Разработка инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза птиц

Бородина, Ольга Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза птиц
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Разработка инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза птиц"

На правах рукописи

Бородина Ольга Владимировна

РАЗРАБОТКА ИНАКТИВИРОВАННОЙ ЭМУЛЬСИОННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА ПТИЦ

03.00.07 - микробиология 03.00.23 - биотехнология

Автореферат

диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саратов - 2005

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор

Ведущая организация: Федеральное Государственное Учреждение "Федеральный

центр токсикологической и радиационной безопасности животных" (ФГУ ФЦТРБ - ВНИВИ) г.Казань Защита диссертации состоится "17" ноября 2005 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 220.061 04 при Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова" по адресу 410005, г. Саратов, ул. Соколовая, 335.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО "Саратовский государственный аграрный университет им Вавилова" по адресу. 410005, г. Саратов, ул. Соколовая, 335.

Автореферат разослан "13" октября 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

ВАСИЛЬЕВ Дмитрий Аркадьевич доктор биологических наук, старший научный сотрудник ПРУНТОВА Ольга Владиславовна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

ШВИДЕНКО Инна Григорьевна доктор биологических наук ТИХОМИРОВА Елена Ивановна

доктор биологических наук

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Пастереллез - одна из важнейших ветеринарных проблем Заболевание у птиц вызывают различные сероварианты пастерелл серогруппы А Значительный экономический ущерб, наносимый птицеводству этой инфекцией, складывается из высокого отхода поголовья, снижения привесов и затрат на проведение профилактических мероприятий (Душук, 1987; Rimler, Rhoades, 1989, Confer, 1993; Селиверстов, 2003).

Как показывает мировой опыт, вакцинация во многих случаях является одним из основных средств борьбы с инфекционными болезнями животных.

В настоящее время в арсенале иммунопрофилактики пастереллеза птиц имеется целый ряд вакцинных препаратов, различающихся по составу, технологии производства, способу применения и эффективности (Schimmel, Winnefeld, 1998; Levings, Henderson, Metz, 1993; Ярцев, 1996).

Важным моментом в технологии изготовления вакцин из убитых возбудителей является инактивация микроорганизмов Для этих целей чаще всего используют формалин. Однако установлено, что формалин не является идеальным инактивантом, так как он может снижать антигенную и иммуногенную активность бактериальных антигенов. Поэтому необходим поиск новых инактивантов, которые не оказывают влияния на протективные антигены.

Одним из возможных решений этого вопроса может быть использование азиридинов

Большинство вакцин против пастереллеза птиц выпускают в виде инактивированных формалином сорбированных и эмульсионных препаратов. Основными недостатками сорбированных вакцин являются:

необходимость многократных инъекций препарата;

относительно большие дозы вакцин.

Применяемые в настоящее время эмульсионные вакцинные препараты превосходят по иммуногенности сорбированные, однако основным препятствием их широкого использования являются:

1)высокая вязкость, затрудняющая их введение при массовой обработке птицы;

2)высокая реактогенность.

Поэтому проведение работ по созданию новых инактивированных вакцин против пастереллеза птиц является актуальной задачей, имеющей научное и практическое значение.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы являлась разработка трехвалентной инактивированной эмульсионной ^«птнтит против расторг"""""1 птиц.

В соответствии с целью были поставлены след

! snräl !

" I i** m

разработать режим инактивации пастерелл аминоэтилэтиленимином; подобрать масляный адъювант и изготовить экспериментальные образцы вакцины против пастереллеза птиц;

разработать метод оценки иммуногенной активности противопастереллезной вакцины по индексу защиты (АО;

определить иммунизирующую дозу, напряженность и продолжительность иммунитета после применения вакцины на курах.

Научная новизна работы. Новизна исследований состоит в том, что в результате проведенных экспериментов:

разработан режим и определены оптимальные параметры инактивации пастерелл аминоэтилэтиленимином;

количественно охарактеризована зависимость кинетики инактивации пастерелл от концентрации инактиванта;

установлена высокая антигенная и иммуногенная активность пастерелл, инактивированных аминоэтилэтиленимином;

разработан метод оценки иммуногенной активности противопастереллезной вакцины по индексу защиты (Л/).

Практическая значимость работы.

На основании полученных результатов разработана нормативно-техническая документация по изготовлению и контролю трехвалентной инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза птиц, утвержденная заместителем директора ФГУ ВНИИЗЖ по НИР 20.07.2005 г.

Апробация работы. Основные материалы исследований по диссертационной работе доложены и обсуждены на.

Международной научно-практической конференции "Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов", Покров, 24-26 сентября 2003 г. Международной научной конференции молодых ученых "Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных", Владимир, 24-26 марта 2004 г.

Всероссийской научно-практической конференции "Современное развитие АПК: региональный опыт, проблемы, перспективы", Ульяновск, 26-28 апреля 2005 г Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 работ. Основные положения, выносимые на защиту: Способ инактивации пастерелл АЭЭИ. Масляный адъювант для изготовления вакцины.

Вакцина против пастереллеза птиц, трехвалентная инактивированная эмульсионная.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121 странице и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты исследований, обсуждение, выводы, практические предложения. Список использованных литературных источников включает 204 наименования, в том числе 107 работ зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 7 рисунками и 19 таблицами. В приложении представлены копии титульных листов документов, подтверждающих результаты отдельных этапов работы, их научную новизну и практическую значимость.

Автор благодарит сотрудников кафедры микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы пищевых продуктов Ульяновской ГСХА, лаборатории экологии ГНУ ВНИИВВиМ и лаборатории микробиологии ФГУ ВНИИЗЖ за помощь в выполнении данной работы

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Штаммы микроорганизмов. В работе использовали штаммы Pasteurelîa multocida ■ №115 (серовар А:1), №1231(серовар А:3), ВК-3(серовар А:4); полученные из музея бактериальных культур ФГУ ВГНКИ (г. Москва), №11039 (серовар А.1) и №15742 (серовар А:3), полученные из американской коллекции типовых культур (АТСС).

Питательные среды, краски. При проведении исследований применяли общепринятые питательные среды и краски. Для культивирования пастерелл использовали питательную среду на основе мясного перевара по Хотгингеру.

Подопытные животные. Для контроля безвредности и реактогенности вакцины использованы мыши белые нелинейные массой 16-18 г. Для определения вирулентности пастерелл, оценки антигенных и иммуногенных свойств вакцины - мыши белые нелинейные массой 20-22 г и куры породы белый яепорн в возрасте от 25 суток до 3 месяцев.

Культивирование пастерелл проводили в аппаратах АК-210 объемом 10 литров. Культуры в реакторах выращивали 8 часов при температуре 37.0± 0.5° С с постоянным перемешиванием 800-1200 об/мин и непрерывной аэрацией из расчета обогащения одного литра питательной среды воздухом в соотношении 1:2 В процессе культивирования определяли рН среды, чистоту роста и концентрацию микробных клеток. При изменении рН среды в щелочную сторону в реактор добавляли стерильный 40 % раствор глюкозы до 0.1-0.2 % содержания (сухой) глюкозы в среде. Культивирование прекращали, когда концентрация микробов переставала заметно увеличиваться. Выращенные культуры охлаждали до температуры 10-15° С и использовали в дальнейшей работе.

Проведение инактивации. Отработку режима инактивации пастерелл аминоэтилэтиленимином проводили со штаммом PasleureUa multocida ВК-3. АЭЭИ вносили в бактериальную суспензию, исходя из концентрации бактерий в определенном объеме, а также процентного содержания основного активного вещества в водном растворе инактиванта. Предварительно pH АЭЭИ доводили 5 М раствором уксусной кислоты до 7 47.8.

Определение числа живых микроорганизмов. Для подсчета живых микроорганизмов в суспензии использовали метод определения количества КОЕ высевом на плотные питательные среды.

Определение концентрации инактиванта (К50), обеспечивающей гибель 50 % микробных клеток популяции. В точно отмеренные объемы бактериальной суспензии, с концентрацией 10 млрд м к./см3 по стандарту мутности, добавляли 0 25 % АЭЭИ и далее количество АЭЭИ увеличивали, получая его двукратно возрастающие конечные концентрации. Через каждые 3 часа, начиная с 1 часа инкубации при 37° С, в образцах определяли число живых микробов Kjo рассчитывали по формуле Кербера в модификации Ашмарина- IgK;o=IgK„-5(£li-0 5), где К„ - максимальная концентрация инактиванта в бактериальной суспензии, при которой отсутствует рост микробов на всех чашках с МПА <5 -логарифм кратности испытанных концентраций инактиванта, И - отношение количества чашек с характерным бактериальным ростом к общему числу засеянных чашек с МПА, Z -сумма значений Ii, для всех испытанных концентраций инактиванта.

О вирулентности штаммов пастерелл для мышей и кур судили по LDso и выражали в КОЕ/мл

Белых мышей заражали подкожно, а кур - внутримышечно в объёме 0.5 см3 десятикратными разведениями (Ifr'-lO"9) суточных бульонных культур пастерелл в забуференном физиологическом растворе.

Электронная микроскопия. Нативные и инактивированные бактерии просматривали и фотографировали на электронном микроскопе JEM-100 при увеличении 1600 раз Предварительно бактериальные клетки освобождали от остатков культуральной среды и инактиванта трехкратным центрифугированием (3000 об/мин 30 минут) с последующим ресуспендированием в фосфатно-буферном растворе (ФБР). Контрастирование препаратов проводили 4 % фосфорно-вольфрамовой кислотой (ФВК) pH 6.8.

Определение реакгогенности адъювантов. В работе использовали следующие масляные адъюванты: полный адъювант Фрейнда (ПАФ), адъювант ВНИИЗЖ (на основе минерального масла MarcoI-52 с эмульгатором Е-139) и Montanide ISA-70 Реактогенносгь адъювантов определяли на белых мышах по методу Гарцета в модификации Е В. Гусевой,

А И. Дудникова (1986). Для этого простерилизованные препараты вводили в подушечку правой задней лапки мыши в дозе 0,025 см3 (по 10 мышей на каждый адъювант). В качестве контроля использовали стерильный физиологический раствор. Спустя 10-14 суток, мышей убивали, отсекали задние лапки по скакательный сустав и взвешивали отдельно правые (инъецированные) и левые (интактные). Индекс реактогенности К определяли по формуле: К=(ЕК47Ш-1)х100%, где ГА/- сумма веса правых лапок; ИМ- сумма веса левых лапок.

Изготовление опытных образцов вакцины. Для изготовления опытных образцов вакцины использовали суспензию пастерелл трех сероваров инактивированных аминоэтилэтиленимином. Составление опытных образцов вакцины проводили с таким расчетом, чтобы в 1 0 см3 готовой вакцины содержалось по Ю10 м.к. бактерий каждого серовара. Освобожденные от культуральной среды и инактиванта центрифугированием (на проточной центрифуге), ресуспендированные в забуференном физрастворе до необходимой концентрации антигены пастерелл смешивали и эмульгировали с различными объемами масляных адыовантов на микроразмельчителе тканей РТ-2 при 3000 об/мин в течение 5 минут. Образцы готовили в соотношении антиген-адьювант. 20:80, 30:70, 40.60 и 50:50. Полученную вакцину расфасовывали во флаконы.

Определение физических и иммунобиологических свойств опытных образцов вакцины

Стабильность вакцины определяли центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин, а также двухнедельной выдержкой в термостате при 37° С и длительным хранением при температурах 18-22° С и 2-8° С с последующей визуальной оценкой на предмет расслоения эмульсии.

Кинематическую вязкость измеряли капиллярным вискозиметром марки ВПЖ-2 и выражали в мм /сек. Определение вязкости проводили при температуре вакцины 20° С, измеряя время истечения вакцины от первого до второго мениска с точностью 0.2 сек. Кинематическую вязкость определяли по формуле. В = С Г, где В - кинематическая вязкость, мм2/сек; С - постоянная вискозиметра; Г - средняя арифметическая времени истечения вакцины, сек.

Определение стерильности готовой вакцины и полноты инактивации бактериальных суспензий проводили в соответствии с ГОСТом 28085-90 "Препараты биологические. Методы бактериологического контроля стерильности".

Безвредность вакцины определяли по ОСТ 9380-076-00008064-96 "Препараты ветеринарные. Методы определения безвредности. Основные положения.". Белым мышам и курам препарат вводили однократно, в дозе в 3 раза превышающей иммунизирующую дозу.

Реактогенность вакцины определяли на курах путем двукратной инъекции прививной дозы препарата с интервалом между введениями 20 суток. За птицей вели наблюдение в течение 7 суток после первой и второй вакцинации, проводя ежедневную оценку клинического состояния и наличие тканевых реакций в месте введения препарата.

Иммуногенность вакцины изучали в опытах на белых мышах и курах. Животных иммунизировали однократно цельной вакциной и разведениями в масляном адъюванте, используя трехкратный шаг Через 21 сутки после вакцинации всех иммунизированных и контрольных (не вакцинированных) животных заражали минимальными летальными дозами штаммов гомологичных сероваров. Результаты опытов учитывали в течение 10 сут после заражения и оценивали по величине 1тП50 , которую определяли по формуле Кербера в модификации Лшмарина и выражали в объёмных единицах (см') и количеством инактивированных микробных клеток, находящихся в этом объеме.

Антигенную активность вакцины оценивали по способности препарата вызывать у привитых птиц выработку антител к возбудителю заболевания. Для этого вакцину вводили цыплятам в объёме 0.5 см3 в область грудных мышц. Через 20 суток проводили ревакцинацию. На 21 сутки после второй вакцинации у всех цыплят отбирали кровь и сыворотки исследовали иммуноферментным методом на наличие антител

Статистическая обработка результатов

При анализе и обобщении результатов исследований были использованы статистические методы, описанные ИП Ашмариным, А А. Воробьевым (1962), Н Бейли (1962)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Получение биомассы пастерелл для изготовления вакцины

Первый этап нашей работы был посвящен изучению биологических свойств контрольно-производственных штаммов пастерелл При изучении культуральных свойств штаммов Р тикосШ посевы инкубировали при температуре 37° С до 72 часов. Через 18-24 часа культивирования наблюдали незначительное равномерное помутнение бульона с образованием "муаровых волн" при встряхивании. Через 48-72 часа отмечали просветление МПБ с образованием слизистого осадка, поднимающегося при встряхивании в виде "косички".

На агаре по Хоттингеру через 18-24 часа культивирования отмечали наличие мелких, прозрачных, росинчатых, гладких колоний.

На МППА рост культуры пастерелл происходил по уколу в виде беловатого стержня, окружающая среда при этом оставалась прозрачной.

На кровяном агаре наблюдали рост мелких (1-2 мм), округлых, выпуклых колоний Зона гемолиза вокруг колоний отсутствовала.

В мазках, окрашенных по Граму, обнаруживали грамотрицательные коккобактерии или короткие палочки, расположенные одиночно или попарно.

В мазках-отпечатках из паренхиматозных органов и крови павших белых мышей и кур, микробные клетки выглядели в виде биполяров (интенсивно окрашены концевые участки бактерий). У всех штаммов пастерелл, выращенных на кровяном агаре, при окрашивании по Бурри-Гинсу, на темном фоне была видна капсула, в виде светлого ореола вокруг микробных клеток.

По биохимическим свойствам культуры пастерелл соответствовали своему таксономическому положению в определителе бактерий Берджи (1997).

Необходимо отметить, что вирулентность у исследованных штаммов пастерелл для использованных видов животных была близка (табл. 1).

Таблица 1

Вирулентность штаммов РаШигеИа тиНоаЛа

! | | Ю50 КОЕ/мл (М± т)

1 №

п/п

| Номер штамма и серовара Вид животного V_

А:1 | А:3 ' А:4

I .!

' 115 11039 I 1231 'I 15742"

1 \ Белыемыши 1 21 ±3 Пз±2 ': 20±5 ' 22±3

3 I

2 • цыплята

85 ±4 \ 81 ±4 80± 5 ! 84±4

вк-з

25 ±2 ~т¥±7~

В процессе изучения вирулентности пастерелл была определена минимальная летальная доза, которая составляла для мышей и кур 4 ± 1 ЬО;о.

Таким образом, использованные в работе штаммы Р. ти1юЫс1а имели характерные для вида культурально-морфологические и биохимические свойства, обладали вирулентностью для белых мышей и кур.

Основные параметры культивирования пастерелл Проведенные эксперименты выявили зависимость числа живых клеток пастерелл от продолжительности культивирования.

При этом концентрация пастерелл за 8 часовой период культивирования возрастала с 8.3-8 4 КОЕ/см3 до 10.3-10.4 КОЕ/см3, т.е увеличивалась до 25 млрд.мкр.кл./см3. Различий в динамике роста изученных штамов Р. тиЬосЫа не установлено.

Инактивация Р.тиНоайа аминоэтилэтиленимином

Имеются сообщения о применении этиленимина и его производных при изготовлении инактивированных вакцин Исходя из этого, нами была предпринята попытка использовать АЭЭИ при инактивации пастерелл. С этой целью вначале определили концентрацию янактиванта, обеспечивающую гибель 50 % микробных клеток (К50) Опыты проводили на бактериях штамма Р тиМоа<1а ВК-3, предполагаемого для включения в состав вакцины

Бактериальную суспензию Р тикосШа ВК-3 на фосфатном буфере, с концентрацией 10 млрд.м.к./см3 по стандарту мутности, инактивировали АЭЭИ в двукратно возрастающих концентрациях: 0.25 % - 2 % при 37° С в течение 24 часов.

Проведенные эксперименты показали, что гибель 50 % пастерелл при воздействии 1 % АЭЭИ происходила через 3 часа, а при воздействии 0.50 % - через 6 часов Аминоэтилэтиленимин в концентрации 0.25 % не обеспечивал гибели 50% клеток в популяции пастерелл.

Результаты опытов по определению К50 показали, что АЭЭИ можно использовать для инактивации пастерелл В дальнейшем необходимо было установить оптимальные параметры процесса инактивации, которые могли бы быть использованы для получения антигенов.

Закономерности гибели пастерелл изучали при инактивации 0.5 % и 1 % концентрациями АЭЭИ по активному веществу. В работе использовали штамм Р тикоас/а ВК-3, инактивацию проводили при 37° С, в режиме постоянного перемешивания (30-50 об/мин) и рН 7.2-7 6.

Кинетические кривые, построенные на основании данных экспериментов, наглядно демонстрируют процесс инактивации пастерелл. Прямолинейная форма их указывала на экспоненциальный характер процесса гибели бактерий. Однако кривые различались по углу наклона к оси абсцисс, что было связано с разной скоростью гибели микроорганизмов (рис. 1).

Время (I), час

0.5% ДЭ И 10%ДЭИ

Рис. 1. Кинетика инактивации бактерий Ра^еигеНа тиксхлёа штамм ВК-3 разными концентрациями АЭЭИ при 37°С.

Исходя из подученных результатов, а теоретические расчеты на основании кривых выживания позволяют прогнозировать снижение числа жизнеспособных клеток, дальнейшие опыты по инактивации пастерелл мы проводили 1 % АЭЭИ при 37° С.

Одним из важнейших вопросов в технологии изготовления убитых вакцин является проблема полноты инактивации, а количественная оценка этого процесса позволяет прогнозировать снижение числа жизнеспособных клеток. Опыты проводили в ферментерах емкостью 10 л или 104 см3. Оценку уровня инактивации выражали по числу живых бактерий (КОЕ/см3). За допустимый уровень количества оставшихся жизнеспособных пастерелл мы приняли величину <Ю"4 КОЕ/см3. То есть теоретически допускали возможность выживания менее одной бактериальной клетки в 10 л инактивируемой суспензии.

Регрессионный анализ гибели популяции Р тикоас1а ВК-3 при воздействии 1 % АЭЭИ при 37° С позволил рассчитать константу скорости инактивации бактерий, значение которой составило 6.62 ч'1. Продолжительность инактивации пастерелл до допустимого уровня-4.91 ч.

Следует отметить, что величина эмпирического коэффициента к=6.62 ч"1 является справедливой для 1 % концентрации АЭЭИ.

Учитывая серологическую неоднородность возбудителя пастереллеза, далее было изучено влияние АЭЭИ на инактивацию двух других серовариантов РтикосШа №115, №1231.

Проведенные эксперименты не выявили значительных различий инактивируюшей способности АЭЭИ в отношении серовариантов пастерелл А:1, А:3 и А:4. Режим инактивации бактерий, разработанный на модели Р.тикоаёа ВК-3, оказался приемлемым для инактивации штаммов Р тикоШа №115 и №1231.

Влияние аминоэтилэтиленимина на морфологию бактерий

Морфологические изменения, происходящие в клетках под влиянием АЭЭИ иссследовали с помощью методов световой и электроной микроскопии.

Сравнительное изучение под световым микроскопом нативных культур Р тикоа'окг ВК-3 и бактерий инактивированкых АЭЭИ, выявило различия в их форме и размерах. В мазках, приготовленных из инактивированных препаратов, наряду с характерными для данного возбудителя палочками, отмечали бактерии округлой формы более бледной окраски.

Электронно-микроскопический анализ пастерелл, инактивированных АЭЭИ показал, что субмикроскопическая организация бактерий претерпела некоторые изменения по сравнению с исходными культурами- наблюдали наличие клеток меньших размеров округлой формы с дефектной клеточной стенкой, на поверхности которой отмечали скопление масс, не имеющих закономерной структуры

Подбор масляного адъюванта для изготовления вакцины против пастереллеза птиц инактивированной эмульсионной

Несмотря на то, что вакцины на основе масляных адьювантов имеют определенные достоинства (обладают высокой иммуногенностью), у них отмечаются и недостатки, главным из которых является высокая реактогенность при введении даже в малых количествах. Нами были проведены исследования по изучению степени реактогенности различных масляных адьювантов на белых мышах (табл. 2).

Исходя из полученных величин индекса реактогенности и в соответствии с классификацией Е В.Гусевой и А.И.Дудниковой (1986), испытуемые адъюванты были разделены на две группы. Полный адъювант Фрейнда (ПАФ) и адъювант ВНИИЗЖ обладали выраженной реактогенностью (82.4 и 68.8 %), адъювант Montanide ISA- 70 - умеренной реактогенностью (39.3 %)

Таблица 2

Реактогенность масляных адьювантов на белых мышах

! 1 Средний вес лапок, г ' Индекс ;

' № 8 Наименование адъюванта И------- - —--------- • {

, I | опыт | контроль ■ реактогенности,% ,

Г l~j ПАФ j 0Л980" | оТТо85 |

2 Адъювант"ЗНИИЗЖ"""' 02179 ~~" { 0Л291 ~ ■! 688 i

■ 3 ° MontanidelSA-70 Г 0.1492 | "0Л07Г i 39.3~ "

¡"Т". Контроль (физГр-р) 1 ' (Х1205 | 0.1 ISl" 1 ~~ 4.6~ ~ 1

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что разные масляные адъюванты вызывают различную воспалительную реакцию, наиболее выраженную на ПАФ и адъювант ВНИИЗЖ и менее выраженную на адъювант Montanide ISA- 70, что и послужило основанием для использования адъюванта Montanide ISA- 70 в дальнейшей работе.

Изготовление опытных образцов вакцины против пастереллеза птиц инактивированной эмульсионной и изучение их физических и иммунобиологических свойств

Физические свойства опытных образцов вакцины

Основное внимание при изготовлении и изучении физических свойств эмульсионной вакцины было уделено препарату с адъювантом Montanide ISA- 70. Задача заключалась в получении стабильной эмульсии типа "вода-масло" при использовании минимального количества адъюванта, в связи с определенной некоторой реактогенностью последнего

В результате проведенных исследований установлено, что наиболее выгодными для практического применения физическими свойствами обладал образец вакцины с объемным

соотношением антигена и адъюванта Montamde ISA- 70 30:70. Вакцина обладала стабильностью в течение 12 месяцев хранения при температуре 2-8° С и 18-22° С. Кинематическая вязкость данного образца вакцины при температуре 20± 2° С составляла 68.5 ± 5 мм2/сек.

Таблица 3

Вязкость и стабильность опытных образцов инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза птиц

i 1 № ( образца вакцины ! процентное соотношение антигенздьювант S стабильность среднее значение эмульсии (сут) j вязкости при л ' У при1(°С) t=20± 2 С мм /с 1 ---- . _ - 1 2-8 i 18-22 j 37 ili

1 1 i 20:80 ] 60.3 ¡>180 ¡>180! L _ ¡I __u 1 > i4 ;

J 2 j 30:70 'j 68.5 f> 180 jj > 180 ; > 14

i 3 j 40:60 [ 86.9 j<180j<90 4 ; 50:50 Г 93.4 i <30 | <30 1 _± _ ___ jL _ __ 1_ _J __ <14 ____

Безвредность и реактогенность

Безвредность вакцины определяли на белых мышах массой 16-18 г и цыплятах трёх месячного возраста, которым вводили подкожно 0.5 см3 и 1.5 см3 вакцины соответственно. В течение 10 суток наблюдения мыши и цыплята оставались живы, клиническое состояние животных не изменялось.

Реактогенность вакцины оценивали на курах по наличию тканевых реакций в месте введения препарата. Вакцину вводили в объеме 0.5 см3 внутримышечно в грудную мышцу. Температурная реакция у птиц оставалась в пределах допустимых границ. При наружном осмотре не установлено наличие какой-либо припухлости, покраснения в месте инъекции препарата При патологоанатомическом вскрытии через 15 суток после вакцинации наблюдали отечность, побледнение тканей вокруг места инъекции препарата на площади 1-2 см в диаметре.

Таким образом, представленные результаты свидетельствуют, что вакцина против пастереллеза птиц инактивированная эмульсионная безвредна для белых мышей и кур, слабореактогенна.

Антигенные и иммуногенные свойства вакцины

В результате изучения ответной реакции организма белых мышей и кур на введение пастереллезной вакцины нами была установлена зависимость между логарифмом дозы

антигена, уровнем антител и защитным эффектом препарата, которую линеаризовали методом пробитоп и описали уравнением линейной регрессии. При этом наличие математической зависимости между логарифмом дозы антигена и уровнем иммуного ответа, позволило определить теоретическое значение любой условной дозы вакцины, соответствующей определенному эффекту. Необходимо отметить, что у кур уровень антител 1 7500 и выше, при исследовании иммуноферментным методом, является достаточным для защиты при контрольном заражении Изучение иммуногенной активности вакцины показало, что при стандартных условиях определения иммуногенности следует пользоваться одной и той же дозой возбудителя для контрольного заражения - Dim . При этом величина FmDjo трех пастереллезных убитых бактерий в составе вакцины для кур составляла- для серовара А-1-0.018 см3 (3.6x107 м.к), серовара А:3-0.015 см3 (3 0х107м.к.), серовара А4-0 020 см3 (4 0х107мк) В прививном объеме вакцины (0.5 см3) содержится- 27 7, 33.3 и 25 ImDu, соответствующих антигенов Pasteurella multocida.

Таблица 4

Антигенный состав вакцины против пастереллеза птиц инактивированной эмульсионной

j Антигены Концентрация бактерий в 1.0 см (х10ч) м к

Р multocida сероварА.1 2.0 ±0.1

i P. multocida серовар А:3 ! P. multocida серовар А.-4 2.0 ±0.1

2.0 ±0.1

Из данных таблицы 4 видно, что общее содержание инактивированных бактерий в 1.0 см3 вакцины, составляет 6x10® м.к. В прививном объеме для птиц равном 0.5 см3, соответственно содержится ЗхЮ'м.к.

Иммуногенность экспериментальных серий вакцины оценивали по устойчивости вакцинированных животных к контрольному заражению Dim пастерелл каждого из трех сероваров.

Вакцину считали иммуногенной, если она предохраняла от гибели не менее 8 из 10 вакцинированных мышей или 4 из 5 вакцинированных цыплят (по каждому серовару) в течение 10 суток при гибели не менее 8 из 10 мышей или 4 из 5 цыплят в контроле Проведенные опыты показали, что полученные экспериментальные серии вакцины являются иммуногенными.

Опыты по изучению напряженности иммунитета в зависимости от кратности вакцинации проводили на цыплятах 6 недельного возраста путем однократной и двукратной

иммунизации с последующим контрольным заражением. Птицу иммунизировали подкожно в область шеи в объеме 0.5 см3 вакцины на инъекцию. Через каждые тридцать дней после иммунизации птицу заражали внутримышечно Dim Р multocida штамм №115. Наблюдение за курами осуществляли в течение 10 суток после заражения.

Результаты исследования показали, что напряженный иммунитет после однократной иммунизации сохраняется первые два месяца, а затем снижается При двукратной вакцинации иммунитет сохраняется на протяжении 6 месяцев (срок наблюдения).

Для оценки иммуногенности вакцины мы использовали так называемый "индекс защиты".

Сущность метода заключается в определении относительной устойчивости иммунизированных животных в сравнении с не иммунизированными после контрольного заражения Для этого вакцинированных и интакгных животных заражают последовательными десятикратными разведениями 18 часовой бульонной культуры Р multocida, затем определяют LDso в обеих группах и сравнивают их между собой.

Отношение величины LD5tl для иммунизированных животных к величине LDso контрольных животных, выраженное в логарифмах, характеризует иммуногенную активность препарата и обозначается как "индекс защиты". Эксперименты в этом направлении провели вначале на белых мышах, а затем на курах.

Предварительные опыты показали, чю ластереллезные антигены с достаточным о

уровнем иммуногенности должны иметь lg индекса защиты не менее 0,8. г

Результаты проверки иммуногенной активности 8 экспериментальных серий вакцины на белых мышах, выборочно по 1 серовару, представлены в таблице 5

Таблица 5

Результаты изучения имммуногенной активности вакцины против пастереллеза птиц

на белых мышах

Проверка иммуногенности экспериментальных серий вакцины на курах показала, что все они обладали выраженной иммуногенностью. ' Результаты испытаний хорошо воспроизводились, свидетельствуя о стандартности образцов препарата (табл.6)

Таблица 6

Результаты оценки иммуногенности экспериментальных серий вакцин на курах

1 Серовариант по | соматическому антигену

А:1

/Я индекса защиты экспериментальных серий вакцины

__ I ~ | --- - ¡-—у

__ ____» ___

1.2 " Г 1.4" ;| 1.2 Т~\Т' | "1.2

1 \

(I __

I о

11.28 ,0.10 £

Таким образом, эксперименты, проведенные на белых мышах и курах, показали, что оценка иммуногенной активности экспериментальных серий противопастерсллезной вакцины по индексу защиты является информативным и легковоспроизводимым методом.

Определение активности антигенов Р. тиНосЫа в составе вакцины в процессе её

хранения

Оценку иммуногенной активности инактивированной эмульсионной вакцины проводили сразу после изготовления и через 6, 12 месяцев хранения при температуре 2-8° С путем определения /тОщ на белых мышах массой 20-22 г (табл.7).

Результаты экспериментов показали, что иммуногенность вакцины через 6 и 12 месяцев хранения не снизилась, уровень различий между значениями 1т05г, был статистически недостоверным Это свидетельствует о сохранении иммуногенной активности разработанной вакцины против пастереллеза птиц в течение 12 месяцев хранения при температуре 2-8° С На основании полученных результатов был установлен срок годности препарата, который составил 12 месяцев при температуре 2-8° С.

Таблица 7

Иммуногенные свойства трехвалентной инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза птиц в процессе хранения

Значение 1тП;0 (хЮ ) (м.к) при хранении вакцины (мес)

! | ° 1 1 6 ! 12 |

| Р. тикосШа штамм № 115 | 46 ±5 1 54 ± 4 _ ! 47 ± 6 ,. ----- ,!

Р.тиЬосШа штамм №1231 | 47 ±5

58 ±5

Р тииос\Ла штамм ВК-3

48 ±7

59 ± 3

Производственные испытания вакцины

При проверке противоэпизоотической эффективности экспериментальных серий инактивированной эмульсионной противопастереллезной вакцины было привито - 25000 голов, в том числе цыплят 28 суточного возраста - 5000 голов и 20000 голов 40 суточного возраста.

Вакцина была применена на птицефабрике "Русь" Курской области (хозяйство неблагополучное по пастереллезу). Препарат вводили подкожно в область шеи в объеме 0.5 см3 двукратно с интервалом 40 суток.

Среди вакцинированного поголовья птицы случаев заболевания пастереллезом на протяжении 6 месяцев не зарегистрировано.

Таким образом, результаты производственных испытаний разработанной инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза птиц показали, что вакцина безвредна, слабореактогенна и обладает высокой эффективностью.

ВЫВОДЫ

Установлено, что аминоэтилэтиленимин в концентрации 1% полностью инактивирует бактерии Pasteurella multocida.

Количественные оценки кинетики выживаемости пастерелл под воздействием аминоэтилэтиленимина позволили описать её в виде формулы экспоненты, определить константы скорости инактивации и прогнозировать время инактивации до допустимого уровня в зависимости от объема суспензии и концентрации бактерий.

Установлено, что масляный адъювант Montanide ISA-70 обладает умеренной реактогенностью при использовании его в составе вакцины против пастереллеза птиц.

Объемное соотношение суспензии бактериального антигена и адъюванта 30-70 обеспечивает образование стойкой эмульсии типа "вода-масло" с кинематической вязкостью 70.6 ммг/сек при температуре 20° С.

Показано, что величина ImD¡o инактивированных пастереллезных бактерий в составе вакцины для кур составляет по серовару А:1- 0 018 см3 (3 6х107 м.к.), серовару А:3- 0 015 см3 (3.0x107 м.к.), серовару А:4 - 0.020 см3 (4.0х107 м.к.).

Для оценки иммуногенной активности противопастереллезной инактивированной эмульсионной вакцины наиболее информативным является количественный метод определения индекса защиты (N).

Однократная иммунизация кур разработанной вакциной обеспечивает защиту против пастереллеза продолжительностью 2 месяца Двукратная вакцинация с интервалом 20 суток, создает напряженный иммунитет продолжительностью не менее 6 месяцев (срок наблюдения).

Изготовленные образцы противопастереллезной вакцины безвредны, обладают умеренной реактогенностью, в процессе хранения при температуре 2-8° С сохраняют исходную иммуногенную активность в течение года.

Практические предложения

Результаты экспериментальной работы использованы при разработке нормативно-технической документации по изготовлению и контролю биологического препарата-"Вакцина против пастереллеза птиц трехвалентная инактивированная эмульсионная" (технические условия, наставление по применению, инструкция по изготовлению) Утверждена заместителем директора ФГУ ВНИИЗЖ по НИР 20.07.2005г.

Список научных работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Русалеев В.С, Прунтова О.В., Гневашев В.М., Селиверстов ВВ, Потехин А В Колотилова Т.Г., Бородина О.В Разработка вакцины против пастереллеза птиц инактивированной эмульсионной //Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов-Тр. Междунар науч -практич.конф.-Покров, 2003.-Ч.2.-С 514-519.

2 Шадрова Н.Б, Бородина О В Разработка иммуноферментного набора для выявления антител в сыворотках крови кур к Pasteurella multocida // Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных: Матер междунар.науч конф молодых ученых.-Владимир, 2004.-С. 136-139.

3. Русалеев B.C., Прунтова О.В., Гневашев В.М., Потехин А.В, Васильев ДА.. Бородина О.В. Оценка иммуногенности противопастереллезной вакцины// Труды Федерального центра охраны здоровья животных - Владимир,2005.-Т Ш -С. 223-229

4. Васильев Д.Д., Бородина О В., Прунтова О.В. Проблемы пастереллезной инфекции// Современное развитие АПК- региональный опыт, проблемы, перспективы. Матер.Всерос.науч.-практич.конф -Ульяновск, 2005 -С. 200-206.

5. Бородина О.В., Прунтова О.В. Васильев Д.А. Сравнительное испытание димера этиленимина и формалина при инактивации бактерий Pasteurella multocida // Современное развитие АПК региональный опыт, проблемы, перспективы: Матер Всерос.науч,-практич конф.-Ульяновск, 2005.-С. 207-210.

Подписано в печать 22.09 05 Формат 60x84 1/16 Бумага типогр. №1 Гарнитура Тия-Таймс 1 Усл.печ.л. 1.0 Заказ 436 Тираж 100

Ризограф УГСХА

432601, г.Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1 На правах рукописи

С"

»195 19

РНБ Русский фонд

2006-4 17019

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бородина, Ольга Владимировна

Введение.6

1.Обзор литературы.10

1.1. Общие сведения о пастереллезе птиц.10

1.2. Характеристика возбудителя и требования к штаммам, используемым в качестве производственных.11

1.3. Противопастереллезные вакцины.15

1.4. Общие принципы технологии изготовления инактивированных бактериальных вакцин.17

1.5.0ценка качества инактивированных бактериальных вакцин.27

1.5.1. Основные требования к качеству инактивированных вакцин.27

1.5.2. Оценка иммуногенных свойств инактивированных вакцин.28

1.5.3. Корреляция уровня специфических антител в сыворотках крови животных с защитой организма от инфекции.30

1.5.4. Современные методы выявления и определения уровня антител.33

2. Собственные исследования.36

2.1. Материалы и методы.36

2.1.1. Материалы.36

2.1.2. Методы.38

2.2. Результаты исследований.45

2.2.1. Получение биомассы пастерелл для изготовления вакцины.45

2.2.1.1.Биологические свойства штаммов Pasteurella multocida.45

2.2.1.2.0сновные параметры культивирования пастерелл.50

2.2.1.3.Инактивация P.multocida аминоэтилэтиленимином.51

2.2.1.3.1. Изучение активности аминоэтилэтиленимина при инактивации пастерелл.

2.2.1.3.2. Кинетические закономерности гибели пастерелл при инактивации аминоэтилэтиленимином.52

2.2.1.3.3. Влияние аминоэтилэтиленимина на морфологию бактерий.57

2.2.2. Подбор масляного адъюванта для изготовления вакцины против пастереллеза птиц инактивированной эмульсионной.58

2.2.3. Изготовление опытных образцов вакцины против пастереллеза птиц и изучение их физических и ммунобиологических свойств.61

2.2.3.1.Физические свойства вакцины.62

2.2.3.2.Иммунобиологические свойства вакцины.63

2.2.3.2.1. Безвредность и реактогенность.63

2.2.3.2.2. Антигенные свойства вакцины.64

2.2.3.2.3. Иммуногенные свойства вакцины на белых мышах.66

2.2.3.2.4. Иммуногенные свойства вакцины на птице.68

2.2.4. Изготовление экспериментальных серий вакцины против пастереллеза птиц трехвалентной инактивированной эмульсионной.

2.2.5. Контроль качества вакцины.73

2.2.5.1. Оценка физических свойств, безвредности и реактогенности экспериментальных серий вакцины на белых мышах и курах.74

2.2.5.2. Оценка иммуногенных свойств вакцины.75

2.2.6. Определение активности антигенов P.multocida в составе вакцины в процессее хранения.81

2.2.7. Производственные испытания вакцины.

3. Обсуждение.84

4. Выводы.

5. Практические предложения.

6. Список использованных литературных источников.97

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза птиц"

Актуальность темы. Пастереллез — одна из важнейших ветеринарных проблем, возбудителем которого является бактерия Pasteurella multocida. Заболевание у птиц вызывают различные сероварианты пастерелл серогруппы А по капсульному антигену. Значительный экономический ущерб, наносимый птицеводству этой инфекцией, складывается из высокого отхода поголовья, снижения привесов и затрат на проведение профилактических мероприятий (32;190;124;81).

Как показывает мировой опыт - вакцинация во многих случаях является одним из основных средств борьбы с инфекционными болезнями животных.

В настоящее время в арсенале иммунопрофилактики пастереллеза птиц имеется целый ряд вакцинных препаратов, различающихся по составу, технологии производства, по способу применения и эффективности. Большинство из них обладает несомненными достоинствами, но имеются и недостатки (194; 160;96).

Эффективность инактивированных вакцин зависит от количества и качества антигена, природы и свойств адъюванта, от технологии изготовления препарата и способа его применения.

Важным моментом в технологии изготовления вакцин из убитых возбудителей является инактивация микроорганизмов. Для этих целей чаще всего используют формалин. Однако установлено, что формалин не является идеальным инактивантом, так как он может снижать антигенную и иммуногенную активность бактериальных антигенов. Поэтому необходим поиск новых инактивантов, которые не оказывают влияния на протективные антигены.

Одним из возможных решений этого вопроса может быть использование азиридинов.

1) необходимость многократных инъекций препарата;

2) относительно большие дозы вакцин.

1)высокая вязкость, затрудняющая введение при массовой обработке птицы;

2)высокая реактогенность.

Поэтому проведение работ по усовершенствованию и созданию новых инактивированных вакцин против пастереллеза птиц является актуальной задачей, имеющей научное и практическое значение.

Цель и задачи исследований. Целью данной работы являлась разработка трехвалентной инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза птиц.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

- разработать режим инактивации пастерелл аминоэти лэти л енимином;

- подобрать масляный адъювант и изготовить экспериментальные образцы вакцины против пастереллеза птиц;

- разработать метод оценки иммуногенной активности противопастереллезной вакцины по индексу защиты (.N);

- определить иммунизирующую дозу, напряженность и продолжительность иммунитета после применения вакцины на курах.

Научная новизна работы. Новизна исследований состоит в том, что в результате проведенных экспериментов:

- разработан режим и определены оптимальные параметры инактивации пастерелл аминоэтилэтиленимином;

- количественно охарактеризована зависимость кинетики инактивации пастерелл от концентрации инактиванта;

- установлена высокая антигенная и иммуногенная активность пастерелл, инактивированных аминоэтилэтиленимином в составе вакцины;

- разработан метод оценки иммуногенной активности противопастереллезной вакцины по индексу защиты (N).

Практическая значимость работы.

На основании полученных результатов разработана нормативно-техническая документация по изготовлению и контролю вакцины против пастереллеза птиц, трехвалентная инактивированная эмульсионная, утвержденная заместителем директора ФГУ ВНИИЗЖ по НИР 20.07.2005г.

Апробация работы. Основные материалы исследований по диссертационной работе доложены и обсуждены на:

- Международной научно-практической конференции «Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов», Покров, 24-26 сентября 2003 г.

- Международной научной конференции молодых ученых «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных», Владимир, 24-26 марта 2004г.

- Всероссийской научно-практической конференции «Современное развитие АПК: региональный опыт, проблемы, перспективы», Ульяновск, 26-28 апреля 2005 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Способ инактивации пастерелл АЭЭИ.

2. Масляный адъювант для изготовления вакцины.

3. Вакцина против пастереллеза птиц, трехвалентная инактивированная эмульсионная.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Бородина, Ольга Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что аминоэтилэтиленимин в концентрации 1 % полностью инактивирует бактерии Pasteurella multocida.

2. Установлено, что масляный адъювант Montanide ISA-70 обладает умеренной реактогенностью при использовании его в составе вакцины против пастереллеза птиц.

3. Объемное соотношение суспензии бактериального антигена и адъюванта 30:70 обеспечивает образование стойкой эмульсии типа «вода

2 0 масло» с кинематической вязкостью 70.6 мм /сек при температуре 20 С.

4. Показано, что величина ImDso инактивированных пастереллезных бактерий в составе вакцины для кур составляет по серовару А:1- 0.018 см (3.6x107м.к.), серовару А:3- 0.015 см3 (3.0х107м.к.), серовару А:4 - 0.020 см3 (4.0x107м.к.).

5. Для оценки иммуногенной активности противопастереллезной инактивированной эмульсионной вакцины наиболее информативным является количественный метод определения индекса защиты (N).

6. Однократная иммунизация кур разработанной вакциной обеспечивает защиту против пастереллеза продолжительностью 2 месяца. Двукратная вакцинация с интервалом 20 суток, создает напряженный иммунитет продолжительностью не менее 6 месяцев (срок наблюдения).

7. Изготовленные образцы противопастереллезной вакцины безвредны, обладают умеренной реактогенностью, в процессе хранения при температуре 2-8° С сохраняют исходную иммуногенную активность в течение года.

5. Практические предложения.

Результаты экспериментальной работы использованы при разработке нормативно-технической документации по изготовлению и контролю биологического препарата «Вакцина против пастереллеза птиц трехвалентная инактивированная эмульсионная» (технические условия, наставление по применению, инструкция по изготовлению). Утверждена заместителем директора ФГУ ВНИИЗЖ по НИР 20.07.2005 г.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бородина, Ольга Владимировна, Ульяновск

1. Атаева Э. М. Иммунологические свойства капсульного антигена и серологические типы P. multocida: Автореф. дис. . канд. биол. наук.-М., 1981.- 18 с.

2. Азарян С. JL Изыскание масла для эмульгированныхпротивопастереллёзных вакцин // Диагностика, профилактика и меры борьбы с инфекц. и инваз. болезнями с.-х. животных и птиц на Сев. Кавказе: Сб. науч. тр.- Новочеркасск, 1990.- С. 64-69.

3. Аксёненко Г. Р. Научные основы производства вирусных и бактериальных препаратов.- Томск, 1977.- С.225-268.

4. Антитела. Методы. В 3-х т. / Под ред. Кэтти Д.: Пер. с англ. М.: Мир, 1991.

5. Антонова Н.И., Коломнина Г.Ф., Галибина Н.В. и др. Изучение роста Р. multocida разных серовариантов // Науч. Основы технологии пром. Производства вет. биологических препаратов: Тез. Докл. М., 1991. -С. 159-160.

6. Антонова Н.И., Коломнина Г.Ф., Нецепляева Л.И. и др. Сравнительная оценка роста пастерелл на различных питательных средах // Науч.основы технологии пром. производства вет. биологических препаратов: Тез. Докл. — М., 1991.-С. 160-161.

7. Ашмарин И. П., Воробьёв А. А. Статистические методы в микробиологических исследованиях.- JL: Медгиз, 1962.- 180 с.

8. Ю.Барташевич Ю.Э. Этиленимины и мутационный процесс // Супермутагены. М., 1966. - С.211-260.

9. П.Баснакьян И. А. Культивирование микроорганизмов с заданными свойствами. М.: Медицина, 1992. - 192 с.

10. Бейли Н. Статистические методы в биологии.-М.: Изд-во иностран.лит., 1962.-С.124-135.

11. Бовкун Г. Ф. Биологические особенности и антигенная структура возбудителя пастереллеза: Автореф. дис. канд. вет. наук.- М., 1977.- 14 с.

12. Бойд У. Основы иммунологии. М.: Мир, 1969. — 648 с.

13. Бойко А.А., Кириллов JI.B., Козловский Г.А. Количественные методы контроля биологических препаратов // Тр. ВГНКИ ветпрепаратов. -1974.-Т. 20. С. 3-5.

14. Болезни домашних и сельскохозяйственных птиц: Пер. с англ./ Под ред. Кэлнека Б.У. М.: Аквариум, 2003. - С.169-180.

15. Браун В. Генетика бактерий: Пер.с англ. М.: Наука, 1968. - 446 с.

16. Буткин Е.И. Пастереллез (холера) птиц. М.: Колос, 1972. - С.125-140.

17. Веселова Е.Ф. Микрометод определения численности колониеобразующих микроорганизмов // Микробиология. 1995.- Т.64., Вып. №2.- С. 279-284.

18. Ветеринарные препараты. Справочник / Под ред. Д.Ф. Осидзе. М.: Колос, 1981.-238 с.

19. Геведзе В. И., Вайсман Э. И. Эпизоотологическая эффективность существующих вакцин против пастереллёза свиней И Разработки, апробации и гос. контроль вет. препаратов: Тез. докл. науч.- практ. конф.- М., 1981.-С. 90-91.

20. Гневашев В.М., Прунтова О.В., Кулаков В.Ю. Кинентика реакции агглютинации бактерий Salmonella choleraesuis II Пробл. инфекц. патологии с.-х. животных: Тез. докл. конф. Владимир. 1997. - С. 191192.

21. Горелов А.Л., Левина Г.А., Прозоровкий С.В. Изучение возможности использования различных вариантов иммуно ферментного анализа для выявления L-форм брюшнотифозных бактерий в биологических жидкостях // Журн. микробиол.-1989.-№8.-С.60-64.

22. ГОСТ 4.492-89. Система показателей качества продукции. Препараты биологические ветеринарные. Номенклатура показателей.

23. Государственная фармакопея СССР. 11 изд. Вып. I. Общие методы анализа. М.: Медицина, 1987. - 336 с.

24. Гусева Е.В., Дудников А.И. Изучение реактогенности компонентов, входящих в состав эмульсионных противоящурных вакцин // Акт.вопросы вет. вирусологии.-Владимир.- 1986.-С.77-79.

25. Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные положения: РД 42-28-8-89 / Минздрав СССР.-М.,1989.- 45 с.

26. Дуплищева А.П., Мысякин Е.Б., Ромашевская Е.И. и др. Стимуляция бактериальным полисахаридом сальмозаном естественной резистентности организма к инфекции // Иммунология. — 1988. №1. -С.60-62.

27. Душук Р. В. Болезни, вызываемые пастереллами. Пастереллёзы // Инфекц. болезни животных: Справочник / Под ред. Осидзе Д. Ф.- М.: Агропромиздат, 1987.- С. 188-194.

28. Душук Р.В., Белкин З.П., Егорова Г.П. и др. Иммуногенность вакцин против пастереллеза свиней // Ветеринария. -1997.-№10.-С. 18-20.

29. Душук Р.В., Малахов Ю.А., Шапошникова JI.M. и др. Специфическая профилактика пастереллеза птиц // Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветер.препаратов: Тез.докл.Всерос.науч.конф.-М., 2001.- С.49-50.

30. Душук Р. В., Игнатьев С. В., Пещеняева JI. И. Сравнительное испытание эмульгированных противопастереллёзных вакцин // Профилактика и меры борьбы с болезнями молодняка с.-х. животных.- Минск, 1990.- С. 15-17.

31. Душу к Р.В., Азарян C.JI. Изыскание адъюванта для противопастереллёзных вакцин // Повышение продукт, с.-х. животных.: Тез. докл. науч. конф. Харьков, 1991.- С. 117-118.

32. Душук Р. В. Совершенствование специфической профилактики пастереллёза животных // Совершенств, методов гос. контроля вет. препаратов.: Тез. докл.- М., 1991.- С. 156-158.

33. Душук Р. В. Иммуногенность вакцин против пастереллёза свиней // Ветеринария.- 1997.-№10.- С. 18-20.

34. Душук Р.В., Романенко Э.Е., Шапошникова Е.К., Шапошникова JLM. Антигенная характеристика Pasteurella multocida и этиологическая значимость сероваров // ЖМЭИ. -1998.-№3.-С.108-112.

35. Езепчук Ю.В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий. М.: Наука, 1977.-216с.

36. Иммунопрофилактика болезней животных: Пер. с нем./ Под ред. Гизатулина X. Г., Хазипова Н. 3.- М.: Колос, 1981,- 415 с.

37. Иммуноферментный анализ: Пер. с англ./Под ред. Т. Нго, Г. Ленхоффа. -М., Мир, 1988. 446 с.

38. Каральник Б.В., Еркинбекова Б.К., Грушина Т.А. Ускоренная идентификация бактерий агглютинацией на стекле эритроцитов сенсибилизированных антителами // ЖМЭИ.- 1999.- №3.- С. 74-77.

39. Карпухин Г.И., Шапиро Н.И., Андриевская Р.А. Химические вакцины для профилактики кишечных инфекций. JL: Медицина, 1979. - 192 с.

40. Кириллов Л.В., Каган Ф.И., Сторожев Л.И. Количественный метод контроля активности вакцины против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота и овец // Тр. ВГНКИ ветпрепаратов. М, 1977. Т. 23. С. 78-82.

41. Кириллов JI. В., Кружиов Н. Н. Методические основы разработки методов контроля специфической активности вакцин и гипериммунных сывороток // Совершенств, методов гос. контроля вет. препаратов.: Тез. докл.- М., 1991.- С. 8-9.

42. Кириллов JI.B., Сторожев Л.И. Селекционирование производственныхштаммов Cl.chauvaei // Совершенствование методов контроля,стандартизации и сертификации ветер.препаратов:

43. Тез.докл.Всерос.науч.конф.-М., 2001.- С.63.

44. Коляков Я.Е. Ветеринарная иммунология. М.: Агропромиздат, 1986. -166с.

45. Костина Г.И. К вопросу о механизмах химической инактивации микроорганизмов // ЖМЭИ. 1981. - №8. - С.25-32.

46. Куликова И.Л., Попова Т.Е. Токсичность капсульных антигенов Р. multocida // Ветеринария. 1995. - №7. - С.27-28.

47. Лузан Н.С., Скичко Н.Д., Мельник Н.В. Химическая инактивация бруцеллезной культуры // Науч. основы производства вет. биологических препаратов: Сб. докл. междунар. конф. молодых ученых. -Щелково, 2001.-С. 118-121.

48. Мамков Н.С. Масляные адъюванты для противоящурных вакцин. Автореф. дис. д-ра. вет. наук.- М., 1999.- 45 с.5 8.Матвеев В.Е. Научные основы микробиологической технологии (кинетика развития, асептика, масштабирование). М.: Агропромиздат, 1985.-224с.

49. Мейнелл Д., Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология. М.: Мир, 1967.-347 с.

50. Методическое руководство по лабораторной оценке качества бактерийных и вирусных препаратов / Под ред. Дзагурова С. Г. и др. М., 1972.- 302 с.

51. Методические указания по лабораторной диагностике пастереллеза животных и птиц / Утв.зам.нач. Гл.упр. ветеринарии МСХ РФ-20.08.92.-М., 1992.- С.6.

52. Микроэмульсии. Структура и динамика: Пер. с англ.- М.: Мир, 1990.320 с.

53. Мищенко В.А., Базаров М.А., Никешина Т.Б. и др. Ускоренный иммуноферментный метод // 100 лет Курской биофабрике и агробиологической промышленности России: Тез.докл.науч.-произ.конф.-Курск, 1996.-С.95.

54. Мэрфи Ф.А. Условия разработки современных вакцин // ЖМЭИ. 1990. -№11. С. 83-90.

55. Нефёдова Л. А. К вопросу об изучении иммуногенеза при применении ассоциированных вакцин // Вопр. вирусологии.- 1962.- №2.- С. 206.

56. Никифорова Н. М., Лукьянченко А. В. Масляно-адъювантная вакцина против пастереллёза крупного рогатого скота, буйволов и овец // Сб. науч. тр. ВГНКИ вет. препаратов. 1966.- Т.13.- С. 199-206.

57. Никифорова Н. М., Лукьянченко А. В. Изыскание минеральных масел, пригодных для изготовления эмульгированных противопастереллёзных вакцин // Сб. науч. тр. ВГНКИ вет. препаратов. 1969.- Т. 16.- С. 141150.

58. Никифорова Н. М. Адьюванты и их использование в активной профилактике пастереллёза с.-х. животных // Сб. науч. тр. ВГНКИ вет. препаратов. 1969.- Т.16.- С. 223-229.

59. Определитель бактерий Берджи : В 2-х Т. Т.1. Пер. с англ. М.: Мир.-1997.-С.200-203.

60. Панин А.Н., Татаринцев Н.Т., Третьяков А.Д., Гарбузов А.В. и др. Сертификация системный подход к управлению качеством вет.препаратов// Сб.науч.тр. ВГНКИ вет.препаратов. —1996.-Т.59.-С.З-8.

61. Петровская В.Г. Проблема вирулентности бактерий. Л.: Медицина, 1967.-С.25-26.

62. Петровская В.Г., Бондаренко В.М. Микробиологические аспекты иммунобиотехнологии. М.: Медицина, 1992. - С. 100-108.

63. Полоцкий Ю.Е., Бондаренко В.М., Ефремов В.Е. Патогенез кишечных инфекций и морфологическая оценка вакцин // ЖМЭИ.- 1992.- №5-6.- С. 51-57.

64. Практическая химия белка / Под ред. А.Дарбре. М.: Мир, 1989. С. 297299.

65. Рамон Г. Сорок лет исследовательской работы. М.: Медгиз, 1962.-С.177.

66. Роуз Э. Химическая микробиология. М.: Мир, 1971. - С.86-93.

67. Рубан Е.А. Оптимизация и масштабирование процессов глубинного культивирования микроорганизмов и клеток животных с использованием методов системного анализа: Автореф. дис. . д-ра. вет. наук в форме науч. докл.- М., 1995,- 56 с.

68. Руководство по вакцинному и сывороточному делу/Под ред. П.Н. Бургасова М.: Медицина, 1978. - С.120-121.

69. Русалеев В. С. Разработка инактивированных вакцин против сальмонеллёза и пастереллёза свиней // Современ. аспекты патологии животных: Тез. докл. Владимир, 1999.- С. 141-144.

70. Селиверстов В.В. Пастереллезы животных //Ветеринария.-2003.-№10.-С.3-5.

71. Сергеев В.Д., Никитина Н.М.,Мухаметшина А.Р. Иммуноферментный метод в диагностике болезней птиц//Основы профилактики болезней сельскохозяйственной птицы.-Л.,1989.-С.75-82.

72. Серебрякова Е.В., Калинский В.Б., Медведев Н.П. Двухфазное культивирование Serratia marcescens как способ повышения аэрации глубинных культур // Биотехнология. 1999. - №3. - С. 63-66.

73. Серебряный A.M., Андриевский Г.В., Беккер А.Р. и др. Направления алкилирования дезоксигуанидина и дезоксигуантловой кислоты тиотэфом //Биоорган.химия.-1986.-Т.12,№4.-С.499-506.

74. Сидоров М. А., Агаева Э. М. Серологические варианты пастерелл // Бюл. ВИЭВ. 1982.- Вып.45.- С. 3-5.

75. Сидоров М.А., Федотов В.В., Шегидевич Э.А. и др. Изготовление типоспецифических сывороток и применение их для серотипизации пастереллы мультоцида: Методич.рекомендации.-М., 1984.- 18с.

76. Скопинская С.Н., Ярков С.П., Рубцов И.В. Определение антител и соматического О-антигена сальмонел группы В с помощью комплементзависимого лизиса липосом //ЖМЭИ.-1990.-№4.-С.84-88. ■

77. Сохин A. J1. Парадокс инфекционного иммунитета // Микробиология.-1988.- №1.- С. 73-80.

78. Ставцева JL Я., Попова Т. Я. Применение РНГА для серологической идентификации пастерелл // Материалы междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию ВНИИВВиМ.- Покров, 1998.- С. 365-366.

79. Степаншина В.Н., Коробова О.В., Степаншин Ю.Г. и др. Иммунохимические свойства белка капсулы Pasteurella multocida и егороль в процессе диссоциации микроба //Биотехнология.-1996.- №11.- С. 16-21.

80. Татаринцев Н.Т., Нестифорова М.В. Основные показатели качества оценки анатоксинов и инактивированных вакцин против бактериальных и вирусных болезней животных //Сб.науч.тр.ВГНКИ вет.препаратов.-1996.-Т.59.-С.13-17.

81. Тугаринов О.А., Пирожков М.К., Исхакова Т.И. Профилактическая эффективность специфических средств защиты животных и методы контроля качества биологических препаратов // Сб. науч. тр. ВГНКИ вет. препаратов. 1991. - Т. 53. - С. 32-40.

82. Шегидевич Э.А. Состояние и перспективы изучения пастереллезов сельскохозяйственных животных // Акт. Пробл. ветеринарии в промышленном животноводстве: Тр. ВИЭВ. М., 1984. - Т. 60. - С. 5863.

83. Янкина Н.Ф., Шобухова Т.С., Павлова И.П. и др. Применение метода аффиной хроматографии для получения моноспецифических антител к сальмонеллам // ЖМЭИ. 1989. - №3. - С. 74-78.

84. Ярцев М.Я. Разработка технологии вакцин против пастереллеза животных и птиц // Ветеринария. 1996. - №2. - С. 17-19.

85. Ярцев М.Я. Специфическая профилактика и технология вакцинного производства при сальмонеллезах // Ветеринария. 1996. - №8. - С.47-51.

86. Abdullahi M.Z., Gilmour N.J.L., Poxton I.R. Outer membrane proteins of bovine strains of Pasteurella multocida type A and their doubtful role as protective antigens // J. Med. Microbiol. 1990. - N. 32. - P. 55-61.

87. Antybody engineering. H: A Practical Approach. — Oxford University Press, 1996.-325 p.

88. Ashford W.R., Moon M., Tan T.G. A study of the effectiveness of vaccines. Antimicrobial agents in biological products // Develop. Biol. Standard. — 1974.-V. 24.-P. 29-38.

89. Avakian A. P., Dick J. W. Comparison of various antigens and their ability to direct protective antibodies against Pasteurella multocida using ensimelinked immunosorbent assay // Avian Dis.- 1986. V. 30. - P. 527535.

90. Awumbila В., Rosenbusch R.F. Metabolism inhibition as a result of interaction of antibody with a membrane protein of Mycoplasma bovoculi // Current Microbiol. 1991. - V. 22. - P. 221-224.

91. Barrow P.A. The paratyphoid salmonelle // Rev. Sci. Techn. OIE. 2000. -V. 19, N. 2.-P. 351-375.

92. Barteling S.J. Safety control of FMD vaccines 2 // Report of the Session of the Research Group of the Standing Technical Committee of the European Commission for the Control of Foot-and-Mouth Disease. Rome, 1982. - P. 40-48.

93. Bastionello S., Jouker M. Report on the occurence of septicaemia caused by P. multocida type E in cattle from Southern Africa // J. S. Afr. Vet. Assn. -1981.-V. 42.-N. 2.-P. 99-104.

