Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Прогнозирование эффективности трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Прогнозирование эффективности трансплантации эмбрионов у крупного рогатого скота"

АКАДШИЯ АГРАРНЫХ НАУК РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

БЕЛОРУССКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА

На правах рукописи

ЛЕТКЕВИЧ Людмила Леонидовна

УДК 636.2.034.612.6.02

ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

, Об .02.01 - разведение, селекция и воспроизводство сельскохозяйственных животных

А В Т О Р Е Ф Е Р А Т ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ'НАУК

Жодино - 1993 г..

)

Работа .аиаоднеяа а лаборатория траиопданиции эмбрионов ос вдохозяйстаешшс жгаотных Белорусского научно-иселедоватедьсь кнотвтута животноводства. •<

Научим» руководители! доктор о.-х. наук Будевич И.И.,

кандидат биологических наук Звньков A.C.

Официальные оппонвюгм; доктор о.-х. наук, профессор Заввртяев Б.П.,

- кандидат ветеринаршие наук, доцент Федосова H. X.

Вед/де» учреждение) Белоруоокий научио-иоследовательокня ы отитут экспериментальной вегоринарни и СЛ. Выввлеоского

Защита диссертации ооотоитоя " Jé . (¡Ш-djl 1993 г мя »аоедаиин специализированного совета Л 02049.01 при Велор окон ваучнонюоледовательокоминотктуте кадотнояодвтва по axi 2¿2I60, г. Жодияо, уд. Фрунзе, II.

С диссертацией можно ознакомиться s бийлкотёке мнотитута. Аиороферат разослан " /et

/чениВ секретарь специализированном совета, какдвдат

___-л / '

биологических наук,' # ) С.И. Лоокмаком

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ . . , ■ 1.1. Актуальность тема. Трансплантация эмбрионов крупного рогатого окота как биотехнический мотод ускоренного воспроизводства высокопродуктивных животных получила в последнее время широкое распространение. Если технические проблемы трансплантации зароды- , шей у крупного рогатого окота можно считать ревенными, то в вопросах физиологических процессов, контролируемых нейро-зндокринной системой, еще много неизученного. Это лрэиде всего касается индукции оупоровуляции у доноров. Вариабельность чиоха овуляция составляет от 0 до 50 иа донора. При этом индуцирование высокой отвпомп полиовуляции отрицательно оказывается на качестве извлеченных эмбрионов. Проблемным до настоящего временя остается вопрос пови-аоняя результативности эмбриопересадок. Прижавляемооть эародыией оря нехирургичеокон способе перосадки у крупного рогатого скота колеблется и составляет в среднем 50-60,2.

В литературе накоплен определенный .экспериментальный »лториал по изучений -коррелятивной овяэя между концентрацией половых гор-ионов в периферической крови коров -доноров, телок - реципиен-. тоз и уровнем ответной реакции яичников на отимулирупщее действие гокадотропяиов, выходом эмбрионов, их качеотвом и прияив-ляемост&п. Имоидаооя сзедения коакт разноречивый характер.

По мнения ряда авторов (Рябив В .П., 1933; Прокофьев Н.Й., 1983; Квасницкий А .В. и др., 1983; Зрнот Л.К.', Сергееа Н.П.,. 1989; Завертявв Б.П., 1982) целесообразно более детальное исследование гормонального фона и биохимических показателей крови доноров и реципиентов в период подготовки их к трансплантации эмбрионов, что позволят выявить оптимальные параметры для прогнозирования результатов данного метода.

Известно, что реакция животных на введение фолликулостинули-руаиих гормонов сугубо индивидуальна. Поэтому несомненный интерес вред став генетмчвокав предрасположенность ответной реакции яичников доноров на гормональнув стимуляция, в также приживляемо-оти эмбрионов у реципиентов.

Возможность выявления 4вкторов) предопределявших высокий уровень оуперовуляции, получение максимального количества полноценных зародышей и высокув приживляемооть их при пересадках и определило шшн цели и задачи.

1.2. Цель и задача исследования. Поставлена цель разработать способ прогнозирование эффективности трансплантации эмбрионов у крупного рогатого окота.

Для достижения поставленной цели решали следу»цие задачи:

- изучить гормональный профиль и биохимические показатели крови доноров и реципиентов;

| - выяснить степень влияния функциональных нагрузок гокадотропн-нами на гомаостатичеокие показатели крови коров-доноров;

- определить генотипы полиморфных оиотем белков и ферментов крови доноров и реципиентов;

. . _ установить взаимосвязь отдельных показателей крови о уровнен вупвровуляцни, качеством эмбрионов к их приживляемооть»;

- изучит» особенности обмена ведеств и состояние естественной резистеитвооти телят-трансплантантов.

1.3. Научная новизна работы." Разработан опоооб прогнозирована оуперовуляции у коров-доноров и прихивляемооти эмбрионов у реципиентов на основа комплексного биохимического теста.

Выявлена наследственная предрасположенность животных о транс-ферриноя к повмаения ответной реакции яичников на действие екэогвниого гонадотропика ■ прххивляемости эародывей.

Изучено влияние гонадотропкых препаратов на гоноостатичдоки» показателя крови коров-доноров; особенности проявления кетабодвз-ка у телят-трансплантантов.

Разработано "Средство для повалеим прияивляэыости экбрионоз крупного рогатого скота" (положительное рспеннэ Государственной патентной экспертизы от 29.06. 93 г. га выдачу авторского свидетельства по заявке В 5023602) . -,,

1Л. Практическая значимость. Способ отбора корол-донорой я телок-реципиентов по биохииическкн показателям крови прэдлояен для использования о производства.

Метод прогнозирования супэровудяции возол в методические рэ-яонондации: "Метод гормонального вызывания суперовудяции у коров-дсноров" (Ни., 1992).

1.5. Публикация результатов исследований. По тоиз диссертации опубликовано 4 научные работа.

1.6. Апробация работы. Основные положения диссертационной работа яздояекы й обсуждепн на:

71 съезде Белорусского общостга генетиков и селекционеров (г. Торги» 1993); Республиканской научног-практическоИ конференции (г. Минск, 1993); расширенной заседания оотрудникоз отдэп биотехнология БелШПШа (г. Еодиио, 1993).

1.7. Объаи и структура диссертация. ДяссортаЦия излояека ¿а 125

V ^

страницах тайнописного текста, состоят из введения, обзора литературы, собственных иоододований, обсуждения, выводов и практических предложений. Иллпстряровака 23 таблицами. Спиоок литературы вютчавт 169 источников, в тон числе 85 иностранных.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проведена в 1990-1992 гг. в Белорусском НИН зсн-

воадоводотва, «леменнои заводе "Красная звезда", опытно п^оиз-водобойном хозяйстве "Будагово" Пинской, племенном заводе "Кора-дичи" Гродненской и колхозе "Р,аоовети им. К.П. Орловского Ыоги-_ леаокой областей.

Б качестве доноров использовали клинически здоровых коров чер-но-пвотрой породы 4-6 летнего возраста, живой кассой 550-650 кг, продуктивностью 6-8 хыо. кг молока за лактации; реципиентов - телок в возрасте 16-18 месяцев, живой массой 390-400 кг. Рацион кор мления соответствовал нормам ВАСХШ1 (^1985) .

Для стимуляции оуперов/ляции на 10-й день полового цикла приме няхи стандартные фолликулостимулируещне препараты в сочетании с проотагландинама по 4-х дневной схеме. В качестве гонадотропи-нов использовали ФСГ (США) в дозе 40 мг, фоллитропни (Литва) -1200 1Ш проотагландинов - оинтетичеокие аналоги проотагландина $2~вльэотрофан (Ч05Р) в дозе 500 мкг активного вещества по клопростенолу* оуперфаи (Латвия) - 150 мкг по Д-кхопростенолу.

- Отбор коров-доноров, обработку их Говадотропинами, осеменение,

I

извлечение, покое и оценку зародышей, отбор реципиентов и пересадку им эмбрионов проводили по методика ВИХа (1937).

Для изучения гормонального профиля и биохимичеоких показателей плазма крова, у доноров к реципиентов на 6-й день спонтанного полового цикла брали кровь и» яремной вены. Для выяснения степени влияний гормональная обработки «а обмен ввщвотв и содержание половых горноиов у Г | коров черно-пестрой породи аналогов по возрасту и продуктивности била исследована кроя»,взятая на б-Я день спонтанного , к пяяторно на 6-й день Индуцированного оуперовуляторного Щк< «ев.Ойредиленйе квкивнтряции прогестерон», аотрахиола, кортязол», *врок»йка, трчИод*ирони!1я проводили радиоимнунолошмохям методом .л ллборьторм натморфояоги* Белорусского НИН акопврикевталытоЯ

вотеринарии.

Активность щелочной фоофатазы, аланинаминотрансферазы (АЛ), аопартатаминотрансферазы (ACT), содержание общего холестерина определяли фотометричеоким методом, согласно инструкции "1АХБ1Ц" (1982, 1986), гдпкоэу - Q-толуидиновым методом по набору химических реактивов НПО " Биохнмреактив" согласно инструкции (1972), активность лактатдегидрогоназы (W) по Асатиани B.C. (1969)., общий белок - биуретовой реакцией по Колб В.Г. и Какыяникозу B.C. (1976), количество эритроцитов и гемоглобина- фотомзтрйчеоким методом по Кудрявцеву A.A. и др. (1974).

7 опытного поголовья коров-доноров и телок-реципиентов изучала наследственно обусловленные полиморфныо сиотекы белков и ферментов кровн. Наоледотвешив типы траисферринов ( Т | ), церулоохаз-ийнов (Ср), амилазы I (Am I) и амилазы П (Ам П) определяла методой электрофореза о крахмальном геле о использованном прерывистой системы буферов по Ганэ (Методические рекомендации, Зодино, 1980)< Расочятаны частоты генов локусоз по общепринятой котодпжэ (Тихонов В.Н., 1967).

Для изучения биохимического и нммунологичоокого статуса телят, полученных методом трансплантации эмбрионов была сформированы две группы: опытная и контрольная. В опытнув группу вошлн телята-трано-плантанты, в контрольнув - телярц, полученные методом иоцуоотаенно«-го осеменения. Кровь для исследования у них брали из ярёмной вены в возраоте 3, 9 и 12 месяцев, "

О состоянии естественной резистентности организма подопытных телят судили по величине изменений морфологичеоккх, биохимических я иммунологических показателей крови: количество лейкоцитов, содержание гемоглобина и эритроцитов, глмкозы, общего болка, активность АСГ п АЖГ определяли по методикам указанным выше; рвзервнув

иелочнооть.по Раевокону, белковые Фракции - электрофорезом на агаровом геле, бактерацаднув активность оылоротки крови по Смирновой 0.6, к Кузьминой Т,А.<19бб), лизоцимнув активность по До-рофзйчуху'В.Г. ({968), активность лизинов по Бухарину О .В. ((970) китеноивнооть накопление в крови нормальных агглвтининов -поотаиовкой реакции агглютинации.

Полученный екопериментальный материал обработав методом биологической статиотики по Рокицкоцу П.(1974).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

3.1. Сравнительное изучение гормонального отатуса и биохимических показателей крови коров-доноров в связи о уровнем оуперовуляцаи, количеством и качеством извлеченных ембрионрв

Анализ экспериментальных данных позволил выявить зависимость величины ответной реакции яичников доноров от некоторых изучаемых биохимических показателей крови. Особенно отчетливо это вы-рахено вотыояенин концентрации прогестерона (табл. X).

Доноры)при низком содержании прогестерона в плазме крови - в среднем 1,20 нг/мл^е реагировали на гормональну» обработку. С возрастанием показателя до ¿,03 нг/мл овулировало 3-6 фолликулов, а при 2,69 нг/мл наблюдалось статистически достоверное возрастание чиола овуляций до 7-12 на донора (Р 0,01). Однако, нами не установлено тенденции дальнейшего роота концентрации гормона в случае, когда число желтых тел > яичниках было в пределах 13-19 (X < 0,01).

При минимальной концентрации эстрадноли в крови на уровне 20, 69 пг/мл I кортизола в пределах 10,09 нг/мл получено т<сиииьио< чноле овуляций на донора (13-19).

Таблица!. Уровень оупзровуляцаи в зависимости от.

гормонального фока крови короэ-доноров

Показателя

-___Г£уппи, _чиоло_ов/ляциИ _ _

I. п«~10 _ п~-~15 71У, ~п*"-~9~ _ 0-2___: 3-6 V 7-12~ ~ Т ~13-Ъ~ "

Прогестерон, нг/ил 1,20^,15 2,03^0,26 2,6^,31** 2,61^0,42**

Эотрадио!, пг/мл 25,78^4,54 25,49+4,63 24,58^,30 20,69+1,53

Кортизол, кг/мл 12,57+3,50 12,05^2,73 12,75+1,38 10,094,33

Т3, нг/мл 0,86+0,03 0,89+0,11 0,88^0,06 0,85^0,09

мхг/100 ил 3,93+0,48 3,71^0,50 3,72^0,18 3,23+0,37

Здесь я далзо : * Р< 0,05, *х Р-: 0,01

Содержание трийодтаронина а тирокойка а плазме крови зиготных всех групп по повлияло кз ответнуэ роакциа яичников доноров на го-падотропин.

Установлена связь мзяду числом овулировазаих фолликулов в вич-

пиюх и котабохичаской актийностьо организи» каютных в период, .

предявотаувщий введении гонадотропннов (та5л. 2).

Таблица 2. Уровень суперовуляцил в зависимости от биохимических показателей хровн доноров

:______Г2?£пЙ»_ч20Л°_<,2У£яйв2___ _____

Показателя : I п - 10 :П п ■ II : Н п » 15 _ ¿17 п" 9__

________Г 2 ~ V Ж ~ "Г 1ЪЧ III _ I-

мзГмк^о^Я®" 0,66+0.13 0,97+0,23 1,03+0,17 1,12+0,03*

ЦТ, икмоль/л 0,26^0,03 0, ЗэТо, 04 0,24+0,03 0,31+0,07

1СТ,мкиоль/л 0,67^0,04 0,70^,04 . 0,63^0,04 0,55^0,06

1ДГ, од.акт. 580,03+ 534,07+ $69,80+ 543,13+ „ 41721 51746 50741 67743

'локоза, №% 63,69+5,5 57,07+5,31 61,03+4,51 61.75+6,2

Збций бедок,г* 8,17+0,42 8,70+0,33 7,99+0,29 7,30+0,39хх

Солосторин, 110,12+ 122,77+ 127,85+ 143,32+„ №/100 Н' 8755 ' 11729 9722 6758**

Так. прц сродней активности щелочной фоофатазм 0,66 мкмоль/л реакция яичников' на гонадотропмн отсутствовала. С ее повышением от 0,97 до 1,12 мкмоль/л наблюдалось увеличение числа овуляций соответственно о 3-6 до 13-19. Статистически достоверным было различив показателя активности щелочной фоофатазы между животными 1У и I групп (i * Q,05) .

По активности ферментов AIT, ACT, 1ДГ. содержанию глвкозы животные опытных групп не различались.

Наблвдалась обратная зависимость между содержанием общего бедка плазмы крови м числом овуляций на донора. При снижении концентрации общего белка о 8,70 г$ (П группа) до 7,99 гД (Iii группа) и далее до 7,3 rt (17 группа, Р-: 0,01), выявлена тенденция к возрастание общего количества овуляций на донора. В то же время у животных I группн^имевцих среднее по величине значения показателя 8,17 vi наблвдалось отсутствие реакции.

По содержанка общего холестерина прослеживается прямая связь

между его концентрацией в плазме крови и ответной реакцией яични-«

ков на гормональнув обработку* Животные I группы о содержанием общего холестерина в среднем 110,12 мг/100 ыл не реагировали на гонадотропин, а с дальнейаим его увеличением во 122,77 (П группа) до 143,82 мг/100 ил (17 группа) соответственно возрастало чиоло овуляций о до 13-19.

Выявлена определенная закономерность между содержанием гормонов в крови доноров на б-й день полового цикла и количеством извлеченных эмбрионов (табл. 3).

7 животных I группы о концентрацией прогеотерона в среднем £,53 кг/мл извлечение оказалось безрезультатным. При содержании гориова ш уровне 2,50 кг/мл (П группа), 2,14 (1) и 2.Э1 нг/мл (17 группе) получен* соответственно 1-6, 7-12 и 13-19 зароднией.

Таблица 3. Связь количества извлеченных эмбрионов с содерханиеи гормонов в крови доноров

-----------_---------------:----•--->

:__Г£уппы,_количеотво извлеченных эмбрионов _

Показателя п - 8 _:П,_п_«_15 _ п ■ 7__îï/~ п W

_________С _ loi I 1С Jz6! I ~ I _ I ~

Прогестерон, нг/нл .1,53+0,42 2,50+0,30 2,14+0,24 2.81+0,49

Эстрадиол, пг/мл ¿1,94+3,60 29,18+4,01 22,91^2,06 18,ЭШ. 13

Кортизол,нг/мл 17,99+5,58 14,014,99 10,73+1.99 10,224,28

Т3, нг/мл 0,87+0,11 0,88+0,05 0,79^3,11 0,81+0,12

Tv мкг/100 мл 2,98+0,47 3,33^,16 " 3,61+0,39 3,3ö7o,36

От 13 до 19 эмбрионов получено нами у животных I/ группы имея-

щнх наиболее низкой содеряание в плазме крова эстрадиола в корти-

зола соответственно 18,31 пг/мл и 10,22 нг/мл.

Но установлено существенных различий при изучэпяи биохимически

показателей кровя между животными опытных групп (табл. 4). .

Таблица 4. Св^зь количества извлеченных эмбрионов q биохимическими показателями кровя ; доноров

Гр£ппыь количест£о_нзвлвченныг_эмб£Ионов_ ^ Показателя : I, п - 8 п - 15 ¿Ш, п - 7 iIJt П"_б_

_________А : : х il _ г-! : : 1 jys11 i*z 1ъч _

Щелочная фос^за, ^^ ^^ ^^ ^^

А.ТГ,мкмоль/л 0.32f0.04 0,30^0,04 0,29+0.07 0,39+0,08

ACT, мкмоль/л 0,71+0.04 0,68f),04 0,72^0,05 0,64+0,09

ДДГ, еД.акт. 586,09+ 531,80+ 606,85+ 546,67+ '

56729 42701 88741 . 337Ю

Глвкоза, мг* 65,00+5,03 61,40+4,82 59,00±3,56 59,17+5,86

Общий белок. т% 8,31+0,52 8,28То,27 7,22^0,21 7.43+0,45

Холестерин, 119,47^ 130,797 I4I.47+ 145,37+

мг/100 мл 13750 8756 13728 6,17"

Тем не менее, у доноров I группы с а.;тивносты> щелочной фосфа-тазн в средней 0,81 мкмоль/л эмбрионы не были обнаруженн •

ров Q, В и Ц групп, где активность фермента была заметно выше и равнялась 1,18; 1,04 и 1,04 мкмоль/л, извлечено I-б, 7-12 и 13-19 «ародыяей "на донора. .

Содержание общего холестерина в плазме крови имело прямув, а обцеге белка-обратнув связь с общим амбриообором. При их концентрации соответственно 119,47 иг/100 мл и 8,31 т% (I группа) эмбрионы не были обнаружены . С повышением концентрации общего холестерина со 130,79 до 145,37 мг/ЮО мл и снижением общего белка о 8,23 до 7,43 т% возрастало количество извлеченных зародышей на донора от 1-6 до 13-19.

Установлена определенная зависимость между концентрацией гормонов и содержанием метабилитов в плазме крови доноров с одной стороны и качеством полученных зародышей с другой (табл. 5, 6.).

Таблица 5. Концентрация гормонов в плазме крови доноров и пригодность эмбрионов к пересадке

: _Г£уппы,_п£иго4ность_эмй£ионов_к_первсадкв_

Показатели К й Г 11 К £ 1 К.

¡яйцеклетки¡непригодные:пригодных :пригодных

Прогестерон, нг/мл 3,37+0,50 2,«+0,24 2,50+0,35 2,45^0,27

Эотрадаол, пг/мл 16,95^2,86 24,90^6,29 25,11^4,03 21,224,72

Кортизол, нг/мл 9,17^1,03 11,38*2,28 13,60*2,19 10,354,55

Ту нг/мл 0,74+р,04 0,70*0,07 0,96+0,05 О.ЗЗТО.Н

мкг/100 мл 3,96+0.25 3,97+0,25 3,98^3,38 3,22Д),31

7 животных I группы, где били извлечены только неоплодотворенные яйцеклетки, уровень прогестерона ооотавил 3,37 нг/мл. При содержа aim гормона а плазм* крови 2,17 нг/мл (П группа) были подучены л 1иь эмбрионы(непригодные для пересадки. Оптимальная концентра* цмя прогестерона, позволяющая получить зарчдыии пригодные для пе-

paсадка в количество от I до б группа) и от 7,до 12 (1У группа), находилась в пределах 2,45-2,50 «г/ил. Сннпеиие содержания эстрадной а среднем до 16,95 пг/нл в периферической крова яивот-i

т "

пых I группы, перед введением им экзогониых гонадотропинов, taiura

негативно отразилось на оплодотворяемаоти яйцеклеток. При последув-

e;sh повышении его уровня в кровн до 21,27-25,11 пг/нл извлечены

как качественные (Й н 1У группы), таа в непригодные (П группа) для

пересадки зародшн. ■

Таблица б. Активность ферментов, содвргатгэ иетабо-

литоа п плазме кров» доноров н пригодность . извлеченных эмбрионов к пересадкэ

Группы,_п£агодность^эмб£ионов_к_пересадке_ _ Показателя :1, п ■ б__п » 0 _ ; 13_:1Уг_п_и_5_

:яйцеклеткн : непригодные :пригодная:пригодных

йолочная фосйвтаза,

итохь/я 0,80+0,07 1,05+0.2*} 1,05+0,20 1Д2А09

ДЗТ, мкноль/л 0,3743,05 0.29+0,06 0,3043,04 0,2843,03

ACT, нкмоль/л' 6,57+0,08 0,7043,07 0,65+0,03 0,80+0,04

ЛЯ, од.акт. 533,00+ 522,ООТ 531,03+ 527,00+

55731 68703 51707 96763

Глзкоэа, иг* 57,17+4,16 62,50+4,81 58,15^5,75 60,20+4,23

Общяй белок, т% 7,82^3,28 7,4943,40 8,07^,28 7,5343,53

Холестерин, 126,63+ ■ 131. боТ , 131,86*. 135,16+

да/100 ил 9703 9756 II717 1/733

Наня также установлено, что у ишвотпых I группа показатель активности щелочной фоо$атазы составил 0,80 икколь/л (табл. б). От них получены жшь яйцеклетки. С возрастанием активности фермента до 1,05 (i rpynni) п 1,12 мхмоль/л (If группа) увеличился выход качественных эмбрионов соответственно до 1-6 и 7-12. Аналогичная связь обнаружена при изучении концентрация в кровя доноров общего холестерина. Яйцоклетки получэнн от доноров I групгш с наиболее низким уровнем метаболита 126,63 иг/100 мл. 1 тсвотных 1У группы

при максимально* цовыиении концентрации холестерина а среднем до 155,16 мг/100 мл нами вымыто 7-Х2 жизнеспособных эмбрионов на до-кора. Содержание общего бедка,да отразилось на качестве извлекаема эародшнв.

По остальным изучаемым показателям плазмы крови закономерностей не выявлено..

Таким образом, гормональный статус и состояние обмена веществ организма коров-доноров перед подготовкой их к оуперовуляции оказывают определенное влияние на результата гормональной обработки. Наиболее высокие результаты (7-19 овуляций на донора) получены при концентрации прогестерона в плазме крови а пределах от 2,61 до 2,69 нг/мл, активности щелочной фоо^атазы от 1,03 до 1,12 мкмоль/д, содержании общего холестерина от 127,85 до 143,82 «г/100 мл, общего бедка от 7,30 до 7,99 Биход жизнеспособных эмбрионов также овя-зан о вышеуказанными показателями.

3.2. Влияние экзогенного гонадотропина на содержание гормонов, метаболитов и активность ферментов а • крови короа-донороа

В результата проведенных исследований установлено, что содержание в кровм животных гормонов яичников, щитовидной жвлезы, коры надпочечников существенно отличается при естественном и индуцированном половой цикле (табл. 7).

Таблица 7. Гормональный фон крови коров-доноров при суперовуляции

:Коли- _____Изучаемые_показатйли________

Группы " Прогвсте-:Эотради:Корти- : 'Г3 : Т4

Л#ниу« Рвя» нг/ :ол,пг/млзол,нг/;нг/мл :мкГ/100м, 5ватных. ^ г_ ¡и_ ^___: ил : _ _ :____

2,14+ 25,36+ "9795+" ~о7'/1+~ Х91+" 0,23 3,04" 3,40 0,05 0,28-

7,04+¥ 48,17+ 19,82+ 0,78+ 4,19+ 1,601х 5,39" 4,38" 0,0Г 0,42х

X' II контрольная

П 13

опытная

Так, концентрация прогестерона перед извлеченном эмбрионов по- \ высилась на 4,90 нг/нл (7,04 против 2,14 нг/мл на 6-й день спонтанного полового цикла, Р < 0,05).

Нчми выявлено также повышение уровня эстрадиола в плазме крова доноров опытной группы. Вели в опонтанном цикле количество старой«-да в крови роотавило 25,86 пг/мл, то в оуперовулированном достигло 48,17 пг/мл.

Полученные нами данные по содержании в крови кортизола и тироксина свидетельствуют о повышении функциональной активности надпочечников и щитовидной железы у животных П-й группы. В индуцированном цикле, по. сравнении с естественным в 2 раза увеличивается содержание кортизола в крови (19,82 против 9,95 нг/мл), заметно возрастает концентрация тироксина (4,18 против 2,91 мкг/100 мл).

Инъекции гонадотропина и последующие физиологические процесои на вызвали существенных изменений в морфологическом состава крови доноров.

Супвровулированный цикл характеризовался лишь незначительный повышением содержания гемоглобина и эритроцитов в крови по сравнении о контролем (соответственно 12,06 г£ и 6,65 млн/мм^ против 10,99 и 6,33 млн/мм3) и снижением количества лейкоцитов в ней (7,23 против 7,62 тыс/им^) .

Экспериментальные данные показывает, что в результате индукции суперовуляции содержание гликозы увеличилось о 67,66 до 71,71 мг#. Одновременно отмечено возрастание в крови и уровня общего холестерина со 110,40 до 136,39 мг/100 мл у доноров на б-й день суперову-лированного цикла в сравнении о таким ж* периодом естественного. Содержание общего белка почти не изменилось (8,28 против 8,35 г,£).

Введение гоиадотропного препарата способствовало подъему активности щелочной фо о<1а та ян почти в два раза. Воли в начало лвтеино-

' вей фазы естественного подового цикла уровень ее активности составил 0,78 мкмохь/д, то в аналогичный период оуперовулированного вэз-роо до 1,30 ккноль/д. Но установлено существенных изменений в вк-«квностн ферментов 1ДГ, АЛГ, ACT.

Изучение Гуморальных факторов защити организма коров-доноров показало, что у ЖИВОТНЫХ II группы днзоцимная активность сыворотки ерови была достоверно тяв, чей у коров из группы контроля (табд.8),

Таблица 8. Показатели естественной резистентности доноров при суперовуляции

:Коли- J_____Покодаголк________

Труппы J^nS0! днзоцимная J БАСК, нормальные аг-5ных 1 активность, * t % гглптиншш,титр

контрольная 6 7,48±0,20 25,60+0,70 1:36+4,85

опытная 6 4,80^, 30х* 23,44*1,35 1:31+3,67

Волн до введения гонадотропина она составляла 7.48$, то в аналогичный период полового цикла перед извлечением эмбрионов - 4,001 (Р< 0,01).

Установлено незначительное снижение бактерицидной активноотн сыворотки крови о 25,60^ на б-й день спонтанного полового цныа внвотных до при подиовудяцяи, а также нормальных агглвтнаи-

нов с 1:36 де Il3I.

Приведенные данные овидетельотвувт о том, что суиеотвувкие в каотолчее время приемы оинхронизации-отимуляции множественной овуляции фолликулов н последувций за этим процесс роста и развития желтых тел оказывавт определенное влияние на остесгвеннув горшка льнув регуляций, интенсивность обменных процеооов и состояние защитных сих организма животного.

3.3. Изучение биохимических показателей крови телок-реципиентов а связи о прннивляеко-стьа эмбрионов

Исследования показали, что результативность эибриоперасадов зависит от концентрации прогестерона в периферической крови реципиентов (табл. 9).

Таблица 9. Влияние концентрации прогестерона в крови телок-реципиентов на прнживляемость эмбрионов

Группы

Концентрация йрогеотерона, нг/мл

КоличеотвоИз них стельных

животных.

:голов :

I

П

а

и

т

<I

1-1,9

2-2,9

3-3,9 4 н 7

Всего

8 22 38 13 10

91

2 9 28 7 3

49~

25,0+15,33 40,940,46 73,7+ 6,68х* 53,843,83х 30,0*5,23

Ъ'вЪ'гЗ ~

1 реципиентов о содержанием прогестерона в крови менее I нг/мл (I группа) процент стельности был самым низким и составил 25,0. С увеличением его количества до 1-1,9 нг/мл (П группа) приживляемое» эмбрионов повысилась до 40,9;2. Статистически достоверный установлен

показатель стелыгости для реципиентов 9 и II групп по сравнение о I соответственно 73,7 и 53,82 против 25,Однако, при дальней-аен повышении уровня прогестерона до 4 н более нг/мл прихиаляемооть эмбрионов снизилась и составила 30,0?. Обцвй процент стельности за период проведения опыта ооотавил 53,6.

По содержании зотрадиола я трийодтиронииа в крови стельные а оестельнне животные мало различались (табл. 10). Концентрация их а обеих группах была почти одинаковой а ооотавнла ооответотввнпо 23,52 и 25,39 пг/мл; 1,00 и 1,05 нг/мл.

Таблица 10. Гормональный профиль крови реципиентов к приживляемооть эмбрионов

¡Коли- : Содержание гормонов

Группы

: во : эстрали-: нг^Зл : ТА, :кйртизол, :икг /100 : нг/мл

.•годов : ол, пг/ид:

: » : : мл

t

Стельные 49 23,524,47 I,00ip.04 3,76+0,11*26,34+5,21

¿•отельные 43 25,39+1,89 1,05+0,05 4,33+0,21 Э1,94±7,7Э

Установлены рааяичия по концентрации Т^ я плазме крови реципиентов полученной перед пересадкой в связи о ее результативность», кивотнне^отввдше отел1>ныИИ;имели достоверно более низкий его уро-авяь.По сравнении в бесплодными (3,76 мкг/100 ил против 4,33 шаг/ 100 мл, при t-i 0,05).

Прослеживается тенденция к повышенно эффективности эмбриопере-садок со снижением концентрации кортизола о 31,94 до 26,34 нг/мл.

В ходе исследований нами изучены морфологические я биохимические показатели крови опытных телок-реципиентов в связи о прижив- , ляемоотьв амбрионов (табл. II).

Выявлены различия по содержание гемоглобина в крови реципиентов I (12,7 г$) л й (11,38 г$) групп. Количество эритроцитов, лейкоцитов, активность щелочной фоофатазы, AIT, ACT, ХДГ, концентрация гликозы ; животных опытных групп почти не различались.

1 стельных реципиентов содержание обнего холестерина в плазме крови Перед пересадкой зародышей составило 110,0 иг/100 мл, что окаевхооь достоверно выве в сравнении о неотельными животными, у которых его концентрация была равна 97,68 мг/100 ил (? * 0,05).

Стельные реципиенты отличались также пониженный содержанием обчего бедка в плазме крови в сравнении о нестельными. Количество его у животных I группы составило 7,24 ri, П - 8,06 т% (Р<0,05).

Таблица II. Морфологические и биохимические показатели крови реципиентов и результаты эмбриопервсадов

: Группы

Показатели . j 7 ' ц ~

_____________^стельные,47_ _иестельные,_п; 43_

Гемоглобин, т% 12,07+0,37 11,38+0,21

Эритроциты, млн/мм3 6,82+0,24 6,36+0,16

Лейкоциты, тыс/мм 3 6,50^0,20 6,40^0,16 Щелочная фосфатаза,

мкмоль/л 0,90+0,05 ' 0,82+0,11

А1Г, мкмоль/л 0,25^0,02 0,244),01

ACT, ыкмоль/л 0,60^3,02 0,68^0,02

1ДГ, ад.акт. 661,98+37,88 685,25±3б,03

Глюкоза, мг2 59,26+¿,34 56,92+1,94

Холестерин, иг/100 мл 110.00+4,46* 97,68^2,74

Общий белок, г% 7,24+0,23* 8,0бТ0,23

Железо, мг2 29,194,77х 23,52^0,65

7 телок I группы наблюдалось превосходство по содержания железа а крови (29,19 против 23,52 ыг#, Р < 0,05).

Таким образом, результативность эмбриопересадок завиоит от гормонального фона и метаболической активности организма реципиентов перед пересадкой. Приживляемооти зигот благоприятствует концентрация прогестерона в указанный период а пределах о» 2 до 3,9 нг/tu, тироксина в среднем 3,76 мкг/100 мх, общего белка 7,24 т%, обцвг« холестерина 110, 0 иг/100 мл, железа 29,19 мг2.

3.4. Наследственно обусловленные типы балков и Ферментов крови у коров-доноров и телок-реципиентов

Проведенные исследования позволила выявить ряд оуцеотвенных различий в концентрации гннов транец ерркноиого локуоА в выборках ягивотных о разкнн уровнем полиовуляции (табл. 12).

Таблице 12. Концентрация аллелей Т£ локуса и результаты гормональной обработки коров-доноров

* • Аллели

Показателе^ _ __ Г " Г" У ^ " Г

0,017+0,017 0,010+0,008 0,025+0,016 О,047^0,025

0,014+0,001

0,043+0,026 0,041+0,028

0,010^,008 0,053^,022

В группах хоров-доноров о ответной реакцией яичников^ ооставля- , вщей 13.овуляций и более, а также у животных, от которых подучено 13 я более эмбрионов,прослеживается закономерность повышения частоты гена Т^ Воли животныв^не реагирующие на экзогенное введение гонадотропика, вмели частоту Т^* 0,383, то о возрастанием числа овуляций до 13 и более чаотота'гена повыоилаоь до 0,547 (Р<0,05).

У доноров, от которых не удалось получить эмбрионы, частота составила 0,403, к при извлечении £3 и более - 0,542. В группах животных о различным количеством пригодных к пересадке зародышей, полученных при извлечении,тенденция сохраняется. Не получено качественных эмбрионов от доноров о частотой Т/ * 0,441, я то же время вымыто жизнеспособных в количестве 7-12 при частоте гена

Геакция яичников, 0-2, п - 30

3-6, п - 51 '

7-12,п - 60

13 И7, п - 32

Извлечено эмбрионов,

0-2, п - 36

3-6, п - 34 7-12, п - 35 13 ii7 , п » 24

Извлечено пригодных эмбрионов,

1-6, п - 50

7-12, п - 47 нет пригодных,

0,383+0,053 0,600^,063

0,402+0,049 0,583^0,049

0,375+0,044 0,600^0,045

0,547^),055х 0,406+0,061

0,403+0,058 0,583+0,058

0,412+0,058 0,588+0,058

0,414+0,058 0,543+0,058

0,542^0,070 0,417+0,070

0,400+0,002 0,590^0,002 0,532+0,051 0,415+0,030

0,441+0,060 0,559^0,060

t

0,532, В группах коров-доноров о различных чаолои оэуляциа и количеством извлеченных эмбрионов о повышением частоты гена ооот-аетотвенно снижается частота Т^.

Закономерностей в распространении аллелей по Ср, Ami н А^П не обнаружено.

У телок-реципиентов изучены генетические сиотвмы белков и фермец-тов крови в связи о приживляемоотьв пересаженных зародышей (табл. 13).

Таблица 13. Концентрация аллелей Т^локуса у телок-реципиентов и результаты эмбриопересадок

Группы ----------Аллели

____А____:___I____:____В___

Стельные, п- 71 0,472+0.042 0,528+0,042 Нестельные.п- 84 0,393+0,038 0,565*0,033 0,042+0,015

Результаты проведенных исследований свидетельствует о имевшихся различиях в концентрации генов транс^ерринового локуоа у стелышх н неотельных реципиентов. Так, у отельных реципиентов частота гена Т^ выше по сравнение с нестельными 0,472 против 0,393.

Чаотота гена \ наоборот, била ниже у животных о приживаим-оя эмбрионом и ооотовила 0,528 против 0,565 у неотельных.

О распространении аллелей по локусам Ср, А* I, А^П у реципиентов закономерностей не установлено.

Результаты наших исследований дает основание предположить о возможности использования наследственно обусловленных, типов трано-феррияов в качестве дополнительных теотоя при отбор» коров-доно-ро* и реципиентов.

3.5« Особенное»« обмена вецеотв и ооотояни* еопот-л*иной реэистентиоотя млят-травоплаитяито*

Для научно-обоонованной оценки эффективности ускоренного воспроизводства крупного рогатого окота о использованием метода трансплантации эмбрионов важно оценить состояние здоровья и устойчивость полученного молодняка к воздействии факторов внешней средн.

Поэтому каин проведено комплексное изучение морфологических, биохимичеоких и иммунологических показателей крови, позволявших каиболее объективно провеоти оценку физиологического состояния и уровня естественных защитных сил организма телят-трансплантантов.

Результаты исследований морфологических показателей крови телят приведены в таблице 14.

„ Т а б як ц а 14.{ Морфологически» показатели крови телят-

трансплантантов

:Воз- • • ____ ___Г £ / П П Ы___

:раст :кео. • • S__.контрольная^__£__опытная ____

:телочки : бычки :телочкя ; бычки

3 6,12¿p,27 8,12+0,73 6,04+0,59 8.20+0,70

0 8,26+0,44 8,8843,35 8,8643,30 8.5543.59

12 5,9L¡Q, 33 6,37+0,87 6,0543.05 7,78¿.00,

3 5,87+0,19 6,36^,16 5,73+0,19 6,54+0,10

9 б,21+0,27 6,5843,32 5,9743,33 7,0143,24

12 6.52+0,21 6,1443,42 6,5043,14 6,6943,21

3 10,66+0,41 12,6043,38 10,70+0,60 12,25+0,53

9 И, 9440,58 12,2743,50 12,7643,30 12,334), 46

12 12,6340,23 11,5340,35 12,25^3.31 12,00+0,18

Лейкоциты,, о тыс/Mir

Эритроциты, млн/мм3

Гемоглобин, rí

Анализ полученных экспериментальных данных указывает на отсутствие существенных различий по количеству лейкоцитов, эритроцитов, в также содержание гемоглобина в крови телят-трансплантантов и их сверстников в изучаемы» воэраотныа периоды.

По содержанке г ли козы, резервной щелочности, общего белка и его фракций, активности АЛ и АСТ опытные и контрольные khbothwj так-

ко но различались.

Показатели лизоцимной,/-лизанной, бактерицидной активности

сыворотки крови, среднего титра антител но отличались от таковых

у сверстников контрольной группы (табл. 15.).

Таблица 15. Гуморальные факторы защиты организма телят-

трансплантантов

:Воз- Г ЙХИйМ_____■«.

Показатели :раот мео. :__контрольная_ _. __опытная _____

« :телочки : бычкн • • телочки : бычки

Лизоцимная

активность, *

_Р>-лизш1нал

активность, * ■

БАСК. $

Нормальные

агглатиншш,

титр

3 3,94+0,23 3,12+0,09 9 4,99+0,43 4,20 4), 36 12 4,28+0,30 4,07+0,57

3 11,0340,67 15,60+1,02 9 18,24+1,45 16,47+1,28 12 19,96+0,88 20,87^0,68

3 13,47+1,34 19,60+0,60 9 22,60+0,82 20,50^0,46 12 21,864),59 24,36+1,14

3 1:10,00+ 1:11,67+ 2,00" 1,67"

9 1:25,71+ 1:21,67+ 2,54- 1Ж

12 1:45,00+ 1:56,67+ 6,20- 12,02х

3,79+0,27 3,25+0.13 5,23+0,28 4,60+0,40 4,834), 15 4,58+0,22

11,06 Л,40 16,00+0,63 20,27+0,99 17,52+1,36 20,20+1,91 21,404), 97

15,59+1,15 19,90^3.89 23,81+0,90 21,92^0,87 22,13+1,88 21,48*1,23

1:11,43+ 1,43х

1:25,71+ 2,54"

1:15,00+ ¿,24-

Х:24,17+ э,г7х

1!М:В*

Таким образом, в результат« проведенных ыооледогаьий установлено, что биотехнический метод трансплантации энбрионов но окаан-гаот отрицательного воздействия ва формирование 8 проявлена* за» цитннх сил организма, физиологическое соотоянйО к интенсивность ойнояинх процвоео» я период роота н рзмтка йолодмва.

ВЫВОДЫ

1. Между уровнем прогестерона в крови доноров на 6-ой день подового никла и ответной реакцией яичников на экзогенное введение гонадотропинов существует определенная зависимость. Концентрация прогестерона от 2.61 до 2,69 нг/мл обеспечивает получение от 7 до 19 овуляция на донора и извлечение жизнеспособных зародыией.

2. Содержание гормонов эстрадиола, кортизола, тироксина и трнй-одтиронина не оказывает значительного влияния на уровень оуперову-ляцни и пооледувщий эмбриосбор. Однако, отмечена тенденция к повы-иоиив количества овуляций у животных со сравнительно пониженным содержанием эотрадиола, кортизола и тироксина в пределах соответственно - 20,69 пг/мл, 10,09 нг/мл и 3,23 мкг/100 мл.

3. Ответная реакция яичников и эмбриопродуктивнооть доноров находятся в прямой зависимости от биохимических показателей крови,' характеризующих состояние обмена веществ в организме. Высокому уровнв оуперовуляции соответствует.активность щелочной фоофатаэы в пределах 1,03-1,12 мкмоль/л, содержание общзго холестерина 127, 85-143,62 мг/100 мл, общего белка 7,30-7,99 г%.

4. Инъекции гонадотропина отимулирувт определенные физиологические процессы в организме коров-доноров, вследствие чего повышается функциональная активность яичников, кора надпочечников и щитовидной железы. Перед извлечением эмбрионов концентрация прогестерона возраотаот почти в три раза по сравнение о соответствуй-щнм периодом спонтанного подового цикла (7,04 против 2,14 нг/мл), еотрадиола, кортизода и тирокоина почти вдвое (соответственно 48, 17 Против 25,86 пг/мл; 19,82 против 9,95 нг/мл; 4,18 против 2,91 мкг/100 мл).

5. Веяние фоллнкулосгимудйрувщкх препаратов не оказывает влияния на" морфологический состав крова. Достоверных изменений

а активности ферментов и содержании метаболитов не установлено. ц Отмечено заметное возрастание в крови концентрации общего холестерина со 110,4 до 135,39 мг/100 мл, а также алтнвноста щелочной фоофатазы о 0,7 до 1,3 нкмоль/д. У животных, обработанных гонадот-ропином, достоверно снижается лизоцимная активность сыворотки крови о 7,48 до 4,30$.

6. Приживляенооть эмбрионов зависит от концентрации гормонов прогестерона а тироксина в плазме крови реципиентов перед пересадкой. Содержание прогестерона в пределах от 2,0 до 2,9 нг/мд, а также от 3 до 3,9 нг/мл способствуй? наиболее успешной имплантации зародышей (.73,7 и 53,8;» отвльностей). Также высока эффективность при концентрации тироксина на уровне 3,76 мкг/100 ид.

7. Результаты эмбриопересадок связали о бнохимичеокими показателями крови реципиентов. Приживляемостн способствует содержание общего белка в среднем 7,24 общего холестерина 110,0 мг/ЮО мл, железа 29,19 иг£.

8. Установлено влияние траноферринового локуса на уровень супер овуляции и приживляеиость эмбрионов. Результативность трансплантации эмбрионов вцие у животных о генотипами АА и АД.

9. Биотехнический метод траноплантации эмбрионов не оказывает отрицательного воздействия на формирование защитных оал организма, физиологическое состояние и интеноивнооть обменных процеооов то-лят-траноплантантов. Иорфологичеокий и биохнмичооюШ ооотаа крови, показатели неспецифической резаотентнооти их существенно не отличается от аналогичных показателей у сверстников, полученных методом искусственного осеменения.

ПРЕ.ДЛОЕВНПЯ ПРОИЗВОДСТВУ I. При отборе *оров-доноров к телок-реципиентов рекомендуется ка б-Я день спонтанного полового цикла определять гормоналмай ота-

туо и биохимически» показатели крови животных. В качество доноров оледует использовать животных о концентрацией прогестерона в пределах от 2,4 до 2,8 кг/мл, общего холестерина 140-155 кг/100 мл, общего белка * 7,3-8,0 г?, и активности, щелочной фосфатазы - 1,03 -I,¿8 мкмоль/л. ПЕресАр,к^ прр&рщиИ реципиентам о

содержанием прогестерона в крови от 2,0 до 3,9 нг/мл, тироксина + '

на уровне 3,76 ккг/ЮО мл, общего белка - 7,24 г£, общего холестерина - 110 мг/10.0 ид, железа - 29,19 мг^.

2. В качестве дополнительного критерия отбора коров-доноров и толок-рециписнтов можно применять наследственно обусловленные типы 1рансферринов. Необходимо отбирать животных о генотипами, по

1 -

трансферриновону локусу АА и АД.

СПИСОК работ, опубликованных по теме диссертации

I. Метод гормонального вызывания суперовуляцик у коров-доноров: Методические рекомендации. - Нн., 1992. - II о. - (БелНИНХ) ( в-соавторстве). .

2.0 возможности использования биохвмичеоких показателей крови при отборе хоров в качестве доноров // 71 съезд белорусского общества генетккев в селекционеров: Тез. докл.- Горки, 1992. - С. 86 »87.

3. Возрастная динамика биохимических показателей крови телят-трансплантантов П Технология получения и выращивания здорового молодняка сельскохозяйственных животных и рыбопосадочного катерка-ла: Тез. докл. Реоп. науч.-практ. конф.- Мн., 1993.- С. 26-27

(в соавторстве).

4. Средстве для повышения приживляемости эмбрионов крупного рогатого скота. Положительное решение Государственной патентной экспертизы от 29 коля 1993 г . на выдачу авторокого свидетелЗЬтва на азобретениаГпо заявке Ъ 5023802 (в соавторство).