Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Пути и способы стимуляции размножения вирусов, одноклеточных организмов и животных (теоретическое и экспериментальное обоснование)

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Пути и способы стимуляции размножения вирусов, одноклеточных организмов и животных (теоретическое и экспериментальное обоснование)"

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА -

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ им. Я. Р. КОВАЛЕНКО

ВСЕСОЮЗНОЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК имени В. И. ЛЕНИНА (ВАСХНИЛ)

На правах рукописи

X В О Л Е С Анатолий Григорьевич

ПУТИ И СПОСОБЫ СТИМУЛЯЦИИ РАЗМНОЖЕНИЯ ВИРУСОВ, ОДНОКЛЕТОЧНЫХ ОРГАНИЗМОВ и животных

(теоретическое и экспериментальное обоснование) 03.00.06 — вирусология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва — 1991

Ч,-

Работа выполнена в Московском ордена Трудового Красного Знамени Медицинском Стоматологическом институте им. Н. А. Семашко.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Дьяконов Л. П.

академик ВАСХНИЛ Дунин М. С.

доктор биологических наук Лаптев Ю. П.

Ведущая организация: Московская ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственная академия имени К. А. Тимирязева.

Защита диссертации состоится « » 1991 г. в час. на

заседании специализированного совета Д.020.28.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всесоюзном ордена Ленина научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко по адресу:

109172, Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан « » 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат ветеринарных паук

Ф. Г. ТЕРЕШКОВ

- 1- ОБЩ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Б современных условиях уделяется большое вникание фундаментальным и прикладным научным исследованиям для развития аграрной науки и широкому использованию передового отечественного и зарубежного опыта в реализации аграрной политики нашей страны.

К научным отраслям, имегвдш важное значение для развития биологических дисциплин, прежде всего можно отнести экспериментальную морфологии (А.О.Ковалевский, 1870; А.Н.Северцов, 1931; К.Х.Уоддингтон, 1970), особенно при сочетании морфологических и биохимических методов исследования в связи с тем, что взаимосвязь их обусловлена необходимостью изучения наследственных закономерностей, основанных на активности геномов организмов различного уровня биологической организации (О.Б.Хатт, 1963).

Б настоящее время установлено регуляторное значение участков ДЫ или РНК, в которых локализованы "молчащие" гены, представляющие неинформативную часть генетической программы (Г.П.Георгиев, 1989; Д.К.Беляев, 1979). Однако регуляторные функции геномов до сих пор в связи со сложностью методических приемов изучены недостаточно. Ь этой области молекулярной биологии конкретные-исследования малочисленны. Б связи с этим современней прогресс и указанном направлении является больше результат л технических достижений.

Актуальность проблемы определяется также тем, что в процессе реализации генетической программы в генсмгх различных по

сложности организмов морфологические и биохимические показатели наиболее важны для регистрации получаемых результатов. На этом основании изыскание путей и способов стимуляции размножения различных организмов имеет важное научное и практическое значение.

Ь плане решения задач, направленных на интенсификацию животноводства в настоящее время уделяется серьезное внимание изучению воздействия биологических стимуляторов, применение которых обеспечивает получение экологически чистой продукции.

Важнейшим направлением молекулярной биологии является генная инженерия, результаты применения методов которой позволяют изменить некоторые наследственные свойства высших организмов, а также осуществить получение в промышленном масштабе в бактериях ряда белков животного происховдения (А.л.Баев, 1980).

В настоящее время рядом исследователей реализуются задачи, направленные на получение бнотехнологкческих продуктов (К.Г.Га-зарян, А.А.Языков, 1978; И.А.Рапопорт, Л.И.Др- 'хал, 1976; И.И.Фодор, 1960; К.Г.Скрябин, 1960; Н.П„Дубинин, 1986; А.А.Никонов. 1990).

Решение проблей, связанных с активацией геномов и последующа! получением биологически активных веществ, имеет первостепенное значение для повышения рентабельности сельскохозяйственного производства (А.А.Баев, 1960; Д.К.Эрнст, 1990).

Цолъ и задачи исследования. Цель работы - изучить пути и способы ;тимуляции размножения вирусов, одноклеточных организмов и иивотных, закономерности ¿функциональной активности геномов прокариотов и эукариотов, используя для этого различные биологичес-

кие модели, а также изыскать биостимуляторы, активирующие функции их геномов.

Задача работы:

- изыскать биологические модели для изучения функциональноа активности генетического аппарата прокариотов я эукариотов;

- выяснить роль избыточности генетической информации в генетической регуляции геномов различит по сложности организмов и обосновать значение "молчащих" генов в механизме образования новых генотипов на различных структурных уровнях биологической организации;

- изучить реализацию генетической информации вирусной ШК у некоторых вирусов растений, морфологическую и биохимическую структуру их Еярионэв, разработэть новые пргнципн конструирования противовирусных вакцин;

- разработать генетико-инфорыациопный анализ процесса сборка некоторых бактериофагов и на примере ыалнх бактерлофзгов исследовать участки с неиспользованными цистронзма да гатях ДНК или РЕК этих фагов;

- изыскать повый способ фаготерапии бактериальных инфзкциЗ, вызываемых лекарственно-устойчивыми формами бактерий;

- изучить влияние активации рибосокалышх генов для подучэ- ■ ния рРНК прз воздействии ДМС на ооциты рыб;

- разработать новый способ ускорения процесса согенеза у животных с целью повышения плодовитости и получения экологически чистой продукция.

Научная новизна. Изучен процесс ахисгцгя разинохепия вирусов, прокариотов и эукариотов, оснований п:. реализации гене-

тяческой информация под воздействием биостимуляторов.Показано, что пассирование фагов в бактериальных клетках, изолированных при гнойно-хирургических инфекциях, - обеспечивает повышение их .оптической активности и сокращения сроков лечения ыонофага-ци (авторское свидетельство & 745.524 от 14.03.80). Установле--но стимулирующее влияние парааминобензойной кислоты (ПАЕК) и дтаетилсульфата (ДМС) на функциональную активность последовательностей нуювотидов в геномах (авторское свидетельство А 504.708 от 14.10.61; авторское свидетельство Л 1.076.051 от 01.11.83).

В структуре вирусов растений между числом белковых молекул е последовательностями нуклеотидов в геномах прякой корреляции це установлено. Показано, что геномы малых бактериофагов имеют мозаичную структуру. Цроведены количественные расчеты реализуемой генетической информации в геномах вирусов, фагов и ывкоплаза. Установлено, что для репликации метки УИ, /ьс-лиги3 важное значение принадлежит структурным белкам ывмброн.- т* "г сальным белкам, ДНК- и РНК-полиыеразе. Для самовосцроизы,.,».«1Я клетки мико-плазы необходимо не менее 33 видов регуляторных белков.

Отмечено, что иыыуноглобулиновые гены расположены в локусе ядришкового оргашватора. Явление индуцированной амплификации свидетельствует о возыоаности применения новых способов стимуляции напряженности иммунитета в организме животных. Установлено впервые явление индуцированной амплификации под влиянием биостимуляторов обуславливающее увеличение дозы гена в генетической апп&рате зшвотних. Показано, что использование ПАЕК для обработки икры рыб, стимуляции оогеиеза у роликов способствует получению экологически чистой продукции. (справка ШШГГО о приёме к рассмотрению заявки на открытие 15 2629 от 21.03.90).

Практическая значимость работа определяется возможностями использования фактических результатов и оригинальных методов в научных исследованиях а практике.

- Новый способ лечебного применения бактериофагов путём использования специфических монофагов с литической активностью усиленной 2-3-х кратным пассированием на питательных средах (мясо-пептонньгё агар или мясо-веятонный бульон) и адаптированных к микрофлоре больного, что позволило сократить срохи лечения боль-них гнойно-хирургическими инфекциями.

- Новый метод лечения лекарственно-устойчивых форм инфекция с помочь» фуразолинз позволяет значительно повысить эффективность лечепзя Сольных.

- Использован морфологическая тост, основанный на выявлении при млкрсскопзи удлиненных бактерий, как ноеыЗ морфологический показатель для оценка эффективности действия приме пяеиого препарата а кчигаке (например, эффективность действия на мпкроор-

фурозмпна).

- Способ получения рРНК при активация рибоссмальних генов, я рсз тугатс ?сзде2стввя Л1С на ооцига рыб.

- Способ стимуляции развития якры рыб при действия шззкпх концентрация ПАЕК.

- Разработан новый способ ускорения процесса ооггнвза в явч-рлгах к?о;пков путём внутрлмшечного введения кролика:« ПАЕК в дезе 500 мгр/кг.

х) Авторское сзгкг.:е: гги й 745.524 ва "Способ лечения гнойно-лягдтвчекеи инфант'."!'' обсечено знаком "Изобрвтэтзль СССР".

- Установлено явление индуцированной амплификации ядрышхо-вого организатора, сопровождающееся образованием большого числа дополнительных функционирующих ядрышек и резким увеличением ДНК в ядрах ооцитов рыб, носящим каскадный характер, т.к. через

' каждый интервал времени (2 ч., 4 ч. и 6 часов) содержание в яд-pai ДНК прогрессивно увеличивается. Эго свидетельствует об увеличении дозы гена в генетическом аппарате ооцитов живых организмов при действии минимальных (пороговых)доз биостимуляторов Ш1С. ЕШО.х)

- Апробация работы

Материалы диссертации доложены на Ученом Совете Института морфологии человека АШ СССР II мая 1973 г. ;

па 1У Всесоюзной конференции по бионике, АН СССР, Москва, 1973 т.;

на семинаре и совещании по созданию гибридных сортов сельскохозяйственных культур ка основе химического мутагенеза, АН СССР, 14 февраля 1980 г.;

на совещании -'химический мутагенез в повышении урожайности сельскохозяйственных культур, АН СССР, Ц0сква, 14 января 1981 г.;

на совещании - селекция технических культур на основа xîiîm-чеекого мутагенеза,' АН СССР, 15 яаваря I9S2 г.;

на Всесоюзном совещании по приыенаняв химического мутагенеза в селекции. АН СССР, 10 февраля IS83 г.;

на УШ Всесоюзном симпозиуме "Структура и функции клеточного ядра", АН СССР, 17 мая 1984 г.;

х) Значение наблюдаемой характерной морфологической картины увеличения количества и размеров ядрипек при воздействия биостимуляторов (ДМС, ПАЕК) - отмечено в резюыа Реферативного журнала ."Биология" АН СССР, 198а, й 4, с.52.

на IX Всесоюзном симпозиуме "Структура и функции клеточного ядра", АН СССР, 27 мая IS87 г.

Результаты диссертации опубликованы в 34 работах, включая раздел в "Руководстве по антибиотикотералии", M., "Медицина", 1964.

В тезисах докладов 7 съезда Всесоюзного общества генетиков и селекционеров им.Н.И.Вавилова, АН СССР, Москва, 1987 г., т.I,с.290. В резкие Реферативного журнала "Биология" АН СССР, в разделе: "яд-ршкоЕый организатор", I96S г., 4,с.52, в резше Реферативного журнала "Биология" АН СССР, в разделе: "мутагены", 1968 г.12, с.31-32, в журнале "йрирода" АН СССР, в разделе: "новости науки", 1989 г., а 2, с. ПО.

Структура л объем диссертационной работы. Диссертация представлена в 2-х томах, из которых 1-й то и состоит из введения, обзора литературы, пяти разделов собственных исследований, семи разделов обсуждения результатов исследований, заключения, выводов а практических предложений, а также приложения. 2-й том содерзит дополнения к главам диссертации. Список использованной литература э сгэтает 269 источников, в том числе 122 наименования работ ино-авторов.

Работа изложена на 320 страницах машинописного текста л содержит 64 рисунка (24 таблицы, 19 графиков, 21 микрофотография). .

соБстагнныЕ исследования

Материал методы исследования

Работа выполнена в 1.МСИ иг.Н.А.Семашко, d институте морфологии человека АМН СССР, на кафедре хирургия и травматологии 1-го ЬШ им.И.М.Сеченова, в ':;;стптуте эволюционной морфологии и экологии етг-отитх им.А.Н.Сс:, з соответствии с программой научно-псслсз-

доззггдьскдх работ на IS73-I983 гг.

На основании теоретических подходов и экспериментов изучены геномы различных по сложности организмов при использовании биологических объектов-вирусов растений (вирус огуречной мозаики, вирус широкой крапчатости бобов, вирус кёлтой козаики турнепса, Х-Еирус картофеля, вирус табачной мозаики - ВН.!) и вирусов хпвотных (вирус герпеса, аденовирусы), бактериофаги (стафилсфаг, стрептофзг, кзли-фаг, синегнопный и протейный фаги), кикоплазмы ( /Л. <<•: /VI,

■¿О.Ц-С'!^;; ), бактерии ( гЧа-Д^е«"^}. гсг«и,л.» -

сосс и>,, ^ .»с^гк.!-^ я; , Г г злы* I'".' с ..¡С Г:'-., и Я С IV« иляй Лг гц^и^и), икра карпов ( ^ ^ г-'^ саг-Со) и вьюков ( „ч'.'з-^«гаи«. ). ооциты вьюнов (/•'..'<*"."-< п-ч«//с,':ь) и кроли-

ков ( С11 чи^л01'.г.(й V-*! и., порода- шиншилла).

Объем исследований представлен в расчетах, формулах и экспериментальных данных с указанием числа различных по сложности организмов и необходимых материалов.

Для теоретического обоснования мозаичного строения геномов на различных структурных уровнях биологической организации были использованы полученные нами данные, подвергнутые последующей математической обработке с использованием методов' дисперсионного анализа. С учетом полученных материалов были установлены количественные показатели мозаичной структуры геномов прокариотов и эукарпотов, математическая обработка сопоставления между количеством белковых молекул, составляющих морфологическую основу изучаемых организмов, и содержанием нуклеиновых кислот в их геномах проведена методами математического моделирования, направленного на необходимость реализация генетической информация в геномах вирусов, миконлазм и ряда других организмов.

Для экспериментальных, исследований выяснения лекарственной устойчивости и механизма воздействия препаратов использовали антибиотики -стрептомицин и тетрациклин, препарат нитрофуранового ряда - Ф>каолин;

лечебные бактериофаги - стафилофаг, сгрептофаг, колпфаг, протейный . и синегноймнй фаги,, а для воздействия на ооциты животных -ДОС и ПАБК5^.

Бактериологические исследования производились с использованием мясо-пептонных и селективных питательных сред. Изучение морфология осуществлялось в гистологических препаратах, окрапенных метплгрюн-пиронином, галлоцианяном, обработанных ферментами ЛШ-азоЯ и ШК-азой. Лечебное применение бактериофагов осуществляли путем использования специфических монофагов с литической активностью, усиленной 2-х - 3-х кратнкм пасспровэнием на питательных средах (мясо-пептонннй бульон и мясо-пептонный агар) л адаптированных к бактерии, изолированным от больных. С этой целью в 4,5 мл. мясо-пептэнного бульона вносят 0,5 мл. того или иного фэга и 0,1 мл. выделенной от больного культуры, инкубированной до 3-4 г. в термостате при 37°С. Пассирование повторяют 2-3 раза. Титрование монофагов - определение зрелых фэгов з едг.Ц"Це объема (титр фага) проводили по методу Грациа (1936), основанному на ,'спользованкя агаровщ: слоев. Татр фага устанавливал;) подсчетом числя чегзпшяцх кслочяй. Иснофзгп использовал;! кестно в виде тампонов, 1.-ЛГГ:!КХ й ГТНу, ИДЯ Ял ПрйМеНЯЛЛ ДЛЯ ЩРЯДОНГЛ гнойной полости.

Б."» .т; ?слоггчесг.ое псследсгэпле лрэгодзди путем выделения лозбу-■ Га. .о? солхчых гнойяо-хирур!ячеекгкя вн^еюп.г/з при посеве, взятого «эгервзла (содержимое рзны) на искусствечные .питательны' •¿рех.ч с гсследуюгак определением чувствательностя г. фуразоллну. Гл"! рзз^Соткв нового способа лечения гноино-хирургяческих инфекций •• ' ¡.'делено от вольных 240 ктгммов бактерий (ста?ллококков, стреп-■ ";,,'кв, энг-ерококкоэ, эасрахиЯ, протея и свнегнэ^ноЗ палочка). !'лволзцвошше йорыи б®ктерр2 изучали методом поэтапной фэзово-конт-рэс?:;пя микрост'.оп:1/ . 1 у'-.^щых стадиях развития бектерлй с учетом "¿¿г- т. аз мор^эг^"] ^зь-еров клетки до устранения -фактора, дей-

' •■ -с лэ микроор;....!'!зм (антибиотик) и после культивирования нэ '.':.'. : ергду, пч со черта.:'".! те тег. '„.'кллн.

- диуетису/ьфлт, ПДМ - .лргг'.чг^енсоКная кислота.

Исследование структур ооцитов рыб к кроликов, включая ядерно-ядрышковый. аппарат, производили с использованием цитохимических методов. Локализацию Р:ц{ е цитоплазме и ядршках ооцитов определяли цитохимическими методами .ислользуя окрашшэкие метилгрюн-пиронином по Браше. и галлоцианином по Эйнарсону. Эксперименты проведены в 3-х ¡фатиой повторности на группе вьюнов, включающей 200 самок. Всего -600 самок-вьюн?в для изучения морфологических структур ооцитов. 3 целом опыты проведены на 1200 выонах-сакках,из которых 600 самок-вьюнов были использованы для биохимических исследований,причем подопытные и контрольные рысы были в равных количествах. Вьюнов экспериментальных партий подвергали воздействию ЦЛС в концентрации 10 в течение 6-ти часов, затем их подвергли убою. Яичники удаляли и фиксировали в жидкости Карнуа я Ценкера. Цитофотокетрическое исследование - толщину срезов измеряли с помощью интерференционного микроскопа модели"¿ЯВИ-2".

Для последующей цитофотометрии РНК использовали препараты, окрапенные галлоцианлном. Количество РНК оценивали спектрофотометрически на однолучевоы микрослектрофотоыетре фирмы "Рейхерт".

Микроспектрофотометрию проводили в максимуме поглощения гэллициа-нина при длине волны света 575и глоцади зонда Выбор плоца- ;

ди зонда определяли размерами ядрыиек и морфологическим особенностями социтов. Определение концентрации РНК производили на единицу площади изучаемых социтов рыб. Число замеров для ядрыше и площади цитоплэз-; мы социтов составляло 10 на один препарат. В каждом случае вычисляли среднюю-концентрацию РНК. С этой целью в каждом наблюдении производила,

распределение показателей величины плоцади цитоплазмы социтов на груп-

р

пы.располошшио в пределах 1-2 мкм . Среднее содержание К1К в условных единицах для ядрышек и цитоплазмы, равное произведению оптической плотности ва среднюю площадь ядрышек л цитоплазмы социтов, определяли по формуле = Ч = Сср • 5 ср

Суммарное количество ДНК и РНК опрбдалчли по методу А.С.Сд.;;),-:а (1958) с использованием двухволновой спектрофотометры.

Дня изучения симуляции выхода рРНК в ооцитах рыб под воздействием ЩС исследовали все классы молекул рРНК-455РКК, 28$ РНК, 18 5 РНК, 5S FKK методом электрофореза в геле агарозы. Достоинством метода служит то, что под воздействием электрического поля макромолекулы рРКК, находяциеся в буфферном растворе в геле, содержащемся е стеклянной трубке, мигрируют в зависимости от величины зэртдз п размера с различной скоростью. Образующиеся зоны одинаковых макромолекулы, прбдставлявдие собой отдельные классы рРНК, перемещаются в геле к положительному электроду. Классы рРНК еыязляли окрашиванием метиленовкм сиял; и сканировали в спектрофотометре "Сатон" с оптической приставкой для цилиндрических гелей. Морфологические изменения ооцитов регистрировали цветными и черно-белыми микрофотографиями.

Б другой серии спкгов изучали морфологические изменения в ооцитэх кроликов при действии ПАЕК. Эксперименты проведены на С,О крсл^/лх-анэлогах по возрасту и глвой массе, разделенных на та с равных подгруппы - контрольную и опытную. Подопытным кивот-н;"' риутрвкквечпо вводили ПАЕК в дозе 500 игр/кг однократно чз-ï-hi дис. з течение двух недель. Затем производила убой лод^гат->;т: у. ксагрслькых кроликов. Препараты для Г>!ст0-х;клч5склд т<о-следсзаний готовили по указанной sinre методике. Исследования ш-•т-лхчлись л 3-х кратной пэвторности.

Стимулирующее действие пзрэа?шпобепзойно2 кислоты изучат " икры ркб карпэзых пород (карпы, вьюны) на стадии 2-х

.'.т: стокеров. Обработку производили растворе:.: ПАЕК в концентрации 12-16 игр/гдл, i -.еразванке в растворе производили до выклвва -^г: гути та кок. С:- ?.••.-> йлэстсмеров оптимальна для наблюдения 1 т результатами зяала.ш врепарата на эмбриогенез. Инкубация

икры карпа производили при температуре 22° в небольших танках емкостью 3 л. Использовали отстойную речную воду и постоянную подачу воздуха. Контролем инкубации служила икра, находящаяся в ' аналогичных условиях, но не подвергшаяся обработке ПАЕК. В данном опыте в условиях использования ПАЕК массовый выклев жизнеспособных эмбрионов карпа наблюдали через 72 часа, а в контроле - через 81 час. Выклюнувшихся эмбрионов пересаживали в проточ-•ные ванны емкостью 200 литров. После перехода на активное питание рыб выпускали в мальковые пруды рыбоводного хозяйства.

Практическое применение предложенного наш способа стимуляции развития икры рыб обеспечивает получение значительного экономического эффекта за счет ускорения эмбрионального развития икры на стадии выклевз предличинок. Сокрэаение рабочего времени инкубации в связи с этим составляет экономию в среднем на одно рыбоводное хозяйство за сезон - 6.400 руб. Учитывая важность развития рыбоводства в СССР, предлагаемый способ имеет и всесоюзное значение. Использование предложенного нами способа стимуляции развития И1фы рыб позволяет повысить экономичность процесса инкубации И1фы рыб, упростить его, ускорить эмбриональное развитие икры на стадии выклева предличинок.

Нормативно-технические данные и расчеты экономической эффективности полученных результатов получены при использовании ряда формул.

Ежемесячную сумму экономического эффекта от применения ио-нофагов при лечении гнойно-хярургических инфекций устанавливали в соответствии с расчетом, произведенным по методике определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытпо-кокся'руктор-

ских работ новой техники, изобретений и рационализаторских предложений, утверздвнной заместителем министра XX СССР тов.Н.А. Столбулкиным 26 февралч 1979 г. (Москва, Изд. "Колос", 1980 ) Расчет произведен по формуле:

5 = (Сб + 76) - (Сн + Ун) • Ан,

где: Э - искомая сумма фактического экономического эффекта; Сб, Сн - удельные суммы затрат по вариантам; Уб, Ун - удельные суммы экономического уцерба по вариантам. Для определения экономического эффекта при практическом применения прадлохенкого нами способа стимуляции развития икры рыб расчет произведен по формуле дисперсионного анализа:

Су = Сх + Сг (Н.А.Плохинский, Биометрия, Изд. МГУ, 1970). Ери дисперсионном анализе осуществляется определение еяли я достоверности влияния одного или нескольких факторов на изучаемый результативный признак. В однофакторном дисперсионном комплекса рассчитываются три дисперсии: факторальная - Сх, случайная - Сг. 1 оОиЗ". - Су. И, наконец, предполагаемый экононаческий эффект пгта/лтпиЕ гс;чкеза у кроликов под воздействием ПАЕК определяли с ферчулб, устанавливающей силу влияния фактора в дисперсионном а.ашшзе, которая исмеряагся отнесением дисперсий (частных а общей) :

Г)2 _ СI Су

т. а: - показатель влияния факторов;

О ^ - дисгарслл одного из изучаемых влияний. •{И.Л.Нюхянскиа. Г" гг.и.ч". Изд. МГУ, 1970).

1С

Как известно, дисперсией называется наличие разнообразия в группе (например, животных) и устанавливает саму меру, которая обуславливает величину этого разнообразия. Использование представленных формул для расчетов экономического эффекта, полученного от практического применения разработанных нами новых способов активизации размножения различных по сложности организмов, позволяет дать правильную количественную оценку получениях результатов реализации этих способов.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕОВАНК:

Реализация генетической информации вирусных РНК у

некоторых вирусов растений

Одниы из этапов разработки проблемы избыточности генетической информации было исследование этого вопроса для некоторых вирусов растений. Современные метода изучения С~'.''остей вирусов растений позволили не только дать точный бионический анализ лх структур, но и изучить пространственное расположение составляющих их белковых субъединиц (Т.И.Тихоненко, 1966).

С помощью этих методов удалось получить данные для расчета избыточности генетической информации у некоторых вирусов растений б, хотя дальнейлая расшфровкэ структурной организации многих вирусов продолжает уточняться, уже в настоящее время эти данные цокло считать достоверными для некоторых групп вирусов, например, для растительных (И.Г.Атабеков, 1972).

Наибольшее внимание исследователей привлек вирус табачной шзс.;:кд, изучение которого в молекулярной генетике было наиболее тщательным и интенсивным (И.Г.Атабеков, 1987).

В соответствии с полученными данными в результате исследований этих вирусов можно рассчитать количество нуклеотидов, составляют РНК вирусов растений.

Ь результате сопоставления длины участков генома вируса, ко-дируючкх белки его структур, с количеством всех кодируемых белкой вариона вируса устанавливают величину избыточности в его гоноые, например, пятикратную избыточность установили в геноме вируса широкой крапчатости бобов, для генома х-вируса картофеля избыточность была десятикратной.

Подобные расчеты, в силу их универсальности, могут быть использованы и при исследовании характера реализации генетической информации у других вирусов с более сложным строением, включая и вирусы животных.

Структурные и биохимические особенности некоторых

бактериофагов

При анализе рассматриваемой проблемы для некоторых бактериофагов мы столкнулись с близкими по своему характеру результатами расчетов избыточности генетической информации, что и 'в исследованиях на некоторых вирусах растений. Для этого по литературным данным учитывались и структурные особенности изучаемых бактериофагов (Б.Ф.Поглазов, 1970).

В результате аналогичных расчетов для бактериофагов следует также сделать ряд выводов о наличии избит;, .кости генетической информации. Наиболее реальными являлись подсбгае вычисления для ряда малых фагов, в геноме которых обнарухеис. всего линь несколько генсБ. К числу подобных фагов следует с-;..-.' гтн ф х 174, М52.Я-17, с детально изученной белковой структур:;- подробно составленной генетической картой генсмэв (Т.И.Тихо1 -ипсо, 1977).

Уже в настоящее время можно довольно четко использовать необходимые показатели по этим фарам для соответствующих расчетов избытка генетической информации.

Среди перечисленных выше фагов следует указать на особеннос-тж генома фага ф х 174, в котором присутствует тесть генов, при наличии трех генов, участвующих в синтезе белка, причем роль двух генов связана, как известно, с кодированием минорных белков (Ь.Ф. Поглазов, 1970). В результате сопоставления общего количества генов, равного шести, в геноме бактериофага ф х 174 .с количеством генов, участвующих в синтезе белка (три гена), получаем двухкратную избыточность генетической информации в геноме этого фага. Остальные гены фага ф х 174 ответственным, согласно современным представлениям в генетике, за другие метаболические процессы при взаимодействии фага с микробной клеткой (А.С.Тихоненко, 19Ь8).

Остальные из указанных бактериофагов такке могут служить примером наличия избыточности генетической информации в их геномах, так как из нескольких генов, входящих в состав их генома, только два являются структурными, если учесть и наличие гена, кодирующего минорный белок этих фагов (Б.4.Поглазов, 1970).

Прочие гены (три гена, как уже отмечалось, у фага ф х 174 и по-одному гену у фагов Щ2 и&17) участвуют в процессах, осуществляемых в геномах этих фагов н связанных с их ролью при разшо-кении фагов в клетке, в ее лизисе и в других явлениях онтогенеза, регуляции синтеза белков и сборки у бактериофагов (Б.Ф.Пог. азоз, 1970).

Анализ результатов ыорфологнческого изучения фотов ко данным Б.Ф.Поглазова, Т.И.Тихоненко, А.С.Ткхоиеиг.о позволил раорабо-т&ть новый способ лечения гнойю-хирургичесицх гафокцвй jryre.ii адаят£!',яа н кдаенсификациа. розшожсикя фг.гов в баж?€' •

клетке возбудителей этих инфекций (авторское свидетельство * 745524).

Особенно актуальным для практики ветеринарии и медицины явилось создание новых препаратов различных монофагов при разработке предлагаемого нами с особа лечения гнойно-хирургических инфекций.

Реализация предлагаемого нами способа осуществлялась при клиническом применении непроизводственных серий полифагов, а при использовании монофагов, полученных в результате адаптирования исходных фагов к атампаы возбудителей, выделенных от конкретных больных.

Адаптация фагов нами производилась з условиях клинической баклаборатории путем усиления литической активности раз ичных монофагов посредством их 2-8-х кратного пассирования на жидких и плотных питательных средах.

Для этого от больных с абсцессами, флегмонами, маститами, карбункулами, остеомиелитами и другими хирургическими заболеваниями выделяют возбудителей из раны и среди испытуемых фагов (стафилофаг, стрептофаг, колифаг, скнегнойный и протейный фагн), отбирает наиболее активные клоны, а затем литическал активность отобранных монофагов усиливается путем пассажей на выделенных отданного больного возбудителях.

Микробиологическим! исследованиями было установлено, что выделяемые бактерии-возбудители у одной группы больных состояли преимущественно из патогенного стафилококка (до 80% случаев), а в 2С* случаев в той же и другой группе отмечалась смешанная инфекция. Зто было либо сочетание патогенного стафилококка и килечной палочки ( В. Сл>£ь ) или протея ( Ргс.^'д: \Atj2o.)* либо пато-

генного стафилококка ( и^пл ) и стрептококка

Ссссиб ). Ьажно также отметить, что большинство выделенных возбудителей были лекарствеккоустойчивыми формами бактерий.

Ьот почему, наряду с определением чувствительности возбудителей к антибиотикам бакже определялась степень фаголизиса этих же возбудителей в отношении тех же бактерий, которые нали использовались для лечеиия хирургических больных.

При этом было установлено, что все лекарственноустойчивые штаммы бактерий, выделенные ст больных, оказались чувствительными к применяемым препаратам монофагов, в то время как производственные фиги лизировали те же бактерии только в 65» случаев. Б результате клинического анализа эффективности лечения этих больных с учетом обеих групп по ЗС человек каждая Ц-я группа - лечение монофагами, 2-я - производственными фагами) было установлено, что лечение монофагами, полученными в условиях клинической б&клабора-тории, приводит обычно к более быстрому течению рантого процесса. При раневых инфекциях средней тяжести курс лечения монофагами не превышает 3-4 недели.

Все это позволяет широко использовать предлагаемый споссб лечения в условиях многих хирургических стационаров, тем болое, что -основой для получения ыонофагов могут служить препараты производственных фагов, выпускаемых бакинститутами наией страны.

Таким образом, генетико-информационньй анализ процесса сборки некоторых бактериофагов группы малых фагов квнлся по сути дала моделированием для последующей разработки метода получения ыонсфагов уке из группы бактериофагов, применявши: б клиника. Причом основные результаты, полу«¿¡сшз при изучении генома &хххх, фагов, были реализованы для повышения литическоЯ активности другие фйт-ов пра их клиническом сраывиешш.

Структурно-функциональные показатели морфологии и особенности геномов микоплазм и бактерий

Исследуя реализацию генетической информации на субклеточном уровне биологической организации (вирусы растений, бактериофаги, вирусы животных и человека), нам удалось сделать выводы о нали- • чии избыточности генетической информации в гономах некоторых изучаемых вирусов (Б.5.Поглаэов, 1970, Т.И.Гихоненко, 1Э78).

Несомненно также и то, что еще больпув трудность представляют исследования структурно-функциональных особенностей генетического аппарата млкоплазм и бактерий (Г.З.Коромыслов, 1Э87).

Согласно современным представлениям б биологии, микоплазмы могу? служить модельо минимальной автономной клетки, способной к самовоспроизведение, причем геном микоплазм содержит минимальнее количество ДНК на клеточном уровне биологической организация ( Л1. Жогъ^пЬЗ ).

Детальное исследование генома микоплазм показало, что в ссс-их генетического аппарата входят 637 генов (¡4. Аоггйп. ¿«2 ) пт'гпем !!сью выявись разлитые в функциональном отношении грутти •. итус-'оз. "содируящих белк:: различного назначения (регулаторные и '.:оакспср'.,гае блоки, а так:.'е фермента промежуточного обмена и ол.кл самовоспроизведения клетки). Цистрсны, яодирувщие указан-г.!« белки, виполшэт вадауо генетическую программу, с которой ::менлс и начинается биосинтез белк с л з клетке.

^аверяает реализация генетической информацгл процесс редупликации ДНК и последующее деление клеток на две дочерние юхатиз.

Для лзуче-.-езрукгурных особенностей микоплазм необходимо ог" • и? кол ю различных типов белков изучаемого вила • лоплазм ( Д. ), с учетом превде всего тех видов

белковых молекул, которые можно отнести непосредственно к системе саиопроизведения клетки.

Естественно, в этом перечень не во9дут как ферменты проме-ауточного обмена, так и пермеазы, локализованные в мембране клетки и выполняющие функции транспортных белков, т.е. все те белки, которые не участвуют непосредственно в системе самовоспроизведения клетки.

Интересующие нас белки системы самовоспроизведения данного вида микоплазм - это ДНК-полимеразг1, РНК-полиыераза, рибосомаль-ные белки; к этому перечню можно добавить также и такие белки, как структурный белок мембраны клетки, белки для инициирования трансляций и ряд других белковых молекул. Всего к системе самовоспроизведения микоплазм (относящихся к человеческому типу) согласно представления« в молекулярной генетике, мокко отнести 85 типов различных белков (.',1 /iic.~cv/:'tr, 196Э).

Кроме; того, для процесса синтеза белка ' пол системе самовоспроизведения микоплазм человеческого типа ноиоходимо иметь не менее 33 регуляторных белков, если исходить из того, что на один оперон приходится три с половиной цистрона ( Л1. /hcrowitX , 1969).

Используя имеющиеся данные о первичной структуре и локализации в геноие участков, кодирующих один вид белка, mozho установить затем общее количество ДНК, содержащееся в геноме того пли иного вида клеток микоплазм.

Tai-, по данным Д Alc.<-QW>-kjL , это количество равно 75 х 10^ дальтон, а по более точным расчетам (Р, Jt'ür-toi, 1968) оно составляет 8 я 10 дальтон ДНК, так как согласно этому расчету информационная РНК гистидионного оперона сальмонелл, кодирующего 10 ферментов, имеет молекулярный вес 4 х 10® дальтон ДНК.

Таким образом, для кодирования 118 различных типов белковых молекул потребуется около 100 х 10^ дальтон ДНК, если учесть еще и количество ДНК, которое кодирует тРНК и рРНК.

Для определен;:! количества ДНК, которое приходится на "молчащие" гены, необходимо разделить все количество ДНК, составляющего генои этого вида кнкоплазм, равное около 500 х 10^ дальтон ДНК, на количество ДНК, необходимое для кодирования 118 различных видов белковых молекул, а также на количество ДНК, необходимое для кодирования тРНК и рРНК (это составляет в общей сложности количество ДНК, равное 100 х 1С*3 дальтон ДНК).

3 результате деления первой величины (500 х 10^ дальтон ДНК) на вторую величину (IOC х 10^ дальтон ДНК) получаем пятикратную избыточность генетической информации в геноме искомых микоплазм.

Зсе это дает основание сформулировать важный для современной генетики вывод о биологическом смысле существования такого рода избыточности, обусловливающей последовательность и соподчинение генетических программ в геноме микоплазм.

Исследование структуры генетического аппарата у бактериальна организмов связано со значительно больаей сложностью его до срав!1Ен:-э с геномом микоплазм. что обусловлено, как извесно, наличием разнообразного количества копий генов в геномах бактерий, а такте сложной морфологией бактерий, которая нами детально ис-елед'jзалась по литературным данным (А.А.Имшенецкий, 1984).

Для изучения путей морфологической изменчивости бактерий тисков применение получили различные факторы: антибиотики и дру.ч-.-э химиопрепарагы.

В сеязи с этим кагч был разработан морфологический те^ст, ссноваяза-й на вияеяс' >i вмененных нитевидных форм бактерий с по--! írranccarp-э'Л i, \тароскопа. При этом использовалось дей-

ствие суббактериэстатическо» дозы тетрациклина на еинегнойные палочки ( асх-^'л.), которые регистрировали в препа-

ратах разделенной капли испытуемых бактерий в бзговокэнтрэстном микроскопе.

Близкие по результатам данные были получены и при исследовании действия суббактериостатической дозы (¿уразолкна на штамм кишечной палочки (6 СсА ).

Бее это позволяет сделать соответствующий вывод о том, что при изучении сложной структуры бактерий использование простого и доступного метода, основанного на регистрации морфологических изменений у бактерий с помощью фазовоконтрастного микроскопа для определения степени изменения синтеза белка в рибосомах бактерий, является одним из возможных подходов для изучения процесса стимуляции размножения бактерий.

Изучение морфологических особенностей штаммов синегнойных бактерий и килечной палочки, особенно лекарственноустойчивых форм этих микроорганизмов, важно сочетать с выявлением плаэмид, контролирующих резистентность к лекарственным препаратам.

Если изучить первую часть указанной задачи, обусловленной необходимостью решения практических вопросов в клинике в связи с распространением лекарственноустойчивых форм бактерий, играющих важнейшую роль в этиологии инфекций, то очевидна необходимость разработки методов преодоления лекарственной устойчивости бактерий.

В связи с этим представилось целесообразным с практической направленностью использовать методы преодоления лекарственной устойчивости возбудителей инфекций для эффективного лечения в клинике, в частности, химиопрепаратами(<£ураэолин и др.). Наряду с изучением реализации генетической информации в гено*гх ^«х-рий

/

предполагаемая нами модель позволила при клиническом использования тех же препаратов дать правильную оценку их эффективности в отношении тех же возбудителей, выделенных от больных, при разработке способов преодоления лекарственной устойчивости исследуемых нами возбудителей в клинике.

Изучение морфологии бактерий с выявлением полярных гранул цитохимическими методами в сочетании с иммунологическим тестом позволило выяснить некоторые аспекты механизма действия сернокислого стрептомицина.

Биологические модели (михоплазмы и бактерии), изучаемые нами на клеточном уровне организации, позволяют сделать необходимые обобщения, имеющие важное научное и практическое значение и преэде всего для разработки путей стимуляции размнояения одноклеточных организмов на основании детального морфологического исследования составляющих их структур.

Важным практическим выходом является и разработка эффективного способа лечения лехарственноустойчивых форм инфекций, преодоление которых стало возможным благодаря интенсивному размножении чувствительных к препаратам видов возбудителей этих инфекций.

Экспериментально-морфологические исследования действия дкметилсульфата (ДМС) на ооциты вьюна и действия пара-аминобензойной кислоты (ПАБК) на ооциты и гепатоцитм кроликов

Используя способность к лабильности ядерно-ядрызкового аппарата клетки, ксто^чЛ может изменяться под влиянием различных факторов, мы з си. исследованиях руководствовались укэ изаест-пш *лнсменом 'рРНК на матричных ДНК ядрызжовых организа-

?0{->? • причем в сел: р:"5осо.чах затем ассоциируются рРНК о рпбо-

2 е

сонными белками. Кроме того, именно в ядрыажовом аппарате, как известно, локализованы копии генов, которые ответственны за реализацию дополнительного количества генетической информации (Ю.С. Ченцов, В.С.Поляков, 1974).

В связи с этим, только благодаря морфологическим исследованиям, представлялось возможным наиболее точно выяснить структурные изменения ядрышковсго аппарата ооцитов у животных и правильно обосновать изменение содержания нуклеиновых кислот (РНК; ДНК) в изучаемых структурных ооцитов у рыб и кроликов.

Поскольку ядрышко является местом синтеза рибосом и локализации копий генов, то изменение содержания р?НК в них при действии различных факторов мокет быть показателем изменений генной активности в геномах различных по сложности организмов.

В результате исследований, которые трехкратно повторялись, в опыте у вьюнов выявлены ядра ооцитов угловатой или полигональной формы, образующие иногда значительные выросты, содержащие ядрыш-ковый материал. Отмечается также значительное увеличение количества ядрышек в ядре.

Как показали измерения диаметра ядер и ядрышек, у 100 подопытных и 100 контрольных животных из расчета 100 ядер на препарат, .в ядрах ооцитов вьюнов из опыта ядрышки увеличены.

Изучение, сравнительных размеров ядрышек в ооцитах вын;з. в контроле и опыте (т.е. после действия ДМС), позволило выявить рад определенных особенностей. Оказывается, что наряду с почти двухкратным увеличением общего количества ядрнвек увеличивается и их равиор. Например, в опыте ядрышек большего диаметра в 11,2 раза больпо, чем в контроле, а ддрьшек среднего и малого дпаяетрп в опыте а 2 pasa больше, чем в контроле. Данные* по мь-.чру • змс-

ров ядрьгаек и соотношению этих размеров в контроле и опыте приведены в таблице I.

Таблица I

Размеры ядрышек ооцитов вьюна при воздействии ДМС и в контроле

Показатель Диаметр ядрьгаек (ммк) Общее количество ядрышек, шт.

более 40 30-40 20-30 1 2-20 9-12 менее 9

Опыт 1120 3280 4000 5900 7190 9310 Зи8СО

Контроль" 100 270 1720 2080 3450 4200 12420

Примечание: В опыте и контроле микроскопировалось по 100 препаратов.

В то время, как в контрольных препаратах ядрышки в ядрах ооцитов расположены по всему ядру, в опыте ядрышки занимают, в основном, периферическое положение. Секреция ядрышек в этих ядрах выражена сильнее.

'Кроме воздействия ДАЮ на ооциты. вьюнов был нспользован как биостимулятор парааминобензойнал кислота (ПАЕК), обладающая витаминными свойствами. Как уже отмечалось, этот препарат вводили кроликам (самкам) внутримышечно в дозе 500 мг/кг веса животного. Представляется интересным отметить, что в препаратах ооциты подопытных кроликов находились либо в 1-ой стадия созревания, лкбо в 4-й и тем самым было зафиксировано резког ускорение самого процесса согенеза в яичниках кроликов под вл -.чиеы ПАБК. Несомненно, что установленный нами феномен имеет непсс/'Здствегиое отноиение к стимуляции раэдоокенкя у зивотиых. Ешт т <кжз показано, что ядра ооцитов подопытных кроликов пмеят час о утлопатую кля поли-

тональную форму» образуя иногда значительные выросты. Используя гистохимические красители (метил-грюн-пиронин при окраске по методу Бра.ие), удалось выявить, что количество РНК в ядрышках и цитоплазме ооцитов у кроликов после действия ПАЕК в своем содержании резко возрастает (по данным гистохимического анализа).

Не менее специфические изменения наблюдались и в печеночных клетках у кроликов при действии ПАБК. Зарегистрированные морфологические особенности ядер в этих клетках позволили отметить феномен удвоения и утроения ядер при действии ПАБК, чего в контроле не наблюдалось.

Таким образом, наряду с увеличением размеров ядрышек и другими морфологическими изменениями в клетках у кроликов наблюдается и определенный сдвиг в синтетических процо^с&х, происходящих в этих клетках.

Экспериментально-морфологические исследования ооцитов вьюна при действии на них ДМС позволяют сделать вывод о том, что увеличение количества и размеров ядрышек при одновременном увеличении в них концентрации РНК и при близких изменениях в цитоплазме ооцитов связано с определенными сдвигами в обменных процессах .клетки, которые при этом значительно интенсифицировались.

Наблюдаемые факты позволяют предположить, что явления, связанные с увеличением ядерно-ядрышхового аппарата в клетке обусловлены процессами реализации избыточной ядерной и цитоплазкати-чьской РНК.

Проведенными исследованиями было установлено, что в ядерно-ядрышковом аппарате клеток, подвергавшихся действию ДИС и ПАБК, возникают очень существенные изменения как в собственных размерах ядер и ядрышек, так и в процессах синтеза, происходящего в

клетках. Отмечается тенденция не только к увеличению обшего количества ядрышек, но и к увеличению их размеров.

Экспериментально-биохимические исследования ооцитов вьюнов при действии на них ДМС. Новый способ стимуляции развития икры рыб

целенаправленность использования экспериментально-биохими-ческкх подходов вполне очевидна для реаения принципиальных вопросов изучаемой нами проблемы, поскольку рибосомальная РНК имеет непосредственное отноаение к инициации белкового синтеза, а ядрышко служит местом сборки клеточных рибосом и их предшественников. Именно благодаря активации рибосомальных генов можно целенаправленно воздействовать на процессы синтеза РНК в хромосомном аппарате клетки (Е.С.Ченцов, З.Ю.Поляков, 1974).

Кроме микроспектрофотометрических исследований яйцеклеток нам представлялось целесообразным выполнить и биохимические эксперименты по изучению индиввдуальных классов молекул рРНК.

Было установлено, что при воздействии ДМС на ооциты вьюна возникают резкие различия в концентрации РНК цитоплазмы и ядрышек ооцитов вьюнов в опыте по сравнении с ооцитами контрольных групп (табл.2).

Таблица 2

Изменение концентрации РНК (в относительных ед.) в цитоплазме и ядрышках ооцитов вьюна при воздействии ДОС (окраска по Эйнарсону)

_Цитоплазма_;____Ядрышко_

__Статистические показатели (Сор.)_

СорТ + + Со?". + +

Контроль

0.354 0.031 0.01 0„213 0.07 0.002 (продолжение табл.2 - сто', о)

Опыт I.173 0.006 0.021 0.489 0.0312 0.01

Соотношение показателей

^оп. ^кон. 3.31 2.29

Концентрация РНК возрастает в 3.31 раза в цитоплазме ооци-тов вьюнов в опыте по сравнению с концентрацией РНК в контроле.

В то же время в ядрышках этих же ооцитов концентрация РНК увеличивается В 2.29 раза в отличие от того, что наблюдается в контроле.

При сравнительном изучении разности значений оптической плотности РНК цитоплазмы и ¡дрышках ооцитов вьюна после воздействия на них ДЖ до и после обработки препаратов РНК-азой, были получены весьма демонстративные данные, свидетельствующие о резком различии показателей оптической плотности РНК г -тят».* этих групп вьюнов до и после обработки препаратов РНК-азой ¡.^ . опоставлении препаратов опыта с препаратами контроля (табл.З).

Таблица 3

Сравнительные величины разности значений оптической плотности РНК цитоплазмы и ядрьгаек ооцитов вьюна при воздействии ДМС до и после обработки препаратов РНК-азой (окраска по сйнероону)

цитоплазма_Ядзддко

Статистические показатели

■ Сер. + + Сер.

Контроль 0.1 0.030 0.01 0,075 0,007 0.002

Опыт 0.S76 0.066 0.021 0.274 0.031 0.01

Соотношение показателей

Соп. Скон. 8.76 3.65

Из таблицы 3' следует, что разность показателей оптической плотности РНК цитоплазмы ооцитов вьюнов в опыте в 8.76 раза превышает разность показателей оптической плотности РНК цитоплазмы ооцитов контрольной группы еьюнов до и после обработки препаратов РНК-азоЙ.

Сопоставление разности значений оптической плотности РНК для ядрыяек ооцитов контрольной группы вьюнов и группы в опыте показывают, что значение указанной разности для ядрышек в опыте в 3.65 раза больпе, чем для ядрыяек ооцитов контрольной группы.

Спектофотометрическое определение суммарного количества ДНК по методу А.С.Спирина также зафиксировало его увеличение через определенные интервалы времени (2 ч., 4 ч., Ь ч.) после воздействия ДМС. Все это позволило установить новое явление индуцированной амплификации в ядрах ооцитов, сопровождающееся увеличением дозы гена в генетическом аппарате ооцитов животных.

При последующих расчетах площадей на графиках сканирования в спектофотометре индивидуальных классов рРНК было показано, что участки геля опыта с полосами 28$ РНК, 18 S РНК, 55 РНК намного превышали соответствуйте участки полос контрольного геля (см. табл.4).

Таблица 4

Относительное увеличение содержания РНК (в %) под действием ДМС

Классы рРНК

45 S 28 S

18 5

5S

Нситроль

10.4 21.5

4.2

31.8 7.3

70.5 23.0

411.9%

335.61% 206.08%

зг

Следовательно, используя метод биохимического анализа указанных классов молекул рРНК методом электрофореза в геле агарозы, мы получили распределение РНК, свидетельствующее о повышении содержания под действием ДМС - 285 РНК, 185 РНК, 55 РНК, которые были выявлены и в контроле, а такке наличие 45S РНК в опыте. Следует отметить, что увеличение фракции 55 РНК под действием ДМС указывает на одновременную стимуляцию генов, не входащихвсостай ядрышковсго организатора.

а

График I. Классы рРНК при сканировании ко...,.■ ъного геля после электрофореза.

1S

График 2. Классы рРНК при сканировании опытного геля после, электрофореза.

Таким образом, использование мутагена может вызвать сти-муляционный эффект. При сопоставлении использованных нами методов было показано, что ДМС приводит к усиления биосинтеза в ооци-тах вьюна. Одновременно активизируются гены рибосомальной РНК и гены, с которых идет считывание 55 РНК.

Эффект в ядрьшках ооцитов рыб, возникающий при действии ДОС, имел значение для разработки способа резкой активизации синтеза .рРНК.

Отличительной особенностью предложенного нами способа является то, что ооциты рыб перед гомогенизацией помещают в воду, добавляют ДМС в концентрации от 3 х 10"* М до 3 х 10"^ И и выдерживают их в течение 4-6 часов.

Предлагаемый способ получения рибосомальной рибонуклеиновой кислоты отличается простотой и через 4-6 часов позволяет увеличивать все фракцкирРНК в анализируемом материале (авторское свидетельство » 904708).

В основе разработанного изобретения для получения рРНК лежит выявленное нами новое явление индуцированного воздействия биостимуляторов на различные структуры ооцитов у жисотннх.

Весьма перспективной оказалась такяе разработка способа стимуляции развития икры рыб (авторское свидетельство 1076051), реализация которого непосредственно связана с решением задач Продовольственной программы СССР. Б.Машипток (1950-1951) первая выполнила вакные исследования, посвященные подвижным элементам генома, что является одам из интересных направлений в молекулярной биологии наряду с другими возможными напг .лениями. Так, при действии низких концентраций ПАШ удалось поу чить стимуляцию развития илри у карпа я вьюна (табл.5,6).

Таблица 5

Показатели концентрации ПАШ, вызывавшие стимуляцию развития икры у карпа (мг/литр) при температуре воды 20-22°С

4 мг 8 мг 12 мг 16 мг 24,5 контроль ~

ilAbli • отст. прототип

вода смесь антиоксид антов-токоферола. • убкхинсна по примеру I в прототипе

Бремя эмбр. 81-34 разв. в час 76-78 71-78 70-72 76-78 81-84 ч. 78-84 ч.

% ускор. эмбр. 0% развития 5-7% 9-14% 10-1555 5-7% 0%

Таблица 6

Показатели концентрации ПАЕК, вызывающие стимуляцию развития икры у вьюнов (мг/литр) при температуре воды 17,0-17,5°С

4 мг 8 мг 12 мг 16 мг 24.5 контроль Контроль -ПАЕкд. "" отст. прототип

вода смесь антиоксид антос-токоферола, убихинона по примеру № I в прототипе

Бремя

эмбр. 81-84 76-78 71-73 70-72 76-78 81-84 ч. 79-6«. ч. раз в. в час

% ускор.

эмбр. 0% Ъ-7% 9-14% 10-15% 5-7% 0% развития

Интересные результаты получены л.К.Зрнстом^В.Н.Бахаревым, Л.П.Дьяноновым и В.А.Сергеевым ("Способ культивирования ооцитов крупного рогатого скота 'иь vlirt"), которые при культивировании в монослое клеток яичников в среде с антикоатулянгон подучили стимуляции развития ооцитов.

Представленные результаты экспериментально-морфологических и экспериментально-биохимических исследований позволили наиболее детально изучить структурные изменения и биохимические сдвиги, возникавшие в ооцитах рыб и кроликов при индуцированном воздействии биостимуляторов (ДМС, ПАБК). Благодаря расшифровке нового биологического явления индуцированного воздействия биостимуляторов на различные структуры ооцитов у животных стала возмогдой разработка новых путей и способов стимуляции их размножения. В результате проведенных экспериментов был установлен феномен ускоре- . кия оогенеза в яичниках рыб и кроликов.

ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФЖКГИЬНОСТЬ ПОРУЧЕННЫХ РЕЗУШЖОЗ НАУЧНЫХ РАЗРАБОТОК

Использование в наших исследованиях новых направлений в области прикладных и фундаментальных биологических наук позволило повысить экономический эффект разработанных нааи способов в различных областях их практического применения.

Предлагаемый нами новый способ лечения гнойно-хирургических инфекций приводит к более быстрому течении раневого процесса и характеризуется высокой экономичностью лрч аго реализации о вете-ринерии и в медицине. Ках показали клинические испытшмя, больнке, яечегпша с применением нснофагоа, провел-; э клинике в среднее

30,7 койко-дней, в то время как известный способ лечения более длителен - Ь0,7 койко-дней.

При определении экономической эффективности нового способа исходили из того, что стоимость одного койко-дня хирургического больного составляет II руб. Сумму ежемесячного экономического эффекта от применения монофагов устанавливали по методике определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ новой техники, изобретений и рационализаторских предложений по формуле: Э = (Сб + Уб) - (Сн + Уп) • Ан. Подставив значения в эту формулу, получаем исходную сумму фактического экономического эффекта: Э = (1,0 + II) - (6,5 + 5,5) • 3000 = = I65uü руб. за один месяц применения нового способа в хирургическом стационаре (авторское свидетельство № 74552У. от 14 марта I9öü г.). для определения экономического эффекта предлагаемого нами нового способа стимуляции развития икры рыб расчет сделан по формуле дисперсионного анализа Су = Сх + Cj. . В результате получаем общее значение суммы, обозначенной в формуле: Су = Ь368 руб. + 32 руб. = 6400 руб., где ЬЗоЗ руб. соответствует общему приросту икры за счет ускорения развития икры путем сокращения рабочего времени инкубации при действии биостимулятора - ПАВК на одно рыбоводное хозяйство за сезон, а 32 руб. составит прирост только на I млн.личинок карпа (авторское свидетельство № 1.076.051 от I ноября 1983 г.).

Экономический эффект стимуляции оогенеза у кроликов при действии ПАБК определяли по другой формуле дисперсионного анализа: П**. = £к- . В этой формуле учитывается cü.v. ■"'•;,.vi фаа-Оь Су

торов и б числителе (Cj,) и.в знаменателе (Су) преде?ч .<_■ ¿j

показатели одного'из изучаемых влияний, а в налем случае показатель - Су показывает исходную величину размера ядрышка - 4 мык. Под воздействием ПАБгС этот размер ядрышка достигает - 1С ммк (ядрьшковый аппарат используется как критерий стимуляции).

Б результате показатель влияния факторов О . = ——м— =■ 4.

4 ммк

В результате экономический эффект при стоимости одного кролика 12 руб. составляет 46 руб., на 100 подопытных кроликов составляет сумму от применения нового способа стимуляции оогенеза у кроликов при действии ПАБгС, равную 4800 руб.

Следует отметить, что 4-х кратное увеличение наблюдается не только в ядрыкковом аппарате, но и большего числа яичников (4-х кратное) у кроликов-самок под воздействием ПАБК, что определяет и сам прирост потомства (справка № 2629 от 21 марта 1990 г.). Полученные при использовании формул расчеты экономичности практического применения новых способов активации размножения различных по сложности организмов позволяют дать правильную количествен-1г/п оценку полученных результатов. Таким образом, широкое использование разработанного нами направления исследований в области фундаментальных и прикладных наук, основанное на разработке новых способов стимуляции размножения различных по биологической слох-нос^л организмов является перспективным. Реализация его позволяет значительно повысить экономическую эффективность кивотнозод-стзп.

ВЫВОДЫ:

I. Установлена восмозность стимулами размножения вирусов, прокариот л оукар!Ют, основанная на реализации генетической кн-

за

формации путем усиления функциональной активности генома под' влиянием биостимуляторов.

2. В процессе размножения фагов, в онтогенезе вирусов, а также в ускорении эмбриогенеза у животных важная роль принадлежит явлению функциональной активности последовательностей нуклео-тидов в геномах.

3. При биохимическом анализе структуры некоторых вирусов растений между входящими в их состав белковыми молекулами и числом последовательностей нуклеотидов, составляющих их геном, прямой коррелятивной зависимости не установлено.

4. Полученные данные позволили установить мозаичное стровнк те номов малых бактериофагов, что свидетельствует о наличии участков

с неиспользованными цистронами на нитях аНК или РНК эт<:х фагов.

5. Пассирование фагов в бактериях, ИЗОЛИрОЬа I. ; при гнойно-хирургических инфекциях, обеспечивает повышение их логической активности и сохранение сроков лечения монофагами.

Ь. Основной структурно-функциональной особенностью генома М. Л. от с а является соподчиненный и разновременный характер реализации генетической информации, обуславливающий редупликацию ДКК в геноме и синтез белков, входящих в состав структур клетки микоплазм.

7. Использование антибиотиков тетрацнклинового ряда и применение метода поэтапной фазовоконтрастной микроскопии на различных стадиях развития бактерий при последующем исключении воздействия антибиотиков тетрациклинового ряда обеспечили разработку теста стимулирования скорости размножения лекарственно-чувствительных форм бактерий. Суббактериостатические дозы антибиоти-

ков тетрациклинового ряда способствуют образованию инволюционных форм этих бактерий.

8. Образование инволюционных форм бактерий происходит при суббактериостатических дозах фуразолина, обеспечивающих эффективное терапевтическое воздействие на лекарственноустойчивые формы возбудителей гнойных инфекций.

9. Изучено стимулирующее действие дкметилсульфата на осциты высна, которые являются моделью для определения влияния указанного препарата, выражающееся в изменении структуры ооциты, в увеличении размеров и количества ядрыаек, расположенных по периферии ядра. Выявлено увеличение размеров ядра опытных ооцитов

по сравнению с контрольшми ооцитами и усиление интенсивности окраски гистохимическими красителями ядрышек и цитоплазмы ооцитов вьюна в опыте, свидетельствующее о накоплении РЖ в этих структурах ооцитов.

10. Мккроспектрофотометрическое исследование ооцитов вьюна при действии на них ДМС показало, что концентрация РНК в 3,31 раза возврастает в цитоплазме ооцитов опыта по сравнению с ооцитами вьюнов контроля. Одновременно в ядрышках этих пе ооцитов концентрация РНК в опыте увеличивается в 2,29 раза по сравнении с контролем. Использование различных методов окраски существенно не влияло на показатели цитофотометрии посредством двух моделей однолучезого микроспектрофотометра.

11. Методом электрофорзза в гелеагарозц при изучении механизма действия ДЫС ка д!:фференцироэанные структуры клетки ооци-та вьпна выявлены индивидуальные классы pa..- "кчных фракций рРНК -45S PliK, 235 PHiC, IBS Ph'K, а токга 5:7 PHI С. Наличие фракции 55Р1И свидетельствует сб одновременной еп> • уляции генов, не

входящих в состав ядрьглкового организатора, что означает взаимосвязанность регуляции считывания со всех рмбосомальных генов.

12'. Применение в качестве биологически активного веяества парааминобензойной кислоты в концентрации 16 мг/литр раствора для обработки икри рыб карповых пород на стадии двух бластомеров показывало ускорение массового выклева предличиноу.

13. Использование парааминобензойной кислоты для обработки икры рыб, стимуляции оогенеза у кроликов обеспечивает получение экологичгски чистой продукции.

14. Цитохимические изменения в ооцитах кроликов, получавших в теченир двух недель внутримышечно парааминобенэойную кислоту

в дозе 500 мг/кг веса, характеризуются повгаением содержания РНК и лдрыз:ках и цитоплазме ооцитов кроликов.

15. Установлено явление индуцированной л™, ":ции при действии биостимуляторов, сопровождавшееся образованием значительного числа дополнительных функционируюших ядрышек, что обусловлено увеличением дозы гена в генетическом аппарате ооцитов животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ пр5до£енмя

Разработан и предложен способ определен/,я величины производ-стзенного потенциала гирусного генома, основанный на факте отсутствия прям 1Й корреляции между числом белковых молекул к последовательностями нуклеотидов в генетическом аппарате вирусов. Апробирован и рекомендован для стандартизации Еируснкх препаратов (справка Госкомизобретенкй СССР №3605061/13).

Установленные положения о мозаичной структуре геномов вирусов, связанной с наличием в них участков, неиспользуемых в процессе синтеза белковых молекул вириона, свидетельствуют о перспективности реализации их для конструирования противовирусных вакцин

методами генной инженерии.

Разработан и-предложен способ получения специфических монофагов, литическая активность которых усилена пассированием в бактериальных клетках, обеспечивавший адаптация фага к возбудителям, выделенным при инфекционном процессе. Способ внедрен при лечении гнойно- хирургических инфекций в системе Минздрава БССР.

Экономическая эффективность на каждые 100 болымх 16500 руб. в течение одного месяца применения монофагов.

Разработан и предложен тест стимуляции размножения лекарственно-чувствительных Форм бактерий, обеспечивающий предотвра-сение формирования резистентности бактерий. Метод обеспечивает значительное повышение терапевтического воздействия химиопрепара-тов при гнойных инфекциях. Внедрен в клиническую практику Институтом хирургии им, А.В.Вишневского АМН СССР.

Разработан и предложен способ получения р РНК и ДНК для биохимических исследований. Способ получения рРНК основан на активации рибосомальных генов под воздействиям ДМС на ооциты рыб, позволявший повысить содержание всех фракций рРНК. Классы рРНК при сканировании геля агарозы после электрофореза превышают контроль: 28S - в 5,1 раза, I8S - в 4,3 раза, 5S - в 3,1 раза. В опытном геле присутствует полоса электрофореза, соответствуйте.! - 45S РНК.

Разработан и предложен способ стимуляции развития икры рыб. Рекомендовано икру рыб карповых пород на стадии двух блпстомеров обрабатывать парайминобензойной кислотой в доз-."1 16 мг/л. Экспозиция 72 часа. Стимуляция развития икр» в процессе развития достигает 15,ОХ, что обесг.гчизагт значительное повышение выхода вколсгически чистой продукции рыбоводства.

Экономический эффект составляет 6400 f/.'i. на одно ркбозод-нов хозяйство sa один cesan.

Разработан и рекомендован способ активации биохимических процессов в организме кроликов парааминобензойной кислотой, обусловливающий стимуляцию оогенеза и получение экологически чгистой продукции. Использование пороговых доз ПАБК приводит к увеличению диаметра ядрышек до 12 - 16 ммк.

Способ апробирован совместно с лабораториями биофизики и патологической анатомии ВИЭВ в 1982 - 1985 г.г.

Экономический эффект от применения способа стимуляции ооге-неза у кроликов при действии ПАБК составляет 4800 руб./100 гол.

Справка о приеме к рассмотрению заявки на открытие !?' 0Т-12006 выдана ЗНИИГПЭ в том, что 21 декабря 1989 г. принято заявление о ввдаче диплома на открытие под названием "Явление функциональной активности повторяющихся последовательностей нуклеоти-дов в геномах". Ицпуцированная амплификация яд ' ^----"о организатора сопровождается резким увеличением содержа:...?. ^{К в ядрах ооцитов и характерными морфологическими изменениями, что свидетельствует об увеличении дозы гена в генетическом аппарате эттвых организмов.

Использование феномена индуцированной амплрфикецки ядртасо-цого организатора является перспективным для получения экологически чис-ой продукции я стимуляции размножения прокариот и эу-кариот.

Для ос' .снования явления индуцированной амплификации использованы результаты практического применения разработанных нами способов получения рРНК и ДКК, стимуляции икры рыб, с также ооге-нсзй у кроликов.

СПИСОК ОСНОЫИХ РАБОТ, ОПУБШСОЕАКНЫХ ПО ТЬЖ ДИССЕРТАЦИИ

1. А.Г.Хволес. Действие тетрациклина на морфологию сине-гнойных палочек.// Лабораторное дело, 1964, > 5, с.307-309.

2. А.Г.Хволес. Действие антибиотиков на морфологию микробной клетки. Раздел в кн.: Кратное руководство по антибиотикоте-рапии.// Ы., Медицина, 1964, с.33-40.

3. Е.А.Говорович, А.М.Маршак, Л.А.Сысоевъ, А.Г.Хволес. Фуразолин - препарат для лечения лекарственноустойчивых форм бактериальной инфекции.// Советская медицина, 1965, № 4 с. 116-120.

4. Н.Н.Жуков-Верегаиков, М.Н.Волков, И.Н.Майский, В.Я.Кольев, М.А.Губерниев, Н.И.Рыбаков, А.Г.Хволес, И.И.Подоплелов, Э.Б.Воронкова. О подходах к изучению соотношения стохастических и "эвристических" процессов в эволюции. // Философские науки, 1969, » 6, с.32-87.

5. Н.Н.Нуков-Вережников, А.Г.Хволес, Методические и теоретические аспекты проблема избыточности генетической информации. // Философские науки, 1970, № 6, с.77-81.

6. Н.Н.Жуков-Вережников, А.Г.Хволес. Избыточность генетической информации у некоторых растительных вирусов. // Вестник сельскохозяйственной науки, 1971, £ I, с.2б-29.

7. Н.Н.Жуков-Вережников, А.Г.Хволес. Некоторые методологические вопросы исследования избыточности гене"яческой информации. // Философские на^ки, 1972, 3, с.110-112.

8. Н.Н.Жуков-Вережников, И.Н.Майский, М.Н.Волков, Н.И.Рыбаков, П.В.Сергеев, Е.Д.Лнискин, Р.Д.Сейфулля, А.И.Майский,

И.И.Подоплелов, А.Г.Хволес, Ы.К).Климова, З.П.Козловская, М.И. Бойченко, А.Ь.Хохлачев. Механизмы регуляции использования клетками генетической информации и некоторые проблемы бионики. // Труды и Всесоюзной конференции по бионике, АН СССР, 1973, т.У, с.89-91.

9. А.Г.Хволес. Генетико-информационный анализ процесса сборки некоторых бактериофагов. // Сельскохозяйственная биология, 1974, » I, с.148-149.

10. Н.Н.Куксв-Ьережннков, А.Б.Хохлачев, Ы.Н.Волков, И.Н. Майский, Н.И.Рыбаков, И.Н.Подоплелов, А.Г.Хволес, Е.Д.Анискин. Вероятная модель одного механизма образования новых генов. //Биофизика, 1971, № Ь, с.1092-1093.

11. А.Г.Хволес, Ю.А.Коробко. Цитологические особенности действия дкметклсульфата на ядерно-вдрылковы-Л „рит ооцитов вьюна. //Доклады оАСХНЛЛ, 1975, № 12, с.29-31.

12. А.Г.Хволес, Ю.А.Коробко. Микроспектрофотометрическое исследование ооцитов вьюна после воздействия диметилсульфатом. // Биофизика, 1976, & 4, с.759-7о0.

13. А.Г.Хволес, Ю.А.Коробко. Действия диыегилсульфата на половую систему выэна. // Вопросы ихтиологии АН СССР, 1977, Е> 2, с.371-373.

14. '•¡.Н.Цуков-Бережников, л .Д. Перемитина, Э.А.Берилло,

Б.П.Комиссаров, В.М.Бардымов, А.Г.Хволес, Л.Б.Угрюмов. Изучение терапевтического эффекта препаратов бактериофага в комплексном лечении гнойных хирургических заболеваний.// Советская медицина, 1978, Я 12, с.64-66.

15. Л.д.Перемитина, Э.А.Берилло, А.Г.Хволес. Способ лечения гнойно-хирургических инфекций.// Авторское свидетельство на изобретение № 745524 Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий от 14 марта 1980 г.

16. А.Г.Хволес, Н.^.далоне, В.И.Киселев, Ю.А.Коробко. Стимуляция выхода рибосомальной РНК в ооцитах рыб под воздействием диметилсульфата. // Доклады ВАСХНШ., 1980, » 12, с.29-30.

17. А.Г.Хволес. Статья в БМ5, 1981, т.17,СтатъяМ.У.Киренберг.

18. Н.л.Делоне, А.Г.Хволес. Способ получения рибосомальной рибонуклеиновой кислоты. // Авторское свидетельство на изобретение № 904708 Государственного комитета СССР по делам открытий и изобретений от 14 октября 1981 г.

19. л.Д.Перемитина, Э.А.Берилло, А.Г.Хволес. Опыт лечебного применения препаратов бактериофага при гнойно-хирургических инфекциях. // ЖМЭИ, 1981, № 9, с.109-110.

20. А.Г.Хволес, В.А.Горбатов, Е.А.Коробко. Цитоморфологичес-кме особенности ядер ооцитов и гепацитов у кроликов при действии парааминобензойной кислоты. //Доклады ВАСХНИД, М., 1982, > 12,

с.8 (Депонирована во ЬШИЗИСХ № 234-82. Дел.25.09.82).

21. А.Г.Хволес с соавторши (Ю.А.Коробко, Н.Л.Делоне). Заявление на открытие "Явление увеличения числа генов рибосомаль-ных РНК под влиянием химического мутагенеза" от 15 июля 1982 г.

в Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий. // Материалы, относящиеся к содержании указанного открытия имеется в соответствующих разделах докторской диссертации и автореферата. В Ученый Совет БИЭВ представлены отзкш на данное открытие?^

х)

В настоящий период указанная заявка получила название "Явление функциональной активности повторявшихся последовательностей нуклеотвдов в геномах4.

22. Н.Л.Делоне, Л.Г.Хволес. Действие ¿¡¿С на ооциты вьюна. Химический мутагенез и качество сельскохозйственной продукции. // Н., Наука, 1983, с.2о0-2с2.

23. С.Г.Дзагуров, Г.М.Гнуни, А.Г.Хволес. Справка о приеме

к рассмотрению заявки на изобретение "Способ определения величины производственного потенциала вирусного генома". // Заявка № ЗоСЬ051ДЗ от 14 июня 1983 г.

24. А.Г.Хволес, Ю.А.Коробко. Изменение ядерно-ядрылкового аппарата и содержание нуклеиновых кислот в клетках животных (рыба, кролик) при воздействии минимальных (пороговых) доз различных биостимуляторов. // Доклады АН СССР, 1983, т.271, № I,-

с.238-240.

25. А.Б.Бурлаков, А.Г.Хволес, Н.7..Делон. об стимуляции развития икры рыб". // Авторское СВИДбТвЛЬ с *Г' 1076051 Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий от I ноября 1383 г.

26. С.Г.Дзагуров, Г.Ы.Гдани, А.Г.Хволес. Некоторые подходы

к конструированию противовирусных вакцин. // Вопросы вирусологии, 1934. № 2, с.137-140.

27. Ю.А.Коробко, А.Г.Хволес. Воздействие пороговых доз биостимул] горов Д!£С и ПАБК на ядерно-ядрыпковый аппарат половых клеток животных. // УШ Всесоюзный симпозиум "Структура и функции клеточного ядра". АН СССР, тезисы докладов, с.266, 17 мая 198-1 г.

28. А.Б.Бурлаков, А.Г.Хволес, Н.Л.Делоне. Способ стимуляции развития икры рыб. - В кн.: Ученые МГУ - науке и производству. Открытия, изобретения, результаты научных исследований, предлагаемых для практического использования. // М., изд.МГУ, 1984, с.65.

29. А.Г.Хволес, Ю.А.Коробко. Индуцированная амплификация под воздействием ДМС и ПАБК. // Доклада ВАСХНИЛ, I9Ö5, )> 2, с.35-38. .

30. А.Г.Хволес. // Справка № 84-I-I7-I279a от 25 сентября 1985 г. Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий об использовании изобретения $ 745524.

31. А.Г.Хволес, Ю.А.Коробко, Й.А.Черняео. Механизмы инду-щрованной амплификации лдрышкового организатора. // IX Всесоюзный симпозиум "Структура и функции клеточного ядра". АН СССР, тезисы докладов, с.265, 27 мая 1987 г.

32. А.Г.Хволес, Ю.А.Коробко, Н.А.Черняев. К вопросу усилены синтеза нуклеиновых кислот (ДНК, РНК) у животных как прояв-

!я 'эдуцированной амплификации лдрышкового организатора. // "Чзисц докладов У съезда ВОГИС им.Н.И.Вавилова, АН СССР, т.1, с.&0-29I, 27 ноября 1987 г.

33. А.Г.Хволес, Ю.А.Коробко, H.A.Черняев^Реферативный аур-млл "Биология" АН СССР в разделе: "лдрышсовый организатор", 1988, П А л с,'->

* , . О V .

34. А.Г.Хволес, S.A.Черняев. // Реферативный яурнал "Биология" АН СССР з разделе: "мутагены", 1988, 0 12, с.31-32.

35. А.Г.Хволес, Ж.А.Черняев. Механизм стимуляции цутагена-ми. // Доклады АН СССР. 1988, т.301, » 4, с.985-983.Х)

36. А.Г.Хволео, Ю.А.Коробко./'Справка о приеме к рассмотрению заявки на открытие > ОТ-12005 под названием: "Явление функциональной активности повторяющихся последовательностей куклео-тцдов в геномах" от 21 марта 1990 г.

О важном значении установленного нами явления индуцированной глтлификации генов, характеризующегося прогрессивным увеличением ядерной ДНК, сообщается в журнале "Природа"АН СССР, в разделе "Новости науки", 1989 г.,№ 2, с.НО.