Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Научные основы совершенствования вакцинопрофилактики кори и эпидемического паротита

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Научные основы совершенствования вакцинопрофилактики кори и эпидемического паротита"

РГб од

На правах рукописи УДК 578.4(578:616-036.22)

ЮМИНОВА НАДЕЖДА ВАСИЛЬЕВНА

НАУЧНЫЕ ОСНОВЫ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ КОРИ И ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПАРОТИТА

03.00.06 - Вирусология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МОСКВА - 1998 г.

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте вирусных препаратов Российской академии медицинских наук._

Научный консультант: академик РАМН, профессор О.Г. Анджапаридзе.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Бектпмпров Т.А. доктор медицинских наук, профессор Миронова Л.Л. доктор биологических наук Пронин A.B.

Ведущее учреждение - Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита состоится ХГ шт 1998 г. в/.. часов на заседании диссертационного совета Д.001.27.01 при Институте полиомиелита и вирусных энцефалитов им.М.П. Чумакова РАМН по адресу: 142782, Московская область, Ленинский район, п/о Институт полиомиелита. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им.М.П. Чумакова РАМН.

Автореферат разослан 1998 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

O.A. Медведкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Открытие принципа активной иммунизации дало человечеству чрезвычайно сильное оружие борьбы с инфекционными болезнями, включая и болезни вирусной этиологии.

В течение многих десятилетий главной мерой профилактики ряда инфекций является специфическая вакцинопрофплактика, поэтому число усовершенствованных препаратов постоянно растет.

До начала проведения массовой вакцинации корь и эпидемический паротит считались очень тяжелыми заболеваниями, они были распространены повсеместно, за исключением удаленных и островных популяций. Во всех странах мира крупные вспышки кори и эпидемического паротита происходили ежегодно, в сельских районах они возникали реже. В раннем возрасте этпми парамиксовирусными инфекциями заражался почти каждый ребенок.

После того как в бывшем СССР в 1967 г. началась проводиться массовая вакцинация против кори, заболеваемость ею сократилась в 8-16 раз. Массовая вакцинация против эпидемического паротита, начавшаяся в нашей стране в 1976 и 1977 гг. и возобновившаяся в 1981 г., снизила заболеваемость в 4-16 раз по сравнению с минимальными показателями довакцинального периода.

Успехи вакцпнопрофнлактики были неоспоримы. Однако, складывающуюся в последнее десятилетие эпидемиологическую ситуацию по кори и эпидемическому паротиту однозначно оценить было нельзя. С одной стороны наблюдалось снижение заболеваемости, с другой - рост серонегативных людей среди ранее привитых, отмечалось "повзрослейте" кори и эпидемического паротита и, в ряде случаев, утяжеление клинических проявлений болезни, увеличивалось число серонегативных лиц среди беременных жензцин и, как следствие этого, рождались неиммунные к кори и эпидемическом}' паротиту дети, что, в свою очередь, сказывалось на проценте детской смертности в раннем возрасте. Тенденция роста заболеваемости корью в начале 80-х годов была так ярко выражена, что привела к введению во многих странах мира, в том числе и в бывшем СССР в 1986 г., повторных прививок. Заболеваемость корью снизилась, но не надолго. Практика последних лет показала, что рост заболеваемости корью ( 1993 г. ) и эпидемическим паротитом ( 1996, 1997 гг. ) нельзя объяснить только социальными переменами последних лет. Накопление значительной прослойки не-

вакцинированных людей происходило в течение всего последнего десятилетня. В настоящее время очевидно, что рост заболезаемостп этими инфекциями был связан ие только с низкой привптостыо населения, нарушениями в хранении, транспортпровке вакцин. Существовало и ряд других, не менее важных, прпчнн, устранение которых следует вести в следующих направлениях. Во-первых, необходимо совершенствование существующих вакцин. Прежде всего - применение термостабильных вариантов коревой и паротитной вакцин, улучшение качества вакцинного вируса - использование генетически однородного варианта. Во-вторых, внедрение в практику здравоохранения нового, более физиологичного пути введения коревой и паротитной вакцин и, в-третьих, их ассоциированного использования. В-четвертых, известно, что любая вакцинация, помимо развития специфического иммунного ответа, сопровождается достаточно глубокой перестройкой иммунной системы, такой, как появление повышенной чувствительности к заражению гетерологичными возбудителями бактериальной, вирусной и грибковой природы, и повышенной чувствительностью к отдаленной встрече с гомологичным инфекционным агентом, развитием аллергических и аутоиммунных состояний в период вакцинации и после нее.

В последние годы стало известно, что вакцинация живыми коревой и паротитной вакцинами приводит к количественным изменениям соотношений, функций и взаимодействий между иммунокомпетентными клетками. Эти изменения вызывают формирование временного имму-нодепрессивного состояния, модулируют иммунный ответ вакцинированных по отношению к другим инфекционным агентам и появлению аллергии.

Необходимость всестороннего изучения специфического и неспецифического клеточного реагирования на вакцинный препарат стала очевидна особенно сейчас, в условиях сниженной иммунореактивности детского организма на фоне ухудшения общей экологической обстановки как у нас в стране, так и во всем мире. Существующий в настоящее время набор иммунологических методов огромен, но его использование в России до сих пор не носит системного характера. Чаще всего испытания проходят на разных моделях, в разных условиях и полученные результаты оказываются мало сопоставимыми, а подчас 'и противоречивыми. В этой связи проведение исследований по адекватной оценке иммунной системы людей, вакцинируемых парамиксовирусными пре-

паратами, а также людей, находящихся в очагах этих инфекций имеет большое теоретическое п практическое значение. Полученные данные позволят не только по новому рассмотреть проблему формирования поствакцпнального иммунитета к кори и эпидемическому паротиту, понять причины невосприимчивости организма к этим инфекциям, но и по другому взглянуть на проблему совершенствования вакцинопро-филактики.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ. Основная цель настоящей работы состояла в поиске дальнейших путей совершенствования вакцин и методов важцпнопрофилактпкп кори и эпидемического паротита посредством разработки адекватных критериев оценки иммунологической эффективности и иммунологической безопасности существующих и усовершенствованных коревой и паротитной вакцин, новых способов их аппликации, а также в углубленном изучении ряда иммунологических реакций, индуцированных у привитых и ревакцшшрованных этими препаратами.

В соответствии с поставленной целью в задачи работы входило:

1. Разработать систему иммунологического мониторинга при апробации живых коревой и паротитной вакцин и их усовершенствованных вариантов ( с новым термостабилизатором ЛС-18, с генетически однородным штаммом вируса кори МОСКВА-5, с ассоциированным вариантом паротитно-коревой вакцины).

2. Изучить характер, длительность и диапазон специфических клеточных и гуморальных ( общих и местных ) реакций при вакцинации и естественной циркуляции диких штаммов вирусов кори п эпидемического паротита.

3. Разработать мшеромодификацию метода реакции бластной трансформации лимфоцитов для определения функционального специфического и неспецифического состояния Т- и В-систем иммунитета людей, привитых парамиксовпруснымл вакцинами и больных корью и эпидемическим паротитом.

4. Разработать простые, доступные для широкого круга практических вирусологических лабораторий методы ранней дифференциальной диагностики коревой и паротитной инфекций и оценки длительности и напряженности поствакцинального иммунитета.

5. Оценить реактогешюсть, антигенную активность, иммунологическую эффективность и безопасность живых коревой п царотитноп вакцин,введенных интраназально с целью ревакцинации.

6. Установить п дать иммунологическую оценку критериям защищенности от заболевания корью и эпидемическим паротитом отдельных лнц и отдельных коллективов в современных условиях.

7. На основании всестороннего п комплексного изучения особенностей коревой п паротптноп инфекций в современных условиях выяснить пути возможного повышения эффективности вакцинации против кори и эпидемического паротита.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Проведенное экспериментальное исследование впервые позволило оценить реактогенность, антигенную активность, эпидемиологическую эффективность, иммунологическую безопасность термостабильных вариантов живых коревой и паротит-ной вакцин с новым стабилизатором ЛС-18 п иммунологическую эффективность ревакцинации термостабильной живой коревой вакциной. Апробированы латая коревая вакцина с новым генетически однородным штаммом вируса кори МОСКВА-5 и ассоциированная паротитно-коревая вакцина (АПКВ ). Определена реактогенность, иммунологическая эффективность и иммунологическая безопасность интраназально введенной живой коревой вакцины ( ЖКВ ) из штамма ЛЕНИНГРАД-16 ( Л-16 ) на взрослых и детях при ревакцинации и живой паротитной вакцины ( ЖПВ ) из штамма ЛЕНИНГРАД-3 ( Л-3 ) на взрослых людях. Впервые была показана перспективность данного способа введения вакцины при крупномасштабной ревакцпнацпп против кори.

Показано, что невосприимчивость к парамиксовирусным инфекциям - это многофакторное явление, зависящее как от состояния клеточного, гуморального и особенно местного звена специфического иммунитета. Впервые дана оценка роли и влияния диких штаммов вирусов кори и эпидемического паротита на адаптационные возможности иммунной системы организма привитых и переболевших в условиях прямого, постоянного воздействия на нее парамиксовирусов.

Впервые апробирована и научно обоснована система иммунологического мониторинга при испытании усовершенствованных коревой и паротитной вакцин, обеспечивающая на современном уровне оценку их иммунологической безопасности и иммунологической эффективности.

Отработаны условия постановки реакции бластной трансформации лимфоцитов, реакции пнгибпрования нейраминидазноп активности противопаротитных антител. Качественно модифицирован непрямой метод флюоресцирующих нротивокоревых антител. Использование данных методов позволило впервые получить адекватную характеристику иммунологического воздействия диких циркулирующих вирусов, а также коревой и паротитяой вакцин, на человека, выявить и охарактеризовать важный реабилитационный постпрпвивочный период.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. В строго контролируемых шифрованных эпидемиологических наблюдениях установлено, что живая коревая вакцина из генетически однородного штамма МОСКВА-5, отвечает требованиям предъявляемым к вакцинным препаратам. Результаты исследований легли в основу Фармакопейной статьи '' Вакцина коревая культуральная живая сухая" ( НТД на производство ), утвержденной 01.12.1994 г.

Испытания термостабильных вариантов живых коревой и наро-титной вакцин с новым стабилизатором ЛС-18 показали, что изученные вакцины отвечают требованиям ВОЗ, предъявляемым к вакцинным препаратам. Полученные результаты легли в основу нормативно-технических документаций на производство живой коревой и живой па-ротптной вакцин с новым стабилизатором ЛС-18 и в Фармакопейные статьи - " Вакцина коревая культуральная живая сухая " и " Вакцина паротитная культуральная живая сухая ", утвержденная 20.02.1996 г. Результаты работы нашли отражение в следующих документах: методические рекомендации: " Использование модифицированного радиометрического мпкроварианта реакции бластной трансформации лимфоцитов в исследованиях клеточного поствакцпнального иммунитета ", ГУКИ МЗ СССР,№> 28-6/3 от 28.11.1983 г.,

методические рекомендации: " Реакция ингибирования нейрамини-дазной активности для определения антител у переболевших и привитых паротитной вакциной ", Ученый Совет НИИ ВП РАМН, 12.11.1987 г.,

авторское свидетельство: " Штамм культивируемых клеток человека для выявления антител к вирусу кори ", N0 1428765 от 08.06.1988 г.,

авторское свидетельство: " Штамм культивируемых клеток челове-

ка, используемый для выявления антител к вирусу кори ", N0 1433978 от 01.07.1988 г.

АПРОБАЦИЯ ДИССЕРТАЦИИ. Основные положения п выводы диссертационной работы доложены на научных конференциях и заседаниях Ученого совета НИИ ВП РАМН ( 1989, 1991, 1993, 1995, 1996, 1997 гг.); заседаниях проблемной комиссии " Корь, паротит" ( 1989, 1991,1992, 1993, 1994 гг. ); 62 Сессии общ. собрания АМН СССР на секции " Фундаментальные Проблемы инфектологип" ( 1991 г. ); Всесоюзной конференции "Поствакцинальные осложнения: патогенез, профилактика, лечение" ( Ленинград, 1991 г. ); Всесоюзной конференции " Актуальные проблемы диагностики и профилактики кори, эпидемического паротита и краснухи" ( Москва, 1992 г.); Международном конгрессе Европ. общества против вирусных заболеваний ( Страсбург, 1992 г. ); IX межинстптутской научной конференции " Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" ( Челябинск, 1992 г. ); Всероссийской научной конференции " Актуальные проблемы инфекционной патологии" ( С.-Пет., 1993 г. ); международном конгрессе по клинической вирусологии ( Стокгольм, 1994 г. ); Европейском конгрессе "Прогресс в вирусологии 1995 г." ( Праха, 1995 г.); 1-й нац.конферешщи Российской Ассоциации аллергологов и клинических иммунологов ( Москва, 1997 г.).

ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. По теме диссертации опубликовано 57 печатных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертационная работа изложена на 311 страницах машинописного текста, иллюстрирована 57 таблицами и 3 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы ( три главы ) и 5 глав собственных исследований, заключения, выводов и библиографического указателя, включающего 340 отечественных и зарубежных источников. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. ВАКЦИНЫ. 1. В работе были использованы 26 серий живой коревой вакцины ( ЖКВ ) из штамма Ленинград-16 (Л-16 ) и 1 экспериментальная серия живой коревой вакцины из генетически однородного штамма Москва-5 ( М-5 ), 10 серий живой коревой вакцины из штамма Л-16 с повышенной термостабильностью. Активность серий живых коревых вакцин из штаммов Л-16 и

М-5 составляла от 3 ООО до 10 ООО ТЦД-,о в одной прививочной дозе. 18 серий паротитной вакцины со стабилизаторами сорбит-желатоза и JIC-18. Активность разных серий паротитных вакцин из штамма JI-3 составляла от 10 ООО до 40 ООО ГАД Е^о в одной прививочной дозе. 5 серий ассоциированной паротитно-коревой вакцины ( АПКВ ), соотношения в них паротитно-коревого компонентов колебалось от 1:5 до 1:12,6. Активность коревого вируса колебалась от 2 500 до 4 000 ТЦД$о, а активность паротитного вируса от 15 500 до 40 000 ГАДЕ^о в одной прививочной дозе.

ВАКЦИНАЦИЯ. Вакцинация различными типами коревых, паротитных и ассоциированной паротитно-коревой вакцин проводилась согласно наставлению по их применению. Прививки вакцин проводили медицинские работники лечебных учреждений.

КОНТИНГЕНТЫ. Изучение ректогенности, антигенной активности, иммунологической безопасности различных типов коревых и паротитных вакцин и иммунного статуса проводили в организованных коллективах взрослого и детского населения. В общей сложности под наблюдением находилось 8200 человек, в том числе 1120 взрослых и 7080 детей.

РЕАКТОГЕННОСТЬ. Реактогенность испытуемых вакцин оценивали для коревых вакцин в течение 28 дней, паротитных - 21 дня с учетом местных и общих реакций, путем опроса, тщательного медицинского осмотра и ежедневной термометрии. Одновременно проводили тщательное наблюдение за состоянием здоровья и самочувствием непривитых людей, но находящихся в непосредственном общении с привитыми. Полученные результаты обобщали и подвергали статистической обработке.

ПРОБЫ КРОВИ И НОСОВЫХ СЕКРЕТОВ. Пробы крови и носовых секретов у вакцинированных различными типами коревых, паротитных и паротитно-коревой вакцин брали перед вакцинацией и на 7-10, 14-20, 30, 50-60 дни после и через 1, 2, 3, 5, 7 лет. Пробы крови и носовых секретов в очагах коревой и паротитной инфекций брали в первые дни вспышки, через 10, 20, 30 дней после первого забора и через 1 месяц после последнего случая зарегистрированного заболевания корью и эпидемическим паротитом в данном коллективе.

ВИРУСЫ. В работе использовали вакцинные штаммы вируса кори - Ленинград-16 ( Л-16 ) и Москва-5 ( М-5 ), вакцинный штамм вируса

эпидемического паротита - Лепингра.д-3 ( Л-3 ), а также штамм вируса кори - Эдмопстон и штамм вируса эпидемического паротита - Эндерс.

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ, а). Антигенную активность живых коревой, паротитной и ассоциированной паротитно-коревой вакцин, а также иммунный статус к вирусам кори и эпидемического паротита изучали с помощью следующих серологических реакций:

1. реакции торможения гемагглютинируюшей активности ( РТГА ),

2. реакции нейтрализации ( РН ), 3. реакции радиального гемолиза ( РРГ ), 4. метода флюоресцирующих антител ( МФА ), 5. реакции торможения пассивного гемолиза ( РТПГ ), 6. реакции ингибирова-ния нейраминидазной активности ( РИНА ) проводили по методике Н.В. Юмпновоп и С.С.Унанова, 7. метода иммуноферментного анализа ( ИФА ).

б). Реакцию бластной трансформации ( РБТ ) лимфоцитов ставили по методу J. Раи1у и др. в нашей модификации ( 1983 г.).

2. Выявление Т-хелперов (СВ4+), Т-супрессоров (СБ8+), В-клеток (СБ72) и О-клеток ( НИ-В/ НИ-Т -гетерогенная популяция натуральных киллеров-МК ) проводили с помощью цитохимического метода, используя нафтол АБ-В1 фосфат п диазотированный парарозанилин в модификации Р.П.Нарцисова. 3. Определение численности Т-клеток, Т-супрессоров, Т-хелперов, В-клеток, натуральных киллеров проводили методом непрямой иммунофлюоресценции с моноклональными антителами ( Никола,енко В.Н.,1990 ).

Иммунорегуляторный индекс (ИРИ) вычисляли соотношением числа Т-хелперов (СБ4+) к Т-супрессорам (СБ8+)-

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

РАЗРАБОТКА НОВЫХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ И БЕЗОПАСНОСТИ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМИКСОПРЕПАРАТОВ.Первый раздел исследований был посвящен разработке ряда новых методов контроля эффективности коревой и паротитной вакцин. Изучение действия иммунобиологических препаратов на организм человека до настоящего времени в основном было ограничено исследованиями их реактоген-ных и антигенных свойств. Обоснованное расширение набора - тестов контроля вирусных вакцин и, прежде всего, их дополнение реакциями клеточного иммунитета является одним из реальных путей усовершенствования коревой и паротитной вакцин. В процессе работы возникла

необходимость в подборе чувствительного и максимально объективного метода определения функциональной активпостп лимфоцитов крови у привитых людей. Таким методом явилась реакция бластной трансформации лимфоцитов ( РБТ ). В клинической иммунологии она используется наиболее часто. Существующие варианты этой реакции были неприемлемы для нас, так как классический макрометод связан с использованием очищенных лимфоцитов и требует большого количества венозной крови (10-40 мл ), а микроварианты в большинстве своем трудоемки и сложны для широкого практического использования и требуют специального импортного оборудования и редких реактивов.

Поэтому , взяв за основу радиометрический вариант метода определения РБТ по .1. Рап1у и др. ( 1972 ), мы существенно уменьшили объем исследуемой крови, используя периферическую кровь из пальца в объеме 0,5 - 0,8 мл и изменили методику обработки культуры для подсчета радиактивности, применяя отечественные реактивы. Радиометрический вариант в нашей модификации значительно выиграл в скорости и простоте обработки культуры клеток и позволил исследовать минимальные количества крови.

Данная модификация метода РБТ позволила не только охарактеризовать активность специфических анткгениндуцированных СБ4+ клеток, но и активность специфических супрессоров и их предшественников, учесть уровень неспецифической модуляции стимулированных ФГА Т-лимфоцитов, а ЛПС - В-лимфоцитов.

Модифицированный вариант РБТ дал объективную возможность адекватной оценки иммунологической безопасности и эффективности коревой и паротитной вакцин, позволил более полно характеризовать иммунологический статус организма в процессе становления, формирования клеточного звена противокоревого и противопаротитного иммунитета.

Наша дальнейшая задача заключалась в разработке иммунологического мониторинга при испытании усовершенствованных вариантов ЖКВ и ЖПВ и оценке целесообразности применения ряда иммунологических методов, таких, как изучение цитохимического статуса лимфоцитов, учет гемограмм, использование ряда серологических методов, с внедрением реакции ннгибпрования непраминидазных противопаро-титных антител и метода флюоресцирующих антител ( РИНА и МФА ) в целях изучения иммунологических реакций у привитых и людей,

оказавшихся в очагах коревой и паротитной инфекций.

Для оценки гуморального противопаротитного иммунитета была разработана реакция ингибнрования нейраминпдазной активности ( РИНА ). В основу нашего варианта РИНА был взят количественный метод определения сиаловых кислот, описапныи ЗДУаггеп ( 1959). Сущность нашего варианта РИНА заключается в том, что в результате воздействия нейраминидазы вируса эшщ. паротита на субстрат ( овому-цин, фетуин ) высвобождается низкомолекулярное вещество, которое при периодатном окислении образовывало В-формилпировиноградную кислоту. Последняя, вступая в реакцию конденсации с тиобарбитуро-вой кислотой, давала окрашивание хромофора, плотность которого измерялась при длине волны 549 нм. Использование данного метода РИНА позволила проследить динамику появления, роста и длительности сохранения антинейраминидазных антител у людей.

Следующим этапом работы явилось усовершенствование способа диагностики кори и эпид. паротита. По этому разделу исследований было получено 2 авторских свидетельства, касающихся получения двух новых штаммов культивируемых клеток человека для выявления антител к вирусу кори, это штамм ВСКК(П)79Д и ВСКК(П)81Д. В отличие от обычного варианта мы использовали хронически инфицированные клеточные культуры Нер-2 и Л-41. Внедрение новых штаммов культивируемых клеток в качестве субстрата способствовало ускорению и стандартизации метода пммунофлюоресценции для выявления антител к вирусу кори. Использование хронически инфицированных клеток ВСКК(П)79Д и ВСКК(П)81Д стандартизовало метод флюоресцирующих антител ( МФА ) и ускорило получение результатов по определению антител к вирусу кори в сыворотках больных и вакцинированных ЖКВ из штамма Л-16.

Таким образом, внедрение в практику испытания коревой и паротитной вакцин методов РБТ, изучения ферментного статуса лимфоцитов, учет гемограмм, РИНА, МФА и других серологических методов позволило изучить иммунологический статус привитых и людей, находившихся в очагах коревой и паротитной инфекций, оценить иммунологическую безопасность ЖКВ и ЖПВ, спрогнозировать эффект вакцинации, апробировать ряд усовершенствованных парамиксовирусных вакцин и новый альтернативный способ их введения - интраназальную иммунизацию.

УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫЕ ПРЕПАРАТЫ - ЖИВАЯ КОРЕВАЯ И ПАРОТИТНАЯ ВАКЦИНЫ.

1.ОЦЕНКА КОРЕВОЙ ВАКЦИНЫ ИЗ ГЕНЕТИЧЕСКИ ОДНОРОДНОГО ШТАММА МОСКВА-5.

Основными критериями качества любых вакцинных препаратов является их безопасность и специфическая активность. Особое значение критерий безопасности имеет для живых вакцин. Вакцинные штаммы не должны обладать реверсией.

С целью профилактики кори в нашей стране с 1967 г. используется живая коревая вакцина из штамма Л-16. Изучение вакцинного штамма вируса кори Л-16 путем клонирования выявило его генетическую неоднородность. Клонированные варианты, полученные из штамма Л-16, отличались и различной степенью нейровпрулентности для обезьян при интрацеребральном заражении. Некоторые клоны вызывали тяжелые изменения в ЦНС у обезьян, другие только в области инъекционного рубца. Эти изменения соответствовали картине посттравматических рубцевых изменений. Все это указывало на неоднородность штамма Л-16, возможность при определенных условиях изменения его реактогенных, в частности,нейровирулентных свойств. Это обстоятельство выдвинуло задачу получения генетически однородного штамма для профилактики корп. Этот штамм, Москва-5 ( М-5 ), был получен в НИИ ВП РАМН. Штамм М-5 характеризовался отсутствием нейровпрулентности при изучении на обезьянах. Для установления возможности внедрения нового вакцинного варианта вируса кори в медицинскую практику было проведено его исследование в клинике института педиатрии РАМН и на базе Краснодарской Край- и ГорСЭС. Изучение безвредности ЖКВ из штамма М-5, проведенное в клинике НИИ педиатрии, показало полную безвредность усовершенствованного коревого препарата. Дальнейшая апробация ЖКВ из штамма М-5 проходила в Краснодарском крае. Предварительно был изучен иммунологический статус детей по отношению к вирусу кори в различных возрастных группах ( 1-16 лет ), посещающих детские дошкольные учреждения и школы. Всего было обследовано 3700 детей, а привито разными типами коревых вакцин 633 ребенка. Вакцинальный процесс у привитых протекал доброкачественно, без осложнений, аллергических и побочных реакций. Частота общих и местных реакций среди привитых ЖКВ из штаммов М-5 и Л-16 была практически идентич-

ной. Общие реакции среди привитых М-5 и Л-16 зарегистрированы в 11,6 и 10,9%, соответственно.

Изучение антигенной активности показало, что частота положительных сероконверсий у вакцинированных ЖКВ из штамма М-5 составило 97,5 % при средней геометрической величине титров ан-тигемагглютинипов -6,0 1од-1. У привитых вакциной из штамма Л-16 сероконверсия наблюдалась в 99,4 % случаев при средней геометрической величине тптров - 6,1 \og-i. У привитых плацебо антител против кори не обнаружено, что свидетельствовало об отсутствии в детских коллективах циркуляции диких штаммов вируса кори. Живая коревая вакцина из штамма М-5 оказалась высокоиммуногенной. Изучение длительности и напряженности поствакцинального иммунитета ( 7 лет ) это подтвердило.

Таким образом, представленные данные свидетельствовали о том, что живая коревая вакцина из генетически однородного штамма Москва-5 не уступает вакцине из штамма Ленинград-16 и может быть рекомендована в качестве кандидата в вакцинные штаммы. Штамм М-5 вируса кори был рекомендован в качестве второго ( запасного ) вакцинного штамма для производства ЖКВ, а результаты исследования легли в основу Фармакопейной статьи " Вакцина коревая культураль-ная живая сухая " ( НТД на производство ), утвержденной 01.12.1994 г.

2. ЖИВАЯ КОРЕВАЯ ВАКЦИНА ИЗ ШТАММА ЛЕНИНГРАД -16 С ПОВЫШЕННОЙ ТЕРМОСТАБИЛЬНОСТЬЮ.

Коревая и паротитная живые вакцины - лабильные препараты, даже после лиофилизации. Многочисленные научные исследования показали, что первичные вакцинальные неудачи связаны прежде всего с термола-бнльностью ЖКВ и ЖПВ и нестандартностью отдельных серий этих вакцин.

