Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

КОМПЛЕКС ИССЛЕДОВАНИЙ Х-ВИРУСА, ИНДУЦИРУЕМОЙ ИМ БОЛЕЗНИ И МЕР БОРЬБЫ С ИНФЕКЦИОННЫМ ВЫРОЖДЕНИЕМ КАРТОФЕЛЯ

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "КОМПЛЕКС ИССЛЕДОВАНИЙ Х-ВИРУСА, ИНДУЦИРУЕМОЙ ИМ БОЛЕЗНИ И МЕР БОРЬБЫ С ИНФЕКЦИОННЫМ ВЫРОЖДЕНИЕМ КАРТОФЕЛЯ"

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЗАЩИТЫ Р А С Т Е Н И Й_

На правах рукописи

ШЕЛУДЬКО Юрий Михайлович

КОМПЛЕКС ИССЛЕДОВАНИЙ Х-ВИРУСА. ИНДУЦИРУЕМОЙ ИМ БОЛЕЗНИ И МЕг БОРЬБЫ С ИНФЕКЦИОННЫМ ВЫРОЖДЕНИЕМ КАРТОФЕЛЯ

(06. 01.11—фитопатология и защита растений)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени-доктора биологических наук

Ленинград — 1980

Работа выполнена в ордена Трудового Красного Знамени институте микробиологии и вирусологии им. Д. К. Забо-лотного АН УССР с 196] по 1969 г. и в Украинском научно-исследовательском институте сельскохозяйственной микробиологии Южного отделения'ВАСХНИЛ с 1969 по 1978 г.

Официальные оппоненты: лауреат Государственной премии СССР, член-корреспондент АН БССР, профессор, доктор биологических наук, А. Л, Амбросов, профессор, доктор биологических наук Ю. И. Власов, доктор сельскохозяйственных наук А. Г. Зыкин.

Ведущая'организация — Латвийская ордена Трудового ■ Красного Знамени сельскохозяйственная академия.

Защита состоится года, в ■'.'■'.. ;.

часов на заседании специализированного совета (шифр ;— Д ~ 020,01.01) при Всесоюзном научно-исследовательском институте защиты растений. Адрес: . 188620, . Ленинград, Пушкин-6, шоссе Подбельского, д. 3, ВИЗР.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Все-, союзного научно-исследовательского института защиты растений.

Автореферат разослан « ¿А^т^е-^^

Ученый секретарь специализированного совета

Н. Р. Гончаров.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследований. В докладе Генерального секретаря ЦК КПСС товарища Л. И. Брежнева XXV съезду Коммунистической партии Советского Союза перед работниками сельскохозяйственной науки поставлена ответственная задача развития научных исследований, направленных на повышение продуктивности сельскохозяйственного производства. Эта задача подчеркнута также в планах партии и народа на X пятилетку, конкретизирована в постановлении Центрального Комитета КПСС и Совета Министров СССР «О мерах по дальнейшему повышению эффективности сельскохозяйственной науки и укреплению ее связи с производством» и в решениях июльского (1978 г.) пленума ЦК КПСС.

Важнейшим резервом повышения урожайности сельскохозяйственных растений, особенно, размножаемых вегетативно, является борьба с инфекционным вырождением, вызываемым вирусами. Однако разработка эффективных н экономичных приемов и мер борьбы с вирусными болезнями невозможна без глубокого изучения и познания вирусов вообще, особенно взаимодействия возбудителей болезней различной вирулентности с растениями-хозяевами, о чем к началу нашей работы были лишь некоторые общие представления. Меры борьбы с вирозами вегетативно размножаемых растений, в частности картофеля, должны базироваться на научно обоснованных приемах оздоровления промышленных сортов. К началу нашей работы для этого были рекомендованы массовые серологические отборы безвирусных растений (Онищенко, 1966), однако диагностические сыворотки на Украине производились в очень небольшом объеме, и выпускаемая продукция была низкого качества. Относительно получения исходного безвнрусного материала методом культуры верхушечных меристем был обобщен только зарубежный опыт (Шмыгля, 1971). На Украине в возможность использования этого приема в ■ семеноводстве картофеля мало кто

' -—3

1 йэятр. мучзгз б;!3;г \.::г ] Кзез. е;д. г. >::... •. ' .:'м«5, ш, П. А. V.. .п.—

верил, и не было никакого опыта использования его в широких масштабах. Требовалась разработка и экспериментальное обоснование в конкретных почвенио-клнматических условиях семеноводства картофеля данного региона комплекса защитных приемов от реинфицирования оздоровленного материала.

Цель н задачи исследований. Исходя из вышеизложенного, задачей исследований, представленных в диссертации, явилось изучение, на примере Х-вируса картофеля (ХВК), общих тенденций взаимодействия между возбудителем различной,вирулентности, состзвом вириона, некоторыми физно-лого-биохимическими и патоанатомическими ультраструктурными изменениями в клетке и организме растения-хозяина, а также разработка, экспериментальное обоснование и производственная проверка мер борьбы с инфекционным вырождением картофеля, главным образом в условиях Полесья Украинской ССР.

Научная новизна исследований. В диссертации обобщены результаты многолетних лабораторных и полевых исследований новых аспектов в познании вирусных болезней одной из важнейших сельскохозяйственных культур, разработан, научно обоснован и апробирован в производственных условиях комплекс мер борьбы с вирусным инфекционным вырождением картофеля. На . основе проведенных научных разработок организовано на современной научной основе производство диагностических сывороток к вирусам картофеля и значительно повышено их качество, что позволило решить проблему обеспечения ими всех селекционно-семеноводческих учреждений и закрытых районов по производству товарного картофеля в УССР. Впервые в республике начато внедрение и широкое использование в практике выращивания элиты картофеля на основе исходного безаирусного материала, оздоровленного методом культуру меристемы. Организовано и начато промышленное выращивание такого материала.

Новизна всего комплекса представленных на защиту положений диссертации вытекает из следующего:

Впервые в фитовирусологии, на основании разносторонних сравнительных исследований, выполненных на одних и тех же штаммах различной вирулентности, разработан ком-4

плекс корреляционных признаков вирулентности возбудитёлй. Предложен способ выделения н биологической фильтрации штаммов от примесей и поддержания их без изменения свойств. Впервые в белке ХВК определена С-кониевая аспа-рагиновая кислота и установлены междуштаммовые отличия в последовательности аминокислот на С-концевом участке, открыты специфические для этого пиру с а внутриклеточные ультраструктуры, состоящие из аномальных выростов эндо-плазматнческого ретикулума, покрытых с внутренней п внешней сторон органеллами, подобными большому компоненту клеточных рибосом.

Научную новизну и практическую ценность представляет также разработанная для массового оздоровления сортов картофеля от вирусов методика культивирования крупных меристем (почек) на иммунном подвое с использованием антивирусного ингибитора. Оригинальными являются применение в борьбе с реинфицированием оздоровленного картофеля уничтожения сорняков гербицидами и исключения на не-заплывающих почвах послевсходоаых обработок и заездов агрегатов сельхозмашин в посадки картофеля, а также предложенная методика прогноза лета тлей-переносчиков и распространения афидофильных вирусов, В диссертации впервые в нашей стране разработана и применена оптимизация комплекса защитных противовирусных приемов путем использования долгосрочного прогноза лета тлей-переносчикоа и распространения афидофильных вирусов.

Разработан оригинальный способ приготовления диагностических сывороток к вирусам растений и предложен новый способ повышения чувствительности сероло! нчесних реакций, защищенные авторскими свидетельствами СССР.

Практическая значимость работы. В результате теоретических исследований вируса и индуцируемой им болезни разработан перечень критериев вирулентности штаммов ХВК, который может быть применен, после соответствующей проверки, также к другим вирусам. Разработана методика выделения наиболее слабых, вакцинных штаммов этого вируса в природных условиях, изучены особенности их взаимодействия с хозяином. Теоретические итоги исследований включены в учебное пособие по фитовирусологии.

Результаты исследований позволили значительно усовершенствовать технологию массового производства диагности-

веских сыворбтйк к вирусам картофеля, организовать оздоровление от вирусной инфекции районированных сортов картофеля и их защиту от реннфекции во время ускоренного размножения и выращивания в поле. Предложена методика прогнозирования лета тлей-переносчиков и распространения энтомо-фильных вирусов. Тексты утвержденных ученым советом института и рекомендованных к применению соответствующих рекомендаций имеются в приложении к диссертации.

Область*применения полученных результатов — лаборатории фитовирусологического профиля, товарное семеноводство картофеля и педагогический процесс на биологических факультетах университетов УССР и факультетах защиты растений сельскохозяйственных вузов.

Апробация работы. Основные результаты исследований многократно докладывались и обсуждались на ученых советах институтов, где проведена работа. Материалы диссертации представлялись для обсуждения на следующие научные совещания:

1. Четвертое совещание по вирусным болезням растений — г. Краснодар, 1961 г.

2. Четвертое Всесоюзное совещание по электронной микроскопии — г. Сумы, 1963 г.

3. Пятое Всесоюзное совещание по вирусным болезням растений, посвященное 100-летию со дня рождения Д. И, Ивановского — г. Киев, 1965 г.

4. Первый съезд Украинского микробиологического общества — г. Киев, 1965 г,

5. Второй Всесоюзный симпозиум по применению электронной микроскопии в биологических исследованиях — г, Киев, 1967 г.

6. Шестая Всесоюзная конференция по электронной микроскопии — г. Новосибирск, 1967 г.

7. Электронная микроскопия твердых тел и биологических объектов — г. Москва, Дубна, 1969 г,

8. Конференция «Вирусологические исследования на Дальнем Востоке» — г. Владивосток, 1969 г.

9. Симпозиум польских вирусологов растений «Биохимические и физиологические аспекты вирусных болезней растений» — Краков, 1968 г.

10. Всесоюзное совещание по культуре растительных тканей — г. Москва, 1968 г,

11. Шестое Всесоюзное совещание по вирусным болезням растений — г, Киев, 1971 г.

12. Всесоюзный семинар-совещание по вирусным болезням овощных культур — г. Ереван, 1974 г.

13. Всесоюзный семинар-совещание «Современные методы получения безвирусного картофеля» — г. Москва, 1975 г,

14. Шестое Всесоюзное совещание по иммунитету сельскохозяйственных растений к болезням и вредителям — г. Одесса, 1975 г.

(5. Четвертый съезд микробиологов Украины. — г. Киев, 1975 г.

16. Республиканское совещание по семеноводству картофеля в Украинской ССР — г. Чернигов, 1975 г,

17. Всесоюзное совещание «Штаммы вирусов растений» — г. Владивосток, 1975 г.

18. Третье Всесоюзное совещание по применению препарата ТУР в плодоводстве и овощеводстве — г. Москва, 1976 г.

19. Заседание бюро президиума ВАСХНИЛ, посвященное проблеме семеноводства картофеля — г. Москва, 1976 г.

20. Всесоюзный семинар-совещзние по применению серологической диагностики вирусов и микоплазм — г. .Москва, 1977 г.

21. Всесоюзное совещание по изучению насекомых-переносчиков1 вирусов и микоплазм растений — г. Елгава. 1977 г. I

22. Седьмое Всесоюзное совещание «Вирусные болезни с.-х. растений и меры борьбы с,ними» — г. Ленинград, 1978 г.

23. Заседание бюро президиума Южного отделения ВАСХНИЛ — г. Киев, 1978 г.

Публикации., По материалам диссертации опубликован 71 научный труд и в том числе учебное пособие для биологические факультетов университетов УССР «Фитовнрусоло-гия».

Структура и объем работы. Материалы диссертации изложены в монографическом стиле и составляют 7 глав, в которых освещены результаты соответствующих экспериментальных разработок. Каждая глава включает обоснование вопроса и аналитический обзор литературы, методику, результаты исследований. После изложения фактических материалов следует их обсуждение. В конце каждой главы имеется заключение. Кроме этого, в диссертации есть общее введение, обсуждение общих результатов и общие выводы. Приведены также разработанные корреляционные штаммо-воспеиифические показатели и методика выделения в природных условиях слабопатогенного штамма, а также список цитированной литературы. В приложение вынесены три текста практических рекомендаций,

В экспериментальной части работы приведены результаты исследований, имеющих прямое отношение к теме диссертации. В тех случаях, когда для обоснования основных положений необходима ссылка на соответствующие исследования автора, подробно проанализированные в ранее опубликованных им работа*, приводится только обобщенное их изложение с соответствующей ссылкой. Аналогичная практика используется в диссертации при упоминании результатов собственных методических разработок, обзоров методик

и аналитических обзоров литературы. В диссертации цитируется только та литература, которая имеет непосредственное отношение к излагаемым и обсуждаемым вопросам.

Диссертация изложена на 195 страницах машинописного текста, кроме этого, включает 85 таблиц, 45 рисунков (3S фотографий симптомов, диаграмм и графиков л 7 электронных микрофотографий), список цитированной литературы (319 источников, в том числе 255 отечественных), три приложения на 70 стр,, всего 394 стр.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. Изучение биологических свойств вируса различной вирулентности

В тексте приведено обоснование выбора, в качестве модельного объекта для исследований в этой части ХВК и приведен аналитический обзор современных взглядов на понятие штамм, штаммовоспецифические признаки и корреляционные показатели вирулентности, указаны источники выделения штаммов, использованных в работе.

Из 59 видов и сортов растений, использованных при изучении симптомов отобранных для работы изолягов, для их дифференциации отобраны дурман, гомфрена, картофель сорта Камераз-I и табак Самсун 3075, иммунный к ВТМ и мучнистой росе. По симптомам на зараженных растениях наиболее четкие различия проявили «разлитой» — Хр и «суровый» — Хс изоляты, а «киевский» — Хк занял промежуточное положение. «Полесский» — Хп близки к Хс, «херсонский» — Хх — к Хк и «тепличный» — Хт отличается симптомами типа аукуба.

Все отобранные изоляты интерферируют между собой, что доказывает их принадлежность к одному виду (Matthews, 1949). Минимальный интервал между предохранительной и последующей инокуляциями определен 0 дней, оптимальный — 7—8 дней.

При репродукции на различных растениях установлено ослабление вирулентности сильных штаммов и усиление слабых на табаке. Для поддержания штаммов на протяжении длительного периода без изменения патогенности и других биологических свойств подобраны растения дурмана и

картофеля сорта Камераз I, §

Особенности распространения по зараженному растению для различных изолятов позволили разделить нх на некротические и системные, разлитые. Установлено несколько интересных особенностей для ХВК по этому признаку. Например, независимо от нзолята и места инокуляции вирус вначале размножается в том месте, в которое проведена первичная инокуляция. Затем он проникает в молодые верхушечные листья, расположенные на том же стебле, и после этого передвигается в молодой лист, расположенный на другом стебле. Только после этого отмечено его распространение в другие листья. За 2^-3 дня вирус преодолевает по растению расстояние в 80—120 см.

По серологическим свойствам (перекрестная адсорбция антител, серологическая и антигенная активность) исследованные изоляты составили ряд, в котором наиболее слабые и с ними Хт были наиболее активные, т. е. проявилась 'обратная зависимость от вирулентности. Аналогичная зависимость проявилась по термостабнльности (табл. I). При точности измерений'±1°С наиболее.слабый изолят Хр отличается по точке температурной инактивации (ТТИ) от других на 4—6°. Эти свойства слабого изолята мы использовали а дальнейшем при производстве диагностических сывороток и выделении вакцинных изолятов в природных условиях.

Точки тем па рту рн ой инактивации исследованных изолятов ХВК

В диссертации подробно обсужден вопрос распределения изолятов по этому показателю на различные группы,

В свете литературных данных, обсужденных в диссертации, и в связи с большими отличиями между изолятамп по вирулентности, представляло интерес изучение их специализации. Изучали возможность заражения тканевыми свеже-выделенными РНК различных изолятов следующих не-

Таблица 1

Изоляты

ТТИ, в градуса* по Цельсию

Хр

Хх Хк Хт Хп Хс

75 71 70 70 69 69

свойственных хозяев; яблони, капусты, инкарнатного клевера, гречихи, культуры клеток яблони в жидкой среде, одноклеточных водорослей. Многократные опыты оказались безуспешными. Проведено также испытание совместно с селекционерами (Д. Л. Ващишина, М. Я. Молоцкий) инфекцион-ности трех изолятов Хс, Хр, Хк на диких видах картофеля и растениях с различной плондностью. Существенные отличия не установлены.

: В итоге исследований в этой части и обсуждения результатов все изоляты идентифицированы с штаммами ХВК, описанными в литературе. Хр отнесен к самым слабым штаммам ХВК, Хс — к самым сильным и Хк — к средиевирулент-ным. Эти три штамма, как отражающие весь диапазон природной изменчивости вируса, в основном использованы для более углубленных исследований,

2. Изучение особенностей строения и состава вирионов в зависимости от вирулентности вируса

В этой части работы особое внимание уделено методикам. Подробно описаны и обсуждены использованные методы очистки вирионов и определения чистоты препаратов, получения вирусного белка и рибонуклеиновой кислоты, изучения аминокислотного состава вирусного белка, исследования морфологии и ультра структуры вирионов, определения нн-фекционности и нативностн вирусной РНК, ее молекулярного веса и др.

По морфологии исследованные штаммы не отличаются. При использовании более точных изменений с помощью оптического компоратора проявилась большая длина вирионов самого сильного штамма Хс. При средней арифметической ошибке для всех трех штаммов не более ±3 нм разница между средними арифметическими длины Хс и двух, других штаммов равна 18—21 нм и имеет высокую степень достоверности. В диссертации подробно обсуждается этот феномен. Исследована длина молекул РНК. Она составила для всех изученных штаммов 2020±20 нм, междуштаммовые отличия по этому показателю не выявлены.

По аминокислотному составу каисулярного белка выявлены хорошо выраженные отличия между штаммами различной вирулентности (табл. 2). В диссертации подробно анализируются результаты определений аминокислот методами

бумажной хроматографии й с поМощью японского амйнб-анализатора. Полученные данные позволяют отнести в целом белок ХВК к а л а ннн-тр еон л и о в ом у типу. Для изученных штаммов определено почти тождественное содержание основных аминокислот. Наиболее выражены отличия по содержанию метионина и пролина. По содержанию этих- аминокислот можно характеризовать вакцинные н более сильные штаммы.

Эти данные существенно дополнены исследованиями С и N — концевых аминокислот (Сидор*-1968). На N — конце и всех трех штаммов определено блокирование аминокислоты ацетильной группой. На С пептида определена аспарагиновая кислота и но, доступность белка протеолизу.

Таблица 2.

Аминокислотный состав белков трех штаммов ХВК

(в г. на 100 г белка и в количестве аминокислотных остатков на белковую субъединнцу) : "

конце белкового полИследователь-

Аминокислоты Хр ■ 1 Хк Хс

количество аминокислоты остатки количество аминокислоты остатки количество аминокислоты остатки

Алании 12,85 77 13,00 77 12,60 75

Аргинин 6,12 19 7,30 22 7,40' 22

Аспарагиновая кислота 11,10 44 11,91 47 11,43 47

Цнстин 1,05 4 1,06 4 1,12 4

Глютаминовая кислота 10,41 38 9.У0 36 10,67 38

Глицин 3,80 27 3,93 28 3,62 25

Гистидин 1.46 5 1,71 6 1,89 6

Иэолейцин 5,34 22 5,49 22 5,46 22

Лейцин 5,03 20 5,23 21 5,21 21

Лизин 9,12 27 8,89 26 9,20 27

Метионин 0,0 0 1,77 6 2.32 8

Балл к 4,87 22 5,63 25 5,68 26

Фенилалашш 5,42 20 5,71 20 6,11 21

Пролин 7,41 34 7,99 34 6,10 28

Серии 4,00 20 4,56 23 4,21 22

Треонин 9,60 43 6,23 41 8,88 Ч

Тирозин 0,54 3 0,70 4 0,75 4

Триптофан 1,90 5 1,25 3 2,27 6

До наших исследований на С-конце.ХВК предполагалось расположение пролина и поэтому, белок этого вируса" считался недоступным действию пептидазы.

Разновременным гидрблнзом с помощью А-карбоксипеп-тидазы на автоматическом анализаторе аминокислот определен следующий состав С-концевого участка белковых субъединиц исследуемых штаммов:

Штамм Хр — (Гли, Лей, Фен, Ала, Вал) Асп СООН

Штамм Хк — (Лей, Гли, Фен, Вал, Ала) Асп СООН

Штамм Хс — (Фен, Лей, Глю, Гли, Вал, Ала) Асп СООН.

Таким образом, по С-концевой аминокислоте они все идентичны, но различаются по последовательности аминокислот в С-концевом пептиде. Сведения по последовательности аминокислот заключены в скобки, они рассматриваются как предварительные, но позволяют все же выделить некоторые четкие отличия, которые нельзя'объяснить только возможной неточностью результатов анализов.

Междуштаммовые отличия проявляются уже со второй С-концевой аминокислоты. В штамме Хр после С-концевого ас-парагина следует валлин, а в двух других — аденин. Этот существенный признак может оказаться полезным при контроле за изменчивостью вакцинных штаммов. Полученные данные указывают на вполне реальную возможность выявления междуштаммовых отличий также и по другим С-концевым аминокислотам — вторым, третьим и т. д.

3. Количественные и качественные изменения в содержании белка и нуклеиновых кислот в динамике развития инфекции различной вирулентности

В настоящее время кажется очевидным, что проявление вирусной инфекции различной силы в растении является отражением активности особых белков, кодируемых вирусной РНК. Этот процесс может идти только через патологические изменения в синтезе клеточных РНК.

Для изученных нами штаммов в начале инфекционного процесса автором совместно с Л. К. Жеребчуком установлена интенсификация дыхания. Это свидетельствует о том, что вирус стимулирует обменные явления. При атом они возбуждаются с различной силой в зависимости от вирулентности патогена.

В диссертации приведен анализ экспериментальных данных по динамике количественного содержания белка и связанных аминокислот в различные сроки после заражения различных растений одним штаммом и основных хозяев —

тремя штаммами различной вирулентности. ВирусНай инфекция во всех вариантах опытов вызвала значительные колебания по всем исследованным показателям.

В динамике содержания различных аминокислот отклонения от нормы наблюдаются под влиянием одного и того же фактора — определенный штамм вируса. Выявлены отклонения, которые могут быть обусловлены в значительной мере видом растения — хозяина и фазами развития болезни.

Уровень содержания белкового азота всегда выше у больных растений и не коррелирует со штаммовым составом вируса.

По этим показателям не выявлена четкая связь с вирулентностью вируса, которая бы хорошо воспроизводилась в нескольких опытах. В тех же препаратах определено содержание нуклеиновых кислот.

В растениях различных видов под влиянием вирусной инфекции на 5-й день после заражения проявилось относительное уменьшение в содержании общей РНК- Затем ее содержание в больных растениях было выше нормы вплоть до появления симптомов. Относительное уменьшение содержания обшей РНК в растениях в начале инфекционного процесса наиболее четко выражено для наиболее слабого штамма Хр. Оно имеет высокую степень достоверности (Р=0.02—0.01), подтверждающеюся в 98—99 случаях из ста результатов анализов, проведенных в опытах. После тщательного анализа и обсуждения этого показателя он отнесен к инднкацнонным признакам вакцинных штаммов.

Достоверные отклонения по всем вариантам опытов в содержании ДНК не проявились.

Для штамма Хр наибольшее уменьшение ниже контрольного уровня общей РНК достоверно коррелирует с умень-ш«ше'м содержания нуклеотида АМФ. В диссертации сделан анализ других аномальных отклонений от нормы в содержании нуклеотидов по всем вариантам опытов.

4. Исследование патоанатомических ультраструктурных

изменений растительной клетки, индуцируемых Х&К

В тексте приведен анализ экспериментальных данных по локализации вирионов различных по вирулентности штаммов в цитоплазме, по электронной микроскопии хло-.ропластов больного растения, по ультраструктуре X—тел.

13

В результате выявлены некбторые характерные особеннб-стн в патоанатомических ультраструктурных изменениях Сольной клетки.

Электронномикроскопические исследования трех, отличающихся по вирулентности штаммов ХВК, показали, что наиболее четкие патологические изменения вызывает самый сильный штамм Хс. Наименее вирулентный, вакцинный штамм Хр, обладает практически незаметным по внешнему проявлению влиянием на восприимчивые растения, но по деталям ультраструктурной патоанатомии больных клеток практически не отличим от других, более сильных штаммов.

Проведенные исследования не позволили выявить интересующие иас штаммовоспецифическпе корреляции, но они имеют общебиологическое значение, т. к. указывают на универсальность картнн внутриклеточного развития представителей одного вида фитовирусов в клетке пораженного хозяина.

Впервые в растительной клетке выявлены аномальные, специфические для ХВК, ультра структуры. Как указывают данные их изучения другими авторами (Stolz et at., 1970; Shatla, Shepard, 1972) они представляют собой оригинальные ленточные мембранные образования, с внешней и внутренней сторон покрытые скоплениями структур, подобных большому компоненту клеточных рибосом. .

Результаты исследовании вируса и индуцируемой им болезни, нашедшие отражение в общих выводах, использованы для разработки списка корреляционных штаммово-специфических показателей и методики выделения в природных условиях вакцинных штаммов ХВК. Полные их тексты приведены в приложении к диссертации. Ряд экспериментальных данных использован для разработки технологии массового производства диагностических сывороток к вирусам той же группы.

5. Совершенствование технологии массового

производства диагностических сывороток к основным вирусам картофеля

Массовое производство диагностических сывороток, как любой другой производственный процесс, характеризуется определенными особенностями, которые необходимо учитывать при подборе приемов и способов, обычно применяемых в лабораторных фитовирусологических исследова-

ниях. В диссертации приведены .и обсуждены основные критерии, которые регламентировали разработку всех этапов технологического процесса.

Для получения диагностической сыворотки к ХВК мы использовали штамм Хр, а для других исследуемых вирусов получили из фптовирусологическнх лабораторий страны изоляты, провели их сравнительную оценку и отобрали наиболее активные.

ХВК размножали и накапливали в дурмане. В итоге тщательных, сравнительных опытов для двух других вирусов подобраны томаты сорта Невский, в котором возможность размножения ЭВК установлена Э. В. Трускиновым (1972 г.). В результате проведения ряда опытов определено, что кинетнн и препарат ТУР не оказывают никакого влияния на репродукцию МВК в томатах, но с помощью препарата ТУР устраняется вытягивание растений, Кинетнн снижает ретардантное действие этого препарата.

В наших работах с ХВК хорошие результаты при получении чистых препаратов обеспечивал цитратный буфер. Проведенными исследованиями установлена целесообразность его использования и для других вирусов. Сравнительная оценка различных способов первичного осветления инфекционного сока показала, что в условиях массового производства наиболее целесообразно применение охлажденного хлороформа при продол ж ительности эмульгирования 3—7 мин. Удовлетворительное вторичное осветление достигнуто при гельфильтрацин инфекционного сока на колонках молселектов Г-50 и ДЭАЭ-50, в сравнении с другими, испытанными в статических и динамических условиях молекулярными и ионообменными сорбентами. По сравнению с осаждением в нзоэлектрической точке и сульфатом аммония для конечного концентрирования антигена лучшие результаты показало применение полиэтилен-гликоля (ПЭГ), С его помощью, независимо от дополнительного диализа и добавления адъюванта, титр сыворотки повышается в 4 р^з"а. В 2—4 раза увеличивается титр сыворотки при дроблении ^вирусов ультразвуком (0,5а, 15 кгрц, 0,5—2 мин.), особенно для склонного к агрегации МВК.

Большой экспериментальный материал анализируется в диссертации по изысканию рационального способа имму-

низации животных и получения сывороток, консервированию их. Эти разработки положены в основу технологии." Она утверждена МСХ СССР, МСХ УССР и 'ВАСХНИЛ в качестве типовой для производящих сыворотки лабораторий. Ее использование в институте, где работает диссертант, позволило определить экономическую эффективность как производственного пронесся, так н использования сывороток в семеноводстве картофеля. За 4 года использования старой технологии убыток составил 42 тыс. руб. Разработанная технология позволила в несколько1десятков раз увеличить объем производства сывороток, повысилось качество выпускаемой продукции, производство приобрело рентабельность.

В 1972 г. в научных учреждениях и хозяйствах республики отобрано 100,7 тыс. серологически безвирусных клонов. В 1977 г. из них на площади 3,8 тыс. га выращено 39 тыс. тонн элиты картофеля. Экономическая эффективность от использования диагностических сывороток, по результатам только одного года, составила более 4 млн. рублей (таблица 3).

Таблица 3.

Экономическая эффективность от использования диагностических сывороток в 1972 г„ произведенных по разработанной технологии, по результатам выращивания элиты на без вирусной основе в 1977 г.

*

2Г

Показатели

Цифровые величины

1. Площадь под элитой на без в ярусной основе в 1977 г. в хозяйствах республики, где использовались сыворотки, произведенные в Институте, тыс. га 3,8

2. Вырашено таких семян, тыс. тонн 30,0

3. Прибавка урожая, по литературным данным н данным. Черниговской областной с.-х. станции: ц/га 15,0

4. Дополнителньые затраты, руб./га

а) на уборку, транспортировку, сортировку н проч. работы, затраченные на дополнительный урожай, по литературным данным 158,0

б) приобретение сыворотки, проведение серол. анализов, отбор безвирусных клонов 3,88 а} всего дополнительных затрат ' 161,88

5. Стоимость прибавочного урожая, руб., коп./га из расчета 270 руб./т 1215,0

6. Чистая прибыль руб., коп./га 1053,12

7. Чистая прибыль от использования сывороток в семеноводстве картофеля по итогам выращивания элиты в

1977 г., млн. руб. 4,04

6. Приемы повышения эффективности оздоровления сортов картофеля от вирусов методом культуры меристемы

* Товарное картофелеводство на основе здоровых семян в значительной мере решает проблему уменьшения вредоносности инфекционного вырождения картофеля (Витенко, Хандыборенко, 1976; Трофимец и др., 1976). В диссертации представлены исследования, направленные на решение вопросов борьбы с вирусами в первую очередь во время, выращивания элиты. Основное вниманне уделено усовершенствованию метода оздоровления путем повышения эффективности при максимальном упрощении процесса.

Для увеличения безвирусной зоны меристем испытаны термотерапия, ингибиторы репродукции вирусов, иммунные подвои. Выдерживание этиолированных ростков при температуре 37,5° на протяжении ЗЮ дней позволило из полностью, пораженных вирусами растений картофеля из 1236 мелких меристем получить 139 безвирусных растений. Недостатком метода является большая продолжительность приема. В наших опытах меристемы из подвергнутых термотерапии ростков отличались замедленным ростом и низким процентом приживаемости. Более -высокий выход здоровых растений обеспечивают иммунный подвой и антивирусные-ингибиторы, особенно при посадке крупных меристем 0,3—0,5 мм. Такие кусочки верхушечных п. пазушных почек отличаются быстрым ростом, хорошо регенерируют.

Разработана методика препаративного выделения ингибитора из гвоздики на основе использования подогрева, дифференциального высаливания и ннзкоскоростного' центрифугирования, определен способ введения его путем замачивания ростков в течение 4—5 суток и определена оптимальная концентрация 10 мг/мл.

Получены отрицательные результаты от испытания для оздоровления сортов культуры столонов. ■ .

Разработан оптимальный вариант проверки меристем-ных растений на зараженность вирусами. Для этого из каждой безвирусной, по результатам 1-й проверки, меристемы формируют линию и вторично проверяют ее серологически и электронномикроскопически. Благодаря применению серологических анализов по темновым росткам, как установлено экспериментально, можно в десятки раз сократить, а

в ряде случаев полностью исключить, трудоемкий процесс индексации клубней.

Испытаны различные приемы ускоренного размножения оздоровленного материала. Установлено, что пробирочное черенкование позволяет в течение 4-х месяцев получить более 3 тыс. растений из одной меристемы. Для ускоренного получения безвирусных клубней хорошие результаты показала двухурожайная культура с выращиванием первого урожая в теплице и копке растений не ранее фазы цветения ¡г второго — на изоточке. Таким путем достигается в 1 год коэффициент размножения до 18 и выше, если использовать черенкование, метод отводков и резки клубней 1-го урожая.

Большое внимание уделено определению урожайности ме-ристемного картофеля. Для этого проведены многочисленные опыты на ряде оздоровленных сортов. Наиболее подробно в этом отношении изучен сорт Прнекульский ранний: средняя прибавка урожая, но сравнению с элитой, выращенной из серологически безвнрусных клонов, составила по этому сорту 60 ц/га. При этом использованы результаты опытов, проведенных в различных хозяйствах республики, и данные, полученные автором в полевых полупроизводственных опытах (табл. 4).

Таблица 4

Сравнительная оценка элиты на меристегиной основе в полевых опытах

Происхождение элиты Урожай, ц/га Прибавка 1 Се рол о-[ гическн беэгирус* ' ных.

Серологически без ви- 1976 год

русные клоны . совхоза ии. Чкалова Меристемные растения, поле севооборота Меристемные растения, нэоточка 114.7 143,3 171.8 Е= 2,02 Т= 6,06 ц/га Р= 1,4% +28,6 +57,1 эм 72,5 75,8

Серологически без вирусные клоны из колхоза «Правда» Меристемные растения, поле севооборота 1977 год 129 183 +54 37,4 71,0

Происхождение элиты

Урожай, ц/га , Прибавка

Серологически безвирусных, ч

Мерис темные растения, изоточка

196 Е= 6,4 Т = 16,2 ц/га Р= 3,0

+67 74,0

1978 год

(повторение

олыга прошлого года)

Серологически безвн-русньге клоны

Меристеиные растения, поле севооборота

156,9

21,7

+62,8 55,2 +83,6 59,2

219,7

Меристеиные растения, изоточка

240,5 Е= 11,87 Т= 35,61 и/га Р= 2,8%

По мере оздоровления и ускоренного размножения сортов картофеля, безвирусный материал передавали семеноводческим хозяйствам. В 1976 г. в республике такой материал выращивали 30 семеноводческих хозяйств 6-ти областей на обшей площади 90 га, " с которых накопано около 18 тыс. тонн клубней, отобрано более 80 тыс. клонов первого года н 20 тыс. клопов второго года. Эти объемы позволили определить реальность продвижения оздоровленного материала от пробирки до поля.

На основании данных, полученных с мест, и собственных опытов, за вычетом расходов на уборку ,н хранение дополнительного урожая (Вострикова, 1973), получение и выращивание меристемных растений, благодаря уменьшению объема серологических анализов, затрачиваемых на отбор серологически безвирусных клонов, доход от использования исходных меристемных безвирусных растений составил 172 руб./га,

В масштабе республики, в объеме семеноводства картофеля 1977 г., предполагаемая прибыль от внедрения мерис-темного безвирусного картофеля должна составить 9,8 млн. рублей.

7. Испытание некоторых приемов защиты оздоровленного картофеля от вторичного заражения в полевых условиях и разработка методики прогноза вредных факторов

Промышленные сорта картофеля пока не обладают устойчивостью к комплексу возбудителей инфекционного вырождения. Поэтому защита оздоровленного материала от ре-инфекции является неизбежным п весьма ответственным этапом в борьбе с этим вредным фактором в целом. Чем на более позднем этапе размножении произойдет проникновение инфекции, тем более здоровыми должны быть семена и тем меньше потери урожая можно ожидать в посевах товарного картофеля. Анализ фактического материала и литературных данных, приведенный в диссертации, позволил установить для зоны Украинского Полесья два наиболее распространенные способа проникновения вирусов в насаждение — контактный и с помощью тлей-переносчиков. Из тлей наибольшее значение как переносчик имеет крушинная (Ше-вель, 1973). На пресечение этих путей реинфекцгш и направлены основные экспериментальные разработки.

Из фитосаннтарных мероприятий пространственная изоляция, удаленность от лесополосы, от края картофельного поля, населенного пункта и от посадок картофеля в глубь посевов различных культур, а также кулисная защита из конопли предотвращают или значительно уменьшают проникновение в насаждение меристемного картофеля как тлей-переносчиков, так и афидофильных вирусов. В диссертации приведен анализ экспериментальных данных по этим вопросам по годам с отличающейся фитосанитарнои обстановкой.

Из мер защиты от контактных вирусов изучены загущенные посадки, уничтожение сорняков, исключение заездов в насаждение сельхозмашин. Опыты проводили параллельно в поле севооборота, на минеральной почве и на изоточке, на торфо-болотной незаплыватощей почве.

Исключение междурядных обработок и замена их прополкой гербицидами ведет к значительному уменьшению засоренности почвы и повышению процента здоровых растений. За три года испытания с этой целью прометрина пора-женность вирусными болезнями, по сравнению с контролем, осталась в 2—3 раза на более низком уровне, а урожайность повысилась на 50—80 ц/га. Кампарол уменьшает засо-' 20

ренносгь поля на 48—78 проц., распространенность контактных вирусов снизилась на 13—46 проц., а урожайность повысилась. Особенно заметной была прибавка урожая на изо-точке. Она составила 46,2 проц. Подробный анализ данных проведен по другим мероприятиям п и том числе раннему скашиванию ботвы. Последнее снижает пораженность материала, но сопровождается в год проведения некоторой потерей урожайности.

Высокую эффективность в борьбе с афндофильной вирусной инфекцией имеют афициды. Кроме широко известного сайфоса, эффективность которого, как установлено, зависит от климатических условий и фнтоегшитарной обстановки, испытаны опрыскивания деспиролем. дурсбаном, лоннэйтом, внесение в почву при посадке и в междурядья гранулированных препаратов ависект (20 кг/га) и базуднн (40 кг/га). По всех вариантах химической защиты уменьшается количество колоний тлей, остается на более нысоком уровне количество здоровых растений н нонышпется урожай (табл. 5).

Комплекс защитных мероприятий практически полностью защищает меристемный картофель от реинфекцик.

Проведен анализ многолетних (за 12 лет) данных учетов лета и заселения первичных питомников по семеноводству картофеля тлями-переносчиками вирусов, распространенна афидофильных вирусов н фактором погоды. Корреляционным методом статистической обработки 54-х сочетании погодных факторов показал, что для прогнозирования упомянутых вредных факторов наиболее существенную роль играют показатели погоды, обуславливающие рост и развитие картофеля, состояние кормовой базы для переносчиков и морфо-физиологическне особенности их популяций. Прямая корреляционная связь между показателями погоды и вредными факторами статистической обработкой цифрового материала не была установлена. Такая связь проявилась при использовании уравнения линейной регрессии, которое разработано для прогноза болезнен сельхозрастений (Степанов, Чумаков, 1967). В тексте диссертации проведен анализ экспериментальных данных по этому вопросу по годам, в зависимости от интенсивности лета тлей и прочих факторов и показателей.

Внедрение защитных мероприятий п опытном хозяйстве института позволило вскрыть дополнительные резервы повы-

шения урожайности семенного картофеля. За три года защиты меристемного картофеля в первичных питомниках урожай семенных клубней повысился на 23,4 ц/га, получено дополнительно 632 руб./га. Затраты на осуществление мер защиты составили 96 руб./га, доход — 536 руб./га. Рубль затрат на обработку клубней и опрыскиваинс растений сайфо-сом окупается в 10,3 раза.

Таблица 5.

Эффективность химической защиты меристемного картофеля сорта Гатчинский от тлей-пере носчиков и афндофнльных вирусов (1978 г.)

Среднее кол. бескрылых тлей к ~ за« эг Урожай

1 --

с "с" * Варианты Штук па 100 листьев % заражен, растений Сь'® CÜ f- 2. « ta £ « £ С Я ц/га относ, к контр.

1. Контроль (без

защиты) 48,2 21,8 54,4 9,3 262,5

2. Систематическое опрыскивание

сайфосом 15,0 6,8 68.2 8.8 361,5 +99,0

3. Систематическое опрыскивание дисперолем

4. Внесение в рядки граиулир. авнсекта

5. Внесение в рядки гранулир. б а зуди на

Применение афицидов после появления бескрылых тлей

6. Опрыскивание

дурсбаиом 5,0 2,6 78,6 7,8 307,2 +44,7

7. Опрыскивание

лоннэйт 7.0 3,0 72,7 8,0 326,5 +64,0

8. Поверхностное внесение гранулиров.

ависекта 8,8

23,0 11,0 72,8 5,7 321,7 +59,2

18,0 6,0 72,9 6,8 294,5 +22,0

18,0 7,0 73,3 7,5 297,4 +34,9

HCPoi

Р

5,0 82,3

1,49 1,13 5,68

8,0

331,5 +69,0

1,95 31,5 ц/га 3,4%

Использование прогноза вредных факторов позволит в 4 года один раз полностью отменять защитные мероприятии или проводить только одно опрыскивание афицидом. Это позволит экономить в среднем на год 24 руб./га без опасности увеличения перезаражения семенных клубней вирусами, 22

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Вирулентность является основным отличительным свойством штаммов ХВК, с которым коррелируют другие индикационные, показатели и диагностические признаки. Преобладание штаммов определенной вирулентности находится в зависимости от условий окружающей среды. В наиболее неблагоприятных для картофеля климатических условиях степень проявления симптомов вирусной болезни ослабляется, и можно ожидать преимущественного распространения в природе сильных, высоковирулентных штаммов. В условиях, наиболее близких к оптимальным для произрастания картофеля и развития вирусной болезни, происходит самовыбраковка сильных штаммов и преобладают наименее вирулентные возбудители. Чем более резко отличаются в этих пределах климатические условия, тем более далекие, полярные по вирулентности штаммы встречаются в природе на основном хозяине.

2. Интенсивность проявления внешних симптомов, вызванных. различными по вирулентности штаммами ХВК, может изменяться при репродукции их на различных растениях-хозяевах и в частности на табаке. Индуцированное изменение биологических свойств штамма при этом обратимо и поэтому может быть примером адаптивной изменчивости. Свойства штаммов этого вируса не изменяются при поддержании их на протяжении длительного времени на восприимчивом. картофеле сорта Камераз I или дурмане обыкновенном.

3. Низковирулентный штамм может быть выделен в природных условиях, максимально приближающихся к оптимальным для репродукции вируса, из смеси природных популяций на наиболее восприимчивом сорте основного хозяина. Для его очистки от примеси других изолятов может использоваться более высокая термостабильность,

4. С вирулентностью штаммов коррелируют их следующие свойства н показатели: термостабильность, антигенная активность, аминокислотный состав капсулярного, белка,

последовательность аминокислот на С-концевом участке, нормальная длина внрнонов, более интенсивный биосинтез белка, РНК, торможение биосинтеза РНК в начале про-грессирования инфекционного процесса, колебания в содержании связанных аминокислот хозяина, интенсивность формирования вирусных масс и деградации клеточных ор-ганелл! Динамика содержания ДНК в пораженном растении от вирусной инфекции не зависит.

5. Для ХВК характерны выявленные нами впервые блокирование ^-концевой аминокислоты в капсулярном белке ацетильной группой, С-концевая аепарагиновая кислота и, следовательно, доступность белковой субъединицы протео-лизу, формирование в пределах Х-тел оригинальных мембранных ленточных ультра структур, окруженных с внешней и внутренней'сторон рибосомальнымн телами, идентичными большому компоненту клеточных рибосом.

6. Разработанная н предложенная технология производства диагностических сывороток отличается следующими особенностями, обеспечивающими их высокое качество: подбор наиболее антигенно активных штаммов вирусов и антигенно неродственных основному растению-накопителю, качественный рабочий буфер, поточная очистка вирусного антигена с помощью колоночной Хроматографии .или другого пригодного для включения в непрерывный технологический поток способа, щадящее исключающее агрегацию и денатурацию внрнонов осаждение вирусов, использование активного адъюванта, рациональная схема иммунизации и ренммунизации животных.

7. Для накопления антигенов Б и М вирусов картофеля наиболее отвечают требованиям массового производства молодые растения томатов сорта Невский и для ХВК —■ дурман. Однократное опрыскивание молодых растений-накопителей препаратом ТУР не снижает интенсивность накопления вирусов и устраняет вытягивание растений.

8. Для экстрагирования изученных вирусов картофеля хорошие результаты дает нитратный буфер с добавлением веществ, уменьшающих агрегацию внрнонов и ингиби-рующях окислительные процессы в инфекционном соке. На первом этапе очистки вирусного антигена эффективным и доступным в условиях массового производства является кратковременное эмульгирование инфекционного сока с ох-

лагкденным хлорофором. При продолжительности процедуры не более 3—7 мин. достигается удовлетворительное первичное осветление инфекционного сока при минимальной потере антигенной активности вируса.

- 9. С целью получения качественной антивирусной сыворотки достаточно полное освобождение вируса от сопутствующих нормальных антигенов и окрашивающих растительный сок веществ обеспечивает гельфильтрация на колонках молекулярного сэфадекса Г-50 и анионо-обменного сэфадекса ДЭАЭ-50. При конечном осаждении вирпоиов наименьшие потери антигенной активности обеспечивает полиэтилеиглн-коль при прямом переведении вируса в осадок. Для вирусов, имеющих повышенную агрегирующую способность, антигенная активность повышается путем дробления вир ионов ультразвуком,

10. Продолжительное и интенсивное образование антител в организме животных вызывает смесь желатины с аль-гинатом натрия. Оптимальным способом его введения является двухкратная внутримышечная инъекция вместе с вирусным антигеном. Высокую производительность в получении качественных антивирусных сывороток обеспечивает также комбинированная (внутримышечная и внутривенная) иммунизация животных и несколько реиммуннзаций по сокращенной. схеме. Хорошее консервирование и минимальные потери серологической активности при хранении на-тивных антивирусных сывороток обеспечивает глицерин.

■ 11. Высокоактивные диагностические антивирусные сыворотки могут быть использованы не только для постановки реакции капельной преципитации, но также для других способов постановки серологических реакций и в том числе более, чувствительного теста с сенсибилизацией антител на палыгорските.

12, Метод культуры меристемы пригоден для широкого практического применения при оздоровлении сортов картофеля н получении больших количеств исходного безвнрус-ного материала с целью выращияання высококачественных элитных семян.

Путем усовершенствования метода выращивания меристем картофеля на элективных питательных средах лабораторный цикл оздоровления растений от вирусов может быть

значительно упрощен, удешевлен н сокращен. Из изученных. приемов этой цели служат увеличение размера вычленяемой для посадки меристемы путем .выращивания маточ--ных растений на иммунном подвое, обработки маточных растений и черенков растворами антивирусных ингибиторов, предварительная серологическая проверка растений, предназначенных для электронной микроскопии, черенкование пробирочных растений и другие приемы ускоренного размножения.

13. Применение комплекса защитных мероприятий: предпосадочная обработка клубней системным афицидом, химическая прополка сорняков, исключение заездов в насаждение сельхозмашин и сельхозоруднн, опрыскивание растений афицидом в начале массового лета тлей, раннее предуборочное скашивание ботвы позволяет выращивать из здорового исходного материала безвирусный семенной материал, соответствующий мировым стандартам на безвирусный картофель, в поле основного севооборота. Пространственная изоляция удешевляет систему защитных мероприятий за счет исключения предпосадочной обработки клубней системным афицидом и уменьшением числа опрыскиваний.

14. Прогнозирование лета тлей-переносчнкос и распространения афндофильных вирусов возможно на основе построения уравнения линейной' регрессии и многолетних количественных показателей, оно позволяет рационально планировать объем защитных мероприятий и в значительной мере сокращать его в годы, благоприятные в фнгосанитар-ном отношении.

15. В производственных условиях реализация мер борьбы с инфекционным вырождением картофеля обеспечивает высокий экономический эффект. Этот эффект обеспечивается в основном повышением урожайности семенных клубней, выращенных из безвирусных меристемных клонов, по сравнению с серологически безвирусным исходным материалов, на 60 ц/га, окупаемостью химической защиты оздоровленного материала от реинфекции, составляющей 10,31 рубля на рубль затрат, рентабельностью других профилактических и защитных изученных и рекомендованных к внедрению приемов, а также рациональным планированием объема работ на основе использования перспективного прогноза лета тлей-переносчиков и распространения афидофильных вирусов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шелудько ГО. М. О методике получения диагностической сыворотки к Х-вирусу картофеля.— «Вирусные болезни растений. Изд. «Колес», М., 1964. с, 102—110,

2. Шелудько Ю. М., Егоров О. В., Олевский В. Б. К усовершенствованию методики приготовления препаратов вирусов растений для электронной микроскопии,— «IV Всесоюзное совещание по электронной микроскопии». Тезисы докладов, г. Сумы, 1963, с. 106—107.

3. Московец С. Н., Шелудько Ю, М. Влияние горно-карпатских условий на оздоровление картофеля от вирусов морщинистой мозаики.— «Вопросы иммунитета и оздоровления растснин». Изд. «Урожаи», Киев. 1964, с. 180—182.

4. Мое к овец С. Н., Шелудько Ю. М., Михеева И. И. Спектрофото-метрическое определение РНК в растениях, пораженных Х-вирусом картофеля.— «Тезисы выступлений на пятом совещании но вирусным болезням». ВАСХНИЛ, М„ 1964, с. 1—9.

5. Шелудько Ю. М., Шевченко Н. А., Алексеенко JT. И. Ионообменная хроматография вируса Х-картофеля.— «Тезисы выступлений на пятом совещании по вирусным болезням». ВАСХНИЛ, М„ 1964, с. 23—25.

6. Шелудько Ю. М. Деям метод и дослал жен ня поел и мних вфуЫв у лабораторП, керованш професором Г. Шрачмом. 1, Вирощування рослин та розмноження Bipycie. 2. Очистка BipyciB. Пренаративне вид|лення ш-фекшйноТ РНК—ВТМ. — М(кробюлопчннй журнал, 1964, т. 26, в. 2, с. 100—103.

■7, Шелудько Ю. М. Деяк[ методи дослшкення рослинних Bipycie у лаборатори, керовашй професором Г, Шраммом. 4. Препаратнвпс видЬ лення битка ВТМ. 5. Одержання рнбонуклеазн з листя тютюну,— iMik-роб!олопчиий журнал. 1964, т. 26, в. 3, с. 90—93.

8. Шелудько Ю. М. 'Деяк! методи дослщження рослинних eipyciB у лаборатори, керовашй професором Г. Шраммом. 6. Ямсне i Ki.ibnicne визначення мононуклеотидного складу РНК в лист! тютюну. 7. Електрон-но-шкроскотчне вивчення рослинних BipvciB.— Мжробюлопчннй журнал, 1964, т. 26, в. 4, с. 86—88,

9. Шелудько Ю. М,, Шевченко II, О. Повторне освЕтлення соку рослин, уражених Х-в1русом картоп.ш" на в!тчизняних йонообмшних смолах.— ЛШробюлопчннй журнал, 1965, т. 27, в. 2, с. 78—82.

10. Шелудько Ю, N1., Сивере Н. А. Колончатая хроматография X-вируса картофеля.— «Вирусные болезни сельскохозяйственных растений», Киев, 1966, с. 63—70.

11. Московеи С. Н.г Шелудько К). М,, Михеева И. И. Спектрофото-метрическое определение РНК в растениях, пораженных Х-вирусом картофеля.—«Вирусные болезни сельскохозяйственных растений», Киев, 1966, с. 24—32.

12. Шелудько Ю. Д1., Михеева И. И. С не к г ро фото метрическое определение РНК и вируса в растениях, пораженных Х-вирусом картофеля,

— Вопросы вирусологии, 1966, № 3, с, 46.

13. Шелудько Ю. М., М1хеева I. I., Вареник В. С. Особливосп нагро-мадження рибонуклеТновоГ кислоти (РНК) в рослинах, уражених Х-В1-русом картопл!. — М]Кроб1олопя для народного господарства 1 медици-ни», «Наукова думка», Кт'в, 1966, с. 289—294.

14. Московець С. М., Криволалова О. П., Шелудько Ю. М. Полш-шення насшневих якостей та оздоровления картолл] вщ в ¡рус} в зморш-куватоГ мозаГки в прсько-карпатських умовах. — М1кробюлопчний журнал. 1965, т. 27, в. 4, с. 31—36.

15. Московец С. Н„ Шелудько Ю. М., Жеребчук Л. К- Выращивать только здоровую элиту.— Селекция и семеноводство, 1966, в. 2, с. 35—36.

(6. Шелудько Ю. М., Козар Ф. Е, Структурные особенности растительной клетки, пораженной вирусом. — «Материалы ко второыу всесоюзному симпозиуму по применению электронной микроскопии в ботанических исследованиях», Киев, 1967, с. 138—141.

17. Козар Ф. Е., Шелудько Ю. М. Изменения в цитоплазме клеток дурмана, связанные с репродукцией Х-вируса картофеля. — «Материалы ко второму всесоюзному симпозиуму по применению электронной микросколии в ботанических исследованиях», Киев, 1967, с. 141—143.

18. Козар Ф. Е,, Шелудько Ю. М. Аномальные хлоропласты в клетках дурмана, пораженного Х-вирусом картофеля. — «.Материалы ко второму всесоюзному симпозиуму по применению электронной микроскопии в ботанических исследованиях», Киев, 1967, с. 143—146.

19. Шелудько Ю. М., Козар Ф. Ю, До питания в]рулентносп Х-01русу картопл! в р]зинх кл1матичних ммовах СРСР, — ЛНкробюлопчниб журнал, КнГв, 1967, т. 29, в. 4, с. 316—322.

20. Сндор О. С.. Шелудько Ю. М. Особлиаосл аминокислотного складу б!лка рослин, уражеиих Х-в1русом картопль — АШробюлогнаий журнал, 1967, т, 29, в. 4, с. 326—333.

21. Шелудько Ю. М„ Козар Ф. Ю. Особливосл поширення Х-в1руеу картопл! по рослин!. — М1кро<Яолопчний журнал, 1968, т. 30, в. 2, с. 181—183.

22. Шелудько Ю. М. Одержання нагнвним в1русних РНК та Тх штуч-ний синтез.—М)Кробюлопчний журнал. 1968, т. 30, в. 2, с. 381—184.

23. Козар Ф, Ю„ Шелудько Ю. М. Ультраструктура Х-т!л Х-в1русу картопль— ДоповЫ АН УРСР, 1968, сер. Б, с. 756—760.

24. Сидор О. С., Шелудько Ю. М. Амшокисл отпил склад б!лмв трьох штаьив Х-В1русу картопл! р]зно! в1рулентност1.— АШроб!олопчний журнал, 1968, т. 30, в. 5, с. 471—475.

25. Московец С, Н., Шелудько Ю. Л1. и др. Изучение биологических, химических и физических свойств вирусов растений и условий их репродукции (1964—1967 гг.). — Реферативная информация о законченных научно-исследовательских работах Института микробиологии и вирусологии им. Д. К- Заболотного АН УССР, в 1967 г. «Наукова думка», Киев, 1968, с. 20—22.

26. Шелудько Ю. М., Козар Ф. Ю. Серолопчш властивост) Х-шрусу, видитеного з кар то п.11 в р^зних клшатичних зонах СРСР.— М:кробюло-пчннй журнал, 1968, т. 30, в. 3, с. 254—261.

27. Шелудько (О. Л1„ Козар Ф. Ю., Жеребчук Л. К М1нлив(сть Х-в(-русу картопл! при репродукци на тютюн!- — Мжробюлопчннй журнал, 1969, т. 31, е. 3, с, 236—242,

28. Полем ко Г. Г., Шелудько Ю. М. Портнялъне вивчення морфоло-rii трьох штам!в X-Bipycy картопл). — ДоповЫ АкадемЛ наук УкраТнсь-коТ РСР, 1969, Mb 5, сер. Б., с. 465—469..

29. Шелудько Ю, М., Козар Ф. Е. Элекзронно-мнкроскогшческне картины энергетической перестройки растительной клетки под влиянием вирусной инфекции.— «Хлоропласта и митохондрии*. М., «Наука», 1969, с. 216—223.

30. Попенко Г. Г., Кишко Я. Г, Шелудько Ю. М, Электрон но-микро-скопическое исследование структуры Х-вируса картофеля,— «Электрон-, ная микроскопия твердых тел и биологических объектов», М., «Наука», 1969, с. 356—361.

31. Шелудько Ю. М., Козар Ф. Е. Внутриклеточное развитие фитопа-тогенных вирусов. — «Современная вирусология», «Иаукова думка», Киев. 1969, с. 125—153.

32. Шелудько Ю. М- «ФповЕрусолоня». «Пиша школа», Khib, 1970, с. 273 з 1л.

33. Шелудько Ю. М. Внутриклеточное развитие вирусов растений,— * Вирусологические исследования на Дальнем Востоке», РИС Дальн. фил. Сибирского отдел. АН СССР, Владивосток, 1969, с. 222—227,

34. Козар Ф. Е„ Шелудько Ю. М. Ультра структур а расгнтельных клеток картофеля и дурмана, пораженных Х-внрусом картофеля. —Virology, 1969. v. 38, N 2, р. 12—19,

35. Шелудько Ю. М. Изменения в содержании РНК и белка, а также ультраструктурные особенности клетки под влиянием ХВК инфекции. —Zeszyty fprobiemove posiepow nauk rofnlczych, 1970. z, 3, p. 169—182

36. Шелудько Ю. M. и др. О возможности репродукции растительно-' го вируса в культуре растительных тканей свойственных и несвойственных хозяев и одноклеточных водорослей. — «Культура изолированных орга*. нов. тканей и клеток растений». Труды I всесоюзной конференции. *На-ука», М., 1970. с. 295—298.

37. Московець С. М„ Cieepc Н. О., Шелудько Ю. М. Виявлення ( вивчення штам!в X-Bipycy картопл] на УкраГии.— АШробюлопчний журнал, 1970, т. 32, в. 2, с. 242—247.

38. Cieepc Н. О., Шелудько Ю. М. Очистка X-Bipycy картоши методом колонковоТ хроматограф^. — АШробюлоНчний журнал. 1970, т. 32, в. 4, с. 473—478.

39. Московець С-М., Шелудько Ю. М,, Семерн1кова Л. I. Зм|ич вмюту РНК, ДНК та бьпка в хлоропластах листя дурману при ураженн! X-Bipy-сом картоплк— Л1жробюлопчний журнал, 1971, т. 33, в. 1, с. G0—64,

40. Попенко Г. Г., К1шко Я. Г., Шелудько Ю. М-, Cieepc И. О. Електронно-м1кроскошчне дослйження РНК X-sipvcy картопл!. — ЛИк-робюлопчний журнал, 1971, т, 33, в. 2, с. 165—172.

41. Попенко Г. Г., Кишко Я. Г., Шелудько Ю. М. Электронно-микроскопическое изучение трех штаммов Х-вируса картофеля. —- Вопросы вирусологии, 1971, в. 3, с. 344—348. .

42. Шелудько Ю, М. Внутриклеточное развитие вирусов растений.— «VI всесоюзное совещание по вирусным болезням растений», тезисы докладов, часть I, М„ 1971, с. 20—24.

. 43. Ващншнна Д. Л., Молоцькнй М. Я., Шелудько Ю. М. Випробу-вання окремих cepifl диких вид1в картопл! на спйк!сть проти Bipycy X. — «Картоплярство», республжанський Mi жв ¡дом чин темагнчннй науковий зб!рник, «Урожай», Кит, 1972, в. 3, с. 83—86.

44. Шелудько Ю. М., Макаренко К. I., Полянсысий М. I. (нтерфере-

Н0П0Д:6Н[ рОСЛННШ ШПбПОрИ Х-В]русу КарТОПЛ!, - ЛШрОбЮЛОПЧНИЙ

журнал, 1973, т. 35, в. 3, с. 396.

45. Шелудько Ю. М., Погорнлько М. Я- Внкористання мо.пеелектт I ак-рилекст для очищения в]рус(в картопл!. — М1кроб!олопчний журнал, 1973, т. 35, в. 3, с. 396—397.

46. Шелудько ГО. М,, Логор1лько М. Я. Внкористання томат для иагромадження 3-В1русу картопл1 при масовом\' внробництв! дтагностнч-но! сироватки— В1сник с.-г. науки. 1974, т. 196, в. 3, с. 55—60.

47. Шелудько Ю. М. Некоторые данные о внутриклеточном развитии вирусов растений,— «Вирусы н вирусные болезни растсний^. Материалы VI всесоюзного совещания по вирусным болезням растении. «Наукова думка», Киев, 1974, с. 43—45.

48. Шелудько ГО. М. и др. Перспективи одержання безвгрусноТ ел5тн картопл!.— «Картопл ярство», рёспуОлжаиський шжв1ДОмчий темагнчний науковий збфник, «Урожай», Кшв, 1974. в. 5, с. 41—4С.

49. Шелудько Ю. М., Р и бал ко А. €. Нов1 метод и одержання безвкусно! елки, картопл!.— Весник с.-г. науки, т. 203, в. 10, с. 53—58.

50. Шелудько Ю. М., Рыбалко А. Е. Перспективы использования метода культуры меристемы в безвирусном семеноводстве овощных культур. — «Тезисы докладов к всесоюзному семинару-совещанию по вирусным болезням овощных культур». Л1., ВАСХИИЛ, 1974, с. 51—52.

51. Шелудько ГО. М. и др. До питания про д ¡агностик)' вгрусиого скручуванкя листыв картопл! та застосування термотерапп в Ьоротьбг з ним. — «Картоплярство*, республжанськии м1жв1домчий тематичннй науковий збфник, «Урожай», Кшв, 1975, в. 6. с. 44—46.

52. Шелудько ГО. И. Можно'ли считать уникальной репродукцию ХВК? — «Труды IV съезда микробиологов Украины«-. «Наукова думка», Киев, 1975, с. 130—131.

53. "Погорнлько Н. А,, Шелудько К>. М. Использование адъгаванто» при массовом производстве диагностических сывороток к некоторым в и-' р\сам картофеля.—■ «Сельскохозяйственная биология», 1975, т. 10, в. 4, с.' 551—554. ■

54. Шелудько Ю. М. и др. Использование метода культуры меристемы картофеля для создания исходного безвирусного материала в Украинской ССР. — «Современные методы получения без вирусного картофеля», тезисы докладов к Всесоюзному семинару-совещанию. ВАСХНИЛ,

1975, с. 25—26.

55. Погорнлько Н. А., Шелудько 10, М. Производство и использование диагностических сывороток для получения безвирусного картофеля на Украине.— «Современные методы получения безвирусного картофеля», тезисы докладов к Всесоюзному семинару-совещанию. ВАСХШ1Л, М., 1975, с. 84—86.

56. Шелудько ГО. М., Рыбалко А. Е. Пути повышена устойчивости растительных тканей для получения безвирусных растений.— «VI Всесоюзное совещание по иммунитету с.-х. растений к болезням н вредителям», тезисы докладов, М., 1975. с. 62—63,

57. Способ постановки серологических реакций. Авторское свидетельство СССР № 432193. (В соавторстве).

58. Способ приготовления диагностических сывороток к вирусам растений. Авторское свидетельство СССР Л'г 519472 (В соавторстве;.

59. Шелудько Ю. М. и др. Повышение чувствительности серологической реакции с помощью суспензии палыгорскита. — Доклады ВАСХНИЛ, 1976, е. 1, с. 19—20.

60. Шевель Н. Е., Шелудько Ю. М. Использование экологических факторов в прогнозировании тлей-переносчиков вирусов картофеля..— «Вирусные болезни растений и насекомых». Груды ЛСХА, по материалам Всесоюзного совещания, Елгава, 1977, в. 153, с. 123—127.

61. Шелудько Ю. М. Штаммы Х-вируса картофеля и их критерии.— «Штаммы вирусов*, Труды Всесоюзного совещания. Владивосток. РИС ДВНЦ АН СССР, 1977, с. 100—107.

62. Шелудько Ю. М, и др. Ускоренное размножение меристем но го безвнрусного картофеля.—-Вестник с.-х. науки, 1977, т. 250, в. 7, с. 26—30.

63. Шелудько Ю, М. и др. Исходный' материал для -семеноводства картофеля на безвирусной основе. — «Вирусные болезни растений Дальнего Востока*, Владивосток. РИС ДВНЦ АН СССР, 1976. Новая серия, т. 25, в. 128, с. 146—150.

64. Погорилько Н, А., Шелудько Ю. М. Растения-накопители S . вируса картофеля при массовом производстве диагностических антисывороток. — «Вирусные болезни растений Дальнего Востока», Владивосток. РИС ДВНЦ АН СССР, 1976, Новая серия, т. 25, в. 128, с. 227—233.

65. Рыбалко А. Е., Харута Л.Г., Шелудько Ю, М. Применение ТУРа при ускоренном размножении безвирусного картофеля, полученного методом культуры меристемы. — «Отдельное приложение к методическим указаниям по работе с препаратом ТУР в плодоводстве и овощеводстве — по материалам 3-го Всесоюзного совещания», М., МСХ СССР, 1976, с. 22—24.

. 66. Шелудько 10. М., Шевель Н. Е. Меры защиты оздоровленного в культуре меристемы картофеля от вторичного заражения вирусами, — Информационный листок, сер. 31, земледелие, Чернигов, изд. ЦНТИ, 1977, № 77—35, 3 с.

67. Шелудько Ю. М. и др. Использование метода культуры меристемы для создания исходного безвнрусного материала картофеля в УССР. — «Защита картофеля от вирусных болезней в семеноводстве», научные труаы НИИКХ, М„ вып. 30, 1977, с. 51—58.

68. Погорилько Н. А., Шелудько Ю. М, Производство диагностических сывороток к вирусам картофеля методом гельфильтрации, — Сельскохозяйственная биология, 1978, т. 13, в. 1, с. 113—1!8.

69. Шелудько Ю. М, Внедрение в семеноводство картофеля, оздоровленного методом культуры меристемы. — Информационный листок, JA 13—78, сер. 32, растениеводство, 1978, Чернигов, ЦНТИ, 4 с.

70. Шелудько Ю, М, Некоторые исследования вирусов картофеля и внедрение системы борьбы с ними в семеноводство УССР.-— «Вирусные болезни с.-х. растений и меры борьбы с ними», тезисы докл. на Всесоюзн. совещании. ВАСХНИЛ, М„ 1978, с. 58-61.

71. Шевель Н. Е., Шелудько К>. М, Принципиальные основы прогноза н его место в системе борьбы с эитомофильными вирусами картофеля,— «Вирусные болезни с.-х. растений и меры борьбы с ними», тезисы докл. на Всесоюзн. совещании. ВАСХНИЛ, М., 1978, с. 8—10.

Типография им. Кирова издательства «Десна?, а& /177/ 1/1-80 г. БШ 01191

т. 100