Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические свойства бактерий рода Citrobacter, выделенных при моно- и ассоциированных бактериальных инфекциях

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, , Азнабаев, Гумер Калимуллович

Глава 1. ВВЕДЕНИЕ

Глава 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Этиологическая роль бактерий рода Citrobacter

2.2. Факторы патогенности бактерий рода Citrobacter

Глава 3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

4.1. Сравнительная морфологическая и культуральная характеристика бактерий рода Citrobacter, выделенных при инфекционных процессах в составе микст- и монокультуры

4.2. Биохимический и серологический пейзаж Citrobacter spp.

4.3. Питательные потребности клинических штаммов бактерий рода Citrobacter (ауксо - и прототрофность)

4.4. Адгезивная активность бактерий рода Citrobacter

4.5. Факторы бактерий рода Citrobacter, коррелирующие с патогенностью микроорганизмов

4.6. Персистирующие свойства бактерий рода Citrobacter

4.7. Тестирование на биологических моделях вирулентности бактерий рода Citrobacter, выделенных в микст- и моноинфекциях

4.8. Молекулярно-генетическое типирование клинических штаммов Citrobacter, выделенных в моно- и в микст-инфекциях

4.9. Плазмидный профиль бактерий рода Citrobacter

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологические свойства бактерий рода Citrobacter, выделенных при моно- и ассоциированных бактериальных инфекциях"

Актуальность работы. В последние годы наблюдается изменение этиологической структуры инфекционной заболеваемости человека, с четкой тенденцией повышения удельного веса условно-патогенных грамотрицательных микроорганизмов. Данная патология человека характеризуется выраженным клиническим. полиморфизмом, связанным с одновременным воздействием нескольких этиологических агентов, каждый, из которых имеет в своем арсенале комплекс факторов патогенности. Интерпретацию результатов при этих инфекциях затрудняет высокая частота выявления условно-патогенных микроорганизмов в составе микст-культур, каждая из которых обладает рядом характеристик,, сочетание которых может определять высокий вирулентный потенциал патогенов в целом (Воробьев А.А., 1998; Бухарин О.В., 2000).

В наибольшей степени это относится к условно-патогенным бактериям семейства Enterobacteriaceae, выделяемым в составе микст-инфекций (Габидуллин З.Г., 1999).

В качестве оптимальной модели мы избрали бактерии > рода Citrobacter, поскольку темпы изменений свойств патогенных представителей этих микроорганизмов, выделенных при моно- и микст-инфекциях высоки и отмечено возрастание их роли в инфекционной патологии человека (Туйгунов М.М., 2003).

К тому же литературные данные свидетельствуют о широкой распространенности представителей рода Citrobacter в окружающей среде, в воде, почве [21, 37]. Некоторые исследователи относят их даже к естественным обитателям кишечника, т.к. они: нередко выделяются и у практически здоровых людей [34,46].

Вместе с тем следует признать, что в последние годы появились сообщения о развитии тяжелых гнойно-воспалительных, урологических и кишечных инфекций, вызванных бактериями рода Citrobacter в ассоциации с другими представителями условно-патогенных микроорганизмов [16, 32,47].

Отмечено, что по частоте встречаемости бактерии рода Citrobacter при различных инфекционных процессах колеблются от 9,3% до 14,5%, от общего числа всех выделенных условно-патогенных грамотрицательных возбудителей [49, 206]. По данным других авторов, высеваемость бактерий рода Citrobacter при острых кишечных заболеваниях еще выше, достигая 19,4 - 39,0 % случаев [27, 82, 86].

Провести при этом дифференцировку патогенных и непатогенных представителей данного рода по культуральным и ферментативным свойствам представляется не всегда возможным. Для осуществления четкого контроля за распространением и проведением противоэпидемических мероприятий, а также разработки критериев отнесения выделенных культур в каждом конкретном случае к этиологическим, требуется всестороннее изучение сравнительных биологических свойств клинических штаммов Citrobacter, выделенных при инфекционных процессах как в виде моно-, так и в микст-культурах.

В связи с вышеуказанным, актуальным представляется сравнительная характеристика биологических свойств бактерий рода Citrobacter выделенных клинических культур как при моно-, так и в ассоциированных микст-инфекциях.

Цель исследования

Провести сравнительное изучение некоторых биологических свойств бактерий рода Citrobacter, выделенных от больных с инфекционными процессами различной локализации при моно- и ассоциированных бактериальных инфекциях.

Задачи исследования

1. Установить частоту встречаемости Citrobacter spp. при кишечных, гнойно-воспалительных и урологических: инфекциях и изучить их культуральные свойства и морфологические особенности с использованием электронного микроскопа.

2. Провести сравнительную оценку адгезивной, гемолитических (а-, тиолзависимый и энтерогемолизин), лецитиназной, ДНК-азной активности, персистирующих свойств Citrobacter spp, выделенных при ассоциированных бактериальных инфекциях и в монокультуре.

3. Провести сравнительную оценку патогенных свойств клинических штаммов Citrobacter spp., выделенных в моно- и ассоциированных бактериальных инфекциях, на различных биологических моделях экспериментальной инфекции.

4. Выяснить природу генетических детерминант, контролирующих адгезивную, гемолитическую, LT-, ST-энтеротоксигенную активности Citrobacter spp.

Научная новизна. Впервые с помощью электронного микроскопирования описаны морфологические особенности Citrobacter spp. и изучены взаимоотношения бактериальных клеток Citrobacter spp. в колониях. При этом выявлено два типа контактов: плотное слипание и образование перемычек на уровне наружных мембран. В концентрических зонах колоний микробы преимущественно представлены клетками, образующими швермеры, с избыточным количеством жгутиков и не способных к делению.

У клинических изолятов Citrobacter spp., выделенных при острых ассоциированных кишечных инфекциях чаще обнаружена способность к синтезу холероподобного термолабильного и термостабильного энтеротоксинов.

Выявлены различия серологического пейзажа Citrobacter spp., в зависимости от источника выделения. культур: 022 серогруппа: выделялась при патологии желудочно-кишечного тракта, ЗаЗвЗс - от больных урологического профиля в основном в составе микст-инфекций.

Представлена сравнительная характеристика данных об адгезивной, гемолитической, антилизоцимной и антиинтерцидной, лецитиназной, ДНК-• азной активности Citrobacter spp, при моно- и ассоциированных инфекциях: бактерии рода Citrobacter, выделенные в микст-инфекциях обладают способностью синтезировать высокоактивный термолабильный и термостабильный энтеротоксины, а-гемолизин, энтеро- и тиолактивируемый гемолизины, ферменты агрессии и способны к адгезии, что подтверждает их этиологическую роль при инфекционных процессах различной локализации.

Впервые у части штаммов, выделенных при кишечных инфекциях, обнаружена способность к синтезу энтерогемолизина, формирующего на кровяном агаре с 5% дефибринированной кровью барана зоны двойного лизиса и; в эксперименте морфологически вызывающего накопление геморрагической жидкости в петле тонкого кишечника кролика.

Практическая и теоретическая значимость. Обнаружение среди клинических штаммов Citrobacter spp. культур, характеризующихся наличием ряда факторов патогенности, свидетельствует об их возможной роли в этиологии инфекционных заболеваний человека.

Результаты исследования, освещающие биологические свойства бактерий рода Citrobacter, выделенных в монокультуре и при ассоциированных процессах внедрены в практические и лекционные курсы по микробиологии на кафедре микробиологии; Башкирского государственного медицинского университета.

Положения, выносимые на защиту:

1. Факторами вирулентности бактерий рода Citrobacter ь выделенных при острых кишечных инфекциях являются термолабильные и термостабильные энтеротоксины.

2. Штаммы бактерий рода Citrobacter, изолированные в микст-инфекциях, чаще в сравнении с монокультурами обладают ДНК-азной, лецитиназной и гемолитическими активностями и проявляют четко выраженные персистентные свойства.

3. У бактерий рода Citrobacter генетической детерминантой, контролирующей адгезивность являются гены, входящие в состав хромосомы бактериальной клетки, а-гемолизина - плазмида массой 120

МД, термолабильной энтеротоксигенности - плазмида массой 60 МД. Апробация работы. Материалы работы представлялись во Всероссийских научных конференциях: «Клинические перспективы в инфектологии» Санкт-Петербург 2001г., «Достижения отечественной эпидемиологии в XX веке, взгляд в будущее» Санкт-Петербург, 2001г., «Актуальные аспекты природноочаговых болезней» г.Омск, 2001г., III Всероссийской конференции Российской Академии Естествознания «Гомеостаз и инфекционный процесс» г.Догомыс, 2002 г., «III Геллеровские чтения, посвященные памяти профессора Л.И. Геллера» г.Хабаровск, 2002 г., на IV Российской научной конференции «Персистенция микроорганизмов» г.Оренбург, 2003 г., на научных конференциях Башкирского государственного медицинского университета (2000-2003 г.г.)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 10 глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы и приложения. Работа изложена на 122 страницах машинописного текста, содержит 6 таблиц и 18 рисунков. Список литературы включает 207 источников (65 отечественных и 142 зарубежных авторов).

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Азнабаев, Гумер Калимуллович

ВЫВОДЫ

1. Клинические штаммы бактерий рода Citrobacter, выделенные в виде монокультуры и в ассоциации при бактериальных: инфекционных процессах, изолированы от больных, страдающих гнойно-воспалительными, желудочно-кишечными и урологическими инфекционными заболеваниями. Культуры Citrobacter,. выделенные при микст-инфекциях выделялись в ассоциации с E.coli, Staphylococcus spp., Pseudomonas aeruginosa, Proteus spp., Enterobacter spp. Бактерии рода Citrobacter, изолированные в монокультуре, преимущественно выделялись при острых кишечных заболеваниях.

2. Колонии бактерий рода Citrobacter, выделенные в ассоциации, морфологически характеризовались определенной формой, рисунком, макро-и микроструктурой бактериальных колоний, демонстрируя способность к клеточной дифференцировке и многоклеточной организации. В концентрических зонах колоний микробы преимущественно представлены клетками, образующими швермеры, с избыточным количеством жгутиков и не способны к делению.

3. Бактерии рода Citrobacter, выделенные в микст-инфекциях обладают способностью синтезировать высокоактивный термолабильный и термостабильный энтеротоксины, а-гемолизин, энтеро- и тиолактивируемый гемолизины, ферменты агрессии и способны к адгезии, что подтверждало их этиологическую значимость при инфекционных процессах различной локализации. Штаммы Citrobacter,, выделенные в монокультуре, реже обладают свойствами.

4. У бактерий рода Citrobacter, выделенных при ассоциированных бактериальных инфекциях, фенотипически более стабильно выражены такие персистентные свойства, как антилизоцимная и антиинтерцидная активности, в отличие от монокультур.

5. У бактерий рода Citrobacter в ассоциации с другими микроорганизмами более четко выражены их ауксотрофные свойства (потребность в лейцине, витамине Вз (никотиновая кислота) и B]2) по сравнению с монокультурами, что определяет один из возможных механизмов формирования микробиоценоза.

6. Выявлена прямая корреляционная связь между классическими биологическими методами определения вирулентности Citrobacter и протистоцидным тестом, что позволяет рекомендовать его для выявления потенциально патогенных клинических изолятов Citrobacter.

7. У бактерий рода Citrobacter , выделенных при различных инфекциях определены генетические детерминанты, контролирующие: адгезивность -гены, входящие в состав хромосомной ДНК бактериальной клетки, а-гемолизин — плазмида массой 120 МД, термолабильную энтеротоксигенность - плазмида массой 60 МД.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Увеличение удельного веса условно-патогенных микроорганизмов в этиологии инфекционных заболеваний человека привело к интенсификации исследований, направленных на изучение биологических их свойств. Это закономерно продиктовано тем, что указанная патология характеризуется выраженным клиническим полиморфизмом, связанной с одновременным воздействием нескольких этиологических агентов, каждый из которых может иметь в своем арсенале комплекс факторов патогенности. К тому же интерпретацию результатов при этих инфекционных процессах затрудняет высокая частота выявления условно-патогенных микроорганизмов в составе микст-культуры, каждая из которых может обладать рядом несущественных в отдельности свойств, сочетание которых может определять в целом их высокий патогенный потенциал.

В качестве соответствующей модели рассматриваются бактерии рода Citrobacter, поскольку темпы изменений их свойств, сопровождающиеся постоянным возрастанием роли этих микроорганизмов в патологии человека, весьма значительны.

Исследования проводились с клиническими штаммами бактерий рода Citrobacter, выделенными в виде монокультуры (32 культуры) и при ассоциации (45 штаммов) с другими микроорганизмами-возбудителями инфекционных процессах, изолированными от больных, страдающими гнойно-воспалительными, желудочно-кишечными и урологическими заболеваниями. Штаммы цитробактер, выделенные при микст-культуре были ассоциированы совместно е E.coli - 13 случаев, со Staphylococcus spp.- 9, Pseudomonas aeruginosa — 7, Proteus spp - 6, Enterobacter spp. — 5 и с другими штаммами-5. Citrobacter, выделенные в монокультуре в основном изолировались при острых кишечных заболеваниях, лишь в 4-х случаях - при гнойно-воспалительном процессе.

В качестве эталонных тест - культур использовали штаммы С.diversus №244,255, С. freundii №256, депонированные в ГИСК им JI.A. Тарасевича, а также музейные культуры С. freundii №1489 и С. diversus №946, любезно предоставленные нам профессором В.М. Бондаренко (НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалея).

Культуральные свойства бактерий рода Citrobacter, выделенных при микст и монокультуре в принципе были типичными и не отличались друг от друга: на жидких питательных средах через 2 суток бактерии рода Citrobacter давали помутнение с образованием слабого осадка на дне пробирки, а также нежной пленки на поверхности среды. Бактериоскопия в раздавленной и висячей каплях показала, что клетки обладают поступательными и маятникообразными движениями вне зависимости от источника выделения. Электронно-микроскопические исследования бактериальных колоний и культур бактерий рода Citrobacter демонстрируют способность к клеточной дифференцировке и многоклеточной организации. Колонии бактерий рода Citrobacter как бы сложены из нескольких различных "тканей"- клеточных кластеров. В качестве типичных кластеров рассматриваются: 1) активно делящиеся; 2) покоящиеся; 3) спонтанно аутолизирующиеся клетки. Имеется как вертикальная слоистость колонии, так и наличие в ней горизонтально разделённых зон (секторных и концентрических). Так и в колониях Citrobacter обнаружены три слоя: 1) нижний окрашенный; 2) средний, в основном светлый, по-видимому, сложенный из нежизнеспособных клеток (часто неправильной формы) 3) верхний окрашенный, в котором хорошо заметна дальнейшая дифференциация на два слоя - более нижний тонкийf (толщиной 1-3 клеточных слоя), с чёткой границей и особенно ярко окрашенный и толстый слой, содержащий отдельные неокрашенные клетки. Эти данные свидетельствуют о том, что у бактерий рода Citrobacter имеются определенные сходства с ранее изученными бактериальными колониями УПЭ [30, 94, 176].

Помимо вертикальной слоистости, колониям микроорганизмов на плотных средах свойственны также секторные и концентрические зоны.

Сектора соответствуют генетически различающимся клонам, что находит своё отражение в их различной консистенции, форме, скорости роста, активности ферментов и др. При получении изогенной пары Citrobacter длительное культивирование штаммов в неблагоприятных: условия, содержащих 2-5% Sds, способствовало переходу S-форм колоний в R-формы. Фазовые диссоцианты обусловливают различие в архитектонике секторов колоний. Что касается R-варианта, то в соответствующем секторе клетки нижних слоёв располагаются перпендикулярно или под углом к питательной среде, клетки верхних слоёв - радиально и параллельно к поверхности агара.

Концентрические зоны отражают стадии "онтогенеза" бактериальных клеток - они соответствуют различным этапам программы индивидуального развития клеток. Отмечено, что при выращивании бактерий на богатых питательных средах популяции обычно относительно однородны по формам и размерам, имеются в колониях лишь возрастные различия:, непосредственно перед делением; клетки имеют большие размеры, чем только что поделившиеся - дочерние. Клетки, выращенные на бедных полусинтетических средах, обладали выраженным полиморфизмом.

Если концентрическая зональность колонии сочетается с секторной, то у более быстрорастущих секторов; концентрические кольца оттянуты к краю, формирующие кольца, которые регулируются не в пространстве (путем взаимодействия соседних клеток), а во времени (пульсации "биологических часов"). Последние наиболее очевидно для видов бактерий < Proteus spp., Serratia spp. и Salmonella spp., для E. coli, периодически формирующих швермеры [94] - клетки с избыточным количеством жгутиков и не способные к делению. Изучение ультраструктуры штаммов показало, что среднее число жгутиков колебалось от 8 до 60-70. При этом надо отметить, что на количество жгутиков определенное влияние оказывали используемые в приготовлении препарата вещества: так, при обработке препаратов раствором уранилацетата наблюдали большую ломкость жгутиков, что соответственно резко уменьшало их количество, и жгутики часто располагались в межклеточном пространстве отдельно от поверхности бактерий.

Полученные данные о зависимости ритма "биологических часов" от плотности клеточной популяции, в частности, о связи между плотностью инокулята и продолжительностью лаг-фазы перед появлением первой "волны" швермеров, указывают на наличие сложной системы "внутриколониальной коммуникации". По мере развития! колонии; имеется тенденция ко всё большей синхронизации поведения отдельных клеток со всё более совершенной циркулярной симметрией колонии в целом, вопреки возмущающим факторам.

Подобно эукариотическим клеткам в составе тканей многоклеточного животного, растительного или грибного организма, прокариоты формируют внутриколониальные межклеточные контакты, вероятно, способствующие распространению сигнальных молекул в популяции, особенно если речь идёт о недиффундирующих в среде факторах "коммуникации" и особенно в микробных ассоциациях.

На электронограммах отпечатков колоний Citrobacter spp. выделяются, вне зависимости от источника (микст- или моноинфекция), между клетками преимущественно существуют контакты двух типов. Межклеточные контакты формируются за счёт многообразных поверхностных структур, включая микрофибриллы, шишковидные выступы, инвагинаты клеточной стенки, гликокаликс, отражая "генетически детерминированную закономерность развития микробных популяций как саморегулирующихся многоклеточных систем" [144]. К первому относится плотное слипание клеток между собой. В зоне плотного слипания бактериальных клеток границы: наружных мембран клеточных стенок трудно различимы. Через липидные слои их мембран видимо проходят соприкасающиеся белковые структуры, часто называемые "Байеровскими зонами". По предположению некоторых исследователей [76], в результате соединения двух таких белковых структур образуется непрерывный водный канал, связывающий цитозоли двух взаимодействующих клеток.

Отмечено наличие в колониях также системы воздухоносных микрополостей, часто пересечённых "балками" из клеточных тяжей. Сложная система микрополостей фактически превращает колонии в совокупность частично изолированных друг от друга очагов сгущения (микроколоний). Микроколонии, сформированные слизистым матриксом и разделённые открытыми (часто заполняемыми водой) каналами, характерны также и для внутренней структуры биоплёнок.

Таким образом, по морфологии бактерии рода Citrobacter вне зависимости от источника выделения представляют собой палочки размерами длиной 1,5-4,0 мкм и шириной 0,5-0,7 мкм, окружены перитрихиально расположенными жгутиками. Изолированные колонии имеют четкую структурированность, состоящую из дифференцированных клеток Citrobacter, контактирующих между собой и имеющих свои четко сформированные "биокоммуникации".

Серологический пейзаж выделенных культур Citrobacter характеризовался тем, что чаще встречались штаммы, относящиеся серогруппе 022 (12 шт.), ЗаЗвЗс (8 шт.), по 3 штамма к серогруппам 1а1в1с; 2а1в; 4а4в; 8а8в; 7а7вЗв1с; 21а21в; по 2 - 64в5в; 8а1с; 8а8с; по одному штамма - 12а12в; 7а7сЗв1с; 15; 16; 24; 7; 2; 32; 33; 37а37в37с; 38; 30; 28 1с; 10а9в; 17; 12а12с; 19; 20; 41; 40а40в; 35; 42 Культуры, относящиеся к 22 серогруппе, выделялись при патологии желудочно-кишечного тракта и гнойно-воспалительных процессах ЗаЗвЗс - от больных урологического профиля в основном в составе микст-инфекций. Это указывает на эпидемиологическую значимость указанных серогрупп в развитии инфекционной патологии человека различной локализации. 022 серогруппа является маркером ассоциации Citrobacter при смешанных бактериальных нфекциях.

Как известно, организм хозяина — это среда, в которой бактерии осуществляют свои обменные процессы. Рост и размножение бактерий могут быть подавлены не только действием разнообразных защитных механизмов макроорганизма, но и определенными биохимическими факторами, которые подавляют или задерживают его существование в условиях живого организма. К таким факторам можно отнести; дефицит некоторых метаболитов, которые необходимы микроорганизмам для нормальной жизнедеятельности. К тому же потребность определенных веществ для роста и размножения может быть видовым или родовым признаком. Частое обнаружение микроорганизмов в ассоциации может быть обусловлено именно ауксотрофностью тех и других, которые могут сосуществовать в биотопах человека только совместно. В этой связи, проведенные нами исследования, характеризовалось тем, что из 77 клинических штаммов Citrobacter 41 оказались прототрофами, а 36 ауксотрофами. Из ауксотрофов 32 штаммов были выделены со смешанной микрофлорой и лишь 4 штамма -в монокультуре. Выявление ауксотрофности бактериальных клеток к тем или иным субстратам показало, что штаммы проявляли не к одной определенной аминокислоте или витамину, а к нескольким. Причем, добавление в минимальную среду необходимой для роста аминокислоты или витамина проявлялось в виде роста ауксотрофов.

Нужно отметить, что все ауксотрофные штаммы Citrobacter нуждались в лейцине, большая потребность отмечалась в витамине В5 (никотиновая кислота) 91,6% и В,2 - 66,7%.

Большинство ауксотрофных штаммов Citrobacter были выделены при смешанных бактериальных инфекциях. Указанный признак, на наш взгляд, определяет существование бактериальных клеток; в эпитопах человека, именно в ассоциации с другими микроорганизмами, продукты жизнедеятельности которых являются взаимозаменяемым, субстратом необходимым для жизнедеятельности ауксотрофов.

Взаимодействие микробных клеток с клеткой хозяина осуществляется благодаря: их адгезивной способностью, поскольку адгезивность является одним из ведущих факторов, реализующих патогенность микроба, на начальном этапе развития инфекционного процесса. Известно, что рецепторы эпителиальных клеток, принимающих участие в адгезии, аналогичны структурам, которые определяют группу крови и поэтому метод гемагглютинации с использованием эритроцитов различных видов птиц и животных широко используется для предварительного выявления возможных адгезинов у бактерий.

Для поиска клеток-мишеней для выявления адгезинов использовали эритроциты I-IV группы крови человека, быка, барана, собаки, кролика, гуся, утки и цыпленка.

Постановку реакции гемагглютинации проводили на предметном стекле в модификации проф. З.Г.Габидуллина (Авт.свид. №1312098 от 22.01.87) с использованием суспензии эритроцитов и 24-часовыми культурами Citrobacter, выращенными на дрожжевом мясо-пептонном агаре. Штаммы Citrobacter spp. с эритроцитами I-IV группы крови человека, быка, барана, собаки, кролика не давали агглютинацию, а реагировали только с эритроцитами птиц. Это указывает на то, что для выявления адгезинов бактерий рода Citrobacter больше подходит эритроциты цыпленка, поскольку больше штаммов способны проявить адгезивность, которые легко можно обнаружить в реакции гемагглютинации. Сравнительная характеристика культур бактерий рода Citrobacter, выделенных при микст- и монокультуре показывает, что большей адгезивностью к эритроцитам птиц обладают штаммы, выделенные при микст-инфекциях. Количественная оценка адгезивности показала, что из всех изученных культур 7 штаммов проявляли высокий уровень среднего показателя адгезии, 13 — средней, 14 и 41, слабой и отрицательной активности, соответственно.

Все штаммы, имеющие высокое СПА в реакции гемагглютинации с эритроцитами цыпленка давали положительную Д-маннозорезистентную реакцию гемагглютинации и были выделены при острой кишечной инфекции.

Электронно-микроскопическое исследования бактериальных клеток, обладающих и не обладающих свойством вызывать, Д-маннозочувствительную и Д-маннозорезистентную реакции гемагглютинации показали, что бактериальные клетки штаммов, способных вызывать реакцию гемагглютинации с эритроцитами птиц, по периметру имели реснички длиной 110 - 420 нм и шириной 5,0 - 5,4 нм, тогда как большинство клеток не способных давать РГА не имели их.

Для осуществления патогенного действия микробная клетка после адгезии, должна обладать способностью секретировать вещества, способствующие клиническому проявлению инфекционного заболевания. К. одним из таких веществ относятся гемолизины, наличие которых может быть использовано в качестве показателя потенциальной цитотоксичности, выделенных условно-патогенных энтеробактерий. Функционально определяют несколько групп гемолизинов, среди которых у энтеробактерий превалирует а-гемолизин, тиолзависимый гемолизин и, в определенной степени, можно выделить энтерогемолизин. Среди штаммов, выделенных в виде монокультуры при инфекциях, такой активностью обладали из совокупности, всего лишь два штамма и их активность была слабой. Штаммы, изолированные при микст-инфекционных процессах различной локализации, обладали гемолитической активностью, из них 12 штаммов; Citrobacter, 8 из них проявляли высокую гемолитическую активность, 4 -среднюю. Корреляция между способностью культур продуцировать а-гемолизин и вирулентностью in vivo в опытах интраназального заражения белых мышей и на модели инфузорий туфелек выявила, что из 12 штаммов 7 проявляли высокую вирулентность, 3 - среднюю. При этом а-гемолитические штаммы Citrobacter в опытах на лигированной петле тонкого кишечника кролика не вызывали дилатацию кишечника. Среди штаммов, обладающих а-гемолитической активностью, по серологическим свойствам 4 принадлежали к 7а7вЗв1с серогруппе, 3 - к 7а7сЗв1с, 2 - к 12а12в и 1 - к ЗаЗвЗс серогруппе. По питательным потребностям все оказались прототрофами, за исключением штамма №800 C.amalonaticus, который нуждался для роста в лейцине, метионине, витаминах В5, Вб, В9, Bi2. Указанное логично отражают тот факт, что эти штаммы обладают патогенностью и фактором их вирулентности является а-гемолизин.

Ряд авторов выделяют отличающиеся от а-гемолизина, тиолзависимый гемолизин, вызывающий гемолиз только эритроцитов кролика при наличии в среде цистеина, который в той или иной степени обуславливает патогенный потенциал возбудителя [68, 147].

Исследование способности клинических штаммов Citrobacter синтезировать тиолзависимый гемолизин показало, что такой активностью из штаммов, изолированных при ассоциации обладали 7 культур Citrobacter, а из штаммов, выделенных в монокультуре - 3. Тестирование показало, что штаммов из первой группы были вирулентными в опытах интраназального заражения белых мышей, из них 2 обладали высокой вирулентностью, 3 -средней, 2 - слабой. Штаммы из второй группы вирулентностью в тестировании in vivo проявляли себя слабо (Р<0,05).

Учитывая важную роль гемолизинов в патогенезе бактериальных инфекций, в последние годы появились сообщения, подтверждающие существование других гемолизинов, обуславливающих развитие ■ диарейных инфекций. Так Beutin I. et al. [102] наличие такого гемолизина у энтеропатогенных кишечных палочек, назвали энтерогемолизином, хотя в литературе применение такой терминологии пока не нашло широкого распространения. В наших исследованиях отмечено, что 13 культур обладали энтерогемолитической активностью, которые были выделены при кишечных инфекциях.

Анализ корреляции гемолитической активности и вирулентности показывает, что наиболее вирулентными при интраназальном заражении белых мышей, а также протистоцидном тесте, являются штаммы, обладающие одновременно способностью продуцировать а-гемолизин и энтерогемолизин.

Результаты данного раздела исследований показали, что клинические штаммы Citrobacter, выделенные при микст-инфекциях, чаще проявляли способность продуцировать а-гемолизин, синтезировать тиолзависимый и. энтерогемолизин, каждый из которых играет непосредственную роль в развитии инфекционного процесса различной локализации, тогда как у штаммов, выделенных при моно-инфекциях эти признаки проявлялись в меньшей степени (Р<0,05).

Известно, что некоторые представители семейства Enterobacteriaceae, выделенные от больных с дисбактериозом, в сравнении с культурами, изолированными от здоровых людей, характеризуются наличием ДНК-азной активности [152], хотя механизм патогенного действия ДНКазы бактерий остается: еще до конца нерасшифрованным. Известно, что понижение вязкости окружающей среды, благоприятное для развития микроорганизма в тканях, осуществляется ферментом, деполимеризующим дезоксирибонуклеиновую кислоту, выделяющуюся; в среду при: некрозе и гибели лейкоцитов в месте инфекции [12]. В доступной нам литературе мы не нашли данных, касающихся ДНК-азной активности бактерий рода Citrobacter.

Полученные результаты свидетельствуют о наличии ДНКазной активности клинических штаммов Citrobacter. ДНКазой обладали штаммы, изолированные при смешанных бактериальных инфекциях. Культуры Citrobacter; выделенные при смешанных бактериальных инфекциях характеризовались различной степени ДНКазной активности, причём превалировали клетки, обладающие высокой активностью. Возможно, указанный признак необходим штамму именно для сосуществования в составе микст-культуры, которые дают им возможность выживать в экологических микробиоценозах и "отстаивать" свои права на существование.

Корреляционная зависимость активности культур, обладающих ДНКазной активностью и вирулентностью, в опытах интраназального заражения и на модели инфузорий туфелек показала, что из 21 ДНК-аза активных штаммов 1 группы вирулентностью обладали лишь 2 штаммов и то эти штаммы характеризовались наличием слабой а-гемолитической активности. Из этих культур по серологическим; свойствам 3 принадлежали к 22 серогруппе, 2 - к 4а4в, и по одной к 1а1в1с и 8а8с серогруппам.

Из 15 штаммов, обладающих высокой ДНК-азной активностью 11 штаммов Citrobacter были выделены при кишечных инфекциях (9 случаев дисбактериоза кишечника) и 2 штамма при гнойно-воспалительных процессах.

Серологический пейзаж ДНК-аза активных штаммов Citrobacter, выделенных при кишечных инфекциях и гнойно-воспалительных процессах, характеризовались преобладанием 022, 4а4в, 1а1в1с и 8а8с серогрупп.

Лецитиназная активность, наряду с гемолитическими и протеолитическими активностями микроорганизмов, относится к малым факторам патогенности, в связи, с чем является важным показателем вирулентности, высеваемых клинических штаммов условно-патогенных энтеробактерий. Указанный признак выражался у 55 клинических штаммов Citrobacter. Среди всех штаммов Citrobacter, обладающих лецитиназной активностью, слабая вирулентность была выражена у 3 штаммов, из которых 2 обладали высокой лецитиназной активностью, 1 - слабой. Кроме того, имелись штаммы, одновременно проявляющие лецитиназную активность. и продуцировали тиолзависимый гемолизин.

Характерная для смешанных бактериальных культур лецитиназная активность может являться для штамма свойством: для защиты от других составляющих микробиоценозов. Синтез клиническими культурами лецитиназы, наряду с другими факторами патогенности, может быть признаком, характеризующим маркер существования в микробиоценозе циркулирующих штаммов Citrobacter.

В целях сохранения возбудителя, находящегося в организме хозяина, от бактерицидных факторов сыворотки или фагоцитов микробная клетка располагает средствами дистанционного действия, которые представляют собой многочисленную группу секретируемых бактериальных субстанций, направленных на инактивацию механизмов иммунного ответа организма. Среди специализированных и наиболее изученных у множества представителей микроорганизмов впервые открытой и детально изученной школой академика Бухарина; О.В. в этом отношении, является антилизоцимный фактор, который направлен на инактивацию тканевого лизоцима и лизоцима фагоцитов, обеспечивая выживание возбудителя в макрофагах [10]. Дальнейшие исследования изучения персистентных свойств микроорганизма позволили им выделять антиинтерцидные и антикомплементарные факторы бактерий, которые соответственно обладают инактивирующей активностью против катионных белков лейкоцитов и комплемента организма хозяина [13].

Собственные результаты показали, что антилизоцимной активностью (АЛА) обладали 35 штаммов (87,5%) из 1 группы и 9 штаммов (25,7%) из 2. группы. Среди штаммов Citrobacter, выделенных при ассоциированных бактериальных инфекциях, характеризующихся наличием АЛА, большинство (75,9%) проявляли высокую инактивирующую способность. У штаммов Citrobacter, являющимися этиологическим фактором в виде монокультуры, антилизоцимный фактор выражался в меньшей степени и инактивирующая её активность также была низкой.

К факторам, обеспечивающим персистирование микробной клетки в организме хозяина, относится "антиинтерцидный" (APIA) признак, характеризующий способность, бактерий инактивировать лейкоцитарный катионный белок [10]. АИА бактерий выявлена у многих микроорганизмов, частота выявления этого признака бактерий находилась в тесной зависимости от источника выделения и мало коррелировала с их видовой принадлежностью.

Наши результаты исследований показали, что данный признак фенотипически ярче проявлялся в клинических штаммах Citrobacter, выделенных при микст-инфекциях, тогда как при монокультуре признак выражался слабо. Титрование лейкоцитарного интерферона в среде для определения антиинтерацидной активности характеризовалось тем, что 11 штаммов из первой группы могли инактивировать "катионные белки лейкоцитарного интерферона" в концентрации 10 ЕД., 7 штаммов в концентрации 5 ЕД., 1 - в 1 ЕД. Тогда как, штаммы второй группы могли инактивировать только в малой концентрации интерферона.

Среди исследованных штаммов Citrobacter, 8 одновременно обладали как антилизоцимной, так и антиинтерцидной активностью, эти штаммы были выделены при смешанных бактериальных инфекциях.

Таким образом, факторы персистенции были выражены и фенотипически закреплены штаммам, изолированным в составе смешанных бактериальных культур и не зависели от видовой принадлежности штамма, от серотипа бактерий рода Citrobacter.

Вирулентность условно-патогенных энтеробактерий тесным > образом связана со способностью бактерий продуцировать токсин и токсические вещества. Выделяют отдельную группу энтеротоксинов - термолабильных и термостабильных, а также выделяют'шига-подобного токсина, продукция которых УПЭ определенным образом обусловливает развитие диарейного симптомокомплекса. Исследования, направленные на выявление способности Citrobacter вырабатывать энтеротоксины, немногочисленны и весьма противоречивы, особенно когда культуры выделяются в ассоциации с другими бактериями. Биологические методы, лежащие в основе тестирования токсигенности и патогенности клинических штаммов, имеют ряд недостатков, связанных с необходимостью наличия лабораторных животных, трудоемкостью, но, однако наиболее полно отражают этиологическую значимость, выделенных культур. Поскольку бактерии рода Citrobacter относятся к условно-патогенным, то в каждом случае при их выделении из биологического материала необходимо их тестировать на токсигенность и вирулентность, наличие которых позволяет определить их причастность в этиологии инфекционного процесса человека. Проведенные нами исследования по обнаружению токсических субстанций в супернатанте бульонных культур Citrobacter, выделенных при микст- и моноинфекциях, с использованием широко применяемой легочной модели, протистоцидного теста и модели «отека лапки» на беспородных белых мышах показали, что на «легочной модели» из всех исследованных штаммов 2 группы 9 штаммов (28,8%) проявляли вирулентность слабой степени, а остальные 23 штаммов были авирулентными в легочной модели.

Штаммы, выделенные в микст-инфекциях проявляли также вирулентность в легочной модели. Из 45 штаммов — 21 (48,5%) проявляли вирулентность, причём из них 2 оказались высоковирулентными, 6 -средневирулентными и 9 проявляли слабую вирулентность. Проведенные исследования по высеваемости и количественной оценке штаммов бактерий рода Citrobacter в легочной ткани через 5-7 часов после заражения вирулентные качества штаммов подтверждены фактом увеличения числа патогенных штаммов в 40-50 раз с момента заражения.

Штаммы, проявляющие вирулентные свойства на легочной модели в качестве фактора патогенности, были способны синтезировать термолабильные и термостабильные энтеротоксины, в связи с чем мы эти штаммы исследовали на токсигенность, используя «плантарный» тест на белых мышах и на мышах-сосунках. Результаты исследований показали, что все штаммы,, проявляющие высокую вирулентность, были способными синтезировать высокоактивный термолабильный энтеротоксин, который характеризовался разницей между интактной и опытной лапкой более 120 мг. Из средневирулентных штаммов 5 культур Citrobacter были положительными в плантарном тесте, двое вызывали дилатацию кишечника у мышей-сосунков. Из слабовирулентных штаммов Citrobacter 3 вызывали отек кишечника в мышах-сосунках, 4 синтезировали а-гемолизин.

Бактерии группы кишечной палочки преимущественно вызывают заболевания желудочно-кишечного тракта, и для их тестирования in vivo в этом отношении является воспроизведение экспериментальной инфекции применением модели «лигированной петли тонкого кишечника» кролика.

В результате проведенных опытов было обнаружено, что при введении кроликам взвеси агаровых культур Citrobacter, выделенных в смешанных бактериальных инфекциях, в целом наблюдалась однотипная картина, видимых морфологических изменений кишечника не наблюдалось.

Штаммы Citrobacter, выделенные в. моно- и микст-инфекциях, обладающие способностью продуцировать термолабильные и термостабильные энтеротоксины, обусловливали образование серозного экссудата в просвете тонкой кишки, что характеризовалось значениями отношения объема жидкости к длине лигированного сегмента (V/L) от 1,2 до 1,7. > Штаммы, продуцирующие энтерогемолизин, также обусловливали образование и накопление экссудата, но экссудат носил серозно-геморрагический характер.

Таким образом, патоморфологическая картина поражения кишечника в известной степени дифференцировалась в зависимости от наиболее выраженных фенотипических свойств, наличие которых коррелирует с патогенностью бактерий Citrobacter, выделенных штаммов в микст-инфекции.

Полученные результаты свидетельствовали о способности клинических штаммов Citrobacter синтезировать токсические вещества, обусловливающие развитие "отека лапки" у белых мышей, что совпадало с их вирулентностью, в связи; с чем плантарный тест может быть использован в качестве биологической модели для выявления LT-энтеротоксигенности: бактерий рода Citrobacter. выделенных в виде микст- и моноинфекции.

Создание биологической модели с лабораторными животными для тестирования вирулентности и токсигенности микроорганизмов имеет ряд недостатков. Это связано с дороговизной экспериментальных животных и не всегда выполнимы в обычных условиях. Метод, предложенный для выявления степени патогенности дизентерийных палочек, на модели инфузорий туфелек вполне применимо и для выявления вирулентности УПЭ. Это прежде всего связано с тем, что инфузории относятся к эукариотическим клеткам и могут быть чувствительны к действию токсических субстанций бактериальных клеток. В связи с этим мы изучили на модели инфузорий туфелек токсические свойства клинических штаммов Citrobacter.

Библиография Диссертация по биологии, , Азнабаев, Гумер Калимуллович, Москва

1. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологии / И.П. Ашмарин,

2. A.А. Воробьев. Л.: Медицина, - 1962. - 179 с.

3. Бабский В.Г. Явление самоорганизации у бактерий на клеточном и популяционном уровнях / В.Г. Бабский // Нелинейные волны. Динамика и эволюция. 1989. - С.299-303.

4. Балабанов М.В. Влияние фосфадена и унитиола на циклазную систему слизистой тонкой кишки кролика на экспериментальном сальмонеллезе / М.В. Балабанов, В.И. Мелихов, В.А. Юркиев // Журн. Микробиол. -1988. -№3. С.82-85.

5. Баланин Н.В. Энтеротоксигенность и нейраминидазная активность бактерий рода Citrobacter / Н.В. Баланин, Н.М. Юдицкая, И.В. Петер // Журн. Микробиол. -1984. №8. - С.32-34.

6. Бернасовская В.К. Условно-патогенные микроорганизмы и их этиологическое значение при острых кишечных инфекциях /

7. B.К. Бернасовская, Ю.А. Барштейн // Острые кишечные инфекции, вызванные условно-патогенными микроорганизмами. Киев, 1984. - С.5-39.

8. Бисенова Н.М. Сочетанная продукция энтеротоксинов и MR-адгезинов штаммами цитробактер / Н.М. Бисенова, Ш.И. Сарбасова // Матер. V объед. съезда гиген. эпидемиол. микробиол. паразитол. и инфекц. Казахстана. 1991. - Т. 5. - С.19-21.

9. Бисенова Н.М. Энтеротоксигенная активность цитробактер различного происхождения / Н.М. Бисенова // Матер. V объед. съезда гиген. эпидемиол. микробиол. паразитол. и инфекц. Казахстана. 1991. -Т.5. - С. 17-19.

10. Бондаренко В.М. Влияние генетических плазмид на развитие "бьющего" эффекта у энтеробактерий разных видов / В.М. Бондаренко, А.В. Голубев, И.В.Корягина // Журн. Микробиол.- 1983.- №9.- С.50-53.

11. Брилис В.И. Методика определения адгезивного процесса микроорганизмов / В.И. Брилис, Т.А. Брилене, Х.П. Ленцер, А.А. Ленцер // Лаб. Дело. 1986. -№4. - С.210-212.

12. Ю.Бухарин О.В, Антилизоцимный тест как маркер персистенции микроорганизмов / О.В. Бухарин, Б .Я. Усвяцов // Теоретическая и прикладная иммунология: Тез. докл. 1 всесоюзн. конф. -М., 1982. С.58-34.

13. И.Бухарин О.В. Бактерионосительство / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов. -Екатеринбург, 1996. С.78-89.

14. Бухарин О.В. Биология патогенных кокков / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, О.Л.Карташова М.: Медицина, Екатеринбург: Уро РАН. -2002. -281 с.

15. З.Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин. М., 1999.-206 с.

16. Н.Вертиев Ю.В. Бактериальные токсина и биотехнология / Ю.В. Вертиев // Микробиологические аспекты иммунобиотехнологии: Сб.трудов. -М., 1992. -С.24-32.

17. Войно-Ясенецкая М.К. Опыт изучения дизентерейной инфекции у лабораторных животных / М.К. Войно-Ясенецкая // Журн. Микробиол. -1957. №4. - С.65-69.

18. Габидуллин З.Г. Биологическая характеристика штаммов Proteus, выделенных при инфекционных процессах различной локализации: Автореф. дис. д-ра. мед. наук. -Саратов, 1990. -46 с.

19. Габрилович И.М. Тиолактивируемые гемолизины как фактор бактерий родов цитробактер и серраций / И.М. Габрилович, Р.Х. Гайрабеков, М.А.

20. Шеожев, О.С. Якушенко // Персистенция бактерий. Куйбышев. -1994. -С.67-71.

21. Годзе Г.М. Серологическая характеристика бактерий рода цитробактер / Г.М. Годзе, Г.М. Чупрун // Острые кишечные инфекции. -Л., 1978. №2. -С.109-112.

22. Гордейко В.А. Потенциально патогенные бактерии в природе. /В.А. Гордейко. М., 1991. - С.75-86.

23. Дали М.В. Белковые токсины микробов / М.В. Дали, Н.Г. Фиш. М., 1980. -С. 170-180.

24. Дж. Миллер. Эксперименты в молекулярной генетике / Дж. Миллер. М.: Мир, 1976.-325с.

25. Домбровский A.M. Особенности представленных микроорганизмами семейства Enterobacteriaceae, ассоциаций, выделенных из испражнений здоровых и больных сальмонеллезом детей / A.M. Домбровский, А.В. Бодрягина // Журн. Микробиол. 1986. - №12. - С.38-43.

26. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул / Ю.В. Езепчук. М.: Медицина, 1985.-145 с.

27. Иерусалимский И. Д. Физиология развития чистых бактериальных культур: Автореф. дис. . д-ра. биол. наук. М., 1952. 38 с.

28. К вопросу о роли бактерий рода Citrobacter в этиологии острых кишечных заболеваний / О.Н. Костюковская, Е.А. Гладкая, В.Т. Бунин и др. // Кишечные инфекции. -Киев, 1981. -№13. -С.74-77.

29. Кочорбаев Т.К. Изучение этиологического значения условно-патогенных микроорганизмов при остром аппендиците / Т.К. Кочорбаев,

30. Т. А. Абдыкеримова // Проблемы клинической микробиологии в неинфекционной клинике. -Винница, 1983. С.60-61.

31. Кузнецов О.Ю. Структурно-функциональная организация колонии Shigella flexneri Rd / О.Ю.Кузнецов // Электронная микроскопия для исследования функциональных изменений структуры клетки при различных воздействиях. М., 1988. - С.89-92.

32. Литвинова Е.И. Контаминация микроорганизмами растворов дезинфектантов и антисептиков / Е.Н.Литвинова // Актуальные проблемы нозокомиальных инфекций и лекарственной устойчивости микроорганизмов. -Минск, 1986. С. 151-152.

33. Лыйв Х.Д. О лабораторной диагностики инфекционной диареи у грудных детей: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -Ташкент, 1973. 26 с.

34. Мавзютов А.Р. Молекулярно-генетические основы токсигенности условно-патогенных представителей Enterobacteriaceae: Автореф.дис. . д-ра. мед. наук. Челябинск, - 2001. - 44 с.

35. Мнацаканов С.Т. О выделении условно-патогенных энтеробактерий у детей раннего возраста / С.Т.Мнацаканов, М.Е.Когинян, Р.Г.Акопян // Журн. Микробиол. 1983. - №5. - С.106-108.

36. Некоторые данные изучения биохимической характеристики штаммов родов Citrobacter и Hafnia и их идентификация в лабораторной практике / Калашникова Г.К., Леймане З.Я., Латышева К.А. и др. // Журн. Микробиол. -1976. №4. - С. 108-112.

37. Особенности микрофлоры толстого кишечника при инфекционном эндокардите / А.А.Воробьев, Л.О.Иноземцев, Ю.В.Несвижский и др. // Журн. Микробиол. 1996. - №1. - С.70-74.

38. Отек лап белых мышей-тест для оценки активности энтеротоксинов / Ю.П. Вартанян, М.К. Северцева, О.И. Введенская, Е.С. Станиславский. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1978. -№2. -С. 150-152.

39. Петровская В.Г. Микрофлора человека и патологии / В.Г.Петровская, Марко О.П. М.: Медицина, 1976. -213 с.

40. Петровская В.Г. Общие закономерности взаимодействия в системе паразит-хозяин и проблема смешанных инфекций / В.Г.Петровская // Журн. Микробиол. 1982. - №8. - С.24-31.

41. Петрус B.C. Характеристика бактерий рода Citrobacter, выделенных у здоровых детей и детей с различными острыми кишечными заболеваниями / В.С.Петрус, Я.В.Мацюрак, А.И.Акопова // Журн. Микробиол. 1977. -№4. -С.121-125.

42. Полоцкий Ю.Е. Адгезивность, инвазивность и; энтеротоксигенность возбудителей кишечных инфекций / Ю.Е.Полоцкий, Т.А.Авдеева // Журн. Микробиол. 1981. - №5. - С.23-32.

43. Популяционно-генетические аспекты микробиологического фенотипа кишечника здорового человека / А.А.Воробьев, Ю.В.Несвижский, Е.В.Буданова, Л.О.Иноземцев // Журн. Микробиол. 1995.- №4. - С.30-35.

44. Рагинская В.Н. Антигенная структура и О-антигенные связи бактерий рода Citrobacter / В.Н.Рагинская // Журн. Микробиол. 1973. - №6. - С.78-83.

45. Рагинская В.Н. Бактерии Citrobacter diversus классификация, положение, роль в патологии / В.Н.Рагинская, А.П.Батуро, М.Б.Лифшиц // Журн. Микробиол. 1980. - №12. - С.36-39.

46. Сарбасова Ш.И Серологические и бактериологические показатели при экспериментальной кишечной цитробактер инфекции / Ш.И. Сарбасова // Матер. V объед. съезда гиген. эпидемиол. микробиол. паразитол. и инфекц. Казахстана. 1991. - Т.5. - С. 17-19.

47. Сарбасова Ш.И. Принципы лабораторной диагностики кишечной цитробактер-инфекции: Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. Алматы, -1993. 42 с.

48. Сергеев П.В. Очерки биохимической фармокологии / П.В.Сергеев, П.А.Галенко-Ярошевский, Н.Л.Шимановский / -М., 1996. 384 с.

49. Соколов В.Ю. Антиинтерфероновая активность микроорганизмов /

50. B.Ю.Соколов // Персистенция микроорганизмов. -Куйбышев, 1990. С.83-93.

51. Соколова К.Я. Методика оценки состояния микрофлоры толстой кишки с использованием ЭВМ / КЛ.Соколова, И.В.Шутова, А.Н.Коровенков // Журн. Микробиол. 1988. - №11. - С.11-16.

52. Соколова Н.А. Обнаружение патогенных свойств у почвенных азотофиксирующих энтеробактерий / Н.А.Соколова, В.А.Лаврова // Журн. Микробиол. 1991. - №12. - С.13-14.

53. Способность штаммов Citrobacter freundii, выделенных при острых кишечных инфекциях и LT-энтеротоксинобразованию / В.М.Бондаренко, М.Т.Тимофеева, С.А.Колесников и др. // Журн. Микробиол. 1986. - №12.1. C.27-29.

54. Теблоева Л.Т. Микробиологическая диагностика пиелонефрита у детей / Л.Т.Теблоева, М.В.Цванг // Проблемы клинической микробиологии в неинфекционной клинике. -М., 1983. -С.38-99.

55. Тимаков В.Д. Биологические и генетические характеристики бактерий рода Shigella / В.Д.Тимаков, В.Г.Петровская, В.М.Бондаренко. М., 1980. 210 с.

56. Тиолактивируемая гемолитическая активность и её значениие для проявления вирулентности Citrobacter freundii / О.СЛкушенко, И.А.Реднев, И.М.Габрилович, В.М.Бондаренко // Акт. вопросы изучения кишечной инфекции: Сб. науч. трудов. Нальчик, 1988. -С.52-55.

57. Туйгунов М.М. Роль энтеротоксина бактерий родаCitrobacter в исходе взаимодействия «патоген-хозяин» Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. — Челябинск, 2003 41с.

58. Характеристика штаммов родов Proteus, Klebsiella Enterobacter и Citrobacter, выделенных при уроифекциях / Петровская В.Г., Бондаренко В.М., Маринова Р. и др. // Журн. Микробиол. 1983. - №8. - С.25-31.

59. Шапиро Дж.А. Бактерии как многоклеточные организмы / Дж.А.Шапиро // В мире науки. 1988. - № 8. - С.46-54.

60. Энтеротоксигенная способность гемолизинпродуцирующих штаммов протеев, выделенных при острых кишечных, инфекциях у детей / Габидуллин З.Г., Батыршин Р.А., Жукова С.Л. и др. // Журн. Микробиол. -1990. №6. - С.49-53.

61. Якушенко О.С. Тиолзависимая геиолитическая активность и ее значение для проявления вирулентности у цитробактер: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1989.-29 с.

62. A genetic locus of enterocyte effacement conserved among diverse enterobacterial pathogens / Т.К. McDaniel, K.G. Jarvis., M.S. Donnenberg, J.B. Kaper // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1995. -Vol.92. -P.1664-8.

63. A tiol-activated hemolysin in gram-negative bacteria / J. Albesa, L.J. Barberis, M.C. Pajaro et al. // Can. J. Microbiol. -1985. -Vol.31. -P.297-300.

64. Aktories K. Rho proteins: targets for bacterial toxins / K.Aktories // Trends Microbiol. -1997. -Vol.5. -P.282-8.

65. Aldova E. Biochemicke znaky Citrobacter sedlakii / E.Aldova, J.Schindler, A.Nemec // Epidemiol. Mikrobiol. Immun. -1995. -Vol.44. -P.57-64.

66. Analysis of cases with liver abscess following transcatheter arterial chemoembolization "TAE" for malignant hepatic tumors / H.Ishikawa, T.Kanai, T. Ono et al.// Gan. To. Kagaku. Ryoho.- 1994. -Vol.21. -P.2233-6.

67. Bacteremia due to Citrobacter species: significance of primary intraabdominal infection / C.C.Shih, Y.C.Chen, S.C.Chang et al. // Clin. Infect. Dis. -1996. -Vol.23.-P.543-9.

68. Bacterial evasion of host immune defense: Yersinia enterocolitica encodes a suppressor for tumor necrosis factor alpha expression / H.U. Benseher, F. Rodel, A. Forsberg, M. Rollingholf// Infect. Immun. -1995. -Vol.63. -P.1270-77.

69. Barrow P.A. Invasion of Vero cells by Salmonella species / P.A.Barrow, M.A.Lovell // J. Med. Microbiol. -1989. -Vol.28. -P.59-67.

70. Bauer M.E. Characterization of an RTX toxin Enterohemorrahagic Escherichia coli 0157:H7 / M.E.Bauer, R.A. Welch // Infect. Immun. -1996. -Vol.64. -P. 167-75.

71. Bayer M.E. Membrane biogenesis / M.E. Bayer. N.Y., 1975. - 427 p.

72. Bergey's manual of systematic bacteriology: // Eds. N.R.Kreig, J.G.Holt. -9-th of Baltimore: Williams and Wilkins Co, 1984. -Vol.1. -P.409-588.

73. Biochemical identification of Citrobacteria in the clinical laboratory / J.M.Janda, S.L.Abbott, W.K.Cheung, D.F.Hanson // J. Clin. Microbiol. -1994.-Vol.32. -P. 1850-4.

74. Bordetella bronchiseptica dermonecrotizing toxin induces reorganization of actin stress fibers through deamidation of Gin-63 of the GTP-binding protein Rho / Y.Horiguchi, N.Inouc et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1997. -Vol.94.-P. 11623-6.

75. Carriage of Citrobacter diversus among young children in Baltimoro / J.G.Morris, B.D.Tall, K.E.Kotloff, B.Sechter// Pediatr. Infect. Disease J. -1988. -Vol.7. rP.294-6,

76. Cisneros-Garcia N. Acute gastric distension due to sepsis in a newborn infant / N.Cisneros-Garcia, I.Rodriguez-Balderrama // Bol. Med. Hosp. Infant. Мех. -1993. -V.50 -P.406-9.

77. Citrobacter diversus ventriculitis and brain abscesses in an adult / L.V.Booth, J.D.Palmer, J.Pateman, A.C. Tuck // J. Infect. -1993. -Vol.26. -P.207-9.

78. Citrobacter emphysematous pyelonephritis in a tuberculous kidney caused by citrobacter. A case report in a diabetic patient / C.Fischer, M.Kallerhoff, W.Weidner, R.H.Ringert // Ann. Urol. Paris. -1996. -Vol.30. -P. 108-11.

79. Citrobacter infections in humans: expression at the Seattle Veterans. Administration Medical Center and a review of the literature / B.A.Lipsky, E.W.Hook, A.A.Smith, J.J.Plorole // Rev. Infect. Diseases. -1980. -Vol.2. -P.746-60.

80. Citrobacter pericarditis secondary to a subphrenic abscess / R.Wesley-Farr, R.A.Khakoo, L.P.Maxwell, R.C.Hill // Clin. Infect. Dis. -1994: -Vol.18. -P.838-9.

81. Civen R. Peritonsillar abscess, retropharyngeal abscess, mediastinitis,. and nonclostridial anaerobic myonecrosis: a case report / R.Civen, M.L.Vaisanen, S.M.Finegold // Clin. Infect. Dis. -1993.-Vol. 16. -P.S299-S303.

82. Clonal spreading of a multidrug resistance Citrobacter freundii strain at a neonatal intensive care unit / B.Gericke, E.Dinger, D.Heuck et al. // Zentralbl. Hyg. Umweltmed. -1993. -Vol.194. -P.540-52.

83. Collier R.J. ADP-ribosylating toxins and g proteins / Eds. J.Moss, M.Vaughan. Washington: Am Soc Microbiol., 1990. -P.3-19.

84. Crystal structure of the cell-binding В oligomer of vero-toxin-1 from E.coli / P.E.Stein, A.Boodhoo, G.T.Tyrell et al. // Nature. -1992. -Vol.355. -P.748-50.

85. Crystal structure of the holotoxin from Shigella dysenteriae at 2.5 A resolution / M.E.Frasier, M.M.Chernaia, Y.V.Kozlov, M.N.James // Nature Structural Biol. -1994.-Vol.1.-P.59-64.

86. Cullmann W. Comparative evaluation of orally active antibiotics against community-acquired pathogens: a multi-center study in; five Mediterranean countries / W.Cullmann // J; Chemother. -1995. -Vol.7. -P.21-5.

87. Cushing A.H. Serum immune response to carriage of toxigenic fecal bacteria with and without diarrhea / A.H.Cushing // Dev. Biol. Stand. -1983. -Vol.53. -P.107-11.

88. Cytotoxic necrotizing factor type 2 produced by virulent Escherichia coli modifies the small GTP-binding proteins Rho involved in assembly of actin stress fibers / E.Oswald, M.Sugai et al. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. -1994. -Vol.91. -P.3814-8.

89. Detection of Escherichia coli and identification of enterotoxigenic strains by primer-directed enzymatic amplification, of specific DNA sequences / U.Candrian, B.Furrer, Ch.Hofelein et al. // Inter.J.Food Microbiol. -1991. -Vol.12.-P.339-52.

90. DNA-based: diagnostic tests for Salmonella species targeting agfA, the structural gene for thin, aggregative fimbriae / J.L.Doran, S.K.Collinson, J.Burian et al.//J. Clin. Microbiol. -1993. -Vol.31. -P.2263-73.

91. Enterohemolysin, a new type hemolysin produced by some strains of enteropathogenic E.coli (EPEC) / L. Beutin, J. Prada, S. Zamermann et al. // Zbl. Bakt. Hyg. A. -1988. -Bd.267. -S.576-88.

92. Epitope maps of the Escherichia coli heat-labile toxin В subunit for development of a synthetic oral vaccine / I.Takahashi, H. Kiyono, R.J.Jackson et al. // Infect. Immun. -1996. -Vol.64. -P. 1290-8.

93. Evidence for two types of cytotoxic necrotizing factor in human and animal clinical isolates of Escherichia coli / J.DeRycke, E.A.Gonzalez, J.Blanco et al. //J. Clin. Microbiol.-1990.-Vol.28.-P.694-9.

94. Examination of colonies and stool blots for detection of enteropathogens by DNA hybridization with eight DNA probes / P.Echeverria, D.N.Taylor, J. Seriwatana et al. // J.Clin.Microbiol. -1989. -Vol.27. -P.331-4.

95. F17-lake fimbriae from an invasive Eschirichia coli strain producing cytotoxic necrotizing factor type 2 toxin / E.L.Mazouari, K.E.Oswald, J.R.Hernalsteens et al. // Infect. Immun. -1994. -Vol.60. -P.2800-7.

96. FimH adhesin of type 1 pili is assembled into a fibrillar tip structure in the Enterobacteriaceae / C.H.Jones, J.S.Pinkner, R. Roth et al. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. -1995. -Vol.92. -P.2081-5.

97. Fujii T. Coexisting respiratory tract infection and bacteremia or sepsis caused by the same bacterium / T.Fujii, Y.Inoue, S.Sacata et al. // Kansenshogaku. Zasshi. -1994: -Vol.68. -P.217-25.

98. Garbers D.L. Guanylyl cyclase receptors and their endocrine, paracrine and autocrine ligands /minireview/ D.L.Garbers // Cell. -1992. -Vol.71.-P. 1-4.

99. Genetic and biochemical characterization of Citrobacter rodentium / D.B.Schauer, B.A.Zabel, I.F.Pedraza et al.// J. Clin. Microbiol. -1995. -Vol.33. -P.2064-8.

100. Gillispie D. S. A quantitative assay for DNA/RNA hybrids with DNA immobilized on a membrane / D. Gillispie, S. Spiegelman // J. Mol. Biol. -1965.-Vol.12.-P.829-842.

101. Gin-63 of Rho is deamidated by Escherichia coli cyto-toxic necrotizing factor-1. / G.Schmidt, P.Sehr, M.Wilm et al. // Nature. -1997. -Vol.387. -P.725-9.

102. Giron J.A. Characterization of fimbriae produced by enteropathogenic Eschirichia coli I J.A.Giron, A.S.Yho, G.K.Schoolnik // J.Bacteriol. -1993. -Vol.175. -P.7391-403.

103. Glycoprotein receptors for a heat-stable enterotoxin "STh" produced by enterotoxigenic Escherichia coli / T.Hirayama, A. Wada, N.Ywata et al.// Infect. Immun. -1992. -Vol.60. -P.4213-20.

104. Gram-negative enteric bacillary meningitis: a twenty-one-year experience / M.Unhanand, M.M.Mustafa, G.H.McCracken, J.D.Nelson //J. Pediatr. -1993. -Vol.122.-P.15-21.

105. Guarino F. Citrobacter freundii produced an 18-aminoacid heat-stable enterotoxin identical to the 18-aminoacid E.coli heat-stable enterotoxin STIa / К Guarino, R.Gianella, M.R.Thompson // Infect. Immun. -1989. -Vol.236. -P.649-52.

106. Harrington DJ. Bacterial collagenases and collagen-degrading enzymes and their potential role in human disease / D.J.Harrington // Infect. Immun. -1996. — Vol.64.-P. 1885-91.

107. Heat-stable enterotoxin of E.coli in vitro effects on guanilate cyclase activity cyclic GMP concentration and ion transport in small intestine / M.Field, L.H.Grof, W.J. Laird, P.L.Smith // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. -1978. -Vol.75. -P.2800-4.

108. Hemolysin-Positive Enteroaggregative and Cell-Detaching Escherichia coli Strains Cause Oncosis of Human Monocyte-Derived Macrophages and Apoptosis of Murine J774 Cells / C.F.Prada, B.D.Tall et al. // Infect.Immun. -1998.-Vol.66.-P.3918-24.

109. Henderson В. Are bacterial exotoxins cytokine network regulators? / B. Henderson, M. Wilson, B. Wren // Trends Microbiol. Sci. -1997. -Vol.5; -P.454-58.

110. Holmgren J. Action of cholera toxin and the prevention and treatment of cholera / J.Holmgren // Nature. -1981. -Vol.292. -P.413-7.

111. Infection and antibiotic therapy in 4000 burned patients treated in Milan, Italy, between 1976 and 1988 / L.Donati, F.Scamazzo, M.Gervasoni et al. // Burns. -1993. -Vol.19. -P.345-8.

112. Interspecific plasmid transfer and modification of heat-stable enterotoxin expression by Klebsiella pneumoniae from infants with diarrhea / M.Allesio,

113. F.Albano, L.Tarralo, A.Guarino // Pediatr. Res. -1993. -Vol.33. -P.205-8;

114. Isolation and nucleotide sequence of the gene encoding cytotoxic necrotizing factor 1 of Escherichia coli / V.Falbo, T.Pace, L.Picci et al. // Infect. Immun. — 1993.-Vol.61.-P.4909-14.

115. Isolation of a Citrobacter freundii strain which carries the Escherichia coli 0157 antigen 7 K.A.Bettelheim, H.Evangelidis, J.L.Pearce et al. // J. Clin. Microbiol. -1993. -Vol.31. -P. 760-761.

116. Jackes T. Biochemical properties of E.coli low molecular-weight, heat-stable enterotoxin / T.Jackes, B.J.Wu // Infect. Immun. -1974. -Vol.9. -P.342-7.

117. Jones G.W. The adhesive properties of V.cholerae and other vibrio species /

118. G.W.Jones // Receptors and recognition Ser. В / Ed. E.H.Beachey.-London,N. Y., 1980. -Vol.6. -P.221-45.

119. Kado C.T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmids / C.T. Kado, S.T. Liu // J. Bacteriol. -1981. -Vol.145. -P. 1365-73.

120. Karch H., Single primer for amplifying segments of distinct shiga-lake-toxin genes by polymerase chain reaction / H.Karch, T.Meyer // J. Clin. Microbiol. -1989.-Vol.27.-P.2751-7.

121. Kline M.W. Characterization of Citrobacter diversus strains causing neonatal meningitis / M.W.Kline, E.O.Mason, S.L.Kaplan // J. Infect. Dis. -1988. -Vol.157. -P. 101-5.

122. Klose K.E. The suckling mouse model of cholera / K.E. Klose // Trends Microbiol. -2000. -Vol.8. -P.189-91.

123. Lesseva M.I. Analysis of bacteriuria in patients with burns / M.I.Lesseva, O.G.Hadjiski //Burns. -1995. -Vol.21. -P.3-6.

124. Lobo A.L. Identification and assay of RTX family of cytolysins / A.L.Lobo, R.A.Welch//Methods enzymol. -1994. -Vol.235. -P.667-78.

125. Lockman H. Nucleotide sequence analysis of the A2 and В subunits of the Vibrio cholerae enterotoxin / H.Lockman, J.B.Kaper // J. Biol. Chem. -1983. -Vol.258.-P.13722-6.

126. Lottenberg R.Capturing host plasmin(ogen): a common mechanism for invasive pathogens? / R Lottenberg, D. Minning-Wenz, M.D.Boyle // Trends Microbiol. -1994. -Vol.2. -P.20-4.

127. Mann Е.А. Comparison of receptor for Escherichia coli heat-stable enterotoxin: novel receptor present in IEC-6 cells / E.A.Mann, M.B.Conen, R.A. Gianella//Am. J. Physiol. -1993.-Vol.264.-P.G172-G178.

128. Matsui S. Clinical bacteriology and empiric therapy for hospital-acquired pneumonia in the elderly at a national leprosarium / S.Matsui, T.Nakasawa // Nippon. Kyobu. Shikkan. Gakkai. Zasshi. -1994. -Vol.32. -P.851-5.

129. Molecular analysis of multiply recurrent meningitis due to Escherichia coli K1 in an infant / E. Bingen, H. Cave, Y. Aujard et al. // Clin. Infect. Dis. -1993. Vol.16.-P.82-85.

130. Molecular cloning of an E.coli plasmid determinant that encodes to the production of heat-stable enterotoxin / M. So, H.W. Royer, M. Bellach, S. Falkow // J. Bacteriol. -1976. -Vol.128. -P.463-72.

131. Molecular cloning of Proteus mirabilis uroepithelial cell adherence genes /

132. W.Cook, N.Mody, J.Valle, R.Hull // Infect. Immun. -1995. -Vol.63. -P.20826.

133. Molecular localization of the Escherichia coli cytotoxic necrotizing factor CNFI cell-binding and catalytic domains / E.Lemichez, G.Flatau, M.Bruzzone et al. // Mol. Microbiol. -1997. -Vol.24. -P. 1061-70.

134. Molecular weight determination and partial characterization of Klebsiella pneumonia haemolysins / L.J.Barbers, A.J.Eraso, M.C.Pajaro, J.Albesa // Can. J. Microbiol. -1986. -Vol.32. -P.884-5.

135. Moss J. Mechanisms of activation of adenilate cyclase by cholerogen and E.coli heat-labile enterotoxin secretory diarrhea / J.Moss, M.Vanghan // Eds. M. Field, T.S.Frodtran, S.G.Schuetz. -N.Y., 1980. -P. 107-126.

136. Muller H.E. Occurence and clinical significance of tyrosin clearing positive Citrobacter freundii in human faecal specimens / H.E.Muller // Zbl. Bacterid. Microbiol. -1986. -Bd.262. -S.412-6.

137. Nair G.B. The heat-stable enterotoxins / G.B.Nair, Y.Takeda // Microb. Pathog. -1998. -Vol.24. -P. 123-31.

138. Narang A. Neonatal necrotizing enterocolitis: a clinical study / A.Narang, R.Rao, O.N.Bhakoo // Indian. Pediatr. -1993. -Vol.30. -P.1417-22.

139. Nassif X. Less systems bacteriens de captation du for: leur role dans la virulence / X.Nassif, P.Sansonetti // Bull. Inst. Pastuer. -1987. -Vol.85. -P.307-27.

140. Neill R.J. Synthesis of plasmid-coded heat-labile enterotoxin in wild-type and hypertoxinogenic strains of Escherichia coli and in other genera of Enterobacteriaceae / RJ.Neill, E.M.Twiddy, R.K.Holmes // Infect. Immun. -1983.-Vol.41.-P.1056-61.

141. Neter E. Enteropathogenicity: recent developments / E.Neter // Klin. Wochenschr. -1982. -Vol.60. -P.699-701.

142. No Lumbar puncture in the evolution for early neonatal sepsis: will meningitis be missed? / T.E.Wiswell, S.Baumgart, C.M.Gannon, A.R.Spitzer // Pediatrics. -1995. -Vol.95.-P.803-6.

143. Novel sites for expression of an Escherichia coli heat-stable enterotoxin receptor in the developing rat / D.W.Laney, E.A.Mann, S.C.Dellon et al. // Am. J. Physiol. -1992. -Vol.263. -P.G816-G821.

144. O'Hara C.M. Ability of commercial identification systems to identify newly recognised species Citrobacter I C.M.O'Hara, S.B.Roman, J.M.Miller // J. Clin. Microbiol. -1995. -Vol.33. -P.242-5.

145. Old D.C. A new mannose-resistant haemagglutinin in Klebsiella / D.C.Old, R.A.Adegbola // J. Appl. Bacteriol. -1983. -Vol.55. -P.165-72.

146. Paton J. C. Pathogenesis and Diagnosis of Shiga Toxin-Producing Escherichia coli Infections / J.C.Paton, A.W.Paton // Clin. Microbiol. Reviews. -1998.-Vol.11.-P.450-79.

147. Paton J.C. Survival rate of mice after transient colonization with Escherichia coli clones carrying variant Shiga-like toxin type II operons / J.C.Paton, A.W.Paton // Microb. Pathog. -1996. -Vol.20. -P.377-83.

148. Production of Escherichia coli STa-like heat-stable enterotoxin by Citrobacter freundii isolated from humans / A.Guarino, G.Capano, B. Malamisura et al. // J. Clin. Microbiol. -1987. -Vol.25. -P.l 10-4.

149. Ralph A. Escherichia coli heat-stable enterotoxins, guanilins, and their receptors: What are they and what do they do? / A.Ralph, R.Gianella // J. Lab. Clin. Med. -1993 -Vol.125. -P.173-81.

150. Raman T.S. Citrobacter septicemia in neonates / T.S.Raman, D.G.Jayaprakach, D.Singh // Indian. Pediatr. -1993. -Vol.30.-P.516-20.

151. Random amplification of polymorphic bacterial DNA: evaluation of 11 oligonuceotides and application to food contaminated with Listeria monocytogenes I C. Niederhauser, C. Hofelein, M. Allmann et al. I I J. Appl. Bacterid. 1994. -Vol.77. -P.574-82.

152. RAPD analysis of Campylobacter isolates: DNA fingerprinting without the need to purify DNA / S. Mazurier, A. Giessen, K. Heuvelman, K. Wernas // Lett. Appl. Microbiol. -1992. -Vol.14. -P.260-2.

153. Rappaport R. Development of a purified cholera toxoid. Ill Refinements in purification of toxin and methods for the determination of residual somatic antigen / R.Rappaport, W.Pierschala, G.Boncle // Infect. Immun. -1976. -Vol.14. -P.687-93.

154. Recurring ventriculitis due Citrobacter diversus: clinical and bacteriologic analysis / S.C.Eppes, C.R.Woods, A.S.Mayer, J.D.Klein //Clin. Infect. Dis. -1993.-Vol.17.-P.437-40.

155. Redefined structure of Escherichia coli heat-labile enterotoxin, a close relative of cholera toxin / T.K.Sixma, K.H.Kalk et al.// J. Mol. Biol. -1993. -Vol.230.-P.890-918.

156. Refined structure of Escherichia coli heat-labile enterotoxin, a close relative of cholera toxin / Т.К. Sixma, K.H. Kalk, B.A. van Zanten et al. // J. Mol. Biol. -1993.-Vol.230.-P.890-918.

157. Regulation of the shiga-lake toxin II operon in Escherichia coli / I.Muhledorfer, J.Hacker, G.T.Keusch et al. // Infect. Immun. -1996. -Vol.64. -P.495-502.

158. Richord R.L. Pathophysiological effects of Vibrio cholera and enterotoxigenic E.coli and their exotoxionson eucoryotic cells / R.L.Richord, S.D.Douglas//Microbiological Reviews. 1978. -Vol.78. -P.592-613.

159. Ruan Y. Hemolysin as a marker for Serratia / Y. Ruan, V. Braun // Arch. Microbiol. -1990. -Vol.154. -P.221-5.

160. Saxena S.K. Shiga toxin, Shiga-like toxin II variant, and ricin are all single-site RNA N-glycosidases of 28 S RNA when microinjected Xenopusoocytes / S.K.Saxena, A.D.O'Brien, K.J.Ackerman // J. Biol Chem -1989. -Vol.264. -P.596-601.

161. Sears C.L. Enteric bacterial toxins: mechanisms of action and linkage to interstinaL secretion / C.L.Sears, J.B.Kaper // Microbiol. Reviews. -1996. -Vol.60.-P. 167-215.

162. Shapiro J.A. Pattern and control in bacterial colonies / J.A. Shapiro // Sci. Progr. -1994. -Vol.76. -P.399-424.

163. Shiga toxin: biochemistry, genetics, mode of action, and role in pathogenesis / A.D. O'Brien, V.L.Tesh, A.Donohue- Rolfe et al. Pathogenesis of shigellosis // Eds. P.J.Sansonetti.-180th ed. -Berlin-Heidelberg: Springer-Verlag, 1992. -P.66-94.

164. Shiga-lake toxin II-related cytotoxins in Citrobacter freundii strains from humans and beef samples / H.Schmidt, M.Montag, J.Bockemuhi et al.// Infect. Immun. -1993. -Vol.61. -P.534-43.

165. Site of action of a Vera toxin (VT2) from Escherichia coli 0157:147 and Shiga toxin in eucaryotic ribosomes / Y.Endo, K.Tsurugi et al. // Eur. J. Biochem. -1998. -Vol.171: -P.45-50.

166. Smith H.R. Mapping of a plasmid, coding for colonization factor antigen I and heat-stable enterotoxin production isolated from on enteritoxigenic strain of E.coli / H.R. Smith, G.A. Willchow, B. Rowl // J. Bacteriol. -1982. -Vol. 149. -P.264-75.

167. So M. Nucleotide sequence of transposon Tnl681 encoding a heat-stable toxin (ST) and its identification in enterotoxigenic Escherichia coli strains / M.So, B.J.McCarthy // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1980. -Vol.77. -P.4011-5.

168. Songer J.G. Bacterial phospholipases and their role in virulence / J.G.Songer // Trends Microbiol -1997. -Vol.5. -P.156-61.

169. Spontaneous bacterial peritonitis in an abult patient with nephrotic syndrome / A.Kato, T.Ohtake, R.Furua et al. // Intern.Med. -1993. -Vol.32. -P.719-721.

170. Staphylococcal alpha-toxin, streptolysin-0 and Escherichia coli hemolysin: prototypes of pore-forming bacterial cytolysins / S.Bhakdi, H. Bayley et al. // Arch. Microbiol.-1996.-Vol.165.-P.73-9.

171. Structural and serological studies of lipopolysaccharides of Citrobacter 035 and ОЗ 8 antigenically related to Salmonella / N.A.Kocharova, Y.A.Knirel, E.S.Stanislavsky et al. // FEMS Immun. Med. Microbiol. -1996. -Vol.13. -P.l-8.

172. Structure and antigenic properties of Citrobacter freundii lipopolysaccharides / H.Chart, G.A.Willshaw, T.Cheasty, B.Rowe // J. Appl. Bacteriol. -1993. -Vol.74. -P.583-7.

173. Suh J.K. Shiga toxin attacks bacterial ribosomes as effectively as eukaryotic ribosomes / J.K.Suh, C.J.Hovde, J.D.Robertus // Biochemistry. -1998, -Vol.37. -P.9394-8.

174. Sylvia S.M. Acquisition and maintenance of enterotoxin plasmids in wild-type strains of E.coli / S.M.Sylvia, P.D.Nigel, B.Rowe // J. Gen. Microbiol. -1983. -Vol.129. -P.3111-20.

175. Tang L.M. Citrobacter meningitis in adults / L.M.Tang, S.T.Chen, T.N.Lui // Clin. Neurol. Neurosurg. -1994; -Vol.96. -P.52-7.

176. Tesh V.L. The pathogenic mechanisms of Shiga toxin and the Shiga-like toxins / V.L.Tesh, A.D.O'Brien // Mol Microbiol -1991.-Vol.5. -P.1817-22.

177. The crystal structure of pertussis toxin / P.E.Stein, A.Boodhoo et al. // Structure. -1994. -Vol.2. -P.45-57.

178. The interaction between RTX toxins and target cells / E.T.Lally, R.B.Hill, I.R.Kieba, J.Korostoff//Trends Microbiol. -1999. -Vol.7. -P.356-61.

179. The use imipenem-cilastatin in neonatal meningitis caused by Citrobacter diversus / Y.Haimi-Cohen, J.Amir, A.Weinstock, I.Varsano / Acta. Pediatr. -1993.-Vol.82.-P.530-2.

180. Toxin-induced activation of the G protein p21 Rho by deamidation of glutamine / G.Flatau, E.Lemichez et al. // Nature. -1997. -Vol.387. -P.729-33.

181. Tundidor-Bermudez A.M. A xanthogranulomatous psoas abscess 4 years after nephrectomy for xanthogranulomatous pyelonephritis / A.M.Tundidor-Bermudez, D. Brene-Padron //Arch. Esp. Urol. -1993.-Vol.46. -P.428-9.

182. Uro virulence determinants in Escherichia coli strains causing prostatitis / A.Andreu, A.E.Stapleton et al. // J. Infect. Dis. -1997. -Vol.176. -P.464-9.

183. Vatopoulos A.C. Risk factors for nosocomial infections caused by gram-negative bacilli. The Hellenic Antibiotic Resistance Study Group / A.C.Vatopoulos, V.Kalapothaki, N.J.Legakis // J. Hosp. Infect. -1996. -Vol.34. -P. 11-22.

184. Vertical transmission of Citrobacter diversus from mother to infant / A.Finn, G.Talbot, E.Anday et al.// Pediat. Infect. Dis. J. -1988. -Vol.7. -P.293-4.

185. Vyskytasirem bacterii rodu Citrobacter / R.Rodman, O.Horsckova, J.Hajkova, K.Prispevek // Cs. Hyg. -1979. -Vol.24. -P.256-260.

186. Welch R.A. Identification of two different hemolysin determinants in uropathogenic Proteus isolates / R.A.Welch // Infect. Immun. -1987. -Vol.55. -P.2183-90.

187. Wick M.J., Iglewski B.H. ADP-ribosylating toxins and g proteins. / Eds.-J.Moss, M.Vaughan. Washington: Am Soc Microbiol., 1990. -P.21-43.

188. Woods C.R. Interaction of Citrobacter diversus strains with HEp-2 epithelial and human umbilical vein endothelial cells / C.R.Woods, E.O.Mason, S.L.Kaplan // J. Infect. Dis. -1992. -Vol.166. -P.1035-44.

189. Yamamoto T. Detection of the enteroaggregative Escherichia coli heat-stable enterotoxin 1 gene sequences in enterotoxigenic Escherichia coli strains pathogenic for humans / T.Yamamoto, P.Echeverria // Infect. Immun. -1996. — V.64.-P. 1441-5.

190. Yamamoto Т. Evolutionary origin of pathogenic determinants in enterotoxigenic Escherichia coli and Vibrio cholerae 01 / T.Yamamoto, T.Gojobori, T.Yokota// J. Bacterid. -1987. -Vol.169. -P.1352-7.

191. Youssef P.P. Septic arthritis: a second decade of experience / P.P.Youssef, J.R.York // Aust. N. Z. J. Med. -1994. -Vol.24. -P.307-11.

192. Zembrzuska-Sadkowska E. The danger of infections of the hospitalized patients with the microorganisms present in preparations and in the hospital environment / E.Zembrzuska-Sadkowska // Acta. Pol. Pharm. -1995. -Vol.52. -P.173-8.