94. Bean H.S. Preservation for pharmaceuticals // J. Cosmet. Chem. -1972. -N. 23.-P. 703-720.

95. Beveridge E.G. Microbial spoilage and preservation of pharmaceuticl products // Pharmaceutical Micribiology, 3 Auft. 1983. - P. 334-353.

96. Bokhout B. A. A selected water-in-oil emulsion: comparison usefullness as an immunological adjuvant// Vet. Immunopath. 1981. - V. 2. - P. 449-500.

97. Caprenter C. P., Smyth H.F., Shaffer C.B. The acute toxicity of ethylene imine to small animals // J. Indust. Hyg. and Toxicol. 1948. - V.30, N. 1. -P. 2-6.

98. Carter G., Byrne J. A serological study of the Haemorrhagic septicaemia Pasteurella // Cornell. Vet.- 1953. V. 43. - P. 223-230.

99. Carter G. Studies on P. multocida 1. A haemagglutination test for the identifing of serological types // Am. J. Vet. Res.- 1955. V. 16. - P. 481484.

100. Carter G. Correlation between haemagglutinating antibody and mouse protection in antipasteurella (P. multocida) sera // Can. J. Micribiol. -1964. -N. 10.-P. 756-765.

101. Carter G. Pasteurellosis: Pasteurella multocida and Pasteurella haemolytica // Adv. Vet. Sci.- 1967. V. 11. - P. 321 -379.

102. Carter G. Improved hemagglutination test for identifying type A strains of Pasteurella multocida // Appl. Microbiology. 1972. - V. 24, N. 1. - P. 162163.

103. Carter G., Subronto P. Identification of type D strains of P. multocida with acriflavine // Am. J. Vet. Res. 1973.- V. 34, N. 2.- P. 293-294.

104. Casolari A. A Model describing microbial inactivation and growth kinetics //J. Theor. Biol. 1981. -N. 88. - P. 1-34.

105. Cerf O. A review Tailing of survival curves of bacterial spores // J. Appl. Bacteriol. 1977. - N. 42. - P. 1-19.

106. Charles S.D., Hussain I., Choi C. et.al. Adjuvanted subunit vaccines for the control of Salmonella enteritidis infection in turkeys // Am. J. Vet. Res.-1994.- V. 55, N. 5.- P. 636-642.

107. Cheville N., Rimler R. A toxin from Pasteurella multocida type D // Vet. Pathol. -1988. V. 25, N. 6. - P. 352-356.

108. Chitang L., Veuing C. Studies on the capsular subunit vaccine against fowl cholera// Acta. Vet. Zoot. Scien. 1988. - V. 19. - P. 195-200.

109. Choi K.H., Maheswaran S.K., Molitor T.W. Comparison of enzyme-linked immunosorbent assay with dot immunobiding assay for detection of antibodies against Pasteurella multocida in turkeys // Avian Dis. 1990.- N. 34. -P. 539-547.

110. Confer A. W. Immunnogenes of Pasteurella // Vet. Microbiol. 1993. - V. 37, N. 3-4.-P. 358-368.

111. Cowen R.A., Steiger A. Antimicrobial activity a critical review of test metods of preservative efficiency // J. Soc. Cosmet. Chem. - 1976. - N. 27. -P. 467-481.

112. Dawkins H. J., Johnson R. B. Haemorrhagic septicaemia: correlation of vaccinal antibody responses in mice with protection against Pasteurella multocida strain M 1404 // Vet. Microbiol.- 1991.- V. 27.- P. 309-326.

113. De Alvis M. Haemorrhagic septicaemia in cattle and buffaloes // Rev. Sci. -1985. V. 3.N.4.- P. 707-730.

114. Desbordes J., Jourdan R. Influence of bacterial enzymes on molecular degradation of antiseptics utilized as preservatives in medical preparations // Develop. Biol. Standard. -1974. N. 24.- P. 77-90.

115. Desmidt M., Haesebrouck F., Ducatelle R. Comparison of the Salmonella-Tek ELISA to culture methods for detection of Salmonella enteritidis in litter and cloacal swabs of poultry // J. Vet. Med. Biol. 1994. - N. 41. - P. 523-528.

116. Digiacomo R. F., Deeb B. J., Brodie S. J. Toxin production by Pasteurella multocida isolated from rabbits with atrophic rhintis // Am. J. Vet. Res.-1993. V. 54, N. 8. - P. 1280-1286.

117. Dominick M. A., Rimler R. B. Turbinate atrophy in gnotobiotic pigs intranasally inoculated with protein toxin from type D P. multocida II Am. J. Vet. Res. 1986. - V. 47. - P. 1532-1536.

118. Dushuk R., Azaryan S. Adjuvant improvement for against pasteurellosis // Ргос.12л' Int. Pig. Vet. Soc. Netherlands, 1992. - P. 397.

119. Dwivedi P., Sadhi S. Morphological, cultural and biochemical characteristics of P. multocida isolated from poultry // Poultry Adv.- 1989. -V. 22, N. 5.-P. 69-71.

120. Elling F. Atrophic rhinitis in pigs induced by a dermonecrotic type A strain of P. multocida И Comission of the Europ. Comm. Belgium. 1983. - P. 123125.

121. Fan H. Serological typing on somatic antigens of Pasteurella multocida strains isolated from birds and mammals 11 Vet. Med.-1984. V. 21, N. 3. - P. 36-40.

122. Fassihi R.A. Preservation of medicines against microbial contamination. I I Disinfection, Sterilization, and Preservation. Block S.S. (Hrsg.), 4. Aufl. -Philadelphia; London, 1991. P. 871-886.

123. FIP-Report. The test for effectiveness of antimicrobial preservation of pharmaceuticals // Pharm. Acta Helv. 1980. - V. 55, N. 2.- P. 40-49.

124. Foged N. Т., Nielsen J. P. Differentiation of toxigenic from nontoxigenic isolates of P. multocida by Enzimelinked Immunosorbent Assay // J. Clinical. Microbiol. 1988.- V.26, N. 7.- P. 1419-1420.

125. Foged N. T. Quantitation and purification of the Pasteurella multocida toxin by using monoclonal antibodies // Infect. Immun. 1988. - V. 56. - P. 19011906.

126. Foged N. Т., Nielsen J. P., Jorsal S. E. Protection against progressive atrophic rhinitis by vaccination with Pasteurella multocida toxin purified by monoclonal antibodies // Vet. Rec. -1989. V. 125 - P. 7-11.

127. Frank G.H. Pasteurellosis of cattle // Adlam C., Rutter J.M. Pasteurella and Pasteurellosis) // Academic Press, New York, 1989. P. 197-222.

128. Freese E., Levin B.C. Action mechanisms of preservatives and antiseptics // Develop. Idustrial Microbiol. -1978. V. 19.- P. 207-227.

129. Freund J. The mode of action of immunologic adjuvants // Adv. Tuberc. Res. 1956.-V. 7.-P. 130-148.

130. Frtih R. Priifung auf ausreichende Konservierung // Pharma-Technologie-J. 1991.-V. 12, N. 4.-P. 22-27.

131. Germanier R. Bacterial Vaccines . Orlando ets: Academic Press, 1984. - P. 16-18.

132. Guthner O. Antagonism and synergy of antigenes // Bull. Organis. mond. Sante. 1956. - V. 13, N. 3. - P. 479-489.

133. Hall W.J., Heddleston K.L., Legenhausen D.A., Hughes R.W. Studies on pasteurellosis: I. A new species of Pasteurella encountered in chronic fowl cholera. Am.J.Vet.Res.-1955.-V. 16.-P.598-604.

134. Hugo W.B. Phenols as preservatives for pharmaceutical and cosmetic prodacts // Cosmetic and Drug preservation / Kabara J.J. (Hrsg.). Marcel Dekker Inc., 1984. - P. 109-114.

135. Jann K., Westphal O. Microbial polysaccharides // The Antigenes. N.Y, 1975.-P. 1-125.

136. Jayakumar R., Ramadass P., Raghavan N. Studies on immune response and protective capacity of rabies vaccine in Indian dogs // Rev. Scient. Techn. Off Int. Epiz. 1989. - V. 8, N. 1. - P. 199-208.

137. Johnson R., Dawkin H. Evaluation of bovine antibody responses to haemorrhagic septicaemia vaccine // Res. in Vet. Sci. 1989. - V. 47. - P. 277-279.

138. Juszkiewicz T. Hyperthermia and prednisolone acetate as provocative factors of Pasteurella multocida infection in chickens. Pol.Arch.Weter.-1966.-V.10.-P. 141-151.

139. Juszkiewicz Т. Effects of shaking and premedication with methylprednisolone on some biochemical indices associated with Pasteurella multocida infection of cockerels. Pol.Arch.Weter.-1966.-V.10.-P.129-140.

140. Kaeberle M.L. Function of carriers and adjuvants in induction of immune responses // Nervig R.M., Gough P.M. Advances in Carriers and Adjuvants for Veterinary Biologies. Ames, Jowa, 1986. -P. 35-49.

141. Keller L.H., Benson C.E. et.al. Monoclonal antibody-based detection system for Salmonella enteritidis II Avian Dis.-1993.-N.37.-P.501-507.

142. Khalil A.A., Jerry K. Evaluation of the immunological response of cattle with the use of different types of Pasteurella vaccines // Vet. Med. 1983. -V. 15.-P. 77-84.

143. Knight J.M., Adlam C., Owen P. Characterization of envelop proteins from Pasteurella haemolitica and Pasteurella multocida II J. Gen. Microbiol. -1990.-V. 146.-P. 495-505.

144. Landi S., Held H.R., Pivnick H. Studies on phenol and chinosol used as preservatives in tuberculin PPD solutions // Bull. WHO. 1968. - V. 39. - P. 809-820.

145. Lee M.D., Wooley R.E., Brown J., Glisson J. R. A survey of potential virulence markers from avian strains of Pasteurella multocida II Vet.Microbiol.-1991 .-V.26.-P.213 -225.

146. Levings R.L., Henderson L.M., Metz C.A. In vitro potency assays for nonreplicating veterinary vaccines: comparison to in vivo assays and considerations in assay development // Vet. Microbiol. 1993. - V. 37. - P. 201-219.

147. Lingnau J. Die Moglichkeiten zur Konservierung pharmazeutischer Zubereitungen // Pharm. Ind. 1970. - Bd. 32.- S. 266-271.

148. Lingnau J. Dia Konservierung fltissiger und halbfester. // Arzneizubereitungen aus der Sicht des Mikrobiologen // Acta Pharmaceutica Technologica. 1977. - V. 23, N. 1. - P. 39-52.

149. Lu Y.S., Lai W.C., Pakes S.P., Nic L.C. A monoclonal antibody against a Pasteurella multocida outer membrane protein protects rabbits and mice against pasteurellosis// Infect, and Immun. 1991. - V. 59. - P. 172-180.

150. Lu Y.S., Aguila H.N., Lai W.C. Antibodies to outer membrane proteins but not to lipopolysacharide inhibit pulmonary proliferation of Pasteurella multocida in mice I I Infect, and Immun. 1991. - V. 59. - P. 1470-1475.

151. Lugtenberg В., Van Boxtell R., Evenberg D. Biochemical and immunological characterization of cell surface proteins of Pasteurella multocida strains cousing atrophic rhinitis in swine // Infect, and Immun. -1986. V. 52, N. 4. - P. 175-182.

152. Lugtenberg В., van Boxtel R., de Jong M. Atrophic rhinitis in swine: correlation of Pasteurella multocida pathogenicity with membrane protein and lipopolysacharide patterns // Infect, and Immun. 1984. - V. 46. - P. 4854.

153. Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines for List A and В Diseases of Mammals, Birds and Bees. Paris: OIE, 2004. - P. 537-547.

154. McCarthy T.J. Formulated factors affecting the activity of preservatives. // Cosmetic and Drug Preservation. / Kabara J.J. (Hrsg.). Marcel Dekker Inc., 1984.-P. 359-388.

155. McKercher P.D. Oil adjuvants: their use in veterinary biologies // Adv. in Carriers and Adjuvants for Vet. Biologies. Jowa, 1986. - P. 115-149.

156. McKercher P.D., Gailiunas P., Capstick P.B. Reaction of swine to oil-adjuvanted inactivated foot-and-mouth disease virus vaccine inoculated byintramuscular and subcutaneous routes // Arch, gesamte Virusforschung, -1976. V. 35, N. 4. - P. 364-377.

157. Mittal K.R., Jaiswal T.N., Gupta B.K. Studies on haemorrhagic septicaemia oil-adjuvant vaccines II Immuniti, trials in mice, rabbits and calves // Indian Vet. J. 1979. - V. 56, N. 6. - P. 449-456.

158. Moore M.K., Chubbs L.C., Gates R.J. A new selective enrichment procedure for isolating Pasteurella multocida from avian and enviromental samples // Avian Dis. 1994. - V. 38. - P. 317-324.

159. Mosier D.A., Confer A.W. The evaluation of vaccines for bovine pneumonic pasteurellosis // Res. Vet. Sci. 1989. - V. 47, N. 1. - P. 1-10.

160. Nakai Т., Tsuiu M., Kutme K. Characterization of dermonecrotic toxin produced by serotype D strains of Pasteurella multocida II Am. J. Vet. Res. -1983. V. 45, N. 11. - P. 2410-2413.

161. Namioka S., Murata M. Serological studies on Pasteurella multocida. 3 On antigenic analysis of culture isolated from varios animals // Cornell. Vet. -1961.-V. 51.-P. 522-528.

162. Nicholas R.A., Cullen G.A. Development and application of an ELISA for detecting antibodies to Salmonella enteritidis in chicken flocks // Vet. Record. 1991. - N. 26.- P. 74-76.

163. Nielsen J.P., Foged N.T., Jorensen V. Vaccination against progressive athrophic rhinitis with a recombinant Pasteurella multocida toxin derivative //Can. J. Vet. Res. 1991.-N. 55.-P. 128-138.

164. Okerman L., Spanoghe L. Protective effects of inactivated Pasteurella vaccines in specific pathogen free (SPF) rabbits // Сотр. Immunol. Microbiol, and Infect. Diseases. 1981. V. 4, N. 2. - P. 223-228.

165. Pat. 1 924 303 ФРГ, МКИ3 A61 . Athylathylenimin als inaktivierungsmittel / Bauer K., Wittmann G., Mussgay M. (ФРГ). 7 p.

166. Phillips C.R. The sterilizing action of gaseous ethylene oxide. 2 Review // Amer. J. Hyg. 1949. - V. 50, N. 1. - P. 280-288.

167. Pindur U. Phenol // Kommentar zum DAB 10, Hartke K., Hartke H., Mutschler E., Riicker G., Wichtl M. (Hrsg.). Deutscher Apotheker Verlag Stuttgart, Govi-Verlag GmbH Frankfurt, 1993.

168. Ramdani В., Aide R. B. Opsonic monoclonal antibodies against lipopolisacharide (LPS) antigens of Pasteurella multocida and the role of LPS in immunity // Vet. Microbiol. 1991. - V. 26. - P. 335-347.

169. Rhoades K.R., Rimber R.B. Capsular groups of Pasteurella multocida isolated from avian hosts// Avian Dis.-1987.-V.31.-P.895-898.

170. Rhoades K.R., Rimber R.B. Toxicity and virulence of capsular serogroup D Pasteurella multocida strains isolated from turkeys// J.Am.Med.Assoc.-1988.-V. 192.-1790p.

171. Rifking D., Pickett M.J. Bacteriophage studies on the hemorrhagic septicemia Pasteurellae //J.Bacteriol.-1954.-V.67.-P.243-246.

172. Rimler R.b., Rebers P.A., Phillips M. Lipopolisacharides of the Heddleston serotypes of Pasteurella multocida II Am. J. Vet. Res. 1984. - V. 45. - P. 759-763.

173. Rimler R.B., Phillips M. Fowl cholera: protection against Pasteurella multocida by ribosome lipopolysacharide vaccine // Avian Dis. - 1986. - V. 30.-P. 409-415.

174. Rimler R.B., Rhoades K.R. Serogroup F, a new capsule serogroup of Pasteurella multocida //J.Clin.Microbiol.-1987.-V.25.-P.615-618.

175. Rimler R.B., Rhoades K. R. Pasteurella and Pasteurellosis. London: Academic Press, 1989. - P. 37-73.

176. Rimler R.B. Presumptive indeutification of Pasteurella multocida serogroup A,D and F by capsule depolymerisation with mucopolysaccharidases // Vet.Rec.-1994.-V. 13 4.-P. 191 -192.

177. Rutter J.M. Atrophic rhinitis in swine // Adv. Vet. Sci. Сотр. Med. 1985.-N. 29. - P. 239-279.

178. Schmidt P.C., Frunck M. Konservierung heute // Pharmazie in unserer Zeit.- 1993.-V. 22, N. 1.-P. 39-44.

179. Schimmel D., Winnefeld K. Shook reaction and pneumonia following administration of P.multocida endotoxin preparation // Ach. exp. Vet. Med.,- 1988.-Bd. 36.-N. 6.-S. 881-887.

180. Sheenan R., Jones L.L. Title 9 Animals and nimal Products, Chapter I (part 1-99) // Code of Federal Regulations. U.S. Goverment Printing Office.- Washington, 1992. P. 789.

181. Skinner F.S. Konservierungsmittelverluste durch Behaltereinfluss. // Informationsdienst APV 1967. Bd. 18. S. 256-294.

182. Smith R.H., Davidson J.N., Henry C.W. Evaluating a live vaccine for P.haemolytica in dairy calves // Vet. Med. 1985. - V. 80, N. 9. - P. 78-88.

183. Soulebot J.P., Milward F., Prevost P. In vivo potency testing of inactivated biologies: current situation in the E.E.C. // Vet. Microbiol. 1993. - V. 37. -P. 241-251.

184. Talkington F.D., Kleven S.H., Brown J. An ensyme-linked immunosorbent assay for the detection of antibodies to Mycoplasma gallisepticum in experimentally infected chickens // Avian Dis. 1985. - V. 29, N1. - P. 5370.

185. Vadal M.S., Ahooja M.L. Immunity trials in mice, rabbits and calves with oil-adjuvant and multiple emulsion oil-adjuvant vaccines against Haemorrhagic septicaemia // Indian J. of Animal Sci. 1983. - V.53, N. 7. -P. 705-708.

186. Veterinary Medicines Directorate. Guidelines for the production and control of veterinary bacterial vaccines // Central Vet. Laboratory, New Haw, Weybridge, U.K. MAL., 1991. P. 76.

187. Visser N., Moortmeyer R. Quntification characterization and safety testing of foot-and-mouth disease virus antigens eluted from alhydrogel vaccines // Develop. Biol. Standard. 1982. - V. 50. - P. 277-283.

188. Walhauser K.H. Praxis der Sterrilisation, Desinfektion-Konservierung: Georg Thieme Verlag, Stuttgart; New York., 1988.- 4. Aufl. S. 118-125.

189. После проведения опыта получены следующие результаты:п/п Наименование Опытная группа Контроль1. Сохранность P/Z

190. Продуктивность (средне суточный привес или яиц на несушку) /9,5~3. % выбраковки ж4. Получено прибыли 1. Koi\W

191. Федеральная служба по ветеринарному и фитосанитарному надзору Федеральное государственное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГУ "ВНИИЗЖ")

192. УДК 619:616.98:579.843.95:636.5:615.371 Группа Р-31

193. ТРЕХВАЛЕНТНАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ЭМУЛЬСИОННАЯ

194. Технические условия ТУ 9384-114-00495527-03 ' '1. На опытную партию

195. Срок введения с пЛ0 " ММХЛ® 200^г. На срок до "&Q200бг.1. РАЗРАБОТЧИКИ

196. Заведчющий^абораторией ВНИИЗЖ .В.С.Русалеев1. ЯЯ/ье^Я 200-^г.1. Старш1. Копия верна

197. Ученый секретарь ФГУ ВНИИЗЖ ^научный сотрудник ВНИИЗЖ -В.М. Гневашев1. ОМ^ЛЦ 200 <£гГ

198. Ведущий научный сотрудник ВНИИЗЖ

199. О.В. Прунтова " /3 " jfe^W 2Q0jr.дник ВНИИВВиМ Бородина 200-^г .1. Г.М. Семенова1. Копия

200. Ученый секретарь ФГУ ВНИИЗЖова

Информация о работе

Бородина, Ольга Владимировна
кандидата биологических наук
Ульяновск, 2005
ВАК 03.00.07

Диссертация

Разработка инактивированной эмульсионной вакцины против пастереллеза птиц - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно