Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Продуктивные и биологические особенности свиней с интегрированным в геном чужеродным геном релизинг-фактора соматотропного гормона

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Продуктивные и биологические особенности свиней с интегрированным в геном чужеродным геном релизинг-фактора соматотропного гормона"

РГВ од

- 6 СЕН 2000

На правах рукописи

Чабан Иван Михайлович

ПРОДУКТИВНЫЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ СВИНЕЙ С ИНТЕГРИРОВАННЫМ В ГЕНОМ ЧУЖЕРОДНЫМ ГЕНОМ РЕЛИЗИНГ - ФАКТОРА СОМАТОТРОПНОГО

ГОРМОНА

03.00.23.- Биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Дубровицы Московской области 2000г.

Диссертационная работа выполнена а отделе биотехнологии животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства (ВИЖ).

Научный руководитель - доктор сельскохозяйственных наук,

академйк РАСХН Л.К. Эрнст

Официальные оппоненты - доктор биологических наук Н.Г. Букаров

кандидат биологических наук В.П. Рябых

Ведущее учреждение - Всероссийские научно-исследовательский

институт свиноводства

Защита диссертации состоится И июля 2000 г. в 10 часов на заседании диссертационного Совета Д.020.16.02 при Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес: 142132, Московская область, Подольский район, пос. Дубровицы

I

I

I

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан 31 мая 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, > кандидат биологических 1

/ПГ-МГ, о

. Губанова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность т«чы, Совершенствование и создание новых высокопродуктив-Йых пород свинеП традиционными методами селекции япляегся делом долговремен- ■ ним и трудоемким. Современна» биологическая наука сделала прорыв в этом вопросе на основе использования методов генной и клеточной инженерии, разработав методику изменения наследственной природы, путем интеграции чужеродных генов в («ном животного (Муромцев Г.С. и др., 1990, Эрнст Л.К. и др., 1993). '

Одним из наиболее актуальных направлений биотехнологической науки *вля-ется изменение генома эукарнот (в том числе сельскохозяйственных животных) методами генетической инженерии с целью придания им желательных качеств.

В последнее десятилетие развернут широкий фронт исследований по созданию тршегенных животных с конечной целью повышения продуктивности, использования их как продуцентов биологически активных веществ, получения трансгеииых животных с повышенной устойчивостью к инфекционным заболеваниям, применения этих животных в качестве биомоделей в медицине, а также для ксенотрансплантации органов и тканей (Эрнст Л К. и др., 1994, В&лл Р. и др., 1992).

Применение такого подхода сделало возможным изучение влияния различных регуляторных элементов па уровень и гканеспецифичность экспрессии генов и выяснение влияния экспрессии шгтегрироваиных генноинженерных конструкций на организм животного (Брем Г. и др., 1991, Глоссер А. и др., 1986, Палмиттер Р. и др., 19ВЗ)..

Эксперименты по получению и изучению трансгенных животных проводятся во многих странах мира. Однако, несмотря на многочисленность и многообразие этих исследований, многие факторы, определяющие эффективность экспрессии чужеродных генов в клетках животного реципиента целостного организма остаются недостаточно изученными. В связи с этим, изучение экспрессии введенных чужеродных генов и изучение их взаимосвязи с физиолого-морфологичсскнми признаками у трансгенных свиней является актуальной задачей как в биотехнологии, так и селекции сельскохозяйственных животных.

■, . " . *

Цель изялачд исследований. Целью настоящей работы являлось изучение

I

продуктивности, обмена веществ, энергии н качества мясо-сальной продукции у растущих - откармливаемых трансгенных по релнзннг-фактору гормона роста свиней IV поколения. В задачи исследований входило определить:

а) динамику среднесуточных прнвссов при откорме свиней с 25 до ПО и с 50 до 160 кг живой массы;

б) переваримость основных питательных веществ, обмен азота, углерода и энергии при живой массе свыше 100 кг;

в) мясо-сальную продуктивность при убое свиней по достижении 160 и 110 кг живой массы, морфологический состав туш, развитие внутренних органов;

г) химический состав и энериггическую ценность мяса н сала свиней;

д) биохимический состав крови;

е) активность генов рРНК после иммунизации;

ж) жнрнокислотный состав свиного жнря.

Цаучная новизна работы. В результате проведенных исследований определены продуктивные и биологические качества у растущих- откармливаемых свиней, трансгенных по релизинг-фактору гормона роста человека МТ - (ЬОЙР.

Научно-ппяктическяя значимость работы. Результаты исследований дают возможность объективно судил. о сохранении влияния интегрированной ненкой кон-' струкции МТ-НЮЯТ в геномесвиней четвертого поколения.

Основные положения, выноснмые на защиту. Влияние интегрированного в геном чужеродного гена релизинг-факгора соматотропного гормона на продуктивные и биологические особенности свиней IV поколения.

. Апробация работы. Материалы диссертации были доложены на заседании отдела биотехнологии ВЮКа (1989, 1999 гг.), на межотдельской конференции ВИЖа (2000 г.). " ;

Публикации. По материалам диссертации опубликованы две работы.

Структур» и объем работы! Диссертация состоит из пвеления, обзора литера-гуры, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы. Диссертация изложена на 141 странице машинописного текста, включает 42 таблицы, 6 рисунков, 14 фотографий. Список л итераторы включает 127 источников, в том числе 64 на иностранных языках.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для изучения влияния интегрированного в геном гена релнзинг-факгора сома-тотропного гормона человека на продуктивные и биологические особенности свиней IV поколения было проведено два опыта па двух группах откармливаемых транасиних свиней и их аналогах в первом опыте с 50 до 160 кг жипой массы по 10 голов в каждой и во втором с 25 до 110 кг но 5 голов в каждой. Опыты проведены по схеме 1.

Первый опыт проводили с 50 до 160 кг и второй с 25 до 100-110 кг живой массы. Свиньи были получены отделом биотехнологии в ЭХ"Кленово-Чегодаено'\

Группы были подобраны по принцип)' одиогнездовых аналогов с учетом живой массы, возраста и пола.

В ходе первого опыта 8 голов свинок (по 4 головы из каждой группы) по достижении половой зрелости были отправлены в ЭХ"Клеи08о-Чегодаено" для осеменения и получения животных для второго опыта методом близкородственного разведения с целью выявления консолидированных признаков чужеродного гена.

Инге грацию чужеродного гена определяли с помощью полимеразной цепной реакции. Для ГИДР геномную ДНК выделяли из кусочка ушной раковины родившихся поросят. Тестирование проводили совместно с сотрудниками ВПЖа Поповым А.11. и Зиновьевой Н.А. (1998).

В течение опытов кормление свиней было индивидуальным полнорациопным комбикормом СК-5 по нормам, поение из автопоилок. Температура н свинарнике находилась в пределах от +10 до 20°С. В период опыта ежедневно учитывали по группам количество скармливаемых кормов и их поедаемоегь, контролировали физиологическое состояние животных, два раза в месяц поросят взвешивали.

Схема опыто»

При достижении подопытными свиньями живой массы 100 кг на трех животных из каждой группы были проведены опыты но изучению переваримости питательных веществ рационов и обмену азота, углерода и энергии, а при достижении свинья-

ми живой массы 160 кг в первом опыте и 100-110 кг во втором был проведен контрольный убой всех животных с детальным изучением развития внутренних органов и анатомо-морфологнчсского состава туш. Обмен энергии изучали в рсспирационных камерах.

Химический cocían кормов, кала, мочи, продуктов убоя, крови и изучения активности генов рРНК у свиней после иммунизации проводили общепринятыми методиками. В кормах и экскремешах определяли: содержание общей влаги - методом высушивания в термостате до постоянной величины ; сырую золу - сухим озоленисм в муфельной печи; общий азот - .по Къельдалю; сырой жир - по Соксклезу; сырую клетчатку - по Геннебергу и Шгокману; каииИП - трнлономезричгским методом; фосфор -по Фиске-Сиббороу; энергию - калориметрическим методом; углерод - но методу Тюрина в модификации Лукашек. Содержание кислорода и углекислого газа • на газоанализаторах "Manioc" и "Урас" фирмы Хартман и Браун (ФРГ)- Обмен энергии и энергетическую питательность рационов определяли прямым методом в респнраци-онных опытах на свиньях. Баланс энергии, отложение жира и белка в теле свиней рассчитывали по константам и уравнениям, рекомендованным первым Международным симпозиумом по энергии. D мясе и длиннейшей мышце спины определяли содержание волы, белка, жира, золы. В пробах крови определяли содержание: белка в сыворотке - рефрактометрическим методом; мочевины • по реакции с диацетилмонокисмо-сом в присутствии тносемнкарбоцила; общих липидов, фосфолипидов и холестерин -по Покровскому; фосфора - по методу Бригса в модификации Усовича; активность аминотраисфераз (ACT и АЛТ) - по Пасхиной. Содержание жирных кислот - методом газожидкостной хроматофафнн метиловых эфиров жирных кислот на хроматографе . "Цвст-4".

Качество мяса и принадлежность к той или иной группе (PSE, DFD и N) оценивали по величине рН мышечной ткани через 1 и 24 часа после убоя животных при одновременном определении температуры и визуальной оценке цвета мяса; влагоудер-'жнваюшие свойства мяса определяли методом прессования по Грау и Хампу в модификации ВНИИМПа (1953); реологические свойства мяса - методом пенеграции на длиннейшей и полусухожильной мышце. '

Влагу в мясе определяли методом высушивания до постоянной величины.

Для изучения активности генов рРНК свиней иммунизировали вакциной против классической чумы 2-х-кратно с интервалом через 14 дней с профилактической дозой.

Показатели, полученные в результате исследований, были обработаны биометрическими методами по малой выборке по автору Е.К.Меркурьевой (1970) с помощью персонального компьютера IBM.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Живая масса н среднесуточные привесы свиней.

Одним ю основных показателен продуктивности является прирост живой массы. Динамика живой массы, среднесуточных привесов и затраты кормов па прирост индивидуально но животным и по группам в возрастном аспекте и в целом за опыт приведены в таблице I,

Тийлица I

Живая масса, среднесуточные привесы и затраты кормов на прирост трансгенных свиней и их аналогов (в целом но опытам)

Трянсгпшыс скиньн Контрольные свиньи

л> жинаа чисса Срсдие- За граты Л» жниаа масса Средне- Затраты

ЖЯВОТИЫТ * * С)10Ч- корна ЖИВОТ- а а суточ- корна

начале конце кыК иа 1 кг HUI начале конце ный на 1 кг

ОЯЫ1Я оиыта apunte, г прироста, кг опыта опыта ирмасс. г прарос-т», кг

1 опыт

Боровк и

1593 52,0 166,0 644 4,8 1535 47,7 172,4 705 4.7

1601 48,6 143,2 534 5,5 1715 48,6 166,0 663 4.6

1543 56,2 168,1 632 4,8 1545 63,3 166,0 580 5.3

1713 45,0 154,4 618 4,6 1720 45,6 166,4 682 4.7

1915 48,0 176,0 723 4.3 1698 44,0 170,0 712 4,6

В среднем 50,0 161,5 630 4,8 49,8 168,2 669 4,8

Свинки

1572 52,4 112,6 621 4,5 1576 52,0 107,6 573 4,8

1716 43,5 109,0 675 4.1 1518 41,0 105,7 667 4,2

1574 50,2 113,4 652 4,3 1524 50,4 110,6 621 4.6

1570 51,0 111,3 622 4,4 1506 42.2 110,2 701 4,0

В среднем 49,3 111,6 64,2 4,3 46,4 108,5 640 4,4

¡1 опыт

Бо;юеки

1035 31,6 110,0 560 4,1 1037 32,6 110,0 553 4,3

1034 35,0 115,8 577 4,4 1091 26,2 110,6 603 4,2

1031 27,9 95,4 482 4,3 1096 28,1 114,0 614 3.7

1038 16,8 95,8 564 3.9 1033 21,5 101,8 574 3,9

1093 19,5 97,7 559 4,1 1089 16,7 93,2 546 ■ 4,1

В среднем 26,2 102,9 548 4.2 25,0 105,9 578 4,0

В среднем по II 41.3 126,3 605 4,4 40,0 128,9 628 • 4,4

опытам, кг

Выращивание поросят было интенсивным. Среднесуточные привесы как у трансгенных поросят, так и у их аналогов, находились на уровне 500-700 г в сутки. В целом, за период выращивания и откорма в первом опыте с 50 до 163-167 кг среднесуточные привесы составили у трансгенных боровков 630 г, у свинок - 642 г и во втором опыте с 25 до 110 кг привес составил у трансгенных свиней 348 г, а у их аналогов, соответственно в I и II опытах 669 и 640 г и 578 г, но эти различия были не достоверными.

Переваримость питательных веществ рационов, обмен азота н энергии.

Трансгенные свиньи переваривали органическое вещество на 78,9%, протеин -80,3%, жир - 8,8, клетчатку • 21,9, БЭВ - 84,5, а их аналога соответственно на 78,8%; 79,5; 12,0; 14,5 и 85,1%, т.е. различия между ними были недостоверными. Среднесуточное отложение азота у трансгенных свиней составляло 23,8 г, а у их аналогов 23,4 г, т.е. почти равное количество. Результаты исследований по обмену энергии у трансгенных свиней и их аналогов приведены в таблице 2.

Таблица 2

Обмен энергии у трансгенных евкней и их аналогов

JÛ Потреблено Отложено в теле Тепло-

животных обменной энергии, в виде продукция,

энергии, МДж МДж белка жнра МДж

Трансгенные сеиньи

1543 36,61 12,23 . 151 217 23,38

1593 36,04 9,89 146 161 26,15

1601 34,36 13,51 97 281 20,85

В среднем 35,67 ±0,83 11,88 ± 1.3 131121,1 220 ±42,5 23,46 ± 1,87

Аналоги

1545 35,54 13,31 • 158 239 22,23

1715 35,61 10,55 138 182 23,06

В среднем 35,60x0,01 11,93 ±0,59 148 ± 10,61 211 ±8,49 22,7 ± 0,69

Различия между траисгениыми свиньями и нх аналогами по эффективности использования принятой в корме энергии, се обмену и отложениям в теле в виде белка и жира были незначительными. В среднем, трансгенныс свиньи использовали энергию корма на синтез в теле белкл и жира с эффективностью 24,7%, а их аналоги - 24,9% ; в теле трансгенных свиней в сутки откладывалось 131 г белка и 220 г жира, а у их аналогов 148 и 213 г, т.е. потги равное количество. Количество теплопродукции было также почти равным: 23,46 и 22.70 МДж/сутки на голову.

Биохимические исследования крови.

Биохимические показателям крови: общий белок, альбумины, ACT, АЛТ, глюкоза, креатинин, Са, Р, мочевина, общие липнлы крови, фосфолипиды крови н холестерин находились в пределах физиологической нормы и существенно не различались.

Изучение активности генов рРНК у свиисй после иммунизации.

Были изучены особенности функционирования ЯОР у трансгснных животных, для изучения возможности использования оценки активности генов рРНК в качестве тест-системы, характеризующей интенсивность обменных процессов в органшме.

Результаты исследований приведены в таблице 3. Оказалось, что на момент постановки опыта наибольшая активность ядрышек была у грансгашых животных. На 30 день после иммунизации по всем группам наблюдалась четкая тенденция к увеличению числа активных ядрышек. К 60 дню в этой группе наблюдается снижение числа активных ядрышек в клетке, при практически стабильном уровне их активности в контроле, в результате чего происходит его выравнивание по труппам.

Таблица J

Частота интерфазных клеток с различным числом активных ядрышек в

группах обследованных свиней

Группы Среднее число ядрышек на клс! ку Доля клеток с числом активных ядрышек 3 и более (в %)

до иммунизации

Трансгенныс 1,81 ±0,11 14,0 ± 2,00

Контроль 1,68 ±0.07 9,8 ±1,33

30 день после иииуниыции

Трансгеншде 2,05 ±0,12 26,0 ±2,53

Контроль 1,86 ±0,08 18,4 ±1,73

60 день после и\шуншации

Траисгенные 1.87 ±0,14 22,0 ±2,39

Контроль 1,90 ±0,09 21,6 ± 1,84

Статистический анализ, проведенный на основе критерия согласия, показал существование достоверных различий между трансгснными и контрольными животными в подготовительный период и первый период опыта (р<0,05). Показано достоверное повышение активности генов рнбосомной РНК к 30 дню опыта в группе трансгенных животных (р<,0,01) и контрольных группах (р<0,05). К 60 дню различия между группами нивелировались в результате достоверного снижения числа активных

и

ядрышек у трансгенов (р<0,05). Данное яатенис, очевидно, обменяете* тем, что у трансгенных животных процесс синтеза рРНК, связанного с иммунным ответом, шли более активно.

Полученные результаты указывают на то, что уровень активности генов рнбо-сомной РНК, определяемый по числу окрашенных серебром ядрышек, свидетельствует о различиях в шггенснвности обмена вешсств, на что указывает появление клеюк с дополнительными активными ЯОР у трансгснных животных. П таком случае понятна активация этих генов под лсПсгвнем вакцины. Поскольку изучение активности рнбо-сомных генов осуществлялось в иммунокомпстентных клетках, стимуляция иммунитета естественно привела к активации п них обменных процессов.

Мясная продуктивность н качество туш трансгенных и контрольных свиг

uefl.

При достижении свиньями жниой массы 160 кг н первом опыте н 100-ПО кг во втором опыте были проведены контрольные убой всех животных.

Показательным критерием оценки лолномясностн туш является "индекс мяс-ности" - соотношение в них тканей мясо/кость н "индекс постностн"- мясо/жир. Полученные данные свидетельствуют о том, что туши опытных животных были более полномясными и более постными в сравнении с контрольными.

Как видно из данных таблицы 4, живая масса составляет в среднем в первом опыте по контрольной группе 168,1 кг, в опытной - 161,3 кг. Во втором опыте животные контрольной группы превосходили животных опытной группы по живой массе (на 2 кг), массе туш (на 2,67 кг), выходу мяса на костях и выходу жира-сырца, в сред- -нем на 1,18 и 1,29%.

Таблица 4

Характеристика туш свиней опытной и контрольной групп (по опытам)

Преду бойная Масса туши Выход туши, Масса Выход

живая иасса. кг % внутреннего внутреннего

кг жира, кг жира, %

/ опыт

Трансгенные свиньи

161,5 ±6,4 И 4.9 ±4,9 71,11 ±0,87' 4,7 10,4 4,010,2

Свиньи - аналоги

168,1 ± 1,4 119,6 ± 1,5 71,11 ±0,63 5,8 ±0,5 4,8 ± 0,4

// опыт

Трансгенные свиньи

106,5 ± 3,5 71,0 ± 2,7 66,7110,52 1.7 ± 0,3 2,410,4

Свиньи - аншоги

108,5 ±3,7 73.7 ± 2,7 67,8910,2 Г' 2,7 Ю^ 3,7 ±0,5Х)

х) - Р<0,95

Результаты толщины шпика приведены в таблице 5. В среднем в опытной группе свиней во всех трех точках толщина шпика была ниже, чем в контрольной, при этом разница в первом опыте в 1-й, 2-й и 3-й точках составляла соответственно 0,7; 0,6 и 0,8 см, а во »тором • 0,2; 0,4 и 0,1 см.

Таблица 5

Промеры туш свиней (по опытам)

Л» Толшнна шпика в точке, см

ЖНВОТИ-4Х 1 2 3

/ опыт

Трансгенные свиньи

1543 3,6 4.3 5.7

1915 4,9 3.8 6,4

1593 2,4 2.8 5,7

1713 3,1 3.1 3,2

1601 4,9 3,2 5,4

В среднем 3.8 ± 0,5 3.4 ± 0,3 5,3 ± 0,6

Свиньи - аналоги

1545 5.4 3,6 6,3

1535 5,1 4.6 7,4

1715 4,2 3,8 5,9

1698 4.2 4,5 7,8

1720 3,9 3,7 • 2,6

В среднем 4,6 ±0,3 4,0 ± 0,2 6,0 ± 1,0

И опыт

Трансгенные свиньи

1034 3,0 2.5 3.5

1035 3,3 2,8 3.8

1093 4,0 2,4 3.7

1038 3,3 2,4 3.2

1031 2,1 1.4 2,8

В среднем 3,1 ±0,3 2.3 ±0.2 3,4 ±0,2

Свиньи - аналоги

1091 3.1 2,4 3.6

1037 3,6 3,0 3.7

1033 3,5 2,8 3.8

1089 3,0 2.3 3.1

1096 3,5 2.9 3,4

В среднем 3,3 ±1,1 2,7 ±0.1 3,5 ±0,1

Примечание: Толщина шпика в точке:

1 - между 3-4 крестцовыми позвонками

2 - над остистыми отростками позвонков между 3-4 ребрами

3 - над остистыми отростками цозионков между 6-7 ребрами Результаты изучения морфологического состава туш трансгенных свиней и их

аналогов показали, что в первом опыте в них содержалось соответственно: мяса •

54,02 н 53,02%; сала - 31,2 к 32,7%; костей - 10.06 к 9,4%: шкуры - 4,68 и 4,88% к во втором опыте; мяса - 57,5 и 55,3%; сала • 25,7 и 28,6%; костей • 11,3 и 11,1% к шкуры • 5,3 и 5,0%.

В таблице 6 показано содержание жира в тушах у трансгенных свиней и их аналогов. В тушах когтрольных свиней больше жира наружного, внутреннего и в первом опыте достоверно больше собственного жира на 7,6 кг или 4,2% (Р<0,95).

Тыб.1 ица 6

Содержание жира я мяса в тушах с внутренним жиром (без костей)

трансгениых свиней н их аналогов (по опытам)_

Всего в туше в том числе собственно жира

«НВОТ11ЫХ мяса, кг кг %

/ опыт

Трансгенные свиньи

1543 107.7 .48,8 45,3

1915 111,9 56,3 503

1593 104,9 49,2 46,9

1713 92,1 42,1 45,7

1601 91,9 44,3 48,3

В среднем 102,0 ±4.1 48.1 ±2,4 47,3 ±0.9

Свиньи - аналоги

1535 110.3 60,3 54,6

1715 105,1 52,1 49,6

1545 109,1 48,9 44,9

1720 105,5 55,4 52,5

1698 110,7 61,9 . 55,9

В среднем 108,0 ± 1,2 55,7 ±2,4" 51,5 ±2,0'°

// опыт

Трансгенные свиньи

1035 63,2 24,4 38,6

1034 66,2 26,5 40,0

1031 54,7 17,5 32,0

1038 58,4 19,8 33,9

1093 57,0 32,5 36,8

В среднем 59,9 ±2,43 22,1 ± 1,6 36,8 ±1,61

Свиньи - аналоги

1037 63,6 ¡25,3 39,7

1091 66,6 31,4 47.2 .

1096 68,5 ' 26,1 38,1

1033 59,0 . 21,8 37,0

1089 58,1 23,4 40,2

В среднем 63,2 ±2,04 25,6 ±1,6 40,4 ±1.8

Данные контрольного убоя свидетельствуют о нормальном развитии внутрен-

него органов как у трансгенных свиней, так и у их аналогов. По большинству органов

существенных различий не обнаружено. Однако те органы, которые связаны с сшгге-зом внутреннего сало, проявляют существенное различие. Так, в мерном опыте вес сальника у контрольных животных на 18,2% больше, чем у трансгснных сшшсй. Вес внутреннего сала у контрольных особей выше на 46,3% в сравнении с трансгенамн. При этом разница в весе брьпжеЛки статистически достоверна (Р<0,95).

ч По химическому составу средней пробы мяса были отмечены некоторые различия: в мясе транстшых сшшсй в первом опыте было больше воды на 1.66% и меньше жира на 1.95% при практически равном содержании белка: 13,5 и 13,6%. Некоторые рагтнчня были и по химическому составу средней пробы сала: у гранстенных свиней в сале содержалось больше воды на 1,34 и меньше белка на 0,35% при равном содержании собственно жира: 85,0 и 85,8%. Во втором опыте различи* были только по содержанию волы и жира в средней пробе сала. В спле трансгснных сшшсй волы содсржаюсь на 2,08% больше, а жира на 2,56% меньше, чем у их аналогов.

Физико-химические характеристики и химический состав мышечной ткани свиней.

Содержание белка несколько ниже в полу сухожильной мышце при одновременном более высоком содержании в ней жира; несколько меньшее содержание жира . отмечено у животных опытной |руппы, более заметное ь случае полусухожнлыюй ' мышцы. Однако аиазнзируя полученные результаты химического состава мышц, нельзя констатировап. достоверное различие между контрольными н опытными животными по изученным параметрам (рН, содержание влаги, жира н белка) из-за больших колебаний между показателями в пределах (руппы.

Нежность мясо - одна из важнейших характеристик структурно-механических свойств мясного сырья и готовой продукции - показатель их качества.

Средние значения результатов исследований приведены в таблице 7.

Таблица 7 .

Реологические свойства мяса фансгениых евнней и их аналогов_

Группы животных Направление ммеров, величины пенетрации

длиннейшая мышца

Опытные вдоль волокон поперек волокон 222.1 ± 33,9 143.2 ± 11,4

Контрольные вдоль волокон поперек волокон 222,9 ± 18,5 152,5 + 25,8

■ пмусухожичьная мышца

Опытные вдоль волокон ; поперек волокон 249,2 ±18,9 137,4 ±18,2

Контрольные вдоль волокон поперек волокон 272,5 ±48,5 151,1 ±25,5

Анализируя показатели ленетрации длиннейшей и полусухожилыюй мышц при измерении поперек волокон, следует отметить, что мясо животных коигрольной [руп-пы ив 6,4$% нежнее мяса опытных животных и на 9,46% нижнее при измерении т. астНепШпеиз. Это можно объяснить большим содержанием жира и влаги в мясе животных контрольной группы.

При измерении вдоль волокон длиннейшей мышцы различий в показателях пс-нетрацни между контрольной н опытной группами не установлено. При измерении полусухожилыюй мышцы, что мясо животных контрольной группы на 10,93% нежнее опытной.

В целом, следует озистить, что мясо трансгснных свиней ы их аналогов имеет достаточно высокие показатели нежности с небольшим преимуществом контрольной группы.

Жнркокнслотный состав свиного жира.

Анализ средней пробы свиного жира изучаемых свиней показал, что каких-либо достоверных различий между трансгениыми свиньями и их аналогами не выявлено. У трангсенных свиней первого опыта можно отметить большее содержание в свином жире линолевой кислоты и суммы ненасыщенных жирных кислот. У транс« генных свиней во втором опыте выявили больше ненасыщенных жирных кислот и достоверно большее содержание линолевой кислоты (Р<0,95).

ВЫВОДЫ

1. У трансгенных по гену релизинг-фактора соматотропного гормона свиней IV поколения отсутствуют достоверные различия по среднесуточному приросту живой массы, затратам кормов на единицу прироста живой массы, переваримости питательных веществ, обмену азота и энергии.

2. Туши трансгенных животных были более полномясными и постными. Толщина шпика у трансгснных свиней существенно ниже, в сравнении с контролем (при живой массе 107-109 кг контроль превосходит трансгснных по средней толщине шпика на 7,8%, а при 162-168 кг - на 15%; колнчествожира в туше больше у контрольных на 4,8% и 15% (Р<0,95), коэффициент мясности 'у трансгенов выше на 15,5 и8,0% в обеих весовых категориях). • '

3. При анализе средней пробы свиного жира на содержание высших жирных кислот установлено, »по трансгенные свиньи достоверно превосходят аналогов по ер-держанию линолевой кислоты (Р<0,99).

4. Установили более высокий выход основных субпродуктов 1 категории (печени, почек, сердца) у транспснных животных в сравнении с нетрансгснными.

5. Не выявлено различий в протекании посмертных биохимических процессов в мышечной ткани.

6. По химическому составу:

а) не выявлено существенных различий по содержанию влаги в изученных мышцах как для отдельных животных внутри группы, тах и у животных опытной и контрольной групп;

б) установлено несколько большее содержание внутримышечного жира в контрольной группе, наиболее выраженное в полу сухожильной мышце.

7. По микроструюуриым показателям:

а) отмечены несколько большие размеры мышечных волокон в длиннейшей мышце спины и полусухожильной мышие опытных животных по сравнению с таковыми же мышцами у животных контрольно!) группы;

8. При иммунизации экспериментальных свиней вакциной против классической чумы повышается уровень активности генов рРПК в лимфоцитах свиней, наибольшая активность отмечена у трансгснных свиней на 30 день после иммунизации.

9. Показатели пенетрацни длшшейшей и полусухожильной мышц (при измерении поперек волокон) свидетельствуют о том, что мясо контрольных животных нежнее соответственно на 6,45 и 9,46% в сравнении с мясом опытных животных и на 10,93% при измерении вдоль волокон полусухожильноП мышцы.

ПРЕДЛОЖЕНИЕ

Рекомендуем Э\Х «Кленово-Чегодаево» создание линий трансгенных евннен с интегрированным геном релизинг-фактора соматотропиого гормона МТ-НЮШ7 для использования трансгенных животных в научных и селекционных целях.

I Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Эрнст Л.К., Лисицын А.Б., Тазу.пов Ю.В., Чабан И.М., Шатайло В.Н. Генно-инженерная селекция свиней // Мясная индустрия.- 1999,- №.3.- С.11-14.

2. Чабан И.М., Шатайло В.Н., Кленовицкий П.М. Изменение активности генов рРНК у свиней после иммунизации // Совершенствование племенных и продуктивных качеств животных и птиц. Материалы конференции МГА ветер, медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина. М., 1999,- С.95-96.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Чабан, Иван Михайлович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Генноинженерные технологии - новый путь развития жи- 7 вотноводства

1.2. Методы получения трансгенных животных

1.3. Общая характеристика гормона роста

1.4. Разведение трансгенных животных

1.4.1. Особенности фенотипа свиней, трансгенных по гену 20 тМП-ЬОШ

1.4.2. Использование ПЦР для определения присутствия рекомбинантной генной конструкции в геноме трансгенных животных

Введение Диссертация по биологии, на тему "Продуктивные и биологические особенности свиней с интегрированным в геном чужеродным геном релизинг-фактора соматотропного гормона"

Актуальность темы. Совершенствование и создание новых высокопродуктивных пород свиней традиционными методами селекции является делом долговременным и трудоемким. Современная биологическая наука сделала прорыв в этом вопросе на основе использования методов генной и клеточной инженерии, разработав методику изменения наследственной природы, путем интеграции чужеродных генов в геном животного.

Одним из наиболее актуальных направлений биотехнологической науки является изменение генома эукариот (в том числе сельскохозяйственных животных) методами генетической инженерии с целью придания им желательных качеств.

В последнее десятилетие развернут широкий фронт исследований по созданию трансгенных животных с конечной целью повышения продуктивности, использования их как продуцентов биологически активных веществ, получения трансгенных животных с повышенной устойчивостью к инфекционным заболеваниям, применения этих животных в качестве биомоделей в медицине, а также для ксенотрансплантации органов и тканей (59, 123).

Многочисленные успешные работы Палмиттера, Гордона, Брема и ряда других исследователей по получению трансгенных животных как лабораторных (в основном мышей), так и сельскохозяйственных животных, продемонстрировали широчайшие возможности использования метода трансформации генома организма (68, 73, 82, 100).

Применение такого подхода сделало возможным изучение влияния различных регуляторных элементов на уровень и тканесцецифичность экспрессии генов и выяснение влияния экспрессии интегрированных генноинженерных конструкций на организм животного.

Совместными усилиями российско-германских ученых были созданы свиньи, трансгенные по конструкции mMTl-hGRF. Рекомбинантная генная конструкция mMTl-hGRF содержит структурную часть гена релизинг- фактора гормона роста человека (hGRF) и металлотионеиновый промотор 1 мыши (mMTl). Ранее проведенными исследованиями установлено, что у полученных трансгенных свиней до достижения живой массы 100 кг существенных отличий по скорости роста от их аналогов выявлено не было. Различия проявлялись по отложению в теле белка при откорме свиней свыше 100 кг живой массы, т.е. когда у обычных животных усиливаются процессы синтеза жира, а синтез белка резко снижается.

Эксперименты по получению и изучению трансгенных животных проводятся во многих странах мира. Однако, несмотря на многочисленность и многообразие этих исследований, многие факторы, определяющие эффективность экспрессии чужеродных генов в клетках целостного организма остаются недос-> таточно изученными. В связи с этим, изучение экспрессии введенных генов и изучение их взаимосвязи с физиолого-морфологическими признаками у трансгенных свиней является актуальной задачей как в биотехнологии, так и селекции сельскохозяйственных животных.

Цель и задачи исследований:

Целью настоящей работы являлось изучение продуктивности, обмена веществ и энергии у выращиваемых откармливаемых трансгенных по релизинг- фактору гормона роста свиней IY поколения. В задачи исследований входило определить: а) динамику среднесуточных привесов при откорме свиней с 50 до 150 кг живой массы; б) переваримость основных питательных веществ, обмен азота, углерода и энергии при живой массе свыше 100 кг; в) мясо-сальную продуктивность при убое свиней в 150 кг живой массы, морфологический состав туш, развитие внутренних органов; г) химический состав мяса и сала свиней; д) энергетическую ценность мяса и сала свиней; е) затраты кормов и энергии на производство прироста живой массы.

Научная новизна и практическая значимость работы: В результате проведенных исследований в настоящей работе определены продуктивные и мясные качества у откармливаемых свиней, трансгенных по релизинг-фактору гормона роста.

Апробация работы:

Материалы диссертации были представлены на заседании отдела биотехнологии ВИЖа.

По материалам диссертации опубликовано две работы.

Структура и объем работы:

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы. Диссертация изложена на 141 страницах машинописного текста, включает 42 таблицы, 6 рисунков, 14 фотографий. Список литературы включает 127 источник, в том числе 64 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Чабан, Иван Михайлович

6. ВЫВОДЫ

1. У трансгенных свиней IV поколения и их аналогов отсутствуют достоверные отличия по среднесуточному приросту живой массы, затратам кормов на единицу прироста живой массы, переваримости питательных веществ, обмену азота и энергии.

2. Туши опытных животных были более полномясными и более постными, толщина шпика у трансгенов существенно ниже, в сравнении с контролем (при живой массе 107-109 кг контроль превосходит трансгенов по средней толщине шпика на 7,8%, а при 162-168 кг - на 15%; количество сала в туше больше у контрольных на 4,8% и 15%, коэффициент мясности у трансгенов выше на 15,5 и8,0% в обеих весовых категориях).

3. Установлен более высокий выход основных субпродуктов 1 категории (печени, почек, сердца) у экспериментальных животных в сравнении с контролем.

4. Не выявлено заметных нарушений в протекании посмертных биохимических процессов в мышечной ткани. Отмечен значительный разброс величины рН мяса, особенно длиннейшей мышцы спины у индивидуальных животных как в опытной, так и контрольной группах.

5. По химическому составу: а) не выявлено существенных различий по содержанию влаги в изученных мышцах как для отдельных животных внутри группы, так и у животных опытной и контрольной групп; б) отмечены достаточно существенные колебания между отдельными животными внутри каждой отдельной группы по содержанию жира и белка; в) установлено несколько большее содержание внутримышечного жира в контрольной группе, наиболее выраженное в полусухожильной мышце.

6. По микроструктурным показателям: а) у опытных животных отмечено наличие дистрофических процессов в печени; б) отмечены несколько большие размеры мышечных волокон в длиннейшей мышце спины и полусухожильной мышце опытных животных по сравнению с таковыми же мышцами у животных контрольной группы; в) в мышечной ткани животных максимальный диаметр мышечных волокон превышает минимальный в 3-4 раза.

7. При иммунизации свиней вакциной против классической чумы повышается уровень активности генов рРНК в лимфоцитах свиней, наибольшая активность отмечена у трансгенных свиней на 30 день после иммунизации. Целесообразно использование цитогенетических показателей для оценки функционального состояния хромосомного аппарата у трансгенных животных.

8. Показатели пенетрации мышц т. 1ог^18в1ти8 ёогэ! и т. БеткепсНпеш (при измерении поперек волокон) свидетельствуют о том, что мясо контрольных животных нежнее соответственно на 6,45 и 9,46% в сравнении с мясом опытных животных и на 10,93% при измерении вдоль волокон т. БеткепсНпеш. Это можно объяснить большим содержанием жира и влаги в мясе животных контрольной группы.

9. При анализе средней пробы свиного жира на содержание высших жирных кислот установлено, что трансгенные свиньи достоверно превосходят аналогов по содержанию линолевой кислоты.

7. ПРЕДЛОЖЕНИЯ

В результате изучения целого комплекса биотехнологических и хозяйственно-полезных признаков в ряде поколений установлено, что трансгенные по релизинг-фактору гормона роста свиньи характеризуются рядом существенных изменений, связанных с трансгенезом.

Это прежде всего значительное снижение содержания жира в туше и организма в целом. Эти животные характеризуются более высокими коэффициентами мясности и постности. Все эти признаки являются значимыми для селекции.

Изучение биохимических показателей крови, а также морфологического ряда клеток, показало, что они у трансгенов не выходят за пределы нормы. Не отмечено также никаких отклонений в состоянии здоровья трансгенных свиней в сравнении с контролем. Стала очевидной перспектива создания линии транг-сенных свиней. Поэтому необходимо начать работу по получению монозиготных трансгенных свиней с интегрированным геном релизинг-фактора гормона роста.

После изучения биохимических и хозяйственно-полезных качеств этих животных можно рекомендовать их для практической селекции.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Чабан, Иван Михайлович, Дубровицы, Московской обл.

1. Андреева JI.B., Хайдарова Н.В. и др. Микроинъекция гена релизинг фактора гормона роста человека в зиготы и эмбрионы свиней // Доклады ВАСХНИЛ.- 1990.- №.7.- С.46 51.

2. Балаболкин М.И. Секреция гормона роста в норме и патологии. М.'Медицина, 1978.- 173 с.

3. Балаболкин М.И. Эндокринология. М.-.Медицина, 1989.- 416 с.

4. Богатырев А.Н., Эрнст Л.К. Генная инженерия сельскохозяйственных животных мощный рычаг селекции XXI века // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. - 1995.- Вып.1.- С. 3-13.

5. Брем Г., Зиновьева H.A., Эрнст Л.К. Генные формы новый путь производства биологически активных протеинов трансгенными животными // Сельскохозяйственная биология.- 1993 - №.6 - С.3-27.

6. Брем Г., Эрнст Л.К., Андропов Л.А. и др. Трансгенные свиньи (mMTl-hGRF): оценка качества туш и химического состава мяса при убое животных // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. 1995.-Вып. 1С. 26-33.

7. Вайсман Б., Капелинская Т., Городецкий С., Дыбан А. Возможность получения животных продуцентов биологически активных препаратов путем микроинъекции клонированных генов в яйцеклетки // Антибиотики и химиотерапия.- 1988.- T.XXXIII.- №.2.

8. Верховский O.A., Федоров Ю.Н., Сологуб В.К. и др. Использование моноклональных антител для оценки антигенных свойств иммуноглобулинов животных // Сельскохозяйственная биология.- 1995.- №.4.- С.94-100.

9. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. М., Медицина, 1982.

10. Волкова О.В., Елецкий Ю.К., Дубовая Т. К. и др. Гистология, цитология и эмбриология: Атлас. М., Медицина, 1996.

11. Газарян К. Трансгенные животные: перспективы использования животноводстве // Сельскохозяйственная биология.- 1988.- №.2.- С.31-39.

12. Гоголевский П., Гольдман И., Гусев В. и др. Исследование экспрессии гена В-галактозидазы в трансгенных ранних эмбрионах кроликов // Доклады ВАСХНИЛ.- 1991.- №.10.- С.38-42.

13. Гольдман И.Л., Башкеев Е.Д., Гоголевский П.А. Прогрессивная технология получения трансгенных овец // Докл. РСХА 1992.- №.9-10.- С.25-30.

14. Гольдман И.Л., Разин C.B., Эрнст Л.К. и др. Молекулярно-биологические аспекты проблемы позиционно-независимой экспрессии чужеродных генов в клетках трансгенных животных // Биотехнология.- 1994.- №.2.-С.3-8.

15. Гольдман И.Л., Эрнст Л.К., Гоголевский П. и др. Теоретические вопросы получения трансгенных животных. Эксперименты на кроликах // Ген-ноинженерные сельскохозяйственные животные / Сб. науч. тр. Вып.1.- 1995.-С.93-102.

16. ГОСТ 19496-93. Мясо. Метод гистологического анализа. М., "Стандарты", 1993.

17. Григорян Г.Ш. Биотехнологические основы повышения производства говядины, свинины и сокращения потерь в процессе переработки. ВНИИплем. М., 1993.- 239 с.

18. Дворянчиков Г.А., Иванов Л.Ю., Рудько Н.П. и др. Идентификация и анализ интегрированного в геном животных трансгена методом ПЦРамплификации и с помощью блот-гибридизации // Сельскохозяйственная биология.- 1993.- №.4.- С.39-46.

19. Дыбан А.П., Городецкая С.И. Трансгенные млекопитающие: изучение фенотипических эффектов гормона роста человека, индуцированного животным // Биотехнология.- 1987.- №.3.- С.352-357.

20. Блинов Н.П. Основы биотехнологии. С.Петербург:Наука, 1995.- 600 с.

21. Жданов А.Б., Дворянчиков Г.А. Амплификация интегрированного трансгена гена гормона роста быка методом полимеразной цепной реакции (PCR)//Генетика 1993.-Т.29.-С.905-913.

22. Зиновьева H.A., Попов А.Н., Эрнст JI.K. и др. Методические рекомендации по использованию метода полимеразной цепной реакции в животноводстве. Дубровицы, 1998. 47 с.

23. Зоотехнический анализ кормов /Петухова Е.А., Бессарабова Р.Ф., Ха-ленова Л.Д. М.:Колос, 1981. 256 с.

24. Изучение липидного обмена у сельскохозяйственных животных / Ме-тодич. указания. Боровск, 1980.- 73 с.

25. Калашникова Л.А. Получение и размножение трансгенных животных // Современные аспекты селекции, биотехнологии, информатизации в племенном животноводстве /Сб. ВНИИПЛЕМ.- 1997.- С.257-264.

26. Кудрявцев A.A. Методы исследования газового и энергетического обмена с.-х. животных. М.:Колос, 1974.- 405 с.

27. Кудрявцев A.A., Кудрявцева Л.А. Клиническая гематология животных. М.:Колос, 1974.- 405 с.

28. Лапшин С.А., Эрнст Л.К., Матяев В.И. Особенности жирнокислотно-го состава тканей трансгенных свиней // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. 1995.- Вып.1.- С. 58-61.

29. Лашас Л.В., Лашене Д.Г. Соматотропин человека. Вильнюс:Мокслас, 1981.- 143 с.

30. Лебедев П.Г., Усович А.Г. Методы исследования кормов, органов и тканей. М.:Россельхозиздат, 1976.- 271 с.

31. Лукашик H.A., Тащилин В.А. Зоотехнический анализ кормов. М.-.Колос, 1965.- 126 с.

32. Медведев С.Ю., Козикова Л.В., Бавин В.Г., Яковлев А.Ф. Рост и развитие трансгенных кроликов и свиней с перенесенным геном релизинг-фактора гормона роста человека // Сельскохозяйственная биология.- 1995.- №.6.- С.43-48.

33. Меркурьева Е.К. Биометрия в селекции и генетике с.-х. животных. М.гКолос, 1970.- 424 с.

34. Мертвецов Н.П. Гормональная регуляция экспрессии генов. М.:Наука, 1986.- 207 с.

35. Методические указания по изучению качества туш, мяса и подкожного жира убойных свиней. М., 1978.- 26 с.

36. Методические указания по исследованию липидного обмена у с.-х. животных. Боровск, 1973.- 115 с.

37. Науменко П.А., Владимиров В.Л., Фридберг Р.В., Школьник Г.С. Биохимические показатели крови, органов и тканей у трансгенных (МТ1-hGRF) и интактных свиней // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. 1995.- Вып.1.- С. 54-57.

38. Ноздрин Н.Т., Мысик А.Т. Обмен веществ и энергии у свиней. М.:Колос, 1975.- 240 с.

39. Овсянников А.И. Основы опытного дела в животноводстве. М.:Колос, 1976.-304 с.

40. Пасхина Т.С. Определение глутаминаланиновой и глютаминоаспара-гиновой аминофераз (аминотрансфераз) в сыворотке крови человека. М., 1959.12 с.

41. Покровский A.A. Биохимические методы исследований в клинике. М.:Медицина, 1969.- 586 с.

42. Попов А.Н., Зиновьева H.A., Брем Г. Экспресс- метод тестирования новорожденных поросят на интеграцию в геном чужеродных генов // Сельскохозяйственная биология.- 1995.- №.6.- С.136-138.

43. Раецкая Ю.И., Сухарева В.Н., Самохин В.Т. Методы зоотехнических и биохимических анализов кормов, продуктов обмена и животноводческой продукции / ВИЖ, дубровицы, 1970.- 128 с.

44. Росохатский С., Смирнов А.Ф., Ефимов А.Ф. и др. Повышение скорости роста кроликов, трансгенных по гену РФГР человека // Доклады РАСХН.- 1994.- №.2.- С.24-26.

45. Рядчиков В., Солодухина Л. Соколов Н. и др. Трансгенные свиньи с геном mTl/hGRF и перспективы их использования в селекции // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. 1995.- Вып.1.- С. 7384.

46. Симон Е.И. Методика определения баланса азота у с.-х. животных. М.:ПТМ, 1956.- 32 с.

47. Скалинский Е.И., Белоусов A.A. Микроструктура мяса. М.:Пищевая промышленность, 1978.

48. Татулов Ю.В., Ивашов В.И., Немчинова И.П. Особенности качества свинины, производимой по интенсивной технологии выращивания и откорма // XXXVI Международный конгресс по проблемам науки и технологии мяса и мясопродуктов.- Куба, Гавана.- 1990.

49. Татулов Ю.В., Борткевич Л.Л. Транспортировка и стресс свиней // Обзорная информация. М., АгроНИИТЭИмясомолпром.- 1990.- 32 с.

50. Томмэ М.Ф. Методика взятия образцов корма для химического анализа. М., 1969.- 34 с.

51. Томмэ М.Ф. Методика изучения убойных выходов и мяса. М., 1956.16 с.

52. Томмэ М.Ф. Методика определения переваримости кормов и рационов. М., 1961.- С.245-250.

53. Федоров H.A., Суханов Ю.С., Асади Мобархан А.Х., Артемьев М.И. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) / Методическое пособие.- М., 1996.- С.33.

54. Хвыля С.И., Авилов В.В., Кузнецова Т.Г. Практическое применение гистологических методов анализа // Мясная промышленность.- 1994.- №.6. С. 9-11.

55. Хвыля С.И., Авилов В.В., Кузнецова Т.Г., Тимин E.H. Компьютерная приставка к человеческому глазу // Мясная промышленность.- 1995.- №.1.-С.23-25.

56. Хвыля С.И., Кузнецова Т.Г., Авилов В.В. Оценка мясного сырья и определение состава мясопродуктов микроструктурными методами. РАСХН. М., 1998.- с.38.

57. Эрнст JI.К. Итоги и перспективы исследований по биотехнологии животных // Зоотехния.- 1999.- №.8.- С.23-25.

58. Эрнст Л.К., Брем Г., Зиновьева Н. Генноинженерные технологии новый путь развития животноводства // Зоотехния.- 1994.- №.5.- С.2-4.

59. Эрнст Л.К., Гольдман И.Л., Семенова В.А. Фенотипический эффект трансгенности по гену гормона роста крупного рогатого скота у кроликов // Доклады ВАСХНИЛ.- 1990.- №.6.- С.32-36.

60. Эрнст Л.К., Гольдман И.Л., Кадулин С.Г. Генная инженерия в животноводстве: трансгенные животные, кормовые растения, микроорганизмы рубца //Биотехнология.- 1993.-№.5.- С.2-14.

61. Эрнст Л.К., Брем Г., Махаев Е.А. Результаты выращивания и изучения обмена веществ трансгенных по гену релизинг-фактора гормона роста свиней 1 поколения // Генноинженерные сельскохозяйственные животные /Сб. науч. тр. 1995.-Вып. 1.-С. 48-57.

62. Эрнст Л.К., Татулов Ю.В. , Хвыля С.И. и др. Комплексная оценка качественных характеристик мясного сырья, полученного от трансгенных животных // Материалы 3 Международной НТК.- 1999.- С. 147.

63. Agellon L.B., Davies S.L., Chen Т.Т., Powers D.A. Structure of fish (rainbow trout) growth hormone gene and it s evolutionary implications // Proc.Nat.Acad.Sci. USA, 1988.

64. Ausubel F.M., Brent R, Kingston R.E. et.al. Current protocols in molecular biology // Join Wiley and Sons.- New York.- 1987.

65. Behringer R.R, Ryan T.M, Reilly M.P. et.al. Synthesis of functional hyman hemoglobin in transgenic mice // Science 245.- 1989.- P.971-973.

66. Bishop J, Smith R. Mechanism of chromosomal integration of microinyection DNA // Mol. Biol. Med. 1989.- V.6.- P.283-298.

67. Brem G. Transgenic animals. In Biotechnology. A Multy Volume Comprehensive Treatise. Edited by H.J.Rehm and G.Reed in cooperation with A.Puhler and. P.Stadtler. VCH. Weinhein,New York, Basel, Cambridge. P.745-832.

68. Brem G. Transgene Nutztiere // Zuchtungkunde.- 1988.- V.60.- N.3.-P.248-262.

69. Brem G. Interifance and tissue-specific expression of transgenes in rabbits and pigs // Mol. Deprod. and. Dev.- 1993.- 36.- N.2.- P.242-244.

70. Brem G. Production of transgenic mice, rabit and pigs by microinjection into pronuclei // Zuchtyniene.- 1995.- V.20.- N.5.- P.134-139.

71. Brem G., Brening B., Goodman H.M. et.al. Production of transgenic mice, rabbits and pig by microinjection into pronuclei // Zuchthug.- 1985.- V.20.- P.251-252.

72. Brem G., Brening B., Salamons B. et.al. Unerwartets transgene Expression eines gesaengespezifischen Wachstumshormon Genkonstruktes in den Bergmann-Gliazellen der Maus // Tiwrarztl. Prax.-1991.- V.19.- P.l-6.

73. Brem G., Muller M. Large transgenic mammals // Animals with novel genes / by Ed.N.Maclean.- Cambridge University Press.- 1994.- P. 179-224.

74. Church R.B. Embryo manipulation and gene transfer in domestic animal. Trends Biotechnol. 5.- 1987.- P.13-19.

75. Clark A., Bissinger P., Bullock D. et.al. Chromosomal position effects and modulation of transgene expression // Reprod. Fertil. Dev. 1994.- V.6.- N.5.-P.589-598.

76. Erlich H.A. PCR technology: principles and applications for DNA ampflication. Stocton Press, New York. 1989.

77. Evans M.J. and. Kaufman M.H. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos //Nature 292.- 1981.- P. 154-156.

78. Evans M., Bradley A., Robertson E.J. Genetic manipulation of the mammalion ovum and early embryos // Bandbury Report.- Gold Spring Harbor, New York, 1985.

79. Gavora J.S., Benkel B., Sasada H. et.al. An attempt at sprem mediated gene transfer in mice and chikens // Can.J. Anim.Sci. 71.-1991.- P.287-291.

80. Glosser A., Doetschman T., Korn R. et.al. Transgenessis by means of blastocyst derived embrionic stem cell lines // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1986.-V.83.- P.9065-9069.

81. Gordon J., Ruddle F. Integration and stable germ line transmission of genes injected into mouse pronuclei // Scince.- 1981.- V.214.- P.1244-1246.

82. Gordon J.W., Lee E., Vitale J.A. et.al. Production of human tissue plasminogen activator in transgenic mouse milk // Biotechnology 5.- 1987.- P.l 1831187.

83. Gray R., Hamm R. Eine einfache Methods sur Bestimming der Wasserbindung in Muskel //Naturwissen Schäften.- 1953.- V.40.- N.I.- S.29.

84. Hammer R.E., Palmiter R.D., Brinster R.L. Partial correction of murine hereditary growth disorder by germline incorporation of a new gene // Nature.-V.311.- 1984.-P.65-67.

85. Hammer R.E., Pursei V., Rexroad C. et.al. Production of transgenic rabbits sheep and pigs by microinjection // Nature.- 1985.- V.315.- P.680-683.

86. Hogan B., Costantini F. and Lacy E. Manipulation of the mouse embryo. In: Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York. 1986.

87. Huzar D., Balling R., Kothary R. et.al. Insertion of a bacterial gene into the mouse germ line using an infections retro virus vector // Proc. Natl. Acad. Sci. 82.1985.- P.8587-8591.

88. Jaehner D., Haase K., Mulligan R. et.al. Insertion of the bacterial gpt gene into germ of mice by retro viral infection // Proc. Natl.Acad. Sci. 82.- 1985.- P.6927-6931.

89. Kostyo J.L. Rapid effect of growht hormone on amino acid transport and protein synthesis // Ann. N.Y. Acad.Sci.- V.148.- P.284-312.

90. Kostyo L.J., Nutting D.K. Growth hormone and protein metabolism. In: Handbook of physiology.- 1979.- P. 187-210.

91. Lavitrano M., Camaioni A., Fazio V.M. et.al. Sprem cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of mice. Cell 57. 1989.-P.717-723.

92. Mannino R.J. and Gould-Fogerite S. Liposome mediated gene transfer // Bio Technigues 6.- 1988.- P.682-690.

93. Mansour S.L., Thomas K.R. and Capecchi M.R. Diruption of the proto-oncogene int -2 in the mouse embrio derived stem calls; a general strategy for targeting mutations to nonselectable genes // Nature 336. - 1988.- P.348-352.

94. Mansour S.L. Gene targeting in mouse embrionic stem cells: introduction of specific alteration into the mammalian genome // Gene-Anal. Tech. 7.- 1990.-P.219-227.

95. Mehtali N., LeMeur V., Lathe R. The methylationfree ststus of a houskeeping transgene is lost at high copy number // Gene.- 1990.- V.91.- P. 179184.

96. Mullis K.B., Fallona F.A. Speccific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chaim reaction // Meth. Enzymol.- 1987.- V.155.- P.335-350.

97. Nazario E. Petits on grands: Une histoire d'hormone? // Rev. Palais decouv.- 1996.- V.24.- N.237.- P.53-60.

98. Palmiter R.D., BrinsterR.L., Hammer R.E. et.al. Dramatic growth of mice that develop from eggs microinjected with metallothionein-growth hormone fusion genes //Nature.- 1982.- V.306.- P.611-615.

99. Palmiter R.D., Norstedt R.E., Gelinas R.E. et.al. Metallothionein-human GH fusion genes stimulate growt of mice // Science.- 1983.- V.222.- P.809-814.

100. Palmiter R.D., Brinster R.L. Germ-line transformation of mice // Ann. Rev. Genet. 1986.- V.20.- P.465-499.

101. Panthier J.J., Condamine H. and Jacob F. Inoculation of newborn SWR/J gemales nith an ecotropic murine llucemia virus can produce transgenic mice // Proc. Natl.Acad. Sci. 85.- 1988.-P. 1156-1160.

102. Pinkert C.A. The future of transgenic livestok with enhanced production characteristics, Vancouver, Canada. 1989.

103. Pursel V.G., Rexroad C., Pincert C. et.al. Progress on gene transfer in animals // Vet.Immunol. Immunopathol.- 1987.- V.17.- P.303-312.

104. Pursel V.G. et.al. II-th International Congress on Animal Reproduction and Artificial Insemination, Dublin, 1988.

105. Pursel V.G., Pincert C., Mileer K. et.al. Genetic engineering of livestok // Science.- 1989.- V.244.- P.1281-1288.

106. Pursel V.G., Pinkert C., Rexroad C., Mileer K. Animal growth regulation // Et by D.K.Campion, C.J.Hausman, K.J.Martin. New York.- London. 1989.

107. Pursel V.G., Bolt D.J., Mileer K. Expression and performance in transgenic pigs // J.Reprod. Fert. Suppl.- 1990.- V.40.- P.235-245.

108. Pursel V.G., Rexroad C. Status of research with transgenic farm animals //J.Anim.Sci.- 1993.- V.71.- P.10-19.

109. Rexroad C.E., Pursel V.G. Status of gene transfer in domestic animals // Proc. of 11th inter.congress on animal reproduction and artifical insemination. Dublin, 1988.- V.5.- P.28-35.

110. Rexroad C.E. Transgenic technology in animal agriculture // Animal Biotechnology.- 1992.- V.3.- N.I.- P. 1-13.

111. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F. et.al. Enzymatic amplification of (3-globulin genomic seguenes and restriction site analysis for diagnosis of sockle cell anemia// Science, 230.- 1985.- P.1350-1354.

112. Saiki R.K., Gelfand D.N., Stoffel S. et.al. Primer-directed enzymatic ampflication of DNA with a thermostable DNA polymerase // Science, 239.- 1988.-P.439-491.

113. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F. et.al. Enzymatic amplification of b-globulin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia// Science.- 1985.- V.230.- P.1350-1354.

114. Schoenenberger C.F., Andres A.C., Groner B. et.al. Targeted c-mys gene expression in mammary glands of transgenic mice induces mammar y tumors with constitutive milk protein gene transcription // EMBO J.- 1988.- 7.- P. 169-175.

115. Sippel A.E., Saueressing H., Winter D. et.al. Transgenic animals. N.Y.L: Academic Press Inc.- 1992.- P.3-26.

116. Stotish R.L. Repartitioning agents in animal production // Proceeding of the fourth animal CMS A symposium. Vancouver, Canada. Februarry, 1998.

117. Thompson S, Clarke A.R, Row A.M. et.al. Cerm line transmission and expression of corrected HPRT gene produced by gene targeting in embryonic stem cells//Cell 56.- 1989.-P.313-321.

118. Tyrreil H.F, Brown A.C, Peynolds P.J. Effect of bovine somatotropin on metabolism of lactating dairy cows: energy and nitrogen utilization as determined by respiration calorimetry // J.Nutr. 1988.- V,118.- N.8.- P.1024-1030.

119. Wagner E.F. Of transferring genes into sprem cells and mice // EMBO J.9. 1990.- P.3025-3052.

120. Wall RJ, Hawk H.W, Nel Neil. Varking transgenic livestok: genetic engineering on a large seale // J.Cell. Biochem.- 1992.- 49.- N.2.- P.l 13-120.

121. Ward K.A. Nancarrow C.D. The genetic engineering of production traits in domestic animals // Experienta 1991.- V.47.- P.913-922.

122. Wilkil T.M, Brinster R.L, Palmiter R.D. Germline and somatic mosaicism in transgenic mice // Dev. Biol.- 1986.- V.l 18.- P.9-18.

123. Wilmut I, Archibald A.L, Harris S. et.al. Metods of gene transfer and their and their potential use to modify milk composition // Theriogenology.- 1990,-V.33.-N.1.- P.l 13-123.

124. Yones S.D.M. The effect of repartioning agents on meat quality. Vancouver. Canada, 1989.