Разработка комплексной технологии биологически активных веществ на основе конверсии вторичного рыбного сырья

Устинова, Юлия Вадимовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка комплексной технологии биологически активных веществ на основе конверсии вторичного рыбного сырья
ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Разработка комплексной технологии биологически активных веществ на основе конверсии вторичного рыбного сырья"

На правах рукописи

0иэи—-

УСТИНОВА ЮЛИЯ ВАДИМОВНА

РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСНОЙ ТЕХНОЛОГИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НА ОСНОВЕ КОНВЕРСИИ ВТОРИЧНОГО РЫБНОГО СЫРЬЯ

03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

2 2 НОЯ 2012

Щелково-2012

005055327

Работа выполнена на кафедре «Биотехнология» ФГБОУ ВПО «Московский государственный университет пищевых производств» Научный руководитель: доктор технических наук, профессор

Иванова Людмила Афанасьевна

Официальные оппоненты: Нежута Александр Александрович

Ведущая организация: Государственное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии" Российской академии сельскохозяйственных наук

ного совета Д 006.069.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности РАСХН по адресу: 141142, Московская область, Щелковский район, пос. Биокомбината, д. 17, ВНИТИБП, e-mail: vnitibp@mail.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности

доктор биологических наук, кандидат технических наук ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности РАСХН, заведующий лабораторией «Сушка биопрепаратов»

Лыско Ксения Андреевна

кандидат технических наук

ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России, ведущий специалист

Зашита состоится: « 30 » ноября 2012 г. в 10°° на заседании диссертацион-

РАСХН.

Автореферат разослан « 29 » октября 2012 г. Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Биотехнология рыбопродуктов в настоящее время охватывает широкую сферу научных изысканий и, в первую очередь, к ним относятся исследования в области биологически активных веществ сырья водного происхождения, на которых основаны технологии изготовления биологически ценных продуктов с заданными свойствами.

В последние годы наблюдается тенденция снижения объемов вылова и переработки рыбного сырья. В целом по России с 2000 г. уровень добычи рыбы снижается в среднем ежегодно на 17,7%, следствием чего является уменьшение производства рыбной продукции почти на 10%. Для преодоления этих негативных тенденций в настоящее время утверждена Концепция развития рыбного хозяйства РФ на период до 2020 г., задачами которой являются не только увеличение объемов вылова, но и повышение эффективности использования и развития ресурсного потенциала рыбохозяйственного комплекса в целом. Одним из путей повышения эффективности является внедрение новых технологий переработки рыбных отходов.

В таких странах, как Исландия, Норвегия, Финляндия, Япония давно эффективно функционируют заводы по комплексной переработке рыбы. В нашей стране в настоящее время такие заводы отсутствуют, несмотря на то, что объемы вторичного рыбного сырья (отходов и неиспользуемого улова) в России ежегодно достигают 800 тыс. т., что составляет до 20% от общего улова.

Снижение объема нерационально утилизируемых отходов рыбоперерабатывающих предприятий за счет внедрения новых технологических процессов является эффективным способом, позволяющим повысить глубину переработки рыбного сырья и экономичность производства.

Настоящая работа посвящена разработке комплексной технологии переработки вторичного рыбного сырья, позволяющей получить ряд стратегически необходимых бе-локсодержащих продуктов, аминокислотных смесей и других полезных веществ на их основе (в частности, гистамина) для применения в пищевой, сельскохозяйственной и фармацевтической отраслях.

Цель и задачи исследования

Основная цель диссертационной работы состояла в разработке эффективных технологий переработки отходов от разделки массовых промысловых рыб рыбохозяйственного бассейна России для получения белковой продукции, аминокислотных смесей и препарата гистамина, отличающихся от традиционных энерго- и ресурсосбережением, и предложении сфер их применения.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- оценка биохимического состава исходного сырья (отходы от разделки промысловых рыб) для определения его пригодности к дальнейшей переработке;

- разработка технологии белкового препарата кормового назначения из вторичного рыбного сырья с предложением наиболее эффективного способа экстракции липндов;

- разработка технологии белкового препарата пищевого назначения на основе экстракции и последующего осаждения протеинов исходного сырья;

- разработка технологии аминокислотных смесей путем протеолиза полученных ранее белковых препаратов промышленными ферментами;

- предложение сфер применения продуктов, получаемых введением в их состав разработанных добавок;

- разработка с использованием полученного препарата гистидиндекарбоксилазы метода конверсии гистидина в гистамин для его последующего использования в фармацевтической промышленности;

- разработка нормативно-технической документации, включая ТУ на белковые продукты и аминокислотные смеси и Лабораторные регламенты.

Ыаучная новизна работы

Научно обоснованы принципы создания комплексной технологии биологически активных веществ на основе конверсии вторичного рыбного сырья.

На основании исследования биохимического состава вторичного сырья рыбоперерабатывающих предприятий показана целесообразность его использования в качестве альтернативного источника полноценного белка.

По результатам изучения влияния условий процесса экстракции липидов из биомассы рыбных отходов на качественный состав жировой и белковой фракций рекомендован технологический режим, позволяющий максимально полно разделять указанные фракции с минимальными потерями сухого вещества.

Впервые на основе установленных параметров экстракции и последующего осаждения протеина рыбных отходов разработан наиболее эффективный способ получения белкового концентрата пищевого назначения - заменителя растительных белков.

Основываясь на экспериментальных данных и выявленных зависимостях степени ферментативного гидролиза от условий проведения процесса установлен наиболее эффективный режим ферментолпза белковых продуктов и разработана экономически обоснованная технология получения аминокислотных смесей.

Впервые проведен направленный скрининг микроорганизмов и отобран штамм-продуцент гистидиндекарбоксилазы с высокой активностью. На основании изучения совокупности морфологических, культуральных, физиолого-биохимических и филогенетических характеристик исследуемой культуры новый штамм идентифицирован как Bacillus licheniformis KJI13.

Впервые на основе лабораторных исследований и полученных зависимостей накопления новым штаммом В. йсЬешГопгня гистидиндекарбоксилазной активности и выхода гистамина от условий культивирования этого штамма, параметров выделения и очистки ферментного препарата, разработана биотехнология препарата гистидинде-карбоксилазы.

Практическая значимость работы

Проведенные лабораторные исследования явились основой для создания новой комплексной технологии переработки вторичного рыбного сырья с целью получения ряда биологически активных веществ. Впервые разработаны технологии кормового и пищевого белкового концентрата и аминокислотных смесей на их основе из вторичного сырья рыбоперерабатывающих предприятий. На готовые продукты подготовлены и зарегистрированы в ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ» следующие технические условия: ТУ 9283-001-02068634-2011 «Концентрат кормовой белковый»; ТУ 9283-00202068634-2011 «Концентрат белковый пищевой из рыбы»; ТУ 9283-003-02068634-2012 «Аминокислотные смеси на основе белоксодержащих продуктов из рыбы». На ТУ 9283002-02068634-2011 получено положительное заключение органа Роспотребнадзора (экспертное заключение № 985 от 07 октября 2011 г).

Разработаны Лабораторные регламенты на изготовление пищевого и кормового белкового концентратов.

Произведена наработка опытной партии пищевого белкового концентрата в ОАО «Удмуртский хладокомбинат». Результаты подтверждены актом о наработке и протоколом испытаний готового продукта (утверждены и.о. генерального директора ОАО «Удмуртский хладокомбинат» 12.12.2011).

Подана заявка № 2011135454 от 25.08.2011 на выдачу патента РФ «Способ получения белкового концентрата из рыбных отходов».

По результатам лабораторных и производственных испытаний определены основные направления практического использования разработанных белковых добавок: создание обогащенных пищевых и кормовых продуктов, функциональных продуктов, жидких питательных прикормов для растений.

Осуществлено изготовление рубленных кулинарных изделий из рыбы, рубленных кулинарных изделий из мяса, крабовых палочек, протеиновых печений для спортивного питания с введением в их состав белкового концентрата или полуфабриката. Установлено, что применяемые добавки не оказывают негативного влияния на микробиологические и органолептические показатели готовых изделий. Применительно к рубленным изделиям было зафиксировано улучшение цвета и структуры продукта по сравнению с рецептурой, содержащей соевый изолят. Результаты подтверждены актом лабораторных испытаний (утвержден проректором по научной работе ФГБОУ ВПО «МГУПП» 05.09.12). Использование разработанного белкового полуфабриката при изготовлении крабовых палочек снижает их себестоимость. Применяемая добавка не

оказывает негативного влияния на органолептические, микробиологические и физико-химические показатели готового изделия. Результаты подтверждены актом о дегустации (утвержден генеральным директором ООО «HCT плюс» 15.07.2012).

На основе наиболее перспективного штамма Bacillus licheniformis KJ113, полученного в результате скрининга микроорганизмов-продуцентов гистидиндекарбокси-лаз, разработана биотехнология препарата гистидиндекарбоксилазы Г20Х и проведена наработка опытной партии в ООО «Зеленые линии». Результаты подтверждены актом о наработке (утвержден генеральным директором ООО «Зеленые линии» 20.08.2012 ).

Штамм бактерий Bacillus licheniformis КЛ13 депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-11185.

Подана заявка № 2012122258 от 30.05.2012 на выдачу патента РФ «Штамм Bacillus licheniformis для получения гистидиндекарбоксилазы».

С использованием ферментолизата белков рыбных отходов и препарата гистидиндекарбоксилазы, полученного на основе нового штамма-продуцента Bacillus licheniformis КЛ13, разработана биотехнология гистамина, применимого в производстве фармацевтической продукции.

Разработанная комплексная технология позволяет не только получить белковые продукты, аминокислотные смеси и препарат гистамина, но и решить -экологические проблемы, возникающие при утилизации рыбных отходов.

Апробация работы

Основные положения работы докладывались на Российских и международных конференциях и симпозиумах: Международной научно-технической конференции "Инновационные технологии переработки продовольственного сырья" (Владивосток, 2011 г.); IX международной научно-практической конференции и выставке «Технологии и продукты здорового питания. Функциональные пищевые продукты» (Москва, 2011 г.); IX Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (Москва, 2011 г.); IV Международной научно-практической конференции молодых ученых (Таганрог, 2012 г.); Международной конференции «Биология - наука XXI века» (Москва, 2012 г.); II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Биотехнология в интересах экологии и экономики Сибири и Дальнего Востока» (Улан-Удэ, 2012 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 3 статьи в ведущих рецензируемых научных журналах, определенных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, библиографического списка, включающего 202 источника, и 9 приложений. Работа изложена на 195 страницах машинописного текста, включает 43 таблицы и 42 рисунка.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В обзоре литературы рассмотрено современное состояние проблемы утилизации вторичного рыбного сырья в России. Оценены объемы ежегодно образующихся отходов и выявлены основные пути их нерациональной утилизации. Приведены примеры способов (разработанных отечественными и зарубежными специалистами) эффективной переработки вторичного и малоценного первичного рыбного сырья, включающие комплексную переработку, получение белоксодержаших продуктов кормового и пищевого назначения, а также аминокислотных смесей. Отдельно рассмотрен вопрос получения гистамина на основе традиционного химического синтеза и ферментативной конверсии гистидина, описаны основные продуценты данного фермента (гистидиндекарбоксила-зы), приведены примеры практического использования гистамина.

Анализ имеющихся публикаций выявил ограниченность исследований в области получения пищевых белоксодержащих препаратов на базе рыбных отходов, кормовых низколипидных добавок, бактериальных ферментных препаратов гистидиндекарбокис-лазы, что и позволило сформулировать цели и задачи диссертационного исследования.

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

На рис. 1 представлена общая схема проведенного эксперимента.

Рисунок 1 - Общая схема исследований. Объектом исследования явились рыбные отходы, состоящие преимущественно из голов, шкур, хребтов и хвостов. Вторичное сырье было предоставлено компаниями ГК «Марина», ГК «Русское море», ОАО «Удмуртский Хладокомбинат».

Микроорганизмы. В работе была использована лабораторная коллекция микроорганизмов кафедры «Биотехнология» ФГБОУ ВПО «МГУПП», коллекция культур микроорганизмов, выделенных сотрудниками кафедры из природных источников обитания (почва, рыбные отходы, соленые и квашеные продукты питания), а также коллекция микроорганизмов рода Lactobacillus, полученных из биологических сред организма человека в процессе обследования здоровых людей, предоставленная Лабораторией генетики микроорганизмов Института обшей генетики им. Н.И. Вавилова.

Методы.

Определение массовой доли влаги и жира проводили согласно ГОСТ 7636-85.

Определение массовой доли золы проводили согласно ГОСТ 13979.6-69.

Определение содержания белковых веществ проводили по методу Кьельдаля согласно ГОСТ 7636-85, Несслера и Лоури.

Экстракцию липидов из вторичного рыбного сырья осуществляли органическим растворителем в течение 15-90 мин при 35-60 °С, гидромодуль 1,5-5.

Определение КМАФАнМ проводили согласно ГОСТ 10444.15-94; дрожжей и плесневых грибов - ГОСТ 28805-90.

Определение аминокислотного состава проводили согласно Руководству Р 4.1.1672-03.

Экстракцию белка из предварительно гомогенизированного рыбного сырья осуществляли в интервале рН 2,0-12,0. Суспензию разделяли в поле центробежных сил в течение 20 мин при 8000 мин"1. Целевым продуктом являлся средний слой.

Осаждение белков из раствора осуществляли с использование органических растворителей, ТХУ и методом изоэлектрической преципитации (рН 4,8-5.2).

Определение протеолитической активности ферментных препаратов проводили по методу Ансона в модификации.

Скрининг микроорганизмов, изолированных из трех природных источников обитания, проводили по схеме, разработанной в соответствии с особенностями роста культур в зависимости от источника выделения.

Количественное определение гистамина осуществляли колориметрическим методом.

Определение гистидиндекарбоксилазной активности осуществляли модифицированным спектрофотометрическим методом.

Идентификацию культуры до вида проводили путем анализа секвенсов вариабельных участков 16S рРНК, а также ПЦР анализа с использованием видоспецифиче-ских праймеров.

Выделение гистамина проводили методом ионообменной хроматографии на смоле Dowex 50WX4.

Все измерения проводили не менее, чем в трех повторностях. Результаты экспериментальных исследований были обработаны с помощью программы Microsoft Excel 2007. В работе представлены средние результаты с достоверностью 95%.

ГЛАВА III ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Исследование биохимического состава вторичного рыбного сырья В работе был исследован биохимический состав отходов от разделки следующих видов промысловых рыб: килька, мойва, сельдь, судак, треска, форель (табл.1).

Таблица 1 - Биохимический состав рыбных отходов, %.

Вид рыб Состав отходов Влажность Белок (сырой протеин) Лшшлы Зольность

Килька Головы, хребты, кожа 72,12 14.40 0,20 1,46

Мойва Головы, хребты, кожа 69,50 14.20 14.00 2.28

Сельдь Головы, хребты, кожа 65,92 14,90 18,10 0,82

Судак Головы, хребты, кожа 67,35 18.50 3.60 10.38

Треска Головы,хребты.кожа 76,58 19,10 1,00 3,03

Форель Головы 61.98 15,40 16,20 6,12

На основании представленных результатов был сделан вывод о том, что отходы рыбоперерабатывающих предприятий содержат достаточно высокое количество белка (14,20-19,10%), и поэтому могут быть использованы в качестве потенциального источника полноценного протеина.

Разработка технологии кормового белкового концентрата из вторичного рыбного сырья

1 Обоснование эффективных условии экстракции лнпидов из вторичного рыбного сырья

Одной из целей получения очищенных белковых продуктов является обеспечение их продолжительного хранения. Поэтому важно удалять из них реакционноспособные и легко окисляемые компоненты - липиды. В связи с этим был определен способ и экспериментально обоснованы условия экстракции липидов из рыбных отходов.

Для выбора экстрагента проводили сравнительное исследование с использованием ряда органических растворителей: изопропанол, ацетон, н-гексан, этилацетат, бута-нол-1, этанол. Наиболее полное извлечение липидов было достигнуто с применением этилацетата. Однако использование его в качестве основного экстрагента ограничено его возможным негативным воздействием на производственный персонал. Поэтому для выделение липидов из гомогенизированных рыбных отходов был выбран дешевый и безопасный экстрагент — этанол, применяемый в пищевой и комбикормовой промышленности.

Для определен™ эффективного гидромодуля при проведении обезжиривания соотношение экстрагента и гомогенизированной массы рыбных отходов варьировали от 1,5:1; 2:1; 2,5:1; 3:1; 3,5:1; 4:1; 4,5:1 до 5:1. Наиболее целесообразным для проведения экстракции следует считать соотношение 2,5:1, при котором выход липидов составил 73,6%.

Для определения эффективной концентрации этанола, позволяющего удалить максимальное количество липидов из биомассы рыбных отходов, исходное сырье обрабатывали 40, 50, 60, 70, 80, 96% этанолом при установленном ранее гидромодуле 2,5. С учетом экономических требований, предъявляемых к разрабатываемой технологии, рекомендуемой была выбрана концентрация 70%, позволяющая удалить достаточное количество липидов — 69,40%.

Для изучения зависимости выхода липидов из вторичного рыбного сырья от температуры этанола (при условии: гидромодуль 2,5, концентрация этанола - 70%) проводили экстракцию при температурах 35. 40, 45, 50, 55 и 60 °С. При температурах раствора этанола 55 и 60° С выходы экстрагируемых липидов практически совпадали, что позволило рекомендовать для дальнейшего применения температуру экстракции 55° С, целесообразную как с экономической, так и с биохимической точек зрения.

Для определения эффективной продолжительности экстракции липидов исследование проводили в течение 15, 30, 45, 60, 75 и 90 мин (при условии: гидромодуль 2,5,

- 55° С) (рис. 2).

Наиболее эффективной и экономически целесообразной следует считать продолжительность экстракции 60 мин, при этом количество удаляемых липидов составляет 89,3%

Таким образом были экспериментально выявлены и обоснованы следующие условия экстракции липидов из вторич-Рисунок 2 - Влияние длительности экстракции на ного рыбного сырья: основной выход липидов из вторичного рыбного сырья (на экстрагент — 70% этанол; гидропримере сельди). модуль - 2,5; температура экст-рагента - 55° С; длительность экстракции - 60 мин.

2 Получение сухого кормового белкового концентрата

Обезжиренную рыбную массу, полученную после экстракции липидов, высушивали конвективным методом. В готовом продукте определяли содержание влаги, белка, жира, зольность, оценивали общую микробную обсемененность (табл. 2).

Полученный кормовой белковый концентрат (КБК) отвечает требованиям существующей нормативной документации на кормовые рыбные продукты. По основному показателю — содержанию белка - КБК более чем в 2 раза превосходит нормируемое значение.

концентрация этанола - 70%, температура экстрагента

89.30 91.Ю 91.00

1,63

Время, мин

• Количество экстрагируемых липидов

■ Остаточное содержание липидов в биомассе

Наименование показатели Нормируемое значение Обозначение норма гив-ного документа Значение показа геля но результатам исследований

Маесоваи доля влаги,0/«» не более 13,00 ГОСТ 2116-2000 4,80

Маесовая доля белковых веществ, % не менее 36,00 72,70

Массовая доля белковых веществ, %а.с.в. не нормируется - 76,36

Массовая доля жира, % не более 18,00 ГОСТ 2116-2000 1.90

Массовая доля жира, %а.с.в. не нормируется - 2,00

Массовая доля золы, % не более 1.00 ГОСТ 2116-2000 20.60

Массовая доля золы, %а.с.в. не нормируется 21,64

КМ АФАнМ, КОЕ/г не более 5*104 СанПиН 2.3.2.1078-01 3*10"

Патогенная микрофлора не допускается ГОСТ 2116-2000; СанПиН 2.3.2.1078-01 не выявлена

Выход по белку по разработанной технологии составил 65-67%. Выход белкового препарата из 1 кг переработанного сырья составляет 170-180 г (влажность 5%).

3 Оценка аминокислотного состава белков готового КБК

Определение аминокислотного состава готового КБК проводили на аппаратурной базе ООО «Зеленые линии». Исследование аминокислотного состава показало, что содержание основных незаменимых аминокислот (кроме триптофана) в полученном КБК превышает 32%, в кормовой рыбной муке — 31%.

4 Оценка функциональных свойств белков готового КБК

>5 50 54 45

| 40

5 35

а 30

2 25

! 20 а о

Ь «

а.

¥ 15

5 0

0 20 40 60 80 100 120 Температура, *С

Значенне pll

Рисунок 3 - Зависимость растворимости Рисунок 4 - Зависимость растворимости белков КБК от температуры. белков КБК от значения рН.

Для исследования возможности применения КБК в составе консервированных кормов (используемых для домашних животных) были исследованы важнейшие функциональные свойства белков полученного КБК (рис. 3,4 и табл.3).

Согласно представленным результатам, максимум растворимости белков КБК наблюдался при температуре 30° С и составил 45,61%. В интервале рН от 2 до 11 растворимость КБК практически не менялась и в среднем составила 45%. Максимум растворимости наблюдался при рН 12,0 и составил 63,34%.

1 I

Наименование показателя Значение

ВСС, % 404,80

ЖСС, % 198,50

Набухаемость, см3/г 2,80

Рисунок 5 - Способность КБК к сорбированию микроорганизмов.

Значения определяемых показателей ВСС, ЖСС и набухаемости достаточно высоки и подтверждают возможность использования КБК в качестве биологически активной добавки в консервированные корма для домашних животных.

5 Оценка сорбциопной способности КБК по отношению к микроорганизмам

Исследование сорбци-онной способности КБК проводили по отношению к микроорганизмам, в т.ч. патогенным и условно-патогенным (рис. 5). Полученные результаты показали, что КБК обладает выраженной способностью адсорбировать палочко- и кокковид-ные бактерии различных форм патогенности. Отдельно следует выделить практически 100% адсорбцию B.cereus и Е. cloacae как серьезных потенциальных возбудителей заболеваний у животных.

Разработка технологии пищевого белкового концентрата из вторичного рыбного сырья

1 Экстракция белка из гомогенизированной массы рыбных отходов

Исходное вторичное сырье измельчали до однородной, гомогенной массы, имеющей консистенцию рыбного фарша (влажность фарша 60-78%). Экстракцию белка из измельченных отходов проводили при разных значениях рН (интервал рН 2,0-12,0; шаг 0,5) (рис. 6). Как видно из диаграммы на рис. 6, наибольшая растворимость белков была достигнута в сильно-

Рисунок 6 - Растворимость белков (%), экстрагированных из рыбных отходов при значениях рН 2.0-12,0.

щелочной области рН (11.0). Поэтому для дальнейшего детального изучения экстракции белков был выбран диапазон рН 10,5-11,5 и проведено аналогичное исследование с шагом рН 0,1.

Максимальная раствори-мость белков 76,51 % была достигнута при рН экстраген-та 10,8. Это значение было выбрано в качестве рекомендуемого для разрабатываемой технологии.

Образующиеся на данном этапе отходы после отделения растворенных белков могут быть также использованы, а именно: осадок, после высушивания, может служить в качестве кормовой минеральной добавки, а липидная фракция, содержащая насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты, может найти применение в фармацевтической

раствора

Для оценки сравнительной эффективности осаждение экстрагированных белков было проведено различными способами: этанолом, изопропанолом, трихлорук-сусной кислотой, а также методом изоэлектрической преципитации (рН 5,0). Установлено, что наиболее эффективным является изоэлектрическое осаждение, позволяющее получить максимальный выход целевого продукта.

Согласно результатам, представленным на рис.6,

ИЭТ изучаемого комплекса белков находится в области Рисунок 7 - Влияние значения рН на изоэлектрическое РН 5'0' Поэтому для более детального изучения осажде-

осаждение белка. ния белков был выбран диапазон рН 4,8-5,2 и проведено

аналогичное исследование с шагом рН 0,1 (рис. 7). Осаждение при рН 5,1 позволяет максимально перевести белки в нерастворимое состояние и получить белковый полуфабрикат (БП).

3 Оценка биохимических и микробиологических показателей БП

Полученный БП из вторичного рыбного сырья представляет собой аналог сурими. Значения биохимических показателей БП представлены в табл.4 в сравнении с показателями для традиционного фарша сурими. Микробиологические показатели БП представлены в табл. 5.

Таким образом, полученный БП не уступает по биохимическому составу традиционному фаршу сурими, а по такому показателю как содержание белка - превосходит его более чем на 40%. По микробиологическим показателям БП полностью соответствует нормам СанПиН 2.3.2. 1078-01. Выход БП из I кг исходного сырья составляет 470490 г (влажность 74%).

промышленности.

2 Осаждение белка из

11,00

2 10,50 =: ш

4,8 4,9 5 5.1 5,2 Значение рН

Наименование показателя Нормируемое значение для фарша рыбного пищевого мороженого для производства «Крабовых палочек» но ТУ 15-03-467-89 Нормируемое значение для сурими Значение показателя по результатам исследований

Массовая доля влаги,% 74.00-77,00 72,18-76,78 74,26

Массовая доля золы, % не нормируется 0,34-Н),75 1,99

Массовая доля золы, %а.с.в. не нормируется не нормируется 7,73

Массовая доля белковых веществ, % не нормируется 13,38-16,28 23,36

Массовая доля белковых веществ, %а.с.в. не нормируется не нормируется 90,75

Массовая доля жира, % не нормируется 0.2-2,65 0,39

Массовая доля жира, %а.с.в. не нормируется не нормируется 1,52

Таблица 5 — Микробиологические показатели БП.

Наименование показателя Нормируемое значение Обозначение нормативного документа Значение показателя по результатам исследований

КМАФАнМ, КОЕ/г не более 1 * 10"^ СанПиН 2.3.2.1078-01 1*10'

Бактерии группы кишечной палочки (БГКП), КОЕ/0,001 г не допускается не выявлены

в.аигеиз, КОЕ/ОД)! г не допускается не выявлены

4 Получение сухого пищевого белкового концентрата (ПБК)

БП высушивали конвективным методом. В готовом ПБК определяли содержание

влаги, белка, жира, а также оценивали общую микробную обсемененность.

Результаты проведенных исследований представлены в табл. 6 в сравнении с нормируемыми значениями для пищевого соевого изолята.

Таблица 6 - Биохимические и микробиологические показатели ПБК и соевого

изолята.

Наименование показателя Нормируемое значение для соевого изолята Обозначение нормативного документа Значение показателя по результатам исследований ПБК

Массовая доля влаги,% не нормируется РАО (1оситет 10,00

Массовая доля белковых веществ, % не нормируется 83.50

Массовая доля белковых веществ, %а.с.в. не менее 90.00 92.78

Массовая доля золы, % не нормируется 5.30

Массовая доля золы, %а.с.в. не более 4,5 5,89

Массовая доля жира, % не нормируется 1,20

Массовая доля жира, %а.с.в. не более 0.5 1,33

КМАФАнМ, КОЕ/г не более 2,5*104 СанПиН 2.3.2.1078-01 з*ю-

БГКП, КОЕ/О.1 г не допускаются не выявлены

Дрожжи и плесени, КОЕ/г дрожжи не более 90; плесени не более 10 не выявлены

Патогенная микрофлора, в т.ч. сальмонеллы, КОЕ/25 г не допускается не выявлена

Как видно из табл. 6, полученный ПБК обладает сопоставимыми с соевым изоля-том биохимическими и микробиологическими характеристиками. Выход белка из сырья в ПБК согласно разработанной биотехнологии составил 70-75%. Выход ПБК из 1 кг переработанного сырья составляет 120-130 г (влажность 10%).

5 Оценка аминокислотного состава белков готового ПБК

Определение аминокислотного состава проводили на аппаратурной базе ООО «Зеленые линии». Суммарная доля 7 незаменимых аминокислот (кроме триптофана) в полученном ПБК составляет 35,80%. Следует отметить, что соевый изолят, как наиболее часто употребляемая белковая добавка в продуктах питания, содержит около 31% незаменимых аминокислот. Таким образом, ПБК обладает повышенной биологической ценностью и поэтому может быть рекомендован к использованию в качестве функциональной добавки в рецептурах пищевых продуктов.

6 Оценка функциональных свойств белков готового ПБК

Температура, 'С —»—ПБК —•—Соевый изолят

.= 70

г 50 £ 40 1 30 5 20 8.Ю

о £ 0

Значение рН -ПБК —•— Соевый изолят

Рисунок 8 - Зависимость растворимости Рисунок 9 - Зависимость растворимости ПБК и соевого изолята от температуры. ПБК и соевого изолята от значения рН.

Проводилось сравнительное исследование важнейших функциональных свойств полученного ПБК и соевого изолята как наиболее близкого и широко распространенного аналога (рис. 8, 9; табл. 7).

Как видно из графиков на рис. 8, максимум растворимости ПБК наблюдался при температуре 40° С и составил 40.18%. Следует отметить, что максимум растворимости соевого изолята (38,85%) наблюдается при температуре 80° С (рис. 8), а при 40° С его растворимость примерно на 20% ниже, чем у ПБК, что свидетельствует в пользу применения ПБК при изготовлении продуктов, для которых высокотемпературная обработка нежелательна или недопустима.

Как видно из графиков на рис. 9, максимум растворимости ПБК наблюдался при рН 2,0 и составил 60,12%. Максимум растворимости соевого изолята наблюдался при рН 11 и составил 44,13%. Следует отметить, что в диапазоне значений рН, характерных для пищевых продуктов и их полуфабрикатов (4,5-8,5), растворимость белков ПБК выше, чем у соевого изолята в 1,2-2,8 раза, что дополнительно расширяет сферу

применения разработанного нового продукта и дает существенные преимущества в использовании по сравнению с традиционными соепродуктами.

Таблица 7 - ВСС, ЖСС, набухаемость ПБК и соевого изолята.

Наименование показателя ПБК Соевый оголят

ВСС, % 261,4 305,4

ЖСС, % 199 222,5

Набухаемость, см '/г 4.4 10.4

По показателям ВСС, ЖСС и набухаемости разработанный продукт несколько уступает соевому аналогу, но в целом значения определяемых показателей сопоставимы, высоки и достаточны для использования ПБК в качестве биологически активной добавки в пищевых продуктах.

7 Оценка сорбционной способности ПБК по отношению к микроорганизмам

Исследование сорбционной способности ПБК проводили по отношению к микроорганизмам, в т.ч. патогенным и условно-патогенным (рис. 10).

Как видно из диаграммы. сорбционная способность ПБК по отношению к большинству микроорганизмов (за исключением С. maltosa и Sarci-na sp.) по сравнению с соевым изолятом выше, потенциал разработанного продукта к микрофлоре, в т.ч. патогенной и условно-патогенной, позволяет использовать полученную добавку в производстве изделий лечебно-профилактического назначения.

Разработка технологий аминокислотных смесей на основе КБК н ПБК

В рамках диссертационного исследования была изучена возможность получения обогащенных аминокислотами биологически активных добавок пищевого и кормового назначения путем ферментативного гидролиза белковых продуктов (КБК и ПБК), полученных ранее из вторичного сырья рыбоперерабатывающих предприятий.

1 Выбор наиболее эффективного ферментного препарата

Для выбора ферментного препарата, способного быстро и качественно осуществить протеолиз белков проводилось сравнительное исследование по воздействию 12 ферментных препаратов на исследуемый субстрат. Максимальная глубина гидролиза

Рисунок 10 - Способность ПБК и соевого изолята к сорбированию микроорганизмов.

Таким образом, ярко выраженный адсорбционный

была выявлена при использовании Пепсина, что и определило дальнейшее его использование в работе.

2 Выбор условий протеолиза белков ПБК

В исследованиях были использованы математические методы планирования эксперимента и реализован полнофакторный эксперимент. Интервалы варьирования факторов включали все экономически целесообразные и биохимически значимые величины. Результаты статистической обработки позволили сделать вывод, что наиболее эффективными являются следующие условия проведения пиролиза белкового концентрата (ПБК) из отходов переработки рыбы ферментным препаратом Пепсин: концентрация субстрата - 5%; количество вносимого фермента - 1% от массы обрабатываемого субстрата; длительность процесса -6 ч; температура реакционной среды - 50° С. Указанные условия позволяют достичь глубины гидролиза 27,53%.

3 Получение жидкого прикорма для растений на основе КБК

Ферментолизат после протеолиза КБК в выбранных условиях отделяли от непро-

гидролнзованного осадка путем фильтрации. Полученную жидкую аминокислотную смесь использовали в качестве прикорма для роста и поддержания растений (огурцов Cucumis sp.).

В интервале концентрации 1-5% отмечалась положительная динамика роста, а максимальная эффективность достигалась при 2%-й концентрации аминокислотной смеси. В полученных ростках определяли содержание белка (сырого протеина). При проращивании семян с использованием 2%-ой аминокислотой смеси наблюдалось накопление белка в стеблях, корнях и листьях.

Таким образом, аминокислотная смесь, вводимая в составе жидкости для орошения в качестве прикорма, может рассматриваться как эффективное средство повышения пищевой ценности и ускорения роста экологически чистых продуктов (organic food).

4 Получение сухой аминокислотной смеси

Ферментолизат отделяли от непрогидролизованного осадка путем фильтрации, затем упаривали и высушивали. Выход готовой аминокислотной смеси (с влажностью не более 10%) составил 25,31 % и 21,83 % от массы прогидролизованных ПБК и КБК соответственно.

При этом дополнительным продуктом в разработанной технологии являлся пептидный осадок, который также может быть использован в качестве биологически активного вещества в составе кормов.

5 Оценка аминокнелотного состава сухого ферментолизата

Определение аминокислотного состава сухих смесей, полученных после протеолиза КБК и ПБК проводили на аппаратурной базе ООО «Зеленые линии». Полученные аминокислотные смеси обладают повышенной биологической ценностью (содержание незаменимых аминокислот более 44 %) по сравнению с гидролизатами рыбного и соево-

го белка, содержание незаменимых аминокислот в которых составляет 39% и 35% соответственно.

6 Интенсификация процесса ферментолнза ПБК

Интенсификация процесса ферментолиза ПБК осуществлялась путем введения дополнительной стадии автолиза исходного сырья. Экспериментально обоснованные условия: выдерживание суспензии отходов в течение 5 ч при температуре 45-50° С с применением 2% хлорида натрня в качестве автолитического агента. В результате автолиза около 80% белковых фракций имели молекулярную массу менее 5 кДа, из них более 40% - менее 1,5 кДа. Полученный после предварительного автолиза вторичного рыбного сырья ПБК подвергали ферментативному гидролизу. Было выявлено, что предварительный автолиз сырья позволил увеличить степень гидролиза ферментным препаратом Пепсин более чем в 1,5 раза, выход готовой аминокислотной смеси (с влажностью не более 10%) составил 47,23% от исходного ПБК. Высокая степень конверсии белков ПБК (более 50%) подтверждает возможность использоваши разработанного ПБК и аминокислотных смесей на его основе в качестве функциональных добавок в пищевые продукты. В результате проведенного исследования степень гидролиза составила 50,91%.

Разработка биотехнологии гнстндиндекарбоксилазы

В настоящее время гистамин для фармацевтических целей получают в основном синтетическим путем, что оказывает значительное влияние на стоимость готового препарата. Именно поэтому в задачи диссертационной работы входило изучение возможности создания рентабельной биотехнологии фермента гистидиндекарбоксилазы, трансформирующего гистидин, получаемый из вторичного рыбного сырья, в гистамин.

1 Скрининг мнкроорганизмов-нроду центов гнстидиндекарбоксилаз

В рамках диссертационной работы было получено более 60 изолятов культур микроорганизмов. В результате скрининга было установлено, что наибольшее количество гиста-мина (9,26 мкг/см3) в культуралыюй жидкости (КЖ) образуется в результате культивирования штамма КЛ13, который и был отобран для дальнейших исследований.

2 Исследование морфологических, культуральных и физиолого-биохимических признаков изолята КЛ13

При определении видовой принадлежности изолята КЛ 13 учитывали совокупность морфологических, культуральных л физиолого-биохимических признаков. По результатам изучение физиолого-биохимических свойств изолята КЛ13 был сделан вывод о принадлежности тестируемого штамма к роду Bacillus.

Идентификация штамма Bacillus sp.KJI 13 до вида осуществлялась в лаборатории ФГУПГосНИИГенетика. Проведенный анализ секвенсов вариабельных участков 16S рРНК тестируемого штамма показал, что с вероятностью 99% его вид можно идентифицировать как Bacillus licheniformis.

3 Выбор наиболее эффективных условий культивирования Bacillus licheni-formis KJ113 с целью получения активною фермента гистидиндекарбоксилазы

Планирование исследования осуществляли по методу Гаусса-Зейделя, предусматривающего последовательное изучение влияющих факторов и использование каждого предыдущего в качестве фона для последующего.

В процессе исследования последовательно варьировали следующие факторы: концентрацию гистидина в ПСр (0-50 мкг/см3); pH питательной среды (2,0-12,0); длительность культивирования (1-8 сут); возраст посевного материала (ПМ) (1-5 сут); концентрации микроэлементов в ПСр (0,01-0,05%); посевную дозу (102-10 кл/см').

Согласно результатам, полученным на этапе скрининга, наиболее эффективная

концентрация добавляемого в ПСр (ГРМ-бульон)гистидина с целью индукции биосинтеза фермента находится в интервале 5-15 mkt/cmj ПСр. Для выбора точного значения были проведены дополнительные исследования в указанном интервале концентраций с шагом 2 мкг/см' (рис.11). Следует отметить, что содержание гистидина в составе панкреатического гидроли-зата рыбной муки (в ГРМ-бульоне) составляет 0,12%.

Как видно из графика на рис. 11, наиболее эффективной является концентрация гистидина 8 мкг/см' ПСр. При данной концентрации индуктора количество гис-тамина в фильтрате КЖ после культивирования составило 14,04 мкг/см", а активность гистидиндекарбоксилазы - 1,00 ед/см .

Установлено, что при культивировании Bacillus licheniformis КЛ13 pH среды должен быть нейтральным (pH 7,0).

Оптимальное время культивирования Bacillus licheniformis КЛ13 для накопления максимальной активности препарата равно 96 ч.

Для получения фермента с максимальной активностью (6,01 ед/см") необходимо использовать 2-х дневный посевной материал. При этом, концентрация гистамина в фильтрате КЖ достигала 47,9 мкг/см .

Установлено, что такие микроэлементы как Zn, Со, Си и Мп ингибируют рост штамма В. licheniformis КЛ13. Добавление же 0,05% ионов Mg2+оказывает благоприятное влияние на рост культуры и биосинтез фермента, позволяя достичь активности 15,27 ед/см3 (рис. 12). Концентрация гистамина в фильтрате КЖ в этом случае составляла 58,76 мкг/см'.

а m

| 3 14

Si 13

е* 12

£ и 11 5^10

11 9 & е- s

.14.04

тт

4 9 14 1

Концентрация гистидина, добавляемого в ПС, мкг/смЗ

Рисунок 1 1 - Влияние содержания гистидина в составе ПСр на концентрацию гистамина в фильтрате КЖ после культивирования.

Экспериментально установлена оптимальная посевная доза с концентрацией 107 кл/см"1 ПМ.

4 Изучение путей повышения активности гистидиндекарбоксилазы В. lichenifor-mis КЛ13

С целью повышения активности ферментного препарата посевной материал предварительно выращивали на питательной среде типа ГРМ-агар с добавлением гистамина. Концентрация гистамина варьировалась в диапазоне 5-50 мкг/см". Колонии выросшей культуры далее использовали для получения 2-х дневного ПМ для глубинной ферментации. По окончании 96 ч культивирования в фильтрате КЖ определяли активность гистидинде-карбоксилазы.

Повышение активности фермента гистидиндекарбоксилазы до 27,5 ед/см"' было достигнуто после предварительного выращивания ПМ на среде, содержащей 35 мкг/см"1 гистамина.

С целью дальнейшего повышения активности ферментного препарата проводили УФ-индуцированный мутагенез продуцента. Максимальная активность (78,67 ед/см ) фермента гистидиндекарбоксилазы в фильтрате КЖ достигалась под воздействием УФ-облучения на культуру в течение 50 мин. Для дальнейших исследований использовали полученный в результате мутагенеза ПМ.

5 Осаждение гистидиндекарбоксилазы B.licheniformis КЛ13 из культураль-ной жидкости

Установлено, что наиболее эффективно осаждение фермента из фильтрата куль-туральной жидкости B.licheniformis КЛ13 происходит изопропанолом в соотношении 5:1 и рН 9,0, при этом выход сухого препарата (влажность 10,6%) достигает 9 г/дм^. Активность высушенного ферментного препарата гистидиндекарбоксилазы (Г10Х) (влажность 10,6%) составила 666,67 ед'г.

6 Очистка гистидиндекарбоксилазы B.licheniformis КЛ13

В ООО «Зеленые линии» была проведена очистка фильтрата культуральной жидкости B.licheniformis КЛ13 методом ультрафильтрации на установке «ВЛАДИСАРТ». После высушивания ферментного препарата активность гистидиндекарбоксилазы в нем составила 1087 ед/г.

м8 Мо N¡

Рисунок 12 - Влияние добавляемых в ПСр микроэлементов на активность гистидиндекарбоксилазы B.licheniformis КЛ13.

Рисунок 13 - Продукты, полученные в результате проведенного диссертационного исследования, и сферы их

применения.

7 Выбор эффективных условий ферментативной конверсии гистидина ферментным препаратом гистидиндекарбоксилаза Г10Х

На основании проведенного многофакторного эксперимента были выбраны эффективные условия конверсии гистидина гистидинекарбоксилазой В.ПсЬетГоггшз КЛ13. Вариабельными параметрами были: рН среды (интервал варьирования 4,0-9,0), температура реакционной смеси (интервал 30-60° С), доза ферментного препарата (1-6 ед/г субстрата). Длительность реакции составляла 60 мин, концентрация субстрата 3%. Оптимум действия фермента достигался при температуре 40° С, нейтральном рН и дозе ферментного препарата 1 ед/г субстрата. В таких условиях 28,49% гистидина трансформировалось в гистамин.

8 Получение гистамнна на основе ферментативной конверсии гистидина в жидкой аминокислотной смеси

Полученную в результате конверсии гистидина из аминокислотной смеси после протеолиза КБК с использованием разработанного ферментного препарата гистидинде-карбоксилазы (в условиях, обоснованных выше), реакционную смесь очищали путем ионообменной хроматографии на смоле Оолех 50\УХ4. В элюате определяли содержание гистамина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на базе ООО «Зеленые линии». Содержание гистамина составило 98,7% а.с.в.

Продукты, полученные в результате проведенного диссертационного исследования, и сферы их полезного применения представлены на рис. 13.

В соответствии с проведенными расчетами экономической эффективности разработанных технологий, себестоимость готовых препаратов составила: КБК - 96,05 руб/кг; ПБК - 207,58 руб/кг, гистамина - 32,21 руб/г. Отпускная цена готовых изделий значительно ниже или сопоставима с рыночной ценой ближайших конкурентных аналогов. Так, рассчитанная цена гистамина, полученного с использованием разработанного ферментного препарата в 5 раз ниже среднерыночной цены за данный препарат.

ВЫВОДЫ

1. Исследование биохимического состава вторичного рыбного сырья показало, что отходы рыбоперерабатывающих предприятий содержат высокое количество белка (14,20-19,10%), что позволяет считать их перспективным источником полноценного протеина

2. Разработана малоотходная биотехнология КБК на основе экспериментально выявленных эффективных условий экстракции липидов из вторичного рыбного сырья. Показано, что КБК обладает высокой биологической ценностью, содержание основных незаменимых аминокислот превышает 32%.

3. Разработана малоотходная биотехнология ПБК на основе экстракции белков из вторичного рыбного сырья (рН 10,8) и их осаждения в ИЭТ (рН 5,1). Показано, что ПБК обладает сопоставимыми с соевым белком биохимическими характеристиками и может быть введен в рецептуры пищевых продуктов с целью повышения их биологической

ценности (содержание незаменимых аминокислот в полученном ПБК составляет 35,80%).

4. На основашш исследования функциональных свойств белков КБК и ПБК подтверждена возможность их использования в составе кормов и продуктов питания, соответственно, в качестве биологически активной добавки и с лечебно-профилактическими целями.

5. На основе анализа экспериментальных данных и выявленных зависимостей степени ферментативного гидролиза от условий проведения данного процесса обоснован наиболее эффективный режим проведения ферментолиза белковых продуктов. Установлено, что автолиз вторичного рыбного сырья способствует проведению ферментолиза, повышая субстратную доступность для фермента (Пепсина).

6. Экспериментально установлено, что полученные аминокислотные смеси обладают повышенной биологической ценностью (содержание незаменимых аминокислот более 44 %) по сравнению с пщролнзатами рыбного и соевого белка.

7. Результаты скрининга более 60 изолятов микроорганизмов позволили выявить культуру, обладающую максимальной гистиднндекарбоксилазной активностью

8. Разработана биотехнология гистидиндекарокснлазы Г20Х с использованием стадий ультрафильтрацпи и спиртового осаждения. Активность гистидиндекарбоксила-зы Г20Х составила 1087 ед/г.

9. Разработана технология получения гистамина из аминокислотной смеси после протеолиза КБК с использованием нового ферментного препарата гистидиндекарбокси-лазы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Устинова Ю.В. Получение кормовых белковых концентратов как способ рациональной утилизации вторичного рыбного сырья / Л.А. Иванова, Д.Н. Марусина // Пищевая промышленность России. - 2011. - №11. — С. 26-28.

2. Устинова Ю.В. Разработка технологии получения белковых продуктов из вторичного сырья рыбоперерабатывающих предприятий / Л.А. Иванова, О.В. Румянцева // Экология и промышленность России. - 2012. - №1. - С. 50-53.

3. Устинова Ю.В. Изучение процессов ферментолиза белкового концентрата пищевого назначения./ Л.А. Иванова, О.В. Румянцева, ИЛО. Батгалова // Естественные и технические науки. — 2012. - №3. — С. 364-369.

Статьи и материалы конференций:

4. Устинова Ю.В. Использование отходов от разделки рыбы в качестве основного сырья для получения кормовых белковых добавок / Л.А. Иванова, Д.Н. Марусина, О.В. Румянцева // Сборник материалов IX международной научно-практической конференции и выставки «Технологии и продукты здорового питания. Функциональные пи-

щевые продукты», конференции молодых ученых «Инновационные технологии продуктов здорового питания» / МГУПП - М., 2011. - С. 187-189.

5. Устинова Ю.В. Исследование возможности использования рыбных отходов в качестве потенциального источника белка и других ценных компонентов / Л.А. Иванова, О.В. Румянцева // Живые системы и биологическая безопасность населения: материалы IX Международной научной конференции студентов и молодых ученых / МГУПП - М., 2011. - С. 40-43.

6. Устинова Ю.В. Использование вторичного сырья рыбоперерабатывающих предприятий в качестве альтернативного источника белка / Л.А. Иванова // Инновационные технологии переработки продовольственного сырья: материалы Международной научно-технической конференции / Дальрыбвтуз — Владивосток, 2011. - С. 107-109.

7. Устинова Ю.В. Изучение возможности получения фермента гистидиндекар-боксилазы биотехнологическим способом для фармацевтической и пищевой индустрии / Л.А. Иванова, A.C. Беловолова, А.Ю. Прищепо // Международная научно-практическая конференция Молодых учёных: Сборник научных трудов / Науч.ред. д.п.н., проф. И.А. Рудакова. - М.: Издательство «Перо», 2012. — С. 286-289.

8. Устинова Ю.В. Биотехнология фермента гистидиндекарбоксилазы на основе нового штамма Bacillus licheniformis / Л.А. Иванова, A.C. Беловолова, А.Ю. Прищепо // Биология - наука XXI века: Материалы Международной конференции / Ред. Р.Г. Васи-лов. - М.: МАКС Пресс, 2012. - С. 316-317.

9. Устинова Ю.В. Повышение эффективности протеолиза белкового концентрата из вторичного рыбного сырья / Л.А. Иванова, И.Ю. Батталова // Биотехнология в интересах экологии и экономики Сибири и Дальнего Востока: материалы II Всероссийской научно-практической конференции (с международным участием) / ВСГУТУ. - Улан-Удэ, 2012.-С. 13-15.

Сокращения

АСВ — абсолютно сухое вещество;

БГКП - бактерии группы кишечной палочки;

БП - белковый полуфабрикат;

ВСС — водосвязывающая способность;

ЖСС — жиросвязывающая способность;

ИЭТ - изоэлектрическая точка;

КБК - кормовой белковый концентрат;

КЖ — культуральная жидкость;

КМАФАнМ - количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов;

НД- нормативный документ;

ПБК - пищевой белковый концентрат;

ПД - посевная доза;

ПМ — посевной материал;

ПСр - питательная среда;

ТХУ — трихлоруксусная кислота.

Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю заведующей кафедрой «Биотехнология» ФГБОУ ВПО «МГУПП», профессору, д.т.н. Ивановой Л.А. за формирование научных взглядов, руководство при написании работы, всестороннюю поддержку и внимание, а также всем сотрудникам кафедры «Биотехнология» ФГБОУ ВПО «МГУПП». За помощь в организации и выполнении работы автор выражает глубокую признателеность руководителю аналитического центра ООО «Зеленые линии» Русановой Е.П. и всему коллективу аналитического центра ООО «Зеленые линии».

Подписано в печать 26.10.2012 г.

Печать цифровая Усл. п. л. - 1,5 Заказ № 1093 Тираж: 200 экч.

Типография «ФОРМАТ» ИНН 7713659744 125512, Москва, ул Прянишникова, д 19А стр 9 (495)739-04-18 www.ks-format.ru

Содержание диссертации, кандидата технических наук, Устинова, Юлия Вадимовна

Введение.

Глава 1 Обзор литературы.1В

1.1 Вторичные сырье рыбоперерабатывающих предприятий РФ: современное состояние, объемы, направления неэффективной утилизации.

1.2 Биохимический состав рыбных отходов.

1.3 Основные способы эффективной утилизации вторичного и малоценного первичного рыбного сырья.

1.3.1. Комплексная рациональная переработка.

1.3.2 Получение белоксодержащих продуктов кормового назначения.

1.3.3 Получение белоксодержащих продуктов пищевого назначения.

1.4 Гидролиз вторичного и малоценного первичного рыбного сырья.

1.5 Гистидиндекарбоксилазы.

1.5.1 Систематическое положение фермента.

1.5.2 Микроорганизмы-продуценты гистидиндекарбоксилаз.

1.5.4 Особенности гистамина и его применение.

1.5.5 Способы получения гистамина.

Глава 2 Материалы и методы.

2.1 Приборы, расходные материалы, лабораторная посуда и химические реактивы, используемые в работе.

2.1.1 Приборы.

2.1.2 Расходные материалы, лабораторная посуда.

2.1.3 Химические реактивы.

2.2 Питательные среды (ПСр), используемые в работе.

2.3 Вторичное рыбное сырье.

2.4 Микроорганизмы.

2.5 Источники выделения продуцентов гистидиндекарбоксилаз.

2.6 Методы.

2.6.1 Определение массовой доли влаги.

2.6.2 Определение массовой доли золы.

2.6.3 Определение массовой доли белковых веществ.

2.6.3.1 Метод определения массовой доли белка по Кьельдалю.

2.6.3.2 Метод определения массовой доли сырого протеина по Несслеру.

2.6.4 Определение содержания белка по методу Лоури.

2.6.5 Определение массовой доли жира.

2.6.6 Экстракция липидов из вторичного рыбного сырья.

2.6.6.1 Выбор экстрагента.

2.6.6.2 Выбор условий экстракции.

2.6.7 Определение жирнокислотного состава липидов сырья.

2.6.8 Получение сухого белкового препарата.

2.6.9 Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), дрожжей и плесневых грибов.

2.6.10 Определение молекулярной массы белковых молекул.

2.6.10.1 Метод горизонтального электрофореза.

2.6.10.2 Гель-фильтрация.

2.6.11 Определение аминокислотного состава.

2.6.12 Определение функциональных свойств белков.

2.6.13 Определение сорбционной способности белковых продуктов.

2.6.14 Экстракция белка из гомогенизированной массы рыбных отходов

2.6.15 Осаждение белков из раствора.

2.6.15.1 Осаждение трихлоруксусной кислотой.

2.6.15.2 Осаждение органическими растворителями.

2.6.15.3 Изоэлектрическая преципитация.

2.6.16 Методика изготовления кулинарных изделий из рубленного мяса с введением в рецептуры белкового полуфабриката (БП) и пищевого белкового концентрата (ПБК).

2.6.17 Методика изготовления крабовых палочек с введением в рецептуру разработанного белкового полуфабриката.

2.6.18 Методика изготовления протеиновых печений с введением в рецептуру разработанного пищевого белкового концентрата.

2.6.19 Выбор ферментного препарата для протеолиза белкового продукта

2.6.20 Определение протеолитической активности ферментных препаратов.

2.6.21 Выбор условий проведения ферментолиза.

2.6.22 Методика проращивания семян.

2.6.23. Автолиз вторичного рыбного сырья.

2.6.24 Скрининг микроорганизмов-продуцентов гистидиндекарбоксилаз

2.6.25 Колориметрический метод количественного определения гистамина в фильтрате культуральной жидкости.

2.6.26 Колориметрический метод определения гистидиндекарбоксилазной активности.

2.6.27 Изучение культуральных и физиолого-биохимических свойств продуцента.

2.6.27.1 Морфология клетки.

2.6.27.2. Культуральные признаки.

2.6.27.3.Физиолого-биохимические свойства.

2.6.27.4 Филогенетические особенности культуры.

2.6.28 Выращивание культур микроорганизмов.

2.6.28.1. Выращивание культур микроорганизмов в условиях глубинной ферментации.

2.6.28.2. Выращивание культур микроорганизмов поверхностным способом.

2.6.29 Определение количества клеток высевом на плотные питательные среды (метод Коха).

2.6.30 Осаждение ферментов органическими растворителями.

2.6.31 Выделение гистамина с помощью ионообменной хроматографии

2.6.32 Проведение УФ-индуцированного мутагенеза.

2.6.33 Математические методы планирования эксперимента.

2.6.33.1 Метод Гаусса-Зейделя.

2.6.33.2 Регрессионный анализ.

Глава 3 Экспериментальная часть.

3.1 Исследование биохимического состава вторичного рыбного сырья.

3.2 Разработка технологии кормового белкового концентрата из вторичного рыбного сырья.

3.2.1 Обоснование эффективных условий экстракции липидов из вторичного рыбного сырья.

3.2.1.1 Выбор эффективного экстрагента липидов.

3.2.1.2 Выбор эффективных условий экстракции липидов.

3.2.2. Определение жирнокислотного состава липидной фракции.

3.2.3 Получение сухого кормового белкового концентрата (КБК).

3.2.4 Оценка фракционного состава белков готового КБК.

3.2.5 Оценка аминокислотного состава белков готового КБК.

3.2.6 Оценка функциональных свойств белков готового КБК.

3.2.7 Оценка сорбционной способности КБК по отношению к микроорганизмам.

3.3 Разработка технологии пищевого белкового концентрата из вторичного рыбного сырья.

3.3.1 Экстракция белка из гомогенизированной массы рыбных отходов

3.3.2 Осаждение белка из раствора.

3.3.3 Оценка биохимических и микробиологических показателей БП.

3.3.4 Утилизация отходов, образующихся после экстракции белка из вторичного рыбного сырья.

3.3.5 Определение жирнокислотного состава липидной фракции.

3.3.6 Получение сухого пищевого белкового концентрата.

3.3.7 Оценка фракционного состава белков готового ПБК.

3.3.8 Оценка аминокислотного состава белков готового ПБК.

3.3.9 Оценка функциональных свойств белков готового ПБК.

3.3.10 Оценка сорбционной способности ПБК по отношению к микроорганизмам.

3.3.11 Апробация БП, ПБК в составе рецептур при изготовлении пищевых продуктов.

3.3.11.1 Изготовление и оценка характеристик кулинарных изделий из рубленного мяса и рыбы.

3.3.11.2 Изготовление и оценка характеристик крабовых палочек.

3.3.11.3 Изготовление протеиновых печений на основе ПБК.

3.4 Разработка технологий аминокислотных смесей на основе КБК и ПБК

3.4.1 Выбор наиболее эффективного ферментного препарата для интенсификации гидролиза белков вторичного рыбного сырья в составе ПБК

3.4.2 Выбор условий протеолиза белков ПБК.

3.4.3 Получение жидкого прикорма для растений.

3.4.4 Получение сухой аминокислотной смеси.

3.4.5 Оценка аминокислотного состава сухого ферментолизата.

3.4.6 Интенсификация процесса фементолиза ПБК.

3.5 Разработка биотехнологии гистидиндекарбоксилазы.

3.5.1 Скрининг микроорганизмов-продуцентов гистидиндекарбоксилаз

3.5.2 Исследование морфологических, культуральных и физиолого-биохимических признаков бактериального изолята КЛ13.

3.5.2.1 Морфология клетки.

3.5.2.2 Культуральные признаки изолята КЛ13.

3.5.2.3 Физиолого-биохимические признаки изолята КЛ13.

3.5.2.4 Идентификация штамма КЛ13 до вида с помощью анализа 16Б рРНК.

3.5.3 Изучение влияния количества добавляемого в ПСр гистидина на концентрацию гистамина в фильтрате КЖ и активность фермента гистидиндекарбоксилазы, синтезируемого Bacillus licheniformis KJI13.

3.5.4 Влияние pH исходной ПСр на активность фермента гистидиндекарбоксилазы, синтезируемого Bacillus licheniformis KJI13.

3.5.5 Изучение влияния длительности культивирования В. licheniformis KJI13 на накопление гистамина в фильтрате КЖ и активность фермента гистидиндекарбоксилазы.

3.5.6 Влияние возраста посевного материала на накопление гистамина в фильтрате КЖ и активность фермента гистидиндекарбоксилазы.

3.5.7 Влияние микроэлементов на биосинтез гистидиндекарбоксилазы штаммом В. licheniformis KJI13.

3.5.8 Влияние посевной дозы на биосинтез гистидиндекарбоксилазы штаммом В. licheniformis KJI13.

3.5.9 Изучение путей повышения активности гистидиндекарбоксилазы В. licheniformis КЛ13.

3.5.9.1 Влияние условий подготовки посевного материала на активность гистидиндекарбоксилазы.

3.5.9.2 Влияние УФ-индуцированного мутагенеза В.licheniformis KJ113 на активность гистидиндекарбоксилазы.

3.5.10 Осаждение гистидиндекарбоксилазы В.licheniformis KJI13 из культуральной жидкости.

3.5.11 Очистка гистидиндекарбоксилазы В.licheniformis KJI13.

3.5.12 Конструирование альтернативной питательной среды на основе КБК для получения фермента гистидиндекарбоксилазы.

3.5.13 Выбор эффективных условий ферментативной конверсии гистидина ферментным препаратом гистидиндекарбоксилаза Г10Х.

3.5.14 Получение гистамина на основе ферментативной конверсии гистидина в жидкой аминокислотной смеси.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка комплексной технологии биологически активных веществ на основе конверсии вторичного рыбного сырья"

Актуальность темы

В таких странах, как Исландия, Норвегия, Финляндия, Япония давно эффективно функционируют заводы по комплексной переработке рыбы [58]. В нашей стране в настоящее время такие заводы отсутствуют, несмотря на то, что объемы вторичного рыбного сырья (отходов и неиспользуемого улова) в России ежегодно достигают 800 тыс. т., что составляет до 20% от общего улова. Утилизация подобного сырья осуществляется крайне нерационально: сжигание, захоронение, несанкционированный сброс в окружающую среду. Наиболее распространенным методом является захоронение, что ведет к безвозвратной потере до 90% полезной продукции, имеющей реальный спрос на рынке [95].

Настоящая работа посвящена разработке комплексной технологии переработки вторичного рыбного сырья, позволяющей получить ряд стратегически необходимых белоксодержащих продуктов, аминокислотных смесей и других полезных веществ на их основе (в частности, гистамина) для применения в пищевой, сельскохозяйственной и фармацевтической отраслях.

Цель и задачи исследования

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- разработка технологии белкового препарата кормового назначения из вторичного рыбного сырья с предложением наиболее эффективного способа экстракции липидов;

- предложение сфер применения продуктов, получаемых введением в их состав разработанных добавок;

- разработка биотехнологии ферментного препарата гистидиндекарбоксилазы, позволяющего трансформировать гистидин из аминокислотной смеси в гистамин на основе нового перспективного штамма, выявленного путем скрининга; разработка с использованием полученного препарата гистидиндекарбоксилазы метода конверсии гистидина в гистамин для его последующего использования в фармацевтической промышленности;

Научная новизна работы

Основываясь на экспериментальных данных и выявленных зависимостях степени ферментативного гидролиза от условий проведения процесса установлен наиболее эффективный режим ферментолиза белковых продуктов и разработана экономически обоснованная технология получения аминокислотных смесей.

Впервые на основе лабораторных исследований и полученных зависимостей накопления новым штаммом В. НсЬешАогпш гистидиндекарбоксилазной активности и выхода гистамина от условий культивирования этого штамма, параметров выделения и очистки ферментного препарата, разработана биотехнология препарата гистидиндекарбоксилазы.

Практическая значимость работы

ТУ 9283-001-02068634-2011 «Концентрат кормовой белковый» (каталожный лист №200/111035);

ТУ 9283-002-02068634-2011 «Концентрат белковый пищевой из рыбы» (каталожный лист № 200/111036);

ТУ 9283-002-02068634-2012 «Аминокислотные смеси на основе белоксодержащих продуктов из рыбы» (каталожный лист № 200/112790).

На ТУ 9283-002-02068634-2011 получено положительное заключение органа Роспотребнадзора (экспертное заключение № 985 от 07 октября 2011 г).

Разработаны Лабораторные регламенты на изготовление пищевого и кормового белкового концентратов.

В лабораторных условиях на кафедре «Технология общественного питания» ФГБОУ ВПО «МГУПП» осуществлено изготовление рубленного кулинарного изделия из рыбы, рубленного кулинарного изделия из мяса, крабовых палочек, протеиновых печений для спортивного питания с введением в их состав белкового концентрата или полуфабриката. Применяемые добавки не оказывают негативного влияния на микробиологические и органолептические показатели готовых изделий. Применительно к рубленным изделиям было зафиксировано улучшение цвета и структуры продукта по сравнению с рецептурой, содержащей соевый изолят. Результаты подтверждены актом лабораторных испытаний (утвержден проректором по научной работе ФГБОУ ВПО «МГУПП» 05.09.12).

Использование разработанного белкового полуфабриката при изготовлении крабовых палочек снижает их себестоимость. Применяемая добавка не оказывает негативного влияния на органолептические, микробиологические и физико-химические показатели готового изделия. Результаты подтверждены актом о дегустации (утвержден генеральным директором ООО «HCT плюс» 15.07.2012).

На основе наиболее перспективного штамма Bacillus licheniformis KJ113, полученного в результате скрининга микроорганизмов-продуцентов гистидиндекарбоксилаз, разработана биотехнология препарата гистидиндекарбоксилазы Г20Х и проведена наработка опытной партии в ООО «Зеленые линии». Результаты подтверждены актом о наработке (утвержден генеральным директором ООО «Зеленые линии» 20.08.2012 ).

Штамм бактерий Bacillus licheniformis KJI13 депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-11185.

С использованием ферментолизата белков рыбных отходов и препарата гистидиндекарбоксилазы, полученного на основе нового штамма-продуцента Bacillus licheniformis KJI13, разработана биотехнология гистамина, применимого в производстве фармацевтической продукции.

Разработанная комплексная технология позволяет не только получить белковые продукты, аминокислотные смеси и препарат гистамина, но и решить экологические проблемы, возникающие при утилизации рыбных отходов. При этом, низкая себестоимость и высокие физико-химические показатели готовых изделий позволяют им составить реальную конкуренцию на рынке таким традиционным добавкам, как рыбная мука и соевый изолят.

Апробация работы

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Устинова, Юлия Вадимовна

Выводы.

4. На основании исследования функциональных свойств белков КБК и ПБК подтверждена возможность их использования в составе кормов и продуктов питания, соответственно, в качестве биологически активной добавки и с лечебно-профилактическими целями.

6. Экспериментально установлено, что полученные аминокислотные смеси обладают повышенной биологической ценностью (содержание незаменимых аминокислот более 44 %) по сравнению с гидролизатами рыбного и соевого белка.

7. Результаты скрининга более 60 изолятов микроорганизмов позволили выявить культуру, обладающую максимальной гистидиндекарбоксилазной активностью

8. Разработана биотехнология гистидиндекароксилазы Г20Х с использованием стадий ультрафильтрации и спиртового осаждения. Активность гистидиндекарбоксилазы Г20Х составила 1087 ед/г.

9. Разработана технология получения гистамина из аминокислотной смеси после протеолиза КБК с использованием нового ферментного препарата гистидиндекарбоксилазы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата технических наук, Устинова, Юлия Вадимовна, Щёлково

1. Аверьянова Н.Д. Биопродукты на основе гидробионтов и их функциональная значимость / Н.Д. Аверьянова, М.Е. Цибизова // Вестник АГТУ. -2008. 44, №3.-С. 115-119.

2. Анисимова И.Н. Применение методов регрессионного анализа для оценки рыночной стоимости в среде MS Excel / И.Н. Анисимова // Вестник Хакасского государственного университета им. Н.Ф. Катанова. Серия 1: Информатика. 2003. -№ 5. - С.14-18.

3. Антуфьев В.Т. Современные способы размораживания / В.Т. Антуфьев,

4. B.В. Пеленко, О.В. Бычихин // Процессы и аппараты пищевых производств. 2007.- №1. С. 43-47.

5. Байдалинова JI. С. Биотехнология морепродуктов / JI.C. Байдалинова, А.

6. C. Лысова, О. Я. Мезенова М.: Мир, 2006. - 560 с.

7. Баранов В.В. Производство кормовой продукции из рыбного сырья: учеб. пособие для мех.-технол. фак. / В.В. Баранов, И.П. Ковалёва. Калининград, 1986.103 с.

8. Бацунова Г.Е. Дефростация рыбной продукции / Г.Е. Бацунова // Рыбпром. 2009. - №4. - С. 22-24.

9. Безусов А.Т. Рыбная костная ткань как источник ценных бытовых и минеральных веществ / А.Т. Безусов, Б.Л. Флауменбаум, Л.Б. Добробабина // Химические превращения пищевых параметров: всесоюзная конференция / КГТУ. -Калининград, 1991.-С. 136.

10. Белоусова C.B. Совершенствование технологии получения белковых гидролизатов и их использование при производстве рыборастительных продуктов: дис. канд. техн. наук : 05.18.01, 05.18.04 / Белоусова Светлана Викторовна. -Краснодар, 2009. 170 с.

11. Березов Т. Т. Биологическая химия: учебник / Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровкин; под ред. акад. АМН СССР С.С. Дебова. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1990. - 528 с.

12. Блекбэрн К. де В. Микробиологическая порча пищевых продуктов / К. де В. Блекбэрн. Пер. с англ. - СПб.: Профессия, 2008, - 784 с.

13. Богданов В.Д. Общие принципы переработки сырья и введение в технологии производства продуктов питания : учебное пособие / В.Д. Богданов, В.М. Дацун, М.В. Ефимова. Петропавловск-Камчатский: КамчатГТУ, 2007. - 213 с.

14. Боева Н.П. Совершенствование технологии кормовых продуктов и жиров из гидробионтов / Н.П. Боева, Ф.М. Ржавская // Доклад на научно-техническом симпозиуме выставки «Инрыбпром 90». — Ленинград, 1990. — 9 с.

15. Вайсфельд И.Л. Гистамин в биохимии и физиологии / И.Л. Вайсфельд, Г. Н. Кассиль. -М.: 1981. 277 с

16. Васильева Т.Г. Гистаминотерапия в комплексном лечении хронической рецидивирующей крапивницы / Т.Г. Васильева . М.: 1988. - 25с.

17. Войно Л.И. Методические указания к выполнению лабораторных работ по разделу «дрожжи» курса «Микробиология» / Л.И. Войно. М.: МГУПП, 1999. -19 с.

18. Галь Э. Электрофорез в разделение биологических макромолекул / Э. Галь, Г. Медьеши, Л. Верецкеи. Пер. с англ. - М: Мир, 1982. - 446 с.

19. ГН 2.1.6.1338-03 Предельно допустимые концентрации (ПДК) загрязнающих веществ в атмосферном воздухе населенных мест. Введ. 2003-06-25. -64 с.

20. Гончар H.A. Торможение бактериальной гистидиндекарбоксилазы производными гидроксиламина / H.A. Гончар, С.Р. Мардашев // Биохимия. 1970. -Т. 35, №2.-С. 224-228.

21. ГОСТ 10444.15-94 Продукты пищевые. Методы определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов. Введ. 1996-01-01. -М.: Издательство стандартов, 2010. - 7 с.

22. ГОСТ 13979.6-69 Жмыхи, шроты и горчичный порошок. Метод определения золы. Введ. 1970-01-01. - М.: Изд-во стандартов, 2002. - 4 с.174

23. ГОСТ 2116-2000. Мука кормовая из рыбы, морских млекопитающих, ракообразных и беспозвоночных. Технические условия. Введ. 2003-01-01. - М. Издательство стандартов, 2004. - 7с.

24. ГОСТ 28805-90 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества осмолетарных дрожжей и плесневых грибов. Введ. 1993-01-01. - М.: Издательство стандартов , 2010. - 4 с.

25. ГОСТ 4288-76 Изделия кулинарные и полуфабрикаты из рубленного мяса. Правила приемки и методы испытаний. Введ. 1977-01-01. — М.: Издательство стандартов , 2004. - 16 с.

26. ГОСТ 4570-93 Конфеты. Общие технические условия. Введ. 1995-01-01.- М.: Издательство стандартов , 2008. — 12 с.

27. ГОСТ 7636-85 Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки. Методы анализа. Введ. 1986-01-01. - М.: Изд-во стандартов, 2004. - 87 с.

28. ГОСТ Р 51483-99 Масла растительные и жиры животные. Определение методом газовой хроматографии массовой доли метиловых эфиров индивидуальных жирных кислот к их сумме. Введ. 2001-01-01. - М.: Издательство стандартов , 2005.-11 с.

29. Грачева И.М. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов: учебное пособие для вузов / И.М. Грачева, Ю.П. Грачев, М.С. Мосичев.- М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. 240с.

30. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов / И.М. Грачева, А.Ю. Кривова. 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Изд-во «Элевар», 2000. - 512 с.

31. Дарбре А. Практическая химия белка / А. Дарбре. М.: Мир, 1989 - 623 с.

32. Егорова Л.Н. Производство кормовой муки, стабилизированной антиокислителем / Л.Н. Егорова, В.И. Трещёва. М.: Пищевая промышленность, 1971. —39 с.

33. Емельянов A.A. Имитационное моделирование экономических процессов: Учеб.пособие / A.A. Емельянов, Е.А. Власова, Р.В. Дума. -М.: Финансы и статистика, 2002. 368 с.

34. Зайцев В.П. Комплексное использование морских организмов / В.П. Зайцев, И.С. Ажгихин, В.Г. Гандель. М.: Пищевая промышленность, 1980. - 280 с.

35. Занкевич И.Г. Аналитическая химия. В 3 т. Т2. Методы разделения веществ и гибрилные методы анализа: учеб.для студ.высш.учеб.заведени / И.Г. Занкевич. М.: Издательский центр «Академия», 2008. - 304 с.

36. Зарудий Ф.С. Гистамин и противогистаминные средства / Ф.С. Зарудий. -Уфа, 1995.-244 с.

37. Иванова J1.A. Методические указания к лабораторному практикуму по дисциплине "Технология комбинированных пищевых систем, аналогов и лечебно-профилактических продуктов" / JI.A. Иванова, Н.В. Рыжова. М. Издательский комплекс МГУПП, 2006 - 46 с.

38. Иванова JI.A. Пищевая биотехнология. Переработка растительного сырья / Л.А. Иванова, Л.И. Войно, И.С. Иванова; под ред. И.М. Грачевой. М.: КолосС, 2008 г. - 472 с.

39. Исаев В.А. Кормовая рыбная мука / В.А. Исаев М.: Агропромиздат, 1985. — 189 с.

40. Касьянов Г.И. Сушка сырья и производство сухих завтраков / Г.И. Касьянов, Г.В. Семенов, В.А. Грицких, Т.Л. Троянова М.: Март, 2004. - 160 с.

41. Кизеветтер И.В. Технологическая химическая характеристика промысловых рыб тихоокеанского бассейна / И.В. Кизеветтер Владивосток: Дальиздат, 1971.-297 с.

42. Кильмаев A.A. Пути интенсификации ферментативного гидролиза рыбного сырья / A.A. Кильмаев, Р.Г. Разумовская // Вестник АГТУ. 2008. - 44, №3. -С. 99-102.

43. Киричко H.A. Разработка технологии кормовых продуктов на основе вторичных сырьевых ресурсов: дис. канд. тех. наук : 05.18.04 : защищена 23.09.05 / Киричко Наталья Александровна. Астрахань, 2005. - 269 с.

44. Колпакова В. В. Растворимость и водосвязывающая способность белковой муки из пшеничных отрубей / В.В. Колпакова, А.П. Нечаев // Известия вузов. Пищевая технология. 1995. - №1-2. - С. 31-33.

45. Комов В.П. Биохимия: учеб. для вузов / В.П. Комов. 2-е изд., испр. - М.: Дрофа, 2006. - 638 с.

46. Коновалов K.J1. Продукты функционального назначения / K.JI. Коновалов, М.Т. Шулбаева // Продукты питания и рациональное использование сырьевых ресурсов: Сб. науч. работ / Кемерово: Изд-во Кемер. технол. ин-та пищ. пром-сти, 2005. Вып.10. - С. 198.

47. Коробова Л.Н. Гистамин в крови и тканях при гипероксии: дис. канд. биол. наук : 03.00.04 / Коробова Людмила Николаевна. Ростов-на-Дону, 1983. -193 с.

48. Косарина Е.Б. Разработка и научное обоснование технологии получения рыбного гидролизата-основы белковой зернистой икры: дис. канд. тех. наук : 05.18.07 / Косарина Елена Борисовна. Москва, 2004. - 209 с.

49. Костюрин К.В. Изучение ферментативной кинетики протеинсодержащего сырья как основополагающего биотехнологического процесса при получении новых продуктов / К.В. Костюрин, М.Е. Цибизова // Вестник АГТУ. 2007. - 38, №3. - С. 125-129.

50. Кудряшева A.A. Секреты хорошего здоровья и активного долголетия / A.A. Кудряшева. М.: Пищпромиздат, 2000. - 320 с.

51. Куранова JI.K. Разработка технологии аналоговых продуктов из водных биоресурсов северного бассейна: дис. канд. техн. наук : 05.18.04 : защищена 15.11.10 / Куранова Людмила Казимировна. Мурманск, 2010. - 217 с.

52. Куцакова В.Е. Кинетика гидролиза белоксодержащих отходов / В.Е. Куцакова, А.Л. Ишевский, В.В. Леваков и др. // Хранение и переработка сельхозсырья. 2002. - №12. - С. 31-33.

53. Куцакова В.Е. Кинетика гидролиза белоксодержащих продуктов животного происхождения / В.Е. Куцакова, В.В. Леваков, A.B. Белова // Мясная индустрия. 2002. - №12. - С.43-45.

54. Лебедев А.П. Возможность получения и применения ВМД из отходов переработки рыбы в приготовлении комбинированной фаршевой смеси / А.П. Лебедев, Л.В. Вериалов // Естественные и технические науки. 2008. - №5. - С. 343-345.

55. Лея Ю.Я. рН-метрия желудка / Ю.Я. Лея. Л.: Медицина, 1987. - 144 с.

56. Лизин одна из важнейших незаменимых аминокислот в обеспечении полноценного питания / A.C. Фаустов, М.И. Чубирко, О.В. Бобрешова и др.; под общ. Ред. A.C. Фаустова. - Воронеж: Воронежский государственный университет, 2003.-88 с.

57. Лисовой В.В. Отходы переработки товарной прудовой рыбы как дополнительный сырьевой источник получения животного белка / В.В. Лисовой, Е.Е Иванова // Известия КГТУ. 2010. - №10. - С. 57-60.

58. Максимова Е.М. Разработка технологии утилизации белковых отходы методом ферментативного гидролиза / Е.М. Максимова // Вестник МГТУ. 2006. -Т.9, №5. - С. 875-879.

59. Мардашев С.Р. Очистка микробной гистидиндекарбоксилазы / С.Р. Мардашев, В.В. Мамаева // Микробиология. 1961. - Т. 30, вып. 3.

60. Мардашев С.Р. Получение кристаллической гистидиндекарбоксилазы / С.Р. Мардашев // Докл. АН СССР. 1964. - Т. 156. - С. 465-466.

61. Махнач Е.В. Использование продуктов ферментолиза рыбного сырья в технологии мучных кондитерских изделий профилактического назначения / Е.В. Махнач, И.А. Бессмертная // Известия КГТУ. 2010. - № 18. - С. 96-102.

62. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Пособие для врачей: справочник / М.Д. Машковский. 15-е изд. - М.: "Новая Волна", 2005. - 1164 с.

63. МУК 4.1.002-095 Использование биохимических методов исследования при токсиколого гигиенической оценке образцов химической продукции. - 1995.

64. Нетрусов А.И. Практикум по микробиологии: учебное пособие для студентов высших учебных заведений / Нетрусов А.И, Егорова М.А., Захарчук Л.М. и др.; под ред. А.И. Нетрусова. М.: Академия, 2005. - 608 с.

65. Нечаев А.П. Пищевые добавки / А.П. Нечаев, A.A. Кочеткова, А.Н. Зайцева. М.: Колос, 2001. - 256 с.

66. Ноздрина В.А. Методические указания к выполнению организационно-экономической части дипломного проекта (для студентов специальности 240901 (070100) "Биотехнология" / В.А. Ноздрина. М.: Издательский комплекс МГУ1111, 2006-24 с.

67. Орел Н.М. Биохимия липидов: практикум для студентов биол. фак. спец. 1-31 01 01 «Биология», специализации 1-31 01 01 -05 «Биохимия» / Н.М. Орел. -Минск: БГУ, 2007. 35 с.

68. Остерман JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот: электрофорез и ульрацентрифугирование / JI.A. Остерман. М.: Наука, 1981. - 288 с.

69. Палагина В.М. Продукты функционального питания на основе вторичного сырья рыбопереработки / В.М. Палагина, О.В. Волошина, A.A. Набокова // Рыбная промышленность. 2005. - №1. - С. 28-30.

70. Папунашвили Г.А. Способ производства кормовой рыбной муки / Г.А. Папунашвили, К.А. Мрочков // Рыбное хозяйство. 1989. - № 2. - С. 79-81.

71. Патласов В.П. Регенерация растворителей органо-сольвентной варки древесины / В.П. Патласов, А.Н. Трофимов, Л.Д. Каплун, В.А. Чупрова, А.И. Михайлов // Химия растительного сырья. 2000. - №2. - С. 29-35.

72. Перебейнос A.B. Обоснование принципов регулирования технологии многокомпонентных кормовых продуктов из гидробионтов: дис. док. техн. наук : 05.18.04 / Перебейнос Анатолий Васильевич. М., 1996. - 409 с.

73. Петушкова Е.В. Большая Советская энциклопедия: в 30 т. 3-е изд. - М., 1969-1978.

74. Полыгалина Г.В. Определение активности ферментов / Г.В. Полыгалина, B.C. Чередниченко, JI.B. Римарева. М.: ДеЛи, 2003. - 372 с.

75. Разумовская Р.Г. Исследование и разработка технологии получения гидролизатов, белковой массы и концентратов из мелкой рыбы и криля: автореф. дис.канд.тех.наук. -М.: ВНИРО, 1983. 24 с.

76. Рапопорт С.И. pH метрия пищевода и желудка при заболеваниях верхних отдеов пищеварительного тракта / С.И. Рапопорт, A.A. Лакшин, Б.В. Ракитин, М.М. Трифонов; под ред. акад. РАМН Ф.И. Комарова. - М.: ИД МЕДПРАКТИКА-М, 2005. - 208 с.

77. Романцев Ф.Е. Функциональные свойства и закономерности структурной оранизации гистидиндекарбоксилазы и каталазы из Micrococcus sp.n.: дис. канд. биол. Наук : 03.00.04 / Романцев Федор Евгеньевич. М., 1984. - 172 с.

78. Руководство Р 4.1.1672-03. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Введ. 2003-06-30. - М.:, 2004. - 240 с.

79. Рыбохозяйственные исследования на Каспии: результаты НИР за 2006 г. / Редкол.: Каршок М.И. и др. Астрахань: Изд-во КаспНИРХ, 2007. - 629 с.

80. СанПиН 2.3.2.1078-01 "2.3.2. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. Введ. 2001-11-14. - М.: ФГУП «ИнтерСЭН», 2002. - 168 с.

81. Северин Е.С. Биохимия: учеб.для вузов / Е.С. Северин. М.: ГЭОТАР-Медия, 2003. - 779 с.

82. Семина JI.А. Очистка и кристаллизация микробной гистидиндекарбоксилазы / Л.А. Семина, С.Р. Мардашев // Биохимия. 1965. - Т.30, №1.

83. Скорухина И.М. Современные технологии переработки отходов / И.М. Скорухина // Профессиональный журнал «Рыбпром». 2010. - №2. - С. 98-99.

84. Скоупс Р. Методы очистки белков / Р. Скоупс. Пер. с англ. - М.: Мир, 1985.-358 с.

85. Ступин В.А. Нарушения секреторной функции желудка при язвенной болезни. Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии / В.А. Ступин, C.B. Силуянов // Научно-практический журнал. 1997. - т.7, №4. - С. 23-28.

86. Телишевская Л.Я. Белковые гидролизаты. Получение, состав, применение / Л.Я. Телишевская; под ред. А.Н. Панина. М.: Аграрная наука, 2000. - 295 с.

87. ТУ 15-02-537-89 Крабовые палочки. Полуфабрикат для предприятий общественного питания. Введ. 1989-07-20.

88. ТУ 15-03-467-89 Фарш рыбный пищевой мороженый для производства "крабовых палочек". Введ. 1989-05-11. Номер в книге учета 145/368156.

89. Тырсин Ю.А. Методические указания к выполнению лабораторных работ по курсу "Специальная биохимия" / Ю.А. Тырсин, Л.А. Иванова, А.Ю. Кривова. -М.: Издательский центр МГАПП, 1993 66 с.

90. Утеушев P.P. Разработка технологии комплексной переработки панцирьсодержащего сырья из ракообразных волго-каспийского региона: дис. канд. техн. наук : 05.18.04 : защищена 08.06.06 / Утеушев Ренат Рахметуллаевич. -Москва, 2006. 265 с.

91. Фатыхов Ю.А. Технология пищевой добавки из рыбной кости: результаты исследования / Ю.А. Фатыхов, А.Э. Суслов, A.B. Мажаров // Вестник МГТУ. 2010. - Том 13, № 4/1. - С. 665-672.

92. Федеральное агентство по рыболовству. URL: http://www.fish.gov.ru/

93. Функциональные пищевые продукты. Введение в технологии / А.Ф. Доронин, Л.Г. Ипатова, A.A. Кочеткова и др.; под ред. А.А Кочетковой. М.: ДеЛи принт, 2009. - 288 с.

94. Хабибуллин С.С. Популяционная вариабельность микроорганизмов: дис. канд. биол. наук : 03.00.23 / Хабибуллин Самат Сиринович. Москва, 2007. - 150 с.

95. Цибизова М.Е. Интенсификация процессов автобиотрансформации рыбного сырья / М.Е. Цибизова, Д.С. Язенкова, Н.Д. Аверьянова // Вестник АГТУ. Сер.: Рыноехозяйство.-2009.-№1.-С. 176-180.

96. Цибизова М.Е. Использование рыбного белка в сбалансированном питании / М.Е. Цибизова, Н.Д. Аверьянова // Вестник АГТУ. Сер.: Рыбное хозяйство. 2009. - №1. - С. 166-169.

97. Цибизова М.Е. Исследование возможности биотрансформации рыбного сырья как основного компонента биопродуктов / М.Е. Цибизова, Н.Д. Аверьянова, Д.С. Язенкова // Вестник АГТУ. Сер.: Рыбное хозяйство. 2009. - №1. - С. 170-175.

98. Цибизова М.Е. Концепция рационального питания и проектирование функциональных продуктов из гидробионтов / М.Е. Цибизова, A.A. Кильмаев // Вестник АГТУ. 2005. - 26, №3. - С. 173-178.

99. Цибизова М.Е. Маломерное сырье и отходы от разделки промысловых рыб потенциальное сырье для получения функционально значимых компонентов пищи / М.Е. Цибизова // Вестник АГТУ. Сер.: Рыбное хозяйство. - 2010. - №2. - С. 130-137.

100. Цибизова М.Е. Рыбная белковая масса основной компонент зерновых биокрипсов / М.Е. Цибизова, Н.Д. Аверьянова // Вестник АГТУ. Сер.: Рыбное хозяйство. - 2009. - №2. - С. 114-120.

101. Цибизова М.Е. Рыбные гидролизаты как один из компонентов полнорационных кормов для птицеводства / М.Е. Цибизова, К.В. Косюрина // Вестник АГТУ. 2006. - 32, №3. - С. 243-249.

102. Цибизова М.Е. Сухие завтраки на основе рыбного белка и их биологическая доступность / М.Е. Цибизова // Вестник АГТУ. 2008. - 44, №3. - С. 93-98.

103. Черногорцев А.П. Технология получения новых белковых продуктов: учеб. пособие для вузов / А.П. Черногорцев, Р.Г. Разумовская Мурманск, 1999. -97 с.

104. Швицер Ю. Производство химико-фармацевтических и техно-химиечских препаратов / Ю. Швицер. М.-Л.: ОНТИ НКТП СССР, 1934 г. - 485 с.

105. Ширшова Т.И. Экстракция как метод выделения биологически активных соединений: краткий обзор / Т.И. Ширшова // Вестник института биологии Коми НЦ УрО РАН. 2002. - № 57. - С. 41-42.

106. Шкатов Е.Ф. Промышленная и санитарная очистка газов нфтепереработки от сероводорода / Е.Ф. Шкатов, Я.С. Анципович. М.: ЦНИИТЭнефтехим, 1970. - 111с.

107. Ярочкин А.П. Комплексная переработка минтая / А.П. Ярочкин // Рыбное хозяйство. 2000. - № 1. - С. 62-64.

108. Aberoumad A. Chemical and proximate composition properties of different fish species obtained from Iran / A. Aberoumad, K. Pourshafi // World Journal of fish and Marine Sciences. 2010. - 2, №3. - Pp. 237-239.

109. Agriculture Science Research Paper. URL: http://www.agrpaper.com/

110. Alqadi R. An efficient parallel Gauss-Seidel algorithm for the solution of load flow problems / R. Alqadi, M. Khammash // The International Arab Journal of Information Technology. 2007. - Vol.4, №2. - Pp.148-152.

111. Arason S. Maximum resource utilization value added fish by-products: project number 04275 / Nordic Innovation centre; S. Arason, M. Karlsdottir, T. Valsdottir, R. Slyzyte, T. Rustad, E. Falch, J. Eysturskard, G. Jakobsen. - 2009.

112. Arason S. Utilization of Fish Byproducts in Iceland. Advances in Seafood Byproduct / S. Arason // Alaska Sea Grant College Program, AK-SG-03-01, 2003.

113. Ariyawansa S. The evaluation of functional properties of fish meal / S. Ariyawansa // Fisheries Training Programme: Sri Lanka. United Nations University, 2000.-P. 25.

114. Asgeirsson B. Purification and characterization of trypsin from poikilotherm Gadus morhua / B. Asgeirsson, J.W. Fox, J.B. Bjarnason // European Journal of Biochemistry. 1980. - №180. - Pp. 85-94.

115. Aslim B. Determination of some properties of Bacillus isolated from soil / B. Aslim, N. Saglam, Y. Beyatli // Turkish Journal Biology. 2001. - №26. - Pp. 41-48.

116. Batista I. Recovery of protein from fish waste products by alkaline extraction / I. Batista // European Food Research and Technology. 1999. - №210. - Pp. 84-89.

117. Bazinet L. Electroacidification of soybean proteins for production of isolates / L. Bazinet, F. Lamarche, R. Labrecoue // Food Technology. 1997. - Vol. 51, №9. - Pp. 52-60.

118. Berk Z. Technology of production of edible flours and protein products from soybeans / Z. Berk. // FAO agricultural services bulletin №97. Rome, 1992. - P. 178.

119. Bibb W.R. Studies on the amino acid decarboxylases of oral Lactobacilli / W.R. Bibb, W.R. Straughn // Journal of Dental Research. 1953. - 40, №3. - Pp. 454460.

120. Bjornsdottir-Butlera K. Development of molecular-based methods for determination of high histamine producing bacteria in fish / K. Bjornsdottir-Butlera, G.E.

121. Boltona, J. Lee-Ann, P. D. Mc Clellan-Green // Food Microbiology. 2010. Vol. 139, № 3.-Pp. 161-167.

122. Bottone EJ. Bacillus cereus, a volatile human pathogen / EJ. Bottone // Clinical Microbiology Reviews. 2010. - Vol. 23, №2. - Pp. 382-398.

123. Calandra T. Intestinal microbiome, gastroenteritis caused by Escherichia coli and resistant Enterobacteriaceae or the Art of living with our intestines / T. Calandra, D. Lew // Revue Medicale Suisse. 2012. - 338, №8. - Pp. 875-876.

124. De las Rivas B. Improved multiplex-PCR method for the simultaneous detection of food bacteria producing biogenic amines / D. Rivas, B. A. Marcobal, R. Munoz // FEMS Microbiology Letters. 2005. - Vol. 244. - Pp. 367-372.

125. Doughman S.D. Omega-3 fatty acid for nutrition and medicine: considering microalgae oil as a source of EPA and DHA / S.D. Doughman, S. Krupanidhi, C.B. Sanjeevi // Current Diabetes Reviews. 2007. - №3. - Pp. 198-203.

126. Eggerth A. H. The determination of histamine in bacterial cultures / A. H. Eggerth, R. J. Littwin, J.V. Deutsh // Department of Bacteriology. New York. - 1938. -P. 193.

127. Eggerth A.H. The production of histamine in bacterial cultures / A.H. Eggerth // Journal of Bacteriology. 1938. - 37, №2. - Pp. 205-222.

128. Fletcher G.C. Levels of histamine and histamine-producing bacteria in smoked fish from New Zealand markets / G. C. Fletcher, G. Sunners, P. W. C. Veghel // Journal of food Protection. 1998. - Vol. 61. - Pp. 1064-1070.

129. Folch J. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues / J. Folch, M. Lees, S. G. Sloane // Journal of Biological Chemistry. 1957. - 226, №1. - Pp. 497-509.

130. Gehring C.K. Improvement of pellet quality with proteins recovered from whole fish using isoelectric solubilization-precipitation / C.K. Gehring, J. Jaczynski, J.S. Moritz // The Journal of Applied Poultry Research. 2009. - №18. - Pp. 418-431.

131. Geirsdottir M. Protein isolation from herring: project report / Nordisk Innovations Center; M. Geirsdottir. 2006.

132. Green H. Effect of some drugs upon rat brain histamine content / H. Green, R.W. Erickson // International Journal Neuropharmacology. 1964. - №3. - Pp. 315-320.

133. Hakanson R. Mammalian histidine decarboxylase: Intraction between apoenzyme and pyridoxal-5 '-phosphate / R. Hakanson // European Journal of Pharmacology. 1967. - V.l, №5. - Pp. 383-390.

134. Johnston J.N. Protein quality of New Zealand fish meals / J.N. Johnston, C.P. Savage // New Zealand Journal of Technology. 1987. - V. 3, № 1. - Pp. 123-128.

135. Kachaeva E. V. Various jobs of proteolytic enzymes in skeletal muscle during unloading: facts and speculations / E. V. Kachaeva, B. S. Shenkman // Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012. - Vol. 2012. - Pp. 1-15.

136. Kanki M. Klebsiella pneumonia produces no histamine: Raoultella planticola and Raoultella ornithinolytica strains are histamine producers / M. Kanki, T. Yoda, T. Tsukamoto, T. Shibata // Microbiology. 2002. - Vol. 68, № 7. - Pp.3462-3466.

137. Klausen N.K. A rapid method for detection of histamine producing bacteria / N.K. Klausen, H.H. Huss // Food Microbiology. 1987. - Vol. 5. - Pp.137-146.

138. Landete J.M. Update molecular knowledge about histamine biosynthesis by bacteria / J.M. Landete, B. De las Rivas, A. Marcobal, R. Munoz // Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 2008. - Vol.48. - Pp. 697-714.

139. Lowry O.H. Protein measurement with the Folin reagent / O.H. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr, R.J. Randall // Journal of Biological Chemistry. 1951. - Vol. 193.-Pp. 317-325.

140. Madson P.W. Ethanol distillation: the fundamentals / P.W. Madson // The Alcohol Textbook, 4th ed., Nottingham University Press. Nottingham, U.K., 2003. - P. 319-336.

141. Mavromatis P. Modification of nivens medium for the enumeration of histamine-forming bacteria and discussion of the parameters associated with its use / P. Mavromatis, P. C. Quantick // Journal of food Protection. 2002. - Vol. 65. - Pp. 546551.

142. Miller E.L. Available amino acid content of fish meals / E.L. Miller // Fishery Report №92, Food and agricultural organization. Rome, 1970. - P.66.

143. Murphy T.F. Pseudomonas aeruginosa in chronic obstructive pulmonary disease / T.F. Murphy, A.L. Brauer, K. Eschberger, P. Lobbins, L. Grove, X. Cai, S. Sethi // American Journal of Respiratory Critical Care Medicine. 2008. - 177, 8. - Pp. 853860.

144. Musaiger A.O. Chemical composition of raw fish consumed in Bahrain / A.O. Musaiger, R. D'Souza // Pakistan Journal of biological science. 2008. - 11, №1. - Pp. 55-61.

145. National Center for Biotechnology Information. URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/

146. Offeman R.D. Extraction of ethanol with higher alcohol solvents and their toxicity to yeast / R.D. Offeman, S.K. Stephenson, D. Franqui, J.L. Cline, G.H. Robertson, W.J. Orts // Separation and Purification Technology. 2008. - №63. - Pp. 444-451.

147. Palafox H. Protein isolates from jumbo squid (Dosidicus gigas) by pH-shift processing / H. Palafox, J.H. Cordova-Murueta, M.A. Navarrete del Toro, F.l. Garcia-Carreno // Process Biochemistry& 2009. - №44. - Pp. 584-587.

148. Regenstein J.M. Food protein chemistry: introduction for food scientists / J.M. Regenstein, E. Carrie. U.S.: Academic Press Inc., 1984. - 353 p.

149. Rescei P.I. Histidine decarboxylase of Lactobacillus 30a: VI. Mechanism of action and cinetic properties / P.I. Rescei, E.E. Shell // Biochemistry. 1970. - V.9, № 7. -Pp. 1492-1497.

150. Rodwell W. J. The Occurrence and distribution of amino-acid decarboxylases within the genus Lactobacillus / W. J. Rodwell // Cambridge. 1953. - Vol. 8. - Pp. 224232.

151. Rogers E.A. Adhesion by pathogenic corynebacteria / E.A. Rogers, A. Das, H. Ton-That // Advances in Experimental Medicine Biology. -2011. -№715.- Pp. 91-103.

152. Rosenthaler J. Purification and properties of histidine decarboxylase from Lactobacillus 30a / J. Rosenthaler, B.M. Guirard, G.W. Chang, E.E. Snell // Proceedings ofthe National Academy of Science USA. 1965. - V.54, №1. -Pp. 152-158.

153. Schierack P. Composition of intestinal Enterobacteriaceae populations of healthy domestic pigs / P. Schierack, N. Walk, K. Reiter, K.D. Weyrauch, L.H. Wieler // Microbiology. 2007. - Vol. 153, №11. - Pp. 3830-3837.

154. Shaviklo G.H. Evaluation and utilisation of fish protein isolate products : Master Thesis in Food Science / Gholam Reza Shaviklo. Reykjavik, 2008. - 108 p.

155. Thawornchinsombut S. Frozen stability of fish protein isolate under various storage conditions / S. Thawornchinsombut, J.W. Park // Journal of Food Science. 2006. - Vol. 71, №3. - Pp. 227-232.

156. Thawornchinsombut S. Role of ionic strength in biochemical properties of soluble fish proteins isolated from cryoprotected pacific whiting mince / S. Thawornchinsombut, J.W. Park // Journal of Food Biochemistry. 2005. - №29. - Pp. 132-151.

157. Tina N. Surimi-like material: challenges and prospects / N. Tina, H. Nurul, A. Ruzita // International Food Research Journal. 2010. - №17. - Pp. 509-517.

158. Torz A. Analysis of environmental conditions and macro-cations composition (Ca, Mg, Na, K, Sr) in the operculum bones of estuarine fishes in the Pomeranian Bay (Southern Baltic Sea). Oceanological and hydrobiological studies / A. Torz, A. Nedzarek193

159. International Journal of oceanography and hydrobiology. 2010. - Vol. XXXIX, № 1. -Pp. 147-159.

160. Windsor M. Introduction to fishery by-products / M. Windsor, S. Barlow. -London: Fishing News Books Ltd., 1981. 187 p.

161. Yamani M. I. Development of a histidine decarboxylase medium and its application to detect other amino acid decrboxylases / M. I. Yamani, F. Untermann // International Journal of Food Microbiology. 1985. -Vol.2. - Pp. 273-278.

162. Yen C. Biogenic amines and histamine of marlin fillet and spotted mackerel fillet sampled from cafeteria and anchovy from fish market in Keelung / C. Yen, S. Lin, D. Hwang // Journal of Food and Drug Analysis. 2004. - Vol. 12, № 2. - Pp. 128-132.

Информация о работе

Устинова, Юлия Вадимовна
кандидата технических наук
Щёлково, 2012
ВАК 03.01.06

Диссертация

Разработка комплексной технологии биологически активных веществ на основе конверсии вторичного рыбного сырья - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы