 78 с.

23.Грудина Н.В., Препарат нового поколения Солунат для повышения молочной продуктивности коров. / Н.В. Грудина, В.И. Луховицкий, Н.С. Грудин, В.В. Быданова, Л.А. Бастракова// Молочное и мясное

скотоводство: состояние и перспективы развития в Южном Федеральном Округе: сб. науч. труд, всерос. научно-практ. конф. (Черкесск, 2007 г.).- Черкесск, 2007,- С. 168-171.

24.Грудина Н.В. Предложения по использованию кормовой добавки «Солунат» для снижения содержания радионуклидов в продукции животноводства/ Н.В. Грудина, П.Н. Цыгвинцев, A.A. Царенок, А.Ф. Гвоздик. Н.В. Телицина, Н.С. Грудин, В.И. Луховицкий. Гомель. -2007.-7 с.

25.Грудина Н.В. в соавт. Рекомендации по ведению кормопроизводства и животноводства, обеспечивающие получение нормативной продукции в условиях техногенного загрязнения». Обнинск, 2007 г.-58 с.

26.Грудина Н.В. Новое поколение кормовых добавок для сельскохозяйственных животных на основе высокомолекулярных водорастворимых полимеров / Н.В. Грудина, В.И. Луховицкий, Н.С. Грудин, В.В. Быданова, В.М. Артюх // Проблемы увеличения производства продуктов животноводства: сб. трудов ВИЖа (Дубровины-ВИЖ, 21-23 окт. 2008 г.).- Дубровицы, 2008,- С. 258260.

27.Грудина Н.В. Рациональное использование протеина для крупного рогатого скота/Н.В. Грудина// Комбикорма.- 2008,- №3.- С. 73 - 75.

28.Грудина Н.В. Классификация защитных мероприятий и технологий по снижению перехода радионуклидов и тяжелых металлов в сельскохозяйственную продукцию. В кн.: «Технологические приемы, обеспечивающие повышение устойчивости агроценозов, восстановление нарушенных земель, оптимизацию ведения земледелия и получение соответствующей нормативам сельскохозяйственной продукции» под ред. проф. Санжаровой Н.И. Обнинск.-2010,- С. 29-36.

29.Грудина Н.В. в соавт. Методы организации и ведения агроэкологического мониторинга сельскохозяйственных угодий в зонах техногенного загрязнения и оценка экологической обстановки в сельском хозяйстве в регионах размещения атомных электростанций и аварии на ЧАЭС. Под ред. проф. Санжаровой Н.И. Обнинск,- 2010,- 232 с.

Заказ 774 Тираж 100 Объём 3 п.л. Формат 60x84^/16 Печать офсетная

Отпечатано в МП «Обнинская типография» 249035 Калужская обл., г. Обнинск, ул. Комарова, 6

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Грудина, Наталья Владимировна

Введение.

1. Обзор литературы. Состояние проблемы.

1.1 Анализ современных способов и средств, способствующих повышению продуктивности жвачных животных.

1.1.1 Основные источники белка в рационе жвачных животных.

1.1.2 Классификация различных кормовых добавок.

1.1.2.1 Нутрицевтики.

1.1.2.2 Пробиотики и микробиологические добавки.

1.1.2.3 Парафармацевтики.

1.1.2.4 Ферментные препараты.

1.1.2.5 Пребиотики.

1.1.2.6 Биологически активные вещества.

1.1.2.7 Антиоксиданты.

1.1.2.8 Ароматизаторы кормов.

1.1.2.9 Синтетические азотистые вещества.

1.1.3 Средства, «защищающие» белок от распада в рубце жвачных.

1.2 Современные приемы и средства, снижающие переход

§ в продукцию животноводства.

1.2.1 Экологическая ситуация в регионах России, подвергшихся радиоактивному загрязнению.

1.2.2 Ведение животноводства на радиоактивно загрязненных территориях.

1.2.2.1 Рациональное использование лугов и пастбищ.

1.2.2.2 Нормирование рационов кормления животных с учетом содержания в них радионуклидов.

1.2.3 Специальные мероприятия.

21 Материал и методы исследований.

3. Результаты собственных исследований.

3.1 Методические подходы по разработке нового типа добавок в рацион на основе высокомолекулярных водорастворимых полимеров (полиэлектролитов).

З.Г.1 Химические и биологические свойства высокомолекулярных водорастворимых полимеров.

3.1.1.1 Свойства белок — полимерных комплексов.

3.1.1.2 Взаимодействие высокомолекулярных водорастворимых полимеров с ионами металлов.

3.1.1.3 Взаимодействие высокомолекулярных водорастворимых полимеров с мембранами клеток млекопитающих

3.1.2 Определение сорбционных свойств высокомолекулярных водорастворимых полимеров in vitro. 88'

3.1.2.1 Изучение сорбционных свойств высокомолекулярных водорастворимых полимеров — полианионитов — по отношению к ионам металлов.

3.1.2.1.1 Разработка методов определения сорбционных свойств высокомолекулярных полимеров по отношению к ионам металлов.

3.1.2.1.1.1 Качественные методы определения сорбционной способности высокомолекулярных водорастворимых полимеров* по отношению к ионам железа и меди.

3.1.2.1.1.2 Разработка количественных методов по определению способности высокомолекулярных водорастворимых полимеров сорбировать ионы металлов.

3.1.2.1.2 Влияние рН среды.на эффективность сорбции полианионитами ионов металлов.

3.1.2.1.3 Влияние давления на сорбционные свойства полианионитов.

3.1.2.2 Изучение сорбционных свойств высокомолекулярных водорастворимых полимеров — поликатионитов.

3.1.3 Исследование in vitro диффузионных свойств высокомолекулярных полимеров по отношению к мембранам клеток.

3.1.3.1 Исследование диффузионных свойств полимеров методом расчета радиуса инерции макромолекулярного клубка.

3.1.3.2 Изучение диффузионных свойств полимеров (полианионов и поликатионов) в вертикальной ячейке.

3.1.3.3 Разработка методики оценки диффузионных свойств высокомолекулярных водорастворимых полимеров.

3.1.4 Взаимодействие высокомолекулярных водорастворимых полимеров с концентрированными кормами.

3.1.5 Изучение механизмов взаимодействия высокомолекулярных полимеров и белков in vitro и в рубце жвачных животных.

3.1.5.1 Взаимодействие in vitro полимеров с белками.

3.1.5.1.1 Взаимодействие поликатионита ВПК с белками.

3.1.5.1.2 Взаимодействие полианионита ПЭККА с белками.

3.1.5.1.3 Взаимодействие ПЭККА с белками в условиях, приближенных к условиям желудочно-кишечного тракта животных.

3.1.5.2 Изучение способности высокомолекулярных водорастворимых полимеров снижать распадаемость протеинов кормов;.

3.1.5.3 Влияние «склеивающих» свойств> высокомолекулярных полимеров на растворимость кормового белка in.vitro.

3.2 Изучение биологических свойств кормовой добавки Солунат, разработанной на новой основе — высокомолекулярных водорастворимых полимеров.

3.2.1 Характеристика Солуната — кормовой добавки нового типа.

3.2.2 Изучение влияния Солуната на организм лабораторных животных.

3.2.2.1 Токсикологическая оценка Солуната.

3.2.2.1.1 Исследование острой токсичности.

3.2.2.1.2 Изучение показателей субхронической токсичности.

3.2.2.1.2.1 Влияние Солуната на общебиологические показатели.

3.2.2.1.2.2 Влияние Солуната на гемопоэз.

3.2.2.1.2.3 Влияние Солуната на функциональную активность центральной нервной системы.

3.2.2.1.2.4 Оценка функциональной активности выделительной системы

3.2.2.1.2.5 Влияние Солуната на биохимический статус лабораторных животных.

3.2.2.1.2.6 Естественная резистентность лабораторных животных, получавших Солунат.

3.2.2.1.2.7 Влияние Солуната на структуру внутренних органов крыс 149 3.2.2.2 Исследование отдаленных последствий Солуната

3.2.2.2.1 Мутагенная активность Солуната

3.2.2.2.2 Изучение эмбриотоксического, гонадотоксического и тератогенного действия Солуната.

3.2.3 Исследование влияния Солуната на показатели здоровья, и обмен.веществ жвачных животных (крупный рогатый скот).

3.23.1 Влияние Солуната на клинические показатели животных.

3.2.3.2 Действие Солуната на гемопоэтическую систему коров.

3.2.3.3 Влияние Солуната на биохимический статус крупного рогатого скота.

3.2.3.4 Влияние Солуната на состояние защитных сил организма животных.

3.2.3.4.1 Изучение активности клеточного звена иммунитета.

3.2.3.4.2 Изучение показателей гуморального звена иммунитета.

3.2.3.5. Влияние Солуната на развитие плода и отелы коров.

3.2.4 Исследование влияния Солуната на процессы пищеварения в желудочно-кишечном тракте жвачных животных.

3.2.4.1 Влияние Солуната на процессы пищеварения в рубце.

3.2.4.2 Изучение переваримости питательных веществ корма в тонком отделе кишечника.

3.2.5 Механизм влияния полимерной кормовой добавки Єолунат на продуктивность крупного рогатого скота.

3.1.5.1 Предполагаемый механизм поведения полимера. ПЭККА в желудочно-кишечном тракте жвачных животных.

3.1.5.2 Теоретические расчеты, обосновывающие возможность повышения продуктивности скота с применением полимера ПЭККА.

3.2.6 Изучение влияния Солуната на продуктивность крупного

Рогатого скота в натурных условиях.

3.2.6.1 Влияние Солуната на мясную продуктивность молодняка.

3.2.6.1.1 Изучение влияния кормовой добавки Солунат на увеличение живой массы телят 5 -6 -ти месячного возраста.

3.2.6.1.2. Влияние добавки Солунат на привесы бычков 8-ми ^ месячного возраста.

3.2.6.2. Эффективность Солуната по повышению молочной продуктивности крупного рогатого скота.

3.2.6.2.1 Влияние кормовой добавки-Солунат на удои коров.:.

3.2.6.2.1.1 Влияние Солуната на удои коров, которые получали Солунат до отела (в стадии глубокой стельности).

3.2.6.2.1.2 Влияние Солуната на молочную продуктивность коров, получавших Солунат в фазе раздоя и в средней фазе лактации.

3.2.6.2.1.2.1 Влияние Солуната на удои низкопродуктивных коров.

3.2.6.2.1.2.2 Применение Солуната в рационе высокопродуктивных коров.

3.2.6.2.2 Влияние состава рациона на эффективность добавки

Солунат.

3.2.6.2.3 Исследование качества молока.

3.2.7 Изучение эффективности кормовой добавки Солунат на радиоактивно загрязненных территориях.

3.2.7.1 Предпосылки использования полимера ПЭККА в качестве растворимого сорбента ,37С8.

3.2.7.2 Радиологическая обстановка в опорных животноводческих хозяйствах.

3.2.7.2.1 Брянская область, Новозыбковский район, опытная станция ВНИИА (Россия), плотность радиоактивного загрязнения территории

37С8 от 15 Ки/км2 до 40 Ки/км2.

3.2.7.2.2 Гомельская область, Добрушский район, КСУП «Дубовый Лог» (Республика Беларусь), плотность радиоактивного загрязнения

Се территории 40 Ки/км*" и выше.

3.2.7.3 Эффективность применения кормовой добавки Солунат в рационе дойного стада.

3.2.7.3.1 Изучение влияния Солуната на динамику накопления Се в молоке коров

3.2.7.3.1.1 Производственные эксперименты на базе фермы «Деменки», Брянская область.

3.2.7.3.1.2 Производственные эксперименты на базе хозяйства КСУП «Дубовый Лог».

3.2.7.3.2 Влияние Солуната на молочную продуктивность коров, содержащихся на радиоактивно загрязненной, территории.

3.2.7.4 Применение Солуната в кормлении молодняка крупного рогатого скота.

3.2.7.4.1 Производственные эксперименты на базе фермы «Деменки».

3.2.7.4.2 Эксперименты^ базе хозяйства КСУП «Дубовый Лог».

4. Обсуждение результатов исследований.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка нового типа кормовых добавок на основе полимеров и их влияние на здоровье и продуктивность жвачных животных, содержащихся в разных экологических условиях"

Актуальность работы. Интенсификация животноводства предполагает постоянный поиск новых путей повышения мясной и молочной продуктивности сельскохозяйственных животных, содержащихся в разных экологических условиях. При этом одной из главных проблем является обеспечение животных протеином (Н.В. Курилов, 1978). Эта проблема актуальна при содержании животных как на экологически чистых, так и на техногенно загрязненных территориях, в том числе на следе Чернобыльской аварии.

В кормовом балансе животноводства дефицит протеина, в среднем, составляет 15-20%, что сдерживает рост продуктивности животных и обусловливает повышение затрат кормов. При этом проблема осложняется тем, что в процессе пищеварения существенная часть протеина высокобелковых кормов теряется, превращаясь в сравнительно малоценные для питания животных вещества (аммиак, мочевина и др.). (Н.В: Курилов, 1978, 1979; В.В. Цюпко, 1984; А.И! Фицев, 1986; F. Santos, 1999). В связи с этим весьма актуальным является-поиск путей и средств для максимального использования питательных веществ традиционных кормов с целью повышения конверсии корма, что позволит более полно обеспечить организм животных заменимыми и незаменимыми аминокислотами и, следовательно, биосинтез белка. Повышение обеспеченности организма протеином приводит к активизации обменных процессов (повышению прироста мышечной массы, увеличению надоев), а также укреплению иммунной системы животных, повышению сохранности молодняка, снижению себестоимости продукции.

На обеспеченность организма жвачных животных протеином и аминокислотами большое влияние оказывает сложные и своеобразные микробиологические процессы, происходящие в сложном желудке жвачных (А.Д. Синещеков, 1965; Э.Р. Ерсков, 1985; Т. Hvelplund, J. Madsen, 1993;

D.E. Beever, B.R. Cottrell, 1994; M.D Hanigan, J.P. Cant, D.C. Weakley, J.L. Beckett, 1998). Особую важность эти вопросы приобретают при нормировании кормления высокопродуктивных коров. Если низкопродуктивным животным достаточно того количества белка, который' образуется за счет микробного синтеза в рубце и качественный состав протеина корма не играет существенной роли, то потребность высокопродуктивных животных удовлетворяется как за счет микробного белка, так и за счет высококачественных белков корма, избежавших распада в рубце. Синтез микробного белка в рубце у таких животных может обеспечить лишь 40-50% их потребности, а остальное количество протеина должно поступать с кормом. Для уменьшения- распада протеина в прежелудках используются разнообразные методы «защиты» протеина, которые имеют существенные недостатки, ограничивающие их применение.

Следует отметить, что при ведении скотоводства на экологически неблагополучных территориях (в частности, радиоактивно загрязненных), большое значение имеет не только количество произведенной животным продукции, но и ее качество, в том числе соответствие санитарно-гигиеническим нормативам по содержанию в ней радионуклидов. Использующиеся- в настоящее время добавки в корм в, виде твердых нерастворимых сорбентов снижают уровни загрязнения продукции животноводства, но при этом не способны повышать молочную и мясную продуктивность животных. Кроме того, твердые сорбенты имеют ряд существенных недостатков, связанных с их агрегатным состоянием.

В связи со сказанным представляется весьма актуальной и перспективной задачей разработка кормовых добавок нового типа, создаваемых на основе высокомолекулярных водорастворимых полимеров. Благодаря свойствам этих полимеров добавки будут лишены ряда недостатков известных способов защиты белка и смогут выполнять две функции: эффективно защищать полноценные кормовые белки от распада в преджелудках жвачных с целью более полноценного снабжения организма аминокислотами и снижать поступление радиоактивного цезия в молоко и мясо.

Цель и задачи исследований. Целью исследований было -разработать теоретические основы и создать на основе высокомолекулярных водорастворимых полимеров образец нового типа кормовых добавок для крупного рогатого скота двойного назначения: для повышения продуктивности животных, содержащихся в разных экологических условиях, и для снижения поступления радиоактивного цезия в продукты животноводства.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изыскать соединения высокомолекулярных водорастворимых полимеров, которые теоретически, за счет образования- интерполимерных комплексов, способны повысить продуктивность жвачных животных вследствие повышения эффективности использования питательных.

137 веществ кормов и снизить поступление радионуклида Cs в продукты животноводства.

2. Исследовать диффузионные и сорбционные свойства высокомолекулярных водорастворимых полимеров по отношению к молекулам белка и ионам1металлов:

3. Изучить свойства высокомолекулярных водорастворимых полимеров in vitro и in vivo на оперированных животных с фистулой рубца.

4. Разработать кормовую добавку нового типа на основе высокомолекулярных водорастворимых полимеров.

5. Оценить на лабораторных животных безвредность полимерной добавки.

6. Исследовать влияние полимерной добавки на здоровье, обмен веществ и продуктивность крупного рогатого скота.

7. В условиях производства провести апробацию разработанной полимерной ^добавки с целью оценки ее эффективности по повышению продуктивности жвачных животных при применении добавки в разных экологических условиях: на территориях не подверженных радиоактивному загрязненных и следе аварии на ЧАЭС.

8. Определить в условиях производства способность добавки нового типа. снижать уровень загрязнения, продуктов животноводства (молоко, 1 мясо) Cs.

Новизна работы. Впервые в мировой практике в качестве добавки в корм для жвачных животных были использованы высокомолекулярные водорастворимые полимеры, вносимые в организм в весьма малых количествах. С применением качественных и количественных методов, химического анализа изучены сорбционные и диффузионные свойства высокомолекулярных водорастворимых полимеров и доказана способность этих полимеров образовывать интерполимерные комплексы с белками и ионами тяжелых металлов in vitro. Показано, что при использовании высокомолекулярных водорастворимых полимеров, повышается, обеспеченность жвачных животных протеином и аминокислотами за счет улучшения использования белка, содержащегося в самом корме, т.к. высокомолекулярные водорастворимые полимеры не являются питательными веществами. Их применение не . привносит в корм дополнительное количество протеина, как это происходит, например, при использовании традиционных кормовых добавок (белково-витамино-минеральных добавок, синтетических азотистых веществ и т.п.). Механизм защиты кормового белка от распада в рубце жвачных животных при применении полимеров отличается от известных способов защиты: молекулы высокомолекулярных полимеров образуют комплексы с белками кормов при помощи кулоновских взаимодействий. При этом не изменяются химические свойства белковых молекул, как это происходит, например, при обработке корма формалином или при нагревании до высоких температур и т.п. В процессе защиты кормового белка с применением высокомолекулярных водорастворимых полимеров не образуется новых химических соединений.

Впервые для снижения поступления l37Cs в продукты животноводства использованы высокомолекулярные водорастворимые полимеры в качестве растворимого гомогенного сорбента. В этом случае взаимодействие между 1 сорбентом (полимером) и металлом (в данном случае - Cs) в желудочно-кишечном тракте животных происходит не на поверхности твердой (нерастворимой) фазы сорбента (как это бывает при использовании гетерогенных сорбентов), а на уровне активных ионных групп, расположенных на поверхности молекул полимера (растворенного в пищеварительных соках), и ионов металла.

На основе полученных результатов была разработана новая эффективная кормовая добавка на базе высокомолекулярных водорастворимых полимеров, получившая коммерческое название «Солунат», имеющая двойное назначение: повышать молочную и мясную

137 продуктивность крупного рогатого скота и снижать поступление Cs в продукты животноводства.

Практическая значимость работы. На базе полученных результатов была разработана эффективная кормовая добавка нового типа — Солунат, действующим веществом которой является высокомолекулярный полимер. Эта добавка имеет двойное назначение: повышать молочную и мясную

137 продуктивность жвачных животных и снижать поступление Cs в продукты животноводства.

Материалы исследований легли в основу следующих разработок: патент на изобретение РФ № 2173057 «Способ протектирования белкового корма для сельскохозяйственных животных и протектор для его осуществления» от 10.09.2001; патент Евросоюза № ЕР 1 198 993 В1 «Verfahren zum Schutz von Eiweissfiitter mit Polyacrylamid» от 19.10.2001.

На кормовую добавку Солунат получено: Свидетельство о государственной регистрации - учетная серия 21-2-3.5-0529, регистрационный № ПВР - 2-3.5/01549 от 24.04.2006г.; Сертификат соответствия № РОСС RU.nP15.B 13729.

Кормовая добавка Солунат внедрена' в технологию кормления крупного рогатого скота в колхозе им. Фрунзе Белгородской области; ООО «Маяк», Прионежский район, Карелия; ООО «Мясо Калмыкии», Целинный район, Калмыкия; ООО «Агросоюз Удмуртии», Завьяловский район, Удмуртия.

Основные положения, выносимые на защиту:

- создано новое направление в животноводстве по использованию высокомолекулярных водорастворимых полимеров в качестве кормовой добавки для крупного рогатого скота; утверждается, что эффективность добавок на основе высокомолекулярных водорастворимых полимеров основана на их сорбционных свойствах и способности образовывать интерполимерные комплексы с молекулами белка и ионами металлов;

- доказано, что высокомолекулярные водорастворимые полимеры с линейной структурой молекул повышают эффективность использования питательных веществ кормов;

- разработана кормовая добавка нового типа, с коммерческим названием Солунат, имеющая двойное-назначение: она способна повышать мясную и молочную- продуктивность крупного рогатого скота и снижать концентрацию радиоактивного цезия в продуктах животноводства.

Апробация работы. Материалы доложены: на региональном конкурсе научных проектов в области естественных наук, Калуга, 2000; Международной научно-практической конференции "Опыт преодоления последствий катастрофы на Чернобыльской атомной станции. Экология, безопасность и устойчивое развитие - XXI век", г. Новозыбков., Брянская область, 20-2 ¡сентября 2002 г; Всероссийской научно-практической конференции «Агроэкологические проблемы сельскохозяйственного производства в условиях техногенного загрязнения агроэкосистем», Казань, 2002 г.; Всероссийском семинаре «Био-технология-2003», Пущино, ноябрь, 2003; 2-ой Российской- научно-практической конференции «Физикотехнические проблемы создания новых технологий в агро-промышленном комплексе», Ставрополь, апрель, 2003 г.; 5-ом Международном симпозиуме «Актуальные проблемы дозиметрии», Минск (Республика Беларусь), 20-21 октября 2005г.; Международной научно - практической конференции, посвященной 50- летию ВНИИВВиМ 13-14 ноября 2008 г. «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных». Покров, 2008; Международной научно-практической конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства и пути их решения» Дубровицы ВИЖ. 21-23 окт. 2008 г.; Всероссийской научно-практической конференции «Инновационные пути развития животноводства». КЧР, Черкесск, 2009 г.; 6-ой международный радиобиологический съезд, Москва, 25-28 октября 2010.

Публикации. Основные положения работы опубликованы в 29 научных статьях, рекомендациях, тезисах, в том числе в 11 статьях в изданиях, рекомендованных ВАК РФ; на основании полученных результатов защищены: патент РФ и Европатент.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 326 страницах текста компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, предложений производству, приложений. Работа иллюстрирована 90 таблицами, 32 рисунками. Список литературы включает 307 источников, в том числе 101 иностранный.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Грудина, Наталья Владимировна

Выводы

1. В экспериментах in vitro показано, что исследованные полимеры ВПК и ПЭККА с молекулярной массой 106 Да и размером молекулярного клубка ~ ЮОнм образуют интерполимерные комплексы с модельным белком — бычьим сывороточным альбумином. Образование комплексов происходило в широком интервале избытка* белка от 1 до 2000 по отношению к полимеру. Расчеты показали, что 1 г полимера ВПК при рН 7,26 - 6,74 может удержать 21-25 г бычьего сывороточного альбумина, имеющего молекулярную массу 105 Да, air полимера ПЭККА (при рН 6,0-6,5) -86 + 91 г. Поскольку бычий сывороточный' альбумин является низкомолекулярным белком сыворотки крови животных, то были проведены теоретические расчеты по количеству удержания полимером ПЭККА молекул растительных белков; которые имеют значительно более высокую молекулярную массу, чем бычий альбумин. Расчеты показали, что 1 г ПЭККА, с молекулярной массой 106 Да, может удержать в комплексе от 150 до 400 г растительного белка в зависимости от вида белка и его молекулярной массы.

2. В исследованиях in vitro было установлено, что высокомолекулярные водорастворимые полимеры, так же как некоторые химические вещества (альдегиды, спирты), хорошо «защищают» протеин концентрированных кормов. Степень защиты в буферных растворах от растворимости протеина подсолнечного жмыха, обработанного 1% растворами формальдегида и глутаральдегида, а также 0,01% раствором

ПЭККА, составляла 78,2; 67,1%; 50,8%, соответственно. При

275 исследовании инкубированных в рубце таких же образцов подсолнечного жмыха, обработанных альдегидами: 1% растворами формальдегида и глутаральдегида, а так же 0,01% раствором- ПЭККА степень защиты составляет 74,4%; 61,5%; 54,7%, соответственно. Следует отметить, что при сопоставимом эффекте количество ПЭККА было в 100 раз меньше, чем альдегидов.

3. Механизм защиты кормового белка от распада в рубце жвачных животных с применением высокомолекулярных полимеров отличается от известных способов защиты: молекулы полимеров образуют комплексы с протеинами концентрированных кормов при помощи кулоновских взаимодействий, при этом не изменяют химических свойств белковых молекул как это происходит, например при обработке корма формалином или при нагревании до высоких температур.

4. Установлено, что полимер ПЭККА, обладает хорошо выраженными сорбционными свойствами по отношению к ионам металлов. В опытах in vitro было показано, что степень сорбции молекулами ПЭККА ионов j fy j | ^ j ^ металлов: Cu Zn , Cd Pb " составляла 90-98%.

5. В опытах с ПЭККА было установлено, что интерполимерные комплексы с белком и ионами'металлов образуются при рН среды 5,0 + 7,5. В кислой среде при рН 1,5 комплексы* не существуют.

6. На основании лабораторных исследований свойств высокомолекулярных водорастворимых полимеров, была разработана кормовая, добавка нового типа для крупного рогатого скота, получившая коммерческое название «Солунат», двойного назначения: повышающая продуктивность животных и снижающая поступление радиоактивного цезия в продукцию животноводства. Основное действующее вещество Солуната - натриевая соль сополимера этиленкарбоновой кислоты и ее амида (ПЭККА). ПЭККА вносится в организм крупного рогатого скота с концентрированным кормом в ничтожно малых количествах, из расчета 500 мг или 1000 мг на 1 животное, с живой массой ~ 500 кг.

7. При использовании Солуната обеспечение жвачных животных аминокислотами происходит не за счет питательных компонентов добавки, как это происходит при применении традиционных кормовых добавок, а за счет лучшего усвоения белка, содержащегося в основном, корме.

8. Добавление Солуната в концентрированные корма приводило к снижению распадаемости сырого протеина в рубце коров на 8,2 в абс. %, что подтверждает существование эффекта «защиты» и объясняется-тем, что активные центры полимерных молекул могут связываться с активными центрами части белковых молекул корма, что делает их недоступными для протеолитических бактерий рубцовой микрофлоры. При применении Солуната отмечена тенденция повышения рН содержимого рубца (рН=5,9 в контроле, против рН=6,1 в опыте).

9. При* использовании Солуната несколько понижается амилолитическая активность рубцового содержимого, что позволяет увеличить поступление крахмала в кишечник, где он переварится без ферментативных потерь.

Ю.Введение Солуната в рацион^ коров увеличивает переваримость питательных веществ в кишечнике. Особенно повышалась переваримость сырого протеина — на 9,7 % относительно контроля. По-видимому, это связано с увеличением поверхности контакта ферментов с субстратом, посредством образования белок (фермент) - полимерных комплексов. Это, очевидно, способствует повышению эффективности полостного и пристеночного пищеварения в тонком отделе кишечника.

11.Изучение показателей субхронической токсичности полимерной добавки Солунат показало отсутствие выраженных изменений какихлибо показателей, характеризующих состояние и функционирование j различных систем организма крыс: кроветворную, центральную нервную систему, выделительную, иммунную и др. В экспериментах установлено, что Солунат в дозах ~10мг/кг живой массы не оказывает эмбриотоксического, гонадотоксического и тератогенного действия на организм лабораторных животных, а так же не обладает мутагенной активностью.

12.Анализ экспериментальных данных показал отсутствие токсических свойств у кормовой добавки Солунат. У подопытных животных установлен высокий уровень естественной резистентности и иммунного статуса, о чем свидетельствует соответствие нормативным значениям показателей лейкоформулы, а так же характеристик функциональной активности нейтрофилов крови, бактерицидной активности сыворотки крови, концентрации общего белка, его фракций. Выявлено некоторое положительное влияние Солуната на иммунологические показатели: в период сезонно низкой резистентности у животных, получавших Солунат, была несколько выше концентрация общего белка в сыворотке крови, фагоцитарное число и относительная поглотительная способность нейтрофилов по сравнению с контролем.

13.В серии производственных опытов в условиях хозяйств Белгородской, Ленинградской, Московской, Калужской, Брянской, Гомельской и других областей показано положительное влияние Солуната на < повышение молочной и мясной продуктивности» крупного рогатого скота. При одинаковом основном рационе животных применение Солуната обеспечивало увеличение привесов молодняка крупного рогатого скота на 166 250 г/(гол*сут) и удоев - 1,5-^2,5 л/(гол*сут).

М.Впервые для снижения поступления 137Сз в продукты животноводства предлагается использовать высокомолекулярные водорастворимые полимеры (ПЭККА), с молекулярной массой ~ 106 Да; в виде растворимого гомогенного сорбента. В этом случае эффективная* доза Солуната составляет 1,0 г/(гол*сут) и взаимодействие между сорбентом и металлом (в данном случае, с 137Сз) происходит не на поверхности твердой фазы сорбента (как при применении твердых нерастворимых сорбентов); а на уровне активных ионных групп, расположенных на поверхности молекул полимера (растворимый гомогенный сорбент), и ионов металла.

15.В исследованиях, проведенных в условиях хозяйств, располо-женных на радиоактивно загрязненных территориях, применение Солуната в эффективной дозе (1,0 г/(гол*сут) показало снижение содержания Сб в мышечной ткани бычков на 35- 38 % относительно контроля. Использование Солуната в рационе дойных коров в эффективной дозе

137 снижало (относительно контроля), в среднем, поступление Сб в молоко на 30%; что было на 24% меньше, чем при применение ферроцианидов (специфического сорбента 137Сз в дозе 3 г/(гол*сут) — на 54%). При этом молочная продуктивность при применении Солуната повышалась, в среднем на 1,5 л/(гол*сут), а мясная — на 137 — 173 г/(гол*сут).

Предложения производству

1. Рекомендовать скотоводческим хозяйствам, находящимся на

137 радиоактивно загрязненных ( Сб) территориях, и не подвергшихся радиоактивному загрязнению, использовать кормовую добавку Солунат в рационе крупного рогатого скота.

2. С целью повышения молочной продуктивности скота предлагается использовать Солунат в смеси с концентрированным белковым кормом в дозе 500 мг/(гол*сут) (по активному веществу) на территориях как условно

137„ „ чистых», так и на радиоактивно загрязненных Сб. Для получения максимального эффекта рекомендуется начинать дачу Солуната стельным сухостойным коровам за месяц до отела и продолжать в течение всей лактации.

3. Для повышения мясной продуктивности молодняка крупного рогатого скота производству предлагается вводить в концентрированные белковые корма Солунат в дозе по активному веществу - 250 мг/(гол*сут) телятам с живой массой менее 200 кг и 0,5 г/(гол*сут) телятам с живой массой более 200 кг.

137

5. Для снижения уровней накопления Cs в молоке коров наиболее эффективной дозой (по активному веществу) является 1,0 г/(гол*сут).

137

При уровнях «загрязнения» молока Cs с невысоким превышением санитарно-гигиенических нормативов (ниже 150 Бк/кг), целесообразно

137 использовать Солунат в дозах 0,5 г/(гол*сут). При содержании Cs в молоке коров выше 150 Бк/кг, рекомендуемая суточная доза Солуната -1,0 г на 1 голову.

137

6. Для снижения концентрации Cs в мышечной ткани молодняка крупного рогатого скота наиболее эффективной дозой Солуната (по активному веществу) является - 0,5 г/(гол*сут) телятам с живой массой менее 200 кг и 1,0 г/(гол*сут) телятам с живой массой более 200 кг.

Заключение

Таким образом, можно сделать заключение о том, совокупность основных результатов диссертации представляет собой новое перспективное научное направление, связанное с разработкой и практической реализацией кормовых добавок нового типа — на основе высокомолекулярных водорастворимых полимеров. Ключевыми элементами разработки, новой методологии использования полимерных высокомолекулярных соединений' для повышения продуктивности

137 сельскохозяйственных животных и снижения уровней загрязнения Сб продукции животноводства является изучение механизмов взаимодействия высокомолекулярных водорастворимых полимеров с ионами металлов, молекулами белков и со стенкой желудочно-кишечного тракта в процессе усвоения и всасывания питательных веществ, а так же влияние высокомолекулярных водорастворимых полимеров на процессы пищеварения в желудочно-кишечном тракте жвачных животных и показатели здоровья крупного рогатого скота.

На основании полученных результатов собственных исследований была разработана кормовая добавка нового типа для крупного рогатого

274 скота, с коммерческим названием Солунат, двойного назначения, способная повышать продуктивность сельскохозяйственных животных и снижать концентрацию 137Cs в животноводческой продукции, путем связывания радиоактивного цезия в желудочно- кишечном тракте жвачных животных и выведения его с экскрементами из организма.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Грудина, Наталья Владимировна, Боровск

1. Алдошин, В.Г. Некоторые физико химические характеристики высокомолекулярного полиамида / В.Г. Алдошин // Высокомолекулярные соединения. - 1960. -Т. 2. - № 3. - С. 347 - 353.

2. Алексахин, P.M. Некоторые актуальные проблемы почвенной радиоэкологии / P.M. Алексахин, А.И. Таскаев // — Почвоведение. — 1988. -№7.-С. 115-124.

3. Алексахин, P.M. О реабилитации территорий, подвергшихся загрязнению / P.M. Алексахин, Г.В. Козьмин, Н.И. Санжарова, C.B. Фесенко // Вестн. РАСХН. 1994. - №2. - С. 28 - 30.

4. Алиев, А. А. Новейшие оперативные методы исследований жвачных животных/А;А. Алиев; — М: Агропромиздат. 1985. — 127 с.

5. Анненков, Б.Н. Радиационные катастрофы: последствия и контрмеры в сельском хозяйстве/ Б.Н. Анненков. — М: Санэпидмедиа. — 2008. — 272 с.

6. Анненков, Б.Н. Сельское хозяйством после крупных радиационных катастроф /Б;Н: Анненков. Ростов-на-Дону: ЗАО «Росиздат». - 2010. -284 с. . ;

7. Анненков, В.В.Реакции комплексообразования с участием поливинил-азолов: автореф. дисс. ученой степени докт. химич. наук/ В.В. Анненков; Иркутский государственный университет. Иркутск, 2001. - 27 с.

8. Антипова JI. Кормовые добавки из вторичного сырья/ Л. Антипова, Ч. Шахманов, А.Аргунов//Комбикорма. 2003. - №3. - С. 58.

9. Асташева, Н.П: Использование ферроциновых болюсов для снижения концентрации в молоке коров, содержащихся на загрязненных PB сельхозугодьях/ Н.П. Асташева//Радиобиологический съезд: тез. докл. Киев. 20-25 сент. 1993. — Пущино, 1993.-T. 1.-С. 41-42.

10. Афоничков, H.A. Применение полиакриламида для повышения удержания наполнителя в бумаге/ H.A. Афоничков, Е.А. Терентьев//Бумажная промышленность. 1961. — № 11. — С. 22-25.

11. Батюк, В.П. Применение гранулированных отходов химической промышленности для борьбы с сорняками / В.П. Батюк // Пласт, массы. — 1961.-№2.-С. 1 -2.

12. Богданов, H:Hî Использование хлореллы в рационе сельскохозяйственных животных/Н!И. Богданов//Доклады РАСХН. 2004. - №1. - G.34-36.

13. Большаков В.Н. Заключение комиссии по оценке экологической ситуации в районе деятельности производственного объединения «Маяк» минатомэнергопрома СССР, организованной распоряжением, Президиума

14. АН СССР № 1140-501 от 12.06.90/ В.Н. Большаков, P.M. Алексахин//Радиобиология. — Т. 31, вып. 3, 1991. С. — 436-452.

15. Бударков, В.А. Радиобиология. Радиационная безопасность сельскохозяйственных животных/ В.А Бударков A.C. Зенкин//М.: ООО «КолосС». 2008. - 352 с.

16. Булдаков, JI.A. К обмену и биологическому действию цезия-137 у овец//распределение, биологическое действие, ускорение выведения радиоактивных изотопов. Под ред. Ю.И. Москалева. М.: Медицина, 1964. -С. 167- 182.

17. Булдаков, JI.A. Проблемы распределения и экспериментальной оценки допустимых уровней l37Cs, 90Sr, I06Ru / JI.A. Булдаков, Ю.И. Москалев. M.: Атомиздат, 1968.

18. Бухарин, О.В. Фотонефелометрический метод определения бактерицидной активности крови/ О.В. Бухарин, B.JI. Созыкин.//Факторы естественного иммунитета. Под. ред. О.В. Бухарина Оренбург, 1979. — С. 43-45.

19. Васильев, A.B. Ведение животноводства на территориях, подвергшихся радиоактивному загрязнению/ А.В Васильев, И.А Морозов, В.Н. Кудрявцев и др. // Химизация сельского хозяйства. 1992. - №2. — С. 17-20.

20. Ведина, О.Т. Цинк в сельскохозяйственных растениях придорожных экосистем/О.Т. Ведина, С.И. Тома, И.С. Пайлик//Тяжелые металлы и радионуклиды: матер, научно-практической конференции 21-24 декабря 1992 г Москва, 1995. С.97-101.

21. Власов, O.K. Статистические методы прогноза загрязнения продукции агропромышленного производства / O.K. Власов, C.B. Фесенко, Н.И.

22. Санжарова // Г Всесоюз. радиобиол. съезд: Тез. докл. ( Москва, 21 — 27августа) 1989. Т. 2. - С. 129.

23. Воккен, Г.Г. Ветеринарная радиология / Г.Г. Воккен, JL: Колос, 1973. -248 с.

24. Волгарев, М. Н. /Биологически активные добавки— нутрицевтики и их использование с профилактической и лечебной целью при наиболее распространённых заболеваниях/М.Н. Волгарев, В.А. Тутельян, А.К. Батурин//: III Международный симпозиум. — Тюмень, 1997.

25. Георгиевский, В.И. Минеральное питание животных / В.И. Георгиевский, Б.Н. Анненков, В.Т. Самохин. М.: Колос, 1979- 472 с.

26. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности продуктов: 213 ^.Продовольственное сырье и пищевые продукты СаНПиН 2.3.2.107801. Министерство здравоохранения РФ, 2002. 164 с.

27. Гильденскиольд, P.C. Тяжелые металлы в окружающей среде1 и их влияние на организм (обзор) Гильденскиольд P.C., Новиков Ю.В., Хамидулин P.C., Анискина Р.И., Винокур И.Л. // Гигиена и санитария. М.: Медицина. 1992. - №5-6. - С. 6-9.

28. Головин, A.B. Влияние ферментного препарата МЭК СХ-4 на мясную продуктивность и качество туш голштинизированных черно-пестрых бычков / A.B. Головин, A.C. Красовский, О.Н. Могиленец, Е.С.

29. Афанасьева //В сб. Материалов международной научно-практической конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства и пути их решения». Дубровицы-ВИЖ, 2008. С. 187-190.

30. Горячев, И.И. Кормление высокопродуктивных коров / И.И. Горячев, Ф.Ф. Богуш, Н.В. Пилюк. Минск: Белнцим, 1996. - С.10-12.

31. Григорьев, A.B. Разработка и клиническая оценка пробиотика "Бифидумбактерин форте"/ A.B. Григорьев, В.М. Бондаренко, H.A. Абрамов и др.// Журн. микробиол. — 1997. — №3- С. 92-96.

32. Грудина Н.В. Повышение эффективности высококонцентрированных белковых кормов путем применения защищающих агентов/ Н.В. Грудина, В.И. Луховицкий, P.M. Алексахин, Н.С. Грудин, Б.Д. Кальницкий, A.M. Соловьев //Доклады РАСХН.- 2005.-№2.- С.33-35.

33. Грызлов, В.П., Данилова H.H. Влияние сложных удобрений на фракционный и аминокислотный состав белков озимой ржи. — Физиология и биохимия культурных растений, 3, 3, 1974.

34. Данилевская, H.B. Лактобифадол для стимуляции продуктивности дойных коров/Н.В.Данилевская, В.В. Субботин, O.A. Вашурин, Ю.В. Пятышева //Ветеринария. 2003. - №2. - С. 50-54.

35. Диков, М.М., Макромолекулярный обмен в растворах комплексов глобулярных белков с неприродными полимерами/Осипов А.П., Егоров1

36. A.M. и др.-ДАН. 1979.- т. 248. - №5.- С. 1260-1267.

37. Дмитриева, Н.Я. Липрот в питании жвачных / Н.Я. Дмитриева, С.В Ясников// В сб. Материалов междунар. научно-практ. конференции «Проблемы увеличения производства продуктов животноводства и пути• их решения». Дубровицы-ВИЖ, 2008. С.263 265.

38. Ерсков, Э.Р. Протеиновое питание жвачных животных / Э.Р. Ерсков // Пер с англ. Э.В Овчаренко и Г.Н. Жидкоблиновой под ред. и пред.

39. B.И.Георгиевского. М.: Агропромиздат, - 1985. - 183с.

40. Иванов; A.A. Микрогранулированный кормовой препарат/ A.A. Иванов, А.И. Воронкова, JI.M. Городилина, В. Г. Беликова, Т.М. Околелова//Пат. РФ 2099964 А 23 К 1/00, 1/165, 1995.

41. Изумрудов, В.А. Макромолекулярный обмен в растворах комплексов глобулярных белков с неприродными полиэлектролитами/ В.А. Изумрудов, А.Б. Зезин, член-корр. АН СССР В.А. Кабанов // Физическая химия.- 1984. №7.-С.1120-1123.

42. Изумрудов, В.А. О кинетике макромолекулярного обмена в растворах полиэлектролитных комплексов /В.А. Изумрудов, А.П.Савицкий, А.Б. Зезин, член-корр. АН СССР В.А. Кабанов // Физическая химия. 1984 -№9. - С.1408-1412.

43. Изучение микрофлоры преджелудков у жвачных, Боровск, 1977.

44. Ильин, М.И. Мелиорация^ естественных лугов — способ» уменьшения содержания радионуклидов в кормах/ М'.И. Ильин, Г.П. Перепелятников, Б.С. Пристер// Радиобиологический съезд (Киев, 20-25 сентября 1993 г). -Пущино, 1993. т. 1. - С. 409.

45. Ильязов, Р.Г. Радиоэкологические аспекты животноводства (Последствия и контрмеры после катастрофы на Чернобыльской АЭС)/Под ред. Р.Г. Ильязова/. Гомель: Полеспечать, 1996. - 180 с.

46. Ильязов, Р.Г. Экологические и радиобиологические последствия чернобыльской катастрофы для животноводства и пути их преодоления/

47. Р.Г. Ильязов, А.Н. Сироткин, Б.П. Кругликов. Под ред. Чл.-корр. АН РТ Ильязова Р.Г. Казань: Фэн, 2002. - 330 с.

48. Ильязов, Р.Г. Адаптация агроэкосферы к условиям техногенеза / Р.Г. Ильязов, Ф.Х. Шакиров, Н.М Лазарев, и др. Под ред. Чл.-корр. АН РТ Ильязова Р.Г. Казань: Фэн, 2006. - 664 с.

49. Имангулов, Ш. Ферментативный пробиотик : два в одном/ Ш. Имангулов, Г. Игнатова// Птицеводство. 2004. — № 7. - С. 10-11.

50. Использование берлинской лазури для снижения уровня загрязнения радиоактивным цезием молока и мяса, производимых на территориях, пострадавших от чернобыльской аварии // Проспект ООН ЕП.- МАГАТЭ, 1997.-28 с.

51. Кабанов, В.А. Успехи использования полимеров в иммунологии/ В.А. Кабанов, P.M. Петров, P.M. Хаитов. М.: Химия, 1986.

52. Калашников, А.П. Нормы и рационы кормления с.х. животных: справочное пособие/ А.П. Калашников, Н.И Клейменов, В.Н. Баканов и др. // М.: Агропромиздат, 1985. 352с.

53. Кальницкий, Б.Д. Минеральные вещества в кормлении животных/ Б.Д. Кальницкий. Л.: Агропромиздат. Ленинградское отделение, 1985. — 207 с.

54. Кальницкий, Б.Д. Физиолого-биохимические подходы к оценке питательности кормов и нормирования кормления жвачных животных /Б.Д. Кальницкий, Е.Л.Харитонов//Сельскохозяйтвенная биология. — 2002.-№4.-С. 3-10.

55. Карабанова, В.Б. Взаимодействие сшитого полиакрилата натрия с белками/ В.Б. Карабанова, В.Б. Рогачева, А.Б. Зезин, В.А. Кабанов // Высокомоле-кулярные соединения. 1995. - т.37. -№11. - С.1861-1995.

56. Карпенко, Л.Ю. Биологическое значение ионов иода/ Л.Ю. Карпенко, О.Н. Ершова//Журнал «Практик». 2004. - №5-6 (май-июнь). - С. 101105.

57. Касснер, К. Опыт использования лизинпротеиновой добавки / К Касснер // Комбикорма. №3. - 2003.- С. 57-58.

58. Кашин, A.C. Об обеспечении ветеринарного благополучия животноводства на фоне антропогенных аномалий региона/ A.C. Кашин //Ветеринария. 2001. - №5. - С. 76-79.

59. Кирилов, М. Для высокоудойных коров защищенный метионин/М. Кирилов, А. Головкин, Д. Грачев, О. Голосной//Животноводство России. -2002.-№2.-С. 10-11.

60. Клиценко, Г.Т. Минеральное питание сельскохозяйственных животных: 2-е изд. перераб. и дополн./ Г.Т. Клиценко. Киев.: Урожай, 1980. - 1980.- С. 20.

61. Княжев, В. А. Правильное питание; Биодобавки, которые вам необходимы/ В. А. Княжев, Б.П. Суханов, В.А. Тутельян. М.: Гэотар медицина, 1998. - 208 е.).

62. Ковальский, В.В. Биологическая роль микроэлементов/В.В. Ковальский.- М., 1972.- С. 30-32.

63. Козьмина, Н.П. Биохимия зерна и продуктов его переработки/ Н.П. Козьмина. М.: Колос, 1976. — 276 с.

64. Конарев, В.Г. О' природе глютелина пшеницы по данным иммунологического анализа/В.Г Конарев, И.П Гаврилюк., Губарева Н.К. //Доклады ВАСХНИЛ. 1970. -№17. С. 45-50.

65. Кондрахин, И.П: Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии / И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов, А.Г. Малахов и др. М.: Агропромиздат, 1985.-287 с.

66. Корнеев,Н.А. Основы радиоэкологии сельскохозяйственных живот-ных /H.A. Корнеев, А.Н. Сироткин. — М.: Энергоатомиздат, 1987. 208 с.

67. Корнеев; H.A. Сфера агропромышленного производства -радиологические последствия' аварии на Чернобыльской АЭС и основные защитные мероприятия/ H.A. Корнеев, А.П. Поваляев; Р.М.Алексахин' и др.// Атомная энергия. 1988. - Т. 65. - вып. 2. - С. 129-134.

68. Корнеев, H.A. Ведение личного подсобного хозяйства на территории, загрязненной радиоактивными веществами (рекомендации)/Н.А. Корнеев, Р.М.Алексахин; А.Н.Ратников и др. Обнинск, 1991 - 29 с.

69. Коршунов, В.М. Характеристика биологических препаратов и пищевых добавок для функционального питания и коррекции микрофлоры кишечника// В.М. Коршунов, Б.А. Ефимов, А.П. Пикина. //Журн. микробиол. -2000.-№3.-С. 86-91.

70. Косарев, Э. Кормовые добавки в животноводстве /Э. Косарев //Молоко& КормаМенеджмент. 2006. - №2. - С. 35-37.

71. Костин, П.М. Способ приготовления кормовой добавки из шелухи, лузги и отходов хлопчатника/П.М. Костин, Н.Т. Ноздрин, Л.Н. Борисенко, H.H. Зрайченко, A.M. Бич, В.Ф. Винниченко, Н.М. Мироненко//Авт. свид. СССР № 1090322, кл. А 23К 1/12. 1984.

72. Котова, Г.А. Синтетические аминокислоты для кормовых целей/ Г.А. Котова, М.В. Волкова//Сельское хозяйство за рубежом. — 1983. — №1. — С. 37-41.

73. Котова, Г.А. Промышленное производство аминокислот/ Г.А. Котова, М.В. Волкова// Белково-аминокислотное питание сельскохозяйственныхживотных: тезисы докл. Всесоюзного совещания 28-30 мая 1986г. -Боровск, 1986.-С. 23-24.

74. Кретович, B.JI. Основы биохимии растений/ B.JI. Кретович. М.: Высшая^ школа, 1964. - 586 с.

75. Кроль, М.Ю. Диагностика отравлений животных медь-содержащими соединениями/ М.Ю. Кроль//Ветеринария. 1986. - №9. - С. 77-81.

76. Крыжановский, Р. Н. Стресс и иммунитет / Р. Н. Крыжановский //Вестник АМН СССР.- №8.- 1985.- С. 3-12.

77. Кудрявцев, В.Н. Миграция 137Cs в трофической цепи крупного рогатого скота и нормирование поступления радионуклида в ее звенья. Автореф. дис. канд. биол. наук, Обнинск. 1991. - с.20.

78. Кудрявцева, JI.A. Селен в кормлении животных/ JI.A. Кудрявцева//Сельское хозяйство за рубежом. 1974. - №1. - С. 14-17.

79. Кузнецов, С.Г. Биологическая доступность минеральных веществ для животных. Обзорная информация. / С.Г.Кузнецов. ВНИИТЭИагропром. М., 1992.-52 с.

80. Кулик, М.Ф. Использование синтетических веществ в животноводстве / М.Ф. Кулик, Н.В. Бабийчук, В.В Химич. Киев: Урожай, 1980.- 126с.

81. Курилов, Н.В. Использование протеина кормов животными / Н.В. Курилов, А.Н. Кошаров // Москва. Колос. -1979. -343с. с иллюстр. /

82. Курилов, Н.В. Пищеварение у жвачных. Обзор./Н.В. Курилов, А.Н. Севастьянова // Итоги науки и техники, серия животноводство и ветер. -1978.-С. 5-78.

83. Курилов, Н.В. Современный подход к нормированию протеинового питания жвачных животных/ Н.В Курилов// Вестник с.х. науки. 1987 — №11.-С.124- 132.

84. Кутовенко, Т. Оптимальное кормление — высокая продуктивность/ Т. Кутовенко//Животноводство России. 2008. - Январь. - С. 19-20.

85. Лабораторные методы в ветеринарии: биохимические и микологические. (Под ред. Б.И. Антонова). Москва ВО «Агропромиздат», 1991.-с. 287.

86. Лавренчик, В.Н. Глобальные выпадения продуктов ядерных взрывов/ В.Н. Лавренчик. М: Атомиздат, 1965. - 170 с.

87. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф Лакин. М-.: Высш. Школа, 1990. - С. 352.

88. Лампила, М. Небелковые азотсодержащие вещества в кормлении жвачных / М. Лампила // Сел. хоз-во за рубежом . Животноводство. — 1970.-№7.-С. 10-12.

89. Лещук, С.И. Получение высокоактивной иммунной сыворотки с помощью полимерного иммуноадъюванта / С.И. Лещук, В.В. Анненков, В.А. Круглова //Мат. науч.-практ. конф., поев. 60-летию Исфаринской сан.-эпид. службы. Исфара, 1992.- С. 84 - 86.

90. Липатов, Ю.С. Адсорбция полимеров / Ю.С. Липатов, Л.М. Сергеева // Киев: Наук, думка. - 1972. - 196с.

91. Лусли, Дж. Использование небелкового азота в,кормлении жвачных животных / Дж. Лусли, И Мак-Дональд // М.: Колос. 1973. - 450с.

92. Линник, B.C. Интенсивный откорм бычков полнорационными смесями с мочевиной / B.C. Линник // Научн. тр. Укр. с-х. академии. -1976.-№204.-С. 31-35.

93. Луховицкий, В.И. Об определении характеристической вязкости ( высокомолекулярных и сверхвысокомолекулярных полимеров / В.И.

94. Луховицкий, А.И. Карпо // Высокомолекулярные соединения, Серия Б, 2001. Т.43. - №7. - С. 1257-1261.

95. Лушников, H.A. Минеральные вещества и природные добавки в питании животных/Н.А. Лушников. Курган: КГСХА, 2003. - 192 с. - С. 9-15.

96. Марей, А.Н. Глобальные выпадения 137Cs и человек/А.Н. Марей, P.M. Бархударов, Н.Я. Новикова. — М.: Атомиздат, 1974. 168 с.

97. Масалов, В.Н. Стимуляция репродуктивной функции коров антиоксидантами, адреноблокаторами и средствами природного происхождения: автореф. дис. канд. биол. наук / В.Н.Масалов. Орел, 2001.-21с.

98. Методические указания по получению экологически чистой сельскохозяйственной продукции на техногенно загрязненных территориях. Обнинск, 2005. 93 с.f 119. Методические рекомендации. «Изучение пищеварения у жвачныхживотных», Боровск, 1987.- 35-39.

99. Методическими рекомендациями по оценке мутагенной активности препаратов, применяемых в животноводстве, М., ВАСХНИЛ, 1988.

100. Методы определения токсичности и опасности химических веществ (Токсикометрия). Под ред. проф. И.В. Саноцкого. М.: изд-во Медицина, 1970.

101. Методы анализа пищеварительных ферментов», Боровск, ВНИИФБиП, 1987.

102. Методы биохимического анализа, Боровск, ВНИИФБиП, 1998.

103. Методы исследования питания с.-х. животных, Боровск, ВНИИФБиП, 1998.

104. Методы исслед пищеварения жвачных, Боровск, ВНИИФБиП, 1987.

105. Микулец, Ю. Витамины Е и С плюсы одновременного действияЛО. Микулец, Н.Шевелев//Животноводство России. — 2006. -Январь.-С. 17-18.

106. Модянов, A.B. Использование ферментных препаратов при кормлении жвачных / A.B. Модянов, A.M. Холмаков и др.// Микробиол. синтез. 1969. - 5. № 6. - С. 19 - 26.

107. Модянов, A.B. Ферментные препараты в кормлении животных/ A.B. Модянов. -М.: Колос, 1973. 150с.

108. Модянов, A.B. Использование синтетических веществ в кормлении животных / A.B. Модянов. М.: Россельхозиздат. - 1981. - С. 4 -45.

109. Москалев, Ю.И. Распределение, биологическое действие и миграция радиоактивных изотопов/под ред. Ю.И. Москалева.- М.: Атомиздат, 1961.-стр. 5-27.

110. Новиков, В.А. Техногенное воздействие тяжелых металлов / В.А. Новиков, М.Я. Тремасов //Ветеринария. 2004. - №11. - С. 51-55.

111. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных/Под общей редакцией А.П. Калашникова, В.И. Фисинина, В.В. Щеглова, Н.И. Клейменова. Москва, 2003. - 456с.

112. Отан, П., Буррэн П., Картилье А., Санте Р.-П. Патент Франции 4203664/А 23 К 1/00 1986.

113. Павленко, С.Д. Применение метода суммационно порогового показателя в токсикологическом эксперименте на белых крысах / С.Д. Павленко //Санитарно-токсикологические методы исследования в гигиене. М., 1975, с.5-7.

114. Панин, И. Корректировка аминокислотного состава сырья при расчете рецептов комбикормов/ И. Панин//Комбикорма. — 1999. — №1. — С. 37-39.

115. Патент № 3925560 США, А 23К 1/00, 1975.

116. Перуанский, Ю.В. Влияние места выращивания на компонентный состав белков ярового ячменя/ Ю.В. Перуанский, С.С. Садыхов// Вестник сельскохозяйственной науки Каз. ССР. 1974.-№11. -С.32-36.

117. Пестис, В.К. Сапропелевые гранулы, обогащенные мочевиной, в рационах молодняка крупного рогатого скота на откорме / В.К. Пестис,

118. B.Н. Сурмач // Вопросы полноценности кормления сельскохозяйственных животных и качество кормов: Сборник научных трудов.- Горки, 1991.1. C.65-68.

119. Петров, P.B. Иммуногенетика и искусственные антигены / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, М. Атауллаханов. М. Медицина, 1983. - С. 256.

120. Петрухин, И.В: Корма и кормовые добавки: справочник / И.В. Петрухин.-М.: Росагропромиздат, 1989. 526 с.

121. Пивняк, И.Г. Микробиология пищеварения жвачных/И.Г., Пивняк, Б.В Тараканов. — М.: Изд-во Колос, 1982. 247 с.

122. Пилат, Т. JI. Биологические добавки к пище /Т.Л. Пилат, A.A. Иванов М, 2002. - 710с.

123. Платэ A.A., Валуев Л.И.Международная конференция «Фундаментальные проблемы науки о полимерах» /Платэ A.A., Валуев Л.И.// Тезисы докладов, М. 1997. - С.113 - 116.

124. Плешков, Б.П. Состав белков-семян различных сортов овса/ Б.П. Плешков, Е.В: Седова// Известия TGXA. 1968. - № 9. - С. 56-61.

125. Плященко, С.И. Естественная резистентность организма/ С.И. Плященко, В.Т Сидоров// Ленинград. «Колос». Ленинградское отд. -1979.- 184 с.

126. Подобед, Л.И. Сукрам, или «шоколадка» для свиньи/ Л.И. Подобед, А.Т. Столяр// Ж. Ценовик. 2007. - №5. - С. 13-19.

127. Подшибякин, А.Е., Курилов Н.В., Коршунов В:Н. Патент России № 858724, кл. А 23 К 1/00, 1980.

128. Полеес, М.Э. Аналитическая химия / М.Э. Полеес. — М.: Медицина, 1981.-С. 258-259.

129. Пономаренко, Ю.А. Питательные и антипитательные вещества в кормах/ Ю.А. Пономаренко. Минск: Экоперспектива; 2007. - С. 476.

130. Порфирьев, И.А. Эффективность диспансеризации в выявлении« нарушений обмена, веществ; у высокопродуктивных коров/И:А. Порфирьев// Сельскохозяйственная биология. 1986. - №11. - С. 73-80.

131. Поясов, Н.П. Роль полимеров в повышении плодородия! почвы / Н.П. Поясов, О.А. Агафонов // Земледелие.-1961. № 12. - С. 70 - 73;159: Применение химических;веществ в животноводстве./. Под ред. П. А. Шманенкова. Mi!: Колос, 1964.

132. Прозоровский, В.Б. Актуальные проблемы фармакологии/ В.Б. Прозоровский//Психофармакология и биологическая наркология . -2007. т. 7. - Вып. 3-4. - С. 2090-2100.

133. Пучкова, С.М. Роль белков сыворотки крови и тканей в транспортировке и фиксации; некоторых радиоактивных», элементов: Автореф. дисс. канд. биол. наук.-Челябинск. -1969.

134. Рабинович, В.А. Краткий химический справочник / В.А. Рабинович, З.Я Хавин: -Ленинградское отделение, Химия, 1978.-С. 22.

135. Ранцева, ИЗ*. Обмен веществ и продуктивность коров при скармливании- кормовой; добавки; И-САК1026. /И:В. Ранцева,. Р.В.

136. Некрасов, М.П. Кирилов, В.Н. Виноградов, С.В Кумарин. // Проблемы увеличения производства продуктов животноводства и пути их решения: сб. Материалов международной научно-практической конференции, Дубровицы-ВИЖ, 2008. С. 291-293.

137. Ратников, А.Н. Агропромышленное производство на загрязненных территориях/А.Н. Ратников, Т.Л. Жигарева, Г.И. Попова, Б.Г. Лисянский // Химизация сельского хозяйства. 1992. - №4. - С. 24-29.

138. Рафиков, С.Р. Методы определения молекулярных весов и полидисперсности высокомолекулярных соединений / С.Р. Рафиков, С.А. Павлова, И.И. Твердохлебова//М.: Изд-во АН СССР, 1963.

139. Риш, М.А. Биологическая роль микроэлементов/М.А. Риш.- М.: Наука. 183.-С. 17-28.

140. Рогачева, В.Б., Превыш В. А., Зезин А.Б. Кабанов В.А.//Высокомолекулярные соединения. А. 1988.- Т.30.-№10.- С.2120.

141. Родионова, Т.Н. Обмен веществ и мясная продуктивность молодняка крупного рогатого скота под влиянием селена / Т.Н. Родионова, М.Н. Панфилова //Сельскохозяйственная биология. 2003. — №2.-С. 108-109.

142. Родионова, Т.Н. Фармакодинамика селеноорганических препаратов и их* применение в животноводстве: афтореф. дисс. . канд. биол. наук/Т.Н. Родионова; Куб. гос. аграрн. ун- т, 2004. 45с.

143. Савицкая, М. Н. нанесение пленкообразующих веществ на удобрения и влияние их на всхождение семян и развитие растений / М.Н. Савицкая // Пласт, массы. 1959. - № 4. - С. 36-41.

144. Санжарова, НИ. Особенности мониторинга сельскохозяйственных угодий в зоне воздействия АЭС / Н.И. Санжарова // I Всесоюзн. радиобиол съезд : Тез. докл. (Москва, 21-27 августа 1989). Пущино, 1989. - Т.5. - С. 1214-1215.

145. Сараев; В.В. Изучение методом ЭПР кластерообразования в системе полиметакриловая кислота ионы меди (II) / В.В. Сараев, И.А. Алсарсур; В1В; Анненков; Д.В; Щипуиов // Коорд:. химия.-19991-Т 25:-№12.-С. 919-922.

146. Сироткин, А.Н. Биологическое действие ионизирующих излучений на сельскохозяйственных животных /H.A. Корнеев, А.Н. Сироткин //В кн: Основы радиоэкологии сельскохозяйственных животных. — М.: Энергоатомиздат, 1987. С. 166 - 180.

147. Скобелева, В.Б. Взаимодействие гидрогелей сополимеров акриловой кислоты и акриламида с цитохромом С / В .Б. Скобелева, А. В: Зинченко, В.Б. Рогачева, А. Б. Зезин, В. А. Кабанов //Высокомолекулярные соединения:: Серия А, 2001.-Т. 43:- №3.- С.505-513.

148. Соколова, С.М. Итоги работ по изучению бихимических и физиологических особенностей многолетней пшеницы. /С.М. Соколова, H.A. Тиунова// Биохимия зерна и хлеба М.: Наукам 1964. - 287 с.

149. Таранов, М. Т. Химическое консервирование кормов/ М. Т. Таранов;- М.: Колос, 1964.

150. Тенфорд, Ч.М. Физическая химия полимеров/Ч.М. Тенфорд. — М.: Химия, 1965. 596 с.

151. Томмэ,М.Ф. Потребность свиней в макро и микроэлементах/ М.Ф. Томмэ, Э.Г. Филлипович// Животноводство. - 1975. - №12. - С. 36 - 38.

152. Турчинский, В.В: Определение растворимости и распадаемости протеина кормов. / В.В. Турчинский, Н.В. Курилов, A.M. Фрицев, Ф.В. Воронкова. (Методические указания), Боровск, ОНТИ ВНИИФБиП сельскохозяйствен-ных животных, 1987.

153. Тутельян, В. А. Питание и здоровье: биологически активные добавки к пище / В- А. Тутельян — Сб. 2-го междунар. симп. — М., 1996: С. 25-32.

154. Фабуляк, Ф.Г. Молекулярная подвижность полимеров в поверхностных слоях /Фабуляк Ф.Г. Киев: Наукова думка, 1983. - 144 с.

155. Фармазюк, В.Е. Роль перекисного окисления липидов биомембран в патологии (молекулярные аспекты): обзор литературы. ВИНИТИ/ В.Е. Фармазюк, В.В. Шило. М., 1985. - № 2962. - С. 85.

156. Фисинин, В.И. Природные минералы в кормлении животных и птицы/ В.И.Фисинин, П.Ф. Сурай// Животноводство России. 2008. -Август - С. 66-68.

157. Фицев, А.И. Современные тенденции в оценке и нормировании протеина для жвачных / А.И. Фицев, Ф.В. Воронкова // Москва, - 1986. -55с.

158. Фольмар.М. Кинетика образования новой фазы /М.Фольмар. -М.: Наука, 1986.-205 с.

159. Харитонов, Л.В: Поступление эндогенного азота и всасываниеаминокислот в пищеварительном тракте жвачных / Л.В. Харитонов, Н.В.

160. Курилов, A.M. Материкин //Аминокислоты в животноводстве: тезисы докл. межд. симп. Калуга, 1971. - С. 139- 140.

161. Хенниг, А. Минеральные вещества, витамины, биостимуляторы в кормлении сельскохозяйственных животных/ А.Хенниг. — Перевод с нем. Н.С. Гельман, под ред. А.Л. Пачевой и Ю.И. Раецкой. М.: Колос, 1976. -559с.

162. Цюпко, В.В. Физиологические основы питания молочного скота / В.В. Цюпко //-Киев. Урожай. -1984. - 157с.

163. Чернова, Н.И. Пищевая ценность спирулины: опыт выращивания и применения/ Н.И. Чернова// Ветеринария. 2002. - №1 - С. 60.

164. Шабров А. В. Биохимические основы действия микрокомпонентовпищи/ А. В. Шабров, В. А. Дадали, Макаров В. F М., 2003. - 166 с.

165. Закавказ.конф.: Тез. докл. ( Тбилиси, 23 27 декабря 1987г). - Тбилиси.11987.-С. 49-50.

166. Arthur, J.R. Selenium biochemistry and function /J.R. Arthur// Procceedings of the Ninth International Symposium on Trace Elements in Man and Animals. Ottawa, Canada. — 1997. P. 1-5.

167. Байтасау, P.P. Сапрапель прыродны антыаксщант / Р.Р.Байтасау, Г.Э.Абакумау, В.К.Песщс // Весщ Акадэмн аграрных навук Беларусь-1995.-№1.- С.72-76.

168. Barnett, J.G. Reaction in the Rumen/ J.G. Barnett, D.L. Reid. London, 1961.-170 c.

169. Beever, D. E. Protein systems for feeding ruminant livestock: a European assessment / D.E. Beever, B.R. Cottrell // J. Dairy Sci. -1994. -V. 77.-P.2031-2043.

170. Bebunear, H. Poliacrylamide of ses derives ionigues /Н. Bebunear // Rev. Prod. Chim. 1958. -V. 61. N. 1253 - 1254. - P. 441-449.

171. Benes, B. The concentration level of Cd, Pb, Hg, Cu, Zn and Se in blood of the population/ B. Benes// Cent. Eur. Public Health. 2000. - № 5. - P. 917.

172. Berezkin V.G. Chemical method in gas chromatogphy/ V.G. Berezkin // Amsterdam: Elsevier. 1983. - 122 p.

173. Berry, M.J. Type I iodothyronine deiodinase is a selenocysteine-containing enzyme / M.J. Berry, L. Banu, P.R. Larsen//Nature. 1991. - № 31. -P. 438-440.

174. Blumberg A.A. Identifying polymers through combustion and density/ A.A. Blumberg // J. Chem. Educ. 1993. - Vol.70. - № 5. - P. 399-403.

175. Borovoy, A.A. Radioactive releases originating from the Chernobyl accident / A.A. Borovoy, V.F. Demin, L.D. Blinavoa, I.I. Kryshev ed //. Radeoecological consequences of the Chernobyl accident. Moscow : Nuclear Society International; - 1992: 9 - 20.

176. Braun T. The comparative standing of individual instrumental analytical techniques / T. Braun, S. Zsindely// TrAC: Trends Anal. Chtm. 1992. - Vol. 11. -№ 8. - P. 267-269.

177. Burrows V.A. Internal reflection infrared spectroscopy for chemical analysis of surfaces and thin films/ V.A. Burrows // Solid-state Electron. -1992. Vol. 35. - № 3. - P. 231-238.

178. Buslingame A.L. Mass spectrometry/ A.L. Buslingame, T.A. Bailie, D.H. Russels// Anal. Chem. 1992. - Vol. 64. - № 12. - P.467-502.

179. Canettieri, G. Isolation and characterization of human typeeee 2 deiodinase gene promoter / G. Canettieri, F.S. Celi, R. Sibilla et al.// J. Endocrinol. Invest. 1999. - Vol. 22, Suppl to №6. - P. 1.

180. Cardis, E. Risk of cancer after low doses of ionising radiation: retrospective cohort study in countries /E. Cardis, M. Vrijheid, M. Blettner et al // BMJ. 2005.-V. 331.-P. 77-82.

181. Christensen, R.A. Influence of amount and, degradability of dietary protein on nitrogen utilization by dairy cows/ R.A. Christensen, M.A. Cameron, T.H. Klusmeyer, J.P. Elliot, D.R. Nelson at all // J. Dairy Sci. -1993.-V. 6.-P. 3497-3513.

182. Collins, M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut/ M.D. Collins, G.R. Gibson.// Am.J.Clin.Nutr. 1999. -T. 69. -№5. - P. 1052-1057.

183. Conor, Rudden /Пат. US № 5496572 A 23K 1/00, 1995.

184. Cragg L. H. The Fractionation of High-Polymeric Substances/ L. H. Cragg, H. Hammerschlag// Chem. Rev. 1946. - Vol.39. - №79.

185. Cummings, J.H. Prebiotics digestion and fermentation/ J.H. Cummings G.T. Macfarlane, H.N. Englyst //Am.J.Clin.Nutr. 2001. 73(suppl.):415-420.

186. Cunningham, K.D. Influence of source and amount of dietary protein on milk yield by cows in early lactation/ K.D. Cunningham, M.J. Cecava, T.R. Johnson, P.A. Ludden // J. Dairy Sci. 1996. - V. 79. - P. 620-630.

187. Dhiman, T.R. Protein as the first-limiting nutrient for lactating dairi cows fed high proportions of good quality alfalfa silage / T.R. Dhiman, L.D. Satter. // J. Dairi Sci. -1993. V. 76. -P.l960-1971.

188. Dunster. H.J. District Surveys Following the Windscale Incident/ H.J. Dunster, F.D. Howells, W.L. Templeton//Secondi United Nations International conference on the Peacful Uses of Atomic Energy. A/Conf. — 1958. Vol. 15. -316c.

189. Ewart, J. Further, studies on -S-S-bonds inxereal glutenins. / J. Ewart // J. Sci. Fd. Agr., Vol. 23, № 5. C. 567-579. - 1972.

190. Faichney, G.J. The effect of formaldehyde treatment of concentrate diet on the solute and particle markers through the gastro-intestinal tract of sheep//Aust. J. Arg. Res. 1975. -V. 13. -№ 2. - P. 319-327.

191. Faicney, G. J. Formaldehyde treatment of diet for sheep. 1. Portion of the digestion of organic mater and nitrogen between the stomach and intestines /

192. G. J: Faicney , G.A. White // // Aust. J. Agr. Res. 1977. - V.28. - N6. - P. 1055-1067.

193. Firkins, S.L. Effect of feed intake and protein degradability on rumen dilution rate, efficiency of bacterial growth and site of digestions in steers / S.L. Firkins, L.L. Berger, N.R. Merchen, G.J. Faichneu // J. Univ. Illinois. -Urbana. 1987.

194. Flory P. Principles of Polymer Chemistry/ P. Flory //N.Y. 1953.

195. Frith E.M. Linear Polymers / E.M. Frith, R. F. Tuckett// Longmans, Creen a. Co., London. 1951.

196. Garbassi F. Polymer analysis and characterization/ F. Garbassi // Polym. News. 1996.-Vol. 21.-№ l.-P. 19-20.

197. Garbassi F. Polymer analysis and characterization/ F. Garbassi // Polym. News.-1997.-Volt 22.-№ l.-P. 15.

198. Gardner, K.L. Poliacrylamide solution aging / K.L.Gardner, W.R. Murphy // Appl. Polym. Sei 1978. -V. 22.- N 3. - P. 882 - 887.

199. Ghose, T. Localization of immunoglobulin and complement in pulmonary sarcoid granulomas / T. Ghose, P. Landigan, A. Asif // Chest. -1974.-Vol.66.-P. 264.

200. Gladyshev, V.N. Selenocysteine containing proteins in, mammals/ V.N. Gladyshev, D.L. Hatfield// Jl Biomed. Sei. - 1999. - Vol. 6, № 3. - P. 151160.

201. Griin N. The uptake of radionuclides from inadvertent consumption of soil by grazing animals/ N.Griin, N. Dood// The Science of the Totel Envir. -1988.-Vol. 69.-P. 367-377.

202. Hangate, R. The rumen and its microbes / R. Hangate // Acad. Press. N.Y.-1966.-708 p.

203. Hanigan, M.D. An evaluation of postabsorptive protein and amino acid metabolism in the lactating dairy cow / M.D Hanigan, J.P. Cant, D.C. Weakley, J.L. Beckett // J. Dairi Sei. -1998. Dec. - 81 (12). -385 - 401.

204. Heimer B. Zur Identifizierung von Polymerblends mit einfachen Analysenmethoden/ B. Heimer, K. Rode, D. Braun, H. Pasch// Kautschuk Gummi Kunststoffe. 1997. - Vol. 50. - № 3. - P. 208-215.

205. Herrick, J. Minerals in animals heath/ J. Herrick / Veter. Med. Small Anim. Clin: 1974. - Vol. 69. - № 6. - P. 708-711.

206. Hood, S.L. Metabolism of cesium-137 in rats and farm animals // S.L. Hood, C.E. Comar //Arch. Biochem. Biophys. 1953.-Vol. 45, p.423.

207. Hvelplund, T. Protein systems for ruminants / T. Hvelplund, J. Madsen // Icel. Agr. Sei. 1993. - V. 7. - P. 21 - 36.

208. Huber M. Modern titration/ M. Huber// Schott Inf. - 1997. -№81.-P. 12-13.

209. International Agency for Research» on Cancer (IARC) Monographs on the Evalution of the Carcinogenic Risk of Chemical' to Humans. Lion Who, 1979, V.19, 513p.

210. Jerooh, H. Application of enzymes in laying hens rations based on barley/ H. Jerooh //Proceedings of the 8th European Symposium on Poultry Nutrition. 14-17 Oct.,Venezia-Mestre, Italy. 1991. - P. 361-363.

211. Jimenez, J: Protein fraction studies on high lysine corn/ J Jimenez // Proceedings of the high lysine corn conference. — 1966. — P: 74-79.

212. Jirjis, F.F. Effects of dietary protein'; methionine- and lysine on urinary amino acid exretion in turkeys/ F.F Jirjis //Brit. Poultry Sc. 1999. - Vol. 38. -№♦2.-P. 518-523.

213. Jorgensen, R.L., Cummings K.R., Vinci A., Lajoie M.S., Rudden C. riaT.94/06329 PCT/US, 1993.

214. Kaneta T. Theory of optical chromatography/ T. Kaneta, Y. Ishima, N. Imasaka// Anal. Chem. 1997. - Vol. 69. - № 14. - P.2701-2710.

215. Kingsley, P.B. Vitamin E activity of alpha-tocopherol side chain analogs in selenium-deficient chicks/ P.B. Kingsley, G.F. Combs// Journal Dairy Science. 1981. - Jan. - № 166. -P. 1-5.

216. Kulicke, W.M. Studies of the deuteration of polyacrylamide / W.M. Kulicke, H.W. Siesler // J. Polym. Sci. : Polym. Plus. 1982. - 20. N. 3. - P. 553-556.

217. Lengemann, F.W. The stady of iodine secretion into milk of dairy animals/ F.W. Lengemann//Radioisot. in anim. nutr. a physiol, Viena: IAEA, 1965.-P. 203-219.262.' Lewes, R.W. Пат. Англ. № 2113121А/ R.W. Lewes, O.J. Mc.Makon, T. Tomkins. 1982.

218. Lucy C.A. Co-current chromatography: a new mode of liquid-liquid chromatography// C.A. Lucy, B.P. Hausermann// Anal. Chim. Acta. — 1995. — Vol. 307.-№2-3.-P. 173-183.

219. McAllan, A.B. Factors influencing the digestion of dietary carbohydrates between the month and abomasums of steers / A.B. McAllan, R.h. Smith// Brit. J. Nutr, 1983. - V. 50. - n 2. - P. 445 - 454.

220. Mehret, A.Z. Processing factors affecting the degradability of fish meal in the rumen / A.Z. Mehret, E.R. Orskow /Я. Anim-. Sei. 1979. - V. 50. - № 3.-P. 737-744.

221. Michaleten Doreau, B: Aliments concentres pour ruminantes: degradability in situ dans le rumen /В. Michaleten - Doreau // INRA Prod. Anim. — 1992. — V.5. — N.5. — P. 371 -377.

222. Mohammed, O.E. Measurement of protein degradaition in the rumen / O.E. Mohammed, R.M. Smith // Proc. Nut 4r. Soc.- 1977. v.36.- N1. P. 152 A.

223. Moor, W.J., Comar C.L. Absorption of 137Cs from the Gastrointestinal Tract of the Rat//Intern. J. Radiat. Biol.- 1962.- Vol.5, № 3, p. 247 254

224. Nigrovic, V. Enhancement of the excretion of radiocesium in rats by ferric cyanoferrates (II)/V. Nigrovic//Int. J. Rad. Biol.-1963.-№ 7.-P. 307-309.

225. Nohmi T. Electrospray mass spectrometry of poly(ethylene glycols) with molecular weights up to five million/ T. Nohmi //J: Amer. Chem. Soc. — 1997. Vol. - 14. - № 9. - P. 3241 -3246.

226. Preikschat E. In-line scanning laser microscopy for improved process control1 in the chemical industry / E. Preikschat, J. Hokanson// Pittsburgh Conf. Presents PITTCON'92, New Orleans, La, March 9-12, 1992. P. 279.

227. Preston, DiL. Cances incidence in atomic bomb survivors. Part III: Leukemia; lymphoma and;multiple myeloma. 1950 - 1987 /D.L. Preston, S. Kusumi, M. Tominaga, et al //Radiat. Res.-1994.-V. 137 (Suppl): - P. 68 - 97.

228. Rawlings, R.M., Procter D: Пат.2004728А, Великобритания, 1979.

229. Reduncan H.A. La Polyacrylamide et ses derives iongues/ H.A. Reduncan//Period. des Produits Chim. 1958. - 61. -N 1253. - P. 441-449.

230. Roberfroid, M.B. Prebiotics: preferential substrates for specific germs?/ M.B. Roberfroid //Am.J.Clin.Nutr. 2001. - 73(suppl). - P. 406-409.

231. Rotruck, J.T. Selenium: biochemical role as a component of glutathione perox-idase / J.T. Rotruck , A.L. Pope, H.E. Swanson // Science. 1973. - № 179. — P.588-590.

232. Salbu, B. The mobility of l37Cs and 90Sr in agricultural soils in the Ukraine, Belarus, and Russia, 1991/ B. Salbu, D.N. Oughton, A. N. Ratnikov et al //J. Health Physics. Vol. 67. -N 5. - P: 518-528.

233. Samchson J. Plasma levels, urinary excretion and increase in body burdon of strontium-90 in man / J;Samchson// Rad. Res. — 1960. N 3. - P 192.

234. Sanson, B.F. The metabolism of 137Cs in dairy cows Y.B.F.* Sanson //J. Agr. Sai. 1966. - № 66. - P. 289:

235. Sasaoka, Seiji, Aoki Jzuo, Maruyama Hiroshi /naTeHT US A 23 K 1/18 5532008 A, 1995. Schiller, A.M. Ionic derivatives of: Polyacrylamide /A.M. Schiller, J.Y. Such // Ind. Chim 1956. — Ni 12. - P. 2132 - 2137.

236. Schildnnecht, C. E. Vinyl and.related1 Polimer / C. E.Schildicnecht// -New York: Intesciencepubl, 1952. - 322c.

237. Schiller, A.M. Ionic derivatives of Polyacrylamide /A.M. Schiller, J.Y. Such // Ind. Chim 1956. - N. 12. - P. 2132 - 2137.

238. Sniffen,, C.J. A net carbohydrate and protein system for evaluating cattle diets :I! Carbohydrate and protein availability / C.J.Sniffen, J.D. O' Connor, P.J. Van Soest, D.G. Fox, J:B. Russe! // J. Anim. Sei. 1992. 70. - P. 3562 -3577.

239. Snyder S R. Scanning tunneling microscopy, atomic force microscopy and related techniques / S.R. Snyder, H.S. White // Anal. Chem. 1992.-Vol.64.-№ 12.-P. 116-134.

240. Surai, P.F. Effekt of the selenium and vitamin E content of the maternal diet on the antioxidant system of the yolk and the developing chick/ P.F. Surai// British Poltry Science. 2000. - V. 41. P. 235-243.

241. Tamminga, S. The Dutch protein evalution system : the DVE/OEV-system / S. Tamminga, W.M. Van Straalen, A.P.J. Subnel, Meijer et. al // Livestok Prod: Sei. 1994. - V.40. - P; 139 - 155.

242. Veen, W.A. Vitamin E en- selenium* in de voiding van de landboumhuisdieren/ W.A.Veen // Tijdscr. Voor Diergeneesk. 1975. - N 17. -P. 915-926:

243. Vendelag, S. Absorption- and> metabolism of selenium, compounds by vasculary perfused rat smaal intestine/S. Vendelag, M. Beilstein// Selenium in Biology and Medicine. Tennesse. - 2000. - P. 113.

244. Villette, S. Thyroid stimulating hormone and selenium supply interact to regulate selenoenzyme gene expression in thyroid cells (FRTL-5) in culture/S. Villette, G.Bermano, J.R. Arthur, J.E. Hesketh // FEBS. 1998. - N 438 (1-2). -P. 81-84.

245. Vinson, J.A. Relative bioavailability of inorganic and natural selenium/ J.A. Vinson, P: Bose // Selenium in Biology and Medicine. Van Nostrand, Inc., N.Y., 1987.-P. 445-451.

246. Weins C. Advances and development in thin-layer chromatography/ C. Weins, H.E. Hauck// LC and GC. 1996. - Vol. 14. - № 6. - P.456.

247. Wolsieffer, J.K. Studies concerning the-effects of-ferric ferrocianide, beef and pulp-and fluoride upont 137Cs retention-in the rat- /Wolsieffer J.K., Stockey G.K. and Muhlev J.C.// Proc. Soc. Exper. Biol. Med: 1969. -N 130. - p. 953-956.

248. Zinn, R.A. A rapid procedure« for purine measurement and. its use for estimating net ruminal protein synthesis / R.A. Zinn, F.N. Owens//Can. J. Anim. Sci.-1986.-V.66.-P. 157-166.