Хроматографические диагностические критерии люэтической инфекции

Осман Кхалиль Ареф

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Хроматографические диагностические критерии люэтической инфекции
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Хроматографические диагностические критерии люэтической инфекции"

На правах рукописи

Осман Кхалиль Ареф

Хроматографические диагностиче жие критерии люэтической инфеки/.зи

03.00.07 — микробиология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Москва — 2005

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

А. Ю. Миронов Научный консультант:

доктор медицинских наук

В. Г. Истратов

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор П. В. Калуцкий

Доктор медицинских наук, профессор И. В. Смирнов

Ведущая организация: ГУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова РАМН.

Защита состоится О Ъ 2005 года в 1400 часов

на заседании Диссертационного совета Д. 208.040.08 в Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова по адресу: 119992, Москва, Б. Пироговскал ул., 3, отроение 3. ^'р^Ье^ЬСоЛ^

С диссертацией можно ознакомиться вгбиблиотеке ГОУ ВПО Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова (117998, Москва, Нахимовский проспект, 49).

Автореферат разослан «£3_» СЦ_■ 2005 года.

Учёный секретарь Диссертационного совета Д. 208.040.08 доктор медицинских наук, профессор

А. Ю. Миронов

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы: Во всём мире отмечается рост числа инфекционных заболеваний передающихся половым путём (ЗППП). Среди ЗППП наиболее значимым является сифилис. По данным органов ГСЭН заболеваемость сифилисом в 2001 году составила в РФ 240 тыс. случаев. Эпидемиологическая ситуация в стране остаётся крайне напряжённой. Одним из основных мероприятий, направленных на предупреждение заболеваемости сифилисом, является его ранняя диагностика [Приказ МЗ РФ № 87 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса»]. Несмотря на то, что сифилис известен врачам с античных времён, остаётся много нерешенных проблем связанных с его диагностикой и лечением. В последние годы особенно увеличилось число скрытых форм сифилиса. Так по данным Борисенко К. К. с соавт. (1989) ранний скрытый сифилис стал регистрироваться значительно чаще, чем поздний и неучтённый и составляет до 60-96% всех больных латентной формой сифилиса. По данным Соколовского Е. В. (1995) удельный вес раннего срытого сифилиса в РФ вырос с 1991 по 1994 год в 1,2 раза. Частота регистрации позднего скрытого сифилиса снизилась в 6 раз.

Поскольку Treponema pallidum является очень капризным и прихотливым микробом, серологические исследования продолжают оставаться доминирующим методом лабораторной диагностики сифилиса. Они включают неспецифические и специфические тесты.

К неспецифические тестам (без участия трепонем) относятся реакция Вассермана (РСК с несколькими АГ); также разработаны более чувствительные модификации, например Григорьева-Рапопорта или Вайнштейна-Резниковой, но они менее специфичны. Для предварительных исследований широко используется VDRL-реакция — специализированная флоккуляционная проба на предметных стёклах с использованием кардиолипин-лецитин-холестеринового АГ — модификация реакции Кана и цитохолевой реакции. В качестве метода экспресс-диагностики удобен тест на реагины плазмы, представляющий собой РА частиц угля, нагруженных кардиолипином.

Среди специфических тестов большое значение имеют реакция иммобилизации бледной трепонемы (РИБТ) включающая инкубирование возбудителя с сывороткой пациента в анаэробных условиях, после чего бактерии теряют подвижность (в среднем, через 18 час), и РА (микроагглютинации) Т. pallidum. В последние 10-20 лет всё большее распространение получают методы иммунофлюорес-центной диагностики сифилиса (особенно непрямой РИФ),,поста-новка которых отличается относительной простотой и достаточно

высокой чувствительностью. Наибольшее распространение получила РИФ с адсорбированной сывороткой, включающая предварительное истощение сыворотки пациента инкубацией с АГ штамма Райте-ра (что приводит к элиминации перекрёстно реагирующих AT), последующее инкубирование с АГ Т. pallidum (штамм Николя) в течение 30 минут при температуре 37° С и внесение антиглобулиновой сыворотки, меченой флюоресцеином.

Результаты серологических реакций зависят от множества причин, которые могут обуславливать появление ложноположитель-ных и ложноотрицательных результатов. Ложноположительные результатов (ЛПР) нередко могут регистрироваться у пациентов с соматическими (например, при заболеваниях крови, печени), инфекционными заболеваниями (например, при вирусных гепатитах), диффузными болезнями соединительной ткани, при интоксикациях и других патологических, а также физиологических состояниях (например, при беременности, во время менструаций, при старении и др.). Ложноотрицательные результаты могут быть обусловлены недостаточно высокой чувствительностью тест-системы и другими причинами. Кроме того, серодиагностика возможна в относительно поздние сроки с момента заболевания, когда у больного в крови появляются AT и занимает много времени. Так постановка РИБТ после получения АГ с последующие чтением результатов занимает 22-24 часа (меланжевый метод), РИФ - в среднем 7 часов, ИФА с предварительной Сенсибилизацией планшета АГ - 20-22 часа, без сенсибилизации - 2-3 часа в зависимости от квалификации лабораторного персонала.

Таким образом, неясность происхождения ЛПР на сифилис, трудности их дифференциации со скрытыми формами сифилиса вызывает необходимость поиска новых критериев дифференциальной диагностики специфической и неспецифической серопозитивности.

Недостатки серодиагностики сифилиса послужили толчком к разработке молекулярно-генетических методов диагностики сифилиса получивших широкое распространение в последние годы. Запатентованы различные способы способы ПЦР-диагностики сифилиса. Однако, несмотря на целый ряд преимуществ ПЦР-диагностики эти методы обладают и существенными недостатками, среди которых необходимо отметить их высокую стоимость, обусловленную дороговизной праймеров для ПЦР-диагностики и высокой стоимостью лабораторного оборудования, что ограничивает применение этих методов в лабораторной практике. Следует подчеркнуть, что ПЦР-анализ, довольно широко распространенный для диагностики многих инфекционных заболеваний, в том числе ЗППП, для диагности-

ки сифилиса не регламентирован органами здравоохранения и во всем мире имеет пока исследовательский статус.

В связи с вышесказанным, разработка современных недорогих, высокочувствительных и специфических методов лабораторной диагностики сифилиса является актуальной и представляет большое значение для практического здравоохранения.

Цель исследования: разработка диагностических критериев развития сифилиса методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии (ГХ-МС) на основе хроматографического определения молекулярных маркёров Treponema pallidum.

Задачи исследования. Для достижения указанной цели исследования представлялось необходимым решение следующих задач:

1. Изучить особенности развития сифилитической инфекции с оценкой скрытых форм сифилиса и органных поражений.

2. Отработать лабораторную методику определения молекулярных маркёров Treponema pallidum в биологических жидкостях и тканях организма.

3. Определить методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии наличие в сыворотке крови больных сифилисом углеводных, липидных и белковых компонентов — фрагментов клеточной стенки и органелл Treponema pallidum.

4. Определить методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии наличие в сыворотке крови больных сифилисом органных метаболитов — молекулярных маркёров поражения ЦНС, печени и костных структур.

5. Определить методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии наличие в сыворотке крови больных сифилисом сигнальных соединений — лактонов, хинолонов и фурановых эфиров — факторов «кооперативной чувствительности» микробов.

6. Определить диагностическую значимость, диагностическую эффективность и диагностическую чувствительность лабораторных диагностических критериев на основании хромато-масс-спектрометрических методов определения метаболитов Treponema pallidum, органных метаболитов и сигнальных соединений «кооперативной чувствительности» микробов.

Научная новизна полученных результатов:

• Впервые методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии определен характер биохимических изменений сыворотки крови больных сифилисом.

• Впервые методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии определены молекулярные маркёры органных поражений (ЦНС, печень, костные структуры) при сифилисе.

• Впервые в сыворотке крови больных сифилисом методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии определены активаторы «кооперативной чувствительности» микробов и их субъединицы.

• Впервые на основании факторного анализа выстроен приоритетный ряд клинико-лабораторных и ГХ-МС показателей сифилитической инфекции по величине удельного веса.

• Впервые определена диагностическая значимость, диагностическая эффективность и диагностическую чувствительность хрома-то-масс-спектрометрических критериев сифилиса.

Практическая значимость исследований. Работа является фрагментом плановой темы НИР кафедры микробиологии Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития РФ: «Экология условно-патогенных микробов и их роль в патологии человека», № государственной регистрации 01.200.115343.

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Биохимические изменения сыворотки крови при сифилисе характеризуются наличием липидных (летучие жирные кислоты, холестерин и его эфиры; триглицериды; фосфолипиды; С14-С20 жирные кислоты; изо- и антиизокислоты), углеводных (D-глюкоза, изомеры глюкозы; D-галактоза, её изомеры; L-фукоза; аминоса-хара и ацетилированные амины глюкозы и маннозы) и аминокислотных (алифатические аминокислоты; оксиаминокислоты; ди-карбоновые аминокислоты и амиды; основные аминокислоты; ароматические аминокислоты; серосодержащие аминокислоты) компонентов, являющихся фрагментами органелл Treponema pallidum.

2. D-галактоза, D-трентол, глюкоза и её циклический изомер — инозитол служат молекулярными маркёрами органных поражений ЦНС при сифилисе.

3. Ароматические производные жирных кислот (фенилпропионовая и фенилуксусная кислоты), аминокислотные фрагменты, липид-но-белковый комплекс (хроматографически неразделенный) служат молекулярными маркёрами органных поражений печени при сифилисе.

4. Летучие жирные кислоты, липополисахариды и их субъединицы (С18-С20) служат молекулярными маркёрами органных поражений костей при сифилисе.

5. Активаторы «кооперативной чувствительности» микробов и их субъединицы — бутиролактон, фуранилэтанол, 2-фуран-метанамин и 4-гидрокси-2-хинолинкарбоксиловая кислота присутствуют в сыворотке крови больных сифилисом.

6. На основании факторного анализа выстроен приоритетный ряд клинико-лабораторных и ГХ-МС показателей сифилитической инфекции по величине удельного веса. В первую десятку вошли такие ГХ-МС показатели как сфингомиелин (0,978); лизофосфа-тидилхолин (0,966); фосфатидилэтаноламин (0,943); инозитол (0,911); Б-галактоза (0,894); циклическая форма глюкозы и изомер глюкозы — углеводные компоненты, а также активаторы «кооперативной чувствительности» — 3-оксодозеноил-лактон (0,886); ди- и тетрагидро-изохинолин (0,854). Такие активаторы «кооперативной чувствительности» как фуранозил-диэфир-бора и бутаноил-лактон заняли соответственно 11 (0,755) и 12 (0,736) места.

7. ГХ-МС критерии сифилитической инфекции имеют высокий уровень диагностической чувствительности (79,6-97,2%), диагностической специфичности (50,0-92,3%), диагностической предсказуемости положительной (61,3-94,7%), диагностической предсказуемости отрицательной (60,9-95,1%) и могут быть использованы в качестве лабораторных диагностических критериев развития сифилиса.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедре микробиологии ММА им. И. М. Сеченова.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на:

• научной конференции кафедры микробиологии ММА им. И. М. Сеченова;

• Национальных днях лабораторной медицины России, 20-22 октября 2004 года, Москва;

• I Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность», 26-28 октября 2004 года, Москва;

• совместной научной конференции кафедры микробиологии ММА им. И. М. Сеченова и клинико-биохимической лаборатории Института хирургии им. А. В, Вишневского РАМН (28 декабря 2004 года, протокол № 10).

Личный вклад автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. В работах выполненных в соавторстве, вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально-теоретической и клинико-бактериологической реализа-

ции до обсуждения результатов в научных публикациях и докладах и их внедрения в практику.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 работы, в том числе 3 в центральным журналах.

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, пяти глав собственным исследований, обсуждения резулытатов, выводов, практических рекомендаций, списка цитируемой литературы и приложения. Работа включает löR страниц текста; 21 таблицу; 17 рисунков. Список литературы содержите (^источника, из тЫИ отечественных и W зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Методами ГХ-МС анализа исследованы1 сыворотки крови 117 больныж сифилисом.

Из 117 больных положительные серологические пробы (ИФА, РП, РПГА) установлены у 76 пациентов, отрицательные — у 41 пациента.

Поражения костей и костныж структур вымвлены1 у 28 из 117 больныж (23,9%), поражения кожи (пурпура, экзематозные и пустулёзные высыпания) — у 28 из 117 больныж (23,9%), поражения печени (гепатит) — у 20 из 117 больныж (17,0%), нарушения сердечнососудистой системы (гипертоническая болезнь, ИБС, миокардит) — у 23 из 117 больных (19,6%), поражения нервной системы — у 23 из 117 больныж (19,6%), поражения ЛОР-органов (гайморит, гайморо-этмоидит) — у 13 из 117 больных (11,1%), хронический цистит — у 12 из 117 больныж (10,2%).

Хроматографические исследования проводили по разработанной схеме для ГХ-МС анализа биологического материала больных с люэтической инфекцией с переводом исследуемых соединений в ТМС-соединения и идентификации с помощью масс-селективного детектора.

Использована ГХ-МС система Hewlett-Packard с газовым хроматографом НР-5890 и масс-селективным детектором НР-5972А и идентификацией соединений по их спектру электронного удара при химической ионизации.

Схема ГХ-МС анализа биологического материала представлена в табл. 1.

Таблица 1

хромато-масс-спектрометрия

перевод в ТМС-соединения с помощью ВЭТРА

перевод в ТМС-соединения с помощью ВвТРА

Высшие лактоны выделялись из сыворотки крови с помощью различных процедур экстракции — без гидролиза, с энзиматическим и кислотным (соляная кислота) гидролизом. Образцы анализировались методами ВЭЖХ, используя квадрупольный масс-селективный детектор с ионной ловушкой и ГХ-МС методы. Идентификация метаболитов основывалась на MS, MS-MS и MS3-Macc-cnejcrpax. Использовались различные способы ионизации: электроспрей и химическая ионизация при атмосферном давлении. Методами ВЭЖХ определено семь метаболитов лактонов. Сравнительный анализ методов ГХ-МС и ВЭЖХ-МС анализа показывает определённые преимущества ГХ-МС метода с возможностью быстрого скринингового исследования биологического материала на основе селективных ионов. Альдонолактоны и альдоновые кислоты определялись с помощью метода капиллярного электрофореза. Проводилось одновременное разделение кислотных и основных метаболитов в 30 мМ ацетате натрия при рН 4,0. При минимальных концентрациях определяемых соединений проводилось предварительное концентрирование и разделение метаболитов с помощью системы для капиллярного электрофореза «Капель-105». Все определения выполнены на не модифицированном капилляре (Ьэр=50 см) при длине волны детектирования 220-240 нм. Ввод проб осуществлялся гидродинамически при 30 Мбар в течение 20 сек. Состав и рН воздушного электролита влиял на электрофоретическую подвижность компонентов, степень разрешения и селективность.

Статистическую обработку результатов исследования проводили на ЭВМ Pentium. В работе анализировались только статистически достоверные данные. Статистическая обработка данных клини-ко-лабораторных исследований проводилась с применением многомерной статистики — корреляционного, факторного и кластерного анализов — по программе Гарвардского университета BMDP-2M для биомедицинских исследований. Также использовался пакет прикладных программ Excel версия 7.0, раздел программ «Анализ данных». Различия между сравниваемыми величинами признавались статистически достоверными при уровне значимости р<0,05 по критерию Стьюдента.

При корреляционном анализе использовался коэффициент Юла, который высчитывался с помощью таблицы сопряжённости, а также с помощью корреляционной матрицы программ биомедицинских исследований Гарвардского университета BMDP-2M. Величина коэффициента корреляции указывала на связь между факторами: от 0 до 0,3 — слабой силы, от 0,3 до 0,7 — средней силы, от 0,7 до 0,9 — сильную взаимозависимость, 1 — полную (функциональную) связь.

Для оценки диагностической значимости разработанных ГХ-МС критериев, использовали унифицированные критерии пригодности лабораторных тестов для диагностики определенной формы патологии, применённые R. Galen и S. Gambino (197S) и В. В. Меньшиковым (1982) основанные на решении теоремы Байеса (расчёт вероятности распределения результатов исследования).

Диагностическая чувствительность, диагностическая специфичность, диагностическая предсказуемость положительная, диагностическая предсказуемость отрицательная рассчитывались следующим образом:

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Проблема диагностики сифилиса связана, прежде всего, с большой распространённостью заболевания, возможностью поражения любых органов и тканей, наличием скрытых форм заболевания. Привлечение в диагностический арсенал методов ГХ-МС позволяет с высокой степенью достоверности определить наличие поражения органов и систем при отсутствии положительных серологических реакций и выраженных клинических проявлений болезни.

Диагностические возможности методов ГХ-МС анализа мы использовали по трём направлениям:

1. ГХ-МС анализ биохимических изменений метаболизма в сыворотке крови больных с определением липидных компонентов, углеводных компонентов и аминокислотных компонентов;

2. ГХ-МС поиск сигнальных соединений для реализации микробами «кооперативной чувствительности» — лактонов, хинолонов и фурановых эфиров.

3. ГХ-МС поиск молекулярных маркёров органных поражений (ранние стадии заболевания), в частности молекулярных маркёров поражения нервной системы (головной мозг), печени и костных структур.

Определяя сифилис, как инфекционный процесс, развивающийся по септическому типу с появлением возбудителя в крови (так

называемая люэтическая септицемия), развитием органных поражений (висцеральный сифилис) с поражением нервной системы, печени и костных структур, с интоксикацией и выраженной лихорадкой, мы стремились последовательно разрабатывать методические приемы ГХ-МС анализа соответственно развитию люэтического инфекционного процесса.

По мнению С. А. Писаржевского (1999), сепсис — это состояние инфицированности организма, при котором резко усиливаются катаболические процессы в крови, определяются жизнеспособные микробы, резко повышается количество токсических микробных метаболитов, продуктов повреждения и деструкции тканей, а также медиаторов воспаления, а показатели активности эффекторного звена иммунитета снижены.

По нашему мнению, развитие инфекционного люэтического процесса вполне соответствует вышеприведенному определению.

Приступая к ГХ-МС определению нарушений метаболизма в сыворотке крови больных при сифилисе, мы исходили из основного постулата молекулярной медицины — положения о том, что для каждой болезни каждого патологического проявления организма имеется молекулярная мишень, которую можно использовать как для диагностики заболевания, так и для лекарственного воздействия [Пальцев М. А., 2002]. Использование современных технологических и инструментальных разработок существенно расширяет возможности молекулярной диагностики. Практически все патогены могут быть диагностированы методами молекулярной биологии, причём более точно и в более короткие сроки, чем это можно сделать с помощью классических микробиологических методов. Мы исходили из того, что каждый микроб (в том числе и Treponema pallidum) имеет свой специфический молекулярный маркё'р. Привлечение в арсенал методов лабораторной диагностики сифилиса ГХ-МС позволяет с высокой степенью достоверности определить наличие Treponema pallidum в организме по наличию специфического молекулярного маркёра.

Рассматривая биохимические изменения сыворотки крови под влиянием сифилитической инфекции, мы оценивали соотношение липидных, углеводных и аминокислотных компонентов сыворотки крови, которые составили:

• липидные компоненты — 88,90-89,80% (средн. 89,35±7,13%);

• углеводные компоненты — 2,79-2,89% (средн. 2,84±0,3 8%);

• аминокислотные компоненты — 7,31-8,31% (средн. 7,81±0,85%).

В состав липидных компонентов входили традиционные метаболиты анаэробных грамотрицательных бактерий — ЛЖК (суммарно от 1,64±0,23 ммоль/л до 3,33±0,47 ммоль/л), а также холестерин и

его эфиры (суммарно от 12,87+2,29 ммоль/л до 13,45+1,94 ммоль/л); триглицериды — от 5,55+0,52 ммоль/л до 7,81+1,22 ммоль/л; фосфо-липиды (от 12,87+2,29 ммоль/л до 13,45+1,94 ммоль/л); Ci4-C2o жирные кислоты (суммарно от 1,26+0,41 ммоль/л до 4,12+0,38 ммоль/л); изо- и антиизокислоты (суммарно от 1,12+0,33 ммоль/л до 1,21+0,55 ммоль/л). :

В состав углеводных компонентов входили: D-глюкоза и изомеры глюкозы (суммарно от 0,46+0,06 ммоль/л до 0,63+0,012 ммоль/л); D-галактоза и её изомеры (суммарно от 0,270+0,0192 ммоль/л до 0,322+0,0542 ммоль/л), L-фукоза и аминосахара (соответственно от 0,14+0,015 ммоль/лдо 0,18+0,019 ммоль/л и от 0,19+0,021 ммоль/лдо 0,23+0,018 ммоль/л), ацетилированные амины глюкозы и маннозы (соответственно от 0,0060+0,00002 ммоль/л до 0,0064+0,00003 ммоль/л и от0,0048+0,00005ммоль/лдо 0,0062+0,00о6б ммоль/л).

В состав аминокислотных компонентов входили: алифатические аминокислоты (суммарно от 1,161+0,1708 ммоль/л до 1,237+0,1709 ммоль/л); оксиаминокислоты (суммарно от 0,24л0,013 ммоль/л до 0,25+0,015 ммоль/л); дикарбоновые аминокислоты и амиды (от 0,8862+0,0932 ммоль/л до 0,9368+0,1033 ммоль/л); основные аминокислоты (от0,53+0,061 ммоль/лдо0,63+0,66ммоль/л); ароматические аминокислоты (от 0,246+0,0838 ммоль/л до 0,282+0,0999 ммоль/л); се-русодержащие аминокислоты (от 0,146+0,017 ммоль/л до 0,154+0,020 ммоль/л).

Следующая группа диагностических критериев связана с существованием так называемой «кооперативной чувствительности» микробов или «чувством кворума» (quorum sensing). Считая сифилис сеп-тикоподобным состоянием с наличием возбудителя в крови, наличием люэтических метастазов в органах и тканях, температурной реакцией, мы предложили использовать наличие активаторов «кооперативной чувствительности» в сыворотке крови для оценки риска генерации люэтической инфекции. Известно, что генетический механизм реализации «кооперативной чувствительности» позволяет патогенным бактериям рационально использовать свой болезнетворный потенциал, определяя системой quorum sensing момент включения генов патоген-ности только после достижения бактериями определенной плотности, при которой синтезирующееся количество факторов патогенности гарантирует успешное развитие инфекционного процесса. Активаторами «кооперативной чувствительности» являются низкомолекулярные соединения группы лактонов, хинолонов и фурановых эфиров бора. С помощью ГХ-МС анализа и детектора селективных ионов были определены масс-спектры указанных соединений и их субъединиц. Скрининг биологического материала по характеристическим ионам позво-

лил установить присутствие в сыворотке крови больных бутиролакто-на, фуранилэтанола, 2-фуран-метанамина и 4-гидрокси-2-хинолона.

Приступая к ГХ-МС поиску молекулярных маркёров органных поражений при сифилисе, мы исходили из основного постулата молекулярной медицины — положения о том, что для каждой болезни каждого патологического проявления организма имеется молекулярная мишень, которую можно использовать как для диагностики заболевания, так и для лекарственного воздействия [Пальцев М. А., 2002]. Использование современных технологических и инструментальных разработок существенно расширяет возможности молекулярной диагностики. Привлечение в арсенал методов лабораторной диагностики сифилиса ГХ-МС позволяет с высокой степенью достоверности определить наличие органных поражений при отсутствии положительных серологических реакций и выраженных клинических проявлений болезни.

При ГХ-МС поиске молекулярных маркёров органных поражений мы использовали опыт диагностики возможной локализации поражения при сепсисе с помощью ГХ-МС образцов крови больных [Истратов В. Г., Жуков А. О., 1999; Истратов В. Г. с соавт., 1995; Жуков А. О., 1998]. Молекулярные маркёры органных поражений (ранние стадии заболевания) по данным ГХ-МС-анализа периферической крови больных представлены в табл. 2.

Особо следует остановиться на метаболизме головного мозга, учитывая возможные поражения нервной ткани люэтическим процессом. Выявленные ГХ-МС методами метаболиты являются продуктами обновления основных структурно-функциональных соединений головного мозга — фосфагликолипидов, фосфатидилинозитов, фосфа-тидилэтаноламинов, фосфатидилсерина, фосфатидилхолина, церебро-зидов и ганглиозидов. Процессы обмена и обновления указанных соединений обычно проходят достаточно длительно. Периоды полураспада цереброзида, сфингомиелина, фосфатидилхолина, фосфатидилэ-таноламина, фосфатидилсерина и фосфатидилинозита составляют соответственно: 13,10,2, 7,4 и 1,25 месяца [Карелин А. А., 2000]. Однако в критических для организма ситуациях возникает энергетический стимул увеличения скорости обновления указанных субстратов. При этом вступает в действие механизм избирательности процессов распада. Установлено, что повышенной скоростью обновления при стимуляции головного мозга отличаются фосфатидилэтаноламин и фосфа-тидилинозит.

Таблица 2

ГХ-МС молекулярные маркеры органных поражений в сыворотке крови больных (ранние стадии заболевания)

Локализация поражения Диагностический признак (моль/л)

Исследуемые показатели Норма (п = 2 0) Без признаков . поражения внутренних органов С признаками поражения внутренних органов

Печень ароматические производные жирных кислот (фенилпропионовая и фенилуксусная кислоты) 0,124±0,029 2,235±0,44 6,86±0,74

аминокислотные фрагменты 0,508±0,063 2,08±0,213 4,20±0,54

липидно-белковый комплекс (неразделенный хромато графически) в норме отсутствует не определяется 3,11±0,19

Нервная система (головной мозг) Фосфотидилинозитол и фосфоти-дилэтаноламин и их субъединицы:

• Б-галактоза 1,01 ±0,17 1,716±0,22 2,28±0,39

• Б-трентол в норме отсутствует 0,506±0,063 1,11±0,19

• Инозитол в норме отсутствует 0,311 ±0,043 1,28±0,23

Фосфорная кислота 0,243±0,036 0,714±0,081 3,16±0,48

Костные структуры ЛЖК 0,212±0,033 0,619±0,072 4,11±0,58

ЛПС и их субъединицы (С^-Сго) 1,12±0,26 2,08±0,39 3,19±0,41

Для нервной системы стимулом являются гормоны и биогенные амины — ацетилхолин, серии, количество которых существенно меняется при критических состояниях головного мозга. Мы считаем, что достаточно серьезным стимулом в данной патологической ситуации является воздействие такого специфического для нервной ткани возбудителя, как Т. pallidum. Необходимо также учитывать возможности конкурентного взаимодействия ароматических аминов, образующихся при распаде тканевых структур и выявленных методами ГХ-МС анализа, с биологическими аминами головного мозга.

Отмечено повышенное содержание в ликворе (суммарно 41,8%) таких компонентов, как D-галактоза, D-трентол, глюкоза и её циклический изомер — инозитол, которые являются продуктами деградации наиболее активных субстратов — фосфатидилинозитола и фосфатидилэтаноламина. По содержанию фосфатидилинозина и фосфатидилэтаноламина на первом месте в головном мозгу стоит ствол мозга, диэнцефалон и мезэнцефалон. Естественно предположить, что в данном случае процессы интенсификации обмена и возможной деградации основных субстратов головного мозга активнее всего идут в этих функционально ответственных отделах головного мозга.

Оценивая диагностическую значимость разработанных нами ГХ-МС критериев, мы использовали унифицированные критерии пригодности лабораторных тестов для диагностики определенной формы патологии, применённые R. Galen и S. Gambino (1975) и В. В. Меньшиковым (1982) и основанные на решении теоремы Байеса (расчёт вероятности распределения результатов исследования).

Диагностическая чувствительность ГХ-МС методики определения углеводных компонентов в сыворотке крови больных сифилисом составила 89,4%, диагностическая специфичность — 58,3%, диагностическая предсказуемость положительная — 67,1%, диагностическая предсказуемость отрицательная — 85,3%.

Диагностическая чувствительность ГХ-МС методики определения липидных компонентов в сыворотке крови больных сифилисом составила 87,5%, диагностическая специфичность — 71,1%, диагностическая предсказуемость положительная — 82,8%, диагностическая предсказуемость отрицательная — 78,0%.

Диагностическая чувствительность ГХ-МС методики определения аминокислотных компонентов в сыворотке крови больных сифилисом составила 81,3%, диагностическая специфичность — 80,6%, диагностическая предсказуемость положительная — 92,1%, диагностическая предсказуемость отрицательная — 60,9%.

Параметры диагностической значимости ГХ-МС методики определения молекулярных маркёров поражения нервной системы в

сыворотке крови больных сифилисом составили: диагностическая чувствительность — 95,1%, диагностическая специфичность — 69,0%, диагностическая предсказуемость положительная — 77,6%, диагностическая предсказуемость отрицательная — 92,6%.

Параметры диагностической значимости ГХ-МС методики определения молекулярных маркёров поражения печени в сыворотке крови больных сифилисом составили: диагностическая чувствительность — 97,2%, диагностическая специфичность — 90,6%, диагностическая предсказуемость положительная — 94,7%, диагностическая предсказуемость отрицательная — 95,1%.

Параметры диагностической значимости ГХ-МС методики определения молекулярных маркёров поражения костных структур в сыворотке крови больных сифилисом составили: диагностическая чувствительность —. 79,6%, диагностическая специфичность — 50,0%, диагностическая предсказуемость положительная — 61,8%, диагностическая предсказуемость отрицательная — 70,7%.

Унифицированные критерии оценки значимости разработанных диагностических тестов ГХ-МС методики определения в сыворотке крови больных сифилисом сигнальных соединений — факторов «кооперативной чувствительности» — лактонов, хинолонов и фурановых эфиров составили: для лактонов — диагностическая чувствительность — 94,6%, диагностическая специфичность — 88,0%, диагностическая предсказуемость положительная — 93,4%, диагностическая предсказуемость отрицательная — 90,2%; для хинолонов

— диагностическая чувствительность — 83,1%, диагностическая специфичность — 70,0%, диагностическая предсказуемость положительная — 84,2%, диагностическая предсказуемость отрицательная

— 68,2%; для фурановых эфиров — диагностическая чувствительность — 93,5%, диагностическая специфичность — 92,3%, диагностическая предсказуемость положительная — 96,0%, диагностическая предсказуемость отрицательная — 87,8%. Параметры диагностической значимости ГХ-МС критериев сифилиса (в %) представлены в табл. 3.

Таблица 3

Параметры диагностической значимости ГХ-МС критериев сифилиса (в %)

ГХ-МС диагностические критерии Диагностическая чувствительность Диагностическая специфичность Диагностическая предсказуемость (положительная) Диагностическая предсказуемость (отрицательная)

Биохимические изменения сыворотки крови Углеводные компоненты 89,4 58,3 67,1 85,3

Липидные компоненты 87,5 71,1 82,8 78,0

Аминокислотные компоненты 81,3 80,6 92,1 60,9

Определение молекулярных маркёров органных поражений Нервная система (головной мозг) 95,1 69,0 77,6 92,6

Печень 97,2 90,6 94,7 95,1

Костные структуры 79,6 50,0 61,8 70,7

Определение активаторов «кооперативной чувствительности» микробов Лактоноы 94,6 88,0 93,4 90,2

Хинолоны 83,1 70,0 84,2 68,2

Фурановые эфиры бора 93,5 92,3 96,0 87,8

Таким образом, разработанные нами ГХ-МС методики имеют высокий уровень диагностической чувствительности: от 79,6% до 97,2%, диагностической специфичности от 50,0% до 92,3%, диагностической предсказуемости положительной — от 61,3% до 94,7%, диагностической предсказуемости отрицательной — от 60,9% до 95,1% и могут быть использованы в качестве диагностических критериев развития люэтической инфекции.

На основании факторного анализа основных клинико-лабораторных и ГХ-МС показателей нами выстроен приоритетный ряд по величине удельного веса показателей (в условных единицах).

В первую десятку по величине удельного веса вошли такие ГХ-МС показатели как сфингомиелин (1 место) — 0,978, лизофос-фатидилхолин (2 место) — 0,966 и фосфатидилэтаноламин (3 место) — 0,943; липидные компоненты, связанные с метаболизмом нервной системы и головного мозга, инозитол и Б-галактоза (4 и 5 места соответственно) — 0,911 и 0,894; циклическая форма глюкозы и изомер галактозы — углеводные компоненты, а также активаторы «кооперативной чувствительности» — 3-оксодозеноил-лактон (7 место) — 0,886; ди- и тетрагидро-изохинолен (8 место) — 0,854. Такие активаторы «кооперативной чувствительности» как фуранозил-диэфир-бора и бутаноил-лактон заняли соответственно 11 (0,755) и 12 (0,736) места. Диагностическая значимость ГХ-МС показателей сифилитической инфекции по сравнению с традиционными клнни-ко-лабораторными показателями показана на рис. 1.

Рис. 1. Диагностическая значимость ГХ-МС показателей сифилитической инфекции по сравнению с традиционными кли-нико-лабораторными показателями.

Оценивая потенциальные возможности рассматриваемых нами ГХ-МС диагностических критериев с позиций раннего выявления скрытых форм сифилиса, мы поставили на первое место возможности ранней диагностики поражений нервной системы и печени, а также наличие активаторов «кооперативной чувствительности» микробов, как показателя генерализации сифилитического процесса.

Изученный спектр активаторов «кооперативной чувствительности» микробов групп лактонов, хинолонов, фурановых эфиров, а также их аналогов и родственных соединений позволяет придти к выводу, что тщательный подбор соединений этих классов поможет найти соединения, блокирующие работу активаторов, или вступающих с ними в конкурентные взаимодействия, приводящие к нарушению передачи сигнала на экспрессию генов патогенности. Несомненна перспективность этого направления в плане разработки низкомолекулярных соединений для воздействия на патогенные микробы. Зная химическую структуру автоиндукторов, можно синтезировать модифицированный аналог, который будет неактивен в качестве индуктора, но эффективен в качестве ингибитора. Преимущества создания антимикробных препаратов на основе автоиндукторов состоят в следующем: все описанные к настоящему моменту автоиндукторы являются низкомолекулярными соединениями не обладающими антигенными свойствами, которые можно легко модифицировать; автоиндукторы высоко специфичны в своём взаимодействии с белками-сенсорами, синтезируемыми только патогенными микробами; учитывая их высокую специфичность и лёгкость проникновения через мембрану клетки, задача адресной доставки таких препаратов существенно облегчается.

Выводы:

1. В сыворотке крови больных сифилисом присутствуют липидные (летучие жирные кислоты, холестерин и его эфиры, триглицери-ды, фосфолипиды, С14-С20 жирные кислоты, изо- и антиизокисло-ты); углеводные (D-глюкоза и изомеры глюкозы, D-галактоза и её изомеры, L-фукоза, аминосахара, ацетилированные амины глюкозы и маннозы); аминокислотные (алифатические аминокислоты, оксиаминокислоты, дикарбоновые аминокислоты, амиды, основные аминокислоты, ароматические аминокислоты, серосодержащие аминокислоты) компоненты, являющиеся фрагментами клеточной стенки и других органелл Treponema pallidum.

2. Молекулярными маркёрами органных поражений ЦНС при сифилисе служат D-галактоза, D-трентол, глюкоза и еб циклический изомер — инозитол, которые являются продуктами деградации наиболее активных субстратов ЦНС — фосфатидилинозитола и фосфатидилэтаноламина.

3. Молекулярными маркёрами органных поражений печени при сифилисе служат ароматические производные жирных кислот (фе-нилпропионовая и фенилуксусная кислоты), аминокислотные фрагменты, липидно-белковый комплекс (хроматографически неразделенный).

4. Молекулярными маркёрами органных поражений костей при сифилисе служат летучие жирные кислоты, липополисахариды и их субъединицы (С18-С20).

5. В сыворотке крови больных сифилисом присутствуют активаторы «кооперативной чувствительности» микробов и их субъединицы — бутиролактон, фуранилэтанол, 2-фуран-метанамин и 4-гидрокси-2-хинолинкарбоксиловая кислота.

6. Информативность ГХ-МС исследований молекулярных маркёров органных поражений и активаторов «кооперативной чувствительности» микробов таких как сфингомиелин (0,978), лизофос-фатидилхолин (0,966), фосфатидилэтаноламин (0,943), инозитол (0,911), D-галактоза (0,894), 3-оксодозеноил-лактон (0,886), ди- и тетрагидро-изохинолин (0,854), фуранозил-диэфир-бора (0,755), бутаноил-лактон (0,736), выше по сравнению с традиционными клинико-лабораторными показателями сифилиса.

7. Разработанные ГХ-МС критерии сифилиса имеют высокий уровень диагностической чувствительности (79,6-97,2%), диагностической специфичности (50,0-92,3%), диагностической предсказуемости положительной (61,3-94,7%), диагностической предсказуемости отрицательной (60,9-95,1%) и могут быть использованы в качестве лабораторных диагностических критериев развития сифилиса.

Практические рекомендации:

1. Для объективизации критериев наличия или отсутствия инфекционного люэтического процесса у больных сифилисом необходимо использовать хромато-масс-спектрометрическое исследование сыворотки крови, включающее:

• определение молекулярных маркёров органных поражений;

• определение активаторов «кооперативной чувствительности» микробов;

• определение биохимических изменений сыворотки крови.

2. Молекулярными маркёрами сифилитического поражения ЦНС служат: Б-галактоза, Б-трентол, глюкоза и её циклический изо-мер—инозитол.

3. Молекулярными маркёрами сифилитического поражения печени служат ароматические производные жирных кислот (фенилпро-пионовая и фенилуксусная кислоты), аминокислотные фрагменты, липидно-белковый комплекс (хроматографически неразделенный).

4. Молекулярными маркёрами сифилитического поражения костей служат летучие жирные кислоты, липополисахариды и их субъединицы (Си-См).

СПИСОК научных работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Миронов А. Ю., Истратов В. Г., Воробьёв А. А., Осман К. А. Газовая хроматография и масс-спектрометрия в лабораторной диагностике сифилиса // Тез. докл. I международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность», Москва, 26-28 октября 2004 года. - С. 133-135.

2. Истратов В. Г., Миронов А. Ю., Осман К. А. Новые методические подходы к диагностике септических состояний с помощью методов газовой хроматографии и хромато-масс-спектрометрии // Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. - № 9. - С. 65.

3. Истратов В. Г., Миронов А. Ю., Осман К. А. Хроматографиче-ские аспекты люэтической инфекции // Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. - № 9. - С. 65.

4. Воробьёв А. А., Миронов А. Ю., Истратов В. Г., Осман К. А. Оценка диагностических критериев сифилитической инфекции методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии // Вестник РАМН. - 2005.-№ 2.-С. 22-26.

Список сокращений: АГ - антиген; AT - антитело;

АМК - аминокислотные компоненты; AT - антитело;

ГСЭН - государственный санитарно-эпидемиологический надзор;

ГХ-МС - газовая хроматография-масс-спектрометрия;

ДС -диагностическая специфичность;

ДЧ - диагностическая чувствительность;

ЗППП - заболевания, передающиеся половым путём;

ИО - истинно отрицательные;

ИП - истинно положительные;

ИФА - иммуноферментный анализ;

КС - костные структуры;

КСР - комплекс серологических реакций;

ЛЖК - летучие жирные кислоты;

ЛК - лактоны;

ЛК - липидные компоненты; ЛО - ложноотрицательные; ЛП - ложноположительные; ЛПС - липополисахарид; МПБ - мясо-пептонный бульон; НС - нервная система; ПН - печень;

Протр - предсказуемость отрицательная; ПРпол - предсказуемость положительная; ПЦР - полимеразная цепная реакция; РА - реакция агглютинации;

РИБТ - реакция иммобилизации бледной трепонемы;

РИТ (РИБТ) - реакция иммобилизации бледных трепонем;

РИФ - реакция иммунофлюоресценции;

РМП - реакция микропреципитации;

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации;

РПР - реакция преципитации;

РСК - реакция связывания комплемента;

УК - углеводные компоненты;

ФЭ - фурановые эфиры;

ХН - хинолоны.

ММЛ им, И. М. Сеченова

Подписано • печать 2005 г.

Тираж 100 экземпляров

\ Í.

2 2 A.IP 2005

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Осман Кхалиль Ареф

yv Оглавление "

Список сокращений Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Биологические свойства возбудителя сифилиса

1.2 Лабораторная диагностика сифилиса

1.2.1. Бактериоскопическая диагностика сифилиса

1.2.2. Серологическая диагностика сифилиса

1.2.3. Молекулярно биологические методы диагностики ^ сифилиса

Введение Диссертация по биологии, на тему "Хроматографические диагностические критерии люэтической инфекции"

Актуальность проблемы: Во всём мире отмечается рост числа инфекционных заболеваний, передающихся половым путём (ЗППП). Среди ЗППП наиболее значимым является сифилис. По данным органов ГСЭН заболеваемость сифилисом в 2001 году составила в РФ 240 тыс. случаев. Эпидемиологическая ситуация в стране остаётся крайне напряжённой. Одним из основных мероприятий, направленных на предупреждение заболеваемости сифилисом, является его ранняя диагностика [Приказ МЗ РФ № 87 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса»]. Несмотря на то, что сифилис известен врачам с античных времён, остаётся много нерешенных проблем связанных с его диагностикой и лечением. В последние годы особенно увеличилось число скрытых форм сифилиса. Так по данным Борисенко К. К. с соавт. (1989) ранний скрытый сифилис стал регистрироваться значительно чаще, чем поздний и неучтённый и составляет до 60-96% всех больных латентной формой сифилиса. По данным Соколовского Е. В. (1995) удельный вес раннего срытого сифилиса в РФ вырос с 1991 по 1994 год в 1,2 раза. Частота регистрации позднего скрытого сифилиса снизилась в 6 раз.

Среди специфических тестов большое значение имеют РИБТ, включающая инкубирование возбудителя с сывороткой пациента в анаэробных условиях, после чего бактерии теряют подвижность (в среднем, через 18 ч), и РА (микроагглютинации) Т. pallidum. В последние 10-20 лет всё большее распространение получают методы иммунофлюоресцентной диагностики сифилиса (особенно непрямой РИФ), постановка которых отличается относительной простотой и достаточно высокой чувствительностью. Наибольшее распространение получила РИФ с адсорбированной сывороткой, включающая предварительное истощение сыворотки пациента инкубацией с АГ штамма Райтера, что приводит к элиминации перекрёстно реагирующих AT, последующее инкубирование с АГ Т. pallidum (штамм Николса) в течение 30 минут при температуре 37° С и внесение ан-тиглобулиновой сыворотки, меченой флюоресцеином.

Результаты серологических реакций зависят от множества причин, которые могут обуславливать появление ложноположитель-ных и ложноотрицательных результатов. Ложноположительные результаты нередко могут регистрироваться у пациентов с соматическими (например, при заболеваниях крови, печени), инфекционными заболеваниями (например, при вирусных гепатитах), диффузными болезнями соединительной ткани, при интоксикациях и других патологических, а также физиологических состояниях (например, при беременности, во время менструаций, при старении и др.). Ложноот-рицательные результаты могут быть обусловлены недостаточно высокой чувствительностью тест-системы и другими причинами. Кроме того, серодиагностика возможна в относительно поздние сроки с момента заболевания, когда у больного в крови появляются AT и занимает много времени. Так постановка РИБТ после получения АГ с последующие чтением результатов занимает 22-24 часа (меланжевый метод), РИФ - в среднем 7 часов, ИФА с предварительной сенсибилизацией планшета АГ - 20-22 часа, без сенсибилизации - 2-3 часа в зависимости от квалификации лабораторного персонала.

Таким образом, неясность происхождения ложноположитель-ных результатов серологических реакций на сифилис, трудности их дифференциации со скрытыми формами сифилиса вызывает необходимость поиска новых критериев дифференциальной диагностики специфической и неспецифической серопозитивности.

Все методы серодиагностики сифилиса основаны на косвенном показателе наличия Т. pallidum - AT к бледной трепонеме в крови пациентов. До настоящего времени нет однозначного объяснения причины серологической резистентности; различий в сроках негативации у больных, получивших однотипное лечение; возникают проблемы установления достоверного диагноза врожденного сифилиса; не разработаны критерии определения жизнеспособности возбудителя сифилиса в организме хозяина.

Перечисленные недостатки серодиагностики сифилиса послужили толчком к разработке молекулярно-генетических методов диагностики сифилиса получивших широкое распространение в последние годы, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР) (Ra-dolf J. D. et al.), поскольку геном Treponema pallidum достаточно консервативен. Запатентованы различные способы ПЦР-диагностики сифилиса. Однако все проводимые исследования в области ДНК-диагностики сифилиса носят экспериментальный характер (Лыкова С. Г., Шахматов Д. А., 1998; Дмитриев Г. А. с соавт., 2002). Несмотря на целый ряд преимуществ ПЦР-диагностики эти методы обладают и существенными недостатками, среди которых необходимо отметить их высокую стоимость, обусловленную дороговизной праймеров для ПЦР-диагностики и высокой стоимостью лабораторного оборудования, что ограничивает применение этих методов в рутинной лабораторной практике. Следует подчеркнуть, что ПЦР-анализ, довольно широко распространенный для диагностики многих инфекционных заболеваний, в том числе ЗППП, для диагностики сифилиса не регламентирован органами здравоохранения и во всем мире имеет пока исследовательский статус.

Следует отметить, что характер развития люэтической инфекции с быстрым проникновением возбудителя в кровь и быстрой генерализацией по организму, сопровождающейся повреждением различных органов и тканей (так называемая люэтическая септицемия) позволяет считать её течение сепсисоподобным с соответствующей клинической и лабораторной оценкой.

Современное развитие физико-химических методов исследования и, в частности хромато-масс-спектрометрии, позволяет определить минимальные количества химических соединений, входящих в состав клеточной стенки и органелл Treponema pallidum, продуктов её метаболизма, как анаэробного микроорганизма; определить наличие в крови больных органных метаболитов, а также ряда сигнальных соединений, запускающих развитие септического состояния в организме.

Цель исследования. В связи с изложенным целью работы является разработка диагностических критериев развития сифилиса методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии (ГХ-MC) на основе хроматографического определения молекулярных маркёров Treponema pallidum.

Научная новизна полученных результатов:

Практическая значимость исследований. Работа является фрагментом плановой темы НИР кафедры микробиологии с вирусологией и иммунологией Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова: «Экология условно-патогенных микробов и их роль в патологии человека», № госрегистрации 01.200.115343.

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Биохимические изменения сыворотки крови при сифилисе характеризуются наличием липидных (летучие жирные кислоты, холестерин и его эфиры; триглицериды; фосфолипиды; См-Сго жирные кислоты; изо- и антиизокислоты), углеводных (D-глюкоза, изомеры глюкозы; D-галактоза, её изомеры; L-фукоза; аминоса-хара и ацетилированные амины глюкозы и маннозы) и аминокислотных (алифатические аминокислоты; оксиаминокислоты; ди-карбоновые аминокислоты и амиды; основные аминокислоты; ароматические аминокислоты; серосодержащие аминокислоты) компонентов, являющихся фрагментами органелл Treponema pallidum.

6. На основании факторного анализа выстроен приоритетный ряд клинико-лабораторных и ГХ-МС показателей сифилитической инфекции по величине удельного веса. В первую десятку вошли такие ГХ-МС показатели как сфингомиелин (0,978); лизофосфа-тидилхолин (0,966); фосфатидилэтаноламин (0,943); инозитол (0,911); D-галактоза (0,894); циклическая форма глюкозы и изомер глюкозы — углеводные компоненты, а также активаторы «кооперативной чувствительности» — 3-оксодозеноил-лактон (0,886); ди- и тетрагидро-изохинолин (0,854). Такие активаторы «кооперативной чувствительности» как фуранозил-диэфир-бора и бутаноил-лактон заняли соответственно 11 (0,755) и 12 (0,736) места.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на:

• научной конференции кафедры микробиологии ММА им. И. М. Сеченова;

• Национальных днях лабораторной медицины России, 20-22 октября 2004 года, Москва;

• 1-й Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность», 26-28 октября 2004 года, Москва;

• совместной научной конференции кафедры микробиологии ММА им. И. М. Сеченова и клинико-биохимической лаборатории Института хирургии им. А. В. Вишневского РАМН (28 декабря 2004 года, протокол № 10).

Личный ВКЛаД автора. Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализе и обобщении полученных результатов. В работах выполненных в соавторстве, вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач, их экспериментально-теоретической и клинико-бактериологической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и докладах и их внедрения в практику.

Публикаци И. По теме диссертации опубликовано 4 работы, в том числе 3 в центральных журналах.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Осман Кхалиль Ареф

Выводы:

2. Молекулярными маркёрами органных поражений ЦНС при сифилисе служат D-галактоза, D-трентол, глюкоза и её циклический изомер — инозитол, которые являются продуктами деградации наиболее активных субстратов ЦНС — фосфатидилинозитола и фосфатидилэтаноламина.

7. Разработанные нами ГХ-МС критерии сифилиса имеют высокий уровень диагностической чувствительности (79,6-97,2%), диагностической специфичности (50,0-92,3%), диагностической предсказуемости положительной (61,3-94,7%), диагностической предсказуемости отрицательной (60,9-95,1%) и могут быть использованы в качестве лабораторных диагностических критериев развития сифилиса.

Практические рекомендации

Для объективизации критериев наличия или отсутствия инфекционного люэтического процесса у больных сифилисом необходимо использовать хромато-масс-спектрометрическое исследование сыворотки крови, включающее:

• определение молекулярных маркёров органных поражений;

• определение активаторов «кооперативной чувствительности» микробов;

• определение биохимических изменений сыворотки крови. Молекулярными маркёрами сифилитического поражения ЦНС служат: D-галактоза, D-трентол, глюкоза и её циклический изомер — инозитол.

Молекулярными маркёрами сифилитического поражения печени служат ароматические производные жирных кислот (фенилпро-пионовая и фенилуксусная кислоты), аминокислотные фрагменты, липидно-белковый комплекс (хроматографически неразделенный).

Молекулярными маркёрами сифилитического поражения костей служат летучие жирные кислоты, липополисахариды и их субъединицы (Ci8-C2o).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Осман Кхалиль Ареф, Москва

1. Аковбян В. А., Дмитриев Г. А. Комментарий к приказу Минздрава России от 26.03.2001 № 87 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» // Здравоохранение: Журнал для руководителей и главного бухгалтера. - 2001. - № 6. - С. - 103-106.

2. Акопова 3. П. Роль реакции гемагглютинации в серодиагностике сифилиса // Вестник дерматологии и венерологии. 2000. - № 6. -С. 12-13.

3. Амозов М. Л., Короткое В. Д., Собченко О. М. К вопросу о пересмотре классификации сифилиса и других ЗППП // Заболевания, передаваемые половым путем.- 1997. № 3. - С. 69-70.

4. Базиков И. А. Использование полиакролеинового латекса в получении тест-системы для экспресс-диагностики сифилиса // Вестник дерматологии и венерологии. 2001. - № 4. - С. 51-52.

5. Базиков И. А. Новый метод экспресс-диагностики сифилиса с помощью иммуноферментного анализа на стекле //Здоровье и болезнь как состояния человека: Сборник. Ставрополь. - 2000. - С. 563-565.

6. Базиков И. А., Тюменцева И. С., Афанасьев Е. Н. Применение трепонемных магнитных иммуносорбентов в иммуноферментном анализе для диагностики сифилиса // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2001. - № 2. - С. 61-63.

7. Ю.Базиков И. А., Тюменцева И. С., Афанасьев Е. Н. Применение трепонемных магнитных иммуносорбентов в иммуноферментном анализе для диагностики сифилиса // Российский журнал кожных и венерических болезней. 2000. - № 3. - С. 44-46.

8. Бондаревский Я. И. Роль терапии ex juvantibus в диагностике сифилиса // Вестник дерматологии и венерологии. 2002. - № 1. - С. 46-47.

9. Борисенко К. К., Лосева О. К., Доля О. В., Туманова Е. Л. Ранний врожденный сифилис: клиника, патоморфология, диагностика, лечение, профилактика. // Русский медицинский журнал. 2002 № 15.-С. 985-993.

10. Венерические болезни. Руководство для врачей / Под ред. О. К. Шапошникова // «Медицина», 1991. 140 с.

11. Гариб Н. Ф. Регистрация антигенсвязывающих лимфоцитов как основа нового метода иммунодиагностики сифилиса //Журнал теоретической и клинической медицины. 1999. - № 1. - С. 104107.

12. Гвоздева Л. И. Ошибки в диагностике сифилиса // Актуальные вопросы дерматовенерологии: Сб. научных трудов, посвящённых 70-летнему юбилею акад. РАМН Ю. К. Скрипкина. Курск, 1999. -Вып. 2. С. 22-23.

13. Горланов И. А., Милявская И. Р. О врожденном сифилисе у недоношенных детей // Актуальные вопросы дерматологии и венерологии: Сб. научных трудов, посвящённых 60-летию со дня рождения Н. И. Рассказова. Астрахань, 1998. - С. 154-155.

14. Гражданцева Антонина Анатольевна Рекомбинантные антигены в развитии иммуноферментного анализа для диагностики сифилиса // Автореферат дисс. . канд. биол. наук. Кольцово (Новосибирской обл.), 2000.-37 с.

15. Гуляй П. Д., Курилюк С. В. Приобретенный сифилис у детей // Здравоохранение, Минск. 1999. - № 8. - С. 55.

16. Данилов С. И., Назаров П. Г. Новая концепция формирования се-рорезистентности после лечения сифилиса // Инфекции, передаваемые половым путем. 2000. - № 2. - С. 16-19.

17. Данилов Сергей Иванович Критерии диагностики, иммунокоррек-ция и реабилитация больных с серорезистентностью после лечения сифилиса // Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Санкт-Петербург, 1996.-38 с.

18. Динисламов Галихон Глимзянович Состояние нервной системы при ранних формах сифилиса: (Клинико-нейрофизиологические сопоставления) // Дисс. . канд. мед. наук. Уфа, 1997. - 258 с.

19. Динисламов Галихон Глимзянович Состояние нервной системы при ранних формах сифилиса / Автореферат дис. канд. мед. наук. -Казань, 1997.-24 с.

20. Дмитриев Г. А., Брагина Е. Е. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса. Часть I // Вестник дерматологии и венерологии. 1996. - № 2. - С. 29-33.

21. Дмитриев Г. А., Брагина Е. Е. Современные методы лабораторной диагностики сифилиса. Часть 2 // Вестник дерматологии и венерологии 1996. - № 3. - С. 33-38.

22. Дмитриев Г. А., Киселева Г. А., Акопова 3. П. Современное состояние серодиагностики сифилиса // Вестник службы крови России. 1999.-№ 2. - С. 25-29.

23. Дмитриев Г. А., Урывская Е. А. Реакция пассивной гемагглюти-нации в диагностике сифилиса // Биопрепараты 2001. - № 4. - С. 16-17.

24. Довжанский С. И. Сифилис // Саратов, 1993. 68 с.

25. Доля Ольга Валентиновна Современные методы профилактики, диагностики и лечения сифилиса у детей // Автореферат дисс. . д-ра мед. наук. М., 2001. 41 с.

26. Доля Ольга Валентиновна Современные методы профилактики, диагностики и лечения сифилиса у детей // Дисс. . д-ра мед. наук. М., 2001.- 172 с.

27. Думченко В. В., Ткаченко Т. А. Анализ ошибок в диагностике сифилиса // Инфекции, передаваемые половым путем 2001. - № 4. -С. 29-30.

28. Дунязина Т. М. Диагностика сифилиса на стоматологическом приеме // Институт стоматологии 2000. - № 4. - С. 36-37.

29. Жибурт Е. Б., Бельгесов Н. В., Бондарчук Ю. В., Серебряная Н. Б., Сидоркевич С. В. Исследование маркеров сифилиса у доноров ге-мокомпонентов // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. -№ 11.-С. 15-17.

30. Жуков А. О. Дифференциальная диагностика сепсиса в хирургической клинике // Автореферат дисс. . д-ра. мед. наук. М., 1998. -33 с.

31. Жуков А. О., Святухин А. М., Истратов В. Г. Дифференциальная диагностика сепсиса и симулирующих его заболеваний // Избранный курс лекций по гнойной хирургии / Под ред. В. Д. Фёдорова и А. М. Святухина. М.: «Миклош», 2003. - С. 247-262.

32. Иванов Андрей Михайлович Совершенствование диагностики сифилиса на основе модифицированного иммуноферментного анализа // Автореферат дисс. . канд. мед. наук. СПб., 2000. - 22 с.

33. Иванов Андрей Михайлович Совершенствование диагностики сифилиса на основе модифицированного иммуноферментного анализа// Дисс. . канд. мед. наук. СПб., 2000. - 202 с.

34. Иванов Вадим Михайлович Динамика клинико-серологических показателей у больных ранними формами сифилиса при лечении различными антибиотиками // Автореферат дисс. . канд. мед. наук.-М., 1998.-20 с.

35. Иванов Вадим Михайлович Динамика клинико-серологических показателей у больных ранними формами сифилиса при лечении различными антибиотиками // Дисс. . канд. мед. наук. Новокузнецк, 1998. - 117 с.

36. Иванова Маиса Афанасьевна Диагностическое и прогностическое значение комплекса факторов, влияющих на исход беременности у женщин, больных и болевших сифилисом // Дисс. . канд. мед. наук. -М., 2000. 110 с.

37. Ильин И. И., Яровинский Б. Г., Галеева А. С. Тактика врача при сохранении положительных серореакций после лечения ранних форм сифилиса// Вестник дерматологии. 1984. - II. - С. 57-61.

38. Истратов В. Г., Жуков А. О., Руднева В. Г. Современные методические подходы к диагностике и оценке тяжести хирургического сепсиса // Сб. Актуальные вопросы хирургии. М., 1995. - С. 179183 с.

39. Каральник Б. В., Денисова Т. Г., Кешилева 3. Б., Пшеничная J1. А., Азизов Д. А., Тимофеева JI. Н., Амиров Ш. Н. Антигенсвязываю-щие лимфоциты и антитела в диагностике сифилиса // Инфекции, передаваемые половым путем. № 5. - С. 34-36.

40. Кардашенко Б. Я., Сафарова Э. А. Экстрагенитальные твердые шанкры // Инфекции, передаваемые половым путем. 1999. - № 2. -С. 30-31.

41. Карелин А. А. Сигнальный АТФ. Энергетика передачи сигнала к росту клеток плазматическими мембранами // М.: «Научно-издательский центр инженер», 2000. 505 с.

42. Каур С., Сильм X., Виндиревских Г., Шевчук О. Усовершенствование методов диагностики сифилиса при помощи определения антител к специфическим белкам возбудителя // Заболевания, передаваемые половым путем. № 4. С. 21-22.

43. Клиника, диагностика и профилактика сифилиса: методическое письмо Департамент здравоохранения Администрации Астраханской обл., Астраханская гос. мед. Академия // Н. И. Рассказов и др. утв. 21.03.97. Астрахань. - 1998. 33 с.

44. Коновалова О. П., Исаева И. В., Журбенко И. А., Савченко Е. В., Бобрышева Н. А. Серорезистентность у больных сифилисом // Здоровье и болезнь как состояния человека: Сб. Ставрополь, 2000. -С. 281-284.

45. Короткий Н. Г., Чиненова Е. Г. Клинико-диагностические особенности раннего врожденного сифилиса // Российский журнал кожных и венерических болезней.- 1998. № 6. - С. 44-47.

46. Короткий Н. Г., Чиненова Е. Г. Современные особенности течения врожденного сифилиса // Педиатрия. 1998. - № 3. - С. 61-64.

47. Красносельских Татьяна Валерьевна Определение спектра и соотношения антитрепонемных антител в диагностике приобретенного сифилиса // Автореферат дисс. . канд. мед. наук. СПб., 1998. -22 с.

48. Красносельских Татьяна Валерьевна Определение спектра и соотношения антитрепонемных антител в диагностике приобретенного сифилиса//Дисс. . канд. мед. наук. СПб., 1997. - 230 с.

49. Лещинская Н. П. Специфические иммуноглобулины в диагностике инфекций, передаваемых половым путем (ИППП) // Ученые записки С.-Петербургского гос. мед. университета им. И. П. Павлова.- 2001.-8.-№ 4.-С. 40-42.

50. Ломоносов Константин Михайлович Иммунорегуляторные нарушения как причина серорезистентности и замедленной негатива-ции серологических реакций при сифилисе: (Клинико-иммунологические аспекты) / Автореферат дисс. . д-ра мед. наук. М., 2000. - 47 с.

51. Ломоносов Константин Михайлович Иммунорегуляторные нарушения как причина серорезистентности и замедленной негатива-ции серологических реакций при сифилисе: (Клинико-иммунологические аспекты) // Дис. . д-ра мед. наук. М., 2000. -С. 222.

52. Лосева В. А., Вознесенский Д. Л. Ранний нейросифилис: клиника, диагностика, лечение // Смоленская гос. мед. академия. Смоленск, 2001. - С. 14.

53. Лосева В. А., Цыганкова Е. П., Макушкина В. К., Парамонова Н. А., Кузьмин А. В. К клинике и диагностике раннего врожденного сифилиса // Смоленская гос. мед. академия. дата депонирования 29.05.97. - Смоленск, 1997. - 9 с.

54. Лосева В. А., Цыганкова Е. П., Макушкина В. К., Торшина И. Е., Вознесенский В. Л. Ошибки диагностики ранних заразных форм сифилиса // Российский журнал кожных и венерических болезней. 1999.-№4.-С. 15-17.

55. Лосева В. А., Цыганкова Е. П., Торшина И. Е., Вознесенский Д. Л. К клинике и диагностике пустулезных сифилидов // Смоленская гос. мед. академия. Смоленск, 1999. - 9 с.

56. Лосева В. А., Цыганкова Е. П., Торшина И. Е., Вознесенский Д. Л. К клинике и диагностике пустулезных сифилидов // Российский журнал кожных и венерических болезней. 1999. - № 5. - С. 36-40.

57. Лосева О. К., Тактамышева Э. Ш. Современный нейросифилис: клиника, диагностика, лечение // Русский мед. журнал. 1998. - 6. -№ 15.-С. 981-984.

58. Лосева О. К., Тактамышева Э. III., Куприянова Л. В., Шишков А. С., Грудометов Ю. П. Анализ методов диагностики и лечения нейросифилиса в Москве в 1995-1996 г. г. // Вестник дерматологии и венерологии. 1997. - № 3. - С. 42-45.

59. Лосева О. К., Тактамышева Э. III., Штульман Д. Р. Современный нейросифилис: диагностика, лечение и тактика ведения больных // Российский журнал кожных и венерических болезней. № 4. - С. 39-44.

60. Лукьянов А. М., Панкратов В. Г. Клинико-иммунологические аспекты серологической резистентности после лечения сифилиса // Здравоохранение: орган МЗ Республики Беларусь. 2000. - № 6. -С. 50-51.

61. Лукьянов Александр Михайлович Клинико-иммунологическая характеристика, диагностика и лечение больных нейросифилисом и серорезистентным сифилисом // Автореферат дисс. . канд. мед. наук. Минск, 2000. - 24 с.

62. Люгер А. Ф., Шмидт Б. Л., Каулих М. Значение лабораторных данных для диагностики нейросифилиса // Инфекции, передаваемые половым путем. 2000. - № 5. - С. 4-13.

63. Маликов В. Е., Курдина М. И., Петришина С. В., Бурова А. А., Павлова И. П. Сравнительная оценка методов лабораторной диагностики сифилиса //Вестник дерматологии и венерологии. 2001. - № 1.-С. 16-18.

64. Малишевская Н. П., Батыршина С. В., Зильбер А. Г., Скидан Н. И. Случай гигантского экстрагенитального язвенного шанкра // Российский журнал кожных и венерических болезней. 1999. - № 1. -С. 50-53.

65. Масеткин И. П., Резникова Л. С., Лучникова Т. А., Елькин В. Д. Серодиагностика сифилиса // Пермь, 1977. 195 с.

66. Маховская Т. Г., Кемайкина Л. В., Ананьев К. Г. Проблемы диагностики нейросифилиса // Актуальные проблемы психиатрии, наркологии и неврологии: Сб. научных трудов. М., 1998. - С. 8386.

67. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник / под ред. А. А. Воробьёва. М.: «Медицинское информационное агентство», 2004. - 691 с.

68. Меньшиков В. В. Руководство по клинической лабораторной диагностике // М.: «Медицина», 1982. 576 с.

69. Метревели Г. В., Джальмухамедова Э. И. Сифилис у новорожденных // Актуальные вопросы дерматологии и венерологии: Сб. научных трудов, посвящённых 60-летию со дня рождения Н. И. Рас-сказова. Астрахань, 1998. - С. 166-168

70. Милич М. В. Серологическая резистентность при сифилисе // Москва, 1984.-48 с.

71. Милич М. В. Эволюция сифилиса // М., Медицина, 1987. 158 с.

72. Милявская И. Р., Горланов И. А., Качанов В. П. Современные вопросы эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики врожденного сифилиса: Учебное пособие для студентов // С.-Петербургская педиатрическая мед. академия. СПб., 1999. - 28 с.

73. Миракян М. Е., Бабаян К. Р. Реакция ТРНА в серологической диагностике сифилиса // Современные проблемы клинической и теоретической медицины. — Ереван, 1998. С. 152-154.

74. Назаров П. Г., Старченко М. Е., Касаткин Е. В., Данилов С. И. Новая концепция формирования серорезистентности при сифилисе // Вестник дерматологии и венерологии. 1996. - № 6. - С. 17-19.

75. Нейросифилис: клинические формы, течение, диагностика: Учебное пособие / Т. Г. Маховская с соавт.; Дальневосточный гос. мед. университет. Хабаровск, 1998. - 27 с.

76. Немкаева Р. М., Трубина Е. В. Ранний врожденный сифилис // Медицинский журнал Чувашии. 1997. - т. 8. - № 3. - С. 137-139.

77. Пальцев М. А. Молекулярная медицина и прогресс фундаментальных наук // Вестник РАН. 2002. - т. 72, № 1. - С. 13-21.

78. Пальцев М. А. Молекулярная медицина: достижения и перспективы // Молекулярная медицина. 2004. - № 4. - С. 3 - 8.

79. Панкратов О. В. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе сифилиса // Здравоохранение. Минск, 1999. - № 8. - С. 10-14.

80. Папий Н. А. Ошибки в диагностике манифестных форм сифилиса // Здравоохранение: Органан МЗ Республики Беларусь. -1996.-№5.-С. 67-68.

81. Пожарская В. О. Функциональные свойства клеточных структур культуральных Treponema pallidum //Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1997. - № 3. - С. 11-14.

82. Пожарская Виктория Олеговна Функциональные свойства клеточных структур культуральных бледных трепонем и научно-производственная разработка новых специфических диагностических препаратов на сифилис // Автореферат дисс. . д-ра мед. наук. М., 1997.-33 с.

83. Пожарская Виктория Олеговна Функциональные свойства клеточных структур культуральных бледных трепонем и научно-производственная разработка новых специфических диагностических препаратов на сифилис // Дисс. . д-ра мед. наук. Ставрополь, 1996.-247 с.

84. Попова О. В., Ялхороева Р. М., Коновалова О. П., Исаева И. В. Серологические рецидивы у больных заразными формами сифилиса // Здоровье и болезнь как состояния человека. Ставрополь, 2000. - С. 284-286.

85. Приказ МЗ РФ № 87 от 26. 03. 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» // М.: Минздрав РФ, 2003. 63 с.

86. Приказ Министерства здравоохранения РФ от 26.03.2001 № 87 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» // Здравоохранение: Журнал для руководителей и главного бухгалтера. 2001.-№ 6. - С. 77-102.

87. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 26. 03. 2001 г. № 87 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» // Здравоохранение: Журнал для руководителей и главного бухгалтера. 2001. - № 7. - С. 50-75.

88. Прохоренков В. И., Мисенко Д. Н., Карачева Ю. В., Шергин С. Н., Родиков М. В. Нейросифилис (патогенез, диагностика и лечение) // Вестник дерматологии и венерологии. 1997. - № 5. - С. 2025.

89. Пшеничная Любовь Андреевна Организация и эффективность службы серологической диагностики сифилиса в лечебно-профилактических учреждениях Республики Казахстан. // Автореферат дисс. д-ра мед.'наук. М., 1997. - 32 с.

90. Пшеничная Любовь Андреевна Организация и эффективность службы серологической диагностики сифилиса в лечебно-профилактических учреждениях Республики Казахстан // Дисс. . д-ра мед. наук. Алма-Ата, 1997. - С. 196.

91. Разнатовский И. М., Красносельских Т. В., Соколовский Е. В. Поражение нервной системы и внутренних органов у больных ранним приобретенным сифилисом в настоящее время // Журнал дермато-венерологии и косметологии. 1996. - № 1. - С. 67-71.

92. Рассказов Н. П., Алтухов С. А., Еланцева Т. X. Ранний врожденный сифилис в неонатальном периоде: клинические особенности и диагностические проблемы // Российский журнал кожных и венерических болезней. 1999. - № 4. - С. 33-36.

93. Родиков Михаил Владимирович Современные особенности клиники и течения нейросифилиса // Дисс. . канд. мед. наук. Красноярск, 1998. 159 с.

94. Родиков Михаил Владимирович Современные особенности клиники и течения нейросифилиса // Автореферат дисс. . канд. мед. наук. Новосибирск, 1998. - 21 с.

95. Родин Ю. А., Родин А. Ю. Персистенция бледных трепонем и иммунитет при сифилисе // Вестник дерматологии и венерологии. 2000. - № 6. - С. 23-24.

96. Румянцева Е. В., Бакулев А. Д., Суворов А. П. Сравнительный анализ чувствительности некоторых серологических методов диагностики при различных формах сифилиса // Новые технологии в медицине: Сб. научных трудов. Саратов, 1999. - С. 143-145.

97. Селютина О. В. К диагностике сифилиса // Стоматология. -2000. 79. - № 2. - С. 50.

98. Сметов В. К., Моргуль М. П., Уразовская Е. В., Крушинская И. А. О применении иммуноферментного анализа в диагностике сифилиса // Вестник дерматологии и венерологии. 2003 № 3. - С. 46-47.

99. Соколовский Е. В. Серологическая резистентность после лечения сифилиса (причины и факторы развития, профилактика и лечение) // Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Санкт-Петербург, 1995.^0 с.

100. Соловых Н. Н., Оркин В. Ф., Завьялов А. И., Бакулев А. Д., Румянцева Е. В., Денисов С. Н. Нейросифилис: наблюдения из практики последних лет // Российский журнал кожных и венерических болезней. 1998. - № 5. - С. 31-34.

101. Сурганова Вера Ивановна Эпидемиологические и клинико-диагностические аспекты раннего скрытого сифилиса // Автореферат дисс. . канд. мед. наук. — Екатеринбург, 1998. 21 с.

102. Сурганова Вера Ивановна Эпидемиологические и клинико-диагностические аспекты раннего скрытого сифилиса // Дисс. . канд. мед. наук.- Екатеринбург, 1998. 205 с.

103. Сухова JI. П., Машеро В. В., Войнова Н. Н., Щербаков В. М. Опыт применения иммуноферментных тест-систем с использованием рекомбинантных белков в диагностике сифилиса // Инфекции, передаваемые половым путем. 1999. - № 1. - С. 34-35.

104. Тактамышева Эльвира Шавкятовна Современные методы диагностики и лечения нейросифилиса // Автореферат дисс. .канд. мед. наук. М., 1999. - 25 с.

105. Тактамышева Эльвира Шавкятовна Современные методы диагностики и лечения нейросифилиса // Дисс. .канд. мед. наук. -М., 1999. 124 с.

106. Теличко Игорь Николаевич Оптимизация диагностики и лечения раннего нейросифилиса // Автореферат дисс. . канд. мед. наук. СПб., 2001.- 18 с.

107. Тония К. С. Лечение больных серорезистентной формой сифилиса: (Клинико-иммунологические и электронно-микроскопические исследования) // Медицинские новости Грузии. 1997.-№ Ю.-С. 24-25.

108. Торшина И. Е., Лосева В. А., Цыганкова Е. П., Тарасова Н. Н., Макушкина В. К. Клиника, диагностика и профилактика раннего врожденного сифилиса // Российский журнал кожных и венерических болезней. 1999. - № 4. - С. 36-39.

109. Фриго Н. В., Главинская Т. А., Комарова В. Д., Новикова С. И. Новые возможности «Lues Screen»: определение антител к ДНК в сыворотках крови, исследованных для подтверждения сифилиса // Заболевания, передаваемые половым путем. 1998. - № 6. - С. 1721.

110. Фриго Н. В., Комарова В. Д., Обрядина А. П., Бурков А. Н. Сравнительные результаты иммуноферментного анализа, реакции пассивной гемагглютинации и микрореакции в серодиагностике сифилиса // Вестник дерматологии и венерологии. 2000. - № 4. -С. 34-36.

111. Фришман М. П. О серологической устойчивости после лечения больных сифилисом // Вестник дерматологии. 1984. - № 7. -С. 32-34.

112. Фурнье Альфред. Учение о сифилисе // СПб., 1903. — Т. 2. — 523 с.

113. Фурнье Альфред. Учение о сифилисе // СПб., 1903. Т. 1. -254 с.

114. Хурадо P. J1. Серология сифилиса: практический подход // Заболевания, передаваемые половым путем. 1997. - № 3. - С. 3-10.

115. Цераиди Н. Ф., Мажников А. Т., Коротков Н. В., Дерюгин И. JI. Актуальные аспекты серорезистентности у больных сифилисом // Заболевания, передаваемые половым путем. 1997. - № 4. - С. 23-26.

116. Чеботарев В. В., Павлик J1. В., Гужвиева О. Д., Чеботарева Н. В. Актуальные проблемы нейросифилиса // Вестник дерматологии и венерологии. 2002. - № 1. - С. 69-71.

117. Чимитова Ирина Агвановна Серорезистентный сифилис и обоснование применения цефалоспорина III поколения цефтриак-сона в лечении этого состояния // Автореферат дисс. . канд. мед. наук. М., 2000. - 22 с.

118. Чимитова Ирина Агвановна Серорезистентный сифилис и обоснование применения цефтриаксона в лечении больных // Дисс. . канд. мед. наук. М., 2000. - 101 с.

119. Шахматов Д. А., Кузнецов П. В., Киншт В. Н. Полимеразная цепная реакция в диагностике сифилиса // Консилиум. 1999. - № 3. - С. 28-30.

120. Шахматов Дмитрий Алексеевич Сравнительная оценка поли-меразной цепной реакции в лабораторной диагностике сифилиса // Автореферат дисс. . канд. мед. наук. Новосибирск, 1999. - 16 с.

121. Шахматов Дмитрий Алексеевич Сравнительная оценка поли-меразной цепной реакции в лабораторной диагностике сифилиса // Дисс. .канд. мед. наук. Новосибирск, 1999. - 87 с.

122. Штульман Д. Р., Лосева О. К., Артемьев Д. В., Хатиашвили И. Т., Тактамышева Э. А. Нейросифилис: современное состояние проблемы // Российский мед. журнал. 1998. - № 2. - С. 11-16.

123. Штульман Д. Р., Лосева О. К., Тактамышева Э. Ш. Клиника, диагностика и лечение современного нейросифилиса. Ч. 1. // Инфекции, передаваемые половым путем. 1999. - № 2. - С. 22-25.

124. Штульман Д. Р., Лосева О. К., Тактамышева Э. Ш. Клиника, диагностика и лечение современного нейросифилиса. Часть 2 // Инфекции, передаваемые половым путем. 1999. - № 3. - С. 12-15.

125. Шулешова Н. В., Никитина В. В., Скоромец А. А., Голиков К. В., Пешков Б. А. Трудности диагностики ранних форм нейросифилиса // Учёные записки С.-Петербургского гос. мед. университета им. И. П. Павлова. 2000. - т. 7. - № 1. - С. 66-69.

126. Щербаков Максим Анатольевич Комплексное лечение больных серорезистентным сифилисом с использованием иммуномо-дулятора «Полиоксидоний» // Дисс. . канд. мед. наук. М., 2001. - 133 с.

127. Эглстоун С. И., Тернер А. Дж. Л. Серологическая диагностика сифилиса // Инфекции, передаваемые половым путем. 2001. - № З.-С. 4-9.

128. Юцковский А. Д., Дубняк Н. С., Стефанович Я. А., Каменская О. Г. Особенности клинических проявлений сифилиса // Российский журнал кожных и венерических болезней. 2000. - № 1. - С. 41-42.

129. Юцковский А. Д., Тихомирова Н. В., Стефанович Я. А., Мило-видова Е. В., Черных С. Н. К проблеме серологической резистентности при сифилитической инфекции // Инфекции, передаваемые половым путем. 2000. - № 1. - С. 23-28.

130. Янг X. Рекомендации по серологической диагностике сифилиса // Инфекции, передаваемые половым путем. 2001. - № 3. - С. 10-12.

131. Aplevich V. A. Use of immunoenzyme test systems for diagnosis of syphilis in the troop unit of a medical service // Voen. Med. Zh. -2001.-№22(1).-P. 30-33.

132. Basse-Guerineau A. L., Assous M. V. Interpretation of questionable syphilis serologies // Review Prat. 2004. - № 54 (4). - P. 387391.

133. Brown D. L., Frank J. E., Brown D. L., Frank J. E. Diagnosis and management of syphilis // American Fam. Physician. 2003. - № 68 (2).-P. 283-290.

134. Castro R., Prieto E. S., Santo I., Azevedo J., Exposto F. L. Evaluation of an enzyme immunoassay technique for detection of antibodies against Treponema pallidum II J. Clinical Microbiology. 2003. - № 41 (l).-P. 250-253.

135. Collart P., Borel L., Durel P. Significance of spiral organisms found, after treatment in latt human and experimental syphilis. Brit J. Vener. Diseases. 1964. - № 40 (2). - P. 81-89.

136. Dicker L. W., Mosure D. J., Steece R., Stone К. M. Laboratory tests used in US public health laboratories for sexually transmitted diseases, 2000 // Sex Transmitted Diseases. 2004. - №31 (5). - P. 259264.

137. Golden M. R., Marra С. M., Holmes К. K. Update on syphilis: resurgence of an old problem // JAMA. 2003. - № 290 (11). - P. 15101514.

138. Goldmeier D., Guallar C. Syphilis: an update // Clinical Medicine. -2003.-№3(3).-P. 209-211.

139. Gosbell I. В., Sullivan E. A., Maidment C. A. An unexpected result in an evaluation of a serological test to detect syphilis // Pathology. -1999. -№31 (4). P. 398-402.

140. Guglielmone H., Vitozzi S., Elbarcha O., Fernandez E. Cofactor dependence and isotype distribution of anticardiolipin antibodies in viral infections // Annals Rheum. Diseases. 2001. - № 60 (5). - P. 500504.

141. Gutierrez J., Vergara M. J., Soto M. J., Piedrola G., Maroto M. Clinical utility of a competitive ELISA to detect antibodies against Treponema pallidum II J. Clinical Laboratory Annals. 2000. - № 14 (2). - P. 83-86.

142. Hartmann M. Therapy of syphilis // Hautarzt. 2004. - № 55 (2). -P. 215-216.

143. Hollier L. М., Hill J., Sheffield J. S., Wendel G. D. Jr. State laws regarding prenatal syphilis screening in the United States //American J. Obstetric Gynecology 2003. - № 189 (4). - 1178-1183.

144. Kolman С. J., Centurion-Lara A., Lukehart S. A., Owsley D. W., Tuross N. Identification of Treponema pallidum subspecies pallidum in a 200-year-old skeletal specimen // J. Infections Diseases. 1999. - № 180 (6).-P. 2060-2063.

145. Kouznetsov A. V., Prinz J. C. Molecular diagnosis of syphilis: the Schaudinn-Hoffmann lymph-node biopsy // Lancet. 2002. - № 360 (9330).-P. 388-389.

146. Nagano I, Abe K. Neurosyphilis.// Nippon Rinsho. 2004. - № 62. - Suppl. l.-P. 231-234.

147. Osato K. Syphilis // Nippon Rinsho. 2003. - № 61. - Suppl. 2. -P. 542-546.

148. Peeling R. W., Mabey D. C. Syphilis // National Rev. Microbiology. 2004. № 2 (6). - P. 448-449.

149. Peeling R. W., Ye H. Diagnostic tools for preventing and managing maternal and congenital syphilis: an overview // Bulletin World Health Organization. 2004. - № 82 (6). - P. 439-446.

150. Phelps R. G., Knispel J., Tu E. S., Cernainu G., Saruk M. Im-munoperoxidase technique for detecting spirochetes in tissue sections: comparison with other methods // International J. Dermatology 2000. -№39 (8).-P. 609-613.

151. Saloojee H., Velaphi S., Goga Y., Afadapa N., Steen R., Lincetto O. The prevention and management of congenital syphilis: an overview and recommendations // Bulletin World Health Organ. 2004. - № 82 (6). - 424-430.

152. Schaffzin J. K., Koumans E. H., Kahn R. H., Markowitz L. E. Evaluation of syphilis reactor grids: optimizing impact // Sexually Transmitted Diseases. 2003. - № 30 (9). - P. 700-706.

153. Schmid G. Economic and programmatic aspects of congenital syphilis prevention // Bulletin World Health Organ. 2004. - № 82 (6).- P. 402-409.

154. Shin J. L., Chung K. Y., Kang J. M., Lee Т. H., Lee M. G. The effects of Treponema pallidum on human dendritic cells // Yonsei Medicine J. 2004. - № 45 (3). - P. 515-522.

155. Siedner M., Zapitz V., Ishida M., De La Roca R., Klausner J. D. Performance of rapid syphilis tests in venous and fingerstick whole blood specimens // Sexually Transmitted Diseases. 2004. - № 31 (9). -P. 557-560.

156. Steuerwald U., Sander J., Sander S., Janzen N., Andree M. Syphilis specific antibodies in newborn infants in Lower Saxony, Germany 1993-2001 // Sexually Transmitted Diseases. 2003. - № 79 (4). - 351352.

157. Thoma-Greber E. Syphilis renaissance of a forgotten disease? A recommendation of the DSTDG for diagnosis and therapy // Hautarzt.- 2003. № 54 (12). - P. 1224-1228.

158. Uthman I. W., Bizri A. R., Gharavi A. E. Infections and antiphospholipid antibodies // J. Medicine Liban. 2000. - № 48 (5). -P. 324-326.

159. Venkatesh P., Verma L., Garg S. P., Tewari H. K. Rapid seroconversion to Treponema pallidum and HIV positivity in a patient with retinal vasculitis // Clinical Experiment Ophthalmology. 2002. - № 30 (4). -P. 297-299.

160. Wenhai L., Jianzhong Z., Cao Y. Detection of Treponema pallidum in skin lesions of secondary syphilis an characterization of the inflammatory infiltrate // Dermatology. 2004. - № 208 (2). - P. 94-97.

161. Wheeler H. L., Agarwal S., Goh В. T. Dark ground microscopy and treponemal serological tests in the diagnosis of early syphilis // Sexually Transmitted Diseases. 2004. - № 80 (5). - P. 411-414.

162. Young H., Aktas G., Moyes A. Enzywell recombinant enzyme immunoassay for the serological diagnosis of syphilis // Internal J. STD AIDS. 2000. - № 11 (5). - P. 288-291.

Информация о работе

Осман Кхалиль Ареф
кандидата биологических наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Хроматографические диагностические критерии люэтической инфекции - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы