Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Псевдомоноз продуктивных животных в регионе Северного Кавказа

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Псевдомоноз продуктивных животных в регионе Северного Кавказа"

На правах рукописи

ПРУЦАКОВ СЕРГЕИ ВЛАДИМИРОВИЧ

ПСЕВДОМОНОЗ ПРОДУКТИВНЫХ ЖИВОТНЫХ В РЕГИОНЕ СЕВЕРНОГО КАВКАЗА

06.02.02-ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

1 2 МАЙ 2011

Краснодар - 2011

4846485

Работа выполнена в лаборатории эпизоотологии ГНУ Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института

Научный консультант:

Заслуженный деятель науки Кубани, доктор ветеринарных наук, профессор Болоцкий Иван Александрович

Официальные оппоненты:

Шевченко Александр Алексеевич

доктор ветеринарных наук, профессор Литвинов Олег Борисович доктор ветеринарных наук, профессор Малышева Людмила Александровна доктор ветеринарных наук, профессор

Ведущая организация: Северо-Кавказский зональный научно-

исследовательский ветеринарный институт

Защита состоится « /о-» & 2011 г. в «10-00» часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при Кубанском государственном аграрном университете по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан « и » ^¿ууу^ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук

И.А. Родин

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Псевдомоноз регистрируется у всех видов животных в различных климатических зонах мира. Этому способствуют высокая устойчивость возбудителя к условиям внешней среды, антагонистическая активность, резистентность к большинстыу применяемых антимикробных средств. (П. П. Литовченко, 1984; Basey С. et al., 1984; Bodey P. et al., 1984; Fernandes C. et al., 1985)

В настоящее время отмечается усиление роли P. aeruginosa в этиологии заболеваний и тяжелых инфекционных осложнений у людей и животных, что необходимо учитывать в зависимости от региональных условий (Н. С. Акатова,

A. К. Акатов, 1975; В. Д. Беляков, Л. А. Ряпис, В. И. Илюхин, 1990).

Значительная инфицированность животных и птиц во всех регионах России, сложность диагностики, отсутствие рациональной терапия болезней, вызываемых патогенными культурами синегнойной палочки, представляет на современном этапе актуальную проблему отечественной ветеринарии (Н. К. Седов 1985, И.А. Болоцкий, А. Г. Шипицын, В. И. Терехов, Н. Ю. Басова 1986,

B. Т. Больных с соавт.1987. П. Ф. Сонин, М. А. Азямов 1988, С. А. Шаронин 1990, Л.И. Ефанова 1995, О.Б. Литвинов 1999, А.К. Васильев 2003 и др.).

Качественно новые методы содержания и эксплуатации животных, особенно на комплексах, характеризующиеся длительным пребыванием их в закрытых помещениях, высокой концентрацией на ограниченных производственных площадях, воздействие на организм животных многочисленных технологических стресс-факторов, снижает уровень их естественной резистентности, что способствует повышению вирулентности P. aeruginosa и провоцирует вспышки псевдомоноза у животных.

Всё вышеизложенное и послужило основанием для проведения исследований по изученю эпизоотологических особенностей, определению этиологической структуры псевдомоноза животных и разработке специфических средств и способов для повышения эффективности ветеринарных мероприятий при данной патологии в регионе Северного Кавказа.

Цель исследований: Изучить эпизоотологию и этиологию псевдомоноза сельскохозяйственных животных в регионе Северного Кавказа и на основании полученных данных разработать комплексную систему специфической профилактики и эффективной терапии.

Для достижения указанной цели, поставлены следующие задачи:

- изучить распространение и этиологическую структуру псевдомоноза у продуктивных животных в выше обозначенной зоне;

- изучить клиническое проявление и патологанатомические изменения при псевдомонозе у различных видов животных в призводственных и экспериментальных условиях;

- изучить биологические, вирулентные, антигенные и иммуногенные свойства у наиболее часто встречаемых серотипов P. aeruginosa и подобрать штаммы для создания поливалентной вакцины и сыворотки против псевдомоноза животных;

- создать опытные серии поливалентной вакцины и гипериммунной сыворотки против псевдомоноза животных и провести их испытание;

- разработать и подготовить нормативную документацию (технические условия, инструкции по изготовлению, контролю и применению) на поливалентную вакцину и гипериммунную сывортку против псевдомоноза животных;

- разработать и внедрить комплексную систему мероприятий при псевдо-монозе животных;

Научная новизна. Впервые в регионе Северного Кавказа изучена распространенность и определена этиологическая структура псевдомоноза у животных, изучены биологические, вирулентные, антигенные и иммуногенные свойства выделенных изолятов P.aeruginosa. Экспериментально воспроизведен псевдомоноз на поросятах, описаны клинические признаки и патологоанатоми-ческие изменения.

Сконструирована поливалентная вакцина против псевдомоноза животных, изучены ее антигенные и иммуногенные свойства. Получена гипериммунная сыворотка для профилактики псевдомоноза животных и определены ее превентивные свойства. Проведены клинические испытания этих бипрепаратов и доказана их высокая эффективность.

На основании полученных положительных результатов подготовлена и утверждена нормативная документация (технические условия, инструкции по изготовлению, контролю и применению) на поливалентную вакцину и гипериммунную сыворотку против псевдомоноза животных.

Разработана и внедрена научно обоснованная система борьбы с псевдо-монозом продуктивных животных, включающая применение специфических, профилактических и лечебных средств и проведение соотвествующих организационно-хозяйственных мероприятий.

Новизна исследований подтверждена патентами на изобретения: № 2308288 от 20.03.2006 г. "Вакцина поливалентная против псевдомоноза сельскохозяйственных животных", № 2327472 "Средство для профилактики и лечения токсикозов сельскохозяйственных животных и птицы" от 20.12.2006 и № 2376034 от 27.05.2008 г. "Способ получения поливалентной сыворотки против псевдомоноза сельскохозяйственных животных"

Практическая значимость работы.

Изучена эпизоотология псевдомоноза, этиологическая структура, клиническое проявление и патологоанатомические изменения у различных видов животных. Определена роль P.aeruginosa в эпизоотическом процессе на территории Северного Кавказа и России.

Изучены биологические, вирулентные, антигенные и иммуногенные свойства у наиболее часто встречаемых серотипов P. aeruginosa и подобраны штаммы для создания поливалентной вакцины и сыворотки против псевдомоноза животных. Оптимизированы параметры культивирования производственных штаммов для изготовления поливалентной вакцины, методы контроля качества и определения эффективности. Определены иммунизирующие дозы вакцины для различных видов животных.

В условиях биофабрики отработана методика гипериммунизации волов-доноров с использованием иммуностимуляторов. Изучена динамика накопления специфических антител при различных схемах гипериммунизации. Разработаны параметры контроля качества сыворотки и методы определения ее активности.

Производство новой вакцины и поливалентной сыворотки против псев-домоноза сельскохозяйственных животных освоено на ФГУ «Армавирская биофабрика».

В производственных условиях внедрена эффективная система мероприятий при псевдомонозе животных.

Материалы диссертации легли в основу: "Методических рекомендаций по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных", утвержденных академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии A.M. Смирновым (протокол №3 от 9 октября 2001 г.), а также вошли в монографию "Псездомоноз животных" (ISBN 978-510-003990-7 М. Колос, 2010 223 С. тираж 1000 экз.) и учебное пособие "Инфекционные болезни свиней" (ISBN 978-5-222-12183-2 г. Ростов н/Д : Феникс, 2007. - 346 с. тираж 3000 экз.)

Федеральным агентством по науке и инновациям Российской Федерации в 2008-2009 гг. проведена процедура учета и государственной регистрации разработанных средств и способов, на основании которой выдано 2 регистрационных свидетельства на объекты учета научно-технической деятельности с правом Российской Федерации на безвозмездное их использование для федеральных государственных нужд.

На защиту выносятся следующие основные положения:

• Эпизоотологические особенности и этиологическая структура псевдомоноза продуктивных животных в регионе Северного Кавказа.

• Клинические признаки и патологоанатомические изменения у различных видов животных при псевдомонозе в эксперименте и производственных условиях.

• Поливалентная вакцина против псевдомоноза животных, конструирование и результаты испытаний в лабораторных условиях и на производстве

• Поливалентная сыворотка против псевдомоноза животных, схемы гипериммунизации волов-доноров и ее профилактическая и лечебная эффективность.

• Комплексная система мер борьбы с псевдомонозом сельскохозяйственных животных.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и одобрены на ученых советах Краснодарского НИВИ, международных и Всероссийских научно-практических конференциях: Международной научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов" г. Щелково 2005 , на международной науч. -прак.конф. 9-10.10.2008. 110 лет ВИЭВ. «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел» г.

Москва, на научно-практической конференции посвященной 60-летию ГНУ Краснодарский НИВИ "Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях" г. Краснодар 2006 г., на Всероссийской научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и зоотехнии г. Казань 2005, на научно-практической конференции фармакологов Российской Федерации «Фармакологические и экотоксикологические аспекты ветеринарной медицины» г. Троицк 7-9.11.07., на Всероссийской научно-практической конференции и XII Межвузовском координационном совете "Свинина. Актуальные проблемы производства свинины в Российской Федерации" Ставрополь 2004, на международной научно-практической конференции "Профилактика и меры борьбы с лейкозом крупного рогатого скота в Российской федерации" Екатеринбург 2005 , на международной научно-практической конференции "Ветеринарна медицина - 2005 " сучасний стан та актуальни проблеми забеспечиния ветеринарного благополучия тваринитцтва" в г. Харькове 2005, на международной научно-производственной юбилейной конференции посвященной 110-летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России, г. Курске 2005, и др. в 2000-2010 годах

Публикации. Основные научные положения диссертации изложены 52 работах, в том числе 12 в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ, в 3 патентов на изобретения Российской Федерации. Материалы диссертации использованы в монографии, учебном пособии с грифом МСХ РФ, рекомендациях, научных статьях и тезисах докладов центральных научных журналов и изданий, международных и всероссийских научных конференций.

Внедрение. Результаты научных исследований под авторским надзором и с положительным эффектом внедрены в хозяйствах Краснодарского края, Волгоградской области, в республике Кабардино-Балкария, вошли в учебное пособие "Инфекционные болезни свиней" ISBN 978-5-222-12183-2 г. Ростов н/Д : Феникс, 2007. - 346 с. тираж 3000 экз. и монографию "Псевдомоноз животных" (ISBN 978-5-10-003990-7 М. Колос, 2010 223 С. тираж 1000 экз.); "Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных", утвержденные академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии A.M. Смирновым (протокол №3 от 9 октября 2001 г),; "Методические рекомендации по эпизоотологии, профилактике и лечению псевдомоноза крупного рогатого скота и свиней" рассмотренные и одобренные на заседании ученого совета Краснодарского НИВИ (протокол № 7 от 27.10.2010).

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 308 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Материалы диссертации иллюстрированы 62 таблицами и 1 рисунком. Список литературы включает 383 источника, в том числе 151 иностранных авторов. В приложении диссертации представлены документы, подтверждающие результаты отдельных этапов работы, их научную и практическую ценность.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в лаборатории эпизоотологии Краснодарского НИВИ в 2000-2010 годах, в Краснодарской межобластной ветеринарной лаборатории, в ФГУ "Армавирская биофабрика" а также в 32 хозяйствах Краснодарского края, Волгоградской области в рамках Российской научно-технической программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК Российской Федерации (N° госрегистрации 15070.3321004010.06.8.002.3 от 22.11.06) в соответствии с Государственными планами научных исследований Россельхозакадемии. Она является частью задания № 08.01.02 "Разработать современные средства и методы специфической защиты, терапии и диагностики наиболее распространенных инфекционных (в том числе зоонозов, прионных инфекций) и протозойных болезней животных в соответствии с планами научных исследований, утвержденными Российской академией сельскохозяйственных наук задания № 02.01.01. "Разработать специфическую профилактику и эффективную фармакотерапию псевдомоноза животных" и этап "Отобрать и изучить биологические (антигенные и иммуноген-ные) свойства штаммов P. aeruginosa для конструирования вакцин и сывороток против псевдомоноза".

В проведении ряда отдельных лабораторных исследований и клинических испытаний, с учетом их комплексности, принимали участие сотрудники Краснодарского НИВИ и ФГУ "Армавирской биофабрики": И.А. Болоцкий, В.И. Семенцов, А.К. Васильев, Н.Ю.Басова, И.И. Дубровин, Е.В. Сусский, С.Н. Ярцев и другие, которым автор выражает искреннюю признательность и благодарность за оказанную помощь в работе.

Экспериментальные и научно-производственные опыты проведены в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому исследованию по подбору аналогов, постановке контроля, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период проведения работы и учета результатов. При постановке опытов были использованы биологические, клинические, бактериологические, биохимические, морфологические, иммунологические и другие методы исследований.

В ходе решения поставленных задач было проведено 157 научно-производственных опытов, при этом использовано 3878 белых мышей, 278 морских свинок, 2770 поросят разного возраста, 1534 свиноматок, 187 хряков-производителей, 1215 телят различных возрастов, 742 коровы, 97 быков-производителей. Всего проведено бактериологических исследований проб материалов из хозяйств - 6223, от животных опытных групп - 2780, гематологических - 1752, биохимических - 2658, иммунологических- 1230, серологических -1474, биологических-972.

Распространение, зональность, сезонность псевдомоноза животных в некоторых регионах Российской Федерации и хозяйствах Краснодарского края изучали, анализируя данные Центральной ветеринарной и Краснодарской межобластной лабораторий, краевой и внутрихозяйственной ветеринарной отчетности, амбулаторные журналы, акты выбытия животных (падёж, вынужденный убой, сдача санитарного брака) и собственных исследований за последние 10

лет.

Методики постановки опытов по экспериментальному воспроизведению псевдомоноза у поросят, приготовлению вакцины и сыворотки, а также по определению эффективности терапевтических мероприятий подробно описаны в соответствующих главах.

При постановке опытов учитывали общее состояние телят и поросят, взятых в опыт, для чего осуществляли клинические наблюдения на всех стадиях выращивания и откорма. При этом особое внимание обращали на животных, у которых наблюдались клинические признаки, свойственные псевдомонозу.

В различные сроки развития патологического процесса проводили морфологические и биохимические исследования крови животных по общепринятым методам. Комплексный гематологический анализ - автоматизированным анализатором «Абакус» (Австрия) и унифицированным методом подсчета в счетной камере; подсчет общего количества лейкоцитов - унифицированными методами подсчета в автоматическом счетчике типа «PS-5» - Пикоскел и в счетной камере; скорость оседания эритроцитов (СОЭ) - методом Панченкова; гемоглобина - по методу Сали и гемоглобинцианидным методом; количественную оценку лимфоидных элементов проводили с помощью гематологического электронного цифрового счетчика, согласно методическим рекомендациям по ветеринарной гематологии (А.А.Кудрявцев, с соавт., 1969, Г.А Симонян, Ф.Ф. Хисамутдинов, 1995).

Биохимические исследования состояли из определения в сыворотке крови общего белка (колориметрически), белковых фракций (нефелометрически), каротина и витамина А (по Бессею, в модификации Анисовой), мочевины (цветной реакцией с диацетилмонооксимом и тиосемикарбазидом), общего кальция (с орто-кризолфталеином), неорганического фосфора (с ванадат-молибдатным реактивом), глюкозы (ферментативно).

Бактерицидную активность сыворотки крови исследовали нефелометри-ческим методом по отношению к референтному штамму E.coli 055; лизоцимную активность сыворотки крови - нефелометрическим методом с M.Iysodeiticus (ацетоновая культура); фагоцитарную активность нейтрофильных гранулоци-тов периферической крови - с тест-культурой St.aureus 209р; оценку функциональной активности микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов -по спонтанному и стимулированному NBT- тесту, стимуляцию проводили тест-культурой St.aureus 209р; циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) - методом преципитации с полиэтиленгликолем-6000; количество Т-лимфоцитов и их субпопуляцйй ~ методом спонтанного розеткообразования со стабилизированными эритроцитами барана с теофиллином и без; количество В-лимфоцитов - розеткообразованием с ЕАС-комплексом с использованием стабилизированных эритроцитов быка, основываясь на " Методических указаниях по тестированию естественной резистентности телят" М., 1980; "Тестирование состояния микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов в диагностике иммунного дефицита" и "Методах оценки функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов", И.В. Нестерова с соавт., 1992. Титры антиэритроцитарных антител определяли в РМГА согласно "Иммунологическим методам" под ре-

дакцией Г.Фримеля, 1987.

Исследования параметров микроклимата помещений, в которых содержались животные, проводили по методу Г.К. Волкова (1978).

Бактериологические исследования проводили общепринятыми методами, описанными в руководствах: «Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии» (1985) и «Медицинские лабораторные технологии (1999 г.), а также руководствовались «Методическими указаниями по лабораторным исследованиям на псевдомоноз животных и птиц», утвержденных ГУВ МСХ СССР № 432-3 от 14. 11. 1988 г.

Серотипизацию выделенных изолятов Р. aeruginosa осуществляли в РА по общепринятой методике с типоспецифическнми сыворотками, изготовленными ГИСК им. Тарасевича, Москва. Контрольными являлись 20 штаммов болгарской коллекции.

Экономический ущерб, наносимый заболеваниями, экономическую эффективность лечебно-профилактических мероприятий определяли согласно утвержденной Главветупром СССР «Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» М. 1982 г.

Математическую и биометрическую обработку полученных цифровых данных исследований проводили с помощью программы Microsoft Excel 2000 на компьютере с процессором Pentium 4, степень достоверности «Р» устанавливали по распределению коэффициента Стьюдента.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 3.1. Эпизоотологические аспекты, клиническое проявление псевдо-моноза и патологоанатомические изменения у продуктивных животных в регионе Северного Кавказа

По данным Центральной ветеринарной лаборатории РФ было проанализировано 8138 проведенных бактериологических исследований на псевдомоноз, из которых 989 дали положительные результаты, что составило 12,2%. От крупного рогатого скота исследовано 1828 проб, из которых положительных было 254 (14,4%). От свиней исследовано 855 проб, из них положительных ока-затось 118 (13,8%).

В южном регионе России число положительных результатов составило 20,5%. В Ставропольском крае - 86% было положительных. В СевероОсетинской республике положительных результатов было 4,5%, в Воронежской области - 2,1%, в Краснодарском крае число положительных проб составило 17,1%. Наибольшее количество положительных результатов при исследовании на псевдомоноз отмечено в сельскохозяйственных центрах Юга и Европейской части России.

В Краснодарском крае регистрируются высокие (12,9° С) среднегодовая температура и влажность (747,8 мм - среднегодовое количество осадков) внешней среды, что создает термостатные условия для длительного переживания условно-патогенных микроорганизмов, поэтому в пределах Краснодарского края инфицированность животных Р. aeruginosa в различных климатических зонах региона составила от 12,1% до 16,5%. Больше всего положительных результа-

тов при исследовании на псевдомоноз получено от свиней - 14,1% и крупного рогатого скота - 13,9%. Другие виды животных инфицированы Р. aeruginosa в меньшей степени - от 1,1% до 3,5%. При этом наибольшая инфицированность синегнойной палочкой - 39,5% отмечена у поросят, у взрослого крупного рогатого скота - 28,6 %, у взрослых свиней - 25,0%, у птиц - 23,4%.

При изучении этиологической структуры псевдомоноза установили, что крупный рогатый скот (телята и коровы) были инфицированы возбудителями 15 серогрупп, но чаще серогруппами 019 (35,5%), 013 (12,9%), 06(6,5%). Свиньи (поросята, свиноматки и хряки) инфицированы возбудителями 19 серогрупп и наиболее часто регистрировали 019 (16,1%), 020 (9,7%), 02,04,010, 013 по 5 (8,1%). Птица инфицирована P.aeruginosa 13 серогрупп и наиболее часто 010, 013, 014, 019 (по 18,2%). Нутрии и собаки инфицированы возбудителями 10 серогрупп и в большей степени 018 (18,2%), 05 и 06 по 15,6 %.

Для псевдомоноза свойственна сезонность: пик заболеваемости приходится на осенне-зимний период (13,1 - 13,4 %), а минимум отмечали в августе (2,4-2,6%).

Развитию заболевания способствуют факторы, снижающие резистентность животных, в первую очередь, нарушения кормления, условий содержания и техногенные стрессы. По нашим данным развитию иммунодефицитов способствуют болезни обмена веществ. Наиболее подвержен заболеванию молодняк и беременные животные, у которых регистрировали нарушения минерального и витаминного обмена (уровень каротина ниже нормы на 23%, витамина А - на 12,2%, резервной щелочности - на 20,1%, цинка - на 25,8%, йода - на 17,3%).

Чаще заболевание регистрируется при низком санитарном состоянии животноводческих помещений (общая микробная загрязненность воздуха родильных отделений до 490250 микробных тел в 1 м3, в том числе Р. aaeruginosa - до 86000 микробных тел/ м3).

При бактериологических исследованиях патматериала от больных и павших животных P.aeruginosa выделяли в 124 случаях, из них 106 (86,5 %) в ассоциации с другими патогенными и условно-патогенными микроорганизмами. Наиболее часто - в ассоциации с E.coli (73,6%), Proteus ssp. (59,4%), различными стрептококками (48,1 %) и стафилококками (10,4%). При этом в большинстве случаев (68 - 72 %) P.aeruginosa встречалась в ассоциации с тремя, четырьмя и более микроорганизмами.

Изучение эпизоотологии, клинического проявления и патологоанатоми-ческие изменения у свиней проводили в 17 свиноводческих хозяйствах в различных регионах Северного Кавказа.

При этом псевдомоноз регистрировали у поросят сосунов (5-25 -дневного возраста), отъемного и послеотьемного возраста (35-60 дней). Заболеваемость колебалась в пределах 60-94 %, летальность - 24 - 52,1 %. Инкубационный период составлял от 2 до 7 дней. У поросят снижался аппетит, наблюдался отказ от корма, вялость, температура тела повышалась на 1,5°-2,0° С, отмечали диарею, часто с примесью крови и слизи. Через 3-4 дня после начала заболевания регистрировали поражение ЦНС, мышечную дрожь, кашель, одышку, рвоту с

пенистыми кровянистыми выделениями. У животных старшего возраста развивалась серозно-катаральная и катарально-гнойная бронхопневмония. За день до гибели отмечали снижение температуры тела до 37 -37,5°С, у отдельных животных наблюдали геморрагическую инфильтрацию подкожной клетчатки в области промежности, внутренних поверхностей конечностей.

При патологоанатомическом исследовании отмечали явления токсикоза -гепатит, гепатоз, желчный пузырь увеличен, переполнен желчью. Вокруг портальной вены кровоизлияния. Почки увеличены, размягчены, с кровоизлияниями на поверхности и в корковом слое. При хроническом течении регистрировали пиелонефрит. Сердце дряблое, гидроперикардит, часто на миокарде точечные кровоизлияния. Региональные лимфоузлы увеличены, сочные, с точечными кровоизлияниями. Оболочки головного мозга отечны, сосуды инъецированы. При сверхостром и остром течении болезни патологоанатомические изменения были менее выражены.

Основными путями передачи Р. aeruginosa у свиней были алиментарный и половой, с контаминированной возбудителем спермой. Корма являлись источником возбудителя псевдомоноза во многих районах Краснодарского края. В этих хозяйствах поросятам-отьемышам в качестве подкормки давали корма, обсемененные синегнойной палочкой. Заболевание протекало остро и подост-ро, вначале с поражением желудочно-кишечного тракта, а позднее (через 15 дней), с поражением легких. За две недели пало 468 поросят, летальность составила 48-60%. При бактериологических исследованиях из кормов и патологического материала от павших поросят изолировали Р. aeruginosa серогруппы Об и 08.

Из патматериала от свиней в разные годы изолировали от 15,5 до 31,3% Р. aeruginosa серогруппы 06, из них от 32 до 51% изолятов были высоковирулентные.

Для доказательства того, чго комбикорма, контаминированные синегнойной палочкой могут быть причиной развития инфекции, провели опыт в агроп-лемзаводе «Индустриальный». С этой целью отобрали 40 поросят-отъемышей крупной белой породы 45-дневного возраста, из которых по принципу пар-аналогов сформировали две группы по 20 голов. Поросятам 1 -й, контрольной группы скармливали экструдированные не контаминированные корма, 2-ой опытной группы - в течение 7 дней тот же корм, контаминированный патогенной культурой Р. aeruginosa серогруппы 06.

В результате в первой группе заболел 1 (5%) поросенок с симптомоком-плексом диареи, отхода не было. Во второй группе заболело 9 поросят (45%) и пало 4 (20%). Заболевание начиналось на 12-14 день после начала скармливания контаминированного корма и протекало лодостро в течение 4-6 дней. У поросят пропал аппетит, отмечалась вялость, температура тела была на 1,5°-2,0°С выше нормы. Развился понос, у некоторых с примесью крови и слизи. Через 3-4 дня после начала заболевания у 3 поросят опытной группы (75% от заболевших) появились поражения ЦНС, мышечная дрожь, кашель, одышка, рвота с пенистыми кровянистыми выделениями. За день до гибели отмечали снижение температуры тела. Среднесуточный прирост массы тела у животных

опытной группы был на 73,9% ниже, чем у контрольных поросят и составлял 127 г против 487 г. в контроле.

Таким образом, экспериментально установлена возможность заражения поросят кормом, контаминированным P. aeruginosa. Данный факт неоднократно подтверждался выделением вирулентных культур P. aeruginosa из зерновых кормов и кормов животного происхождения в различных хозяйствах Краснодарского края.

Влияние спермы хряков-производителей контаминированной синегной-ной палочкой на воспроизводительную способность и заболеваемость изучали на 50 здоровых холостых свиноматках, которых по принципу пар-аналогов разделили на 2 группы по 25 голов и искусственно осеменили. Свиноматок первой, опытной группы осеменяли спермой хряка-производителя (№ 3678), контаминированной культурой P. aeruginosa серогруппы 08. Свиноматки контрольной группы были осеменены не контаминированной спермой. На 3-4 день после осеменения у восьми свиноматок опытной группы отмечали слизисто-гнойные вьщеления из родополовых путей, у них были установлены катаральный вагинит и эндометрит. При бактериологическом исследовании материала от больных эндометритом свиноматок изолировали вирулентную ретрокультуру P. aeruginosa серогруппы 08.

На 83 день супоросности абортировала одна свиноматка из опытной группы. Серологически были исключены абортогенные инфекции: бруцеллез, лептоспироз и листериоз. Из внутренних органов абортированных плодов была также изолирована вирулентная культура P. aeruginosa серогруппы 08.

От 15 опоросившихся свиноматок опытной группы получили 38 гипо-трофичных поросят со средней массой тела ниже 1,0 кг, которые заболели в течение 14 дней. 21 из них пал. Из патматериала выделена культура P. aeruginosa серогруппы 08. От свиноматок контрольной группы получено 225 нормально развитых поросят, со средней массой тела 1,1 кг.

В хозяйствах, где использовали инфицированную синегнойной палочкой сперму хряков, происходили массовые заболевания свиноматок эндометритами, заболевания с синдромом ММА, рождение слабых, гипотрофичных поросят, иногда аборты, мертворождения. Всего было зарегистрировано 1478 больных свиноматок в 17 хозяйствах, использовавших сперму хряков-псевдомононосителей.

Таким образом, контаминированная P. aeruginosa сперма хряков-производителей является причиной ранней гибели плодов и рождению гипо-трофиков, инфицированных синегнойной палочкой поросят, заболеваемости свиноматок эндометритами и маститами.

Вспышки инфекции у телят 2-20 - ти дневного возраста регистрировали в различных хозяйствах Кубани. У них регистрировали диарею, животные отставали в росте. Шерстный покров имел тусклый цвет. Каловые массы серо-зеленого цвета, иногда с примесью крови. Энзоотия протекала остро. Температура тела в начале болезни повышалась на 0,5 - 1,5°С а затем снижалась до 37,5 - 38 °С, снижался или полностью отсутствовал аппетит, развивались катараль-но-гнойный коньюктивит, ринигг. При токсической форме болезни у живот-

ных отмечали судороги, парезы, повышенную возбудимость. Заболеваемость телят в хозяйствах составляла 40-90%, летальность - от 10 до 42,9%.

При патологоанатомических исследованиях павших телят наблюдали увеличение брыжеечных, средостенных, заглоточных лимфоузлов с точечными кровоизлияниями. Регистрировали кровоизлияния на эпи- и миокарде, под капсулой почек и на селезенке. Отмечали отеки и острое геморрагическое воспаление слизистой оболочки желудка, острое геморрагическое воспаление слизистой оболочки желудка и кишечника с точечными и полосчатыми кровоизлияниями, дистрофические и застойные процессы в печени, почках и сердечной мышце, отеки в легких, сосуды коры головного мозга инъецированы.

У коров, искусственно осемененных спермой, содержащей патогенные штаммы P.aeruginosa уже на 4 день отмечали появление слизисто-гнойных истечений из половых органов. Псевдомоноз проявлялся в форме абортов во второй половине стельности, мертворождений, эндометритов, маститов, гипо - и агалактии.

Диагноз в хозяйствах был подтвержден бактериологическими исследованиями.

У быков-производителей широко распространено носительство P.aeruginosa, при этом клинические признаки заболевания проявлялись редко. Из спермы и препуциальных смывов быков-производителей синегнойная палочка выделена в 16 - 40%. При этом отмечали снижение половой активности, быки неохотно шли на чучело, объем эякулята был меньше, чем обычно. Качество спермы по показателям загрязненности и активности спермиев было низким. При бактериологических исследованиях убитых быков - псевдомононоси-телей синегнойную палочку изолировали из мочеполового канала, придаточных половых желез, придатков семенников, препуциальной полости.

При паталогоанатомическом вскрытии отмечены незначительное увеличение почек, граница коркового и мозгового слоя стерта, лоханка увеличена, увеличение паховых лимфоузлов, баланопоститы, орхиты.

3.2. Экспериментальное воспроизведение псевдомоноза у поросят

Экспериментальное заражение поросят вирулентной культурой P.aeruginosa проводили в изоляторе Ильской участковой ветеринарной лечебницы Северского района. В опыте использовали 20 здоровых поросят, (у которых предварительными лабораторными исследованиями исключили вирусные, бактериальные и болезни обмена веществ) 1,5 - месячного возраста со средней массой тела 10,5 кг, которых по принципу аналогов разделили на 4 группы по 5 голов в каждой, которых содержали в отдельных изолированных станках. После трхдневной адаптации для определения фоновых показателей у поросят взяли кровь.

Заражения поросят проводили культурой Р. aeruginosa 6/'2-9 серогруппы Об, выделенной из спермы хряка-производителя № 5682 агроплемзавода «Индустриальный». Изолят 6/2-9 высоковирулентен для белых мышей LD100 составила 76 млн. микробных тел на мышь. Поросят первой опытной группы внутрибрюшинно заражали смывом суточной агаров ой культуры на стериль-

ном физрастворе в дозе 80 млрд. микробных тел, второй опытной группы - в дозе 40 млрд. микробных тел. Животным четвертой (контрольной) группы в том же объеме вводили стерильный физиологический раствор. Поросят третьей группы (помеченных) поместили совместно с поросятами первой группы для контактного заражения, а когда поросята первой группы пали, то поросят 3-й группы совместили с поросятами 2-ой группы. Результаты проведенных исследований отражены в таблице 1.

Таблица 1- Результаты экспериментального заражения поросят культурой P. aeruginosa _|___i__

№ пп К-во поросят в группе Заражение Доза млрд. микробных тел Заболело Пало

сутки поро сят сутки поросят

1 5 Внутри-брюшинное 80 1-2 5 2-3 5

2 5 Внутри-брюшинное 40 6-13 5 13-15 5

3 5 Контактное - 14-17 5 21-24 4

4 5 Контроль Физ. раствор, 40,0 - - - -

После внутрибрюшинного введения микробной взвеси Р.аепщшоБа у всех поросят первой и второй групп через 4 часа повысилась температура тела на 0,3 - 0,5 0 С выше нормы, которая держалась 10 - 15 часов, а затем пришла в норму и только на вторые сутки после инфицирования у поросят 1-й группы, а у поросят 2-й группы на 6-й день температура повысилась на 0,5 - 1,0 С.

Клинические признаки болезни наиболее стремительно развивались у поросят первой группы: у них появилась вялость, понижение аппетита, а затем и полное его отсутствие, жажда. В это же время зарегистрирован понос, в каловых массах через 72 часа у 4-х поросят стали появляться сгустки крови и слизи. Через 72 часа после инфицирования отмечали сначала у одного, а затем еще у трех поросят первой группы рвоту с кровью. Кашель и одышка развивались через 48 часов. На четвертый день у одного поросенка кашель сопровождался пенистыми, розового цвета истечениями из носа. У других отмечали ринит, конъюнктивит.

Таким образом, инкубационный период продолжался 30-48 часов, заболевание длилось от 48 до 72 часов, после чего наступала гибель поросят.

Подобная клиническая картина наблюдалась у поросят второй группы, которым вводили по 40 млрд. микробных тел взвеси Р.аеги§'шоза. Признаки болезни были те же и развивались они в той же последовательности, но медленнее. Гибель поросят данной группы продолжалась в течение 3-х суток.

В третьей группе (контактной), инкубационный период составил 10 - 12 суток, клинические проявления болезни продолжалось 10-13 суток, и пали

они в течение 4-х суток.

При бактериологических исследованиях органов от павших поросят опытных групп изоляты исходной культуры 6/2-9 серогруппы Об выделены во всех случаях. Изолировать культуру удалось из сердца (крови), селезенки, печени, желчи, почек, брыжеечных, паховых, средостенных лимфоузлов, легких, мышц, костного и головного мозга. Из кала, мочи, слюны и носовых истечений P. aeruginosa выделяли на несколько дней раньше гибели поросят, одновременно с появлением явных клинических признаков заболевания. У поросят опытных групп при гематологических исследованиях с 12 по 21 день отмечали снижение количества эритроцитов на 20%, гемоглобина на 26%, цветного показателя на 23%, лейкоцитов на 16%. Снижалось количество сегментоядерных лейкоцитоз, а уровень палочкоядерных лейкоцитов незначительно увеличивался. Отмечено значительное достоверное увеличение лимфоцитов.

Установлено снижение общего белка в сыворотке крови на 14,5 % и гамма-глобулинов на 17,5 %, относительное увеличение альбуминов и альфа - глобулинов.

У опытных поросят в сыворотке крови отмечено достоверное снижение глюкозы к 21 дню на 21,5%, цинка - на 21%, и кальция на 7%. Заметно увеличилось (на 14,2%) содержание фосфора, изменилось соотношение кальция и фосфора с 1,14:1,0 до 0,93:1,0.

Патологоанатомическое исследование трупов павших поросят опытных групп показало, что наиболее четкие и характерные изменения отмечены у тех животных, которые болели более продолжительное время, т.е. у поросят второй и особенно третьей групп. Четыре трупа поросят третьей группы были истощены, с явлениями токсикоза, слизистые оболочки и мышцы анемичны. У трех трупов на участках кожи в области паха и брюха отмечали кровоизлияния. У двух - трахею и бронхи заполняли пенистые массы. У двух поросят этой группы в легких наблюдали гнойно-кагаральное воспаление, отек, на разрезе пенистые истечения, гидроперикардит. На границе желудочков и предсердий наблюдали точечные кровоизлияния, сердечная мышца дряблая, кровь не свернувшаяся. Печень слегка увеличена, дряблая, серо-желтого цвета с кровоизлияния вокруг воротной вены. Желчный пузырь увеличен, наполнен вязкой желчью. Селезенка увеличена, с редкими точечными кровоизлияниями. Почки слегка увеличены, светло-коричневого цвета с кровоизлияниями под капсулой. Граница коркового и мозгового слоя сглажена с кровоизлияния в корковом слое. Лоханка увеличена, у двух поросят со слизисто-гнойным содержимым. В двух случаях отмечали кровоизлияния на слизистой оболочке мочевого пузыря. Средостенные, брыжеечные, паховые лимфоузлы увеличены, с кровоизлияниями. В желудке и кишечнике содержалось незначительное количество разжиженных масс серо-зеленого цвета, со зловонным запахом, в толстом отделе кишечника со сгустками крови и слизи, при этом регистрировали катарально-геморрагический гастрит, энтероколит. Оболочки головного мозга отечны, кровеносные сосуды инъецированы.

3.3. Разработка и испытание средств специфической профилактики псевдомоноза

Изучение штаммов P.aeruginosa для приготовления вакцины против псевдомоноза проводили в лаборатории эпизоотологии Краснодарского НИВИ, Краснодарской межобластной ветеринарной лаборатории, районных ветеринарных лабораториях в 2004 - 2009 годы.

Руководствуясь предварительными результатами исследований для конструирования поливалентных вакцин и поливалентных сывороток решили использовали изоляты P.aeruginosa наиболее широко распространенные серо-группы, а именно, для крупного рогатого скота: Ol, ОЗ, Об, 013,019; для свиней: 02, ОЗ, 04, 06, 010, Ol 1, 013, 018, 019.

По морфологическим и тинкгориальным свойствам культуры выделенные из различным объектов существенных различий не имели. Бактериальные клетки P.aeruginosa представляли собой короткие, прямые с закругленными концами грамотрицательные палочки, расположенные одиночно, иногда парами, а изредка короткими цепочками. Изолированные культуры были подвижные, спор не образовывали, но активно продуцировали слизь, которая тонким слоем окружала каждую бактериальную клетку,.

Характерным фактором патогенности для P.aeruginosa являются ее гемолитические свойства, в нашем исследовании 187 культур (88,6%) обладали ß -гемолизом и только 13 культур (11,4%) продуцировали а - гемолизин. Пиоциа-нин продуцировали 93 % культур.

Вирулентность выделенных изолятов Р. aeruginosa определяли на беспородных белых мышах массой тела 18-20 грамм. Культуры вводили внутри-брюшинно в дозах в 125, 250, и 500 миллионов микробных тел на мышь(млн. МТ). В случае гибели животных в течение 18-24 часов от дозы 125 млн. МТ -культуру считали высоковирулентной. При гибели мышей, зараженных дозой 250 млн. МТ культуру считали вирулентной, а при гибели мышей от дозы 500 млн. МТ - слабовирулентной. Если же гибель мышей не наступала - культуру считали авирулентной. В результате 8,6% изолятов Р. aeruginosa были авиру-лентны, 54,3 % - высоковирулентные, 21% - вирулентные, и16,1% - слабовирулентные. Вирулентность изолятов во многом зависило от источника выделения. Наибольшее количество вирулентных изолятов получали от свиней (95,9%) и немного меньше от крупного рогатого скота (94,4 %).

Вирулентность Р. aeruginosa, после культивирования на искусственных nkräfejibHblx с$5ёдах (б^льой Хбттгийгера, ЦпХ» среда с ацетамидом, Кинг А й Б) не изменялась.

Определение иммуногенности 10 культур Р. aeruginosa, отобранных для изготовления биопрепарата, проводили на 20 белых мышах, для чего из каждого серовара готовили моноантиген с концентрацией 1 миллиард микробных тел (МТ) в см3 путем смыва суточной агаровой культуры стерильным физиологическом раствором с последующей инактивацией 0,3% формалином при 370 С в течение 14 суток. Мышам антигены вводили внутримышечно в дозе 0,3 см3 с последующим через 14 суток внутрибрюшинным заражением LD100.

Все испытуемые культуры P. aeruginosa были иммуногенными, создавали строго специфическую протективную защиту 85 - 95% животных опытных групп при 100% гибели в контроле.

Для изготовления поливалентной вакцины против псевдомоноза использовали смывы суточных агаровых культур в концентрации 10 млрд. МТ в см3, инактивированных формалином 10 серологических групп: 01, 02,03,04, 06, 010, 011,013, 018,019. Моноантигены смешивали в равных количествах (по 1/10).

С целью усиления иммуногенных свойств к антигену в качестве адьюван-та добавляли стерильную 6% взвесь гидроокись алюминия (ГОА) в количестве 15% к объему антигена. Концентрацию и объем ГОА установили в предварительных опытах на белых мышах при определении степени иммуногенности. Готовую вакцину выдерживали 24 часа, проверяли на стерильность, фасовали и этикетировали. Затем контролировали безвредность, активность по разработанной методике.

Для производственных испытаний разработана технология промышленного получения на Армавирской биофабрике.

В результате разработана нормативная документация, представленная в Россельхознадзор МСХ России для государственной регистрации. На поливалентную вакцину против псевдомоноза сельскохозяйственных животных получен патент № 2308288 от 20.03.2006 г.

Производственные испытания опытных промышленных серий вакцины проводили в неблагополучных хозяйствах, где диагноз на псевдомоноз у телят и поросят ставили на основании данных эпизоотологического обследования, по клиническим и патологоанатомическим признакам с последующим подтверждением результатами бактериологических исследованийс обязательным выделением культуры P. aeruginosa.

Изучение эффективности опытной серии вакцины проводили на 340 здоровых поросенка 18-20 дневного возраста, разделенных на 2-е группы: опыг-ную(264) и контрольную (76). В опытной группе вакцину вводили с интервалом в 12 дней внутримышечно дважды в дозе 1 см3 в область внутренней поверхности бедра. Животных контрольной группы не вакцинировали. Аналогичные исследования провели на 64-х здоровых телятах, разделенных на 2 группы: опытную (48 телят) и контрольную (16). Опытных телят дважды с интервалом в 12 дней внутримышечно вакцинировали в дозе2 см3, животным контрольной группы вакцину не вводили. За животными вели наблюдения в течение трех месяцев, при этом трижды с интервалом в 30 дней анализировали кровь. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Установлено что, вакцина не вызвала осложнений у животных опытных групп, создавала иммунитет и сокращала гибель поросят их на 25,1 %, телят -на 25 %.

При иммунизации супоросных свиноматок за 35-40 дней до опороса в дозе 5 см3 дважды с интервалом в 12 дней у поросят создавался колостральный иммунитет, сокращающий их заболеваемость псевдомонозом на 12,8% и гибель на 5,4%.

Таблица 2. Профилактическая эффективность опытной серии поливалентной вакцины против псевдомоноза

Группы животных Кол-во животных Пало Эффективность, (%)

животных (%)

Поросята (опыт) 264 24 9Д 90,9

Поросята (контроль) 76 26 34,2 65,8

Телята (опыт). 48 3 6,2 93,8

Телята (контроль) 16 5 31,2 68,8

При иммунизации супоросных свиноматок опытной серией вакцины выход поросят повысился на 15 %, заболеваемость снизилась на 14,2 %, а падеж -на 21 %.

Изучая реакцию организма телят и поросят на введение вакцины, кроме превентивных свойств оценивали антигенную активность в РА. Для этой цели в опытных группах у 12 животных кровь отббирали до вакцинации и на 15, 30 и 60 день опыта для исследования ее морфологических показателей.

В полученной сыворотке определяли уровень специфических антител, содержание общего белка и белковых фракций. Специфические антитела определяли по отношеию к 10-ти антигенам, входящим в поливалентную вакцину. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Как видно из результатов серологических исследований, поливалентная вакцина вызывала образование специфических антител ко всем серогруппами возбудителей входящих в вакцину. Средний уровень титров антител у поросят через месяц после вакцинации был не высокий и регистрировался в титрах 1:11,5 - 1:15,3 в течение 2-х месяцев. Через 60 дней после вакцинации они снижались до 1:6,3. У свиноматок титры антител были на 30% выше, чем у поросят, но регистрировали их в течение 30 дней. У телят уровень специфических антител был выше, чем у поросят и составлял 1:15,6-1:18,7, а в тех группах, где вакцину применяли по 2 см дважды, они были на 30% выше.

Результаты исследования показали, что у вакцинированных поросят к 60 дню после иммунизации наблюдалось незначительное увеличение гемоглобина и эритроцитов. Значительные изменения произошли в лейкограмме, общее количество лейкоцитов увеличилось на 15%. Наиболее заметно увеличилось количество сегментоядерных - на 17,5 % и палочкоядерных - на 16,1 % нейтро-филов. Отмечено незначительное снижение эозинофилов, лимфоцитов и моноцитов.

У поросят опытных групп через 2 месяца после вакцинации отмечено увеличение общего белка на 10 %. Происходили определенные изменения в содержании белковых фракций. Так содержание альбуминов уменьшилось, а глобулиновая фракция возросла на 5,7 %. Причем неравномерное процентное увеличение отмечено во фракциях глобулинов. Установлено наиболее значительное увеличение (на 14,5 %) у фракции гамма-глобулинов.

Таблица 3 - Динамика титров антител к P. aeruginosa у иммунизированных животных

Количество Доза Возраст Исслед РА с антигенами P. aeruginosa

животных вакцины ж-х, после

(см3) (дней) вакц,

(дней) 01 02 03 04 Об 010 ОН О 13 018 019 Средний титр

Поросята

12 1+1 20 30 1:16 - 1:4 1:18 1:22 1:10 1:8 1:14 1:8 1:18 1:11

12 1+1 20 _ 60 1:8 - 1:4 1:10 1:12 - 1:4 1:9 - 1:16 1:6,3

Телята

12 2+2 30 30 1:26 - 1:20 - 1:18 1:18 1:24 1:22 1:8 ПП24-1 1:15,2

12 2+2 30 60 1:8 - 1:10 - 1:9 - 1:10 1:12 - 1:10 1:4,1

Поросята

12 1+1 20 30 1 1:18 | 1:10 1:10 1:9 1:26 1:18 1:24 1:20 - 1:18 1:15,3

Телята

12 1+1 35-40 30 1:25 1:12 | 1:14 1:16 1:22] 1:16 1:24 1:18 1:20 1:20 1:18,7

Поросята

12 '5+5 24 30 1:20 1:8 1:25 1:28 1:20 1:10 1:24 1:10 1:24 1:16,9

Аналогичные исследования по динамике морфологических изменений крови и биохимических показателей сыворотки проведены и у телят при иммунизации их поливалентной вакциной против псевдомоноза, где отмечено у телят опытных групп увеличение гемоглобина и эритроцитов общего количества лейкоцитов и нейтрофильных гранулоцитов и соответственно незначительное снижение эозинофилов, лимфоцитов и моноцитов. При исследовании общего белка и белковых фракций у опытных животных установлены существенные изменения в глобулиновой фракции. Отмечали заметное увеличение (10 - 12 %) общего белка сыворотки крови, снижение (на 7-8) уровня альбуминов, отмечено увеличение гамма-глобулинов на 14 - 15 %. Другие белковые фракции незначительно снижались или остались в пределах фоновых показателей, увеличение гамма-глобулинов в сыворотке крови опытных телят свидетельствует о существенной иммунологической перестройке в организме. Эти иммунологические изменения подтверждены серологическими исследованиями.

Всего опытными сериями поливалентной вакцины против псевдомоноза в 23 хозяйствах Краснодарского края иммунизировано 26570 поросят, 3720 телят, 4560 свиноматок, 430 хряков-производителей, 8600 коров и 38 быков-производителей. Во всех случаях вакцина значительно сокращала отход у молодняка и не вызывала местных и общего характера осложнений,. Экономическая эффективность применения вакцины составила 27,41 руб. на 1 рубль затрат.

3.4. Получение и испытание эффективности поливалентной гипериммунной сыворотки

В лабораторных условиях для получения поливалентной сыворотки против псевдомоноза использовали кроликов, которым в качестве антигена вводили смыв суточной агаровой культуры каждой из 10 серогрупп P. aeruginosa. Смыв культуры с МПА осуществляли стерильным физиологическим раствором. Готовые моноантигены имели концентрацию 1 млрд. МТ в 1 см каждой серогруппы. В последующем к культурам добавляли 0,3 % формалина и инак-тивировали 14 суток.

В опыте было использовано 26 кроликов. В первых четырех группах животным вводили моноантиген. Первая группа - 4 кролика, которым вводили моноантиген 1 млрд. МТ в 1 см3 внутримышечно серогруппы 02 штамма №47. Четырем кроликам второй группы вводили в той же дозе моноантиген серогруппы 04 штамма №19. Четырем кроликам третьей группы вводили моноантиген серогруппы 013 штамма №66, и четырем кроликам четвертой группы также вводили моноантиген серогруппы 013 штамма №66, но две последние инъекции делали с иммуностимулятором - левамизолом дозе 1 мг/кг массы тела подкожно.

В последних двух группах использовали 10 кроликов по 5 в каждой группе. Кроликам пятой группы вводили полиантиген состоящий из 10 моноантигенов десяти различных серогрупп: Ol, 02, 03, 04, 06, 010, Ol 1,0,13, 018,019 с конечной концентрацией 1 млрд. МТ в 1 см3 каждой из серогрупп. Кроликам

шестой группы вводили такой же полиантиген, но во время двух последних (6 -й и 7 - й) инъекций вводили дополнительно левамизол в дозе 1 мг/'кг массы тела.

Во всех всех шести группах антиген вводили по одной схеме: первые две инъекции через 4 дня по 1 млрд. МТ, третью и четвертую по 2 миллиарда микробных тел, а пятую, шестую и седьмую по 3 млрд. МТ каждой серогруппы. Начиная с 3-й инъекции, введение антигена повторяли через каждые 3 дня.

Во время опыта кровь брали после третьего, пятого введения антигена. Третий раз кровь брали при тотальном обескровливании через семь дней после последнего введения антигена.

Результаты исследований (таблица 4) показали, что уровень специфических антител в РА у кроликов на введение антигенов после третьей иммунизации достигал среднего титра 1:2]3±38 -1:310±54. После пятого введения антигенов происходило заметное повышение титра антител до уровня 1:522±38 -1:650±32. После семикратной инъекции антигенов титр антител значительно возрастал, а у кроликов, которым антигены вводили с левамизолом - их уровень возрастал в четыре раза и был на 32 - 40% выше, чем титр антител у кроликов, которым левамизол не вводили.

Таблица 4 - Динамика накопления антител у кроликов в процессе гипе:

риммунизации культурами P. aeruginosa.

Антиген Количество кроликов Средние титры антител в РА после иммунизации

После 3-х введений После 5-и введений После 7-и введений

1 02 (47) 4 1:213±38 1:534±52 1:1748±86

2 04 (19) 4 1:262±56 1:646±24 1:1880+82

3 013 (66) 4 1:230±46 1:561±46 1:1910±76*

4 013 (66) с левамизолом 4 1:310±54 1:650±32 1:2490±115

5 10 серогрупп 5 1:254±48 1:522±38 1:2106±88

6 10 серогрупп с левамизолом 5 1:256± 48 1:638±63 1:2796^232

Примечание: для данных со знаком * р <0,05

При оценке превентивных свойств опытных серий гипериммунной сыворотки крови полученных от кроликов после трех, пяти и семикратного введения им антигена, с левамизолом и без него на белых мышках, сыворотку смешивали в равных количествах и вводили мышам внутрибрюшинно в дозах 0,1 - 0,2 -0,5 см3 /мыш по группам, и через сутки их заражали гомологичными культура-

ми в дозе LD1W).

Интенсивное повышение уровня защитных свойств сыворотки наблюдали уже через три инъекции антигена кроликам. Сыворотка в дозе 0,2 см3 защищала 36 - 60% мышей от гибели, в дозе 0,5см3 - 100 % мышей после их экспериментального заражении, при полной гибели всех контрольных животных.

В дальнейшем на белых мышах провели оценку превентивных свойств сывороток, полученных после пяти и семикратного введения антигенов кроликам.

После пятикратного введения антигена защитные свойства сыворотки в дозе 0,1 см3 были выше в 2 - 4 раза в сравнении с таковыми при с первом исследовании. Сыворотка в дозе 0,2 см3 предохраняла 100% мышей от заражения кроме серогруппы 02, где защита составила 80%. Сыворотка крови кроликов после семикратного введения антигенов обладала защитными свойствами в дозе 0,1 см3 и составляла 80 - 100%.Сыворотка, полученная с введением левами-зола, обеспечивала 100% защиту белых мышей. Сыворотки крови кроликов всех групп после семикратного введения антигенов в дозе 0,2 см3 защищали всех животных опытных групп, при 100 % -ой гибели мышей в контрольной группе.

Для получения гипериммунной сыворотки на волах предварительно была разработана схема, которая включала в себя основные этапы гипериммунизации: грундиммунизация и гипериммунизация. Для приготовления гипериммунной сыворотки использовали те же 10 штаммов P. aeruginosa, что и для изготовления поливалентной вакцины.

Технологический процесс производства сыворотки состоял из 10 стадий:

1 стадия - приготовление питательной среды для культивирования производственных штаммов, 2 - приготовление посевного материала, 3 - выращивание культуры в реакторах (баллонах) для получения бактериальной массы, 4 - приготовление антигена для гипериммунизации волов-продуцентов, 5 - порядок содержания и подготовки волов к гипериммунизации, 6 - гипериммунизация волов, 7 - взятие крови и получение сыворотки, 8 - расфасовка поливалентной сыворотки, 9 - контроль сыворотки, 10 - упаковка сыворотки.

Первые четыре стадии были аналогичные таковым при производстве вакцины на Армавирской биофабрике.

Для опыта было сформировано две группы волов. Первая - 5 волов, которым антиген вводили без левамизола и вторая - 5 волов, которым после грун-диммунизации вводили подкожно левамизол с антигеном.

До опыта у волов не было выявлено специфических антител к Р. aeruginosa.

После грундиммунизации проводили основную иммунизацию - гипериммунизацию антигеном в дозе 150 см3 на животное три раза с интервалом 3 -4 дня. Волам обеих групп во время грундиммунизации вводили только поливалентный антиген. Волам второй группы после окончания грундиммунизации, с одиннадцатой инъекции вводили подкожно по 1 мг/кг массы тела левамизол. Три последние инъекции антигена проводили совместно с левамизолом.

Через 32 и 51 дней от начала введения антигена у продуцентов из ярёмной вены отбирали кровь для контрольного определения биохимических показателей и титра специфических антител. После завершения цикла иммунизации у продуцентов через 52-53 дня от начала иммунизации брали кровь для производства сыворотки.

Во второй половине отдыха (через 15-20 дней) продуцентам трехкратно подкожно с интервалом 5-6 дней с учетом массы животных вводили поливалентный антиген, инактивированный формалином: первый раз в дозе 80-100 смЗ, повторно 110-150 см3 и третий раз 150-200 см3 и проводили очередной цикл эксплуатации продуцентов (взятие крови).

После отстоя или сепарации сыворотку крови подвергали фильтрации через фильтроэлемент "Мелипор" и консервировали фенолом до конечной концентрации 0,5 %. После этого проводили цеховой контроль стерильности. При удовлетворительных результатах контроля стерильности сыворотку расфасовывали в стерильные флаконы по 200 см3.

Сыворотку подвергали проверке на внешний вид, стерильность, безвредность и активность. Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонней примеси, плесени, не разбивающихся хлопьев, герметичности укупорки флаконы с сывороткой встряхивали, просматривали в проходящем свете и переворачивали вниз пробкой. Одновременно проверяли правильность этикети-рования.

Для испытания на стерильность использовали 5 флаконов с сывороткой. Посевы проводили из каждого флакона в объеме 0,2-0,3 см3 в пробирки с МПБ, МППА, МППБ под Еазелиновым маслом, средой Сабуро и по 2 см3 во флаконы с МПБ и МППБ под вазелиновым маслом. Посевы из каждого образца препарата проводили в 2 пробирки с каждой средой и в два флакона. Посевы выдерживали в течение 10, а пересевы - 7 суток, которые были стерильными.

Сыворотку считали активной при выживании не менее 4 опытных белых мышей и гибели не менее 4 контрольных животных от каждого штамма возбудителя псевдомоноза. Срок наблюдения за подопытными мышами составил 5 суток.

Всего в опыте получено 148 литров поливалентной сыворотки, в которой содержались антитела к 10 антигенам P. aeruginosa, выше указанных серологических групп.

Полученную в производственных условиях гипериммунную поливалентную сыворотку подвергали исследованию на активность по уровню специфических антител и по защитным (превентивным) свойствам.

Уже после двукратного введения поливалентного антигена титр антител начал нарастать и достигал в среднем 1: 36 ±3,86. В дальнейшем нарастание титра антител происходило более интенсивно. После шестого введения антигена титр специфических антител у волов вырос в14 раз. Следует отметить, что антитела формировались ко всем 10 антигенам, входящим в общий полиантиген. После десятикратной иммунизации волов полиантигеном титр антител увеличился в среднем в 30 раз. Антитела регистрировали ко всем 10 серогруп-

пам антигенов. После тринадцатикратной иммунизации у волов (без левамизо-ла) титр антител повысился до уровня 1:1823, что в 53 раза выше первоначальных показателей. Следует отметить, что антигены всех серогрупп обладали выраженной антигенной активностью, и они вызывали интенсивное образование специфических антител в титре 1:720 - 1:2560. Особенно активны оказались антигены серогрупп 01,04,06,018 и 019, которые вызывали образование антител в титре 1:2560.

У волов, которым при гипериммунизации вводили одновременно с антигеном и левамизол в дозе 1 мг/кг массы тела, титр антител был достоверно выше на 34,2 % по сравнению с титром, который установлены у волов не стимулированных левамизолом.

Защитные (превентивные) свойства сывороток крови гипериммунизиро-ванных волов определяли на белых мышах в количестве 15 животных на каждый серотип и 30 контрольных. Сыворотку вводили внутрибрюшинно по 0,05 0,1 и 0.2 см3, а затем через одни сутки всех мышей заражали в дозе 2LD50 культурой каждой серогруппы. Контролем служили мыши, которьш вводили сыворотку от здорового крупного рогатого скота в дозе 0,2 см3, после чего проводили их заражение в дозе 2LD50 - по 3 мыши на каждый штамм 10 серогрупп.

Гипериммунная сыворотка после 13 - кратного введения антигена приобретала высокие превентивные свойства. Доза сыворотки 0,5см3/кг массы тела защищала мышей только в 52% случаев. Доза в 1,0 см3/кг массы тела обеспечивала защиту 74% мышей, а доза 1,5 см3/кг массы тела защищала 90 % мышей от заражения гомологичными культурами 10 серогрупп P. aeruginosa.

Далее проведено сравнительное изучение динамики формирования защитных свойств сыворотки в зависимости от кратности введения антигена на белых мышах после 6 -, 10 -, и 13 - кратного введения антигенов в дозе 1,5 см3/кг массы тела. Заражение мышей проводили через сутки после введения сыворотки.

Гипериммунные сыворотки волов после шестикратного введения антигена защищали 60% опытных мышей. Десятикратное введение антигена повышало защитные свойства сыворотки до 74%, а тринадцатикратное введения антигена обеспечивало защиту до 90 %. Более выраженными защитными свойствами обладала сыворотка, которая получена от волов, гипериммунизированных с левамизолом. Превентивность составила 96 %.

Таким образом, установлена строгая закономерность, чем выше был титр специфических антител, тем выше становились защитные свойства гипериммунной сыворотки.

Гипериммунизация животных вызывала изменения в морфологическом составе крови и в содержании общего белка и белковых фракций сыворотки крови доноров. Так при гипериммунизации за 50 дней от начала до конца опыта у волов на 10 % уменьшилось содержание гемоглобина, количество эритроцитов на 5 % и количество лейкоцитов возросло на 9,5 %. В лейкограмме резко уменьшилось количество эозинофилов и моноцитов, но на 18% увеличилось количество палочкоядерных и на 26% сегментоядерных лейкоцитов.

Установлено, что содержание общего белка в сыворотке крови за период гипериммунизации выросло на 8,3 %, причем у волов, которым антиген вводили с левамизолом это увеличение было на 2% выше. Значительные изменения произошли в процентном соотношении белковых фракций сыворотки крови доноров: содержание у - глобулинов за период гипериммунизации увеличилось на 16,4%, содержание альбуминов уменьшилось на 17,6%.

Установленные изменения свидетельствуют о глубокой иммунологической перестройке в организме доноров. Значительное образование и диагностируемое увеличение специфических антител соответствует динамике значительного накопления у — глобулинов в сыворотке крови доноров, так как эта фракция отражает состояние гуморального иммунитета у животных.

На поливалентную сыворотку против псевдомоноза сельскохозяйственных животных разработана, оформлена и утверждена службой Россельхознад-зора по Краснодарскому краю и республике Адыгея научно-техническая документация: инструкция по изготовлению и контролю, технические условия по производству, инструкция по применению. На способ получения поливалентной сыворотки против псевдомоноза сельскохозяйственных животных получен патент № 2376034 от 27.05.2008 г.

Опыты по изучению эффективности гипериммунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза были поставлены в хозяйстве, где отмечалась высокая заболеваемость поросят 50 - 60 дневного возраста сразу после отъема.

Заболевание не отличалось четкими характерными признаками, но отмечали: повышение температуры тела на 0,5 - 1,0"С, иногда диарея, чаще кашель, прогрессирующее исхудание, значительный падеж (до 35%). При вскрытии отмечали катаральную пневмонию, кровоизлияния на сердечной мышце, почках, селезенке, геморрагическое воспаление дна желудка, тонкого и толстого отделов кишечника. Применение различных антибиотиков давало низкую терапевтическую эффективность. При бактериологических исследованиях в лаборатории эпизоотологии Краснодарского НИВИ из сердца, селезенки, почек были изолированы P. aeruginosa серогруппы 02 высокой степени вирулентности, из кишечника Е. coli и P. aeruginosa. На ферме было отобрано 342 больных и 67 здоровых поросят из них были сформированы группы для оценки терапевтической и профилактической эффективности с применением различных методов.

Установлено, что лечение поросят традиционными методами давало эффективность 61,5% при сохранности в контроле 42,8%.

Подкожное введение гиперймМунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза в дозе 0,3 см3 на килограмм массы тела два раза с интервалом 5 -7 дней обеспечивало терапевтическую эффективность 80,3 %, в дозе 0,5 см3 -86 %, а применение сыворотки в дозе 1см /кг массы тела однократно было эффективно в 89 %. Применение гипериммунной сыворотки здоровым поросятам с профилактической целью по 0,5 см3 на килограмм массы тела однократно обеспечило сохранность поросят на 96,2 %. (таблица 6)

Опыт по испытанию терапевтической эффективности поливалентной сыворотки провели в хозяйстве, где наблюдались массовые аборты и мертворож-

дения у свиноматок (диагноз был подтвержден лабораторно установлением возбудителя Р. aeruginosa 02). В дальнейшем заболевание отмечено и у поросят более старшего возраста 45 - 65 дней.

В опыт были отобраны 238 свиноматок, из которых сформированы пять групп супоросных и опоросившихся свиноматок для оценки эффективности различных схем лечения.

Таблица 5 - Терапевтическая эффективность опытной серии поливалент-_ной сыворотки против псевдомоноза на поросятах.. _

Группа К-во Дозы Крат Анти - Забо- Пало Вы- Эф-

№ живот- поро- сыво- ноет биотики лело голов здо- фек-

п/ ных сят в ротки ь голов рове- тив-

п (поросята) опыте см3/кг введения ло голов ность %

1 Больные 132 0,3 2 - 132 26 106 80,3

2 Больные 121 0,5 2 - 121 14 104 86,0

3 Больные 63 1,0 1 - 63 7 56 89,0

4 Больные 26 стрептомицин, тетрациклин 26 10 16 61,5

5 котроль 14 - - - И 8 6 42,8

Комбинированное применение супоросным свиноматкам опытной поливалентной сыворотки в дозе 0,5 см3/кг массы тела и антибиотиков (стрептомицин, полимиксин) за 20 - 25 дней до ожидаемого опороса обеспечило высокую профилактическую эффективность - 96,8 %. В группе свиноматок, которым применяли одну гипериммунную сыворотку по 0,5 см3 /кг массы тела двукратно через 7-10 дней эффективность составила 92,6 %. Аборты и мертворожденна у животных этих групп не регистрировались.

В условиях свинокомплекса « Краснодонское» Волгоградской области на четвертом участке (группы доращивания) у поросят 2 - 3 - месячного возраста было диагностировано заболевание, которое сопровождалось диареей, кашлем, судорогами, исхуданием. На начальном этапе заболело 64 поросенка, лечение пенициллином и стрептомицином не оказало эффекта. При бактериологических исследованиях в лаборатории племзавода изолирована из паренхиматозных органов поросят Р.aeruginosa (серотип Об) с высокой степенью вирулентности. В дальнейшем количество заболевших увеличилось до 136 голов, падеж составил

42 головы (30,9 %).

Для профилактики и лечения больных животных применили опытную поливалентную сыворотку против псевдомоноза, которую вводили подкожно по 0,5 см3/ кг массы тела больным двукратно через 10 дней и 1 раз здоровым. Параллельно была сформирована группа больных поросят, которых лечили традиционными методами (антибиотиками).

Результаты исследования показали, что профилактическая эффективность гипериммунной сыворотки у здоровых поросят, находящихся в контакте с больными составила 96,0 %, терапевтическая - составила 90,0 %. При лечении традиционными методами терапевтическая эффективность составила 61,5 %.

Опыты по изучению эффективности гипериммунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза проводили в хозяйстве, где на телятах 4-15 дневного возраста началось заболевание с острым течением, потерей аппетита и слабостью. Температура тела повышалась до 41° С, учащался пульс и дыхание, у некоторых появлялось слюнотечение, нервные явления, серозный ринит. У телят с первых дней заболевания регистрировали профузный понос, а у отдельных животных отмечали с примесью крови. Гибель больных наступала на 2 -3 день с начала заболевания. Заболеваемость составила до 32 - 55%, смертность доходила до 38 %. Диагноз на псевцомоноз был подтвержден бактериологически выделением высоковирулентных изолятов Р.аепщтоБа серогруппы 01. Вирусную этиологию заболевания исключили серологическими исследованиями на ПГ-3, ИРТ, рота- и коронно-вирусные инфекции. Для проведения опыта 35 больных телят с характерными признаками псевдомоноза, разделили их на две группы - опытная (23 теленка) и - контрольная (12). Телятам опытной группы подкожно вводили гипериммунную сыворотку из расчета, 5 см3 на килограмм массы тела дважды с интервалом в 5-7 дней, а телят контрольной группы лечили с применением антимикробных средств.

Таблица 6. Эффективность опытной поливалентной сыворотки против

псевдомоноза на телятах МТФ № хозяйство «Атаманское»

№ )Группы п/ 1 телят п ! 1 1 ( к-во телят в группе Введение сыворотки Заболело телят Пало телят Выздоровело голов Эффектов ность %

Доза см3/кг Кратность

1 1 Больные го 0,5 2 23 3 20 87,0

2 Больные 12 поли- мик- син. стреп- том. синтомицин 12 4 8 66,6

3 Здоровые 18 0,5 2 2 - 18 100,0

4 Контроль 2 - 2 1 1 50,0

Как видно из данных таблицы 6 терапевтическая эффективность гипериммунной сыворотки составила 87,0 %, а профилактическая - 100%

Следующий опыт по изучению эффективности сыворотки на телятах провели при заболевании псевдомонозаом, которое началось с признаками поражения органов дыхания и пищеварения. Болели телята в возрасте 10 - 20 дней. Температура тела повышалась до 41,3 °С. Отмечалась одышка, кашель, иногда пенистые истечения из носа, вялость, потеря аппетита, быстрое исхудание, у отдельных телят диарея. Падеж доходил до 42%.

Бактериологическими исследованиями подтвержден диагноз на псевдо-моноз, выделена культура Р.аеп^шова серогруппы ОЗ. Как и в предыдущем случае исключили вирусную этиологию заболевания.

Для проведения опыта было отобрано 38 больных телят в возрасте 12 -15дней, которых разделили на три группы. Животных первой группы лечили гипериммунной сывороткой в дозе 0,5 см3 /кг массы тела подкожно дважды вместе с антибиотиками. Терапевтическая эффективность составила 100%.при лечении телят одной гипериммунной сывороткой терапевтическая эффективность была 91,7 %, а одних антибиотиков - 66,7 %.

Применение сыворотки здоровым телятам с профилактической целью предохраняло от заболевания до 90 %, что на 20% выше, чем применение антибиотиков.

Всего в хозяйствах Краснодарского края обработке поливалентной сывороткой против псевдомоноза (с лечебной и профилактической целью) подвергнуто 2675 поросят, 896 телят, 486 свиноматок, 376 коров, 72 хряка-производителя и 16 быков-производителей.

Экономическая эффективность применения сыворотки составила 42,35 руб. на 1 рубль затрат.

3.5. Комплексная система мер борьбы с псевдомонозом сельскохозяйственных животных

Меры борьбы с псевдомонозом продуктивных животных должны учитывать региональные особенности, степень инфицированности, этиологическую структуру, особенности клинического проявления и включать в себя как методы и средства специфической, так и неспецифической этиотропной профилактики и терапии, предусматривающие проведение мероприятий, способствующих повышению иммунологической реактивности организма животных.

К таковым следует отнести:

- Получение здорового приплода с высоким иммунным статусом за счет обеспечения полноценного кормления с восполнением биологически активных веществ, способствующих развитию иммунитета, специфической иммунизации стельных коров и свиноматок, создания благоприятных условий содержания и обеспечение активного моциона. Снижение неблагоприятного действия технологических стрессов за счет:

- обеспечения оптимальных параметров микроклимата;

- улучшения санитарного состояния животноводческих помещений, снижения уровня бактериальной загрязненности;

Повышение неспецифической резистентности организма животных:

- нормализация минерального и витаминного обмена за счет применения витаминов и витамино-минеральных премиксов;

- применение иммуностимуляторов, повышающих активность клеточного звена иммунитета (гормоны тимуса и др.).

- для снятия токсического синдрома необходимо вводить в рацион животным антитоксические средства, разработанные в Краснодарском НИВИ (Средство для профилактики и лечения токсикозов сельскохозяйственных животных и птицы).

Повышение специфической резистентности животных:

- иммунизация против псевдомоноза в соответствии с наставлением по применению поливалентной вакцины;

- применение гипериммунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза животных с профилактической целью.

Проведение этиопатогенетической терапии при заболевании продуктивных животных псевдомонозом:

- парентеральное использование гипериммунной сыворотки с лечебной целью;

- применение комплексных химиотерапевтических препаратов, обладающих бактерицидным, противовоспалительным действием;

Проведение комплексной системы мероприятий обеспечивало благополучие хозяйств по псевдомонозу и повышало сохранность животных до 9398,2% по сравнению с неблагополучными хозяйствами.

4. Выводы:

1. Псевдомоноз животных и птиц, независимо от природно-географических условий регистрируется во всех регионах России. Наибольшая инфицированность возбудителем псевдомоноза отмечается в хозяйствах с интенсивными технологиями и с нарушениями ветеринарно-санитарных правил ведения животноводства.

В хозяйствах Краснодарского края по многолетним данным инфицированность животных и птиц P. aeruginosa занимает четвертое место после коли-бактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза.

Заболевание псевдомонозом в регионе Северного Кавказа носит сезонных характер с максимальным проявлением в осеннее-зимне-весенний период

2. Этиологическую структуру псевдомоноза животных в Южном регионе России составляют 19 серогрупп P. aeruginosa

- Крупный рогатый скот инфицирован возбудителями 15 серогрупп, чаще всего серогруппами 019 (35,5%), 013 (12,9%), 06(6,5%).

- Свиньи инфицированы возбудителями 19 серогрупп и наиболее часто регистрируются 019 (16,1%), 020 (9,7%), 02, 04, 010, 013 по 8,1%.

3. Экспериментальное воспроизведение псевдомоноза у поросят 1,5 -

месячного возраста возможно при внутрибрюшинном введении вирулентной культуры P. aeruginosa и при контакте здоровых с зараженными животными.

Заболевание псевдомонозом у поросят протекает с признаками диареи, ринита, нервными явлениями, сопровождающиеся токсемией и септицемией, как и при эпизоотических вспышках.

Течение болезни у молодняка зависит от количества и вирулентности возбудителя P. aeruginosa, попавшего в организм, поэтому инкубационный период может колебаться от 2 до 12 дней, клиническое проявление болезни может продолжаться от 2 до 13 суток, при 100% -ой гибели поросят опытных групп.

Заболевание молодняка продуктивных животных псевдомонозом характеризуется септико-токсическими явлениями, которые проявляются в необратимых поражениях печени, почек, сердца, повышением проницаемости стенок кровеносных сосудов, уменьшением в периферической крови эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, общего белка сыворотки крови, гамма-глобулинов, глюкозы, кальция и цинка, увеличением фосфора.

Патологоанатомические изменения при вскрытии трупов павших от псев-домоноза поросят отмечаются во всех органах и тканях и характеризуются явлениями сепсиса, токсикоза, которые наиболее ярко проявляются при длительном подостром течении болезни.

4. Из наиболее часто выделяемых от животных в Краснодарском крае отобраны 10 изолятов разных серогрупп P. aeruginosa (OI, 02,03, 04,06, OIO, 011, 013, 018, 019). Изучены их морфологические, культуральные, вирулентные, биохимические, антигенные и иммуногенные свойства. Данные штаммы использованы для изготовления поливалентной вакцины против псевдомоноза и гипериммунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза сельскохозяйственных животных.

5. Разработана технология промышленного изготовления поливалентной вакцины против псевдомоноза. Оптимизированы параметры культивирования производственных штаммов для изготовления поливалентной вакцины, методы контроля качества и определения эффективности. Определены иммунизирующие дозы вакцины для различных видов животных. Разработаны и утверждены: технические условия, инструкция по изготовлению и контролю, инструкция по применению поливалентной вакцины против псевдомоноза сельскохозяйственных животных.

6. Применение поливалентной вакцины поросятам дважды в дозах 1+1 см3 через 12-14 дней в очаге псевдомонозной инфекции обеспечивает эффективность до 88,4 %, а у телят в дозе 2+2 смЗ - 93 %. Профилактическая эффективность данной вакцины у поросят - 91,0 %, а у телят - 93,8 %.

Вакцинация свиноматок в неблагополучных по псевдомонозу хозяйствах повышает выход поросят на 15 % и снижает заболеваемость на 18,2 %.

7. Разработана технология промышленного изготовления поливалентной сыворотки против псевдомоноза. Подготовлены и утверждены технические условия, инструкция по применению поливалентной гипериммунной сыворотки против псевдомоноза сельскохозяйственных животных.

В условиях биофабрики отработана методика гипериммунизации волов-доноров с использованием иммуностимуляторов. Изучена динамика накопления специфических антител при различных схемах гипериммунизации. Разработаны параметры контроля качества сыворотки и методы определения ее активности.

8.Профилактическая эффективность поливалентной гипериммунной сыворотки против псевдомоноза в дозе 0,5 см3 /кг массы тела двукратно через 10 дней обеспечивает сохранность поросят в 96,0 % случаев.

Применение гипериммунной сыворотки против псевдомоноза супоросным свиноматкам в дозе по 0,5 см3 /кг массы тела двукратно через 10 дней предотвращает аборты и снижает заболеваемость эндометритами. Эффективность составляет 92,6 %. Однократное применение сыворотки в комбинации со стрептомицином и полимиксином обеспечивает эффективность 96,8 %.

Введение гипериммунной сыворотки больным телятам по 0,5 см3 /кг массы тела дважды через 10 дней обеспечивает лечебный эффект в 87,5 % случаев. Профилактическая эффективность составляет до 100,0 %.

9. Проведение разработанной комплексной системы мероприятий обеспечивает благополучие хозяйств по псевдомонозу и повышает сохранность животных до 93-98,2%.

5. Практические предложения

1. Разработана и испытана технология промышленного производства и вся научно-техническая документация по изготовлению, контролю и применению поливалентной вакцины против псевдомоноза сельскохозяйственных животных, утвержденная заместителем руководителя Федеральной службы по ветеринарному надзору по Краснодарскому краю и республике Адыгея в 2005 году.

2. Разработана и испытана технология промышленного производства и вся научно-техническая документация по изготовлению, контролю и применению гипериммунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза сельскохозяйственных животных, которая была утверждена заместителем руководителя Федеральной службы по ветеринарному надзору по Краснодарскому краю и республике Адыгея в 2010 году.

3. Подготовлены и изданы "Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза крупного рогатого скота и свиней" утвержденные академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии A.M. Смирновым (протокол №3 от 9 октября 2001 г.).

4. Разработана и внедрена комплексная система мер борьбы с псевдомо-нозом сельскохозяйственных животных вошедшая в "Методические рекомендации по эпизоотологии, профилактике и лечению псевдомоноза крупного рогатого скота и свиней" рассмотренных и одобренных на заседании ученого совета Краснодарского НИВИ (протокол № 7 от 27.10.2010).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Васильев А.К., Болоцкий И.А., Дружина К.В. Семенцов В.И., Пруца-ков C.B., Куклев В.А. Молчан С.К. Вопросы эпизоотологии псевдомоноза свиней в Краснодарском крае / Материалы Всероссийской научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и зоотехнии, ч. 1, Казань, 2002 г. стр. 10-11

2. Васильев А.К., Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Пруцаков C.B., Молчан С.К. Эпизоотология псевдомоноза сельскохозяйственных животных в Краснодарском крае/ Материалы Всероссийской научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и зоотехнии, ч. 1, Казань, 2002 г. стр. 12-13

3. Васильев А.К., Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Пруцаков C.B., Молчан С.К. Испытание различных препаратов при фармакотерапии псевдомоноза свиней / Материалы Всероссийской научно-производственной конференции по проблемам ветеринарии и зоотехнии, ч. 1, Казань, 2002 г. стр. 13-16

4. ПруцаковС.В., Васильев А.К., Болоцкий И.А. Семенцов В.И., Васильев В.Ф., Хурай Р.Я., Ермакова Т.В. Молчан С.К. Псевдомоноз свиней в Краснодарском крае Ветеринария - 2002 г. № 12 стр. 12-14

5. Васильев А.К., Болоцкий И.А. ПруцаковС.В., Семенцов В.И. Забо-лотникова Л.Н. Терапевтическая эффективность некоторых препаратов при псевдомонозе поросят Ветеринарная патология - 2003 г. № 1 стр. 187188

5. Болоцкий И.А., Васильев А.К., Семенцов В.И., Пруцаков C.B., Молчан С.К. Клиническое течение и результаты патологоанатомического вскрытия при псевдомонозе поросят отьемышей /Материалы международной конференции посвященной 100-летию со дня рождения проф. С.Н. Никольского "Актуальные проблемы инвазионной, инфекционной и незаразной патологии животных" г. Ставрополь 2003 г. стр. 152-153

6. Терехов В.И. Шипицин А.Г. Болоцкий И.А С.В Пруцаков и др. Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных /Брошюра, РАСХ, М. 2003 г

7. Пруцаков C.B., Шипицин А.Г., Басова Н.Ю., Васильев А.К., Болоцкий И.А., Семенцов В.И. Получение в условиях хозяйства и испытание гипериммунной сыворотки против респираторных болезней телят Актуальные проблемы ветеринарной медицины" /Материалы международной научно-практической конференции т. 1 Ульяновск 2003 г. стр. 97-99

8. Васильев А.К., Болоцкий И.А., Пруцаков C.B., Семенцов В.И., Клиническое проявление и патологоанатомические изменения у поросят при псевдомонозе /Материалы Всероссийской научно-практической конференции и XII Межвузовского координационного совета "Свинина Актуальные проблемы

производства свинины в Российской Федерации" г. Ставрополь 2004 г. стр. 119120.

9. Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Васильев А.К., Пруцаков С.В. Фармакотерапия при псевдомонозе свиней/Материалы Всероссийской научно-практической конференции и XII Межвузовского координационного совета "Свинина Актуальные проблемы производства свинины в Российской Федерации" г. Ставрополь 2004 г. стр. 115-117.

10. Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Васильев А.К., Пруцаков С.В., Дубровин И.И. Вопросы эпизоотологии лептоспироза свиней в Краснодарском крае/Материалы Всероссийской научно-практической конференции и XII Межвузовского координационного совета "Свинина Актуальные проблемы производства свинины в Российской Федерации" г. Ставрополь 2004 г. стр. 117-119.

И. Пруцаков С.В., Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Васильев А.К., Распространение псевдомоноза животных в Краснодарском крае и воспроизведение заболевания на поросятах./ Труды Кубанского ГАУ Краснодар, 2004 вып. 406(434) стр. 37-40.

12. Пруцаков С.В., Болоцкий И.А., Васильев А.К., Семенцов В.И., Дубровин И.И. Опыт конструирования и испытания на лабораторных животных вакцин против Ps. aeruginosa/ Материалы международной научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов" г. Щелково 2005 г. стр. 387-389.

13. Пруцаков С.В., Болоцкий И.А., Васильев А.К., Семенцов В.И., Дубровин И.И. Выделение и изучение активности бактериофагов Ps. aeruginosa / Материалы международной научно-практической конференции "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов" г. Щелково 2005 г. стр. 389-392.

14. Васильев А.К., Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Пруцаков С.В., Дубровин И.И. Вопросы эпизоотологии псевдомоноза сельскохозяйственных животных в краснодарском крае Материалы международной научно-практической конференции "Ветеринарна медицина - 2005 " сучасний стан та актуальни про-блеми забеспечиния ветеринарного благополучия тваринитцтва" Харьюв 2005 г. стр. 198-202

15. Пруцаков С.В., Дубровин И.И., Болоцкий И.А., Васильев А.К., Семенцов В.И., Экспериментальное получение и испытание эффективности гипериммунной сыворотки против псевдомоноза животных/ Материалы международной научно-практической конференции "Профилактика и меры борьбы с лейкозом крупного рогатого скота в Российской федерации" Екатеринбург 2005 г. стр.

16. Болоцкий И.А., Васильев А.К., Пруцаков С.В., Семенцов В.И., Дубровин И.И., Фармакотерапия экспериментального псевдомоноза лабораторных животных и спонтанного псевдомоноза поросят/ Тезисы докл. Всероссийской конференции "Лекарственные средства для животных и корма, современное состояние и перспективы" М. 2005 71-72

17. Болоцкий И.А., Пруцаков C.B., Семенцов В.И., Васильев А.К., Дубровин И.И., Экспериментальное изучение эффективности бактериофагов при псевдомонозе Тезисы докл. Всероссийской конференции "Лекарственные средства для животных и корма, современное состояние и перспективы" М. 2005 стр72

18. Васильев А.К., Пруцаков C.B., Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Дубровин И.И,.Фармакотерапия свиней при спонтанном псевдомонозе /РАСХН, Отделение ветеринарной медицины. ГНУ ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко "Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных" Материалы международной научно-практической конференции (Москва 16-17 мая, 2006 г.) стр. 176-177

19. Болоцкий И.А., Пруцаков C.B., Васильев А.К., Семенцов В.И., Дубровин И.И.,. Вопросы этиологии псевдомоноза животных в Краснодарском крае /РАСХН, Отделение ветеринарной медицины. ГНУ ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко "Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных" Материалы международной научно-практической конференции (Москва 16-17 мая, 2006 г.) стр. 163-164

20. Пруцаков C.B., Семенцов В.И., Болоцкий И.А., Васильев А.К., Дубровин И.И. Анализ некоторых аспектов эпизоотологии псевдомоноза животных /РАСХН, Отделение ветеринарной медицины. ГНУ ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко "Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных" Материалы международной научно-практической конференции (Москва 16-17 мая, 2006 г.) стр. 98-99

21. Болоцкий И.А., Семенцов В.И. Васильев А.К., Пруцаков C.B. Особенности псевдомоноза крупного рогатого скота в Краснодарском крае Материалы научно-практической конференции посвященной 60-летию ГНУ Краснодарский НИВИ "Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях" г. Краснодар, 2006 г. стр.113-115

22. Васильев А.К., Болоцкий И.А., Семенцов В.И. Пруцаков C.B. Эпизоотология псевдомоноза свиней Материалы научно-практической конференции посвященной 60-летию ГНУ Краснодарский НИВИ "Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях" г. Краснодар, 2006 г. стр.199-122

23. Дубровин И.И. Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Пруцаков C.B., Васильев А.К. Изыскание методов специфической терапии животных, больных псевдомонозом Материалы научно-практической конференции посвященной 60-летию ГНУ Краснодарский НИВИ "Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях" г. Краснодар, 2006 г. стр.137-139

24. Пруцаков C.B. Семенцов В.И. Болоцкий И.А., Васильев А.К., Дубровин И.И.. Эпизоотология псевдомоноза в России и Южном Федеральном округе Материалы научно-практической конференции посвященной 60-летию ГНУ Краснодарский НИВИ "Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях" г. Краснодар, 2006 г. стр.204-207

25. Ярцев С.Н., Сусский Е.В., Васильев А.К., Пруцаков C.B. Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Псевдомоноз животных. Этиология и эпизоотология

/Материалы международной научно-производственной юбилейной конференции посвященной 110-летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России г. Курск, 2006 г. стр.. 240-243

26. Ярцев С.Н., Сусский Е.В., Болоцкий И.А., Васильев А.К., Пруцаков C.B. Семениов В.И., Экспериментальные испытания поливалентной вакцины против псевдомоноза животных /Материалы международной научно-производственной юбилейной конференции посвященной 110-летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России г. Курск, 2006 г. стр.. 243-246

27. Болоцкий И.А., Пруцаков C.B., Васильев А.К., Семенцов В.И. Дубровин И.И. Экспериментальное изучение эффективности бактериофагов при псевдомонозе Научные основы обеспечения защиты животных от зкотоксика-нов, радионуклеидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний" Материалы междун. Симпозиума 28-30.11. часть 2 Казань 2005, 65-67

28. Болоцкий И.А., Васильев А.К., Семенцов В.И., Пруцаков C.B., Дубровин И.И. Распространение псевдомоноза свиней и специфическая терапия заболевания' Ж. "Свиноводство" 2007 г.№ 3 стр. 34-35

29. Пруцаков C.B. Болоцкий И. А. Семенцов В.И. Васильев А.К. Дубровин И.И. Аксененко С.А. Испытание поливалентной вакцины против псевдомоноза животных/"Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов" Матер. Междунар. Научно-практич конф. (20-21.12.2007) Щелково 2007, 243-245

30. Пруцаков C.B. Болоцкий И.А. Семенцов В.И. Васильев А.К. Дубровин И.И. Аксененко С.А. Эффективность гипериммунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза свиней "Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов" Матер. Междунар. Научно-практич конф. (2021.12.2007) Щелково 2007, 264-265

31. Болоцкий И.А., Васильев А.К., Семенцов В.И., Пруцаков C.B. Инфекционные болезни свиней / Монография учебное пособие, Ростов н/Д "Феникс" 2007 г. 250 стр.

32. Пруцаков C.B. Болоцкий И.А. Семенцов В.И. Васильев А.К. Дубровин И.И. Специфическая терапия псевдомоноза свиней / «Фармакологические и экотоксикологические аспекты ветеринарной медицины» Материалы научно-практической конференции фармакологов Российской Федерации 7-9.11.07. Троицк 2007, с. 249-252

33. Патент. 2308288 Российская Федерация, МПК А61К 39/104, А61Р 31/04, Вакцина поливалентная против против псевдомоноза сельскохозяйственных животных /Антипов В.А, Болоций И.А., Пруцаков C.B., Васильев А.К., Семенцов В.И., Ярцев С.Н, Сусский Е.В; заявитель и патентообладатель Кубанский ГАУ. - 20061087/13; заявл. 20.03.2006; опубл. 20.10.2007 г. Бюл. № 29. - 17 с.

34. Болоцкий И.А. Васильев А.К. Семенцов В.И. Пруцаков C.B. Аксененко С.А. Фармакотерапия псевдомоноза свиней«Современное состояние и перспективы исследвоаний по инфекционной и протозойной патологии живот-

ных, рыб и пчел» Материалы международной науч.-прак.конф. 9-10.10.2008. 110 лет ВИЭВ. М, 2008. - 63-64

35. Патент. 2327472 Российская Федерация, МПК А61К 33/06, (2006.01), А61К 36/49 (2006.01) Средство для профилактики и лечения токсикозов сельскохозяйственных животных и птицы / Семенцов В.И., Семе-ненко М.П.,Антипов В.А,Васильев В.Ф, Болоций И.А., Пруцаков C.B., Васильев А.К., Кузьминова Е.В.; заявитель и патентообладатель ГНУ "Краснодарский НИВИ. - 2006145616/15; заявл. 20.12.2006; опубл. 27.06.2008 г. Бюл. № 18. -14 с

36. Болоцкий И.А. Васильев А.К. Семенцов В.И. Пруцаков C.B. Аксененко С.А. Результаты применения опытных серий вакцины поливалентной противпсевдомоноза животных «Современное состояние и перспективы ис-следвоаний по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел» Материалы международной науч.-прак.конф. 9-10.10.2008.110 лет ВИЭВ. М, 2008.-65-68

37. Болоцкий И.А. Васильев А.К. Семенцов В.И. Пруцаков C.B. Аксененко С.А. Псевдомоноз сельскохозяйственных животных /Вестник ветеринарии № 47(4/2008) стр. 51-55

38. Васильев А.К. Болоцкий И.А. Семенцов В.И. Пруцаков C.B. Аксененко С.А. Псевдомоноз сельскохозяйственных животных в Краснодарском крае /"Ветеринария" Ж №12 2008 стр. 20-23

39. Пруцаков C.B. Семенцов В.И. Васильев А.К. Болоцкий И.А. Применение поливалентной вакцины против псевдомоноза крупного рогатого скота Ж. Молочное и мясное скотоводство, 2009, № 2 стр.32

40. Антипов В.А. Пруцаков C.B. Болоцкий И.А. Васильев А.К. Семенцов В.И. Эффективность гипериммунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза свиней /Труды Кубанского ГАУ серия - ветеринарные науки № 1 (4.1) 2009 Краснодар, стр. 13-14

42. Патент. 2376034 Российская Федерация, МПК А61К 39/40, (2006.01),Способ получения поливалентной сыворотки против против псевдомоноза сельскохозяйственных животных /Антипов В.А, Болоций И.А., Пруцаков C.B., Васильев А.К., Семенцов В.И., Ярцев С.Н, Сусский Е.В, Дубровин И.И.; заявитель и патентообладатель ГНУ "Краснодарский НИВИ. - 20081214/13; заявл.27.05.2008; опубл.20.12.2009 г. Бюл. X» 35. - 12 с

43. Пруцаков C.B. Болоцкий И.А. Семенцов В.И. Васильев А.К. Профилактика и лечение болезней свиней / Инновационные технологии в свиноводстве. Сб.науч.трудов 2-й Международ, конф. КубГАУ г.Краснодар, 23-24.10.2010 г. с.180-182

44. Пруцаков C.B. Болоцкий И.А. Семенцов В.И. Васильев А.К. Вопросы эпизоотологии псевдомоноза сельскохозяйственных животных /Ветеринария Кубани» Ж. № 2,2010, с. 19 - 20

45. Пруцаков C.B. Болоцкий И.А. Семенцов В.И. Васильев А.К. Отбор штаммов P.aeruginosa для приготовления вакцины против псевдомоноза сельскохозяйственных животных / Актуальные проблемы ветеринарного обеспече-

ния Российского животноводства. Мат.Всеросс.н-практич. конф. 16-17.06.2010 г. Новочеркасск, 2010, с.37-39

46. Пруцаков С.В. Васильев А.К. Болоцкий И.А. Семенцов В.И. Эпизоотология и распространение псевдомоноза свиней в Краснодарском крае /Актуальн. Проблемы ветеринарии и животноводства. Мат.межрегиональной науч.-практич. конф. г.Самара 2010, с. 250-253

47. Пруцаков С.В. Семенцов В.И. Болоцкий И.А. Васильев А.К. Экспериментальное воспроизведение псевдомоноза у свиней алиментарным и половым путем. / "Актуальные вопросы ветеринарной медицыны" Материалы II Сиб. Вет. Конгр. /Новосиб. Гос. Аграрн. Ун-т. Новосибирск, 2010. - с. 359-360

48. Пруцаков С.В. Некоторые биологические свойства изолятов

P.aeruginosa, выделенных в хозяйствах Краснодарского края/Ветеринария Кубани» Ж. № 4,2010, с. 19 - 20

49. Веревкина М.Н., Светлакова Е.В. Поветкин С.Н., Пруцаков СВ. Природные микробные ассоциации /Ветеринария Кубани» Ж. № 4,2010, с. 19-20

50. И.А. Болоцкий, А.Г. Шипицын, А.К. Васильев, С.В. Пруцаков, В.И. Семенцов, В.Ф. Васильев Псевдомоноз животных Монография, книга издательство М. "Колос" 2010. 223с

51. Пруцаков С.В. Болоцкий И.А. Семенцов В.И. Васильев А.К. Этиологическая структура псевдомоноза сельскохозяйственных животных /Ветеринария Кубани» Ж. № 1,2011, с. 15 -16

52. Пруцаков С.В. Болоцкий И.А. Семенцов В.И. Васильев А.К. Изучение вирулентных свойств выделенных изолятов Pseudomonas aeruginosa Этиологическая структура псевдомоноза сельскохозяйственных животных /Ветеринария Кубани» Ж. № 1,2011, с. 18 - 19

Подписано в печать :11.04.2011г. Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная Офсетная печать Печ. л. 1,5 Заказ № 260 Тираж 100 экз.__

Отпечатано в типографии КубГАУ 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13

Содержание диссертации, доктора ветеринарных наук, Пруцаков, Сергей Владимирович.

Введение.

1. Обзор литературы

1.1. Эпизоотология псевдомоноза животных

1.2. Псевдомоноз - актуальный и опасный зооантропоноз

1.3. Специфические средства профилактики псевдомоноза животных

1.4. Лечебно-профилактические мероприятия при псевдомонозе.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3. СОБСТВЕННЫЕ Р1ССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Эпизоотологические аспекты псевдомоноза сельскохозяйственных животных

3.2. Факторы, обуславливающие развитие и способствующие распространению псевдомоноза в хозяйствах Краснодарского края

3.3. Ассоциативные формы псевдомоноза

3.4.1. Особенности эпизоотического процесса при псевдомонозе крупного рогатого скота

3.4.2. Особенности эпизоотического процесса при псевдомонозе свиней

3.5. Экспериментальное воспроизведение псевдомоноза поросят

3.6. Разработка и конструирование средств специфической профилактики и терапии псевдомоноза

3.6.1. Изучение штаммов Р.аеп^тоза и отбор их для приготовления вакцины против псевдомоноза

3.6.2. Изготовление опытных серий поливалентной вакцины против псевдомоноза животных.

3.6.3. Разработка промышленной технологии приготовления поливалентной вакцины против псевдомоноза

3.6.4. Производственные испытания опытных серий поливалентной вакцины против псевдомоноза.

3.7. Получение и исследование поливалентной сыворотки в лабораторных и производственных условиях

3.7.1. Изучение эффективности гипериммунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза в производственных условиях на свиньях

3.7.2. Изучение эффективности гипериммунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза на телятах

3.8. Терапевтические мероприятия при псевдомонозе

3.8.1 Лечение крупного рогатого скота при псевдомонозе

3.8.2 Терапия свиней при псевдомонозе

3.9. Комплексная система мер борьбы с псевдомонозом сельскохозяйственных животных

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Псевдомоноз продуктивных животных в регионе Северного Кавказа"

Псевдомоноз регистрируется у всех видов животных в различных климатических зонах мира. Этому способствуют высокая устойчивость возбудителя к условиям внешней среды, антагонистическая активность, резистентность к болыиинстыу применяемых антимикробных средств. (П. П. Литовченко, 1984; Basey С. et al., 1984; Bodey P. et al., 1984; Fernandes C. et al., 1985)

Проникая в организм человека или животного, синегнойной палочки может вызвать патологию в зависимости от ее вирулентности, что связано с биологическими свойствами, в частности, с наличием у нее большого набора факторов патогенности, степень проявления которых зависит от состояния живого организма, его естественной резистентности и иммунологического статуса. (Haveiaar A.H.,et al. 1985, В.В. Минухин, А.Я. Цыганенко,1986, Б.А. Корж, Я.Д. Злоткевич, И.И. Гевкав,1990).

В настоящее время отмечается усиление роли P. aeruginosa в этиологии заболеваний и тяжелых инфекционных осложнений у людей и животных, что необходимо учитывать в зависимости от региональных условий (Н. С. Акатова,

A. К. Акатов, 1975; В. Д. Беляков, Л. А. Ряпис, В. И. Илюхин, 1990).

Значительная инфицированность животных и птиц во всех регионах России, сложность диагностики, отсутствие рациональной терапия болезней, вызываемых патогенными культурами синегнойной палочки, представляет на современном этапе актуальную проблему отечественной ветеринарии (Н. К. Седов 1985, И.А. Болоцкий, А. Г. Шипицын, В. И. Терехов, Н. Ю. Басова 1986,

B. Т. Больных с соавт.1987, П. Ф. Сонин, М. А. Азямов 1988, С. А. Шаронин 1990, Л.И. Ефанова 1995, О.Б. Литвинов 1999, А.К. Васильев 2003 и др.).

Качественно новые методы содержания и эксплуатации животных, особенно на комплексах, характеризующиеся длительным пребыванием их в закрытых помещениях, высокой концентрацией на ограниченных производственных площадях, воздействие на организм животных многочисленных технологических стресс-факторов, снижает уровень их естественной резистентности, что способствует повышению вирулентности P. aeruginosa и провоцирует вспышки псевдомоноза у животных.

Всё вышеизложенное и послужило основанием для проведения исследований по изученю эпизоотологических особенностей, определению этиологической структуры псевдомоноза животных и разработке специфических средств и способов для повышения эффективности ветеринарных мероприятий при данной патологии в регионе Северного Кавказа.

Цель исследований: Изучить эпизоотологию и этиологию псевдомоноза сельскохозяйственных животных в регионе Северного Кавказа и на основании полученных данных разработать комплексную систему специфической профилактики и эффективной терапии.

Для достижения указанной цели, поставлены следующие задачи:

- изучить распространение и этиологическую структуру псевдомоноза у продуктивных животных в выше обозначенной зоне;

- изучить клиническое проявление и патологанатомические изменения при псевдомонозе у различных видов животных в призводственных и экспериментальных условиях;

- изучить биологические, вирулентные, антигенные и иммуногенные свойства у наиболее часто встречаемых серотипов P. aeruginosa и подобрать штаммы для создания поливалентной вакцины и сыворотки против псевдомоноза животных;

- создать опытные серии поливалентной вакцины и гипериммунной сыворотки против псевдомоноза животных и провести их испытание;

- разработать и подготовить нормативную документацию (технические условия, инструкции по изготовлению, контролю и применению) на поливалентную вакцину и гипериммунную сывортку против псевдомоноза животных;

- разработать и внедрить комплексную систему мероприятий при псевдомонозе животных;

1. Обзор литературы

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Пруцаков, Сергей Владимирович.

4. Заключение.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора ветеринарных наук, Пруцаков, Сергей Владимирович., Краснодар

1. Акатова Н.С. Принцип конструирования поливалентных вакцин Pseudomonas aeruginosa // Журн.микробиол. 1979. - № 2. - С.56-60.

2. Акатова Н.С., Акатов А.К. Некоторые данные о вирулентности Pseudomonas aeruginosa // Журн.микробиол. 1975. - № 1. - С. 101104.

3. Акатова Н.С., Смирнова Н.Е. Серологическая классификация Pseudomonas aeruginosa // Журн.микробиол. 1982. - № 7. - С. 87-91.

4. Алешня В.В., Цацка A.A., Влодавец В.В., Алешня Е.П. Значение Pseudomonas aeruginosa при гигиенической оценке водоисточника. Гиг. и сан. 1982, 3, с.76-77.

5. Ароне P.M., Чурсина Т.В. Применение синтетических минеральных сред для выделения синегнойной палочки. // Лаб.дело. 1976, 3.-е. 179-180.

6. Артемев В.И. Чувствительность синегнойной палочки к антибиотикам. В кн.: Профилактика и лечение болезней сельскохозяйственных животных и птиц (Тезисы IV научно-производственной конференции). -Л., 1979.-С. 25-26.

7. Артемьев В.И., Петрова И.В. Морфологические и культурально-биохимические свойства культур синегнойной палочки, выделенных из различных источников // Сб.науч.работ /Лен.вет.ин-т. 1978. -Вып.52. - С. 5-9.

8. Африканов С.Г., Ладыгин B.C., Силин А.К., Пиленко Г. И. Псевдомо-ноз птиц // Ветеринария.- 1985.-N 10,- С.40- 41.

9. Африканов С.Г., Силин А.К., Пиленко Г.И. Роль синегнойной палочки в патологии птиц // Современные средства и методы борьбы с заразными болезнями с.-х. птиц.- 1988,- Т.4. N2. - С.89-91.

10. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Стат. методы в микробиологических исследованиях. М.: Медгиз, 1962.

11. Балашов Н.Г., Родина В.Н. Диагностика синегнойной палочки в сперме животных и меры профилактики при ее обнаружении // Труды Гос.науч.-контр. ин-та вет.препаратов. 1971. - Т.ХУП. - С. 337-342.

12. Бекбергенов Б.М. Диагностика и химиотераптия синегнойной инфекции ожоговых ран: Дис. канд. Мед. наук. М., 1977.- 208 с.

13. Белоножкин В.П. и др. Санация спермы быков, контаминированной синегнойной палочкой // Животноводство.- 1982. N7.- С.51 -52.

14. Вельский В.В., Шатолова Е.В., Сингх Прадиуман Кумар. Структура популяций синегнойной палочки при ассоциации со стафилококками и эшерихиями. ЖМЭИ, 1994, 6, с. 37-38.17