Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Повышение эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Повышение эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа"

На правах рукописи

КОЛОМОЙЦЕВ Александр Владимирович

ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДИАГНОСТИКИ

РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ СИФИЛИСА НА ОСНОВЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

03.00.07 Микробиология 14.00.11 Кожные и венерические болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Пермь — 2005

Диссертация выполнена на базе кафедры микробиологии с курсом вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия МЗ и СР РФ» и ГУЗ «Пермский областной кожно-венерологический диспансер»

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Карпунина Тамара Исаковна кандидат медицинских наук, доцент Елькин Владимир Дмитриевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Демаков Виталий Алексеевич доктор медицинских наук, профессор Кунгуров Николай Васильевич

Ведущая организация:

Ижевская государственная медицинская академия

Защита состоится ¿-¿¿С-д,^ 2005 г. в -/О часов на заседании

диссертационного совета Д 004.019.01 в Институте экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу: 614081, г. Пермь, ул. Голева, 13. Факс:(3422)446711.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН.

Ученый секретарь

Ившина Ирина Борисовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Инфекции, передающиеся половым путем (ИППП), остаются важной медико-социальной проблемой, нанося обществу значительный экономический и демографический ущерб (Кисина, 2003). Сифилис — одна из наиболее серьезных ИППП, характеризующаяся длительным стадийным течением и развитием отдаленных осложнений. В 90-х годах XX столетия в России отмечался значительный рост заболеваемости сифилисом (277,3 случая на 100 тыс. населения), достигший своего пика в 1997 г. (Никифоров и др., 2003). На фоне наметившейся в последние годы тенденции к снижению заболеваемости особую настороженность вызывают изменения, происходящие в структуре и клинических проявлениях данной инфекции. Прежде всего это касается увеличения доли скрытых и атипичных форм сифилиса, что указывает на сохранение в России неблагоприятной эпидемической ситуации (Прохоренков, 2000). Вместе с тем, течение инфекции в разных регионах имеет свои особенности, что определяет необходимость изучения клинико-эпидемиологической картины на отдельных территориях (Кунгуров, 2002).

Лабораторная диагностика сифилиса представлена достаточно широким спектром тестов, включающих прямое обнаружение возбудителя (микроскопическое исследование серозного отделяемого сифилидов, ПЦР-детекция) и выявление антител к трепонемным и нетрепонемным антигенам (Герасимова и др., 2004). Среди специфических серологических методов, позволяющих успешно диагностировать заболевание, наиболее перспективным является иммуноферментный анализ, с помощью которого удается проводить раздельное определение IgM и IgG (Дмитриев, 2004).

Наблюдающийся в настоящее время рост малосимптомного и скрытого сифилиса и трудности при трактовке результатов серологического обследования повышают значимость дифференцированной оценки показателей гуморального иммунитета и требуют совершенствования методов серологической диагностики, как единственно возможной при этих формах.

Цель настоящей работы — изучение клинико-эпидемиологических особенностей сифилиса на территории Пермской области и повышение эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа.

Основные задачи исследования

1. Оценить клинико-эпидемиологическую картину заболеваемости сифилисом на территории Пермской области.

2. Оценить степень результативности комплексного серологического обследования больных с применением различных методов диагностики.

3. Провести анализ клинических особенностей различных форм сифилиса.

4. Разработать способ повышения эффективности диагностики . различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа.

Положения, выносимые на защиту

1. На территории Пермской области, как при минимальном уровне заболеваемости (до 1993 г.), так и при его подъеме (1993-1996 гг.), доминируют вторичные формы сифилиса. С 1998 г. в структуре заболеваемости выявляется устойчивая тенденция повышения удельного веса скрытых форм сифилиса.

2. Наряду с увеличением удельного веса скрытых форм сифилиса выявляются определенные изменения в клинической симптоматике манифестных форм данного заболевания.

3. Использование в качестве сорбента аффинно очищенного белка А золотистого стафилококка, иммобилизированного на суперпарамагнитной ферроматрице (пр-во НПО «Биомед», Пермь) обеспечивает возможность дифференцированного определения подклассов IgG и способствует повышению эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа.

Научная новизна,

теоретическое и практическое значение работы

Установлено, что на территории Пермской области выявляется устойчивая тенденция повышения (до 39 %) удельного веса скрытых форм сифилиса. Данная клиническая форма при неудовлетворительном уровне ее диагностики обеспечивает резервацию и сохранение возбудителя сифилиса в межэпидемический период. Проведена сравнительная оценка диагностической значимости примененных серологических тестов с использованием нетрепонемных и трепонемных антигенов (реакция микропреципитации, реакция связывания комплемента, реакция иммунофлюоресценции, реакция пассивной гемагглютинации, иммуноферментный анализ) на разных стадиях инфекционного процесса. Показано, что иммуноферментный

анализ с раздельным определением специфических IgM и IgG характеризуется наиболее высокой информативностью. Экспериментально обосновано, что предложенная оригинальная методика, предполагающая аффинное выделение подклассов IgGi, IgG2 и IgG4 за счет Fc-рецепторных свойств магнитного сорбента с иммобилизированными клетками золотистого стафилококка, содержащими белок А, способствует повышению эффективности дифференциальной серологической диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа.

Полученные данные расширяют представление о клинико-эпидемиологических особенностях сифилитической инфекции. Прослеженная среднемноголетняя динамика уровня заболеваемости различными формами сифилиса указывает на существенную роль скрытых его форм в поддержании неблагополучной эпидемической обстановки по ИППП на территории Пермской области. Результаты исследования могут быть использованы при разработке профилактических противоэпидемических мероприятий, а также в диагностических и терапевтических схемах лечения различных форм сифилиса. Разработанная оригинальная методика повышения эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа может быть использована для их дифференциальной диагностики и дает возможность минимизации диагностических ошибок в серологическом обследовании больных сифилисом (Приоритетная справка №2004125573 о выдаче Патента на изобретение РФ от 20.08.2004).

Результаты настоящей работы внедрены в практику Пермского областного и городского кожно-венерологических диспансеров, Пермской областной клинической больницы и используются в учебном процессе на кафедрах дерматовенерологии и микробиологии с курсом вирусологии и иммунологии Пермской государственной медицинской академии.

Апробация работы и публикации. Основные положения

работы доложены и обсуждены на заседании Пермского филиала Всероссийского общества дерматовенерологов, Пермь, 2003, 2004; VI Российском съезде врачей-инфекционистов, Санкт-Петербург, 2003; Научно-практической конференции «Актуальные проблемы уретрогенных инфекций, передаваемых половым путем. Новые лекарственные препараты в дерматовенерологической практике», Москва, 2003; XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 2004; Научной сессии ГОУ ВПО «Пермская

государственная медицинская академия МЗ РФ», Пермь — Ижевск; 2004; Всероссийской научно- практической конференции «Медицинская микробиология — XXI век», Саратов, 2004. Диссертация апробирована на расширенном заседании кафедр микробиологии с курсом вирусологии и иммунологии и дерматовенерологии Пермской государственной медицинской академии (Протокол №204 от 21 декабря 2004 г.). По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 4 статьи.

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР Пермской государственной медицинской академии (номер государственной регистрации темы 01.9.60000638).

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 149 страницах машинописного текста, содержит 20 рисунков, 17 таблиц и 16 фотографий. Диссертация состоит из введения, обзора данных литературы, описания материалов и методов, двух глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, приложения и списка цитируемой литературы, содержащего 204 литературных источника, из них 119 отечественных и 85 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Ретроспективный анализ уровня заболеваемости сифилисом на территории Пермской области выполнен по данным официальной статистической отчетности (1989-2003 гг.) и картам стационарных больных различными формами сифилиса Пермского областного кожно-венерологического диспансера (ПОКВД) за 1999-2003 гг. Комплексное клинико-лабораторное обследование проведено 142 больным сифилисом (34,5 % мужчин и 65,5 % женщин) в возрасте от 14 до 52 лет. Клиническое обследование включало сбор анамнестических данных и физикальное обследование органов и систем, выполненное в соответствии с порядком проведения объективного осмотра пациентов. Диагностика различных форм сифилиса осуществлялась с использованием регламентированных клинико-лабораторных методов (Приказ № 87 МЗ РФ «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» от 26.03.2001). Деление на группы проведено в соответствии с клинической классификацией сифилиса. Первую группу составили пациенты с первичным сифилисом (31 человек), вторую группу — больные вторичным свежим сифилисом (34 обследованных), в третью вошли 36 пациентов с признаками вторичного рецидивного периода заболевания, четвертая состояла из 41 больного ранним скрытым сифилисом.

Во всех случаях основным материалом для лабораторных исследований служили образцы сыворотки крови пациентов, отделяемое сифилидов, соскобный материал из уретры у мужчин, уретры, цервикального канала и влагалища у женщин, который забирали с помощью ложек Фолькмана и (или) одноразовых щёточек. С целью исключения из групп наблюдения больных с другими ИППП, проводили диагностику гонореи, трихомониаза, хламидиоза, генитального герпеса, уреамикоплазмоза, согласно общепринятым методикам. Серологическую диагностику сифилиса проводили с использованием реакции микропреципитации (РМП), реакции связывания комплемента с кардиолипиновым (РСКк) и трепонемным (РСКт) антигенами, реакции иммуннофлюоресценции (РИФ), реакции пассивной гемагглютинации (РПГА), иммуноферментного анализа (ИФА), следуя указаниям, изложенным в инструкциях к соответствующим тест-системам и диагностикумам.

В разработанной методике для дифференциальной диагностики различных форм сифилиса использовали магнитный сорбент на основе белка А золотистого стафилококка, входящий в комплект препарата «Сангвидет» — диагностикума иммуноглобулинового для определения скрытой крови в фекалиях человека в реакции коагглютинации (пр-во НПО «Биомед», Пермь). Для характеристики концентрации антител в ИФА использовали коэффициент позитивности (КП), равный отношению оптической плотности (ОП), полученной для каждого образца, к критической ОП (Приказ № 87 МЗ РФ, 2001). КП у положительных образцов выше 1,1, сомнительных — в интервале от 0,9 до 1,1 и отрицательных — ниже 0,9.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерных программ Exel 2000 (Microsoft Inc, 1999), Statistica for Windows, v. 5.0 (Statsoft Inc., 1995), рассчитывая среднее арифметическое, доверительные интервалы, средние значения и ошибку относительных величин, критерий t Стьюдента и вероятность различий.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ статистической отчетности за период 1989-2003 гг. и исследования, проведенные на базе ПОКВД, подтвердили высокую распространенность сифилиса среди населения Пермской области. В среднем за анализируемый период интенсивность эпидемического процесса первичного, вторичного и раннего скрытого сифилиса составила 52,3, 81,8, и 60,6 на 100 тыс. населения соответственно. Начиная с 1997 г., на фоне снижения уровня заболеваемости первичным и вторичным сифилисом показатели заболеваемости скрытыми формами инфекции увеличивались до 1998 г., а их снижение с 1999 г. происходило менее интенсивно. Кроме того, с 1998 г., в структуре заболеваемости выявлена устойчивая тенденция повышения удельного веса скрытых форм сифилиса.

На фоне структурного перераспределения удельного веса клинических форм сифилиса, в последние годы отмечаются определенные изменения и в клинической картине различных стадий заболевания. Из особенностей первичного сифилиса отмечена большая частота язвенных форм твердого шанкра (42 ±8,8%) и частая экстрагенитальная его локализация (22,6 ± 7,5 %). Розеолезные высыпания у 31 больного (91,2 ± 4,8%) были доминирующим проявлением вторичного свежего сифилиса и у 12 пациентов (35,3 ± 8,2%) сочетались с папулезным сифилидом. Во вторичном рецидивном периоде розеолезная сыпь выявлялась реже — у

25 обследованных (69,5 ±7,6%). Сочетание же ее с папулезным сифилидом отмечено с достоверно большей частотой — у 23 больных (63,9 ± 8,0 %). Патологический процесс на коже, представленный только мономорфной розеолезной сыпью, обнаружен у 19 пациентов (55,9 ± 8,5 %) вторичным свежим и достоверно реже — у 2 обследованных (5,6 ± 3,8 %) вторичным рецидивным сифилисом. При наличии в клинической картине заболевания только папулезных сифилидов отмечена обратная зависимость: достоверно чаще они встречаются у больных вторичным рецидивным сифилисом, как и сифилитическая алопеция, зарегистрированная в 11,1 ±5,2% случаев. Обращает на себя внимание более частое поражение слизистых оболочек при вторичном рецидивном сифилисе по сравнению со вторичным свежим: 14 больных (38,9 ±8,1%) и 5 пациентов (14,7 ±6,1%) соответственно.

Таким образом, нами отмечена высокая частота язвенных форм первичного аффекта и частая экстрагенитальная его локализация. Во вторичном периоде в клинической картине преобладали розеолезно-папулезные высыпания, отмечено частое поражение слизистых, увеличение папулезных сифилидов ладоней и подошв, сифилитической алопеции у больных во вторичном рецидивном периоде болезни. При этом у 34,2 % обследованных пациентов с первичным и вторичным сифилисом клиническая симптоматика инфекции была стертой или атипичной. Именно такие, а также бессимптомные формы заболевания являются наиболее проблемными в диагностике сифилиса. Отсутствие характерных проявлений инфекционного процесса на коже и слизистых затрудняет прямую детекцию возбудителя в исследуемом материале, выдвигая на первый план серологические методы диагностики.

В соответствии с приказом МЗ РФ № 87 от 26.03.2001 г. в стране вводится новый серологический комплекс для диагностики сифилиса: РСКк (реакция Вассермана) с 2006 г. выводится из пользования. Для скрининга будет применяться РМП, для подтверждения диагноза — РПГА или ИФА. Целесообразность такой замены неоднозначно оценивается клиницистами и исследователями (Дмитриев, 2004). Результаты исследования сывороток крови обследованных нами пациентов (табл. 1, 2, 3), и их сравнительный анализ позволяют следующим образом оценить диагностическую значимость использованных тестов.

• РМП обладает высокой чувствительностью при всех формах сифилиса и хорошо сочетается с подтверждающими диагноз трепонемными тестами. Для постановки этой реакции не требуется

специального оборудования и сложной предварительной подготовки, что определяет ее экономичность и позволяет использовать в качестве скринингового теста на догоспитальном этапе.

Таблица 1.

Результаты серологического обследования пациентов в РМПиРСК

Первичный сифилис (1 группа) Вторичный свежий (II группа) Вторичный рецидивный (III группа) Скрытый ранний (IV группа)

п % п % п % п %

РМП (4+) 31 100 34 100 36 100 41 100

РСКк (4+) в низких титрах (1:5-1:40) 8 25,8 ±7,9* 5 14,7 ±6,1* 19 52,8 ±8,3 37 90,2 ±4,6*

в высоких титрах (1:80-1:320) 23 74,2 ± 7,9 29 85,3 ±6,1 17 47,2 ± 8,3 4 9,8 ±4,6

РСКт (4+) в низких титрах (1:5-1:40) 6 19,4 ±7,1* 3 8,8 ±4,9* 18 50 ±8,3 40 97,6 ±2,4*

в высоких титрах (1:80-1:320) 25 80,6 ±7,1 31 91,2 ±4,9 18 50 ±8,3 1 2,4 ±2,4

Примечание.* — Р<0,05 — по критерию Стьюдента между РСК в высоких и низких титрах.

• РПГА целесообразно использовать для подтверждения диагноза сифилиса. Метод исключительно прост, не требует специального оборудования и специалистов высокой квалификации. При сравнении с реакцией прошлого «золотого стандарта» — РИФ установлено, что РПГА обладает достаточно высокой чувствительностью.

• ИФА обладает высокой чувствительностью, специфичностью и воспроизводимостью. Метод легко поддастся автоматизации, что весьма удобно при обследовании крупных контингентов. ИФА позволяет проводить определение не только суммарных антитрепонемных иммуноглобулинов, но и отдельно классов G и М, что имеет определяющее значение для диагностики ранних форм сифилиса (в том числе врожденного) и реинфекции.

Результаты серологического обследования пациентов в РПГА и РИФ

Первичный сифилис (I группа) Вторичный свежий (И группа) Вторичный рецидивный (III группа) Скрытый ранний (IV группа)

п % п % п % п %

РПГА отр. 4 12,9 ±6,0 0 0 0 0 0 0

2+ 13 41,9 ±8,9 0 0 0 0 0 0

3+ 14 45,2 ± 8,9 7 20,6 ±6,9 0 0 0 0

4+ 0 0 27 79,4 ±6,9 36 100±0 41 100±0

РИФ-200

3+ 23 74,2 ± 7,9 0 0 0 0 19 53,7 ±7,8

4+ 8 25,8 ±7,9 34 100 36 100 22 46,3 ±7,8

РИФ-абс

3+ 5 16,1 ±6,6 0 0 0 0 8 80,5 ±6,2

4+ 26 83,9 ±6,6 34 100 36 100 33 19,5 ±6,2

Таблица 3.

Результаты серологического обследования пациентов в ИФА

Форма сифилиса IgM IgG

п % КП, М±ш п % КП, М±т

Первичный (I группа) п-31 + ± 22 9 0 70,9 ±8,2 29,1 ± 8,2 0 2,29 ±0,19 0,98 ±0,08 0 + ± 17 12 2 54,8 ± 8,9 38,7 ±8,7 6,5 ± 4,4 2,2 ±0,15 0,98 ±0,10 0,84 ±0,08

Вторичный свежий (II груша) п=34 + ± 11 16 7 32,3 ± 8,0 47,1 ± 8,3 20,6 ±6,9 2,54 ±0,24 1,02 ±0,02 0,82 ±0,02 + ± 19 15 0 55,9 ±8,5 44,1 ±8,5 0 2,25 ±0,17 0,96 ±0,10 0

Вторичный рецидивный (III группа) п=36 + ± 0 5 31 0 13,9 ±5,7 86,1 ±5,8 0 0,97 ±0,02 0,60 ±0,05 + ± 28 7 1 77,8 ±6,9 19,4 ±6,6 2,8 ±2,7 2,36 ±0,20 0,99 ±0,10 0,85 ±0

Скрытый ранний (IV группа) п=41 + ± 0 5 36 0 12,2 ±5,1 87,8 ± 5,1 0 0,97 ±0,02 0,54 ±0,09 + ± 18 23 0 43,9 ±7,6 56,1 ±7,6 0 2,3 ±0Д1 1 ± 0,10 0

Примечание. «+» положительный, «±» сомнительный, «-» отрицательный результат ИФА.

Таким образом, можно согласиться с мнением авторов, справедливо рассматривающих ИФА как наиболее перспективный для практического здравоохранения метод диагностики различных форм сифилиса. Однако, высокая доля результатов, «сомнительно» характеризующих выраженность иммунного ответа при сифилисе при определении IgM и IgG на разных стадиях развития заболевания, требует проведения дополнительных подтверждающих исследований (рис. 1). В значительной степени преодолению этих негативных моментов способствует разработанная нами оригинальная методика, основанная на использовании стафилококкового белка А.

Теоретической основой для ее разработки послужили накопленные в последнее время сведения о диагностической ценности определения в серологических исследованиях не только класс-принадлежности иммуноглобулинов, но и подклассов IgG. У больных первичным сифилисом специфические антитела к Т. pallidum представлены только IgM и IgGi (Офицеров, 2004). При активных формах вторичного сифилиса основное количество антитрепонемных антител относятся к подклассам Gi и G3 (Losy, 1998). «Магнитная» технология аффинного разделения систем, когда лиганд иммобилизуется на магнитной матрице, а осаждение последней вместе с выделяемым продуктом осуществляется магнитным полем, широко применяется за рубежом, однако в отечественной практике такие системы почти не используются. В Пермском НПО «Биомед» исследуются возможности получения сорбентов на суперпарамагнитной ферроматрице с различными биоактивными лигандами. В частности, в объединении создан препарат «Сангвидет», составной частью которого является магнитный сорбент с иммобилизированными белок А-содержащими клетками золотистого стафилококка для определения скрытой крови в фекалиях человека в реакции коагглютинации. Именно этот сорбент, любезно предоставленный нам сотрудниками лаборатории комбинированных вакцин (зав. отделом д. б. н. А. М. Николаева), позволил разработать и успешно апробировать способ (Приоритетная справка № 2004125573 о выдаче Патента на изобретение РФ от 20.08.2004), сущность которого заключается в определении в сыворотке крови методом ИФА антитрепонемных антител до и после ее обработки

магнитным сорбентом, который позволяет проводить аффинное выделение подклассов иммуноглобулина G за счет

Fc-рецепторных свойств лиганда и обладает высокой специфической активностью — 1 мл магнитного сорбента связывает не менее 1 мг IgG

Рис. 1. Доли сомнительных результатов в ИФА с раздельным определением IgM и IgG у больных различными формами сифилиса.

нормальной сыворотки человека. Данный реагент для диагностики сифилиса ранее не использовался.

Способ осуществляется следующим образом. Проводится подбор оптимального соотношения реагента для истощения сывороток. Для этого к возрастающим количествам магнитного сорбента добавляют определенное количество сыворотки, содержащей IgG, и затем с помощью магнита проводят разделение суспензии на

жидкую и твердую фазы. Определяют остаточное количество IgG в надосадочной жидкости. Выбирают оптимальное количество сорбента, которое соответствует минимальному остаточному количеству IgG в истощенной сыворотке. У больного определяют класс-принадлежность иммуноглобулинов в ИФА в нативной сыворотке с использованием стандартных тест-систем (предварительный диагноз). Затем «истощают» нативную сыворотку. Осаждение твердой фазы, с адсорбированными IgG с помощью магнита существенно ускоряет процесс. При этом количество IgM в растворе остается неизменным, но может существенно снижаться содержание IgG за счет удаления подклассов IgGi, IgG2 и IgG4. С одной стороны это позволяет выявлять минимальные количества IgM, которые маскируются при избытке IgG, в том числе иной специфичности, с другой — обнаруживать IgGs — маркеры вторичного рецидивного сифилиса.

В целях повышения эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе ИФА мы применили представленный выше метод иммуносорбции. Для этого параллельные образцы сывороток 142 больных были подвергнуты обработке магнитным сорбентом и после этого повторно испытаны в ИФА с раздельным определением IgM и IgG. Для характеристики концентрации антител в ИФА использовали коэффициент позитивности (КП), равный отношению оптической плотности (ОП), полученной для каждого образца, к критической ОП (Приказ №87 МЗ РФ, 2001). КП у положительных образцов выше 1,1, сомнительных — в интервале от 0,9 до 1,1 и отрицательных — ниже 0,9.

Анализ полученных данных показал (табл. 4), что в результате обработки образцов сывороток магнитным сорбентом при определении IgM в ИФА у всех больных первичным сифилисом (I группа) были зарегистрированы только положительные результаты с исчезновением сомнительных и одновременным увеличением величин КП. У больных вторичным свежим сифилисом (II группа) возросло количество положительных результатов с одновременным снижением сомнительных и исчезновением отрицательных результатов. Величины КП при этом существенно не изменились. В III группе больных вторичным рецидивным сифилисом показатели результативности достоверно не изменились. В IV группе больных скрытым ранним сифилисом возросло количество отрицательных результатов регистрации IgM при отсутствии сомнительных и положительных.

Результаты исследования сывороток больных различными формами сифилиса в ИФА с определением IgM до и после обработки магнитным сорбентом

Форма сифилиса I gM до обработки IgM после об >аботки

п % КП, М±т п % КП,М±т

Первичный + 22 70,9 ±8,2 2,29 ±0,19 + 31 100 ±0" 2,98 ±0,28**

(I группа) ± 9 29,1 ± 8,2 0,98 ± 0,08 ± 0 0" 0**

- 0 0 0 - 0 0 0

Вторичный свежий + 11 32,3 ± 8,0 2,54 ±0,24 + 31 91,2 ±4,9" 2,52 ±0,15

(И группа) ± 16 47,1 ± 8,3 1,02 ±0,02 ± 3 8,8 ±4,9** 1,08 ±0,02

- 7 20,6 ±6,9 0,82 ±0,02 - 0 0" 0**

Вторичный рецидивн. + 0 0 0 + 0 0 0

(III группа) ± 5 13,9 ±5,7 0,97 ±0,02 ± 2 5,6 ±3,8 1,05 ±0,06

- 31 86,1 ±5,8 0,60 ±0,05 - 34 94,4 ±3,8 0,46 ±0,04

Скрытый ранний + 0 0 0 + 0 0 0

(IV группа) ± 5 12,2 ±5,1 0,97 ±0,02 ± 0 0* 0**

- 36 87,8 ±5,1 0,54 ±0,09 - 41 100 ±0* 0,37 ±0,06

Примечания. «+» положительный, «±» сомнительный, «—» отрицательный результат ИФА;* — Р<0,05,** — Р<0,01 — по критерию Стьюдента до и после обработки магнитным сорбентом.

При определении ^О анализ полученных данных показал (табл. 5), что у больных первичным сифилисом после обработки сывороток магнитным сорбентом снижается количество положительных и сомнительных результатов при возрастании количества отрицательных результатов со снижением величин КП. У больных вторичным свежим сифилисом возрастает количество положительных и снижается количество сомнительных результатов без изменения величин КП сывороток. У больных вторичным рецидивным сифилисом не происходит количественных изменений результативности, а также величин КП. В сыворотках больных ранним скрытым сифилисом после обработки сорбентом наряду с уменьшением положительных и сомнительных результатов возрастает количество отрицательных результатов определения ^О, со снижением средней величины КП в группе.

Результаты исследования сывороток больных различными формами сифилиса в ИФА с определением до и после обработки магнитным сорбентом

IgG до обработки IgG после обработки

Форма сифилиса п % КП, М±т п % КП, М±ш

Первичный + 17 54,8 ±8,9 2,2 ±0,15 + 1 3,2 ±3,1** 1,46 ±0**

(I группа) ± 12 38,7 ± 8,7 0,98 ±0,10 ± 4 12,9 ±6,0* 0,94 ± 0,2

- 2 6,5 ±4,4 0,84 ±0,08 - 26 83,9 ±6,6** 0,49 ±0,04**

Вторичный + 19 55,9 ±8,5 2,25 ±0,17 + 30 88,2 ± 5,5** 2,05 ±0,11

свежий (II группа) ± 15 0 44,1 ± 8,5 0 0,96 ±0,10 0 ± 4 0 11,8 ± 5,5** 0 0,91 ±0,10 0

Вторичный + 28 77,8 ±6,9 2,36 ±0,20 + 33 91,7 ±4,6 2,27 ±0,18

реиидивн. (III груша) ± 7 1 19,4 ±6,6 2,8 ±2,7 0,99 ±0,10 0,85 ±0 ± 3 0 8,3 ± 4,6 0 1 ±0,10 0

Скрытый + 18 43,9 ±7,6 2,3 ±0,21 + 2 4,9 ±3,4** 1,31 ±0,18**

ранний ± 23 56,1 ± 7,6 I ± 0,10 ± 5 12,2 ±5,1** 0,93 ±0,10

(IV группа) - 0 0 0 - 34 82,9 ± 5,9** 0,56 ±0,03**

Примечания. «+» положительный, «±» сомнительный, «-» отрицательный результат ИФА;* — Р<0,05,** — Р<0,01 — по критерию Стьюдента до и после обработки магнитным сорбентом.

Нам представляется, что в основе выявленных изменений лежит способность использованного иммуносорбента извлекать из сывороток подклассы оставляя

На основании изложенного мы предлагаем следующую схему оценки результатов выявления IgM и И^в, а также их подклассов в ИФА с применением предложенного метода иммуносорбции для дифференциации различных форм сифилиса (табл. 6).

Таким образом, наличие в сыворотках больных после обработки магнитным сорбентом ^М свидетельствует о первичном сифилисе, ^М и 1§Оэ — о вторичном свежем, только ^Сз — о вторичном рецидивном сифилисе. Выявление только в нативной сыворотке и исчезновение их после обработки сорбентом свидетельствует о раннем скрытом сифилисе.

Определение формы сифилиса по предлагаемой методике

Форма сифилиса I этап (ИФА нативной сыворотки) II этап (ИФА сыворотки, обработанной магнитным сорбентом)

1йМ ДО ДО

Первичный сифилис положительно положительно или сомнительно положительно отрицательно

Вторичный свежий сифилис положительно или сомнительно положительно или сомнительно положительно положительно (ДОЗ)

Вторичный рецидивный сифилис отрицательно положительно отрицательно положительно (ДОЗ)

Ранний скрытый сифилис отрицательно положительно или сомнительно отрицательно отрицательно

Истощающая сорбция иммунных сывороток позволила значительно повысить эффективность использования ИФА с раздельным определением ^М и ^О в дифференциальной серологической диагностике различных форм сифилиса. Такая дополнительная процедура способствует конкретизации получаемых результатов и повышает возможности ИФА-диагностики при оценки «давности» сифилитической инфекции, особенностей динамических изменений гуморального иммунитета. Применение этой методики позволило нам в целом ряде случаев уточнить стадию заболевания и на этой основе рационализировать проводимую терапию.

вывод ы

1.3а последние 15 лет в динамике эпидемического процесса сифилиса на территории Пермской области выявлено 3 периода. До 1993 г. показатели уровня заболеваемости были минимальными (42,2 на 100 тыс. населения), в 1993-1996 гг. отмечался значительный подъем уровня заболеваемости (465,5 на 100 тыс. населения), при доминирующем положении вторичных форм инфекции (до 40,1 %). В период снижения уровня заболеваемости (с 1997 г.) выявлена устойчивая тенденция повышения удельного веса скрытых форм сифилиса (до 39 %).

2. Серологическая диагностика с использованием И ФА с раздельным определением IgM и IgG характеризуется наиболее высокой информативностью и является важным уточняющим компонентом клинико-лабораторного комплекса при обследовании больных, госпитализированных в кожно-венерологический стационар с диагнозом «сифилис».

3. Современная клиническая картина сифилиса характеризуется: увеличением частоты язвенных форм первичного аффекта с частой экстрагенитальной его локализацией, во вторичном периоде — увеличением частоты папулезных сифилидов, поражений слизистых оболочек и сифилитической алопеции, а также отсутствием проявлений сифилиса на коже и слизистых у большинства пациентов (ранний скрытый сифилис).

4. Истощающая сорбция иммунных сывороток, основанная на аффинном выделении 1{£С], и 18^4 за счет Fc-рецепторных свойств белка А золотистого стафилококка, иммобилизированного на суперпарамагнитной ферроматрице, позволяет значительно повысить эффективность диагностики различных форм сифилиса на основе ИФА.

5. При наличии у пациентов кожно-венерологического стационара характерных клинических проявлений сифилиса в качестве подтверждающих диагноз тестов достаточно использовать РПГА или ИФА. При стертой клинике или асимптомном течении заболевания целесообразен ИФА с раздельным определением классов иммуноглобулинов в сыворотках, предварительно обработанных с помощью магнитного сорбента с иммобилизированными белок А-содержащими клетками золотистого стафилококка, по предлагаемой оригинальной методике.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Увеличение удельного веса скрытых форм в картине общей заболеваемости сифилисом определяет необходимость усиления профилактических мероприятий, направленных на предотвращение возможного повышения ее уровня в ближайшие годы, в том числе расширения перечня лиц, подлежащих обследованию на сифилис.

2. В связи с изменениями в клинической картине сифилиса на современном этапе и увеличением доли малосимптомных форм инфекции, необходимо уделять пристальное внимание методам его клинической диагностики. На разных стадиях инфекционного процесса диагностика сифилиса должна включать специфический комплекс клинических и лабораторных тестов.

3. Всем больным ИППП необходимо проводить комплексное обследование на сифилис с использованием специфичных трепонемных тестов. Для этого наиболее целесообразно использовать иммуноферментные тест-системы. ИФА обладает высокой чувствительностью, специфичностью и воспроизводимостью. Метод легко поддастся автоматизации, что весьма удобно при обследовании крупных контингентов, позволяет проводить определение не только суммарных антитрепонемных иммуноглобулинов, но и отдельно классов О и М, что имеет определяющее значение для диагностики ранних форм сифилиса (в том числе врожденного) и реинфекции.

4. Для диагностики сифилиса в условиях специализированного стационара рекомендуется использование иммуноферментного анализа с раздельным определением иммуноглобулинов классов М и О. Применение разработанной оригинальной методики с предварительной обработкой сыворотки крови магнитным сорбентом способствует повышению эффективности дифференциальной диагностики различных форм сифилитической инфекции на основе ИФА.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Коломойцев А. В., Карпунина Т. И. Клинико-эпидемиологические особенности заболеваемости сифилисом в г. Перми//Актуальные проблемы уретрогенных инфекций, передаваемых половым путем. Новые лекарственные препараты в дерматовенерологической практике: Матер. научно-практ. конф.— Москва, 2003.—С. 53-54.

2. Коломойцев А. В. Клинико-эпидемиологическая характеристика сифилиса в г. Перми/ДТ Российский съезд врачей-инфекционистов: Мат. съезда.— Санкт-Петербург, 2003.— С. 179.

3. Коломойцев А. В., Карпунина Т. И., Сергевнин В. И. О тенденциях эпидемического процесса сифилиса в последние годы//Матер. Всерос. научн. конф., посв. 105-летию Пермского НПО «Биомед».— Пермь, 2003.— С. 100-103.

4. Коломойцев А. В., Карпунина Т. И. Совершенствование лабораторной диагностики скрытых форм сифилиса//Х1 Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл.— Москва, 2004. С. 446.

5. Карпунина Т. И., Коломойцев А. В., Сперанская В. Н. О возможности дифференцирования различных форм скрытого сифилиса в серологических тестах // Медицинская микробиология — XXI век: Мат. Всерос. научно-практ. конф.— Саратов, 2004.— С. 111-112.

6. Коломойцев А. В., Елькин В. Д., Карпунина Т. И. Совершенствование серологической диагностики скрытых форм сифилиса // Материалы научной сессии 2004 года.— Пермь — Ижевск, 2004.—С. 102-103.

7. Коломойцев А. В. Дифференцировка различных форм скрытого сифилиса в серологических тестах//Вестник новых медицинских технологий.— 2004.— № 4.— С. 88-89.

8. Коломойцев А. В., Карпунина Т. И., Сперанская В. Н. Способ диагностики сифилиса//Приоритетная справка № 2004125573 о выдаче Патента на изобретение РФ от 20.08.2004.

КОЛОМОЙЦЕВ Александр Владимирович

ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ДИАГНОСТИКИ

РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ СИФИЛИСА НА ОСНОВЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Лицензия ПД-11-0002 от 12.12.99

Подписано в печать 17.02.2005. Формат 60 х 90/16 Усл. печ. л. 1,31 Тираж 100 экз. Заказ 188/2004.

Отпечатано на ризографе в отделе Электронных издательских систем ОЦНИТ Пермского государственного технического университета 614600, г. Пермь, Комсомольский проспект, 29а, к. 113 т. (3422) 198-033

(

2 2 f'AP 2C35 *

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Коломойцев, Александр Владимирович

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Микробиологическая характеристика Treponema pallidum

1.2. Патогенез и клинико-эпидемиологические аспекты сифилиса

1.3. Механизмы иммунитета при сифилисе

1.4. Серологические методы диагностики сифилиса

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследования

2.2. Методы исследования

Глава 3. КЛИНИКО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ СИФИЛИСА НА ТЕРРИТОРИИ ПЕРМСКОЙ ОБЛАСТИ

3.1. Анализ заболеваемости сифилисом в Пермской области

3.2. Клиническая характеристика обследованных больных

Глава 4. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТИВНОСТИ

СЕРОЛОГИЧЕСКИХ ТЕСТОВ И ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИФА В ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ

РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ СИФИЛИСА

4.1. Сравнительная оценка результатов регламентированного серологического обследования

4.2. Повышение эффективности ИФА с раздельным определением

IgM и IgG в серологической диагностике различных форм сифилиса

4.3. Анализ индивидуальных особенностей результативности регистрации IgM и IgG в ИФА при различных формах сифилиса

Введение Диссертация по биологии, на тему "Повышение эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа"

Актуальность проблемы. Инфекции, передающиеся половым путем (ШИШ), остаются важной медико-социальной проблемой, нанося обществу значительный экономический и демографический ущерб (Кисина В.И., 2003). Сифилис - одна из наиболее серьезных И11Ш1, характеризующаяся длительным стадийным течением и развитием отдаленных осложнений. В 90-х годах XX столетия в России отмечался значительный рост заболеваемости сифилисом, достигший своего пика в 1997 г. (277,3 случая на 100 тыс. населения) (Никифоров Б.Н., 2003). На фоне наметившейся в последние годы тенденции к снижению заболеваемости, особую настороженность вызывают изменения, происходящие в структуре и клинических проявлениях данной инфекции [1,34,43,53,61,67,95,96,122,146]. Неутешительным фактом следует считать увеличение доли скрытых форм сифилиса [2,9,35,54,68,75,93,98,102,132,140,148]. Ввиду учащения случаев с мало- и бессимптомным течением заболевания, трудности при установлении диагноза могут возникать и на ранних манифестных его стадиях (первичный, вторичный сифилис).

Лабораторная диагностика сифилиса представлена достаточно широким спектром тестов, включающем микроскопическое обнаружение возбудителя в отделяемом эрозивно-язвенных элементов, выявление антител к трепонемным и нетрепонемным антигенам, ДНК-диагностику [17,28,29,30]. Зачастую антитела к Treponema pallidum начинают регистрироваться на второй неделе после инфицирования, однако большинство серологических тестов не обладают необходимой чувствительностью, прежде всего на ранних сроках заболевания [8,20,28,29,102]. Среди специфических серологических методов, позволяющих успешно диагностировать сифилис, наиболее перспективным является иммуноферментный анализ (ИФА), с помощью которого удается проводить раздельное определение IgM и IgG [25,26,27,38,48,52,85,117]. Несмотря на сравнительно широкое и уже довольно длительное применение в практике сифилидологии тест-систем

ИФА для раздельного и суммарного определения иммуноглобулинов, диагностическую значимость этих реакций и, в первую очередь ИФА- IgM, еще предстоит определить [20,27,39,49,52,137,145,156].

Наличие в структуре общей заболеваемости сифилисом высокого удельного веса вторичных и скрытых форм указывает на сохранение в России неблагоприятной эпидемиологической обстановки [11,13,36,59,73]. Вместе с тем течение инфекции в разных регионах имеет особенности, связанные с различными социально-экономическими, демографическими и т.п. условиями в них, что определяет необходимость изучения клинико-эпидемиологической картины на отдельных территориях [14,15,21,33,65,94,95,96,104,107,113]. Наблюдающийся в настоящее время рост малосимптомного и скрытого сифилиса, трудности при трактовке результатов серологического обследования, повышают значимость дифференцированной оценки показателей гуморального иммунитета и требует совершенствования методов серологической диагностики, как единственно возможной при этих формах.

Цель исследования - изучение клинико-эпидемиологических особенностей сифилиса на территории Пермской области и повышение эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа.

Основные задачи исследования

1. Оценить клинико-эпидемиологическую картину заболеваемости сифилисом на территории Пермской области.

2. Оценить степень результативности комплексного серологического обследования больных с применением различных методов диагностики.

3. Провести анализ клинических особенностей различных форм сифилиса.

4. Разработать способ повышения эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа.

Научная новизна исследований. Впервые по данным официальной регистрации заболеваний проанализированы основные проявления эпидемического процесса сифилиса в областном центре в период низкой заболеваемости, ее роста и на фоне снижения в последние годы. Установлено, что лидирующее положение в структуре заболеваемости как в годы с минимальным уровнем, так и на ее подъеме занимал вторичный сифилис. В период спада общей заболеваемости (начиная с 1997 г.), происходившего в основном за счет первичного и вторичного сифилиса, показатели заболеваемости скрытыми формами инфекции увеличивались до 1998 г., а их снижение с 1999 г. происходило менее интенсивно. Это позволило предположить, что именно данная клиническая форма обеспечивает резервацию и сохранение возбудителя сифилиса в межэпидемический период, а при неудовлетворительном уровне ее диагностики может способствовать последующему распространению инфекции среди населения.

Впервые на большом клиническом материале проведена сравнительная оценка диагностической значимости серологических тестов с нетрепонемными и трепонемными антигенами на разных стадиях инфекционного процесса. Показано, что иммуноферментный анализ с раздельным определением специфических IgM и IgG характеризуется наиболее высокой информативностью.

Впервые предложена и апробирована оригинальная методика, способствующая повышению эффективности ИФА в дифференциальной серологической диагностике наиболее распространенных форм сифилиса, предполагающая аффинное выделение иммуноглобулина G, преимущественно подклассов IgG], IgG2 и IgG4 за счет Fc-рецепторных свойств магнитного сорбента с иммобилизированными белок А-содержащими клетками стафилококка штамма Cowan I.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные расширяют представления о клинико-эпидемиологических особенностях сифилиса на фоне высокой и низкой заболеваемости. Прослеженная средне-многолетняя динамика различных форм сифилитической инфекции указывает на существенную роль скрытого сифилиса в поддержании неблагополучной эпидемической обстановки по ИППП на территории Пермской области в последние годы. Выполненные исследования могут служить теоретическим обоснованием при разработке профилактических противоэпидемических мероприятий, совершенствовании диагностических и терапевтических схем на разных стадиях развития инфекционного процесса.

Практическая значимость работы заключена в том, что на большом клиническом материале показана целесообразность соблюдения принципа комплексности проводимого серологического обследования с оценкой его показателей в динамике наблюдения. Использование предложенной и апробированной оригинальной методики ИФА, основанной на дополнительной обработке исследуемых сывороток стафилококковым реагентом, может способствовать дифференциальной диагностике различных форм сифилиса и минимализации диагностических ошибок при серологическом обследовании больных (Приоритетная справка № 2004125573 на выдачу Патента на изобретение РФ от 20.08.2004).

Положения, выносимые на защиту

1. На территории Пермской области, как при минимальном уровне заболеваемости (до 1993 г.), так и при его подъеме (1993-1996 гг.), доминируют вторичные формы сифилиса. С 1998 г. в структуре заболеваемости выявляется устойчивая тенденция повышения удельного веса скрытых форм сифилиса.

2. Наряду с увеличением удельного веса скрытых форм сифилиса выявляются определенные изменения в клинической симптоматике манифестных форм данного заболевания.

3. Использование в качестве сорбента аффинно очищенного белка А золотистого стафилококка, иммобилизированного на суперпарамагнитной ферроматрице .(пр-во НПО «Биомед», Пермь) обеспечивает возможность дифференцированного определения подклассов IgG и способствует повышению эффективности диагностики различных форм сифилиса на основе иммуноферментного анализа.

Апробация работы и публикации. Основные положения работы доложены и обсуждены на заседании Пермского филиала Всероссийского общества дерматовенерологов, 2003, 2004; VI Российском съезде врачей-инфекционистов, Санкт-Петербург, 2003; Научно-практической конференции «Актуальные проблемы уретрогенных инфекций, передаваемых половым путем. Новые лекарственные препараты в дерматовенерологической практике», Москва, 2003; XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, 2004; Научной сессии ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия МЗ РФ», Пермь - Ижевск; 2004; Всероссийской научно-практической конференции «Медицинская микробиология - XXI век», Саратов, 2004. Диссертация апробирована на расширенном 'заседании кафедр микробиологии и дерматовенерологии (Протокол № 209 от 21.12.2004 г.). По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 4 статьи.

Внедрение в практику. Результаты настоящей работы внедрены в практику ГУЗ «Пермский областной кожно-венерологический диспансер», МУЗ «Пермский городской кожно-венерологический диспансер», ГУЗ «Пермская областная клиническая больница» и используются в учебном процессе на кафедрах дерматовенерологии и микробиологии с курсом вирусологии и иммунологии ГОУ ВПО «ПГМА МЗ и CP РФ».

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 149 страницах машинописного текста, содержит 20 рисунков, 17 таблиц и 16 фотографий. Диссертация состоит из введения, обзора данных литературы, описания материалов и методов исследования, двух глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, приложения и списка цитируемой литературы, содержащего 204 литературных источников, из них 119 отечественных и 85 зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Коломойцев, Александр Владимирович

ВЫВОДЫ

1. За последние 15 лет в динамике эпидемического процесса сифилиса на территории Пермской области выявлено 3 периода. До 1993 г. показатели уровня заболеваемости были минимальными (42,2 на 100 тыс. населения), в 1993-1996 гг. отмечался значительный подъем уровня заболеваемости (465,5 на 100 тыс. населения), при доминирующем положении вторичных форм инфекции (до 40,1%). В период снижения уровня заболеваемости (с 1997 г.) выявлена устойчивая тенденция повышения удельного веса скрытых форм сифилиса (до 39%).

2. Серологическая диагностика с использованием ИФА с раздельным определением IgM и IgG характеризуется наиболее высокой информативностью и является важным уточняющим компонентом кпинико-лабораторного комплекса при обследовании больных, госпитализированных в кожно-венер о логический стационар с диагнозом «сифилис».

3. Современная клиническая картина сифилиса характеризуется: увеличением частоты язвенных форм первичного аффекта с частой экстрагенитальной его локализацией, во вторичном периоде - увеличением частоты папулезных сифилидов, поражений слизистых оболочек и сифилитической алопеции, а также отсутствием проявлений сифилиса на коже и слизистых у большинства пациентов (ранний скрытый сифилис).

4. Истощающая сорбция иммунных сывороток, основанная на аффинном выделении IgG], IgG2 и IgG4 за счет Fc-рецепторных свойств белка А золотистого стафилококка, иммобилизированного на суперпарамагнитной ферроматрице, позволяет значительно повысить эффективность диагностики различных форм сифилиса на основе ИФА.

5. При наличии у пациентов кожно-венерологического стационара характерных клинических проявлений сифилиса в качестве подтверждающих диагноз тестов достаточно использовать РПГА или ИФА. При стертой клинике или асимптомном течении заболевания целесообразен ИФА с раздельным определением классов иммуноглобулинов в сыворотках, предварительно обработанных с помощью магнитного сорбента с иммобилизированными белок А-содержащими клетками золотистого стафилококка, по предлагаемой оригинальной методике.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Увеличение удельного веса скрытых форм в картине общей заболеваемости сифилисом определяет необходимость усиления профилактических мероприятий, направленных на предотвращение возможного повышения ее уровня в ближайшие годы, в том числе расширения перечня лиц, подлежащих обследованию на сифилис.

2. В связи с изменениями в клинической картине сифилиса на современном этапе и увеличением доли малосимптомных форм инфекции, необходимо уделять пристальное внимание методам его клинической диагностики. На разных стадиях инфекционного процесса диагностика 1 сифилиса должна включать специфический комплекс клинических и лабораторных тестов.

3. Всем больным ИППП необходимо проводить комплексное обследование на сифилис с использованием специфичных трепонемных тестов. Для этого наиболее целесообразно использовать иммуноферментные тест-системы. ИФА обладает высокой чувствительностью, специфичностью и воспроизводимостью. Метод легко поддастся автоматизации, что весьма удобно при обследовании крупных контингентов, позволяет проводить определение не только суммарных антитрепонемных иммуноглобулинов, но и отдельно классов G и М, что имеет определяющее значение для диагностики ранних форм сифилиса (в том числе врожденного) и реинфекции.

4. Для диагностики сифилиса в условиях специализированного стационара рекомендуется использование иммуноферментного анализа с раздельным определением иммуноглобулинов классов М и G. Применение разработанной оригинальной методики с предварительной обработкой сыворотки крови магнитным сорбентом способствует повышению эффективности дифференциальной диагностики различных форм сифилитической инфекции на основе ИФА.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Коломойцев, Александр Владимирович, Пермь

1. Аковбяи В.А. Характеристика эпидемиологических закономерностей, определяющих распространение заболеваний, передаваемых половым путем, в России/ В.А. Аковбяи, А.В. Резайкгша, Л.И.Тихонова II Вестн. дерматол. и венерол. 1998. №1. С.4-6.

2. Аковбяи Г. В. Бензатин бензил пенициллин (экстенциллин) в лечении раннего скрытого сифилиса: Автореф. дис. канд. мед. наук /Г.В. Аковбяи. Й. 1998. 14 с.

3. Антигенсвязывающие лимфоциты и антитела в диагностике сифилиса/ Б.В.Карачъник, Т.Г.Денисова, З.Б. Кешилева и др./ГШШП. 1999. № 5. С.34-36.

4. Аравийская Е. Р. Социальная и медико-психологическая характеристика болеющих сифилисом женщин/ Е.Р. Аравийская, Е.В. Соколовский!У Журн. дерматовенерол. икосметол. СПб., 1999. №1. С.53-58.

5. Артемьев М.И. ПДР-детекция Treponema pallidum в клинических материалах/ М.И.Артемьев, Н.А. Федоров, В.А.Максимов II Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний. М., 1998. С. 40-41.

6. Базиков И.А. Применение трипонемных магнитных иммуносорбентов в иммуноферментном анализе для диагностики сифилиса/ И.А. Базиков, И.С.Тюменцева, Е.Н.Афанасъев //Рос. журн. кожных и венерических болезней. 2000. №3. С. 44-46.

7. Базиков И.А. Эпидемиологические аспекты сифилиса на Ставрополье/ ИА.Базиков, В.В. Чеботарев II Рос. журн. кожных и венерических болезней. 2000. № 5. С. 43-46.

8. Борисенко К. К. Неспецифические положительные результаты131 1серологических реакций на сифилис. Количественные модификации современных серологических реакций: Метод, рекомендации/ К.К Борисенко. М. МЗ СССР, Ц1СВИ, 1990. 20 с.

9. Борисенко К.К. О классификации врожденного сифилиса/ К.К. Борисенко, М.В. Шапаренко, М.Б. Яцуха//ЗППП. 1995. №6. С.33-35.

10. Борисенко К.К. Особенности течения скрытых форм сифилиса/ К.К.Борисенко, И.Н. Винокуров, JI.M. Топоровский //Вест.дерматол. 1989. №11. С.25-29

11. Борисенко /CiC Современная тактика ведения беременных и детей, больных сифилисом/ К.К. Борисенко, O.K. Лосева, О.В.Доля //ИППП. 1999. №2. С. 14-17.

12. Буданова Н.П. Дифференциальная диагностика сифилиса скрытого раннего и позднего: Автореф. дис. канд. мед. наук/ Н.П. Буданова. М., 1979.

13. Васильев В.И., Пирогова Е.П., До.ютин А.И., Мешалкина JI.A. Матер, научн.-практ. конф. дерматовенерологической службы Кузбасса. Кемерово, 1998. С. 7-9.

14. Введенская Э.В. Особенности Течения сифилиса у больных туберкулёзом/ Э.В.Введенская, О.В.Ермак, Б.С.Кибрик//Т&з. 8-го Всерос. съезда дерматовенерологов. М., 2001. С. 127-8.

15. Венерические болезни/ И.З. Яговдик, М.В. Качук, A.M. Сосновский и др. Минск, 1998. 342 с.

16. Гамулина И А. Злокачественный эктиматозно-рупиоидный сифилис/ И.А. Гамулина, Ж.Я. Мореховская, А.Б.ЭпштейнНВестн. дерматол. и венерол. 1992. № 5. С.49-51.

17. Гигантские фигурные эктимы у больных вторичным рецидивным сифилисом/ М.В.Милич, М.В.Шапаренко, Л.В. Сущенко, Т.А. Асшашкиш Вестн. дерматол. и венерол. 1987. №10. С.72-75.

18. Гинцбург А.Л. Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний/ А.Л.Гиицбург, Ю.М. Романова!!

19. Клин. лаб. диагностика. 1998. № 2 . С. 35-39.

20. Головинов Э.Д. Эпидемиологические аспекты раннего скрытого сифилиса/ Э.Д. Головинов, Е.А. Готовкин II Вест.дерматол. 1988. №12. С. 59-61.

21. Гомулина Е.Б. Некоторые данные о раннем врожденном сифилисе (РВС) в Удмуртии/ Е.Б. Гомулина, О. А. Богуславская!I Новое в диагностике и лечении ЗППП и болезней кожи: Тез. докл. научн.-практ. конф. 22-23 октября 1997г. ML 1997. С. 145-146.

22. Гракович Р.И. Сифилитические эктимы на подошвах у больного злокачественным сифилисом/ Р.И. Гракович, А.И. Ломыскин //Вестн. дерматол. и венерол. 1988. № 5. С. 68-70.

23. Данилов С.И. Критерии диагностики, иммунокоррекция и реабилитация больных с серорезистентностью после лечения сифилиса: Автореф. дис. д-ра мед. наук/ С.И. Данилов. СПб. , 1998.

24. Данилов С.И. Новая концепция сёрорезистентности после лечения сифилиса/ С.И.Данилов, П.Г. Назаров //ИППП. 2000. №1. С. 16-19.

25. Диагностика, лечение и профилактика заболеваний, передаваемых половым путем: Метод, материалы/ Под ред. К.К. Борисенко. М.: Ассоциация САНАМ, 1997. 72с.

26. Диагностика, лечение и профилактика заболеваний, передающихся половым путем: Метод, материалы. М: Ассоциация САНАМ, 1998. 188 с.

27. Дмитриев Г.А. Современное состояние реакции пассивной гемагглютинации в серодиагностике сифилиса/ Г. А. Дмитриев, Г.Ф.Тимченко!I Кожн. и вен. болезни: Сб. научн. работ сотр. ЦКВИ,посвящ. 75-летию ин-та. М., 1996. С. 171-175.

28. Дмитриев. Г.А. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса. Ч. I/ Г.А Дмитриев, Е.Е. БрагинаИ Вестн. дерматол. 1996. №2. С. 29-33.

29. Дмитриев Г.А. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса. Ч. II / Г.А.Дмитриев, Е.Е. БрагинаП Вестн. дерматол. 1996. №3. С. 33-38.

30. Довжанский С.И. Клиническая оценка серорезистентности при сифилисе /С.И. Довжанский II Рус.мед.журн. 1998. Т.6, № 15. С. 977-980.

31. Довжанский С.И. Клинические проявления генетического иммунитета к сифилису . 1С.И.ДовЭ1санский, С.Н.Румянцев II Международный медицинский журнал. 2000. №4. С.78- 79.

32. Долотин А.И. Особенности клинической картины раннего врожденногосифилиса/ А.И. Долотин, Е.П.Пирогова, В.Н.Васильев II Матер, научн.tпракт. конф. дерматовенерологической службы Кузбасса. Кемерово, 1998. С. 14-15.

33. Захаров В.К. Некоторые аспекты патогенеза скрытого сифилиса/ В.К.Захаров И Актуальн. вопр. дерматол. и сифилидол. СПб., 1994. С. 7273.

34. Захаров С-.В. Нарушение клеточного и гуморального иммунитета у больных сифилисом и их коррекция рибомунилом/ С. В. Захаров!ГЖ. дерматол., косметол., сексопатол. 1999. №2. С.82-84.

35. Зуй Г.И. Случай эктиматозного рупиоидного сифилида/ Г.И. Зуй,

36. В.Н.Михайлов!I Вестн. дерматол. и венерол. 1981. №10. С.67-68.

37. Иммуноферментный анализ в серодиагностике сифилиса/ Г.АДмитриев, В.Н.Беднова, Г.А. Киселева, М.Ф. Латыпова // Кожн. и вен. болезни: Сб. научн. работ сотрудн. ЦКВИ, посвящ. 75-летию ин-та. М., 1996. С. 181187.

38. Иммуноферментный анализ для серодиагностики сифилиса: Пособие для врачей. М., 1997. 15 с.

39. Инфекции, передаваемые половым путем: Практическое руководство/ Ю.К.Скрипкин, А.А. Кубанова и др. М., 1999. С. 18—25.

40. Исследование сывороток больных сифилисом методом иммуноферментного анализа с использованием рекомбинантных антигенов/ А.А.Граэ/сданцева, Г.В.Кочиева, Г.Ф.Саволобова и др.II Иммунология. 1998. №4. С. 20-23.

41. К проблеме диагностики нейросифилиса/ В.И. Прохоренков, А.Б. Гринштейн и др. II Вестн. дерматол. и венерол. 1998. № 1. С.35-38.

42. К проблеме заболеваний, передаваемых половым путем, в Енисейском регионе Восточной Сибири/ В.И. Прохоренков, В.А. Скибщкий, М.В. Родиков, Ю.В. Карачева//ЗППП. 1997. №4. С.27-30.

43. К проблеме серологической резистентности при сифилисе/ А.Д.Юцковский, Н.В. Тихомирова, Я.А. Стафанович и др. //ИППП. -2000.-№1.-С. 23-28.

44. К проблеме терапии больных ранними формами сифилиса/ В.А. Молочков, Г.Ф.Романенко, Н.В. Будилова и др.Н Рос. журн. кожи и вен. болезней. 1999. №6. С.43-48.

45. Калугина О.Г. Ранний манифестный сифилис: современная клиника вторичного периода/О.Г. Калугина //ИППП. 2003. - №5. - С. 60-66.

46. Карачева Ю.В. О механизмах клинического полиморфизма сифилитической инфекции/ Ю.В.Карачева, В.А.Аковбян, В.И. Прохоренков //Вестн. дерматол. и венерол. 2002. №3. С.20-22.

47. Ким А.Э. HLA-антигены и характер иммунного ответа у больных скрытым сифилисом: Автореф. дис. канд. мед. наук/ А.Э. Ким. М., 2000. 19 с.

48. Ким А.Э. Актуальные проблемы дерматологии и венерологии/ А.Э.Ким, В.А.Аковбян, А. В.Резайкияа//Сборник научных работ. М., 2000. С. 37-38.

49. Кгш Э.Г. Особенности иммуногенетики и иммуногенеза при сифилисе (клинико-экспериментальные исследования): Автореф. дис. д-ра мед. наук/Э. Г.Ким. М., 1992. 31 с.

50. Клинико-эпидемиологическая характеристика сифилиса в Пермской области/ В Д. Елъкин В.Д., И.В.Фелъдблюм, Т.В. Ворожцова, О.Ю. Наумов II Рос.журн.кожных и венерических болезней. 2000. № 5. С. 4143.

51. Котровский А.В. Разработка и клиническая оценка методики постановки иммуноферментного анализа на поверхности твердофазного носителя для серодиагностики сифилиса: Автореф. дис. канд. мед. наук/1. A.В.Котровский. М., 1986.

52. Кошкин С.В. Некоторые показатели иммунитета у больного вторичным сифилисом с отрицательными серологическими реакциями/ С.В.Кошкин, ? Г.А.Зайцева, Т.В. Черемных // Вест, дерматол. 2003. № 6. С.53-55.

53. Кубасъ В.Г. Ложноположительные реакции в диагностике сифилиса/

54. B.Г.Кубась, О. П. Данилова //Матер. XXXIII научно-практич. конф. дерматовенерологов, акушеров-гинекологов и урологов Санкт-Петербурга. СПб., 1998. С. 27-28.

55. Куляш Г.Ю. О роли отрицательных результатов ИФА на IgM к Treponema pallidum в ошибках при диагностике и оценке эффективности лечения сифилиса/ Г.Ю. Куляш //ИППП. 2002. №2. С. 25-29.

56. Кунцевич Л Д. Частота и клинические особенности ИППП у женщин, находящихся в условиях учреждений исполнения наказаний (УИН)/ Л.Д.Кунцевич, Р.П.Боршевская, В.Р. Мишанов //Тез. 8-го Всерос. съезда дерматовенерологов. М., 2001. С. 115-116.

57. Лихтшаигоф А.З. Современные медико-социальные и организационные проблемы оказания медицинской помощи больным сифилисом и гонореей/ А.З. Лихтшаигоф, Д.А. Арапенков. СПб.: Изд-во ГПМА, 1999.68 с.

58. Лосева O.K. Эпидемиология, клиника, диагностика и лечение сифилиса: Руководство для врачей/ O.K. Лосева, А.Н. Ловенецкий. М., 2000. 62 с.

59. Лосева O.K. Современный нейрорифилис: клиника, диагностика, лечение/ O.K. Лосева, Э.Ш. Тактамышева // Рус. мед. журн. 1998. Т.6, № 15. С. 981-984.

60. Методические указания по профилактике и лечению сифилиса. М., 1999. 20 с.

61. МгиичМ.В. Эволюция сифилиса/М.В.Мгшич. М.: Медицина, 1987.

62. Никулин Н.К. Анализ заболеваемости сифилисом в учреждениях пенитенциарной системы/ Н.К.Никулин, И.Л. Шливко, А.К.ЧуринП ИППП. 2001. №4. С. 19-23.

63. Новая концепция формирования сёрорезистентности после лечения сифилиса! Оригинальные статьи //ИППП. 2000. № 2.

64. Новолодский В.Л. Эпидемиологические аспекты раннего скрытого сифилиса/В.Л. Новолодский II Здравоохр. Белоруссии. 1992. №3. С. 3041.

65. О врожденном сифилисе/ В.В. Чеботарев, Л.В. Павлик, Е.Е. Хачайчева и др. //Вестн. дерматол. и венерол. 1997. №1. С.41-44.

66. Онищенко Г.Г. Эпидемиологическая обстановка в России в 1991-1996 гг. по заболеваемости социально-обусловленными инфекционными заболеваниями/Г.Г.Онищенко!IЖ. микробиол. 1998. №1. С.24-35.

67. Особенности диагностики и лечения раннего сифилиса сосудов головного мозга/ Н.С. Потекаев, В.И. Шмырева и др. II Вестн. дерматол. и венерол. 1998. № 1. С.55-57.

68. Офицеров В.И. Подклассы иммуноглобулина G: возможностиtиспользования в диагностической практике/ В.И. Офицеров. Кольцово, 2004. 35 с.

69. Патология сосудов при антифосфолипидном синдроме: Клиника, диагностика, лечение/ Е.Л.Насонов, А.А. Баранов, Н.П.Шилкина, З.С.Алекберова. Ярославль, 1995. 180 с.

70. Писклакова Т.П. Вторичный сифилис: особенности течения на современном этапе/ Т.П.Писклакова, Ю.В. Ковалев, И.А. Летуновская II Рос. журн. кожн. и вен. бол. 1998. №5. С. 29-31.

71. Поздний врожденный сифилис у сестер/ А.П. Суворов, В.Ф. Оркил, А.Л.

72. Бакулев и др. //Российский журнал кожн. и вен. болезней. 2000. №1. С.43-44.

73. Потекаев Н.С. Заметки к этиологии и патогенезу сифилиса/ Н.С. Потекаев, С.Н. Потекаев I/Вестн. дерматол. 2002. №1. С.63—68.

74. Приказ МЗ РФ № 291 от 30.07.2001 «О мерах по предупреждению распространения инфекций, передаваемых половым путем».

75. Причины и факторы, способствующие развитию серологическойрезистентности после современного лечения сифилиса/ И.М.

76. Разнатовский, Е.В. Соколовский, Т.В. Красносельских и др. II Журн. 1дерматовенерол. и косметол. 1996. № 1. С.60-66.

77. Прохоренков В.И. Скрытый сифилис: современное состояние проблемы/ В.И.Прохоренков, С.Н.Шергин, Ю.В. Карачева //ИППП. 2000. №1. С. 915.

78. Прохоренков В.И. Соматотипы и течение сифилиса/ В.И. Прохоренков, Ю.В. Карачееа, С.Н. Шергин// Актуальные вопросы терапии инфекций,передаваемых половым путем, и хронических дерматозов: Тез. научн. работ. Екатеринбург, 2002. 169 с.

79. Прохоренков Е.И. Сифилис: Иллюстрированное руководство/ Е.И.Прохоренков. М.Медицинская книга, 2002. 297 с.

80. Родин ЮЛ. Персистенция бледной трепонемы и иммунитет при сифилисе/ ЮЛ. Родин//Вестн. дерматол. и венерол. 2000. №6. С.23-24.

81. Родионов А.Н. Сифилис: Руководство для врачей/ А.Н. Родионов. СПб., 1997. 288 с.

82. Самцов А.В. Клинические проявления первичного и вторичного сифилиса/ А.В. Самцов //Рус. мед. журн. 1998. Т.6, № 15. С.972-976.

83. Серодиагностика сифилиса/ И.ПМасеткин, JI.C. Резникова, Т.А.Лучникова, В.Д. Елькин. Пермь, 1977. 195 с.

84. Сивак В. В. Состояние иммунного статуса у заключённых, больных сифилисом/ В.В. Сивак// Тез. 1-го Конгр. дерматовенерологов России. СПб., 2003. Т. 2. С.70-71.

85. Сидорова Е.В. Значение определения противотрепонемных lgM-антител в серодиагностике сифилиса/ Е.В.Сидорова, В.Ф. Ляхов// ЗППП .1995. №4. С. И-14.

86. Случай позднего врожденного сифилиса/ К.К. Борисенко, O.K. Лосева, Т.Н. Грмако, О. В Доля //ИППП. 1999. №5. С. 42-43.

87. Соколовский Е. Оценка состояния иммунитета больных сифилисом на различных этапах развития инфекции/ Е. Соколовский, И. Фрейдлин// Журн. дерматовенерол. и косметол. 1996. № 1. С.39-55.

88. Способ дифференциальной диагностики раннего скрытого сифилиса и ложноположительных реакций на сифилис/ Н.В.Фриго, Т.А.Главинская, В.Д.Комарова, С.И.Новикова. Реферат заявки № 95107872/14. Бюлл.

89. Открытия и изобретения, 1997. 33с.

90. Сравнительная эффективность современных методов лечения раннего сифилиса/ А.Л. Машкгшейсон, С. А. Кутин, О.Л. Поздняков и др.// Вестн. дерматол. и венерол. 1997. №1. С.17-21.

91. Сравнительное изучение чувствительности и специфичности трех иммуноферментных тест-систем, предназначенных для выявления иммуноглобулинов класса М к возбудителю сифилиса/ Г.А.Киселева,

92. B.К.Ткачев, В.Н. Беднова и др./iВестн.дерматол. 2000. №4. С. 6—10.

93. Сурганова В.И. Эпидемиологические и клинико-диагностические аспекты раннего скрытого сифилиса: Автореф. дис. . канд. мед. наук/ В:И. Сурганова. Екатеринбург, 1998. 24 с.

94. Сухарев А.В. Клинико-иммунологические особенности течения сифилитической инфекции в современных условиях: Автореф. дис. канд. мед. наук /А.В. Сухарев. СПб., 1997. 23 с.

95. Тайц Б.М. Проблемы дерматовенерологической службы по профилактике ИППП в Санкт-Петербурге/ Б.М. Тайц, М.Е. Старченко, Т.С. Смирнова //Мат. XXXV науч.-практ. конф. дерматовенерологов и врачей смежных специальностей Санкт-Петербурга. СПб., 2000. С.4-5.

96. Тихомирова Н.В. Социально-эпидемиологические аспекты врожденного сифилиса в Приморье/ Н.В. Тихомирова, Е.А. Блохина// 31ЯШ. 1998. №1.1. C.26-21.

97. Тихонова Л.И. Обзор ситуации с ИППП. Анализ заболеваемости врожденным сифилисом в Российской Федерации/ Л.И. Тихонова ИППП(ЗППП). 1999. №1. С.15-19.

98. Тихонова Л.И. Общий обзор ситуации с инфекциями, передаваемымиполовым путем. Анализ заболеваемости врожденным сифилисом в Российской Федерации/ Л.И. Тихонова // Вестн. дерматол. 1999. № 2. С.4-7.

99. Тихонова Л.И. Прогнозирование заболеваемости различными формами сифилиса в Российской Федерации/ Л.И. Тихонова, Н.К.Привалова//Мж. XXXV науч.-практ. конф. дерматовенерологов и врачей смежныхспециальностей Санкт-Петербурга. СПб., 2000. С.5-6.i

100. Уровень иммунокомпетентных клеток у социально дезадаптированных больных сифилисом/ Ю.К.Скрипкин, А.В. Резайкина, В.П.Бухова, И.А. Усовецкий//Вестн. дерматол. 1999. №3. С.5—7.

101. Усовершенствование методов диагностики сифилиса при помощи определения антител к специфическим белкам возбудителя/ Р.Каур, X.CiL'ibM. ПВиидиревских, О. Шевчук//ЗППП. 1998. №4. С.21-22.

102. Фриго Н.В. Современные критерии дифференциальной диагностики раннего скрытого сифилиса и ложноположительных результатов стандартных серологических реакций на сифилис: Автореф. дис. д-ра мед. наук/Н.В. Фриго. М., 2001. 34с.

103. Фурнье А. Учение о сифилисе А. Фурнъе. М., 1899. С.100-101.

104. Хорват А. ИППП лакмусовая бумажка социальных проблем общества/ А. Хорват //Клин, дерматол. и венерол. 2003. № 3. С.4-7.

105. Хурадо Р.Л. Серология сифилиса: практический подход/ Р.Л. Хурадо II ЗППП. 1997. №3. С. 3-11.

106. Цераиди Н.Ф. Актуальные проблемы иммунитета при сифилисе /Н.Ф. Цераиди//Вестн. дерматол. и венерол. 1987. №2. С.13-17.

107. Чеботарёв ■ В.В. Результаты исследования течения сифилиса узаключённых/ В.В.Чеботарёв, В.В.Сивак, В.В.Тертъшникова/1 Тез. 1-го Конгр. дерматовенерологов России. СПб., 2003. Т.2. С.74-75.

108. Чеботарёв В.В. Серорезистентный сифилис современная актуальная проблема / В.В. Чеботарёв, Л.В. Павлик// Клин, дерматол. и венерол. 2003. №3. С. 19-22.

109. Шувалова Т.М. Клиническая и социально-эпидемиологическая характеристика женщин, родивших детей, больных врожденным сифилисом (сообщение И)/ Т.М. Шувалова, А.Г. Туманян, В.М. Юдакова //ИППП. 1999. №2. С. 18-21.

110. Шувалова Т.М. Сифилис у беременных в Московской области: клинико-эпидемиологические аспекты, тактика, прогноз / Т.М. Шувалова /Российский журнал кожных и венерических болезней. 2000. №2. С.52-59.

111. Шувалова Т.М. Эпидемиологические особенности заболеваемости сифилисом у беременных в Московской области (сообщение I) / Т.М. Шувалова, А.Г. Туманян, В.М. Юдакова //ИППП. 1999. №1. С.20-25.

112. Эпидемиологические закономерности распространения сифилиса в г. Кемерово/ О.М. Дроздова, В.В. Гольмгрейн, Г.С. Гранкина, Н.И. Медведева II Матер, научн.-практ. конф. дерматовенерологической службы Кузбасса. Кемерово, 1998. С. 16-17.

113. Эффективность экстенциллина в лечении раннего скрытого сифилиса/ Ю.К. Скрипкин, Г.В. Аковбян, Г.Е. Шамина, Л.А. Петренко// Вестн. дерматол. ивенерол. 1998. №1. С.32-34.

114. Янг X. Рекомендации по серологической диагностике сифилиса / X. Янг //ИППП. 2001. №3. С. 10-12.1118 .Яргаин А.А. Иммунорегуляция на уровне презентации антигена/ А.А. Яргиин//Шиуаоп. 1998. №6. С.26-26.

115. Ярилин А. А. Межклеточная кооперация при иммунном ответе. Выбор клеткой формы ответа/ А.А. Яртин// Иммунол. 1999. №1. С Л 7-24.

116. Active syphilis in HIV infection: A multicentre retrospective survey/ H. Schofer, M. Imhof, E. Thoma-Greber et al. //Genitourin. Med. 1996. Vol.72. P.176-181.

117. Akovbian V. Management of syphilis infected patients in Russia. Country paper for WHO/EURO project / V. Akovbian, E.Filatova. 2002 www.sti-taskforce.org/documents.html «ST1: case man agement».

118. Alter M.J. Epidemiology of hepatitis С/M.J. Alter// Hepatology.1999. Vol.26 (Suppl 1). S.25-S65.

119. American Academy of Pediatrics Committee on Child Abuse and Neglect. Guidelines for the evaluation of sexual abuse of children: subject review//Pediatrics. 1999. Vol.103. Р.186Л91.

120. American Cancer Society. Guidelines for the cancer related checkup. Atlanta, Georgia: American Cancer Society, 1998.

121. American College of Obstetricians and Gynecologists. Routine cancer screening: committee opinion 185. Washington, DC: American College of Obstetricians and Gynecologists, 1997. ,

122. An epidemic of congenital syphilis in Jefferson Country, Texas, 1994-1995: inadequate prenatal syphilis testing after an outbreak in adults/ K.L. Southwick, M. Guidiy, M.M.Weldon et al. II Am J. Public Health 1999. №89. P.557-560.

123. Assotiation of antimitochondrial antibodies type 5 and anti-beta 2 glycoprotein I antibodies in the antiphospholipid syndrome / N.Abuaf, O. Meyer etal. //J Rheumatol. 1994. Sep. Vol.21, №9. P.1678-1683.

124. Augenbraun M.H. Treatment of syphilis, 1998: Non pregnant adults/ M.H. Augenbraun, K. Rolfs//Clin. Infect. Dis. 1999. Vol.28(Suppl 1). S.21-28.

125. Augenbraun M.H. Treatment of syphilis: Nonpregnant adults /М.Н. Augenbraun//Clin. Infect. Dis. 2002. Vol.35(Suppl 2). P.l87-190.

126. Balachandran C. Perforation of hard palate in lues maligna associated with HIV infection/ C. Balachandran, L. Sabita, G.R. Kanthzaj// Generation Med.г1997. Vol.73, №3. P. 225-229.

127. Blanko D.R. Surface antigens of the Syphilis Spirochaete and their potential as virulence determinants/ D.R. Blanko, J.N. Miller, M.A.Lovett// Emerg Infect. Dis. 1997. Jan—March. Vol.3, №1. P.ll-20.

128. Borobio M. V. The assotiation of false-positive rapid plasma reagin results and HIV infection/ M. V. Borobio, J.M.Arquez, E.J. Perea //Sex Transm Dis.1998. Nov. Vol. 25, №10. P. 569-571.

129. Brocklehurst P. Update on the treatment of sexually transmitted infections in pregnancy-1 IP. Brocklehurst!IInt J. STD AIDS.1999. Vol.10. P.571-580.

130. Brockmeyer N.H. Syphilis/ N.H. Brockmeyer ;Eds. D.Petzoldt, G.Gross //Diagnostik mid Therapie sexuell Obertragbarer Krankhaten-Leitlinien. 2001 dsr Deutschen STD Gesellschaft. Berlin: Springer Verlag, 2001. 101 p.

131. Case definitions for infectious conditions under Public health surveillance. U.S. Department of Health and Human Services. Public Health Service. Centers forDise ase Control, Atlanta, Georgia, USA. MMWR, 1997. 46 (No.144 ,1. RR-10).

132. Cause of oral ulcers in HIV-infected patients: a study of 19 cases/ S. Piluso, G. Ficarra, G.M. Lucatorto et al// Oral Surg., Oral Med., Oral Pathol., Oral Radial Endod. 1996. Vol. 82, №2. P.166-172.

133. CDC. Public Health Service guidelines for the management of health care worker exposures to HIV and recommendations for post-exposure prophylaxis. MMWR 1998.47(No. RR-7). P.l-33.

134. CDC. Recommendations for prevention and control of hepatitis С virus (HCV) infection and HCV-related chronic disease. MMWR 1998.47(No.RR-19). P.l-39.

135. Center for Disease Control and Prevention. Congenital syphilis United States, 2000. MMWR 2001. Vol.50. P.573-577.

136. Center for Disease Control and Prevention. Guidelines for treatment of sexually transmitted diseases. MMWR 1999. Vol.52. P.473-7.

137. Centers for Disease Control and Prevention. Sexually transmitted diseases treatment guidelines 2002. MMWR 2002. Vol. 51. P.18-28 www. cdc. go v/std/treatment/.

138. Congenital syphilis after treatment of maternal syphilis with a penicillin regimen exceeding CDC guidelines/C.S.Conover, СЛ. Rend, G.B. Jr. Miller, G.P. Schmid//Infect Dis. Obstet Gynecol. 1998. Vol.6, №3. P.134-137.

139. Congenital syphilis surveillance and newborn evaluation in a low-incidence state/ D. Martin, J.Bertrand, C. McKegney et al. //Arch. Pediatr. Adolesc. Med. 2001. Vol.155. P. 140.

140. Contreras M.A. False positive treponemal test result in a patient with active systemic lupus erythematosus// M.A. Contreras //J. Rheumatol. 2000. Vol.27, №8. P. 2059.

141. Effects of human immunodeficiency virus 1 infection on microbial origins of pelvic inflammatory disease and on efficacy of ambulatory oral therapy// E.A. Bukesi, C.R. Cohen, C.E. Stevens et al!IAm J. Obstet Gynecol. 1999. Vol.18. P.1374-1381.

142. Efficacy of treatment for syphilis in pregnancy/ J.M. Alexander, J.S. Sheffield, P.J. Sanchez et al. II Obstet Gynecol. 1999. Vol.93. P.5-8

143. Emmons W.W. Syphilitic uveitis/ W. Ж. Emmons, L.W. Church// West-J-Med.1994. Vol.161, №2. P.168-171.

144. Engelkens H.J. Syphilis in the AIDS era/ H.J.Engelkens, J.J. van der Sluis, E. Stolz// Int J. Dermatol. 1991. Vol.30. P.254-256

145. Epidemics of syphilis in the newly independent states of the former Soviet Union/ A.M. Renton, K.K. Borisenko, A. Mehens et al.// Sex Transm. Infect. 1998. Vol.' 74. P.l65-166.

146. Epidemics of syphilis in the Russian Federation: trends, origins and priorities for control/ L. Tlchonova, K. Borisenko, H. Ward et al. //Lancet. 1997. №350. P.210-213

147. Ernst A.A. High syphilis rates among cocaine abusers identified in an energency department/ A.A. Ernst, D.N. Martin //Sex Transm Dis. 1993. Vol.20, №2. P. 66-69.

148. Escherichia coli 0157 serology: false-positive ELISA results caused by human antibodies binding to bovine serum albumin/ H. Chart, J.Evans, R.M.Chalmers, R.L. Salmon// Leff Appl Microbiol. 1998. Aug. Vol. 27, №2. P. 76-78.

149. False-positive reaction between syphilis an hepatitis С infection/ E.Sonmez, I.H.Ozerol, M. Senol et al. //Isr. J. Med. Sci. 1997. Nov. Vol. 33, №11. P.724-727.

150. Farnie M.A. Testing for syphilis/ M.A. Farnie// Dermatol. Clin. 1994. Jan. Vol.12, №1. P. 9-17.

151. Fischer T.J. Клиническая иммунология и аллергологии/ T.J. Fischer, B.C. Adelman. M.: Практика, 2000.

152. French P. Syphilis Guidelines Revision Group. UK national guidelines for the management of late syphilis 2002/ French P. www. mssvd. org. uk.

153. Goh B. European guideline for the management of syphilis/ B. Goh, Vader P. van Voorst // Inl J. STD AIDS. 2001. Vol.12 (Suppl 3). P.14-26;www.iusti.org.

154. Goh В. Syphillis Guidelines Revision Group. UK national guidelines on.the management of early syphilis 2002/ B. Goh www. mssvd. org. uk.

155. Gomberg M.A. Resurgence of sexually transmitted diseases in Russia and eastern Europe/ M.A. Gomberg, V.A. Akovbian. Dermatol. Clin. 1998. Vol.16.v1. P.659-662.

156. Hook E. HI. Management of syphilis in human immunodeficiency virus infected patients/ E. HI. Hook //Am J. Med. 1992. Vol.92. P.477-481.

157. Hook E. W. Azithromycin compared with penicillin G benzathine for treatment of incubating syphilis/ E. W. Hook, J. Stephens, D.M. Ennis// Ann Intern Med. 1999. Vol. 1-31. P.434-439.

158. Incident Syphilis among Women with Multiple Admissions to Jaie in New York City/ S. Blank, M. Sternberg, L.L. Neylans et al. //J. Infect. Dis. 1999. Vol.180. P.1159-1163.л

159. Jay N. Human papillomavirus infections in women with HIV disease: prevalence, risk, and management Review./ N.Jay, AB. Moscicki// AIDS Reader. 2000. Vol.10. P.659-668.

160. Juniper J.M. Exudative retinal detachment and retinitis associated with acquired syphilitic uveitis/ J.M.Juniper, R. Machemer, R.P. Gallemore// Retina. 2000. Vol.20, №2. P.190-197.

161. Lagerberg D. Sexually transmitted diseases in children: a serious consequence of sexual abuse and an indication of possible victimization of other children/ D. Lagerberg//Acta Pediatrica. 1998. Vol.87. P.1214-1221.

162. Larsen S.A. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis/ S.A. Larsen// Clin. Microbiol. 1995. Vol.8. P. 1-5.

163. Metronidazole to prevent preterm delivery in pregnant women with asymptomatic bacterial vaginosis/ J. C. Carey, M.A.Klebanoff, J.C. Hauth et al. //New Engl J. Med. 2000. Vol.342. P.534-540.

164. Molecular detection of Treponema pallidum in secondary and tertiary syphilis/ N. Zoechling, E.M. Schluepen, H.P. Soyer et al. // Br J. Dermatol. 1997. Vol. 136, №5. P.683-686.

165. Oral secondary syphilis in a patient with human immunodeficiency virus infection/ V. Ramirer-Amador, J.G. Madero, L.E. Pedraza et al.// Oral Surg., Oral Med., Oral Paphol., Oral Radial Endod. 1996. Vol.81, №6. P.652-654.

166. Parkes R. Audit project on refusal of parenteral treatment for syphilis. 2002. Unpublished data.

167. Penicillin levels following the administration ofbenzathine penicillin G in pregnancy/ L. Nathan, R.E. Bawdon, J,E. Sidawi et al.// Obstet Gynecol. 1993. Vol.82. P.238-243.

168. Ш. Peters G.B. Active ocular syphilis/ G.B. Peters, G.B. Krohel// Ophthalmology. 2001. Vol.108, №9. P.1515-1519.

169. Posterior uveitis in patients with positive serology for syphilis/ A. V. Villanueva, M.J. Sahouri, L.D. Ormerod et al II Clin. Infect. Dis. 2000. Vol.30, №3'. P.479-485.

170. Postexposure prophylaxis for human immunodeficiency virus (HIV) infection following sexual assault/ J.D. Bamberger, C.R. Waldo, J.L. Gerberding, M.H.

171. Riedner G.Recent declines in reported syphilis rates in eastern Europe and central Asia: are the epidemics over? / G. Riedner, K.L. Dehne, A. Glomyko// Sex Trans. Infect. 2000. Vol.76. P.363-365.

172. Risk factors for congenital syphilis in infants of women with syphilis in South Carolina/ J.A. Mobley, R.E. McKeon, K.L. Jackson et al. //Am J. Public. Health. 1998. Vol.88. P.597-602.

173. Russian Federation Ministry of Health. Specific and prophylactic treatment of pregnant women for syphilis, sexually transmitted disease treatment recommendation for the Russian Federation. Ministry of Health, 1999.

174. SandsM. Lues maligna or ulcernodular syphilis in a men infected with human immunodeficiency virus: case repot and review/ M. Sands, A. Marcus// Clin. Infect Dis. 1995. Vol. 20, №2. P.387-390.

175. Schmidt B.D., Luger A. Laboratory diagnosis of neirosyphilis with PCR: a comparative evaluation WC 140.1999. №5. P. 5174-5179.

176. Seroconversion of the serological tests in the newborns to treated syphilitic mothers/ S.N. Chang, K.Y. Chung, M.G. Lee, G.B. Lee// Genitourin Med. 1995. Vol.71. P.68-70.

177. Sexually transmitted diseases/ Ed. King K.Holmes, P.Frederick Sparling, Per. Anders Mardh et al.; in 25 patients with antinuclear antibody negative systemic lupus erythematosus (SLE)//11 th Meet Int Soc STD Res, New Orleans, Aug 27-30.1995. P.89-94.

178. Similar serologic response to conventional therapy for syphilis among HIV positive and HIV negative women/ J. Goeman, M. Kivuvu, N. Nzila et al.

179. GenitourinMed. 1995. Vol.71. P.275-279.

180. Singh R. Syphilis in pregnancy/ R. Singh, JMcCloskey// Venereology. 2001. №14. P.121-131.

181. Slainer B.M. Laboratory diagnosis and interpretation of tests for syphilis/ S.A., B.M. Stainer, A.H. Rudolph// Clin. Microbiol. Rev. 1995. Jan. Vol. 8, №1. P. 1-21.

182. Syphilis serology in human immunodeficiency virus immunoglobulin levels/ E.J. Erbelding, D. Vlahov, K.E. Nelson et allIJ Infect. Dis. 1994. Jun. Vol. 169, №6. P. 1356-1359.

183. The emerging AIDS crisis in Russia:a review of enabling factors and prevention "needs/ S.C. Kalichman, J.A. Kelly, K.J. Sikkema et al.// JSTD AIDS. 2000. Vol.11.P.71-75.

184. The prevalence of hepatitis С virus infection in the United States, 1988 through 1994. N Engl J M.J. Alter, D. Kruszon-Moran, O.V. Nainan et al. Hi. Med. 1999. Vol.341. P.556-562.

185. Tikhonova L. Congenital syphilis in the Russian Federation (plenary presentation)/ L. Tikhonova II National Planning Meeting for Implementation of Congenital Syphilis Study. Moscow, 2 December. 1999.

186. Treatment of early syphilis with azithromycin/ F. Gruber, M. Kastelan, L. Cabrijan etal.llJ. Chemother. 2000. Vol.12. P.240.

187. Walker G. Antibiotics for syphilis diagnosed during preg-nanacy/ G. Walker The Cochrane Library. 2002. Issue 3.

188. World Health Organization Europe STI Task Force. Overview of HIV/AIDS/STI situation in the European Region.www.sti-taskforce.org.

189. World Health Organization. Guidelines for sexually transmitted infections surveillance. WHO/CHS/HIS/99.2; WHO/CDS/CSR/EDC/99.3:

190. UNATOS/99.3E. Geneva: WHOrT999. 204. World Health Organization. Guidelines for the management of sexually transmitted infections. WHO/HIV-AIDS/2001.01. WHO/RHR/01.10.