Проницаемость эритроцитов для криопротекторов и структурно-функциональное состояние компонентов их цитоплазмы на этапах криоконсервирования

Межидов, Султанбек Хумаидович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Проницаемость эритроцитов для криопротекторов и структурно-функциональное состояние компонентов их цитоплазмы на этапах криоконсервирования
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Межидов, Султанбек Хумаидович

ВВЕДЕНИЕ.

РАЗДЕЛ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Проницаемость эритроцитов для неэлектролитов и парамагнитных ионов.

1.2. Теоретический анализ проницаемости клеточных мембран для неэлектролитов.

1.2.1. Уравнения, основанные на законе диффузии Фика

1.2.2. Уравнения, основанные на законах неравновесной термодинамики

1.2.3. Распределение веществ между клеткой и окружающей ее средой.

1.3. Влияние различных физико-химических факторов на состояние цитоплазмы эритроцитов.

1.4. Гипотезы, теории криоповреждения и криозащиты

1.5. Способы криоконсервирования эритроцитов.

РАЗДЕЛ II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Метод электронного парамагнитного резонанса.

2.1.1. Исследование проницаемости мембран эритроцитов для криопротекторов методом ЭПР спинового зонда.

2.2. Исследование распределения криопротекторов между эритроцитами и внеклеточной средой методом ЯМР

2.3. Исследование гидратации эритроцитов методом

ЭПР спинового зонда.

2.4. Исследование времени корреляции вращательной диффузии спинового зонда во вне- и внутриклеточных средах методом ЭПР.

2.5. Краткое описание строения эритроцита.

2.6. Исследование эритроцитов методом спектрофотометрии

2.7. Подготовка эритроцитов для исследования.

2.8. Получение красных теней эритроцитов.

2.9. Подготовка реактивов.

2.10. Замораживание эритроцитов

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ .112 РАЗДЕЛ III. ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ И КОНЦЕНТРАЦИИ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО БЕЛКА НА ПРОНИЦАЕМОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ ДЛЯ КР-ИОПРОТЕКТОРО.В.

3.1. Влияние температуры на проницаемость мембран эритроцитов для криопротекторов

3.2. Влияние концентрации внутриклеточного белка на проницаемость мембран эритроцитов для глицерина.

3.3. Влияние концентрации внутриклеточного белка гемоглобина на распределение различных веществ между вне- и внутриклеточными средами

РАЗДЕЛ IV. ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ВРЕМЯ КОРРЕЛЯЦИИ ВРАЩАТЕЛЬНОЙ ДИФФУЗИИ СПИНОВОГО ЗОНДА ВНЕ, ВНУТРИ ЭРИТРОЦИТОВ И СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ

СОСТОЯНИЕ ГЕМОГЛОБИНА ИХ ЦИТОПЛАЗМЫ

4.1. Влияние концентрации различных веществ на время корреляции вращательной диффузии зонда ТЕМПОН в цитоплазме эритроцитов

4.2. Влияние температуры на время корреляции вращательной диффузии зонда ТЕМПОН в цитоплазме и во внеклеточном растворе

• 4.3. Влияние различных физико-химических факторов на структурно-функциональное состояние внутриклеточного белка гемоглобина РАЗДЕЛ V. КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЕ ЭРИТРОЦИТОВ

5.1. Оценка цитотоксичности криопротекторов

5.2. О роли переохлаждения в повреждении биообъектов на этапе замораживания.

5.3. О роли осмотических факторов в повреждении биообъектов на этапе замораживания.

5.4. Влияние сочетания 1,2-пропандиола с различными высокомолекулярными веществами на сохранность ф эритроцитов при криоконсервировании.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Проницаемость эритроцитов для криопротекторов и структурно-функциональное состояние компонентов их цитоплазмы на этапах криоконсервирования"

За последние десятилетия интенсивно развивается сравнительно молодое научное направление общей биологии криобиология, от которой зависит решение ряда важных народнохозяйственных и социальных задач [4,8,13,17,20, 52,85,98,143,155,156,165,169,187,199,268]:

- создание запасов крови и ее компонентов для обеспечения возрастающих потребностей хирургии и гематологии;

- создание вакцино-сывороточных запасов, потребность в которых возрастает, в связи с увеличением частоты вирусных заболеваний;

- сохранение некоторых линий клеточных культур, семян растений, вымирающих животных, рыб для сохранения существующих и создания новых их видов методами генной инженерии;

- сохранение репродуктивных клеток человека и животных;

- создание банка органов и тканей, что позволит уменьшить риск отторжения трансплантата из-за иммунной несовместимости; использование холода для лечения различных заболеваний.

В настоящее время широко используют клетки крови в хирургии, терапии для лечения различных заболеваний. Чаще всего применяют переливание эритроцитов человека [3,4,51,85]. Однако имеющиеся методы криоконсервирования эритроцитов человека имеют недостатки (трудоемкость, дороговизна, малые сроки хранения в ресуспендирующей среде после криоконсервирования и отмывки), которые препятствуют широкому их распространению в клинической практике [4,45,127]. Причиной такого состояния дел является то, что недостаточно изучены те физико-химические процессы, которые протекают в эритроцитах и в других биообъектах на этапах их криоконсервирования. К этим физико-химическим процессам, в частности, относятся:

- транспорт неэлектролитов и электролитов в клетку и из нее в условиях изменения температуры;

- изменения во всех компонентах клеток, которые происходят в результате изменения температуры, фазового перехода вода-лед, вымораживания воды в лед и концентрирования электролитов и неэлектролитов вне и внутри клеток, стеклования, расстеклования, плавления льда и т.д.

Актуальность темы. Изучению проницаемости клеток для неэлектролитов и электролитов посвящено достаточно большое число экспериментальных [83,84,213,214,250,282,297,320] и теоретических работ [48,83,84,181,239,320], так как выяснение механизмов, лежащих в основе регуляции проницаемости мембран и причин неравномерного распределения веществ между клеткой и окружающей ее средой имеет большое значение не только для теории, но и для практики. Для криобиологов важно знать проник или не проник криопротектор в клетку и завершился ли процесс его проникновения, так как от этого зависит не только результат криоконсервирования, но и правильная оценка полученного результата в плане выяснения механизмов криоповреждения и криозащиты. Однако до настоящего времени остаются неясными многие стороны клеточной проницаемости, и по сей день существуют мембранная теория [48,83,181,239,320] и сорбционная (фазовая) гипотеза [134,181,214,250]. Мембранная теория получила широкое распространение в силу серьезного и всестороннего анализа на ее основе экспериментальных результатов [48,83,239,320], в то время как сорбционная гипотеза [134,181,214,250] все еще требует дальнейших экспериментальных и теоретических исследований для своего обоснования.

Исследование проницаемости мембран эритроцитов человека и животных для неэлектролитов ведутся давно [236,259,290,293,294], однако, до сих пор нет данных по систематическому исследованию проницаемости их мембран для различных криопротекторов при различных температурах. Так Джекобе [237] провел исследование проницаемости мембран эритроцитов человека и млекопитающих для глицерина, этиленгликоля гемолитическим методом. При этом было определено время гемолиза эритроцитов при различных температурах без рассчета коэффициента проницаемости. Парпат и Шулл [294], используя аналитический и гематокритный методы, определили, что время завершения процесса проникновения глицерина в эритроциты крупнорогатого скота составляет 40-Й50 мин. Орсков [290] исследовал проницаемость мембран эритроцитов для глицерина оптическим методом в диапазоне температур O-s-37 °С и установил, что при изменении температуры на 10 °С константа скорости его проникновения изменяется в 1,8-ь2 раза. Коэффициент проницаемости для глицерина при 0 °С -0,23-10"5 см/мин и -0,87-10"5 см/мин при 20 °С (из графических данных). Стейн [318,319] оптическим методом определил время, в течение которого проникает 50% от количества внеклеточного вещества (t1/2) в эритроциты человека при Ю-т-30 °С. Значения t1/2 для 1,2-пропандиола (1,2-ПД) 20%

101 с, глицерина - 30% - 90 с (20 °С), этиленгликоля 20% - 65 с (определенны из графических данных путем экстраполяции). Обращает на себя внимание более высокое значение t1/2 1,2-ПД, чем у глицерина. Высокая скорость проникновения глицерина при больших его концентрациях объяснена образованием димеров глицерина с переносчиком глицерина. Мазур и Миллер [266] исследовали проницаемость мембран эритроцитов человека для глицерина и определили, что коэффициент проницаемости (Р) при 20 °С составляет 2,5-10"4 см /мин, а при 0 °С - 1,0-10"4 см/мин. Позднее Карлсен и Вит [213] установили, что Р мембран эритроцитов человека для глицерина (1 ммоль/л) при 0 °С и рН=7,4 составляет 7,8-Ю"5 см/мин (1,3-10"в см/с). Майранд и Левит [261], используя радиоизотопный метод, определили коэффициент проницаемости мембран эритроцитов человека для этиленгликоля при 23 °С, который оказался равен 4,8-10"4 см/с (2,9-10"2 см/мин). При использовании оптического метода Левит и Млекодей [248] получили значение коэффициента проницаемости мембран эритроцитов человека для этиленгликоля 3,9-10"4 см/с (2,3-10'2 см/мин) (23 °С). Используя эти данные, а также данные по влиянию блокаторов проницаемости на трансмембранные потоки, они пришли к выводу о существовании независимых транспортных систем для растворителя и растворенных веществ. Однако Тун и Соломон [328] на основании собственных исследований пришли к выводу, что проницаемость мембран эритроцитов для воды все же коррелирует с проницаемостью этиленгликоля и мочевины, на основании чего сделали вывод о прохождении этих веществ через одни и те же поры в мембране.

Свенсон и соавт. [324] исследовали проницаемость мембран лизосом из клеток печени крыс для 43 органических веществ (неэлектролитов) с молекулярной массой 62-1000. Было показано, что имеет место отрицательная корреляция между скоростью проникновения этих вещества в лизосомы и с их способностью к образованию водородных связей с водой (для ОН-группы способность образовывать водородные связи считали равной 2). Эти значения отличаются от данных, которые были получены экспериментально методом 1Н-ЯМР [71,72] (гидроксильной группой этиленгликоля прочную водородную связь образует 1 молекула воды). Зинченко [72] считает, что ряд связывающей способности, построенный Свенсоном и соавт. [324], соответствует достаточно слабым водородным связям исследованных веществ с водой. Брукдорфер и соавт. [211] показали, что при удалении холестерина из эритроцитов возрастает их осмотическая хрупкость и проницаемость для глицерина.

Приведенные выше данные показывают, что основное внимание в большинстве работ уделялось изучению механизмов транспорта веществ через мембраны, измерению трансмембранных потоков и определению коэффициента проницаемости. Следует отметить, что данные по определению Р мембран эритроцитов человека при 0-10 °С единичны [318,319]. Этот диапазон важен для криобиологов, так как добавление криоконсерванта, содержащего криопротекторы 1,2-ПД и этиленгликоль, при этих температурах к эритроцитам человека дает более высокую их сохранность [45,78]. Кроме того, данные по коэффициенту проницаемости мембран эритроцитов человека даже для одного глицерина, полученные различными исследователями, отличаются почти на порядок [213,290]. На такие различия в значениях коэффициента проницаемости глицерина для мембран эритроцитов, полученных различными исследователями, указывали и ранее [266,320] (3-ь40)Ю~6 см/мин). Причинами таких расхождений могут быть как особенности методики подготовки образца (состав и низкая осмолярность среды), так и недостатки методов исследования проницаемости мембран эритроцитов. Из вышеизложенного видно, что необходимы дальнейшие исследования проницаемости мембран эритроцитов человека с применением нового неинвазивного метода.

К настоящему времени накоплены экспериментальные данные, которые не удается объяснить с точки зрения мембранной теории. Порою эти данные носят противоречивый характер. Так исследование распределение этиленгликоля показало, что коэффициент его распределения для эритроцитов человека, быка, кролика и овцы близки к единице [259], в то время как по данным Орскова [291] коэффициент распределения для этиленгликоля, как и для глицерина, больше 1. Карлсен и Вит [213] установили, что коэффициент распределения глицерина не зависит от его концентрации (0,001-^-4 моль/л), рН раствора (5,5-ь9,8) и составляет 0,93 ± 0,04. Маклеод и Пондер [259] также определили, что коэффициент распределения этиленгликоля (0,3 моль/л) для эритроцитов человека, быка и кролика близок к 1. Однако исследования Зинченко [72] показали, что коэффициент распределения для всех криопротекторов при 23 °С меньше 1, но даже для веществ, которые имеют молекулярную массу до 2000, он не равен нулю.

Исследование проницаемости клеток для Сахаров показало, что они проникают не во все клетки животных [227,233,334], но проникают в мышечные клетки [223,281,282,289,292].

Данные, приведенные выше, не удается объяснить с точки зрения мембранной теории, так как криопротекторы, транспорт которых не зависит от затрат энергии, имеют различные концентрации вне и внутри клетки. Однако этих данных недостаточно для широких обобщений. Так недостаточно изучено влияние температуры на распределение криопротекторов. Практически нет работ по изучению влияния концентрации основной компоненты внутриклеточной фазы - белка на проницаемость клеток для электролитов и неэлектролитов, хотя этот вопрос особенно важен не только для криобиологов, но и для биологов для понимания роли внутриклеточной фазы в регуляции клеточной проницаемости. Кроме того, на этапах криоконсервирования биообъектов происходит существенное изменение концентрации внутриклеточного белка, что сказывается как на распределении веществ между клеткой и окружающей ее средой, так и на процессах их транспорта через мембрану клеток и диффузии в цитоплазме.

Для исследования диффузии веществ в цитоплазме эритроцитов человека был использован метод ЭПР спинового зонда [133,191,235]. При этом было установлено, что имеются изломы на кривых зависимости параметра подвижности зондов от обратной температуры. В присутствии криопротекторов эти изломы сглаживались. На основании исследования подвижности спиновых зондов в мембране и в цитоплазме эритроцитов был сделан вывод о кооперативности изменений в них при изменении температуры [191]. Эти исследования не охватывают диапазон температур -0-г-10 °С, где происходят основные повреждения клеток при криоконсервировании без криопротекторов, в силу переохлаждения системы. Данные, полученные на этапе отогрева, не в полной мере отражают процессы, которые протекают в этом диапазоне температур, в силу явлений гистерезиса. Имеющиеся данные в литературе [53,109,110], по изучению зависимости вращательной диффузии спинового зонда в цитоплазме эритроцитов от концентрации различных веществ охватывают их концентрации до ~1,2 моль/л, в то время как концентрация натрия хлорида может достигать 4 моль/л и более [25,26]. Не изучено влияние различных концентраций криопротекторов и электролитов при их сочетании на процессы диффузии в цитоплазме эритроцитов, хотя именно такая ситуация реализуется при криоконсервировании. Поэтому необходимы дальнейшие исследования по изучению влияния более высоких концентрации различных веществ (больше 1,2 моль/л) на диффузию зондов в цитоплазме эритроцитов, что в свою очередь позволит выявить общие закономерности процессов, которые протекают в цитоплазме, клеток при замораживании-оттаивании.

Как указывалось выше, основным компонентом цитоплазмы эритроцитов является белок гемоглобин (95%) [139] и он может оказывать влияние на проницаемость эритроцитов для веществ и их диффузию в цитоплазме.

Однако изучению структурно-функционального состояния основной компоненты цитоплазмы клеток - белка посвящены единичные работы [50,174,191]. Так было установлено, что в гипертонических растворах максимум флуоресценции эритроцитов смещается в длинно- или коротковолновую область в зависимости от концентрации натрия хлорида [50]. Изучение форм гемоглобина внутри эритроцитов в зависимости от времени хранения в физиологических условиях показало [174], что содержание окси- и метгемоглобина меняется волнообразно и происходит стабилизация их уровня через 20 дней хранения эритроцитов. На основании исследований методом ЭПР спиновых меток и зондов липидов мембран и белков эритроцитов был сделан вывод о кооперативности структурных переходов белков эритроцитов в зависимости от температуры [191]. Гулевский [57] изучил влияние температуры, криопротекторов, осмолярности среды на проницаемость мембран эритроцитов их теней для ионов и метаболитов, а также на их сохранность в гипертонических растворах при замораживании. Было показано, что красные тени эритроцитов более устойчивы к повреждению, чем эритроциты и их плазматическая мембрана хорошо сохраняет барьерные свойства. На основании таких экспериментов был сделан вывод о различии структурного состояния гемоглобина в цитоплазме эритроцитов и их теней [57]. Однако этих данных явно недостаточно для понимания процессов, которые протекают внутри клеток на этапах криоконсервирования. Так не изучено влияние концентраций различных веществ на соотношение форм гемоглобина внутри эритроцитов. В работе [50] представлены данные только по изучению положения максимума флуоресценции.

Необходимость выполнения данной работы, в силу ее важности, нашло отражение в научных программах Института проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины:

1. Тема №9, 2.2.6.9, шифр 2.28.3.1:2.28.3.2, номер госрегистрации 01944005297.

Исследование влияния температуры на структурное состояние изолированных и мембраносвязанных белков, в том числе в составе цитозоля и цитоскелета, на физико-химические процессы в среде инкубирования и на метаболизм в клетках с целью изучения криорезистентности клеточных структур».

2. Тема №69, 2.2.6.69, шифр 2.28.3.1:2.28.3.2.

Исследование влияния температуры на структурное состояние мембраны и цитозоля, а также на проницаемость для электролитов и неэлектролитов эритроцитов человека на различных стадиях развития и некоторых патологиях».

Государственного Фонда фундаментальных исследований:

1. Тема № 5/282, шифр "Иней"

Исследование проницаемости эритроцитов для электролитов и неэлектролитов с целью определения вклада в нее мембраны и физико-химических свойств внутри- и внеклеточных сред".

В связи с вышеизложенным пелью настоящей работы явилось изучение влияния различных физико-химических факторов на структурно-функциональное состояние компонентов цитоплазмы эритроцитов и проницаемость их мембран для криопротекторов.

Для достижения поставленной цели было необходимо рртттитт, следующие задачи:

- изучить проницаемость эритроцитов человека для криопротекторов и влияние на нее температуры, концентрации внутриклеточного гемоглобина;

- изучить влияние температуры, различных концентраций натрия хлорида, калия хлорида, сахарозы, глюкозы, 1,2-пропандиола, поливинилпирролидона-12600 на диффузию зонда ТЕМПОН в цитоплазме эритроцитов;

- изучить влияние концентрации натрия хлорида, калия хлорида и сахарозы на структурно-функциональное состояние внутриэритроцитарного гемоглобина;

- изучить влияние сочетания 1,2-пропандиола с хлоридом натрия, а также переохлаждения на сохранность эритроцитов;

- изучить влияние комбинаций высокомолекулярных (поливинилпирролидон-12600, полиэтиленоксид-1500, желатина, оксиэтилированный крахмал-180000) и низкомолекулярных веществ(сахароза, глюкоза, натрия хлорид, натрия гидроцитрат) на сохранность эритроцитов при криоконсервировании; теоретически обосновать подход для разработки экономичных криоконсервантов для криоконсервирования клеточных суспензий;

- создать способ криоконсервирования эритроцитов человека при температуре -196 °С.

Научная новизна полученных результатов. Впервые проведены систематические исследования проницаемости мембран эритроцитов для различных криопротекторов при температурах 0-10 °С. Определены коэффициенты проницаемости и энергия активации процесса их проникновения. Показано, что ряд, который образуют криопротекторы по величине коэффициента проницаемости для эритроцитов человека, не полностью коррелирует с рядом, в котором последовательность определяется их размерами, лиотропными и диэлектрическими свойствами, а также количеством связанной с ними воды.

Впервые показано, что концентрация внутриклеточного белка оказывает влияние на коэффициент распределения различных веществ между эритроцитами и окружающей их средой, а также на скорость проникновения глицерина.

Исследовано состояние хромофорной группы внутриэритроцитарного гемоглобина в гипертонических растворах натрия, калия хлорида и сахарозы. Установлено, что в гипертонических растворах натрия и калия хлорида происходит изменение соотношение форм внутриклеточного гемоглобина (окси-, дезокси- и метгемоглобин), что указывает на изменение его конформации.

Впервые показано, что при повреждении эритроцитов в гипертонических растворах натрия и калия хлорида в первую очередь уменьшается количество клеток, содержащих большее количество оксигемоглобина, в то время как количество клеток, содержащих большее количество метгемоглобина, увеличивается.

Исследовано влияние различных концентраций натрия хлорида на первые производные спектров поглощения (ППСП) глобулярной части внутриклеточного гемоглобина и впервые показано, что в гипертонических растворах происходит появление дополнительного отрицательного максимума на ППСП гемоглобина, что указывает на изменение его конформации.

Установлено, что отклонение от линейного характера зависимости времени корреляции вращательной диффузии спинового зонда ТЕМПОН в цитоплазме эритроцитов от концентрации внеклеточного вещества, связано с выходом из эритроцитов основной массы свободной воды.

Показано, что количество поврежденных эритроцитов не коррелирует с величиной переохлаждения суспензии клеток.

Причинами различий в их сохранности в этих условиях являются как сжатие, так и деформации сдвига, развивающиеся в узких каналах между кристаллами льда, в которые вытесняются эритроциты при вымораживании воды в лед.

Впервые теоретически показано, что увеличение концентрации криопротектора в криоконсерванте позволяет уменьшить его количество, которое необходимо для криоконсервирования клеточных суспензий.

Обнаружено, что в присутствии эритроцитов, начиная с определенной их концентрации, происходит увеличение экстинкции хромофорной группы внеклеточного метгемоглобина. Показано, что увеличение концентрации клеток и натрия хлорида приводит к дальнейшему увеличению экстинкции внеклеточного метгемоглобина, в то время как криопротекторы ее уменьшают, начиная с определенной их концентрации. Кроме того, установлено, что в присутствии эритроцитов исчезает

• / полоса поглощения внеклеточного метгемоглобина в диапазоне длин волн полосы Соре; хотя концентрация эритроцитову уменьшена так, что экстинкция метгемоглобина соответствует ее значению в надосадке без эритроцитов.

Изучено влияние сочетания различных высоко- и низкомолекулярных криопротекторов на сохранность эритроцитов. Установлено, что сочетание высоко- и низкомолекулярных криопротекторов позволяет уменьшить концентрацию низкомолекулярного криопротектора, увеличить диапазон скоростей замораживания, при которых сохранность клеток остается высокой. Кроме того, это улучшает результаты криоконсервирования эритроцитов при умеренно низких температурах.

Установлено, что 1,2-пропандиол и этиленгликоль при концентрациях выше 20% оказывают на эритроциты токсическое действие, которое способствует усилению повреждения эритроцитов в растворе натрия хлорида с концентрацией 3,2 моль/л (LD50).

Практическое значение полученных результатов. Показано, что увеличение концентрации криопротектора в составе криоконсерванта позволяет создавать экономичные, менее трудоемкие способы криоконсервирования клеточных суспензий. Созданы экономичные, эффективные и менее трудоемкие способы криоконсервирования эритроцитов человека при -196 и -85-Г-90 °С.

Показано, что эритроциты при ресуспендировании (после центрифугирования) в том же гипертоническом растворе, в котором они находились перед центрифугированием, разрушаются начиная с концентрации натрия хлорида 0,6 моль/л и более.

Предложен простой способ инициации кристаллов льда в контейнере, для предупреждения переохлаждения суспензии клеток при криоконсервировании, что позволяет уменьшить количество поврежденных клеток и получать их высокую морфо-функциональную сохранность.

Обнаруженное явление увеличения экстинкции хромофорной группы метгемоглобина в присутствии эритроцитов использовано для изучения влияния различных веществ на мембрану эритроцита.

Предложенные методы исследования проницаемости и дегидратации, а также другие методические подходы могут быть использованы для исследования и криоконсервирования других биологических объектов.

Личный вклад соискателя. В работах, которые опубликованы в соавторстве, диссертантом предложены идеи работ, методические подходы, готовились образцы. Соискатель принимал непосредственное участие в проведении экспериментов, лично проводил статистическую обработку результатов, принимал участие в научном обсуждении всех результатов, формулировал основное содержание выводов при помощи научного консультанта доктора биол. наук, проф. Моисеева В.А.

Апробациярезультатовдиссертации. Материалы диссертации докладывались на Всесоюзной конференции «Магнитный резонанс в биол. и медиц.» (Черноголовка, 1989), на I съезде Белорусского общества фотобиологов и биофизиков (Минск, 1994), на III съезде Украинского общества гематологов и трансфузиологов (Сумы, 1995), на I съезде Украинского общества криобиологии и криомедицины (Харьков, 1995), на международной конференции «Актуальные проблемы разработки и производства кровезаменителей и консервантов крови» (Минск 1994), на II съезде Украинского биофизического общества (Харьков, 1998 г.).

Публикации. По результатам диссертационной работы опубликована 21 статья в научных журналах, 9 тезисов и получено б авторских свидетельств и патентов.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Межидов, Султанбек Хумаидович

выводы

1. Криопротекторы по скорости проникновения через мембрану эритроцита при температуре 10 °С образуют ряд: 1,2-ПД > этиленгликоль > ДМСО > глицерин, который не согласуется с рядом, который они образуют по их лиотропным свойствам (по величине коэффициента распределения в системах хлороформ/вода и оливковое масло/вода), по величине диэлектрической проницаемости их растворов, по количеству связанной с криопротектором воды и т.д., в связи с чем следует полагать, что положение криопротектора в этом ряду определяется комплексом всех его физико-химических свойств.

2. Концентрация внутриклеточного белка оказывает существенное влияние на коэффициент распределения различных веществ между эритроцитами и окружающей их средой, а также на скорость проникновения глицерина.

3. Отклонение от линейного характера зависимости ВКВД зонда ТЕМПОН в цитоплазме эритроцитов при концентрации различных веществ выше 0,8 моль/л связано с выходом из эритроцитов основой массы свободной воды.

4. Различия в значениях ВКВД зонда ТЕМПОН в цитоплазме эритроцитов в зависимости от концентрации 1,2-ПД при концентрациях натрия хлорида до 0,8 моль/л обусловлены зависимостью вязкости внутриклеточного водного раствора от концентрации криопротектора в силу наличия в эритроцитах достаточного количества свободной воды.

5. Различия между значениями ВКВД зонда ТЕМПОН во внеклеточной среде и в цитоплазме эритроцитов определяются их составом и концентрацией веществ.

6. При эквилибрации эритроцитов в гипертонических растворах натрия и калия хлорида происходит изменение конформации внутриэритроцитарного гемоглобина, на что указывают изменения соотношение его форм (окси-, дезокси- и метгемоглобин) и первых производных спектров поглощения.

7. В гипертонических растворах натрия и калия хлорида повреждаются в первую очередь эритроциты, содержащие большее количество оксигемоглобина и более устойчивы клетки, содержащие большее количество метгемоглобина, в силу окисления липидов кислородом в первых и образования комплексов между молекулами гемоглобина, цитоскелета, мембран в последних.

8. Количество поврежденных клеток слабо коррелирует со степенью переохлаждения. Причинами увеличения повреждения клеток при переохлаждении являются сжатие и деформации сдвига на границе растущих кристаллических фронтов.

9. Теоретический подход, предложенный для создания криоконсервантов с целью криоконсервирования клеточных суспензий, позволяет создавать экономичные, эффективные и менее трудоемкие способы их криоконсервирования.

10. Сочетание высоко- и низкомолекулярных криопротекторов позволяет уменьшить концентрацию низкомолекулярного криопротектора, увеличить диапазон скоростей замораживания, при которых сохранность клеток остается высокой, а также улучшить результаты криоконсервирования при умеренно низких температурах в силу специфического взаимодействия высокомолекулярного криопротектора с мембраной клеток, увеличения им вязкости внеклеточной среды и низкого осмотического давления его растворов при высоких его концентрациях.

11. Причиной усиления повреждения эритроцитов в растворе натрия хлорида 3,2 моль/л в присутствии этиленгликоля и 1,2-ПД 20% и выше является их токсическое действие на эритроциты.

12. В присутствии эритроцитов, начиная с определенной их концентрации, происходит увеличение экстинкции хромофорной группы внеклеточного метгемоглобина в силу передачи им энергии компонентам мембраны эритроцитов. Уменьшение экстинкции метгемоглобина может происходит в силу неспецифического (1,2-ПД, глицерин) или специфического (ПВП-12600) действия криопротекторов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Криоконсервирование биологических объектов имеет важное социальное и народнохозяйственное значение. Однако создание криобиологических технологий требует решения различных задач, многие из которых связаны как с криобиологией, так и с проблемами общей биологии.

Вопросы транспорта веществ в клетку и в особенности механизмы их проникновения в клетку и их выхода из нее давно волнуют исследователей, но до сих пор не все ее стороны ясны, в связи с чем существуют мембранная теория и сорбционная гипотеза клеточной проницаемости.

На роль мембраны в транспорте веществ в клетку указывают не только многочисленные исследования на различных клетках [83,84,239,318,319,320,324,328], но и на липидных везикулах [103,209]. Однако в некоторых случаях, по нашему мнению, не вполне обоснована критика в адрес теории, описывающей проникновение веществ в клетку, на основе закона диффузии [180]. Наиболее серьезные доводы против теории на основе закона диффузии это то, что она не описывает данные по диффузии в клетку тяжелой воды в физиологических условиях [337], явления ультра фильтрации и плазмолиза растительных клеток [239]. Однако, надо отметить, что, записав одно уравнение для тяжелой воды в физиологическом растворе во внеклеточной среде, dvi/dt=KwA{N'Jvl -с;> (6.1), исследователи [337] упустили из виду, что при этом на такую же величину больше количество обычной воды внутри клетки по отношению к внеклеточной, для которой надо записать аналогичное уравнение, но при этом изменение объема будет иметь противоположный знак при той же его величине. Отсюда следует, что никакого изменения объема не должно быть. Кроме того, следует отметить, что судить о диффузии воды в клетку по дейтерированной воде не совсем корректно, так как в данном случае о проникновении воды судят по концентрации дейтерия, который может проникать в клетку путем эстафетной передачи через водородные связи. О проникновении воды необходимо судить по диффузии кислорода.

Для того чтобы понять, почему не удается объяснить явления плазмолиза клеток, необходимо обратить внимание на особенности строение твердой оболочки растительной клетки. Она состоит из трех слоев, две из которых состоят из целлюлозы. Иногда растительные клетки имеет вторичную оболочку, порою состоящую из 25 слоев, толщина каждой из которых может достигать 0,4 мкм [12]. Теперь, вполне понятно, что различные вещества будут проходить через эти оболочки с различной скоростью, как в хроматографической колонке (скорость прохождения будет зависеть от константы адсорбции в мембране), в то время как вода будет выходить из клетки. В этом случае можно объяснить различия концентраций веществ в клетке при достижении клеткой объема, характерного для физиологических условий. Несомненно, что подход Кадема и Катчальского [239], основанный на законах неравновесной термодинамики, является более общим и позволяет описывать многие явления, связанные с процессами проникновения веществ в клетку, в том числе и явление ультрафильтрации.

Нами проведено систематическое исследование проницаемости мембран эритроцитов человека для различных криопротекторов при различных температурах. Определены коэффициенты проницаемости и энергии активации проникновения. По скорости проникновения при 10 °С эти вещества образуют ряд 1,2-ПД > этиленгликоль > ДМСО > глицерин. Этот ряд не согласуется с рядом их лиотропных, диэлектрических свойств, а также их размерами и количеством связанной с ними воды. Следовательно, это связано с комплексом всех их физико-химических свойств.

Отсутствие блока проницаемости мембран для 1,2-ПД и ДМСО, в то время как она имеет место для этиленгликоля и глицерина в присутствии Ni2+ 0,33 моль/л указывает на возможность их транспорта через различные каналы, если это не связано с образованием этиленгликолем и глицерином комплексов с Ni2+, в то время как 1,2-ПД и ДМСО их не образуют.

В последние годы все больше накапливается данных, что внутриклеточное содержимое, играет существенную роль в процессах транспорта веществ в клетку [72,181,214], однако, не изучена роль основной компоненты внутриклеточной фазы -белка в ее регуляции.

Нами впервые проведены исследования по изучению роли внутриклеточного белка в процессах транспорта веществ в клетку. Полученные нами данные показывают, что при изменении концентрации внутриклеточного белка происходит изменение коэффициента распределения (Q). Уменьшение концентрации гемоглобина в эритроцитах приводит к увеличению Q для ФК и уменьшению для ПЭГ-1500. Скорость проникновения глицерина резко увеличивается при уменьшении концентрации гемоглобина, а ее увеличение приводит к блоку проницаемости мембран эритроцитов. Это указывает на то, что при высоких концентрациях внутриклеточного белка скорость проникновения вещества в клетку лимитируется внутриклеточным белком.

Таким образом, анализ наших и литературных данных дает основание для вывода, что клеточная мембрана является барьером на пути проникновения веществ в клетку, однако на этот процесс оказывает существенное влияние внутриклеточный белок (гемоглобин). Причиной влияния гемоглобина на кинетику проникновения глицерина в эритроциты, по-видимому, является его взаимодействие с белками мембраны и цитоскелета, что может приводить к блоку проницаемости мембран при высоких концентрациях гемоглобина и к увеличению скорости проникновения при снижении его концентрации. Распределение веществ между клеткой и окружающей ее средой определяется в основном составом вне- и внутриклеточных растворов при условии, что мембрана проницаема для них.

Проведенные нами исследования показывают, что внутриклеточный белок играет важную роль не только в механизме транспорта веществ в клетку, в распределении веществ между клеткой и окружающей ее средой, но и в процессах повреждения клеток на этапах криоконсервирования.

Исследование соотношения форм гемоглобина внутри эритроцитов в гипертонических растворах NaCI и KCI, показало, что уменьшается количество клеток, содержащих больше оксигемоглобина, и увеличивается содержание клеток, содержащих больше метгемоглобина. Повреждение клеток, содержащих больше оксигемоглобина, по-видимому, вызвано окислением липидов кислородом перекисей и кислородом, который высвобождается из оксигемоглобина в условиях повышенной концентрации электролита во внеклеточной среде. В клетках с большим содержанием метгемоглобина имеют место более благоприятные условия. для агрегации гемоглобина, его взаимодействия с цитоскелетными и интегральными белками мембран в силу большего заряда метгемоглобина. Такая агрегация может приводить к образованию структур по типу геля, которая будет более устойчива к повреждению в гипертонических растворах.

Бороске и соавт. [209] установили, что липидные везикулы в гипертонических растворах превращается в протуберанец определенного диаметра в зависимости от радиуса везикулы. Однако теоретическое описание этого явления, предложенное авторами, не позволяло объяснить все явления, которые сопровождают этот процесс. Маркин и соавт. [103] теоретически корректно описали это явление. При этом были установлены зависимости между радиусом везикулы, радиусом и длиной протуберанца. г, = ЗЩЯ0 +R)/R20 +R.R+R2 (6.2)

L = 2(%-R3)/3M (6.3), где га - конечный радиус протуберанца; В0 - радиус везикулы;

R - радиус шапочки на конце протуберанца; L - длина протуберанца; h - толщина монослоя липида равная 2-Ю'3 мкм; X - величина равная 25 мкм.

Так как площадь эритроцита 109 мкм2 [266], то, считая ее неизменной при превращении эритроцита в сфероцит, можно найти радиус сферического эритроцита из формулы 47cR* = 109 мкм2, который оказался равным 3 мкм. Тогда конечный радиус протуберанца будет равен r0 =2XhjRa = 3-25-2-10~3/3 = 5-10~2 МКМ (6.4).

Здесь сделано допущение, как и авторами работы [103], что радиус сферического эритроцита значительно больше радиуса сферической шапочки протуберанца. После подстановки, полученного значения радиуса везикулы, в уравнение для длины протуберанца получим ее длину 360 мкм. Тогда объем протуберанца (Vp) равен

Ур-я Rl -£ = ЗД4-(5-10~2)2 -360 = 2,8 мкм3 (6.5).

По многочисленным данным объем эритроцита уменьшается при дегидратации на 55%, т.е. при выражении в долях он составляет 0,45 от объема интактного эритроцита (63 мкм3). При умножении данной величины на объем интактного эритроцита мы узнаем, до какой величины может уменьшиться объем эритроцита.

0,45-63 = 28,4 мкм3 (6.7).

Таким образом, мы видим, что объем эритроцита на порядок больше объема протуберанца, в который должен был превратиться эритроцит. Причиной тому является то, что уменьшиться объему эритроцита до объема протуберанца не позволяет внутриклеточное содержимое. Следовательно, есть основание полагать, что давление создаваемое внеклеточной средой, может оказывать воздействие через мембрану на внутриклеточное содержимое и цитоскелетные белки.

Постгипертонический лизис клеток, по-видимому, связан с фиксацией объема клетки в результате взаимодействия внутриклеточного гемоглобина, с цитоскелетными и мембранными белками, что может привести к образованию конгломерата между макромолекулами цитоплазмы, цитоскелета и мембраны в силу действия сил когезии. На возможность такой ситуации указывают появление дополнительных структур на первой производной спектра поглощения внутриклеточного гемоглобина, увеличение содержания метгемоглобина (больше заряд гемгруппы), а также блок проницаемости мембран эритроцитов для криопротектора глицерина в гипертоническом растворе натрия хлорида.

На основании изложенного выше можно предполагать, что внутриклеточная фаза играет существенную роль в процессах транспорта веществ в клетку, а также в механизме их повреждения на этапах криоконсервирования. Эти исследования указывают на необходимость наличия в цитоплазме клеток криопротектора для защиты ее белков, а также белков цитоскелета и мембраны от повреждения.

Использование обнаруженного нами явления увеличения экстинкции метгемоглобина в присутствии эритроцитов, которое связано с передачей им энергии компонентам мембраны эритроцита, позволило исследовать влияние различных веществ на ее мембрану. При этом установлено, что криопротекторы 1,2-ПД, глицерин уменьшают экстинкцию метгемоглобина •■/•■" ' начиная с 20% их концентрации, в то время как ПВП-12600 уже при 5%. Это указывает на неспецифический характер защитного действия криопротекторов 1,2-ПД и глицерина на мембрану эритроцита и метгемоглобин при криоконсервировании, т.е. участвуют в образовании гидратной оболочки вокруг мембраны и белков. ПВП-12600 специфически взаимодействует с компонентами мембраны эритроцита и оказывает таким образом защитное действие при криоконсервировании. Кроме того, взаимодействие ПВП-12600 с компонентами мембраны эритроцитов, увеличение вязкости внеклеточной среды при его присутствии, способствуют формированию мелкокристаллического льда, замедлению процессов диффузии через мембрану эритроцита и во внеклеточной среде, что уменьшает градиент осмотического давления на мембране эритроцитов и способствует повышению сохранности эритроцитов.

Обнаруженные явления позволили понять причины повреждения эритроцитов при криоконсервировании, а также нарастания гемолиза в ресуспендирующей среде в процессе хранения. Для предупреждения процессов обнаруженных нами, которые приводят к усилению повреждений клеток при криоконсервировании и хранении в ресуспендирующей среде нами предложены:

1) подход для оценки цитотоксичности криопротекторов с целью их подбора;

2) метод изучения влияния различных веществ (в том числе и криопротекторов) на мембрану эритроцита, на основе обнаруженного нами явления - увеличение экстинкции хромофорной группы внеклеточного метгемоглобина в присутствии эритроцитов;

3) метод инициации кристаллов льда для предупреждения переохлаждения, что позволяет уменьшить повреждение клеток и получать высокую морфо-функциональную сохранность клеток;

4) теоретическое обоснование для создания экономичных криоконсервантов для криоконсервирования клеточных суспензий и на его основе предложены эффективные и экономичные криоконсерванты для криоконсервирования эритроцитов при азотных и умеренно низких температурах.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Межидов, Султанбек Хумаидович, Харьков

1. А.с. 1138097 СССР, МКИ4 А01 N 3/00. Способ криоконсервирования апексов растений / Манжухин А.В. (СССР). -№ 3651266/30-15; Заявлено 15.07.83; Опубл. 07.02.85, Открытия. Изобретения. № 5. С. 12.

2. А.с. 1144673 СССР, МКИ4 А 10 N 1/02. Способ консервации живых клеток или тканей растений / Попов А.С., Волкова А.А., Бутенко Р.Г. (СССР). № 3565401/28-13; Заявлено 10.03.83; Опубл. 15.03.85, Открытия. Изобретения. №10.- 11с.

3. Аграненко В. А. Повышение эффективности методов консервирования крови и эритроцитной массы // Труды Всесоюз. симпоз. "Консервирование крови и ее компонентов". М. (Россия). -1978. - С. 8-15.

4. Аграненко В.А. Федорова Л.И. Замороженная кровь и ее клиническое применение. ML: Медицина, 1983. - 96 с.

5. Аграненко В.А., Абезгауз Н.Н., Трошина В.М. и др. Заготовка концентратов лейкоцитов из консервированной крови с добавлением желатины. Метод, реком.- М.: Медицина.-1985. 36 с.

6. А жила Я.И. Медико-биологические аспекты применения метода электронного парамагнитного резонанса.- М.: Наука, 1983. -527 с.

7. Аксенов С.И. Вода и ее роль в регуляции биологических процессов. М.: Наука, 1990. - 117 с.

8. Актуальные проблемы криобиологии / Под ред. Н.С. Пушкаря, А.М. Белоуса. К: Наук, думка, 1981. - 608 с.

9. Альтшулер С.А., Козырев БЖ. Электронный парамагнитный резонанс соединений элементов промежуточных групп. М.: Наука, 1972. - 672 с.

10. Анциферова Л.И., Лазарев А.В., Стрюков В.Б. Влияние вращательной диффузии на форму линии парамагнитного резонанса //ЖЭТФ. Письма в журнал. 1970. - 12. - №12. - С. 108-110.

11. Анциферова Л.И., Вассерман A.M., Иванов А.Н. и др. Атлас спектров электронного парамагнитного резонанса спиновых меток и зондов. М.: Наука, 1977. - 160 с.

12. Атабекова А.И. Устинова Е.И. Цитология растений. -М.: Колос, 1980. 328 с.

13. Бабийчук Г.А., Аркатов В.А., Арцыбушев Ю.Н., Гнатиев В.В. Гипотермия и лечение острых отравлений. К.: Наукова думка, 1990. - 128 с.

14. Бабийчук Г. А., Марченко B.C., Ломакин И.И., Белостоцкий А.В. Нейрофизиологические процессы охлажденного мозга. К.: Наукова думка, 1992. - 208 с.

15. Бабийчук Л.А. Влияние охлаждения на структуру и осмотические свойства эритроцитов человека: Автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.22 / ИПКиК НАН Украины. Харьков, 1985. - 22 с.

16. Белла Ю.И., Намчевадзе Э.Н., Бакрадзе Н.Г. Перераспределение воды в системе охлаждаемых растительных клеток по данным ядерного магнитного резонанса // Биофизика. 1989. - 34. - №6. - С. 997-1000.

17. Белоус А.М., Шраго М.И., Пушкарь Н.С. Криоконсерванты. К.: Наукова думка, 1979. - 198 с.

18. Белоус A.M., Бондаренко В.А. Структурные изменения биологических мембран при охлаждении. К.: Наукова думка, 1982. - 254 с.

19. Белоус A.M., Бондаренко В. А., Гулевский А.К.

20. Молекулярно-клеточная концепция криоповреждения клетки: роль трансмембранных дефектов // Криобиология. 1987. -№2. - С. 3-11.

21. Белоус A.M., Грищенко В.И. Криобиология. К.: Наукова думка, 1994. - 431 с.

22. Беляков А.Д. Об удлинении сроков хранения консервированной крови // Актуальные вопросы гематологии и переливания крови. Ленинград, 1957. - №5. - С. 51-62.

23. Берлинер JI. Метод спиновых меток. Теория и применение. М.: Мир, 1979. - 639 с.

24. Блинова Е.В., Комолова Г.С., Егоров И.А. Влияние ультранизких температур на активность РНК-азы // Изв. АН СССР, сер. биол. 1968. - №6. - С. 847-853.

25. Блюменфельд Л.А. Проблемы биологической физики. М.: Наука, 1977. 336 с.

26. Бондаренко В.А. Развитие и предупреждение температурного шока эритроцитов: Дис. . д-ра биол. наук: 03.00.22. Харьков, 1988. - 450 с.

27. Бондаренко Т.П. Осмолярность и температура среды как факторы, регулирующие чувствительность эритроцитов к охлаждению и осмотическому стрессу: Дис. . д-ра биол. наук: 03.00.22. Харьков, 1994. - 351 с.

28. Браун A.M., Моженок Т.П. Неспецифический адаптационный механизм клеточной системы. Ленинград: Наука, 1987. - 232 с.

29. Бучаченко А.Л., Троицкая Л.С. Исследование вращательной и трансляционной подвижности частиц в жидкой фазе методом электронного парамагнитного резонанса // Изв. АН СССР, сер. хим. 1966. - №4. - С. 602-609.

30. Бучаченко Л.А., Вассерман А.М. Стабильные радикалы. -М.: Химия, 1973. 265 с.

31. Валери С.Р., Чанк А.Н., Броудин С.Е. Современное состояние вопроса консервирования эритроцитов человека методом замораживания с применением глицерина // Труды II Международного конгресса по переливанию крови. М. (Росссия). - 1972. - С. 115-119.

32. Вассерман А.М., Коварский А.Л. Спиновые зонды в физико-химии полимеров. М.: Наука, 1986. - 242 с.

33. Вертц Дж., Болтон Дж. Теория и практические приложения метода ЭПР. М.: Мир, 1975. - 548 с.

34. Верховская Л.З., Карташов В.Ф., Кощий С.В., Ханина Л.А. Действие алкоксизамещенных глицерина на морфо-функциональные свойства перевиваемой культуры // Криобиология. 1990. - №1. - С. 30-34.

35. Виноградов В.Л., Федорова Л.И. Унифицированный метод криоконсервирования эритроцитов в широком диапазоне температурных режимов (-130+-30 °С) // Тез. III Всесоюз. съезда гематол. и трансфузиол. Т. 1. - Киров (Россия). - 1991. - С. 49-50

36. Виноград-Финкелъ Ф.Р. Консервирование крови устойчивой к замораживанию при температурах ниже 0 °С // Тез. докл. 35 пленума Уч. совета ЦОЛИПК МЗ СССР. М.: (Россия). - 1956. - С. 51-52.

37. Виноград-Финкелъ Ф.Р., Бурдыга М.А., Тальская И.Н. Разработка метода замораживания и длительного хранения эритроцитов с глицерином в диапазоне температур от -25 до -60 °С // Проблемы гематологии и переливания крови.- 1969.- №3.- С. 34-38.

38. Виноград-Финке ль Ф.Р., Федорова Л.И., Кудряшова С.Н. и др. Теоретические и практические аспекты проблемы хранения размороженных эритроцитов в условиях положительных температур // Проблемы гематологии и переливания крови. -1975. №9. - С. 3-8.

39. Виноград-Финке ль Ф.Р., Федорова Л.И., Семенова НЗ. Усовершенствованные растворы для ресуспендирования размороженных эритроцитов после их деглицеринизации // Криобиология и криомедицина. 1979. - №5. - С. 14-20.

40. Виноград-Финкель Ф.Р., Федорова Л.И., Семенова Н.В. и др. Усовершенствование криоконсервирования эритроцитов при ультранизких температурах (-150*-196 °С) // Проблемы гематологии и переливания крови. 1980. - №9. - С. 19-23.

41. Вишневский В.И. Термодинамика выхода воды из спермиев при замораживании // Научно-технический бюллетень. -Харьков. 1974. - №111. - С. 14-21.

42. Владимиров Ю.А. Фотохимия и люминисценция белков. М.: Наука, 1965. 232 с.

43. Вольфензоль Л.Г. Влияние низких температур на клетки рыхлой соединительной ткани кроликов. 1. Изменение размеров фибробластов и гистиоцитов // Реакция клетокна экстремальные воздействия. М.-Л.: Наука, 1963. - С. 74.

44. ВоротЬин О.М., Шраго M.I. Про захисну дпо пол1мергв окису етилену на еритроцити людини при заморожуванш // Доп. АН УССР. 1966. - №5. - С. 638-643.

45. Воротилин А.М. Криоконсервирование эритроцитовчеловека под защитой криопротекторов на основе низкомолекулярных диолов: Дис. . д-ра биол. наук: 03.00.22. -Харьков, 1987. 250 с.

46. Гаврилов О.К., Аграненко В.А. Метод долгосрочного хранения в замороженном состоянии эритроцитов, предназначенных для трансфузии. Метод, рекомендации. М.: Медицина, 1980.- 35 с.

47. Гаврилов O.K., Кузнец Г.И., Черняк Н.Б. Клетки костного мозга и периферической крови.- М.: Медицина, 1985.- 286 с.

48. Гордиенко Е.А. Физические основы низкотемпературного консервирования клеточных суспензий. К.: Наукова думка, 1994. -144 с.

49. Горн Л.Э. К методике количественного определения метгемоглобина в крови // Фармакология и токсикология. 1951. -14. - №4. - С. 37-40.

50. Грек А.М. Изучение некоторых биохимических механизмов действия низких температур и криопротекторов на эритроциты: Дис. канд. биол. наук. 03.00.22. М., 1979. - 132 с.

51. Гршценко В.И., Воротилин А.М., Гучок В.М. и др. Криоконсервирование эритроцитов под защитой криоконсерванта "Пропандиосахароль". Метод, рекомен. Харьков: МЗ СССР, 1990. -12 с.

52. Гршценко В.И., Паращук Ю.С., Дахно Ф.В., Юрченко Г.Г. Криобиология и проблемы бесплодия. К.: Наукова думка, 1990. -136 с.

53. Гршценко В.И., Межидов С.Х., Моисеев В.А., Нардид О.А. Влияние температуры и концентрации различных веществ на микровязкость цитозоля эритроцитов // Биофизика. 1995. - 40. -№1. с. 106-109.

54. Гршценко В.И., Межидов С.Х., Моисеев В.А., Воротилин

55. А.М. Технология криоконсервирования эритроцитов в полимерной таре одноразового применения при умеренно низких температурах // Тези доповщ. III Укршський з'1зд гематол. i трансфузюл. KiiB (Украша). - 1995. - С. 83.

56. Грищенко В.И., С.Х. Межидов. Об увеличении экстинкции хромофорной группы белка в присутствии клеток // Проблемы криобиологии. 1998. - №2. - С. 72

57. Грищенко В.И., Межидов С.Х., Нардид О.А., Розанова Е.Д., Моисеев В.А., Кулешова Л.Г. Об экстинкции хромофорной группы белка в биологических системах // Проблемы криобиологии. 1998. -№4. - С. 18-21.

58. Гулевский А.К. Барьерно-транспортные свойства плазматических мембран в процессе криоконсервирования: Дис. . д-ра биол. наук: 03.00.22. Харьков, 1986. - 374 с.

59. Гулевский А.К., Бондаренко В.А., Белоус А.М. Барьерные свойства биомембран при низких температурах. К.: Наук, думка, 1988. - 205.

60. Гучок В.М. Сравнительное исследование токсичности этиленгликоля, ПЭО-400 и ПЭО-1500 для крыс и мышей в раннем постнатальном онтогенезе // Криобиология и криомедицина. 1980. - №7. - С. 34-40.

61. Гучок ММ., Гучок В.М. Сравнительное исследование токсичности некоторых криопротекторов // Тез. докл. 1-го Украинского съезда гематологов и трансфузиологов. Харьков (Украина). - 1980. - С. 176.

62. Гюнтер X. Введение в курс спектроскопии ЯМР. М.: Мир, 1984. - 478 с.

63. Демченко А.П. Температурные эффекты в электронных спектрах поглощения и структура белков // Молекулярная биология. 1976. - №2. - С. 305-313.

64. Демченко А.П., Зима В.Л., Галанова Т.Ф., Белицер В.А. Конформационные изменения фибриногена и мономерного фибрина, зависимые от рН // Молекулярная биология.- 1978.- №1. С. 148-156.

65. Демченко А.П. Ультрафиолетовая спектрофотометрия и структура белков. К.: Наукова думка, 1981. - 208 с.

66. Дервиз Г.В., Воробьев А.И. Количественное определение гемоглобина крови посредством аппарата ФЗК-М // Лабор. дело. -1959. №3. - С. 3.

67. Жегунов Г.Ф. Биохимические и ультраструктурные основы функциональной активности сердца зимоспящих: Дис. . д-ра биол. наук: Харьков, 1990. 267 с.

68. Зима В.Л., Дечок О.М., Семенов Ю.В. Флуоресцентт i калыцйзв'язуюч!. характеристики индо-1 при взаемоди з бЪпсами // Тези доповщ. П з'1зду Украшського биоф!зичного товариства. -XapKiB (Украша). 1998. - С. 39.

69. Зинченко А.В. Исследование фазовых переходов и физических состояний водных растворов многоатомных спиртов в диапазоне температур -150-Ю °С: Автореф. дис. . канд. физ.- мат. наук: 01.04.15. К., 1984. - 20 с.

70. Зинченко В.Д., Манк В.В., Моисеев В.А., Овчаренко Ф.Д. Исследование межмолекулярных взаимодействий в системе вода -полиэтиленгликоль // Коллоидн. журн. 1976. - №1. - С. 44-50.

71. Зинченко В.Д., Манк В.В., Моисеев В.А., Овчаренко Ф.Д.• Исследование водных смесей полиэтиленгликолей методом ЯМР // Коллоидн. журн. 1977. - №1. - С. 30-35.

72. Зинченко В.Д. Процессы метаболизма макроэргических ф соединений и трансмембранного переноса неэлектролитов и ионовводорода в условиях криоконсервирования: Автореф. дис. . д-ра биол. наук: 03.00.22. Харьков, 1994. - 36 с.

73. Иванов JI.B., Ляпунов Н.А., Цымбал Л.В., Жданов Р.И. и др. Влияние состава двухкомпонентных растворителей на биологические мембраны // Химико-фармацевтический журнал. 1986. - №12. - С. 1437-1442.

74. Ивков В.Г., Берестовский Г.Н. Динамическая структура ® липидного бислоя. М.: Наука, 1981. - 296 с.

75. Кальве Э., Прат А. Микрокалориметрия. М.: ИЛ, 1963.234 с.

76. Каррингтон А, Мак-Лечлан Э. Магнитный резонанс и его применение в химии. М.: Мир, 1970. - 448 с.

77. Кеплен С.Р., Эссинг Э. Биоэнергетика и термодинамика необратимых процессов.- Т. 2. М.: Мир, 1984.- 190 с.

78. Кирошка В.В. Значение факторов среды в обеспечении * устойчивости эритроцитов к действию верифицирующих

79. Ф концентраций проникающих криопротекторов: Дис. . канд. биол. наук: 03.00.22. Харьков. - 1997. - 132 с.

80. Кислюк И.М. Морфологические и функциональные изменения хлоропластов при охлаждении листьев Cucumis Sativus L. // Труды третьего международного симпозиума по цитоэкологии "Клетка и температура среды".- Ленинград: (Россия).- 1964.- С. 47-49.

81. Коварский А.Л., Вассерман A.M., Бучаченко А.Л. Применение парамагнитного зонда для исследования размораживания сегментальных движений в полимерах // ДАН

82. СССР. 1970. - 193. - №1. - С. 132-134.

83. Комолова Г.С., Егоров И.А., Васильева Т.Б. и др. Криолиз рибонуклеазы, предварительно обработанной ультрафиолетовым светом // Изв. АН СССР, сер. биол. 1972. - №1. - С. 146-148.

84. Конев С.В. Электронно-возбужденные состояния биополимеров. Минск: Наука и техника, 1965. 186 с.

85. Костюк П.Г. Кальций и клеточная возбудимость. М.: Наука, 1986. - 256 с.

86. Котык А., Яначек К. Мембранный транспорт. М.: Мир, 1980. - 341 с.

87. Криоконсервирование клеточных суспензий /Под ред. Цуцаевой А.А. К.: Наук, думка, 1983. - 240 с.

88. Кузнецов А.Н., Волков А.Ю., Лившиц В.А., Мирзоян А.Т. Степень несферичности броуновского вращения органических нитроксирадикалов // Ж. физ. химии. 1975. - №7. - С. 1617- 1621.

89. Кузнецов А.Н. Метод спинового зонда (основы и применение). М.: Наука, 1976. - 210 с.

90. Кукушкин А.И. Исследование структурно-функциональных характеристик мембран эритроцитов при замораживании до умеренно низких температур: Дис. . канд. биол. наук: 03.00.22. -Харьков, 1992. 128 с.

91. Кяйверяйнен А.И., Рожков С.П., Суханова Г.А., Франек Ф. Изменение гибкости антител и их взаимодействие с водой при реакции с гаптеном и неспецифических взаимодействиях // Молек. биология. 1982. - 33. - С. 55-58.

92. Лаврик С.С., Полубояринова А.Г., Кушко О.В. Криоконсервирование эритроцитов глубоким замораживанием при применении низкомолекулярного ПВП // Проблемы гематологии и переливания крови. 1973. - №9. - С. 15-19.

93. Лаврик С.С., Когут Г.И. Кровь, холод и жизнь. К.: Наук, думка, 1984. - 71 с.

94. Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии. М.: Мир, 1986. - 496 с.

95. Лениджер А. Основы биохимии.- Т. 2.- М.: Мир, 1985.- 366 с.

96. Леонов Б.Н., Моисеев В.А., Репина С.В., Завадский А.А. Влияние сахарозы на характеристики бычьего сывороточного альбумина в растворе // Рук. деп. ВИНИТИ. М., 1984. - 14 с. Деп. в ВИНИТИ 27.06.84 г., №4387-В84.

97. Леонов Б.Н., Моисеев В.А. Взаимодействие бычьего сывороточного альбумина с полиэтиленгликолем по данным рентгеновского диффузионного рассеяния // Рук. деп. ВИНИТИ. -М., 1984. 9 с. Деп. в ВИНИТИ 28.06.84 г., №4445-В84.

98. Лихтенштейн Г.И. Метод спинового зонда в молекулярной биологии. М.: Наука, 1974. - 255 с.

99. Лозина-Лозинский Л.К. Очерки по криобиологии. Ленинград: Наука, 1972. 288 с.

100. Луговой В.И. Криоповреждение ферментов и ферментных систем // Актуальные проблемы криобиологии. К.: Наукова думка, 1981. - С. 15-40.

101. Луговой В.И., Гусева Н.Р. Проблема продления сроков хранения размороженных эритроцитов // Криобиология и криомедицина. 1983. - №11. - С. 17-23.

102. Луцик М.Д., Панасюк Е.Н., Луцик А.Д. Лектины. Львов: Вшца школа, 1981. - 153 с.

103. Мануильский В.Д. Криорезистентность и вопросы консервации растений при низких температурах: Дис. . д-ра биол. наук: 03.00.22. К, 1989. - 305 с.

104. Маркин B.C., Светина С., Жекш В. Осмотическое сжатие гигантских липидных везикул и гипотеза бислойной пары // Биол. мембраны. 1987. - 4. - №3. - С. 280-289.

105. Марковский А.Л. Влияние факторов криоконсервации на гидратацию глобулярных белков: Дис. . канд. биол. наук: 03.00.22. -Харьков, 1984. 200 с.

106. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Минск: Беларусь, 1987. - Т. 2. - С. 72.

107. Межидов В.Х., Краснобрыжев Г.К., Донченко Н.М. Исследование стабильности пересыщенных растворов солей в условиях трения твердых поверхностей // Ж. физ. химии. 1986. -№3. - С. 606-609.

108. Межидов С.Х., Моисеев В. А., Нардид О. А. Влияние повышенных концентраций хлорида натрия и температуры на состояние цитозоля эритроцитов // Биофизика. 1987. - №3. - С. 528-530.

109. Межидов С.Х., Моисеев В.А. Влияние температуры на вязкость вне- и внутриклеточных растворов // Криобиология. 1987. - №4. - С. 49-50.

110. Межидов С.Х. Влияние температуры на дегидратацию эритроцитов и проницаемость их мембран: Автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.22. Харьков.- 1987. - 24 с.

111. Межидов С.Х. Моисеев В.А., Нардид О.А. Дегидратация эритроцитов компонентами криоконсервирующих сред

112. Криобиология. 1989. - №2. - С. 13-16.

113. Межидов С.Х., Кукушкин А.И. Влияние гемоглобина на барьерные свойства мембран эритроцитов // Ред. ж. Биофизика. -М., 1990. 11 с. Деп. в ВИНИТИ 08.10.90 г., №5278-В90.

114. Межидов С.Х., Моисеев В.А. Влияние температуры на гидратацию эритроцитов // Биофизика. 1991. - №1. - С. 294-298.

115. Межидов С.Х., Воротшш О.М., Мойсеев В.О. Заявка № 93006763 МКИ А 01 N 1/02. Cnoci6 консервування еритроцита. Прюрггет вщ 03.08.93. Пол. реш. 03.08.95 г.

116. Межидов С.Х., Моисеев В. А. Влияние сочетания высокомолекулярных криопротекторов с 1,2-пропан дио лом на сохранность эритроцитов при криоконсервировании // Проблемы криобиологии. 1995. - №3. - С. 46-48.

117. Межидов С.Х., Зинченко В. Д., Щетинский МЛ., Кучеренко Ю.В. Влияние внутриклеточного белка на распределение криопротекторов // Тези доповщ. I з'1зда Украшського товариства крюбюлоги i крюмедицини. Харк1в (Украша). - 1995. - С. 163-164.

118. Межидов С.Х. О роли осмотических факторов в повреждении клеток при их замораживании // Проблемы криобиологии. 1996. - №1. - С. 54-57.

119. Межидов С.Х., Беляева И.М, Воротилин А.М., Моисеев В.А. Влияние сочетания поливинилпирролидона и 1,2-пропандиола на сохранность эритроцитов при криоконсервировании // Проблемы криобиологии. 1996. - №2. - С. 22-25.

120. Межидов С.Х. Повреждение эритроцитов при ресуспендировании в гипертонических растворах // Проблемы криобиологии. 1996. - №4. - С. 51-52.

121. Межидов С.Х., Нардид О.А., Моисеев В.А. Метод ЭПР-спинового зонда в исследовании проницаемости эритроцитов длякриопротекторов // Биофизика. 1996. - №6. - С. 1278-1283.

122. Межидов С.Х. К криоконсервированию клеточных суспензий //Проблемы криобиологии. 1997. - №1-2. - С. 104-105.

123. Межидов С.Х., Моисеев В.А. О некоторых особенностях метода ЭПР-спинового зонда в криобиологии // Проблемы криобиологии. 1997. - №3. - С. 55-56.

124. Межидов С.Х. Подход к оценке цитотоксичности криопротекторов // Проблемы криобиологии. 1997. - №3.- С. 59-60.

125. Межидов С.Х. Влияние концентрации хлорида натрия на состояние внутриклеточного гемоглобина // Вестник проблем биологии и медицины. Полтава-Харьков. - 1997. - №18. - С. 67-71.

126. Межидов С.Х., Моисеев В.А., Линник Т.П. Влияние концентрации различных веществ на соотношение форм гемоглобина внутри эритроцитов // Вестник проблем биологии и медицины. -Полтава-Харьков: 1998, №20. С. 62-65.

127. Межидов С.Х. Влияние концентрации внутриклеточного гемоглобйна на проницаемость эритроцитов для ферроцианида калия // Вестник проблем биологии и медицины. Полтава-Харьков: 1998, №20. - С. 59-61.

128. Мельникова В.Н., Замалетдинова Т3., Кирьянова ГЛО. Метод криоконсервирования эритроцитов при -38±2 °С со сниженной концентрацией глицерина // Тез. докл. Всесоюз. съезда гемат. и трансфузиол. Киров(Россия). - 1991. - С. 61.

129. Меримен Г.Т., Гарнблоуер М. Метод замораживания и отмывания эритроцитов с применением глицерина в высокой концентрации // Труды XII международного конгресса по переливанию крови. М. (Россия). - 1972. - С. 119-122.

130. Моисеев В.А., Лемешко В.В., Нардид О.А. Эффектыкомплексообразования полиэтиленоксидов с биометаллами // Криобиология и криомедицина. 1976. - №2.- С. 19-20.

131. Моисеев В.А., Нардид О.А. Исследование взаимодействия ионов Со2+ с молекулами полиэтиленоксидов методом ядерного магнитного резонанса на протонах // Украинский физико-технический журнал. 1977. - №3. - С. 433-436.

132. Моисеев В.А. Молекулярные механизмы криоповреждения и криозащиты белков и биологических мембран: Автореф. дис. . док. биол. наук: Харьков, 1984. 24 с.

133. Моисеев В. А., Межидов С. X., Нардид О. А. Исследование дегидратации эритроцитов методом спинового зонда // Биофизика. -1989. №6. - С. 993-996.

134. Моисеев Н.Н. Асимптотические методы нелинейной механики. М.: Наука, 1981. - 400 с.

135. Нардид О.А., Моисеев В.А., Межидов С.Х. Исследование влияния низких температур на фазовое состояние цитозоля эритроцитов // Криобиология. 1986. - №3. - С. 18-20.

136. Насонов Д.Н., Александров В.Я. Реакция живого вещества на внешние воздействия. M.-JL: Наука, 1940. - 252 с.

137. Николенко А.В., Компаниец А.М., Кощий С.В., Иванова И. А., Луговой В Л. Влияние веществ ряда полиолов на морфо-функциональные свойства тромбоцитов // Рук. деп. в ВИНИТИ М., 1989. - 13 с. Деп. в ВИНИТИ 28.09.89 г., №6037-В89.

138. Никольский Н.Н., Трошин А.С. Транспорт Сахаров через клеточные мембраны. Л.: Наука, 1973. - 222 с.

139. Новиков А.Н., Вишневский В.И., Душейко А.Г. Влияние ультразвуковых колебаний на первичное зародышеобразование льда в биологических системах // Криобиология. 1982. - №10. -С.19-22.

140. Новиков А.Н., Олейник С.Т., Ишков Г.С., Копейка Е.Ф. Лабораторная установка для отработки режимов криоконсервирования биологических объектов в элементарных объемах // Криобиология и криомедицина. 1983. - №12. - С. 75-78.

141. Нормальное кроветворение и его регуляция /Под ред. Н.А. Федоровой. М.: Медицина, 1976. - 543 с.

142. Олейник С.Т. Инициирование фазового перехода вода-лед в биологических системах при низкотемпературном консервировании: Автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.22. -Харьков, 1987. 16 с.

143. Орлик В.В., Качоровский Б.В., Криворучко Р.А. и др. Длительное хранение эритроцитов при умеренно низкой температуре (-40 °С) и клиническая оценка их эффективности // Криобиология. 1991. - №2. - С. 27-31.

144. Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и длительное хранение спермы производителей. К.: Урожай, 1978. - 256 с.

145. Осташко Ф.И. Биотехнология воспроизведения крупного рогатого скота. К: Аграрная наука. - 1995. - 275 с.

146. Пат. 888896 РФ, МКИ А 01 N 1/02. Способ криоконсервирования эритроцитов / Воротилин А.М., Гучок М.М., Моисеев В.А., Дворцевой В.К. и др. (Украина). № 2913320/SU Заявлено 18.04.80. Опубл. 25/04/97, Бюл. № 2.

147. Пат. 13668 МПК4 G 01 N 24/10. Cnoci6 визначення води в бюлопчних об'ектах /Мойсеев В.О., Межидов С.Х., Нардвд OJV. (Украша).- № 4101692/SU; Заявлено 10.02.86; Опубл. 25.04.97, Бюл. № 2.

148. Пат. 14072 МПК4 G 01 N 24/10. Cnoci6 визначення проникност1 ерггроцитш для осмотично активних речовин / Межидов С.Х., Нардщ О.А., Мойсеев В.О. (Украша).4101692/SU; Заявлено 03.06.86; Опубл. 25.04.97, Бюл. № 2.

149. Пат. 9582А, А 01 N 1/02. Cnoci6 консервування еритроцит1в / Межидов С.Х., Воротшш А.М., MoiceeB В.А. (Украша).- JM° 93060622; Заявлено 22.02.93; Опубл. 30.09.96, Бюл. № 3. С. 3.1.35.

150. Пат. 2009 МКВ A01N 1/02. Cnoci6 консервування ерггрощгпв / Межидов С.Х., Беляева I.M., ВоротЬин О.М., Мойсеев В.О. (Украша). № 93270547; Заявлено 22.03.93. Опубл. 20.12.94, Бюл. № 4. - С. 3.4

151. Пат. 12355А, А 01 N 1/02. Cnoci6 консервування еритроцитш / Межидов С.Х., Воротшш А.М., MoiceeB В.А. (Украша).- JM° 94052995; Заявлено 26.05.94; Опубл. 28.02.97, Бюл. № 1. С. 15.

152. Петров М.М., Кушко О.В., Блоцкая JI.H., Юхимчук Л.Н. Морфобиохимические и функциональные состояния эритроцитов криоконсервированных с глицерином и ПВП на протяжении 5 дней хранения при +4 °С // Криобиология и криомедицина.1980. №6. - С. 50-54.

153. Петров М.М., Кушко .В., Юхимчук Л.М. Криозащитные свойства ОЭГ и влияние на них некоторых добавок экстра- и интрацеллюлярного действия // Криобиология и криомедицина.1981. №8. - С. 43-46.

154. Пичугин Ю.И., Новиков А.Н., Олейник С.Т. Лиотропный ряд криопротекторов // Криобиология и криомедицина. 1984. -№14. - С. 12-13.

155. Пичугин Ю.И. Зависимость цитотоксичности и криопротекторной активности диолов от их структуры и физико-химических свойств: Дис. канд. биол. наук: 03.00.22. Харьков, 1988.- 120 с.

156. Поздняков В.В'. Влияние состава и осмолярности среды на устойчивость эритроцитов к осмотическому и температурномушоку: Автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.22.- Харьков, 1989.- 16 с.

157. Практическая медицина / Под ред. Грищенко В.И., Сандомирского Б.П. К.: Здоров'я, 1987. - 248 с.

158. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Белоус A.M., Калугин Ю.В. Криопротекторы. К.: Наук, думка, 1978. - 204 с.

159. Пушкарь Н.С., Капрельянц А.С., Панков Е.Я. Ультраструктура клетки при низких температурах. К.: Наукова думка, 1978. - 144 с.

160. Пушкарь Н.С., Осецкий А.И., Аненко В.И., Макаренко Б.И. Тензодилатометрия охлаждаемых растворов криопротекторов и тканей // Доклады академии наук Украинской ССР, серия "Б". -1990. №3. - С. 74-78.

161. Радиоизотопные методы исследования в гематологии и трансфузиологии. Метод, рекоменд. К., 1979. - 18 с.

162. Рождественская М.А., Недельский Д.Т., Гуйго Э.И. и др. Быстрое замораживание эритроцитов при использовании низких концентраций глицерина // Проблемы гематологии и переливания крови. 1973. - №9. - С. 19-21.

163. Руководство по неорганическому синтезу / Под. ред. Г. Брауэра. Т. 5. - М.: Наука, 1985. - С. 1617.

164. Руководство по общей и клинической трансфузиологии / Под ред. Б.В. Петровского. М.: Медицина, 1979. - 464 с.

165. Рыжков С.В., Калеко С.П., Петренко Г.И. и др. Результаты низкотемпературного консервирования эритроцитов сглицерином и ПВП // Механизмы криоповреждения и криозащиты биологических структур. К.: Наукова думка, 1977. - С. 92 - 94.

166. Рэ JI. Консервация жизни холодом. М.: Медгиз, 1962.176 с.

167. Саноцкий И.В., Уланова И.П. Критерии вредности в гигиене и в токсикологии при оценке опасности химических соединений. М.: Медицина, 1975. - 254 с.

168. Сахаров Б.В., Волков В.Я. Проницаемость и повреждение мембран эритроцитов при температурах от -1 °С до -9 °С по данным метода ЯМР-релаксации // Биофизика.- 1984.- 29.- № 2.- С. 264-267.

169. Семенова Н.В., Федорова Л.И., Азовская С.А. и др. Криоконсервирование эритроцитов при -30 °С // Тез. докл. 2-го Всесоюз. съезда гематологов и трансфузиологов. М. (Россия). - 1985. - С. 55.

170. Смит О. Биологическое действие замораживания и переохлаждения. М.: ИЛ, 1963. - 430 с.

171. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования / Под ред. Кост Е.А. М.: Медицина, 1975. - 383 с.

172. Стародуб Н.Ф., Назаренко В.И. Гетерогенная система гемоглобина. Структура, свойства, синтез, биологическая роль. К.: Наукова думка, 1987. - 200 с.

173. Стркжов В.Б., Соснина Т.В., Крацберг А.М. Исследование вращательной подвижности иминоксильного радикала (спинового зонда) в полимерах в широкой области частот вращения // Высокомол. соедин. 1973. 15. - №6. - С. 1397-1406.

174. Стусь Л.К. Влияние исходных характеристик эритроцитов на их сохранность в процессе гипотермического хранения крови: Автореф. дис. . канд. биол. наук: 03.00.22. -Харьков, 1987. 16 с.

175. Стусь Л.К., Розанова Е.Д. Осцилляции форм гемоглобина в процессе хранения крови // Биофизика. 1992. - №2. - С. 387 - 388.

176. Суворова И.А., Маркова Н.А., Голубева B.JI. и др. Функциональная полноценность крови, консервированной на растворе с аденином и никотинамидом // Тез. докл. II Всесоюз. съезда гематологов и трансфузиологов.- М. (Россия).- 1985.- С. 40-41.

177. Суханов Ю.С., Семенова Н.В., Азовская С.А., Федорова Л.И. Криоконсервированиеи деглицеринизация эритроцитов хранившихся в электрохолодильниках при -30 °С. Метод, реком. -М.: Медицина, 1987. 29 с.

178. Терехов Н.Т., Полубояринова А.Г., Кушко О.В. и др. Функциональное состояние эритроцитов замороженных с ПВП и их клиническое изучение // Проблемы гематологии и переливания крови. 1977. - №2. - С. 16-19.

179. Терехов Н.Т., Петров М.М., Буденная M.EL, Тимченко Н.В. Долгосрочное хранение эритроцитов методом замораживания при умеренно низких (-60ч~40 °С) температурах. Метод, реком. К.: Здоров'я, 1986. - 16 с.

180. Терехов Н.Т., Петров М.М. Эффективные трансфузионные среды. К.: Здоров'я, 1990. - 166 с.

181. Трошин А.С. Проблемы клеточной проницаемости. -М.-Л.: Наука, 1956. 474 с.

182. Трошин А.С. Распределение веществ между клеткой и средой. Л.: Наука, 1985. - 191 с.

183. Уайт А., Хандлер Ф., Смит Э., Хил Р., Леман И. Основы биохимии. Т. 3. - М.: Мир, 1981.- 721 с.

184. Фаррант Дж. Пересмотр некоторых кробиологических концепций // Криобиология и криомедицина. К.: Наук, думка, 1977. - J№3. - С. 12-20.

185. Федорова Л.И. Состояние и перспективы развития методов криоконсервирования клеток крови в СССР // Гематология и трансфузиология. 1983. - №1. - С. 3-6.

186. Хакл. О.В., Корнилова С.В., Безлепкина Н.А., Благой Ю.П. Вплив глщерину та 1,2-пропандюлу на взаемодпо ioHiB Cu2+ з ДНК у розчинах // Тези доповщ. II з'1зду Украшського биоф!зичного товариства. XapKiB (Украша). - 1998. - С. 32.

187. Цуцаева А. А., Гольцев А.Н., Попов Н.Н. и др. Криоиммунология. К: Наукова думка, 1988. - 176 с.

188. Цымбал Л.В., Моисеев В. А. Исследование термоиндуцированных структурных изменений мембран эритроцитов методом спиновых зондов // Биол. мембраны. 1985.- №2. С. 190- 194.

189. Цымбал Л.В., Гаврилова И.И., Моисеев В. А. Исследование влияния полиспиртов на динамическую структуру биологических мембран методом спиновых зондов // Криобиология.- 1985. №3. - С. 20-24.

190. Цымбал Л.В., Гаврилова ИИ., Моисеев В.А. Влияние температуры и криопротекторов на структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов зрелого организма и плода человека // Криобиология. 1988. - №1. - С. 7-10.

191. Цымбал Л.В., Моисеев В.А. Влияние криопротекторов на мембраносвязанные и цитозольные белки эритроцитов // Проблемы криобиологии. 1992. - №2. - С. 13-20.

192. Чеканова В.В., Ханина Л.А., Луговой В.И., Петренко Т.Ф. Цитотоксичность и криопротекторная активность оксиэтилированных амидов при криоконсервировании перевиваемой культуры СПЭВ // Криобиология. 1995. - №1. - С. 37-41.

193. Чижевский А.Л. Биофизические механизмы реакции оседания эритроцитов. Новосибирск: Наука, 1980. - 177 с.

194. Шаронов Ю.А., Шаронова Н.А. Структура и функция гемоглобина // Мол. биол. 1975. - №1. - С. 145-172.

195. Шраго МИ., Тимченко В.Г., Бредихина Л.П. и др. Низкотемпературное консервирование эритроцитов с криопротек-тором полиэтиленоксидом // Механизмы криоповреждения и криозащиты биологических структур. К.: Наукова думка, 1977. - С. 47-48.

196. Шраго М.И., Бредихина Л.П., Тимченко В.Г. и др. Полиэтиленоксиды в низкотемпературном консервировании эритроцитов: некоторые итоги и перспективы // Криобиология и криомедицина. 1978. - №4. - С. 38-45.

197. Щербакова А.С., Зозуля В.М., Благой Ю.П., Волошин Т.М. Спектроскогачне дослщження зв'язування пистьох пох1дних феназинового барвника з ДНК // Тези доповщ. II з'!зду Украшського биоф1зичного товариства.-Харкш(Украша).- 1998.- С. 33.

198. Юрченко Т.Н., Шар лай Т.М., Волков В.В. и др. Криоконсервация и трансплантация роговицы- К.: Наукова думка, 1986. 152 с.

199. Юрченко Т.Н., Козлова В.Ф., Скорняков Б.А. и др. Влияние криопротекторов на биологические системы. К.: Наукова думка, 1989. - 237 с.

200. Allen E.D., Weatherbee L., Permond P.A. Post-thaw suspensions of red cells cryopreserved with hydroxyethyl starch // Cryobiology. 1978. - 15. - №4. - P. 375-381.

201. Amer K.A., Pepper D.S., Provse C.U. Effect of different resuspension media on the post-thaw characteristics of frozen blood // Brit. J. HematoL 1980. - 44. - №4. - P. 635-644.

202. Asahina E. Prefreezing as a method enabling animals to survive freesing at an extremely low temperature // Nature. 1959. - 184. - P. 1003-1004.

203. Asahina E., Hisala Y., Emura M. Microscopie observations of innocuous intracellular freezing in very rapidly cooled tumor cells. Contributions from the Institute of Low Temperature // Science. Ser. B. 1968. - №15. - P. 35-40.

204. Ashwood-Smith M.J., Warby C. Studies in the molecular weight and cryoprotective properties of polyvinylpyrrolidone end dextran with bacteria and erythrocytes // Cryobiology. 1971. - №5. -P. 453-464.

205. Atkinson M.A.L., Morrow J.S., Marchesi V.T. The polymeric state of actin in the human erythrocyte citoskeleton // J. Cell. BioL -1982. 18. - №4. - P. 493-506.

206. Benesch R.E., Yung S. Equation for the Spectrofotometric Analysis of the Hemoglobin Mixtures // Anal. Biochemistry. 1973. -55. - №1. - P. 245-248.

207. Blottner S., Toursel W., Scheibe I. Quality of erythrocytes cryopreserved at -25 °C // Folia Heamatol. 1985. - 112. - №1. - P. 6-8.

208. Boroske E., Elwenspoek M. Osmotic Shrinkage Giant Egg1.cithin Vesicles // Biophys. J. 1981. - 34. - №1. - P. 95-109.

209. Bricka M., Bessis M. Ser la conservation des erythrocytes par congelation a basse temperature en presence de PVP et de dextran // C. r. Soc. BioL 1955. - №6. - P. 875-877.

210. Caprari P., Bozzi A., Malorni W. et all. Junctional sites of erythrocyte skeletal proteins are specific targes of tret-butyHydroperoxide oxidation damage // Chem. BioL Interact. 1995. -M- - №3. - P. 243-258.

211. Carlsen A., Weith J.O. Glycerol Transport in Human Red Cells // Acta physioL Scand. 1976. - 97. - P. 501-513.

212. Cope F.W. Spin-echo nuclear magnetic resonance evidence for complexing of sodium ions in muscle, brain and kidney // BBA. 1970. - 10. - P. 843-856.

213. Deuticke В., Ruska C. Changes of nonelectrolyte permeability in cholesterol-loaded erythrocytes // Biochem. Biophys. Acta. 1976. - 433. - №4. - P. 638-653.

214. Doebbler G.F., Reinfred H.F. The influence of protective compounds and cooling and warming conditions on hemolysis of erythrocytes by freezing and thawing // Biochem. Biophys. Acta. -1961. 58. - P. 449-458.

215. Dow A., Farrant J., Morris G.J. Membrane leakage of solutes after thermal shock or freesing // Cryobiology. 1973. - 10. - N22. - P. 126-133.

216. Fahy G.M. Vitrification. In book. Low temperature biotechnology / Ed. by J.J. McGath, K.R. Diller. Bed.-Vol 10. - HTD

217. Vol. 98. N.-Y, 1988. - P. 113-146.

218. Farrant J., Woolgar A.E. Human red cells under hupertonic condition: A model system for investigating freezing damage. L Sodium chloride // Cryobiology. 1972. - №1. - P. 9-15.

219. Farrant J., Woolgar A.E. Human red cells under hupertonic condition: A model system for investigating freezing damage. I. Sucrose // Cryobiology. 1972. - 9. - №1. - P. 16-21.

220. Farrant J. Human red cells under hypertonic coditions: A model system for investigating freezing damage. 3. Dimethyl sulfoxide // Cryobiology. 1972. - 9. - №2. - P. 131-136.

221. Farrant J., Knight S.C. McGann L.E., O'Brien J. Optimal recovery of lymphocytes and tissue culture cells following rapid cooling // Nature. 1974. - 249. - P. 452-453.

222. Fisher M., Lindsat D.B. The action of insulin on the penetration of sugars intu the perfused heart // J. Physiol. 1956. - 131. - P. 526-541.

223. Flamm M., Schachter D. Acanthocytosis and cholesterol enrichment decrease lipid fluidity of only the outer human erythrocyte membrane leaflet // Nature. 1982. - 298. - №5871. - P. 292-294.

224. Friderick W., Smith L.A., Winter W.P. Effect of Ugand state on the binding of hemoglobin to the cytoplasmic side of the red cell membrane. 33-rd Annu. Meet. Amer. Soc. HematoL Denver(US), 1991 // Blood.- 1991.- Ж- №10. SuppL - №1.- P. 88a.

225. Fung Y.C.B., Tong P. Theory of sphering of red blood cells // Biophys. J. 1968. - 8. - №2. - P. 175-198.

226. Glycols. / Ed. Curme G.O., Jonston F. N.Y.: Reinhold Publishing Corporation, 1952. - 520 p.

227. Goldfinger D., Lowe C. Prevention of adverse reaction to blood transfusion by the administration of saline-washed redblood cells // Transfusion. 1981. - 21. - №3. - P. 277-280.

228. Goldman S.A., Bruno G.V., Polnaszek C.F., Freed J.H. An ESR Study of Anisotropic Rotationol Reorientation and Slow Tumbling in Liqid and Frozen Media // The Journal of chemical Physics. 1972. - №2. - P. 716-735.

229. Grunze M., Forst B.t Deuticke B. Duel effect of membrane cholesterol on simple and mediated transport processes in human erythrocytes // Biochem. Biophys. Acta.- 1980.- 600.- №3.- P. 860-869.

230. Haest C.W.M. Interaction bitween membrane sceleton proteins and the intrisic membrane domains // Biochem. Biophys. Acta. 1982. - №4.- P. 331-352.

231. Hegedus E., Harsonyi V. Post-storage of frozen-thawed erythrocyte concentrate // Folia HaematoL 1985. - 112. - №1. - P. 9-10.

232. Henry L., Hudlestun В., Levine R. Action of insulin on transfer of sugar across cell membrane the common chemical configuration of sugar affected by the hormone // Fed. Proc. -1952. №11. - P. 56-59.

233. Higgins Ch.E. Reversible agglomeration used to remove demethylsulfoxide from large volumes of frozen blood // Science. -1963. 39. - P. 3554.

234. Jecobs M.N. The quantitative measurement of the permeability erythrocyte to water and to solute by the hemolysis method // J. CelL and Сотр. Physiol. 1934. - £ - P. 161-183.

235. Jecobs M.N. Osmotic properties of the erythrocytes// J. Cell. Сотр. Physiol. 1935. - 5. - P. 197-225.

236. Joslin M.A. Enzyme activity in frozen vegetable tissue // Adv. Enzymol. 1949. - №9. - P. 613-651.

237. Kadem O., Katchalsky A. Termodynamic analysis of the permeability of biologycal membrane to non-electrolytes // BBA. -1958. 27. - P. 229-246.

238. Kahn M.A., Flinton L.J. Evalution of ethylene glycol as a cryoprotective agent for blood platelets // Cryobiology. 1973. - 10. -№2. - P. 148-151.

239. Kapitsa H.G., Saekmann E. Local measurament of lateral motion in erythrocyte membranes by photobleaching technique // Biochim. Biophys. Acta. 1980. - 595. - JSfel.- P. 56-65.

240. Kiroshka V.V., Dvortsevoy V.K., Shetinsky M.I., Zinchenko V.D., Markovsky A.L. Effekt of temperature and high cocentrations of cryoprotectants on red blood cell survival // 31st Annual Meeting. Kyoto (Japan). - 1994. - P. 231.

241. Knetch D.G. Alcohols as ligands. III. Complexes of ethylene glycol with some divalent metal halidex // Inorganic chemica acts. -1973. 7. - №1. - P. 81-87.

242. Keith A.D., Snipes W. Viscosity of Cellular Protoplasm // Sciens. 1974. 183. - P. 666-668.

243. Kurtz S.R., Valeri D.A., Gray A. at aL A approach to washing red blood cells frozen with a high concentration of glycerol in a special freezing container // Vox. Sang.- 1982.- 43.- №3. P. 132-137.

244. Le Fevre P.G. Active transport through animal cell membranes// Protoplasmologia. 1955. - 8. - №7a. - P. 1-23.

245. Leibo S.P., Farrant J., Mazur P. et aL Effect of freezing on marrow stem cell suspensions: Interactions of cooling and warmingrates in the presence of PVP, sucrose or glycerol // Cryobiology. -1970. 5. - №4. - P. 315-332.

246. Levitt D.G., Mlekodey H.Y. Reflection coefficient and permeability of urea and ethylene glycol in human red cell membrane // J. Gen. Physiol. 1983. - 81. - №2. - P. 239-253.

247. Levitt J.A. A sulfhydryl-disulfide hypothesis of frost injury and resistance in plants // J. Theor. Biol. 1962. - 2. - №3. -P. 355-391.

248. Ling G.N. In search of physical basis of life. New York: Academic Press, 1984. - 675 p.

249. Lionetti F.G., Hunt S.M. Cry ©preservation of human red cells in liquid nitrogen with hydroxyethyl starch // Cryobiology. -1975. 12. - №2. - P. 110-118.

250. Lovelock J.E. The Hemolysis of Human red blood cells by freezing and thawing // Biochem. et Biophys. acte 1953a. - 10. - P. 414-426.

251. Lovelock J.E. The mechaanism of the protective action of glycerol against hemolysis by freezign and thawing // Biochem. et Biophys. acte 1953. 11. - P. 28-36.

252. Lovelock J.E. The protective action of neutral solutes against hemolysis by freezing and thawing // Biochem. J. 1954. - 56. - №2. - P. 265-270.

253. Lovelock J.E., Bishop W.H. Prevention of freezing damage to living cells by dimethyl sulfoxide // Nature. 1959. - 183. -№4672. - P. 1394 - 1395.

254. Luyet B.J., Gehenio P.M. Life and death at low temperatures. Monograph, publ. by Biodinamics. Missuri, 1940. - P. 341.

255. Luyet B.J., Gehenio P.M. On the mode of action of glycerinpreventing injury by freezing in embryonic tissues of chick // Science. 1952. - 116. - P. 256.

256. Marchesi V.T., Furthmayr H., Tomita M. The red cell membrane // Annu. Rev. Biochem. V. 45. - Palo Alto Califf. - 1976.- P. 667-698.

257. Macleon I., Ponder E. Solvent water in the mammalian erythrocyte // J. Physiol. 1936. - 86. - P. 147-152.

258. Marinetti G.V., Crain R.C. Topology of aminophospholipids in the red cell membrane // J. SupramoL Struct.- 1978.- 8.- №2. P. 1-23.

259. Mayrand R.R., Levitt D.G. Urea and ethyleneglycol -facilitated transport system in the human red cell membrane // J. Gen. Physiol. 1983. - 81. - №2. - P. 221-237.

260. Mazur P. Kinetics of water loss from cell at freezing // J. Gen. Physiol. 1963. - 47. - P. 347-369.

261. Mazur P., Shmidt J.J. Interactions of cooling velocity, temperature and warming velocity on the survival of frozen and thawed yeast // Cryobiology. 1968. - 5. - №1. - P. 1-17.

262. Mazur P. Cryobiology: The freezing of biological systems // Sciens. 1970. - 169. - №5135. - P. 939-949.

263. Mazur P., Leibo S.P., Chu E.H.Y. A two-factor hypothesis of freezing injury // Exp. Cell. Res. 1972. - 71. - №2. - P. 345-355.

264. Mazur P., Miller R.M Permeability of the human erythrocyte to glycerol in 1 and 2 m solutions at 0 or 20 °C // Cryobiology. 1976. - 13. - №5. - P. 507-522.

265. Mehlhorn J., Candau P., Packer L. Measuraments of volumes and electrochemical gradients with spin probes in membrane vesicles // Meth. enzimoL 1982. - 88. - P. 751-762.

266. Meryman H.T. Cryobiology. New York: Acad. Press, 1966.- 437 p.

267. Meryman H.T. The exeding of minimum tolerable cell volume in hypertonik suspension as a cause of freezing injury / The frozen cell. Ed. by Wolstenholme G.E.W., O'Connor. London: Churchill, 1970. - P. 51-57.

268. Meryman H.T. Osmotic stress as a mechanism of frizeeng • injure // Cryobiology. 1971. - 8. - №5. - P. 489-500.

269. Meryman H.T., Hornblower M. Changes in red cell following rapid freezing with extracellular cryoprotective agents // Cryobiology.- 1972. 9. - №4. - P. 262-267.

270. Meryman H.T., Williams R.J., Donglas M.S.I. Freezing injury from solution effect and its prevention by natural or artificial cryoprotections // Cryobiology. 1977. - 14. - P. 297- 302.

271. Meryman H.T., Hornblower M. Qulity control for deglycerolised red blood cells // Transfusion. 1981. - 21. - №3. - P. 235-240.

272. Meryman H.T. The cryopreservation of blood cells for clinical use // Progr. HematoL 1983. - 11. - P. 193-227.

273. Mikkelsen A., Stokke B.t., Elgsalter A. An electrooptic study of human erythrocyte spectrin dimers. The presence of calcium ions does not alter spectrin flexibility // Biochem. Biophys Acta. -1984. 45. - №5. - P. 95-103.

274. Miller R.H., Mazur P. Survival of frozen-thawing human red cells as a function of cooling and velocities // Cryobiology. 1976.- 13. №4 - P. 404-414.

275. Miyamoto H., Ishibashi Т. Survival of frozen-thawed mouse and rat embryos in the presence of ethylene glycol // J. Repod. Fert. -1977. 50. - №2. - P. 373-375.

276. Mlekodey H.Y., Moore R., Levitt D.G. Osmotic water permeability of the human red celL Dependence on direction of water flow and cell volume // J. Gen. Physiol. 1983. - 81. - №2. - P. 239-253.

277. Mollison P.L., Sloviter H.A. Sucsesfull transfusion of previously frozen human red cells // Lancet.- 1951.- 11.- P. 862- 864.

278. Morgan H.E., Park G.R. The effect of insulin, alloxan diabetes and chlorhidrin on sugar transport across the muscle cell membrane // J. Clin. Invest. 1957. - 36. - P. 916.

279. Morris G.J., Farrant J. Effect of cooling rate on thermal shock hemolysis // Cryobiology. 1973. - 10. - №2.- P. 119- 125.

280. Morrison M., Miller T.J., Edwards H.M Protein architecture of the erythrocyte membrane // Progr. Clin. BioL Res. -1981. -51. P. 16-34.

281. Morse P.D. Use of the spin label TEMP AMINE for measuring the internal viscosity of red cells // Biochem. Biophysical Res. Com. 1977. - 77. - №4. - P.1486-1491.

282. Myhre B.A., Nakasako Y.Y., Shott R. Studies on 4 °C stored frozen-reconstituted red blood cells // Transfusion. 1978. - 18. - №2. - P. 199-203.

283. Nash G.B., Meiselman M. Red cell and ghost viscoelasticy. Effect of hemoglobin concentration and in vivo aging // Biophys. J.1983. 13. - №1. - P. 63-73.

284. Nei Т. Freezing injury to erythrocytes. I. Freezing patterns and post-thaw hemolysis // Cryobiology.- 1973. 13. - №3. - P. 278-286.

285. Norman D., Menozzi P., Lester G., Hechter O. Action of insulin on sugar permeability rat diaphragm muscle // J. Gen. PhysioL- 1959. 42. - P. 1277-1299.

286. Orskov S.L. Eine methode zur forlaufenden photographischen Aufzeichnung von Volumanderungen der roten Blutkorperchen // Biochem ztschr. 1935. - Bd 279. - S. 241-249.

287. Orskov S.L. Solvent water in the human erythrocytes // Acta physioL Scand. 1946. - 12. - P. 192-201.

288. Park C.R., Jonson J.H., Wright J.H., Batsel H. Effect of insulin on transport of several hexoses and pentoses into cells of muscle and brain // Amer. J. PhysioL 1957. - 191. - P. 13-18.

289. Parpat A.R., Shull J. Solvent water in the normal mammalian erythrocyte //J. CelL Сотр. PhysioL 1935. - №6. - P. 137-150.

290. Parpat A.R., Shull J. Permeability of the erythrocyte for glycerol // J. CelL Сотр. PhysioL 1935. - №6. - P. 129-136.

291. Pegg D.E., Hayes A.R., Diaper M.P. The mechanism of the packing effect in red cell freezing // Cryobiology. 1985. - 22. - P. 604.

292. Perutz M.F. Nature of Hem-Hem Interaction // Nature. -1972. 237. - №5357. - P. 495-499.

293. Pfeffer W. Osmotishe Untersuchungen. Leipzig. 1877.236 S.

294. Polge C., Smith A., Parkes L. Revival spermatozoa after vitrification and dehydration at low temperatures // Nature. 1949.- 164. №4219. - P. 666.

295. Puchkar N.S., Itkin Y.A., Bronstein V.L., Gordienco E.A., Kozmin Y.V. On the problem of dehydration and intracellular crystallization during freezing of cell suspension // Cryobiology. -1976. 13. - P. - 147-152.

296. Racz Z. Reneficial effect delayed washing on the qualyty of frozen-thawed red cell concentrate // Haematologia. 1982. - 15. -№2. - P. 201-204.

297. Ralston G.B. Physical-chemical studies of spectrin // J. SupramoL Struct. 1978, - 8. - №3. - P. 361-373.

298. Ramjeesing M., Grinstein S., Rothstein A. Intrinsic segments of band 3 that are associated with anion transport across red blood cell membranes // J. Membrane BioL 1980. - 51. - №2. - P. 95-103.

299. Rapatz G., Sullivan J.J. Luet B. Preservation of erythrocytes in blood containing various cryoprotective agents frozen at various rates and brought to a given final temperature // Cryobiology. 1968. - 5. - №1. - P. 18-25.

300. Renard G.E., Bebinet C. High survival of mouse embryos afte rapid freezing and thawing inside plastic strews with 1,2-propanediol as cryoprotectant //J. exp. ZooL 1984. - 30. - №3. - P. 443-448.

301. Rozantsev E.G. Fri nitroxide radicals. New York: Plenum pres, 1970. - 230 p.

302. Roslofsen В., Meer G., Kamp J.A.B. The lipids of red cell membranes: compositional, structural and functional aspects // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1981. - 41. - №156. - P. 111-116.

303. Rousselet A., Guthmann G., Matricon G. et aL Study of the transwerse diffusion of spin labelled phospholipids in biological membranes. I. Human red blood cells // Biochem. Biophys. Acta. -1976. 426. - №3. - P. 357-371.

304. Schaclai N., Yqerabide J., Renney H.M. Interaction of hemoglobin with red blood cell membrares as shown by a fluorescent chromophore // Biochemistry. 1977. - 16. - №25. - P. - 5585-5592.

305. Scheiwe M.W., Nick H.E., Korber C. An axperimental study on the freezing of red blood cells with and without hydroxyethyl starch // Cryobiology. 1982. - №5.- P. 461-477.

306. Shepard M.L., Goldston C.S., Cocks F.H. The H20-NaCI-glycerol phase diagram and its applikation in cryobiology // Cryobiology. 1976. - 13. - №1. - P. 9-23.

307. Shuler K.E., Dames C.A., Laidler K.J. // J. Chem. Phys. -1949. 17. - P. 860.

308. Sigma chemcal company. Catalog. 1994. - P. 1799-1829.

309. Silvares O.M., Cravalcho E.G., Toscano W.M., Huggins C.E. The thermodynamics of water transport for biological cells during freezing //J. Heat Transfer., Trans ASME. 1975. - 97. - P. 582-588.

310. Siminovich D., Singh J., De la Roche A. Freezing behavior of free protoplasts of winter ray // Cryobiology. 1978. - 15. - №12. -P. 205-211.

311. Sloviter H.A., Ravdin R.G. Recovery and transfusion of human erythrocytes after freezing in polyglycol solutions // Nature. 1962. - №4857. - P. 899-900.

312. Solomon H.K., Chason В., Dix J.A. et aL Biomembranes and cell function // Annals of the New York Academy of Sciences. Ed. by Kummerow E.A., Benga G., Holmes R.F. V. 414. - New York: Academy of Science, 1983. - P. 97-125.

313. Staverman A. J. The theory measurement of osmotic pressure //RecL trav. chim.- Paye-Bas Belg.- 1951.- 70.- P. 344-352.

314. Stein W.D. Spontaneous and enzyme induced dimerformation and its role in membrane permeability. I. The permeability of nonelektrolytes at high concentration // Biochem. Biophys. Acta. -1962. 59. - №1. - P. 35-46.

315. Stein W.D. Spontaneous and enzyme induced dimer formation and its role in membrane permeability. II. The mechanism movement of glycerol across the human erythrocyte membrane // Biochem Biophys. Acta.- 1962. 59. - №1. - P. 47- 65.

316. Stein W.D. The movement of molecules across cell membranes. New York-London: Academic Press, 1967. - 369 p.

317. Steponcus P.L., Wiest S.C. Low temperature stress in crop plants // Acad. Press. N.Y., 1979. - P.231-254.

318. Steponcus P.L., Wolfe J., Dowgert M. Effect of low temperatures on biological membranes // Acad. Press. Londen, 1981.- P. 307-322.

319. Strauss D., Megner G., Seidel B. Washed red blood cells stored for 24 hours priorto transfusion // Folia HematoL 1985. -112. - №1. - P. 24-26.

320. Svenson G.P., Bird S.Y., Lloyd J.B. Passive diffusion of non-electrolytes across the lysosome membrane // Biochem. J. 1989.- №2. P. 451-456.

321. Tenford C. The hydrophobic effect of the organization of living matter // Science. 1978. - 202. - №4345. - P. 1012-1018.

322. The Red blood Cell Secend Edition / Ed. by Douglas MacN. Surgenor. 1975. - V.II. - P. 753-797.

323. Thek G., Marsanyi V., Varsanyi G. Vorosversejtek Konservalasa -24-J--30 °C // Transfuzio. 1983. - №16. - Old. 67-72.

324. Toon M.R., Solomon A.K. Transport parameters in the humen red cell membrane: soute-membrane interactions of hydrophilic alcohols and their effect on permeation // Biochem. et Biophys. Acta.1990. 1020. - P. 239-253.

325. Toursel M. Anwendung tiefer temperaturen im transfusionsdienst. I. Nitteilung: Tiftemperaturkonservierung von Erythrozyten bei 196 °C // Dt. Gesudh. - Wesen. - 1980. - 35. - №25. -S. 987-992.

326. Valleojos G.C., McCredie K.D., Freireich E.J. Improved leukocyte collections with HES from patients with chronic myelocytic leukemia //Clin. Res. 1972. - №6. - P. 503-506.

327. Van Deenen L.L.M., De Gier J. Lipids of the red cell membrane. In: The red blood cell / Ed. By Surgener D. N.Y.-San Francisko-London: Academic Press, 1974. - P. 147-211.

328. Van Meer G., Poorthuis B.J.H.M., Wirtz K.W.A. et aL Transbilayer distribution and mobility of phosphatidyl choline in intact erythrcyte membranes. A study with phosphatidyl choline exchange protein // Eur. J. Biochem. 1980. - 103. - №2. - P. 283-289.

329. Whittam R, Ager M.E. Vectorial aspects adenosine triphosphatase activity in erythrocyte membranes // Biochem J. -1964. 93. - №2. - P.337-347.

330. Wick A.N., Drudy D.R. Action of insulins on the permeability of cells to sorbitol // Amer. J. PhysioL 1951. - 166. - P. 421-423.

331. Willams R.J. The surface of PVP and other polymers and their antihemolytic capacity // Cryobiology.- 1983.- 20.- P. 521-526.

332. Yamaguchi Т., Kuroki S., Tanaka M., Kimoto E. Effect of temperature and cholesterol on human erythrocyte membranes //J. Biochem 1982. - 92. - №3. - P. 673-678.

333. Zeuthen E., Prescott D.M. Comparison of Water Diffusion and Water Filtration Across Cell Surfaces // Acta Physiol. Scand. -1953. 28. - P. 77.

Информация о работе

Межидов, Султанбек Хумаидович
доктора биологических наук
Харьков, 1999
ВАК 03.00.19

Диссертация

Проницаемость эритроцитов для криопротекторов и структурно-функциональное состояние компонентов их цитоплазмы на этапах криоконсервирования - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Похожие работы