Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Применение антисмысловых олигонуклеотидов к мРНК генов HRK и FASL при культивировании in vitro ооцитов и эмбрионов человека

ВАК РФ 03.00.30, Биология развития, эмбриология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Захарова, Елена Евгеньевна

I. ВВЕДЕНИЕ.

И. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

II. 1. ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОЕ ОПЛОДОТВОРЕНИЕ.

II. 1.1. История развития метода.

И. 1.2. Стимуляция суперовуляции в программе ЭКО и ПЭ.

II. 1.3. Эмбриологические аспекты программы ЭКО.

Уровень рН.

Осмолярность.

Ионный состав.

11.2. НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ ДОИМПЛАНТАЦИОННОГО ЭМБРИОНАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ.

11.2.1. Активация генома зародыша млекопитающих.

11.2.2. Нарушения раннего эмбрионального развития млекопитающих и их причины.

11.2.3. Характерные черты апоптоза и некроза соматических клеток.

Краткая характеристика некроза.

11.2.4. Гибель клеток путем апоптоза.

Морфологические черты клеток, вступивших в апоптоз.

Биохимические особенности клеток, вступивших в апоптоз.

Пути реализации апоптоза.

11.2.5. Клеточная гибель в раннем развитии млекопитающих.

Фрагментация доимплантационных эмбрионов млекопитающих.

11.3. ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ

В ГЕННОЙ ТЕРАПИИ.

11.3.1. Генная терапия.

11.3.2. Способы и механизмы ингибирования экспрессии генов.

Трансгенные технологии.

Олигонуклеотидные технологии.

Смысловые олигонуклеотиды.

Антисмысловые олигонуклеотиды.

Рибозимы и ДНК энзимы.

Интерференционная малая РНК.

11.3.3. Химические модификации антисмысловых ол игонуклеотидов.

Первое поколение» АсОДН.

Второе поколение» АсОДН.

Третье поколение» АсОДН.

11.3.4. Способы доставки нуклеотидов в клетки-мишени.

Ш.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

III. 1. МАТЕРИАЛЫ.

III. 1.1. Животные и получение эмбрионов.

III. 1.2. Среды.

III. 1.3. Олигонуклеотидные последовательности.

111.2. ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

111.2.1. Анализ поступления АсОДН в бластомеры эмбрионов мыши методом конфокальной микроскопии.

111.2.2. Культивирование эмбрионов мыши в среде с добавлением АсОДН к мРНК генов HRK и FASL человека.

111.2.3. Трансплантация бластоцист мыши в матку.

111.2.4. Анализ плодов мыши на присутствие аномалий развития.

111.3. КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

111.3.1.Групп ы.

111.3.2. Индукция суперовуляции.

Ш.3.3. Оплодотворение in vitro.

111.3.4. Культивирование и оценка качества эмбрионов.

111.3.5. Криоконсервация эмбрионов.

111.4. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ.

IV. РЕЗУЛЬТАТЫ.

IV. 1. ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

IV. 1.1. Анализ поступления АсОДН в бластомеры эмбрионов мыши методом конфокальной микроскопии.

IV. 1.2. Культивирование эмбрионов мыши в среде с добавлением АсОДН к мРНК генов HRK и FAS человека и некомплементарной олигонуклеотидной последовательности.

IV.2. КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

IV.2.1. Сравнение клинико-эмбриологических показателей в группах.

IV.2.2. Культивирование ооцитов и эмбрионов человека в среде с добавлением АсОДН к мРНК гена HRK человека.

Уменьшение аномалий и фрагментации эмбрионов in vitro.

Наступление беременности.

IV.2.3. Культивирование ооцитов и эмбрионов человека в среде с добавлением АсОДН к мРНК гена FASL человека.

Уменьшение аномалий и фрагментации эмбрионов in vitro.

Наступление беременности.

IV.2.4. Культивирование ооцитов и эмбрионов человека в среде с добавлением смеси АсОДН к мРНК генов HRK и FASL человека (HRK №2 + HRK №3 +FASL №2+FASL №3).

Выявление специфического эффекта смеси олигонуклеотидных последовательностей.

Сравнение качества эмбрионов (норма, аномалия) между группами на 2 и 3 сутки развития.

Наступление беременности

V. ОБСУЖДЕНИЕ.

VI. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Применение антисмысловых олигонуклеотидов к мРНК генов HRK и FASL при культивировании in vitro ооцитов и эмбрионов человека"

Лечение мужского и женского бесплодия методамивспомогательных репродуктивных технологий в настоящее времяявляется наиболее эффективным. Успех программыэкстракорпорального оплодотворения (ЭКО) во многом зависит отпричин бесплодия, возраста пациентки, от количества и качестваполученных и трансплантированных в матку эмбрионов. Низкаярезультативность лечения данным методом, как правило, наблюдается упациенток старшей возрастной группы (35 лет и старше) и у женщин снеадекватным ответом яичников на гормональную стимуляцию (низкийответ, синдром гиперстимуляции яичников). В таких случаях числополученных ооцитов может быть невелико, качество ооцитов иэмбрионов и, как следствие, их жизнеспособность значительно снижены.Повышение жизнеспособности эмбрионов in vitro - одна изключевых задач современной репродуктивной медицины. Значительнаячасть исследований в данной области посвящена разработкемодификаций культуральных сред и условий культивирования с цельюулучшения качества ооцитов и эмбрионов in vitro (Behr et al, 2004;Quinn, 2004; Summers et al, 2003). Многими исследователями былопоказано, что нарушения развития и снижение качества эмбрионов (втом числе остановка в развитии, фрагментация и др.), полученных впрограммах ЭКО, является следствием апоптоза отдельных бластомеровили целых эмбрионов.При лечении бесплодия методом ЭКО созревание большогоколичества ооцитов индуцируют повышенными дозами гонадотропныхгормонов, многие пациентки имеют нарушения иммунной системы,страдают заболеваниями репродуктивной и эндокринной систем. Эти- 5 факторы могут являться причиной сверхэкспрессии некоторых геновапоптоза в ходе оогенеза (Chi et al., 2000; Dharma et al., 2003; Perez et al.,1997;Katagirie?a/., 1997).Открытиями последних десятилетий в области генетики имолекулярной биологии показана возможность модуляции геннойэкспрессии экзогенными генетическими конструкциями (Gleave et al.,2005; Morishita et al., 2003; Putnam, 1996). Это положило началоразвитию нового направления молекулярной медицины - геннойтерапии, одним из методов которой является применениеантиСмысловых олигонуклеотидов. Преимущество подходаантисмыслового ингибирования на посттранскрипционном уровне переддругими методами генной терапии заключается в том, что в результатевоздействия терапевтического агента (антисмысловой олигодезоксинуклеотидной последовательности - АсОДН) не затрагиваетсяцелостность генома, так как все биохимические процессы протекают внеядра: в клетку вводится АсОДН, идентичная участку кодирующей частигена-мишени, которая комплементарно связывается с мРНК данногогена в цитоплазме, образуя двуцепочечный комплекс, что препятствуетсинтезу белка (Putnam, 1996; Tomita et al., 2003).Использование АсОДН в генной терапии для лечения различныхзаболеваний обсуждается с конца семидесятых годов прошлого века. Внастоящее время уже проводятся клинические испытания препаратовАсОДН для лечения таких заболеваний, как раковые поражения органови их систем, сердечно-сосудистые патологии, ревматоидные артриты,псориаз, астма, гепатит С, СНИД, и многие другие (Kurreck, 2003). Вданном исследовании нами была предложена методика примененияАсОДН для регуляции генной экспрессии на доимплантационныхстадиях развития эмбрионов человека.Целью данного исследования являлось изучение возможностииспользования АсОДН как действующих агентов для генной терапии наранних эмбриональных стадиях развития. В связи с этим былипоставлены следующие задачи: исследовать возможныеэмбриотоксические эффекты воздействия АсОДН надоимплантационные эмбрионы млекопитающих при культивировании invitro и возможные отсроченные тератогенные эффекты послевоздействия АсОДН на доимплантационных стадиях развития(модельный объект - мышь); исследовать проникновение ираспределение АсОДН в клетках доимплантационных эмбрионов прикультивировании ш vitro (модельный объект - мышь); исследоватьвозможность повышения качества эмбрионов человека прикультивировании in vitro в среде с добавлением АсОДН к мРНК геновHRK и FASL, индуцирующих апоптоз.- 7

Заключение Диссертация по теме "Биология развития, эмбриология", Захарова, Елена Евгеньевна

VI. ВЫВОДЫ

1. При культивировании эмбрионов мыши в течение двух суток в среде с добавлением АсОДН отсутствуют эмбриотоксический и отсроченный тератогенный эффекты.

2. АсОДН эффективно проникают в клетки ранних эмбрионов млекопитающих, локализуются преимущественно в перинуклеарной области бластомеров и не имеют полной колокализации с лизосомами.

3. Количество аномальных эмбрионов у пациенток экспериментальных групп (среда с АсОДН к мРНК гена HRK и среда с АсОДН к мРНК гена FASL) достоверно меньше, чем в контрольных группах.

4. Терапевтический эффект АсОДН распространяется на эмбрионы со сниженным качеством (умеренная степень фрагментации, 25-50%), но не на эмбрионы с возможной летальной патологией (высокая степень фрагментации, более 50%).

5. Анализ изменения качества эмбрионов на 2-е и 3-й сутки развития показал положительный эффект смеси HRK и FASL АсОДН и отсутствие положительного эффекта некомплементарной последовательности.

6. Частота наступления беременности после внутриматочной трансплантации эмбрионов выше во всех экспериментальных группах с максимальным эффектом при сочетанном воздействии HRK и FASL

АсОДН: HRK - 41,38% (эксперимент) и 31,40% (контроль); FASL -42,37% и 27,59%; смесь HRK и FASL - 51,6% и 30,5%, соответственно.

7. При сочетанном воздействии HRK и FASL АсОДН шанс достигнуть беременности методом ЭКО в 2,56 раз больше, чем в группе интактного контроля (р=0,056), и в 4,78 раз больше, чем в группе неспецифического контроля (р=0,01).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Захарова, Елена Евгеньевна, Москва

1. Дыбан А.П. Раннее развитие млекопитающих II Л. Наука, 1988.

2. Зеленин А.В., Кайгородов В.А., Прасолов B.C. Генная терапия сегодня и завтра.// Молекулярная биология, 1998, № 32, с. 219-228.

3. Колесников В.А., Зеленина И.А., Семенова М.Л., Шафеи Р.А., Зеленин А.В. Баллистическая трансфекция клеток млекопитающих in vivo. // Онтогенез, 1995, № 26, с. 467-480.

4. Кузмичев Л.Н., Кулаков В.И., Леонов Б.В. Экстракорпоральное оплодотворение. Отбор, подготовка и тактика ведения больных. Москва, «Мир», 2001.

5. Кулаков В.И., Леонов Б.В. Экстракорпоральное оплодотворение и его новые направления в лечении женского и мужского бесплодия. Теоретические и практические подходы. ООО «Медицинское информационное агентство», Москва, 2000.

6. Леонов Б.В., Гусарева А.А. Эмбриологические аспекты программы ЭКО и ПЭ. // Лечение женского и мужского бесплодия. Вспомогательные репродуктивные технологии. / Медицинское информационное агентство, Москва, 2005.

7. Манк М. Биология развития млекопитающих. Методы. Москва, «Мир», 1990.

8. Подобед О.В., Жданов Р.И. Генный перенос с помощью невирусных векторов на основе поликатионов и гидрофобныхполикатионов в целях генной терапии. // Вопросы биологической, медицинской и фармакологической химиии, 1999, №4, с.7-15.

9. Ю.Позмогова Г.Е., Кнорре Д.Г. Белковые и пептидные конструкции для доставки в клетку олигонуклеотидов и ДНК. // Вопросы медицинской химии, 1999, №6.11 .Программированная клеточная гибель // Под ред. проф. Новикова B.C. СПб.: Наука, 1996.

10. Тарантул В.З. Таргетинг генов как современная методология изучения их функции. 1996.

11. Н.Шафеи Р.А., Кривохарченко И.С., Заева В.В., Сухачева Т.С., Потапов М.Е. Роды после ЭКО с переносом витрифицированных эмбрионов (описание случая) // Проблемы репродукции, 2003, т.9, № 2. с.63-64.

12. Ярилин А.А. Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и патологии. // Актуальные проблемы патофизиологии: избранные лекции / Под ред. Мороза Б.Б., М., Медицина, 2001, с. 13-56.

13. Aoki F., Нага К.Т., Schultz R.M. Acquisition of transcriptional competence in the 1-cell mouse embryo: requirement for recruitment of maternal mRNAs. // Molecular Reproduction and Development, 2003, vol. 64, p. 270-274.

14. Alikani M., Calderon G., Tomkin G., Garrisi J., Kokot M., Cohen J. Cleavage anomalies in early human embryos and survival after prolonged culture in-vitro. I I Human Reproduction, 2000, vol. 15, №12, p. 2634-2643.

15. Alikani M., Cohen J., Tomkin G., Garrisi G.J., Mack C., Scott R.T. Human embryo fragmentation in vitro and its implications for pregnancy and implantation. II Fertility and Sterility, 1999, vol. 71, № 5, p. 836-842.

16. Amantana A., Iversen P.L. Pharmacokinetics and biodistribution of phosphorodiamidate morpholino antisense oligomers. // Current Opinion in Pharmacology, vol.5, №5, p. 550-555.

17. Aposhian H.V. The use of DNA for gene therapy—the need, experimental approach, and implications. // Perspectives in Biology and Medicine, 1970, vol.14, №1, p. 98-108.

18. Ball H.A. Sense and antisense: therapeutic potential of oligonucleotides and interference RNA in asthma and allergic disorders. // Clinical Reviews in Allergy and immunology, 2004, vol. 27, №3, p.207-217.

19. Ball H.A. Clinical potential of respirable antisense oligonucleotides (RASONs) in asthma. // American Journal of Pharmacogenomics : Genomics-Related Research in Drug Development and Clinical Practice, 2003 ;3(2):97-106.

20. Baltogiannis D. Combined use of antisense oligonucleotides and chemotherapeutics in the treatment of refractory prostate cancer. // Experimental Oncology, 2005, vol. 27, № 2, p. 91-93.

21. Bilodeau-Goeseels S., Schultz G.A. Changes in the relative abundance of various housekeeping gene transcripts in vitro-produced early bovine embryos. // Molecular Reproduction and Development, 1997, vol. 47, p. 413-420.

22. Blake D., Proctor М., Johnson N., Olive D. Cleavage stage versus blastocyst stage embryo transfer in assisted conception. // Cochrane Database of Systematic Reviews, 2005, vol. 19, № 4.

23. Bongso A, Ng SC, Lim J, Fong CY, Ratnam S. Preimplantation genetics: chromosomes of fragmented human embryos. // Fertility and Sterility, 1991, vol. 56, №1, p. 66-70.

24. Borini A., Lagalla C., Cattoli M., Sereni E., Sciajno R., Flamigni C., Coticchio G. Predictive factors for embryo implantation potential. // Reproductive Biomedicine Online, 2005, vol. 10, № 5, 653-668.

25. Boulikas T. Status of gene therapy in 1997: molecular mechanisms, disease targets, and clinical applications. // Gene Therapy and Molecular Biology, 1998, vol l,p. 1-172.

26. Brinsden P.R. In Vitro Fertilization and Assisted Reproduction. The Parthenon Publishing Group. London. 1999.

27. Brown R. The bcl-2 family of proteins. // British Medical Bulletin, 1997, vol. 53, № 3, p. 466-477.

28. Budiansky S. Quick fixes not on the cards. II Nature, 1983, vol. 306, №5942, p. 414.

29. Budker V.G., Knorre D.G., Vlassov V.V. Cell membranes as barriers for antisense constructions. // Antisense Research and Development, 1992 Summer; vol. 2, №2, p. 177-184

30. Caceres A., Kosik K.S. Inhibition of neurite polarity by tau antisense oligonucleotides in primary cerebellar neurons. // Nature, 1990, vol 1, № 343, p. 461-463.

31. Chanan-Khan A.A. Bcl-2 antisense therapy in multiple myeloma. // Oncology, 2004, vol. 18, № 13, p. 21-24.

32. Chen Z., Yan J., Feng H.L. Aneuploid analysis of tripronuclear zygotes derived from in vitro fertilization and intracytoplasmic sperminjection in humans.// Fertility and Sterility, 2005, vol. 83, № 6, p. 18451848.

33. Chen X., Dudgeon N., Shen L., Wang J.H. Chemical modification of gene silencing oligonucleotides for drug discovery and development. // Drug Discovery Today, 2005, vol. 10, № 8, p. 587-593.

34. Christians E., Campion E., Thompson E.M., Renard J.P. Expression of the HSP 70.1 gene, a landmark of early zygotic activity in the mouse embryo, is restricted to the first burst of transcription. // Development, 1995, vol. 121, p. 113-122.

35. Coates A., Rutherford A.J., Hunter H. Glucose-free medium in human in vitro fertilization and embryo transfer: a large-scale, prospective, randomized clinical trial. // Fertility and Sterility, 1999, vol. 72, p. 229-232.

36. Cooke S., Quinn P., Kime L. Improvement in early human embryo development using new formulation sequential stage-specific culture media. // Fertility and Sterility, 2002, vol. 78, p. 1254-1260.

37. Coticchio G., Sereni E., Serrao L., Mazzone S., Iadarola I., Borini A. What criteria for the definition of oocyte quality? // Annals of the New York Academy of Sciences, 2004, № 1034, p. 132-144

38. Cotran R.S., Kumar V., Collins T. Pathologic basis of disease.- 6th ed. // W.B. Saunders Company, 1999.

39. Czauderna F., Fechtner M., Dames S., Aygun H., Klippel A., Pronk G.J., Giese K., Kaufmann J. Structural variations and stabilising modifications of synthetic siRNAs in mammalian cells. // Nucleic Acids Research, 2003, vol. 31, № 11, p. 2705-2716.

40. Davis W.Jr., Schultz R.M. Molecular cloning and expression of the mouse translation initiation factor elF-lA. // Nucleic Acids Research, 1998, vol. 26, №20, p. 4739-4747.

41. De Oliveira M.C., Boutet V., Fattal E. Improvement of in vivo stability of phosphodiester oligonucleotide using anionic liposomes in mice. // Life science advances, 2000, № 67, vol 13, p. 1625-1637.

42. Dharma S. J., Kelkar R.L., Nandedkar T.D. Fas and Fas ligand protein and mRNA in normal and atretic mouse ovarian follicles. // Reproduction, 2003, №126, p. 783-789.

43. Diesbsch P., Berens C., Monsigny M. Identification, purification and partial characterization of an oligonucleotide receptor in membranes of HepG2 cells. // Nucleic Acids Research, 2000, vol.28, № 4, p. 868-874.

44. Dheur S., Saison-Behmoaras Т.Е. Polyethyleneimine-mediated transfection to improve antisense activity of 3'-capped phosphodiester oligonucleotides. // Methods in Enzymology, 1999. vol. 313, p.56-73.

45. Dozortsev D., Ermilov A., El-Mowafi D.M., Diamond M. The impact of cellular fragmentation induced experimentally at different stages of mouse preimplantation development. // Human Reproduction, 1998, vol. 13, №5,p. 1307-1311.

46. Duwuri M., Feng W., Mathis A., Krise J.P. A cell fractionation approach for the quantitative analysis of subcellular drug disposition. // Pharmaceutical Research, 2004,vol. 21, № 1, p. 26-32.

47. Eckstein F. Phosphorothioate oligodeoxynucleotides: what is their origin and what is unique about them? // Antisense Nucleic Acid Drug Development, 2000, vol. 10, № 2, p. 117-121.

48. Exley G.E., Tang C., McElhinny A.S., Warner C.M. Expression of caspase and Bcl-2 apoptotic family members in mouse preimplantation embryo. 11 Biology of Reproduction, 1999, vol. 61, p. 231-239.

49. Fancsovits P., Toth L., Takacs Z.F., Murber A., Papp Z., Urbancsek J. Early pronuclear breakdown is a good indicator of embryo quality and viability JI Fertility and Sterility, 2005, vol. 84, № 4, p. 881-887.

50. Faria M., Spiller D.G., Dubertret C., Nelson J.S., White M.R., Scherman D., Helene C., Giovannangeli C. Phosphoramidate oligonucleotides as potent antisense molecules in cells and in vivo. // Nature Biotechnology, 2001, vol. 19, № l,p. 40-44.

51. Fire A., Xu S.Q., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mello C.C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. II Nature, 1998, vol. 391, p. 806-811.

52. Fleming J.V., Fontanier N., Harries D.N., Rees W.D. The growth arrest genes gas5, gas6, and CHOP-IO (gaddl53) are expressed in the mouse preimplantation embryo. // Molecular Reproduction and Development, 1997, vol. 48, p. 310-316.

53. Fox M.S., Littlefield J.W. Reservations concerning gene therapy. // Science, 1971, vol. 16, № 173, p. 195.

54. Freese E. Prospects of gene therapy. // Science, 1972, vol. 3, № 175, p. 1024-1025.

55. Friedmann Т., Roblin R. Gene therapy for human genetic disease? //

56. Science, 1972, vol. 175, № 25, p. 949-955.

57. Fuchimoto D., Mizukoshi A., Schultz R.M., Sakai S., Aoki F. Posttranscriptional regulation of cyclin Al and cyclin A2 during mouse oocyte meiotic maturation and preimplantation development. // Biology of Reproduction, 2001, vol. 65, p. 986-993.

58. Fulka J.Jr., First N.L., Fulka J., Moor R.M. Checkpoint control of the G2/M phase transition during the first mitotic cycle in mammalian eggs. // Human Reproducrion, 1999, vol. 14, №6, p. 1582-1587.

59. Garrett D.J., Larson J.E., Dunn D., Marrero L., Cohen J.C. In utero recombinant adeno-associated virus gene transfer in mice, rats, and primates. // BMC Biotechnology, 2003, vol. 30, № 3, p. 16.

60. Geller B.L. Antibacterial antisense. // Current Opinion in Molecular Therapeutics, 2005, vol. 7, № 2, p. 109-113.

61. Gleave M.E. Antisense therapy for cancer. // Nature Reviews. Cancer, 2005, vol. 5, № 6, p. 468-479.

62. Goodarrzi G., Watabe M, Watabe K. Binding of oligonucleotides to cell membranes at asidic pH. // Biochemical and Biophysical Research Communications, 1991, vol 181, № 3, p. 1343-1351.

63. Heasman J. Morpholino oligos: making sense of antisense? // Developmental biology, 2002, vol. 243, № 2, p. 209-214.

64. Helene C., Garestier Т., Giovannangeli C., Sun J-S. Sequence-specific control of gene expression by antigene and clamp oligonucleotides.// Gene therapy and Molecular biology, 1998, vol 1, p.467-474.

65. Hardy K. Apoptosis in the human embryo. // Reviews of

66. Reproduction, 1999, vol. 4, p. 125-134.73 .Hardy K. Cell death in the mammalian blastocyst. // Molecular Human Reproduction, 1997, vol. 3, № 10, p. 919-925.

67. Hardy K., Spanos S. Growth factor expression and function in the human and mouse preimplantation embryo. // Journal of Endocrinology, 2002, vol. 172, p. 221-236.

68. Heichman K.A., Roberts J.M. Rules to replicate by // Cell, 1994, vol. 79, №18, p. 557-562.

69. Henson P.M., Bratton D.L., Fadok V.A. The phosphatidylserine receptor : a crucial molecular switch? // Nature Reviews Molecular Cell Biology, 2001, vol. 2, p. 627-633.

70. Herdewijn P. Antisense oligonucleotides. // Verhandelingen -Koninklijke Academie voor Geneeskunde van Belgie, 1996; vol.58, № 4, p. 359-381.

71. НШ G.A., Freeman M., Bastias M. The influence of oocyte maturity and embryo quality on pregnancy rate in in vitro fertilization embryo transfer. // Fertility and Sterility, 1989, vol. 52, № 5, p. 801-805.

72. Jaeger L.B. Antisense therapeutics and the treatment of CNS disease. II Frontiers in Bioscience, 2004, vol. 1, № 9, p. 1720-1727.

73. Jones G.M., Trounson A.O., Gardner D.K. Evolution of a culture protocol for successful blastocyst development and pregnancy. // Human Reproduction, 1998, vol. 13, p. 169-177.

74. Jurisicova A., Latham K.E., Casper R.F., Varmuza S.L. Expression and regulation of genes associated with cell death during murine preimplantation embryo development. // Molecular Reproduction and Development, 1998a, vol. 51, p. 243-253.

75. Katovich M.J. Angiotensin-converting enzyme 2 as a novel target for gene therapy for hypertension. // Experimental Physiology, 2005 May;90(3):299-305.

76. Kawamura K., Fukuda J., Kodama H., Kumagai J., Tanaka T. Expression of Fas and Fas ligand mRNA in rat and human preimplantation embryos. // Molecular Human Reproduction, 2001, vol. 7, № 5, p. 431-436.

77. Khachigian L.M. Catalytic DNAs as potential therapeutic agents and sequence-specific molecular tools to dissect biological function. // The Journal of Clinical Investigation, 2000, vol. 106, p. 1189-1195.

78. Kim V.N. RNA interference in functional genomics and medicine. // Journal of Korean Medical Science, 2003, vol. 18, p. 309-318.

79. King R.W., Jackson P.K., Kirschner M.W. Mitosis in transition // Cell, 1994, vol. 79, №18, p. 563-571.

80. Knauert M.P., Glazer P.M. Triplex forming oligonucleotides: sequence-specific tools for gene targeting. // Human Molecular Genetics, 2001, vol. 10, №20, p. 2243-2251.

81. Krammer P.H. CD95's deadly mission in the immune system. // Nature, 2000, vol. 407, № 6805, p. 789-795.

82. Kurreck J. Antisense technologies improvement through novelchemical modifications. // European Journal of Biochemistry, 2003, vol. 270, p. 1628-1644.

83. Laktionov P.P., Dazard Y-E., Vives E., Rykova E.Y., Piette Y., Vlasov V.V., Lebleu B. Characterization of membrane oligonucleotide-binding proteins and oligonucleotide uptake in keratinocytes.// Nucleic Acids Research, 1999, vol 27, №11, p.2315-2324.

84. Lamond A.I. 2'-0-alkyloligoribonucleotides: probes for studying the biochemistry and cell biology of RNA processing. // Biochemical Society transactions, 1993, vol. 21, № l,p. 1-8.

85. Lamond A.I., Sproat В., Ryder U., Hamm J. Probing the structure and function of U2 snRNP with antisense oligonucleotides made of 2'-OMe RNA. // Cell, 1989, vol. 58, № 2, p. 383-390.

86. Ledley F. D. Nonviral gene therapy: the promise of genes as pharmaceutical products. II Human Gene Therapy, 1995. vol. 6, p. 1129-1144.

87. Lee J.H., Park J.H., Yang M.H. The effect of cyclophosphamide on Fas-mediated apoptosis. II Journal of Korean Medical Science, 1997, vol. 12, № 3, p. 185-189.

88. Levy R., Benchaib M., Cordonier H., Souchier C., Guerin J.F. Annexin V labelling and terminal transferase-mediated DNA end labelling (TUNEL) assay in human arested embryos. // Molecular Human Reproduction, 1998, vol. 4, № 8, p. 775-783.

89. Liang E., Ajmani P.S., Hughes J.A. Oligonucleotide delivery: a cellular prospective. // Pharmazie, 1999, vol. 54, № 8, p. 559-566.

90. Listerud M., Brussaard A.B., Devay P., Colman D.R., Role L.W. Functional contribution of neuronal AChR subunits revealed by antisense oligonucleotides. // Science, 1991, vol. 254, № 5037, p. 1518-1521.

91. Menendez P, Wang L, Bhatia M. Genetic manipulation of human embryonic stem cells: a system to study early human development and potential therapeutic applications. Curr Gene Ther. 2005 Aug;5(4):375-85.

92. Menezo Y., Testart J., Perone D. Serum is not necessary in human in vitro fertilization and embryo development. // Fertility and Sterility, 1984, vol. 42, p. 750-755.

93. Methods in Prenatal Toxicology. Ed. By Neubert D, Merker H-J, Kwasigroch ТЕ et al., Stuttgart: Thieme, 1977, P. 474.

94. Niwa H, Toyooka Y, Shimosato D, Strumpf D, Takahashi K, Yagi R, Rossant J. Interaction between Oct3/4 and Cdx2 determines trophectoderm differentiation. // Cell, 2005, vol. 123, № 5, p. 917-929.

95. Noonberg S.B., Garovoy M.R., Hunt C.A. Characteristics of oligonucleotide uptake in human keratinocyte cultures. // The Journal of Investigative Dermatology, 1993, vol. 101, № 5, p. 727-731.

96. Nureddin A., Epsaro E., Kiessling A.A. Purines inhibit the development of mouse embryos in vitro. // Journal of Reproduction and Fertility, 1999, vol. 90, p. 455-464.

97. Pampfer S., Donnay I. Apoptosis at the time of embryo implantation in mouse and rat. // Cell Death and Differentiation, 1999, vol. 6, p. 533-545.

98. Paria B.C., Dey S.K., Andrews G.K. Antisense c-mic effects on preimplantation mouse embryo development. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 1992. Vol. 89, p. 10051-10055.

99. Perez G.I., Tao X-J, Tilly J.L. Fragmentation and death (a.k.a. apoptosis) of ovulated oocytes. // Molecular Human Reproduction, 1999, vol. 5, №5, p. 414-420.

100. Perez G.I., Tilly J.L. Cumulus cells are required for the increased apoptotic potential in oocytes of aged mice. // Human Reproduction, 1997, vol. 12, № 12, p. 2781-2783.

101. Petak I., Houghton J.A. Shared pathways: death receptors and cytotoxic drugs in cancer therapy. // Pathology Oncology Research, 2001, vol. 7, №2, p. 95-106.

102. Phillips M.I. Antisense therapeutics for hypertension: targeting the renin-angiotensin system. // Methods in Molecular Medicine, 2005, vol. 106,p. 51-68.

103. Phillips M. I., Zhang Y. C. Basic principles of using antisense oligonucleotides in vivo. // Methods in Enzymology, 1999. Vol. 313, p. 46-56.

104. Plank C., Zauner W., Wagner E. Application of membrane-active peptides for drug and gene delivery across cellular membranes. // Advanced Drug Delivery Reviews, 1998, vol 34, № 1, p 21-35.

105. Pooga M., Land Т., Bartfai Т., Langel. PNA oligomers as tools for specific modulation of gene expression. // Biomolecular Engineering, 2001, vol. 17, №6, p. 183-192.

106. Porter D.A., Vickers S.L., Cowan G.C., Huber S.C., Quirk S.M. Expression and function of Fas antigen vary in bovine granulose and theca cells during ovarian follicular development and atresia. // Biology of Reproduction, 2000, № 62, p. 62-66.

107. Pru J.K., Tilly J.L. Programmed cell death in the ovary: insights and future prospects using genetic technologies. // Molecular Endocrinology, 2001, vol. 15, p. 845-853.

108. Quinn P. et al. Preservation of hamster oocytes to assay the fertilizing capacity of human spermatozoa.// Journal of In Vitro Fertilization and Embryo Transfer : IVF, 1982., vol 66, p. 161-168.

109. Quinn P. The development and impact of culture media for assisted reproductive technologies. // Fertility and Sterility, 2004, vol. 81, p. 27-29.

110. Quinn P., Kerin J.F., Warnes G.M. Improved pregnancy rate in human in vitro fertilization with the use of a medium based on the composition of human tubal fluid. // Fertility and Sterility, 1985, vol. 44, p. 493-498.

111. Sargent I.L., Martin K.L., Barlow D.H. The use of recombinant growth factors to promote human embryo development in serum-free medium. // Human Reproduction, 1998, vol. 13, p. 239-248.

112. Senn A., Urner F., Chanson A., Primi MP., Wirthner D., Germond M. Moфhological scoring of human pronuclear zygotes for prediction of pregnancy outcome. // Human Reproduction, 2006, vol. 21, № 1, p. 234-239.

113. Shafei, R.; Zaeva, V.; Hyaluronan-Based Vitrification Protocol // ESHRE congress. 2003. Madrid.

114. Shafei, R.; Zaeva, V.; Zakharova, E.; Isaev, D.; Krivokharchenko, I. Vitrification of Human Embryos Using Hyaluronan-Based Protocol: Clinical Outcome of 118 Cycles // ESHRE congress. 2004. Berlin.

115. Shulman A., Gen-nun I., Ghetler Y. Relationship between embryo morphology and implantation rate after in vitro fertilization treatment in conception cycles. II Fertility and Sterility, 1993, vol.60, №1, p.123-126.

116. Simon A., Safran A., Revel A. Hyaluronic acid can successfully replace albumin as the sole macromolecule in a human embryo transfer medium.// Fertility and Sterility, 2003, vol. 79, p. 1434-1438.

117. Schultz G.A., Hahnel A., Arcellana-Panlilio M., Wang L., Goubau S., Watson A., Harvey M. Expression of IGF ligand and receptor genes during preimplantation mammalian development // Molecular Reproduction Development, 1993, vol. 4, p. 414-420.

118. Wyllie A.H. Apoptosis and carcinogenesis. // European Journal of Cell Biology, 1997, vol. 73, № 3, p. 189-197.

119. Schultz R.M. Preimplantation embryo development. // Molecular biology in reproductive medicine / Ed. Fauser B.C.J.M., The Parthenon Publishing Group,1999, p. 313-332.

120. Scott L., Alvero R., Leondires M., Miller B. The morphology of human pronuclear embryos is positively related to blastocyst development and implantation. II Human Reproduction, 2000, vol. 15, № 11, p. 2394-2403.

121. Simons M., Edelman E.R., DeKeyser J.L., Langer R., Rosenberg R.D. Antisense c-myb oligonucleotides inhibit intimal arterial smooth musclecell accumulation in vivo. II Nature, 1992, vol. 359, № 6390, p. 67-70.

122. Spanos S., Rice S., Karagiannis P., Taylor D., Becker D.L., Winston R.M.L., Hardy K. Caspase activity and expression of cell deth during development of human preimplantation embryos // Reproduction, 2002, vol. 124, p. 353-363.

123. Steptoe P.C., Edwards R.G. Birth after the reimplantation of a human embryo. II Lancet, 1978, vol. 2, № 8085, p. 366.

124. Takakura Y., Oka Y., Hashida M. Cellular uptake properties of oligonucleotides in LLC-PK1 renal epithelial cells. // Antisense and Nucleic Acid Drug Development, 1998, vol. 8, № 1, p. 67-73.

125. Tamm I. Antisense therapy in clinical oncology: preclinical and clinical experiences. // Methods in Molecular Medicine, 2005, vol. 106, p. 113-134.

126. Temsamani J., Kubert M., Tang J., Padmapriya A., Agrawal S. Cellular uptake of oligodeoxynucleotide phosphodeoxynucleotide phosphorothioates and their analogs. // Antisense Research and Development, 1994, vol. 4,№ 1, p. 35-42.

127. Tilly J.L., Robles R. Apoptosis and its impact in clinical reproductive medicine. // Molecular biology in reproductive medicine / Ed. Fauser B.C.J.M., The Parthenon Publishing Group, 1999, p. 79-101.

128. Tomita Т. Gene therapy for arthritis. // Current Drug Targets, 2003, vol. 4, № 8, p. 609-612.

129. Tomita N. Application of decoy oligodeoxynucleotides-based approach to renal diseases. // Current Drug Targets, 2004, vol. 5, № 8, p. 717-733.

130. Trounson A.O., Gardner D.K. In Vitro Fertilization. CRC Press,1999.

131. Van Blerkom J., Davis P., Alexander S. A microscopic and biochemical study of fragmentation phenotypes in stage-appropriate human embryos. // Human Reproduction, 2001, vol. 16, № 4, p. 719-729.

132. Van Blerkom J., Davis P. DNA strand breaks and phosphatidylserine redistribution in newly ovulated and cultured mouse and human oocytes: occurence and relationship to apoptosis. // Human Reproduction, 1998, vol. 13, №5, p. 1317-1324.

133. Van Soom A., Mateusen В., Leroy J., De Kruif A. Assessment of mammalian embryo quality: what can we learn from embryo morphology? // Reproductive Biomedicine Online, 2003, vol. 7, № 6, p. 664-670.

134. Vasquez K.M., Marburger K., Intody Z., Wilson J.H. manipulating the mammalian genome by homologous recombination. // PNAS, 2001, vol. 98, № 15, p. 8403-8410.

135. Vaux D.L., Strasser A. The molecular biology of apoptosis. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 1996, vol. 93, p. 2239-2244.

136. Vester В., Wengel J. LNA (locked nucleic acid): high-affinity targeting of complementary RNA and DNA. // Biochemistry, 2004, vol. 26, №43, p. 13233-13241.

137. Voss A.K., Thomas Т., Petrou P., Anastassiadis K., Scholer H., Gruss P. Taube nuss is a novel gene essential for the survival of pluripotent cells of early mouse embryos. // Development, 2000, vol. 127, p. 5449-5461.

138. Warner C.M., McElhinny A.S., Wu L., Cieluch С., Ke X., Cao W., Tang C., Exley G.E. Role of the Ped genes in control of preimplantation development. // Journal of Assisted Reproduction and Genetics, 1998, vol. 15, №5, p. 331-337.

139. Wang J., Lane M., Norman R.J. Reducing multiple pregnancy from assisted reproduction treatment: educating patients and medical staff. //The Medical Journal of Australia, 2006, vol. 184, №4, p. 180-181.

140. Wang HY, Watkins DC, Malbon CC. Antisense oligodeoxynucleotides to GS protein alpha-subunit sequence accelerate differentiation of fibroblasts to adipocytes. // Nature, 1992, vol. 358, p. 334337.

141. Weiss В., Davidkova G., Zhou L.-W. Antisense RNA gene therapy for studying and modulating biological processes.// Cellular and Molecular Life Sciences, 1999, vol. 55, p.334-358.

142. White P.J. Antisense oligonucleotide treatments for psoriasis. // Expert Opinion on Biological Therapy, 2004, vol. 4, № 1, p. 75-81.

143. Wianny F., Zernicka-Goetz M. Specific interference with gene function by double-stranded RNA in early mouse development.// Nature Cell Biology, 2000, Vol. 2, p. 70-75.

144. Williamson B. Gene therapy. И Nature, 1982, vol. 298, p. 416-418

145. Wright C.S., Becker D.L., Lin J.S., Warner A.E., Hardy K. Stage-specific differential expression of gap junctions in the mouse ovary:connexin-specific roles in follicular regulation. // Reproduction, 2001, vol. 121, p. 77-88.

146. Wu L., Exley G.E., Warner C.M. Differential expression of Ped gene candidates in preimplantation mouse embryos. // Biology of Reproduction, 1998, vol. 59, p. 941-952.

147. Wu-Pong S. Alternative interpretations of the oligonucleotide transport literature: insights from nature. // Advanced Drug Delivery Reviews, 2000, vol 44, № 1, p. 59-70.

148. Wu-Pong S. Calcium dependent oligonucleotide cellular uptake. // Biochimie, 1996; vol. 78, № 1, p. 33-38.

149. Wu-Pong S., Livesay V., Dvorchik В., Barr WH. Oligonucleotid transport in rat and human intestine ussing chamber models. // Biopharmaceutics and Drug Disposition, 1999, vol 20, № 9, p. 411-416.

150. Wuu Y.D., Pampfer S., Becquet P., Vanderheyden I., Lee K.H., De Hertogh R. Tumor necrosis factor a decreases the viability of mouse blastocysts in vitro and in vivo. // Biology of Reproduction, 1999, vol. 60, p. 479-483.

151. Xu J., Cheung Т., Chan S.T., Ho P., Yeung W.S. The incidence of cytoplasmic fragmentation in mouse embryos in vitro is not affected byinhibition of caspase activity. // Fertility and Sterility, 2001, vol. 75, № 5, p. 986-991.

152. Yang H.W., Hwang K.J., Kwon H.C., Kim H.S., Choi K.W., Oh K.S. Detection of reactive oxygen species (ROS) and apoptosis in human fragmented embryos. // Human Reproduction, 1998, vol. 4, № 4, p. 998-1002.

153. Yonehara S., Ishii A., Yonehara M. A cell-killing monoclonal antibody (anti-Fas) to a cell surface antigen co-downregulated with the receptor of tumor necrosis factor. // Journal of Experimental Medicine, 1989, vol. 169, №5, p. 1747-1756.

154. Zhou B-B.S., Elledge S.J. The DNA damage response: putting checkpoints in perspective. // Nature, 2000, vol. 408, p. 433-439.

155. Zuker M. Mfold web server for nucleic acid folding and hybridization prediction. // Nucleic Acids Research, 2003, vol. 31, № 13, p. 3406-3415.