Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Разработка метода получения трансгенных растений сахарной свеклы, устойчивых к гербицидам

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Богомолова, Наталья Михайловна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Генетическая трансформация растений с помощью Agrobacterium tumefaciens

1.1.1. Взаимодействие между Agrobacterium и растительной клеткой .Ю

1.1.2. Строение Ti-плазмиды.

1.1.3. Перенос Т-ДНК.

1.1.4. Особенности строения плазмидных векторов и генетическая трансформация растений.

1.2. Гербициды широкого спектра действия.

1.2.1. Общая характеристика гербицидов широкого спектра действия.

1.2.2. Механизмы действия гербицидов глифосата и фосфинот-рицина.

1.3. Инженерия растений, устойчивых к гербицидам широкого спектра действия.

1.3.1. Трансгенные растения, устойчивые к глифосату.

1.3.2. Трансгенные растения, устойчивые к фосфинотрицину

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Характеристика растительного материала и плазмидных векторов, используемых в работах по трансформации.

2.2. Характеристика методов исследования.

2.2.1. Выделение эксплантов и регенерация растений.

2.2.2. Трансформация сахарной свеклы.

2.2.3. Анализ ядерной ДНК растений.

2.2.3.1. Выделение и очистка ядерной ДНК(яДНК) растений.

2.2.3.2. Рестрикция я ДНК.

2.2.3.3. Получение ДНК-зонда для гибридизации с я ДНК.

2.2.3.4. ДОТ-гибридизация яДНК.

2.2.3.5. Саузерн-блоттинг яДНК.

2.2.4. Цитогенетический анализ.

2.2.5. Статистическая обработка.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Разработка системы регенерации сахарной свеклы путем прямого органогенеза.

3.1.1. Влияние генотипа.

3.1.2. Значение экспланта.

3.1.3. Роль питательной среды.

3.1.4. Влияние условий культивирования.

3.2. Трансформация сахарной свеклы с использованием Agrobacterium tumefaciens.

3.2.1. Определение параметров кокультивирования эксплантов с Agrobacterium.

3.2.2. Получение трансформированных растений.

3.3. Молекулярно-биологический анализ трансформированных растений.

3.3.1 Анализ хромосомной ДНК методом ДОТ-гибридизации

3.3.2 Анализ хромосомной ДНК методом Саузерн-блоттинга

3.4. Биологические особенности трансгенных растений.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Разработка метода получения трансгенных растений сахарной свеклы, устойчивых к гербицидам"

Актуальность проблемы. В современном интенсивном аграрном хозяйстве используется огромное количество препаратов, выполняющих функцию защиты растений от сорняков, патогенов и вредных насекомых. Пестициды составляют неотъемлемую часть агрономии и вносят существенный вклад в экономику. Несомненно, экологически чистый урожай - идеал для фермера и потребителя, но в настоящее время нет возможности отказаться от применения химикатов, так как это может привести к значительному снижению урожайности сельскохозяйственных культур. Решать эту проблему необходимо прежде всего за счет создания гербицидов и пестицидов, нетоксичных для теплокровных животных и человека. Важно добиться высокой эффективности ингибиторов, чтобы иметь возможность применять их в сравнительно небольших количествах. Желательно, чтобы эти вещества метаболизировались микроорганизмами и не накапливались в почве и воде. Можно сказать, что уже существуют гербициды, удовлетворяющие этим требованиям. Гербициды нового поколения - специфические ингибиторы метаболизма растений в целом и отдельных его звеньев, поэтому они токсичны не только для сорняков, но и для культурных растений. В связи с этим применяется предпосевная обработка почвы или используются селективные гербициды, которые не угнетают культурные растения. Но наибольший эффект можно получить при использовании сельскохозяйственных культур, устойчивых к неселективным гербицидам.

На протяжении многих веков, с тех пор, как человек одомашнил первое растение, он пытается улучшить качество культурных растений. Сам того не зная, человек манипулировал генами, осуществляя их перенос среди культурных растений одного вида, а также между культурными и их родственниками дикого типа. Со временем эта дея6 тельность приобрела научную основу, и сейчас селекция растений практически достигла своих вершин. На помощь ей пришла техника слияния протопластов, позволяющая получать межвидовые гибриды растений. Традиционные методы селекции растений и слияния протопластов - это своего рода генетическая инженерия, оба подхода можно использовать для манипулирования наследственным материалом растений с целью получения нужных комбинаций наследственных признаков. Однако обоим методам не хватает точности переноса конкретных генов, которую можно достичь теперь, когда разработаны способы получения рекомбинантных ДНК. Технология рекомбинант-ных ДНК позволяет осуществлять перенос генов контролируемо и в значительно более сжатые сроки, чем традиционная селекция. Появление технологии рекомбинантных ДНК и генетической инженерии способствует конструированию культурных растений с определенными заданными свойствами.

В связи с созданием гербицидов нового поколения с уникальными свойствами (безопасность для человека и животных, высокая эффективность и недолговечность существования в природе) появилась необходимость конструирования растений, устойчивых к этим гербицидам. Разгадка биохимических и генетических основ устойчивости растений к гербицидам и владение технологией рекомбинантных ДНК и генноинженерными методами позволяют создавать устойчивые к гербицидам растения.

Благодаря внедрению в геномы культурных сортов генов устойчивости, растения, не теряя своих качеств, приобретают несвойственные для них признаки, что делает их еще более ценными, так как за счет устойчивости сельскохозяйственных растений к неселективным гербицидам значительно облегчается обработка посевов, снижаются 7 затраты труда с одновременным сохранением генетического потенциала урожайности.

Цель и задачи исследования. Целью работы установление системных признаков, обеспечивающих получение трансгенных растений сахарной свеклы, устойчивых к гербицидам широкого спектра действия - глифосату и фосфинотрицину. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Выявить условия, стимулирующие прямую регенерацию растений сахарной свеклы.

2. Разработать эффективный метод генетической трансформации сахарной свеклы с использованием Agrobacterium tumefaciens.

3. Осуществить передачу генов, обеспечивающих устойчивость к глифосату и фосфинотрицину, в растения сахарной свеклы.

4. Провести молекулярно-генетический анализ трансформированных растений.

5. Оценить степень устойчивости трансгенных растений к глифосату и фосфинотрицину в условиях in vitro.

Научная новизна работы. Впервые для сахарной свеклы разработан эффективный метод прямой регенерации растений из фрагментов черешков при уровне побегообразования в среднем 2,6 побега на эксплант. Получены новые данные по эмбриоидогенезу in vitro, свидетельствующие о том, что морфогенетический потенциал сахарной свеклы видоспецифичен и заложен как в половых, так и в соматических клетках.

Разработана эффективная система генетической трансформации сахарной свеклы с использованием в качестве вектора Ti-плазмиды Agrobacterium tumefaciens.

Впервые получены трансгенные растения сахарной свеклы с генами мутантным агоА и bar, обусловливающими устойчивость к гер8 бицидам широкого спектра действия глифосату и фосфинотрицину соответственно. Данные трансгенные растения проанализированы in vitro. Показано, что они в разной степени обладают устойчивостью к глифосату и фосфинотрицину. Впервые продемонстрирована возможность использования коммерческого гербицида Basta ( Hoechst, Германия ) в качестве селективного агента при скрининге трансформантов, несущих bar ген.

Практическая значимость работы. Полученные трансгенные растения сахарной свеклы являются ценным исходным материалом для селекционной работы. Создание сортов и гибридов, устойчивых к гербицидам широкого спектра действия, позволит снизить до минимума использование экологически опасных селективных гербицидов, значительно сократить расходы на контроль за сорняками и повысить продуктивность сахарной свеклы.

Разработанные системы регенерации и генетической трансформации могут быть использованы для получения трансгенных растений сахарной свеклы, несущих гены, отвечающие за хозяйственно-ценные признаки.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы докладывались и обсуждались на I Всесоюзном симпозиуме "Новые направления биотехнологии растений", г. Пущино, 1991; на Международной школе "Gene transfer and regulation of their expression in eukaryots", г. Киев, 1993; на Международном симпозиуме "Биотехнология и генетическая инженерия растений", г. Киев, 1994; на Международной научно-практической конференции "Повышение эффективности агропромышленного производства в условиях современных форм хозяйствования", г. Воронеж, 1995; на 3 Всероссийском симпозиуме "Новые направления биотехнологии растений", г. Пущино, 1995; на Всероссийской научно-практической конференции "Пути повышения эффективности свеклосахарного произ9 водства России в условиях рыночной экономики", Рамонь, 1996; на Международной научной конференции " Актуальные проблемы в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии", г. Москва, 1996; на VII международной конференции «Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда», г. Москва, 1997; на 2 Съезде Русского ботанического общества, г. Санкт-Петербург, 1998; а также на научных семинарах отдела биотехнологии ВНИИ сахарной свеклы и сахара и лаборатории генетической трансформации Института физиологии растений и генетики АН Украины.

Работа выполнялась в отделе биотехнологии Всероссийского научно-исследовательского института сахарной свеклы и сахара и отделе генетической трансформации Института физиологии растений и генетики АН Украины в 1991-1995 годах.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Регенерация побегов обусловлена влиянием генотипа, происхождением экспланта, составом питательной среды и влиянием условий культивирования.

2. Трансформация сахарной свеклы с использованием в качестве вектора Ti-плазмиды Agrobacterium tumefaciens, включающая: кокуль-тивирование изолированных частей растения с агробактерией, индукцию регенерации и отбор трансформированных регенерантов на селективных средах.

3. Оценка трансгенной природы трансформированных растений с использованием молекулярно-генетического анализа и гербицидов.

10

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Богомолова, Наталья Михайловна

ВЫВОДЫ

1. Предложен эффективный метод прямой регенерации растений сахарной свеклы из фрагментов черешков. Уровень побегообразования составил в среднем 2,6 побега на эксплант при частоте 28,8%-90%.

2. Воспроизведение эмбриональных структур при культивировании in vitro черешков листьев свеклы свидетельствует о некотором сходстве этапов развития формирующихся эмбриоидов и зиготических зародышей. Морфогенетический потенциал сахарной свеклы заложен как в половых, так и в соматических клетках, и реализация их тотипотентности видоспе-цифична.

3. Разработана эффективная система генетической трансформации сахарной свеклы с использованием в качестве вектора Ti-плазмиды Agrobacterium tumefaciens. Предложенная система включает в себя: ко-культивирование черешков с агробактерией, индукцию регенерации из трансформированных клеток и отбор трансформированных регенерантов на селективных средах.

4. Проведена генетическая трансформация 9 сортов, гибридов и линий сахарной свеклы. Впервые получены трансгенные растения сахарной свеклы с интегрированным мутантным агоА геном, обусловливающим устойчивость к гербициду глифосату. Путем передачи bar гена, обусловливающего устойчивость к гербициду фосфинотрицину, впервые получены трансгенные растения, содержащие этот ген.

5. Трансгенная природа полученных растений подтверждена методами ДОТ-гибридизации и Саузерн-блоттинга. При гибридизации с мутантным агоА геном 3 растения (сорт Межотненская 104) дали положительный авторадиографический ответ. 5 растений линии KJI-1, 2 растения линии 91042 и 2 растения гибрида «Юбилейный» дали положительный авторадиографический ответ при гибридизации с геном bar.

82

6. С помощью морфологического и цитологического анализа показана полная идентичность трансгенных растений исходным формам. Трансгенные растения по морфологическим признакам не отличались от контрольных регенерантов и сохраняли исходный диплоидный набор хромосом.

7. Изучена степень устойчивости трансгенных растений к гербицидам глифосату и фосфинотрицину in vitro. Показано, что трансгенные микроклоны выдерживали концентрации гербицидов в питательной среде, в 2-5 раз превышающие дозы, летальные для контрольных растений.

83

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

1. Рекомендовать метод генетической трансформации, основанный на использовании векторной системы, содержащей Ti-плазмиду Agrobacterium tumefaciens, для получения трансгенных растений сахарной свеклы, несущих гены, контролирующие устойчивость к гербицидам широкого спектра действия.

2. Широко использовать созданные трансгенные растения, обладающие признаками устойчивости к глифосату и фосфинотрицину, в селекционных схемах при создании сортов и гибридов сахарной свеклы.

84

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Все попытки улучшения культурного растения методами генетической инженерии зависят от возможности трансформировать и регенерировать данную культуру (Пирузян, 1990). Необходимо отметить, что сахарная свекла является видом, который заслужил репутацию "непокорного" в манипуляциях in vitro (D'Halluin, 1992), что является серьезным ограничением для создания рутинной процедуры генетической модификации этой культуры. Проведенные нами исследования позволили разработать методику генетической трансформации сахарной свеклы, основанную на прямой регенерации растений из тканей, трансформированных с помощью Agrobacterium tumefaciens. Была разработана эффективная система прямой регенерации растений из фрагментов черешков. Уровень побегообразования у ряда генотипов превышал таковой у зарубежных исследователей. На следующем этапе были определены оптимальные параметры кокультивирования растительных тканей с A. tumeaciens и отбора первичных трансформантов на селективных средах.

Разработанный нами эффективный метод генетической трансформации позволил получить трансгенные растения сахарной свеклы с интегрированными генами мутантным агоА и bar, обеспечивающими устойчивость к гербицидам широкого спектра действия глифосату и фос-финотрицину соответственно.

На последнем этапе работы была изучена степень устойчивости полученных трансгенных растений к вышеназванным гербицидам in vitro. В результате было показано, что экспрессия переданных в растения генов обеспечивает 2-5-кратное превышение уровня устойчивости к глифосату и фосфинотрицину по сравнению с ^трансформированными растениями.

81

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Богомолова, Наталья Михайловна, Рамонь

1. Бормотов В.Е., Свирщевская A.M. Получение регенерантов сахарной свеклы в культуре in vitro // Докл. АН БССР. 1989. - Т. 33, N 10. - с. 926-927.

2. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. -М.: 1964.

3. Бутенко Р.Г. Рост и дифференциация в культуре клеток и тканей. В кн.: Рост растений и природные регуляторы. - М.: Наука, 1977. -с. 6-21.

4. Дарлингтон С.Д., Ла Кур Л.Ф. Хромосомы. Методы работы. -М.: Атомиздат, 1980. 216 с.

5. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. М.: Колос, 1979.416 с.

6. Заяц А.И. Конструирование клонотеки Streptomyces hygroscopicus с целью клонирования генов устойчивости к гербициду биалафосу // Конф. молодых ученых "Актуальные проблемы физиологии растений и генетики": Тез. докл. Киев, 1992. - с. 88.

7. Заяц А.И., Стехин И.Н., Путилина Н.В., Левенко Б.А. Создание экспрессирующихся конструккций с геном bar для трансформации растений // Биополимеры и клетка. 1994. - 10, N 3-4. - с. 87-90.

8. Знаменская В.В., Жужжалова Т.П. Микроклональное размножение сахарной свеклы в культуре // Информ. листок №316-90. Воронежский межотраслевой территор. центр НТИ и пропаганды, 1990. - с. 4.

9. Королева Н.С., Урмеева Ф.М., Алиев К.А. Получение трансгенных растений хлопчатника, устойчиых к действию гербицида глифосата // 2 Всес. план.-отчет, конф. "Ген. и клеточ. инж.": Тез. докл. М., 1992. -с. 181-182.

10. Кучук Н.В., Симоненко Ю.В., Рачек Л.И., Глеба Ю.Ю. Получение трансгенных фосфинотрицинустойчивых растений у коммерче85ских линий гороха // 2 Рос. симп. "Нов. методы биотехнол. раст.": Тез.докл. Пущино, 1993. - с. 30-265.

11. Левенко Б.А., Марьюшкин В.Ф., Стехин И.Н., Мельник А.И., Заяц А.И. Получение растений сои, устойчивых к гербициду глифосату// IBcec. симп. "Нов. методы биотехнол. раст.": Тез.докл. Пущино, 1991. -с. 25,131.

12. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984. - 480 с.

13. Определение числа хромосом и описание их морфологии в меристеме и пыльцевых зернах культурных растений: Методические указания ВИР. Л., 1986. - 62 с.

14. Падегимас Л.С., Шульга О.А., Скрябин К.Г. Исследование трансгенных растений, экспрессирующих ген PAT из S.hygroscopicus // 2 Рос. симп. "Нов. методы биотехнол. раст.":Тез. докл. Пущино, 1993. -с. 38, 275.

15. Пастернак Е.Ю., Левенко Б.А., Стехин И.Н., Мельник А.И., Заяц А.И. Введение гена устойчивости к глифосату в пшеницу // I Всес. симп. "Нов. методы биотехнол. раст.": Тез. докл. Пущино, 1991. - с. 3435, 139.

16. Пирузян Э.С. Проблемы экспрессии чужеродных генов в растениях // Итоги науки и техники (ВИНИТИ), сер. Биотехнология. М., 1990.-23.-с. 1-76.

17. Пирузян Э.С. Получение трансгенных растений, устойчивых к действию гербицидов // 1 Всес. план.-отчет. конф. "Ген. и клеточ. инж.": Тез. докл. М., 1991. - с. 216-217.

18. Свирщевская A.M. Морфология, цитология и фертильность ре-генерантов сахарной свеклы // Съезд Белорус, о-ва генетиков и селекционеров: Тез. докл. Горки, 1992. - с. 67.86

19. Юркова Г.Н., Рымарь С.Е., Галецкая Г .Р., Чугункова Т.В. Трансформация сахарной свеклы Agrobacterium tumefaciens // I Всес. симп. "Нов. методы биотехнол. раст.", Пущино, 20-22 нояб., 1991.: Тез. докл. Пущино, 1991. - с.47-48, 130-131.

20. Akama P., Puchta Н., Hohn В. Efficient Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana using the bar gene as a selectable marker//Plant Cell Rep. 1995. - 14,N7. -P. 450-454.

21. Amrhein N., Deus В., Gehrke P., Steinrucken H.C. The site of inhibition of the shikimate pathway by glyphosate // Plant Physiol. 1980. - 66. -P. 830-834.

22. Amrhein N., Johanning D., Schab J., Schulz A. Biochemical basis for glyphosate tolerance in a bacterium and a plant tissue culture // FEBS Lett. 1983. - 157. - P. 191-196.

23. Anzai H., Yoneyama K., Yamaguchi I. Transgenic tobacco resistant to a bacterial disease by the detoxification of a pathogenic toxin // Mol. Gen. Genet. 1989. - 219. - P. 492-494.

24. Ashton F.M., Crafts A.S. Mode of Action of Herbicides. New York: Wiley, 1981. - 525 p.

25. Atanassov A. Sugar beet ( Beta vulgaris L. ) // In: Biotechnology in Agriculture and Forestry. Berlin, 1986. - P. 462-470.

26. Barry G.F., Rogers S.G., Fraley R.T., Brand L. Identification of a cloned cytokinin biosynthetic gene // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. -81. - P. 4776-4780.

27. Bayer E., Gugel K.H., Haegele K., Hagenmaier H., Jessipow S. et al. Stoffwechselprodukte von Microorganismen 98. Mitteylung: Phosphi87nothricin und Phosphinothiicyl-Alanyl-Alanin 11 Helv. Chim. Acta. 1972. -55. - P. 224-239.

28. Beijersbergen A., Smith S.J., Hooykaas P.J.J. Localization and topology of VirB proteins of Agrobacterium tumefaciens // Plasmid. 1994. -32. - P. 212-218.

29. Bevan M. Binary Agrobacterium vectors for plant transformation // Nucleic Acid Res. 1984. - 12, N22. - P. 8711-8721.

30. Bevan M.W., Flavell R.B., Chilton M.D. A chimaeric antibiotic resistance gene as a selectable marker for plant cell transformation // Nature. -1983. 304. - P. 184-187.

31. Beyer E.M., Duffy M.J., Hay J.V., Schlueter D.D. Sulfonylureas // In: Herbicides: Chemistry, Degradation and Mode of Action. New York, 1988. -3. - P. 117-189.

32. Bowyer J.R.,Camilleri P., Vermaas W.F.J. Photosystem II and its interaction with herbicides // In: Herbicides Topics in Photosynthesis. -Amsterdam, 1991. 10. - P. 27-86.

33. Buchmann J., Marner F.J., Schroder G., Waffenschmidt S., Schroder J. Tumor genes in plants: T-DNA encoded cytokinin biosynthesis // EMBO J. 1985. - 4, N 5. - P. 853-859.

34. Cao J., Duan X., McElroy D., Wu R. Regeneration of herbicide resistant transgenic rice plants following microprogectile-mediated transformation of suspension culture cells // Plant Cell Repts. 1992. - 11, N 11. - P. 586-591.

35. Catlin D.W. The effect of antibiotics on the inhibition of callus induction and plant regeneration from cotyledons of sugarbeet ( Beta vulgaris L.) // Plant Cell Rep. 1990. - 9, N 5. - P. 285-288.

36. Chalupa V. Temperature // In: Cell and Tissue Culture in Forestry. -Dordrecht, 1988. 1. - P. 142-151.88

37. Chi G.-L., Barfield D.G., Sim G.-E., Pua E.-C. Effect of AgN03 and aminoethoxyvinylglycine on in vitro shoot and root organogenesis from seedling explants of recalcitrant Brassica genotypes // Plant Cell Rep.- 1990. -9, N4. P. 195-198.

38. Chibbar R.N., Shyluk J., Georges F., Constabel F. Role of proline in somatic embryogenesis in cultured carrot cells // Plant Physiol. 1987. - 83, N 4, Suppl. - P. 76.

39. Chilton M.D., Drummond M.H., Merlo D.J., Sciaky D., Montoya A.L. et al. Stable incorporation of plasmid DNA into higher plant cells: the molecular basis of crown gall tumorigenesis // Cell. 1977. - 11, N 1. - P. 263-271.

40. Coleman M., Jackson M., Juned S., Ford-Lloyd В., Vessey J., Powell W. Interclonal genetic variability for in vitro response in Solanum tuberosum cv. Record // Proc. 11th Triennial Conf. EARP. Edinburgh. - 1990.

41. Comai L., Facciotti D., Hiatt N.R., Thompson G., RoseR.E., Stalker D.M. Expression in plants of a mutant aroA gene from Salmonella ty-phimurium confers tolerance to glyphosate // Nature. 1985. - 317, N 3. - P. 741-743.

42. Comai L., Sen L.C., Stalker D.M. An altered aroA gene product confers resistance to the herbicide glyphosate // Science. 1983. - 221. - P. 370-371.

43. Coumons-Gilles M.F., Kevers C., Coumans M., Ceulemans E., Gaspar T. Vegetative multiplication of sugar beet through in vitro culture of inflorescence pieces // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1981. - 1. - P. 93-101.

44. Cullimore J.V., Gebhardt C., Saarelainen R., Miflin B.J., Idler K.B., Barker R.F. Glutamine synthetase of Phaseolus vulgaris L. Organ-specific expression of a multigene family If J. Mol. Appl. Genet. 1984. - 2. -P. 589-599.89

45. Das Sarma S., Tischer E., Goodman H.M. Plant glutamine synthetase complements a glnA mutation in Escherichia coli // Science. 1986. -232. - P. 1242-1244.

46. De Block M. Genotype-independent leaf-disc transformation of potato (Solanum tuberosum) using Agrobacterium tumefaciens // Theor. and Appl. Genet. 1988. - 76, N 5. - P. 767-774.

47. De Block M., Botterman J., Vandewiele M., Dockx J., Thoen C. et al. Engineering herbicide resistance in plants by expression of a detoxifying enzyme//EMBO J. 1987. - 6, N11. - P. 2513-2518.

48. De Greef W., Delon R., De Block M., Leemans J., Botterman J. Evaluation of herbicide resistance in transgenic crops under field conditions // Bio/Technology. 1989. - 7. -P.61-64.

49. De Greef W., Jacobs M. In vitro culture of the sugar beet: description of a cell line with high regeneration capacity // Plant Sci. Lett. 1979. -17. - P. 55-61.

50. Della-Cioppa G., Bauer S.C., Taylor M.L., Rochester D.E., Klein B.K. et al. Targeting a herbicide-resistance enzyme from Escherichia coli to chloroplasts of higher plants//Bio/Technology. 1987. - 5. - P. 579-584.

51. Dellaporta S.L., Wool J., Hicks J.B. A plant DNA minipreparation: Version II // Plant Mol. Biol. Rep. 1983. - 1, N 4. - P. 19-21.

52. Detrez C., Sangwan R.S., Sangwan-Norreel B.S. Phenotype and karyotypic status of Beta vulgaris plants regenerated from direct organogenesis in petiole culture // Theor. Appl. Genet. 1989. - 77. - P. 462-468.90

53. Detrez С., Tetu Т., Sangwan R.S., Sangwan-Norreel B.S. Direct organogenesis from petiole and thin cell layer explants in sugar beet cultured in vitro // J. Exp. Bot. 1988. - 39. P. 917-926.

54. D'Halluih K., Bossut M., Bonne E., Mazur В., LeemansJ., Botter-man J. Transformation of sugarbeet ( Beta vulgaris L.) and evaluation of herbicide resistance in transgenic plants // Bio/ Technology. 1992. - 10, N 3. -P. 309-314.

55. D'Halluin K., Botterman J., De Greef W. Engineering of herbicide-resistant alfalfa and evaluation under field conditions // Crop Sci. 1990. - 30. -P. 866-871.

56. Dodge A.D. Herbicides interacting with photosystem I // In: Herbicides and Plant Metabolism. Cambridge, 1989. - P. 91103.

57. Donn G., Tischer E., Smith J.A., Goodman H.M. Herbicide-resistant alfalfa cells: an example of gene amplification in plants // J. Mol. Appl. Genet. 1984. - 2. - P. 589-599.

58. Duke S.O. Glyphosate // In: Herbicides: Chemistry, Degradation and Mode of Action. 1988. - 3. - P. 1-70.

59. Eckes P., Wengenmayer F. Overproduction of glutamine synthetase in transgenic plants // In: Regulation of Plant Gene Expression. 29th Harden Conf. Prog. Abstr. - Ashford. - 1987.

60. Escandon A.S., Hahne G. Genotype and composition of culture medium are factors important in the selection for transformed sunflower (Helian-thus annmis) callus //Physiol. Plant. 1991. - 81, N 3. - P. 4-5.

61. Figueira F.E.S., Figueiredo L.F.A., Monte-Neshich D.C. Transformation of potato ( Solanum tuberosum ) cv. Manticqueira using Agrobacterium tumefaciens and evaluation of herbicide resistance // Plant Cell Rep. -1994. 13. - P. 666-670.91

62. Filatti J.J., Kiser J., Rose R., Comai L. Efficient transfer of a glyphosate tolerance gene into tomato using a binary Agrobacterium tumefaciens vector//Bio/Technology. 1987. - 5. - P. 726-730.

63. Fischhoff D.A., Bowdish K.S., Perlak F.J., MarroneP.G., McCor-mick S.M. et al. Insect tolerant transgenic tomato plants// Bio/Technology. -1987. 5, N 3. - P. 807-814.

64. Ford-Lloyd B.V., Bhat S. Problems and prospects for the use of protoplasts in beet breeding // Gen. Manipulat. Plant Breed. Proc. Int. Symp. -Berlin, 1986. P. 437-440.

65. Fuchs L., Rogers S.G. Crops carrying new herbicide and insect resistance trait // Abstr. Keystone Symp. "Mol. Events Microb. Pathogenes." -Santa Fe, N.M. 1994.

66. Gamborg A.L., Miller R.A., Ojima K. Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells // Exp. Cell Res. 1968. - 50. - P. 151158.

67. Garfinkel D.J., Simpson R.B., Ream L.W., White F.F., Gordon M.P., Nester E.W. Genetic analysis of crown gall: fine structure map of the T-DNAby site-directed mutagenesis// Cell. 1981. - 27, N 1. - P. 143-153.

68. Gasser C.S., Winter J.A., Hironaka C.M., Shah D.M. Structure, expression and evaluation of the genes encoding 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase of petunia and tomato // J. Biol. Chem. 1988. - 263. - P. 4280-4289.

69. Gerlack W., Llewellyn D., Haseloff J. Construction of a plant disease resistance gene from the satellite RNA of tobacco ringspot virus // Nature. 1987. - 328, N 4. - P. 802-805.

70. Ghai J., Das A. The virD operon of agrobacterium tumefaciens Ti plasmid encodes a DNA-relaxing enzyme // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1989. 86,N16. -P. 3109-3113.92

71. Gietl С., Koukolikova-Nicola Z., Hohn B. Mobilization of T-DNA from Agrobacterium to plant cells involves a protein that binds single-stranded DNAII Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - 84, N 32. - P. 9006-9010.

72. Grossbard E., Atkinson D. The Herbicide Glyphosate. London: Butterworth and Co., 1985. - 490p.

73. Guyon P., Chilton M.D., Petit A., Tempe J. Agropine in "null-type" crown gall tumors: evidence for generality of the opine concept // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980,- 65, N 13. - P. 2693-2697.

74. Hamill J.D., Prescott A., Martin C. Assessment of the efficiency of cotransformation of the T-DNA of disarmed binary vectors derived from Agrobacterium tumefaciens and the T-DNA of A. rhizogenes // Plant Mol. Biol.- 1987.- 9.-P. 573-584.

75. Harrison В., Маус M., Baulcombe D. Virus resistance in transgenic plants that express cucumber mosaic virus satellite RNA // Nature. 1987. -328, N5. - P. 799-802.

76. Hepburn A., White J. The effect of right terminal repeat deletion on the oncogenicity of the T-region of pTi T37 // Plant Mol. Biol. 1985. - 5, N 1. -P. 3-11.

77. Hille J., Wullens G., Schilperoort R.A. Non-oncogenic T-region mutants of Agrobacterium tumefaciens do transfer T-DNA into plant cells // Plant Mol. Biol. 1983. - 2. - P. 155-163.

78. Hirayama Т., Muranaca Т., Onkava H., Oka A. Organization and characterization of the virCD genes from Agrobacterium rhizogenes // Mol. Gen. Genet. 1988. - 213, N 1. - P. 229-237.93

79. Hoekema A., Hirsch P.R., Hooykaas P.J .J., Schilperoort R.A. A binary plant vector strategy based on separation of vir and T-region of the Agro-bacterium tumefaciens Ti-plasmid // Nature. 1983. - 303. - P. 179-180.

80. Hollander H., Amrhein N. The site of the inhibition of the shikimate pathway by glyphosate // Plant Phisiol. 1980. - 66. - P. 823-829.

81. Hooker M.P., Nabors M.W. Callus initiation, growth and organogenesis in sugarbeet ( Beta vulgaris L. ) // Z. Pflanzenphysiol. 1977. - 84. -P. 237-246.

82. Hooykaas P.J.J., Schilperoort R.A. Agrobacterium and plant genetic engineering // Plant Mol. Biol. 1992. - 19. - P. 15-38.

83. Hussey G., Hepher A. Clonal propagation of sugar beet plants and the formation of polyploids by tissue culture // Ann. Bot. 1978. - 42, N 178. - p. 477-479.

84. Jaworski E.G. Mode of action of N-phosphono-methylglycine: inhibition of aromatic amino acid biosynthesis // J. Agric. Food. Chem. 1972. -20. - P. 1195-1198.

85. John M.C., Amasino R.M. Expression of the Agrobacterium Ti plasmid gene involved in cytokinin biosynthesis is regulated by virulence loci and induced by plant phenolic compounds // J. Bacteriol. 1988. - 170, N 3. -P. 790-795.

86. Joos H., Inze D., Caplan A., Sormann M., VanMontagu M., Schell J. Genie analysis of T-DNA transcripts in nopaline crown galls // Cell. 1983. -32, N5. - P. 1057-1067.94

87. Karp A., Bright S.W.J. On the causes and origins of somaclonal variation // Oxford surveys of plant molecular and cell biology. 1985. - 2. -P. 199-234.

88. Khan M.R.I., Tabe L.M., Heath L.C., Spencer D., Higgins T.J.V. Agrobacterium-mediated transformation of subterranean clover ( Trifolium subterraneum L.) // Plant Physiol. 1994. - 105, N 1. - P. 81-88.

89. Kim J., La Motte C.E., Hack E. Plant regeneration in vitro from primary leaf nodes of soybean (Glycine max) seedlings // J. Plant Physiol. -1990.- 136, N6.-P. 664-669.

90. Kishore G.M., Shah D. Amino acid biosynthesis inhibitors as herbicides // Annu. Rev. Biochem. 1988. - 57. - P.627663.

91. Klee H.J., Muscopf Y.M., Gasser C.S. Cloning of a Arabidopsis thaliana gene encoding 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase: sequence analysis and manipulation to obtain glyphosate-tolerant plants // Mol. Gen. Genet. 1988. - 5. - P. 47-53.

92. Krens F.A., Jamar D. The role of explant source and culture conditions on callus induction and shoot regeneration in sugarbeet ( Beta vulgaris L. ) // J. Plant Physiol. 1989. - 134, N 6. - P. 651-655.

93. Rrens F.A., Molendijk L., Wullems G.J., Schilperoort S.A. The role of bacterial attachment in the transformation of cell-wall regenerating tobacco protoplasts by Agrobacterium tumefaciens // Planta. 1985. - 166. - P. 300308.

94. Krens F.A., Zijlstra C., Molen W.v.L., Jamar D., Huizing H.J. Transformation and regeneration in sugar beet ( Beta vulgaris L. ) induced by "shooter" mutants of Agrobacterium tumefaciens // Euphytica. 1988. - 39, N 2. - P. 185-194.

95. Kumar P.A., Bisaria S., Sharma R.P. Comparative shoot regeneration in different genotypes of chickpea, Cicer arietinum L. // Indian J. Exp. Biol. 1995. - 33, N1.- P. 77-78.95

96. La Rossa R.A., Schloss J.V. The sulfonylurea herbicide sulfometu-ronmethyl is an extremely potent inhibitor of acetolactate synthase in Salmonella typhimurium // J. Biol. Chem. 1984. - 259. - P. 8753-8756.

97. Lea P.J., Joy K.W., Ramos J.L., Guerrero M.G. The action of the 2-amino-4-(methylphosphinyl)-butanoic acid ( phosphinothricin ) and its 2-oxo-derivative on the metabolism of cyanobacteria and higher plants // Phyto-chemistry. 1984. - 23. - P. 1-6.

98. Leason M., Dunliffe D., Parkin D., Lea P.J., Miflin B.J. Inhibition of pea leaf glutamine synthetase by methionine sulfoximine, phosphinothricin and other glutamate analogues // Phytochemistry. 1982. - 21. - P. 855-857.

99. Leemans J., Deblaere R., Willmitzer L., DeGreve H., Hernalsteens J.P. et al. Genetic identification of functions of TL-DNA transcripts in oc-topine crown galls // EMBO J. 1982. - 1. - P. 147-152.

100. Leemans J., De Block M., D'Halluin K., Botterman J., De Greef W. The use of glufosinate as a selective herbicide of genetically engineered resistant tobacco plants // In: Proc. Brit. Crop Protection Conf. Weeds. -Surrey, 1987. - P. 867-870.

101. Lindsey K., Gallois P. Transformation of sugarbeet ( Beta vulgaris ) by Agrobacterium tumefaciens // J. Exp. Bot. 1990. - 41, N 226. - P. 529536.

102. Lindsey K., Jones M.G.K. Stable transformation of sugarbeet protoplasts by electroporation // Plant Cell Rep. 1989. - 8. - P. 71-74.

103. Lindsey K., Jones M.G.K. Transient gene expression in electropo-rated protoplasts and intact cells of sugarbeet// Plant Mol. Biol. 1987. - 10. -P. 43-52.

104. Linsmaier E., Skoog F. Organic growth factor requirements of tobacco tissue culture // Physiol. Plantarum. 1965. - 18, - P. 100-127.96

105. Lippincott B.B., Lippincott J.A. Bacterial attachment to a specific wound site as an essential stage in tumor initiation by Agrobacterium tumefaciens // J. Bact. 1969. - 97. - P. 620-628.

106. Los M. Synthesis and biology of the imidazolinone herbicide // In: Pesticide Science and Biotechnology. Boston, 1986. - P. 35-42.

107. Matthysse A.G. Characterization of nonattaching mutants of agrobacterium tumefaciens // J. Bacteriol. 1987. - 169, N 1. - P. 313-323.

108. Matthysse A.G. Role of bacterial cellulose fibrils in Agrobacterium tumefaciens infection // J. Bacteriol. 1983. - 154, N 3. - P. 906-915.

109. Mazur B.J., Falco S.C. The development of herbicide resistant crops // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1989. - 40. - P. 441-470.

110. McBride K.E., Kenny J.W., Stalker D.M. Metabolism of the herbicide bromoxynil by Klebsiella pneumoniae subsp. ozaenae // Appl. Environ. Microbiol. 1986. - 52. - P. 325-330.

111. McBride K.E., Knanf V.C. Genetic analysis of the virE operon of the Agrobacterium Ti plasmid pTi A6 // J. Bacteriol. 1988. - 170, N 4. - P. 1430-1437.

112. Melchers L.S., Thompson D.V., Idler K.B., Neuteboom R., de Maagd R. A. et al. Molecular characterization of the virulence gene virA of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid // Plant Mol. Biol. 1987. - 9, N 3. -P. 635-645.

113. Mets L., Thiel A. Biochemistry and genetic control of the photo-system II herbicide target site // See Ref. 1989. - 16. - P. 1-24.

114. Miedema P. A tissue culture technique for vegetative propagation and low temperature preservation of Beta vulgaris // Euphytica. 1982.-31.-P. 635-643.

115. Mikami Т., Sudoh R., Nagao E., Kinoshita T. Genotypic variation in the in vitro morphogenesis from leaf explants of Beta vulgaris L. and B. maritima L. // Euphytica. 1989. - 40, N 3. - P. 271-273.97

116. Mikami Т., Yanai I., Kinoshita Т. Высокая частота органогенеза в культуре листьев сахарной свеклы // Тэнсай коэнкю кайко = Proc. Sugar Beet Res. Assoc. 1990. -N31. - с. 145150.

117. Mollenhauer С., Smart С., Amrhein N. Glyphosate toxicity in the shoot apical region of the tomato plants // Pest. Biochem. Physiol. 1987. -29.-P. 203-211.

118. Moreland D.E. Mechanisms of action of herbicides // Annu. Rev. Plant Physiol. 1980. - 31. - P. 597-638.

119. Morikawa H., Nishihara M., Seki M., Irifune K. Bombardment-mediated transformation of plant cells // J. Plant Res. 1994. - 107, N 1086. -P. 117-123.

120. Mousdale D.M., Coggins J.R. Subcellular localization of the common shikimate pathway enzymes in Pisum sativum L. // Planta. 1985. -163. - P. 241-249.

121. Murakami Т., Anzai H., Imai S., Satoh A.,Nagaoka K., Thompson C.J. The bialaphos biosynthetic genes of Streptomyces hygroscopicus: molecular cloning and characterization of the gene cluster // Mol. Gen. Genet. -1986. 205. - P. 42-50.

122. Murashige Т., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures // Physiol, plant. 1962. - 15, N 13. -P. 473-497.

123. Nafziger E.D., Widholm J.M.,Steinrucken H.C., KillmerJ.A. Selection and characterization of a carrot cell-line tolerant to glyphosate // Plant Physiol. 1984. - 76. - P. 571-574.

124. Padgette S.R., Della-Cioppa G„ Shah D.M., Fraley R.T., Kishore G.M. Selective herbicide resistance through protein engineering // In: Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants. New York, 1989. - 6. - P. 441476.98

125. Paul H., Zijlstra С., Leeuwangh J.E., Krens F.A., Huizing H.J. Reproduction of the beet cyst nematode Heterodera schachtii Schm. on transformed root cultures of Beta vulgarisL.// Plant cell Rep. 1987. - 6. - P. 379381.

126. Peralta E.G., Helmiss R., Rean W. Overdrive, a T-DNA transmission enhancer on the A. tumefaciens tumour-inducing plasmid // EMBO J. -1986.- 5, N5.-P. 1137-1142.

127. Pfister K., Steinback K.E., Gardner G., Arntzen C.J. Photoaffmity labeling of a herbicide receptor protein in chloroplast membranes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. - 78. - P. 981-985.

128. Piruzian E., Mett V., Kobets N., Urmeeva F. The use of bacterial genes encoding herbicide tolerance in constructing transgenic plants // Microbiol. Sci. 1988. - 5, N 8. - P. 242-248.

129. Powell-Abel P., Nelson R., De В., Hoffmann N., RogersS. et al. Delay of disease development in transgenic plants that express the tobacco mosaic virus coat protein // Science. 1986. - 232, N 2. - P. 738-743.

130. Ray T.B. Site of action of chlorsulfuron. Inhibition of valine and isoleucine biosynthesis in plants // Plant Physiol. 1984. - 75. - P. 827-831.

131. Rigby P.W., Dieckmann M., Rhodes C. et al. Labelling deoxyribonucleic acid to high specific activity in vitro by nick transformation with DNA polymerase I // J. Mol. Biol. 1977. - 113. - P. 237-251.

132. Ritchie G.A., Short K.C., Davey M.R. In vitro shoot regeneration from callus, leaf axils and petioles of sugar beet (Beta vulgaris L.) // J. Exp. Bot. 1990. -40, N211. - P. 277-283.

133. Rogers S.G., Brand L.A., Holder S.B., Sharps E.S., Brackin M.J. Amplification of the aroA gene from E. coli results in tolerance to the herbicide glyphosate // Appl. Environ. Microbiol. 1983. - 46. - P. 37-43.99

134. Rogozinska J., Goska M. Induction of differentiation and plant formation in isolated sugar beet leaves // Bull. Acad. Pol. Sci. Ser. Sci. Biol. -1978. 26, N 5. - P. 343-345.

135. Ronchi V.N., Caligo M.A., Nozzolini M., Luccarini G. Stimulation of carrot somatic embryogenesis by proline and serine // Plant Cell Rep. -1984. -3,N5. P. 210-214.

136. Sabir A.A., Ford-Lloyd B.V. Processing crop plant germplasm in vitro for mass production of regenerants: a case study with beet // J. Biotech-nol. 1991. - 17, N 3. - P. 257-268.

137. Sauer H., Wild A., Ruhle W. The effect of phosphinothricin (glu-fosinate ) on photosynthesis. II. The causes of inhibition of photosynthesis // Z. Naturforsch. 1987. - 42c. - P. 270-287.

138. Saunders J.W., Daub M.E. Shoot regeneration from hormone-autonomous callus from shoot cultures of several sugar beet (Beta vulgaris L. ) genotypes // Plant Sci. Lett. 1984. - 34, N 1. - P. 219-223.

139. Saunders J.W., Doley W.P. One step shoot regeneration from callus of whole plant leaf explants of sugarbeet lines and a somaclonal variant for in vitro behavior // J. Plant Physiol. 1986. - 124. - P. 473-479.

140. Saunders J.W.,Shin K. Germplasm and physiologic effects on induction of high-frequency hormone autonomous callus and subsequent shoot regeneration in sugarbeet // Crop Sci. 1986. - 26, N 6. - P. 1240-1245.

141. Schenk R.U., Hildebrandt A.C. Medium and techniques for induction and growth of monocotyledonous and dicotyledonous plant cell cultures // Can. J. Bot. 1972. - 50, N 1. - P. 199-204.

142. Schiemann J. Moglichkeiten und Ansatze fur einen Gentransfer bei der Zuckerrube (Beta vulgaris L.) // Kulturpflanze. 1989. - 37. - S. 15-27.

143. Schroder G., Waffenschmidt S., Weiler E.W., Schroder J. The T-region of Ti-plasmids codes for an enzyme synthesizing indole-3-acetic acid // Eur. J. Biochem. 1984. - 138. - P. 387-391.100

144. Schroeder H.E., Schotz A.H., Wardley-Richardson Т., Spencer D., Higgins T.J.V. Transformation and regeneration of two cultivars of pea ( Pisum sativum L.) // Plant Physiol. 1993. - 101, N 3. - P. 751-757.

145. Shah D.M., Hironaka C.M., Wiegand R.C., Harding E.I., Krivi G.G., Tiemeier D.C. Structural analysis of a maize gene coding for glutathione S-transferase involved in herbicide detoxification // Plant Mol. Biol. 1986a. -6.-P. 203-211.

146. Shah D.M., Horsch R.B., Klee H.J., Kishore G.M., Winter J.A., Turner N.E. et al. Engineering herbicide tolerance in transgenic plants // Science. 1986b. -233, N2. - P. 478-481.

147. Shaner D.L., Anderson P.C.,Stidham M.A. Imidazolinones. Potent inhibitors of acetohydroxyacid synthase // Plant Physiol. 1984. - 76. - P. 545-546.

148. Shimada Т., Gurel F., Takumi S. Simple and rapid production of transgenic rice plants by particle bombardment // Bull. Res. Inst. Agr. Resour. 1995. -N 4. - P. 1-8.

149. Stachel S.E., Messens E., Van Montagu M., Zambryski P. Identification of the signal molecules produced by wounded plant cells that activate T-DNA transfer in Agrobacterium tumefaciens// Nature. 1985. - 318,N2. -P. 624-629.

150. Stachel S.E., Nester E.W. The genetic and transcriptional organization of the vir region of the A6 Ti plasmid of Agrobacterium tumefaciens // EMBO J. 1986. - 5, N 7. - P. 1445-1454.

151. Stachel S.E., Timmerman В., Zambryski P. Generation of single-stranded DNA molecules during the initial stages of T-DNA transfer from Agrobacterium tumefaciens // Nature. 1986. - 322. - P. 706-712.

152. Stachel S.E., Zambryski P. Agrobacterium tumefaciens and the susceptible plant cell. A novel adaptation of extracellular recognition and DNA conjugation // Cell. 1986. - 47, N1. - P. 155-157.

153. Stachel S.E., Zambryski P. VirA and virC control the plant-induced activation of the T-DNA transfer process of A. tumefaciens // Cell. -1986. -46, N 1. P. 325-333.

154. Stalker D.M., Hiatt W.R., Comai L. A single amino acid substitution in the enzyme 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase confers resistance to the herbicide glyphosate // J. Biol. Chem. 1985. - 260. - P. 47244728.

155. Stalker D.M., McBride K.E. Cloning and expression in Escherichia coli of a Klebsiella ozaenae plasmid-borne gene encoding a nitrilase specific for the herbicide bromoxynil // J. Bacteriol. 1987. - 169. - P. 55-60.

156. Steinrucken H.C., Amrhein N. The herbicide glyphosate is a potent inhibitor of 5-enolpyruvyl-shikimic acid-3-phosphate synthase // Bio-chem. Biophys. Res. Commun. 1980. - 94. - P. 1207-1212.

157. Steinrucken H.C., Schulz A., Amrhein N., Porter C.A., Fraley R.T. Overproduction of 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase in a gly-phosate-tolerant Petunia hybrida cell line // Arch. Biochem. Biophys. 1986. -244. - P. 169-178.

158. Subramanian M.Y., Hung H.Y., Dias J., Miner J.H., Butler J.H., et al. Properties of mutant acetolactate synthase resistant to triazolopyrimidine sulfonanilide //Plant Physiol. 1990. - 94. - P. 239-244.

159. Summers L.A. The Bipyridilium Herbicides. London: Academic, 1980.-449 p.102

160. Tachibana К., Watanabe Т., Seikizawa Y., Takematsu T. Inhibition of the glutamine synthetase and quantitative changes of free amino acids in shoots of bialaphos treated Japanese barnyard millet // J. Pestic. Sci. -1986a.-11.-P. 27-31.

161. Tachibana K., Watanabe Т., Seikizawa Y., Takematsu T. Accumulation of ammonia in plants treated with bialaphos // J. Pestic. Sci. 1986b. -11. P. 33-37.

162. Tait R.C., Kado C.I. Regulation of the virC and virD promoters of pTi C58 by the ros chromosomal mutation of Agrobacterium tumefaciens // Mol. Microb. 1988. - 2, N 1. - P. 385-392.

163. Tate M.E. A. tumefaciens pTi A6 and C58 virC and D pro- moter alignment // Nucleic Acids Res. 1987. - 15, N 35. - P. 6789.

164. Tempe J., Goldmann A. Occurence and biosynthesis of opines // In: Molecular Biology of Plant Tumors. New York, 1982. - P. 427-449.

165. Tetu Т., Sangwan R.S., Sangwan-Norreel B.S. Hormonal control of organogenesis and somatic embryogenesis in Beta vulgaris callus // J. Exp. Bot. 1987. - 38. - P. 506-517.

166. Thomashow M.F., Hugly S„ Buchholz W.G., ThomashowL.S. Molecular basis for the auxin-independent phenotype of crown gall tumor tissues // Science. 1986. - 231, N 2. - P. 616-618.

167. Thompson C., Mowa N., Tizard R., Crameri R., DaviesJ. et al. Characterization of the herbicide-resistance gene bar from Streptomyces hy-groscopicus // EMBO J. 1987. - 6, N 9. - P. 2519-2523.

168. Thorstenson J.R., Kuldau G.A., Zambryski P.C. Subcellular localization of seven VirB proteins of Agrobacterium tumefaciens: implication for the formation of a T-DNA transport structure // J. Bacteriol. 1993. - 176. - P. 1711-1717.103

169. Tingey S.V.,Coruzzi G.M. Glutamine synthetase of Nicotiana plumbaginifolia. Cloning and in vivo expression // Plant Physiol. 1987. - 84. -P. 366-373.

170. Tingey S.V., Walker E., Coruzzi G.M. Glutamine synthetase genes of pea encode distinct polypeptides which are differentially expressed in leaves, roots and nodules // EMBO J. 1987. - 6. - P. 1-9.

171. Tischer E., Das Sarma S., Goodman H.M. Nucleotide sequence of an alfalfa glutamine synthetase gene // Mol. Gen. Genet. 1986. - 203. - P. 221-229.

172. Того N., Datta A., Yanofsky M., Nester E. Role of the overdrive sequence in T-DNA border cleavage in Agrobacterium // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. - 85, N 42. - P. 8558-8562.

173. Turner N.E., O'Connell K.M., Nelson R.S., Sanders P.R., Beachy R.N. et al. Expression of alfalfa mosaic virus coat protein gene confers cross-protection in transgenic tobacco and tomato plants // EMBO J. 1987. - 6, N 5. -P. 1181-1188.

174. VainP., Yean H., Flament P. Enhancement of production and regeneration of embryogenic type II callus in Zea mays L. by AgN03 // Plant Cell, Tissue and Organ Cult. 1989. - 18, N 2. - P. 143-151.

175. Van Geyt J.P.C.,Jacobs M. Suspension culture of sugarbeet ( Beta vulgaris L. ). Induction and habituation of dedifferentiated and self-regenerating cell lines // Plant Cell Rep. -1985.-4, N2.-P. 66-69.

176. Van Haaren M.J.J., Sedee N.J.A., Schilperoort R.A., Hooycaas P.J.J. Overdrive is a T-region transfer enhancer which stimulates T-strand production in Agrobacterium tumefaciens // Nucleic Acids Res. 1987. - 15, N48. - P. 8983-8997.

177. Van Larebeke N., Genetello C., Schell J., Schilperoort R.A., Hermans A.K. et al. Acquisition of tumour-inducing ability by non-oncogenic104agrobacteria as a result of plasmid transfer // Nature. 1975. - 255. - P. 742743.

178. Van Onckelen H., Prinsen E., Inze D., Rudelsheim P., Van Lijse-bettens M. et al. Agrobacterium T-DNA gene codes for tryptophan 2-monooxygenase activity in tobacco crown gall cells// FEBS Lett. 1986. -198, N2.-P. 357-360.

179. Vasil I.K. Developing cell and tissue culture systems for the improvement of cereal and grass crops // J. Plant Physiol. 1987. - 128, N 193. -P. 218.

180. Vasil I.K. Molecular improvement of cereals // Plant Mol. Biol. -1994. -25. P. 925-937.

181. Veluthambi K., Krishnan M., Gould J.H., Smith R.H., Gelvin S.B. Opines stimulate the induction of the vir genes of the Agrobacterium tumefaciens Ti plasmid // J. Bacteriol. 1989,- 171, N 1. - P. 3-5.

182. Wan Y., Widholm J.M., Lemaux P.G. Type I callus as a bombardment target for generating fertile transgenic maize (Zea mays L.) // Planta. 1995. - 196, N 1. - P. 7-14.

183. Wang K., Genetello C., Van Montagu M., Zambryski P. Sequence context of the T-DNA border repeat element determines its relative activity during T-DNA transfer to plant cells // Mol. Gen. Genet. 1987. - 210, N 2. -P. 338-346.

184. Wang K., Herrera-Estrella L., Van Montagu M., Zambryski P. Right 25bp terminus sequence of the nopaline T-DNA is essential for and determines direction of DNA transfer from Agrobacterium to the plant genome // Cell. 1984. - 38, N 2. - P. 455-462.

185. Wang Y.Q., Lo C.E., Lian Y.Y., Shao Q.Q., Jiang X.C. et al. Teratome induction and gene transfer in Beta // Acta Agron. Sinica. 1985. -11. - P. 159-162.105

186. Ward E.R., Barnes W.M. VirD2 protein of Agrobacterium tumefa-ciens very tighty linked to the 5' end of T-strand DNA // Science. 1988. -242, N3. - P. 927-930.

187. Weeks J.T., Blechi A.E., Anderson O.D. Optimization of conditions for wheat transformation and approaches for wheat improvement // Induced Mutat. and Mol. Techn. Crop Improv.: Proc. Int. Symp. Vienna, 1995. -P. 592-593.

188. Weising K., Sohell J., Kahl G. Foreign genes in plants: transfer, structure, expression, and application // Annu. Rev. Genet. 1988. - 242, N 3. - P. 927-930.

189. White J., Chang S.-U.P., Bibb M.J., Bibb M.J. A cassette containing the bar gene of Streptomyces hygroscopicus: a selectable marker for plant transformation // Nucl. Acids Res. 1990. - 18, N 4. - P. 1062.

190. Winans S.C. Two-way chemical signaling in Agrobacterium-plant interactions // Microbiol. Rev. 1992. - 56. - P. 12-31.

191. Yadav N.S., Vanderleyden J., Bennett D.R., Barnes W.M., Chilton M.D. Short direct repeats flank the T-DNA on a nopaline Ti plasmid // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982. - 79. - P. 6322-6326.

192. Zambryski P., Yoos H., Genetello C., Leemans J., Van Montagu M., Schell J. Ti plasmid vector for the introduction of DNA into plant cells without alteration of their normal regeneration capacity // EMBO J. 1983. -2, N5.-P. 2143-2150.

193. Zupan J.R., Zambryski P. Transfer of T-DNA from Agrobacterium to the plant cell // Plant Physiol. 1995. - 10, №4. - P. 1041-1047.106