Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Разработать технологию трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Разработать технологию трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве"

аЗ

г» Я л Ч

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах рукописи УДК. 612.646.02

Абуов Аптынбек Галымгереевич

. РАЗРАБОТАТЬ ТЕХНОЛОГИЮ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ В МЯСНОМ СКОТОВОДСТВЕ • ■

03,00.13 - физиология человека и »квотных

АВТОР Е Ф Е PAT

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровины Московской области 1992

Вабота выношена в Отделе трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства г лаборатория трансплантации эмбрионов Западно-Казахстанского СХЙ..

Научные рувоводиг&ля: доктор биологических наук,

профессор Е.Й. Сергеев

кандидат сельскохозяйственных наук,

A.З.Заяуллин

Сфацаальнне оппоненты: доктор биологических наук,

профессор И.Я.Шахов

кандидат биологических наук

B.В.Ильтакинов

Ведущее учреждение: БШО по племенному делу

в зивотаоводстзе

Защита диссертации состоится " " ИЬО У Л Х9Э2 г.

в " ЗЛ? часов, на заседании специализированного Совета Д020.16.02 при Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012, Московская обл., Подольский р-н, пос. Дубровины.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " " МАЯ 1992 г.

Ученый секретарь сдецхалазированного Совета, кандидат биологических наук

И.И.Шшгин

- 2 -

I. ОБЩАЯ ХАРШЕБЮТИКА РАБОТЫ

'Актуальность темы. Разрешение мясной проблемы должно осуществляться как путем увеличения численности поголовья скота и создания прочной кормовой базы, так и совершенствованием селекционной работы, направленной на максимальное использование их генетического потенциала. Б решений згой задачи большое значение имеет шароков использование ввдаищхся животных, потомки которые могли бы иметь хедаеыое влияние на больше популяции племенного и полъзовательного скота. Трансплантации эмбрионов в этой проблеме отведена роль метода, который позволяет получать максимальное число зародышей от выдающихся матерей л дальнейшая пересадка их менее деннцм животным в стаде.

Этот метод открывает большие возможности как в молочной, так л специализированном мясном скотоводстве, имеющий рад своих физиологических, развздеаческих а технологических особенностей.

Задачи практического применения трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве сводятся к двузл основным направлениям: получение генетически денных быков-лроизводителей от выдавшихся ' быков и матерей, обеспечиваниях высокие показатели энергии роста, а такке для получения дво2невых отелов.

. Несмотря на значительней прогресс, досглгнугнй при использований метода в молочном скотоводстве, технология трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве еще на разработана и требует всестороннего изучения.

Цель и задачи исследований. Цель исследований заключалась в усовершенствовании и разработке технологий трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве в условиях степной зоны Казахстана.

В связи с этим для решная была поставлена следующие задо

- определить критерии отбора мясных коров-доноров эмбрионог на основе племенной ценности, продуктивности, воспроизводитольн способности а физиологического состояния;

- изучить эффективность гормонального вызывания суперовуляций у мясных коров-доноров с использованием различных гипофазар еых гонадотропных препаратов и выявить эффективность различных способов синхронизации охоты у коров-доноров и реципиентов;

- выявить влияние различных экзогенных факторов на эффективность суперозуяяций а выход нормальных эмбрионов. Определить крг ность, режим а способа осеменения мясных коров-доноров с суперовуляцией;

- испытать и усовершенствовать технологию нехирургического и влечения и пересадки эмбрионов в условиях отгонного пастбищного содержания.

Научная новизна исследований состоит в определении аффективных критериев отбора мясных коров для использования в качестве доноров эмбрионов, а такке в изучении влияния различных факторов на результаты трансплантации.

Практическое значение тэаботц заключается в разраоотке методов целенаправленного отбора мясных коров-доноров для использования их в качестве доноров змбрлонов и выявлении основных фактори связанных с технологией разведения мясного скота..

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации доложены и получили положительную оценку на:

- ааучш-меюдачесхих конференциях Центра трансплантаций эмбрионов сельскохозяйственных животных ЕЯЖа в 1930, 1931, 1992 г:

- нзучно-методячзсклх конференциях профессорско-преподава-

гэльского состава Западно-Казахстанского G1Ö1 с IS85 по 1992 гг.;

- 1-2 научно-практической конференции молодых ученых и специалистов " Ич тоне;: фи к а ция с.-х. производства", г.Актюбинск (27-23 февраля 1968 г.);

- меквузовскоЗ .чаучно-практ аче с кой конференций молодых ученых и специалистов "Актуальнне вопросы сельскохозяйственного производства", г.Уральск, 1991 г.;

- 44-й научно-ыетодическоЗ конференций аспирантов и молодых -чеаых "Проблемы иктенсифакацди животноводства" п.Дубровяцн, Ш (19-20 июня IS9I г.);

- 32 научно-практической конференции молодых ученых и специалистов "Задачи молодых ученых в повышения эффективности сельскохозяйственного производства", г. Алма-Ата, АЗВй (28-30 октября 199I г.);

- IX—Э межреспубликанской научно-практической конференции молодых ученых и сцециаластов "Резервы увеличения производства и повышения качества сельскохозяйственной продукций", г.Оренбург, 1992 (24-26 марта).

Объем работы. Диссертация изложена на 144 страницах масино-писного текста. Состоит из введения, обзора литературы, результатов и собственных исследований, выводов а практических предложений. Содержат 30 таблиц, 3 схемы, 3 рисунка а приложение. Список использованной литературы включает 153 наименования, в том чйслэ 105 иностранных

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Научно-производственные исследования по трансплантации эмбрионов в мясной скотоводство проводились в племзаводе "Чапаевский", совхозе "Березовский" СП "Зулея", учебно-ошггном хозяйстве "Фрун-

зенское Уральской области, племсовхозе "Багратионовский" Восточно-Казахстанской области Республика Казахстан. В качестве доноро: эмбрионов были использованы 110 чистопородных коров казахский белоголовой породы класса элита и элита-рекорд в возрасте 3-13 лет. Отбор коров-доноров проводили со племенной ценности, воспроизводительным качествам ва основе данных зооветеринарного учета а физиологического состояния половых органов.

Реципиентами бьш телки случного возраста (18-20 мес.) а моле дые коровы (1-3 отелов) мясных и молочных пород, менее ценные в шгеменном отношении,.клинически здоровые, без отклонений в репродуктивных органах и нормальной половой цикликой.

При проведении исследований максимально придерживалась производственных условий а традиционной технологии разведения мясного скота. Так, животных содержали летом - в летних лагерях на пастбище, замой - на стационаре со свободным выходом на внгульно-кормовоЗ двор. Кормление осуществляли с учетом физиологического состояния а продуктивности животных согласно норм и рационов, установленных в хозяйстве.

Для гормонального вызвывакия сукеровуляцаи у коров-доноров использовали отечественный препарат ФСГ-фоллитропин в дозе 1200 ИЗ 2СГ-П (США) в дозах 42 и 50 мг, ГС2К (ЧСФР) в дозе 3000 ИЕ.

Препараты ФСГ инъецировали по 4-х дневной схеме двукратно с интервалом 22 часов в дозе - фоллягрошн 600, 300, 200, 100 ИЕ; ФСГ-п в дозах 42 и 50ыг - соответственно 15, 12, 10, 5 мг и 15, 13, 12, 10 мг.

Для синхронизации охоты и овуляции у мясных коров и телок исаользозаля простагландин (эстрофан) дважды с интервалом II дней, а также в сочетаниях: ГСЖК (1000 ИЕ) и простагландин один раз,

тетравит 10 мл а дростаглавдин один раз по наличию функционального яелтого тела. Часть коров-доноров использовали со спонтанной охотой, а в последущих обработках были синхронизированы.

Охоту определяли по четко выраженному рефлексу неподвижности во время прогулка днем три раза в стойловый период и два раза -утром и вечером в летний период.

Искусственное осеменение коров-доноров осуществляли.через 48 часов после введения эстро|ана дву- и трехкратно с интервалом 8-10 часов двойной дозой свежеполученной разбавленной (1:3 и 1:6). хранившейся при 0°С сперлой с активностью 5 баллов и концентрацией более 30 млн/мл, а также зачороженно-оттаянной спермой. Учитывали кратность, способ и место введения, ректоцервикалышм а визоцервикальнш методами. Кроме того, использовали естественное спаривание с быками (1-2 садки).

Нехирургическое извлечение эмбрионов проводили на 7-8-й день после первого осеменения, на пункте искусственного осеменения, переоборудованного для эти целей.

В ходе исследований изучала влияние на уровень суперовуляции а выход нормальных эмбрионов; подсоса, возраста теленка, сезона года, упитанности, дня начала обработки, методов и кратности осеменения, охоты синхронизированной и спонтанной, качества желтого тела перед обработкой и др.

Обнаружение и оценку качества эмбрионов проводили по методикам ВША. Для переноса эмбриона в разные участки полости матки реципиента использовали металлические катетеры.

Для получения двоен проводили пересадку одного или двух све-непслучекянх и заморожонно-огтаяшшх эмбрионов контрлатерально желтому телу и в рог матки на стороне желтого тела в яичнике, а

также по два эмбриона в один рог натки я по одному эмбриону в разные рога матки.

При пересадке учитывала качество стадии развития и колючесть пересаженных эмбрионов, а такке состояние желтых тел редашентов Результаты праживляемостя оценивали с учетом качества пересаженных эмбрионов и состояния жедтнх тел, во стельности на 90 день.

Основные результаты исследований обрабатывали биометрически по Е.£.Ыеркурьевой (1970) с применением микрокалькулятора МК-56.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИСС1ЕД0ВАЕИЙ

3.1. Отбор «ясных хоров для использования в качестве

доноров эмбрионов по племенной ценности, продуктивности и воспроизводительным способностям

Одним из основных факторов эффективного внедрения метода трансплантации в практику селекции мясного скота является отбор высокоценных в племенном я продуктивном отношениях коров-доноров, способных к Евдуцарованив суперовуляции и выделении достаточного числа нормальных эмбрионов для пересадки или криоконсервированкя (табл. I).

Из числа коров, входящих в селекционную группу стада, супер-овуляцие2 реагировало 88,2%, где выход нормальных эмбрионов от числа зародышей составил 76,3?. В среднем 9,5 овуляцаи а 3 нормальных эмбриона на донора получено в группе коров племядра.

Установлено,, что аа результаты суперовуляцяй определенное влияние оказывают показатели продуктивности мясной коровы. С увеличением иолочностя от 250 кг и более повышается число овуляций и выход нормальных эибраонов. Это возможно связано с тем, что с потенциальной молочностью коровы, свободно обеспечивая своего теленка молоком, меньше поддаются ингибирувдему действии пролай-

сина. В группе коров живой массой от 500 до 600 кг было получено ю 4,9 нормальных эмбриона. Относительно конституции и экстерьера лучше результаты были получены у животных, соответствующих стандарту породы, где суперовуляцией реагировало 88,8$ коров я получено по 4,5 эмбриона на донора.

Таблищ I

Сулеровуляция и выход нормальных эмбрионов у мясных коров различной племенной ценности

Показатель

Племенная ценность

Коровы

матери быков

селекционной группы

племядра

Обработано животных Реагировало суиеровуладией

Получено в среднем на донора:

овуляции

зародышей

в т.ч. нормальных эмбрионов

6

6-100

I?

15-88,2

II,6*2,0х II,7*1,0х 9,0*2,5 7,6-1,2

5,0*1,3х 5,8*1,0*

21 18-85,7

9,5*1,0х 6,0*1,0

3,0*0,9х

х)

Р < 0,01

Некоторые исследователи рекомендуют при отборе коров в качестве доноров обращать внимание на возраст коров (табл. 2).

Различий в показателях овулядаи и числа нормальных эмбрионов разного возраста не выявлено. Следует только отметить, что с увеличением возраста у мясных коров повышалось число овуляций и зародышей, а также выход нормальных эмбрионов.

Исследованиями установлено, что потенциальные коровы-доноры с хорошими и устойчивыми воспроизводительныш способностями от-

лкчаются предрасположенностью к воспроизводству эмбрионов.

Таблица 2

Число овудяцеШ и нораальных эмбрионов у коров разного возраста

Показатель Возраст (лет)

3-5 6-9 10-13

Число животных 17 44 18

В среднем на донора:

овуляций 8,4-1,1 9,8^0,6 9,2±0,8

Коэффициент изменчивости, % 58,2 46,0 3?,4

Получено от зародышей 6,0±0,7 7,4*0,6 7,4*0,9

Процент ог числа овуляций 71,4 76,2 80,4

Коэффициент изменчивости, % 52,3 60,0 52,0

в т.ч. нормальных эмбрионов 4,3±0,6 4,0*0,4 4,7*0,8

Процент от числа зародышей 71,6 54,0 63,5

Коэффициент изменчивости,% 61,0 73,5 71,0

Сервис-период более точно в кашого раньше, чем межотельный период, может определять потенциальные возможности воспроизводительной функций у коровы (табл. 3).

Исследования показали, что с увеличением продолжительности сурвгс-периода у мясных коров идет снижение показателей суперовуляции я извлечения эмбрионов. Наибольшую реакции яичников супероэулгщяэй г высокий выход качественных эмбрионов можно получить от животных» имеющих продолжительность сервис-периода за последние 3-5 отелов в пределах не более 90 дней.

Таблица 3

Суперовуляция и качество эмбрионов мясных коров в зависимости от сервис-периода

Продолжательность сервис-периода,

Показатель дна

60-90 90—120 более 120

Обработано животных 24 26 31

Реагировало суперовуляцией (п-2) 21-87,5 20-76,9 17-54,8

Число овуляхдай на донора 8,7±0,8 7,r¿I,2 6,7-1,0

Получено зародышей':' 7,0-1,0 5,5^0,5

на донора 8,1-1,3

в т.ч.нормальных эмбрионов 4,4*0,9 3,0^0,6 2,1±0,6

Процент от числа зародышей 53,1 43,0 38,1

3.2. Результаты вызывания суяеровуляции у мясных коров разными гонадотрошшамй

Вызывание сукеровуляции является одной из центральных проблем трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота. В последние годы, в связи с ограниченным поступлением гормональных препаратов из других стран, более доступными остаются IUSK и ФСГ -фоллитролнн (габл. 4).

В группе норов, обработанных ГСЖ, суперовуляцией реагировало 70,5% кивотных, что на 14,5/5 меньше, чем в груше коров, обработанных ФСГ (фоллитропин). Фоллитротш имел полное преимущество перед ГСЖ (ЧСФР) почти по всем основным показателям, Так, число овуляции на донора било достоверно (PC0,05) выше на 3,3$, положительных доноров по извлечении fia 35%, по количеству полученных, зародышей на 0,41. Статистическая достоверная разница (PCO,01) по выходу нормальных эмбрионов составила 1,15, при наименьшем

числе неошюдотворенных яйцеклеток (1,2 яром в 3,1) в пользу фолиттрошша. 'Число эмбрионов хорошего и удовлетворительного качества на донора такке было в пользу второй группы.

Таблица 4

Уровень суперовуляциа и качество эмбрионов у мясных коров при применении разных гонад отродных препаратов •

ГС2К Фоллатротш (ЧСФР) (Литва)

Показатель -

Доза, I®

3000 1200

Обработанок коров 17 53

Реагировало суперовуляцаей (п-$) 12-70,5 * X 45-85,0

Число овуляодй на донора 6,1*0,82х' 9,4*0,17*

Коэффициент изменчивости, % 35,7 48,0

Положительных доноров по извле- 7 42

чению эмбрионов-

Процент от числа оперированных 58,3 93,3

Получено зародышей на донора 6,4*1,5 6,8*0,16

в т.ч. нормальных эмбрионов 2,8*0, Г?*2 4,0*0,14хх

Процент от числа зародымей 44,4 58,5

дегенерировакных 0,45*0,12 1,6*0,12

неошюдотворенных яйцеклеток 3,12*1,1 1,23*0,13

Качество эмбрионов: отличные 0,52*0,2 0,6*0,1

хорошие 1,57*0,7 2,3*0,3

удовлетворительные 0,71*0,4 1,1*0,2

Р <0,05; Б <0,01

В поисках путей повышения результативности гормонального вызывания суперовуляции у мясных коров был проведен анализ действия разных аналогов фолликудостимудируодего гор,юна разных фирм ФСГ (Литва) и ФСГ-п (С1Ш (табл. 5).

В результате было отмечено, что 4-х дневная инъекция двух

видов <КГ не повлияла на -число доноров с суперовуляцией (85,0 и 87,5$), а таете овуляции на донора (9,4*0,17 и 9,4*1,13) при вариабельности 48,0 ж 46,8$. Таким образом, анализ полученных данных показал, что ФСГ (Литва) почти не уступает по своим биологическим качествам ФСГ-п (США).

Таблица 5

Уровень суперовуляциа и выход нормальных эмбрионов

при введении фсигаикулостиыулирувдэго гормона (ФСГ)

__ _

Показатель -:-

Латва США

Обработано коров 53 40

Реагировало сушровулявдей Ы-%) 45-85,0 35-87,5

Число овуляций на донора 9,4*0,17х 9,4-1,13х

Хооффициект изменчивости, % 48,0 46,8

Положительных доноров по извлечению змбраоноз {и-%) 42-93,3 30-85,7

Получено зародышей на донора "6,8*0,16 7,5*0,66

Лимит 1-18 3-18

В той числе: процент нормальных 58,6х2 89,03®

эмбрионов

дегенерированиях 23,4 16,4

неоплодотворенных 18,0 14,6

яйцеклеток

х) Р < 0,05; *** Р~=;0,01

Многими исследованиями показано, что несоответствие дозы и схемы применения фолликулостимуларувдего хипофизарного гормона (ФСГ) отрицательно сказывается на результатах суперовуляции (иабл. 6).

Данные табл. 6 показывают» что коровы, обработанные разными дозами ФСГ-п,- реагировали суперовуляцией с разницей в 3,8$. Число

овуляций достоверно повышалось (Р< 0,01) с уменьшением дозн ФСГ от 8,7 до 19,2 на донора. Вариабельность составила 43,3$, что на 7,5% меньше, чем в первой группе. Отмечено также увеличение количества положительных доноров по извлечению эмбрионе: (94,1 против 71,7%). Число зародышей на донора оказалось мены

•" е

в первой груше обработанных с 50 мг. Аналогичные результаты были получены и в числе нормальных эмбрионов (3,6 и 6,8 на дон ра), или на 17,4$ больше. Из полученных данных следует, что дл коров мясных пород оптимальной и более эффективной дозой ФСГ-с является 42 ыг.

Таблица 6

Результаты суперовуляции у коров в зависимости от дозы ФСГ-д

Доза, мг

Показатель —-г-

50 42

Обработано коров 21 19

Реагировало суперовуляцией (и-%) 18-85,8 17-89,4

Число овуляцай на донора 8,7*1, Г?23" 10,2*1,^

Коэффициент изменчивости, % 50,6 43,1

Положительных доноров " по 14 16

извлечена© эмбрионов

Процент от числа оперированных. 77,7 94,1 ■

Получено зародышей на донора 6,1*1,17х 8,9*0,16х

В том числе:

нормальных эмбрионов 3,6*0,16** 6,8*0, Г?**

Процент от числа зародышей 58,6 76,1

х)Р<0,05; *** Р <0,01

3.3. Факторы, влиящие на уровень суперовуляцал, выход и качество эмбрионов у мясных коров

Имеыэдеся в литературе данные зарубежных и отечественных исследователей свидетельствуй: о многообразии факторов, влияющих на результаты трансплантации, в частности, на получение полноценных эмбрионов. В экстремальных условиях разведения мясного скота имеют место сродовые факторы, связанные с технологией разведения, содержания и эксплуатации. Учитывая выраженную сезонность размножения животных мясных пород, нами были изучены физиологические возможности полноценного вызывания суперовуляции у коров в разные сезоны года (табл. 7).

Таблица 7

Уровень суперовулявда а выход нормальных эмбрионов у мясных коров в зависимости от сезона года

Сезон года

Показатель март-май шонь-август сентябрь- ; ноябрь ( гекабрь-ревралъ

Обработано коров 19 26 28 37

Реагировало суперову-ляцяей 15 18 25 34 . ,

Процент от числа обработанных 78,9 69,2 89,2 91,8

Число овуляций на донора 9,83*1,4 7,37*0,8х 9,75*1,0 9,83*0,^

Коэффициент изменчивости 51,4 48,4 48,0 40,5

Положительных доноров т? по извлечению зародыаей 16 20 31

Процент ст числа оперированных 80,0 88,8 80,0 '83,7

Лрлучено зародышей на донора 6,50*0,8 4,87*1,0 7,35*0,5 8,45*0,8

Коэффициент изменчивости, % 43,7 83,5 • 33,4 55,5

В том числе: нормальных эмбрионов 3,08*0,6х* 2,93*0,6х* 5,40*0,б** 4,60*0,6

процент от числа зародышей 47,3 60,1 73,4 54,4

х) Р<0,05; ^ Б<0,01

- 15 -

Анализ проведенных исследований на НО коровах показал, ■что процент животных, реагирующих суперовуляцией, был почти одинаковым в осенний и зимний пераода (сентябрь-ноябрь - 89,2, декабрь-март - 91,8%) и превосходила этот показатель на 20,22? в летний период (69,2$). Число нормальных эмбрионов на донора

•р ь

было больше осенью (5,4) и меньае летом (2,9).

При начале обработки нрепаратама •ЗСГ на 9 и 10 дни реагировало суперовуляцией 90,4 и 95,05? обработанных коров, при сре; нем выходе морфологически нормальных эмбрионов 6,5^0,9 и 4,5-}, соответственно (Р<0,01).

Установлено, что качество желтого тела в яичнике шее? достоверную, связь с уровнем суперовуляцад, числом овуляции и выходом нормальных эмбрионов, (табя, 8).

Таблица 8

Влияние качества еелтого толз. ь яичнике мясных коров

на результаты сушрозуляцЕЕ и выход ногаашшх эмбрионов

Качество яелтого тела

Показатель -•-:--

отличное хорошее слабовыра-

Обработано коров 31 20 яенное 20

Реагировало суперовуляцией 31 19 I?

Процент от числа обтаботшг- еых 100 95,0 85,0

Число овуляций на донора 11,4^0,7х 10,6^0,9* 10,9-1,3

Положительных доноров по 31 19 15

извлечении зарс-здзей

Процент от числа оперированных • - 100,0 100,0 88,2

Получено зародышей на донора 8,1±0,8 6,0±1,1 7,0^1,2

В т.ч. нормальных эмбрионов б,4±0,7х 4,4±0,9Х 2,7*^0,6х

Процент от числа зародышей 79,0 73,3 38,5

Р <0,05,

-16 -

Так, у животных о отличным .желтым телом наблвдали более" высокие показатели выхода нормальных эмбрионов (79 ,($).

Влияние разной продолжительности подсоса на результаты гормональной обработки коров мясных пород изучено на ПО животных (табл. 9),

Таблица 9

Влияние подсоса на уровень суперовуляции и выход нормальных эмбрионов

Показатель

Контроль Продолжительность подсоса,мес до 3-х 3-5 ' >5

Обработано коров Реагировало суперову-

ляйи8й

Процент от числа обработанных

Число овуляций на донора

Коэффициент изменчивости, %

Полояятелышх доноров по извлечена!) эмбрионов

Процент от числа опера- о9 R роваяных

30

28

93,3 10,5*0,7

35,9 26

29

24

82,7 8,5*0,7

40,9 21

28 21 '

75.0 7,9*1,2

64.1 17

Подучено зародыией на р л+n с донора в,и~и,ъ

Коэффициент изменчивости, %

Б т.ч. нормальных эмбрионов

Процент от числа зародышей

87,5 81,0

6,7*1,1 6,8*0,9

74,0 57,3

5,5*0,5х 3,8*0,6х 4,5*0,3

68,7 56,7 - 66,1

42,1

х) Р <0,05; ^ Р <0,01

23 18

78.2 9,8*1,2

48.3 15 "

83.3 6,4*0,9

62,1

48.4

Данные табл. 9 показывают, что.животные с телятами на подсосе по всем показателям явно уступала.-контрольной группе (dea телят). ,

- 17 -

В опытных грушах реакция яичников суперовуляцаей, число лвуляций на донора колебались с увеличением продолжительности подсоса. В груша, где на подсосе были телята в возрасте от 3 до 5 месяцев, несмотря на низкое число овуляции на донора, с?,9) с большей изменчивостью признака (64,Ш и сравнительно низкий процент положительных доноров по извлечению зародышей (81,0,1), последующие результаты были вгае. Так, число зародышей на донора было 6,8^0,9 против 6,7 а 6,4 при наименьшей вариабельности (57,3 против 74,0 и 62,1).

Выявлено такие,,что в этой группе достоверно больше выход . нормальных эмбрионов (4,5^0,9 против 3,8 и 3,1; Р <0,05).

С целью преодоления влияния сезонно~лактационнаго анэструса нами был применен регламентирований подсос телят в течение месяца, начаная с 1-го дня, отнимая телят на 6 часов (1-я опытная) а на 12 часов Ш-я опытная). В контрольной группе коровы постоянно находились вместе с телятами. Во всех грушах возраст коров был одинаковым (3 отела), а возраст телят от 3 до 5 месяцев (табл. 10).

Таблица 10

Суперовуляция и выход нормальных эмбрионов

у мясных коров при регламентированном подсосе

Показатель

Группы

контроль опытная I опытная П

Реагировало суперовуляцаей

Число овуляций на донора

Коэффициент изменчивости,£

Положительных доноров по извлечению зароднией Ы-%)

?исло зародышей ка донора

в т.ч. нормальных эмбрионов

Процент от числа зароднией

6 5 5

8,7±1,7 9,4-1,5 12,8-1,0

45,4 32,0 63,7

4-66,6 . 5-100 5-100

2,2-4,4 3,6-1,5 6,8*0.3

1,0±0,2 3,2-1,5 4,6*0,6

45,4 68,8 67,6

- 18 -

Исследования доказали, что у коров всех групп была 100^-ная реакция на ФСГ (фоллитротшн). В то же время установлено, что в зависимости от интервала между подсосами в течение суток, повышалась ответная реакция яичников на гормональную обработку. Так, при отъеме телят на 6 и 12 часов число овуляций на донора оказалось больше, чем в контрольной группе на 0,7 и 4,1, соответственно, при сравнятельно низкой вариабельности (32$). Процент положительных доноров по извлечению от числа оперированных был на 33,3$ больше, чем з контрольной. Аналогичные данные были получены и по выходу зародышей и нормальных эмбрионов на донора.

Исследования показали, что санация полости матка, проведенная в нулевой день цикла,перед охотой способствует увеличению чпсла положительных доноров по выходу нормальных эмбрионов, по-выаению оплодотворяемосм яйцеклеток и качества эмбрионов. Наилучший эффект был получен при применении препарата ГАМП. В этой группе коров было получено 10,6 овуляций, 7,2 зародышей и 4,7 нормальных эмбрионов на донора против 9,3; 3,8 и 1,8, соответственно, в контроле. Оплодотворяемость яйцеклеток (69,4$) и выход нормальных эмбрионов (65,2$) был намного выше, чем в контрольной и в группе коров, обработанных иодосолом.

Наряду с препаратом ГАМП наиболее доступным и эффективным оказалось комплексное применение пенициллина в сочетании со стрептомицином. При эхом оплодотворяемость яйцеклеток превышала контрольную группу на 15$ и обеспечило 6,8 зародышей и 3,8 нормальных эмбрионов на донора.

В исследованиях изучали степень влияния различных способов содержания на результат вызывания суперовуляцаа и качество эмбрионов (табл. II).

Из данных табл. II видно, что при свободно-выгульном содержании наибольшез число корой реагировало суягровуляцией (91,6$)

или больше на 4,15», чем при пастбищном и на 15,6/=, чем при стойловом содержаниях. Нормальных эмбрионов также достоверно было больше в этой группе коров и составило 75,0% (Р <0,05) до сравнена!) с другими группами. Существенной разницы в числе овуляций и зародышей на донора не обнаружено.

Таблица' И

Уровень суперовуляции в качество эмбрионов в зависимости от технологии содержания мясных коров

.............. |,м 1 ........."I..............

Способ содержания

Показатель - ^ пастбищное стойловое

свободно-' выгульное привязлое

Обработано коров 16 24 25

Реагировало супзровудяцией 14-87,5 22-91,6 19-76,0

Число овуляций на донора 9,4*1,3 9,8*0,8 9,7*1,2

Подучено зародшей на донора 5,4*1,1 5,6*0,5 5,2*1,0

В том числе, процент ношапь-ных 61, X 75,0х 55,7х

дегеаерироваьных 25,9 12,6 27,0

неоплодотвореншп яйцеклеток 13,0 . 12,5 17,3

х\ ? < 0,05

Результаты исследований доказали, что животные с различ-■ ной упитанностью неодинаково реагядоат суперовуляцией на гонадо-тропин (табл. 12).

В группе коров средней упитанности число реагировавших животных составило 85,7$, что на 30,2$ и 10,1% больше, чем у.короВ высшей и нике-средней упитанности. Аналогичное преимущество было -получено в числе овуляций, зародышей и нормальных эмбрионов на донора. Процент зародышей'во П-ой группе был большэ относи-1

- 20 -

цельно I и Ш групп на 22,6% и 36^, соответственно.

Таблица 12

Уровень суперовуляции а выход нормальных эмбрионов в зависимости от упитанности коров перед обработкой

Упитанность

Показатель -:-

высшая средняя низкая

Обработано коров 9 7 12

Реагировало сулеровуляцией Ш-%) 5-55,5 6-85,7 9-75,0

Число овуляций на донора 4,6*0,5 10,5*1,7 7,8*0,8

Полокителышх доноров по извлечению эмбрионов (п-%) 5-100 6-100,0 8-88,8

Число зародышей ка донора 2,6*0,6 6,3*1,о 5,4*1,0

в т.ч. нормальных эмбрионов 1,6*0,5 5,3*1,2 2,6*0,7

Процент от числа зародышей 61,5 84,1 48,1

Таким образом, слишком высокая и низкая; кондиция мясных коров снижает реакцию яичников на гонадотропиды я выход нормальных эмбрионов.

3.4. Осеменение мясных коров-доноров при суперовуляцаа

При искусственном осеменении коров с .суперовуляцией свеже-полученной и замороженно-оттаянноЗ спермой существенных различий в оплодотворяемости яйцеклеток не выявлено (табл. 13).

Заметное влияние на оплодотворяемость яйцеклеток оказывало место введения спермы в половые пути самок. При введении спермы в шейку матки получено в среднем на донора 3,0 и 2,9 качественных эмбрионов, что составило 39,5 и 39,7$ от числа извлеченных зародышей.'" При этом число неоплодотвореншх яйцеклеток до- ,

/

стигало 36,8 и 32,9;!. Более высокий внход нормальных эмбрионов-' был получен при осеменении в тело и рога матки. Так, в среднем

на донора пра этом получено, соответственно, 3,9-3,6 и 4,0-4,1 качественна^ эмбрионов.

Таблица 13

Результаты осеменения коров-доноров свеяеполучэнной и заморояенш-оттаянной спермой в зависимости от места ее введения

Введение спермы

Показатель

свежеполученная замороаенно-оттаянная шейка тело рога шейка тело рога Число коров 6 . 9 II 13 10 9

Й«2 8'4±1'° 8'1±0'? Э'011'1 7'6±1'° 7'9±1'1

ае|Лкл3Д0ЕЙ 7,6*0,9 8,0*0,5 8,4*1,1 7,3*0,9 7,3*0,8 10,2*1,2

ни звонов6" 3,0*1,0 3,9*0,6 4,0*1,2 2,9*0,7 3,6*1,6 4,1*1,1

Процент от чис- зд 5 48 ? 47 & 39 „ 49 3 4[) 0 ла зародышей ' ' ' ' ' '

Мясной скот больше подвержен сграссу при внедрении интенсивных воздействий. В частности, при использовании искусствоняо-го осеменения в обычных условиях взамен естественному спариванию наблцдаогся снижение оклад от воряеиостк коров. Высокие результаты по извлечению и качеству зародышей получены при естественном осеменении коров быками (табл. 14).

При естественном осеменении в среднем на донора получено 8,4 и 9,2 зародзшзй при одной и двух садках. Из них 4,7 а 5,1 качественных эмбрионов, что составило 56,0 и 55,4$ от общего числа зародышей. Число неоплодотворенных яйцеклеток не превышало 23,8 и 21,6$, что в 1,5-2 раза меньше, чем при искусственном осеменении. Оплодотворяемость при естественном спаривании повышалась ка II и 26$.

Таблаца 14

Оплодотворяеыость яйцеклеток у коров-доноров при искусственном и естественном осеменении

Искусственное ' Естественное Показатель Кратность осеменения

2 3 I 2

31 27 12 14

19,2*1,1 7,6*0,6 8,1*0,9 9,6*1,3

9,2*1,1 4,4*1,0 8,4*0,8 9,2*1,2

3,5*1,0 2,0*0,6 4,7*0,8 5,1*1,1

38,0 45,4 56,0 55,4

65,2 52,2 76,2 78,2

Число короз

Среднее число овуляций на донора

Получено зародышей на донора

в т.ч. нормальных эмбрионов

Процент от числа заро-

Оплодотворяемость яйцеклеток, %

3.5. Извлечение и морфологическая оценка качества эмбрионов

Технология нехирургического извлечения постоянно совершенствуется а уточняется в основном при работе с молочным скотом.

Мясной скот, з отлачии от мелочного, имеет ряд своих биологических и анатсмо-физиологических особенностей репродуктивных органов, обусловленные условиями обитания, технологией содержания и кормления с наименьшей степенью улучшения воспроизводительных функций. Установлено, что размер матки и ее рогов всегда меньше, чем у молочной коровы. Пра ректальном обследовании матка имеет повышенную рзгндность, особенно в периоды повышения половой . активности , а также способна быстро и сильно сокращаться при механических воздействиях.

Мясные коровы отрицательно воспринимает каддое введение рука в прямую каику ж до 70$ оперированных коров проявляли бес-

покойство II приходила в двааеаяе с попыткой ьыйти аз фиксирующего станка. Поэтому желательно обследование коров на наличие су-перовуляциа проводить за день до извлечения. Сравнительные опыты

о

показали, что катетер фирмы "Нойштадт" имеет явное преимущество перед катетерам» конструкции КШа и Англии при использовании их у мясных коров. *

Груша коров, эмбрионы у которых извлекалась катетером "Нойштадт", имела больную разницу (Р<0,01) в числе зародышей и превышало первую группу на 5,6 и вторую на 3,9. Аналогичная разница (Р<0,01) была в в числе нормальных эмбрионов (6,4 против 2,7 и 4,4). Меньше времени было затрачено на извлечение при закрытой системе, чем при открытой.

Взеденае мясным коровам-донорам релаксантов в различных дозах и комбинациях существенного влияния на результаты извлечения не оказывала. Из 435 исследованных зыбраонов, пригодными для пересадки а крлохонсервярованая, оказались 326 (75,0$) и дегенерированиями 109 (25;ь). В том числе отличных - 67 (15,455), хорошх-175 (40,255), удовлетворительных - 73 (16,8) и условно-годными -II (2,5%).

При изучении эмбрионов у коров-доноров мясных пород обнару- . лены некоторые особенности, которые заключались в более рыхлой структуре и несколько ослабленной связью меяду бластомерами. Наблюдаются некоторые различия в скорости развития одновозрастных эыбраонов у коров-доноров молочных и мясных пород. Если у первых на 7 день индуцированного цикла поздние морулы от общего числа извлеченных эмбрионов составляют 35-40$, го у последних доходит до 80$.

3.6. Результаты нехирургической пересадки эмбрионов мясного скота с целью получения оданцовых л двойневых стельностей

В наших исследованиях при пересадке эмбрионов от высокоценных племенных коров телкам случного возраста применяла три способа синхронизации (табл. 15).

Таблица 15

Результата синхронизации охоты и праживляемости эмбрионов у мясных телов -реципиентов (л-£)

' Простагландин (эстрофан)

Показатель +500 ИЕ ГСЖК двукратно интервал II дней однократно по ж?

Обработано телок 46 90 28

Проявили признака охоты 34-74,0 75-83,3 19-67,9

В том числе через 24 ч. 1-2,9 4-5,4 7-36,8

через 48 ч. 29-85,3 63-84,0 10-52,7

через 72 ч. 4-17,8 8-10,6 2-10,5

Охота отсутствовала 12-2в,0 ' 15-16,7 9-32,1

Не имели желтого тела в яичнике 8-23,5 13-17,3 7-36,8

Число телок, пригодных для пересадки эмбрионов 28-76,5 62-82,7 12-63,2

Из них имели желтые тела:

отличные 8-30,8 18-25,8 1-8,4

хорошие 12-46,2 27-43,6 4-33,3

удовлетворительные 6-23,0 19-30,6 7-58,3

Пересажено эмбрионов 20 42 8

Стельных 'реципиентов, (п-50 9-45,0 18-42,8 3-37,5

Данные табл. 15 показывает , что при двукратном введении

простаглавдина без учета наличия желтого тела в яичнике 75 из

90 (83,3а) телок проявили признаки охоты, , что превышало на 9,3%

а 15,4$ группы телок, обработанных простатландяном в сочетании с ГСЖК и однократно одним простатландином.

При изучении желтых тел установлено, что наилучшие показатели были в группе телок, обработанных простаглаадином в сочетании с ГС1К (30,8$ желтые тела отличного качества а 46,2$ хорошег

В наших исследованиях ставилась задача выяснить возможность получения двоен у мясного скота при нехирургической перэсадке, определить влияние некоторых факторов на результативность пересадки осемененным я неосемененным реципиентам (табл. 16).

Таблица 16

Результаты получения двоеа при пересадке эмбрионов

Группы

Показатель -

подсадка 2 эмбриона 2 эыбрпо-одного в один рог на В ро.З~

эмбриона натки ные рс: матки

Число реципиентов 25 13 17

Пересажено эмбрионов 25 26 34

Число стельных реципиентов 13 7 II

Процент стельносга 52,0 53,8 65,2

Процент стельности от числа пересаженных эмбрионов 52,0 27,0 32,3

Число отелов двойнями 4 I 4

Процент двойневых отелов 30,7 14,2 40,0

Получено телят 16 8 15

Результатн исследований доказали, что при правильном выборе метода, соблвдении основных условий нехирургической пересадки, а также при высоком качестве пересаживаемых эмбрионов, есть возможность успешно получать двойневые отелы.

Праживляемость эмбрионов была наиболее высокой при пересадке двух эмбрионов отличного и хорошего качества в разные рога (65,25?) • Установлено также, что при пересадке двух эмбрионов, один из которых удовлетворительного качества, прижавляемость

также была достотачно высокой и составила 53,85?. Относительно числа пересаженных эмбрионов процент приживляемости составил по группам: 52,0; 27,0 и 32,3.

Отелы двойнями ш группам были зарегистрированы в 1-й - 4 (30,755), во П-й - I (Г4,2£) а в Ш-А - 4 (40,0^).

Следовательно, лучшие показатели двойневости у мясных коров можно получить при пересадке двух эмбрионов в разные рога матки, а также при контрлатеральной пересадке предварительно осемененным коровам-реципиентам.

В ходе изучения двойневости нами проанализировано влияние основных факторов по этим показателям. При этом выявлено, что стадия развития и качество эмбрионов, способы синхронизации охоты репдпиенгов, виды анестезии, место аппликации эмбриона в просвете рога матки существенного атаяшя не оказывает.

Исследования показала, что прикивляемость эмбрионов находится в прямой зависимости от качества желтого тела в яичнике на день пересадки. При отличном качестве желтого тела получены высокие показатели стельности при пересадке двух эмбрионов в один и в два рога матки (100 и 83,3£).

Получено больше стельностей в летнее время и осенью при пересадке одного эмбриона телкам случного возраста (42,8$), коровам 1-3 отелов (56,3$) по сравнению с зимой.

Из этого следует, что з мясном скотоводства, когда скот находится в экстремальных условиях труднее вызвать синхронизированную охоту, а приход в спонтанную охоту значительно ограничен, так как в этот-период наблвдаегся понижение половой активности.

В связи с этим целесообразно проводить работы по трансплантации эмбрионов планомерно по периодам года, начиная с сентября по март месяцы.

- 27 -

4. шведа И ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРВДОШШ

I» Пра трансплантация наиболее подходящими является коровы в возрасте от 6 до 13 лет селекционной группы класса элитами элита-рекощ, кавой массой 5СЮ-600 кг, 'продолжительностью серва( периода не более 90 дней.

■ е

2. Гипсфйзарный препарат ФСГ-фоллатропан по свои биологическим качества« а действию б дозе 1200 ЕД не уступает другим препаратам аналогам а обеспечивает получение у мясных коров в среднем 9,4 овуляций, 6,8 зародышей и 4,0 нормальных эмбрионов на донора. Оптимальной дозой препарата ФСГ-п (США.) следует считать 42 мг, обеспечивающая получение в среднем 10,2 овуляций

и 6,8 нормальных эмбраоноз на донора. Доза 50 мг чЮГ-п для мясных коров является шкеимачьной а обуславливает снижение конеч-ашс результатов.

3. Уровень суперовулящд и выход нормальных эмбрионов у коров мясных пород зависит от фенологических особенностей, сезона года, подсоса, упитанности а технологии содераанвя. Комбинированная синхронизация охоты, профилактическая санация матки обеспечивает наибольший выход нормальных эмбрионов.

4. Искусственное осеменение короз с суперовуляцией при рек-тоцервакальном введении спермы в тело и рога матки позволяет получать 3,8 а 4,1 нормальных эмбриона на донора. Естественное осеменение (I а,2 садки) быками обеспечивает получение 4,7 а 5,1 качественных эмбриона на донора.

5. На 7-8 день извлечения эмбрионы у мясных коров в основном находятся на стадии поздней морулы (57,6^) и ранней йпастоцисты (25,7$). Д.тя эмбрионов коров казахской белоголовой породы характерна более рыхлая структура а слабая связь ыезду бластоме-рага. По скорости развития оеи несколько отстает от одновозраст-

- 28 -

та эмбрионов коров-доноров молочных пород.

Б. Приживляемость эмбрионов при нехирургической пересадке зависит от стадии развития и качества эмбрионов. Лучшую пршшв-ляемость можно получить при пересадке ранних бластоцист (50,0%), чем поздних морул (44,8^). Более высокие показатели двойневости у мясных коров наблодаются при пересадке двух эмбрионов в разные рога матки (40,0%) и при контрлатеральной подсадке предварительно осемененным реципиентам (30,7%).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для трансплантации рекомездуется использовать коров в возрасте 6-13 лет, хивой массой 500-600 кг, с сервис-периодом до 90 дней. У подсосных коров при гормональной обработке применять кратковременный отъем телят на 6-12 часов. Получение эмбрионов целесообразно проводить в осенне-зимний, а пересадку их в летний периоды.

Основные положения диссертации опубликованы в следулцих • работах:

1. Абуов А.Г. Уровень суперовуляция мясных коров-доноров от применения сывороточного гонадотропина/Л Тезисы докладов молодых ученых и специалистов. Актюбинск, 1988, с. 42.

2. Абуов А.Г., Жумакаев А.Т., Зинуллан А.З. Перше опыты по трансплантации эмбрионов у мясного скота // Тезисы докладов межвузовской научно-практической конференции молодых ученых н специалистов, Уральск, 1991. С. 111-112.

3. Абуов А.Г., Байтлесов В.У., ЗСанагбаев С.Г. Результаты трансплантации эмбрионов в мясном скотоводстве //Биотехнологические приемы з технологии трансплантации эмбрионов. Бвл. научн. работ ®Ж, .вып. 104, 1991. С. 56-59.

4. Сергеев Н.И., Абуов А.Г. Оптимальные варианты искусственного осеменения мясных коров с суперовуляцией // Тозисы Ш Республиканской конференции молодых ученых, Алма-Ата, 1991.

С. 108-109.

5. Байтлзсов Е.У., Абуов А.Г., Морфологическая оценка эмбрионов коров казахской белоголовой порода // Тезисы докладов П межреспубликанской научно-практической конференции молотах ученых и специалистов. - Оренбург, 1992 (24-26 марта). С.П9-12С

6. Абуов А..Г., Канатбаев С.Г., Байтлесов Е.У. Приживляемое; эмбрионов при пересадке на двойневость // Тезисы докладов XI, межреспубликанской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов. - Оренбург, 1992 (24-26 марта). С.120-121.

7. Влияние гокадотропинов на суперовуляцию и выход нормальных эмбрионов у мясных коров-доноров / Абуов А.Г., Байтлесов Е.У., Кавагбаев С.Г., Акимов 1.М. // Информационный листок. -Алма-Ата, 1992. - 4 с.