Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Профилактика острых кишечных заболеваний новорожденных телят бактериальной этиологии с использованием метаболитных пребиотиков

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Профилактика острых кишечных заболеваний новорожденных телят бактериальной этиологии с использованием метаболитных пребиотиков"

На правах рукописи

АРУШАНЯН АРТАВАЗД ЯГОРОВИЧ

ПРОФИЛАКТИКА ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТАБОЛИТНЫХ ПРЕБИОТИКОВ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

31 ОКТ 2013

Краснодар 2013

005536751

Работа выполнена на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, профессор кафедры микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» Терехов Владимир Иванович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, заведующий

лабораторией терапии ГНУ «Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт РАСХН» Басова Наталья Юрьевна

кандидат ветеринарных наук, ведущий консультант отдела государственного контроля й надзора в государственной ветеринарной инспекции «Краснодарский»

Когденко Наталья Владимировна

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный

аграрный университет»

Защита состоится «22» ноября 2013г. в «1200» часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г. Краснодар, ул. Калинина,

13)

Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» - http: II www.kubsau.ru « Vg » еы&Ъъ-х. 2013г. и официальном сайте ВАК РФ -http: // vmw.vak.ed.gov.ru

Автореферат разослан « И» 2013г.

Ученый секретарь

диссертационного совета ^ " И.А. Родин

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы. Проблема острых кишечных заболеваний новорожденных телят продолжает оставаться актуальной для отечественного скотоводства, поскольку ими ежегодно поражается от 50 до 100% полученного приплода (Д.К. Павлов, 2001). При этом гибель телят от данной патологии в различных регионах страны варьирует от 10 до 70% (А.Г.Шахов, 1999; H.A. Шкиль с соавт. 2003; Е.А. Доронин, 2004; И.В. Якушин, 2005; С.А. Водолажская, 2005; З.М. Бедоева с соавт. 2006; Г.Ш. Закирова, 2007; A.M. Кузьменко, 2011).

Теоретическая проработка причин возникновения острых кишечных заболеваний новорожденных телят показала, что часть авторов придерживается мнения о том, что в основе развития острых кишечных заболеваний новорожденных лежит нарушение обмена веществ у коров-матерей из-за неправильного их кормления (В. Р. Хусаинов, 2006). Другие авторы ссылаются на воздействие неблагоприятных факторов внешней среды, объединяя их в три основные группы: климатические, алиментарные и инфекционные (Г.И. Григорьева с соавт., 2006;). Третьи считают, что острые кишечные заболевания возникают при наличии и взаимодействии целого комплекса факторов (биотических и абиотических), которые имеют место в неблагополучных хозяйствах (В.В. Субботин с соавт., 2002; О.Н. Николаева, 2008).

Однако, несмотря на многообразие этиологических факторов, обуславливающих данную патологию, основным патогенетическим звеном, сопровождающим развитие острых кишечных заболеваний, является условнопатогенная и патогенная микрофлора, что предопределяет широкое использование антибиотиков и химиоп-репаратов в качестве средств не только лечения, но и профилактики.

Между тем, опыт превентивного применения антибиотиков показал пагубность данного подхода, поскольку они могут оказывать негативное влияние на функциональную активность ряда органов и симбионтную микрофлору самого животного.

Известно, что нормальная микрофлора кишечника является неотъемлемым физиологическим компонентом, эволюционно связанным с макроорганизмом, которая защищает от болезнетворных микроорганизмов и обеспечивает физиологическую активность многих его систем (Т.А. Спасская, 1998; A.C. Орешкин, 2000; В.И. Раицкая, 2001; В.В. Субботин, 2002; А.Г. Шахов, 2003; Е.А. Доронин, 2004; С.А. Водолажская, 2005; И.В. Якушин, 2005; Г.Ш. Закирова, 2007; О.Н. Николаева, 2008; Е.С. Петраков, 2010).

Учитывая данные обстоятельства, многие отечественные и зарубежные исследователи приоритет в вопросах профилактики острых кишечных заболеваний отдают препаратам пробиотического и пребиотического действия.

Однако, ввиду специфичности (видовой, возрастной) протекания микроэкологических процессов в организме животных и невозможности подбора препаратов отвечающих индивидуальным особенностям, наиболее перспективным направлением профилактики острых кишечных заболеваний, по нашему мнению, является разработка и использование пребиотиков, средств, способных стимулировать рост собственной индигенной микрофлоры и восстанавливать ее качественный и количест-

венный состав, а вместе с ним и повышать колонизационную резистентность животных.

Цель и задачи исследований. Цель работы состояла в определении эффективности использования метаболитных пребиотиков для профилактики острых кишечных заболеваний у новорожденных телят.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространение и нозологический профиль острых кишечных заболеваний новорожденных телят на фермах Краснодарского края.

2. Изучить особенности становления кишечного микробиоценоза и биологические свойства бактерий, заселяющих пищеварительный тракт новорожденных телят.

3. Изучить состояние кишечного микробиоценоза у глубокостельных коров как фактора влияющего на становление микробиоценоза у потомства.

4. Установить влияние органических кислот и гидролизата крови на рост симби-онтных бактерий и разработать на их основе пребиотический препарат.

5. Изучить влияние метаболитных пребиотиков на факторы резистентности глубокостельных коров и новорожденных телят.

6. Определить профилактическую эффективность метаболитных пребиотиков при острых кишечных заболеваний у новорожденных телят.

Научная новизна. Установлена распространенность и нозологический профиль болезней пищеварительной системы у телят на фермах Краснодарского края в современных условиях. Определены особенности становления кишечного микробиоценоза у новорожденных телят и биологические свойства ряда кишечных бактерий. Изучено состояние кишечного микробиоценоза у глубокостельных коров перед отёлом. Определены концентрации молочной, уксусной и янтарной кислот, обеспечивающие ярко выраженный стимулирующий эффект на рост лактобацилл. Разработан новый препарат с пребиотическими свойствами и установлена эффективность использования метаболитных пребиотиков при острых кишечных заболеваниях у

новорожденных телят. ,..,.„

По результатам исследований получен патент на изобретение № 2491 »31, положительное решение на выдачу патента на изобретение по заявке № 2012145886/15 (087101) и приоритет на изобретение питательной среды для выделения лактобакте-

рий по заявке № 2012154888.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволили выявить основные причины развития острых кишечных заболеваний у новорожденных телят. Определить влияние различных концентраций некоторых органических кислот - продуктов метаболизма симбиотических бактерии на рост лактобацилл и разработать новый препарат, обладающий выраженными пребиотическими свойствами. Установлена профилактическая эффективность метаболитных пребиотиков при острых кишечных заболеваниях у новорожденных телят.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (Краснодар, 2011); V Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (Краснодар, 2011); Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии и фармации» (Краснодар, 2012); Международной научно-

практической конференции к 100-летию СГАУ имени H.A. Вавилова «Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве» (Саратов, 2013); II Международной научно-практической конференции «Современные проблемы животноводства и ветеринарии: состояние и пути решения» (Краснодар 2013); Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых в номинации «Ветеринарные науки» (г. Москва, 2012); научных конференциях сотрудников и аспирантов факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ (Краснодар, 2011, 2012,2013).

Публикации. По материалам исследований опубликовано 8 научных статей, в т.ч. 2 в рецензируемых журналах рекомендованных ВАК и 1 патент.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- Острые кишечные заболевания новорожденных телят достаточно широко распространены на фермах Краснодарского края, нозология данной патологии включает в себя диспепсию, колибактериоз, стрептококкоз, псевдомоноз, анаэробную энтеротоксемию и энтерококковую инфекцию.

- Основной причиной острых кишечных заболеваний у новорожденных телят являются нарушения процессов формирования у них кишечного микробиоценоза.

- Рост симбиотических бактерий можно стимулировать с помощью собственных метаболитов.

- Метаболитные пребиотики оказывают выраженное позитивное влияние как на микробиоценоз кишечного тракта, так и на организм животных в целом.

- Метаболитные пребиотики эффективны в профилактике острых кишечных заболеваний у новорожденных телят.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 132 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, предложений, библиографического списка и приложения. Работа иллюстрирована 30 таблицами и 5 рисунками. Библиографический список содержит 220 источников, из них 31 иностранных.

2. Собственные исследования 2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнялась с 2010 по 2013 г.г. на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии Кубанского государственного аграрного университета в рамках кафедральной темы «Разработка микроэкологических и патогенетических приемов профилактики и терапии факторных инфекций у крупного рогатого скота» (№ госрегисрегистрации 01200113464). Отдельные этапы исследований осуществлялись на базе молочных комплексов УОХ «Краснодарское» (г. Краснодар, п. Лазурный) и ЗАО «Путиловец - ЮГ» (ст. Новолеушковская Павловского района).

Объектом исследования служили новорожденные телята и глубокостельные коровы голштинской породы. В опытах было использовано 50 глубокостельных коров и 242 новорожденных теленка, выделено и изучено 394 изолята бактерий. Изучена антагонистическая активность 48 изолятов лактобацилл.

В ходе исследований проведено: 216 бактериологических, 140 биохимических, 140 гематологических и 140 иммунологических исследований.

Для определения эпизоотической ситуации и нозоформ кишечных заболеваний эпизоотологическое исследование материалов годовых отчетов государственного управления ветеринарии Краснодарского края за 2010-2012 годы.

Изучение особенностей становления кишечного микробиоценоза у телят, проводили по результатам определения количественного и качественного состава фекальной микрофлоры, с 1-го по 10-й день после рождения.

Изучение состояния кишечного микробиоценоза у глубокостельных коров, находящихся в родильном отделении проводили на 10 клинически здоровых животных, у которых фекалии отбирали непосредственно из прямой кишки в утреннее время и в течение 2 ч осуществляли посев на дифференциальные (селективные) питательные среды.

На следующем этапе было проведено 4 серии лабораторных опытов для определения возможности применения молочной, уксусной и янтарной кислоты в качестве стимуляторов роста и селективных компонентов для молочнокислых бактерий.

В качестве тест-объектов использовали микроорганизмы, выделенные из фекалий новорожденного теленка - Lactobacillus plantarum, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

В первой серии лабораторных опытов испытуемые тест-штаммы по отдельности выращивали на агаровых средах (МПА и Квасникова) при температуре 37 С в течение 24 ч. Из полученных культур по оптическому стандарту мутности на 10 ед. готовили миллиардную взвесь каждого микроорганизма, а затем методом десятикратных разведений в стерильном физиологическом растворе доводили их концентрацию до 1000 микробных клеток в 1 мл. Из этого разведения отбирали по 0,1 мл и вносили в чашки Петри с твердой средой Квасникова без мела содержащую уксусную или молочную кислоту в диапазоне от 0,02 до 0,2%. Посевы инкубировали в анаэростате с использованием газогенерирующих пакетов «Анаэрогаз» в течение 24 ч при 37°С, после чего учитывали количество выросших колоний.

Во второй серии лабораторных опытов испытали комбинации кислот при соотношении друг к другу как 1:1, 1:10 и 1:100, при этом суммарный объем ввода смеси кислот в питательную среду составлял не более 0,16%, поскольку при такой концентрации кислот в питательной среде отмечали стабильный подавляющий эффект для E.coli и S.aureus.

В 3-й серии лабораторных опытов подбирали оптимальную концентрацию янтарной кислоты для стимуляции роста лактобактерий. Для этого отдельно выращенные на агаровой среде (Квасникова) культуры лактобактерий (L.plantarum, L.acidophilus, L.casei) использовались для приготовления миллиардной взвеси (10 ед. по оптическому стандарту). Далее полученную взвесь методом десятикратных разведений в физиологическом растворе доводили до концентрации 1000 микробных клеток в 1 мл, из данного разведения отбирали по 0,1 мл и вносили в чашки Петри с твердой средой Квасникова без мела содержащей от 0,001% до 0,1% янтарной кислоты. В качестве контроля использовалась аналогичная среда без кислоты. Посевы инкубировали в анаэростате с использованием газогенерирующих пакетов «Анаэрогаз» в течение 48 ч при 37°С, после чего подсчитывали количество выросших колоний.

Определение влияния гидролизата крови на ростовые свойства лактобацилл проводили в опыте с Ь.рІаіНагиш, Ь.асісІорШІїїз, Ь.саБеі, которые по отдельности выращивались на агаровой среде Квасникова при температуре 37°С в течение 48 ч. По оптическому стандарту мутности на 10 ед. готовили миллиардную взвесь каждого микроорганизма, а затем методом десятикратных разведений в стерильном физиологическом растворе доводили их концентрацию до 1000 микробных клеток в 1 мл. Из этого разведения отбирали по 0,1 мл и вносили в чашки Петри с твердой средой Квасникова содержащей от 1% до 10% гидролизата крови убойных животных. В качестве контроля аналогичным образом засевали чашку с аналогичной средой без добавления гидролизата. Посевы инкубировали в анаэростате с использованием газо-генерирующих пакетов «Анаэрогаз» в течение 48 ч при 37°С, после чего подсчитывали количество выросших колоний.

Изучение влияния гидрогемола-М проводили на культурах Ь.ріапіагит, Ь.аЫ<1орЫ1и5, Ь.сазеі, которые вначале по отдельности выращивались на агаровой среде Квасникова при температуре 37°С в течение 48 ч, затем по оптическому стандарту мутности на 10 ед. готовили миллиардную взвесь каждого микроорганизма, и методом десятикратных разведений в стерильном физиологическом растворе доводили их концентрацию до 1000 микробных клеток в 1 мл. Из этого разведения отбирали по 0,1 мл и вносили в чашки Петри с твердой средой Квасникова содержащей от 1% до 10% гидрогемола-М. В качестве контроля аналогичным образом засевали чашку со средой Квасникова без добавления гидролизата. Посевы инкубировали в анаэростате с использованием газогенерирующих пакетов «Анаэрогаз» в течение 48 ч при 37°С, после чего учитывали количество выросших колоний.

Изучение влияния препаратов Гидрогемол, Гидрогемол-М и Хилак-форте на кишечную микрофлору крупного рогатого скота провели в опыте, для которого было сформировано 4 группы по 10 коров и 10 телят в каждой: 1-я (опытная) — коровы за 10-12 дней до отела с ОР, а телята, полученные от этих коров, с первого дня после рождения с молоком получали Гидрогемол 2 раза в день в течение 10 дней подряд по 500 и 50 мл соответственно; 2-я (опытная) — коровы и телята получали по аналогичной схеме и в аналогичных дозах Гидрогемол-М; 3-я (опытная) - коровы и телята получали по аналогичной схеме хилак-форте в дозе 10 и 1 мл соответственно; 4-я (контрольная) - коровы до отела были только на ОР, а полученные от них телята в первый день выпаивались молозивом, а в последующие дни (до 15-го) сквашенным муравьиной кислотой молоком по схеме принятой в хозяйстве.

Пробы фекалий и кровь для лабораторных исследований отбирали у коров за 1-2 дня до предполагаемых родов, а у телят в первый день после рождения и на 11-е сутки жизни.

Производственные испытания препарата гидрогемол проводились на базе УОХ «Краснодарское» (г. Краснодар, п. Лазурный) в период с 15 октября 2011 г. по 15 февраля 2012 г., а препарата гидрогемол-М в ЗАО «Путиловец-ЮГ» (Краснодарский край, Павловский р-н, ст. Новолеушковская) с 1 июля по 1 октября 2012 г.

Определение профилактической эффективности гидрогемола проводили на 100 новорожденных телятах, из которых 47 были подопытными, а 53 служили контролем. Телятам опытной группы 2 раза в день (утром и вечером) вместе с молоком выпаивали гидрогемол в дозе 50 мл в течение 10 дней подряд. Телятам контрольной

группы выпаивали только цельное молоко. Всем телятам опытной и контрольной групп на 2-й день жизни вводили препарат олеовит, согласно плану профилактических мероприятий, принятых на комплексе.

Профилактическую эффективность препарата гидрогемол-М определяли на 92 новорожденных телятах, из которых 44 теленка составляли опытную группу. Они вместе с молоком 2 раза в сутки (утром и вечером) получали гидрогемол-М в дозе 50 мл на голову в течение 10 дней подряд. Остальные 48 телят служили контролем им, согласно схеме хозяйства, выпаивали молоко, сквашенное 8,5% муравьиной кислотой из расчета 20 мл на 1 литр молока.

За всеми телятами вели наблюдение в течение 15 дней, при том учитывали все случаи заболевания и падежа. Для определения среднесуточного прироста телят взвешивали при рождении и на 15 день жизни.

Пробы фекалий для микробиологических исследований отбирали непосредственно из прямой кишки в стерильные контейнеры (FL-medical).B лаборатории фекалии подвергали 10-ти кратным разведениям в пегггонной воде и посеву на дифференциальные среды по методу, предложенному И.А. Бочковым с соавт. (1989) с использованием схемы А.З. Смолянской с соавт. (1985). В качестве питательных сред использовали: агар Эндо, желточно-солевой агар, агар Вильсона-Блэра, среду Сабу-ро, кровяной агар, среду для бифидобактерий (производство НПО «Питательные среды»), среду Квасникова, авторскую среду для выделения лактобактерий, среду для выделения бактероидов с канамицином и среду для выделения энтерококков с теллуритом калия. Культивирование анаэробных и микроаэрофильных микроорганизмов осуществляли в условиях анаэробиоза с использованием газогенерирующих пакетов «Анаэрогаз» в течение 24-48 ч при 37°С.

Отбор проб крови у животных производили из яремной или срединной хвостовой вены в специальные шприцы-контейнеры фирмы Monovette. Для изучения морфологического состава крови и показателей фагоцитоза - в шприцы с антикоагулянтом, а для определения биохимического состава и гуморальных факторов неспецифического иммунитета сыворотки крови - в шприцы дня получения сыворотки.

Общий анализ крови осуществляли на гематологическом анализаторе Abacus - 3 Биохимический анализ сыворотки крови проводился на биохимическом анализаторе Vitalab Flexor Junior 1.0 производства Vital Scientific N.N. с помощью наборов фирмы «ELITech Clinical System» и состоял из определения в сыворотке крови общего белка, мочевины, глюкозы, холестерина, щелочной фосфатазы, триглицеридов, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, кальция, фосфора. Определение в сыворотке крови цинка и меди проводили атомно-адсорбционным методом на спектрофотометре «Квант-2А».

Функциональные способности нейтрофильных гранулоцитов оценивали по их фагоцитарной активности (ФАН), фагоцитарному числу (ФЧ), % переваривания и коэффициенту мобилизации (КМ), которые определяли в реакциях бактериального фагоцитоза, спонтанного и стимулированного NBT-теста (по И.В. Нестеровой с соавт. 1992 год). В качестве объекта фагоцитоза использовалась суточная агаровая культа S.aureus 209Р.

Бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) определяли колориметрическим методом с использованием Е. coli по методике предложенной О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966), а лизоцимную активность (ЛАСК) колориметрическим методом по Грант с применением взвеси Micrococcus lysodeiticus.

Антагонистическую активность лактобацилл устанавливали методом агаровых блоков по Н.С. Егорову (1965). Для этого засеянные «газоном» чашки с тест-микроорганизмами инкубировали при 37°С в условиях анаэробиоза в течение 5 суток, затем из агара вырезались блоки цилиндрической формы с диаметром 5 мм и раскладывались на засеянные «газоном» чашки Петри с микроорганизмами-жертвами, так, чтобы блоки стояли культурой вверх. Чашки с разложенными блоками культивировались в условиях термостата. Через 24 ч проводили учет полученных результатов, отмечая диаметр зон задержки роста тестируемой бактерии.

Определение антагонистической активности при совместном культивировании в жидкой питательной среде проводили в пробирках с использованием питательного бульона пригодного для роста лактобактерий и тест-бактерий (эшерихий и стафилококков). При этом в опытные пробирки вносили по 100 млн. микробных тел обоих испытуемых микроорганизмов. Для контроля испытуемых антагонистов и жертв засевали в тех же концентрациях отдельно. Засеянные пробирки инкубировали при 37 С. Высевы из опытных и контрольных пробирок проводили на агаровые среды спустя 6,12,24, 36, 48 и 72 ч, для чего готовили 10-кратные разведения. Инокуляцию лактобактерий проводили на плотную среду Квасникова, а стафилококков и кишечной палочки на МПА.

Идентификацию выделенных микроорганизмов проводили с помощью коммерческих наборов фирмы Pliva Laechema Diagnostica - ЭНТЕРОтест 24, НЕФЕРМ-тест 24, СТАФИтест 16, СТРЕПТОтест 16, ЭН-КОККУСтест, АНАЭРО тест 23. Серологический профиль выделенных Е. coli устанавливали с помощью типоспецифи-ческих О-агглютинирующих колисывороток (Армавирская биофабрика) и адгезивных колисывороток (ВНИИ прикладной микробиологии, г. Оболенск). Определение адгезивной активности у выделенных кишечных бактерий проводили с помощью нативных эритроцитов кролика по методу В.И. Брилис с соавт. (1986). Способность продуцировать гемолизины выявляли на 5% кровяном агаре. Наличие антилизоцим-ной активности проводили по А.В. Бухарину с соавт. (1984), а а способность продуцировать экзотоксины -в тесте отека лапы мыши по Ю.П. Вартанян (1978).

Методическое сопровождение и интерпретацию результатов гематологических, иммунологических и биохимических исследований осуществляли при использовании таких учебно-методических и справочных пособий как «Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии» (М., 1985), «Клиническая иммунология / под ред. Караулова» (М., 1999), «Современные медицинские технологии» (СПб., 1999), «Методы оценки функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов» (Краснодар, 1992), «Клиническая оценка результатов лабораторных исследований» (М., 2002), «Ветеринарная лабораторная медицина» (М., 2007), «Расшифровка клинических лабораторных анализов» (М., 2010) и др.

Математическую и биометрическую обработку экспериментальных данных с определением степени достоверности по распределению Стьюдента проводили с использованием программы Microsoft Office Excel 2003.

2.2. Результаты собственных исследований

2.2.1. Распространение и нозологический профиль острых кишечных заболеваний телят на фермах Краснодарского края

Согласно статистическим исследованиям, проведенным по документам отчетности государственного управления ветеринарии уровень заболеваемости телят диареями в Краснодарском крае достаточно высокий и в среднем за 3 года (20102012) составил 33,6%, а летальность - 7,3%. При этом, динамика заболеваемости имеет явную тенденцию снижения (с 35,7% 2010 г. до 30,4% в 2012 г), а летальности, напротив, увеличения (с 6,3% в 2010 г до 8,2% в 2012 г). Болезни органов пищеварения в 99,1% случаев диагностировались как диспепсия или гастроэнтерит, а в 0,9% - как колибактериоз, псевдомоноз, стрептококкоз, энтеротоксемия и энтеро-кокковая инфекция.

Результаты собственных исследований показали, что 82,5% случаев диарея у телят была обусловлена ассоциацией различных условно патогенных бактерий и протекала как смешанная кишечная инфекция, в 6,6% случаях диарея характеризовалась как моноинфекция (эшерихиоз, стрептококкоз, псевдомоноз) и в 10,9% носила явный алиментарно-функциональный характер и была связана с нарушением технологии кормления телят или их физиологической незрелостью.

Таким образом, результаты проведенных исследований дают основание констатировать, что на фермах Краснодарского края наиболее распространенной патологией телят, являются болезни органов пищеварения, этиология которых в большинстве случаев остается неустановленной и официально они регистрируются как диспепсия или гастроэнтерит, в то время как фактически в подавляющем большинстве случаев их развитие связано с инфекционным фактором и может быть следствием глубоких нарушений в кишечном микробиоценозе.

2.2.2. Особенности становления кишечного микробиоценоза и

биологические свойства бактерий, заселяющих кишечный тракт новорожденных телят

Результаты проведенных исследований показали (табл. 1), что в период с 1-го по 10-й день жизни в кишечном тракте новорожденных телят происходит активное становление их кишечного микробиоценоза. При этом в первые 3 дня лидирующее положение в составе кишечных микроорганизмов имеют эшерихии (и другие энте-робактерии ), что предопределяет в большинстве случаев развитие диарей. Симби-онтная микрофлора, достигает количества, способного противостоять количеству энтеробактерий только к 10-му дню жизни телят.

В составе кишечных бактерий энтеробактерии обладают гораздо более выраженными способностями прикрепляться к поверхности эукариотической клетки, чем лактобактерии и энтерококки, так как среди энтеробактерий количество адге-зинпозитивных вариантов было 68-84%, в то время как среди молочнокислых бактерий 72-76%. К тому же среди энтеробактерий от 18,8 до 37,5% изолятов обладают экзотосинпродуцирующими и персистентными свойствами.

Таблица 1 - Количество микроорганизмов в дистальном отделе кишечника новорожденных телят в возрастном аспекте (п=10)

Микроорганизмы Количество микроорганизмов в 1 г кала (Ig КОЕ) по дням

1 3 7 10

Escherichia sp. 9,72±1,43 11,47±1,57 8,81±1,13 7,93±0,97

в т.ч. гемолитические 1,14±0,18 4,33±0,67 3,77±0,39 3,14±0,31

Lactobacillus sp. 2,33±0,19 4,48±0,51 5,74±0,62 7,26±0,8б

Bifidobacterium sp. 0 1,8±0,52 2,18±0,33 3,69±0,45

Staphylococcus sp. 1,53±0,23 2,31±0,34 2,84±0,37 3,53±0,43

Enterococcus sp. 3,60±0,27 3,76±0,42 4,12±0,44 4,65±0,51

Clostridium sp. 0 0 0 0

Mucor sp. 1,73±0,11 2,13±0,19 2,75±0,38 3,26±0,48

Исходя из полученных результатов, становится вполне объяснимым количественное превалирование в кишечном тракте новорожденных телят, начиная с первого дня жизни, представителей именно энтеробактерий. Данные микроорганизмы не только превосходят симбионтов по скорости роста, но, как оказалось, превосходят их и по интенсивности освоения кишечника. Количество эшерихий (9,72-11,77 lg КОЕ/г) в содержимом прямой кишки телят спустя 24-48 ч после рождения несопоставимо с количеством кислотообразующих микроорганизмов (0-4,48 lg КОЕ/г) -лактобацилл, бифидобактерий и энтерококков. В составе эшерихий в течение всего периода исследования присутствовали патогенные (гемолитические) формы, однако, их количество не превосходило суммарного количества лактатферментирующих бактерий, что, по-видимому, и объясняет отсутствие у обследованных животных диареи.

Исследования показали, что количественным преимуществом среди симбионтов обладают лактобациллы, которые, несмотря на доминирование эшерихий, тем не менее, сравниваются с ними по численности к 10-му дню жизни телят, а это является подтверждением их активного участия в микроэкологических процессах. В тоже время следует полагать, что если лактобациллы уступают эшерихиям в конкуренции за рецепторы, следовательно, у них имеются альтернативные механизмы антагонизма, позволяющие не только остаться в кишечном тракте новорожденных телят, но и существенно увеличить своё количество в нем к 10-му дню жизни.

В ходе исследований от телят было выделено 48 изолятов лактобацилл, из которых 31,3% (15) составили Lactobacillus plantarum, 22,9% (11) Lactobacillus fermen-tum, 14,6% (7) Lactobacillus acidophilus, 8,3% (4) Lactobacillus helveticus, 6,3% (3) Lactobacillus parabuchneri, 4,2% (2) Lactobacillus cellobiosus, a 12,5 % (6) изолятов нам не удалось идентифицировать. При этом, только 14,6% изолятов были охарактеризованы нами как активные антагонисты (дающие зоны задержки роста эшерихий и стафилококков 16-18 мм), у остальных 85,4% изолятов антагонистические свойства были слабо выражены, либо вообще отсутствовали.

Изучение характера роста лактобацилл при совместном культивировании с Е.соН и ¿.aureus показало, что рост кишечной палочки в присутствии лактобацилл в течение первых 12 ч характеризовался выраженной положительной динамикой (с 102 до 109 lg КОЕ/мл), но в последующем количество жизнеспособных клеток эше-рихий начинало уменьшаться, и, спустя 36 ч, количество лактобацилл и эшерихий сравнялось и составило 7 lg КОЕ/мл. Последующая динамика количественного присутствия в среде совместного культивирования лактобацилл была явно положительной, а эшерихий - отрицательной.

В случае со стафилококком, его количество в среде культивирования с лакто-бациллами начинало уменьшаться уже по прошествии 6 ч. Равное количество стафилококка и лактобацилл устанавливалось спустя 18 ч и составляло в среднем 5,25 lg КОЕ/мл. В последующем количество лактобацилл продолжало увеличиваться, а стафилококка — уменьшаться.

Полученные результаты позволяют предположить, что для подавления лакто-бациллами роста условнопатогенных бактерий в среде совместного обитания их должно быть в количестве не менее 5-7 lg КОЕ/мл, которое при первичной контаминации среды создается не ранее чем через 18-36 ч.

2.2.3. Состояние кишечного микробиоценоза у глубокостельных коров

Первичное заражение организма телят может происходить не только в постна-тальный период, но и в антенатальный, путем транслокации различных микроорганизмов из пищеварительного тракта матерей в пищеварительный тракт плода. В связи с этим в ЗАО «Путиловец-ЮГ» было обследовано 10 клинически здоровых коров с целью определения количественного и качественного состава их кишечного микробиоценоза и влияния его на здоровье телят.

Результаты данных исследований показали (табл. 2), что в дистальном отделе кишечника глубокостельных коров присутствуют эшерихии, энтерококки, лактобакте-рии, слизеобразующие бациллы, плесневые и дрожжеподобные грибы, бифидобак-терии, бактероиды и клостридии. Однако количество данных микроорганизмов было разным. Больше всего в фекалиях у глубокостельных коров было бифидобакте-рий и бактероидов - 6,7 и 6,9 lg КОЕ/г соответственно. Лактобацилл, эшерихий и слизеобразующих бацилл было в пределах 4,7, 4,2 и 4,0 lg КОЕ/г соответственно. Количество энтерококков и клостридий составляло в среднем 2,5 и 2,0 lg КОЕ/г соответственно, а микроскопических грибов из рода Mucor и Candida - 1,5 lg КОЕ/г. В отличие от телят, у коров стафилококки ни в одном случае выделены не были. Учитывая то обстоятельство, что в кишечнике здорового крупного рогатого скота общее количество различных бактерий может достигать 10" и более КОЕ/г кала (S.E.Dowel, 2008; М.А. Сидоров, 2010) полученные нами данные свидетельствуют не только о количественной бедности состава микроорганизмов биоценоза кишечного тракта обследованных коров, но и присутствии у них дисбиотического процесса, характеризующегохся как дисбактериоз, который проявлялся в данном случае в виде снижения содержания облигатных представителей микробиоценоза жвачных -бактероидов, бифидобактерий и лактобацилл. Кроме того, при дополнительном изу-

чении изолятов Е.соН, выделенных из фекалий глубокостельных коров (по 8 изоля-тов от каждого животного), было установлено, что 27 (33,7%) из 80 изолятов обладали выраженными гемолитическими свойствами, а 15 (18,7%) - давали агглютинацию на общую сыворотку к специфическим адгезинам (А20, К88, Р41, К99,987Р).

Таблица 2 - Количественный состав фекальной микрофлоры у глубокостельных коров

Микроорганизмы Количество микроорганизмов в фекалиях kodob. Ip KOF./r В среднем

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Е. coli 3 4 6 3 6 3 6 4 3 5 4,3±1,27

Enterococcus sp. 2 4 1 3 2 5 2 1 3 2 2,3±1,27

Bacillus sp. 2 3 4 3 4 4 3 7 5 5 4,0±1,34

Lactobacillus sp. 5 6 4 7 3 6 3 2 7 4 4,7±1,68

Bifidobacterium sp. 7 6 5 8 6 9 6 7 7 6 6,7±1,10

Bacteroides sp. 8 7 7 9 8 7 5 6 7 5 6,9±1,22

Clostridium sp. 1 2 1 1 3 1 2 2 4 3 2,0±1,0

Staphylococcus sp. 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Mucor sp. 1 1 1 2 2 2 3 1 1 1 1,5±0,67

Candida sp. 2 3 1 I 1 2 1 2 I 1 1,5±0,67

Общее количество 8 8 7 10 8 10 7 7 8 7 8,0±1,09

Таким образом, исследования показали, что на фермах, где существует проблема острых кишечных заболеваний у телят, существует проблема и у сухостойных коров, которая заключается в наличии у них кишечного дисбактериоза. При этом, среди микроорганизмов, составляющих кишечный микробиоценоз коров, имеются патогенные формы, которые могут обуславливать заболевание не только'новорожденных телят, но и самих матерей после родов в виде развития у них воспалительных процессов в половых органах, вымени, конечностях, легких. Следовательно, в системе профилактики острых кишечных заболеваний у новорожденных телят следует в обязательном порядке обращать внимание на сухостойных коров, и, помимо специальных профилактических мер, осуществлять и такие, которые, прежде всего, были бы нацелены на коррекцию их нормализацию состояния микробиоценоза, т.е! назначать биоценозкоррегирующие препараты.

2.2.4. Влияние органических кислот и гидролизата крови на рост ластобактерий в условиях in vitro

Результаты исследований показали, что молочная и уксусная кислота могут быть использованы и как стимуляторы роста и как селективные компоненты в питательных средах, предназначенных для выделения молочнокислых бактерий. При этом оптимальный объем ввода данных кислот в питательные среды для придания им селективных свойств в отношении лактобактерий должен находиться в диапазоне 0,14-0,16%, а для стимуляции их роста - 0,02-0,06%. Уксусная и молочная кислота обладают конкурирующим в отношении друг друга действием. При вводе их в питательную среду в равном количестве ни стимулирующего, ни селективного дей-

ствия не устанавливается. Однако уменьшение или увеличение массовой доли той или иной кислоты приводит к стимуляции роста лактобактерий и, напротив, к подавлению роста эшерихий и стафилококков. Наиболее эффективным оказался ввод в питательную среду уксусной и молочной кислоты в соотношении 10:1. Именно в такой пропорции кислот в питательной среде рост лактобактерий стимулируется, а рост эшерихий и стафилококков полностью подавляется.

Янтарная кислота в концентрации 0,1% оказывает ингибирующее действие на рост молочнокислых бактерий, 0,01%- не оказывает четкого действия на их рост, а 0,001% - приводит к выраженной стимуляции роста лактобактерий, при этом в опытных чашках количество выросших колоний было на 62,9% больше чем в контрольных. Следовательно, янтарная кислота стимулирует рост лактобактерий при концентрации не превышающей 0,001%.

Добавление гидролизата крови в питательную среду для лактобактерий позволило существенно повысить её ростовые свойства. Введение в среду гидролизата в количестве 1% привело к тому, что количество выросших колоний оказалось на 42,3% большим, чем в контроле; 2,5%- на 87,9%; 5% гидролизата - на 112,7%; 7,5% гидролизата - на 132,2%; 10% гидролизата - на 156,3%. При этом существенным позитивным моментом можно считать и тот факт что колонии, выросшие на средах с добавлением гидролизата крови, были заметно крупнее, чем выросшие на среде без гидролизата. Так на среде с гидролизатом диаметр выросших колоний лактобацилл составил 3-5 мм, в то время как в контроле 1,5-2 мм.

Исходя из полученных данных нами экспериментально подобрано оптимальное соотношение уксусной, молочной и янтарной кислот, направленное на стимуляцию роста лактобактерий. Наилучший стимулирующий эффект был отмечен при использовании уксусной, молочной и янтарной кислот при их соотношении как 1:0,125:0,1. Эти результаты послужили основой для разработки нового препарата, оказывающего стимулирующее действие на рост молочнокислых бактерий, который получил условное название «Гидрогемол-М».

Исследования показали, что добавление в среду культивирования для лактобацилл препарата «Гидрогемол-М» позволяет существенно повысить ее ростовые свойства. При этом наиболее оптимальным является ввод препарата в среду в объеме 5%, именно при таком содержании препарата в среде отмечена выраженная стимуляция роста лактобацилл. Однако следует отметить, что с экономической точки зрения оптимальным количеством ввода Гидрогемола-М в питательную среду является 2,5%. Это объясняется тем, что при ней количество выросших колоний было всего на 5,6% меньше, чем в среде с 5% препарата, а количество затраченного препарата при этом было вдвое меньшим. Увеличение объема ввода Гидрогемола-М в питательную среду до 7,5%-10%, не обеспечивало существенной стимуляции роста лактобацилл.

Для того чтобы подтвердить наличие у Гидрогемола-М бифидогенных свойств и возможность его использования в качестве метаболитного пребиотика необходимо проведение опыта в условиях in vivo, что было осуществлено нами в последующем непосредственно на молочном комплексе ЗАО «Путиловец-ЮГ».

2.2.5. Влияние гидрогемола, гидрогемола-М и хилак-форте на кишечный микробиоценоз и организм глубокостельных коров и новорожденных телят

Для изучения возможности использования пребиотиков с целью профилактики острых кишечных заболеваний у новорожденных телят был выбран препарат Гидрогемол, который ранее с успехом применялся на свиноматках и поросятах с целью профилактики эшерихиоза (С. Н. Тельнов, 2002; В.Н. Псиола, 2007), разработанный нами препарат Гидрогемол-М и широко известный в гуманитарной медицине метаболитный пребиотик Хилак-форте (Н.И. Урсова, 2005; O.A. Лиманова, 2012).

Результаты исследований фекалий коров за 1-2 дня до родов показали (табл. 3), что в целом все взятые в опыт препараты позитивно повлияли на кишечный микробиоценоз беременных животных, что проявилось не только в виде увеличения

Таблица 3 - Количественный состав фекальной микрофлоры у коров, получавших пребиотики перед отелом (^ КОЕ/г)

Микроорганизмы Группа, n=10

1 (опыт) 2 (опыт) 3 (опыт) 4 (контроль)

Escherichia coli 5,5±0,65* 5,0±0,15 5,3±0,25* 4,25±0,51

Enterococcus Sp. 3,7±0,75 4,0±0,23* 3,75±0,44* 2,50±0,25

Bacillus sp. 4,0±0,22 3,5±0,18 3,35±0,38 4,0±0,53

Lactobacillus sp. 5,4±0,15* 6,45±0,45* 5,75±0,27* 4,7±0,35

Bifidobacterium sp. 6,4±0,45 8,43±0,51* 6,93±0,54* 6,0±0,18

Bacteroides sp. 5,75±0,93 6,05±0,35 5,45±0,25 6,9±0,55

Clostridium sp. 2,0±0,18* 2,50±0,I5* 2,50±0,15* 3,0±0,23

Mucor sp. 1,5±0,45 1,31 ±0,24 1,50±0,31 1,5±0,31

Candida sp. 2,75±0,33 2,35±0,35 2,15±0,1S 1,5±0,12

Общее количество 8,4±0,45* 9,70±0,24* 8,59±0,37* 7,30±0,44

* - Р<0,05 по отношению к контролю (4 группа)

на 1 порядок общего количества фекальных микроорганизмов, но и увеличения в их составе лактат- и ацетатпродуцирующих бактерий - энтерококков, лактобактерий и бифидобактерий. Количество данных микроорганизмов у животных опытных групп было на 0,7-1,45 ^ КОЕ/г большим, чем у животных контрольной группы. Несмотря на то, что эти изменения не во всех случаях были достоверными, тем не менее, тот факт, что у животных всех опытных групп количество симбионтов увеличилось, говорит о выраженной положительной тенденции в изменении состава кишечного микробиоценоза у коров перед родами. Стоит отметить также, что мы наблюдали снижение таких бутиратпродуцирующих бактерий как клостридий и бактероидов, а так же увеличение на 0,65-1,25 ^ КОЕ/г количества дрожжеподобных грибов.

При сравнении полученных результатов непосредственно в опытных группах, можно констатировать, что наиболее физиологичное состояние микробиоценоза было у коров 2 группы, которым скармливали Гидрогемол-М. Состояние микробиоценоза у коров 1-й и 3-й опытных групп было примерно одинаковым, что может сви-

детельствовать о равном действии на кишечные микроорганизмы Гидрогемола и Хилак-форте.

Скармливание коровам 1,2 и 3 групп в течение 8-9 дней пребиотиков позитивно сказалось не только на их кишечном микробиоценозе, но и на обмене веществ, это проявлялось достоверным уменьшением количества общего белка, альбуминов, глюкозы, уровень которых был выше (но в пределах физиологической нормы), чем у животных контрольной группы на 12,8, 26,0, 10,4; 11,9, 30,6, 22,9% и 9,0,15,0,16,4% соответственно.

Кроме того, у коров 1 и 2 группы произошло достоверное (Р<0,05) увеличение в сыворотке крови по сравнению с контролем цинка на 54,7 45,1% соответственно, а у животных из 2-й группы дополнительно на 36,7% кальция и 8,6% мочевины.

Результаты микробиологических исследований фекалий суточных телят показали (табл. 4), что у телят из опытных групп количество эшерихий было в 4-10 раз меньшим, чем у телят из контрольной группы, в то время как лактобактерий в 1000 раз большим.

Таблица 4 - Состав фекальной микрофлоры однодневных телят (1ц КОЕ/г)

Показатель Группа (п=10) Физиологическая норма (31,78]

1 2 3 4

Escherichia sp. 8,6±0,6 8,0±0,8 8,0±0,8 9,0±1,0 1,5-4,25

Staphylococcus sp. 2,6±0,4 3,0±0,8 2,3±0,6 3,0±0,2 н/у

Enterococcus sp. 2,4±0,6 2,8±0,6 2,6±0,2 2,0±0,4 1,25±3,34

Lactobacillus sp. 5,0±0,2* 5,8±0,2* 5,6±0,4* 2,Q±0,2 3,75±6,15

Mucor sp. 2,6±0,8 3,0±1,0 3,0±1,0 2,4±0,8 н/у

Общее количество 9,1±0,4 9,4±0,8 9,7±0,6 10,3±0,3 н/у

* - Р<0,05 по отношению к контролю (4 группа)

н/у - не установлено

Коррекция кишечного микробиоценоза у матерей положительно сказалась не только на формировании колонизационной резистентности потомства, но и в целом на его состоянии. Так, у телят из опытных групп, была большая насыщенность эритроцитов гемоглобином (на 1-5 пг), меньшим было значение лейкоинтоксикационно-го индекса (1,27-1,65 у подопытных и 1,98 у контрольных), более высокое (в 1,5-2,4 раза) значение лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови.

Применение телятам с 1-го по 10-й день жизни гидрогемола, гидрогемола-М и хилак-форте позитивно сказалось на их здоровье (табл. 5), поскольку не все они по сравнению с телятами из контрольной группы были поражены острыми кишечными заболеваниями, значительно легче переболевали, меньшим была продолжительность лечения и во всех опытных группах установлена 100% сохранность, в то время как в контрольной группе она составила 90%.

После 10-дневного применения пребиотиков у телят в группах 1-3 общий уровень количества фекальной микрофлоры был примерно одинаков и находился в пределах 9-10 ^ КОЕ/г, в то время как у телят из 4 группы общее количество бактерий (табл. 6) составило 11-12 ^ КОЕ/г, т.е. было значительно большим. Кроме этого, у

Таблица 5 - Влияние гидрогемола, гидрогемола-М и хилак-форте на заболеваемость новорожденных телят ОКЗ

Показатель Группа

1 (гидрогемол) 2 (гидрогемол-М) 3 (хилак-форте) 4 (муравьиная к-та)

Кол-во телят 10 10 10 10

Заболело, гол 6 (60%) 5 (50%) 6 (60%) 10(100%)

В т.ч.: в тяжелой форме (%) 3 (50%) 2 (40%) 3 (50%) 6 (60%)

в легкой форме (%) 3 (50%) 3 (60%) 3 (50%) 4 (40%)

Продолжит, лечения, дн 3,7 3,0 3,6 4,2

Пало, гол 0 0 0 1

Сохранность, % 100 100 100 90

телят из групп 1-3, общей тенденцией было достоверное повышение в составе кишечной микробиоты количества кислотопродуцирующих бактерий и, напротив,уменьшение в пределах физиологической нормы, количества эшерихий и стафилококков. Следует констатировать, что у телят из 4-й группы относительно первоначальных данных на 3 порядка увеличилось количество стафилококков и лакто-бацилл, и почти на 1 порядок плесневых грибов, эшерихий и энтерококков.

Таблица 6 - Состав фекальной микрофлоры 11-дневных телят после выпойки им пребиотиков КОЕ/г)

Показатель Группа (п=10) ФИЗИОЛОП!-ческая норма

1 (опыт) 2 (опыт) 3 (опыт) 4 (контроль)

Escherichia sp. 7,6±0,2* 6,0±0,4* 7,80±0,2* 9,7±0,9 6,17-8,4

Staphylococcus sp. 3,0±0,8* 2,0±0,6* 2,0±0,2* . 5,0±0,4 н/у

Enterococcus sp. 4,4±0,4* 5,6±0,2* 5,0±0,10* 3,3±0,2 4,2-5,85

Lactobacillus sp. 7,6±0,2* 8,4±0,4* 8,0±0,4* 2,7±0,2 8,0-8,5

Mucor sp. 1,5±0,6* 2,0±0,2* 2,0±0,2* 3,3±0,8 н/у

Общее количество 9,3±0,3* 9,7±0,5* 9,7±0,2* 11,8±0,3 10-12

* - Р<0,05 по отношению к контролю (4 группа)

н/у - не установлено

В большей степени позитивные изменения были отмечены нами у телят из 2-й группы. Они заключались в том, что в кишечном тракте животных данной группы количество лактобалилл было на 2,4 ^ КОЕ/г большим, чем эшерихий. У телят из 1-й и 3-й групп количество лактобацилл и энтеробактерий в фекалиях было примерно одинаковым - 7,6±0,2, 7,6±0,2 ^ КОЕ/г, и 8,0±0,4, 7,8±0,2 ^ КОЕ/г соответственно. По всей видимости, полученные результаты могут в какой-то степени служить объ-

яснением и одинаковой величины заболеваемости и продолжительности лечения телят в 1 и 3 группах.

Результаты гематологических, биохимических и иммунологических исследований показали, что применение гидрогемола, гидрогемола-М и хилак-форте в отличие от муравьиной кислоты не только в 40-50% случаев предотвращает развитие острых кишечных заболеваний у новорожденных телят и облегчает тяжесть течения болезни, но и в большей мере способствует более быстрому восстановлению гомео-стаза и защитных возможностей организма животных.

Так, например, у телят из 1-3 групп значение лейкоинтоксикационного индекса было чуть более единицы, что свидетельствует о наличии легкой интоксикации, в то время как у телят из 4 группы данный показатель составил 2,3, что характерно при наличии в организме воспалительного процесса и средней степени интоксикации. Результаты биохимических исследований сыворотки крови позволили установить, что только у телят из 4 группы снижен белковый резерв (50,3±1,3 г/л), в то время как у телят из 1-3 групп содержание в сыворотке общего белка было оптимальным для данного возраста. Содержание у телят из опытных групп холестерина, триглицеридов, цинка, активности аланинаминотрансферазы было достоверно позитивным и отличалось от такового у телят из контрольной группы, что свидетельствовало о более выраженных восстановительных процессах в обмене веществ и состоянии печени у подопытных животных.

Назначение пребиотиков метаболитного ряда позитивно отразилось на состоянии врожденного иммунитета телят (табл. 7), что проявилось достоверно более высокими значениями у них лизоцимной активности сыворотки крови (в 6,1-7,5 раза), бактерицидной активности сыворотки крови (в 1,5-1,7 раза) и фагоцитарной активности нейтрофилов (в 1,7-1,8 раза).

Таблица 7 - Показатели врожденного иммунитета у телят после выпойки им пребиотиков

Показатель Группа (п=10) Физиологическая норма

(опыт) 2 (опыт) 3 (опыт) 4 (контроль)

ЛАСК, мкг/мл 2,45±0,19* 4,53±0,30* 2,99=0,09* 0,4±0,03 12,8-14,0

БАСК, % 42,9± 1,56* 48,9±2,57* 47,2±1,91* 28,9±1,7 29,5-43

ФАН, % 36,7±1,98* 38,3 ±2,37* 35,7±2,15* 21,3±1,06 36-38

ФЧ 4,24±0,31* 2,23±0,51 2,38±0,33 2,12±0,23 2-4

% переварив. 43,8±1,24* 58,6±2,88 47,9±1,74* 27,9±2,43 65-69

СЦИ сп, % 0,17±0,03 0,17±0,04 0,16±0,01 0,18±0,03 0,03-0,1

КМ 6,1±0,41 7,2±0,33* 6,8±0,13* 5,1±0,25 2-10

* - Р<0,05 по отношению к контролю (4 группа)

Установлено, что у подопытных телят нейтрофилы не только более активно осуществляли захват бактерий, но и более активно их убивали и перерабатывали, о чем свидетельствовали достоверно более высокие по сравнению с 4 группой показатели фагоцитарного индекса, % переваривания, среднего цитохимического индекса и коэффициента мобилизации.

Обобщая результаты испытания гидрогемола, гидрогемола-М и хилак-форте можно констатировать, что их применение весьма оправдано, т.к. они через регуляцию микробиоценотических процессов способны осуществлять контроль над развитием у новорожденных телят острых кишечных заболеваний.

По способности оказывать биоценозкоррегирующее действие, гидрогемол и гидрогемол-М не только не уступают известному метаболическому пребиотику хилак-форте, выпускаемому немецкой фирмой Ratiopharm, но даже по ряду позиций его превосходят. Из 3-х испытанных препаратов гидрогемол-М оказался наиболее эффективным, что подтвердило наше предположение о возможности использования органических кислот и гидролизата крови взятых в оптимальных пропорциях в качестве основы создания пребиотических средств. Для определения эффективности использования гидрогемола и гидрогемола-М в качестве средств профилактики острых кишечных заболеваний у новорожденных телят нами были проведены дополнительные производственные опыты.

2.2.6. Профилактическая эффективность гидрогемола и гидрогемола-М при острых кишечных заболеваниях у новорожденных телят

Производственные испытания гидрогемола проводились на базе УОХ «Краснодарское» (г. Краснодар, п. Лазурный) в период с 15 октября 2011 по 15 февраля 2012 гг, а гидрогемола-М в ЗАО «Путиловец-ЮГ» (Краснодарский край, Павловский р-н, ст. Новолеушковская) с 01 июля 2012 по 1 октября 2012 гг.

Результаты испытаний показали, что гидрогемол и гидрогемол-М являются эффективными профилактическими средствами при острых кишечных заболеваниях новорожденных телят, способствующими снижению заболеваемости в 2,7-3,1 раза. Несмотря на то, что сохранность телят при использовании гидрогемола и гидрогемола-М была одинаковой (100%), тем не менее, следует отметить, что гидрогемол-М показал себя как более эффективный препарат. Так телята получавшие данный препарат, заболевали только в легкой форме, в то время как в группе, где применяли гидрогемол было 6,4% животных с тяжелой формой диареи, для лечения которых пришлось использовать антибактериальные, регидратационные и витаминные препараты. Кроме того установлено, что среднесуточный прирост живой массы телят, в группе получавшей гидрогемол-М был на 4,7% выше, чем в контроле и на 1,7% выше, чем в группе получавшей гидрогемол. Эти обстоятельства отразились в целом на экономической эффективности гидрогемола-М, его окупаемость составила 14,26 руб, что на 2,62 рубля выше, чем у гидрогемола.

Выводы

1. По данным государственной ветеринарной отчетности заболеваемость телят острыми кишечными заболеваниями на фермах Краснодарского края составляет 33,6%, а летальность 7,3%. В их нозологическом профиле 99,1% составляют болезни неинфекционного характера и регистрируются как диспепсии или гастроэнтерит. На долю инфекционных болезней приходится 0,9%, среди которых постоянно регистрируются колибактериоз, стрептококкоз, псевдомоноз и энтеротоксемия.

2. Развитие у новорожденных телят острых кишечных заболеваний бактериальной этиологии обусловлено дисбиотическими нарушениями, поскольку особенностью становления кишечного микробиоценоза у данных животных в ранний постна-тапьный период является количественное преимущество в течение 5-7 дней энтеро-бактерий над симбионтными бактериями. Количественный паритет между этими микроорганизмами устанавливается только к 10-му дню жизни телят.

3. Среди энтеробактерий, заселяющих пищеварительный тракт новорожденных телят от 18,8 до 37,5% изолятов обладают экзотоксинпродуцирующими и перси-стентными свойствами и 68-84% являются высокоадгезивными с индексом адгезив-ности 3,56-4,05. В тоже время количество изолятов молочнокислых бактерий способных к адгезии находится в пределах 72-76%. При этом только 14,6% изолятов лактобацилл обладают выраженной антагонистической активностью. Для реализации лактобациллами своих свойств в среде совместного культивирования с услов-нопатогенными бактериями требуется не менее 18-36 ч при достижении ими концентрации 5-7 ^ КОЕ/мл.

4. У глубокостельных коров перед родами имеет место дисбактериоз кишечного тракта, проявляющийся снижением общей численности фекальной микрофлоры, а в её составе облигатных бактерий - бифидобактерий (до 6,7 КОЕ/г) и лактобацилл (до 4,71§ КОЕ/г). Среди энтеробактерий, обитающих в кишечном тракте коров, циркулируют потенциально патогенные варианты, которые в 33,7% случаев обладают гемолитической активностью и в 18,7% - имеют специфические факторы адгезии.

5. Установлено, что добавление в питательную среду уксусной, молочной и янтарной кислот в концентрациях, не превышающих соответственно 0,02-0,06% и 0,001% в значительной степени стимулируют рост лактобацилл. При этом наиболее оптимальным соотношением кислот между собой в среде культивирования лактобацилл является 1:0,125:0,1. Гидролизат крови независимо от объема ввода стимулирует рост молочнокислых бактерий. На основании полученных результатов разработан препарат Гидрогемол-М предназначенный для использования в ветеринарии как пребиотическое средство.

6. Назначение глубокостельным коровам за 10-12 дней до родов гидрогемола, гидрогемола-М и хилак-форте способствовало увеличению в составе их кишечной микрофлоры на 1-2 ^ КОЕ/г лактат- и ацетатпродуцирующих бактерий (энтерококков, лактобацилл и бифидобактерий), а так же положительно повлияло на белковый, углеводный и минеральный обмен.

У полученных от этих коров телят состояние колонизационной резистентности, показателей неспецифического клеточного и гуморального иммунитета, обмена

веществ было в большей степени физиологичным, чем у телят, полученных от ин-тактных коров.

7. Назначение новорожденным телятам с первого дня жизни в течение 10 дней гидрогемола, гидрогемола-М и хилак-форте способствовало оптимизации становления у них кишечного микробиоценоза, протекания обменных процессов и состояния врожденного иммунитета, что проявлялось достоверно большим содержанием в фекалиях лактобацилл и энтерококков, а в сыворотке крови альбуминов, у-глобулинов и триглицеридов, а также достоверно более высоким значением лизоцимной активности сыворотки крови, бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности сыворотки крови, чем у телят получавших сквашенное муравьиной кислотой молоко. Благодаря этому заболеваемость телят острыми кишечными заболеваниями в опытных группах сократилась на 40-50%.

8. Гидрогемол и гидрогемол-М обладают высокой профилактической эффективностью, предохраняя в 72,3-77,3% случаев новорожденных телят от острых кишечных заболеваний. Наибольшей эффективностью и окупаемостью обладает гид-рогемол-М.

Практические предложения

1. Разработана «Инструкция по применению кормовой добавки Гидрогемол», утвержденная управлением Россельхознадзора по Краснодарскому краю и Республике Адыгея 21.01.2011 г.

2. С целью профилактики острых кишечных заболеваний у новорожденных телят рекомендуется назначать гидрогемол и Гидрогемол-М глубокостельным коровам за 10-12 дней до отела и новорожденным телятам с первого дня жизни в течение 10 дней с кормом в дозе 500 и 50 мл соответственно 2 раза в сутки.

3. Для выделения лактобацилл из различного материала рекомендуется использовать питательную среду следующего состава; масс%: молочная сыворотка 9,010,0, дрожжевой аутолизат 9,0-10,0, глюкоза 1,9-2,0, уксусная кислота 70% 0,14—

0.16. агар микробиологический 1,8-2,0, капустный отвар остальное.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Арушанян, А .Я. Влияние гидрогемола на организм новорожденных телят / А.Я. Арушанян, В.И. Терехов // Актуальные проблемы современной ветеринарии: Матер. Межд.научно-практич.конф., Краснодар, 2011. -ч.1. -С. 162-164.

2. Арушанян, А.Я. Видовой состав микрофлоры толстого кишечника у новорожденных телят / А.Я. Арушанян, В.И. Терехов // Матер. V Всероссийской науч.-практич. конф. мол. ученых. Краснодар: КубГАУ, 2011. - С.327-328.

3. Арушанян, А.Я. Эффективность использования гидрогемола для профилактики заболеваний коров в постотельный период / А.Я. Арушанян, В.И. Терехов, П.В. Крамарь, А.Ю. Пасечник // Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии и фармации: Матер, межрег. научно-практич. конф. Краснодар, 2012. - С. 127-129.

4. Терехов, В.И. Влияние Гидрогемола на кишечный микробиоценоз и обмен веществ коров / В.И. Терехов, А.Я. Арушанян П.В. Крамарь, А.Ю. Пасеч-

ник // Труды Кубанского государственного аграрного университета, 2012, —№3 (36).-С.181-184.

5. Терехов, В.И. Состав микрофлоры дистапьного отдела кишечника у коров/ В.И. Терехов, А.Я. Арушанян, П.В. Крамарь, А.Ю. Пасечник // Студенчество и наука. Сборник научных трудов. 2012. -Вып. 8. -Tl. -С.107-111.

6. Арушанян А.Я. Характеристика лактобактерий изолированных из желудочно-кишечного тракта телят / А.Я. Арушанян, В.И. Терехов, С.Г. Глущенко // Студенчество и наука: Сборник научных трудов. 2012. -Вып. 8. —Tl. -С.85-87.

7. Арушанян А.Я. Влияние гидрогемола на иммунобиологические показатели новорожденных телят / А.Я. Арушанян // Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве: Материалы Международной научно-практической конференции к 100-летию СГАУ имени H.A. Вавилова, Саратов, 2013. -С.6-8.

8. Арушанян АЛ. Профилактическая эффективность гидрогемола при острых кишечных инфекциях у новорожденных телят / А.Я. Арушанян, В.И. Терехов // Политематический сетевой электронный научный журнал КубГАУ, №86 (2), февраль, 2013, режим доступа http://ei.kubagro.ru/arcliive.asp?n=86.

9. Пат. 2491831 Российская Федерация, МПК А23К 1/04, А23К 1/16 Способ профилактики заболеваний коров в ранний послеотёльный период [Текст]/ Терехов В.И., Крамарь П.В., Мандрыкина H.A., Арушанян А.Я., Глущенко С.Н.. заявитель и патентообладатель Кубанский госагроуниверситет (RU).-№2012110435/13; заявл. 19.03.2012; опубл. 10.09.2013, бюл.25.

Подписано в печать 16.09.2013. Бумага офсетная Печ. л. 1. Тираж 100 экз.

Формат 60х841/іб. Офсетная печать Заказ № 684 .

Отпечатано в типографии Кубанского ГАУ 350044, Краснодар, ул. Калинина, 13.

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Арушанян, Артавазд Ягорович, Краснодар

ФГБОУ ВПО

«КУБАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

АРУШАНЯН АРТАВАЗД ЯГОРОВИЧ

ПРОФИЛАКТИКА ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТАБОЛИТНЫХ ПРЕБИОТИКОВ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, эпизоотология, вирусология, микология с микотоксикологией и иммунология

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Терехов В.И.

На правах рукописи

Краснодар 2013

Содержание

Введение......................................................................................4

1. Обзор литературы........................................................................9

1.1. Распространение и причины острых кишечных заболеваний.................9

1.2. Средства неспецифической профилактики острых кишечных заболеваний у новорожденных телят....................................................19

2. Собственные исследования.............................................................30

2.1. Материалы и методы исследований................................................30

2.2. Результаты собственных исследований.............................................37

2.2.1. Распространение и нозологический профиль острых

кишечных заболеваний телят на фермах Краснодарского края.........................37

2.2.2. Особенности становления кишечного микробиоценоза и биологические свойства бактерий, заселяющих кишечный тракт новорожденных телят........43

2.2.3. Состояние кишечного микробиоценоза у глубокостельных коров..........58

2.2.4 Влияние органических кислот и гидролизата крови на рост лактобактерий в условиях in vitro.........................................................61

2.2.5. Влияние гидрогемола, гидрогемола-М и хилака-форте на кишечный микробиоценоз и организм

глубокостельных коров и новорожденных телят......................................69

2.2.6. Профилактическая эффективность гидрогемола и

гидрогемола-М при ОКЗ у новорожденных телят......................................84

3. Обсуждение результатов исследования...............................................88

Выводы..........................................................................................96

Практические предложения................................................................99

Список литературы..........................................................................100

Приложения...................................................................................125

Список сокращений AJ1T - аланинаминотрансфераза ACT - аспартатаминотрансфераза БАСК - бактерицидная активность сыворотки крови КМ - коэффициент мобилизации КОЕ - колониеобразующая единица л - литр

JIACK - лизоцимная активность сыворотки крови

ЛЖК - летучие жирные кислоты

ЛИИ - лейкоинтоксикационный индекс

Мкмоль - микромоль

мл - миллилитр

Ммоль - милимоль

МПА - мясопептонный агар

НГ - нейтрофильные гранулоциты

ОКЗ - острые кишечные заболевания

ОР - основной рацион

пг - пикограмм

ПНГ - палочкоядерные нейтрофильные гранулоциты СНГ - сегментоядерные нейтрофильные гранулоциты СЦИсп - средний цитохимический индекс (спонтанный) ФАН - фагоцитарная активность нейтрофилов ФИ - фагоцитарный индекс УОХ - учебно-опытное хозяйство УПБ - условно патогенные бактерии ЮНГ - юные нейтрофильные гранулоциты

Введение

Актуальность темы. Проблема острых кишечных заболеваний новорожденных телят продолжает оставаться актуальной для отечественного скотоводства, поскольку ими ежегодно поражается от 50 до 100% полученного приплода [120]. При этом гибель телят от данной патологии в различных регионах страны варьирует от 10 до 70% [35, 38, 58, 64, 91, 179, 181, 183, 188].

Теоретическая проработка причин возникновения острых кишечных заболеваний новорожденных телят показала, что часть авторов придерживается мнения о том, что в основе развития острых кишечных заболеваний новорожденных лежит нарушение обмена веществ у коров-матерей из-за неправильного их кормления [173]. Другие авторы ссылаются на воздействие неблагоприятных факторов внешней среды, объединяя их в три основные группы: климатические, алиментарные и инфекционные [9, 148]. Третьи считают, что острые кишечные заболевания возникают при наличии и взаимодействии целого комплекса факторов (биотических и абиотических), которые имеют место в неблагополучных хозяйствах [114, 147, 148].

Однако, несмотря на многообразие этиологических факторов, обуславливающих данную патологию, основным патогенетическим звеном, сопровождающим развитие острых кишечных заболеваний, является условнопато-генная и патогенная микрофлора, что предопределяет широкое использование антибиотиков и химиопрепаратов в качестве средств не только лечения, но и профилактики.

Между тем, опыт превентивного применения антибиотиков показал пагубность данного подхода, поскольку они могут оказывать негативное влияние на функциональную активность ряда органов и симбионтную микрофлору самого животного.

Известно, что нормальная микрофлора кишечника является неотъемлемым физиологическим компонентом, эволюционно связанным с макроорганизмом, которая защищает от болезнетворных микроорганизмов и обеспе-

чивает физиологическую активность многих его систем [35, 58, 64, 114, 121, 125, 126, 147, 148, 178, 180, 181, 183, 186].

Учитывая данные обстоятельства, многие отечественные и зарубежные исследователи приоритет в вопросах профилактики ОКЗ отдают препаратам пробиотического и пребиотического действия.

Однако, ввиду специфичности (видовой, возрастной) протекания микроэкологических процессов в организме животных и невозможности подбора препаратов отвечающих индивидуальным особенностям, наиболее перспективным направлением профилактики острых кишечных заболеваний, по нашему мнению, является разработка и использование пребиотиков, средств, способных стимулировать рост собственной индигенной микрофлоры и восстанавливать ее качественный и количественный состав, а вместе с ним и повышать колонизационную резистентность животных.

Цель и задачи исследований. Цель работы состояла в определении эффективности использования метаболитных пребиотиков для профилактики острых кишечных заболеваний у новорожденных телят.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространение и нозологический профиль острых кишечных заболеваний новорожденных телят на фермах Краснодарского края.

2. Изучить особенности становления кишечного микробиоценоза и биологические свойства бактерий, заселяющих пищеварительный тракт новорожденных телят.

3. Изучить состояние кишечного микробиоценоза у глубокостельных коров как фактора влияющего на становление микробиоценоза у потомства.

4. Установить влияние органических кислот и гидролизата крови на рост симбионтных бактерий и разработать на их основе пребиотический препарат.

5. Изучить влияние метаболитных пребиотиков на факторы резистентности глубокостельных коров и новорожденных телят.

6. Определить профилактическую эффективность метаболитных пребиотиков при острых кишечных заболеваний у новорожденных телят.

Научная новизна. Установлена распространенность и нозологический профиль болезней пищеварительной системы у телят на фермах Краснодарского края в современных условиях. Определены особенности становления кишечного микробиоценоза у новорожденных телят и биологические свойства ряда кишечных бактерий. Изучено состояние кишечного микробиоценоза у глубокостельных коров перед отёлом. Определены концентрации молочной, уксусной и янтарной кислот, обеспечивающие ярко выраженный стимулирующий эффект на рост лактобацилл. Разработан новый препарат с пре-биотическими свойствами и установлена эффективность использования ме-таболитных пребиотиков при острых кишечных заболеваниях у новорожденных телят.

По результатам исследований получен патент на изобретение № 2491831, положительное решение на выдачу патента на изобретение по заявке № 2012145886/15 (087101) и приоритет на изобретение питательной среды для выделения лактобактерий по заявке № 2012154888.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволили выявить основные причины развития острых кишечных заболеваний у новорожденных телят. Определить влияние различных концентраций некоторых органических кислот - продуктов метаболизма симбиотических бактерий на рост лактобацилл и разработать новый препарат, обладающий выраженными пребиотическими свойствами. Установлена профилактическая эффективность метаболитных пребиотиков при острых кишечных заболеваниях у новорожденных телят.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (Краснодар, 2011); V Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (Краснодар, 2011); Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии и фармации» (Краснодар, 2012); Международной научно-практической конференции к 100-летию

СГАУ имени Н.А. Вавилова «Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве» (Саратов, 2013); II Международной научно-практической конференции «Современные проблемы животноводства и ветеринарии: состояние и пути решения» (Краснодар 2013); Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых в номинации «Ветеринарные науки» (г. Москва, 2012); научных конференциях сотрудников и аспирантов факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ (Краснодар, 2011, 2012, 2013).

Публикации. По материалам исследований опубликовано 8 научных статей, в т.ч. 2 в рецензируемых журналах рекомендованных ВАК и 1 патент.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- Острые кишечные заболевания новорожденных телят достаточно широко распространены на фермах Краснодарского края, нозология данной патологии включает в себя диспепсию, колибактериоз, стрептококкоз, псевдо-моноз, анаэробную энтеротоксемию и энтерококковую инфекцию.

- Основной причиной острых кишечных заболеваний у новорожденных телят являются нарушения процессов формирования у них кишечного микробиоценоза.

- Рост симбиотических бактерий можно стимулировать с помощью собственных метаболитов.

- Метаболитные пребиотики оказывают выраженное позитивное влияние как на микробиоценоз кишечного тракта, так и на организм животных в целом.

- Метаболитные пребиотики эффективны в профилактике острых кишечных заболеваний у новорожденных телят.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 132 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, предложений, библиографического списка и приложения. Работа иллюстрирована

30 таблицами и 5 рисунками. Библиографический список содержит 220 источников, из них 31 иностранных.

1. Обзор литературы

1.1. Распространение и причины возникновения острых кишечных заболеваний у новорожденных телят

В структуре заболеваний новорожденных телят, в хозяйствах Российской Федерации наиболее часто регистрируемой патологией являются желудочно-кишечные болезни [9, 105].

Ежегодно желудочно-кишечными болезнями заболевают от 70 до 100% новорожденных телят, при этом летальность доходит до 60 % [17, 37, 91, 178, 180, 181].

В.И. Терехов [158] отмечает, что на фермах Кубани ежегодно 42-45% новорожденных телят переболевает данной патологией, из которых около 22% погибает. При этом, как отмечает автор, на долю таких инфекционных заболеваний новорожденных телят как эшерихиоз приходится 0,3-0,8%, а стрептококкоз - 0,005-0,02% случаев. О том, что острые кишечные болезни телят регистрируются в большинстве случаев как незаразные говорят данные приведенные в отчете ВНИИЗЖ за 2012 г, посвященные эпизоотической ситуации в стране [185], где указывается, что в 2011 г было зарегистрировано всего 3711 случаев колибактериоза, 782 - энтеротоксемии, 509 - рота-коронавирусной инфекции, 372 - вирусной диареи и 178 диплококковой инфекции.

Установлено, что кишечные заболевания регистрируются во все сезоны года, но наибольшая инцидентность совпадает с массовыми отелами, которые приходятся на ноябрь-март [35, 91, 158, 186]. Однако при круглогодовых отелах острые кишечные заболевания новорожденных телят могут регистрироваться постоянно в течение года [37, 121, 146,147].

Этиология острых кишечных заболеваний новорожденных телят постоянно изучается, дополняется и обсуждается специалистами. Исследования показывают, что развитию данной патологии предшествует взаимодействие целого комплекса различных факторов, которые подразделяются на две основные категории - инфекционные и незаразные. Инфекционный фактор за-

ключается во взаимодействии организма теленка с различными микроорганизмами в результате несоблюдения гигиенических условий профилакториев. Незаразный фактор включает физиологическую неполноценность новорожденного, нарушение сроков и доз выпойки молозива, низкую квалификацию обслуживающего персонала и т.д.

Формирование первых приспособительных реакций новорожденного теленка зависит от условий его внутриутробного развития, а также от взаимодействия функциональных, биохимических, морфологических, регулятор-ных процессов собственного организма с условиями окружающей его внешней среды. Низкий уровень механизмов иммунологической защиты в первые дни жизни у телят обычно приводит к утрате доминирующей роли макроорганизма во взаимосвязи с окружающими его микроорганизмами. В таких условиях заселение пищеварительного тракта происходит как симбионтной, так и условно патогенной микрофлорой. К одному из наиболее важных факторов, влияющих на формирование эндомикроэкологической системы у телят, относят условия окружающей среды в первую неделю жизни.

При благоприятных условиях внешней среды, формирование кишечной микрофлоры новорожденных телят происходит в течение первой недели жизни [158]. Между тем на 2-3 день жизни микрофлора кишечника новорожденных телят обычно представлена непатогенными и не резистентными E.coli, энтерококками и сапрофитными бактериями. Количество лактобакте-рий и бифидобактерий колеблется в пределах 103—105 КОЕ/г. В дальнейшем, в зависимости от условий содержания в профилактории количественный и качественный состав их кишечной микрофлоры может меняться. Эти изменения, как правило, характеризуются одним из взаимоисключающих вариантов: увеличивается численность либо нормальной микрофлоры, либо условно патогенной. Изменение количественного и качественного соотношения микрофлоры в кишечнике принято называть дисбактериозом. При этом первой ступени дисбактериоза соответствует увеличение количества УПБ при нормальном количестве бифидо- и лактобактерий. О второй ступени развития

дисбиотических процессов обычно говорят при снижении количества симби-онтных бактерий до 105 КОЕ/г. Дальнейшее снижение количества микробов-симбионтов или полная их элиминация приводит к состоянию, характеризующемуся стойким развитием дисбиотических процессов в кишечнике, которое принято считать третьей стадией дисбактериоза. [37, 58, 91, 183].

Дисбактериоз у новорожденных телят вызывается обычно из-за попадания в желудочно-кишечный тракт условно-патогенных микроорганизмов в больших дозах из окружающей среды или некачественного молозива.

Установлено, что в сычужном содержимом у заболевших диареей телят количество микроорганизмов в 1 ООО раз выше, чем у здоровых телят. Причем от этих животных, как правило, выделяются преимущественно энтеротокси-генные штаммы кишечной и синегнойной палочки, протей, стафилококки, клостридии и грибы кандида [131].

Проблема раннего заражения телят стала реальностью из-за недооценки важности таких элементарных мер как, соблюдение режима эксплуатации и санации профилакториев. Подобные недоработки стали нормой для многих хозяйств, потому что долгое время их удавалось в той или иной мере «сглаживать» применением антибиотиков, что ослабило интерес к дезинфекции [131, 158, 186].

В настоящее время граница между патогенными, условно-патогенными и сапрофитными бактериями стала расплывчатой. Некогда сапрофитные бактерии обладают адгезивными свойствами и активно заселяют организм животных, а условно-патогенные при определенных условиях (понижение защитных механизмов телят и повышение патогенности микробов) могут вызывать целые вспышки инфекционных заболеваний [38, 183, 186].

Данные ряда исследователей убедительно показывают, что в каждом случае диареи у новорожденных телят имеет место прямое или косвенное участие одного или нескольких инфекционных агентов, которые обладают факторами патогенности. Выделяют три группы болезнетворных факторов: первая - отвечает за адгезию и колонизацию, вторая - обеспечивает устойчи-

вость бактерий к фагоцитам и гуморальным факторам иммунитета, третья -приводит к развитию диареи и токсикоза. Первые две группы факторов в комплексе отвечают за способность микроорганизмов персистировать в организме телят, при этом, как только с