Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Лечебно-профилактическая эффективность Антибака при аэромонозе, псевдомонозе и флексибактериозе рыб

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Лечебно-профилактическая эффективность Антибака при аэромонозе, псевдомонозе и флексибактериозе рыб"

На правах рукописи

о6-

005011832

ГОНЧАРОВА Маргарита Николаевна

Лечебно-профилактическая эффективность Антибака при аэромонозе, псевдомонозе и флексибактернозе рыб

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

12 т? ш

Москва-2012

005011832

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» (ФГБОУ ВПО МГАВМиБ).

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, доцент

Грищенко Леонид Иванович

Официальные оппоненты: Сидорчук Александр Андреевич

доктор ветеринарных наук, профессор, . зав. кафедрой эпизоотологии и инфекционных болезней ФГБОУ ВПО МГАВМиБ;

Смирнова Ирина Робертовна доктор ветеринарных наук, профессор кафедры ветеринарно-санитарноЙ экспертизы ФГБОУ ВПО МГУПП

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко» (ВИЭВ).

Защита состоится — 2012 г. в часов на заседании

диссертационного совета Д 220.642.01 при ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» по адресу: 109472, Москва, ул! Академика Скрябина, 23; тел. (495) 37793-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО МГАВМиБ.

Автореферат разослан г. и размещен на сайте ВАК

РФ: http://www.vak.ed.gov.ru ' "

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Т.Н. Грязнева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одним из факторов, сдерживающих развитие аквакультуры, являются инфекционные болезни. Из них широко распространены и наносят большой ущерб в прудовых и индустриальных рыбоводных хозяйствах РФ такие бактериальные заболевания, как аэромоноз и псевдомоноз карпов, миксобактериоз форели и осетровых рыб (П.П. Головин и др. 1998; H.A. Яременко, А.Н. Мачнев, 2000). Борьба с данными болезнями до сих пор остается весьма актуальной проблемой современного рыбоводства. Несмотря на принимаемые меры, включающие широкое применение антибиотиков, нитрофурановых, сульфаниламидных и других лекарственных средств, эпизоотическая обстановка по ним улучшилась незначительно. Это связано не только с недостаточной комплексностью проводимых оздоровительных мероприятий, но и со снижением лечебной эффективности длительно применявшихся препаратов в результате появления резистентных форм патогенных штаммов возбудителей болезней (Н. Shlotfeldt, 1985). Поэтому существует необходимость периодического обновления их ассортимента за счет новых химиотерапевтических средств. К числу наиболее активных препаратов в отношении бактериальных патогенов рыб относится ципрофлоксацин из группы фторхинолонов (J.F.M. Nouws, J.L. Grandel, 1988; R. Palmer et al., 1992). Анализ литературных данных показал, что в отличие от человека и тепло1фовных животных его взаимодействие с организмом рыб практически не изучено. Исходя из этого, актуальным и перспективным является определение основных фармакологических свойств Антибака (д. в. ципрофлоксацин), а также его лечебной эффективности в условиях прудовых и тепловодных рыбоводных хозяйств при бактериальных болезнях рыб различных видов.

Цель и задачи исследований. Цель работы - изучить фармакологические свойства лечебного препарата Антибак и определить перспективы его использования при аэромонозе и псевдомонозе карпов, флексибактериозе форели и осетровых рыб.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию в рыбхозах Московской и Рязанской областей по аэромонозу, псевдомонозу и флексибактериозу и оценить перспективы применения в них препарата Антибак.

2. Определить чувствительность к препарату возбудителей аэромоноза, псевдомоноза и флексибактериоза, выделенных от больных рыб.

3. Изучить особенности фармакокинетики ципрофлоксацина в организме карпов при разных способах введения препарата, определить дозы и схемы применения Антибака.

4. Установить лечебно-профилактическую эффективность основных форм препарата при разных способах его введения в организм карпов.

5. Определить токсические свойства препарата.

6. Провести производственные испытания Антибака при аэромонозе карпов и флексибактериозе молоди форели и осетровых.

7. Разработать научно обоснованные рекомендации по применению Антибака при аэромонозе, псевдомонозе и флексибактериозе рыб.

Научная новизна. Впервые дано научное обоснование использования ципрофлоксацина - действующего вещества препаратов группы Антибак для борьбы с бактериальными болезнями рыб. В экспериментальных и производственных условиях установлена антибактериальная активность, изучены особенности фармакокинетики, токсические свойства препарата, определены терапевтические дозы и схемы его применения. На этой основе доказана высокая лечебно-профилактическая эффективность и безопасность применения Антибака 100 и Антибака 500 при аэромонозе, псевдомонозе и флексибактериозе прудовых рыб.

Практическая значимость. Результаты работы позволили рекомендовать Антибак для лечения и профилактики аэромоноза, псевдомоноза карпов и флексибактериоза форели и осетров. Предложены оптимальные дозы и схемы применения препарата при разных способах введения в организм рыб. Результаты научных исследований включены в Наставление по применению препарата Антибак при бактериальных болезнях рыб (2004 г.), в Инструкции по применению Антибака 100 и Антибака 500 для лечения и профилактики болезней бактериальной этиологии товарных рыб (2007 г.), а также в Рекомендации по

борьбе с аэромонозом, псевдомонозом и миксобакгериозами рыб с использованием препаратов Антибак (2007 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 статей, из которых 3 в журналах, рекомендованных ВАК.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на Всероссийских научно-практических конференциях «Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов» (п. Борок Ярославской области, 2003, 2007); на Международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2004); на 3-й конференции по учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва,

2006); на совместном заседании Научно-консультативного совета по болезням рыб ФГУ «Межведомственная ихтиологическая комиссия» и Секции патологии рыб и охраны гидробионтов Отделения ветеринарной медицины РАСХН (Москва, 2006), на заседании научно-методической комиссии ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва,

2007).

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 173 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практического использования полученных результатов, рекомендаций по использованию научных выводов, списка использованной литературы и приложений. Работа содержит 24 таблицы, 23 рисунка и 18 страниц приложений. Список литературы включает 255 источников, в том числе 136 иностранных.

Положения, выносимые на защиту:

1. Лечебная и профилактическая эффективность препаратов группы Антибак при аэромонозе, псевдомонозе и флексибакгериозе рыб и безопасность применения их в рыбоводстве.

2. Особенности фармакокинетики ципрофлоксацина в организме рыб.

3. Терапевтические и безопасные дозы и концентрации Антибака, схемы его применения при бактериальных болезнях рыб.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в 2002 - 2009 г.г. на кафедре пчеловодства, рыбоводства, болезней пчел и рыб ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, в ЗАО «Рыбхоз Клинский», в ООО «Русская рыбалка», в рыболовно-спортивном комплексе «Ромашково» (Московская область), в Новомичуринском рыбхозе (Рязанская область).

В лабораторных опытах использовали 865 сеголеток карпа. Производственная проверка проведена на 411000 двух-, трех- и четырехлетках карпа, 20000 сеголетках радужной форели, 15000 мальках и сеголетках сибирского осетра.

Для бактериологических исследований использовали 178 рыб из неблагополучных по аэромонозу прудовых хозяйств - ЗАО «Рыбхоз Клинский» и

000 «Русская рыбалка», по псевдомонозу из рыболовно-спортивного комплекса «Ромашково» (Московская обл.), по флексибактериозу из тепловодного хозяйства -Новомичуринского рыбхоза (Рязанская обл.). При аэромонозе и псевдомонозе отбирали карпов с признаками острого, подострого и хронического течения болезней. При флексибактериозе отбирали форель и сибирского осетра с характерными поражениями кожи и жабр.

Эпизоотологические обследования и бактериологические исследования проводили в «Рыбхозе Клинский» с июня по сентябрь 2002 года с периодичностью

1 раз в 14 дней в нагульных прудах.

В Новомичуринском рыбхозе проводили комплексные исследования по диагностике флексибактериоза среди сеголеток форели, мальков и сеголеток сибирского осетра в марте, апреле, мае и в октябре 2003 г.

В качестве испытуемых лекарственных средств использовали лекарственные формы Антибака, изготовленные в НВЦ «Агроветзащита»: Антибак 100 (100 мг/г д. в. ципрофлоксацина гидрохлорида моногидрата) для перорального введения и растворимый в воде Антибак 500 (500 мг/г д. в. ципрофлоксацина лакгата) для внутрибрюшинного введения и обработки рыб наружно в растворах препарата.

Выделение возбудителей болезней и их идентификацию проводили по схеме, принятой в ихтиопатологии (В.А. Мусселиус и др., 1983; Сб. инстр. по борьбе с бол. рыб, 1998; Л.И. Грищенко и др., 1999). Для типирования бактерий использовали таблицы и схемы, изложенные в официальных руководствах по

определению бактерий (Определитель бактерий Берджи, 1997; М.А. Сидоров и др., 1995; В.И. Покровский и др., 1999).

Патогенность выделенных культур определяли в биопробах на сеголетках карпа массой 25 - 30 г.

Чувствительность аэромонад, псевдомонад и флексибактерий к антибактериальным препаратам in vitro определяли методами диффузии в агар и серийных разведений.

Изучение фармакокинетики ципрофлоксацина в организме карпа проводили методом диффузии в агар (B.C. Дмитриева, С.М. Семенов, 1965; М.О. Биргер и др., 1973). В качестве тест-микроба использовали штамм Bacillus subtilis АТСС 6633, полученный в ФГБУ «ВГНКИ».

При изучении острой токсичности препарата при пероральном, внутрибрюшинном введении и содержании рыб в растворах определяли абсолютно смертельные, средние летальные и максимально переносимые дозы и концентрации препарата. Среднесмертельные дозы и концентрации рассчитывали по Керберу.

Лечебно-профилактическую эффективность Антибака в лабораторных условиях определяли по развитию клинических признаков, выживаемости рыб, а также на основании бактериологических и гематологических исследований. В опытные и контрольные группы брали не менее 10 экз. рыб, наблюдение за которыми вели в течение 10 дней.

Гематологические показатели изучали общепринятыми методами. Изучение гемограммы и оценку качественных изменений клеток крови проводили по Н.Т. Ивановой (1983) и Л.Д. Житеневой (1989). Гистологические исследования проводили общепринятыми методами, парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином.

Количественные показатели результатов исследований подвергали вариационно-статистическому анализу с использованием программного обеспечения PC Microsoft Excel 2003. Достоверность различий оценивали на основании критерия Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Эпизоотическая ситуация в рыбхозах Московской и Рязанской областей по аэромонозу, псевдомонозу и флексибактериозу

Согласно ветеринарной отчетности «Рыбхоз Клинский» с 1989 года является

неблагополучным по аэромонозу карпов, оздоровление его проводится комплексным методом. Однако из-за неполноты проводимых мероприятий, а также экономических трудностей хозяйство до. сих пор не оздоровлено. Заболевание в основном проявляется в латентной форме и протекает подостро или хронически, не вызывая массовой гибели рыб.

В начале мая 2002 года заболеваемость карпов аэромонозом в нагульных прудах Яузского, Владимирского и Дятловского участков составляла 2 - 8%. С целью профилактики острой вспышки болезни в хозяйстве проведены плановые мероприятия с применением субалина с кормом, а также внесением по воде препарата ДОН-1, гипохлорита кальция и негашеной извести. Однако снижения заболеваемости карпов отмечено не было, а в июне-июле в некоторых прудах она возросла до 30% и более.

При клинико-анатомическом исследовании было установлено, что аэромоноз у карпов протекал в основном хронически с наличием на теле рыб точечных или пятнистых кровоизлияний, гиперемии анального кольца, а также язв на боковых стенках и хвостовом стебле. У отдельных особей наблюдали признаки острого течения болезни - очаговое ерошение чешуи и асцит.

В ходе 6-ти кратных бактериологических исследований с июня по август от данных карпов выделена в основном смешанная микрофлора, среди которой ведущее место занимали вирулентные и авирулентные аэромонады - Aeromonas hydrophila, А. sobria, А. veronii, и в меньшем количестве случаев выделялись бактерии родов Pseudomonas, Acinetobacter, Alcaligenes, Flavobacterium, Flexibacter, Plesiomonas, Enterobacter и редко E.coli. На основании этих исследований было подтверждено неблагополучие рыбхоза по аэромонозу карпов.

В 2002 г. в ООО «Русская рыбалка» нами выявлен неблагополучный по аэромонозу карпов водоем, предназначенный для любительской рыбной ловли. По анамнестическим данным установлено, что причиной появления болезни явился завоз и смешанная посадка карпов из разных благополучных и неблагополучных по аэромонозу хозяйств. При бактериологических исследованиях патматериала в

течение 3-х летних сезонов в хозяйстве выделялись высоковирулентные культуры A. sobria.

В мае 2004 г. зафиксирована вспышка псевдомоноза в рыболовно-спортивном комплексе «Ромашково» после завоза товарного карпа из неблагополучного рыбхоза. Диагноз подтвержден выделением высоковирулентной культуры псевдомонад.

В «Новомичуринском» рыбхозе согласно документальным данным флексибактериоз был зарегистрирован в 1998 году у сеголеток карпа. Затем с 1999 г. заболевание начало проявляться на форели, сибирском осетре, стерляди, белуге и гибридах осетровых рыбах, сопровождалось гибелью молоди до 30 - 50%.

За период обследований с марта по октябрь 2003 г. нами были установлены две вспышки флексибактериоза: в марте - среди сеголеток форели (заболеваемость около 2%), в мае-июне - среди мальков и сеголеток сибирского осетра (заболеваемость от 2 до 8%). Заболевание проявлялось характерными признаками: кровоизлияниями, язвами, серо-белыми пятнами и очагами некроза на коже и жабрах и сопровождалось гибелью рыб. Кроме выделения основного возбудителя болезни - бактерий рода Flexibacter, обнаружено носительство бактерий других родов: Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, которые осложняли течение флексибактериоза.

Чувствительность возбудителей аэромоноза, псевдомоноза и флексибактериоза к ципрофлоксацину

При оценке антибактериальной активности различных препаратов in vitro

установлено, что аэромонады, выделенные от карпов из «Рыбхоза Клинский» были наиболее чувствительны к ципрофлоксацину (зона задержки роста 22 - 28 мм), несколько менее чувствительны к тетрациклину (20 - 24 мм) и левомицетину (19 -27 мм), но устойчивы к гентамицину (12 - 14 мм) и стрептомицину (0-11 мм).

По сравнению с другими фторхинолоновыми препаратами энрофлоксацином и норфлоксацином ципрофлоксацин также показал наиболее высокую активность и в отношении псевдомонад (зона задержки роста 19 мм).

Диапазоны минимальной . подавляющей концентрации (МПК) ципрофлоксацина для аэромонад составили 0,01 - 0,16 мкг/мл, для псевдомонад -0,08 - 0,32 мкг/мл, а бактерицидной концентрации для аэромонад - 0,08 - 1,25 мкг/мл, для псевдомонад - 0,63 - 1,25 мкг/мл.

По данным ВНИИПРХ флексибактерии также оказались более чувствительны к ципрофлоксацину (МПК - 0,17 мкг/мл), чем к нифурпиринолу (МПК - 5 мкг/мл) и окситетрацшслину (МПК - 200 мкг/мл).

Фармакокинетика Антибака в организме карпов Результаты изучения распределения и сроков выведения Антибака из органов рыб при разных способах его введения представлены в табл. 1.

При однократном пероральном введении через зонд суспензии Антибака 100 в дозе 20 и 100 мг/кг (по д. в.) живой массы установлено, что он достаточно быстро всасывается из кишечника, распределяется по всем органам, через 2-5 часов достигает максимальных концентраций в крови, паренхиматозных органах (печени,

Таблица 1. Результаты изучения фармакокинетики Антибака в организме карпов (п = 10)

Форма препарата Виды и возраст рыб Методы введения, дозы, д. в. Максимальное содержание препарата, мкг/г/мл Сроки выведения из мускулатуры, сут,

кровь внутренние органы мышцы

Антибак 100 карпы (0+) внутрь 20,100 мг/кг 1,45-2,6 2,6 - 4,8 0,5-2,3 10

Антибак 500 карпы (0+) внутрибрюшинно, 2,5; 5,0; 10 мг/кг 2,6-6,8 2,3-7,5 0-0,7 7

Антибак 500 карпы (0+) через воду, 25 мг/л следы 2,6 - 3,5 0,7-2,6 3

почках, селезенке) и в меньшем количестве в мышцах. Максимальная биодоступность составила 13%. При дозе 100мг/кг в крови он удерживается до 72 часов, а в мышцах - до 10 суток, период полувыведения в среднем составил 19 часов. После введения дозы 20 мг/кг (по д. в.) массы рыб внутрь через 24 часа в крови препарат не обнаруживался, в мышцах улавливали только его следы, а полностью из организма он выводился через 3 суток.

При однократной обработке рыб в течение 5 часов в растворе Антибака 500 с концентрацией 25 мг/л (д.в.) максимального уровня в паренхиматозных органах, мышцах и кишечнике он достигал через 1 - 5 ч. В крови в течение всей обработки улавливались лишь следы препарата. После пересадки рыб в чистую воду в

мышцах препарат не обнаруживался уже через 2 часа, а в паренхиматозных органах и кишечнике он удерживался не более 3-х суток. При ежедневной обработке рыб с экспозицией 5 часов в течение 5 суток подряд распределение и количество препарата в организмах оказалось таким же, как и при однократной обработке, накопления его не происходило. Срок полного выведения Антибака после пересадки рыб в чистую воду, независимо от кратности обработки, составил

3 суток.

При однократном внутрибрюшинном введении Антибака 500 в дозах (по д. в.): 2,5; 5; 10 мг/кг массы рыб наибольшая концентрация препарата обнаруживалась во внутренних органах и в крови через 1 час после введения. Через

4 часа количество препарата снижалось в 2 - 3 раза, через 24 часа при дозах 2,5 и 5 мг/кг он обнаруживался только во внутренних органах (0,62 - 0,8 мкг/г), при дозе 10 мг/кг в крови и внутренних органах содержался на уровне 1,3 - 2,9 мкг/г, в мышцах 0,62 мкг/г. После введения всех испытуемых доз период его полувыведения из плазмы крови составил около 4 часов. Полностью препарат выводился из организма всех подопытных рыб через 7 суток.

Таким образом, при внутрибрюшинном применении по сравнению с другими способами введения Антибак быстрее проникал, распределялся по всем органам и достигал концентраций, превосходящих бактерицидные в несколько раз, обладал наибольшей биодоступностью (68 - 100%).

Токсичность Антибака Токсичность препарата определяли при пероральном и внутрибрюшинном введении чистого ципрофлоксацина сеголеткам карпа и при обработке мальков сибирского осетра в растворе Антибака 250 (табл. 2).

Таблица 2. Параметры токсичности ципрофлоксацина для подопытных рыб (п= 6)_

Виды и возраст рыб Методы введения Параметры токсичности по д. в., мг/кг, мг/л

ЛДо/Жо ЛД5о/ЛК5о ЛДюо/Жюо

карпы (0+) внутрь 2000 мг/кг 2417 мг/кг 3000 мг/кг

карпы (0+) внутрибрюшинно 500 мг/кг 950 мг/кг 1500 мг/кг

осетры (0+) обработка в растворах 100 мг/л 350 мг/л 500 мг/л

Как видно из таблицы ципрофлоксацин относится к малотоксичным для рыб веществам. Максимально переносимая доза (ЛД0) ципрофлоксацина при пероральном введении превышала терапевтическую в 20 - 100 раз, при внутрибрюшинном - в 50 -100 раз, при обработке в растворах (ЛКо) - в 4 раза.

Лечебно-профилактическая эффективность Антибака при экспериментальном аэромонозе и псевдомонозе

С целью определения профилактической эффективности Антибака

проведено 3 опыта с использованием разных методов введения препарата (перорально, внутрибрюшинно, осмотически через воду) по общей схеме. Вначале рыб обрабатывали препаратами в разных дозах, а затем их заражали возбудителями аэромоноза или псевдомоноза.

Опыт I с применением перорального введения препарата проведен в 2-х вариантах. В первом варианте опыта Антибак 100 вводили однократно с помощью зонда в дозах (по д. в.): 20 мг/кг; 50 мг/кг; 100 мг/кг. Затем через 5 часов, когда концентрация ципрофлоксацина в организме достигала максимального уровня, рыб заразили вирулентной культурой A. sobria в дозе 200 млн. м. т. Длительность опыта составила 9 суток. Результаты представлены в табл. 3.

Таблица 3. Заболеваемость и гибель сеголеток карпа при заражении _A. sobria после введения Антибака 100 (п = 10)_

№ Дозы, Клиническое Время после заражения

группы мг/кг д. в. проявление (%) 1 сут. 3 сут. 9 сут.

1. 20 Здоровые 0 0 20

Больные 100 80 60

Погибшие 0 20 0

2. 50 Здоровые 20 0 40

Больные 80 100 60

Погибшие 0 0 0

3. 100 Здоровые 60 60 60

Больные 40 40 40

Погибшие 0 0 0

4. Контроль Здоровые 16,7 16,7 16,7

(п= 12) Больные 83,3 33,3 0

Погибшие 0 50 83,3

Как видно из таблицы в данном случае наиболее эффективными оказались дозы 50 и 100 мг/кг. У рыб, получивших наименьшую дозу Ангибака (20 мг/кг), клинические признаки проявлялись быстрее, были более выражены (асцит,

покраснение и выпячивание анального кольца), а также отмечалась гибель части рыб (20%).

Во втором варианте опыта Антибак 100 скармливали в составе лечебного комбикорма 5 дней подряд в суточной дозе 50 мг/кг (по д. в.). Контрольных рыб кормили обычным комбикормом без препарата. Заражения опытных и контрольных рыб вирулентной культурой А. sobria в дозе 200 млн. м. т. проводили через 1, 9, 23 и 45 суток после последнего кормления лечебным кормом. В контрольной группе у 75 - 100% рыб наблюдали явно выраженные признаки аэромоноза, и в целом гибель составила 83,3%. Среди подопытных рыб гибель не наблюдалась, у заболевших рыб клиническая картина была более сглажена, и происходило их постепенное выздоровление. Результаты последовательных 4-х кратных заражений показали, что устойчивость рыб к заражению аэромонозом сохранялась более 45 дней. При изучении лейкограммы подопытных рыб установлено только увеличение процента нейтрофилов (в 1,5 раза), а у не обработанных препаратом зараженных той же культурой рыб отмечали значительную нейтрофилию (увеличение процента нейтрофилов в 4,9 раза), моноцитоз (увеличение процента моноцитов в 2,6 раза) и небольшое снижение процента лимфоцитов (на 6,7%). Таким образом, у рыб, обработанных препаратом в терапевтических дозах, существенных изменений в крови не выявлено. При этом после 5-ти кратного скармливания Антибака 100 установлена достаточно высокая устойчивость рыб к заражению возбудителем аэромоноза.

Опыт II. В опыте определяли профилактическое действие Антибака 500 при внугрибрюшинном введении препарата в дозах (по д. в.): 2,5; 5 и 10 мг/кг массы рыб и последующем их заражении вирулентными культурами псевдомонад и аэромонад.

В первой серии опытов применяли культуру Pseudomonas sp., которой подопытных рыб заражали в количестве 100 млн. м. т. 4 раза: через 1 час, на 7,13 и 20-е сутки после введения препарата. В итоге среднее количество погибших рыб во всех опытных группах в ходе 4-х заражений в расчете на 1 заражение различалось незначительно и оказалось ниже контроля в среднем на 60,4%. Устойчивость к возбудителю псевдомоноза сохранялась более 27 суток.

Аналогичный опыт был поставлен с использованием А. sobria, которой заражали рыб однократно в дозе 200 млн. м. т. через 1 час после введения Антибака 500. При этом в опытных группах гибели не отмечалось, а в контрольной она составила 83 %.

Использование обеих культур показало, что у выживших подопытных рыб через 3-7 суток выраженные симптомы аэромоноза и псевдомоноза исчезали, и происходило излечивание болезней. На основании этих результатов сделан вывод, что эффективной терапевтической дозой при внутрибрюшинном введении Антибака 500 следует считать 5 -10 мг/кг массы рыб.

Опыт III. В данном опыте проводили профилактическую обработку сеголеток карпа в растворе Антибака 500 с концентрацией 25 мг/л по д. в. в течение 5 часов однократно. После этого одну группу заразили вирулентной культурой А. sobria, а другую - Pseudomonas sp. в дозах 200 млн. м. т. Длительность наблюдений составила 10 суток. В результате в обоих случаях получен незначительный профилактический эффект, который выражался в том, что в опытных группах гибель рыб наступала на 1 сутки позже, чем в контрольной.

Таким образом, обработка рыб в растворе Антибака 500 с концентрацией 25 мг/л показала наименьшую эффективность по сравнению с другими способами применения препарата.

Производственные испытания Антибака при аэромонозе и флексибактериозе

С целью подтверждения терапевтической эффективности Антибака 100 при

аэромонозе карпов был поставлен производственный опыт в нагульных прудах ЗАО «Рыбхоз Клинский». Испытывали 2 схемы применения препарата в составе лечебного корма: в дозах 0,25 и 0,5 г/кг (25 - 50 мг/кг д. в.) массы рыб. Так, в первом случае при 3-х дневном курсе дачи Антибака 100 с лечебно-профилактической целью в дозе 0,25 г/кг ихтиомассы установлено существенное снижение заболеваемости рыб аэромонозом (с 26 - 30% до 6,1 - 8%). При этом не отмечено повторной вспышки болезни в течение летнего сезона, но согласно бактериологическим исследованиям не была обеспечена полная деконтаминация организма рыб от патогенных аэромонад. В то же время, при 5-тикратном применении препарата в дозе 0,5 г/кг получен более высокий лечебный и профилактический эффект: до обработки заболеваемость карпов составляла 35,2%,

а после лечебного кормления клинические признаки заболевания отсутствовали. В результате не отмечено рецидива заболевания в течение нагульного сезона и достигнута деконтаминация рыб от патогенной микрофлоры. В то же время в контрольных прудах заболеваемость рыб не снизилась.

В рыбхозе «Новомичуринский» для лечения флексибактериоза молоди форели и сибирского осетра поставлено 2 опыта применения препарата.

Опыт М1 проведен в бассейнах инкубационного цеха при температуре воды 12°С на сеголетках форели. Опытной группе в количестве 20 тыс. штук (200 кг) задавали с кормом Антибак 100 в дозе 500 мг/кг массы рыб в течение 5 дней подряд и параллельно однократно провели обработку рыб раствором хлорамина в концентрации 60 г/м3 с экспозицией 60 мин. Через 10-15 дней после обработки Антибаком гибель рыб полностью прекратилась, клинические признаки заболевания исчезли, и в течение всего периода летнего выращивания у обработанной рыбы рецидива болезни не отмечено.

Опыт №2 поставлен на мальках и сеголетках сибирского осетра в лотках при температуре воды 20 - 22°С с целью определения сравнительной эффективности Антибака и тетрациклина при флексибактериозе. Наиболее высоким лечебным действием обладал Антибак 100 в дозе 1 г/кг (100 мг/кг по д. в.) в сочетании с обработкой в растворе Антибака 250 с концентрацией 20 г/м3 и экспозицией 40 - 60 мин. 5 дней подряд, а также в сочетании с обработкой хлорамином (60 г/м3) 10 дней подряд С экспозицией 60 мин. В первом случае лечебная эффективность обработки составила 81,2%, а во втором - 100%. При применении тетрациклина с кормом в дозе 70 мг/кг в сочетании с хлораминовыми ваннами в течение 10 дней получены сходные результаты. Следовательно, Антибак выгодно отличается от тетрациклина за счет меньшей кратности применения.

Экономическая эффективность применения Антибака в рыбоводстве Экономическая эффективность применения Антибака при аэромонозе карпов рассчитывалась на основании результатов производственных опытов (табл. 4).

Таблица 4. Экономическая эффективность применения

препа рата Антибак 100

Показатели Опыт Контроль

Рыбопродуктивность, ц/га 11,6 7,0

Количество рыб, шт./га 2500 2000

Средняя масса 1 экз., г 464 350

Стоимость 1 кг рыбы 112 руб. 112 руб.

Стоимость рыбы (с 1 га пруда) 129920 руб. 78400 руб.

Количество препарата (на 1 га), кг 2,9 -

Стоимость израсходованного препарата (на 1 га) 3126,2 руб. -

Прибыль (с 1 га) 44645 руб. -

Таким образом, использование Антибака с лечебно-профилактической целью экономически выгодно.

ВЫВОДЫ

1. В стационарном неблагополучном по аэромонозу карпов рыбхозе «Клинский» заболеваемость рыб по разным прудам колебалась от 2 до 30 %, гибели рыб не отмечено. Заболевание протекало в основном хронически, только у единичных рыб отмечены признаки острого течения болезни. Основной причиной длительного неблагополучия хозяйства является не полное проведение оздоровительных мероприятий, в частности, применение мало эффективных лечебных препаратов.

2. Псевдомоноз карпов и флексибактериоз форели и осетра отмечены в виде спорадических вспышек. Псевдомоноз установлен в рыболовно-спортивном комплексе «Ромашково» у товарного карпа при температуре воды 12°С после завоза рыбы из неблагополучного рыбхоза. Заболеваемость и гибель составляла 11,1 %. Вспышки флексибактериоза наблюдались в стационарно неблагополучном рыбхозе «Новомичуринский» среди молоди форели ранней весной при температуре воды 10 - 12°С и сибирского осетра в мае-июне при температуре 20 -25°С. Заболеваемость форели составляла около 2 %, осетров 2 - 8 % и сопровождалась частичной гибелью рыб.

3. В неблагополучных по аэромонозу прудовых хозяйствах нами изолирована смешанная микрофлора, из которой ведущее место занимали бактерии рода Aeromonas: вирулентные культуры А. hydrophila, А. sobria. В ассоциации с ними в разных соотношениях выделялись бактерии родов Pseudomonas,

Acinetobacter, Alcaligenes, Flavobacterium, Flexibacter, Plesiomonas, Enterobacter, осложняющие течение болезни.

4. Наиболее эффективным средством при аэромонозе, псевдомонозе и флексибактериозе оказались Антибак 100 и Антибак 500, действующим веществом которых является ципрофлоксацин. Минимальная подавляющая концентрация ципрофлоксацина для аэромонад составила 0,01 - 0,16 мкг/мл, для псевдомонад -0,08 - 0,32 мкг/мл, для флексибактерий - 0,17 - 0,33 мкг/мл.

5. Фармакокинетика Антибака в организме рыб имеет ряд особенностей и в большой степени зависит от его формы и способов введения препаратов. При внутрибрюшинном введении и обработке в растворе максимальное количество ципрофлоксацина в крови и внутренних органах карпов обнаруживается через 1 -3 часа, при пероральном введении - через 2-5 часов. Биодоступность Антибака 500 при внутрибрюшинном введении составляет 68 - 100 %, а Антибака 100 при пероральном введении - около 13 %.

6. Сроки выведения Антибака из организма карпов составили: при пероральном применении - 10 суток, при внутрибрюшинном - 7 суток, при перкутанном - 3 суток. Товарную рыбу следует допускать в пищу не ранее, чем через 7-10 дней после применения препаратов.

7. Оптимальными дозами, обеспечивающими лечебно-профилактический эффект, составили: для Антибака 100 50 - 100 мг/кг по д. в., для Антибака 500 при внутрибрюшинном введении - 5 - 10 мг/кг (по д. в.) массы рыб, а при осмотическом поступлении из водных растворов - 25 мг/л (по д. в.). Курс лечебно-профилактических обработок с лечебной целью составляет 5 суток, с профилактической - 3 суток.

8. В производственных условиях лечебно-профилактическая эффективность Антибака при аэромонозе карпов составила 66,1 - 100 %, а при флексибактериозе сибирского осетра - 81,2 -100 %.

9. Антибак относится к группе малотоксичных для рыб веществ: ЛДл) (по д. в.) при пероральном введении составляет для карпов 2417 мг/кг, при внутрибрюшинном введении - 950 мг/кг, ЛК50 (по д. в.) при обработке осетров в растворе - 350 мг/л. Максимально переносимые дозы и концентрации превышают терапевтические в 20 - 100 раз. В терапевтических дозах он не вызывает

патологических изменений в гематологическом статусе и гистологической структуре органов рыб.

Практическое использование полученных результатов

Материалы исследований использованы при составлении: Наставления по применению препарата Антибак при бактериальных болезнях рыб (утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 26.03.2004), Инструкций по применению Антибака 100 и Антибака 500 для лечения и профилактики болезней бактериальной этиологии товарных рыб (утверждены Россельхознадзором 20.02.2007), Рекомендаций по борьбе с аэромонозом, псевдомонозом и миксобактериозами рыб с использованием препаратов Антибак (одобрены Департаментом ветеринарии и животноводства МСХ РФ, 2007).

Результаты исследований используются в учебном процессе в ФГБОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплине «Биология и патология рыб».

Рекомендации по использованию научных выводов

1. Для лечения аэромоноза, псевдомоноза и флексибактериоза рекомендуется применять Антибак 100 методом групповой обработки путем добавления препарата в гранулированные или тестообразные корма в дозе 0,5 - 1 г/кг массы рыб в течение 3-5 дней подряд в зависимости от тяжести болезни, а для профилактики этих заболеваний - в дозе 0,2 г/кг массы рыб 3 дня подряд весной только в стационарно неблагополучных хозяйствах.

2. С целью индивидуальной обработки ремонтно-маточного стада и особо ценных видов рыб рекомендуется вводить Антибак 500 внутрибрюшинно в дозах (по д. в.): для лечения аэромоноза рыб - 5 мг/кг, а для лечения псевдомоноза - 10 мг/кг массы рыб.

3. Для обработки рыб в ваннах при флексибактериозе и псевдомонозе рекомендуется применять раствор Антибака 500 в концентрации 20 - 25 г/м3 в сочетании со скармливанием Антибака 100 с комбикормом в дозе 0,5 - 1 г/кг массы рыб 5 дней подряд.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гончарова М.Н., Грищенко Л.И. Антибак - новый препарат при геморрагической септицемии карпов // Ветеринарный консультант. - 2003. - № 8 (56). - С. 16.

2. Гончарова М.Н., Енгашев В.Г. Фармакокинетика фторхинолонов в организме рыб // Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов: Сб. тезисов докл. Всерос. науч.-практ. конф. - М.: Россельхозакадемия. - 2003. - С. 33 - 35.

3. Грищенко Л.И., Гончарова М.Н. Эпизоотология и меры борьбы с флексибактериозами рыб с применением препарата антибак // Матер. Междунар. учебно-методич. и науч.-практ. конф. - М.: МГАВМ и Б. - 2004. - Ч. 1. - С. 319 -322.

4. Гончарова М.Н., Грищенко Л.И. Фармакокинетика и профилактическая эффективность ципрофлоксацина при бактериальных болезнях карпов // Матер. 3-й. конф. по учебно-воспит. и науч.-практич. работе. - М.: МГАВМ и Б. - 2006. - С. 51-54.

5. Лечение миксобактериозов рыб / Гаврилин К.В., Гончарова М.Н., Грищенко Л.И., Енгашев В.Г. // Рыбоводство. - 2006. - № 2. - С. 34 - 35.

6. Гончарова М.Н., Грищенко Л.И. Лечебно-профилактическая эффективность и безопасность применения ципрофлоксацина при бактериальных болезнях карпов // Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов - 2: Матер. Междунар. науч.-практич. конф. - М.: Россельхозакадемия. - 2007. - С. 499 - 500.

7. Гончарова М.Н. Антимикробный препарат для лечения бактериальных болезней рыб // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2009. -№2.-С.77-78.

8. Гончарова М.Н., Грищенко Л.И. Экспериментальное обоснование применения препарата «Антибак» для борьбы с бактериальными болезнями рыб // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. - 2009. - № 3. -С. 42-43.

9. Гончарова М.Н., Грищенко Л.И. Изучение токсичности ципрофлоксацина в опытах на сеголетках карпа // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. - 2012. - № 1. - С. 25 - 27.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 26.09.2000 г. Подписано в печать 20.02.2012 г. Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,0 Печать авторефератов (495)730-47-74,778-45-60

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Гончарова, Маргарита Николаевна, Москва

61 12-16/79

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

На правах рукописи

Гончарова Маргарита Николаевна

ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ АНТИБАКА ПРИ АЭРОМОНОЗЕ, ПСЕВДОМОНОЗЕ И ФЛЕКСИБАКТЕРИОЗЕ РЫБ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, доцент

Л.И. Грищенко

Москва-2012

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение.................................................................................... ^

I. Обзор литературы......................................................................................................................................7

1. Особенности эпизоотологии бактериальных болезней рыб..........................7

1.1. Аэромоноз карповых рыб........................................................................................................7

1.2. Псевдомонозы..................................................................

1.3. Миксобактериозы...............................................................

2. Применение и эффективность антибактериальных препаратов

при бактериальных болезнях рыб..................................................................................24

3. Препараты фторхинолонового ряда и их характеристика..........................31

3.1. Применение фторхинолонов при бактериальных

болезнях сельскохозяйственных животных и рыб..........................................37

II. Собственные исследования.......................................................................................................43

1. Материал и методы исследований....................................................................................43

2. Результаты собственных исследований..............................................................54

2.1. Эпизоотическая ситуация в рыбхозах Московской и Рязанской областей по аэромонозу, псевдомонозу

и флексибактериозу............................................................54

2.2. Выделение микроорганизмов и чувствительность

аэромонад, псевдомонад, флексибактерий к фторхинолонам..............66

2.3. Фармакокинетика ципрофлоксацина в организме карпов....................71

2.3.1. Пероральное введение.........................................................................................71

2.3.2. Обработка в растворе......................................................................................73

2.3.3. Внутрибрюшинное введение........................................................................76

2.4. Лечебная эффективность Антибака..............................................................................79

2.5. Профилактическая эффективность Антибака......................................................82

2.5.1. Пероральное введение Антибака 100....................................................................82

2.5.2. Внутрибрюшинное введение Антибака 500......................................................89

2.5.3. Обработка в растворе Антибака 500..................................................................93

2.6. Определение токсичности Антибака... ................................................95

2.6.1. Внутрибрюшинное введение ципрофлоксацина.................... 95

2.6.2. Пероральное введение ципрофлоксацина............................ 98

2.6.3. Обработка в растворе Антибака 250................................... 103

2.7. Производственные испытания лечебно-

профилактической эффективности Антибака......................... 104

2.7.1. Производственное испытание Антибака 100 при

104

аэромонозе карпов...........................................................

2.7.2. Производственное испытание Антибака 100 и Антибака

250 при флексибактериозе форели и сибирского осетра............ 108

2.8. Экономическая эффективность от применения

Антибака 100................................................................. Ш

3. Обсуждение полученных результатов.................................. 114

III. Выводы........................................................................... 126

IV. Практическое использование полученных результатов.............. 128

V. Рекомендации по использованию полученных результатов.......... 128

VI. Список литературы........................................................ •••■ 129

VII. Приложения....................................................................

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Одним из факторов, сдерживающих развитие аквакультуры, являются инфекционные болезни. Из них широко распространены и наносят большой ущерб в прудовых и индустриальных рыбоводных хозяйствах различных регионов РФ такие бактериальные заболевания, как аэромоноз и псевдомоноз карпов, миксобактериоз форели и осетровых рыб (П. П. Головин и др. 1998; Н. А. Яременко, А. Н. Мачнев, 2000). Борьба с данными болезнями до сих пор остается весьма актуальной проблемой современного рыбоводства. Несмотря на принимаемые меры, включающие широкое применение антибиотиков, нитрофурановых, сульфаниламидных и других лекарственных средств, эпизоотическая обстановка по ним улучшилась незначительно. Это связано не только с недостаточной комплексностью проводимых оздоровительных мероприятий, но и со снижением лечебной эффективности длительно применявшихся препаратов в результате появления резистентных форм патогенных штаммов возбудителей болезней (Н. Shlotfeldt, 1985). Поэтому существует необходимость периодического обновления их ассортимента за счет новых химиотерапевтических средств. К числу наиболее активных препаратов в отношении бактериальных патогенов рыб относится ципрофлоксацин из группы фторхинолонов (J.F.M. Nouws, J.L. Grandel, 1988; R. Palmer et al., 1992). Однако анализ литературных данных показал, что в отличие от человека и теплокровных животных его взаимодействие с организмом рыб практически не изучено. Исходя из этого наиболее актуальным и перспективным является определение основных фармакологических свойств ципрофлоксацина, а также его лечебной эффективности в условиях прудовых и тепловодных рыбоводных хозяйств при бактериальных болезнях рыб различных видов.

Цель и задачи исследований. Цель работы - изучить фармакологические свойства лечебного препарата Антибак и определить перспективы его использования при аэромонозе и псевдомонозе карпов, флексибактериозе форели и осетровых рыб.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить эпизоотическую ситуацию в рыбхозах Московской и Рязанской областей по аэромонозу, псевдомонозу и флексибактериозу и оценить перспективы применения в них препарата Антибак.

2. Определить чувствительность к препарату возбудителей аэромоноза, псевдомоноза и флексибактериоза, выделенных от больных рыб.

3. Изучить особенности фармакокинетики ципрофлоксацина в организме карпов при разных способах введения препарата, определить дозы и схемы применения Антибака.

4. Установить лечебно-профилактическую эффективность основных форм препарата при разных способах его введения в организм карпов.

5. Определить токсические свойства препарата.

6. Провести производственные испытания Антибака при аэромонозе карпов и флексибактериозе молоди форели и осетровых.

7. Разработать научно обоснованные рекомендации по применению Антибака при аэромонозе, псевдомонозе и флексибактериозе рыб.

Научная новизна. Впервые дано научное обоснование использования ципрофлоксацина - действующего вещества препаратов группы Антибак для борьбы с бактериальными болезнями рыб. В экспериментальных и производственных условиях установлена антибактериальная активность, изучены особенности фармакокинетики, токсические свойства препарата, определены терапевтические дозы и схемы его применения. На этой основе доказана высокая лечебно-профилактическая эффективность и безопасность применения Антибака 100 и Антибака 500 при аэромонозе, псевдомонозе и флексибактериозе прудовых рыб.

Практическая значимость. Результаты работы позволили рекомендовать Антибак для лечения и профилактики аэромоноза, псевдомоноза карпов и флексибактериоза форели и осетров. Предложены оптимальные дозы и схемы применения препарата при разных способах введения в организм рыб. Результаты научных исследований включены в Наставление по применению препарата Антибак при бактериальных болезнях рыб (2004 г.), в Инструкции по применению Антибака 100 и Антибака 500 для лечения и профилактики болезней бактериальной этиологии товарных рыб (2007 г.), а также в Рекомендации по борьбе с аэромонозом, псевдомонозом и миксобактериозами рыб с использованием препаратов Антибак (2007 г.).

Положения, выносимые на защиту:

1. Лечебная и профилактическая эффективность препаратов группы Антибак при аэромонозе, псевдомонозе и флексибактериозе рыб и безопасность применения их в рыбоводстве.

2. Особенности фармакокинетики ципрофлоксацина в организме рыб.

3. Терапевтические и безопасные дозы и концентрации Антибака, схемы его применения при бактериальных болезнях рыб.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Особенности эпизоотологии бактериальных болезней рыб

Бактериальные болезни рыб являются одним из основных факторов, сдерживающих развитие рыбоводства. Из них наиболее распространены такие заболевания, как аэромоноз (краснуха) и псевдомонозы карповых рыб, фурункулез лососевых, миксобактериозы. В список карантинных и особо опасных болезней рыб внесены аэромонозы карповых и лососевых, миксобактериозы лососевых и осетровых (Приказ Минсельхоза России №173 от 29.09.2005 г.).

Несмотря на то, что в настоящее время в РФ показатели распространенности инфекционных болезней рыб по сравнению с инвазионными относительно невысоки (31%), ущерб от них весьма значительный. Так, по данным ветеринарной отчетности практически не уменьшается количество неблагополучных пунктов по аэромонозу карпов и фурункулезу лососевых, эпизодически проявляются вспышки псевдомоноза, сформировались природные очаги некоторых заболеваний (H.A. Яременко, А.Н. Мачнев, 2000; H.A. Яременко, В.В. Селиверстов, 2003; Г.М. Павлович, Г.М. Хотева, 2005). 1.1. Аэромоноз карповых рыб

Аэромоноз (краснуха карпов, геморрагическая септицемия, инфекционная брюшная водянка, люблинская болезнь) - бактериальное заболевание, поражающее, главным образом, карпов, сазанов и их гибридов, а также некоторых других рыб семейства карповых, проявляющееся при остром течении бактериальной септицемией, при подостром течении -асцитно-язвенной и при хроническом - язвенной формой болезни.

Заболевание регистрировалось в Европе еще в XVIII веке. Как эпизоотию краснуху впервые описала М. Плен в 1904 г. (М. Píen). По данным W. Schäperclaus (1979) в 20-е годы XX в. болезнь охватила прудовые хозяйства стран Средней и Восточной Европы, а также стала появляться

среди природного поголовья сазана в низовьях рек, впадающих в Черное море.

В СССР краснуха карпов впервые была завезена в начале 1930-х г. г. с производителями карпа из Германии и затем быстро распространилась по европейской части страны при перевозках рыбы (В.А. Догель и др., 1939). В течение последующих 20 лет болезнь только по РСФСР была обнаружена в 37 рыбоводных хозяйствах, в четырех озерах и пяти водохранилищах с общей площадью акватории в 84,1 тыс. га. Инфекция была также зарегистрирована в хозяйствах Украинской, Латвийской, Литовской, Молдавской, Узбекской, Киргизской и Таджикской ССР (А.К. Щербина, 1972).

В настоящее время аэромоноз также остается основной проблемой в карповых хозяйствах (прудовых, садковых, бассейновых и др.). Наиболее неблагополучным регионом является Московская (неблагополучны 9 рыбхозов), Калужская, Оренбургская, Ростовская области, Краснодарский и Ставропольский края, Республика Северная Осетия-Алания, Хакасия и другие. В них это заболевание регистрируется многие десятилетия и протекает в основном хронически, периодически обостряясь при завозе посадочного материала (М.Н. Борисова и др., 2007; М.В. Калмыков, В.И. Белоусов, 2009).

По поводу этиологии краснухи долгое время не было единой точки зрения, но большинство ученых считало, что возбудителем болезни является бактерия Aeromonas (Achromobacter) punctata (W. Schäperclaus, 1930; H. Mann, 1939; Н. Dombrowski, 1953; W. Wunder, 1953). Советский ученый А. К. Щербина (1939) полагал, что А. punctata всегда можно выделить из пораженных органов рыб, больных краснухой.

Однако при изучении болезни стали накапливаться сведения, что у рыб, больных краснухой, данный возбудитель обнаружить удается не всегда, а бактерии, выделяемые от больных рыб, отличаются большой вариабельностью патогенных свойств. Предположение о вирусной природе

этого заболевания впервые был высказано Г.В. Эпштейном, М.А. Пешковым (1934) и Г.Д. Гончаровым (1949) на основании обнаружения телец-включений в эпидермальных клетках больных рыб.

Позднее В.И. Тецу и Г.С. Яковлевой (1962), Е.Ф. Осадчей (1964), J. Tomäsec et al. (1964) удалось обнаружить цитопатогенное действие ультрафильтрата, полученного из тканей больных краснухой карпов, при его действии на культуры клеток почки, сердца, плавников и гонад. Впервые вирус был выделен от карпов с синдромом острой формы инфекционной водянки югославским исследователем N. Fijan et al., (1971), который доказал его этиологическую роль в заболевании и предложил название болезни -весенняя виремия карпа. Параллельно с этим в нашей стране также был выделен вирус, и заболевание получило наименование «весенняя вирусная болезнь» (Н.И. Рудиков с соавт., 1975).

Дальнейшими углубленными исследованиями, проведенными сотрудниками ВИЭВ, было установлено, что под названием «краснуха карпов» описаны заболевания с различной этиологией, имеющие сходную клиническую картину (К.А. Лобунцов, Н.И. Рудиков, 1972, 1979; К.А. Лобунцов, 1974). На основании этого и было выделено 3 самостоятельных болезни: аэромоноз, вызываемый вирулентными штаммами Aeromonas hydrohpila; псевдомоноз, вызываемый бактериями из рода Pseudomonas и весенняя вирусная болезнь, вызываемая рабдовирусом.

Аэромонады - широко распространенные обитатели воды, которые в природе имеют широкий круг биологических хозяев. Среди них имеются варианты, патогенные для морских и пресноводных рыб, земноводных, пресмыкающихся, а также вызывающие оппортунистические токсикоинфекции у теплокровных животных и человека (Л.Н. Юхименко, В.Ф. Викторова, 1979; Э.К. Скурат, Е.И. Гребнева, 1994; Э.К. Скурат и др., 1995; H.H. Андросик и др., 1998).

Аэромонады обладают достаточно высокой устойчивостью и могут сохраняться в воде более 247 дней, а в тканях погибших рыб - до 32 суток

(D.H. Mac-Carthy, 1977). М.П. Бутко с сотрудниками (1974) установили, что A. punctata остаются жизнеспособными в рыбе при ее посоле (20 - 25% NaCl) 5-7 дней, замораживании (-19°С) - 14 дней и гибнут при ее проваривании, обжарке. Aeromonas spp. способны размножаться при пониженных температурах (от -2 до 10°С) в говядине и свинине (К. Krovacek et al., 1992; S.B. Mano et al., 2000) и при этом сохранять факторы вирулентности (D. Mateos et al., 1993; S. Merino et al., 1995).

В процессе изучения аэромонад классификация их видов претерпела ряд изменений. Согласно 9-му изданию Определителя бактерий Берджи (1984) подвижные аэромонады были включены в семейство Vibrionaceae, род Aeromonas и разделены на 3 вида: A. hydrophila, A. caviae, A. sobria. А в последнем издании этого Определителя (1994) видовой состав аэромонад был значительно расширен и дополнен видами: A. eucrenophila, A. schubertii, A. veronii, A. media. Они разделены на 3 группы: группу A. caviae, которая включает A. caviae, A. eucrenophila и A. media; группу A. hydrophila, которая включает A. hydrophila и биогруппу подвижных организмов в составе А. salmonicida; группу A. sobria, которая включает A. sobria, A. veronii и А. schubertii.

В силу вариабельности ферментативных свойств идентификация новых видов аэромонад нередко вызывает затруднение. Так, некоторые авторы считают, что практически все клинические изоляты, идентифицированные как A. sobria, в действительности представляют собой A. veronii (F.W Hickman-Brenner et al., 1987).

Американскими учеными A.M. Carnahan и S.W. Joseph (1993) предложена другая классификация, в основу которой легло изучение подвижных бактерий рода Aeromonas, которые были представлены клиническими вариантами, а также штаммами, выделенными из внешней среды и от животных. В первую группу вошли штаммы A. hydrophila, А. veronii биовар sobria и A. caviae; во вторую группу - A. veronii биовар veronii и A. schubertii. Кроме того, появилась группа из 2-х новых видов: A. jandaei

(A.M. Carnahan et al., 1991 а) и чувствительный к ампициллину A. trota (A.M. Carnahan et al., 1991 б).

В настоящее время насчитывается около 16 видов, относящихся к роду Aeromonas. Но систематическое положение таких видов как A. encheleia С. Esteve et al, 1995, A. ichtiosmia R.H.W. Schubert et al., 1991, A. culicicola V. Pidiyar et al., 2002, A. sharmana P. Saha and T. Chakrabarti 2006, A. allosaccharophila A.J. Martinez-Murcia et al., 1992 по мнению ряда авторов является весьма спорным (G.B. Nair, В. Holmes, 2002; С. Esteve et al., 2003; M.J. Saavedra et al, 2006). Также нет единого мнения относительно вида А. enteropelogenes R.H.W. Schubert et al., 1991, который рассматривается G. Huys et al. (2002) как более ранний синоним A. trota A.M. Carnahan et al., 1992.

Выделение вирулентных штаммов аэромонад только от больных рыб указывает на их этиологическую роль при заболевании карпов аэромонозом. В ходе бактериологического исследования двухлетних карпов с признаками острого и подострого течения болезни К.А. Лобунцовым и Н.И. Рудиковым (1972) было установлено, что при переходе острого течения краснухи в хроническое частота выделения вирулентных форм А. punctata из внутренних органов и из язв больных рыб снижается, а от переболевших рыб они или не выделяются совсем, или выделяются слабовирулентные штаммы. Об этом свидетельствуют и данные В.В. Просяной (1972), В.И. Афанасьева с сотр. (1978), которые чаще выделяли вирулентные бактерии от карпов с острой формой болезни, чем с подострой. Причем существенной разниц