ВОЗ уделяет большое внимание вопросам повышения термостабильности вакцин. Для повышения термостабильности коревой и паро-титной вакцин в НИИ ВП РАМН был разработан новый стабилизатор ЛС-18.

Особое значение этот показатель имеет для живых Коревых вакцин ввиду выраженной термолабильности коревого вируса, т.к. повышение температуры выше 4° С приводит к быстрой гибели вирусных частиц.

Первым этапом этого изучения явилось испытание живой коревой

вакцины с новым стабилизатором ЛС-18 по тестам реактогенности, антигенной активности и безопасности, которое проводили в Краснодарском крае ( 120 детей ). С целью всестороннего испытания стабилизатора ЛС-18 одна экспериментальная серия ЖКВ была разделена на 3 партии, которые хранились при разных температурных режимах.

Течение вакцинального процесса у привитых было доброкачественным, без осложнений, аллергических и побочных реакций. Анализ заболеваемости показал, что частота соматической и инфекционной заболеваемости среди привитых ЖКВ с JIC-18 и лиц контрольной группы в течение б месяцев существенно не различалась, и подтвердил абсолютную безвредность ЖКВ с повым стабилизатором JIC-18.

Изучение антигенной активности проводили среди привитых тремя партиями ЖКВ с JIC-18. Полученные данные свидетельствовали, что у привитых первой партией ЖКВ ( 14 дней хранения при 4,0° С ) сероконверспя составила 100,0 % при средней геометрической велп-чине титров антигемагглютининов - 6,0 /одг, второй партией ( 7 дней хранения при 37,0° С ) - 94,4 % и 5,1 /052, третьей партией ( 14 дней хранения при 37,0° С ) 92,0 % и 5,2 1од2, соответственно. У привитых ЖКВ обычной серии сероконверспя отмечалась в 100,0 % случаев, при средней геометрической величине титров антител 6,0 log2.

Таким образом, разные температурные условия хранения ЖКВ с JIC-18 вызывали определенное снижение антигенной активности, но все эти показатели оказались статистически незначимы. В целом проведенные псследования показали, что вакцина с новым стабилизатором JIC-18 по своей термостабпльности соответствует рекомендациям ВОЗ при исследовании in vivo, а биологическая активность ( инфекционный титр препарата in vitro ) достаточно четко коррелирует с его антигенной активностью при вакцинации детей. Дальнейшее наблюдение за привитыми ЖКВ с JIC-18 в течение 3 лет показало, что антиге-магглютинирующие антитела обнаруживаются на протяжении всего периода исследования.

Изучение длительности и напряженности поствакцинального иммунитета у привитых ЖКВ с ЛС-18 показало, что партия коревой вакцины, хранившаяся 7 дней при температуре 37,0" С, формирует иммунитет такой напряженности, как и вакцина, которая хранилась при температуре 4,0° С. Таким образом, живая коревая вакцина с новым стабилизатором ЛС-18 полностью отвечала рекомендациям ВОЗ

по термостабилыюстп я может попользоваться а районах Россия с жарким климатом. Наши выводы были подтверждены результатами исследований, проведенными в бывшем ГДР п НРБ.

Полученные в этой главе результаты кг.глк в основу нормативно-технической документации на производство живой коревой вакцины с новым стабилизатором ЛС-18, оыла разработана Фармакопейная статья " Вакцина кулътуральная живая сухая ", утвержденная 01.12.1994 г.

3. ЖИВАЯ ПАРОТИТНАЯ ВАКЦИНА ИЗ ШТАММА ЛЕНИН-ГРАД-3 С ПОВЫШЕННОЙ ТЕРМОСТАБИЛЬНОСТЬЮ.

Следующий этап работы включал испытание живой паротитнон вакцины со стабилизатором ЛС-18 по тестам рсакгсгенности, антигенной активности и иммунологической безвредности, которое проводили в г. Москве. В работе использовали 2 серии ЖПВ с разной специфической активностью.

Вакцинальный процесс у всех привитых детей ( 153 ) протекал доброкачественно, без побочных п аллергических реакций. Частота общих и местных реакций у привитых обеими сериями ЖПВ была практически идентичной. Привитые дети, имевшие вакцинальные реакции, в госпитализации не нуждались. Анализ соматической и инфекционной заболеваемости в наблюдаемых группах в течение 6 месяцез не выявил существенных различий между группами привитых ЖПВ и плацебо и подтвердил практически полную безвредность и иммунологическую безопасность ЖПВ из штамма Л-3 повышенной термостабильности.

Оценка иммунологической эффективности ЖПВ в РН показала, что разные серии термостабильной вакцины индуцировали синтез впрус-нейтрализующих антител практически в 80,0 % случаев ( от 78,0 до 82,0 ), а исследование сывороток через 1 год показало, что уровень вируснейтралпзующих антител практически не снизился.

Резюмируя данный этап работы, необходимо отметить, что ЖПВ с новым стабилизатором ЛС-18 практически ареактогенна и обладает выраженной антигенной активностью. С целью углубленного изучения антигенных свойств ЖПВ сыворотки, взятые в динампке от вакцинируемых, были изучены в РТГА, РИНА и ИФА ( таблица 1 ). Каждый из используемых серологических тестов оценивал различные аспекты противопаротитного иммунитета - образование антител к гемагглю-тинину и нейрамннидазе вируса эпид. паротита, и к другим внешним

и внутренним структурным белкам вируса.

Наши результаты показали, что используемые тесты обладали разной чувствительностью. Наиболее ранними оказались антинейраминп-дазные антитела. Так, уже к 10 дню после прививки они определялись у 75,0 % вакцинированных. Наиболее чувствительным оказался ИФА.

Комплексный подход в оценке поствакцинального гуморального про-тивопаротптного иммунитета позволил не только определить динамику появления специфических антител, множественность антительпо-го ответа, но п получить дополнительные характеристики действия ЖПВ с новым стабилизатором ЛС-18.

Таблица 1. Результаты изучения антигенной активности ЖПВ в РН, РИНА, РТГА и ИФА.

Дни после Пока- Серия Типы реакций

прививки затели вакцины РН РТГА РИНА ИФА

1.Чис. серопо- 1012 9 23 44 56

10- лож.-ных проб 1013 9 27 50 60

день 2. Ср.геом.т. 1012 2,4 2,6 3,0 6,6

ан-л Ьод-2 1013 2,3 2,5 3,1 6,7

1.Чис.серопо- 1012 44 35 48 58

30- лож.-ных проб 1013 53 40 55 66

день 2. Ср.геом.т. 1012 3,0 2,6 3,9 8,4

ан-л Ьодч 1013 2,9 2,6 4,0 8,5

1.Чис.серопо- 1012 45 49 48 58

40- лож.-ных проб 1013 54 56 55 66

день 2.Ср.геом.т. 1012 3,2 3,7 4,2 9,4

ан-л Ьо§2 1013 3,2 3,6 4,3 9,5

1.Чис.серопо- 1012 45 49 48 58

50- лож.ных проб 1013 54 56 55 66

день 2.Ср.геом.т. 1012 3,2 3,6 4Д 9,6

ан-л Ьод-2 1013 3,2 3,6 4,2 9,6

ЖПВ - общепринятое средство профилактики эпидемического паротита. Однако, практика последних лет показала, что ее защитные свойства не абсолютны.

В связи с этим следующим этапом изучения термостабильного варианта ЖПВ было прогнозирование эффекта вакцинации против эппд. паротита по морфологическим и функциональным особенностям лимфоцитов детей, подлежащих плановой вакцинации.

С целью прогнозирования эффекта вакцинации, мы определяли некоторые параметры иммунной системы детей в процессе вакцинации против эпидемического паротита и сопоставляли эти параметры с результатами вакцинации - накоплением специфических антител и появлением клеток памяти, отвечающих на повторное воздействие антигенов вируса эпид. паротита.

Введение ЖПВ вызывало образование специфических антител и накопление клеток памяти у всех детей. Величина исследуемых показателей достигала максимума на 30-50-й день после инъекции вакцины. Вместе с тем конечные результаты колебались в достаточно широких пределах. Это позволило нам считать группу вакцинируемых детей гетерогенной по способности к ответу на ЖПВ. Среди исследованных показателей четкой динамикой отличался индекс стимуляции ( ИС ) клеток на ФГА в присутствии супрессоров, индуцированных убитым вирусом. И вполне логично было предположить, что различия между детьми в способности отвечать на ЖПВ связаны с уровнем специфической супрессии. Разделив группу детей по этому показателю на условно " сильную " группу ( ИС колебался от 200,0 до 250,0, средний ИС составил 222,2 ± 13,0 ) и " слабую " группу ( ИС от 120,0 до 195,0, средний ИС составил 170,0± 15,0 ), мы получили достаточно важную информацию об условиях вакцинации детей ЖПВ ( таблица 2 ). Так, при оценке уровеня клеточной памяти на 50-й день после прививки по ИС бластной трансформации, было отмечено достоверное (Ь > 3 ) различие между " сильной " и " слабой " группами ( ИС 4,90 ±2,16 и 2,60 ± 0,62 ). В то же время сопоставление данных об уровнях стимуляции лимфоцитов ФГА и торможения ее супрессорами по группам до прививки позволило обнаружить, что стимуляция ФГА в " слабой " группе была относительно слабой и без индукции супрессоров ( ИС был 181,0 ± 18,2 по сравнению с " сильной " группой, где ИС был 249,0 ± 2,04 ). По-видимому, во 2-й группе супрессоры были настолько исходно активны, что их дополнительная стимуляция давала лишь незначительный эффект. В "сильной " группе эффект стимуляции супрессоров до прививки был достоверен. Различия между этими

группами по ответу на ФГА сохранилась во все сроки наблюдения, то есть функциональная характеристика групп была устойчива.

Таблица 2. Средние показатели иммунной системы детей " сильной " и " слабой " групп в процессе вакцинации ЖПВ .

Пока- Сроки, " Сильная" " Слабая" Т

затели дни группа группа

Титр ан-л в РТГА 50 10,5 ±4,3 4,4 ± 3,3 Т > 2

Титр ан-л в РН 50 23,0 ±6,2 19,2 ±7,7 -

Антиг.спец.-РБТ ( ИС ) 50 4,9 ± 2,2 2,6 ± 0,6 Т > 2

ФГА-бластной 0 249 ± 20 181 ± 18 Т> 2

трасформацпи, 10 174 ± 14 141 ± 23 Т> 3

(ИС) 50 316 ± 16 187 ± 17 Т > 3

Индукция 0 222 ±14 170 ± 16 Т > 2

спец. суп-соров 10 123 ±18 88,9 ±17,4 Т > 2

(ИС) 50 214 ±15 114 ± 35 Т> 3

ЛПС-РБТ ( ИС ) 10 128 ± 28 92 ± 18 Т> 3

Хелп./супр. все

отношение сроки 2,43 ±0,28 1,73 ±0,22 Т > 2

Кол-во хелперов все

среди Т-лимфоцитов,% сроки 46,3 ±1,5 41,6 ± 1,8 Т> 2

Кол-во супрсссоров все

среди Т-лимфоцитов,% сроки 21,1 ±1,7 25,7 ±2,3 Т> 2

Далее были получены данные о влиянии исходного уровня супрессии на титры специфических противопаротитных антител у вакцинированных детей. Сопоставление результатов титрования антител в РТГА по группам показало преимущество " сильной " груптты. Таким образом, исследования показали, что исходное преобладание супрессор-ного компонента обуславливает и слабое формирование как клеточного, так и гуморального звена поствакцпнального иммунитета. Кроме того, исходное состояние иммунной системы в значительной степени определяет уровень супрессии развивающейся в процессе вакцинации.

Использование разработанного нами комплекса иммунологических ме-тодоз позволило не только построить систему прогнозирования эффективности вакцинации ЖПВ, подтвердить иммунологическую безопасность паротптноп вакцины, но и получить адекватную оценку воздействия противовирусного препарата с новым термостабилизатором ЛС-18 на организм привитого.

Результаты данных исследований легли в основу Фармакопейной статьи " Вакцина паротитах кулътуральная живая сухая ", утвержденная 20.02.1996 г.

4.АПРОБАЦИЯ ЖИВОЙ АССОЦИИРОВАННОЙ ПАРОТИТНО-КОРЕВОЙ ВАКЦИНЫ ИЗ ШТАММОВ ЛЕНИНГРАД-3 И ЛЕНИНГРАДА.

Большинство применяемых вакцин вводят детям в течение первых лет жизни. В связи с насыщенностью календаря профилактических прививок существенным моментом в плане облегчения его реализации является использование ассоциированных вакцинных препаратов. Практически во всех развитых странах мира применяется ди- ( корь-паротит ) и тривакцины ( корь-паротит-краснуха ).

К настоящему времени во многих странах мира накоплен значительный материал, свидетельствующий не только о принципиальной возможности использования ассоциированного паротитно-коревого препарата или корь-паротит-краснушной вакцины, но также проведены исследования по экспериментальному обоснованию оптимальных соотношений в прививочной дозе компонентов, входящих в ассоциированную вакцину, ее безвредности, реактогенности, иммуногенности и эпидемиологической эффективности.

В России же до сих пор продолжают использовать монопрепараты, хотя уже в 1969 г. Санкт-Петербургский институт им. Пастера совместно с НИИ ВП РАМН разработали ассоциированную паротптно-коревую вакцину ( АПКВ ). Многие годы вопрос о ее внедрении в практику здравоохранения затягивался. Для решения этого вопроса ( согласно приказу МЗ СССР N0 899 от 20:07.1983 г.) необходимо было провести дополнительное расширенное испытание АПКВ с различным содержанием вирусов кори и эпид. паротита в одной прививочной дозе. С этой целью в г. Воронеже нами было изучено 5 серий АПКВ и 2 серии моновакцины.

Изучение реактогенных свойств 5 серий АПКВ ( с разным содержа-

пнем вирусов кори и эпидемического паротита ) и моновакцин показало, что большинство поствакцинальных реакций регистрируется с 8-го по 15-й день после вакцинации. В целом, сравнительное изучение вакцинальных реакций среди разных групп привитых свидетельствует, что АПКВ обладает умеренной реактогенностью, а частота реакций сходна во всех группах привитых. Так, у привитых АПКВ и ЖКВ наблюдается главным образом катаральные явления, гиперемия: зева, конъюнктивиты и в единичных случаях сыпь. Вакцинальный процесс протекает доброкачественно, без осложнений п побочных реакций.

Дальнейший анализ соматической и инфекционной заболеваемости в наблюдаемых группах в течение 6 месяцев не выявил существенных различий между ними и свидетельствовал о безвредности и иммунологической безопасности ассоциированной паротитно-коревой вакцины.

Следующим разделом исследований явилось изучение иммунологической активности вакцин. При изучении иммунологической активности коревого компонента, введенного в ассоциации и в виде монопрепарата, было установлено, что во всех случаях антигемагглютиниру-юшие антитела образовывались у 100,0 % привитых ( таблица 3 ).

Таблица 3. Антигенная активность АПКВ.

Вак- Се- Число Паротит, Корь,

ци- рии обсле- РН РТГА

ны дованных % ср.г.титр в Ьо/]2 % ср.г.титр В Ь0[72

АПКВ 4 22 77,3 3,9 100 4,5

5 25 70,0 3,7 100 4,6

6 21 66,7 3,3 100 4,6

7 25 76,0 4,2 100 4,6

8 24 87,5 4Д 100 4,8

ЖПВ 0900 20 83,0 4,2 - -

ЖКВ 531 20 - - 100 5,9

Изучение антигенной активности паротитного компонента при ассоциированном введении показало, что сероконверспя наблюдается у 66,7 - 87,5 % привитых, а при введении паротитной вакцины - у 83,0 %.

Частота сероконверсий к вирусу эпидемического паротита при ассоциированном введении также не зависела от концентрации вируса кори в прививочной дозе.

Таким образом, полученные результаты свидетельствовали о выраженных антигенных свойствах АПКВ и о том, что соотношение концентрации вирусов кори и эпидемического паротита в ассоциированном препарате может колебаться в довольно широких пределах, практически без угнетения иммуногенной функции компонентов по сравнению с монопрепаратами. Ассоциированная паротитно-коревая вакцина отвечает всем требованиям, предъявляемым к препаратам такого класса и пригодна для использования в практике здравоохранения России.

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ И ИММУНОМОДУЛИ-РУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ДИКИХ ШТАММОВ ВИРУСОВ КОРИ И ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПАРОТИТА, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В РОССИИ. 1. КОРЬ. Острота проблемы борьбы с корью на современном этапе определяется состоянием эпидемической ситуации на каждой отдельной территории России, степенью воздействия на эпидемиологический процесс специфической профилактики и решением кардинального вопроса - элиминации коревой инфекции в Европейском регионе к 2000 г.

В теоретическом плане элиминация кори, под которой понимают исключение на отдельных территориях эпидемиологически связанных между собой случаев заболевания, возможна. Однако, как показывает опыт высокоразвитых стран, располагающих стабильной и высоко-иммуногенной живой коревой вакциной, вирус кори до сих пор легко циркулирует в коллективах с высокой степенью привитости.

Если в первое десятилетие ( 70-е годы ) при широкой иммунизации ЖКВ детей максимальные показатели заболеваемости достигали 171297 на 100 тыс.населения, в 80-е годы - 84-130, в 1989-1991 г. - 12,4-17,3 на 100 тыс. населения, межэпидемический период увеличился до 6 лет, то уже в 1993 г. заболеваемость корью возросла в среднем по России до 50,3, а на отдельных территориях - до 100-150 на 100 тыс. населения ( г. Москва, Воронежская, Челябинская, Кемеровская, Томская области и др. ).

Результаты эпидемиологического надзора показали, что трудность реализации программы ВОЗ по элиминации кори в России связана как с качеством применяемой вакцины ( ЖКВ из штамма Л-16 ), так и

с неудовлетворительной организацией прививочного дела ( 70,0-80,0 % охват первичной и вторичной прививкой ), а также социальными и экологическими особенностями отдельных районов России.

Для характеристики иммунного статуса населения к кори в течение ряда лет нами проводилось серологическое исследование на отдельных территориях России ( южные, северные районы и города средней полосы страны, а также ряд контролируемых районов г. Москвы ).

Ретроспективный анализ заболеваемости по России и на контролируемых территориях с 1986 по 1996 гг. показал, что массовая многолетняя вакцинация и ревакцинация против кори к концу 80-х и началу 90-х годов ( 1989-1992 гг.) привела к снижению заболеваемости в 10 -16 раз. 1993 г. стал годом резкого подъема заболеваемости корью.

При изучении имму но структуры населения к вирусу кори в 1993 -1996 гг. было выявлено, что уровень иммунитета составлял в среднем 95,0 - 96,0 % с колебаниями от 90,0 до 100,0 % в группах детей и подростков от 3 до 18 лет. Наиболее низкие показатели иммунитета обнаруживались у привитых детей старшего возраста. Полученные данные согласуются с тенденцией, которую отмечали и другие исследователи.

Все подлежащие ревакцинации дети и подростки были выявлены и повторно нами привиты ЖКВ. Следует подчеркнуть, что при оценке эффективности ревакцинации против кори детей 6 -7 лет как массового мероприятия были получены весьма благоприятные результаты. Под влиянием ревакцинации в последние годы в контролируемых коллективах ( милицейский колледж ГУВД г. Москвы, средние школы Юго-Восточного округа г. Москвы ) уровень заболеваемости корью резко снизился. Причем среди ревакцинированных детей за 10 лет наблюдения не зарегистрировано ни одного случая кори, что подтверждает высокую эпидемиологическую эффективность повторной прививки. Высокая эффективность ревакцинации была зарегистрирована как у истинно, так и у условно серонегативных детей. Установлена она также и в отношении серопозитивных. Иммунный ответ наиболее выражен на фоне низкого уровня антител и закономерно снижался с повышением исходных титров антител. Ревакцинация против кори оказывала благоприятное влияние на напряженность как гуморального, так и клеточного иммунитета.

Учитывая, что заболеваемость корью зависит в основном от каче-

ства и эффективности ЖКВ, следующим этапом нашей работы был поиск доступных п адекватных методов контроля как качества коревой вакцины, так и иммунологического статуса привитых. Для этой цели представлялось целесообразным сравнить четыре метода определения коревых антител - РТГА, РИГА, МФА и ИФА. Исследование сывороток детей, находившихся в очагах коревой инфекции разной интенсивности, показало пригодность всех использованных методов качественного и количественного определения коревых антител. Противо-коревые антитела обнаруживались у 95,9 % обследованных с помощью РТГА, у 97,3 % - МФА, у 97,6 % - РТПГ и у 98,9 % - ИФА, только высокая чувствительность ИФА позволяла с высокой долей достоверности устанавливать наличие бустеризации в инфицированном коллективе. В процессе дальнейших исследований была установлена и корреляционная связь между показателями титров в РТГА и ИФА ( таблица 4 )•

Таблица 4. Напряженность иммунитета у детей к вирусу кори в ИФА и РТГА.

Титры Всего Титры антител в ИФА

в РТГА сыв-ток <30 30 60 120 240 480 960 1920 3840 7680

< 4 12 5 0 2 5 0 0 0 0 0 0

4 32 0 3 6 7 7 9 0 0 0 0

8 31 0 3 4 6 5 6 7 0 0 0

16 75 0 2 5 13 20 13 15 3 4 0

32 68 0 0 1 14 17 И 6 12 7 0

64 58 0 0 0 8 13 10 6 9 11 1

128 10 0 0 0 1 0 3 4 0 1 1

256 4 0 0 0 0 0 0 0 2 1 1

512 3 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2

1024 3 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2

Итого: 276 5 8 18 54 62 52 38 26 26 7

Эта связь определялась только при низких разведениях сывороток ( в ИФА - в диапозоне 1:30 - 1:60 ). С увеличением титра антител

их корреляция в двух тестах приближалась к прямо пропорциональной зависимости ( г=0,5 ). Для РТГА эти диапозоны соответствовали 1:256, для ИФА - 1:1920. Ввиду того, что связь существовала лишь для определенных диапозонов разведений, полученные результаты еще раз подтвердили, что в ИФА анализируются как антигемагглютини-ны, так и антитела другой специфичности. Таким образом, было выявлено преимущество ИФА и подтверждены результаты исследований, свидетельствующие о его высокой чувствительности, специфичности и воспроизводимости.

Дальнейшие псследования показали, что встреча с диким циркулирующим в коллективе вирусом кори вызывает заметные изменения в иммунном статусе людей. Эти изменения напрямую связаны с количеством случаев кори в очаге. Дикие штаммы вируса кори, циркулирующие в России, вызывают достоверную иммуномодуляцию у людей, находящихся в очаге. Работа в ряде очагов кори позволила установить, что нахождение детей в очагах высокой интенсивности значительно изменяет общую иммунологическую реактивность детей, влияет на состояние Т-лимфодитов. Так, детальный анализ выявил, что у 60,0 % детей ИС в РБТ на ФГА может уменьшаться в 1,3 - 3 раза. Циркуляция диких штаммов вируса кори влияет на показатели как гуморального, так и клеточного иммунитета. В крови людей контактировавших с вирусом кори, появляются антигенреактивные клетки памяти и формируются дополнительные факторы защиты на клеточном уровне ( таблица 5 ). Уровень иммунологических сдвигов и коревой иммуномодуляцпи зависит от функциональной активности специфических супрессоров или их предшественников. Если супрессорный фактор у находящихся в очаге коревой инфекции преобладает, то наблюдается слабое формирование иммунологической памяти, резко снижается функциональная активность неспецпфической модуляции Т-лимфоцитов на ФГА. При низкой и средней супрессорной активности формирование клеточных и гуморальных факторов за,щиты идет активно. Зарегистрированный феномен с высокой долей достоверности позволил утверждать, что супрессорный фактор - важный показатель развития положительного иммунного ответа, который позволяет реально оценивать степень иммунологической опасности для людей, находящихся в очагах коревой инфекции.

Таблица 5. Динамика неспецифических и специфических клеточных и гуморальных реакций у детей ( и=80 ), находившихся в очаге коревой инфекции.

Реак- Иссле- Исследование

ция дуемый материала

материал 1-е 2 - е 3-е

РБТ-ФГА (ИС) Перифер.кровь 163,0 134,0 168,3

РБТ(антигсн+ФГА) Перифер.кровь 137,7 137,8 142,6

РБТ (антиген) Периф ер. кровь 1,86 3,30 3,42

РТГА (Ьод2) Сыворотка 3,68 7,71 7,38

Носовой секрет 3,00 3,20 3,20

ИФА (Ьод2) Сыворотка 6,58 12,04 11,42

Носовой секрет 6,90 7,91 7,91

Детальное исследование иммунного статуса детей, находящихся в очагах коревой инфекции, подтвердило, что " встреча " организма с диким вирусом кори вызывает полноценное развитие иммунного ответа с сопутствующими изменениями общих показателей иммунной системы, таких, как образование специфических общих антител и антител, выявляемых в секретах, антпгенреактивных клеток памяти, и в то же время, может снижать функциональную активность Т-системы иммунитета, вызывая тем самым относительную коревую иммунодепрес-сию. Это необходимо учесть при проведении различных экстренных мероприятий в очагах коревой инфекции и назначить реабилитационный период для детей из очага кори не менее, чем 1 месяц. Необходимо учитывать пребывание ребенка в очаге кори как объективную причину для временного ( 1 месяц ) медицинского отвода при проведении любых плановых прививок.

2. ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПАРОТИТ.

Массовая иммунизация против ряда вирусных инфекций внесла существенные изменения в эпидемический процесс не только при кори, но и при эпидемическом паротите. Произошло стойкое снижение заболеваемости. Если средний показатель заболеваемости эпидемическим паротитом в г. Москве за 1980 - 1987 гг. составил 466 на 100 тыс.

населения, то на контролируемых территориях в г. Воронеже он снизился в 2,5 раза, а в г. Краснодаре в 16 раз. Уровень заболеваемости эпидемическим паротитом в последние годы ( 1992 - 1996 гг. ) в России невысок. Однако, в ряде областей России эпидемическая ситуация не проста. Серологическое обследование различных контпнгентов па контролируемых нами территориях ( г. Москва, г. Краснодар и г. Воронеж ) показало достаточно широкую циркуляцию диких штаммов вируса эпидемического паротита в данных регионах.

Наиболее информативным методом определения противопаротит-ных антител является реакция нейтрализации ( РН ). Однако, при массовых сероэпидемиологическпх исследованиях, обработке большого количества проб, изучении пммуноструктуры пепользованпе РН затруднено из-за громоздкости и длительности постановки. Поэтому нами проводилась работа по сравнительной характеристике различных методов выявления противопаротитных антител в реакциях - РН, РТГА, РРГ и ИФА. Исследования показали, что наибольшей чувствительностью обладает ИФА, выявляющий антитела в очень низких концентрациях, лежащих за пределами чувствительности РТГА и РН. Сопоставительный анализ методов показал, что наибольшей взаимосвязью характеризуются ИФА и РН ( г = +0,48 t > 3 ).

Путем построения линейной регрессии была выявлена функциональная зависимость титров для пересчета количества впруснейтрализую-щих антител от величины титров антигемагглютинпнов, гемолизинов и ИФА-антител. Сопоставительный анализ серологических методов проводился с вычислением коэффициента линейной корреляции, который рассчитывали с помощью программы " Statgraphic Corporation ". Были составлены уравнения между соотношениями вируснейтрализу-ющих и антигемагглютинирующих антител, вируснейтрализующих и гемолпзпрующих антител. Данные зависимости пересчета удобно использовать для повседневной вирусологической и эпидемиологической практики с целью подтверждения активной циркуляции диких штаммов вируса эпидемического паротита, серологической работы в очагах паротитной инфекции и оценки эффективности ЖПВ.

Несмотря на значительные успехи вакцинопрофплактики, вирус эпидемического паротита продолжает циркулировать на всей территории России, а в последние годы стала расти заболеваемость и среди ранее привитых.

Исследование очагов иаротитной инфекции показало, что даже незначительный контакт детей с источником инфекции ( последний день продромы ) вызывает эффект сильного проэпидемичивания и активную бустеризацию коллектива. Специфические противопаротитные антитела появляются не только в сыворотках крови контактировавших детей, но и в назальных смывах. Так, уже через 10 дней после контакта у 50,0 % детей обнаруживаются антитела в секретах, а через месяц ожп обнаруживаются в 66,7 % случаев.

Параллельное изучение динамики появления и накопления антиген-реактивных клеток показало, что у 55,6 % детей, вместе с общим и местным образованием антител к вирусу эпидемического паротита, шло образование антител и антигенреактивных клеток памяти. Причем эти изменения в иммунной системе происходят как у ранее привитых ЖПВ, так и у детей, не имеющих в анамнезе сведений ни о перенесенном заболевании, ни о прививках. Заболеть эпидемическим паротитом могут не только не иммунные люди, но и ранее привитые ЖПВ.

Подробный анализ иммунного статуса детей, находившихся в очаге паротитной инфекции, позволил оценить иммунные реакции у детей с бессимптомным течением эпидемического паротита. Это наблюдение имеет особое значение, так как в 30,0 - 50,0 % случаев эпидемический паротит протекает в инаппарантной форме.

Детальное изучение иммунного статуса детей, находившихся в очаге паротитной инфекции, подтвердило, что " встреча " организма с диким вирусом эпидемического паротита вызывает развитие иммунного ответа с сопутствующими: изменениями общих показателей иммунной системы ( таких, как образование специфических общих и местных антител, антигенреактивных клеток памяти ), а также снижает функциональную активность Т-системы иммунитета на ФГА. Это необходимо учитывать при проведении экстренных мероприятий в очагах паротитной инфекции и установить постреабилитационный период в течение одного месяца для детей, побывавших в очаге эпидемического паротита. Необходимо рассматривать пребывание детей в очаге эпидемического паротита, как объективную причину для временного медицинского отвода при проведении любых других профилактических прививок.

ИНТРАНАЗАЛЬНАЯ РЕВАКЦИНАЦИЯ ЖИВОЙ КОРЕВОЙ ВАК-

ЦИНОЙ ИЗ ШТАММА ЛЕНИНГРАД-16 И ЖИВОЙ ПАРОТИТНОЙ ВАКЦИНОЙ ИЗ ШТАММА ЛЕНИНГРАД-3. 1. КОРЬ. Интраназаль-ный способ иммунизации предусматривает нанесение вакцины на слизистую оболочку полости носа, откуда часть ее может попадать на поверхность более глубоко расположенных отделов верхних дыхательных путей и в желудочно-кишечный тракт.

Обращение к данному способу введения вакцинных препаратов было обусловлено в первую очередь поиском путей снижения реактоген-ности прививок, а также появлением экспериментальных данных, свидетельствующих о том, что его применение способно обеспечить более высокую резистентность к заражению через дыхательные путп, чем подкожная иммунизация..

Попытки вакцинировать детей против кори непарентеральным путем предпринимаются уже сравнительно давно. Некоторым авторам удалось добиться высокого уровня сероконверсии и появления достаточно высоких титров антител в сыворотках детей различного возраста, привитых против кори аэрозольным и пнтраназальпым методами.

Несмотря на сообщения о результативности упомянутых методов иммунизации, они не были внедрены в практику. Очевидно, большие успехи парентеральной иммунизации в перзые годы ее применения создали впечатление, что поиски альтернативных путей вакцинации не являются первоочередной задачей.

Все же данная проблема постоянно оставалась на повестке ВОЗ, а в настоящее время она приобрела особую актуальность. Прежде всего, это связано с выполнением программы глобальной элиминации кори в мире, с появлением новой проблемы - опасности контаминации шприцев и переноса при массовой вакцинации вирусов ВИЧ п гепатитов В и С. Кроме безопасности, альтернативный метод интересен тем, что с его помощью должна быть достигнута дополнительная защита организма на уровне "входных ворот" - носоглотки, через которую обычно проникает дикий вирус корп.

Начать изучение конкретного метода пнтраназального введения коревой вакцины необходимо было на взрослых добровольцах, так как нужно было убедиться в отсутствии неожиданных реакций при использовании ЖКВ этим методом.

Таким образом, задачи первого этапа данного исследования сводились к определению реактогенности и антигенной активности коревой

вакцины из штамма Л-16 при однократном интраназальном введении взрослым людям.

Изучение реактогенных свойств ЖКВ у интрапазально ревакцпни-рованпых добровольцев показало, что частота общих и местных реакций среди привитых разными методами была практически идентичной. Введение ЖКВ интраназально в некоторых случаях вызывало появление признаков вакцинального процесса, но с быстрым их исчезновением. Во всех случаях вакцинальный процесс протекал доброкачественно, без побочных п аллергических реакций.

Таким образом, установлена весьма низкая реактогенность коревой вакцины при интраназальном введении взрослым добровольцам. Выраженность побочных реакций зависела от дозы препарата. Аппликация ЖКВ на поверхности респираторного тракта не приводила ни к каким, даже слабо выраженным воспалительным изменениям в легких.

Иммунологический эффект вакцинации оценивали по нарастанию титров специфических антител в сыворотках добровольцев. Эффект был не столько выражен, как у первично иммунизированных детей, вероятно, потому, что у большей части добровольцев в сыворотках до иммунизации содержались антитела в титре от 1:4 до 1:32 ( в РТГА ). При парентеральном введении вакцины число случаев повышения титров антигемагглютпнинов в 4 раза или более составило 60,0 % при интраназальном введении ЖКВ с 10 ООО ТЦД50 в 1 прививочной дозе - 33,0 %, а прп 20 000 ТЦДЪ0 -79,0 %. Суммируя результаты по 1-й и 2-й группам вакцинированных интраназально, установили, что до ревакцинации у 13 из 29 человек коревые антитела содержались в сыворотке в титре 1:4 - 1:8. На 14-й день после прививки ЖКВ таких человек осталось только трое. У всех тропх до вакцинации определялись следы антигемагглютпнинов, а после нее они появились в титре 1:8.

Кроме того, во всех группах добровольцев были установлены соотношения между числом сывороток с " низкими ", " средними " и " высокими " титрами. Во всех случаях отмечалось достоверное нарастание числа сывороток не только с низкими, но и со средними и высокими титрами после вакцинации. Изучение во всех трех группах привитых антигенной активности ЖКВ в РТГА показало, что 4-кратный и выше прирост титра антител у лиц с низким исходным уровнем антител наблюдался в 1-й группе у 60,0 %, во 2-й группе - у 77,8 % ревак-

цянпрованных п/н, в 3-й группе у 100,0 % ревакцшшрованных п/к. Исследование этих же сывороток в ИФА показало, что достоверный прирост (t > 3 ) у лиц, имеющих до ревакцинации антитела в низких титрах, отмечен в 1-й группе у 61,5 %, во 2-й - 50,0 %, а в 3-й группе - у 62,5 %, соответственно.

Следующим разделом наших исследований было изучение функциональной модуляции иеспецифической активности Т-лпмфоцитов на ФГА ( таблица 6 ). Изменение этого иммунологического показателя при коревой инфекции свидетельствует о снижении общей реактивности иммунной системы и о возможном развитии поствакцинальных осложнений. В наших исследованиях наиболее серьезные сдвиги отмечались в показателях PET на ФГА и, особенно, в группе ревакцинпро-ванных ЖКВ подкожно. Так, индекс стимуляции ( ИС ) лимфоцитов в РБТ в этой группе до прививки составил 227,0 ± 23,0, к 7-му дню он снизился до 73,0 ± 11,9, оставаясь достоверно ниже (t > 3 ) первоначального значения в течение 2 недель с постепенным его восстановлением к концу 2-го месяца. В группах лиц, ревакцинированных н/н, четко прослеживалась зависимость уровня бластной трансформации от дозы введенной вакцины. Если в 1-й группе добровольцев снижение ИС было незначительно и носило кратковременный характер, то в группе лиц, получивших ЖКВ с активностью 20 ООО ТЦД^О в одной прививочной дозе, показатель ИС к концу 2 недели стал в 2 раза ниже своего довакцинального значения.

Таким образом, наблюдавшееся снижение ИС в группе ревакцинпро-ванных п/к свидетельствует о наличии определенного фактора риска в случае присоединения в поствакцинальном периоде каких-либо ин-теркурентных заболеваний. Зарегистрированные во всех группах изменения были обратимы, носили транзиторный характер, однако их выраженность была различной.

Исследование клеточного иммунитета показало, что ИС во всех группах был невысок. Увеличение ИС в РБТ у ревакцинированных против кори после иммунизации было зарегистрировано уже к 7-му дню с пиком показателя на 14-й день после прившзкп. Особенно высок ИС лимфоцитов в этот период был у добровольцев 2-й группы, что, безусловно, связано с большим содержанием коревого вируса в одной прививочной дозе ЖКВ. К концу 1-го месяца наблюдения ИС в группах привитых снизился, оставаясь положительным до конца наблюдения (

2 месяца ).

Таблица 6. Динамика неспецифической (ФГА) и специфических ( вирусиндуцированная и антигениндуцированная супрессия) клеточных реакций у ревакциннрованных и/н и п/к ЖКВ из штамма Л-16.

Реак- Груп- ИС

ции па 0-дн. 7-дн. 14-дн. 30-дн. 60- дн.

РБТ 1.И/Н 189,1 162,1 185,0 191,3 188,2

(ФГА) 2.И/Н 213,4 124,9 117,2 207,8 207,8

З.П/К 227,0 73,4 116,6 165,2 219,4

4.Р1. 219,7 216,6 220,0 222,7 214,5

РБТ 1.И/Н 154,7 121,0 130,7 116,8 142,1

(анти- 2.И/Н 177,8 117,9 131,4 130,4 160,8

ген + З.П/К 155,2 146,8 131,0 127,8 161,0

ФГА) 4.Р1. 168,3 159,9 160,0 162,2 166,5

РБТ 1.И/Н 1,55 2,89 4,61 4,24 2,28

(ан- 2.И/Н 1,89 2,91 9,44 2,74 2,19

ген) З.П/К 1,60 2,83 4,69 3,87 2,06

4.Р1. 1,70 1,70 1,81 1,69 1,74

Образование секреторных антител имеет первостепенное значение при воздушно-капельных инфекциях. Оно наблюдалось лишь у добровольцев, привитых интраназально. Так, при оценке в РТГА, достоверный прирост антител в секретах отмечался у 60,0 % привитых 1-й группы и у 50,0 % - во 2-й группе. При исследовании этих же секретов в ИФА секреторный ^ А выявлен в 1-й группе у 80,0 % лиц, а во 2-й группе -100,0 %. У подкожно привитых ЖКВ выявление секреторных антител не наблюдалось. Это еще раз подтвердило перспективность интраназального метода ревакцинации, поскольку он обеспечивал дополнительную защиту людей и формировал этот фактор защиты на уровне " входных ворот ".

Таким образом, проведенные исследования позволили сделать вывод о перспективности использования и ряде преимуществ интраназального способа введения ЖКВ с целью ревакцинации. Так, введение

ЖКВ из штамма Л-16 пятраназально, как и в случае ее подкожного использования, приводило к формированию общего клеточного и общего гуморального иммунитета. При этом в случае и/'н ревакцинации формировалась защита на уровне " входных ворот ", что особенно важно в случае необходимости вакцинации и ревакцинации людей в очагах коревой пнфекцпи. Ревакцинация взрослых ЖКВ и/п и традиционным п/к способом приводила к некоторым обратимым сдвигам в иммунной системе, из которых наиболее выражены накопление антигенспепифи-ческнх клеток памяти и антпгенпндуцировапных супрессоров или а х предшественников на 2-4-й недели после прививки. Кроме того, ревакцинация против кори вызывала транзиторный Т-пммунодефпцит, но в случае и/н введения он носил кратковременный характер ( 1-2 недели ), что является безусловной предпосылкой иммунологической безопасности ЖКВ.

Следующим этапом работы явилось изучение пнтрапазального способа ревакцинации против корп детей 6-7 лет, подлежащих планово;; прививке в 1992-1995 гг.

Интраназально введенная коревая вакцина ( разных серий ) пе оказывала видимого побочного действия на 134 иммунизированных ребенка, и все дети оставались практически здоровыми па протяжении вссго срока наблюдения ( 30 дней). Подкожная ревакцинация 52 детей ЖКВ ( теми же сериями ) также не вызывала видимых побочных реакций.

Ни одного случая серьезной вакцинальной реакции у детей после прививки ЖКВ, введенной как интраназально, так и подкожно, в течение 6 месяцев зарегистрировано не было, отмечались лишь единичные случаи ОРЗ.

Изучение иммунного ответа на повторное введение ЖКВ и/н способом показало высокую иммунологическую эффективность ревакцинации. Среди 24 серонегативных детей, ревакцинированных и/н, антитела к коревому вирусу приобрели 100,0 %, что не отличалось от показателей в группе привитых п/к ( 100,0 % ). Не было различии в частоте сероконверсип и титрах антител у истинно негативных детей, не имевших накануне ревакцинации антител к 1 ГАЕ коревого антигена, и условно негативных детей, имевших антитела к 1 ГАЕ коревого антигена. Высокая эффективность и/н ревакцинации установлена и в отношении серопозптпвных лиц. На 30-й день после прививки у 134 детей 2-х и выше кратное нарастание титра антпгемагглютпнинов за-

регистрировано в 72,8 % случаев, в ИФА - в 85,0 % случаев. Иммунный ответ был наиболее выражен на фоне низкого уровня антител и закономерно снижался с повышением исходных титров.

Титрование сывороток 52 детей, получивших ЖКВ п/к, не позволило составить представление о преимуществе этого способа иммунизации перед интраназальным.

В 1992 - 1996 гг. мы использовали серии ЖКВ с разной активностью вакцинного штамма вируса кори Л-16 в одной прививочной дозе ( таблица 7 ). Если интенсивность вакцинальных реакций на прививку ЖКВ не коррелировала с количеством вводимого вируса, то общий уровень прироста антигемагглютининов в сыворотках привитых и/н колебался от 64,5 % до 100,0 % в РТГА и от 60,0 % до 100,0 % в ИФА.

Таблица 7. Результаты интраназальной и подкожной ревакцинации детей 6-7 лет ЖКВ из штамма Л-16.

Специф. Спо- Кол- Ср.геом.вел.титр.ан-л, в Ьод2

акт-сть соб во РТГА ИФА РТГА ИФА

ЖКВ( ) 0 дн. Одн. 30 дн. 30 дн.

3,3 и/н 32 3,0±0,3 4,8 ± 0,3 4,6 ± 0,3 7,9 ±0,4

п/к 10 3,1±0,3 4,8 ± 0,4 4,6±0,3 8,0 ± 0,3

3,5 и/н 15 2,8 ± 0,3 - 4,7 ±0,4 -

п/к 10 2,8 ± 0,3 - 5,2 ± 0,4 -

3,7 и/н 30 2,9 ± 0,4 - 4,1 ± 0,3 -

п/к 10 3,4 ± 0,4 - 4,0 ± 0,3 -

3,8 и/н 31 2,9 ± 0,2 4,9 ± 0,3 4,1 ± 0,3 8,1 ± 0,3

п/к 10 2,9 ± 0,3 4,7 ± 0,2 4,1 ± 0,3 8,0 ± 0,4

4,75 и/н 26 2,9 ± 0,3 4,9 ± 0,4 5,7 ± 0,3 8,3 ± 0,3

п/к 12 2,9± 0,3 4,9 ± 0,3 4,3 ± 0,2 7,8 ± 0,3

Интраназальная ревакцинация вызывала местное образование специфических антител у 72,9 %. Среди привитых п/к лишь у одного ребенка к концу 1-го месяца в носовых секретах определялись следы противокоревых иммуноглобулинов. Исследование назальных смывов показало, что максимальное образование секреторных антител приходится на 10 день после прививки, и, в основном, они представлены

^ А. Если до прививки специфические протпвокоревые иммуноглобулины были выявлены всего у 1 ребенка пз 47 обследованных, то уже к концу 10 дня они определялись в 65,0 % случаев при средней геометрической титра антител -4,5 1од2, к концу первого месяца титры снизились до 3,6 1од2.

Таким образом, интраназальная коревая ревакцинация детей и взрослых близка по иммунологической эффективности и реактогенностп к подкожной. Раннее появление в носоглотке коревых антител делает пнтраназальную иммунизацию методом выбора при экстренной профилактике кори в очагах коревой инфекции, так как защита слизистой оболочки носа, глотки, рта может оказаться вполне достаточной для прекращения распространения заболевания.

2.ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПАРОТИТ. Интраназальный способ введения вакцин прост, удобен, физиологичен. Успех вакцинопрофилактики как меры борьбы с возникновением и распространением инфекционных болезней в ряде случаев зависит не только от напряженности иммунитета, формирующегося у отдельных индивидуумов, но и от полноты охвата прививками угрожаемых контпнгентов, причем зачастую весьма значительных. В определенных эпидемических ситуациях помимо полноты охвата коллектива прививками, определяющим фактором эффективности вакцинопрофилактики является скорость осуществления прививочной кампании.

В этой связи следующей задачей исследования явилось апробация нового альтернативного способа иммунизации живой паротитной вакциной из штамма Ленпнград-3 с целью его использования для экстренной вакцинопрофилактики в очагах паротитной инфекции и при чрезвычайных ситуациях.

Изучение реактогенных свойств показало, что течение вакцинального процесса у привитых было доброкачественным, без осложнений, аллергических и побочных реакций.

Интраназальное введение ЖПВ, как и в случае подкожного, вызывало у привитых всех групп образование специфических антител и антигенспецпфических клеток памяти. В первую очередь в сыворотках привитых повышался уровень антител, определяемых в РТГА. К 14-му дню наблюдения 4-кратный прирост их уровня отмечался, соответственно, у 50,0 % ревакцинированных добровольцев 1-й группы, у 30,0 % добровольцев 2-й и 3-й групп. В дальнейшем достоверный прп-

рост титров наблюдался у 70,0-80,0 % вакцинированных всех групп, кроме группы плацебо.

Дпнамика уровня Еируснейтрализуюхцих и определяемых в ИФА антител была сходной при обоих методах введения вакцины,хотя различалась в зависимости от теста, Максимальные титры вируснейтрали-зующпх антптел наблюдались на 60-й день. Специфические антитела, выявляемые в ИФА, определялись у пршзитых первых трех групп уже к концу 1-й недели, что соответствовало нашим ранним исследованиям и было связано с более высокой чувствительностью данного метода. Прирост титра вирусспецифических антител у добровольцев, получивших плацебо, не наблюдался.

Таким образом, изучение динамики накопления вирусспецифических наротитных антител ( в РТГА, РН, ИФА ) не выявило преимуществ п/к способа введения по сравнению с и/н. В целом достоверный прирост уровня наротитных антптел наблюдался в 70,0-80,0 % случаев ( учитывая данные всех реакций ) после и/н введения ЖПВ. После введения такой же дозы ЖПВ п/к он наблюдался в 50,0-80,0 % случаев.

Известно, что устойчивость организма к вирусу эпидемического паротита складывается из взаимодействия общего ( системного ) и местного ( секреторного ) иммунитета. Вопрос о значении различных факторов местной защиты в проблеме коллективной устойчивости людей против эпидемического паротита очень важен.

Сравнительные исследования уровня специфических антител в носовых секретах показали, что до ревакцинации как в 1-й, так и во

2-й и 3-й группах специфические антитела в низких титрах ( 1:5 и 1:10 в ИФА ) присутствовали, соответственно у 20,0, 30,0 и 30,0 % добровольцев.

Данные таблицы 8 свидетельствуют, что в 1-й и 2-й группах привитых и/н динамика накопления специфических антител отличалась от аналогичных показателей у добровольцев, привитых п/к. Так, статистически достоверное повышение уровня секреторных антител у привитых в 1-й и 2-й группах отмечено уже к 7-14-му дню. В этот период у 80,0 % добровольцев из 1-й группы и у 90,0 % - из 2-й группы произошел 4-кратный и более прирост титра секреторных антител, а в

3-й группе добровольцев увеличение содержания специфических антител наблюдалось позже. Среди добровольцев, привитых п/к, к концу 2-й недели отмечался достоверный прирост титра вирусспецифических

антптел у 50,0 %, к концу наблюдения ( 2 месяца ) - у 70,0 %. Динамика накопления секреторных антител у добровольцев, не имеющих их до ревакцинации, была примерно одинакова во всех группах. Так, у привитых и/н (1-я и 2-я группы) антитела стали появляться уже с первых дней после иммунизации, достигнув максимальных значений к концу 2-й недели у 87,5 % лиц из 1-й группы и у 100,0 % - из 2-й группы. Накопление секреторных ИФА-антител у привитых и/к шло медленнее, максимум регистрировался только к концу 2-го месяца. Таким образом, введение ЖПВ п/н позволяло сформировать местную защиту на уровне " входных ворот " уже в 1-ю неделю после прививки и этим выгодно отличалось от п/к способа введения препарата.

Важным разделом наших исследований явилось изучение модуляции способности Т-лимфоцитов к активации ФГА у привитых разными методами. Известно, что паротитная инфекция умеренно снижает функциональную активность Т-лимфоцитов на ФГА. В клинике неоднократно было показано, что это снижение сопряжено с изменением общей реактивности иммунной системы и развитием осложнений разной частоты и интенсивности.

Таблица 8. Динамика образования антител в секретах у добровольцев, ревакцинированных ЖПВ из штамма Л-3, при разных способах введения (п=10).

Группа Чис.серонег. лиц до ревакцинации Кол-во проб в % с 4-крат. приростом ан-л (серонегат./обш.кол-во)

7 дн. 14 дн. 30 дн. 60 дн.

1-я 8 75,0/80,0 87,5/70,0 87,5/70,0 87,5/70,0

2-я 7 57,1/30,0 100,0/40,0 85,7/80,0 71,4/70,0

3-я 7 57,1/30,0 57,1/50,0 57,1/60,0 85,7/70,0

Согласно полученным данным, и/н введение ЖПВ лишь незначительно влияло на функциональную активность ФГА-стимулпрованных Т-лимфоцптов. Так, в 1-й группе привитых и/н индекс стимуляции ( ИС ) лимфоцитов в РБТ до прививки составил 263 ± 41, и весь период наблюдения достоверного снижения этого показателя не отмечалось. Интраназальное введение ЖПВ с повышением количества вируса эпидемического паротита в прививочной дозе вызывало достоверное снижение ИС на 30-й день наблюдения. Так, если ИС во 2-й группе до

прививки составил 298 ± 23, то к концу 1-го месяца он снизился в 1,3 раза. Таким образом, в группах людей, ревакцинированных и/н, четко прослеживалась зависимость уровня бластпой трансформации лимфоцитов от дозы введенной вакцины. В то же время введение ЖПВ и/к вызывало наиболее заметные изменения в показателях РБТ. Так, уже к 14-му дню после прививки ИС лимфоцитов снизился в 1,4 раза, оставаясь достоверно ниже своего первоначального значения ( * > 3 ) в течение всего 1-го месяца наблюдения, с постепенным его восстановлением к концу 2-го месяца. Необходимо отметить, что хотя зарегистрированные изменения ИС в РБТ на ФГА в 3-й группе добровольцев были обратимы и носили временный характер, но они были более выражены по сравнению с аналогичными показателями у добровольцев 1-й группы. В группе лиц, получивших плацебо, снижение функциональной активности Т-лимфоцитов не наблюдалось.

Изучение формирования клеток памяти, отвечающих размножением на воздействие вируса эпидемического паротита, показало, что при использовании специфического паротитного антигена ИС во всех трех группах привитых составил до прививки 2,17 ± 0,84, 1,56 ± 0,58 и 1,91 ±0,74, соответственно. Достоверный рост ИС в РБТ у ревакцинированных был зарегистрирован к концу 2-й недели ( < > 2, £ > 3, t > 3, соответственно, по группам ). Максимальный прирост ИС отмечался в 1-й и 3-й группах к концу 1-го месяца наблюдения ( 4,63 ± 2,42 и 5,59 ± 1,9, соответственно ), во 2-й группе максимальный ИС регистрировался к концу 2-й недели ( 4,87 ± 3,9 ). К концу наблюдения ( 2 месяца ) ИС в РБТ во всех трех группах несколько снизился, но оставался положительным ( 3,92 ± 1,54, 3,51 ±2,34 и 3,42 ± 0,98, соответственно ). В контрольной группе появление клеток памяти не отмечалось.

Таким образом, проведенные исследования позволили сделать вывод об иммунологической безопасности и перспективности использования нового способа введения ЖПВ из штамма Л-3 интраназально. Ревакцинация ЖПВ и/н, как и в случае ее и/к использования, приводила к формированию специфического клеточного, общего и местного специфического гуморального иммунитета. Однако, только в случае ин-траназальной ревакцинации наблюдалось раннее образование защиты на уровне " входных ворот ", что явилось еще одним важным преимуществом и/н метода в случае проведения экстренных мероприятий в

очагах паротитной инфекции. ВЫВОДЫ.

1. Апробирована живая коревая вакцина ( ЖКВ ) из генетически однородного штамма Москва-5. Установлена низкая реактогенность, высокая антигенная активность. Штамм Москва-5 рекомендован как второй ( запасной ) вакцинный вариант для производства живой коревой вакцины.

2. Изучены живая коревая вакцина из штамма Ленпнград-16 ( Л-16 ) и живая паротитная вакцина ( ЖПВ ) из штамма Ленинград-3 (Л-3 ) с новым стабилизатором ЛС-18. Показаны их соответствия требованиям ВОЗ. Выявлена низкая реактогенность, высокая иммунологическая эффективность. ЖКВ И ЖПВ с ЛС-18 внедрены в практику здравоохранения России.

3. Исследована ассоциированная паротитно-коревая вакцина ( АПКВ ) из штаммов Л-3 и Л-16. Показана низкая реактогенность, высокая антигенная активность и безвредность дивакцины.

4. Впервые показана эффективность и иммунологическая безопасность интраназального способа вакцинопрофилактики кори и эпидемического паротита. Доказана перспективность и ряд преимуществ использования альтернативного способа введения ЖКВ п ЖПВ с целью ревакцинации и экстренной профилактики в очагах кори и эпидемического паротита.

5. Разработана комплексная система иммунологического мониторинга по выявлению неспецифического и специфического клеточного звена иммунного реагирования привитых ЖКВ и ЖПВ. Показано, что одним из наиболее информативных тестов адекватной оценки иммунологической активности и эффективности коревого и паротитного препаратов является новый модифицированный вариант метода реакции бластной трансформации лимфоцитов.

6. Впервые отработана новая рациональная схема применения иммунологических методов при проведении вирусологических и сероэпиде-миологических исследований в очагах коревой и паротитной инфекций. Некоторые технические преимущества ИФА ( визуальный и инструментальный учет реакции, более высокая чувствительность, возможность проведения ранней диагностики и др.) выдвигают его на первое место среди ускоренных методов диагностики.

7. Впервые, с привлечением клеточных методов исследования, они-

сан эффект воздействия диких штаммов вирусов кори и эппд. паротита,, циркулирующих в России, на человеческий организм. Иммуноло-гически охарактеризована бессимптомная форма зшщ. паротита. Выявлен и установлен постреабилптащганный период для детей, бывших в очагах коревой п паротптной инфекций.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ В СЛЕДУЮЩИХ РАБОТАХ.

1. Результаты массовой вакцпнопрофилактики кори в СССР и анализ ее эффективности./ О.Г. Имама лиев, О.Г. Анджапаридзе, С.С. Уна-нов, М.Ф. Долгополова, Н.В. Юлшнова. - Советско-германский симпозиум, Донецк. 1981, М., 1981, стр. 8-10.

2. Состояние гуморального иммунитета к кори, паротиту и краснухи у детей Краснодарского края./' О.Г. Анджапаридзе, С.С. Унанов, E.H. Левченко, Н.В.Юминова, Е.В. Стриханова. - I конф. вирусологов Казахстана, V - 1982, стр. 5-7.

3. К оценке противовирусных вакцин по иммунологическим тестам./ С.С. Унанов, Н.В. Юминова. - 1 конф. вирусологов Казахстана, V- 1982, стр. 258-261.

4. Клинико-лабораторные и сероэпидемиологическпе исследования привитых ЖКВ из генетически однородного штамма Москва-5./ С.С. Унанов, Н.В. Юминова, А.Л. Пасечник, А.Ф. Соколова, Н.М. Гордиен-ко, В.П. Краснова. - ЖМЭИ, 1985, N9, стр. 49-54.

5. Результаты иммунизации против эпидемического паротита в г. Воронеже./ Л.Ф. Шарппова, С.С. Унанов, Н.В. Юминова. - Тез. Всерос. съезда эпидемиологов - инфекционистов. Х-1985, стр. 156-157.

6. Сероэпидемиологические исследования ЖКВ из генетически однородного штамма Москва-5./ С.С. Унанов, Н.В. Юминова,Т.Ф. Писарева, Л.И. Голобокова. - Тез. Всероссийского съезда эпидемиологов-инфекционистов. Х-1985, стр. 154-155.

7. Иммунологические реакции и их значение в оценке качества противовирусных вакцин./ Н.В. Юминова, С.С. Унанов - Сб.: Профилактика вирусных инфекций в свете современных достижений иммунологии, М., 1986, стр. 57-76.

8. Исследование эффективности живой ассоциированной паротитно-коревой вакцины./ С.С. Унанов, Ю.Н. Корж, В.М. Дорофеев, Н.В. Юминова, Л.А. Мышляева, Т.И. Калцова, В.А. Макаров, С.И. Саввин. - Ж.Вопр.вирусол., 1987, N6, стр.715-718.

9.Сравнительная чувствительность различных серологических реакций у детей в очагах коревой инфекции./ В.П. Краснова, С.С. Уна-нов, Н.В. Юштова. - В сб.: Иммунопрофилактика детс. инфекций. Каз. НИИ эпидемиологии микробиологии и пнфекц. болезней, Алма-Ата, 1988, стр. 62-65.

10. Изучение безвредности, реактогенности и антигенной активности ассоциированной паротитно-коревой вакцины из штаммов JT-3 и Л-16./ Н.В. Юмпнова, Л.А. Мышляева, Л.Ф. Мамулян. - В сб.: Детские инфекции. Киевского НИИ эпидемиологии и инф. болезней им. Громашевского, 1989, стр. 31-35.

11. Изучение иммунного статуса детей в очагах коревой инфекции методом ИФА./ Н.В. Юмпнова, С.С. Унанов, В.П. Краснова, O.A. Ма-ланчева, Л.Г. Ковалева, В.А. Ляшенко. - ЖМЭИ, N 8, 1990, стр. 35-38.

12. Development of rapid microtiter particle agglution test for the detection on anti-measles antibodies./ C.K. Александер, Ю.В. Лукин, Л.М. Фпдлер, Н.В. Юминова, В.П. Зубов. - Международный конгресс Европ. об. против вирус, заболеваний, Страсбург, Август, 1991, стр. 25-29.

13. Проверка безопасности, реактогенности и антигенных свойств живой паротптной термостабильной вакцины./ Н.В. Юмпнова, В.А. Ляшенко, В.П. Краснова, В.Н. Кривенкова, М.Ю. Голяженкова, С.С. Унанов - Ж. Вопр.вирусол., 1991, N4, стр. 310-312.

14. Сравнительная характеристика различных методов выявления антител к вирусу паротита./ Е.В. Богдашпна, Н.Б. Альбицкая, Н.В. Юмпнова, В.П. Краснова. - Ж. Вопр.вирусол., 1991, N4, стр. 339-341.

15. Иммуноферментная тест-система на основе вируса кори, полученного при культивировании клеток на микроносителях цито-лар./ Ф.Г. Нагиева, Н.И. Краснова, В.Г. Никулина, Н.В. Юминова. - Ж.Вопр.вирусол., 1991, N4, стр. 334-336.

16. Исследование иммунизирующего и пммуномодулирующего действия живой паротитной вакцины с новым стабилизатором./ В.А. Ляшенко, Н.В. Юминова. - В сб.: Науч.тр. Ленинградского НИИ детских инфекций " Поствакцинальные осложнения: патогенез, профилактика, лечение". Л., 19-21 ноября 1991., М., 1991, стр. 64.

17. Иммунологические реакции и их значение в оценке модулирующего действия живой коревой вакцины у ревакцинированных./ Н.В. Юминова, В.П. Краснова, В.А. Ляшенко. - Там лее, стр. 136.

18. Определение титров противокоревых антител в реакции латекс-агглютинащш. / С.К. Александер, Л.М. Фидлер, Ю.В. Лукин, Н.В. Юмппова, В.П. Краснова, - Ж. Вопр.вирусол., 1992, N 5-6, стр. 259261.

19. История п перспективы ЯЕтраназальнои вакцинации против кори./ В.А. Ляшенко, Н.В. Юминоза, Е.П. Краснова, С.К. Александер. -В сб.: Докладов НИИ ВП РАМН "Актуальные проблемы диагностики и профилактики кори. зшщ. паротита п краснухи", М., 1992, стр. 9.

20. Иммунологическая эффективность и безопасность ревакцинации против кори. / В.П. Краснова, Н.В. Юминова. - Там же, стр. 13.

21. Интраназальная ревакцинация против кори: гуморальный и клеточный иммунитет./ Н.В. Юминова, В.П. Краснова, В.А. Ляшенко. -Там же, стр. 10-11.

22. Метод латекс-агглютинации для титрования антител к вирусу кори./ С.К. Александер, Н.В. Юминова, В.П. Краснова,В.А. Ляшенко.

- Там же, стр. 28.

23. Опыт интраназальной ревакцинации живой коревой вакцины из штамма Л-16. / В.А. Ляшенко, Н.В. Юминова, В.П. Краснова. - Ж. Вопр.вирусол., 1992, N2, стр. 107-109.

24. Прогнозирование эффекта вакцинации против эпидемического паротита по морфологическим и функциональным особенностям лимфоцитов детей, подлежащих вакцинации./ В.А. Ляшенко, Н.В. Юминова, В.П. Краснова. - Ж. Иммунология, 1993, Ш,стр. 36-40.

25. Специфическая активность и иммунологическая безопасность интраназального способа ревакцинации живой коревой вакциной из штамма Ленинград-16./ Н.В. Юминова, В.П. Краснова, В.А. Ляшенко.

- Ж. Вопр.вирусол., 1993, N3, стр. 111-113.

26. Иммунологические показатели крови при пнтраназальном способе ревакцинации ЖКВ./ Н.В. Юминова, В.П. Краснова,В.А. Ляшенко.

- Ж.Вопр.впрусол., 1993, N4, стр. 182-184.

27. Изучение гуморального и клеточного иммунитета к кори и паротиту у подростков./ В.П. Краснова, Н.В. Юминова, Н.В. Глазкова.

- В сб.: " Акт. пр. пнфек.патологии ч.1, С.-Пет., 1993, стр. 132.

28. Опыт интраназальной вакцинации добровольцев против паротита./ В.А. Ляшенко, Н.В. Юминова, В.П. Краснова. - Там же, стр. 141.

Текст научной работыДиссертация по биологии, доктора биологических наук, Юминова, Надежда Васильевна, Москва

<*зидиум ВЛ;ч присудил ученую степень Д OK ) :Л

- __. /¿г^У«^'"*. . it'lj

Начальник упрааленжд ВАК Poccsn

/

J " 5>

/ г (■ /

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВИРУСНЫХ ПРЕПАРАТОВ

На правах рукописи УДК 578.4(578:616-036.22)

ЮМИНОВА НАДЕЖДА ВАСИЛЬЕВНА

НАУЧНЫЕ ОСНОВЫ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ КОРИ И ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПАРОТИТА

03.00.06 - Вирусология

диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук

Научный консультант: Академик РАМН, профессор О.Г. Анджапаридзе

МОСКВА - 1998 г.

А' ■и"

Содержание

ВВЕДЕНИЕ .........................................-....... 4

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ........,............. 13

ГЛАВА I. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА КОРИ ...... 13

ГЛАВА II. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПАРОТИТА ................................... 44

ГЛАВА III. ПУТИ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ВАК-ЦИНОПРОФИЛАКТИКИ ПАРАМИКСОВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ................................................ 67

ЧАСТЬ II. С О Б С ТВ ЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ...... 81

ГЛАВА IV. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ............... 81

ГЛАВА V. РАЗРАБОТКА НОВЫХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ И БЕЗОПАСНОСТИ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМИКСОПРЕПАРАТОВ. ............•••••• 92

ГЛАВА VI. УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫЕ ПРЕПАРАТЫ -ЖИВАЯ КОРЕВАЯ И ПАРОТИТНАЯ ВАКЦИНЫ ............................................-...............106

ГЛАВА VII. ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ДИКИХ

ШТАММОВ ВИРУСА КОРИ И ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПАРОТИТА ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В РОССИИ ......155

ГЛАВА VIII. ИНТРАНАЗАЛЬНАЯ РЕВАКЦИНАЦИЯ ЖИВОЙ КОРЕВОЙ ВАКЦИНОЙ ИЗ ШТАММА ЛЕНИНГРАД-16 И ЖИВОЙ ПАРОТИТНОЙ ВАКЦИНОЙ ИЗ ШТАММА ЛЕНИНГРАД-3....................195

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ............................................224

ВЫВОДЫ ...................................................265

ЛИТЕРАТУРА

267

1 ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Открытие принципа активной иммунизации дало человечеству чрезвычайно сильное оружие борьбы с инфекционными болезнями, включая и болезни вирусной этиологии.

В течение многих десятилетий главной мерой профилактики ряда инфекций является специфическая вакцинопрофилактика, поэтому число усовершенствованных препаратов постоянно растет.

До начала проведения массовой вакцинации, корь и эпидемический паротит считались очень тяжелыми заболеваниями, они были распространены повсеместно, за исключением удаленных и островных популяций. Во всех странах мира крупные вспышки кори и эпидемического паротита происходили ежегодно, в сельских районах они возникали реже, корь - через 2-3 года, а эпидемический паротит - через 4-5 лет[18, 280] .В раннем возрасте этими парамиксовирусными инфекциями заражался почти каждый ребенок.

После того, как в США, а затем в других странах ( в бывшем СССР в 1967 г. ) началась проводиться массовая вакцинация против кори, заболеваемость ею резко сократилась. Так, в бывшем СССР в 8-16 раз [123], в США в 99 раз [161]. Массовая вакцинация против эпидемического паротита, начавшаяся в нашей стране в 1976 и 1977 гг. и возобновившаяся в 1981 г., снизила заболеваемость в 4-16 раз, по сравнению с минимальными показателями довакцинального периода [124].

Успехи вакцинопрофилактики были неоспоримы. Однако, складывающуюся в последнее десятилетие эпидемиологическую ситуацию по кори и эпидемическому паротиту однозначно оценить было нельзя. С одной стороны наблюдалось снижение заболеваемости, с другой - рост

серонегативных людей среди ранее привитых, отмечалось "повзросле-ние" кори и эпидемического паротита и в ряде случаев утяжеление клинических проявлений болезни, увеличивалось число серонегативных лиц среди беременных женщин и как следствие этого рождались неиммунные к кори и эпидемическому паротиту дети, что в свою очередь сказывалось на проценте детской смертности в раннем возрасте [23, 59]. Тенденция роста заболеваемости корью в начале 80-х годов была так ярко выражена, что привела к введению во многих странах мира, в том числе и в бывшем СССР в 1986 г., повторных прививок [84,113].Заболеваемость корью снизилась, но не надолго [45,125]. Практика последних лет показала, что рост заболеваемости корью в России с 16 на 100 тыс. детей в 1990 г. до 95 на 100 тыс. в 1993 г. нельзя объяснить только социальными переменами последних лет. Накопление значительной прослойки невакцинированных людей происходило в течение всего последнего десятилетия. В настоящее время очевидно, что рост заболеваемости корью и эпид. паротитом был связан не только с низкой привитостью населения, нарушениями в хранении, транспортировке вакцин. Существовало и ряд других не менее важных причин, устранение которых следовало вести в следующих направлениях. Во-первых, было необходимо совершенствование существующих вакцин. Прежде всего - применение термостабильных вариантов коревой и паротитной вакцин, улучшение качества вакцинного вируса - использование генетически однородного варианта. Во-вторых, внедрение в практику здравоохранения нового, более физиологичного пути введения коревой и паротитной вакцин и, в-третьих, их ассоциированного использования. В-четвертых, известно, что любая вакцинация помимо развития специфического иммунного ответа соцровождается достаточ-

но глубокой перестройкой иммунной системы, такой как появление повышенной чувствительности к заражению гетерологичными возбуди-

и ' О __и

телями бактериальной, вируснои и грибковои природы и повышенной чувствительностью к отдаленной встрече с гомологичным инфекционным агентом, развитием аллергических и аутоиммунных состояний в период вакцинации и после нее [78].

В последние годы стало известно, что вакцинация живыми коревой и паротитной вакцинами приводит к количественным изменениям соотношений, функций и взаимодействий между иммунокомпетентными клетками. Эти изменения вызывают формирование временного имму-нодепрессивного состояния, модулируют иммунный ответ вакцинированных по отношению к другим инфекционным агентам и появлению аллергии [241].

Необходимость всестороннего изучения специфического и неспецифического клеточного реагирования на вакцинный препарат стала очевидна особенно сейчас, в условиях сниженной иммунореактивности детского организма на фоне ухудшения общей экологической обстановки как у нас в стране, так и во всем мире. Существующий в настоящее время набор иммунологических методов огромен, но его использование в России до сих пор не носит системного характера. Чаще всего испытания проходят на разных моделях, в разных условиях и полученные результаты оказываются мало сопоставимыми, а подчас и противоречивыми. В этой связи, проведение исследований по адекватной оценке иммунной системы людей, вакцинируемых парамиксовирусными препаратами, а также людей, находящихся в очагах этих инфекций имеет большое теоретическое и практическое значение. Полученные данные позволят не только по новому рассмотреть проблему формирования

поствакцинального иммунитета к кори и эпидемическому паротиту, понять причины невосприимчивости организма к этим инфекциям, но и по другому взглянуть на проблему совершенствования вакцинопро-филактики.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Основная цель настоящей работы состояла в поиске дальнейших путей совершенствования вакцин и методов вакцино-профилактики кори и эпидемического паротита, посредством разработки адекватных критериев оценки иммунологической эффективности и иммунологической безопасности существующих и усовершенствованных коревой и паротитной вакцин, новых способов их аппликации, а также в углубленном изучении ряда иммунологических реакций, индуцированных у привитых и ревакцинированных этими препаратами.

В соответствии с поставленной целью в задачи работы входило:

1. Разработать систему иммунологического мониторинга при апробации живой коревой и паротитной вакцин и их усовершенствованных вариантов ( с новым термостабилизатором ЛС-18, с генетически однородным штаммом вируса кори МОСКВА-5, ассоциированный вариант паротитно-коревой вакцины. )

2. Изучить характер, длительность и диапазон специфических клеточных и гуморальных ( общих и местных ) реакций при вакцинации и естественной циркуляции диких штаммов вирусов кори и эпидемического паротита.

3. Разработать микромодификацию метода реакции бластной трансформации лимфоцитов для определения функционального специфического и неспецифического состояния Т- и В-систем иммунитета людей, привитых парамиксовирусными вакцинами и больных

корью и эпидемическим паротитом.

4. Разработать простые, доступные для широкого круга практических вирусологических лабораторий методы ранней дифференциальной диагностики коревой и паротитной инфекций и оценки длительности и напряженности поствакцинального иммунитета.

5. Оценить реактогенность, антигенную активность, иммунологическую эффективность и безопасность живых коревой и паротитной вакцин,введенных интраназально с целью ревакцинации.

6. Установить и дать иммунологическую оценку критериям защищенности от заболевания корью и эпидемическим паротитом отдельных лиц и отдельных коллективов в современных условиях.

7. На основании всестороннего и комплексного изучения особенностей коревой и паротитной инфекций в современных условиях выяснить пути возможного повышения эффективности вакцинации против кори и эпидемического паротита.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Проведенное экспериментальное исследование впервые позволило оценить реактогенность, антигенную активность, эпидемиологическую эффективность, иммунологическую безопасность термостабильных вариантов живых коревой и паротитной вакцин с новым стабилизатором ЛС-18 и иммунологическую эффективность ревакцинации термостабильной живой коревой вакциной. Апробированы коревая вакцина с новым генетически однородным штаммом вируса кори МОСКВА-5 и ассоциированная паротитно-коревая "вакцина ( АПКВ ). Определена реактогенность, иммунологическая эффективность и иммунологическая безопасность интраназально

введенной живой коревой вакцины ( ЖКВ ) из штамма ЛЕНИНГРАД-16 на взрослых и детях при ревакцинации и живой паротитной вакцины ( ЖПВ ) из штамма ЛЕНИНГРАД-3 на взрослых людях. Впервые была показана перспективность данного способа введения вакцины при крупномасштабной ревакцинации против кори.

Показано, что невосприимчивость к парамиксовирусным инфекциям это многофакторное явление, зависящее как от состояния клеточного, так и гуморального и особенно местного звена специфического иммунитета. Впервые дана оценка роли и влияния диких вирусов кори и эпидемического паротита на адаптационные возможности иммунной системы организма привитых и переболевших в условиях прямого, постоянного воздействия на нее парамиксовирусов.

Впервые апробирова и научно обоснована система иммунологического мониторинга при испытании усовершенствованных коревой и паротитной вакцин, обеспечивающая оценку их иммунологической безопасности и иммунологической эффективности.

Отработаны условия постановки реакции бластной трансформации лимфоцитов, реакции ингибирования нейраминидазной активности противопаротитных антител. Качественно модифицирован непрямой метод флюоресцирующих противокоревых антител. Использование данных методов позволило впервые получить адекватную характеристику иммунологического воздействия диких циркулирующих вирусов, а также коревой и паротитной вакцин на человека, выявить и охарактеризовать важный реабилитационный постпрививочный период.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

В строго контролируемых шифрованных эпидемиологических на-

блюдениях установлено, что живая коревая вакцина из генетически однородного штамма Москва-5, отвечает требованиям, предъявляемым к вакцинным препаратам. Результаты исследований легли в основу Фармакопейной статьи - " Вакцина коревая культуральная живая сухая" ( НТД на производство ), утвержденной 01.12.1994 г.

Испытания термостабильных вариантов живых коревой и паротит-ной вакцин с новым стабилизатором ЛС-18 позволили установить, что изученные вакцины отвечают требованиям ВОЗ, предъявляемым к вакцинным препаратам. Полученные результаты легли в основу нормативно-технических документации на производство живой коревой и живой паротитной вакцин с новым стабилизатором ЛС-18 и в Фармакопейные статьи - " Вакцина коревая культуральная живая сухая " и " Вакцина паротитная культуральная живая сухая ", утвержденная 20.02.1996 г.

Результаты работы нашли отражение в следующих документах:

Методические рекомендации: " Использование модифицированного радиометрического микроварианта реакции бластной трансформации лимфоцитов в исследованиях клеточного поствакцинального иммунитета ", ГУКИ МЗ СССР,Ыо 28-6/3 от 28.11.1983 г.

Методические рекомендации: " Реакция ингибирования нейрамини-дазной активности для определения антител у переболевших и привитых паротитной вакциной ", Ученый Совет НИИ ВП РАМН, 12.11.1987 г.

Авторское свидетельство: " Штамм культивируемых клеток человека для выявления антител к вирусу кори ", N0 1428765 от 08.06.1988 г.

Авторское свидетельство: " Штамм культивируемых клеток челове-

и

ка, используемый для выявления антител к вирусу кори ", N0 1433978 от 01.07.1988 г.

Результаты исследований отражены в 57 печатных работах. Работа выполнена в лаборатории детских вирусных инфекций НИИ вирусных препаратов РАМН, заведующий лабораторией - доктор медицинских наук, профессор В.А. ЛЯШЕНКО.

Автор выражает сердечную благодарность своему первому учителю

- доктору медицинских наук, профессору С.С.УНАНОВУ , научному консультанту - академику РАМН О.Г АНДЖАПАРИДЗЕ заведующему лаборатории детских вирусных инфекций НИИ ВП доктору медицинских наук, профессору ВА.ЛЯШЕНКО, старшему научному сотруднику лаборатории детских вирусных инфекций кандидату медицинских наук В.П. КРАСНОВОЙ, сотрудникам лаборатории детских вирусных инфекций Т.Н.ШЕВЦОВОЙ, Т.И.БАТОВОЙ,

В.М. АЛЕКСАНДРОВОЙ, И.М.СЕРГИЕНКО. 1 Л.М.КАРЬКОВОИ . врачу-эпидемиологу СЭС ГУВД г.Москвы Н.В. ГЛАЗКОВОЙ, заведующей эпидемиологическим отделом Центра сан.-эпид.надзора Юго-восточного округа г.Москвы Л.Н. ЛЕЖНЕВОЙ.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА

КОРИ.

Во многих странах мира, корь занимает ведущее место в общей инфекционной заболеваемости населения. Ежегодно в мире болеют корью более 45 млн и умирает более 1 млн детей в основном младшего возраста [206]. В некоторых развивающихся странах летальность при этой инфекции в отдельные годы достигала 10-32 % [206]. Корь является большой и трудной проблемой не только для многих стран Африки, Азии и Латинской Америки, но и для высокоразвитых стран в связи с тем, что перенесение этого заболевания подрывает здоровье человека, вызывает серьезные осложнения и открывает путь в организме другим инфекциям [208].

На совещании Международной группы экспертов по кори в октябре 1993 г. и на совещании ВОЗ по кори в 1994 г. [208, 317] был сделан вывод, что для полной ликвидации заболеваемости корью в отдельных странах с последующим глобальным искоренением кори необходима новая стратегия вакцинации, включающая дополнительные кампании по массовой вакцинации всех детей независимо от их предыдущего вакцинального статуса, при постоянном проведении обычной вакцинации против кори всех вновь родившихся детей. Таким образом, единственно радикальным мероприятием в борьбе с корью является активная иммунизация восприимчивого к этой инфекции населения.

Первые попытки выяснить природу возбудителя кори предпринял Ноше в 1759 г. [107].Он внес здоровым детям скарификационным мето-

дом кровь больных корью. Через определенный период все дети заболели корью. В 1911 г. Anderson и Goldberger опубликовали материалы, впервые свидетельствующие о вирусной природе возбудителя.

В 1954 г. J.F.Enders и T.C.Peebls впервые выделили штамм вируса кори на первично трипсинизированных культурах клеток почек обезьян и эмбриона человека [201]. Эта дата стала началом активной и плодотворной работы по изучению вируса кори, его природы, биологической характеристики и успешной разработки методов активной профилактики.

Корь является наиболее распространенным и повсеместно встречающимся заболеванием. Восприимчивость к кори всеобщая. Корь высоко контагиозное заболевание, заразительность больного корью наиболее высока в продромальный период ( до появления сыпи ), когда диагноз еще не очевиден [35].

Существование отдельных географических пунктов, где на протяжении жизни одного или нескольких поколений не регистрировались случаи заболевания обусловлено исключительно отсутствием заноса инфекции. В таких "девственных зонах" географически изолированных, расположенных вдалеке от интенсивных путей общения людей, при первом появлении источника инфекции возникают грозные эпидемии с чрезвычайной быстротой охватывающие все население, независимо от возраста.

История эпидемиологии сохранила многочисленные примеры таких эпидемий, поражающих своим размахом и последствиями: Глан