Влияние антигенов клеточных структур культуральных Treponema pallidum pallidum на течение сифилитической инфекции и разработка контрольной положительной сыворотки для реакции микропреципитации (в эксп

Климанович, Инна Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние антигенов клеточных структур культуральных Treponema pallidum pallidum на течение сифилитической инфекции и разработка контрольной положительной сыворотки для реакции микропреципитации (в эксп
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние антигенов клеточных структур культуральных Treponema pallidum pallidum на течение сифилитической инфекции и разработка контрольной положительной сыворотки для реакции микропреципитации (в эксп"

На правах рукописи

КЛИМАНОВИЧ Инна Викторовна

ВЛИЯНИЕ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР КУЛЬТУРАЛЬНЫХ TREPONEMA PALLIDUM PALLIDUM

НА ТЕЧЕНИЕ СИФИЛИТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ И РАЗРАБОТКА КОНТРОЛЬНОЙ ПОЛОЖИТЕЛЬНОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ РЕАКЦИИ МИКРОПРЕЦИПИТАЦИИ

(В ЭКСПЕРИМЕНТЕ)

03.02.03 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 8 ОКТ 7070

Ставрополь - 2010

004611816

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Пожарская Виктория Олеговна.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Буравцева Нина Паителеймоновна;

Ведущая организация:

доктор медицинских наук, профессор Васильева Лариса Ивановна.

ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Росздрава.

Защита диссертации состоится _

2010 г. в часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.256.09 при Ставропольском государственном университете по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корп. 2, комн. 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета.

Автореферат разослан

2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Ржепаковский И.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Заболевание сифилисом относится к социально значимым инфекциям, передающимся половым путём, на борьбу с которым, как у нас в стране, так и за рубежом направляются значительные усилия и материальные средства (Иванова М.А., Лосева O.K., 2006; Терзян В.А., Земцов М.А., Шаханина И.Л., 2007; Кубанова A.A., 2008; Фриго Н.В., 2008; Боткаев Э.А., Римин Д.В., 2009). Прогнозируемая заболеваемость сифилисом в мире на ближайшие годы будет достигать 12 миллионов, а в России - 270 тысяч человек (Мавров Г.И., 2005; Новиков Ю.А., 2008; Leader В.Т. et al., 2003; Woznicova V., Heroldova M., 2004; и др.). В последнее десятилетие в России отмечается снижение, по сравнению с предыдущими годами, заболеваемости сифилисом (Земцов М.А., Терзян В.А., 2006; Сон И.М. и др., 2006; Кунгуров Н.В. и др., 2008). Однако при этом среди различных форм течения сифилитической инфекции увеличился удельный вес её ранних и поздних скрытых форм, последние из которых сопровождаются тяжелыми поражениями нервной системы и внутренних органов (Балашова И.Ю., 2003; Калугин ВН. и др., 2003; Мавров Г.И., Щербакова ГЛ., 2005; Савчак В.И., 2005; Чеботарёв В.В. и др., 2006; Родинов М.В., Прохо-ренков В Л, 2008; Соколовский Е.В., Красносельских Т.В., 2008; Сырнева Т.А. и др., 2009; Marra С.М., 2004), отмечается увеличение числа случаев врожденного сифилиса (Чеботарёв В.В., 2005; Думченко В.В. и др., 2006; Тихонова А.И. и др., 2006; Кунгуров В.В. и др., 2008).

Это позволяет сделать вывод о том, что в области сифилидологии к настоящему времени остаются нерешенными целый ряд проблем, к числу которых, в том числе, относятся причины ложноположительных серологических реакций на сифилис и возникновения у больных после лечения высокого процента случаев серорезистентности (Уфимцева М.А., 2003; Фриго Н.В., 2004; Вислобоков A.B., 2005; Ломоносов К.И., Новосёлов B.C., 2005; Бат-каева Н.В., 2008; и др.), определенные трудности в диагностике и лечении этого заболевания (Маликов Е.В. и др., 2001; Уфимцева М.А. и др., 2005; Чеботарёв В.В. и др., 2005, 2006; Китаева Н.В. и др., 2008; Лосева O.K. и др., 2008; Василенко Т.А. и др., 2009; Кашутин С.Л. и др., 2009), несовершенство используемых методов профилактики и отсутствие специфической профилактики сифилиса (Соколовский Е.В., Красносельских Т.В., 2002; Вислобоков A.B., 2005; ВОЗ, 2008; и др.).

Анализ известных научных данных показывает, что успешное решение указанных задач во многом связано с совершенствованием знаний о фено-типической морфологической изменчивости Treponema pallidum pallidum (Т. pallidum) под влиянием различных факторов (Устименко Л.М., 1963; Беднова В.Н., 2001; Пожарская В.О., Беднова В.Н., Климанович И.В., 2004; Пожарская В.О., Казиев А.Х., Климанович И.В., 2004), а также о взаимосвязях и взаимодействии возбудителя сифилиса с организмом человека (Родин Ю.А., Родин А.Ю., 2000; Быстрицкая Т.Ф., 2005; Мавров Г.И., 2005, Степаненко В.И., Степаненко Р.Л., 2005; Капкаев P.A. и др., 2009).

Поскольку сифилис относится к антропонозным инфекциям для его экспериментального изучения в качестве модели широко используются кролики, причем наиболее сопоставимые у кроликов с экспериментальным сифилисом и у людей проявления сифилиса получают при интратестику-лярном заражении кроликов патогенными бледными трепонемами (ПБТ) штамма Nichols (Овчинников Н.М., 1955; Тернер Т.Б., 1963; LaFond R.E., 2006; Godornes С. et al., 2007).

Установленное наличие в клеточных структурах не культивируемых in vitro ПБТ и культуральных бледных трепонем (КБТ) общих специфических антигенных детерминант (Милич М.В. и др., 1987; Овчинников Н.М. и др., 1987; Petersen C.S., Petersen N.H., Axeisen N.H., 1981; Pen C.W., 1993) обосновало получение клеточных структур из биомассы штаммов различных иммуногенных групп КБТ и их традиционное использование в качестве специфических антигенов в серологических реакциях (CP) на сифилис (Пожарская В.О., 1997; и др.). Данное направление совершенствования серодиагностики сифилиса связано с поиском новых наиболее специфических и чувствительных антигенов для выявления в сыворотках крови больных анти-трепонемных (AT) антител в CP на сифилис. Однако представляет несомненный научный и практический интерес рассмотрение на основе системного подхода качественно нового направления совершенствования серодиагностики сифилиса, основанного на использовании специфических антигенов КБТ, вызывающих при введении в организм на фоне сифилитической инфекции увеличение выработки не только AT, но и антикардиолипиновых (АК) антител, определяемых в CP на сифилис. Такой подход к проблеме невозможен без выделения и детального изучения функциональных свойств указанных антигенов в условиях in vivo для определения новых возможностей серологической дифференциальной диагностики заболевания сифилисом.

Цель исследования: изучение влияния антигенов клеточных структур культуральных Treponema pallidum pallidum на течение экспериментальной сифилитической инфекции и разработка на этой основе новых препаратов для серодиагностики сифилиса.

Задачи исследования:

1. Научно-производственная разработка получения из антигенов клеточных структур смеси штаммов различных иммуногенных групп КБТ (КСТ антигена) нового антигена (ОП КСТ антигена), не содержащего общие групповые неспецифические антигены (ОГНА), с определением в них массы сухого осадка и суммарных белков и стандартизация выпуска новых препаратов «КСТ антиген» и «ОП КСТ антиген».

2. Изучение влияния введения КСТ и ОП КСТ антигенов на клинические характеристики, макроскопические патологоанатомические проявления и микроскопические изменения морфологических форм ПБТ при экспериментальном сифилисе кроликов (ЭСК).

3. Оценка влияния введения КСТ и ОП КСТ антигенов здоровым кроликам (ЗК) и кроликам с экспериментальным сифилисом (КЭС) на выработку у них AT и АК антител вплоть до сроков полной негативации исследуемых сывороток в CP на сифилис.

4. Оценка влияния введения КСТ и ОП КСТ антигенов на фоне отрицательных результатов CP на сифилис с сыворотками крови ЗК и КЭС на выработку у них AT и АК антител и разработка нового способа серодиагностики серонегативных форм сифилиса.

5. Научно-производственная разработка на основе использования ОП КСТ антигена получения, стандартизации и выпуска новой контрольной, положительной, кроличьей сыворотки (КПКС) для РМП с кардиолипином антигеном (РМП-К) на сифилис.

Научная новизна работы.

1. Впервые с позиций системного подхода поставлена научная задача изучения влияния антигенов клеточных структур культуральных Т. pallidum на течение ЭСК и определены структуры подсистем - моделей, являющихся методологической основой решения этой задачи.

2. Получены новые научные данные о содержании в КСТ антигене, выделенном из смеси биомассы культур V, VII, VIII, IX и Рейтер штаммов (представителей различных иммуногенных групп) КБТ, количества ОГНА преимущественно белкового происхождения, определены массы сухого осадка КСТ антигена и полученного из него нового высокоспецифического ОП КСТ антигена, установлено содержание в утраченной массе сухого осадка ОП КСТ антигена ОГНА преимущественно белкового происхождения, а также увеличение в ОП КСТ антигене при стандартизации антигенов по массе сухого осадка содержания высокоспецифических протеинов.

3. Впервые установлены функциональные свойства КСТ и ОП КСТ антигенов при введении их КЭС на 14 день после заражения ПБТ:

- не оказывать влияние на клинические и макроскопические патолого-анатомические проявления у них сифилитической инфекции и влиять на сокращение сроков и длительности этих проявлений от развития до распада шанкров за счёт активизации сифилитического процесса;

- увеличивать в шанкрах КЭС среднее процентное содержание извитых форм ПБТ за счет снижения содержания их зернистых морфологических форм и продлевать сроки определения извитых форм ПБТ в шанкрах кроликов, что свидетельствует о ведущем их значении в активизации сифилитической инфекции;

- вызывать достоверное (р<0,05) повышение максимальных значений титров AT и АК антител в сыворотках крови КЭС в CP на сифилис, и не влиять на сроки негативации этих антител в сопоставимых CP на сифилис.

4. Впервые выявлено функциональное свойство КСТ и ОП КСТ антигенов:

- при введении ЗК вызывать выработку только AT антител и не нлиять на сроки их негативации в сыворотках крови в РСК с ультраозвученным трепо-немным антигеном (РСК-УЗТА), а при введении этих антигенов на фоне негативации AT антител также не вызывать у кроликов выработку АК антител;

- при введении КЭС на фоне негативации в их сыворотках крови AT и АК антител в CP на сифилис вызывать у них выработку не только AT, но и АК антител, переводя серонегативную форму сифилиса в его серопозитивную форму.

5. Впервые установлено функциональное свойство ОП КСТ антигена вызывать у КЭС выработку достоверно (р<0,05) большего количества пре-

ципитирующих АК антител, определяемых в РМП-К на сифилис, по сравнению с КСТ антигеном, что явилось теоретическим обоснованием научно-производственной разработки на этой основе новой стандартизированной КПКС для РМП-К на сифилис.

Впервые разработаны технологические схемы и этапы получения ОП КСТ антигена - для изучения его функциональных свойств в эксперименте на кроликах, и стандартизированных экспериментально-производственных серий препаратов «КСТ антиген» и «ОП КСТ антиген» - для проведения научных исследований и разработки выпуска экспериментально-производственных серий нового препарата «Сыворотка контрольная, положительная, кроличья, сухая для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис».

Установленные новые функциональные свойства КСТ и ОП КСТ антигенов при введении КЭС оказывать влияние на сроки клинических и макроскопических патологоанатомических проявлений ЭСК, на характеристики процентного соотношения в шанкрах кроликов различных морфологические форм ПБТ позволили впервые экспериментально подтвердить ведущее значение извитых форм ПБТ в активизации сифилитического процесса при первичном сифилисе.

Впервые выявленное свойство исследуемых антигенов при введении КЭС на фоне негативации сывороток в СР на сифилис вызывать у них выработку и АТ, и АК антител позволило впервые ретроспективно диагностировать латентный серонегативный сифилис и явилось теоретическим обоснованием предложенного способа серодиагностики серонегативных форм сифилиса.

Материалы диссертационного исследования легли в основу разработанной с использованием двукратного введения КЭС препарата «ОП КСТ антиген» новой технологической схемы этапов выпуска КПКС для РМП-К на сифилис, что позволило почти в два раза уменьшить поголовье кроликов-продуцентов при сохранении объёма производства сыворотки, а её использование в серологических лабораториях сделало возможным отказаться от использования в качестве контрольной сыворотки смеси резко положительных сывороток крови больных активными формами сифилиса и сократить в среднем на 1,5 часа в день время постановки и учета результатов РМП-К с сыворотками крови людей, обследуемых и больных сифилисом.

хой для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис» на 6aíe ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ филиал «Аллерген» (г. Ставрополь). Экспериментально-производственные серии этой сыворотки прошли испытания на базе серологической лаборатории ГУЗ КККВД (г. Ставрополь) в качестве контрольной для постановки РМП-К на сифилис, которые установили её соответствие требованиям Приказа МЗ РФ № 87 от 26 марта 2001 г., предъявляемым к контрольным сывороткам при постановке РМП-К.

На защиту выносится:

1. Результаты научно-производственной разработки получения, стандартизации и выпуска нового высокоспецифического препарата «ОП КСТ антиген» и препарата «КСТ антиген», позволяющие утверждать, что в КСТ антигене, полученном из смеси пяти штаммов различных иммуногенных групп КБТ, в отличие от ОП КСТ антигена, содержится в среднем 38% ОГНА белкового происхождения, утраченная в процессе аффинной очистки КСТ антигена масса сухого осадка (20%), содержит в среднем 87% ОГНА, а при стандартизации антигенов по массе сухого осадка в ОП КСТ антигене увеличивается содержание высокоспецифических протеинов на 16%.

2. Антигены клеточных структур КБТ обладают функциональным свойством при введении КЭС сокращать сроки и длительность клинических и макроскопических патологоанатомических проявлений первичного сифилиса, увеличивать в шанкрах кроликов среднее процентное содержание извитых форм ПБТ за счет снижения их зернистых морфологических форм, продлевать сроки определения извитых форм ПБТ в шанкрах кроликов, что наиболее выражено при введении ОП КСТ антигена, по сравнению с КСТ антиг еном.

3. Антигены КСТ и ОП КСТ при введении ЗК обладают функциональным свойством не вызывать выработку АК антител, а при введении зараженным кроликам увеличивать выработку АТ и АК антител (в том числе преципити-рующих), что в наибольшей степени характерно для ОП КСТ антигена.

4. Антигены клеточных структур КБТ при введении КЭС на фоне нега-тивации CP на сифилис обладают функциональным свойством вызывать выработку не только АТ, но и АК антител, что позволяет впервые предложить основанный на данном свойстве способ ретроспективной диагностики латентной серонегативной формы сифилиса.

5. Результаты научно-производственной разработки получения нового препарата «Сыворотка контрольная, положительная, кроличья, сухая для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис» позволяющие установить, что двукратное введение ОП КСТ антигена КЭС обеспечивает получение от них вы-сокотитражных по содержанию преципитирующих антикардиолшжновых антител сывороток, уменьшает почти в два раза поголовье кроликов-продуцентов при сохранении объемов производства сыворотки, а унификация и стандартизация сыворотки позволяет отказаться от использования в качестве контрольной сыворотки смеси сывороток крови больных активными формами сифилиса и сократить в среднем на 1,5 часа в день постановку и учет результатов РМП-К с сыворотками крови людей в серологических лабораториях.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были доложены и обсуждены на XIV Международном конгрессе по реабилитации в

медицине и иммунореабилитации (Тель-Авив, Израиль, 2009 г.), П Съезде биотехнологов России (Москва, 2004 г.), IV съезде Общества биотехнологов России им. U.M. Овчинникова (Пущино, 2006 г.), IX Съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007 г.), научной конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань, 2004 г.), XII, ХЯ1, XIV Итоговых (межвузовских) научны?; конференциях молодых ученых и студентов (Ставрополь, 20042006 гг.). заседаниях кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Ставропольской государственной медицинской академии.

Публикации. Основное содержание диссертационной работы отражены в 15 печатных научных работах, в том числе 3 работы - в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации основных результатов диссертации на соискание искомой ученой степени.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 186 листах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 381 источник, в том числе 265 отечественных и 116 иностранных авторов. Работа содержит 25 рисунков и 19 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Исследования проведены на базах ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ филиал «Аллерген» и серологической лаборатории ГУЗ КККВД (г. Ставрополь) с использованием современного оборудования и приборов отечественного и зарубежного производства. Материалами для исследования служили: биомасса КБТ, представленная смесью равных объёмов культур V, VII, VIII, IX и Рейтер штаммов - представителями различных иммуногенных групп (Гельцер P.P., Зебницкая Л.В., 1950); питательные среды (ПС) - пептонный бульон из бычьих сердец и тиогликолевая ПС; ПБТ штамма Nichols, полученные из сифилитического орхита КЭС; микробные антигены - препараты «КСТ антиген» и «ОП КСТ антиген», коммерческие антигены и сыворотки для серологических исследований на сифилис; экспериментальные животные - ЗК и КЭС с массой тела 3,0-3,2 кг; антисыворотки к КСТ и ОП КСТ ангигенам от ЗК и КЭС; материалы из клиник - сыворотки крови здоровых людей и больных различными формами сифилиса.

Получение биомассы смеси 5 штаммов различных иммуногенных групп КБТ и выделение из неё клеточных структур, содержащих клеточные стенки с фрагментами цитоплазматических мембран и наружные фибриллы КБТ проводили в соответствии с известными методиками (Пожарская В.О., 1996; 1997; Пожарская В.О., Шавырина М.В., Иллютович H.A., 1996). Рабочую дозу вводимых антигенов определяли по КСТ антигену на ЗК по известной методике (Пожарская В.О., 1997; Ермолов A.B., 2002); определение массы сухого осадка проводили в соответствии с известной методикой (Герхард Ф. и др., 1983); суммарные белки КСТ и ОП КСТ антигенов определяли с помощью биуретовой реакции в 1 мл образцов каждого исследуемого анти-

гена в стандартном разведении 1: 10 по известной методике (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982) с использованием спектрофотометра с длиной волны 280 нм, применяемой для контроля биологических препаратов (Сим Э., 1985). Интратестикулярное заражение ЗК экспериментальным сифилисом проводили взвесью ПБТ в концентрации 108 микробных клеток в 1 мл, выделенных из 7-8 дневного орхита КЭС по известной методике (Овчинников Н.М., Бед-нова В.Н., Делекторский В.В., 1987). Здоровым кроликам и КЭС исследуемые антигены вводили в ушные вены по 0,023 г в 2 мл изотонического раствора натрия хлорида, при этом всем КЭС при первичном сифилисе вводили КСТ и ОП КСТ антигены на 14 день после заражения их ПБТ. Определение титров AT антител в сыворотках крови ЗК и КЭС осуществляли в количественной РСК-УЗТА, а определение титров АК антител - в количественных РСК-К и РМП-К по известным методикам (Приказ МЗ РФ № 87,2001 г.).

Статистическую обработку группы результатов наблюдений осуществляли в соответствии с требованиями ГОСТ 8.207-76 при помощи компьютерной программы Microsoft Office Excel 2007.

Результаты исследований и их обсуждение

На основе проведенного системного анализа поставленных научных задач была разработана иерархическая структура системообразующих факторов подсистем — моделей (рис. 1), направленных на их решение. Как следует из представленной на рисунке 1 схемы, одним из направлений повышения уровня знаний о сифилитической инфекции является изучение влияния антигенов клеточных структур КБТ на течение ЭСК - модели заболевания человека сифилисом.

На основе выбранной методики исследований, в первую очередь, была решена задача получения из КСТ антигена смеси штаммов различных иммуно-генных групп КБТ нового высокоспецифического ОП КСТ антигена, освобожденного от ОГНА и стандартизации КСТ и ОП КСТ антигенов с целью обеспечения достоверности и сравнимости полученных результатов исследований.

ОП КСТ антиген выделяли из разведенного 1:10 влажного осадаа КСТ антигена путём его последовательной адсорбции на аффинных сорбентах: иммуно-сорбертах, состоящих из у-глобулинов сыворотки крови доноров, альбуминов сыворотки крови быка, стабилизированных CNBr сефарозой, и на сорбенте протеина А сефароза, находящихся в колонках LKB «Вгошша» (Швейцария).

Стандартизацию антигенов клеточных структур КБТ проводили по величине массы сухого осадка и содержанию в них суммарных белков в стандартных разведениях. Было установлено, что суммарные белки КСТ антигена содержат в среднем до 38% ОГНА белкового происхождения (табл. 1). При аффинной очистке КСТ антиген утратил 0,0023±0,0005 г массы сухого осадка и 0,0020±0,0005 г суммарных белков, которые составляют 87% утраченного сухого осадка КСТ антигена. Это означает, что утраченные в процессе аффинной очистки ОГНА на 87% состоят из антигенов белкового происхождения, что подтверждает высокую эффективность использования аффинной очистки для получения высокоспецифического ОП КСТ антигена.

Рис. 1. Иерархическая структура системообразующих факторов подсистем-моделей для решения научных задач повышения эффективности борьбы с сифилитической инфекцией

Содержание массы сухого осадка и суммарных белков в стандартных разведениях КСТ и ОП КСТ антигенов (п=5, а=0,05)

Вид антигена Разведение антигена Кол- во иесле дова-ний Содержание сухого осадка в 1 мл взвеси антигена, г Среднее содержание массы сухого осадка антигена по отношению к исходной,% Содержание суммарных белков в 1 мл взвеси антигена, г Среднее содержание суммарных белков по отношению к исходному, %

КСТ антиген 1:10 10 0,0115 ±0,0005 100 0,0053 ±0,0005 100

ОПКСТ антиген 1:10 10 0,0092 ±0,0003 80 0,0033 ±0,0004 62

Потеря количественных показателей за счет аффинной очистки антигенов - 0,0023* ±0,0005 20 0,0020 ±0,0005 38/87*

Среднее отношение показателей антигенов КСТ/ОП КСТ - 1,25 - 1,61 -

* расчетное содержаиие в массе потерянного сухого осадка - 0,0023±0,0005 среднего процентного содержания суммарных белков — 87%.

Для исключения влияния ЭСК на выработку у них специфического иммунного ответа при введении КСТ и ОП КСТ антигенов выбор рабочей дозы вводимых антигенов определяли в эксперименте на ЗК. В результате проведенных исследований установлено, что рабочая доза КСТ антигена, равная 0,023 г при введении ЗК обеспечивает достоверно (р<0,05) максимальный уровень выработки у них АТ антител и не вызывает выработку АК антител, которые определяли в СР на сифилис.

На основании положительных результатов предварительных исследований была разработана технологическая схема этапов получения экспериментально-производственных серий препаратов «КСТ антиген» и «ОП КСТ антиген», контроль характеристик которых подтвердил их соответствие установленным стандартным требованиям. Изготовленные препараты «КСТ антиген» и «ОП КСТ антиген», содержащие рабочие дозы антигенов, равные 0,023 г, использовались при проведении всех последующих исследований их функциональных свойств.

В соответствии с иерархической структурой (рис. 1) рассмотрено решение задачи изучения влияния введения КСТ и ОП КСТ антигенов на клинические и макроскопические патологоанатомические проявления ЭСК, а также на микроскопические характеристики морфологических форм ПБТ.

Исходя из анализа результатов проведенных исследований на КЭС при проявлениях первичного сифилиса было выделено 7 стадий развития сифилитического процесса в яичках и определены сроки их проявлений (табл. 2), а при вторичном сифилисе - 2 стадии его течения.

Сроки развития клинических и макроскопических патологоанатомических проявлений первичного сифилиса у кроликов с экспериментальным сифилисом

Кролики с экспериментальным сифилисом

№ п/п Формы проявлений экспериментального сифилиса у кроликов На фоне введения КСТ и ОП КСТ антигенов Контрольная группа

Сроки проявлений Сроки проявлений

недели дни недели дни

Перви чный сифилис (стадии) 1-10 70 1-12 84

1 Развивающийся орхит 1 7 1 7

2 Развитый орхит 2 7 2 7

3 Развивающийся шанкр 3 5 3 7

4 Зрелый шанкр 3,4 4 4 7

5 Начинающийся распад шанкра 4 5 5 7

6 Распад шанкра 5 7 6-7 14

7 Заживление шанкра 6-10 35 8-12 35

В работе определены временные характеристики клинических и макроскопических патологоанатомических проявлений в контрольных и опытных гругшах кроликов и дано их описание по формам и стадиям развития сифилитической инфекции, свидетельствующие об отсутствии различий в описании форм и стадий развития этих проявлений в контрольной и опытных группах при введении кроликам КСТ и ОП КСТ антигенов.

Однако установлено влияние исследуемых антигенов на уменьшение длительности проявлений первичного экспериментального сифилиса от стадии развивающегося шанкра до стадии распада шанкра, что сократило сроки созревания и распада шанкров (на 2 недели), по сравнению с контрольной группой, и свидетельствует о выраженной активизации сифилитического процесса антигенами клеточных структур КБТ.

Изучение влияния введения КСТ и ОП КСТ антигенов на изменения среднего процентного соотношения морфологических форм жизни (ФЖ) ПБТ в си филитических орхитах и шанкрах КЭС (рис. 2, а-в) позволило доказать, что установленная ранее активизация первичного ЭСК после введения им КСТ и ОП КСТ антигенов связана с увеличением в пунктатах из шанкров среднего процентного содержания извитых форм ПБТ, которое происходило в основном за счёт перехода зернистых форм ПБТ в её извитые формы. Дальнейшее снижение среднего процентного содержания в пунктатах извитых форм ПБТ сопровождалось увеличением среднего процентного содержания преимущественно зернистых форм.

В то же время второй важный вывод заключается в том, что КСТ и ОП КСТ антигены задерживают образование цистных форм трепонем, оставляя их среднее процентное содержание в пунктатах на более низком уровне, по сравнению с контролем. Основной отличительной особенностью введения высокоспецифического ОП КСТ антигена является продление на 14 дней сроков определения извитых форм ПБТ, по сравнению с контрольной группой кроликов, и на 7 дней—по сравнению с группой КЭС при введении КСТ антигена.

►т-Нзвпше )1>Ж —»— 'Зсрнпсгые - »рцйсхные ,'1'ЛС........

Дни 1 14 21

а) кролики с экспериментальным сифилисом

81 я ■§"

В с

а» ™

в 5

ш В

<" э

я 5

О §

100

2 90 §" 80

"О

й и 60

-и50 а е 40

3 зо § 20

10 о

Дни ? 14 21 28 35 42

б) кролики с экспериментальным сифилисом, введение КСТ антигена

"Г.............................¡ВвёДеннг; ..........................т.......... —>-4П5нпые <1>/1ч ]

\ ¡пншгена 1 —»" Зернпс1ые!ФЖ 1

........\ .* 1яг - »-ЦИШШе 'Г'Ж...................

: \ ■ ^63...................................... \5р,2 ___ -----4ба !

/' 5У.Я V'' \ ..........-.........¡30............- .........

:; /...............«.............................ад

~ ~ ■ ' ............... ■ ■ ■ ■ ■ 1......; ■ ■ • •• ■

в) кролики с экспериментальным сифилисом, введение ОП КСТ антигена

Рис. 2. Среднее процентное соотношение морфологических форм ПБТ в пунктатах из орхитов и шанкров КЭС

Как известно, одним из ведущих до настоящего времени методов диагностики сифилиса остаётся серологический метод, основанный на определении АТ и АК антител в сыворотках крови больных людей и КЭС. Учитывая тот факт, что в последние годы отмечается увеличение числа случаев диагностики скрытых форм заболевания этой инфекцией, в том числе её поздних скрытых форм со случаями вассерманонегативного скрытого сифилиса (Капкаев Р.А. и др., 2009), в работе проведено изучение влияния введения КСТ и ОП КСТ антигенов на сроки и количественные показатели выработки АТ и АК антител у ЗК и КЭС вплоть до негативации у 100%

кроликов сывороток крови в СР на сифилис, а также иммунного ответа этих кроликов на введение антигенов клеточных структур КБТ на фоне отрицательных результатов серологических реакций.

На рисунке 3 представлены результаты изменения средних титров АТ и АК антител в сыворотках крови ЗК при введении им КСТ и ОП КСТ антигенов и при повторном введении этих антигенов через 8 месяцев на фоне отрицательных результатов СР на сифилис. Как видно из представленных зависимостей, при первичном и повторном введении антигены клеточных структур КБТ не вызывали выработку у ЗК антикардиолипи-новых антител, а сроки негативации сывороток крови в РСК-УЗТА у ЗК составляли 7 месяцев со дня введения антигенов.

Результаты изменения средних титров АТ и АК антител в сыворотках крови в СР на сифилис в контрольной группе КЭС, которым не вводили антигены клеточных структур КБТ, и в опытных группах кроликов - при введении им КСТ и ОП КСТ антигенов на 14 день после заражения ПБТ, представлены соответственно на рис. 4-6. Сравнительный анализ представленных графических зависимостей позволил установить, что введение антигенов клеточных структур КБТ вызывает достоверное (р<0,05) увеличение максимальных значений средних титров не только АТ, но и АК антител в сыворотках крови в сопоставимых СР на сифилис, по сравнению с контрольной группой КЭС. Увеличение титров антикардиолипиновых антител в сыворотках крови КЭС в СР на сифилис является еще одним подтверждением на уровне иммунного ответа функционального свойства антигенов клеточных структур КБТ при введении КЭС активизировать течение сифилитической инфекции.

В то же время при введении ОП КСТ антигена в сыворотках крови КЭС определено достоверно (р<0,05) большее содержание комплементсвязы-вающих и преципитирующих АК антител в РСК-К и РМП-К (соответственно) по сравнению с содержанием их у КЭС при введении КСТ антигена. Данное свойство ОП КСТ антигена явилось теоретической основой для его использования при разработке получения новой КПКС для РМП-К на сифилис. Сроки негативации у 100% КЭС контрольной и опытных групп сывороток крови в РСК-УЗТА и РСК-К совпадали и соответствовали 9,5 месяцев со дня заражения ПБТ, в то время, как сроки негативации титров АК антител у тех же кроликов при всех исследованиях в РМП-К совпали и составляли 8 месяцев, что подтверждает более низкую чувствительность по выявлению АК антител в РМП-К, по сравнению с РСК-К.

Изучения иммунного ответа КЭС на введение антигенов клеточных структур КБТ на фоне отрицательных результатов СР на сифилис представлены на рис. 7, 8.

Как следует из полученных данных, при введении КСТ и ОП КСТ антигенов кроликам с экспериментальной сифилитической инфекцией на фоне отрицательных результатов СР на сифилис (330 день после заражения ПБТ) они обладали функциональным свойством вызывать у кроликов выработку не только АТ, но и АК антител, что свидетельствует о переходе латентной серонегативной формы ЭСК в латентную серопозитивную форму.

——p<'K-vTTA(Kcr :

ь. о Дни О Месяцы о

L 2S0 Ж 8 9 9,5

Рис. 3. Динамика изменения средних титров АТ-антител в сыворотках крови ЗК при введении КСТ и ОП КСТ-антигенов и при повторном их введении на фоне отрицательных результатов РСК-УЗТА

в 15 а

9 ч

; 17,817.8 j7-6 : i 1 \ 15,2 j РСК-УПА —<— PCK'-K I

/ 15j4 : SNh2 101. \ „10 ! 9,8 1 9,6 i

......:...... Inj \ / / r' ' ■ 1 ' ' ' 1 ' ' ' 1 ' ' ■ ' ■ ' \4,8 ......2.........1......2.........|.....и.....Г"ХО,2]................... --:—---0 ■ >J0 0 :

Дни о МесяцыО

28 56 S4 112 140 168 196 224 252 2S0 30S 1 2 3 4 5 б 7 8 9 9,5 10

Рис. 4. Динамика изменения средних титров AT и AK-антител в сыворотках

крови КЭС

% 50

Э* 40

S 20

8 ю Ё

• Введение ] " I : |K<ITäHiiirem i 1 : j

: *4^40,7| | : ,-> />—- ! i РСК-^ЗТА —•—ИТч-К.................. - * -:РМП-К

/31 ySJT-O* 223 tili

sl/P *......... |a,1 A-.fi — * —^ - - fa"*1 ' i ■ ■ ' i ' 1 ■ 1 1 ' ' 1 ■ 1 ■ 1 1 ' 1 I 1 ■ ■ 1 ' i : ■ 0 0

Дни 0 28 56 S4 112 140 16S 1% 224 252 2S0 JOS Месяцы 0 1 2 3 4 5 6.7 8 9 9.5 10

Рис. 5. Динамика изменения средних титров AT и AK-антител в сыворотках крови КЭС при введении им КСТ-антитена

Дни с Месяцы о

Рис. 6. Динамика изменения средних титров АТ и АК-антител в сыворотках крови КЭС при введении им ОП КСТ-антигена

Дин зоо Месяцы (О

?5>8

Рис. 7. Динамика изменения средних титров АТ и АК-антител в сыворотках крови КЭС в СР на сифилис при введении им КСТ-антигена на фоне негативации титров антител

-РСК-УЗТА -РСК-К *-РМП-К

Д«п зоо

Месяцы 10

2 1,4

370

г т».

384

Рис. 8. Динамика изменения средних титров АТ и АК-антител в сыворотках крови КЭС в СР на сифилис при введении им ОП КСТ-антигена на фоне негативации титров антител

Это позволяет при введении ОП КСТ антигена через 15 дней в РСК-К и РМП-К, а при введении КСТ антигена через 30 дней в РСК-К или через 45 дней - в РМП-К по наличию АК антител в сыворотках крови КЭС, ретроспективно диагностировать у них латентную серонегативную форму сифилиса. Данные результаты исследования послужили теоретической основой для разработанного нового способа серодиагностики серонегативных форм сифилиса.

На основе новых научных данных о функциональных свойствах ОП КСТ антигена проведена научно-производственная разработка технологических схем получения и выпуска стандартизированных в РМП-К по титру 1: 8 (++++) экспериментально-производственных серий нового препарата «Сыворотка контрольная, положительная, кроличья, сухая для РМП с кар-диолипиновым антигеном на сифилис», в которых используется введение ОП КСТ антигена для получения высокотитражных по содержания преци-питирующих АК антител сывороток.

В таблице 3 представлены результаты проверки соответствия трех экспериментально-производственных серий нового препарата контрольным сывороткам, в качестве которых согласно приказу МЗ РФ № 87 от 26.03. 2001 года использовались смеси резко положительных сывороток крови больных активными формами сифилиса в титре 1: 8 (IMI) в РМП-К.

Анализ полученных данных показал соответствие новой КГТКС требованиям приказа МЗ РФ. При этом производство новой стандартизированной контрольной сыворотки для РМП-К позволило почти в 2 раза сократить поголовье ЗК, при сохранении объёмов выпуска сыворотки, а использование её в серологических лабораториях - отказаться от использования смеси резко положительных сывороток крови больных активными формами сифилиса и унифицировать, стандартизировать и сократить в среднем на 1,5 часа в день постановку и учет результатов РМП-К с сыворотками крови людей обследуемых и больных сифилисом.

Таблица 3

Результаты сравнительного контроля экспериментально-производственных серий препарата «Сыворотка контрольная, положительная, кроличья, сухая для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис»

Исследуемые контрольные сыворотки Количество исследований в РМП-К Титры антикардиолипиновых антител в сыворотках крови 1:

1 серия 2 серия 3 серия

Препарат* 15 8 (++++) 8 (++++) 8 (++++)

Смесь сывороток крови больных активными формами сифилиса** 15 8 (++++) 8 (++++) 8 (++++)

Сыворотка крови здоровых людей* * * 15 (-) (-) (-)

* препарат «Сыворотка контрольна«, положительная, кроличья, сухая для РМП с

кардиолипиновым антигеном на сифилис»;

** контрольная положительная сыворотка для РМП-К на сифилис, титруемая в серологических лабораториях перед постановкой РМП-К;

*** отрицательная сыворотка крови для контроля кардиолипинового антигена РМП.

выводы

1. Разработанная многоуровневая технологическая схема выделения из смеси штаммов различных иммуногенных групп культуральных бледных трепонем КСТ антигена позволила получить на его основе методом аффинной очистки новый высокоспецифический ОП КСТ антиген, освобождённый от общих групповых неспецифических антигенов.

2. Установлено, что новый высокоспецифический ОП КСТ антиген содержал в среднем на 38% меньше общих суммарных белков по сравнению с КСТ антигеном, а утраченные в процессе аффинной очистки КСТ антигена 20% массы сухого осадка включали в среднем до 87% ОГНА белкового происхождения, что подтверждает более высокую специфичность полученного ОП КСТ антигена, по сравнению с КСТ антигеном.

3. Впервые разработанные технологические этапы получения стандартизированных по рабочей дозе экспериментально-производственных серий препаратов «КСТ антиген» и «ОП КСТ антиген», позволили повысить содержание специфических суммарных белков в ОП КСТ антигене на 16% и обеспечить требуемую достоверность и сравнимость полученных результатов проведенных исследований.

4. Установлены новые функциональные свойства КСТ и ОП КСТ антигенов КБТ при введении их здоровым кроликам и на 14 день после заражения кроликов ПБТ:

- вызывать у здоровых кроликов выработку только специфических АТ антител и не вызвать выработку АК антител при введении КСТ и ОП КСТ антигенов;

- сокращать длительность течения, а также сроки проявлений сифилитического орхита от развития до распада шанкров на две недели, и не оказывать влияние на их клинические и макроскопические патологоанатомических проявления; вызывать увеличение в шанкрах кроликов среднее процентное соотношение извитых форм за счет снижения содержания зернистых морфологических форм ПБТ, а также продлевать сроки определения извитых форм ПБТ в шанкрах кроликов при первичном сифилисе, причем у ОП КСТ антигена эти свойства более выражены, по сравнению с КСТ антигеном;

- вызывать при введении ОП КСТ антигена достоверно (р<0,05) большую выработку максимальных значений средних титров комплементсвя-зывающих и преципитурующих АК антител, определяемых в СР на сифилис, по сравнению с КСТ антигеном;

- не влиять на сроки негативации АТ и АК антител сывороток крови, которые в РСК-УЗТА и в РСК-К совпадают и составляют 9,5 месяцев, а АК антител в РМП-К - 8 месяцев со дня заражения ПБТ.

5. Доказано, что КСТ и ОП КСТ антигены обладают функциональным свойством при введении на фоне негативации сывороток крови в СР на сифилис у ЗК вызывать выработку только АТ антител, у КЭС - вызывать выработку и АТ и АК антител, что позволяет при введении ОП КСТ антигена через 15 дней, а при введении КСТ антигена - через 30 дней по ре-

зультатам РСК-К и через 45дней по результатам РМП-К после введения антигенов, ретроспективно диагностировать у кроликов латентную сероне-гативную форму экспериментального сифилиса по наличию в сыворотках крови АК антител.

6. Проведена научно-производственная разработка и выпущены экспериментально-производственных серии нового, стандартизированного по титру 1: 8 (1 м I) препарата «Сыворотка контрольная, положительная, кроличья, сухая для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис», позволившая почти в 2 раза сократить поголовье кроликов-продуцентов, при сохранении объёмов выпуска сыворотки, а также унифицировать, стандартизировать и сократить в среднем на 1,5 часа в день постановку и учет результатов РМП-К с сыворотками крови людей в серологических лабораториях.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Пожарская, В.О. Основные направления борьбы с сифилитической инфекцией на уровне сегодняшних знаний биологии бледных трепонем / В.О. Пожарская, И.В. Климанович, В.Н. Беднова // Материалы II съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова: тез. докл. - М., 2004. - С. 44-45.

2. Пожарская, В.О. Цистообразование культуральных бледных трепонем, как форма существования клеток в неблагоприятных условиях / В.О. Пожарская, А.Х. Казиев, И.В. Климанович // Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии: материалы научн. конф. (Казань, 17-18 июня 2004 г.). —М.: МаксПресс, 2004. - С. 71-72.

3. Климанович, И.В. Длительность сохранения атипичных форм бледных трепонем при неблагоприятных условиях / И.В. Климанович, Е.А. Гуртовой, А.М. Казиева // XII итоговая (межвузовская) научн. конф. студентов и молодых учёных: тез. докл. / СГМА. - Ставрополь, 2004. - С. 97-98.

4. Климанович, И.В. Атипичные формы в биологии бледных трепонем / И.В. Климанович, AJV1. Казиева // XII итоговая (межвузовская) научн. конф. студентов и молодых учёных: тез. докл. / СГМА. - Ставрополь, 2004. - С. 98-99.

5. Климанович, И.В. Антигенные характеристики клеточных структур культуральных бледных трепонем в эксперименте на кроликах / И.В. Климанович // XIII итоговая (межрегиональная) научн. конф. студентов и молодых учёных: тез. докл. / СГМА. - Ставрополь, 2005. - С. 92-93.

6. Климанович, И.В. Особенности биологии культуральных бледных трепонем на современном этапе изучения / И.В. Климанович, OA Мамчик, И.С. Селиванова // XIII итоговая (межрегиональная) научн. конф. студентов и молодых учёных: тез. докл. / СГМА. - Ставрополь, 2005. - С. 93-94.

7. Климанович, И.В. Влияние кардиолипинового антигена на иммуногенные свойства клеточных структур бледных трепонем в эксперименте на кроликах // И.В. Климанович / XIV итоговая (межрегиональная) научн. конф. студентов и молодых учёных: тез. докл. / СГМА. - Ставрополь, 2006. - С. 556-557.

8. Климанович, И.В. Зависимость сроков развития сифилитического ор-хита кроликов от времени забора и хранения бледных трепонем / И.В. Климанович, Е.А. Гуртовой, И.С. Селиванова // XIV итоговая (межрегиональная) научн. конф. студентов и молодых учёных: тез. докл. / СГМА. -Ставрополь, 2006. - С. 557-558.

9. Горчакова, ТА. Этапы в развитии серодиагностики сифилиса / Т.А. Горчакова, И.В. Климанович // XIV итоговая (межрегиональная) научн. конф. студентов и молодых учёных: тез. докл. / СГМА. - Ставрополь, 2006. - С. 82-83.

10. Пожарская, В.О. Культуральные бледные трепонемы, их зернистые и цистные формы, как модель изучения антигенных свойств возбудителя сифилиса в эксперименте на кроликах / В.О. Пожарская, М.В. Корякин, И.В. Климанович, И.С. Селиванова // Материалы IV съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова. — Пущино, 2006. - С. 202-203.

П.Пожарская, В.О. Иммунодепрессивное действие кардиолипина на выработку специфических антител в эксперименте на кроликах / В.О. Пожарская, И.В. Климанович // Материалы IX съезда Всерос. научно - практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М., 2007 - С. 264-265.

12. Пожарская, В.О. Антигенные свойства зернистых и цистных форм культуральных бледных трепонем в эксперименте на кроликах / В.О. Пожарская, И.В. Климанович, И.С. Селиванова // Материалы IX съезда Всерос. научно - практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М., 2007. - С. 265-266.

13. Пожарская, В.О. Клинические особенности и методы диагностики поражения слизистой оболочки полости рта при сифилисе / В.О. Пожарская, И.В. Климанович, И.С. Селиванова, В.В. Чеботарёв, A.B. Одинец // Dental Forum. - 2009. -№ 5. - С. 53-56.

14. Климанович, И.В. Совершенствование постановки реакции микропреципитации с кардиолипином при проведении активного мониторинга и оценке эпидемиологической ситуации по заболеваемости сифилисом / И.В. Климанович, В.О. Пожарская // Международный журнал по иммунореабилитации: материалы XIV Международного конгресса по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Тель-Авив, Израиль, 17-20 октября 2009 г.). - 2009. -Т. 11.-№ 1,-С. 53-54.

15. Пожарская, В.О. Влияние антигенов из очищенных протеинов культуральных бледных трепонем на течение экспериментальной сифилитической инфекции кроликов / В.О. Пожарская, И.В. Климанович, И.С. Селиванова // Клиническая дерматол. и венерол. - 2010. - № 3. - С. 55-60.

Подписано в печать 1.10.10 Формат 60x84 1/16 Усл.печ.л. 1,00 Уч.-изд.л. 1,06

Бумага офсетная_Тираж 140 экз.__Заказ 362

Отпечатано в Издательско-полиграфическом комплексе Ставропольского государственного университета. 355009, Ставрополь, ул.Пушкина, 1.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Климанович, Инна Викторовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ ВОПРОСОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ПОСТАНОВКА НАУЧНОЙ ЗАДАЧИ.

1.1. АНАЛИЗ МОДЕЛЕЙ ИЗУЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ

СИФИЛИСОМ.

1.2. АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ ВОПРОСОВ ИЗУЧЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ АНТИГЕНОВ ПАТОГЕННЫХ

И КУЛЬТУРАЛЬНЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ.

1.3. ПОСТАНОВКА НАУЧНОЙ ЗАДАЧИ.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. МАТЕРИАЛЫ.

2.1.1. Штаммы культуральных и патогенных бледных трепонем, питательные среды.

2.1.2. Микробные антигены.

2.1.3. Коммерческие антигены и сыворотки, использованные при серодиагностике сифилиса.

2.1.4. Животные, экспериментальные сыворотки.

2.1.5. Материалы, полученные из клиник.

2.2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.2.1. Получение биомассы трепонем.

2.2.2. Разрушение клеток трепонем и выделение клеточных структур трепонем.

2.2.3. Методы определения массы сухого осадка исследуемых антигенов клеточных структур трепонем и содержания в них суммарных белков.

2.2.4. Заражение кроликов экспериментальным сифилисом.

2.2.5. Методы оценки течения экспериментальной сифилитической инфекции кроликов.

2.2.5.1. Оценка клинического течения первичного и вторичного сифилиса.

2.2.5.2. Оценка макроскопических патологоанатомических изменений яичек кроликов.

2.2.5.3. Микроскопические исследования морфологических форм патогенных бледных трепонем.

2.2.5.4. Серологические методы исследований.

2.2.6. Получение сыворотки контрольной, положительной, кроличьей, сухой для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис.

2.2.7. Статистическая обработка результатов наблюдений.

Глава 3. НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ РАЗРАБОТКА

ПОЛУЧЕНИЯ И СТАНДАРТИЗАЦИИ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР КУЛЬТУРАЛЬНЫХ

БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ.

3.1. ПОЛУЧЕНИЕ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР ТРЕПОНЕМ И ОЧИЩЕННЫХ ПРОТЕИНОВ КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР ТРЕПОНЕМ.

3.2. СТАНДАРТИЗАЦИЯ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР ТРЕПОНЕМ ПО КОЛИЧЕСТВЕННЫМ ПОКАЗАТЕЛЯМ ИХ МАССЫ СУХОГО ОСАДКА

И СОДЕРЖАНИЮ СУММАРНЫХ БЕЖОВ.

3.3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАБОЧЕЙ ДОЗЫ АНТИГЕНА КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР ТРЕПОНЕМ ДЛЯ ОДНОКРАТНОГО ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ КРОЛИКАМ.

3.4. РАЗРАБОТКА ПОЛУЧЕНИЯ СТАНДАРТИЗИРОВАННЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ СЕРИЙ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ

СТРУКТУР КУЛЬТУРАЛЬНЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ.:.

3.4.1. Стандартизация получения экспериментальных серий антигенов клеточных структур трепонем.

3.4.2. Разработка получения стандартизированных экспериментально-производственных серий препаратов «КСТ антиген» и «ОП КСТ антиген».

Глава 4. ВЛИЯНИЕ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР КУЛЬТУРАЛЬНЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ НА ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРОЯВЛЕНИЙ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СИФИЛИТИЧЕСКОЙ

ИНФЕКЦИИ КРОЛИКОВ.

4.1. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ВЛИЯНИЯ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР КУЛЬТУРАЛЬНЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ НА КЛИНИЧЕСКОЕ ТЕЧЕНИЕ И МАКРОСКОПИЧЕСКИЕ ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО

СИФИЛИСА КРОЛИКОВ.

4.2. ВЛИЯНИЕ ВВЕДЕНИЯ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ

СТРУКТУР КУЛЬТУРАЛЬНЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ НА МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ФОРМ ПАТОГЕННЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ

СИФИЛИТИЧЕСКОМ ОРХИТЕ КРОЛИКОВ.

Глава 5. ВЛИЯНИЕ ВВЕДЕНИЯ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ

СТРУКТУР КУЛЬТУРАЛЬНЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ КРОЛИКАМ НА ДИНАМИКУ

ИХ ИММУННОГО ОТВЕТА В СЕРОЛОГИЧЕСКИХ

РЕАКЦИЯХ НА СИФИЛИС.

5.1. ВЛИЯНИЕ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР КУЛЬТУРАЛЬНЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ

НА ИММУННЫЙ ОТВЕТ ЗДОРОВЫХ КРОЛИКОВ.

5.2. ВЛИЯНИЕ ВВЕДЕНИЯ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР КУЛЬТУРАЛЬНЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ НА ДИНАМИКУ ИММУННОГО ОТВЕТА КРОЛИКОВ

С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ СИФИЛИСОМ.

5.3. ВЛИЯНИЕ ВВЕДЕНИЯ АНТИГЕНОВ КЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР КУЛЬТУРАЛЬНЫХ БЛЕДНЫХ ТРЕПОНЕМ КРОЛИКАМ С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ СИФИЛИСОМ НА ФОНЕ СТОЙКОЙ НЕГАТИВАЦИИ ИХ СЫВОРОТОК

КРОВИ В СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЯХ НА СИФИЛИС.

5.4. НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ РАЗРАБОТКА ВЫПУСКА

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ СЕРИЙ НОВОГО ПРЕПАРАТА «СЫВОРОТКА КОНТРОЛЬНАЯ, ПОЛОЖИТЕЛЬНАЯ, КРОЛИЧЬЯ, СУХАЯ ДЛЯ РМП

С КАРДИОЛИПИНОВЫМ АНТИГЕНОМ НА СИФИЛИС».

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние антигенов клеточных структур культуральных Treponema pallidum pallidum на течение сифилитической инфекции и разработка контрольной положительной сыворотки для реакции микропреципитации (в эксп"

Актуальность проблемы. Заболевание сифилисом относится к социально значимым инфекциям, передающимся половым путём, на борьбу с которым, как у нас в стране, так и за рубежом направляются значительные усилия и материальные средства (Иванова М.А., Лосева O.K., 2006; Терзян В.А., Земцов М.А., Шаханина И.Л., 2007; Кубанова A.A., 2008; Фриго Н.В., 2008; Боткаев Э.А., Римин Д.В., 2009). Прогнозируемая заболеваемость сифилисом в мире на ближайшие годы будет достигать 12 миллионов, а в России - 270 тысяч человек (МавровГ.И., 2005; Новиков Ю.А., 2008; Leader В.Т. et al., 2003; Woznicova Y., Heroldova M., 2004; и др.). В последнее десятилетие в России отмечается снижение, по сравнению с предыдущими годами, заболеваемости сифилисом (Земцов М.А., Терзян В.А., 2006; Сон И.М. и др., 2006; Кунгуров Н.В. и др., 2008). Однако при этом среди различных форм течения сифилитической инфекции увеличился удельный вес её ранних и поздних скрытых форм, последние из которых сопровождаются тяжелыми поражениями нервной системы и внутренних органов (Балашова И.Ю., 2003; Калугин В .И. и др., 2003; Мавров Г.И., Щербакова Г.П., 2005; Савчак В.И., 2005; Чеботарёв В.В. и др., 2006; Родинов М.В., Прохоренков В.И., 2008; Соколовский Е.В., Красносельских Т.В., 2008; Сырнева Т.А. и др., 2009; Marra С.М., 2004), отмечается увеличение числа случаев врожденного сифилиса (Чеботарёв В .В., 2005; Думченко В.В. и др., 2006; Тихонова А.И. и др., 2006; Кунгуров В.В. и др., 2008).

Это позволяет сделать вывод о том, что в области сифилидологии к настоящему времени остаются нерешенными целый ряд проблем, к числу которых, в том числе, относятся причины ложноположительных серологических реакций на сифилис и возникновения у больных после лечения высокого процента случаев серорезистентности (Уфимцева М.А., 2003; Фриго Н.В., 2004; Вислобоков A.B., 2005; Ломоносов К.И., Новосёлов B.C., 2005; Баткае-ва Н.В., 2008; и др.), определенные трудности в диагностике и лечении этого заболевания (Маликов Е.В. и др., 2001; Уфимцева М.А. и др., 2005; Чеботарёв B.B. и др., 2005, 2006; Китаева Н.В. и др., 2008; Лосева O.K. и др., 2008; Василенко Т.А. и др., 2009; Кашутин C.JI. и др., 2009), несовершенство используемых методов профилактики и отсутствие специфической профилактики сифилиса (Соколовский Е.В., Красносельских Т.В., 2002; Вислобоков

A.B., 2005; ВОЗ, 2008; и др.).

Анализ известных научных данных показывает, что успешное решение указанных задач во многом связано с совершенствованием знаний о феноти-пической морфологической изменчивости Treponema pallidum pallidum (Т. pallidum) под влиянием различных факторов (Устименко Л.М., 1963; Беднова

B.Н., 2001; Пожарская В.О., Беднова В:Н., Климанович И.В., 2004; Пожарская» В.О., Казиев? А.Х., Климанович И.В;, 2004), а также о взаимосвязях и взаимодействии возбудителя; сифилиса с организмом человека (Родин Ю.А., Родин А.Ю., 2000; Быстрицкая Т.Ф., 2005; Мавров Г.И:, 2005, Степаненко В.И., Степаненко PJL, 2005; Капкаев P.A. и др., 2009).

Поскольку сифилис относится к антропонозным инфекциям для его экспериментального изучения в качестве модели широко используются кролики, причем наиболее сопоставимые у кроликов с экспериментальным сифилисом и у людей проявления сифилиса получают при интратестикулярном заражении кроликов патогенными бледными трепонемами (ПБТ) штамма Nichols (Овчинников Н.М., 1955; Тернер Т.Б., 1963; LaFond R.E., 2006; Go-dornes С. et al., 2007).

Установленное наличие в клеточных структурах не культивируемых in vitro ПБТ и культуральных бледных трепонем (КБТ) общих специфических антигенных детерминант (Милич М.В. и др., 1987; Овчинников Н.М. и др., 1987; Petersen C.S., Petersen N.H., Axeisen N.H., 1981; Pen C.W., 1993) обосновало получение клеточных структур из биомассы штаммов различных имму-ногенных групп КБТ и их традиционное использование в качестве специфических антигенов в серологических реакциях (CP) на сифилис (Пожарская В.О., 1997; и др.). Данное направление совершенствования серодиагностики сифилиса связано с поиском новых наиболее специфических и чувствительных антигенов для выявления в сыворотках крови больных антитрепонемных (AT) антител в CP на сифилис. Однако представляет несомненный научный и практический интерес рассмотрение на основе системного подхода качественно нового направления совершенствования серодиагностики сифилиса, основанного на использовании специфических антигенов КБТ, вызывающих при введении в организм на фоне сифилитической инфекции увеличение выработки не только AT, но и антикардиолипиновых (АК) антител, определяемых в CP на сифилис. Такой подход к проблеме невозможен без выделения и детального изучения функциональных свойств указанных антигенов в условиях in vivo для определения новых возможностей серологической дифференциальной диагностики заболевания сифилисом.

Задачи исследования:

4. Оценка влияния введения КСТ и ОП КСТ антигенов на фоне отрицательных результатов CP на сифилис с сыворотками крови ЗК и ЕЭС на выработку у них AT и АК антител и разработка нового способа серодиагностики серонегативных форм сифилиса.

5. Научно-производственная разработка на основе использования ОП КСТ антигена; получения, стандартизации и выпуска новой контрольной; положительной, кроличьей сыворотки (КГ1КС) для РМП с кардиолипином антигеном (РМП-К) на сифилис.

Научная новизна работы;

1. Впервые с позиций? системного подхода поставлена научная задача изучения- влияния» антигенов^ клеточных структур, культуральных. Т. pallidum на течение ЭСК и определены структуры подсистем - моделей, являющихся методологической основой решения этой задачи.

2. Получены новые научные данные о содержании в КСТ антигене, выделенном из смеси биомассы культур V, VTI, VIII, IX и Рейтер штаммов (представителей различных иммуногенных групп) КБТ, количества OFHA преимущественно белкового происхождения, определены массы сухого осадка КСТ антигена и полученного из него нового высокоспецифического ОП КСТ антигена, ус тановлено содержание в утраченной массе: сухого» осадка ОП КСТантигена OFHA преимущественно белкового происхождения^ а также увеличение в ОП КСТ антигене при стандартизации антигенов по массе сухого осадка содержания высокоспецифических протеинов.

3. Впервые установлены функциональные свойства КСТ и ОН КСТ антигенов при введении их КЭС на 14 день после заражения ПБТ:

- не оказывать влияние на клинические и макроскопические патолого-анатомические проявления у них сифилитической инфекции и влиять на сокращение срокови длительности этих проявлений от развития до распада шанкров за счёт активизации сифилитического процесса;

- увеличивать в шанкрах КЭС среднее процентное содержание извитых форм ПБТ за счет снижения содержания их зернистых морфологических форм и продлевать сроки определения извитых форм ПБТ в.шанкрах кроликов, что свидетельствует о ведущем их значении в активизации сифилитической инфекции;

- вызывать достоверное (р<0,05) повышение максимальных значений титров АТ и АК антител в сыворотках крови КЭС в СР на сифилис, и не влиять на сроки негативации этих антител в сопоставимых СР на сифилис.

4. Впервые выявлено функциональное свойство КСТ и ©П КСТ антигенов:

- при введении ЗК вызывать выработку только АТ антител и не-влиять на сроки их негативации весыворотках крови в РСК с ультраозвученным тре-понемным антигеном (РСК-УЗТА), а при» введении этих антигенов наг фоне негативации АТ антител также не вызывать у кроликов выработку АК антител;

- при введении КЭС на фоне негативации в их сыворотках крови АТ и АК антител в СР на сифилис вызывать у них выработку не только АТ, но и АК антител, переводя серонегативную форму сифилиса в его серопозитив-ную форму.

5. Впервые установлено функциональное свойство ОП КСТ антигена вызывать у КЭС выработку достоверно (р<0,05) большего количества преци-питирующих АК антител, определяемых в РМП-К на сифилис, по сравнению с КСТ антигеном, что явилось теоретическим обоснованием научно-производственной разработки на этой основе новой, стандартизированной КПКС для РМП-К на сифилис.

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработанные с позиций системного подхода структуры подсистем-моделей для комплексного изучения влияния антигенов клеточных структур КБТ на многоплановые характеристики течения сифилитической инфекции носят общетеоретический характер и являются методологической основой при дальнейшем изучении различных антигенов трепонем, влияющих на течение ЭСК. Впервые: разработаны технологические схемы и этапы получения ОП КСТ антигена — для изучения его функциональных свойств, в эксперименте на кроликах, и стандартизированных экспериментально-производственных серий препаратов «КСТ антиген» и «ОП КСТ антиген» — для проведения научных исследований и разработки выпуска экспериментально-производственных серий нового препарата «Сыворотка контрольная, положительная, кроличья- сухая для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис». ,'.•' ';■.

Установленные; новые функциональные свойства КСТ и ОП КСТ антаь генов при введении КЭС оказывать влияние на сроки клинических и макроскопических патологоанатомических проявлений ЭСК, на характеристики процентного соотношения в шанкрах кроликов различных морфологические форм; ПБТ позволили впервые экспериментально подтвердить ведущее значение извитых форм ПБТ в активизации сифилитического процесса при: первичном сифилисе.

Впервые выявленное свойство исследуемых антигенов при введении КЭС на фоне негативации сывороток в СР на сифилис вызывать у них выработку и АТ, и АК антител позволило впервые ретроспективно диагностировать латентный серонегати нный сифилис и явилось теоретическим обоснованием предложенного способа серодиагностики серонегативных форм сифилиса. V.- '.-.■'' V. •. •;

Материалы диссертационного исследования легли в основу, разработанной с использованием двукратного введения КЭС препарата «ОП КСТ антиген» новой технологической схемы этапов выпуска КПКС для РМП-К на сифилис, что позволило почти в два раза уменьшить поголовье кроликов-продуцентов при сохранении объёма производства сыворотки, а её использование в серологических лабораториях сделало возможным отказаться от использования в качестве контрольной сыворотки смеси резко положительных сывороток крови больных активными формами сифилиса и сократить в среднем на 1,5 часа в день время постановки и учета результатов РМП-К с сыворотками крови людей, обследуемых и больных сифилисом.

Внедрение в практику результатов исследования. Разработанные технологические схемы этапов изготовления экспериментально-производственных серий препаратов «КСТ антиген» и «ОП КСТ антиген», а также предложенные схемы получения высокотитражных по содержанию преципитирующих антикардиолипиновых антител сывороток от КЭС, на основе введений им ОП КСТ антигена, легли в основу разрабатываемого «Регламента производства сыворотки для диагностики сифилиса контрольной, положительной, кроличьей, сухой для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис» на базе ФРУП «НПО «Микроген» МЗ РФ филиал «Аллерген» (г. Ставрополь). Экспериментально-производственные серии этой сыворотки прошли испытания- на базе серологической* лаборатории РУЗ КККВД (г. Ставрополь) в качестве контрольной для постановки РМП-К на сифилис, которые установили её соответствие требованиям Приказа МЗ РФ № 87 от 26 марта 2001 г., предъявляемым к контрольным сывороткам при постановке РМП-К.

На защиту выносится:

3. Антигены КСТ и ОП КСТ при введении ЗК обладают функциональным свойством не вызывать выработку АК антител, а при введении зараженным кроликам увеличивать выработку АТ и АК антител (в том числе преци-питирующих), что в наибольшей степени характерно для ОП КСТ антигена.

4. Антигены клеточных структур КБТ при введении КЭС на фоне нега-тивации СР на сифилис обладают функциональным, свойством вызывать выработку не только АТ, но и АК антител, что позволяет впервые предложить основанный на данном свойстве способ ретроспективной диагностики латентной серонегативной формы сифилиса.

5. Результаты научно-производственной разработки получения* нового препарата «Сыворотка контрольная, положительная, кроличья, сухая для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис» позволяющие установить, что двукратное введение ОП КСТ антигена КЭС обеспечивает получение от них высокотитражных по содержанию преципитирующих антикардиолипи-новых антител сывороток, уменьшает почти в два раза поголовье кроликов-продуцентов при сохранении объемов производства сыворотки, а унификация и стандартизация сыворотки позволяет отказаться от использования в качестве контрольной сыворотки смеси сывороток крови больных активными формами сифилиса и сократить в среднем на 1,5 часа в день постановку и учет результатов РМП-К с сыворотками крови людей в серологических лабораториях.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы были доложены и обсуждены на XIV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Тель-Авив, Израиль, 2009 г.), II Съезде биотехнологов России (Москва, 2004 г.), IV съезде Общества биотехнологов России им. Н.М. Овчинникова (Пущино, 2006 г.), IX Съезде Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2007 г.), научной конференции «Постгеномная «эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань, 2004 г.), XII, XIII, XIV Итоговых (межвузовских) научных конференциях молодых ученых и студентов (Ставрополь, 2004-2006 гг.), заседаниях кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Ставропольской государственной медицинской академии.

Публикации. Основное содержание диссертационной работы^ отражены в ,15 печатных научных работах, в том числе 3 работы — в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации-основных результатов диссертации на соискание искомой ученой степени.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на листах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 381 источник, в том числе 265 отечественных и 116 иностранных авторов. Работа содержит 25 рисунков и 19 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Климанович, Инна Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Разработанная многоуровневая технологическая схема выделения из смеси штаммов различных иммуногенных групп культуральных бледных трепонем КСТ антигена позволила получить на его основе методом аффинной очистки новый высокоспецифический ОПКСТ антиген, освобождённый от общих групповых неспецифических антигенов.

2. Установлено, что новый высокоспецифический ОПКСТ антиген содержал в среднем на 38% меньше общих суммарных белков по сравнению с КСТ антигеном, а утраченные в процессе аффинной очистки КСТ антигена 20% массы сухого осадка включали в среднем до 87% ОГНА белкового происхождения, что подтверждает более высокую специфичность полученного ОПКСТ антигена, по сравнению с КСТ антигеном.

ПБТ в шанкрах кроликов при первичном сифилисе, причем у ОП КСТ антигена эти свойства более выражены, по сравнению с КСТ антигеном;

- вызывать, при* введении ОП КСТ антигена достоверно * (р<0,05) большую выработку максимальных значений средних титров«комплементсвязьь вающих и преципитурующих А£ЕС антител, определяемых в СР на сифилис, по сравнению с КСТ антигеном; - не влиять на сроки негативации АТ. и АК антител сывороток крови; которые в РСК-УЗТА и в РСК-К совпадают и составляют ,9,5 месяцев; а АК антител в РМП-К - 8?месяцев

5: Доказано; чтоЖСТ и; ОЙ КСТ антигены, обладают функциональным свойством? пршвведешда на^фонё- негативации« сывороток; кровш в на» сифилис уЗКвызывать выработку только АТ антител, у КЭС — вызывать выра-г ботку и?АТ ш АКантител,; что позволяет пршвведенитОПЖСТ антигенагче-рез 15 дней; а' при введении КСТ антигена - через; 30 дней по результатам РСК-К и через 45дней по результатам РМП-К после введения антигенов, ретроспективно диагностировать у кроликов латентную серонегативную? форму экспериментального сифилиса по наличшо в сыворотках крови АК антител.

6. Проведена научно-производственная разработка' и выпущены экспе-риментрсьно-производственных серии нового, стандартизированного по титру 1: 8 (++++). препарата «Сыворотка контрольная, положительная, кроличья; .сухая: для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис», позволившая почти в 2 раза сократить поголовье кроликов-продуцентов,, при сохранении объёмов выпуска сыворотки, а также унифицировать, стандартизировать и сократить в среднем на 1,5 часа в день, постановку и учет результатов РМП-К с сыворотками крови людей в серологических лабораториях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Сифилис по определению является системным хроническим инфекционным заболеванием, характерной особенностью которого является волнообразное течение. В настоящее время у нас в стране, судя по результатам проводимого мониторинга, отмечается уменьшение заболеваемости сифилисом. Однако при этом установлено, что по мере угасания вспышки заболевания в регионах увеличивается* число случаев диагностики в них скрытых форм сифилиса, в том числе раннего скрытого, составляющего в структуре диагностики форм заболевания до 37% и представляющего серьёзную эпидемическую опасность с точки зрения передачи заболевания; В целом ряде случаев представляет серьёзные трудности диагностика поздних форм сифилиса, включающих латентный, висцеральный, нейросифилис и др., а также врождённого сифилиса.

В результате проведенного в работе с позиций системного подхода анализа известных научных данных установлено, что ведущими в защите организма при сифилитической инфекции являются гуморальные факторы иммунной системы - специфические антитела, действия которых направлены на элиминацию возбудителя из организма человека. Поэтому одним из механизмов, влияющих на течение сифилитической инфекции в организме человека, является функциональная взаимосвязь и взаимодействие ПБТ, с одной стороны, и иммунного ответа организма человека на антигены ПБТ — с другой.

Однако механизмы этих взаимодействий ещё недостаточно изучены, в частности особенности приспособления Treponema pallidum pallidum к длительной персистенции в организме больных и способности спустя годы при отрицательном КСР на сифилис вызывать поздние формы сифилитической инфекции.

Установленная в известных работах на антигеном уровне взаимосвязь между патогенными и культуральными бледными трепонемами позволила сделать вывод о влиянии антигенов клеточных структур КБТ на течение сифилитической инфекции й разработать на основе проведенного'анализа системы борьбы с заболеванием сифилисом подсистемы-модели решения поставленных научных задач. В качестве модели заболевания человека сифилисом в работе выбраны КЭС, полученным путём их интратестикулярного заражения ПБТ штамма Nichols.

В связи с отсутствием источников получения в готовом виде исследуемых антигенов клеточных структур КБТ в работе впервые поставлена и решена задача научно-производственной разработки получения, стандартизации и выпуска экспериментальных и экспериментально-производственных серий антигенов клеточных структур КБТ двух видов - антигенов клеточных структур КБТ, содержащих и не содержащих в своём составе ОКНА. При этом на основе разработанной технологической схемы» впервые были получены клеточные структуры-КБТ, не содержащие общие групповые неспецифические антигены - ОП КСТ антиген. Впервые установлено, что суммарные белки КСТ антигена содержат в среднем 38% ОГНА преимущественно белкового происхождения. Определение содержания суммарных белков в полученных антигенах и стандартизация их по массе сухого осадка, а также определение стандартной рабочей дозы антигенов, вводимой ЗК и КЭС, позволили обеспечить сравнимость и достоверность полученных результатов исследований.

В связи с известным влиянием генетических особенностей антигенов различных штаммов ПБТ на развитие ЭСК, отсутствие современных научных данных о клинических и макроскопических патологоанатомических проявлениях и микроскопических характеристиках морфологических форм ПБТ при ЭСК не позволяет проведение оценки влияния введения клеточных структур КБТ на исследуемые характеристики течения ЭСК. Поэтому в работе определены формы и стадии течения ЭСИ кроликов, как для случая, когда исследуемые антигены кроликам не вводились, так и для случаев введения КСТ и ОП КСТ антигенов. В качестве определяющего критерия оценки влияния антигенов клеточных структур КБТ на течение ЭСИ кроликов выбраны сроки проявления у 100% кроликов различных форм и стадий течения экспериментального сифилиса.

Впервые установлено функциональное свойство КСТ и ОП КСТ антигенов при введении кроликам на 14 день после их заражения ПБТ не оказывать влияние на характеристики клинических и макроскопических патолого-анатомических проявлений ЭСИ кроликов и оказывать влияние на сроки и длительность этих проявлений — сокращать длительность стадий от развития до распада шанкров на 2 недели.

Впервые при помощи микроскопических исследований морфологических форм ПБТ в пунктатах из орхитов и шанкров кроликов при первичной форме экспериментального сифилиса показано, что антигены клеточных структур КБТ при введении кроликам, на 14 день после их заражения ПБТ обладают функциональным свойством продлевать сроки определения в пунктатах извитых форм ПБТ. При этом ОП КСТ антиген обеспечивает более длительное определение извитых форм ПБТ в пунктатах из яичек, по сравнению с КСТ антигеном на 1 неделю, а по сравнению с контрольной группой — на 2 недели.

Проведенные исследования* влияния антигенов клеточных структур КБТ на иммунный ответ ЗК и КЭС позволили впервые установить функциональное свойство этих антигенов при двукратном введении не вызывать у здоровых кроликов выработку АК антител, что явилось теоретической основой для разработки нового способа диагностики серонегативных форм сифилиса.

Впервые доказано, что антигены клеточных структур КБТ при введении на 14 день после заражения кроликов ПБТ не влияют на сроки полной негативации в их сыворотках крови АТ и АК антител в СР на сифилис. Показано, что сроки негативации в сыворотках крови- АК антител в РМП-К наступают на 1,5 месяца раньше, по сравнению со сроками их негативации в РСК-К. Это позволяет сделать вывод о большей чувствительности РСК-К по срав

4 . 140 нению с РМП-К и целесообразности использования РСК-К, как при серодиагностике сифилиса, так и при контроле эффективности его лечения.

Впервые установлено функциональное свойство антигенов клеточных структур КБТ, при введении КЭС на фоне негативации их сывороток крови в CP на сифилис, вызывать у них выработку АК антител, которые не вырабатываются при введении клеточных структур КБТ в этих условиях у ЗК.: Данные: исследования явились теоретическим обоснованием предложенного нового способа серодиагностики- латентной- серонегативной формы ЭСК, основанного на; активизации сифилитическрй инфекции. Введение: КСТ и ОП КСТ антигенов КЭС на фоне негативации их сывороток крови в CP на сифилис позволяет через 15-45 дней после введения данных антигенов диагностировать у кроликов латентную серопозитивную ЭСИ; по наличию в их сыворотках крови АК антител и ретроспективно диагностировать латентную се-ронегативную форму экспериментального сифилиса: Приоритет нового способа серодиагностики сифилиса защищён заявкой на изобретение № 2010105601 от 16.02.2010 г. [50].

Впервые установлено функциональное свойство ОП КСТ антигена, освобожденного от OFHA, при введении кроликам на. 14 день после их заражения ПБТ, вызывать у кроликов достоверно (р<0,05) большую выработку пре-ципитирующих АК антител, определяемых в РМП-К на сифилис, по сравнению с КСТ антигеном, или при отсутствии введения кроликам исследуемых антигенов. Полученные данные явились теоретическим обоснованием использования, двукратного введения ОП КСТ антигена КЭС при разработке получения высокотитражной контрольной; положительной; кроличьей сыворотки для РМП-К на сифилис. Новые научные данные позволили впервые разработать получение, стандартизацию и выпуск экспериментальных и экспериментально-производственных серий препарата «Сыворотка контрольная, положительная, кроличья, сухая для РМП с кардиолипиновым антигеном на сифилис», использование которой дает возможность усовершенствовать постановку РМП-К за счёт отказа от использования в качестве контрольной сыворотки, согласно приказа МЗ РФ № 87 от 26.03. 2001 г., смеси резко положительных сывороток крови людей, больных активными формами сифилиса, требующих ежедневного их получения и титрования перед постановкой РМП-К.

Приоритет нового способа получения стандартизированной контрольной, положительной, кроличьей сыворотки для РМП с КА на сифилис защищен заявкой на изобретение № 2009110650 от 23.03.2009 г., получившей 04.05.2010 г. положительное решение на выдачу патента [49]. На основе данного способа были разработаны изменения к Регламенту производства №04863028-28-02 препарата «Сыворотка для диагностики сифилиса контрольная, положительная для РСК», которые позволяют в дальнейшем разработать Регламент производства и осуществить выпуск нового контрольного диагностического препарата на базе ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Аллерген» (г. Ставрополь). Исследования экспериментальной серии контрольной сыворотки, проведенные в работе, и испытания экспериментально-производственных серий данной контрольной сыворотки на базе ГУЗ КККВД (г. Ставрополь) подтвердили её соответствие требованиям приказа МЗ РФ № 87 от 26.03. 2001 г., предъявляемым к контрольной сыворотке при постановке РМП-К.

Использование предложенного способа получения контрольной сыворотки для постановки РМП-К на сифилис обеспечивает при сохранении объёма производства сыворотки уменьшение в 2 раза поголовья используемых для этих целей кроликов-продуцентов, а также за счет применения готовой стандартизированной по титру 1: 8 (++++) контрольной, положительной, кроличьей сыворотки сократить время постановки и учета результатов контроля РМП-К с сыворотками крови людей, обследуемых на сифилис, в среднем до 1,5 часов в день.

Таким образом, по совокупности полученных в работе новых научных данных о влиянии антигенов клеточных структур культуральных Treponema pallidum pallidum на течение сифилитической инфекции (в эксперименте на кроликах) и разработанной на этой основе новой контрольной положительной сыворотки для реакции микропреципитации на сифилис можно сделать вывод о том, что поставленная в диссертационной работе цель исследования достигнута.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Климанович, Инна Викторовна, Ставрополь

1. Аковбян, В.А. Рациональная терапия инфекций, передаваемых половым путём: основные принципы и реальность / В.А. Аковбян, В.Г. Нестеренко // Клиническая дерматол. и венерол. 2005. - № 4. — С. 151-155.

2. Анализ заболеваемости врожденным сифилисом в Астраханской области за 10 лет / В.В. Думченко и др. // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2006.-№2.-С. 36-38.

3. Афонин, A.B. Гепатиты как причина серорезистентности при сифилисе и ложноотрицательных серореакций / A.B. Афонин, В.А. Молочков, А.О. Буеверов // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2003. — № 2. - С. 48-50.

4. Афонин, A.B. Ложноположительные пробы на сифилис у больных с вне лёгочными формами туберкулёза / A.B. Афонин, Е.О. Прецманас, Т.А. Смирнова // Пробл. туберкулёза и болезней лёгких. 2004. — № 2. - С. 5152.

5. Бакулев, A.JI. Об особенностях сифилиса нервной системы / A.JI. Бакулев, О.В. Колоколов, А.П. Суворов // Вестн. дерматол. и венерол. — 2002. № 4. - С. 53-57.

6. Балашова, И.Ю: Особенности внутрисердечной гемодинамики, вегетативной регуляции, поражений аорты и изменения фосфатидилипозитов у больных сифилисом: авториф. дис. . канд. мед. наук / И.Ю. Балашова. -М., 2003.-22 с.

7. Баткаев, Э.А. Современные проблемы венерологии / Э.А. Баткаев, Д.В. Рюмин // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2009. - № 3. - С. 45-51.

8. Баткаева, Н.В. Серорезистентность при сифилисе (обзор литературы) / Н.В. Баткаева // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2008. № 6. — С. 4551.

9. Башкаев, Э.А. Серорезистентность после лечения раннего сифилиса при сплошной выборке / Э.А. Башкаев, М.В. Шапаренко, И.Г. Шульгина // Вестн. последиплом. мед. образ. 2001. - № 1. - С. 129-130.

10. Беднова, В.Н. К вопросу о биологии*возбудителя сифилиса / В.Н. Беднова // Вести, последиплом. мед. образ. 20011. — № 4. — С. 24-27.

11. Безрученко, A.A. Эпидемиологическая характеристика больных сероре-зистентным сифилисом / A.A. Безрученко // Дерматол. та венерол. — 2002. №3. - 71 -72. - Украина.

12. Беликов, А.Н. Заболеваемость нейросифилисом в Калужской области / А.Н. Беликов, H.A. Демидов, Л.Ф. Комлева // Венерология. 2007. - № 21 -С. 43-45.

13. Ближайшие и отдалённые результаты лечения цефтриаксоном больных вторичным и ранним скрытым сифилисом»/ О.М. Ющенко и др. // Вестн. дерматол. и венерол. — 2003. — № 6. — С. 55-58.

14. Быстрицкая, Т.Ф. Актуальные проблемы практической венерологии / Т.Ф. Быстрицкая // Венеролог. 2005. - № 2. - С. 32-38.

15. Варианты математического моделирования эпидемиологического процесса при сифилисе / В.И. Прохоренков и др.' // Клиническая дерматол. и венерол. 2009. - № 3. - С. 47-51.

16. Василенко, Т.А. Диагностика сифилиса: проблемы и перспективы / Т.А*. Василенко, Ю.Н. Перламутрова // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2009.-№3.-С. 52L56.>

17. Вислобоков, A.B. Особенности < клинических проявлений сифилиса у сельских жителей / A.B. Вислобоков // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2006. - № 1. - С. 46-49.

18. Вислобоков, A.B. Особенности эпидемиологии врожденного сифилиса в сельской местности / A.B. Вислобоков, K.M. Ломоносов // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2006. - № 3. - С. 43-45.

19. Выявление ДНК и РНК Treponema pallidum в клиническом материале у пациентов с различными стадиями сифилиса / E.H. Родионова и др. // Журн. микробиол. 2003. - № 3 . - С. 43-50.

20. Вязмина, Е.В. Сывороточный уровень цитокинов и растворимых форм; мембранных антигенов клеток иммунной: системы. / Е.В: Вязмина;. В.В. Новиков; Т.Г. Мартынова^// Цдтокинышгвоспаление.- — 2002. Т. 1С— №*31.

21. С. 15-19. ' .•"'•/: ■ ■ . .23: Гаджиева, Х.М. Сравнительная1 эффективность прокаинпенициллина и бензатинбензилпенициллина при вторичном и раннем скрытом сифилисе / Х.М. Гаджиева // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2006. - № 3: - С.49.51. " . ■

22. Главинская, Т.А. Ложноположительные серологические реакции на сифилис при красной волчанке / Т.А. Главинская, Н.В. Фриго // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2003. — № 1. С. 23-26.

23. Глазко, И.И. Современные подходы к молекулярной диагностике сифилиса / И.И. Глазко, Г.А. Дмитриев // Венерол. 2006. - № 10. - С. 36-42.

24. Глобальная стратегия профилактики инфекций, передаваемых половым путём, и борьбы с ними, 2006 — 2015 гг.: Всемирная организация здравоохранения // Вестн. дерматол. и венерол. 2008. - № 4. - С. 18-30.

25. Глобальная стратегия профилактики инфекций, передаваемых половым путём, и борьбы с ними, 2006 — 2015 гг.: Всемирная организация здравоохранения // Вестн. дерматол. и венерол. 2008. — № 5. - С. 97-122.

26. Горчакова, Т.А. Этапы в развитии серодиагностики сифилиса / Т.А. Горчакова, И.В. Климанович // XTV итоговая (межрегиональная) научн. конф. студентов и молодых учёных: тез. докл. / СГМА. — Ставрополь, 2006. — С. 82-83.

27. ГОСТ 8.207 76. Прямые измерения с многократными1 наблюдениями. Методы обработки результатов наблюдения. Основные положения // ГСИ. - М., 1976.-21 с.

28. Гусева, С.Н. Использование теста IgM-РИФ абс в обследовании'беременных на активность сифилитической инфекции / С.Н. Гусева, С.И. Данилов // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2005. - № 4. - С. 28-30.

29. Данилов, С.И. Новая концепция формирования серорезистентности после лечения сифилиса / С.И. Данилов, П.Г. Назаров // И111111. 2000. - № 2. -С. 16-19.

30. Данилов-Данильян, В.И. Моделирование. Системно методологический аспект / В.И. Данилов-Данильян, A.A. Рыбкин // Системные исследования: ежегодник АН СССР. - М.: Наука, 1982. - С. 182-209.

31. Делекторский, В.В. Морфология бледной трепонемы (электронномикро-скопические исследования): автореф. дис. . канд. мед. наук /В;В. Ди-лекторский. М., 1971 . — 23 с.

32. Диагностическая информативность реакции пассивной гемагглютинации при нейросифилисе / Н.В. Фриго и др. // Вестн. дерматол. и венерол. -2008.-№ 1.-С. 23-27.

33. Динамика заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путём, в Краснодарском крае в 1995 2004 гг. и организация медицинской помощтнаселению в современных условиях / И.М. Сон и др. // Вестн. дерматол. и венерол. 2006! — № 6. — С. 10-14. •

34. Дмитриев, Г.А. О возможной причине возникновения серорезистентности при сифилитической инфекции / Г.А. Дмитриев, A.B. Афонин // Вестн. дерматол. и венерол. — 2003. № 3. — G. 47-48.

35. Дмитриев, Г.А. Общественный; прогресс остановить не.возможно5 / Г.А. Дмитриев/Клиническаядерматол.ивенерол. 2004. -№ 1. - С. 92-93.

36. Дмитриев, Г.А. Сифилис. Дифференциальный клинико — лабораторный диагноз: монография /Ц.М. Ддегриев;.HIB*: Фриго; Mlг.^Мёд;;книга^,2004:;

37. Ермолов; A.B. Модифицированная тиогликолевая^ среда;для культивирования производственных штаммов Treponema pallidum: дисс. . канд. мед. наук/ А.В: Ермолов: Ставрополь. - 2002: —191 с:

38. Завьялов, А.И. Сравнительная оценка отдалённых результатов лечения больных ранними формами сифилиса пенициллином и его дюрантными препаратами / А.И. Завьялов, A.JI. Бакулев // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2000. - № 6. - С. 52-54.

39. Заявка на изобретение 2010105601 РФ, МПК8 G 01N* 33/00. Способ неспецифической серологической диагностики серонегативных форм течения заболевания сифилисом / И.В. Климанович и др.; Заяв. 16.02.2010.

40. Земцов, М.А. Эпидемиологические особенности сифилиса в Ставропольском крае // М.А. Земцов, В.А. Терзян // Эпидемиол. и инфекц. болезни. -2006.-№3.-С. 22-24.

41. Иванова, М.А. Развитие эпидемиологической ситуации по ИППП в России за последние 10'лет (1994 2004) / М.А. Иванова, O.K. Лосева // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2006. - № 3. - С. 55-56.

42. Ивлиева, М.С. Особенности течения экспериментального сифилиса у кроликов, морских свинок и белых мышей: автореф. дис. . канд. мед. наук / М.С. Ивлиева. М., 1985. 16 с.

43. Изучение малых молекул микробного происхождения в крови человека с применением хроматомассспектрометрии / Н.В. Белобородова и др. // Клин. лаб. диагностика. 2005. - №9. - с. 78.

44. Иммуноблоттинг в диагностике ранних форм сифилиса / Н.В. Фриго и др. // Вестн. дерматол. и венерол. 2008. - № 4. - С. 57-62.

45. Индикация молекулярных маркеров Treponema pallidum в лабораторной диагностике сифилиса / А.Ю. Миронов и др. // Молекул, мед. 2005. -№4.-С. 58-63.

46. Инструкция по изготовлению питательной тиогликолевой среды для контроля чистоты живых вакцин // Т.В. Кондрашова и др.. М.: МЗ СССР, 1981.-6с.

47. К вопросу о вассерманонегативном скрытом сифилисе / P.A. Капкаев и др. // Клиническая дерматол. и венерол. 2009. - № 3. — С. 25-28.

48. К вопросу о ложной позитивности результатов серологических реакций на сифилис / Э.А. Баткаев- и др. // Вестн. последиплом. мед. образ. -2006.-№2.-С. 14-16.

49. К оценке результатов ИФА и РИГА у лиц, получавших ранее превентивное лечение сифилиса / M.JI. Алмазов и др. // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2008. - № 3. - С. 46-48.

50. Калугин, В.И. Проблема сифилиса центральной нервной системы / В.И. Калугин, Г.Д. Селисский, П.Г. Богуш // Вестн. дерматол. и венерол. — , 2003.-№3.-С. 63-66. v

51. Капкаев, P.A. Эритроциты при сифилисе и лечение бензилпенициллином (экстенциллином) / P.A. Капкаев, И.Б. Нурматова, М.И. Байбекова // Вестн. дерматол. и венерол. — 2001. № 3. - С. 45-49.

52. Карачёва Ю.В. О механизмах клинического полиморфизма сифилитической инфекции / Ю.В. Карачёва, В.А. Аковбян, В.И. Прохоренков // Вестн. дерматол. и венерол. 2001. - № 3. - С. 39-44.

53. Кардашенко, Б.Я. К вопросу о рациональной терапии инфекций, передаваемых половым путём / Б.Я. Кардашенко // Клиническая дерматол. и венерол. 2006. - № 2. - С. 107.

54. Карпенко, В.В. Обезболивание животных в эксперименте / В.В. Карпенко, В.И. Сачков // Методические рекомендации. — М., 1985. 53 с.

55. Ким, А.Э. HLA — антигены и характер иммунного ответа у больных скрытым сифилисом: автореф. дис. . канд. мед. наук / Э.А. Ким. — Москва. -2000. -19 с.

56. Китаева, H.B. Актуальные проблемы сифидологии. Современные технологии диагностики сифилитической' инфекции / Н.В. Китаева, Н.В. Фри-го, JI.E. Мелёхина // Вестн. дерматол. и венерол. — 2008. — № 5. — С. 51-59.

57. Клинико — эпидемиологические особенности, сифилиса у детей в период последней.эпидемии в России / М.А. Иванова и др. // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2006.* — № 6. — С. 69-73.

58. Клинико эпидемиологические особенности течения сифилиса в Санкт -Петербурге / Г.Н. Бурыкина и др. // Вестн. дерматол. и венерол. - 2006. -№ 1.-С. 46-49.

59. ЬСлинические особенности и методы диагностики поражения слизистой оболочки полости рта при сифилисе / В.О. Пожарская и др. // Dental-Forum. 2009. - № 5. - С. 53-56.

60. Ковалёв, Ю.Н: Случайфаннего нейросифилиса / Ю.Н. Ковалёв; O.A. Казакова, T.G. Барыкова // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2006: № 3. — С. 48-49.

61. Колб, В.Г. Справочник по клинической химии / В.Г. Колб, В:С. Камышников. Минск: Беларусь, 1982. — С. 201-204.

62. Конюхова, К.А. Галлюцинаторно — параноидальный синдром как проявiление реакции Гексгеймера у больного сифилисом / К.А. Конюхова, F.H. Григорьева, A.C. Кудрявцев // Клиническая^дерматол. и венерол. 2008. -№ 1.-С. 48-49.

63. Корабейникова, Э.А. Об эффективности лечения больных сифилисом препаратами пенициллина / Э.А. Корабейникова, А.И. Рахматуллин, В.В. Шерстянникова // Вестн. дерматол. и венерол. — 2003. — № 6. — С. 59-62.

64. Корабейникова, Э.А. Ошибка в диагностике вторичного сифилиса / Э.А. Корабейникова, Р.А. Колодкина, О.В. Молоземова // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2009. - № 1. - С. 30-31.

65. Корабейникова, Э.А. Респективный обзор результатов лечения больных ранними формами сифилиса препаратами пенициллинового ряда / Э.А. Корабейникова, А.И. Рахматуллина // И111111. 2001. - № 5. - С. 10-14.

66. Кошкин, С.В. Некоторые показатели иммунитета у больного вторичным сифилисом с отрицательными серологическими реакциями / С.В. Кошкин, Г.А. Зайцева, Г.В. Чермных // Вестн. дерматол. и венерол. 2003. -№ 6. - С. 53-54.

67. Кубанова, А.А. Достижения и перспективы изучения Treponema pallidum / А.А. Кубанова, Н.В. Фриго, Н.В. Китаева // Вестн. дерматол. и венерол. -2006.-№5.-С. 34-37.

68. Кулагин, В.И. Антиоксидантовый статус у больных серорезистентным сифилисом / В.И. Кулагин, П.Г. Богуш, Т.В. Чистякова // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2002. — № 6. С. 51-55.

69. Кунгуров, H.B. Новые подходы к проблеме врожденного сифилиса / Н.В! Кунгуров, А.И. Макаренко, Т.А. Сырнева // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2006. - № 2. - С. 33-35.

70. Кунгуров, Н.В. Эпидемиологические аспекты заболеваемости сифилисом беременных и новорождённых / Н.В. Кунгуров, Т.А. Сырнева, Л.Юг Бер-дицкая // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2008. — № 1. - С. 56-58.

71. Курамшина, Е.Р. О сдвигах тереоидного статуса и некоторых метаболических показателей при- сифилисе / Е.Р1 Курамшина, А.Ж. Гильманов, Г.В. Тимашёва // Клинич. лаб. диагност. 2005. -№1. - С. 35-38.

72. Лабораторная диагностика ИПШГв Российской Федерации4. Результаты национального исследованиям / Н.В! Фриго и др. // Вестн. дерматол. и венерол. 2008. - № 5. - С. 33-41.

73. Лесницкий, A.A. Анализ ответов реакции Вассермана у больных ранним скрытым сифилисом?/ A.A. Лесницкий// Украин. журн. дерматол., венерол., косметол. 2005: - № 3. — С. 204. - Украина.

74. Литвин, Ю.В1 Обратимый переход бактерий в покоящееся (некультиви-руемое) состояние: экологические и генетические механизмы / Ю.В. Литвин, А.Л. Гинзбург, В.И. Пушкарёва // Вестн. РАМН. 2000* - № 1. -С. 7-13.

75. Ломоносов, K.M. Актуальное интервью. Новое в диагностике и терапии сифилиса / K.M. Ломоносов // Рос. журнал кож. и венер. болезней. -2002.-№5.-С. 56-60.

76. Лосева, O.K. Пробеницид как препарат, способствующий проникновению пенициллина в ликвор при лечении нейросифилиса / O.K. Лосева;; Э.Ш. Тактамышева, A.M. Аминов // Вестн. дерматол. и венерол. — 2000. -№3.-G. 73-75.

77. Лосева; 0:К. Результаты клинико — серологического наблюдениям после: лечения больных ранними» формами» сифилиса? с различною длительностью заболевания / O.K. Лосева; Н.В; Китаева. И:А. Тоскин // Вёстн. дерматол: швенерол:-200К-№ 4v С. 46-501

78. Мавров; Г.И: Особенности развития инфекционного? процесса- при« ранних формах сифилиса / Г.ИГ Мавров, F.M: Бондаренко // Журнал дерматол. и венерол. 2000. - № 4. - С. 12-16:

79. Мавров, Г.И; Нарушение церебральной и периферической гемодинамики у больных с, ранними формами сифилиса / И.И. Мавров; O.A. Про-ценко//Дерматол. тавенерол. — 2001. — Ж 4, С; 19-221 —Украина.

80. Мавров, Г.И. Некоторые аспекты патогенеза сифилиса. Новые подходы в лечении / Г.И. Мавров // Журн. дерматол. та венерол. 2000. - № 1 -С. 65-68. - Украина.

81. Мавров, Г.И. Очерки истории сифилиса (малоизвестные факты и выводы) / Г.И. Мавров // ИППП. 2001. - № 3. - С. 41-42.

82. Мавров, Г.И. Проблемы современной сифидологии / Г.И. Мавров // Ук-раин. журн. дерматол. венерол. косметол. 2005. - № 3. - С. 204. - Украина.

83. Мавров, Г.И. Скрытый сифилис современное состояние проблемы / Г.И Мавров, Ю.В. Щербакова, Г.П. Чинов // Эксперим. и клинич. мед.2004.-№2.-С 176-181.110: Мавров, Г.И: Скрытый сифилис на современном, этапе / Г.И. Мавров;

84. Методы общей бактериологии / Под. ред. Ф. Герхарда и др.. М.: Мир,1983.-Т. 2.-С. 138-139.114. Механизмы выживания бактерий / О.В: Бухарин и др.. М.: Медицина,2005.-367 с.

85. Милич, М.В. Случай вторичного рецидивного сифилиса с отрицательным стандартным серологическим комплексом / М.В. Милич; JT.B. Су-щенко, Т.С. Куршакова // Вестн. дерматол. и венерол. 1988. - № 9. - С. 68-69.

86. Министерство здравоохранения'Российской'Федерации. О совершенствовании серологической диагностики, сифилиса: Приказ M3i РФ от 26 марта 2001 г. № 87. М.: МЗ РФ, 2001. - 63 с.

87. Министерство здравоохранения РФ. Регламент производства № 048 630 28-28-02 сыворотки для диагностики сифилиса контрольной, положительной, сухой для РСК. МЗ РФ, 2002. - 54 с.

88. Миросян, М.Е. Сифилитический панувеит / М.Е. Миросян, Р.Н. Саркисян // Вестн. дерматол. и венерол. — 2001. № 1. — С. 78-79.

89. Морозов, A.A. Проблемы создания многоуровневых систем поддержки принятия решений в. современных эколого — экономических системах /

90. A.A. Морозов, Н.Д. Чепурной // Системный, анализ и методы математического моделирования в экологии: сб: научн. тр. АН? УОСР.! — Киев, 1990.-С. 4-20.

91. Мыскин, B.C. «Серорезистентность» при сифилисе вшрактике дерматовенеролога / BIG. Мыскин, O.K. Лосева Г.А. Капустин // ИППП. 2003. -№«2:-С. 24-26.

92. Нагоев, Б.С. Состояние свободно радикального перекисного окисления липидов у больных сифилисом / Б.С. Нагоев, Ф.К. Бжахова // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2008. - № 21 — С. 54-56.

93. Некоторые результаты молекулярно — генетических исследований куль-туральных и.патогенных штаммов бледной трепонемы / М.В. Милич и др.,// Веста, дерматол. и венерол. 1987. - № 12. - С. 19.

94. Немакина, О.В. Эпидемиологическая и клиническая характеристика сифилитической инфекции у больных туберкулёзом в Читинской области / О.В. Немакина // Сибир. журн. дерматол. и венерол. 2006. - № 7. - С. 89-91.

95. Нестеренко, В.Г. Серорезистентность после лечения сифилиса: дюрант-ные пенициллины и новый серологический диагностический комплекс /

96. B.Г. Нестеренко, В.А. Аковбян, JI.A. Петренко // Рос. журн. кож. и венер. болезней. 2005. - № 4. - С. 12-16.

97. Нестеренко, В.Г. Сифилис как проявление хронической системной инфекции / В.Г. Нестеренко и др. // Журнал микробиол. 2006. — № 4.1. C. 120-124.

98. Николаев, А.И. Влияние сифилитической инфекции у больных вторичным сифилисом на показатели сосудисто — тромбоцитарного гемостаза / А.И. Николаев, В.М. Яковлев, Н.Г. Короткий // Рос. журнал кож. и венер. болезней. -2001. -№ 1. —С. 50-51.

99. Новосёлов, B.C. Результаты Всероссийского анкетирования по серодиагностике сифилиса / B.C. Новосёлов, A.B. Новосёлов, Н.Г. Кочергин // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2007. - № 4. - С. 71-73.г

100. Новые диагностические возможности лабораторной диагностики сифилиса мочеполовой системы / А.Ю. Миронов и др. // Клин. лаб. диагност. 2008. - № 9. - С. 51-52.

101. О некоторых спорных вопросах эволюции сифилиса / В.И. Прохоренков и др. //ИППП. — 2003. — № 1.-С. 17-20.

102. О повторных заражениях сифилисом / В.Г. Панкратов и др. // Рос. журн. кож. и венер. болезней. — 2005. № 1. - С. 38-42.

103. Обоснование профилактики врождённого сифилиса при введении про-каин пенициллина беременным / С.Г. Александрова и др. // Клиническая дерматол. и венерол. — 2005. - № 1. — С. 27-30.

104. Овчинников, Н.М. Атлас электронной микроскопии некоторых представителей рода трепонема, рода нейссерия и рода трихомонад / Н.М. Овчинников, В.В. Делекторский. М.: Медицина, 1974. - 51 с.

105. Овчинников, Н.М. Дальнейшее изучение взаимоотношения клеточных элементов шанкра с бледной трепонемой / Н.М. Овчинников, В.В. Делекторский, Н.С. Гладкова // Вестн. дерматол. и венерол. — 1984. № 1. -С. 30-33.

106. Овчинников, Н.М. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путём / Н.М. Овчинников, В.Н. Беднова, В.В. Делекторский. М.: Медицина, 1987. - 304 с.

107. Овчинников, Н.М. Регламент производства ультраозвученного трепо-немного антигена / Н.М. Овчинников, Л.С. Резникова, Л.Г. Сагдеева. -М., 1970. 143 с.

108. Овчинников, Н:М. Ультраструктура возбудителей венерических заболеваний и её клиническое значение / Н.М. Овчинников, В.В. Делектор-ский. М.: Медицина, 1986. - 224 с.

109. Овчинников, Н.М. Экспериментальный сифилис: монография / Н.В. Овчинников. М.: Медгиз., 1955. - 288 с.

110. Опыт активного мониторинга и контроля эпидемиологической ситуации по заболеваемости сифилисом на территориях Урала, Сибири и Дальнего Востока / Н.В. Кунгуров и др. // Вестн. дерматол. и венерол. 2008. — № 5. — С. 24-32.

111. Опыт использования метода иммуноблоттинга для диагностики сифилиса / А.А. Кубанова и др. // Вестн. дерматол. и венерол. 2006. — № 2. -С. 4-11.

112. Опыт применения протеомных технологий в изучении сифилитической инфекции / Н.В. Китаева и др. // Тез. докл. II Всерос. конгрес. дерматол. (С.-П., 25 28 сентября 2007). - С.П. - С. 160.

113. Оркин, В.Ф. К 100-летию открытия возбудителя сифилиса / В.Ф. Оркин, А.И. Завьялов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммубиол. — 2006. № 6.-С. 106-107.

114. Осипов, Г.А. Исследование липидной фракции, клеточных взвесей Treponema pallidum и биологических жидкостей больных сифилисом / Г.А. Осипов, В .А. Аковбян, Н.Б. Бойко // ЗППП. 1999. - № 6. - С. 9-13.

115. Основные эпидемиологические закономерности распространения сифилиса в Республике Тыва / Сырнева Т.А. и др. // Клиническая дерматол. и венерол. 2009. - № 3. - С. 35-37.

116. Особенности иммунных реакций у больных сифилисом с серорези-стентностью при терапии цефтриаксоном и гепоном / Ю.Н. Перламутров и др. // Клиническая дерматол. и венерол. — 2006. № 1. - С. 71-74.

117. Острые биологически ложноположительные реакции на сифилис при заболеваниях соединительной ткани / И.В. Хамаганова и др. // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2008. — № 5. — С. 70-72.

118. Оценка диагностической ценности ПЦР — тест — системы по результатам государственных испытаний / В.М. Безруков и др. // ЖМЭИ. — 2005.-№2.-С. 53-55.

119. Оценка иммуновоспалительных гемостазиологических реакций у больных вторичным сифилисом / Ю.А. Новиков и др. // Вестн. дерматол. и венерол. 2008. - № 6. - С. 70-74.

120. Панкратов, В.Г. Состояние Т клеточного иммунитета у больных сифилисом / В.Г. Панкратов // Мед. новости. - 2002. - № 7. — С. 68-71.

121. Паркед, Pi Обзор и сравнительная характеристика современных методов эффективного лечения сифилиса в Европе / Р. Паркед, А. Рентой, А. Меюс и др. // ИППП. 2004. - № 2. - С. 5-22.

122. Пат. 2185856 РФ, МПК7 А 61К 39/395. Способ получения контрольной сыворотки для диагностики сифилиса. В.О. Пожарская, Е.А. Гуртовой, A.B. Ермолов (РФ). № 2001103073/13; Заявл. 02.02.2001; Опубл. 27.07.2002, Бюл. № 32.

123. Пат. 2198920 РФ, МКИ7 C12N 1/20. Питательная среда для выращивания бледных ^ трепонем / В.О. Пожарская, A.B. Ермолов (РФ). № 200110381113705 /13; Заявл. 05.01.01; Опубл. 20.02.03, Бюл. 5.

124. Пат. 2210771 РФ, МКИ7 G01N 33/48. Способ диагностики кардиоваску-лярного сифилиса / В.В. Дубенский и др. (РФ). № 2002113705/14; Заявл. 28.05.02; Опубл. 20.08.03, Бюл. 23.

125. Патекаев, Н.С. Сифилис: этиология и патогенез / Н.С. Патекаев // Врач. -2001,-№5.-С. 18-20.

126. Перспективы применения полимеразной цепной реакции в диагностике ранних форм сифилиса / А.Е. Гущин и др. // Вестн. дерматол. и венерол. 2009. - № 1. - С. 46-51.

127. Петрушина, C.B. Лабораторная диагностика сифилиса / C.B. Петрушина // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2004. — № 2. С. 46-51.

128. Пожарская, В.О. Антигенные свойства отдельных клеточных структур культуральных бледных трепонем: автореф. дис. . канд. мед. наук / В.О. Пожарская. М.: Московский НИИЭиМ им. Г.Н. Габричевского, 1986.-16 с.

129. Пожарская, В.О. Антигенные свойства структурных детерминант трепонем, выращенных на искусственной питательной среде ИРоль иммунобиологических препаратов в современной медицине: материалы Международного симпозиума. — Уфа, 1995. 4.2. — С. 217-218.

130. Пожарская, В.О. Влияние способов дезинтеграции на антигенные свойства клеточных структур бледных трепонем / В.О. Пожарская // Вестн. дерматол. и венерол. — 1995. — № 2. — С. 114-115.

131. Пожарская, В.О. Научно-производственная разработка новых специфических диагностических препаратов на сифилис по безотходной технологии / В.О. Пожарская // Гомеостаз и инфекционный процесс: материалы Междунар. конф. Саратов, 1996. - С. 216.

132. Пожарская, В.О. Особенности иммунного ответа кроликов на введение антигенов из бледных трепонем / В.О. Пожарская // 7-й Российск. съезд дерматол. и венерол.: тез.докл. Казань, 1996. - Ч.З. - С. 72.

133. Пожарская, В.О. Получение и сорбция высокоочищенного антигена Treponema pallidum для использования в ИФА / В.О. Пожарская, М.В. Шавырина, H.A. Иллютович // Современные достижения биотехнологии: материалы Всеросс. конф. — Ставрополь, 1996. С. 309.

134. Пожарская, В.О. Регламент производства на антиген Пожарской из клеточных структур трепонем сухой для РСК (№ 1) и сорбент сухой для РИФ абс на сифилис (№ 2). / В.О. Пожарская. -М.: МЗ СССР, 1996. 67 с.

135. Пожарская, В.О. Системно — функциональный анализ свойств культуральных бледных трепонем на уровне клеточных структур / В.О. Пожарская II 7-й Российск. съезд дерматол. и венерол.: тез.докл. — Казань, 1996.-4.3.-С. 169.

136. Поликарпов, В.Ю. Клинико — патофизиологическое обоснование комплексной терапии серорезистентности после лечения больных сифилисом: авториф. дис. . канд. мед. наук / В.Ю. Поликарпов. М., 2006. -22с.

137. Полтавченко А.Г. Разработка панели сывороток с нормированным содержанием антител класса Ig G к антигенам р17 и p41 Treponema pallidum / А.Г. Полтавченко, A.M. Яковченко, О.Н. Надточий // Вестн. дерматол. и венерол. 2007. — № 3. — С. 5-13.

138. Полтавченко, А.Г. Динамика гуморального иммунного ответа на белки Р17 и Р41 Treponema pallidum на ранних стадиях сифилиса / А.Г. Полтавченко, А.Н. Рыбаков, О.Н. Надточий // ЖМЭИ. 2004. - №3. - С.52-57.

139. Полякова, Г.А. Новая страница в диагностике сифилиса: иммуногисто-химическая идентификация бледной трепонемы в тканях / Г.А. Полякова, Л.А. Петренко, Т.В. Безуглова // Клиническая дерматол. и венерол. -2005.-№4.-С. 39-44.

140. Поражение внутренних органов, нервной системы и органов чувств сифилитической инфекцией / В.И. Савчак и др. // Инфекционные болезни.-2005.-№ 1.-С. 102-103.-Украина.

141. Практические аспекты современной серологической диагностики сифилиса / В.Н. Рокицкая и др. // Рос. журнал кож. и венер. болезней. -2005.- №4. -С. 10-12.

142. Привалова, Н.К. Прогнозно аналитическая- оценка- заболеваемости^ сифилисом в Л 970 - 2005 годах: автореф. дисс. . канд. мед. наук / Н.К. Привалова // Санкт-Петербург. — 2000: — 18 с.

143. Применение полимеразной цепнот реакции для увеличения^ достоверности лабораторной диагностики ранних форм сифилиса / А. Е. Гущиной др. // Вестн. дерматол. и венерол. 2008. - № 1. - С. 20-24.

144. Проведение внутрилабораторного контроля3 качества серодиагностики сифилиса методом иммуноферментного анализа / Н.В. Фриго и др. // Венерол.- 2007. № 5. - 10-23.

145. Протокол ведения больных "Сифилис" / A.A. Кубанова и» др. // Вестн. дерматол. и венерол. — 2005. — № 2. — С. 15-20.

146. Реакция пассивной гемагглютинации для диагностики нейросифилиса / Н.В. Фриго и др. // Вестн. дерматол. и венерол. 2007. - № 2. — С. 2832.

147. Результаты изучения диагностической эффективности новой тест — системы линейного иммуноферментного анализа "INNO-LIA Syphilis Score" / Н.В. Фриго и др. // Клинич. лаб. диагн. 2006. - № 3. - С. 36-41.

148. Родиков, M.B. Концентрация пенициллина в спинномозговой жидкости у больных нейросифилисом, получивших стандартную терапию / М.В. Родиков, В.И. Прохоренков // Рос. журнал кож. и венер. болезней. -2008.-№2.-С. 59-61.

149. Родиков, М.В. Современные аспекты нейросифилиса / М.В. Родиков, В.И. Прохоренков // Вестн. дерматол. и венерол. 2008. - № 1. - С. 5458.

150. Родин, Ю.А. Персистенция бледных трепонем и иммунитет при сифилисе / Ю.А. Родин, А. Ю. Родин // Вестн. дерматол. и венерол. 2000. -№6. -С. 23-24'.

151. Романова, Ю.М. Некультивируемое состояние у патогенных бактерий: известные и возможные факторы индукции-обратимого процесса / Ю.М. Романова, Е.В. Чегаева, АЛ. Гинзбург // Молекул, генет., микробиол. и вирусол. 1998. - № 3. - С. 3-8.

152. Российская Федерация. Правительство. Об утверждении перечня социально значимых и перечня заболеваний, представляющих опасность для окружающих: Постановление Правительства Рос. Федерации от 01 декабря 2004 г. №715// Рос. газ. 2004. - 16 декабря.

153. Российская Федерация. Правительство. Об утверждении протокола ведения больных «Сифилис»: Приказ МЗ РФ от 25 июля 2003 г. № 327. -М.: МЗ РФ, 2003.-104 с.

154. Ротанов C.B. Сравнительное изучение иммунохроматографических наборов для экспресс — диагностики сифилиса / C.B. Ротанов, Н.В. Фриго, В .И. Клюева // Клин. лаб. диагност. 2008. - № 2. - С. 42-45.

155. Рубине, А4. Эпидемиология и особенности заболеваемости сифилисом в Латвии / А. Рубине, С. Рубине, И. Якобсенс // Вестн. дерматол. и венерол. 2005. - № 6. - С. 42-44.

156. Руководство по лабораторной диагностике сифилиса в странах« Восточной Европы / Е. Соколовский и др. // Вестн. дерматол. и венерол. -2008.-№5.-С. 87-96.

157. Сагаловский, В.PL Системная деятельность,и её философское осмысливание / В.Н. Сагаловский // Системные исследования: ежегодник АН СССР! М.: Наука, 1981. - С. 52-68.

158. Самцов, A.B. Нейросифилис. Современные представления о диагностике и лечении / A.B. Самцов, Г.Е. Труфанов, A.M. Иванов. СПб.: Спец-лит, 2006. - 127 с.ч

159. Сержантова, Т.И. Опыт культивирования, бледных трепонем на тиогли-колевой среде / Т.И: Сержантова // Вестн. дерматол: w венерол. 1979. -№8.-С. 48-51.

160. Сидоренко, C.B. Молекулярные основы резистентности к, антибиотикам / C.B. Сидоренко, В.И. Тишков И Молекулярные основы биол. химии. -2004. № 44. - С. 263 - 306, 423-428.

161. Сим, Э. Биохимия мембран: монография / Э. Сим // М.: Мир, 1985. -1;10с.

162. Система. Симметрия.Гармония / Под ред. В.С. Тюхина, Ю.А. Урманце-ва: М.: Мысль, 1988: - 315 с.

163. Сифилис и- конституция человека: новый« взгляд на старую проблему / АН. Смыкова*и др. // Клиническая дерматол. и венерол. 2009: - №'2. -С. 65-69:

164. Сифилис: иммунитет и лабораторная диагностика / В.А. Черешнев и-др.; Екатеринбург: Ур О РАН. 2006. - 388 с.

165. Скрининг на-сифилис: рекомендации // Вёнерол. 2005. - №3. - С. 1820.

166. Соколенко, A.B. Сравнительная характеристика некоторых форм выживания. патогенных бактерий- / A.B. Соколенко, Т.Н. Мухина. // Эпид. Ht инфекц; болезни. 2006. - № 3. - С. 54-58.

167. Соколовский; Е.В. Сифилис навсегда рядом с нами? / Е.В. Соколовский, Т.В. Красносельских // Клиническая дерматол. и венерол. — 2002. № 1. с. 44-47.

168. Состояние коагуляционного гемостаза у больных ранним скрытым сифилисом на фоне традиционной терапии / Ю.А. Новиков и др. // Вестн. дерматол. и венерол. — 2008. — № 3. — С. 43-46.

169. Сравнительная оценка методов лабораторной диагностики сифилиса / В.Е. Маликов и др. // Вестн. дерматол. и венерол. 2001. - № 1. - С. 16-18.

170. Степков, A.B. Поражение внутренних органов при острозаразных формах сифилиса / A.B. Степков // Актуал. вопр. дерматовенерол. — 2000.3.-С. 135-137.t

171. Стрельников, А.П. Серорезистентность при сифилисе / А.П. Стрельников и др.. М.: Академия, 2005. - 80 с.

172. Структура заболеваемости сифилисом на примере случайной выборки в Москве / И.В. Хамаганова и др. // Рос. журнал кож. и венер. болезней. -2004.-№6.-С. 58-60.

173. Суворов, А.П. Случаи рецидива сифилиса после лечения бензатин — бен-зилпенициллином G / А.П. Суворов, A.JI. Бакулев, Е.В. Румянцева // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2000. — № 4. — С. 46-48.

174. Тельбух, В.П. Регламент производства. Тест система иммунофермент-ная для качественного определения антител к возбудителю сифилиса в сыворотке крови человека / В.П. Тельбух, М.В. Шавырина, В.О. Пожарская. - М.: МЗ СССР, 1995. - 83 с.

175. Терзян, В.А. Экономический ущерб, наносимый заболеванием сифилисом / В:А. Терзян, MIA. Земцов, И:Л. Шаханина // Эпидемиол. иинфекц. болезни. 2007. -№ 4. - С. 12-13.

176. Тернер, Т.Б. Биология трепонематозов / Т.Б. Тернер, Д.Х. Холландер. -Женева: ВОЗ, 1963. 293 с.

177. Устименко Л.М. О культивировании бледной, трепонемы / Л.М. Усти-менко // Лаб. дело. 1962. - № 9. С. 15-19:

178. Устименко, Л.М. Получение L-форм бледной трепонемы / Л.М. Устименко // Антибиотики. 1963. - № 3. - С. 115-128.

179. Устименко, JI.M. Получение L-форм бледной трепонемы под влиянием сывороток больных сифилисом / JI.M. Устименко, С.М. Вяселева // ЖМЭИ. — 1964. — № 12.-С. 104-109.

180. Уфимцева, М.А. Антитела к кардиолипину и р2 гликопротеину I при скрытом сифилисе и хронических ложноположительных реакциях на сифилис / М. А. Уфимцева, Н.М. Герасимова, В.И. Лесняк // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2005. - № 4. — С. 28-27.

181. Федотов, В.П. Нарушение иммунного гомеостаза у больных заразными формами сифилиса / В.П. Федотов, C.B. Захаров // Международный мед. журн. 2001. - Т.7. - № 1. - С. 92-94.

182. Фриго, Н.В. Клиническая интерпретация результатов иммунофермент-ного анализа и микрореакции преципитации в серодиагностике сифилиса / Н.В. Фриго, Н.К. Никулин // Вестн. дерматол. и венерол. 2004. - № 1.-С. 28-31.

183. Фриго, Н.В. Современные аспекты дифференциальной диагностики истинной и ложной серопозитивности серологических тестов на сифилис / Н.В. Фриго // Вестн. дерматол. и венерол. 2004. - № 2. - С. 51-54.

184. Фриго, Н.В. Современные аспекты дифференциальной диагностики ложноположительных серологических результатов на сифилис / Н.В. Фриго, Н.В. Китаева, C.B. Романов // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2005. - № 4. - С. 16-20.

185. Чакова, Т.В. ИФА диагностика у беременных / Т.В. Чакова, О.Б. Нем-чанинова // Рос. журнал кож. и венер. болезней. — 2007. — № 2. — С. 64-67.

186. Чеботарёв, В.В. Актуальные проблемы сифидологии: монография / В.В. Чеботарёв. Ставрополь: изд — во Кавказ - полиграфия, 2005. - 278 с.

187. Чеботарёв, В.В. Врожденный сифилис и его профилактика / В.В. Чеботарёв, О.В. Гаевская, Н.В. Чеботарёва. Ставрополь: Кн. изд - во, 2002. -134 с.

188. Чеботарёв, В.В. Есть ли обоснование использования азитромицина (су-мамеда) в лечении и профилактике сифилитической инфекции / В.В Чеботарёв, Н.В. Чеботарёва, О.В. Галкина // Сибирский журн. дерматол. и венерол. 2006. - № 7. - С. 69-72.

189. Чеботарёв, В.В. Клиническая и серологическая эффективность лечения/ больных с ранними« формами сифилиса прокаин пенициллином G3 ме-га / В.В. Чеботарёв, Н.В. Чеботарёва, JI.B. Павлик,// Рос. журнал кож. и венер. болезней. - 2004. - № 1. - С. 52-55.

190. Чеботарёв, В.В: О скрытых формах сифилиса / В.В. Чеботарёв, М:А. Земцов; Н.В. Чеботарёва // Вестн. дерматол. и« венерол. — 2006. № 3-. — С. 52-54.

191. Чеботарёв, В.В. Основные направлениям лечении больных сифилисом в. XX столетии /В.В: Чеботарёв, JI.B. Павлик, Н.В. Беляева // Рос. журнал-кож. и венер. болезней. 1999: — № 3. - С. 47-51.

192. Чеботарёв, В.В. Серологические реакции, в диагностике сифилиса: реальность и перспективы / BIB. Чеботарёв, М.А. Земцов, Н.В*. Чеботарёва // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2005. - № 4. - С. 7-10.

193. Чеботарёв, В.В. Серорезистентность: "явление" при сифилисе? / В.В. Чеботарёв, Н.В. Чеботарёва, JI.B. Павлик // Рос. журнал кож. w венер. болезней. 2006. - № 2. - С. 30-33.

194. Чеботарёва, Н.В. Современная антибиотикотерапшг сифилиса на основании фармокинетических исследований: автореф. дисс. . докт. мед. наук / Н.В. Чеботарёва. М., 2007. - 35 с.

195. Чеботарёва, Н.В. Эпидемия сифилиса и её угасание: старое заболевание новые проблемы / Н.В. Чеботарёва // Мед. вестн. Северного Кавказа. — 2006.-№ 1.-С. 20-23.

196. Чепурченко, Н.В. Новые возможности использования рекомбинантных антигенов в серодиагностике сифилиса / Н.В. Чепурченко, М.В. Глады-шева, А.П. Обрядина // Клиническая дерматол. и венерол. — 2006. — № 2. -С. 28-31.

197. Чернова, Т.А. Линейный иммуноблот новый диагностический тест для серодиагностики сифилиса / Т.А. Чернова, Г.В. Гордеева, А.Е. Прокофьева // Клиническая дерматол. и венерол. — 2005. — № 1. — С. 21-22.

198. Чернова, Т.А. Региональные проявления эпидемиологического процесса и новые алгоритмы серодиагностики сифилиса: авториф. дис. . канд. мед. наук / Т.А. Чернова. М., 2006. - 22 с.

199. Шакирьянова, Л.В. О качестве тест — систем, используемых в серологических реакциях для диагностики сифилиса / Л.В. Шакирьянова, Э.А. Амельбаева, А.Ж. Гильманов // Клин. лаб. диагност. 2008. - № 9. — С. 56-57.

200. Шанынин, С.Н. Состояние зрительного анализатора при сифилисе: авто-реф. дис. . канд. мед. наук/С.Н. Шаньшин. — Новосибирск. -21 с.

201. Шмелёва, Е.А. Биологическая функция антигенов клеточной стенки С. diphtheria и научно производственная разработка иммуномодулирую-щего препарата Кодивак: автор, дис. . докт. мед. наук / Е.А. Шмелёва. М., 1992.-43 с.

202. Щербакова, Ю.В. Особенности эпидемиологии, иммунопатологии, лечения скрытого сифилиса / Ю.В. Щербакова // Украин. журн. дерматол., венерол., косметол. 2005. - № 3. - С. 206. - Украина.

203. Щукина, И.В. Социально гигиенические аспекты заболеваемости сифилисом сельского населения и пути его профилактики: автореф. дисс. . канд. мед. наук / И.В. Щукина // Курск. - 2006. - 26 с.

204. Элахи, А.Р. Лечение больных серорезистентным сифилисом низкочастотным лазерным излучением / А.Р. Элахи, К.М. Ломоносов, О.В. Гра-бовский // Рос. журнал кож. и венер. болезней. 2005. - № 4. - С. 46-48.

205. Юлдашев, К.А. Изучение функции желудка с помощью эзофагогастро-дуоденофиброскопии у больных сифилисом в зависимости от формы заболевания / К.А. Юлдашев, Ш.Т. Мухтарова // Укр. журн. дерматол., ве-нерол., косметол. 2002. - № 4. - С. 72-73. - Украина.

206. Юлдашев, К.А. Инфекции, передаваемые половым путём у больных сифилисом / К.А. Юлдашев, A.A. Разыков, Д.Ф. Порсохонова // Вестн. дерматол. и венерол. 2004. - № 1. — С. 32-33.

207. Юцковский, А.Д. К проблеме серологической серорезистентности при сифилитической инфекции / А.Д. Юцковский, Н.В. Тихомирова, Я.А. Стефанович // ИППП. 2000. - № 1. - С. 23-28.

208. Юцковский, А.Д. К смене дисперсной фазы сифилитической инфекции / А.Д. Юцковский, Е.В. Миловидова, В.В. Ковтун // Рос. ж. кож. и венер. болезней. 2001. - №3. - С. 52-54.

209. Яровинский, Б.Г. Частота реконвалесцентного носительства у больных ранним скрытым сифилисом после пенициллинотерапии / Б.Г. Яровинский, A.B. Зурочка, О.В. Бигер // ИППП. 2001. - № 1. - С. 33-35.

210. А monoclonal antibody that conveys in vitro killing and partial protection in experimental syphilis bins a phosphorylcholine surface epitope of Treponema pallidum / D.R. Blanco et al. // Infect. Immun. 2005. - Vol.73. - No. 5. -P. 3083-3095.

211. A novel Treponema pallidum antigen, TPO 136, is an outer membrane protein that binds human fibronectin / M.B. Brinkman et al. // Infect. Immun. -2008.-Vol.76.-No. 5.-P. 1848-1857.

212. A pilot study of azithromycin 2,0 g or twice, a week apart, for therapy of early syphilis / E. Hook et al. // Int. Congr. STD. 12 Meet ISSTDR, 14 red Meet IUST I. - 1997. - P. 96.

213. Activation of human monocytic cell by Borrelia burgdorferi and Treponema pallidum is facilitated by CD 14 and correlates with surface exposure of spirochetal lipoproteins / T.J. Sellati et al. I I J. Immunol. 1999. - Vol. 163. -No. 4.-P. 2049-2056.

214. Analysis of the N-terminal region of the 47-kilodalton integral membrane lipoprotein of Treponema pallidum / L.M. Weigel et al. // Infect. Immun. -1992.-Vol.60.-No. 4.-P. 1568-1576.

215. Antigenic variation of TprK V regions abrogates specific antibody binding in syphilis / R.E. LaFond et al. // Infect. Immun. 2006. - 74; - No. 11. - P. 6244-6251.

216. Assessment of the kinetics of Treponema pallidum dissemination into blood and tissues in experimental syphilis by real-time quantitative PCR / J.C. Sala-sar et al. // Infect. Immun. 2007. - Vol.75. - No: 6: - P. 2954-2958.

217. Association of hepatitis C virus infection with false-positive test for syphilis / D.L. Thomas et al. // J. Infect. Dis. 1994. - Vol.170. - No. 6. - P. 15791581.

218. Bialynicki-Birula, R. The 100th anniversary of Wassermann-Neisser-Bruck reaction / R. Bialynicki Birula // Clin. Dermatol. - 2008. - Vol.26. - No. 1. -P. 79-88.

219. Blanco, D.R. Surface antigens of the syphilis spirochete and their potential as virulence determinants / D.R. Blanco, J.N. Miller, M.A. Lovett // Emerg. Infect. Dis. 1997. -Vol.3.-No. 1.-P.11-20.

220. Blanco, D.R. Use of the skin protection in experimental syphilis to assess protective immunity against a specific Treponema pallidum Surface epitope / D.R. Blanco, C.I. Campion, M.A. Lovett // FEMS Microbiol. Lett. 2005. -Vol.249.-No. l.-P. 171-175.

221. Campion, C.I. Quantitative assessment of protection in experimental syphilis / C.I. Campion, D.R. Blanco, M.A. Lovett // Infect. Immun. 2005. - Vol.73. -No. 9.-P. 5923-5927.

222. CD4 + lymphocytes and gamma interferon predominate in local immune responses in early experimental syphilis / B.T. Leader // et al. // Infect. Immun. 2007. - Vol.75. - No. 6. - P. 3021-3026.

223. Ceftriaxone in given repeatedly cures manifest syphilis in the rabbit / H.C. Korting et al. // Chemotherapy. 1987. - Vol.33. - No. 5. - P. 376-380.

224. Centurion-Lara A. Molecular differentiation of Treponema pallidum subspecies / A. Centurion-Lara / J. Clin. Microbiol. 2006. - 44. - No. 9. - P. 33773380.

225. Characterization of outer membranes isolated from Treponema pallidum, the syphilis spirochete / J.D. Radolf et al. // Infect. Immun. 1995. - Vol.63. -No. 11.-P. 4244-4252.

226. Clinical features and rapid plasma reagin antibody titers in spontaneous and experimental rabbit syphilis / K. Saito et al. // J. Vet. Med. Sei. 2005. -Vol.67. - No. 7. - P. 739-741.

227. Comparative in vitro susceptibility of Treponema pallidum to ceftizoxime, ceftriaxone and penicilliny G / H.C. Körting et al. // Chemotherapy. 1986. -Vol.32. -No. 4. -P. 352-355.

228. Complete genome sequence of Treponema pallidum, the syphilis spirochete / C.M. Fraser et al. // Science. 1998. - Vol.281. - No. 5375. - P. 375-378.

229. Complete genome sequence of Treponema ssp. pallidum strain SS14 determined with oligonucleotide arrays / P. Matejkova et al. // BMC Microbiol. -2008.-15.-No. 8.-P. 76.

230. Cullen, P.A. Progress towards an effective syphilis vaccine: the past, present and future / P.A. Cullen, C.E. Cameron // Expert. Revol. Vaccines. 2006. -Vol.5.-No. l.-P. 67-80.

231. Defining the interaction of the Treponema pallidum adhesin Tp0751 with la-minin / C.E. Camtron et al. // Infect. Immun. 2005. - Vol.73. - No. 11.-p. 7485-7494.

232. Dendrite cell phogocytose and are activated Treponema pallidum / D.A. Bouis etal. //Infect. Immun.-2001.-Vol.69.-No. l.-P. 518-528.

233. Dermal inflammation elected by synthetic analogs of Treponema pallidum and Borrelia burgdorferi lipoproteins / M.V. Norgard et al. // Infect. Immun. 1995. - Vol.63. -No. 4. - P. 1507-1515.

234. Detection of antigenic determinants in the Treponema pallidum membrane protein Tmp A using overlapping synthetic peptides / G. Antoni et al. // J. Immunol. Microbiol. 1996. - Vol.189. -No. 1. -P. 137-140.

235. Development of control serum for microbial antibody tests / Y. Uemura et al. // Biologicals. 2001. - Vol.29. - No. 1. - P.39-43.

236. Dracobly, A. Ethics and experimentation on human subjects in mid-nineteen-century France: The story of the 1859 syphilis experiments / A. Dracobly // Bull.Hist. Med. 2003. - Vol.77. -No. 2. -P. 332-366.

237. Epitope mapping of B-cell determinants on the 15-kilodalton lipoproteins of Treponema pallidum (Tmpl5) with synthetic peptides / R.T. Baughn et al. // Infect. Immun. 1996. - Vol.64. - No. 7. - P. 2457-2466.

238. Experimental transmission of rabbit syphilis / K. Saito et al. // J. Vet. Med. Sei. 2005. - Vol.67. - No. 1. - P. 79-81.

239. False-positive reaction between syphilis and hepatitis C infection / E. Sonmez et al. // Isr. J. Med. Sei. 1997. - Vol.33. - No. 11. - P. 724-727.

240. Fitzgerald, T.J. Syphilis vaccine: up-regulation of immunogenicity by cyclophosphamide, Ribi adjuvant, and indomethacin significant protection against challenge infection in rabbits / TJ. Fitzgerald et al. // Vaccine. 1991. -Vol.9.-No. 4.-P. 266-272.

241. Flow cytometric analysis of the peripheral blood lymphocyte immunonophe-notypes in persons infected with Treponema pallidum / V. Pope et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1994. - Vol.121. - No. 1. - P. 121-124.

242. From microbial genome sequence to applications / G.M. Weinstock et al. // Res. Microbiol. 2000. - Vol.151. - No. 2. - P. - 151-158.

243. Function and protective capacity of Treponema pallidum subsp. Pallidum gli-cerophshodi: ester phosphodiesterase / C.E. Cameron et al. // Infekt. Immun. 1998. - Vol.66. - No. 12. - P. 5763- 5770.

244. Gene conversion: a mechanism for generation of heterogeneity in the tprK gene of Treponema pallidum during infection / A. Centurion-Lara et al. // Mol. Microbiol. 2004. - Vol.52. - No. 6. - P. 1579-1596.

245. Genetic approaches to cell biology and metabolism of spirochetes / C.W. Penn et al. // Res. Microbiol. 1992. - Vol.143. - No. 6. - P. 605-613.

246. Genome differences between Treponema pallidum subsp. pallidum strain Nichols and T. paraluiscuniculi strain Cuniculi A/M. Strouhal et al. //Infect. Immun. 2007. - Vol.75. - No. 12. - P. 5859-5866.

247. Genome scale identification of Treponema,pallidum antigens / M. McKevitt et al. // Infect. Immun. 2005. - Vol.73. - No: 7. - P. 4445-4450.

248. Genome Scale Identification of Treponema pallidum Antigens / McKevitt Matthew et al. // Infection and Immunity. 2005. - Vol.73. - No. 7. - P.4445.4450.

249. Genome structure of spirochetes / G.I. Saint et al. // Res. Microbiol. 1992. -Vol.143.-No. 6.-P. 615-621.

250. Greene, S.R. Molecular characterization pallidum-mcp 2, a putative Chemotaxis protein gene / S.R. Greene, L.V. Stamm // Infect. Immun. 1998. -Vol.73. - No. 6; - PI 2999-3002.

251. Haake, D. A. Spirochetal, lipoproteins and pathogenesis / D. Haake // Microbiology. -2000. -Vol.146. -No. 7. -P. 1491-1504.

252. Hardi, P.H. Isolation and Antigenic characteristics of axial , filaments from Reiter Treponema / P.H. Hardi, E.E. Nell, W.R. Fridiricks // Infect. Immun. -1975.-Vol.56.-No. 11.-P. 380-386.

253. Hashimoto, Masahito. Treponemal phospholipids inhibit innate immune responses induced by pathogen-associated molecular patterns/ Masahito Hashimoto, Tomohito Ogawa, Yasuyuki Asai // J. Biol. Chem. 2003. - Vol.278. -No. 45. — P.44205- 44213.

254. High rates of syphilis among STI patients are contributing to the spread of HIV-1 in India / SJ. Reynolds et al. // Sex. Transmitt. Infekt. 2006. -Vol.82.-№2,-P. 121-126.

255. Hinkleman, A.I. Treponema pallidum antigens in the Wasserman reaction / A.I. Hinkleman // Amer. J. of Syphilis. 1925. - No. 9. - P. 181-186.

256. Human hybridomas secreting monoclonal antitreponemal antibodies raised after in vitro stimulation of human lymphocytes / V. Terzieva-Lazarova et al. // Int. Arch. Allergy Immunol. 1995. - Vol.106. - No. 1. - P. 32-37.

257. Immunization of guinea pigs with recombinant TmpB antigen induces protection against challenge infection Treponema pallidum Nichols / K. Wicher et al. //Infect. Immun. 1991. - Vol.59. -No. 12. -P. 4343-4348.

258. Immunization with the N-terminal portion of Treponema pallidum repeat protein K attenuates syphilitic lesion development in the rabbit model / C.A. Morgan et al. // Infekt. Immun. 2002. - Vol.70. - No. 12. - P. 6811-6816.

259. Immunological evaluation and cellular location analysis of the Tpr I antigen of Treponema pallidum subsp: pallidum / L. Giacani et al.,// Infect. Immune. -2005.-Vol.73.-No. 6.-P.3817-3822.

260. Immunophonotypes apoptosis, and expression of Fas and Bel-2 from peripheral bloods lymphocytes in patients with secondary early syphilis / Y.M. Fan et al.//Sex. Transm.-2004. Vol;31.-No. 4.-P. 221-224.

261. Johnson, R.C. Comparison of the activities of cephtriaxone and penicillin G against experimentally induced syphilis in rabbits / R.C. Johnson, R.F. Bey, S.I. Wolgamoi // Antimicrob Agents Chemother. 1982. - Vol.21. - No. 6. -P. 984-989.

262. Katz, K. A. Azithromycin resistance in Treponema pallidum / K. A. Katz, J. D. Kausner. // Curr. Opin. infect. 2008. - Vol.21. - No/ 2 - P. 81 -91.

263. Lachman, P.J. Microbial subversion of the immune response / P.J. Lachman // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 2002. - Vol.99. - No. 13. -P: 8461-8462.

264. LaFond, R.E. TprK sequence diversity accumulates during infection of rabbits with Treponema pallidum Nichols strain / R.E. LaFond // Infect. Immun. -2006. 74. - No. 3. - P. 1896-1906.

265. Lipoprotein-dependent and independent immune responses to spirochetal infection / C. Juan Salazar et al. // Clin, and Diagn. Lab. Immunol. 2005. -Vol.12. - No. 8. - P. 949-958.

266. Lukehart, S.A. Isolation and laboratory maintenance of Treponema pallidum / S.A. Lukehart, C.M. Marra // Curr. Protoc. Microbiol. 2007. - Chapter 12. -Unit 12A.1.

267. Marra, C.M. Neurosyphilis / C.M. Marra // Cur. Neurology and Neuroscience Reports. 2004. - No. 4. - P. 435-440.

268. Mechanisms of clearance of Treponema pallidum from, the CSF in a nonhuman primate model / C.M. Marra et al. // Neurology. 1998. - Vol.51. -No. 4. — P.957-961.

269. Membrane topology and cellular location of the Treponema,pallidum glyce-rophosphodiester phosphodiesterase (GlpQ) ortholog / D.V. Shevchenko et al. // Infect. Immun. 1999. - Vol.67. - No. 5. - P. 2266-2276.

270. Membrane topology of Borrelia burgdorferi and Treponema pallidum lipoproteins / J.D. Jones et al. // Infect. Immun. 1995. - Vol.63. - No. 7. - P. 2424-2434.

271. Molecular characterization and analysis of a gene encoding the acidic repeat protein (Arp) of Treponema pallidum / H. Liu et al. // J. Med. Microbiol. -2007. Vol.56. - Pt.6. - P. 715-721.

272. Molecular evolution of the tprC, D, I, K and J genes in the pathogenic genus Treponema / R.R. Gray et al. // Mol. Biol. 2006. - Vol.23. - No. 11. - P. 2220-2233.

273. Molecular typing of Treponema pallidum strains from patients with neurosyphilis in Pretoria, South Africa / J. Molero et al. // Sex. Transmitt. Infec. -2007.-Vol.83.-No. 3.-P. 189-192.

274. Monoclonal antibodies to the recombinant protein TmpA of the Treponema pallidum / A.I. Brito Moreno et al. // Hybrid Hybribodies. 2003. - Vol.22. -No. 6.-P. 393-396.

275. Morgan, C.A. Protection against syphilis correlates with specificity of antibodies to the variable regions of Treponema pallidum repeat protein K / C.A.

276. Morgan, S.A. Lukehart, W.C. Van Voorhis // Infect. Immun. 2003. -Vol.71. - No. 10. - P. - 5602-5612.

277. Opsonic potential, protective capacity, and sequence conservation of the Treponema pallidum subsp. pallidum Tp 92 / C.E. Cameron et al. // J. Infect. Dis. -2000. Vol.181. -No. 4. - P. 1401-1413.

278. Parales, J.J. Analysis of the Spirochaeta Aurania fla A gene and transcript / J.J. Parales, E.P. Greenberg // FENS Microbiol. Lett. 1993. - Vol.106. -No. 3.-P. 245-251.

279. Penn, C.W. The molecular biology of Treponema pallidum / C.W. Penn // J. Med. Microbiol. 1993. - Vol.38. - No. 1. - P. 4-6.

280. Petersen, C.S. A simple method for a the isolation of flagella from Treponema Reiter / C.S. Petersen, N.S. Petersen, N.H. Axeisen // Act. Patol. et Microbiol. Scand.- 1981.-Vol.89.-No. 6.-P. 379-385.

281. Physical map of the genome of Treponema pallidum subsp. pallidum (Nikols) / E.M. Walker et al. // J. Bacteriol. 1995. - Vol.177. - No. 7. - P. 17971804.

282. Podwinska, J. Attempts to isolation and characterization of autolymphocyto-toxins from syphilis sera / J. Podwinska, M. Chomik, A. Gamian // Arch. Immunol. Ther. Exp. Warsz. 1994. - Vol.42. - No. 5 -6. - P. 447-451.

283. Production of tumor necrosis factor alpha by Treponema pallidum, Borrelia burgdorferi s.l., and Leptospira interrogans in isolated rat Kupffer cells / A. Marangoni et al. // FEMS Immunol. Microbiol. 2004. - Vol.40. - No. 3. -P. 187-191.

284. Quantitation of rabbit cytokine mRNA by real-time RT-PCR / C. Godornes et al. // Cytokine. 2007. - Vol.38. - No. 1. - P. 1-7.

285. Quantitative analysis of tpr gene expression in Treponema pallidum isolates: Differences among isolates and correlation with T-cell responsiveness in experimental syphilis / L. Giacani et al. // Infect. Immun. 2007. - Vol.75. -No. l.-P. 104-112.

286. Radolf, J.D. Role of outer membrane in immune evasion by Treponema palli-dum and Borrelia burgdorferi / J.D. Radolf // Trends. Microbiol. 1994. -Vol.2.-No. 9.-P. 307-311.

287. Radolf, J.D. Treponema pallidum and quest for outer membrane proteins / J.D. Radolf//Mol. Microbiol. 1995. - Vol.16. - No. 6. - P. 1067-1073.

288. Radolf, J.D. Treponema pallidum: Doing a remarkable job with it's got / J.D. Radolf, B. Steiner, D. Shevchenko // Trends. Microbiol. 1999. - Vol.7. -No. l.-P. 7-9.

289. Rein, M:F. Biopharmacology of syphilotherapy / M.F. Rein // J. Am. Vener. Dis. Assos. 1976. - Vol.3. - No. 2. -Pt. 2. - P. 109-127.

290. Segregation of B and T cell epitopes of variable and conserved regions during experimentali syphilis infection / C.A. Morgan et al-.,// J. Immunol. — 2002. — Vol. 169. No. 2. - P.952-957.

291. Sequence analysis and recombinant expression of a 28-kilodalton Treponema pallidum subsp. pallidum rare outer membrane proteins (Tromp2) / C.I. Chempion et al. // J. Bakteriol. 1997. - Vol.179. - No. 4. - P. - 12301238.

292. Sequence diversity of Treponema pallidum subsp. pallidum tpr K in human syphilis lesions and rabbit-propagated isolates / R.E. LaFond et al. // J. Bac-teriol.-2003.-Vol.185. -No. 21. -P. 6262-6268.

293. Sherwood, J. Syphilization: Human experimentation in the search for a syphilis vaccine in the nineteenth century / J. Sherwood // J. Hist. Med. and Allied Sei. 1999. - Vol.54. - No. 3. - P. 364-386.

294. Subfamily I Treponema pallidum repeat protein family: sequence variation and immunity / E.S. Sun et al. // Microbial. Infect. 2004. - Vol.8. - No. 8. -P. 725-737.

295. Systematic cloning of Treponema pallidum open reading frames for protein expression and antigen discovery / M. McKevitt et al. // Genome Res. -2003. Vol.13. - No. 7. - P. 1665 - 1674.

296. Tantalo, L.C. Treponema pallidum Strain specific differences in neuroinvasion and clinical phenotype in a rabbit model / L.C. Tantalo, S.A. Lukehart, C.M. Marra//J. Infekt. -2005. Vol.191. -No. 1. -P. 75-80.

297. T-cell responses to Treponema pallidum subsp. pallidum antigens during the course of experimental Syphilis infection / T.W. Arroll et al. // Infect. Immun. 1999. - Vol.67. -No. 9. -P. 4757-4763.

298. The genome of Treponema pallidum: new light on the agent syphilis / G.M. Weinstock et al. // FEMS Microbiol. 1998. - Vol.22. - No. 4. - P. 323332.

299. The outer membrane, not a coat of host proteins, limited antigen city of virulent Treponema pallidum / D.L. Cox et al. // Infect. Immun. 1992. — Vol.60. - No. 3. -P: 1076-1083.

300. The pattern and level of cytokines secreted by Thl and Th2 lymphocytes of syphilitic patients correlate to the progression of the disease / J. Podwinska et al. // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2000. - Vol.28. - No. 1. - P. 1-14.

301. The TprK protein of Treponema pallidum is periplasmic and is not a target of opsonic antibody or protective immunity / K.R. Hazlet et al. // J. Exp. Med.- 2001. Vol. 193. - No. 9. - P. 1015-1026.

302. Tpr homologs in Treponema paraluiscuniculi Conically strain / L.Giacani et al. // Infect. Imm . 2004. - Vol.72. - No. 11. - P. 6561-6576.

303. Transcriptome of Treponema pallidum: gene expression profile during experimental rabbit infection / D. Smajs et al. // J. Bacterid. 2005. - Vol.187. -No. 5.-P. 1866-1874.

304. Treponema pallidum and Borrelia burgdorferi lipoproteins and synthetic lipo-peptides activate monocytes /macrophages / J.D. Radolf et al. // J. Immunol.- 1995.-Vol.154. -No. 6.-P. 2866-2877.

305. Treponema pallidum in gel microdropleds: a novel strategy for investigation of treponemal molecular architecture / D.L. Cox et al. // Mol. Microbiol. — 1995. Vol.15. - No. 6. - P. 1151-1164.

306. Treponema pallidum major sheath protein homologue TprK is a target of opsonic antibody and the protective immune response / Centurion Lara A. et al. //J. Exp. Med. - 1999. - Vol.189. - No. 11. - P. 647-656.

307. Treponema pallidum subsp. pertenue displays pathogenic properties different from those of T.pallidum subsp. pallidum / K. Wicher et al. // Infect. Immun. 2000. - Vol.68. - No. 6. - P. 3219-3225.

308. Treponemicidal antibody measured by the "washed-killing" assay correlates with immunity in. experimental'rabbit syphilis / M.A. Lewinski et al. // Sex. Trans. Dis. 1995. - Vol.22. -No. 1. -P. 31-38.

309. Trompl, a putative rare outer membrane proteins, is anchored by uncleaved signal sequence to the Treponema pallidum cytoplasmic membrane / D.R. Akins et al. // J. Bacterid. 1997. - Vol.179. -No. 16. - P. 5076-5086.

310. Turner, T.B. My Choice: Infectivity tests in syphilis / T.B. Turner, P.H. Newman // Sex. Transmit! 2000. - Vol. 76. - No. 1. - P. 7-8.

311. Tzeraidi, N.F. Depression of cellular immunity in patients with syphilis and some aspects of HIV infection / N.F. Tzeraidi, A.V. Zolotshko, R.A. Khanfe-ryan // RussJ. Immunol. 2000. - Vol.5. - No. 4. - P. 429-431.

312. Use of synthetic cardiolipin and lecithin in the antigen used by the venereal diseases researth laboratory test for serodiagnosis of syphilis / A.R. Castro et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2000. - Vol.7. - No. 4. - P. 658-661.

313. Utility of molecular biology techniques in the diagnosis of sexually transmitted diseases and genital infections / L. Otero Guerra et al. // Entferm. Infecc. Microbiol. Clin. 2008. - No. 9. - P. 42-49.

314. Vertical transmission of Treponema pallidum to various and generations of guinea pigs. / K. Wicher et al. // J. InfectDis. 1999. - Vol.179. - No. 5. -P. 1206-1212.

315. Wächter, M.S. Treponema outer envelope: Chemical analisis / M.S. Wächter, R.C. Johnson // Proc. Soc. Exp. Biol, and Med. 1976. - Vol.151. - No. 2. -P. 209-213.

316. Woznicova, V. Direct detection of Treponema pallidum in diagnosis of syphil / V. Woznicova, M. Heroldova // Epidemiol. Microbiol. Imunol. 2004. -Vol.53.-No. 3.-P. 121-125.

Информация о работе

Климанович, Инна Викторовна
кандидата медицинских наук
Ставрополь, 2010
ВАК 03.02.03

Диссертация

Влияние антигенов клеточных структур культуральных Treponema pallidum pallidum на течение сифилитической инфекции и разработка контрольной положительной сыворотки для реакции микропреципитации (в эксп - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы