Эпизоотологические, клинико-патоморфологические особенности псевдомоноза свиней и крупного рогатого скота

Захарченко, Олеся Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Эпизоотологические, клинико-патоморфологические особенности псевдомоноза свиней и крупного рогатого скота
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Эпизоотологические, клинико-патоморфологические особенности псевдомоноза свиней и крупного рогатого скота"

На правах рукописи

005006441

Захарченко Олеся Николаевна

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ, КЛИНИКО-ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПСЕВДОМОНОЗА СВИНЕЙ И КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

- 8 ДЕК 2011

Омск 2011

005006441

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина»

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор Плешакова Валентина Ивановна

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник Аржаков Виктор Николаевич

доктор ветеринарных наук, профессор Шкиль Николай Алексеевич

Ведущая организация:

ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»

Защита состоится «29» декабря 2011 г. в 10-00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.050.03 яри ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина» в институте ветеринарной медицины и биотехнологии по адресу: 644122, Омск-122, ул. Октябрьская, 92. тел. (3812) 24-15-35, факс (3812) 24-39-63

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института ветеринарной медицины и биотехнологии ФГБОУ ВПО ОмГАУ имени П.А. Столыпина.

Автореферат разослан

ноября

2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета канд. ветеринар, наук, доцент

Лещева Н.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Исследованиями многих авторов доказано, что роль условно-патогенных микроорганизмов, в том числе Pseudomonas aeruginosa, в инфекционной патологии животных продолжает неуклонно возрастать (М. П. Васильев, 1976; А. К. Васильев, С. В. Пруцаков и др., 2006).

Pseudomonas aeruginosa в настоящее время приобретает одну из ведущих ролей в развитии как местных, так и генерализованных гнойно-воспалительных процессов у сельскохозяйственных животных (А. Г. Шигащын, 1986; В. Т. Больных, 1987; А. К. Васильев, 2003; Е. В. Порт, 2004; Б. Ф. Шуляк, 2006; Lederberg Joshua et al, 2000).

Псевдомоноз сельскохозяйственных животных распространен во многих странах мира, в том числе и в Российской Федерации, и наносит животноводству значительный экономический ущерб, вследствие падежа, вынужденного убоя, задержки роста, снижения продуктивности, потери племенных качеств, значительных финансовых затрат на лечение и оздоровление животных (А. Г. Шипицын, 1979; И. П. Ралка, 1998; С. В. Пруцаков и др., 2005; А. В. Скориков и др., 2006).

Необходимо отметить, что в последние годы эпизоотическая напряженность по псевдомонозу возросла в связи с изменениями методов разведения и откорма животных. Кроме того, в современных условиях интенсивного ведения отрасли, животные с момента рождения подвергаются различным стрессовым воздействиям, которые значительно ослабляют их естественную резистентность, что способствует быстрому распространению псевдомоноза, адаптации и размножению возбудителя в организме с последующим выделением бактерий во внешнюю среду (В. И. Плешакова, Н. М. Колычев и др., 2010).

В большинстве случаев при организации профилактических мероприятий не учитываются природно-климатические и хозяйственно-организационные аспекты, не проводится эпизоотологическое районирование территорий по псевдомонозу сельскохозяйственных животных (С. В. Пруцаков, И. А Болоцкий, 2011).

Кроме того, клиническая картина болезни и патологоанатомические изменения в органах павших животных, зачастую являются не характерными и недостаточными для постановки диагноза, поэтому разработка методов комплексной диагностики псевдомоноза является актуальной для ветеринарной практики.

Все вышеизложенное послужило основанием для выбора темы научно исследовательской работы, при этом определены цель и задачи.

Цель исследования: изучить эпизоотологические особенности, клинико-патологоанатомическое проявление псевдомоноза у свиней и крупного рогатого скота в хозяйствах Омской области и усовершенствовать методы диагностики.

Задачи исследования:

- изучить эпизоотологические особенности псевдомоноза у крупного рогатого скота и свиней в хозяйствах Омской области;

- определить основные биологические свойства выделенных культур Pseudomonas aeruginosa;

- установить особенности клинического проявления и характер па-тологоанатомических изменений при спонтанном псевдомонозе у свиней и крупного рогатого скота;

- оптимизировать методы лабораторной диагностики псевдомоноза сельскохозяйственных животных.

Научная новизна. Получены новые данные о эпизоотологических особенностях псевдомоноза у свиней и крупного рогатого скота на территории Омской области, показано влияние эколого-географических факторов на основные показатели эпизоотического процесса. Проведено моле-кулярно-генетическое изучение нуклеотидного состава ДНК (моль % ГЦ) и анализ гена 16S рибосомальной РНК культур P.aeruginosa, выделенных от сельскохозяйственных животных и из объектов окружающей среды.

Уточнены особенности клинического проявления псевдомоноза у крупного рогатого скота и свиней при естественном заражении и установлены основные патологоанатомические изменения в органах павших животных.

Усовершенствована бактериологическая схема выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa с использованием селективных сред и подобранных тестов. С использованием разработанной схемы выделено и идентифицировано 316 культур Pseudomonas aeruginosa.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты эпизоото-логического обследования животноводческих хозяйств, свидетельствуют о сравнительно широком распространении псевдомоноза среди свиней и крупного рогатого скота. Полученные данные дополняют новой научной информацией вопросы этиологии и патогенеза псевдомоноза сельскохозяйственных животных. Сведения, полученные в результате эпизоотологических, клинических, бактериологических, гематологических, биохимических и патологоанатомических исследований, позволяют более эффективно проводить диагностику псевдомоноза у сельскохозяйственных животных.

На основании результатов исследования разработаны и изданы методические рекомендации для специалистов ветеринарной службы «Ме-

тоды диагностики псевдомоноза сельскохозяйственных животных» (утв. Ученым советом ИВМ ОмГАУ и ЦНО АПК при Министерстве сельского хозяйства и продовольствия Омской области, 2011 г.).

Материал, изложенный в диссертации, может быть использован при составлении соответствующих разделов учебников и руководств по микробиологии и эпизоотологии.

Внедрение результатов исследований. Отдельные положения диссертационной работы используются при чтении лекций и проведении ла-бораторно-практических занятий по курсу ветеринарной микробиологии, эпизоотологии на факультетах ветеринарной медицины Омского ГАУ имени П.А. Столыпина, Башкирского ГАУ и Оренбургского ГАУ, Санкт-Петербургской ГАВМ.

Полученные данные учитываются при разработке схемы диагностики и профилактики псевдомоноза свиней и крупного рогатого скота ветеринарной службой Омской области.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на: XII Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Вклад молодых ученых в реализацию приоритетного национального проекта «Развитие агропромышленного комплекса» 25-27 ноября 2008 г. (Троицк, 2008); Международной конференции, посвященной 80-летию Уральского НИВИ 24 февраля 2010 г. (Уральск, 2010); конференции II этапа Всероссийского конкурса на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Минсельхоза России (Омск, 2011); ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ОмГАУ (2008-2011).

Публикации результатов исследований. По материалам исследований опубликовано пять научных работ, в том числе две в изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования Российской Федерации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 151 странице машинописного текста, иллюстрирована 20 таблицами и 33 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Список литературы включает 177 источников, в том числе 67 зарубежных авторов.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Псевдомоноз животных широко распространен среди свиней (26,7%) и крупного рогатого скота (13,4 %) в хозяйствах Омской области, что подтверждается выделением возбудителя во всех исследованных географических зонах.

2. Особенности клинического проявления псевдомоноза у крупного рогатого скота и свиней при естественном заражении и основные патоло-гоанатомические изменения.

3. Усовершенствована бактериологическая схема выделения и идентификации Pseudomonas aeruginosa с использованием селективных сред и подобранных тестов на оксидазу, каталазу, утилизацию цитрата, ацетата натрия, восстановление нитратов, рост на ацитамидном агаре, расщепление глюкозы и мочевины, способности роста при 42°С, образования пигментов, теста Грегерсена и определения подвижности.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Собственные исследования проведены в период с 2008 по 2011 гг. на кафедре ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А.Столыпина, в животноводческих хозяйствах различных форм собственности Омской области, в Омской областной ветеринарной лаборатории.

Работа выполнена в соответствии с планом НИР «Разработка методов и средств диагностики, профилактики и мер борьбы с инфекционными болезнями сельскохозяйственных животных» (номер государственной регистрации 01.20.00 12391).

Объектом исследований являлся крупный рогатый скот и свиньи различных половозрастных групп, здоровые и больные с клиническими признаками маститов, эндометритов, расстройств желудочно-кишечного тракта и дыхательной системы, а так же выделенные культуры Pseudomonas aeruginosa.

Бактериологическому исследованию подвергали патологический материал от трупов или вынужденно убитых поросят, телят, абортированных и мертворожденных плодов, выделения из наружных половых органов свиноматок и коров, смывы из препуциалыюй полости и спермы хряков-производителей, пробы окружающей среды в хозяйствах (корм и вода, смывы с кормушек, станков).

Первичный посев исследуемого материала производили на питательные среды: МП А, МПБ, Эндо, а также на селективную среду ЦПХ, с последующим инкубированием в аэробных условиях при 37° С в течение 24-48 часов.

С целью выделения чистой культуры микроорганизмов, в зависимости от культуральных и морфологических свойств, производили их пересев на питательные среды ЖСА, Левина, Сабуро и КА (МПА с содержанием 5% дефибринированной крови барана).

Бактериологические исследования проводили в соответствии с «Методическими указаниями по лабораторным исследованиям на псевдомо-ноз животных и птиц», утвержденных ГУВ МСХ СССР № 432-3 от 14.11.1988 г.

Биохимическую активность Pseudomonas aeruginosa и чувствительность к антибактериальным препаратам культур определяли на современном полуавтоматическом бактериологическом анализаторе AutoScan-4 (DADE BEHRING, США), позволяющем проводить идентификацию и определять чувствительность микроорганизмов менее чем за 24 часа. Идентификацию производили с использованием стабильных панелей DADE Microscan, являющихся эталоном в бактериологии, на основе системы биотипирования микроорганизмов в более чем 30 реакций одновременно, что обеспечивало высокую специфичность и точность результатов.

Видовую принадлежность культур Pseudomonas aeruginosa определяли, используя «Определитель бактерий Берджи» (1997) и «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» (М.А. Сидоров и др., 1995).

Вирулентные свойства Pseudomonas aeruginosa изучали на белых беспородных мышах с массой тела 18-20 г. ЬД 50 определяли по методу Рида и Менча, в модификации B.JI. Троицкого (1950).

Адгезивные свойства определяли в реакции гемагглютинации, используя отмытые эритроциты кролика и суточную бульонную культуру Pseudomonas aeruginosa.

Генотипические свойства 10 культур Р. aeruginosa, выделенных от свиней и крупного рогатого скота, имеющих различные фенотипические характеристики были изучены с учетом нуклеотидного состава ДНК (моль % ГЦ) с использованием метода тепловой денатурации и ряда модификаций (J. Marmur, Р. Dotry, 1962).

Содержание ГЦ пар рассчитывали по формуле, адаптированной для использования растворов с низкой ионной силой: ( Г+Ц = 2.08 Тщ,- 106,4). В качестве внутреннего стандарта использовали ДНК Е. coli с известным нуклеотидным составом (НПО "Вектор", г. Новосибирск).

Идентификация культур микроорганизмов проведена с помощью анализа гена 16S рибосомальной РНК. Из культур Р. aeruginosa были выделены нуклеиновые кислоты (НК), каждый образец исследован с помощью реакции транскрипционной амплификации НАСБА. Параллельно была проведена ПЦР каждого образца с использованием праймеров, обеспечивающих амплификацию фрагментов 165-рибосомальной ДНК всех видов, входящих в род Pseudomonas.

Таким образом, были получены микроорганизмы максимальной гомологии с определенной 16S рРНК. Достоверным свидетельством того, что фрагмент принадлежит определенному микроорганизму, считается

совпадение его нуклеотидной последовательности 16S рРНК с последовательностью 16S рРНК, представленной в банке NCBI, более чем на 97%.

Клинические исследования животных проводили по общепринятым в ветеринарии методикам (А. А. Заволока, 1990; С. Ю. Зайцев, Ю. В. Ко-нопатов, 1994; И. П. Кондрахин и др., 2004).

Гематологические и биохимические исследования сыворотки крови у животных, спонтанно больных псевдомонозом, проведены общепринятыми методами.

Для изучения патологоанатомических изменений у больных псевдомонозом животных было проведено 47 вскрытий трупов или вынужденно убитых животных. Биометрическую обработку полученных данных проводили с помощью компьютерной программы Microsoft Exel 2000. Критерий достоверности определяли с помощью таблицы t-распределения Сгьюдента с учетом рекомендаций Г. Ф. Лакина (1990) и В. А. Середина (2001).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ЗЛ.Эпизоотологические особенности псевдомоноза крупного рогатого скота и свиней на территории Омской области

Распространение P. aeruginosa изучали в зависимости от зональных особенностей области, включающей четыре зоны: степную, южную лесостепь, северную лесостепь и северную зону.

Данные областной и районных ветеринарных лабораторий Омской области, а также результаты собственных исследований, позволили изучить степень распространения P. aeruginosa при различных патологиях крупного рогатого скота и свиней.

Возбудитель псевдомоноза регулярно выделяли из патматериала от больных животных (крупный рогатый скот, свиньи), из проб молока, спермы, корма, воды и объектов окружающей среды.

В период с 2008 по 2010 год было проведено бактериологическое исследование 1861 пробы от больных животных и объектов окружающей среды, из которых, выделено 316 (16,9%) культур P. aeruginosa. В том числе, от крупного рогатого скота поступило 1038 проб (из них положительных 139), от свиней 517, из них - 138 положительных. При исследовании объектов внешней среды из 306 проб было выделено 39 культур возбудителя, из них 17 (43,5%) показали вирулентность при заражении лабораторных животных.

P. aeruginosa в хозяйствах Омской области имеет довольно широкое распространение и выделяется практически во всех районах.

Так, из 23 обследованных районов Омской области, возбудитель псевдомоноза зарегистрирован в 22 (95,7%), при этом наряду с P. aeruginosa, выделяли и другие условно-патогенные микроорганизмы (E.coli, Еп-terococcus ssp., Proteus ssp., Staphylococcus ssp., Citrobacter ssp., Klebsiella ssp.).

От больных животных (крупный рогатый скот), выделено 139 культур, этот показатель по зонам колеблется от 41,1% до 54,7%. В степной зоне выделено 23 культуры (54,7%), несколько меньше - в северной (50%). В южной лесостепи и северной лесостепи выделение Р. aeruginosa практически одинаковое и составляет 56 (41,1%) и 55 культур (42,9%) соответственно.

От больных свиней наибольшее количество выделенных культур Р. aeruginosa зарегистрировано в южной (44,8%) и северной лесостепях (49,2%), наименьшее в северной зоне (20,0%).

Выделение Р. aeruginosa из объектов внешней среды колеблется от 7,8% до 30% в зависимости от зоны. Так, наибольшее количество выделенных культур Р. aeruginosa зарегистрировано в северной (30%) и степной (16,6%) зонах, наименьшее (7,8%) в северной лесостепи.

Инфицированность Р. aeruginosa сельскохозяйственных животных и объектов окружающей среды по зонам Омской области составила от 13,0% - в степной зоне, до 37,0% - в северной, в хозяйствах южной и северной лесостепи - 14,4% и 22,4% соответственно.

При проведении бактериологических исследований проб полученных от больных животных и их анализе были получены данные свидетельствующие о сезонности проявления псевдомоноза.

Так, начиная с декабря по апрель, наблюдали увеличение количества выделений Р. aeruginosa, которое колебалось от 8,5 до 12%. Наименьшее количество возбудителя от больных животных и объектов окружающей среды (5,4%) установлено в летний период.

Рис. 1 . Проявление сезонности псевдомоноза у крупного рогатого скота и свиней в хозяйствах Омской области (2008-2010 г.)

На рисунке 1 прослеживается тенденция учащения случаев выделения P. aeruginosa от больного крупного рогатого скота в весенние месяцы (март, апрель, май) и снижения с июня но сентябрь.

У свиней проявление сезонности псевдомоноза выражено в меньшей степени, снижение количества выделений возбудителя от больных животных приходится на ноябрь-декабрь.

3.2. Этиологическая роль Pseudomonas aeruginosa при патологии сельскохозяйственных животных

С целью выяснения этиологической роли Pseudomonas aeruginosa при различных видах патологии сельскохозяйственных животных, нами были проведены бактериологические исследования проб патологического материала от больных животных (крупный рогатый скот и свиньи), а также объектов окружающей среды.

При бактериологическом исследовании проб, полученных из патологического материала трупов (п=78) и больных телят (п=190), выделена 71 (26,5%) культура Pseudomonas aeruginosa. При диарейном симптомоком-плексе (п=85) положительный результат получен в 34,1% случаев, при патологии органов дыхания (п=50) у 11 особей (22%); возбудитель был выделен из 55 проб крови телят в 18,2%, а из органов павших и абортированных плодов телят в 26,9% случаях.

При исследовании проб патологического материала от больных поросят (п=99),мертворожденных и абортированных плодов (п=46), возбудитель выделяли в 45,5% случаев; от животных с клиническими признаками диареи (п=48) положительные находки составили 52,1% и 39,2% - с патологией органов дыхания (п =51).

При исследовании свиноматок с клиническими признаками эндометрита, задержания последа, прохолостах и абортах (п =139) Р. aeruginosa выделена в 27,3% случаев, а у коров (п =192) в 16,1% случаев. При маститах у коров (п=186) выделено 25 культур (13,4%). Возбудитель был выделен также из проб крови больных коров (п=55) в 9,1% случаев.

Бактериологическому исследованию были подвергнуты препуциаль-ные смывы (п =189) и сперма (п =44) хряков-производителей. При этом возбудитель обнаружен в 27 пробах препуциальных смывов (14,3%) и 14 (31,8%) в пробах спермы.

Наиболее часто Р. aeruginosa выделяли при исследовании фекалий (52,1%) и паренхиматозных органов (45,6%) от больных поросят.

Следует отметить, что из всех указанных объектов Pseudomonas aeruginosa выделяли как в чистом виде, так и в ассоциациях, причем в ассоциациях возбудитель выделяли чаще.

Всего нами было выделено 1950 культур условно-патогенных микроорганизмов, при этом наиболее часто выделяли E.coli (48,7% от общего числа изолированных культур) , P. aeruginosa (16,2%), Enterococcus ssp. (11,0%), Proteus ssp. (10%), Staphylococcus ssp. (8,1%), Citrobacter ssp. (3,2%), Klebsiella ssp. 2,8%.

Из исследованных 1861 проб, выделено 316 культур (16,9%) Р. aeruginosa, причем в монокультуре возбудитель был выделен в 94 случаях (29,7%).

3.3 Биологические свойства выделенных культур

Pseudomonas aeruginosa 3.3.1. Культурально-морфологические свойства

Pseudomonas aeruginosa - грамотрицательные, короткие, прямые с закругленными концами палочки длиной 1-3 мкм и шириной 0,5-1 мкм, располагаются одиночно, парами или в виде коротких цепочек.

Значительное количество культур Pseudomonas aeruginosa при культивировании образовывали капсулоподобное вещество - внеклеточную слизь, тонким слоем окружающую микробную клетку. Спор и капсул у микроорганизмов не регистрировали.

Все выделенные культуры Pseudomonas aeruginosa обладали подвижностью.

При культивировании в аэробных условиях на МПА (37°С) через 24 часа Р. aeruginosa образовывали колонии нескольких видов: росинча-тые (0,5-1 мм), округлые, гладкие, блестящие, прозрачные, 4,7%; средних размеров (3-5 мм), сероватого цвета, полупрозрачные, выпуклые с ровными краями, слизистой консистенции 34,8%; круглые, крупные, (5-10 мм), слизистые с пигментом, 7,9%; пигментированные, разлитые, слизистые, с неровными краями 39,9%; колонии с металлическим отливом (феномен радужного лизиса) 12,7%.

Все культуры при росте на питательных средах выделяли специфический запах цветущей яблони или жасмина.

При культивировании на агаре Эндо (37°С, 24 часа) Pseudomonas aeruginosa (выделенные из спермы хряков) образовывали выпуклые блестящие колонии пастообразной консистенции с розовым оттенком.

При инкубации бактерий в жидкой питательной среде (МПБ) в течение 24 часов, среда мутнела, а на ее поверхности образовывалась тонкая, серая пленка и зеленое кольцо (п=96) 30,3% , которое при встряхивании хорошо разбивалось, окрашивая бульон в зеленоватый цвет.

У ряда культур (п=126, 39,8%) наблюдали помутнение среды, и только после встряхивания проявлялся пигмент. В некоторых случаях

29,7% бульон приобретал слизистую тягучую консистенцию. Рост культур отмечали в температурном диапазоне от 37°С до 42°С.

Все выделенные культуры Pseudomonas aeruginosa (316) продуцировали характерные пигменты: пиоцианин 229 культур (72,5%); 28 (8,9%) малиновый пигмент - пиорубин; 25 (7,9%) пиовердин (желто-зеленый флюоресцирующий в ультрафиолетовых лучах); 16 (5,06%) коричневый -пиомеланин, а у 18 (5,7%) - пигмент отсутствовал или был очень слабый.

3.3.2. Биохимические свойства Pseudomonas aeruginosa

Использование панелей Microscan Neg panels для идентификации Грамотрицательных бактерий позволило установить видовую принадлежность выделенных культур P.aeruginosa. При исследовании биохимических свойств установлено, что все выделенные культуры дают положительный тест на образование катал азы, не образуют орпитиндекарбокси-лазу, восстанавливают нитриты до нитратов, ферментируют глюкозу с образованием кислоты, не образуют индол, не дают реакции с метиловым красным и ацетилметилкарбинолом. Установлена положительная реакция на цитохромоксидазный тест. P.aeruginosa окисляет глюкозу (OF тест) в аэробных условиях, но не разлагает фруктозу, инозит, сахарозу, эскулин. Сахаролитическая активность Pseudomonas aeruginosa низкая - бактерии способны окислять глюкозу с образованием кислоты, реже арабинозу. Ряд свежевыделенных культур ферментирует лактозу. При росте на ацетамид-ном агаре, возбудитель дает отрицательный тест на образование сероводорода и положительный на аргениндегидролазу.

На среде Кинг В 7,91% культур продуцировали пигмент флюорецин (пиовердин), окрашивая среду в желто-зеленый цвет, который растворим в воде, но нерастворим в хлороформе.

Установлена высокая протеолитическая активность всех культур Pseudomonas aeruginosa, разжижение желатина в течение 24 часов в виде воронки, в дальнейшем послойное (инкубация до 7 суток). Бактерия гид-ролизует казеин, утилизирует гемоглобин.

3.3.3. Чувствительность выделенных культур

Pseudomonas aeruginosa к химиотерапевтическим препаратам

Определение чувствительности выделенных культур Р. aeruginosa проводили к ряду антибактериальных препаратов - относящихся к следующим группам:

Ингибиторы синтеза клеточной оболочки

• Пенициллины (ПИП\ТАЗ - пиперациллин\тазобактам, амоксицил-лин\клавуланат, ампициллин\сульбактам, тикарциллин, пиперациллин, ТИК\КК - тикарциллин\клавуланат, мезлоциллин, оксациллину)

. Поколения цефалоспаринов (1 цефазолин, цефалотин, 2 цефуроксим, цефотетан, цефокситин, цефамандол 3 дефотаксим, цефтриаксон, цефта-зидим, цефтизоксим, цефоперазон 4 цефепим) . Карбапенемы (имипенем, меропенем) • Монобактамы (азтреонам) Ингибиторы синтеза белка

Тетрациклина (тетрациклин)

Аминогликозиды (гентамицин, тобрамицин, нетилмицин, амикацин, канамицин)

Ингибиторы ДНК- гиразы

Фторхинолы (ципрофлоксацин, левофлоксацин, норфлоксацин, эн-рофлоксацин, офлаксацин)

Нитрофураны (нитрофурантоин)

При исследовании антибиотикочувствительности на панели с большим количеством титров (до шести), установлено, что все выделенные культуры показали чувствительность к пиперациллину, тикарцил-лин\клавуанату, мезлоцилину; цевтазидиму; имипенему, меропенему; ген-тамицину, тобрамицину, нетилмицину амикацину; ципрофлоксацину, ле-вофлоксацину (отсутствие роста при концентрации препарата МИК от <4 до <16 (мг/л)).

Промежуточной чувствительностью (наличие роста при наименьшей концентрации, но отсутствие роста при наивысшей концентрации препарата МИК от <16 до 32 (мг/л)) к азтреонаму обладали 27 (8,5%) культур, остальные были чувствительны к данному препарату.

К цефотаксиму промежуточную чувствительность показали 86,7 % культур, 13,3% были резистентны (наличие роста при всех концентрациях препарата МИК >32 (мг/л)).

Резистентность к цефтизоксиму установлена у 52,2% культур, остальные обладали промежуточной чувствительностью. Большинство культур (66,5%) P. aeruginosa обладали промежуточной чувствительностью к цефтриаксону, 16,5% были чувствительны и 17,1% резистентны к данному препарату.

При определении чувствительности к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом установлено, что большинство культур Pseudomonas aeruginosa, выделенных от крупного рогатого скота и свиней, чувствительны к меропенему, гентамицину, амикацину, энроф-локсацину, офлаксацину, цефоперазону в 88,6% случаев, ципрофлоксацину, тобрамицину, полимиксину - 94,3-97,1%, к канамицину - в 50,6% случаев.

Наряду с этим установлена резистентность к наиболее часто применяемым в ветеринарной практике препаратам, а именно: пенициллину, ок-сациллину, эритромицину, цефуроксиму, цефамандолу, доксициллину, левомицетину, фурозолидону, тилозину и слабая чувствительность (22,6%) культур к канамицину.

3.3.4. Патогепные свойства выделенных культур Pseudomonas aeruginosa и патоморфологические изменения в органах белых мышей при экспериментальном заражении

Для определения патогенных свойств P. aergiunosa исследовали культуры, выделенные от больных животных, объектов внешней среды, где содержались больные животные, а также пробы водопроводной воды, используемой для поения.

Заражение белых мышей осуществляли внутрибрюшинно, взвесью односуточных агаровых культур в физиологическом растворе, в концентрации: 0,25*109 м.к./мл; 0,5x109 м.к./мл и 1,0x10 м.к./мл, в объеме 0,3 мл.

Культуры Р. aeruginosa, выделенные от больных свиней (паренхиматозные органы, влагалищная слизь, сперма), а также из смывов со стен свинокомплекса обладали высокой патогенностью для лабораторных животных в дозе 0,5 х 109м.к./мл, вызывая гибель свыше 50% мышей.

При этом у лабораторных животных через 24-28 часов после заражения наблюдали учащенное дыхание, сердцебиение, в последующем вокруг глаз скопление гнойного экссудата с образованием корочек. Животные дрожали, переступали конечностями, шерсть была взъерошена, движения вялые, аппетит отсутствовал; каловые массы разжижены, зеленовато-желтого цвета, иногда с примесью крови, шерсть вокруг анального отверстия загрязнена фекальными массами. Гибель лабораторных животных наступала в течение 28-36 часов.

Минимальной ДДщ обладали микроорганизмы выделенные из проб водопроводной воды (0,25x109 м.к./мл).

При заражении культурой Р. aeruginosa, выделенной из молока коровы при мастите, в дозе 0,25х109 м.к./мл гибель лабораторных животных не регистрировали, введение дозы 1,0x109 м.к./мл сопровождалось гибелью белых мышей и признаками катарального гастроэнтероколита.

При патологоанатомическом вскрытии мышей, павших в течение 48 часов (зараженных взвесью 1,0x109 м.к./мл, культурой, выделенной из влагалищной слизи свиноматки), отмечали ярко выраженную гиперемию сосудов брюшной стенки, тонкого и толстого кишечника, серозное воспаление паховых лимфатических узлов, спленомегалию, вздутие желудка и кишечника.

При введении P. aeruginosa выделенной из влагалищной слизи свиноматки в объеме 0,25x109 м.к./мл у павших лабораторных животных отмечали серозный лимфанодулит и спленомегалию.

У мышей, зараженных культурой P. aeruginosa, выделенной из спермы хряка, в дозе 0,5 *109 м.к./мл наблюдали отек и гиперемию легких, серозное воспаление подмышечных лимфоузлов, острое расширение сердца, точечные кровоизлияния в печени.

После заражения культурой, выделенной из легкого свиньи в дозе (1,0*109 м.к./мл), у павших мышей наблюдали увеличение селезенки, воспаление подмышечных, паховых лимфоузлов, застойную гиперемию печени.

При определении патогенных свойств для белых мышей выявлено, что патологоанатомическая картина различна в зависимости от выделения и дозы возбудителя P. aeruginosa.

3.3.5. Адгезивные свойства Pseudomonas aeruginosa

Данному исследованию было подвергнуто 277 культур Pseudomonas aeruginosa, выделенных от больных животных с поражениями дыхательной, пищеварительной и репродуктивной систем, а также 39 - из объектов окружающей среды.

Степень адгезивности культур Pseudomonas aeruginosa изучали, используя эритроциты кролика. У высокоадгезивных и реже среднеадгезив-ных культур Pseudomonas aeruginosa на поверхности эритроцитов выявляли как единичные, так и группы бактериальных клеток склеенных между собой. У культур, не обладающих адгезивными свойствами, на поверхности эритроцитов Pseudomonas aeruginosa отсутствовали или фиксировались одна-две микробные клетки.

Проведенные исследования показали, что высокоадгезивные свойства проявили 56,7% (157 из 277) культур выделенных, преимущественно, от больных животных, тогда как из объектов окружающей среды - 17,9%. Средней степенью адгезивной активности обладало 31,7% культур от больных животных (88 из 277) и 43,6% из объектов окружающей среды. Среди низкоадгезивных культур - 30,7 % выделены из объектов окружающей среды и 11,5% от больных животных. Неадгезивные культуры 3 из 39 (7,8%) были выделены только из объектов окружающей среды.

Из выделенных культур Pseudomonas aeruginosa 51,8% - обладали высокими адгезивными свойствами, 33,2% - средней степенью адгезивности, низкими адгезивными свойствами обладали 13,9% и неадгезивными -0,9%.

3.3.6. Генотнпические свойства культур Pseudomonas aeruginosa

Анализ нуклеотидного состава хромосомной ДНК исследуемых культур показал, что изученные Pseudomonas aeruginosa имеют средний показатель содержания Г+Ц пар, равный 60,1 моль %. Пределы варьирования нуклеотидного состава ДНК составили min - 57,7 моль% Г+Ц; max -62,7 моль % Г+Ц.

Определение степени различий моль % содержания Г+Ц (% моль ГЦ) с референтным штаммом позволили нам исследуемые культуры Pseudomonas aeruginosa распределить на две группы. Так, в первую группу вошли культуры, у которых содержание Г+Ц пар было выше по сравнению со средним показателем (60,1 моль %). Вторую группу сформировали культуры, показатель Г+Ц пар которых был ниже по сравнению со средним. Необходимо отметить, что биометрическая обработка степени различий моль % ГЦ на основании параметрического критерия Стыодента показала, что достоверных различий в указанных группах протестированных культур Pseudomonas aeruginosa по этому показателю не установлено.

Секвенирование и последующий филогенетический анализ выделенных культур показали, что в каждом образце находилась Pseudomonas aeruginosa. Сходство в 96% обнаружено в трех образцах, в четырех оно составляло 91%, в остальных - 94% с последовательностью 16S рРНК, представленной в банке NCBI, что обычно приводит к изменению биологических свойств возбудителя.

Нами установлено, что культуры Pseudomonas aeruginosa, выявленные на территории Омской области, имеют некоторые генотипические отличия в структуре генов 16S рибосомальных РНК (4- 9%) от культуры, представленной в банке NCBI.

Проведенный анализ генов 16S рРНК позволяет использовать его для идентификации выделенных культур Pseudomonas aeruginosa, так как уровень сходства последовательностей между видами одного рода находится в пределах 91-100%.

3.4. Клиническое проявление и патологоанатомические изменения при спонтанном псевдомонозе крупного рогатого скота и свиней

Клинические исследования были проведены в животноводческих хозяйствах Омской области. Под наблюдением находилось 277 животных, в том числе 132 головы крупного рогатого скота, 145 свиней, от которых была выделена патогенная Pseudomonas aeruginosa.

У молодняка сельскохозяйственных животных наблюдали диарей-ный симптомокомплекс (39,4% от числа исследованных), болезни органов дыхания (22,6%), и сепсис (7,2%), а у взрослых животных чаще патологию

органов репродуктивной системы (78,5%), мастит (17,8%), реже сепсис (3,5%).

Клиническую картину при псевдомонозе крупного рогатого скота и свиней в животноводческих хозяйствах наблюдали в трех основных формах, у молодняка чаще регистрировали респираторную, при этом у поросят болезнь протекала остро, с подъемом температуры до 40,9-41,5°С, сосательный рефлекс был слабым илр отсутствовал. У животных регистрировали угнетение, иногда нервные явления в виде судорог, частое поверхностное дыхание. Поросята погибали в течение нескольких дней.

При переводе поросят (30,3%) на доращивание, псевдомоноз чаще принимал хроническое течение, животные отставали в развитии, отмечалось снижение массы тела, затрудненное дыхание, отдышка, кашель, риниты и конъюнктивиты. Из носовых отверстий и глаз выделения вначале серозного, а затем слизисто-гнойного экссудата. При этой форме течения зачастую развивалась бронхопневмония. Больные поросята были сгорблены, покрывались длинной щетиной и превращались в заморышей.

При кишечной форме у поросят до двухмесячного возраста (37,8%) регистрировали усиление жажды, потерю аппетита, профузный понос, при этом фекалии были жидкие, зеленоватые, с примесью крови, гнилостного запаха. Иногда у них наблюдали судороги, парезы и параличи конечностей. Летальность поросят при пссвдомонозе составляла 15,2%.

У телят заболевание чаще протекало остро, с подъемом температуры до 40,5-41,5 °С. У животных регистрировали потерю аппетита, вялость в движениях, поверхностное дыхание, сухое носовое зеркальце, затем снижение температуры и к концу 3-5 суток они погибали.

При кишечной форме псевдомоноза в 40,8% случаев у телят отмечали вялость в движениях, самопроизвольную дефекацию, кал разжиженный, серо-желтого или желто-зеленого цвета с примесью крови и слизи. В результате обезвоживания больные животные быстро слабели и гибли в течение трех-пяти дней. Летальность телят при псевдомонозе составляла 18,7%.

При патологоанатомическом вскрытии поросят с острой формой течения респираторного псевдомоноза, регистрировали гиперемию слизистых оболочек носовых ходов, увеличение в объеме регионарных лимфатических узлов, селезенки, кровоизлияния под эпикардом.

При хроническом течении инфекции отмечали риниты, при этом слизистая оболочка носовой полости была гиперемирована, отечная. При вскрытии регистрировали застойную гиперемию печени, почек и миокарда, отек легких с участками эмфиземы.

При кишечной форме слизистая оболочка желудка и тонкого кишечника гиперемирована, нередко с множественными кровоизлияниями, в

просвете кишечника появлялось густое зеленоватое содержимое, слизистая набухшая, окрашена в серый или красно-бурый цвет, усеяна кровоизлияниями. Печень увеличена в объёме, становилась ломкой консистенции, глинистой окраски, содержала множественные, различной величины кровоизлияния.

При вскрытии телят с кишечной формой проявления псевдомоноза отмечали увеличение селезенки, острый катаральный гастроэнтероколит, острый серозный лимфаденит регионарных лимфатических узлов. В ряде случаев на эпикарде, селезенке, печени и почках обнаруживали точечные и полосчатые кровоизлияния.

Патология репродуктивной системы протекала зачастую бессимптомно и наблюдалась у взрослого поголовья, носила хронический характер, а больные животные являлись псевдомононосителями.

У 29,2% хряков-производителей клинические признаки заболевания, вызванные Р. aeruginosa, проявлялись редко, в виде угнетения половой активности (снижение объема эякулята, животные неохотно шли на чучело).

У коров (в 17,8% случаев) регистрировали маститы (серозный, се-розно-катаральный, серозно-геморрагический), которые характеризовались воспалением паренхимы одной или нескольких долей вымени, болевой реакцией, повышением как местной, так и общей температуры тела, изменением характера секрета, снижением или полным прекращением молокообразования. При этом пораженные доли были увеличены в объеме в 1,5-2 раза, плотной консистенции, болезненные, горячие на ощупь, кожа напряжена и гиперемирована, соски отечные. Через 2-3 суток в молоке появлялись хлопья. Общее состояние животного угнетенное, аппетит снижен, температура тела повышена до 40-41°С, пульс и дыхание учащены. Поверхностные паховые лимфатические узлы увеличены в объеме.

У 22,1% коров регистрировали эндометриты, метриты, аборты и мертворождения. Первые клинические признаки заболевания появлялись уже на третьи сутки после отёла, ухудшалось общее состояние. Животные были угнетены, снижался аппетит и молочная продуктивность. Коровы принимали позу для мочеиспускания, из половых путей выделялся слизи-сто-гнойный экссудат, который засыхал в виде грязно-серых скоплений на седалищных буграх, нижней части вульвы и хвосте. Слизистая оболочка шейки матки и влагалища были отёчны и гиперемированы.

Свиноматки (27,1%) перед опоросом, большую часть времени лежали, дыхание было затруднено. После опороса на вторые сутки регистрировали наличие выделений слизисто-гнойного характера из наружных половых путей, а также уплотнение и гиперемию молочных желез. Нередко отмечали агалактию, иногда развивался синдром ММА.

3.4.1. Гематологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота и свиней, клинически здоровых и спонтанно больных псевдомонозом животных.

При исследовании крови свиней, больных псевдомонозом (кишечная и респираторная формы), отмечали снижение эритроцитов до 4,92><1012/л (Р>0,001) при повышении лейкоцитов - до 20,1*109/л, в сравнении с показателями клинически здоровых животных.

Статистически достоверно увеличивался показатель СОЭ до 17,2 мм\ч (Р>0,001), а гемоглобин снижался до 77,6 (Р<0,05).

У коров ( при маститах и патологии репродуктивных органов) отмечали снижение количества эритроцитов до 3,63х1012/л, повышение лейкоцитов 16,4хЮ9/л (Р>0,001), статистически достоверно снижался цветной показатель до 0,49 (Р < 0,001) и гемоглобин до 90,5 г\л (Р>0,001); количество лимфоцитов увеличивалось до 87,1% (Р>0,001), моноцитов - до 8,17% (Р>0,001), а количество эозинофилов - в 1,6 раза (Р>0,001).

В лейкоцитарной формуле у свиней отмечали лимфоцитоз до 61,9 %, моноцитоз - до 5,97%, количество эозинофилов при этом возрастало в 1,5 раза (Р<0,001). Снижалось количество сегментоядерных нейтрофилов, а уровень палочкоядерных нейтрофилов увеличивался (Р>0,001).

Результаты биохимических исследований плазмы крови свиней, больных псевдомонозом, показали, что содержание общего белка у больных свиней ниже на 76,8%, чем у клинически здоровых животных. Также отмечали до 32,8% снижение альбумина; при этом количество альфа- и гамма-глобулинов увеличивалось до 23,3 и 29,6% соответственно (Р>0,001), а бета- глобулинов снижалось до 14,2% (Р<0,001).

При исследовании плазмы крови крупного рогатого скота установили снижение общего белка до 75,7% (Р>0,001), альбуминов до 26,9 % (Р>0,001) и бета глобулинов до 8,07%. В то время когда количество альфа-и гамма-глобулинов достоверно увеличивалось до 23,5 и 50,1 % соответственно (Р>0,001).

3.5. Методы лабораторной диагностики псевдомоноза сельскохозяйственных животных.

Для бактериологического исследования на выделение Pseudomonas aeruginosa в лабораторию необходимо направлять пробы: паренхиматозных органов (сердца, селезенки, печени, легких); тонкий кишечник павших животных; влагалищную слизь от животных с признаками поражения репродуктивной системы; молоко от животных с клиническими признаками мастита; пре-пуциальные смывы и сперму производителей; пробы фекалий от животных с симгггомокомплексом диареи; истечения из носовой полости от животных с клиническими признаками поражения дыхательной системы. Пробы с ограждающих металлических конструкций, кормушек и воды.

Анализ литературы показал, что в настоящее время в ветеринарной лабораторной практике для изоляции и идентификации возбудителя псевдомоноза используют простые среды (МПА, МПБ и среды Гисса), что затрудняет получение надежных и достоверных результатов. Проведенные нами исследования показали, что использование селективных сред и подобранных тестов на ок-сидазу, каталазу, утилизацию цитрата, утилизацию ацетата натрия, восстановление нитратов, роста на ацитамидном агаре, расщепление глюкозы и мочевины, способности роста при 42°С, образования пигментов, теста Грегерсена и определения подвижности позволяет усовершенствовать бактериологическую схему выделения и идентификацию Pseudomonas aeruginosa. С использованием разработанной нами схемой выделено и идентифицировано 316 культур Pseudomonas aeruginosa.

4. ВЫВОДЫ

1. Псевдомоноз широко распространен в хозяйствах Омской области, что подтверждается выделением возбудителя во всех исследованных географических зонах, как от больных животных (крупный рогатый скот 13,4%, свиньи 26,7%), так и из объектов окружающей среды (12,7%). При этом у крупного рогатого скота - отмечена осенняя, у свиней - летне-осенняя сезонность.

2. Псевдомоноз телят и поросят сопровождается диарейным симпто-мокомплексом (возбудитель выделен в 34,1% и 52,1% случаев) и патологией органов дыхания (22% и 39,2% случаев соответственно).

3. При патологии репродуктивной системы возбудитель выделен у коров в 16,1% и свиней в 27,3% случаев; при маститах коров - (13,4%) и пробах спермы хряков - (31,8%).

4. Выделенные культуры по культурально-морфологическим и биохимическим свойствам являются типичными представителями вида Pseudomonas aeruginosa. При этом 72,5% выделенных культур продуцировали пиоцианин, 8,9% - пиорубин; 7,9% - пиовердин; 5,06% - пиомеланин. Слабую пигментацию (или ее отсутствие) показало 5,7% культур. Значительная часть выделенных культур Pseudomonas aeruginosa (56,9 %) были патогенны для лабораторных животных; 51,8% обладали высокоадгезивными свойствами; 33,2% средней;13,9% низкой и 0,9% были неадгезивны.

5. Выделенные культуры Pseudomonas aeruginosa показали чувствительность к пиперациллину, тикарциллин\клавуанату, мезлоцилину; цев-тазидиму; имипенему, меропенему; гентамицину, тобрамицину, нетилми-цину амикацину; ципрофлоксацину и левофлоксацину. Резистентность к цефтизоксиму показали 52,2% культур, к цефотаксиму 13,3%, к цефтриак-сону17,1%.

6. Выделенные культуры Pseudomonas aeruginosa имеют колебания в составе ДНК (от 57,7 до 64,4% ГЦ пар), а также некоторые генотипиче-ские отличия в структуре генов 16S рибосомальной РНК (4- 9%) от культуры, представленной в международном банке NCBI, что приводит к изменению биологических свойств возбудителя.

7. Клинические признаки псевдомоноза протекают в трех основных формах: у молодняка - с поражением желудочно-кишечного тракта и респираторных органов, у взрослого поголовья с расстройством репродуктивной системы (эндометриты, маститы), а также в форме бессимптомного бактерионосительства (в виде угнетения половой активности, снижения объема эякулята).

8. Патоморфологически при кишечной форме псевдомоноза выявлены: спленомегалия, острый катаральный гастроэнтероколит, регионарный серозный лимфаденит, гепатоз, в ряде случаев гемаррагический диатез.

9. Респираторный псевдомоноз при остром процессе характеризовался гиперемией слизистых оболочек носовых ходов, увеличением селезенки, застойной гиперемией сосудов печени, почек и миокарда. При хроническом течении регистрировали катаральную бронхопневмонию, регионарный лимфаденит, очаговую эмфизему и отек лепсих.

10. Рекомендованная схема комплексной лабораторной диагностики псевдомоноза сельскохозяйственных животных позволяет повысить результативность и эффективность бактериологических исследований патологического материала и проб из объектов внешней среды, по сравнению с традиционными.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании результатов исследования разработаны и изданы методические рекомендации для специалистов ветеринарной службы «Методы диагностики псевдомоноза сельскохозяйственных животных» (утв. Ученым советом ИВМ ОмГАУ и ЦНО АПК при Министерстве сельского хозяйства и продовольствия Омской области, 2011 г.).

Материал, изложенный в диссертации, может быть использован при составлении соответствующих разделов учебников и руководств по ветеринарной микробиологии.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Захарченко, О.Н. Выделение и идентификация Pseudomonas aeruginosa у телят с диарейным симптомокомплексом / О.Н. Захарченко, В.И. Плешакова // Материалы 12 Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Вклад молодых ученых в реализацию приоритетного национального проекта «Развитие агропромышленного комплекса», 25-27 ноября 2008 г. - Троицк, 2008. - С. 32-33.

2. Захарченко, О.Н. Pseudomonas aeruginosa при репродуктивной патологии коров / О Н. Захарченко, В.И. Плешакова // Современный мир, природа и человек : сб. науч. трудов. - Томск, 2009. - С. 31-32.

3. Захарченко, О.Н. Биологические свойства культур синегнойной палочки, выделенных от животных в Омской области / О.Н. Захарченко, В.И. Плешакова // Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней животных и птиц: сб. науч. тр. Ведущих ученых России и Зарубежья. - Вып.З. - Екатеринбург, 2010. - С. 58-59.

4. Захарченко, О.Н. Клинические особенности и характер патоло-гоанатомнческих изменений при псевдомонозе сельскохозяйственных животных в Омской области / О.Н. Захарченко, В.Й. Плешакова // Аграрный вестник Урала. - № 1. - 2011. - С. 24-25.

5. Захарченко, О.Н. Распространение и биологические особенности культур Pseudomonas aeruginosa, выделенных от сельскохозяйственных животных в хозяйствах Омской области / О.Н. Захарченко, В.И. Плешакова II Ветеринария Кубани. - № 2. - 2011. - С. 21-22.

Подписано к печати 16.11.2011. Формат бумаги 60x84, 1/16. Печать оперативная. Гарнитура Times New Roman. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Отпечатано в редакционно - полиграфическом отделе Издательство ФГБОУ ВПО ОмГАУ имени П.А.Столыпина при институте ветеринарной медицины и биотехнологии 644122, г. Омск, Октябрьская, 92.

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Захарченко, Олеся Николаевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Этиологические и эпизоотологические особенности псевдомоноза.

1.2. Биологические свойства возбудителя псевдомоноза сельскохозяйственных животных.

1.2.1. Морфологические и культуральные свойства Pseudomonas aeruginosa.

1.2.2. Биохимические свойства Pseudomonas aeruginosa.

1.2.3. Чувствительность микроорганизма к химиотерапевтическим препаратам.

1.2.4. Патогенные свойства Pseudomonas aeruginosa.

1.2.5. Генотипические свойства Pseudomonas aeruginosa.

1.3. Особенности клинического проявления и характер патологоанато-мических изменений при псевдомонозе у разных видов животных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследований.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Эпизоотологические особенности псевдомоноза крупного рогатого скота и свиней на территории Омской области.

3.2. Этиологическая роль Pseudomonas aeruginosa при патологии сельскохозяйственных животных.

3.3. Биологические свойства выделенных культур Pseudomonas aeruginosa.

3.3.1. Культурально - морфологические свойства.

3.3.2. Биохимические свойства Pseudomonas aeruginosa.

3.3.3. Чувствительность выделенных культур Pseudomonas aeruginosa к химиотерапевтическим препаратам.

3.3.4. Патогенные свойства выделенных культур Pseudomonas aeruginosa и патоморфологические изменения в органах белых мышей при экспериментальном заражении.

3.3.5. Адгезивные свойства Pseudomonas aeruginosa.

3.3.6. Генотипические свойства культур Pseudomonas aeruginosa.

3.4. Клиническое проявление и паталогоанатомические изменения при спонтанном псевдомонозе крупного рогатого скота и свиней.

3.5. Методы лабораторной диагностики псевдомоноза сельскохозяйственных животных.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Эпизоотологические, клинико-патоморфологические особенности псевдомоноза свиней и крупного рогатого скота"

Актуальность темы. Исследованиями многих авторов доказано, что роль условно-патогенных микроорганизмов, в том числе Pseudomonas aeruginosa, в возникновении инфекционной патологии животных продолжает неуклонно возрастать (М. П. Васильев, 1976; А. К. Васильев, С. В. Пруцаков и др., 2006).

Pseudomonas aeruginosa, в настоящее время приобретает одну из ведущих ролей в развитии как местных, так и генерализованных гнойно-воспалительных процессов у сельскохозяйственных животных (А. Г. Шипицын, 1986; В. Т. Больных, 1987; А. К. Васильев, 2003; Е. В. Порт, 2004; Б. Ф. Шуляк, 2006; Lederberg Joshua et al., 2000).

В большинстве случаев при организации профилактических мероприятий не учитываются природно-климатические и хозяйственно-организационные аспекты, не проводится эпизоотологическое районированиє территорий по псевдомонозу сельскохозяйственных животных (С. В. Пруцаков, И. А Болоцкий, 2011).

Цель исследования: изучить эпизоотологические особенности, клини-ко-патологоанатомическое проявление псевдомоноза у свиней и крупного рогатого скота в хозяйствах Омской области и усовершенствовать методы диагностики.

Задачи исследования:

- определить основные биологические свойства выделенных культур Pseudomonas aeruginosa;

- установить особенности клинического проявления и характер патоло-гоанатомических изменений при спонтанном псевдомонозе у свиней и крупного рогатого скота;

- оптимизировать методы лабораторной диагностики псевдомоноза сельскохозяйственных животных.

Научная новизна. Получены новые данные о эпизоотологических особенностях псевдомоноза у свиней и крупного рогатого скота на территории Омской области, показано влияние эколого-географических факторов на основные показатели эпизоотического процесса. Проведено молекулярно-генетическое изучение нуклеотидного состава ДНК (моль % ГЦ) и анализ гена 16S рибосомальной РНК культур P.aeruginosa, выделенных от сельскохозяйственных животных и из объектов окружающей среды.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты эпизоотоло-гического обследования животноводческих хозяйств, свидетельствуют о сравнительно широком распространении псевдомоноза среди свиней и крупного рогатого скота. Полученные данные дополняют новой научной информацией вопросы этиологии и патогенеза псевдомоноза сельскохозяйственных животных. Сведения, полученные в результате клинических, бактериологических, гематологических, биохимических и патологоанатомических исследований, позволяют более эффективно проводить диагностику псевдомоноза у сельскохозяйственных животных.

Внедрение результатов исследований. Отдельные положения диссертационной работы используются при чтении лекций и проведении лабора-торно-практических занятий по курсу ветеринарной микробиологии, эпизоотологии на факультетах ветеринарной медицины Омского ГАУ имени

П. А. Столыпина, Башкирского ГАУ и Оренбургского ГАУ, Санкт-Петербургской ГАВМ.

Полученные данные учитываются при разработке системы диагностики и профилактики псевдомоноза свиней и крупного рогатого скота ветеринарной службой Омской области.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Захарченко, Олеся Николаевна

ВЫВОДЫ

4. Выделенные культуры по культурально-морфологическим и биохимическим свойствам являются типичными представителями вида Pseudomonas aeruginosa. При этом 72,5% выделенных культур продуцировали пиоциа-нин, 8,9% - пиорубин; 7,9% - пиовердин; 5,06% - пиомеланин. Слабую пигментацию (или ее отсутствие) показало 5,7% культур. Значительная часть выделенных культур Pseudomonas aeruginosa (56,9 %) были патогенны для лабораторных животных; 51,8% обладали высокоадгезивными свойствами; 33,2% средней;13,9% низкой и 0,9% были неадгезивны.

5. Выделенные культуры Pseudomonas aeruginosa показали чувствительность к пиперациллину, тикарциллин\клавуанату, мезлоцилину; цевтази-диму; имипенему, меропенему; гентамицину, тобрамицину, нетилмицину амикацину; ципрофлоксацину и левофлоксацину. Резистентность к цефти-зоксиму показали 52,2% культур, к цефотаксиму 13,3%, к цефтриаксо-ну17,1%.

6. Выделенные культуры Pseudomonas aeruginosa имеют колебания в составе ДНК (от 57,7 до 64,4% ГЦ пар), а также некоторые генотипические отличия в структуре генов 168 рибосомальной РНК (4-9%) от культуры, представленной в международном банке N031, что приводит к изменению биологических свойств возбудителя.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Установлены источники и пути распространения, а также эпизоотоло-гические особенности псевдомоноза сельскохозяйственных животных в Омской области. Сведения, полученные в результате эпизоотологических, клинических, бактериолоических, гематологических, биохимических и патоло-гоанатомических исследований, позволяют более надежно и быстро проводить диагностику псевдоманоза у сельскохозяйственных животных.

Материал, изложенный в диссертации, может быть использован при составлении соответствующих разделов учебников и руководств по микробиологии.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Захарченко, Олеся Николаевна, Омск

1. Абдель Раззак Р. А. Синегнойная палочка и ее фаги: автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.07 / Абдель Раззак Р. А. М., 1985. - 20 с.

2. Азямов М. А. Характеристика культур Pseudomonas aeruginosa, выделенных от быков-производителей и объектов внешней среды : автореф. Дис. канд. ветеринар, наук / М. А. Азямов ; Ленингр. ветеринар, ин-т. Л., 1988.- 17с.

3. Алтон Л. В. Выживаемость и адаптация некоторых штаммов рода Pseu- domonas в морской и речной воде / Л. В. Алтон // Микробиол. журнал. 1983.-Т. 45, №6. -С. 16-20.

4. Андреев Г. М. Лечение коров при остром послеродовом эндометрите / Г. М. Андреев, Н. И. Мирон // Ветеринария. 1986. - № 12. - С. 50-52.

5. Антигенные комплексы слизи Pseudomonas aeruginosa: выделение и некоторые биологические свойства / А. Д. Александров и др. // Журн. микробиологии. 1984. - № 1. - С. 14-19.

6. Антитела к токсину Pseudomonas aeruginosa в препаратах нормального иммуноглобулина человека / М. Н. Янишевская и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1983. - № 6. - С. 100-102.

7. Арутюнян С. И. Синегнойная палочка в носу / С. И. Арутюнян // Айболит. 2006. - 19 января.

8. Афонин Э. А. Разработка бактериологического метода выделения и идентификации P. aeruginosa: автореф. дис. канд. биол. наук / Э. А. Афонин. -Ульяновск, 1999.-18 с.

9. Бакулов И. А. Методические указания по эпизоотологическому исследованию / И. А. Бакулов, В. А. Ведерников, Г. Г. Юрков. Покров: б.и., 1982.-60 с.

10. Балашов Н. Г. Диагностика синегнойнои палочки в сперме животных и меры профилактики при ее обнаружении / Н. Г. Балашов, В. Н. Родина // Труды Гос. науч.-контр. ин-та ветеринар, препаратов. -М., 1971. Т. 17. - С. 337-342.

11. Басова Н. Ю. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота инфекционной этиологии в условиях Северного Кавказа : автореф. дис. д-ра ветеринар, наук : 03.06.02 / Н. Ю. Басова. Краснодар, 2002. - 44 с .

12. Беляков В. Д. Псевдомонады и псевдомонозы / В. Д. Беляков, JI. А. Ряпис, В. И. Илюхин. М.: Медицина, 1990. - 224 с.

13. Биоиндикация экологического состояния равнинных рек / под ред. О. В. Бухарина, Г. С. Розенберга. М.: Наука, 2007. - 403 с.

14. Больных А. Т. Псевдомонозы животных и их профилактика / А.Т. Больных, Е.А. Кирьянов, Н. В. Больных; под ред. Е. А. Кирьянова.- Владивосток: Дальневосточ. кн. изд-во, 1987. 432 с.

15. Бунаков А. П. Динамика адаптации культур Pseudomonas aeruginosa, выделенных от кур, к гентамицину / А. П. Бунаков // Сб. науч. работ / Jle-нингр. ветеринар, ин-т. — Л., 1983. Вып. 73. - С. 15-18.

16. Васильев А. К. Распространение псевдомоноза свиней в Краснодарском крае и воспроизведение заболевания на поросятах / А. К. Васильев // Актуальные проблемы инвазионных инфекций и незаразной патологии животных. Ставрополь, 2003. - С. 154-155.

17. Васильев М. П. Результат выделения Ps.aeruginosa из различных объектов внешней среды / М. П. Васильев, А. С. Доценко // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1976. - № 11. - С. 143-144.

18. Взаимодействие между естественной колонизацией и адгезией бактерий к эпителию у человека / А. Н. Маянский и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1987. - № 2. - С. 18-20.

19. Вопросы эпизоотологии псевдомоноза сельскохозяйственных животных / С. В. Пруцаков и др. // Ветеринария Кубани. 2010. - № 2. - С. 45.

20. Вопросы эпизоотологии псевдомоноза сельскохозяйственных животных в Краснодарском крае / Васильев. А.К. и др. // Материалы международной науч.-практ. конф. «Ветеринарная медицина 2005». - Харьков, 2005. - С. 198-202.

21. Гавриш В. Г. Препараты для лечения коров, больных эндометритом / В. Г. Гавриш // Ветеринария. 1986. - № 1. - С. 49-50.

22. Гвоздяк Р. И. Об особенностях патогенности Pseudomonas aeruginosa / Р. И. Гвоздяк, Л. М. Яковлева // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1987. - № 3. - С. 3-6

23. Гизатулина С. С. Изучение адгезивной способности грамотрица-тельных бактерий, выделенных от больных с диареями / С. С. Гизатулина, М. О. Биргер // Кишечные инфекции у детей / под ред. М. О. Биргера. Л., 1986.-С. 106-110.

24. Дзюбак С. Т. Влияние экзотоксина синегнойной палочки на проницаемость микроциркулярного русла органов и тканей в эксперименте / С. Т. Дзюбак // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1982.-№ 10.-29-33.

25. Дубровин И. И. Разработка, получение и применение поливалентной сыворотки против псевдомоноза животных : автореф. дис. канд. ветеринар. наук / И. И. Дубровин. Краснодар, 2007 . - 25 с.

26. Жиглов В. И. Изучение биологических свойств синегнойной палочки, выделенной при респираторных болезнях у телят / В. И. Жиглов, В. М. Петров, Г. П. Кулавский. Алма-Ата: б. и., 1983. - 239 с.

27. Иммунохимический анализ и протективные свойства компонентов слизи Pseudomonas aeraginosa с разной молекулярной массой / И. Г. Зайднер и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1981.- № 4. С. 92-97.

28. Злобина М. Ф. О влиянии условно-патогенной микрофлоры на воспроизводительную функцию коров / М. Ф. Злобина // Сиб. вестн. с.-х. науки.- 1979.-№6.-С. 97-99.

29. Зудилин В. А. Патоморфологические изменения репродуктивных органов у быков-псевдомононосителей / В. А. Зудилин, А. Г. Шипицын, Л. И. Коршунова// Бюл. ВИЭВ. 1980. - Вып. 38. - С. 42-44.

30. Зудилин В. А. Проницаемость плацентарного барьера для синегнойной палочки / В. А. Зудилин, Ф. П. Петрякин // Ветеринария. 1982. - №3.- С. 82-83.

31. Исаков М. А. Получение рекомбинантных атоксических форм экзотоксина А Pseudomonas aeruginosa и изучение их иммунобиологических свойств: автореф. дис канд. биол. наук: 03.02.03 / М. А. Исаков. М., 2010. -34 с.

32. К изучению псевдомоноза на племенных станциях / Г, К. Палий и др.. // Ветеринария. 1976. - № 12. - С. 64-67.

33. Калиниченко Н. Ф., Дьяченко В.Ф., Старобинец 3. Г. и др. // Експе-рим. i юин. медицина. 1999. - № 2. - Р. 61-62.

34. Карпухина JI. В., Мельникова У. Ю., Соболева Е. Ф., и др. // Микробиология. 1999. - Т. 68, № 4. - С. 445-447.

35. Кирилова Э. В. Характеристика штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных из спермы быков-производителей / Э. В. Кирилова, A. J1. Доб-рянская // Инфекционные и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных и птиц. М., 1984. - С. 27-29.

36. Кирьянов Е. А. Теория и практика предупреждения бесплодия животных / Е. А. Кирьянов, В. И. Коровко // Сб. науч. трудов / Приморский с.-х. ин-т. Уссурийск, 1984. - С. 91-92.

37. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии : справ, издание / Кондрахин И. П. и др.. М.: Агропромиздат, 1985. - 287 с.

38. Колычев Н. М. Зоопатогенные бактерии и меры борьбы с ними: монография / Н. М. Колычев, В. Г. Ощепков. Омск: Изд-во ОмГАУ, 2001. -632 с.

39. Кондратов Б. С. Синегнойная палочка и качество спермы / Б. С. Кондратов // Молочное и мясное скотоводство. 1975. - № 11. - С. 32-33.

40. Корж Б. А. Роль синегнойной палочки в патологии новорожденных телят / Б. А. Корж, Я. Д. Злонкевич, И. И. Гевкан // Ветеринария. 1990. - Т. 65.-С. 37-41.

41. Красильников А. П. Микробиологический словарь-справочник / А. П. Красильников, Т. Р. Романовская. Минск: Асар, 1999. - 310 с.

42. Лазарев С. В. Типирование возбудителя псевдомоноза пушных зверей / С. В. Лазарев, В. И. Уласов // Актуальные проблемы инфекционной патологии животных. Владимир, 2003. - С. 236-239.

43. Лакин Г. Ф. Биометрия: учебное пособие / Г.Ф. Лакин. М.: Высшая школа, 1990. - 293 с.

44. Лечение быков-псевдомононосителей / А. Н. Турченко и др. // Ветеринария. 1985. - № 6. - С. 47-48.

45. Литовченко П. П. Некоторые структурные элементы Paeudomonas aeruginosa по данным электронной микроскопии / П. П. Литовченко, Н. П. Чернобровый // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1981. -№ 7. 49-53.

46. Лопатина Н. Н. Псевдомоноз сельскохозяйственных животных / Н. Н. Лопатина // Ветеринария Кузбасса. № 45 (220). - С. 12.

47. Марченко Т. В. Биологические свойства Pseudomonas aeruginosa выделенной от животных, из кормов и объектов внешней среды в Краснодарском крае : автореф. дис. канд. ветеринар, наук / Т. В. Марченко. Краснодар, 2006.-23 с.

48. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов / В. И. Брилис и др. // Лаб. дело. 1986. - № 4. - С. 210-212.

49. Методические рекомендации по выделению и диагностике псевдомоноза сельскохозяйственных животных и птиц / ГУВ МСХ СССР № 432-3 от 14.11. 1988 г.

50. Методические рекомендации по подготовке препаратов для изучения степени адгезии микроорганизмов с клетками животных в световом исканирующем электронном микроскопе / И. Б. Павлова и др.. М., 1999. -15 с.

51. Методические указания по применению унифицированных биохимических методов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях / В. Т. Самохин и др.. М., 1981. - 26 с.

52. Микробиологические методы идентификации микробов рода Pseudomonas. Приказ № 535 от 22.04.85 г. «Об унификации микробиологических методов исследования, применяемых в КДЛ лечебно-профилактических учреждениях».

53. Митрохин С. Д. Значение синегнойной палочки в инфекционной патологии человека / С. Д. Митрохин // Инфекция и антимикробная терапия. 2004. - № 3, т. 6.-С. 46.

54. Михайлов Н. Н. К методике терапии быков при псевдомонозе / Н. Н. Михайлов, В. А. Зудилин // Ветеринария. 1975. - № 12. - С. 85-86.

55. Некоторые биологические свойства изолятов Pseudomonas aeruginosa, выделенных в хозяйствах Краснодарского края / С. В. Пруцаков и др.. // Ветеринария Кубани. 2010. - № 3. - С. 51-54.

56. Определитель бактерий Берджи: в 2 т. Т. 1. / под ред. Дж. Холта и др.. М.: Мир, 1997. - 432 с.

57. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий (аэробных и факультативно анаэробных) / пер. с англ. А. Н. Деминой и др..; Вейант Р. [и др.]. М.:Мир, 1999. - 791 с.

58. Определитель грамотрицательных потенциально патогенных бактерий возбудителей внутрибольничных инфекций: утв. 3 июня 1986 г. / М-во Здравоохранения РСФСР. - М., 1986. - 68 с.

59. Оценка этиологической роли синегнойной палочки в пренатальных потерях крупного рогатого скота / В. П. Радченков и др.. // Сельскохозяйственная биология. 1987. - № 1. - С. 32-35.

60. Парусов В. П. Обеззараживание спермы быков от синегнойной палочки / В. П. Парусов // Ветеринария. 1973. - № 11. - С. 77-78.

61. Патоморфологические изменения при псевдомонозе быков /

62. A. Г. Шипицын и др. // Ветеринария. 1984. - № 5. с. 24-31.

63. Плешакова В. И. Инфекционная патология мочеполовой системы и молочной железы бактериальной этироргии у свиней: монография /

64. B. И . Плешакова, Н. М. Колычев и др. Омск : Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2010.-380 с.

65. Ппещенко С. И. Повышение естественной резистентности организма животных основа профилактики болезней / С. И. Плещенко // Ветеринария. - 1992.-№ 6. - С. 49-50.

66. Порт Е. В. Адгезивні та колонізаційні властивості клінічно значущих штаммів Pseudomonas aeruginosa : автореф. дис. канд. мед. наук / Е. В. Порт. Харків, 2006. - 24 с.

67. Порт Е. В. Изучение адгезивных свойств штаммов синегнойной палочки / Е. В. Порт // Висн. Харк. нац. ун-ту. 2004. - № 639. - С. 24-31.

68. Псевдомоноз сельскохозяйственных животных в Краснодарском крае / А. К. Васильев и др. // Ветеринария. 2008. - № 12. - С. 20-23.

69. Псевдомоноз свиней в Краснодарском крае / ПруцаковС. В. и др.. // Ветеринария. 2002. - № 12. - С. 12-14.

70. Псевдомоноз свиней в Краснодарском крае / С. В. Пруцаков и др.. // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2005. - № 5. - С. 27-29.

71. Распространение и клиническое проявление псевдомоноза у крупного рогатого скота и свиней в Краснодарском крае / В. И. Терехов и др. // Труды / Куб. гос. аграр. ун-т, 2004.- Вып. 406 (434). С. 45-50.

72. Распространение псевдомоноза свиней и специфическая терапия заболевания Текст. / А. К. Васильев [и др.] // Свиноводство. 2007. - № 3. - С. 34-35.

73. Рекомендации по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам / А. В. Скориков и др.. Краснодар, 2005. - 26 с.

74. Рождественская Т. Н. Биологические свойства возбудителя псевдомоноза птиц / Т. Н. Рождественская // Ветеринария. 2005. - № 3. - С. 29-30.

75. Роль условно-патогенной микрофлоры в патологии размножения свиней / И. П. Ралка и др.. // Вестник ветеринарии. 1998. - № 9 (3). - С. 2729.

76. Савкова М. Г. Морфологические, культурально-биохимические и патогенные свойства полевых штаммов синегнойной палочки / М. Г. Савкова // Ветеринария Сибири. 2004. - № 11. - С. 38-39.

77. Середин В. А. Биометрическая обработка опытных данных в ветеринарной медицине / В. А. Середин // Вестник ветеринарии. 2001. - № 18. -С. 79.

78. Сидоров М. А. Грамотрицательные аэробные палочки и кокки / М. А. Сидоров, Д. И. Скородумов, В. Б. Федотов // Определитель зоопато-генных микроорганизмов. М., 1995. - С. 161-169.

79. Скориков А. В. Особенности ассоциативного выделения синегнойной палочки у свиней и крупного рогатого скота / А. В. Скориков, В. И. Терехов // Ветеринарный врач. 2004. - № 3-4. - С. 43-46.

80. Скориков А. В. Распространение и клинические проявления псев-домоноза у крупного рогатого скота и свиней в Краснодарском крае / А. В. Скориков, В. И. Терехов, Т. В. Ермакова // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2006. - № 4. - С. 45-46.

81. Совершенствование специфической профилактики и лечения псев-домоноза нутрий / А. А. Шевченко и др. // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Краснодар, 2009. - № 1, ч. 1. - С. 125-126.

82. Станиславский Е. С. Вирулентность и антигены Pseudomonas aeruginosa / Е. С. Станиславский, И. И. Колкер // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1978. - № 7. - С. 16-23.

83. Терехов В. И. Адгезивные и антибиотические свойства Pseudomonas aeruginosa / В. И. Терехов // Ветеринария. 1995. - № 6. - С 33-34.

84. Турова Т. П. Применение методов геносистематики для решения вопросов таксономии и изучения биоразнообразия прокариот: дис. в виде науч. докл. . д-ра биол. наук : 03.00.07 / Т. П. Турова. М., 2009. - 254 с.

85. Уласов В. И. Еще раз о псевдомонозе животных / В. И. Уласов, С. В. Кириллов, С. В. Лазарев // Ветеринарный консультант. 2008. - № 19. -С. 13-14.

86. Фармакотерапия при псевдомонозе свиней / И. А. Болоцкий и др. // Актуальные проблемы производства свинины в Российской Федерации / Дон. гос. аграр. ун-т. Персиановка, 2004. - С. 116-117.

87. Фармакотерапия свиней при псевдомонозе / И. А. Болоцкий и др. // Ветеринарный консультант. 2008. - № 19. - С. 14.

88. Фортушный В. А. Антибактериальные препараты при остром течении пневмонии / В. А. Фортушный // Ветеринария. 1982. - № 10. - С. 50.

89. Шаронин С. А. Патоморфологические изменения при псевдомонозе у телят / С. А. Шаронин // Диагностика и профилактика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. Воронеж, 1990.- С. 46-48.

90. Шаронин С. А. Характеристика культур синегнойной палочки, выделенных из патологического материала от телят и из спермы быков / С. А. Шаронин // Диагностика и профилактика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. Воронеж, 1990. - С. 42-45.

91. Шевцов Ф. Огромный вред от крошечной бактерии / Ф. Шевцов // Животноводство России. 2006. - № 11. - С. 29-30.

92. Шестаков А. Г. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas aeruginosa: автореф. дис. канд. биол. наук / А. Г. Шестаков. Саратов, 2010. - 29 с.

93. Шипицын А. Г. Изучение роли синегнойной палочки, выделяемой при диспепсиях телят / А. Г. Шипицын, В. И. Терехов, Н. Ю. Басова // Ветеринария. 1986. - № 12. - С. 36-37.

94. Шипицын А. Г. Изучение роли условно-патогенной микрофлоры в патологии размножения крупного рогатого скота и усовершенствование этиотропной терапии при эндометритах у коров: дис. канд. ветеринар, наук / А. Г. Шипицын. Краснодар, 1981. - 218 с.

95. Шипицын А. Г. Эксперементальные исследования по искусственному осеменению телок контаминированной микробами спермой быков производителей / А. Г. Шипицын // Сб. трудов Кубанского с.-х. ин-та. Краснодар, 1979. - Вып. 175(203). - С. 235-239.

96. Шуляк Б. Ф. Вот такая сине - зеленая! / Б. Ф. Шуляк // Практик. -2006.-№ 11/12.-С. 86-91.

97. Экзотоксин А Pseudomonas aeruginosa и его роль в патогенезе синегнойной инфекции / Ю. В. Вертиев, Н. С. Бродинова, А. Ф. Мороз // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1981. - № 2. - С . 13-19.

98. Эпизоотология при псевдомонозе сельскохозяйтвенных животных в Краснодарском крае / А. К. Васильев и др. // Материалы Всероссийской науч.-практ. Конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии.-Казань, 2002.-Ч. 1.-С. 12-13.

99. Эпизоотология псевдомоноза свиней / А. К. Васильев и др. // Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях: материалы междунар. конф., посвящ. 60-летию ГНУ Краснодарский НИВИ. Краснодар, 2006.-С. 119-121.

100. Эффективность гипериммунной поливалентной сыворотки против псевдомоноза свиней / В. А. Антипов и др. // Труды Кубанского государственного аграрного университета. Краснодар, 2009. - № 1 (4.1). - С. 13-14.

101. Этиология тяжелых госпитальных инфекций в отделениях реанимации и антибиотикорезистентность среди их возбудителей / С. В. Сидоренко и др.. // Антибиотики и химиотерапия. 2005. - Т. 50, № 2-3. - С. 33-41.

102. Appleton А. К. Pathohen and indicator orgaiamdestriction by the dual digeation system / Appleton A. K. Leong, C. J. Venosa A. D. // J. Water, pollut. Contr. Fed. 1986.- V. 10. - P. 992-999.

103. Au outbreak of Pseudomonas mastitis in dairy cavs / Osborne A. et al. // Canad. Vet. J. -1981. V. 22, № 7. - P. 215-217.

104. Based assay for differentiation of Pseudomonas aeruginosa from other Pseudomonas species recovered from cystic fibrosis patients / Spilker T. et al. // J. Clin. Microbial. 2004. - V. 42(5). - P. 2074 - 2079.

105. Bathelor M, Knutton S, Caprioli A., et al. // J. Clin. Microbiol. 1999. -№37(12).-P. 3822-3827.

106. Bellet S. Diatnbution of Ps. Aeruginosa in a revine exosystem / Bellet S„ Bigley D.V., Grimek D. J. // App. Microbiol. 1983. - V. 45, № 1. - P. 328332.

107. Bergan Т. Human and animal- pathogenic members of the genus Pseudomonas / Т. Bergan // Prokariotes. -1981.- V. 1. P. 666-700.

108. Botzenhardt K. Ecology and epidemiology of Pseudomonas aeruginosa / Botzenhardt K. and Döring G. // Pseudomonas aeruginosa as an Opportunistic Pathogen. New York, 1993. - P. 1-18.

109. Boyd A. Role of alginate lyase in cell detachment of Pseudomonas aeruginosa / Boyd A., Chakrabarty A. M. // Environ. Microbiol. 1994. - V. 60. - P. 2355-2359.

110. Bukowicz E. Wystepowanie drobnoustrojav warunkowochorobot-worcrchw mrozonym nasienju buhajow / Bukowicz E. // Med.wet. 1987. - T. 43, № 7. - 425-428.

111. Carrol S. F. Local homology within the active aites of diphtheria toxin and Pseudomonas aeruginosa exotoxin A / Carrol S. F., Gollier K. J. // J. Cell. Bi-ochem. 1987. - V. 11.-P. 123.

112. Costerton J. W. The role of bacterial surface structures in pathogenesis / Costerton J. W., Irvin R.T., Cheng K. J. // Crit. Rev. Microbiol. 1981. - № 4. - P. 303-338.

113. Costerton W. Pseudomonas aeruginosa : the Microbe and Pathogen / Costerton W. and Anwar H. // Pseudomonas aeruginosa Infections and Treatment. -New York, 1994.-P. 1-17.

114. Davies I. H. Вспышка некротического дерматита и отита среднего уха, вызванная синегнойной палочкой, после погружения овец в ванну с диа3HH0H0M / Davies I. H., Done S. H. // Veter. Ree. 1993. - V. 132, № 18. - P. 460-461.

115. Delden C. Cell. to. cell signaling and Pseudomonas aeruginosa infections / Delden C., Iglewski B. // Emerg. Infect. Dis. 1998. - V. 4 (4). - P. 551560.

116. Evaluation P. aeruginosa exotoxin A and elastase as virulence factors in acute lung infection / Blackwood L. et al. // Infect. Immune. 1983. - V. 39. -P. 198-201.

117. Evans L. R. Production and characterization of Pseudomonas aeruginosa / Evans L. R., Linker A. // J. Bacteriol. 1973. - № 116. - P. 915-924.

118. Frank D. Exoenzyme S regulation of P. Aeruginosa / Frank D. // Mol. Microbiol. 1997. - V. 26. - P. 621-629.

119. Garg D. N. Pseudomonas aeruginosa associated equine abortion, mare infertiling and foal mortaliti / Garg D. N., Manchanda V. P., Chandirmani N. K. // Indian. J. Anim. Sc. V. 53, № 1. - P. 36-40.

120. Habez H. M. Pseudomonas aeruginosa infektionen bli Putenkuken und Behandlungaversuche mit apramycin / Habez H. M., Woernle H., Heil C. // Berlin, und Much, tierarztl. Wochenschr. 1987. - Bd. 100, № 2. - S. 48-51.

121. Iglewaki B. H. NAD-dependent inhibition of protein ayntheasis by Pseudomonas aeruginosa exotoxin A / Iglewaki B. H., Kabat D. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1975. - № 72. - P. 2284-2288.

122. Impact of empiric antibiotic therapy on outcomes in patients with Pseudomonas aeruginosa bacteremia / Osih R. B. et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 2007. - V. 51(3).-P. 839-844.

123. Inhibitory effects of bovine lactoferrin on the adherence of enterotoxigenic Escherichia coli to host cells (In process sitation) / Kawasaki Y. et al. // Biosci-Biotechnol-Biochem. 2000. - № 64(2). - P. 348-354.

124. Incidence of exotoxin production by Pseudomonas aeruginosa / Bjorn M. J. et. al. // Infect, and Immum. 1977. - V. 16. - P. 362-366.

125. Intracellular targeting of exoenzyme S of P. aeruginosa via type III -dependent translocation / Frithz-Lindsten E. et al. // Mol. Microbiol. 1997. - V. 25.-P. 1125-1139.

126. Irvin R.T. Immunochemical examition of the Pseudomonas aeruginosa glycocalyx : a monoclonal antibody which recognises 1-guluronic acid residues of alginic acid / Irvin R.T., Ceri H. // Can. J. Microbiol. 1985. - № 31. - P. 268-275.

127. Isolation, characterization, antibiotic sensitivity and aeruginocine typing of Pseudomonas aeruginosa from animals and poultry / Dholakia P. M. et al. // Indian. Vet. J. 1985. - V. 62, № 3. - P. 263-264.

128. Kielwein G. // Hand bakt. Inf. Tieren. Jena, 1981. - BD3. - P. 75-110.

129. Liu P.V. The roles of various fractions of Pseudomonas aeruginosa in ist pathogenesis. П. Effect of lecithinasae and proteasae / P.V. Liu // J. Infect.-Dis.-1966.-P. 112-116.

130. Lutz F. Cytotoxyc protein from Pseudomonas aeruginosa: formation of hydrophilic pores in ahrlich asitec and effect of cell vibility / Lutz F., Maurer M., Failing К. // Toxicon. 1987. - V. 25, № 3. - P. 293-305.

131. Lysenko A. M. Characteristics of the Thermus genus genome / Lysenko A. M., Bogdanova Т. I. // Microbiol. 1996. - V. 55, № 3. - P. 522-524.

132. Marmur J. A procedure for the isolation of deoxyribonucleic acid from microorganisms / Marmur J. //J. Mol. Biol. 1961. - V. 3. - P. 208-218.

133. Mc Eachran D.W. Adhesion of Pseudomonas aeruginosa to human buccal epithelial cells: evidence for two classes of receptors / Mc Eachran D.W., Irvin R.T. // Can. J. Microbiol. 1985. - № 31. - P. 563-563.

134. Modulation of host cell membrane fluidity: a novel machanism for preventing bacterial adhesion / Ismaili A. et al. // Am. J. Physiol. 1999. - № 277. -P. G201-G208.

135. Nosocomial infections in medical intensive care units in the United States. National Nosocomial Infections Surveillance System / Richards M. J. et al. // Crit. Care Med. 1999. - V. 27(5). - P. 887-892.

136. Novakowski W. Wartosci biologiczne na-sienia buhajow zawierajacego toksyny gronkavcow oraz paleczek ropy blekit-nej / Novakowski W., Furowicz A., Wierzbowski S. // Piodn. i nieplodn. zwier.domav. 1986. - Cz. 12. - S. 311-316.

137. Pavlovskis O. R. Pseudomonas aeruginosa exotoxin in mice: Localization and effect on protein synthesis / O. R. Pavlovskis, A. N. Shackelford // Infect. Immun. 1974.- V. 9, № 3.- P. 540-546.

138. Physlogeny of the genus Pseudomonas : intrageneric structure reconstructed from the nucleotide sequences of gyrB and rpoD genes / Yamamoto S. et al. // Microbiol. 2000. -V. 146. - P. 2385.

139. Pier G. B. Immunj chemical characterization of mucoid exopolsaxxha-ride of Pseudomonas aeruginosa / Pier G.B., Matthews W.J., Fardley D.D. // J. Infect. Dis. 1983. - № 147. - P. 494-503.

140. Pollack M. L. Toxicity of Pseudomonas aeruginosa Exotoxin A for Human Macrophages / M. L. Pollack, S. E. Anderson // Inf. and Immun. 1978. -V. 19, №3.-P. 1092-1096.

141. Pollack M. The virulence of Pseudomonas aeruginosa / Pollack M. // Rev. Infect. Dis. -1984, № 6 (Suppl). S. 617-626.

142. Population structure of Pseudomonas aeruginosa / Wiehlmann L. et al. // Preceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2007. - V. 104. - P. 8101-8106.

143. Prescott J. F. Antimicrobial drug susceptibility of bacteria isolated from disease processes in cattle, horses, doga and cats / Prescott J. F., Gannon V. H., Kittler G. G. // Canad. Vet. J. 1984. - V. 25, № 7. - P. 289-292.

144. Production of exoanzyme S during Pseudomonas aeruginosa infections of durned mice / Björn M. J. et al. // Infect. Indian. 1979. - № 24. - P. 837-842.

145. Pseudomonas aeruginosa bacteremia: risk factors for mortality and influence of delayed receipt of effective antimicrobial therapy on clinical outcome / Kang C. I. et al. // Clin. Infect. Dis. 2003. - V. 37. - P. 745-751.

146. Pseudomonas: Encyclopedia of Microbiology / Lederberg Joshua et al. -Second Edition.- San Diego, 2000. -V. 3. P. 876-891.

147. Pseudomonas aeruginosa bloodstream infection: importance of appropriate initial antimicrobial treatment / Micek S.T. et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 2005. - V. 49. - P. 1306-1311.

148. Pseudomonas aeruginosa exoensyme S: an adenosine diphosphate ribo-syltranaferase distiot from toxin A / Iglewski B. H. et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1978. - № 75. - P. 3211-3215.

149. Pseudomonas aeruginosa: resistance and therapeutic options at the turn of the new millennium / Mesaros N. et al. // Clin. Microbiol. Infect. 2007. -V. 13.-P. 560-578.

150. Rabaey K. Microbial Fuel Cells: novel biotechnology for enegy generation / Rabaey K. and Verstraete W. // TrendS in Biotechnology. 2005. V. - 23. -P. 34.

151. Ramphai R. Adherence of mucoid and nonmucoid Pseudomonas aeruginosa to acid-injured tracheal ehithelium / Ramphai R., Pyle M. // Infect. Immun. 1983.-V. 41, №4.-p. 345-351.

152. Reuben R. Pseudomonas aeruginosa adhesins for tracheobronchial mucin / Reuben R., Colleen G., Gerald B. // Infect. Immun. 1987. - V. 55, № 3. - P. 600-603.

153. Report of the ad hoc committee for the réévaluation of the species definition in bacteriology / Stackebrandt E. et al. // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. -2002. V. 52. - P. 1043-1047.

154. Rhame F. S. The Ecology and Epidemiology of Pseudomonas aeruginosa / Rhame F.S. // Pseudomonas aerugenosa / Ed. by L. D. Sabath. Bern, 1980. -P.31.

155. Role of salivary protease activity in adherence of gram-negative bacilli to mammalian buccal epithelial cells in vivo / Woods D. E. et al. // J. Clin. In-vect. 1981. - V. 68, № 7. - P. 1435-1440.

156. Role of exoenzyme S in chronic Pseudomonas aeruginosa lung infections / Nicas N. I. et al. // Europ J. din. Microbiol. 1985. - V. 4. - P. 175-179.

157. Soto Gabriel E., H. Scott // J. Bacteriol. 1999. - № 4. - P. 1059-1071.

158. Stackebrandt E. Taxonomic parameters revisited: tarnished gold standards / Stackebrandt E, Ebers J. // Microbiol. 2006. - V. 33. - P. 152-155.

159. Stewart P. S. Antibiotic tolerance in biofilms and its role in persistent ifections / Stewart P. S. // 11th International cogress on infectious diseases. Can-cun, 2004. - On dick.

160. Type III protein secretion is associated with death in lower respiratory and systemic Pseudomonas aeruginosa infections / Roy-Burman A. et al. // J. Infect. Dis.-2001.-V. 183. P. 1767-1774.

161. Type III protein secretion is associated with poor clinical outcomes in patients with ventilator-associated pneumonia caused by Pseudomonas aeruginosa / Hauser A. R. et al. //Crit. Care Med. 2002. - V. 30 (3). - P. 521-528.

162. Weiss H.-E. Лечение кератоконъюнктивитов, вызванных синегной-ной палочкой, у лошадей и собак с помощью аутовакцины / Weiss Н.-Е. // Tierarztl. Umsch. 1998. - Jg. 53, № 4. - S. 200-202.

163. Wesam A. Hassanein Molecular Identification of Antibiotics Resistant Pseudomonas Aeruginosa Wt / Wesam A. // Australian Journal of Basic and Applied Sciences. 2009. - V. 3(3). - P. 2144-2153.

164. Woods D. E. Toxins of Pseudomonas aeruginosa new perspectives / Woods D. E., Iglewski B. H. // Rev. Infect. Dis. 1983. - V. 5, № 4. - P. 715-722.

Информация о работе

Захарченко, Олеся Николаевна
кандидата ветеринарных наук
Омск, 2011
ВАК 06.02.02

Диссертация

Эпизоотологические, клинико-патоморфологические особенности псевдомоноза свиней и крупного рогатого скота - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы