Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Принципы лабораторной диагностики кишечной цитробактер-инфекции

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Принципы лабораторной диагностики кишечной цитробактер-инфекции"

И НIIСТЕI

РСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

/ 3 МАЯ ДОЗ

АЛМА-АТИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ имени С. Д. АСФЕНДИЯРОВА

На правах рукописи

САРБАСОВА Шарбат Игликовна

ПРИНЦИПЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ КИШЕЧНОЙ ЦИТРОБАКТЕР-ИНФЕКЦИИ

Специальность 03.00.07 — микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Алматы — 1993

Работа выполнена в Целиноградском государственном медицинском институте и Научно-исследовательском институте эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Министерства здравоохранения Республики Казахстан.

Научный консультант — доктор медицинских наук, профессор Б. В. Каральник.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор В. М. Степанов, доктор медицинских наук, профессор М. М. Ременцова, доктор медицинских наук Л. И. Каламкарова.

Ведущая организация: Кыргызский государственный медицинский институт Министерства здравоохранения Республики Кыргызстан.

Защита состоится «__»_ 1993 года в _часов

на заседании специализированного совета Д 079.04.03 в Алма-Атинском государственном медицинском институте им. С. Д. Асфендия-рова.

Адрес Алма-Атинского государственного медицинского института: 4800)2, г. Алма-Ата, ул. Толе би, 88.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Алма-Атинского государственного медицинского института.

Автореферат разослан «_.»______

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук,

доцент Р. Ф. Сидоренко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТУ

Акт^ад?'—проблемы. Острые кипечкые инфекщш /ОКИ/ являются серьезной проблемой ик£окциоиноЯ патологии. Им принадлежит ззаддцео иесто в структура заболевааиости, особенно у дзтей / Bocfcemutl, 1990/. Шйохткекосгь лечебных, профилактических и противоэпидемических израприатий ззо -многой зависят от знания этлологлчеакого фактора /В.Д.Солодовников к соавт., 1983/. ¡.'заду тем,- несмотря на постоянное соворггзаствовщпге лабораторной днагаостжш, рек отр;грувтся в среднем 50?5 ОКК кеуэтакозяенкоЯ этнологии /М.И.Шапиро, А.А.Дегтярэв, ISSO/. Часть керасЕнйровкпшх случаев г;тлологичос1Я макет быть связана с услслкэ паяэгвнзкю: бактериям« / А.И.КЕачов, 1952; 2.П. Берна-созсхая и CKiET., ISS4; 2.А.По егозит, I9S4; Л.Б.Сайдуллаеза и соаэт., 1987/. К тагам возбудителям относятся Citrobacter freundii, сяоссбншэ зазазать zait групзевне, таге а спорадичеснкэ заболевания /В.П.?2Гккскзя, 1977; В.Г.йага, 1980; В.Л.Романов и соавт., 1980; Н.Б.Лрослуря2:оаа и ссавт., 1962; В.О.ЗйпкобскиЯ, I9S4/. Однако zsxsга-иэпкг. этиологического диагноза ккамчкой [ктробактэр-гшЛв'лгли гаед-сташюс? определен пв трудности, поскольку ухазаотггэ бантевггг кзрзд-г~; встречаются в состава нормальной микрофлоры / З.Г.Пзгроясагя» (VL Варко, 1975/. Поэтому разработка критериев зтаогогкчз&гой зкачи-к-сст; обнаружения c.freundii при диареях приобретаем гззнев значение.

Одам кз доказательств этиологической роли ^ггробгктер при 05® язлязтея регистрация гуморального нш^уншго ответа на антигены возбудителя. Для этих цолай используется peastsa агмюпагавди с ауто-еташки. Стаг-здарткке и белее чувстзгятодызэ погода вьлзлег-см р,нтй-тел я цатрсбастер вд разрабсташ. 15звееткн единично сообцзния о пра-иеаэшш регшда пассивной гвиагглвтинщ?ш /РИГА/ с эритроцитам: еснеибшшзировгншв® ггеочкценшаи антигенам / Б.З.Каг .дацик и соавт., 1974/ к антягенаки аутогетааагов датробактер / А.гу^й^дишачэо и

сгоагт., IS79; В.Г.Винн, ISBQ.'.

Необходим поиск и других более ранки показателей данного заболевания. К тоник подходам следует отнести индикацию антигена в выделениях больного / Ю.И.Литашсюй и соавт., 1988/, определение копроаа-тигсл / И.Б.Куваова и соаат., 1955/ я реакцаа клеточного илыуиктата / Л.Б.Хазенсок к соавт.» 1387/, услеино использовать® при дизентерии и сальмонеллезах / Б.В.Каральник и с.оаат., 1982; Н.а.'!урккка, IC-B4; ¿i. S. Суслова, 1985; Н.И.ГУрарий и соавт., IS88; С.Я.Тендатшн и соавт., 1590/ и которые еце не применялись в диагностике кишечной цатробактер-инфенвди. В этой связи возникает необходимость разработки иимунореагектов и выбора эффективных иетодов исследования. Среда диагностических препаратов привлекают внимание сенсибилизированные эритроциты из-за невысокой стоиыосги диагностики и техшгчасжой доступности реакций / В.А.Дймардин, Т.Н. Тугаибаев, 19Б9/.

Сложность рассматриваемой проблемы заключается также з тек, что нет четких критериев определения потенциальной способности штшшов цктробактер зызывать заболевание. В последние года все больяэе внимание удаляется изучен:«) факторов патогенности, свойственных возбу-даталяи кишечшас иифеющй - адгезивности и внтеротоксигэнности / С.Т.Мнацаканов, 1982; С.С.Гизатуллина, М.О.Еиргвр, 1985; В.М.Бон-даренка и соавт., 1986/. Методы определения указанных признаков, достушыз практический лабораториям, не разработаны. Не потерял актуальности вопрос совершенствования бактериологического метода дна: костздки ОКИ /Е.П.Еернасовская и соавт., 1964/.

Рассмотренный круг вопросов определил задачи исследозаетя.

Цель исследования - совершенствование лабораторной диагностик:: килечной цитроо'актер-инфекции.

Задачи исследования:

I. На основании бактериологического обследования больных ОКИ и

эовых выявить наиболее распространенные серо группы С .freandü. заботать рациональную схему выделения н идентификации условно па-экных энтеробактерий по биохимический свойствам, основанную на шальном наборе тестов. Изучить чувствительность выделенных етам-к антибиотиках.

2. Изучить частоту выделения при ОКИ штампов C.freundü , обла-цих адгезивной, энтеротоксигенной и инвазивдай активностью, ймс-

ь возможности стандартизации определения адгезинов цитробактер.

3. Определить в эксперимента особенности взаимодействия цитро- -rep с кишечшм эпителием, характеризующие его патогенные свойства.

4. Получить моновалентные антигенные и антительные эритроодтар-диагнэстикумы /ЭД/ наиболее часто встречающихся специфичностей

робактер. Разработать способ получения поливалентного антительно-ЗЦ. Дать оценку специфичности и чувствительности реакций с разра-анными препараташ в модельных опытах с индикаторными системами, ^чить БД для обнаружения специфических антигенсвязывающих лимфо- . ав /АСЛ/. . .

5. Определить эффективность реакций с разработанными иимунораа-гами по определению антител, антигена и АСЛ на модели килечной робактер-инйекции. Изучить иммунологические и микробиологические 1затели экспериментальной инфетдаи, выззанной с.freand.il.

6. Выяснить возможности индикации антигенов цитробактер в фака-£ и моче больных при помоги РПГА и реакции нейтрализации антител 1т/. Изучить динамику иммунного отвага по суммарным и цисгеинре-гентным-антителам и выделения антигена, влияние возраста, пола, гельности, тяжести течения болезни, кратности исследования на эф-гивность серологических методов диагностики. Изучить возможность эделения нопроантител и АСЛ при кишечной цитробактер-инфекции.

7. Разработать тактику лабораторной диагностики кишечной датро-

бактер-инфекции.

Научная новизна работы. Впервые разработаны ш-'игешие и антител ныз ЭД чи'гробактер для выявления антител,' антигенов и АСЛ. Установлено, что реакции с разработанными иммунореагентаыи характеризуются достаточно высокой чу вствательност ью и специфичностью. Показала воз-коаность отделения дезинтегрздк клеток цитробактер по серологический Показателям. доказана принципиальная возможность применения реакций с разработанными ЭД ® лабораторной диагностике й:аечно(; цдтробаотер-инфекцки. ^

Впервые установлено, что при кишечной цитробактер-вдеехции на-блвдается выделение мелкодисперсного антигена возбудителя чарез почки, в патогенетическое аспекте свидетельствующее об аитигенеши. При экспериментальной цитробактер-ин^екции и у больных людеГ; с ОКИ, бызвощюй 1?:гробактер, впервае обнарухзкы спеи^сическке Д.СЛ и копро-антитела. Получены новые данные о характера системного антительного ответа при ¡саечной цитробактер-ин'Твкцик. Показана данаиика разви-вагцеЯся в процессе заболевания дезинтеграция бактерий в киаечкике.

Впервые показано, что шкикация антигена в шче, динамика дезинтеграции бактерий в кисечнике и выявление в крови АСЛ могут слунить дополнительным критериями этиологической значимости цатробактер при диареях. Установлено, что определение АСЛ в'периферической крови и антигена в цоче могвт быть использовано для ранней диагностики заболевания. • ,

Выявлен!! особенности серопеГ.заяа зтамиов с.Ггевдйи в условиях Северного Казахстана, определены <-«риентативние особенности вэделен-нше культур. По сочетанию вариабельных признаков охарактеризовано 12 биоваров. Разработана схеиа выделения' и- идентификаций энтеробак-тариГ, с использованием 1ащи».:ального набора биохимических тестов. Полученные данные имеет значение не только для рационализации схеш

5актериологичэского исследования м определения состава иимунореа-гентов, но и дополняэт обидае представления о биологических свойствах цитробактер.

¡1а основании гистологического и электронноиикроскопического изучения взаимодействия цитробактер с кшшчнкм эпителием получены доказательства их энтеропагогенности.

Полученные данные вазны не только для определения этиологических критериев, но и для познания патогенеза н иммуногенеза кишечной • цитробактер-ингекции.

Практическая значимость работы» Показано, что разработанные ЭД могут использоваться для лабораторной диагностики килечной цитро-бантер-ииТекции. Разработана тактика бактериологической и комплексной иммунологической диагностики этого заболевания: выделение культуры возбудителя, изучение его адгезивносги, индикация антигена в фекалиях и моче, определение АСЛ, колро- и сывороточных антител. Применение двух реакций - РПГА и РНАт - позволит не - только взаимно контролировать специфичность индикации антигена, но и охарактеризовать степень его дисперсности, что имеет диагностическое значение. Показано, что при определении сывороточных антител выявление их динамики более значимо, чем условно диагностического титра, с дифференциацией суммарных и цистеинрезистентных антител. Выяснено, что дополнительное диагностическое значеназ мояет ииеть определение спе-, цифических АСЛ и динамика дезинтеграции антигена цитробактер в фекалиях. Выявлено, что определение АСЛ цэзет быть использовано для равней диагностики диарей, вызываемых цитробактер. Установлено, что индикация антигена в моче может служить дополнительным критерием ди-!>-Деренциации носигельства цитробактер и ниаечноГ: цитробактер-ин^екфсс и использоваться для ранне!! диагностики этого заболевания.

Разработана двухэтапнаа схема выделе; ¡ия и идентификации УПХ на

о

основе минимального набора биохимических тестов,позволяющая уве чнть количество исследований на наиболее актуальные для изученн территории возбудители. Выявлена Аерментативные особенности изо гов, что имеет значение не только для идентификации выделенных тур, но и иодег быть использовано в целях иг эпадеииологическох маркирования. Обоснована целесообразность приготовления районкт ных поливалентных агглютинирующих сывороток цитробактер с учете распространения различных серо групп. Показано., что при тепереш составе поливалентных сывороток цитробыстер и серопейзажа цирка рущих штаммов остается неиспользованной большая часть ишунерг тов. Конструирование иммуноре агентов прицельно для территории ( деленный серопейзанеы бактерий данного таксона позволит избеаа: оправданных экономических затрат.

Предложен пригодный для практических лабораторий способ от ления адгезинов бакгер'ий при помощи фиксированных эритроцитов ] стой сваави.

По результатам исследований изданы: I. Методические реконе: "Серологическая диагностика заболеваний, вызванных бактериями ; цитробактер" /1984/, изданные в соответствии с общесоюзным пла издания методических документов на 1963 год и планом внедрения 1984 год; 2. Руководящий нормативный документ РД-42 Казахской 2-65 "Идентификация условно патогенных знтеробаятерий" /1966/, в действие с I января 1986 года приказом Министра . здравоохран Казахской ССР от 30 декабря 1985 года; 3. Методические рекомен "Кддикация антигена цитробактер при помощи поливалентного диаг кума" /1592/. Получены удостоверения на 12 рацпредложений по с бам приготовления цитробактер,выявления адгезинов,по иодифи способов определен:« энтеротоксина, постановки РИГА, имцуна;<ла центного анализа, получения поливалентной сыворотки цатробахте

рационализации тагтигш идентификации УПЖ.

Основные г"- >?а ия. выно'сииче на зааиту.

1. Исп' .ование экспериментально.! «одели килечной цитробактер-ин^екции Аморальное заражение кроликов/ позволяет исследовать в контролируешх условиях возможности микробиологической и иммунологической диагнгстики данного заболевания.-

2. Тактику ввделения патогенных бактерий целесообразно разрабатывать применительно к условиям конкретных территорий и времени на основании данных предварительного микробиологического мониторинга, отражающих этиологическую структуру ОКИ. С учетом таких данных для лазахстана предложена рациональная тактика выделения условно патогенных энтеробаятерий. '

3. Стандартизована на основе применения фиксированных эритроцитов морской свинки методика определения адгезивной активности цитро-бактер, позволящая определять ¡лот фактор патогенности в практических условиях. '

4. Обоснованы способы приготовления цигробактарных антигенных и антительных /ыоко- и поливалентных/ зритроцитарных шзгунореагентов для определения антител, антигенов и АСЛ.

5. Экгективность диагностики ташечно.": цитробактер-интекции обеспечивается применением бактериологического ч комплекса методов с использованием разработанных ЗД - "определение с'ыворото :шх и копроанти-тел, индикация антигенов возбудителя в выделениях, определение АСЛ.

5. Обнаружение специфических АСЛ в крови,- антигена цитробактер в ноче по данным РНАт и дезинтеграции антигена в'те«алиях в динаюше по серологичес:ан; показателям могут использоваться в качества критериев э^пологичэо'.-о ■ значимости 2.Ггг-лгац при данном заболевании.

Апробация работы и пуоЧтикадиа^атеаиаль: диссертации дологг.енк на итоговых научных конференциях .„злиноградского иедицикекого института

ли

/1960-1990/, П!,1У,У объединенных сьез; ах тгагиенистов, эпидемиолог микробиологов, вирусологов, паразитологов и инфекционистов Казахе на /Алма-Ата, 1960,1930; Чимкент, 1565/, П-2 региональных нонЗере циях по программе ÎHSCK0 "Человек и биосфера" "Населенные пункта охрана окружаицай среда" /Целиноград,IS85.IS89/, зональном семита инфекционистов и педиатров /Целиноград,1986/, заседаниях пробле» комиссии Целиноградского медицинского института /I9W,1990/, зас< нии. областного общества'ин$екционистов /1990/, Всесоюзной научно] конференции по биотехнологии /Целиноград, 1991/.

По теме диссертации опубликовано 27 печатных работ. Структура и объем диссертации. Диссертации состоит из Еведеи обзора литературы, б глав собственных исследований, заключения, : дов и списка литературы. Текст изложен ка 215 страницах махикопш включая 62 таблиц и II рисунков* В списке литературы приведен 41 источник, в том числе 159 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования.. Обследовано 1410 больных ОК среда них 1016 детей и 392 взрослых. Контрольную группу составил практически здоровые лица: 616 детей и 466 взрослых. Бактериолог кому исследования подвергали фекалии и мочу больных. У здоровых ли только фекалии. Наделено и изучено 504 культуры c.freunàii. Бактериологическое исследование проводили . в соответствии с общ нятыми методами микробиологической диагностики кишечных инфекций довув и видовус принадлежность штаммов цитробактер определяли в ветствии с "Методическими рекомендациями по идентификации бактер рода цитробактер" /В.П.Рагинская,1973/ и характеристикой .энтероб, терий, приведенной в "Определителе бактерий Берги" /1574,1984/. : этих целях использовали биохимические тесты, рекомендованные Мат, родным подкомитетом по энтеробахтериям /Keport of. ..,1963/.Серк

п

ecsoe ткпирование выделанных культур осуществляли в реакции {»гглю-И1рта иа стекла с поливалентными и типовыми О-сыворотками в соот-■стбни с "Наставлением по применению Антибиограымы изолятов

¡едаляли методом стандартных дисков согласно "Методическим указа-ш по определении чувствительности микроорганизмов к антибиотикам родом диффузии в агаре с использованием дисков" /Ш CCCP»IS83/.

Знтеротоксигенность культур изучали на модели перевязанных петь тонкой кишки кролика /агв et al„1955/, в тесте отека лапк бе-î юавя /В.П.ВвртанЕН,1361/, в анальной пробе ка мшдах-сосунках .й.?оианенкова и соавт.,1980/. Адгезивные свойства штаммов изучав теагции геиаггютинации /Duguid ,1968/ в присутствии Д-нанно-и без нее с нативнами эритроцитам морской свинки, барана, чело-ка 0/1/ и А/П/ групп крови. Уровень адгезии определяли по В.И.Рри-су а созбт./1586/. Для определения инвазпвности штаммов ставили ратогонъшктавалънув пробу на морских свинках по зегегу /1055/.

Гипердмыунныг С-сыворотки для приготовления алтительных ЭД, изу-кия специфичности антигенных ЗД и постановка РНАт получали многодетной внутривенной иммунизацией кроликов гретыми взвесями суточ-s культур эталонных сталнов c.freuadii , полученных из ГИСК им. Р.Тарасезпча. Дня получения 2Д использовали фиксированные фориаль-гидои по .veinbach /1556/ эритроциты барана. 0-антиген /ЛПС/ цитро-етер получала путем водно-фенольной экстракта по '¿'estpbai .Кэбот, М.Уейер, 1968/. Иммуноглобулины из гипериымунных сывороток вдали с nouosfbo этанола /В.А.Шамацдан, Б.З.Каральник, 1981/. Сен-Зялиззцив эритроцитов антигеном проводили общепринятым способом з посредников, антителами - по методу В.А.Кузьюма л соавт. /I9SI/. качестве нейтрапизущих агентов в модельных опытах иг пользовали зтна взвеси суточных культур эталонных стазов и ЛПС по ïestphai.

Истоцание чсследуеиых проб ?*псатай а мочи для удаления носпещф»-

ческих гемагглюигаинов проводили по метода иП.Царевского и соавт. /1779/. Постановку РИГА и РНАт осуществляли микрометодом в пластинах Такачи. Антигены цитробактер в исследуемых пробах определяли при помощи РПГА и РНАт, антитела - РПГА. Для дифференциации суммарных и цистеинустойчивых антител сыворотку крови больных обрабатывали по метод' З.В.Чернохвостовой /1565/. Определение спецкЬгезских АСЛ проводили при помоги реакцш розеткообразования с использованием антигенных СД по методике, описанной П.Н.Дерябиным и соавт./I'.'88/. Лимфоциты выделяли с применением фиколл-верограринового градиента плотности по методу Воуию /196В/.

Килючнуя цитробактер-ингекцию на перевязанных петлях тонкого кишечника кролика воспроизводили по методике, описанной Ю. 2.Полоцким и соавт./1эо1/. Гистологические исследования выполнены при участии сотрудников каЗедр патологической анатомии Целиноградского ыедипдн-

4(

ского института и Алма-Атинского ИУВ. Срезы готовили по общепринято}'; методике. Препараты окрашивали гематоксилин-эозином, азур-эозином, по Грам-Зейгерту. Из части кисечных петель готовили срегы для исследования в реакции непрямой иммунофлиоресценцци на присутствие цитробактер /Х.Фрикель, 197?/. Плектронномикроскопические исследования стенки килечника выполняли совместно с кл:.н. З.Н.Эумеровыи /институт экспериментальной хирургии АН ¡1азахстана/ на электронном микро-, скопе УЗМЗ - 100 Л.

Всего бактериологическим методом исследовано 4609 проб фекалий и 561 проба мочи. Иммунологи<искими методами исследовано 2954 пробы фекалий, 561 проба мочи и 556 образцов крови. Опыты проводили .ка беспородных кроликах "Шиншилла" /135 животных/, морских свинках .:Э животных/, беспородных белых мышах /1070 животных/ и мызах-со о;. ,:;ах /351 животное/. Для изучения эффективности разработанных ЭД выполнено сб7 модельных опытов с гомологичными, перекрестнореагирупцю.и и

гзрокоги'чюдм анд.1"ха«орнши системами.

Поденные - .-ь/льтаты обрабатывали методами иар-лацискной статис-гЛ / В.ЯЗ.Урс':^, IS75/, а Tzxzß но программам для цикро-ЗВК. Результаты и сбсуздешю.Частота шдагания с .freuadü При СЖ бы-выш2, чем среди Едорових лиц, г. составила 12?» и 4,7?- соответствие, что свидетельствует а пользу этиологической'значимости ука-кных микроорганизмов яри диареях, и тзи не менее требует подтверждая их роли в каждой зенкретьои случае заболевания.

Изученные культурн c.freundii по совокупности признают ссответ-ьозали талеонсмическоЯ характеристике вида / йегцеу' з пыша! , 84/. Вариабельность в отпоезжи лакголк, сахарозы, дульцик^ арги-üd я орнитина совпадает с характеристикой бактерий рода цитробак-р и данными других исследователей / Sediat, 19 7* i Janaer,X95I /. деленные штаммы в I8,0-2ü,J« случаев разлагали мочевину. По данным Б.Ди&иц /1975/ я sediaic /1966/, уреазу продуцировали еданич-е изолятц, тогда как Farmer et а.1./1985/ обнаружили уреазу у 70£ aia;OB. 2I5S изученных наии культур утилизировали малоаат, по данным Б.Лафшц /1575/ - 3,254, с-агшег et' ai. /1ЭВ5/ - ISA. 3,6» кяиничео-х изолятов аериенткровали инозит. Однако итаьаш с такими сеойства-оаисаньг В.П.Рагчшсхой /1977/,i,d-j,ardз,L wir« /1572/. Примерно две ети выделенных хультур сбраживали раЬинозу, что существенно превн-ет частоту этого признака у игаnuas, описанных М.Е.Лифшиц /1375/, П.Рагинекой /1577/ и f со-пег /1965/.

Полученные данные о ^ериентатившсс особенностях штаммов кмеззт аченке в бактериологической диагностике ОКЯ для своевременной к лра-льной идентификации возбудителя.

Идентификация патогенных и условно патоганицх энтзробакториЯ. здетавляет опредаленные трудности в салу их биохимического сходства антигенного родства. Дифференциация родоа а видов требует приаеке-

ния более 30 тестов У Report Of...,1062/, что трудоемко и недосту? но практическим лабораториям. Нами предложена двухэтапнгя схема и деления и идентификации энтеробактерий на основе минимального наб ра биохимических тестов. Посев колоний на среду Клиглера /или Toi агар/, мочевину и цитрат Сигшонса позволяет на I этапе предварите но дайерзкцйровать грамотрицателькые нзфзрмгнтируациэ бактерии,б нальнне эиерихии, шгешш, сальмонеллы и различные УПЗБ. На П эта у культур, подозрительных на нигеллы, сальмонеллы и УПЗЕ, изучали отношение к фенилаланицу, лизину, мзлонату,образование индола, р£ ции с метиловым красным и Фогес-Проскауэра, подвижность. Использс ванне минимального набора тестов позволяет увеличить количество i следований на наиболее актуальные для изученной территории возбу, теля ОКИ.

В целях дальнейший дифференциации с. f re undii предложена cxej биохимического типирования штаммов, в основу которой положены пр знаки, оцениваемые как вариабельные /отношение к лактозе, сахаро дульциту, аргинину и орнитину/. Охарактеризовано 12 биоваров. Ра личий по частоте встречаемости отдельных биоваров среди культур, деленных от больных и здоровых, выявить не удалось. Показано, чт биотипирование может быть использовано для установления идентичн и маркировки штаммов в эпидемиологических целях. Ото согласуется данными других исследователей, занижавшихся биотипированием цитр бактер и проводивши его по несовпадающим с нашими тестам /М.БЛ 1976; В.П.Рагинская, 1977; В.Г.<Змнн,1980/.

Серологическое типированиэ штаммов показало их принадлежа сл к 32 серо групп ги. Еолышшство культур /79,3 л/ относилось к 14 се группам. Статистически значимая разница в частоте встречаемости или иных серогрупп выявлена в отношении 12 - 02,03,07,06,012,017 024,026,026 и 041. Только от больных были наделены .хотя и в еда

случая-., штаммы серо групп 041,033,037 и 040. Культуры груш 026, , 01Ю и 035 обнаружена только в Фекалиях здоровых лиц. Штаымн сэ-рупп 01,04,05,09,010,019 регистрировались практически с одкнако-. частотой как у больных ОКИ, так т у здоровых. 75* клинических ,д.1Т0з относились к 7 серогруппаи - 02,04,05,08,010,0X2,022. йо них 6« етаммов составили группы 06,012 и 022. Около половины культур, дленных в контрольной группе обследованных, прингдлежии 7 груп-г - 03,04,07,06,011,022,024. Из них самыми многочисленными были ,'ппы 03 и 07 /45,ЭЙ штаммов/. Наши данные о серологическом поЯаа-цитробактер отличаются от данных, полученных при типировании этих ктерий на других территориях. Превалирование при диареях серогрупп 2,012 и 03 позволяет с больлей вероятность» предполагать этиоло-ческуга роль данных изолятое в конкретном случае заболевания.

Сопоставление биоваров и серогрупповой принадлежности жгаммов казало отсутствие корреляции между ¡шми, что соответствует еыводвы упгх исследователей /В.П.Рагинская,1577; З.Г.5инн,1£80/. Это отрг-ет определенную "гззависидасть двух подходов к типирозашш о.Ггеип-1 и существенно повышает возмолгости их маркировки. Еио- и сероти-рование нонет оказаться полезным в эпидемиологической практике,что дтаердилось при изучении II культур, выделенных при групповом слу-е пищевод токсикоинйекции.

Наибольшая часть клинических изолятов агглютинировалась поянва-нтнымк снвороисагш ОА /33,6«/, ОД /32,3«/ и СВ /21,4й/. Остальные ливалентные сыворотки агглютинировали неныпеэ число культур: ОС -2$, 03 - 3,4«, (V - 1,6?» и 0 с- 3,0«. Более половины штаммов /58,3/, лояательно реагировавшие с сыворотками 0А,03 и ОД.относились к се-группам 08,012 и 022. Антиген 08 выявляется сывороткой ОА, 012 -и 022 - ОД. Состав же указанных сывороток соответстг/зт 19 типом антигенам. При теперешнем составе поливалентных сывороток и серо-

логическом пейзаже клинических кгамисв остается неиспользованной большая часть типовых сывороток и, напротив, отмечается расход п валентных. Поскольку серопейзаж с. ire unit i на разных территория неодинаков, следовало бы обсудить целесообразность новых подходо производству коммерческих поливалентных сывороток цитробактер.

Определение антибиограмм выделенных зггалхв выявило характер д,тя всзх без исключения штаммов ьыоаественную лекарственную усго еость, б большей степени выраженную среди кляничаеюес пзолятое.Н данные согласуются с известной общей тенденцией нарастания полир зистеатности среда УПЭЗ.

В настоящее время в целях разработки этиологических критерий обнаружения УПЗБ при диареях большое внимание уделяется изучению торов патогекности, свойствеинкх воабудатблям кишечных шйекциЯ адгезяшости и энтеротоксигенности /С.Т.Ккацаканов,138б; Б.К.Бон, ренйо и соавт.,1986,193? и др./.

О наличии адгезинов судили ко реакции гомагглюишацая. Псике около половины штаммов, обнаруженных у Сольных, склеивали зригро. те морской свинки, одна треть - эритроциты барана и человека. Не: ческие иголяты значительно реже /в 3 раза/ обладали гаматглипши] щей. активностью в отнодешш эритроцитов барака. Обнаружена тездо; ция к более низкой гвиадгазивной способности в стнсшенш эр/.троц; человека. Установлено, что изученные шташы независимо от источш выделения обладали наиболыгеЭ активностью по отношению к зритрою там морской', свинки / PcQ,G0I/..

¿¡нение о значении ыаннозорезистенотых адгемкоз sail ,f ai-?opos генности неоднозначно. С наличием МР-едгезинов многие азтс/j сзяс ваит проявление патогенные свойств /Old,Adcgbolii, 1983; L" ton al»» 1987} Kagberg, X9S? и ДР-/. Отдельные исследователи bl зывавдгея а пользу патогенного- значения маккозочуЕствиталышх адге

чо» /Süfcruac et га..1936; De Xoaca et Результаты налих

1ссле,чОЗ£!л;." показали, что :<!Р-адгоэинн достоверно чаща встречаться :рвди клинических изслятов. Среда изученных культур преобладали цит->оба?™гр, вызывайте аттлатинащш зр-лтрсццтоэ морской свинки е цри-;утстит манкозы. 2Р-здгезикг з реакции агглютинации 2 эритроцитами клонена и барана обнаруживались ре-кз и частота их. выявления была фактически оданакоьой. Всего среда актикшх. в РГА. иголятав ¡¿Р-адге-кгнани обладали чаще /в 2,2-2,4 раза/' яншин, выделенные пра диа-:елх /Р<0,СЮ1/. Среди атамиоз,изолированных з контрольной грудпэ об-итодоЕзннжс , в ¿J.S pasa чзл/з набледалась РГА, подавляемая "ианияаой. íjtpHrüíTiz сп г1 у н нс^лмлячсслИ^.

:золл?сз в^ттзчаяяс* psrs? я пр::\:-зрн;> с одшгакозей "airoxc.1. Палу^ен-д?нтнз позвататгг считать каянезерээтегь'птнуа гзиагг,етгккац»:в едки из маркеров латсгекнэсти цигробактср.

Определение едгаяквоэ з РГА с натавкна: эритроцитам иорскоЛ вгагаи имеет технические неудобства и дзлазт недоступной ату ыетодалу та практических лабораторий. Нами проведены асследовааы по стан-артаэацяи определения адгезиноэ цитробактер в РГА с эритроцитами зрекей евкния. Для этого использованы эритроциты .фиксированные фор-альдегидом /В.В.Керальяик и соаьт. ,1^58/. Сказалось, что фиксация зитроцитов морской свинки нз влияет на воамозлость выявления ¡£i- а '-адгезкгов. Совпадение результатов РГА с катившим и -|иксировакны-I эритроцита«! было полным.Отмечено тэкзз сокращеше времена насгуз-г.чия реакции в I,S раза. Зыяснека, что фиксировании эритроциты ат-втктаруэтея лучп» не только в р-зак^и: на стекла, ко и в раззерну-й раазиии. Видимо, $орузлянизецйя,К8 илияя на рецептор»- иембрая . итроцнтов,ускоряет агглютинацию за счет болен быстрого юс оса-яия. При параллельной исследовании уровга адгззии показатели адгезии с фиксированными и натиЕгелм эритроцитами обнаружена чэт-

ras сгязь /140,001/ с коз$$гпи«ктаии регрессии 1,13*0,02 и аоррел ца 0/У92. Установлено, что похаоагези здгеотн »«ягиродшах ä не sasract эрптро1~!тоа не различаются. йшсировашше эритроциты »¡срок czs'.uw.! cra6'::.it«-.¡ пр; хронзкш в условиях холодильни-а в точе^э 2 лет /cpo:t йабледиыя/. Ярпдстгглешшз иат&рнзта убедительно показ ваят ,чтс йср^алиткооциг абгспечхнас-т длителькув стабильность ppi¡ поцигов, г.олнук пригодность для шяелония игкксгочувгтв'лтодыод: к va;¡нозopeзистснтнах адгез.'лов. Прймзнэгаз тагах эритроците» делая zssMorssss сгазздздекке эдгезянов е усдамкях пракет'шсуах дазсратег ССягружкям йР-ядхваяна г. ГГА с f«KCKposaHîK>r,ï чрнтрсцитагл изроя üf't:;.ví гэзвс-г.ег г/деть с одного ¿ui/ropo.: п^тог.-т-огт^

«чэтега беле« еэпоятгсл откояогдагаагл} под«» ::/?:асгпг:;ого атсяг*.

ïî.-!-r?«. ascj-icTEKK ;<1иуногвагентс5 дгп cuitcuo-tcucuí:

c.fi^eiiii*. как ясяеда-вована метод» бкздггстесгогс гесзград^йк не мэдэл» темзгэааной петли тххок псотн^ка крсдага

гтолгаазв змаагесвзих ».гмягсз обладд«! »ихарг-;с£.;агегл-х>е1ь« 7 зд-.^яас: мет; israari tv^-ivzaxai в 3,7 рсза. рм

c?sar¿ сбларутжзагись. сд-дпановс часто сроди oössoc групп сСгледо:з£1н:1.х. с ъизгхай стзяашь октиыоегм с

14 чд^э влргчажзь сргя: веских нзолдюг /• p/.0,0ÓLA 'lit: даара-u 19.2S кук-тур способна продуцировать аердалагйигькчД •аьтгр'С tokck-î /¿г-такаш/. сред: кзаасавюсла;. xxssaeos та кг« наводи: ба; одшжчшг. До всапике зкз^за-змго отека бсгььа« ч<;сть зядажзсхос птадлэа отнесена s у»к«зпото.чсгг2!сс.Ч1 /62,84/, огт-ьгькыа - к liícc «жгггшбвд. йэадазягесаз ísaiaaí .аблздзд: cssSoS и уызреынсй тоне гшкеетьв. £ акааакй пробе ка азах-сосунках установлено,, что 41, essinscsix ьташаз ссособкы к образована» териостабильногс онтзро гйкзща /jî-техскн/, тогда лох тенхо каходха среда здоромх лзц (¿а jü a^üHavssaes, пратдеы кщвагаиыа -ауямура ойладаа; уцерекюЗ актив

п. Что касается клинических кзолятов, более половины из них были ннетоксиганныии, остальные - высокстоксигенными. |рада клинических изолятов с одинаковой частотой встречались все :а.рианта продуцируемого токсина: СТ+ЯГ1", СТ^ЛТ, СГДГ*. что от-¡T иного (чзкторнасть патогенное™ c.íreundii ¡дя реализации болезнетворного потенциала энгерэбантзрии доля-!четать способность к выработке эктеротоксина с адгезивной ак-!стью. Оказалось, что культуры, обладание одновременно двумя гаками патогекности, встречались только среди клинических изояя-прдаеи преобладайте большинство из них продуцировало М?-адге-. Распределение ятих штаммов в зависимости от серогрупповой при-зхносхк показало, что наибольшая часть культур принадлежала се-уппз 022 /55,1?5/, до^нирупцей б серопейэажв клинических штам-Опрс.целениэ адгезтености и энтеротсксигенности целесообразно позевать для опенки патогзнности цитробактер. Сочетание этих двух орез может явиться подтверздедгеи этиологической значимости язо-в возникнозенки диареи. При использованных методах определения ротохашов цитробактер рассчитывать на их широкое применение но, но, очевидно, что совершенствование методов даст возможность льне': сем опереться па выявленные нами данные об этиологической ииосги сташов с сочетанием адгезивпости и знтеротоксигеяностм. ленив таймов группы 022 позволяет с больлзй вероятности!) ярзд-гать этиологическую роль кзелпта в конкретном случав заболевания. й пробе Sereny выявлено 2 клинических изолята, вызывавших кера-ныонктивит у морских Ослнск. Один из штаммов относился к capo- ' па 022, характеризоБ.«.;-я адгезивной н энтгротоксигенной аетнвко-, продуцировал лиэтде^рбоксклазу. Второй принадлежал серогруп-8 , такие обладал адгезивной к здаеротогвигенной способность*, е зтамж гатроОактер описаны Л.В.Ияролпбоэой и соавт.' /1533/.

Значение адгазюжоети и энтеротоксигенкссти как царкзроъ аато-генггости клинических кзолятов цитрсбактер подтвергдеао в опытах на дврзвкзакнкх петлях тонкого кшючгика кролика. На основании гистологического и элетяроннгамисросяопкческого исследования начальных вта-поз кигетноЯ цитробактар-ин^нцри впервые отаетскн структура врс-явлеи^Е инфекционного процесса, сзягзннке с патогегаапда гва?.стзазй; возбудитзлз: едгез;гя цагробактср к гдпкокалнхсу, колсггизэдлз эпнта-яиэт, поЕрагдскиэ энтсродатов, госпалэтелькая »г-ф^тьтрслда: я гмгр-сеэтмши оп:!Гс;гл".. Вроимшогеняя бактерий в торсцйта но агДзада-лось, з тем иа»;а с яолежктедьней. нробеГ; Се г» . зтого

сгацма бшта характерна сырааенкея шгстскс;«есхзя ахтнзность.

До казтцаро вроагки ом^ораетен-гл ддд иагунгдегичегко?. воспггг гигвчной 'Л'.тро^антор-чп.теки.!:; ас разработке;. Яэ ¡¿-¡огмх ыс-используема: дте сгралагнчесцой даалюстнк:;, приоритет кь. сс-наиболее удачного соч»тап/л гнслигичносг::, чулствлтеЖгКгстл •аналйо», его длительности к с-гоиаост;:, достукнооти при кассовое прл-^инсни'л, отсутствии необходимости б дорогостоящей аппаратура , дол-азн бат^ отдан РПГА к за зарплатам. П?ж изучена возаоякосхь лриго-тсьягккя аритровдтаршк даагностикуков для внлвлежл ангнтел, йкти~. •■знса а пятигенсалзкв&Ецих лии&гдаов. При конструировании препаратов иепояьзоваш данные об антигенном составе штампов цитробактер, циркулирующих на изученной территории. Чтобы серологический сгаа« оСсспочнаал получе-ше надежых результатов, инцунореггекгк к усло-вия-хх применения доляш быть стандартизованы. С этой целью ЭД готовили на основа стабильных фиксированных эритроцитов. ¿Активность реакций с разгаботсчнъши препаратами исследовали в модельных опытах с индинаторнши системами.

Преядй всего опредалены услоьгя получения антигенных ЦЦ. В качестве сонситиков непельаоаани лапополисахаридаые антигены Еестбаля II сорогрупп. На основе икания вишня температуры, .-¡кспозиции и рН

среда па ггрсцесс гслэсекги&кизздш выбран ситшальгай режим приготовления "цоиовалактаьх антигенных ЭД цятробакгор. Специфичность им-иунораагентов оцагавзли по титру кх агглютинации гомолопгашии.пере-арег.тнореагируть-жз! к гетеролсгичныни сыворотка»«. Во всех гомологичны:: системах титр реаяцик был в 4-24 раза . виге титра сывороток с пбрэкр^стгарсптарукцмд'. еитктелЕШ и в 80-320 раз гстз титра РИГА с гятерйлопркгаг. сыворотками. Пслучекгыз данные свидетельствуй: с дэ«5.т«аеЗ с?:е1л:5:г-п;о2ТК аслученных препаратов.

Далее кзучгны '»узс?гит глькогт ь и специфичность PiiA-r с пра-гэгоалагсны! зктягг-Еслк 2Д для кяднкацж Гл;т:'.г'еиа. Обнаружено, что э PHte кгидоагсрзгя система обесточивает иаи5олк$№ чуэсжви-

гэлъкость сзределизз; re »логичного антигена в глоточной, ran к /¡о.-егл-л.'гг.ней Кскцоптрасп, при которых удается ззягить

культур, мегжх С-снтагенгко сзази с культурой, гоыолегич-rcf: ::нд:;иаторг.-с^ сг.:стоуе, достоверно превгсаят концентрации антигена гсиолегччнэЛ пулы-усы - в 35-1230 и 260-1250 раз соответственно ;ля греггх вягесой :i а:ш;генов по Зест$аля. Тахта оброгсы, P/IA.T с заработанным: характеризуется групповой специфичность:», но поваляет, хотя и со значительно «еньсей чувствительностью, определять -антигены, пэрекрестнореагарущие дэтгращзнты. Результаты

зчкцш с антигенами энтеробакхеркй других родов были отрицательными, i исключение* реакции с ЗД 022 а взвесью s.typhiwuriuB , что о&ьяс-[ется сильной антигенной связью цитробактер 022 и сальмонелл группа /Б.П.Рагинская,1373/.

Для приготовления ионозалентных антительикх ЗД использован метод -мобилизации £орналикизирозгннкх яритрох^тоа при попади ашдояа в тестев коньюгкрухягего агента /Ю.А.Цузьиw и соазт.,1?81/. в гачега-сенслтинов применяли неадсорбировашие сыворотки собственного •иззодства. Получены антател&нне 33 цитробактер II серогрупп. «ля

СШЭЯШ саацрчЕчвостк и чувствительности реакций с ними измеряли агглютинируемую активность гретых взвесей и ЛПС гомологичных, пере-крестнореагаругщих и гетерологичных серогрупп цитройактер.

Установлено, ччо наибольшей чувствительностью разработанные ан-гитвльнке ЗД обладали а отношении гомологичного антигена,Чувстьиталь-носгь выявления культур с антигенным связями по крайней мере в G2-530 раз для rps-шх взвесей и в 19-ЗЭО раз для ДОС меньше соответст-гукцих препаратов гомологичных культур. Следовательно, РИГА с полученными антительнымк ЗД обладает грулповоА специфичностью, но дает всзыоаность со значительно меньшей чувсгвигелшосгьз определять антигены а парекресткораагирующгаи детермиишггаик. В FfjTA с этими жэ препаратами определяли егглккганйруячув активность авхвгопов зктеэо-беятерий других родов. В основной результаты реакдеа были стряцатадь-нкин, за исключением перекрссгса»; реакций антательисго СД С22 с х^ре-той ззвзсь.о ü.typiiiauiiuc .

Ta&iü образом, для прпгото£ланхя ионовааекткьх ангителька: ЭД штробеатвр ¿полна пригоден метод геаосйксибилчзацви при ломсая гьс-дояа.

Известно, что об огнссителыак; разменах антигвхикх частях; моаио судить но «¡отношена» результатов РПГА и РГ1А.? /Е.В.Каральнкк,1976/. Установлено, что эффективноачъ. выявлания группоспецигТичесних детерминант в гретых взвесях при поиоцн РПГА и РНАт примерно одинакова, s в ДОС существенно /Р<0,01/ лучше при использовании PiiAr. Показано, что ^ьствительность РНАт при индикации бактерии ро всех случаях гаже, а антигена по Вастфалю, как правиле /в 9 вз II случаев/ Бшге.чем РПГА. Анализ результатов РКАт показал, что знтктелосвязызяюаая ан?т* кость антигенов лучие выраглкз в препаратах ЛИС по Вестфшш. Результата РПГА позволили установись, что аггляганнрувчаг активность гретых взвесей ваге, чем у ЛИ. Нго^^сшссгь распределения активности

грусл с ело ци úw скхх д^рдагаг?. а РИГА я ГНАт свлдатзлстзуэт о тем, что я PiíAr дучпю <Ьрл,г.5.гд» :шждосйерккЯ енпдан, 4 в Я1ГА - ■ друпшз ¡»якгенши vacrçœ.

Taxw образе:», г. нодзлыгах uisirax г ¿.элрабо^кнцт-та яитлггкдаа: л ШЕИМЛЫШВ и^угорздгсда'за доказана :'«*:оа;ость определяй дэгхктогрздри ангагша по езрелоктсаосх» пегазогляш. Д.та оигсаэчэ-аавсииал^кей ' Цфжткгаоскг n:.uc:ca ?дг,агсг.оз з чагернлв цздлог-oûpacno npKítiiETb обо " Г>ПГЛ к Допгз^а ирцадзвгш-

яея ¡цектлкссгь асдуч.пзп^'. ЭД ДЛЕ зярелийга« awxîifta «

libÄn.tf'iii.ü .¿»глгвь'ь.

с:;.':;.1 ал гр^бу^г ч-i.)-

аЗ yr-'iijo.t гдтга;яч>й «псстк, и , ^ЗЕДУэзтетан?, «.агрж ¿ру-

да, раотгарахог* г htuisc^-c«.., s)-«cwoäkoc::>

яс.-гиьая-з.ттгс; аткгхг.ша:;: сд цртрагаатар. i кгчбвхг» еемзтегсч rcsaasxraa i c-®opt.im voo-

"у-'-ту?, 'r:.;.v.;>.\j •• •„••; л •: i.'.: íl^^u

^р.чтрс^тоз iTfzi''¡¿::z:¡ чт- : гпссгху» ^yrr.iîci'«

cc-íi •¡.c.tüTKf re* -i >з np'ícyr";-::,:» ¡lünisr';;,srs ccritva

ç^kc^p^î.îJîitiï л-л'/рештей гроггоо iron

« ÍÍ^SOT'-SI .гпготаэго зд-гхгтга ютгссдгкчр, p^M-îorM^-T^Bi-cty a отне-екг! .is

•ЗТ?» ^згсбот&чякЯ ОПОЗС5 позгелла* тэазео угрек-игь пропсе прагогоз-тасгя лргларата, В иодаяыах катах.сопззско, что пажеасоякыз дД обачяо«кБок? прайгяпесди одииакозуя о^ектагность загдого

чз аптяг-ет'та. 3 то -epetzt HITA, с полизалчькга л cpoaspaTÄCs г 3 -10 раз уступает по чуэстпятедшоста роаи?я1 с нокоаагизгакэг да. Нрк оцзнгсо спэци*ичноети РИГА о ирнготовленньага ряагаятаыи со'наруагзно» что ЗД еичвдквт гомологичны* антигены з значительно меньвих хенцент-

рацаях, чем парзярестнораагируадао и гетерологичные. Выяснено, что имеется тенденция к дучяеиу определении при покори поетЕалентвих ЗД крупных частиц антигена по сравненшз с ЛПС.

Тшош образом, для поливалентных ЗЦ характерна серо групповая спмзфяность, как и дои ионовалентных, и в то яе время несколько меньшая чувствительность в сравнении с нами. Однако очевидно, что прииенеяиа поливалентных сокращает затраты труда и времени дате в том случае, если после получения положительно го результата в РИГА с ними для точной ивдикацци антигена исследование проводят с ссотает ствукцик мсшвалажгкшя! прчяаратаг:!.

!:а ссново с;гкс::роЕан:^ ^¿чгрсцн-тсв кур разработаны ^¿-лц-оа-аз дтя АСЯ э рсаяцр!. рссггкэзйразсгз^ди:.

Слсду.тпрт ¡ггзлох: исследования лгкягсь иаучвгси роаяци* с рвзработа1й1ами ЗД в контролируемых услс^кях на модели кл-агечкоЛ цитроЗалтер-шфекци и, "предзлеше бактериологических а 1Ыцуно логических показателей данного заболевания в эксперименте. ¡¿одели килечкой цатробактес-ии^еыуп: из огкеаны. отсутствие затрудняет возможность коррептнсЗ оценки потенциала рааахчшх диагностических методоз. Пакт разработана модель на основе перорадьного заражения крелшеез штаммами с.ггеапйя . О воспроизведенном инфзкционном процесс« судкли по клиническим данным, обсеменешшсти фвкалиЯ ;шокурированными бактэршши, содержанию антигенов и копроантител, наличии АСЛ в перк(?врнческоЗ крови, активности сывороточных антител.

Анализ высевазмссти возбудителя показал, что наиболее интенсивно он ввделялся в парша 2 надели. Максимум высева приходился на 3-5 дш. Пссда 5 дня прослеживалось постепенное снижение уровня обсемененности содержимого кииечкика к к 21 дню отмечалось вьделение единичных КОЗ из I г {«калий. Полученные результаты свидетельствуют о колонизации кииечника подопытных животных штаммом цитробактер.

Ди» ::а выведения антигена тагом имеет определенные закономер-яост-и. Выделение антигена с фекалиями отмечается с перЕНх дней опыта. На пзр^ой чеделэ одинаково зЕективны обе реакции, начиная со второй недели, более эффективна РНАт. Наиболее вксоним содержание антигена было в перше 2 недели. Титр РИГА отжался после 7 дня, тогда как гитр РНАт увеличивался до 14 дня. К концу третьей недели число лолсиительных находок антигена значительно уиекигло-мь. Полученные данные свидетельству®! о повышении концентрации антигена в мелкодисперсной *орма и снижении микробной сбсемекенности фекалиЛ з результате действия иммунных и других механизмов освобоэдеггия юшзчника от возбудителя. 05 уиегнжеши относительных размеров антигенных частиц з фекалиях в течение заоолезания говорят и результаты определения коэффициента относительно?, агглютинирующей активности.

Таким образом, динамика выведения антигена соответствует динамике микробной обсемененнооти ¿екали! подопытных животных. Серологические показатели свидетельствуют о каряетащей деградации антигена. Колжествешая оценка содержания бакторкй в ^окалиях является трудоемким исследованием и, ка наш взгляд, мокет быть заменена серологической индикацией антигена при параллельном использовании РПГА и РКат. ;^намияа выделения и характер антигена могут служить этиологическим кригэрием кииечной цигробактер-ин({екпии.

Экспериментальная цитробактер-инЛжция сопрововдзлаць развитием системного иммунного ответа: в РИГА выявлено нарастание титра сывороточных антител. Сывороточные иммуноглобулины регистрировали на 3 день наблюдения , а я 10 дню наблвдали достоверное увеличение активности антитэл в 2-4 и более раз /0,01>?>0,001/, Максимальшэ уроны сывороточных антител отмечали на 14 день. Затем происходило снижзнко татра антител. Кммутшый сдвиг модно выявить при а саг .-цозднии парных сывороток в пгрЕив 2 дня и на 5-7 дни бслезга. С поиоцьа ингаггювк

"В

ЭД в РРО впервые обнаружены специфические АСЛ. АСЛ определили реже, чей рост титра антител, однако обнаруживали в более ранние сроки заболевания. Полученные результаты позволяют сделать вывод о перспективности выявления АСЛ в качестве метода ранней диагностики кишечной цитробактер-инйскции. Впервые обнаружены копро антитела к антигенам цитробахтер. Для этих целей использована РПГА с подученными антигенными 5Ц. Порученные данные показали, что определение копроантител может служить одним из показателе*! киючноЯ цитрсбактер-инфекцки.

Таким образом, разработанная модель ыаеадой цитробактер-инфек-щи дает возможность в контролируемых условиях исследовать эффективность комплекса иммунологических методов диагностики на основе приготовленных препаратов. Показана принципиальная возлошозть их применения в диагностических целях. Определены критерии этиологической значимости цитробактер. Обоснована целесообразность изучения зфйектив-ностн выявленных показателе/! квтекцки при обследовании больных.

Исследование сывороток больных лэдеЯ показало влияние возраста, тягзста заболевания.и сроков взятия крови на эффективность РПГА с разработанными антигенными ЭД. Отмечено, что у взрослых нередко вняв-лаются анамнестические антитела. У детей наЗлздается более низки1, ш-иунньй ответ и тенденция к накоплению антител обще;": и ьз -устойчивой активности. У взрослых серологическое лодтверздение ножно получить дифференцированно по нарастании суммарных и за -резистентных икмуио-глобулинов, у детей - достаточно по динамике обцеЯ активности антител. Частость выявления суммарных антител в первые дни у взрослых выше, чем у детей, однако к концу I недели эти показатели выравг-~-зазшсь Что касается га -устойчивых иммуноглобулинов, процент пола-а^чиьных находок был лиге по сравнении с общей активностьи, однако дина-г.хаг прироста антител была более выракенной. Выяснено, что наибольшая частость нарастания общей и -резистентной активности антител наблзо-

далась при среднетяг .лои и тяжелой течении болезни. При условии однократного вз«^пя крови в качестве условно диагностического титра целесообразно ринять у детеЯ титр 1:40 и выше, у взрослых - 1:80 и выше. Серологические исследования показали также, что вторую сыворотку можно брать на 5-7 дни болезни. В эти сроки уже определяются изменения уровня активности антител.

Зперше проведено исследование на наличие АСЛ при килечной цит-робактор-инфекции. У больных, не выделявших цитробактер, указанные клетки не -найдены. У одной трети больных, выделявших C.freundii 022, выявлены значимые количества АСЛ. У этих больных наблвдается рост активности антител, что подтверждает ценность теста на АСЛ. Преимущество определения специфических лимфоцитов заключается в более раннем появлении этих клеток в отличие от сывороточных антител.

Установлено, что при диареях с выделением цитробактер при помощи РПГА могут быть обнаружены копроантитела. В контрольной группе больных с документированной дизентерией копроантитела к цитробактер не обнаружены. Несмотря на редкие находки копроантител при кишечной цит-робактер-инхекции, их иотно расценивать как дополнительный диагностический показатель.

Иетоды индикации антигена цитробактер на пытались еще применить в лабораторной диагностике диарей неясной этиологии. Исследование фекалий больных людей показало нарастакшую дезинтеграцию возбудителя наряду с выявлением гомологичных антител, что говорит о соответствии результатов обоих методов: индикации антигена и определения сывороточных антител. Оказалось, что возраст и тязеесть течения болезни не ■ влияют на частость выявления антигена в Фекалиях. На индикацию антигена влияет динамика инфекционного процесса, что,видимо, связано с увеличением деградации бактерий.

Поскольку количоственноз определение цитробактер в фекалиях яб-

дяется трудоемким процессом, а полученные данные не всегда информативны, на наш взгляд, объективные критериев этиологической значимости обнаружения цитробактер является динакика дезинтеграции антигена, которую иожко установить по сорологичес.жы показателям. Знделяеиость возбудителя пгдаэт в процессе проведенного антибактериального лечения, анижазтся эффективность РПГА, частость ке индикации антигена прь пьиощи РНАт не меняется.

Таким образом, разработанные 35 эффективны в индикации антигена цитробактер в фокажчх больше.. Полученные данные свидетельствуют о достаточной чувствгтелъноста к специфичности РНАт и РПГА. Впервые установлен», «то относительные размеры антигенсв цятрсОактер в фекалиях уменьшаются з процессе лечения и в динамике заболэзашя. Зс:5ек-тивность икдикэцил не зависит от возраста и тятести течзгаш болезни в отличие от гуморального иммунного ответа, а индикация при помовд РНАт не зависит от лечения и динамики процесса в отличие от бактерии« логического кзтода. диагностики.

Зпервкв при диареях неустановленной природы проведены исследования по индизацм: антигена в моче, Выяснено, что эффективность квдика»

ие зависит от возраста больных. Оказалось, что е отдельных случаях почет наблюдаться фокальное загрязнение иочи /у аенцин и маленьких дегаЯ независимо от иола/. В этих случаях положительные результаты дает РПГА. В случае положительной РНАт высева уринскультуры не отмечали. Установлено, что эффективность РКАт зависит от степени тя-жастл болезет. Почти у везх .больных с положительной на антеген в моче РЯАт набцадается высев кояроптаииа цитробактер и высокая активность антител. болььым бил поставлен диагноз пидевоЛ токсикоин$9кцик. В«док>,при попадании в организм массивной дозы возбудителя происходит их гибель в кишечнике, что ведет к антигенами, затем к гнтигигурии. Таиш сбразсм. л патогенетичоском аспекте обнаружение антигена цитро-

стер з лшае свидетельствует об антигенеиии. С этим связено, по-ви-иоцу, г-ишяение антигена в моче в перше дни болезни. В контроль-Я группе больных документированной дизентерией антиген в моче не наружен. Специфичность индикации антигена в моче подтверядается впадением серогруппы копрокультурн, антигена в фекалиях, сывороточ-х и копроантител, АСЛ с серогруппой антигена в иочч. Полученные иные показывают целесообразность применения РНАт для индикации ан-гена в моче в целях ранней диагностики цитробактер-инфекции. Нали-;е антигена в моче может явиться дополнительным этиологическим кри-рием данного заболевания.

Результаты параллельного исследования фекалий и мочи на антиген 2 и сальмонеллезный группы В свидетельствуют о сильной антигенной ¡язи между ними, но не о полной идентичности. Из-за 'перекрестных ¡акций необходимо использовать оба диагностинума и учитывать разницу титрах реакции или же определять Н-антиген сальмонелл. В последнем !учае при нидечноР цитробактер-инфекции результаты реакции были от-[цательнши.

Использование комплекса критериев этиологической значимости об-:рукзния' цитробактер в фекалиях позволило установить кишечную цит->5актер-инфекцию у 30* больных ОКИ, выделявших C.freundii.

Результаты проведенных исследований показали, что в арсенал лабо-сторноГ! диагностики кишечной цитробактер-инфекции целесообразно вклю-1ть комплекс методов: выделение бактерий с последующим определением 1тогенности штамма, индикацию О-анткгенов цитробактер в фекалиях и че, определение показателей иммунного ответа - системного /актив-ють сывороточных антител, АСЛ/ и местного /копроантител/.

3 Ы В О Д Ы

I. Выявлены особенности серопейзажа аггаммов C.freundii в усло-|ях Северного Казахстана. При диареях C.freundii выделены ча^г -

в 125« /с ¡превалированием серогрупп 022,0X2,06/. чем у здоровых лиц -в 4,7К .случаев / с .превалированием серогрупп 07 и 03/.Установлена . принадлежа сть культур к 32 серогруппам 779,34 штаммов относятся к 14 :из них/ и 12 биовараы/62,2% ляазшов относятся к 8 из них/. Учет ^сочетаний 'биовара и серогруппы ;,в том числе редко ъстречазздихся, расширяет возможности эпиде-млогачаского -маркирования изолятов. Разра-. ботана рациональная схема выделения л идентификации условно патогенных энтеробактерий.

2. ¿таммы с.хгеипйи .независимо от источника выделения характеризовались полирезистентностью 'К антибиотикам. Среди клинических изолятов. по сравнению, со штаммами, обнаруженными у здоровых лиц, преобладали культуры .устойчивые одновременно ж Э и более препаратам.

3. Маннозорезистентная хеиагглютннация, в отличие от маннозочув-ствитУльноП илмеаанного типа, наблюдается-у клинических изолятов с.сгеип&и достоверно чаце по сравнении с культурами, выделенными лт:здоровых.лиц, что'позволяет считать этот признак одним кз маркеров патогенности с.ГгеишШ . Стандартизовано определение адгези-ног в реакции агглютинации эритроцитов морской свинки.

4. 'Показано, что около-половины клинических изолятов С^гециаи ; обладает. энтеротоксигенностья. Среди .изученных культур установлено -три.практически.одинаково часто встречающихся варианта по тицу проду-• даруемых.энтеротоксинов: СТ+ЛГ+, СГ^ЛТ, СТЛ*" , что отражает многофакторность патогенности С.ГгеапсШ.

5. итагш с.2reund.il э обладающие одновременно .адгезивностьв и -энтеротоксигенностью, достоверно чаце обнаружены среда дошщкруыцкх

серогрупп, -что козазт .быть .обусловлено .селективным .их преимуа^асжаеа в циркуляции:среди;лвдей. Сочетание „двух паркеров — адгелквности ж эн-леротоксигеиюсти - целесообразно -использовать /для оценки латоген-1 иости.. язодята.

6. На основании проведенного гистологического и электронномикро-скопического исследования начальных этапов цитробактер-шгёекции на модели перезз-. лиоП петли тонкого кишечника кролика впервые отмечены структурные »¡роявления инфекционного процесса, связанные с патогенными свойствами возбудителя: адгезия цитробактер к гликокаликсу, колонизация эпителия, повреждение энтероцитов, воспалительная инфильтрация и гилерсекрецжя эпителия.

7. Разработаны способы приготовления цитробактерных антигенных и антительных ¡.юно- и полшзале.:т:лх эритроцитарных даагностикумов для выявления антител при помоци РПГА, антигенов - РНАт и РИГА, АСЛ-реакции розеткообразования. Показана целесообразность их использования для более полной расзибровки этиологической структур острых кишечных инфекций.

8. На основании результатов модельных опытов с гомологичными,пе-рекресгнореагирущими и гетерологичными индикаторными системами показано, что реакции с разработанными иммунореагентами характеризуются достаточной чувствительностью и специфичностью. Установлено, что РНАт и РПГА обладает? различной разрешающей способностью в отношении мелкодисперсных и крупных антигенов. Для определенна степени дисперсности антигена и обеспечения максимальной эффективности его индикации целесообразно одновременное использование обеих реакций.

»

9. На разработанной экспериментальной модели кивечноЯ цитробактер-инфекции показана эффективность иммунодиагностических методов на основе разработанных эритроцитарных реагентов и обоснована целесообразность их комплексного использования в клинике. Впервые обнаружены дополнительные показатели этой инфекции: специфические АСЛ и копроанти-тела, динамика выделения и дезинтеграции антигена.

10. Эффективность индикации антигенов цитробактер в фекалиях не зависит от тянесги болезни и возраста больных. Агглютинирующая актив-

ность антигенов в динамике болезни ски; .¿""ся, антителосвязыващая повышается,что отражает развивашуюся в процессе заболевания деград Цию антигенов и может иыеть диагностическое значение. Впервые обнаружено, что при кишечной цитробактер-ин~.екции может наблюдаться анч генурия.Частота находок антигена в моче зависит от тяжести болезни. Показана целесообразность индикации антигена в моче для ранней диаз ноатики,в этих целях более эффективно применение РНАт.

11. .Эффективность определения сывороточных антител зазисит от возраста больных, тяжести заболевания и сроков обследования. Обнар; •хено преобладание суммарных антител и тенденция к накоплении uU-.pi зистентных. Доказано, что ценность определения условно диагностиче' кого титра и динамики обцей и ^ -устойчивой активности идауноглоб; линов зависит от возраста. Впервые при кишечной цитробахтер-инфекц обнаружены слецифичесь АСЛ и- копроантитела, определение которых имеет диагностическое значение.

12. На основе проведенных экспериментальных исследований и лао роторного обследования больных рекомендуется тактика отнологическо диагностики кииэчной цитробактар-инфекцииг- бактериологическое иссл дойание фекалий с последующим определением патогенности изолятов.и дакация антигене при помоги РПГА и'РНАт в фекалиях и РНАт в моче в перше дни болезни, определение в РПГА сывороточных антител в дина мике болезни'С дифференциацией об^ей и -устойчивой активности, детей при невозможности получения парных сывороток определение уел но-" ■ диагностического титра антител в крови не ранее 5 дня болезн Методами диагностики могут-явиться определение антигенсвязываюцих лимфоцитов и копроаптитал. Дополнительными критериями ,дифференцкр щшш' цитробактер-ин+еяцию и носительсгво, является обнаружение в ;; гзл антигенсвязываюцих лимфоцитов при поыоци ъззщя' :с':е?кообразов ния и антигена в моче по Р;1Ат.

список

работ, опубликованных по теле диссертации

1. Биохимическая характеристика и частота обнаружош^слошю патогенных энтеробактерий //Здравоохранение Казахстана.-хатУ.н- о.-С.55-57 /совы, с В.И.Зельцер/.

2. К характеристике бактерий рода клебсиелла-энтеробактер, выделенных при острых кишечных заболеваниях //Актуальные вопросы эпидемиологии и проаилактикн кишечных инфекций и инфекционного гепатита:

. Ж ЭМБ. -itl3. -Алма-Ата, 1977. - С. 83-В8 /совы, с В.И.Зельцер, Э.И. Цасловой/.

3. Об этиологической роли протея при острых кишечных заболеваниях //Tau же.-С.88-91 /совм. с Г.С.Цицурияой, З.Н.Чарухиной,А.Ы.Рабино-вич/. ч

4. Условно патогенные эчтеробактерии в этиологии острых килечных инфекций /Лам же.-С.92-98 /совм. с Э.й.Масловой, В.И.Зельцер/.,

5. Кекоторие вопросы бактериологической тодтвгрдщаемости дизентерии/Лам хе.-С.136-145 / совм. с Н.в.Крамчаниновым и др./.

6. К вопросу улучшения бактериологической подтверждаемости дизен-терии//Эпидешология и профилактика кишечных инфекции: Тез. докл. -симпозиума и заседания Всес. пробл. комиссии "Эпидемиология .клиника, диагностика и профилактика инфекционных болезней".-Таллин,1978.-0.101-103 /сов», с Н»Ф.Крамч актовым и др./.

7. К вопросу расшифровки острых килечных заболеваний неясной этиологии //Там же.-С.264-266/совм. с Э.И.Масловой, В.И.Зельцер и др.

8. Итоги изучения роли условно патогенных энтеробактерий в этиологии ОКЗ в Казахской ССР //Материалы И.съезда гигиен., эпидешод., микробиол. и инфекц. Казахстана.- Алма-Ата,I9S0.-T.3.-С.24-25 /сова, с В.И.Зельцер, З.И.1£асловой,Д.Е.Сейдудлаевой/.

^ФЩ непрерывного действия дда серологических реакций //Каз. Н^И^ри^осп^е Каз.СФ.-Информ.лясток.-Целиноград,1981,-

10. Упрощенный етособ дифференциации кишечных бактерий //КазНии-НТИ при Госплане КазССР.-11нформ.тастоЕ.-Целиноград,1982.-Серия 22-25 е- iio.

vII. Экспериментальная цатробактер-кнйекция //Зоггр.эпидемиол..

Аяиа-Ата,I983.-С.61-66 /совм. с М.У.Дусмагамбетовны,А.В,Ерчунсв4/.

^ешйртоста индикации антигена бактерий рода цитробактер с поыоцью ЙЙ2 //Там ае.-С.85-89 /совм. с 2.И.£гброт/Г

^^{^^ескаятадикация антигена цитробактер при 0КЗ //Тез. докл. Ji исес.конф. по клинич. биохимии, моЫологии и ии-лтеолотаи

кпоЛЬ ^2°55?ование "ОДВ®1 перевязанной петли тонкого иязечника изучения патогенного действия цитробактер /Лам зе.-/совм. с й.У.Дуснагамбетошм, А.В.Ерауном/.

/сови. с Б.В.Каральником/.

16. Микробиологические исследования ь'ри кишечных инфекциях // Алма-Ата, 1984, 155 с./Рукопись депонир. во ВНДШ.мЗ СССР .¡'3614-64 аннотир. Ж,раздел Œ, 1984, V 12/ совм. с Б.В.Рашккньм и др./.

17. Характеристика бактерий рода цитробактер, выделенных при ос трых кишечных инфекциях //йатериалы 1У съезда эпидемиол. ,микробиол. гигиен, и инфекц. Казахстана,- Караганда,1985.-Т.3.-С.105-105 /совы с Н.Ы.Бисеновой/.

* 18. К вопросу экологии шкроорганизмов //:.{атер. П регион, кон*, по программе ШЕСКО "Человек и биосфера":Населенные пункты и охрана окружающей среда.-Алма-Ата,Целиноград,1986.-C.vS-98 /совм. с П.З.Еи сеновой, 'Л.7. Дусмагамбетовкм/.

Ï9. Антибиотикоустойчивоеть условно патогенных энтеробактериг., выделенных на территории Целинограда //Там же.-С.'.'8-100 /совм. с й.и.Бясеновой , В.А.луромской/.

20. Серологическое типированиа и биохимическая характеристика бактерий рода цитробактер, выделенных при кишечных инфекциях //Де-ликйград, 1986, 9 с./Рукопись депонир. во ВНЖШ йЗ СССР 'MI.S4-86, зннотир. ¿¡РЖ,раздел 1:,1986,Р12/совм. с -..Ы.Ьисеновой/.

21. Антибиотикоустойчивость бактерий рсда цитробактер, выделенных при кишечных инфекциях //Целиноград,;»66, 12 с./Рукопись депои во йНшШ ИЗ СССР Ï-1 11985-86, шшотир. ¿PE,раздел 12/сош. с. Н.У.Бисеновой/.

22. Зритрощтарные диагностику™ для выявления антигенов бактерий рода цитробактер //^урн.Ш1Сробиол.-158б.Ч:'8.-С.бЗ-6Б / совм. с Б.В.Каральникоа к др./.

23. 1!денти£икация условно патогенных энтеробактерий //Алма-Ата, IS86.- 27 с.-Руководящий нормативный документ РД-42 Казахской. ССР-2-85 /совм. с Б.И.Зельцер, Э.И.Масловой/.

24. Гистологическое и электронномикроскопическое исследование i ражений кишечника, вызванных бактериями рода щтробактер/Л'мцушые дисйункции.-Алма-Ата,1950.-С.121-126 /совм. с С.Р.Зсергеповой и др.

" 25. Стандартизация определения ?ммбрий /адгезинов/ цмтробактер, Лаб.дело.-1990. -832. -С. 46-49 /совм. с Б.В.Каральником.Г.Д.Укбаевой/.

26. Дифференциальная иммунодиагностика сапьмонеллезов группы В цитробактер группы 022 инфекции //Материалы I болгаро-советского симпозиума по вирусным инфекциям, У наиион. кон?. по бактер.инйекц с мездународньш участием.-Варна,I39Q.-C.132-133./совм. с Т. Г.Денис« вой, л.¡i!.Абдралманоеой и др./.

27. О серологической диагностике сальмонеллеэов группы Б //Лаб, дело.-1991.7.-С.52-54 /совы, с Б.S.Каральшком и др./.

28. Индикация антигена цитробактер в моче при помощи эритроцит! ных диагностикуьюв //Материалы Всес. конг. по сельскохозяйственной биотехнологии.-Целиноград,1991.-С.150-151.

29. Разработка цитробактерных эритроцитарных даагностикумов и эффективность реакций с ними 7/Гаы se.-С.153-154.

30. Сочетанная продукция энтеротоксинов и МР-адгезмгав штаммам; цитробактер //Материалы У съезда гигиен., эпидемиол., южробиол., ж Тектонистов гСазахстана.-Алиа-Ата,1901.-Т.У.-С.19-21 /совм. с B.¡¿. Enсеновой/.

oí. Ноше подходы к этиологической диагностике диарей, вызывав-, условно патогенншли энтероо'актериями /Л'ам же. -С. 77-7'"'" /совы, с с.и.Капальником/.

32. Серологические и бактериологические показатели экспершен-льноП кииечнод цктробантер-ин-текщи // ¡¿атериалы У съезда гигиен., вдеьмол.. иккробйол..инфекционистов Казахстана.- Алма-Ата,1991.-У1.-С. 57-59.

33. Серологическая индикация условно патогенных энтеробактерий >и диареях //Там же,- С. 59-60.

34. Индикация антигена цитробактер при помощи пол1:валентного [агностикума /.'Методические рекомендации.-Целиноград, I9S2.- 7 с. :оем. с Е.В.Каральником, Н.Ь.Еисеновой/.

35. Диагностическая ценность индикации антигена возбудителя при гарзях //Акмола, 1932,12 с./Рукопись депонир. в ХаэНИИНКЯ Госном-соношки Казахстана Г 2348 - Ка S2 / совм. с Е.Н.Колос и др./.

36. Адгезивная и энтеротоксигенная активность зтадаов цитробан-sg, вэделенннх при диареях //Акмола,1932,10 с./Рукопись депоннр. лазйШНКИ Гоонок.экономлки Казахстана № 3349 -Ка 92 /совы. с Н.М. icqhobo:;/.

37. Бактериологические и иммунологические показатели эксперимйн-' . альной диареи //Акмола, 1992, 7 с./Рукопись депонир. в КазНИЙШИ зск01.гэк0н0шиси Казахстана >J 3950 -Ка 92 /совы, с ЕГн.Сочневой и др./