Разработка и внедрение технологии промышленного производства и системы управления качеством ассоциированной паротитно-коревой вакцины

Колышкин, Владимир Михайлович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Разработка и внедрение технологии промышленного производства и системы управления качеством ассоциированной паротитно-коревой вакцины
ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Разработка и внедрение технологии промышленного производства и системы управления качеством ассоциированной паротитно-коревой вакцины"

На правах рукописи

КОЛЫШКИН Владимир Михайлович

Разработка и внедрение технологии промышленного производства и системы управления качеством ассоциированной паротитно-коревой вакцины

03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

2 1 ОКТ ?010

Москва-2010

004610784

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ) и ФГУГТ научно-производственное объединение «МИКРОГЕН» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный консультант: Доктор биологических наук, доцент

Васильев Алексей Васильевич

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Белоусова Раиса Васильевна.

2. Доктор биологических наук, профессор Еремец Владимир Иванович.

3. Доктор биологических наук, профессор Тихонова Нина Тимофеевна.

Ведущая организация: Государственное Учреждение НИИ вакцин и сь: вороток им. И.И. Мечникова РАМН

Защита состоится -/ » 2010 года в часо

на заседании Диссертационного совета Д.220.042.01 в ФГОУ ВПС «Московская государственная академия ветеринарной медицины и бис технологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, Москва, ул. Акг демика Скрябина, 23; тел. (495) 377-93-83

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВП< МГАВМиБ.

Автореферат разослан « УУ/ » ёсУ^УМ'//?*'/ 2010 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Борьба с инфекционными болезнями, составляющими 60-70% общей патологии человека и животных, является важнейшей задачей современной медицины и ветеринарии. Система мер профилактики и борьбы с инфекционными заболеваниями многообразна, но ведущее место в ней принадлежит вакцинации (В.Ф. Учайкин, 2001, Н.В. Медуницын, 2004). Именно с прививками связаны достигнутые в борьбе с инфекциями успехи, на них строятся и перспективы ликвидации некоторых из них. Иммунопрофилактика получила широкое распространение в мировой медицинской и ветеринарной практике. Так, ежегодно в мире вакцинируется около 1,5 млрд. человек, что составляет около 1/4 населения планеты (Г.Г. Онищенко, 2006) и до 70 % поголовья животных (И.А. Бакулов, 1998). В РФ вакцинация взята под контроль Государства (Федеральный Закон от 17 сентября 1998 г. № 157-ФЗ "Об иммунопрофилактике инфекционных болезней", Приказ от 27.06.2001 № 229 МЗ РФ).

Стратегия и тактика вакцинопрофилактики вирусных инфекций затруднена в ряде случаев из-за перегруженности календаря прививок. Одним из радикальных решений данной проблемы является разработка и рациональное использование вместо моно препаратов ассоциированных вакцин, применение которых имеет несомненные преимущества в плане сокращения количества инъекций, снижения уровня аллергизации населения, создания напряженного иммунитета одновременно к нескольким инфекциям (Б.Ф. Семенов 2003, В.В. Зверев, 2005).

При разработке и апробации ассоциированных вакцин предварительно оцениваются совместимость и оптимальное соотношение исходных антигенов, дозы и схемы вакцинации и ревакцинации, а также клинико-иммунологическое обоснование возможности и эффективности применения препаратов. Каждая новая разработка ассоциированных вакцин оценивается с учетом указанных требований (В.Ф. Попов, 2002).

Важность проблемы стабильного производства иммунобиологических препаратов, используемых для выполнения Национального календаря профилактических прививок, связана с тем, что Всемирная Организация Здравоохранения поставила перед национальными органами здравоохранения задачу ликвидации за-

болеваемости корью и резкого снижения заболеваемости эпидемическим паротитом в мире к 2010 году (Т. А. Бектемиров, 2002).

В настоящей работе приведены материалы исследований по разработке технологии производства ассоциированной вакцины против кори и эпидемического паротита (АПКВ), созданию и внедрению системы управления качеством, включая анализ стабильности производства вакцинных препаратов с помощью статистических методов управления качеством.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилась разработка технологии промышленного производства ассоциированной паротитно-коревой вакцины, изучение безопасности и эффективности нового вакцинного препарата и внедрение его в практику.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить пригодность вакцинного штамма эпидемического паротита Ленинград-3 (Л-3) для включения его в АПКВ.

2. Создать систему управления качеством и проведения анализа технологических процессов производства препаратов, изготавливаемых на предприятии в соответствии с требованиями стандартов надлежащей производственной практики вМР.

3. Провести оценку стабильности промышленного производства моновакцин для создания ассоциированного препарата.

4. Разработать методы контроля и мониторинга, позволяющие получить доказательства стабильности производства монопрепаратов.

5. Создать промышленную технологию производства АПКВ, провести производственные испытания в соответствии с требованиями программы, утвержденной ГИСК им. Л .А. Тарасевича (ГИСК).

6. Провести оценку стабильности производства АПКВ с использованием современных специализированных программных пакетов по статистической обработке и анализу данных производственно-технологических процессов.

7. Разработать и утвердить нормативную документацию на производство, зарегистрировать ассоциированную вакцину для применения на территории РФ.

8. Оценить эпидемиологическую эффективность применения АПКВ по разработанной технологии в медицинской практике.

9. Оценить экономическую эффективность внедрения новой технологии производства АПКВ.

Научная новизна.

1. Впервые на основе существующей аппаратурно-технологической базы создано промышленное производство АПКВ, для обеспечения потребности РФ в средствах защиты от кори и эпидемического паротита.

2. На основе созданной производственной базы осуществляется выпуск АПКВ для обеспечения национального календаря профилактических прививок (Приказ от 27.06.2001 № 229 МЗ РФ).

3. Разработаны методы контроля клеточных линий, используемых для производства АПКВ. Внедрена система управления качеством при производстве монопрепаратов и АПКВ.

4. Проведена оценка эпидемиологической эффективности АПКВ в условиях

массового применения (более 20 млн. доз, 2001-2009 гг.).

Научная новизна результатов работы подтверждена получением патентов:

- Патент РФ на изобретение № 2158134 от 27.10.2000 г. «Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины». Зайцев И.З., Колышкин В.М., Сидоренко Е.С., Попов В.Ф., Юминова Н.В., Красильников И.В., Дорофеева Л.В.;

- Евразийский патент № 002387 от 25.04.02 г. «Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины». Зайцев И.З., Колышкин В.М., Сидоренко Е.С., Попов В.Ф., Юминова Н.В., Красильников И.В., Дорофеева Л.В.

Практическая значимость и внедрение результатов научных исследований в производство.

1. Ассоциированная вакцина, производимая по разработанной технологии, используется для профилактики кори и паротита у детей соответствующих возрастов.

2. Разработана и утверждена в установленном порядке нормативная документация (НД) на производство АПКВ. Получено регистрационное удостоверение

Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития № РМЮ0544/01 от 14.03.2008 г.

3. Вакцина АПКВ включена в Национальный календарь профилактических прививок РФ.

4. На предприятии-изготовителе действует система управления качеством в соответствии с требованиями ГОСТ Р 52249-2004.

5. Результаты научных исследований по разработке технологии приготовления АПКВ используются в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ.

Апробация результатов диссертации.

Основные результаты работы доложены и обсуждены на:

- Международном конгрессе «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней - прогресс и проблемы» (СПб., 2003 г);

- 1-ом Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству (Москва, 2005 г.);

- IX - XV Международных конференциях «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Гурзуф 2001-2007);

- VIII, IX съездах Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. (Москва, 2006,2007 гг.);

- Российском симпозиуме с международным участием «БИОФАРМА-2009». (Анталия, 2009 г.).

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 327 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания использованных материалов и методов, собственных исследований, обсуждения, выводов, практического использования полученных научных результатов, рекомендаций по использованию научных выводов, списка цитируемой литературы, включающего 155 источника (83 отечественных и 72 зарубежных авторов) и четырех приложений. Работа иллюстрирована 193 рисунками и содержит 58 таблиц.

Публикации.

Основные научные результаты по материалам, изложенным в диссертации, опубликованы в 62 работах, из них в рецензируемых научных изданиях и журналах, рекомендованных ВАК, опубликовано 15 работ, получено 2 патента.

Основные положения и результаты, выносимые на защиту.

1. Впервые созданная технология промышленного производства АПКВ на основе аттенуированных вакцинных штаммов вируса эпидемического паротита Л-3 и кори Л-16, позволяет обеспечить выпуск препарата в требуемых объемах для проведения профилактических мероприятий.

2. Критерии оценки пригодности клеточных систем культивирования и контроля, позволяющие осуществлять стабильное промышленное производство вакцин надлежащего качества с полноценными иммунобиологическими свойствами, обеспечивающее безопасное и эффективное применение.

3. Разработанная система управления качеством, включающая контроль сырья, материалов, полуфабрикатов, готовой продукции, мониторинг показателей технологических процессов при производстве АПКВ позволяет получить объективную оценку качества продукции.

4. В результате созданной технологии производства и системы управления качеством в период с 2001 года по настоящее время выпущено более 20 млн. доз АПКВ.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Для создания ассоциированной паротитно-коревой вакцины использовали вакцинные штаммы, применяемые для изготовления моновакцин: Ленинград -16 (Л-16) вируса кори; Ленинград - 3 (Л-3) вируса эпидемического паротита. Их культивировали в первично-трипсинизированных фибробластах эмбрионов японского перепела. Перепелиные яйца и перепелиные эмбрионы соответствовали требованиям ФСП 42-01450431- 00 «Эмбрионы японского перепела для производства вирусных вакцин».

Процесс изготовления АПКВ включает получение вируссодержащей жидкости (ВСЖ) кори и эпидемического паротита, сведение их с защитной средой (получение жидкого полуфабриката), с последующим объединением жидких полуфабрикатов. Стабильный выпуск моновакцин против кори и эпидемического паротита надлежащего качества позволил разработать новую оригинальную технологию производства ассоциированной паротитно-коревой вакцины.

Из эмбрионов перепелов за один производственный цикл готовят клетки для засева 24 роллерных культуральных флаконов, 20 из которых заражают вакцинным вирусом кори, штамм JI-16, в дозе от 0.01 до 0.001 ТЦД50 на клетку и инкубируют при температуре 36±0,2° С, 4 флакона оставляют контрольными. Из 20 зараженных роллерных флаконов получают около 6 литров вируссодержащей жидкости 1-4 сливов. Каждый полученный слив в объеме около 0,3 л контролируют на отсутствие контаминантов и определяют величину специфической активности титрованием в культуре клеток Vero.

Состояние перевиваемых линий клеток контролировали с помощью проточной цитометрии с использованием проточного цитофлуориметра EPICS-5 (Coulter Electronics, США). Учет специфической активности вируса проводили по цитопа-тическому действию вируса и рассчитывали по методу Reed L.J., Muench Н.А., (1938).

Не содержащие контаминантов жидкие полуфабрикаты, полученные за один технологический цикл, со специфической активностью более 4,2 lg ТЦЦ5о/0,5 мл хранят при температуре минус 50-56° С в течение необходимого времени, затем размораживают, повторно титруют, сводят в один пул и используют для сведения с полуфабрикатом вакцины против эпидемического паротита.

Технология производства паротитной моновакцины очень близка к технологии производства коревой вакцины и различается в деталях. В соответствии с регламентом и ФС 42-0038-00 «Вакцина паротитная культуральная живая сухая» производится из отечественного штамма Л - 3. Отличия в технологии изготовления паротитной вакцины касаются дозы заражения, времени съема и количества сливов. Контроль над качеством титрования вирусных сборов проводится с помощью отраслевого стандартного образца (ОСО) вакцинного вируса эпидемического паротита.

Главным достижением в технологии производства ассоциированной паро-титно-коревой вакцины является разработка способа сведения полуфабрикатов кори и эпидемического паротита, обеспечивающего в сухом препарате преобладание паротитного компонента над коревым приблизительно на 1 lg.

Жидкие полуфабрикаты кори и эпидемического паротита, являющиеся полуфабрикатами для моновакцин, сводят в определенном соотношении, как указано в патенте, тщательно перемешивают, разливают в ампулы и лиофилизируют. Одна прививочная доза АПКВ содержит:

- не менее 1000 ТЦЦ5о - 3 тканевых цитопатогенных доз (ТЦ Д5о/0,5 мл) вируса кори;

- не менее 20 ООО ТЦЦ50 - 4. 3 ^ ТДЦ50/0,5 мл вируса эпидемического паротита;

- антибиотик - гентамицина сульфат не более 25 мкг;

- стабилизатор - смесь ЛС-18 - 0,08 мл., и 0,002 г. желатина.

С целью стандартизации процесса титрования обоих вирусов на предприятии создан банк перевиваемых культур клеток, который аттестован ГИСК им. Л.

A. Тарасевича.

С целью управления производством с использованием процессного подхода на основе реальной информации, на предприятии создана система обеспечения качества в соответствии с требованиями стандартов ИСО серии 9000 (Колышкин

B.М., 2004).

Стабильность производства компонентов и готового продукта АПКВ изучали с использованием статистических методов (Митрохин И.Н., Орлов А.И., 2007; Орлов А.И., 1997). Анализу подвергали записи маршрутных листов технологического процесса получения коревой и паротитной вакцин, имеющиеся на предприятии в электронном виде.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Учитывая, что технология создания суммирует технологии создания коревой и паротитной моновакцин, нами рассмотрены вопросы создания моновакцин, а затем приведены данные по готовому продукту - ассоциированной паротитно-коревой вакцине.

Характеристика универсального субстрата для промышленного производства полуфабрикатов коревой и паротитной вакцин

Фибробласты перепелов являются единым субстратом для производства вакцин против кори и эпидемического паротита. Все операции по получению культуры регистрировали в разработанных маршрутных картах. Эффективность и стабильность процесса трипсинизации оценивали по выходу клеток на 1 г. ткани. В табл. №1,2 приведены результаты оценки выхода клеток в период с 2002 по 2005 годы на участках по производству коревой и паротитной вакцин.

Таблица 1. Анализ данных по выходу клеток на участке по производству

коревой вакцины за 2002-2005 г.г.

Год Количество колб Выход клеток, ед. х 106/г.

М±а Мин. Макс. Размах С v %

2002 19 65,3±5,0 55,7 72,2 16,5 7,66

2003 26 63,9±4,3 53,6 70,1 16,5 6,72

2004 36 60,7±4,0 51,5 71,8 20,3 6,59

2005 50 60,7±5,5 46,6 82,9 36,4 9,06

Как видно из приведенных данных выход клеток составил ~ 61-65 млн. на 1 грамм ткани. Аналогичные данные были получены по оценке процесса получения клеток на участке по производству паротитной вакцины.

Таблица 2. Анализ данных по выходу клеток на участке по производству __паротитной вакцины за 2003-2005 г.г._

Год Количество колб Выход клеток, ед. х 106/г.

М±а Мин. Макс. Размах С v %

2003 32 76,6±4,3 68,0 83,4 15,4 5,61

2004 39 74,7±3,6 67,0 80,2 13,2 4,82

2005 23 75,1±3,1 71,4 85,3 13,9 4,13

Как видно из приведенных в табл. 1,2 данных, процесс трипсинизации и на паротитном и на коревом участках проходит в стабильном режиме. Однако судя по выходу клеток, эффективность трипсинизации на участке по производству паротитной вакцины выше (на 20%), а коэффициент вариации ниже.

Низкие и близкие по значению показатели размаха и коэффициента вариации в период 2002-2008 гт. свидетельствуют о стабильности процесса промышленного получения культур клеток. В 2005 г. в связи с увеличением необходимого объема полу-

чения клеток для производства коревой вакцины, вариабельность процесса трипсини-зации возросла в среднем на 2%, что хорошо согласуется со случайным характером воздействий, ответственных за разброс. Более наглядные выводы были получены после обработки всего массива данных с использованием программного продукта компании Stat Soft Статистика-5.5.

В качестве примера приведены результаты за 2004 г. на участке по производству коревой вакцины (Рис. 1).

Контрольная Х- карта Шухарта по выходу клеток на грамм ткани на участке по производству коревой вакцины за 2004 год (по порциям при п=2)

Х- ка рта Сиелнее 6.06 х 107. О = 4.6 х 106 п: 2

7,04 х 107 6,06 х 107 5,09 х 107

Рис. 1. Х-карта выхода клеток на участке по производству коревой вакцины

Анализ контрольной карты свидетельствует о стабильности процесса трип-синизации в коревом подразделении, так как колебания показателей укладываются в рамки ± 3 ст. Сходные данные получены и при анализе стадии получения фиброб-ластов эмбриона перепела в паротитном подразделении. Полученные результаты демонстрируют стабильность приготовления клеток для производства вакцин как в паротитном, так и в коревом подразделениях, а повышенный выход клеток при производстве паротитной вакцины обосновывает необходимость создания единого подразделения для трипсинизации клеток, что и было реализовано с 2006 г.

Анализ поствакцинальных осложнений при использовании вакцинных штаммов вирусов эпидемического паротита и кори

По данным ВОЗ, ретроспективный анализ остаточной нейровирулентности, проведенный Galazka A.M., et all., 1999 г. указывает на наличие высокой частоты возникновения поствакцинальных асептических менингитов, 20-100 случаев на 100.000 доз вакцины, произведенной с использованием штамма «Л-3 Загреб».

Эти данные расходятся с результатами, наблюдаемыми при массовой вакцинации против эпидемического паротита в РФ вакциной произведенной с использованием отечественного штамма «JI-З», 0-4 случая на 100.000 доз вакцины.

Только при анализе многолетних накопленных данных можно получить статистически значимые результаты. Мы изучили совместно с проф. С.М. Харит (НИИ детских инфекций, г. С-Петербург) частоту серозного менингита, возникающего при массовой вакцинации штаммом JI-З вируса паротита. Расчет частоты подтвержденных вакциноассоциированных серозных менингитов на число доз использованной вакцины в г. Санкт-Петербурге показал, что в 2001 г. был 1 случай на 97.178 доз (показатель 1,03 на 100.000), а в 2002 г. - 3 случая на 114.391 дозу (2,6 на 100.000). Полученные результаты практически совпадают с представленной в литературе частотой менингитов при использовании штамма «Jeryl Lynn» и свидетельствуют о высокой безопасности отечественного вакцинного штамма «JI-З».

По эффективности штамм «JI-З», по нашим совместным с проф. С.М. Харит исследованиям, не уступает японскому штамму «Urabe», а по степени реактоген-ности (из-за отсутствия куриного белка) штамм «JI-З» находится на более низком уровне, чем другие вакцинные штаммы вируса эпидемического паротита. Учитывая, что у всех вакцинных штаммов вируса паротита, за исключением швейцарского штамма «Rubini», определена последовательность нуклеотидов полного генома, мы смогли провести сравнение всех опубликованных полных геномов вирусов паротита в сравнении с вакцинными штаммами «JI-З» и «Л-З-Загреб».

Построенное дерево родственных взаимоотношений указывает, что штаммы «Л-3», «Л-З-Загреб», «Jeryl Lynn», «Urabe» значительно различаются.

Исследования, проводимые согласно регламенту с периодичностью 3-5 лет на обезьянах, при использовании внутримозгового инфицирования, свидетельствуют об отсутствии нейровирулентности штамма «Л-3» в сравнении с другими вакцинными штаммами.

Коревой вакцинный штамм «Л-16», как и другие используемые для производства противокоревых вакцин, принадлежат к генотипу А.

Сравнение вакцинных штаммов вирусов кори, используемых при производстве за рубежом, и штамма Л-16, применяемого для производства коревой вакцины в России, позволило нам вместе с сотрудниками ГИСК им. Л.А. Тарасевича выявить, что вакцина на основе штамма «Л-16» не уступает по эффективности и безопасности вакцинам, применяемым в развитых странах, и характеризуется меньшей реактогенностью по сравнению с ними. В табл. 3 приведены обобщен-

ные данные.

Таблица 3. Сравнительная характеристика вакцин против кори, __произведенных за рубежом и в РФ _

Страна, фирма Штамм Кол-во наблюдений Номер серии Специфическая активность, ^ ТЦД50/ 0,5 мл Кол-во реакций, %

Франция, Пастер-Мерье Шварц 62 631 1054 3,80 3,97 15

Япония, Кам-70 68 352 353 4,52 4,27 18

Россия, МПБП Л-16 51 310 347 3,95 4,32 3

Контроль Без вакцинации 52 - - 3

Проведенный нами анализ показывает, что применяемые в РФ вакцинные

штаммы «Л-16» вируса кори и «Л-3» вируса эпидемического паротита отвечают

веем требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам.

Оценка стабильности промышленного производства моновакцин против кори и эпидемического паротита для создания ассоциированного препарата

Технология производства полуфабрикатов паротитной и коревой вакцин

включала следующие стадии:

- получение первично-трипсинизированных фибробластов японского перепела;

- инфицирование клеточной суспензии и культивирование вируса в роллер-ных аппаратах;

- отмывание зараженных монослоев клеток и культивирование вируса на клетках в бессывороточной среде;

- получение индивидуальных сборов вакцинных вирусов;

- объединение индивидуальных сборов;

- осветляющую фильтрацию, добавление криопротектора и получение жидкого полуфабриката.

Полученные полуфабрикаты использовали как для приготовления моновакцин против кори и паротита, так и для приготовления ассоциированной вакцины. Предпринимаемые ранее попытки создания АПКВ не увенчались успехом из-за невозможности получения компонентов вакцины с требуемыми параметрами. С целью устранения выявленных недостатков нами была предложена методология описания производственных процессов с фиксированием измеряемых характеристик и величин. Для этого мы провели статистический анализ параметров технологического процесса, контролируемых при производстве моновакцин.

Подбор линии клеток для контроля специфической активности вирусов кори и эпидемического паротита

Оценку биологической активности полученных вирусов, согласно регламенту, проводили в монослойной культуре клеток Vero. Мы проанализировали 4 тро-фоварианта линии клеток VERO, полученные из института вирусологии им. Д.И.Ивановского (РФ), США, Канады и Англии.

Были отобраны 2 трофоварианта клеток VERO В и VERO WHO, которые были аттестованы в ГИСК им. JI.A. Тарасевича и ЕСАСС соответственно.

Изготовление и паспортизация эталонного и рабочего банка линий клеток VERO

Снижение уровня алогггоза в клетках, культивируемых in vitro, требует создания

и использования эталонного и рабочего банков линий клеток, сохраняемых длительное время в жидком азоте и периодического их обновления. Банк клеток был создан в период с 2001 по 2003 г.г. в рамках выполнения исследований по данной диссертации на предприятии, что соответствует требованиям ВОЗ (1988) и РД 42-28-10-89. Для изготовления эталонного и рабочего банков использовали суспензии клеток линий VERO В и VERO WHO. Полученные культуры были размножены, культивированы стационарным и роллерным методами, проконтролированы на отсутствие возмож-

ных контаминантов, в т.ч. микоплазм. Были изучены ростовые свойства и морфология клеток при культивировании. Клетки были расфасованы в криопробирки, заморожены и заложены на длительное хранение в жидкий азот. Эталонные и рабочие банки линий VERO В и VERO WHO были изготовлены на изолированных площадях из клеток 140 и 141, 179 и 181 пассажей соответственно. После размораживания жизнеспособность клеток в суспензии линии VERO В и VERO WHO составила 8792 и 89-94% . Клетки обладали удовлетворительными адгезивными и ростовыми свойствами, формировали монослой на 5-7 сутки инкубирования, а полученные культуры были стерильными, не содержали микоплазменной контаминации и не отличались морфологически от исходных клеток. Морфологические и культуральные свойства линий клеток VERO восстанавливались через 2-3 пассажа после криокон-сервирования. Следует также отметить, что клетки линий VERO В и VERO WHO сохраняли на исходном уровне жизнеспособность и культуральные свойства в течение 2-х лет хранения (срок наблюдения) в жидком азоте.

При повседневном контроле специфической активности вирусных сборов и вакцин против кори и паротита использовали клетки Vero, и отраслевые стандартные образцы вирусов паротита штамм JI-3 (серия ОСО-8) и вируса кори штамм JI-16 (серия ОСО-347), аттестованные в ГИСК.

Для постоянного контроля активности вирусов кори и паротита лаборатория контроля использует в год не менее 10 ампул культур. Созданный рабочий банк позволил обеспечить производственные потребности в стандартном клеточном сырье на последующие, как минимум, 15 лет.

По материалам выполненных исследований созданы и паспортизированы эталонные и рабочие банки наиболее перспективных для контроля производства линий клеток VERO.

Статистическая оценка технологических процессов производства моновакцин против кори и эпидемического паротита

Статистическая оценка отраслевых стандартных образцов вакцинных вирусов на примере отраслевого стандартного образца (ОСО) 8 вакцинного вируса эпидемического паротита, штамм «J1-3»

Стандартизовав линию клеток, пригодных для определения биологической активности, мы провели оценку технологических процессов производства моно-

вакцин против кори и эпидемического паротита. С этой целью мы изучили процесс определения биологической активности. Для этого использовали данные по титрам специфической активности отраслевого стандартного образца ОСО 8 вакцинного вируса эпидемического паротита штамм «JI-З» за 2004 год.

При анализе ОСО 8 было проанализировано 118 наблюдений. Среднегеометрический показатель значения титра равен 5,19 lg ТЦД5О/0,5 мл., минимальный титр - 4,37 lg ТЦД50/0,5 мл., максимальный - 5,54 lg ТЦД5о/0,5 мл., о - 0,21. Полученные результаты позволяют с помощью величины показателя стандартного отклонения оценить разброс данных от среднего значения и выявить характер распределения.

При нормальном распределении 68% всех наблюдений лежит в диапазоне М ± 1 о, 95 % в диапазоне М ± 2 о и 99,73% значений в диапазоне М ± 3 о.

В нашей выборке М±Зо (5,19±0,63), все показатели должны располагаться в интервале от 4,56 lg ТЦД50/0,5 мл до 5,82 lg ТЦД50/0,5 мл. Фактически в выборке только одно значение выходит за рамки М ± 3 о, т.е. диапазон нормального распределения содержит 99,15% значений, что является доказательством нормального распределения. Для дальнейшей оценки использовали ГОСТ Р ИСО 5479-2002 «Статистические методы. Проверка отклонения распределения вероятностей от нормального распределения».

Для подтверждения «нормальности» распределения строили нормальный вероятностный график с помощью программы STATISTICA.

При построении графика по оси Y откладывали вычисленные значения Zj (ожидаемые нормальные вероятностные значения), а по оси X - наблюдаемые значения специфической активности. Если наблюдаемые значения специфической активности распределены нормально, то все значения на графике должны быть на, или вблизи прямой линии. На рис. 4 приведен нормальный вероятностный график значений специфической активности ОСО 8 вакцинного вируса эпидемического паротита.

Наблюдаемое значение специфической активности

Рис.2. Нормальный вероятностный график для значений специфической активности отраслевого стандартного образца вируса

паротита ОСО 8

Как видно из рис. 2, основная часть показателей находится на прямой линии, что свидетельствует о близости распределения данных по специфической активности стандартного образца вакцинного вируса эпидемического паротита к нормальному распределению, т.е. вариабельность титра ОСО 8 вакцинного штамма вируса паротита имеет случайный характер.

Аналогичное заключение было сделано и при анализе определения биологической активности ОСО 347 вакцинного вируса кори «Л-16».

Эти данные позволяют сделать заключение о возможности внедрения статистической системы контроля производства для оценки стабильности производственных процессов.

Статистическая оценка стабильности производства жидких полуфабрикатов вакцин против кори и эпидемического паротита

Статистической оценке подвергали результаты анализа сливов вакцинного вируса кори, полученного на клетках фибробластах эмбрионов перепела (ФЭП), в период с 2002 по 2005 г.г. Установлено, что биологическая активность каждого слива (с первого по четвертый) подчиняется нормальному распределению. Результаты анализа образцов культуральных жидкостей первого слива в 2002 г.г. приведены на рис. 3.

-3

4,0 4,4 4,8 5,2 5,6 6,0 6,4

наблюдаемое значение специ<фической активности

Рис. 3. Нормальный вероятностный график для значений специфической активности 1 слива вируса кори за 2002 год

Проведенный статистический анализ специфической активности 1-4 сливов в

период с 2002 по 2005 год представлен в табл. 4.

Таблица 4. Специфическая активность сливов вируса кори в зависимости от номера слива по годам

№ слива 2002 2003 2004 2005

п Х+о п Х+о п Х+о п Х+о

1 391 5,37 0,44 487 5,28 0,41 736 5,40 0,42 1175 5,24 0,56

2 408 6,03 0,42 476 5,64 0,53 734 5,70 0,62 1178 5,52 0,64

3 408 6,20 0,44 466 6,10 0,45 723 6,31 0,45 1160 6,18 0,55

4 296 6,30 0,40 429 6,36 0,40 219 6,20 0,38 925 6,22 0,48

По результатам, представленным в табл. 9 можно сделать следующее заключение: - с увеличением номера слива увеличивается биологическая активность собираемой культуральной жидкости, процесс накопления вакцинного вируса кори в каждом сливе стабилен.

Далее мы оценили вариабельность процесса накопления вируса кори с помощью контрольных карт Шухарта и кусум-карт. Только среди первых

сливов на карте удалось выявить выпадение единственной точки из допустимых границ.

Несмотря на стабильность значений специфической активности вакцинного вируса кори в целом, выявлены различия в титрах между колбами. Одним из регистрируемых факторов, оказывающих влияние на величину титров, является показатель множественности заражения, который выражается в ТЦД50 на клетку. Анализ данных за 2002-2004 гг. приведен в табл. 5.

Таблица 5. Показатели множественности заражения клеток ФЭП вирусом кори

№ п/п Год п Мт., ТВДг/кл. Мах. ПШкл. Мах./Мт. Размах М± о М/ст

1 2002 19 0,0040 0,093 23,25 0,0890 0,024±0,023 1,04

2 2003 26 0,0050 0,037 7,40 0,0320 0,016±0,009 1,77

3 2004 34 0,0001 0,030 300,00 0,0299 0,014±0,008 1,75

Как видно из табл. 10 множественность заражения на клетку вирусом кори в разные годы колебалась в широких пределах - от 0,0001 ТЦД50/кл. до 0,093 ТЦД50/кл. Вполне вероятно, что различия в множественности заражения сказываются на биологической активности вирусных сливов. Действительно, анализ данных показал, что в 2002 году, когда вариабельность заражающих доз была максимальной, наблюдалась определенная тенденция снижения накопления вакцинного вируса кори в сливах с высокой множественностью заражения (табл. 6).

В дальнейшем были проведены корректирующие действия по уменьшению вариабельности множественности заражения на стадии заражения клеток ФЭП. Максимальная заражающая доза была снижена с 0,09 (в 2002 году) до 0,04-0,03 в 2003 - 2008 году, соответственно. В результате биологическая активность третьих и четвертых сливов (определяющих биологическую активность объединенных сливов) меньше варьировала.

Таблица 6. Анализ данных по влиянию множественности заражения вирусом кори на титры сливов по данным за 2002 год

№ По всем сли- СЛИВЫ

п/п ТЦД50/кл. вам в целом, I II III IV

М± о М±о М± о М ± о М±о

1 Тысяч- п = 511 п= 137 п= 135 п= 135 п= 104

ные доли 5,92±0,49 5,44±0,37 6,01±0,32 6,07±0,45 6,22±0,39

2 0,01 140 40 40 40 20

5,99±0,50 5,51±0,36 5,99±0,35 6,32±0,42 6,30±0,32

3 0,02 390 100 99 99 92

6,09± 0,64 5,26±0,40 6,09±0,41 6,49±0,36 6,55±0,30

4 0,03 134 38 38 38 20

5,93±0,68 5,23±0,36 6,14±0,69 6,19±0,48 6,35±0,48

5 0,04 57 19 19 19 -

5,91±0,34 5,79±0,29 5,98±0,39 5,95±0,33

6 0,06 51 17 17 17

6,00±0,41 5,74±0,27 6,41±0,27 5,8б±0,36

7 0,09 80 20 20 20 20

5,82±0,55 5,20±0,51 5,90±0,44 6,06±0,36 6,13±0,30

На следующем этапе производства, после проведения всех контрольных операций, проводили объединение вируссодержащих сборов. Индивидуальные вирусные сборы последовательно собирали из флаконов в 50-литровый пакет. Полученный с помощью осветляющей фильтрации полуфабрикат после замораживания, хранения и контроля качества размораживали, смешивали со стабилизатором ЛС-18, разливали по ампулам и лиофилизировали. Ампулы с сухой вакциной маркировали и контролировали по показателям, изложенным в ФС. Эти показатели были подвергнуты статистической обработке. Данные за 2002 и 2004 гг. суммиро-

ваны в табл. 7.

Таблица 7. Значения показателей, контролируемых при выпуске _коревой моновакцины, (М±о)__

Показатель Требование ФС 2002 год 2004 год

п = 81 п = 65

Концентрация белка на дозу, мкг Не более 2 0,68±0,28 0,014±0,0065

Специф. активность серий, ^ 7ДД50/0.5 мл Не менее 3 3,69±0,2 4,16±0,13

Точность розлива, % Не выше 10 1,39±0,61 0,97±0,43

Кол-во антибиотиков, мкг/доза Не более 20 3,7±0,3 3,5±0,64

Потеря массы при высушивании,% Не более 2 0,84±0,27 0,98±0,26

Остаточный кислород, % Не выше 1 0,38±0,07 0,34±0,05

рН, ед. рН 7.2 -7.8 7,56±0,09 7,6±0,09

Проведенный статистический анализ позволил осуществить корректирующие воздействия, которые способствовали стабилизации показателей качества выпускаемой вакцины, при этом увеличилась биологическая активность, повысилась точность разлива, снизилась концентрация белка, резко снизилась вариабельность всех исследованных параметров.

Исследуемые показатели специфической активности коревой вакцины представлены в виде Х-карты Шухарта (рис. 4)

Х-карта Среднее3,74 Сигма0,106 п: 1

Рис. 4. Контрольная Х-карта Шухарта индивидуальных значений для специфической активности коревой вакцины (2004 год)

Статистическая оценка, проведенная с использованием контрольных карт, свидетельствует о стабильности производства коревой вакцины.

Аналогичная статистическая оценка технологических процессов была проведена при производстве паротитной вакцины.

В табл. 8 приведены суммарные данные по статистическому анализу активности сливов культуралыюй жидкости при производстве паротитной вакцины в 2003 - 2005 годах.

Таблица 8. Специфическая активность сливов вируса паротита в _ зависимости от номера слива по годам_

Параметр 2003 г. 2004 г. 2005 г.

слив 1 слив 2 слив 3 слив 1 слив 2 слив 1 слив 2

N наблюдений 1845 1841 158 2121 2134 1499 1490

Среднее 6,50 6,62 5,99 6,58 6,77 6,58 6,42

Доверит. --95,00% 6,48 6,60 5,94 6,56 6,76 6,56 6,40

Доверит. -+95,00% 6,51 6,64 6,05 6,59 6,78 6,60 6,44

Стандартное отклонение 0,35 0,42 0,36 0,35 0,28 0,35 0,38

Коэффициент вариации,(%) 5,38% 6,28% 6,05% 5,34% 4,20% 5,29% 5,94%

На основании анализа 8099 производственных сливов за 2003-2005 годы видно, что специфическая активность первых и вторых сливов в процессе производства паротитной вакцины статистически не имела достоверных различий по годам. Коэффициент вариации находился в пределах 4,2-6,28%. Показатели специфической активности третьих сливов были значительно ниже, что явилось основанием для дальнейшего их исключения из этапов производства. О стабильности получения полуфабриката паротитной вакцины свидетельствуют карты Шухарта (на примере Х-Карты), рис 5.

5,637312 5,097312 4,557312

Рис. 5. Контрольная Х-карта Шухарта индивидуальных значений для специфической активности паротитной вакцины (2003 год)

Представленные данные по статистическому анализу распределения активности паротитной вакцины, произведенной, в 2003 году, показывают стабильность технологических процессов.

Х-карта Среднее 5,10 Сигма 0,123 п: 1

Средние показатели множественности заражения клеток вакцинным вирусом эпидемического паротита в 2003 и 2004 г.г. были статистически неотличимы, однако вариабельность заражающей дозы в 2003 г. по сравнению с 2004 г. была выше в 2,2 раза. После введения элементов статистического управления процессом вариабельность удалось оптимизировать на уровне 2004 года. (Табл. 9).

Таблица 9. Вариабельность инфицирующей дозы (ТЦЦ50 на клетку) при

заражении клеток ФЭП вакцинным вирусом паротита

Статистические параметры 2003 год 2004 год

п 89 110

М 0,00074 0,00075

Доверительный интервал -За 0,00057 0,00068

Доверительный интервал +3 а 0,00091 0,00082

V, (%) 111,81% 49,43%

Специфическая активность сливов вакцинного вируса паротита при внесении минимальных доз (0,00012 ТЦЦ50 на клетку в 2003 году и 0,00026 ТЦД50 на клетку в 2004 г.) и максимальных доз (0,0078 и 0,0019) не отличалась, что позволяет сделать заключение, что принятые дозы заражения являлись оптимальными.

Значения параметров, контролируемых при производстве готовой моновакцины против эпидемического паротита, не отличались статистически в 2003 и 2004 году. (Табл. 10).

Таблица 10. Значения показателей, контролируемых при выпуске

паротитной моновакцины, (М±а)

Показатель Требование ФС 2003 год 2004 год

п = 93 (19) п= 196(27)

Концентрация белка на дозу, мкг Не более 2 0,44±0,13 0,66±0,28

Спец.активн.серий, ^ ТЦД50/0,5 мл Не менее 4,3 5,10±0,18 5,14±0,18

Точность розлива, % Не выше 10 0,66±0,25 0,97±0,43

Кол-во антибиотиков, мкг./доза Не более 20 3,73±0,69 4,96±1,17

Потеря массы при высушивании, % Не более 2 1,14±0,29 1,17±0,25

Остаточный кислород, % Не выше 1 0,31±0,06 0,24±0,04

рН, ед. рН 7,2 -7,8 7,42±0,09 7,43±0,7

Вариабельность контролируемых показателей, предусмотренных ФС, в 2005 году сохранилась на уровне 2003-2004 годов. Проведенный статистический анализ технологических процессов производства паротитной моновакцины не выявил па-

раметров, вариабельность которых была бы не случайна. Единственным корректирующим действием была отмена сбора третьих сливов.

Проведенные исследования доказали, что производство коревой и паротитной вакцин в МПБП стабильно, однако уровень стабильности полуфабрикатов, достаточный для выпуска моновакцин против кори и эпидемического паротита, обеспечивающий необходимый для надежной защиты от этих инфекций, был недостаточен для обеспечения выпуска качественной ассоциированной вакцины.

Полученные при анализе производства в 2002 году данные сделали возможным сузить диапазон множественности заражения при производстве полуфабриката для коревой вакцины, в результате чего увеличилась специфическая активность и снизилась вариабельность данного показателя.

Таким образом, комплекс данных, полученных при изучении вариабельности специфической активности полуфабрикатов вакцинных вирусов кори и эпидемического паротита, позволил нам в 2002 году сделать вывод, что сведение этих полуфабрикатов с таким расчетом, чтобы разница между активностью вируса паротита и активностью вируса кори составляла не менее 0,9 ТЦД5о, позволит создать технологию производства ассоциированной вакцины.

Создание технологии производства ассоциированной паротитно-коревой вакцины (АПКВ)

Статистический анализ процессов приготовления вируссодержащих культур вакцинных вирусов эпидемического паротита и кори привел не только к существенной стандартизации выпускаемых моновакцин, но и создал необходимые предпосылки создания ассоциированной вакцины на базе этих вакцинных вирусов.

Специфическая активность компонентов АПКВ имеет решающее значение для эффективности и безопасности препарата. Многолетняя разработка способа оптимизации специфической активности компонентов ассоциированной паротитно-коревой вакцины привела к научному открытию - созданию технологии производства АПКВ. Новизна данной разработки подтверждена выдачей патентов РФ и Евразийского патента.

В табл. 11 приведены данные по специфической активности компонентов созданной АПКВ за 2003-2005 гг. По ФС титр коревого компонента в дозе (0,2 мл) должен быть не ниже 3 ^ ТЦЦ5о/0,5 мл, паротитного - не ниже 4,3 ^ ТЦЦ5о/0,5 мл, превышение титра паротитного компонента над коревым - не ниже 0,9 ^ ТЦД50/0,5 МЛ.

Таблица 11. Показатели специфической активности компонентов АПКВ

Титр компонентов, ТЦЦ 50/0,5 мл. Превышение активности, паротит/корь

Год п Коревой Паротитный

М± о Мш.-тах. М± а Мт.-тах.

2003 122 3,87±0,21 3,37-4,44 5,01±0,18 4,60-5,37 1,14±0,19

2004 108 3,74±0,19 3,27-4,23 5,07 ±0,13 4,77-5,37 1,34±0,23

2005 113 3,96±0,25 3,34-4,37 5,02±0,19 4,44-5,37 1,09± 0,20

Как видно из табл. 11, специфическая активность как коревого, так и паротитного компонентов за исследуемый период различались незначительно и была более высокой, чем установлена в ФС, специфическая активность паротитного компонента значительно превышала активность коревого. Стабильность показателей специфической активности была подтверждена результатами, представленными в контрольных Х-картах Шухарта обоих компонентов вакцины. На рис. 6-1 - 6-6 приведены Х-карты специфической активности коревого и паротитного компонентов АПКВ.

Х-карта Сред 5,01 Сигма 0,18 п: 1

2003 г.

Х-карта Сред 3,87 Сигма 0,21 п: 1

МП

3.239836

1 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 НО <20

1 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 ПО 120

Рис. 6-1. Х-карта специфической Рис. 6-2. Х-карта специфической активности паротита активности кори

Х-карта Сред 5,07 Сигма 0,13 n: 1

2004 г.

Х-карта Сред 3,74 Сигма 0,19 n: 1

>1 L

'j л J \1

5,461074

5,074074

4,687074

,1 IVvM

'J \

4,306657

3,736667

3,166667

1 10 20 30 40 50 60 70 80 90 (00

t 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Рис. 6-3. Х-карта специфической Рис. 6-4. Х-карта специфической активности паротита активности кори

2005 г.

Х-карта Сред 5,02 Сигма 0,19 n: 1

Х-карта Сред 3,96 Сигма 0,25 n: 1

тл ь а гМ~л

Н? к t.4

■ Щ'

4,732672 3,962452 3,219855

1 10 a 30 40 50 SO 70 80 SO 100 110

10 20 30 40 50 60 70 ВО 90 100

Рис. 6-5. Х- карта специфической Рис. 6-6. Х-карта специфической активности паротита активности кори

Анализ приведенных контрольных карт показал, что все значения параметров находятся не только в границах, установленных нормативными документами, но и в статистических границах, что свидетельствует о стабильности процесса производства АПКВ за исследуемый период. Что касается остальных показателей, контролируемых по ФС, то их значения не превышают допустимых границ, (табл. 12), что подтверждает высокую воспроизводимость процесса производства ассоциированной паротитно-коревой вакцины с использованием разработанной и внедренной системы статистического управления качеством.

Таблица № 12. Значения показателей, контролируемых __при выпуске АПКВ, (М±о)__

Показатель Требование ФС 2003 год 2004 год 2005 год

п =122 (18) п= 108 (24) п= 113(16)

Концентрация белка на дозу, мкг Не более 8 0,40±0,1 0,48±0,16 0,41±0,13

Точность розлива, % Не более10 0,86±0,69 0,69±0,30 1,18±0,43

Кол-во антибиотиков, мкг/доза Не более 25 4,2±0,59 4,38±0,57 5,49±0,42

Потеря массы при высушивании, % Не более 2 1,18±0,24 1,12±0,28 1,12±0,24

Остаточный кислород, % Не более 1 0,26±0,03 0,28±0,05 0,25±0,40

рН, ед. рН 7,2-7,8 7,48±0,03 7,49±0,06 7,48±0,07

Наряду с приведенными контрольными картами нами использовались многомерные контрольные карты Хоттелинга, позволяющие провести единый интегральный анализ (рис. 7).

70 —.—.—.—.—.—,—.—.—.—.—.—.—.—.—|—---—.—.—.—.—.—.—.—.—.—

65 ■

ео

50 • ;

45 ■

? 40.

§ 35 ш

Б зо «25-Н 20

15 :-Л---■ 13,72

1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95 100 105 110

Выборки

Рис.7. Многомерная контрольная карта Хоттелинга при производстве АПКВ 2005 г.

Анализ приведенных материалов (рис. 7) показывает, что процесс производства АПКВ стабилен. Только один показатель выходит за рамки статистиче-

ских границ, им является показатель точности розлива. Это обусловлено тем, что фактические значения этого показателя намного ниже допускаемых границ, (0.86 -1.18%, при допустимых не более 10%).

Профилактическая эффективность ассоциированной вакцины не отличалась от эффективности моновакцин. Достигалось это тем, что содержание вирусных компонентов кори и паротита в АПКВ практически не отличалось от моновакцин и между компонентами вакцины не наблюдалось конкуренции антигенов, табл. 13.

Таблица 13. Содержание коревого и паротитного компонентов

в моновакцинах против кори и паротита и в АПКВ, ТЦ Д5о/доза.

Год Вакцина Коревой компонент Паротитный компонент

п М±о Min-max п М±о Min-max

2003 MOHO 118 3,92±0,23 3,34-4,57 93 5,10±0,18 4,64-5,47

АПКВ 122 3,87±0,21 3,37-4,44 122 5,01±0,18 4,60-5,37

2004 MOHO 65 4,16±0,13 3,70-4,37 196 5,14± 0,18 4,57-5,44

АПКВ 108 3,74±0Д9 3,27-4,23 108 5,07±0,13 4,77-5,37

2005 MOHO 191 4,25±0,31 3,64-4,90 41 4,93±0,17 4,61-5,44

АПКВ 113 3,96±0,25 3,34-4,37 113 5,02±0,19 4,44-5,37

Анализ разработанной в МПБП технологии производства ассоциированной паротитно - коревой вакцины методом контрольных карт Шухарта и многомерных карт Хотеллинга показал стабильность, как самого процесса, так и показателей качества. Испытания, в соответствии с Программой, утвержденной Комитетом МИБП МЗ РФ (протокол № 9 от 04 ноября 1999 г.), предусматривали вакцинацию детей, не привитых и не болевших корью и эпидемическим паротитом, в возрасте от 12 до 24 месяцев АПКВ, а контрольные группы детей - моновакцинами против кори и паротита. Сведения о вакцинах, использованных для изучения иммуноген-ных свойств, представлены в табл. 14.

Результаты серологического изучения вакцинированных показали, что количество отреагировавших на введение вакцинного вируса кори не зависит от того, вводился ли вирус кори в моновакцине, или же в составе АПКВ.

Вакцина Серия, Контроль- Шифр Активность, ^ ТЦД5о в Корь/

№ ный номер одной дозе паро-

Корь Паротит тит, А

АПКВ 003 2292 400 4,4 4,5 од

АПКВ 011 2295 403 4,2 4,8 0,6

АПКВ 024 3752 404 з,з 4,5 1,2

Паротитная 0884 2298 406 - 4,7 -

Коревая 564 3182 564 3,7 - -

Число отреагировавших появлением антител на введение вакцинного вируса

эпидемического паротита зависело от величины превышения титров паротитного компонента над коревым и было оптимальным, если превышение составляло 0,9 ^ ТЦД50 и выше. Такие серии АПКВ обеспечивали сероконверсию от 92% до 100% у вакцинируемых детей, т.е. практически сопоставимы с результатами, полученными при использовании моновакцин.

Экономическая эффективность технологии производства АПКВ

Учитывая, что при массовом применении вакцины, входящей в национальный календарь профилактических прививок, стоимость вакцинации в целом играет существенную роль, немаловажным являлась оценка экономической эффективности от внедрения на МПБП технологии промышленного производства и системы управления качеством ассоциированной паротитно-коревой вакцины. Проведенный экономический анализ производства моновакцин в сравнении с АПКВ показал снижение себестоимости производства по основным показателям: сырью и материалам, энергетическим затратам, рис. 10.

300,00 -Т--278^3-

250,00 ---

200,00--- -

г 153,09 I . '

0 15°'°°--

1 100,00 --^¿к

с;

| 50,00 ./.

0,00 --^

Коревая вакцина Паротитная вакцина АПКВ Коревая вакцина +

Паротиная вакцина

Рис. 10. Цеховая себестоимость производства моновакцин и АПКВ в сравнении.

Также вдвое снижаются трудо- и материальные затраты на применение вакцины за счет сокращения количества прививок.

Выводы

1. Установлено, что вакцинный штамм «Ленинград-3» вируса паротита является оптимальным как для вакцинации детей, так и для конструирования ассоциированной вакцины, и по безопасности не уступает американскому штамму «Jeryl Lynn» (1-2 случая асептического менингита на 100.000 вакцинированных), а по иммуногенности соответствует штамму «Urabe», вызывая сероконверсию не менее чем у 80% привитых.

2. Проведенные исследования по оценке стабильности промышленного производства моновакцин установили, что технология воспроизводима и может быть использована для создания ассоциированного препарата.

3. Разработана и внедрена система управления качеством на основе использования статистических методов контроля соответствия параметров продукта заданным критериям, анализа стабильности производственных процессов и своевременных корректирующих воздействий, обеспечивающая получение серий иммунобиологических препаратов надлежащего качества с вероятностью не ниже р < 0,95.

4. Разработана ассоциированная вакцина против кори и эпидемического паротита и технология ее производства, обеспечивающая получение МИБП с биологической активностью 4,3 lg ТЦД5о/0,5 мл. паротитного и 3,0 lg ТЦД5о/0,5 мл. коревого компонентов, и соответствующая требованиям национального органа контроля, в том числе и правилам производства лекарственных средств ГОСТ Р 52249-2004.

5. Использование статистической обработки показателей производственно-технологических процессов позволило стабилизировать производство АПКВ на МПБП, и снизить процент внутрипроизводственных потерь до 3%.

6. Исследования реализованы разработкой утвержденных в установленном порядке регламентов производства, фармакопейной статьи и инструкции по применению препарата.

7. Внедрение АПКВ позволило полностью обеспечить реализацию национального календаря прививок против кори и эпидемического паротита и сократить в два раза количество инъекций, и за период с 2001 года привить более 20 млн. детей.

Практическое использование полученных научных результатов

1. Разработанная ассоциированная паротитно-коревая вакцина обладает качественными характеристиками не ниже, чем моно препараты, входящие в ее состав. Её внедрение в Национальный календарь профилактических прививок позволило вдвое снизить количество инъекций детям второго года жизни, а также вдвое снизить затраты на проведение вакцинации.

2. В установленном порядке проведены клинические испытания ассоциированной паротитно-коревой вакцины, положительные результаты которого изложены в отчете.

3. В установленном порядке разработаны и утверждены фармакопейные статьи предприятия №№ ФСП 42-0145-0988-01, ФСП 42-0504098804, ФСП Р N000544/01-140308. вакцины паротитно-коревой, культуральной, живой.

4. Разработана и утверждена ИНСТРУКЦИЯ по применению вакцины паротитно-коревой культуральной живой, № 01-11/221-07.

5. Разработаны и утверждены в установленном порядке экспериментально-производственный регламент производства № 1106-01 и регламенты производства вакцины паротитно-коревой культуральной живой № 1439-04.

6. Производство ассоциированной паротитно-коревой вакцины налажено на существующей аппаратурно-технологической линии Московского подразделения ФГУП НПО «Микроген».

7. Результаты исследований по созданию системы управления качеством с применением статистических методов анализа производственных процессов используются на Уфимском, Пермском, Томском, Нижегородском, Иркутском, Ставропольском филиалах ФГУП НПО МИКРОГЕН, а также в учебном процессе по дисциплине «БИОТЕХНОЛОГИЯ» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ.

8. Евразийской патентной организацией выдан евразийский патент № 002387 «Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины».

9. Российским агентством по патентам и товарным знакам выдан патент на изобретение № 2158134 «Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины».

Рекомендации по использованию научных выводов

1. Разработанная в результате исследований система управления качеством рекомендуется для анализа технологических процессов при производстве ветеринарных и медицинских иммуно-биологических препаратов.

2. Построенная система оценки технологических процессов применима для целей конструирования ассоциированных многокомпонентных препаратов, а также для целей квалификации и валидации существующих производств.

3. Результаты исследований рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в профильных высших учебных заведениях.

Перечень публикаций по теме диссертации

Патенты

1. Патент РФ на изобретение № 2158134 от 10.03.2000 г. «Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины». Зайцев И.З., Колышкин В.М., Сидоренко Е.С., Попов В.Ф., Юминова Н.В., Красильников И.В., Дорофеева JI.B.

2. Евразийский патент № 002387 от 25 апреля 2002 г. «Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины». Зайцев И.З., Колышкин В.М., Сидоренко Е.С. Попов В.Ф., Юминова Н.В., Красильников И.В., Дорофеева Л.В.

Публикации в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Детекция РНК вируса кори в образах коревой вакцины методом полиме-разной цепной реакции./ Зайцев И.З., Колышкин В.М., Юминова Н.В. и др. // Биотехнология. - 2001. - № 1,- С. 76-82.

2. Разработка отечественной комбинированной вакцины против кори и паротита. / Попов В.Ф., Зайцев И.З., Колышкин В.М. и др. // Эпидемиология и вакци-нопрофилактика. - 2002. - № 2. - С. 31-34.

3. Влияние миелопептида 2 на результаты иммунизации морских свинок живой гаревой вакциной. /Ляшенко В.А., Михайлова A.A., Александер С.К., Юминова Н.В., Фонина, Л.А, Колышкин В.М. // Вопросы вирусологии. - 2004. - № 2. - С. 18-20.

4. Вирусологическая характеристика серозных менингитов у детей, иммунизированных вакциной против эпидемического паротита. / Голева О.В., Харит С.М., Черняева Т.В., Аксенов O.A., Davidkin I., Колышкин В.М. // Вопросы вирусологии. - 2004. - № 5. - С. 28-32.

5. Колышкин В.М. Состояние вакцинопрофилактики кори и эпидемического паротита в РФ на современном этапе // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. -2004,- №5. -С. 8-10.

6. Колышкин В.М. Иммуногенез при комбинированной вакцинации против кори и эпидемического паротита взрослых отечественной ассоциированной паро-титно-коревой вакциной производства МПБП "НПО "Микроген" // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2004. - № 6. - С. 18-20.

7. Колышкин В.М. Роль отечественных коревых вакцин в программе элиминации кори на территории Российской Федерации // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2004. - № 6. - С. 20-21.

8. Проточная цитометрия для стандартизации линии клеток фибробластов и эмбрионов кур. / Колышкин В.М., Ночевный В.Т., Юрков С.Г. и др. // Аграрная наука. - 2004. - № 3. - С. 27-29.

9. Колышкин В.М., Ночевный В.Т., Новохатсткий A.C. Апоптоз клеток в культуре: особенности проявления и влияния на эффективность биотехнологического производства // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2005. - № 6. - С. 99-105.

10. Колышкин В.М., Балдин С.Ю., Ночевный В.Т. Некоторые аспекты транспортировки и хранения МИБП в системе «Холодовой цепи» // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2006. - № 5. - С. 59-63.

11. Многолетняя пострегистрационная оценка качества отечественных моно-и комбинированных паротитных вакцин из штамма Ленинград-3. / Юминова Н.В., Колышкин В.М., Россошанская Н.В. и др. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2006.-№ 6. - С. 8-10.

12. Колышкин В.М., Васильев A.B. Оценка стабильности производства коревой вакцины // Биотехнология. - 2008. - № 1 - С. 57-63.

13. Колышкин В.М., Васильев A.B. Оценка стабильности производства ассоциированной паротитно-коревой вакцины // Биотехнология. - 2008. - № 4. - С. 64-68.

14. Колышкин В.М., Васильев A.B. Оценка стабильности производства па-ротитной вакцины // Биотехнология. - 2008. - № 5. - С. 68-75.

15. Определение показателей точности тест-системы для оценки паротитной и коревой вакцин. / Волкова P.A., Устинникова О.Б., Звонарев А.Ю., Кулякина М.Н., Колышкин В.М. // Фармация. - 2008. - № 6. - С. 5-7.

Публикации в научных журналах, сборниках научных статей и научных докладов:

1. Отечественная ассоциированная паротитно-коревая вакцина создана. / Попов В.Ф., Зайцев И.З., Колышкин В.М. и др. // Биопрепараты. - 2001. - № 2. - С. 22.

2. Колышкин В.М. Опыт внедрения Правил GMP в производстве вакцин // Технология чистоты. - 2003. - № 1. - С. 21.

3. Юминова Н.В., Колышкин В.М. Отечественные вакцины против кори и эпидемического паротита: успехи применения // Вакцинация. - 2006. - № 4(46). - С. 8-9.

4. Юминова Н.В., Колышкин В.М., Юминова Е.О. Проблемы вакцинации взрослых против кори // Главврач. - 2004. - № 12. - С. 101-104.

5. Колышкин В.М. Стандарты ИСО 9000 как составная часть внедрения GMP на предприятии по производству МИБП // Технология чистоты. - 2004. - № 2. - С. 9-10.

6. Колышкин В.М., Берзигияров П.К., Сухомлин И.Г. Референтные модели производственно-технологических процессов при создании системы качества на основе стандартов семейства ГОСТ Р ИСО 9000-2001 // Технология чистоты. -2005. - № 1. - С. 17-21.

7. Колышкин В.М., Сухомлин И.Г., Мешковский А.П. Реализация современных мировых тенденций управления качеством при производстве лекарственных средств в проекте национального стандарта «Производство лекарственных средств. Система и менеджмент качества. Основополагающие требования» // Фармацевтическая промышленность. -2006. - № 6. - С. 18-23.

8. Клиническое течение поствакцинального периода при введении отечественной дивакцины с иммуномодуляторами. / Соловьева И.Л., Куссельман А.И., Микава

Е.И., Костинов М.П., Калманова В.П., Лукачев И.В., Юминова Н.В., Колыш-

кин В.М. // «Иммунокоррекция вакцинального процесса у лиц с нарушенным состоянием здоровья». Под ред. М.П.Костинова. М.: МдВ. - 2006. - С. 86-101.

9. Сухомлин И.Г., Колышкин В.М. Важность отраслевой модели системы менеджмента качества (СМК) в рамках внедрения GMP на предприятиях по производству лекарственных средств. Государственное нормативное обеспечение // Чистые помещения и технологические среды. - 2006. - №1. - С. 30-35.

10. Еще раз о МУ 64-04-002-2002 «Производство лекарственных средств. Документация». / Колышкин В.М., Семченко A.B., Богатиков С.А. и др. // Фармацевтическая промышленность. - 2006. - № 4. - С. 73-75.

11. ИФА-тестирование вируса эпидемического паротита в вируссодержащих сливах, предназначенных для приготовления живой паротитной вакцины. / Юми-нова Н.В., Скворцова О.И., Колышкин В.М. и др. // «Вирусные инфекции на пороге XXI века: эпидемиология и профилактика». Материалы конференции всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - СПб.: изд. РАМН - 1999.- С. 168-169.

12. Отечественная ассоциированная паротитно-коревая вакцина в практике здравоохранения России. / Юминова Н.В., Александер С.К., Сидоренко Е.С., Колышкин В.М. // «Проблемы инфекционных болезней». Сб. научн. Трудов московского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.М. Габричевского. М.: -2000. ч. 1.-С. 139-142.

13. Использование ассоциированной паротитно-коревой вакцины в практике здравоохранения РФ. / Юминова Н.В., Александер С.К., Сидоренко Е.С., Колышкин В.М. // Актуальные вопросы разработки, производства, и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов. Сб. докладов. Уфа: Салават. -2000. - ч. 1. - С. 42-44.

14. Ночевный В.Т., Колышкин В.М. Фторхинолоны - перспективное антибактериальное средство для вирусологической практики. / «Новые информационные технологии в медицине, биологии фармакологии и экологии»: Материалы 9-й Международной конференции. - Гурзуф: Изд. Запорожского национального университета. - 2001. - С. 166.

15. Создана отечественная ассоциированная паротитно-коревая вакцина. / Попов В.Ф., Зайцев И.З., Колышкин В.М. и др. // Материалы Всероссийской научной конференции. 16-18 апреля 2001 г. Всероссийское научно-практическое общество эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - СПб.: - 2001. - С. 89-91.

16. Колышкин В.М., Ночевный В.Т., Сидоренко Е.С. Стандартизация тест-культур для контроля активности вакцин против кори и паротита. / «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» // Материалы 10-й Юбилейной международной конференции. - Гурзуф: Изд. Запорожского национального университета. - 2002. - С. 274.

17. Конструирование и оценка отечественной ассоциированной паротитно-коревой вакцины. / Попов В.Ф., Зайцев И.З., Колышкин В.М. и др. // Тезисы доклада на VIII съезде эпидемиологов. - М.: - 2002. - т. 2. - С. 220-221.

18. Иммунологические свойства новой отечественной ассоциированной па-ротитно-коревой вакцины. / Юминова Н.В., Зайцев И.З., Колышкин В.М. и др. // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М.: РАМН - 2002. - С. 248.

19. Современное состояние вакцинопрофилактики кори в РФ. / Юминова Н.В., Александер С.К. Зайцев И.З., Колышкин В.М. и др. // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М.: РАМН - 2002. - С. 247.

20. Современное состояние вакцинопрофилактики эпидемического паротита в РФ. / Юминова Н.В., Александер С.К, Зайцев И.З., Колышкин В.М. и др. // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М.: РАМН - 2002. - С. 246.

21. Колышкин В.М. Опыт внедрения Правил GMP в производство вакцин. / Тезисы доклада на XIII Внеочередной конференции АСИНКОМ. - М.: АСИН-КОМ - 2002. - С. 27-28.

22. Иммунологическая эффективность новой паротитно-коревой вакцины в практике здравоохранения России. / Попов В.Ф., Колышкин В.М., Юминова Н.В. и др. // Тезисы доклада на Международном конгрессе «Ликвидация и элиминация инфекционных болезней - прогресс и проблемы». СПб. - Институт имени Пасте-ра - 2003. - С. 12.

23. Перспективы использования новой отечественной ассоциированной паро-титно-коревой вакцины (АПКВ) в России. / Юминова Н.В., Зайцев И.З., Колыш-кин В.М. и др.// Материалы научно-практической конференции «Современные научные и практические проблемы инфекционной патологии у детей». - СПб.: НИИ детских инфекций - 2003.- С. 123-124.

24. Проблемы стандартизации линии клеток Vero для контроля вакцин против кори и паротита. / Колышкин В.М., Ночевный В.Т., Хайдуков C.B. и др. // «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии»: Материалы международной конференции. - Гурзуф: Изд. Запорожского национального университета. -2003. - С. 241-242.

25. Колышкин В.М., Ночевный В.Т. Апоптоз как фактор отбора и стандартизации перевиваемых линий клеток. / «Клинические нейронауки: нейрофизиология, неврология, нейрохирургия»: Материалы Международной конференции. -Гурзуф: Изд. Запорожского национального университета. - 2004. - С. 71-72.

26. Детекция клеточных и инфекционных прионов в культурах клеток и биологических жидкостях с использованием поли- и моноклональных антител. / Симонова A.C., Савенко Н.Б., Дьяконов Л.П., Колышкин В.М. и др. // «Сохранение генетических ресурсов»: Материалы международной конференции . СПб.: Клеточная биотехнология. Цитология. - Том 46. - № 92004. - С. 854.

27. О состоянии вакцинопрофилактики кори и эпидемического паротита в России. / Колышкин В.М., Юминова Н.В., Александер С.К. и др. // «Актуальные вопросы эпидемиологии инфекционных болезней»: Сборник научных трудов. -М.: Выпуск 6. - 2004. - С. 386-388.

28. Характеристика новой отечественной ассоциированной паротитно-коревой вакцины производства УГ МПБП МЗ МП РФ. / Колышкин В.М., Юминова Н.В. Сидоренко Е.С. и др. // «Актуальные вопросы эпидемиологии инфекционных болезней»: Сборник научных трудов. - М.: Выпуск 6.- 2004.-С. 388-390.

29. Популяционный иммунитет и его роль в защите населения от кори и эпидемического паротита. / Юминова Н.В., Александер С.К., Колышкин В.М. и др. // «Актуальные вопросы эпидемиологии инфекционных болезней»: Сборник научных трудов. - М.: Выпуск 6 - 2004. - С. 390-393.

30. Пути реализации программы элиминации кори в Российской Федерации. / Юминова Н.В., Колышкин В.М., Александер С.К. и др. // «Актуальные вопросы эпидемиологии инфекционных болезней»: Сборник научных трудов. - М.: Выпуск 6. - 2004. - С. 407-409.

31. Иммунологическая безопасность и целесообразность ревакцинации взрослых против кори и эпидемического паротита вакцинами на основе отечественных штаммов Л-16 и Л-3. / Юминова Н.В., Колышкин В.М., Александер С.К. и др. // «МИБП для профилактики и лечения актуальных инфекций»: Тезисы I Всероссийской конференции по вакцинологии. - М.: 2004. - С. 78-80.

32. Юминова Н.В., Колышкин В.М. Корь: новый этап вакцинопрофилакти-ки. / «Актуальные проблемы эпидемиологии и профилактики инфекционных болезней на региональном уровне»: Сборник материалов межрегиональной научно-практической конференции НИИ вирусных препаратов им. О.Г.Анджапаридзе РАМН; Отв. Ред. д.м.н. Н.В. Юминова. Пенза: - 2004. - С. 9-23.

33. Савин В.Ф., Колышкин В.М. Влияние режимов замораживания на деформацию слоя высушиваемых лиофильно вакцин в ампулах. «Сублимационная сушка в фармацевтической и пищевой промышленности» / Материалы международной научно-технической конференции. - М.: Московский государственный университет прикладной биотехнологии.- 2005. - С. 73-76.

34. Некоторые аспекты изучения популяционного иммунитета к кори, эпидемическому паротиту и краснухе на ряде территорий Российской федерации. / Юминова Н.В., Александер С.К., Колышкин В.М. и др.// «Терапия инфекционных заболеваний у детей: современные представления и нерешенные вопросы»: Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - СПб.: Институт имени Пастера. - 2005. - С. 134.

35. Пострегистрационный мониторинг качества отечественной ассоциированной паротитно-коревой вакцины (АПКВ) из штаммов Л-16 и Л-3. / Юминова Н.В., Колышкин В.М., Сидоренко Е.С. и др. // «Терапия инфекционных заболеваний у детей: современные представления и нерешенные вопросы»: Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - СПб.: Институт имени Пастера. - 2005. - С. 135.

36. Методы получения и контроля СПФ-перепелиных эмбрионов, предназначенных для изготовления живых культуральных вакцин. / Колышкин В.М., Ма-тюхин И.В., Шалунова Н.В. и др. // Материалы 1-ого Международного ветеринарного конгресса по птицеводству. - М.: Минсельхоз России - 2005. - С. 131-135.

37. Современное состояние вакцинопрофилактики эпидемического паротита в РФ. / Юминова Н.В., Александер С.К, Зайцев И.З., Колышкин В.М. и др. // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М.: РАМН. - 2002. - С. 246.

38. Отечественный опыт иммунопрофилактики эпидемического паротита. / Юминова Н.В., Колышкин В.М., Александер С.К. и др. // «Актуальные проблемы эпидемиологии и профилактики инфекционных болезней в России и странах ближнего зарубежья»: Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием 23-26 мая 2006 г. - Самара: Областной медицинский информационно-аналитический центр РФ. - 2006. - С. 9-10.

39. Программа элиминации кори и снижения заболеваемости эпидемическим паротитом: серомониторинг населения. / Юминова Н.В., Колышкин В.М., Александер С.К. и др. // «Актуальные проблемы эпидемиологии и профилактики инфекционных болезней в России и странах ближнего зарубежья»: Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием 23-26 мая 2006 г.- Самара: Областной медицинский информационно-аналитический центр РФ, - 2006. -С. 11-12.

40. Стандартизация методов получения и контроля перепелиных эмбрионов -субстрата для производства парамиксовирусных вакцин. / Колышкин В.М., Шалунова Н.В., Смоленский В.И. и др. // «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии»: Материалы 13-й Международной конференции. - Гурзуф: Изд. Запорожского национального университета. - 2005. - С. 208-209.

41. Качество отечественных коревых и паротитных вакцин в Российской федерации на современном этапе. / Юминова Н.В., Колышкин В.М., Сидоренко Е.С. и др. // «Актуальные проблемы эпидемиологии и профилактики инфекционных болезней в России и странах ближнего зарубежья»: Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием 23-26 мая 2006 г. - Самара:

Областной медицинский информационно-аналитический центр - 2006. - С. 6-7.

42. Многолетняя пострегистрационная оценка качества паротитных вакцин. / Юминова Н.В., Колышкин В.М., Юминова Е.О. и др. // Материалы IX съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М.: РАМН. - 2007. - ч.1,- С. 119-120.

43. Юминова Н.В., Колышкин В.М. Опыт иммунопрофилактики кори и эпидемического паротита в Российской Федерации и странах СНГ. // Материалы IX съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М.: РАМН. - 2007. - 4.1. - С. 117-118.

44. Колышкин В.М., Сухомлин И.Г., Ночевный В.Т. Система менеджмента качества - основа эффективного производства МИБП // «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии»: Материалы 15-й Международной конференции. - Гурзуф: Изд. Запорожского национального университета,- 2007.-С. 159-160.

45. Формирование системы производственных записей в соответствии с методологией нормализованных референтных моделей. / Колышкин В.М., Богати-ков С.А., Подпругина М.В. и др. // Биофармацевтический журнал. - 2009. - № 2. -Т.1.-С. 42-56.

46. Нормализованная референтная модель производственно-технологических процессов. / Колышкин В.М., Богатиков С.А., Протопопов A.C. и др. // «БИО-ФАРМА-2009»: Тезисы доклада Российского симпозиума с международным участием,- Турция. Анталия: 2009. - С. 18-19.

Формат 60x90/16. Заказ 925. Тираж 100 экз.

Подписано к печати 31.08.2010. Объем п.л. 2,44

Печать офсетная. Бумага для множительных аппаратов.

Отпечатано в ООО «ФЭД+», Москва, ул. Кедрова, д. 15, тел. 774-26-96

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Колышкин, Владимир Михайлович

Введение

1. Общая характеристика работы

1.1. Актуальность проблемы

1.2. Цель и задачи исследований

1.3. Научная новизна

1.4. Практическая значимость и внедрение научных исследований в производство

1.5. Положения, выносимые на защиту

1.6. Апробация работы

2. Обзор литературы

2.1. Управление качеством

2.2. Парамиксовирусы

2.2.1. Корь

2.2.2. Эпидемический паротит

3. Собственные исследования

3.1. Материалы и методы

3.2. Оптимизация технологии и анализ стабильности крупномасштабного культивирования первично-трипсинизированных клеток эмбрионов перепелов для репродукции вакцинных штаммов вирусов кори и паротита

3.2.1. Характеристика поставщика универсального субстрата для культивирования вакцинных вирусов

3.2.2. Оценка стабильности получения фибробластов эмбрионов перепелов для культивирования вирусов кори и паротита

3.2.3. Совершенствование методов контроля специфической активности вирусов кори и паротита

3.2.4. Изготовление и паспортизация эталонного и рабочего банка линий клеток VERO

3.3. Технология производства и статистический контроль качества моновакцины против кори; результаты исследований

3.3.1. Технология производства коревого полуфабриката

3.3.2.0ценка стабильности процесса получения промышленных количеств вакцинного вируса кори

3.4. Технология производства и статистический контроль качества моновакцины против эпидемического паротита; результаты исследований

3.4.1. Технология производства полуфабриката паротитной вакцины

3.4.2. Оценка стабильности процесса получения промышленных количеств вируса паротита

3.5. Технология производства и статистический контроль качества ассоциированной паротитно-коревой вакцины (АПКВ); результаты исследований

4. Экономическое обоснование применения АПКВ

5. Обсуждение

6. Выводы

7. Практическое использование полученных научных результатов

8. Рекомендации по использованию научных выводов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Разработка и внедрение технологии промышленного производства и системы управления качеством ассоциированной паротитно-коревой вакцины"

Первое десятилетие XXI века становится периодом усиленного внимания к вопросам развития и совершенствования экономики во всем мире (Т. Конти и др., 2003) [38]. В условиях глобализации рынков повышенное внимание уделяется качеству выпускаемых изделий и предлагаемых услуг. Опыт наиболее развитых в техническом отношении стран, таких как Япония и США, показывает, что успех во многом зависит от наличия у компаний-производителей развернутой системы обеспечения качества. Следует отметить также, что методы обеспечения качества применяются не только в традиционно сложившихся областях производства: электронной, автомобильной, авиационной, но также и в здравоохранении, образовании, деятельности правительственных и общественных организаций. В настоящее время наблюдается постепенный переход от контроля качества, утвердившегося в прошлом столетии, к управлению качеством при постоянной и непосредственной лидирующей роли высшего руководства. Следует отметить некоторые особенности производства лекарственных средств в сравнении с другими отраслями промышленного производства, в которых система управления качеством заняла достойное место.

Лекарственные препараты - особый товар. Основное его отличие от любого другого товара состоит в том, что потребитель самостоятельно не может определить качество того или иного препарата (за исключением отдельных случаев явного несоответствия, как правило, по внешнему виду).

Отметим также, что испытание качественных характеристик готовой продукции почти всегда носит разрушающий характер. А раз метод разрушающий, то его можно применять только для выборочного контроля. Выборочный контроль в состоянии гарантировать качество всей партии испытуемого товара при условии однородности серии. Этого условия можно достичь лишь в том случае, если на предприятии действует система управления качеством. С учетом этого тезиса сформировались основные требования не только к качеству продуктов, изложенные в фармакопейных статьях, но и требования к качеству производственной среды, инфраструктуры и процессов, изложенные в концепции ОМР. Подобных форм управления качеством не существует ни в одной другой отрасли. Таким образом, общеотраслевые принципы контроля хотя и применимы к фармацевтической промышленности, но недостаточны (Мешковский А.П., 2002) [48]. Систему управления качеством строят, как правило, в соответствии с требованиями стандартов серии ИСО 9000. Это межотраслевые стандарты. Однако принципы, заложенные в основу построения системы управления качеством, могут и должны быть использованы и в фармацевтической промышленности. Это важно и с точки зрения все возрастающих требований к самим лекарственным средствам. Причиной постоянно возрастающих требований к качеству при производстве лекарственных средств является тот факт, что их качество неразрывно связано с безопасностью и эффективностью и, следовательно, со здоровьем населения страны. Поэтому наличие системы управления качеством при производстве лекарственных средств представляет собой стратегическую задачу и является обязательной для предприятия-изготовителя.

I. Общая характеристика работы.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Колышкин, Владимир Михайлович

6. Выводы.

1. Установлено, что вакцинный штамм Ленинград-3 вируса паротита является оптимальным как для вакцинации детей, так и для конструирования ассоциированной вакцины, и по безопасности не уступает американскому штамму Jeryl Lynn (1-2 случая асептического менингита на 100.000 вакцинированных), а по иммуногенности соответствует штамму Urabe, вызывая сероконверсию не менее, чем у 80% привитых.

4. Разработана ассоциированная вакцина против кори и эпидемического паротита и технология ее производства, обеспечивающая получение, МИБП с биологической активностью 4,3 lg ТЦД50/0,5 паротитного и 3,0 lg ТЦД 50/05 коревого компонентов, и соответствующая требованиям национального органа контроля, в том числе и правилам производства лекарственных средств ГОСТ Р 52249-2004.

7. Практическое использование полученных научных результатов

3. В установленном порядке разработаны и утверждены фармакопейные статьи предприятия №№ ФСП 42-0145-0988-01, ФСП 42-0504098804, ФСП Р N000544/01-140308 вакцины паротитно-коревой, культуральной, живой.

6. Производство ассоциированной паротитно-коревой вакцины налажено на существующей аппаратурно-технологической линии Московского предприятия по производству бактерийных препаратов.

8. Рекомендации по использованию научных выводов

Наблюдение

100

Получив данные о стабильности процесса титрования вируса паротита, мы провели анализ данных по титрованию вируссодержащих сливов, результаты которого приведены в Приложении № 1 на стр. 213-233, таблицы №№ 31-40, рис. №№ 78-95 .

Как видно из анализа результатов среднестатистическая биологическая активность сливов по колбам колеблется в узких пределах, практически в пределах точности титрования. Напомним, что все сливы одной колбы объединяются в один пул и после смешивания со стабилизатором разливаются по ампулам и подвергаются лиофильному высушиванию. Из одного пула получается несколько серий продукта, которые отличаются только аппаратом, в котором производилась сушка.

На основании анализа большого производственного материала (8099 сливов), таблицы №№ 31-38, рисунки №№ 78-95 (Приложение № 1) видно, что среднегеометрические титры сливов в процессе производства паротитной вакцины в течение 2003 и 2004 гг., практически не различаются, среднегеометрический титр сливов равен 6,67 lg ТЦД so/0,5 мл, а коэффициент вариации находится в пределах 4.2 - 6.28% .

Таким образом, на основании приведенных данных можно сделать вывод о том, что исходная активность сливов, используемая для получения сухой вакцины, различается минимально. Это можно расценивать как доказательство стабильности процесса получения паротитной вакцины. О стабильности процесса свидетельствуют данные, полученные с помощью модуля «Контрольные карты качества».

Данные по множественности заражения культур клеток (таблицы №№ 39, 40, приложение № 1, стр. 225, 226) были обработаны с помощью модуля «Основные статистики».

Таблицы № 41, 41 «а» Вариабельность инфицирующей дозы (ТЦЦ5о на клетку) при заражении клеток ФЭП вакцинным вирусом паротита. п/п Показатели 2003 2004 №п/п Показатели 2003 2004

1 Количество наблюдений 89 110 И Размах 0,00768 0,00164

2 Среднее значение 0,00074 0,00075 12 Квартиль Размах 0,00051 0,00025

3 Доверительн. инт,- 95% 0,00057 0,00068 13 Дисперсия 0,00000068 0,00000014

4 Доверительн. инт. + 95% 0,00091 0,00082 14 Стандартное отклонение 0,000827 0,000373

5 Медиана 0,0006 0,0006 15 Стандартная ошибка 0,0000876 0,0000355

6 Сумма 0,06582 0,08294 16 Асимметрия 7,199 1,701

7 Минимум 0,00012 0,00026 17 Стд.ош. Асимметр 0,255 0,230

8 Максимум 0,0078 0,0019 18 Эксцесс. 61,635 2,771

9 Нижняя Квартиль 0,00039 0,00058 19 Стд.ошибка эксцесса 0,51 0,46

10 Верхняя Квартиль 0,0009 0,00083 20 Коэффициент вариации (%) 111,81 49,43

Статистические параметры 2003 год 2004 год п 89 110

М 0,00074 0,00075

Доверительный интервал - 3 СТ 0,00057 0,00068

Доверительный интервал +3 СТ 0,00091 0,00082

V, (%) 111,81% 49,43%

Как видно из табл. 41 и 41 «а», средние показатели множественности заражения клеток вакцинным вирусом паротита в 2003 и 2004 гг. были практически одинаковые, однако вариабельность дозы заражения в 2004 г. по сравнению с 2003 г. снизилась в 2,26 раза. Анализ тиров сливов вакцинного вируса паротита с минимальными дозами заражения (0,00012 - 2003 г. и 0,00026 - 2004 г.) ТЦД5о/клетка и, соответственно, максимальными дозами (0,0078 и 0,019) ТЦД50/клетка не выявил различий в накоплении вируса, что позволяет сделать заключение, об оптимальности принятых доз заражения, несмотря на их вариабельность.

Значения параметров, контролируемых при производстве готовой моновакцины против эпидемического паротита, не отличались статистически в 2003 и 2004 году. (Табл. 46).

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Колышкин, Владимир Михайлович, Москва

1. Адлер Ю.П., Черных Е. Управление знаниями: новые акценты поиска источников конкурентных преимуществ// Стандарты и качество. 2000. № 6. С. 48-55.

2. Адлер Ю.П. Шпер B.JI. Статистическое мышление: современные трактовки.1991. — Методы менеджмента качества № 4. С. 12-20,

3. Адлер Ю., Щепетова С. Процессное описание бизнес-основ для системы экономики качества//Стандарты и качество. 2002. № 2. С. 66-69.

4. Адлер Ю.П. Анатомия организации с точки зрения физиологии// Стандарты и качество. 2001. № 2. С. 46-50.

5. Адлер Ю.П. О промышленной революции XXI века//Стандарты и • качество. 1999. № 2. С. 30-31.

6. Адлер Ю.П., Щепетова С.Е. Процесс под микроскопом //Методы менеджмента качества. 2002. № 7. С. 4-8.

7. Адлер Ю.П., Щепетова С.Е. Чего же мы ждем от системы экономики качества ? // Стандарты и качество. 2002. № 1. С. 50-53.

8. Анджапаридзе О.Г., Борискин Ю. С., Богомолова H.H. Физико-химическая характеристика вакцинного штамма вируса паротита Ленинград-3 (JI-3). Вопр. Вирусологии 1983, № 2 с. 224-227.

9. Анджапаридзе О.Г., Доссер Е.М., Дорофеев В.М., Способ получепния живой коревой вакцины. Авторское свидетельство №278964

10. Анисимова З.П., Живарева А.И., Сухарев В.М. Клиника современной кори. Педиатрия, 1977, № 1, с. 13-15.

11. Астабацян М.А. Эффективность коревой и паротитной вакцин при различных схемах применения: Дисс. Канд. мед. наук. М., 1985. — 106 с.

12. Барабаш М.А.Некоторые итоги профилактики кори в Молдавии с помощью живой коревой вакцины из штамма JI-16. Материалы научно-практ. Конф. По проблеме профилактики кори живой вакциной из штамма Л-16М., 1969, с. 9-10

13. Бектимиров Т.А. Проблема ликвидация кори «Вакцинация» №4 (22) июль-август 2002.

14. Береговых В.В., Мешковский А.П. "Нормирование фармацевтического производства. Обеспечение качества продукции". М., ЗАО ИИА "Ремедиум", 2001 г., 527 с.

15. Бойчук Л.М., Смородинцев Ал. А., Рыкушин Ю.П. Пути усовершенствования вакцинопрофилактики кори. Детские инфекции, Л., 1979, с. 12-19

16. В.М. Болотовский, Л.И. Кибрик, К.Н. Ливанова и др. Сравнительное изучение реактогенных свойств живых коревых вакцин из штамма Л-16 и ЭШЧ. Специфическая профилактика кори, Л., 1970, с. 109116.

17. Васильева Г.А. Изучение технологии производства и прививочных свойств живой коревой вакцины Л-16, изготовляемой на фибробластах эмбрионов японских перепелов. Автореферат дисс., канд. Мед. Наук, 1971, с 27.

18. Васильева Г.А., Слатин Е.А. Прививочные средства живой ассоциированной вакцины против кори и паротита Ж. Микробиология. 1983. № 5 с. 70-75.

19. Васильева Г.А. Бойчук Л.М. Отработка технологии производства живой коревой вакцины Л-16 на тканевой культуре из эмбрионов японских перепелок. Специфическая профилактика кори. Материалы научн-практ. Конф. Л., 1970, с. 206-210.

20. Геликман Б.К., Славницкая И.В. К вопросу о длительности поствакцинального иммунитета при кори. Актуальные вопросы эпидемиол., диагност, птогенеза и иммунол. нфекц. блезней., М., 1985, с. 46-48.

21. Гордиенко Н.М., Яковлева Г.С., Соколова Т.М. Определение условий, обеспечивающих стабильность свойств вируса кори штамма Л-16 В сб.: Научная конференция по проблеме стандартизации мед. биологических препаратов М., 1974, с. 4-6.

22. Долгополова М.Ф. Эпидемиология и иммунология кори в условиях большого города. Дис. Канд. Мед. Наук. М., 1978, 198 с.

23. Деминг Э. Выход из кризиса: Пер. с англ. Тверь: Альба, 1994. -498 с.

24. Долгополова М.Ф. Эпидемиология и иммунология кори в условиях большого города. Дис. канд. мед. наук. М., 1978, 198 с.

25. Дьяконов Л.П., Ситькова В.И. 2000. Животная клетка в культуре (методы и применение в биотехнологии). М.: Компания Спутник. 400 с.

26. Журавлева Ю.Н., В.Ю. Луговцев, Н.Т. Тихонова и др. Генетический анализ диких штаммов вируса кори, изолированных в европейской части РФ. Вопр. Вирус., 2003, № 4 с. 29-35.

27. Зайцев И.З., Колышкин В.М., Сидоренко Е.С., Попов В.Ф., Юминова Н.В., Красильников И.В., Дорофеева Л.В. Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины» Патент РФ № 2158134 10.03.2000 г.

28. Зверев В.В., Маркушин С.Г., Юминова Н.В. Корь. Молекулярная генетика возбудителя, эпидемиология, специфическая профилактика. С.-Петербургский университет 2004, 110 с.

29. Зверев В.В., С.Г.Маркушин, Н.В.Юминова. Корь. Молекулярная генетика возбудителя, эпидемиология, специфическая профилактика. С.Петербург, 2002 г., с.7

30. Зуев Е.Т. Система средств и методов обеспечения качества безалкогольных напитков, Автореф. докт. дисс. Щелково, 2001.

31. Зуев Е.Т., Фомин Г.С. и др. Государственный контроль качества минеральной воды и напитков ИПК, Издательство стандартов М., 2003

32. Иммамалиев О.Г., О.Г.Анджапаридзе, С.С.Унанов. Результаты массовой вакцинопрофилактики кори в СССР и анализ ее эффективности. Тезисы докл. Совм. Симпозиума ученых СССР и ГДР по проблеме «Профилактика кори и паротита» М., 1981, с. 8-10.

33. Клячкин В.Н. Проблема многомерного статистического контроля показателей качества в технологическом процессе http://quality.eup.ru/ DOCUM7pmsk.htm

34. Клячкин Владимир Николаевич. Модели и методы многомерного статистического контроля технологического процесса : Дис. . д-ра техн. наук : 05.13.18 : Ульяновск, 2003 285 с. РГБ ОД, 71:05-5/179

35. Колышкин В.М., Юминова Н.В., Зайцев И.З. Новая отечественная дивакцина против кори и эпидемического паротита в рамках Национального календаря прививок России. Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке. Пермь, 2003. с. 25-27.

36. Конти Т. Возможности и риски при использовании моделей делового совершенства// Стандарты и качество. 2003. - № 1. - С. 76-81.

37. Корягин В.Н., Особенности течения капельных инфекций у взрослых. Клин, мед., 1982 № 8, с. 76-80

38. Краснова В.П. Пути усовершенствования вакцинопрофилактики кори. Автореферат дис., канд. мед. наук. М., 1989, 21 с.

39. Краснова В.П. Живые коревые вакцины. Вопр. вирусол., 1996, № 2, с. 76-79.

40. Лакин, Г.Ф. Биометрия. Учеб. пособие для студентов биол. специальностей ун-тов и пед. ин-тов. М. : Высшая школа, 1968. с. 43,65.

41. Лапидус В.А. Всеобщее качество (TQM) в российских компаниях / Гос. ун-т управления; Нац. фонд подготовки кадров. М.: ОАО «Типография Новости», 2000. 432 с.

42. Лемешко Б.Ю., Лемешко С.Б. Сравнительный анализ критериев проверки отклонения распределения от нормального закона // Метрология. 2005. № 2. С. 3-24.

43. Ливанова Л.В., Азарова С.Л., Тихонова Н.Т., Каторович P.A. Клинико-иммунологическая характеристика кори. Вопр. Охр. Мат. И дет., 1979, №2, с. 15-20

44. Ливанова Л.В., Азарова С.А., Долгополова М.Ф. и др. К дифференциальной диагностике кори и кроаснухи. Педиатрия, 1978. № 1 с. 14-17.

45. Медуницын Н.В. Вакцинология М. Триада-Х, 1999.

46. Мешковский А.П. Расширение доступности и повышения качества лекарственных средств // Новая аптека. Аптека и рынок. — 2002. — № 11. -С. 14-17.

47. Михеева И.В. Эпидемический паротит: иммуно-эпидемиологичес-кое обоснование системы управления эпидемическим процессом. Автореф. дис. на соиск. уч. ст. докт. мед. наук , 1999, 48 с.

48. Насибов М.Н. Ассоциированная вакцинация против эпидемического паротита, кори и краснухи. Автореф. дис. на соиск. уч. ст. докт. мед. наук , 1969, Ленинград с. 177-178.

49. Нив Г. Р. Пространство доктора Деминга, книга 1. Тольятти: "Качество XXI век", 1998.

50. Нив Г. Р. Пространство доктора Деминга, книга 2. М.: РИА "Стандарты и качество", 2003.

51. Нифантьев О.Е. и др., Основные принципы инспектирования систем качества на фармацевтических предприятиях. // Фарматека. 2004. -1 (37).

52. Нодельман В.А. Развитие теории управления комплексным качеством. Вестник СПбГУ сер. 8 2004, Вып. 2 (№ 16) с. 70.

53. Общая и частная вирусология под ред. В.М. Жданова, С .Я. Гайдамович, Москва, 1982, том 2, с. 186.

54. Полетаев А И. Проточная цитометрия и сортировка в цитологии, молекулярной биологии, биотехнологии и медицине. М., ВИНИТИ, 1989, 87 с.

55. Попов В.Ф. Корь. М., 1985, 263 с.

56. Попов В.Ф. Корь и коревая вакцина JI-16. М.: Триада-Х, 2002 г. с. 23-25.

57. Попов В.Ф., Зайцев И.З., Колышкин В.М., Сидоренко Е.С., Юнасова Т.Н., Михеева И.В., Лыткина И.Н., Шитикова О.Ю., Каплунова О.П. Отечественная ассоциированная паротитно-коревая вакцина создана. Научн-практ. Журнал «Биопрепараты», 2001 № 2 с.22

58. Попов В.Ф., Зайцев И.З., Колышкин В.М., Сидоренко Е.С. и др. Разработка отечественной комбинированной вакцины против кори и паротита. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2002. №2 с. 31-34

59. Розно М., Практическое руководство. Применение прикладных статистических методов при производстве продукции (для спенциалистов) Н.Новгород: ООО «Приоритет», 2005 г.

60. Садыкова Д.К. Пути повышения эффективности вакцинопро-филактики кори. Автореферат дис., канд. мед. наук. М., 1991, 21 с.

61. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. М., 2000.

62. Симакова А.И. Клиника современного течения кори у взрослых. Инфекц. патология в Приморском крае. Тез. докл. научн.-практич. нонф. РАМН СО НИИ эпидемиолог, и микробиологии, Владивосток, 1994, с. 171

63. Смородинова И.П. Иммунологическая и клиническая характеристика коревых заболеваний у детей, привитых живой коревой вакциной. Автореферат дисс., канд. мед. наук, 1975, с 13-16.

64. Смородинцев A.A., Рыкушин Ю.П., Смородинцев Ал. А. Эпидемиологические особенности кори в условиях массовой вакцинопрофилактики и перспективы ее ликвидации. Эпидемиология и профилактика инфекционных болезней. JL, 1982, с. 10-16.

65. Смородинцев A.A., Бойчук Л.М., Шишкина Е.С. Опыт выделения и изучения штаммов вируса кори. Вирусные инфекции, T.XVII, 1958, с.6-12

66. Смородинцев A.A., Тарос Л.Ю. История выделения, аттенуации и испытаний коревого вакцинного штамма Л-16. Вирусные инфекции, С.Пб., 1992. с. 86-102.

67. Тамм О.И., В.М. Болотовский, Л.К. Мартин и др. Актуальные вопросы эпидемиологии. Таллинн, 1981, с. 118-121.

68. Тарос Л.Ю. Опыт непосредственного выделения вируса кори на однослойных культурах почечной ткани морских свинок и фибробластов куриных эмбрионов. Вопр. вирусол., 1963, № 3, с. 316-322.

69. Тарос Л.Ю. Реактогенные, иммуногенные свойства вакцинного коревого штамма Л-16, ослабленного на почечной ткани морских свинок. . Вопр. вирусол., 1963, № 4, с. 514-515.

70. Тейлор Ф.У. Менеджмент, М., 1992.

71. Тейлор Ф.У., Принцины научного менеджмента М., 1992.

72. Тихонова Н.Т., А.Г. Герасимова, Т.А. Мамаева. Программа элиминации кори в Российской Федерации № 4 (22) Июль-август 2002 г.

73. Трайбус М. (1997) Вирусная теория менеджмента. Пер. с англ. Под ред. и с предисл. Ю.П.Адлера.- М.: ГП - Редакция журнала "Стандарты и качество", 32 с.

74. Фейгенбаум, А. Контроль качества продукции; сокр. пер. с англ. / А. Фейгенбаум. М.: Экономика, 1986. - 471 с.

75. Хайдер A.M. Белки вируса кори, их функции и антигенная изменчивость. Вопр. вирусол., 1996, № 2, с. 72-74.

76. Чумаков М.П., В.П. Грачев, С.Г. Дзагуров и др. Адаптация и селекция высокоаттенуированного варианта вируса кори в первичных почечных культурах. Вопр. Вирусол., 1967, № 4, с. 399-405.

77. В фундаментальной книге «История менеджмента качества» стр. 46.

78. Юминова Н.В. Научные основы совершенствования вакцинопрофилактики кори и эпидемического паротита. Дис. Докт. Биолог. НаукМ., 1998, с. 15-17.

79. Afzal et al. 1997а, Orvell et al. 1997a, Takahashi et al. 2000

80. Afzal et al. 1997a,b, Orvell et. al. 1997a, Jin et al. 1999, Takahashi et al. 2000, Tecle et al. 1998, 2001, 2002 из Orvell et al. 2002.

81. Afzal et al. 1997b, Kunkel et al. 1994, Gut et al. 1995, Kim et al. 2000, Nojd et al. 2001 из Orvell et al. 2002

82. Afzal MA Evaluation of the neurovirulence test for mumps vaccines. Biologicals. 1999 Mar; 27(l):43-9.2, 8, 27, 28.

83. Amexis G. et al. Sequence diversity of Jeryl Lynn strain of mumps virus: quantitative mutant analysis for vaccine quality control. Virology. 2002 Sep l;300(2):171-9.

84. Amexis G, Fineschi N, Chumakov K. Correlation of genetic variability with safety of mumps vaccine Urabe AM9 strain. Virology. 2001 15; 287(1):234-41.

85. Barnhard 1959. Цитировано no: http://quality.eup.ru/DOCUM2/ cardscontrolquality.html

86. Boriskin YS, Genetic evidence for variant selection in the course of dilute passaging of mumps vaccine virus.Res Virol. 1992. 143(4):279-83.

87. Clements C., M.Strassburg, F. Cutts et al. The epidemiology of measles.World Health Statist. Quart., 1992, v.45, № 2-3, p.285-291

88. Crowley B, Afzal MA. Mumps virus reinfection-clinical findings and serological vagaries. Commun Dis Public Health. 2002. 5(4):311-3..

89. Cusi MG, Fischer S, Sedlmeier R, Valassina M, Valensin PE, Donati M, Neubert WJ Virus research, 2001, 74(l-2):133-7,

90. Da Cunha S.S. et al. 2002. Outbreak of aseptic meningitis and mumps after mass vaccination with MMR vaccine using the Leningrad-Zagreb mumps strain. Vaccine. 20, p. 1106-1112.

91. Da Silveira C.M. et al. The risk of aseptic meningitis associated with the Leningrad-Zagreb mumps vaccine strain following mass vaccination with measles-mumps-rubella vaccine, Rio Grande do Sul, Brazil, 1997. Intern. J. Epidemiol. 2002, 31, p. 978-982.

92. Davey H. Flow cytometry for clinical microbiology. CLI2004; 2/3: 12-5.

93. Degree and length of viremia in adults with measles. D.N. Forthal, S. Aaranes, J. Blanding et al., J. Infect. Dis., 1992, v.166, p. 421-424.

94. De los Rios Martin R. et al. Mumps in a urban area of the Community of Madrid. Vaccination status, diagnosis and intervention measures Aten Primaria. 2001 Jun 15;28(l):10-6.

95. Development and evaluation of the Moraten measles virus vaccine. M.R.Hilliman, G.B.Buynak, R.K. Weibel et al. JAMA, 1968, v. 206, p. 587-590

96. Elango N., et al. 1988. Molecular cloning and characterization of six genes, determination of gene order and intergenic sequences and leader sequence of mumps virus. J. Gen. Virol. 69, 2893-2900).

97. Enders J.F., Peebls T.C. Propagation in tissue culture of cytopathogenic agent from patients with measles. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1954, 86 p. 277-287.

98. Expanded Program on immunization. Epidemiological situation of vaccine-preventable disease. WHO, 1996, №97, p. 120-125.

99. Expanded Programme on Immunization. Measles Elimination. WHO, 1996, №97, p. 120-125.

100. Expanded Programme on Immunization. Measles Elimination by the Year 2000 in the Americas. WHO Wkly Epidemiol. Rec., 1995, v. 70 p.113-116.

101. Expanded Program on immunization. Epidemiological situation of vaccine-preventable disease. WHO, 1994, 69 №22, p. 163-164.

102. Fullerton K.E., Reef S.E. 2002. Commentary: Ongoing debate over the safety of the different mumps vaccine strains impacts mumps disease control. Intern. J. Epidemiol. 31, p. 983-984.

103. Fullerton K.E.; Reef S.E. Commentary: Ongoing debate over the safety of the different mumps vaccine strains impacts mumps disease control. International Journal of Epidemiology, Volume 31, Number 5, 2002 , pp. 983-984(2).

104. Fullerton K.E., Reef S.E. 2002. Commentary: Ongoing debate over the safety of the different mumps vaccine strains impacts mumps disease control. Intern. J. Epidemiol. 31, p. 983-984.

105. Galazka AM, Robertson SE, KraigherA. Mumps and mumps vaccine: a global review. Bull World Health Organ. 1999; 77(1):3-14..

106. Gellin B.G., Katz S.L. Putting a stop serial killer: Measles. The J. of Inf. Dis, 1994, v.170 (Suppl.) s.1-2

107. Grazia C. et al. M Nucleotide sequence at position 1081 of the hemagglutinin-neuraminidasegene in wild-type strains of mumps virus is the most relevant marker of virulence. J Clin Microbiol. 1998 Dec;36(12):3743-4.

108. Griffin D.E., Ward B.J. Janregui E. et al. Natural killer cell activity during measles. Clin. Exp. Immunol., 1990, v.81, p. 218-224.

109. Gubler J., Luthi R., Oels Os. Severe measles pneumonitis in adults. Clin. Inf. Disease, 1995, v. 21 №4, p. 1060-1061 .117. http://www.juse.or.jp7e/publications/

110. Ikis D. Vaccines produced in diploid cells lines. Nat. Cancer Inst. Monogr., 1968, v. 29, p. 485-501.

111. Jin L. et al. 2004. Genetic diversity of mumps virus in oral fluid specimens: application to mumps epidemiological study. J Infect Dis. 2004. 189(6), 1001-8.

112. Iuminova N.V. et al. Efficiency of revaccination against epidemic parotitis and immunological safety Vopr Virusol. 2002 May-Jun;47(3):44-5..

113. Kats S.L., Milovanovic M., Enders J.I. Propagation of measles virus in culture of chick embrye cells. Pres. Sec. Exp. Biol.Med., 1958, v. 97, №1, p. 23-29.

114. Kazue U. et al. Characterization of F Gene of contemporary mumps virus strains isolated in Japan. Microbiol. Immunol., 2003, 47 (2), 167-172.

115. Kunkel, U., Schreier, E., Siegl, G. and Schultze, D. Molecular characterization of mumps virus strains. Journal of infectious Diseases 1994, 169, 77-82.

116. Lim C.S. et al. Hemagglutinin-neuraminidase sequence and phylogenetic analyses of mumps virus isolates from a vaccinated population in Singapore. J Med Virol. 2003 Jun;70(2):287-92..

117. Magdzik W, Zielinski A. Adverse effects following vaccinations and effectiveness of different live vaccines against mumps. Przegl Epidemiol. 2002;56(3):377-89.,

118. Maksimova O.A. et al. Comparative evaluation of neurovirulence of domestic and foreign live mumps vaccine. Vopr Virusol. 2001. 46(5):31-5.

119. Measles in 1992. Weekly Epidemiol. Rec. WHO, 1993, v. 68, №33, p. 241-243.

120. Nojd J, Mumps virus neutralizing antibodies do not protect against reinfection with a heterologous mumps virus genotype. Vaccine. 2001. 8;19(13-14): 1727-31.

121. Oliver C. Vaccination contre la rougeole: quelles limites. Infect. Et immunol., 1994, v.l, №1, p. 16-20.

122. Ormerod M.G. (ed.) (1990). Flow cytometry; A practical approach. IRL Press, Oxford.

123. Orvell C, The reactions of monoclonal antibodies with structural proteins of mumps virus, J Immunol 132 (1984) (5), pp. 2622-2629.

124. Orvell, C., M. Kalantari, and B. Johansson. 1997. Characterization of five conserved genotypes of the mumps virus small hydrophobic (SH) protein gene. J. Gen. Virol. 78:91-95.

125. Orvell et al. 2002. Antigenic relationships between six genotypes of the small hydrophobic protein gene of mumps virus. J. Gen. Virol. 83, 24892496.

126. Ramsay M.E.B., Moffatt D., O'Connor M. Measles vaccine: a 27-year follw-up. Epidemiol, and Infec., 1994, 112, №2, p. 409-412.

127. Richard J.L. et al. Comparison of the effectiveness of two mumps vaccines during an outbreak in Switzerland in 1999 and 2000: a case-cohort study. Eur. J. Epidemiol. 2003; 18(6): 569-77.

128. Rubin S.A. et al. Changes in mumps virus gene sequence associated with variability in neurovirulent phenotype. J. Virol. Vol., 2003, 77, N21, p.l 1616-11624.

129. Rubin S.A. et al. Changes in mumps virus gene sequence associated with variability in neurovirulent phenotype. J. Virol. 2003, Vol. 77, N21, p.l 1616-11624

130. Rubin, S. A., Pletnikov, M. & Carbone, K. M. Comparison of the neurovirulence of a vaccine and a wild-type mumps virus strain in the developing rat brain. Journal of Virology . (1998). 72, 8037-8042.

131. Rubin, S. A., Pletnikov, M., Taffs, R., Snoy, P. J., Kobasa, D., Brown, E. G., Wright, K. E. & Carbone, K. M. Evaluation of a neonatal rat model for prediction of mumps virus neurovirulence in humans. Journal of Virology 2000, 74, 5382-5384.

132. Rudnai O., F.Farcas, L.Csonka et al. Kanayara elleni elso to meges vedoltasok magy arors Zagon. Oro. Het., 1969, v. 110 № 38, p.2197-2200.

133. Saika S et al. Neurovirulence of mumps virus: intraspinal inoculation test in marmosets. Biologicals. 2004 Sep;32(3): 147-52.

134. Shapiro H.M. "Practical Flow Cytometry", Alan Liss, .N.Y., 1985.

135. Schwars A. Preliminary tests of highly attenuated measles vaccine. Amer. J.Dis. Child., 1962, v.103, p. 386-388.

136. Shewhart W.A. Statistical Methods from the Viewpoint of Quality Control. 1939, The Graduate School, U.S. Department of Agriculture, Washington D.S. 105 p.

137. Schlegel M. et al. 1999. Comparative efficacy of three mumps vaccines during disease outbreak in eastern Switzerland: cohort study. BMJ, Vol. 319, p. 352-353.

138. Schwars A., Anderson J. Immunisation with a further attenuated live measles vaccine. Int. Children's Center Seminar on the Epidemiology and Prevention of measles and Rubella, 1964, p. 15-17.

139. Strategies for Global Measles Control. Elimination. Recommendation of the Meeting of WHO SAGE Sub-Committee on Measles. Geneva, 1995.

140. Strohle, A., Bernasconi, C. & Germann, D. A new mumps virus lineage found in the 1995 mumps outbreak in western Switzerland identified by nucleotide sequence analysis of the SH gene. Archives of Virology, 1996 141, 733-741.

141. Tecle T., Johansson B., Jejcic A. et al. 1998. Characterization of three co-circulating genotypes of the small hydrophobic protein gene of mumps virus. J Gen. Virol. 79, 2929-2937.

142. Tecle T., Bottiger B., Orvell C., Johansson B. et al. 2001. Characterization of two decades of temporal co-circulation of four mumps virus genotypes in Denmark: identification of a new genotype. J. Gen. Virol. 82, 2675-2680.

143. Tecle, T., A. Mickiene, B. Johansson, L. Lindquist, and C. Orvell. Molecular characterisation of two mumps virus genotypes circulating during an epidemic in Lithuania from 1998 to 2000. Arch. Virol. 2002, 147:243-253.

144. Uhlemann K. The molecular epidemiology of mumps virus Infect Genet Evol. 2004. 4(3): 215-9.

145. Van Dilla M.A., Trujillo T.T., Mullaney P.F., CoulterJ.R. (1969). Science, 163, 1213.

Информация о работе

Колышкин, Владимир Михайлович
доктора биологических наук
Москва, 2010
ВАК 03.01.06

Диссертация

Разработка и внедрение технологии промышленного производства и системы управления качеством ассоциированной паротитно-коревой вакцины - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы