Послеожоговая репарация кожи при воздействии компонентов пуповинной крови человека

Ажикова, Альфия Кадыровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Послеожоговая репарация кожи при воздействии компонентов пуповинной крови человека
ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Послеожоговая репарация кожи при воздействии компонентов пуповинной крови человека"

На правах рукописи

Ажикова Альфия Кадыровна

ПОСЛЕОЖОГОВАЯ РЕПАРАЦИЯ КОЖИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ КОМПОНЕНТОВ ПУПОВИННОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

(экспериментальное исследование)

03.03.04 - Клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 7 ИЮН 2010

Астрахань-2010

004605244

Работа выполнена на кафедре биотехнологии и биоэкологии Астраханского государственного университета.

Научный руководитель:

доктор биологических наук Лазько Марина Владимировна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Неваленный Александр Николаевич

доктор медицинских наук, профессор Наумова Любовь Ивановна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО Ставропольский государственный университет

Защита диссертации состоится «25» июня 2010 года в 15-00 часов на заседании объединенного диссертационного совета при Астраханском государственном университете по адресу: 414000, г.Астрахань, пл. Шаумяна, I.

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в библиотеке Астраханского государственного университета по адресу: 414000, Астрахань, пл. Шаумяна, д.1

Автореферат разослан « 2 Ч » мая 2010 года

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Изучение закономерностей воспаления и репаративной регенерации является одной из фундаментальных задач современной патологии. Репаративные процессы в ране неразрывно связаны с воспалением и формируют с ним единую реакцию на повреждение (Серов В.В., Пауков B.C., 1995; Пальцев М.А., Аничков Н.М., 2001). Репаративная регенерация является процессом, который имеет свои особенности в различных органах и тканях, но в целом её основные механизмы присутствуют в заживлении кожных ран (Trent J.F., Kirsner R.S., 1998;NwomehB.C.etal., 1998).

Особую актуальность изучение регенерации ран кожного покрова приобретает в связи с постоянным ростом количества дефектов кожи и рубцов вследствие ожогов, операций, порезов, трещин, травм, язв, постакне (Ахтямов С.Н., Бутов Ю.С., 2003; Sahi WJ. et al., 1994). В последнее время участились случаи термического поражения кожи из-за взрывов, пожаров, и это требует быстрой и качественной терапии. Несмотря на обилие препаратов для местного лечения ожогов, совершенствование методов их лечения по-прежнему остается актуальной задачей (Кузин М.И., Костюченок Б.М., 1990; Парамонов Б.А. и др., 2000).

В последние годы для улучшения результатов лечения ожоговых ран и снижения травматичности хирургического лечения осуществляют трансплантацию клеток и биоинженерных конструкций с иммобилизованными клетками (Расулов М.Ф. с соавт.,2005).

Источниками клеточного материала могут служить костный мозг, абортивный материал, периферическая и пуповинная кровь (Шумаков В.И, Онищенко H.A., 2009).

Весьма важно, что через активацию репаративно-пролиферативных процессов можно добиться снижения выраженности воспалительной реакции не только непосредственно в месте приложения активирующего усилия (Саидгалин Г.З., Салистый П.В.,Панова О.В. и др. 2000), но и в отдаленных органах и тканях, что является результатом существования реципрокных отношений между этими процессами гомеостаза (Воздвиженский С.И. с соавт., 1999).

Целью работы явилось сравнительное экспериментальное выявление особенностей послеожоговой репарации кожи крыс в условиях воздействия биологически активных компонентов пуповинной крови человека и при стандартном лечении.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи исследования:

1. Разработать методику применения пуповинной крови человека, как нативной, так и криоконсервированной, для лечения ожогов кожи.

2. Провести оценку процессов репарации ожогов кожи крыс в норме, как местно, так и на уровне целостного организма.

3. Экспериментально изучить в сравнении процессы репарации ожогов кожи крыс при воздействии нативной пуповинной крови человека и при использовании препарата «10% линимент синтомицина»

4. Провести сравнительную оценку процессов репарации ожогов кожи экспериментальных животных при использовании нативной и криоконсервированной пуповинной крови человека.

Научная новизна исследования заключается в том, что впервые изучено влияние пуповинной крови на регенераторные процессы в тканевых структурах кожи после ожоговой травмы при её аппликации на ожоговую поверхность.

Впервые установлена динамика изменений клеточного состава ожоговых ран при экспериментальной ожоговой травме в условиях воздействия пуповинной крови человека.

Изучены морфологические особенности заживления раневых дефектов кожного покрова после термической травмы при использовании пуповинной крови в сравнении с 10% линиментом синтомицина.

Исследованы качественные и количественные изменения клеток периферической крови экспериментальных животных (крыс) после термической травмы и её лечения биологически активными компонентами пуповинной крови человека.

Разработан способ лечения раневых дефектов кожного покрова после термической травмы с использованием биологически активных компонентов пуповинной крови человека (заявка на изобретение «Биологический стимулятор для интенсификации поврежденной кожи» авторы Ажикова А.К., Лазько М.В., регистрационный номер 2008151998 от 26.12.2008.).

Научно-практическая значимость работы.

Результаты настоящего исследования демонстрируют преимущество использования пуповинной крови как альтернативного способа лечения ожоговых повреждений кожи. Внедрение способа лечения раневых дефектов кожного покрова после термических ожогов за счет использования пуповинной крови человека позволит оптимизировать течение репаративных процессов в ране и снизить риск формирования рубцов.

На основании экспериментальной части диссертации был выигран открытый конкурс № 2008-Н-067 Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере «Проведение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ по приоритетным направлениям развития науки и техники в рамках реализации Программы «СТАРТ-09»: Лот № 2. Проведение научно-исследовательских и опытно-

конструкторских работ по приоритетным направлениям развития науки и техники в области медицины, фармакологии, биотехнологии для медицины (Направление Н 2).

Подписан государственный контракт №6550р/9141 от 21.01.2009 г. Тема НИОКР «Исследование репаративной возможности поврежденной кожи белых крыс в условиях воздействия биологически активных компонентов пуповинной крови человека». Результаты НИОКР зарегистрированы во Всероссийском Научно-техническом информационном центре (ВНТИЦ), работе присвоен регистрационный номер № 01200956788.

Реализация и внедрение результатов исследования.

Разработанная методика применения пуповинной крови человека для целей комбустиологии, сравнительные комплексные данные о процессах заживления ожоговых дефектов кожи крыс в норме, а также при воздействии нативной и криоконсервированной пуповинной крови человека, не только в месте ожоговой раны, но и на уровне целостного организма, раскрывают перспективы поиска оптимальных методов лечения ожогов.

Разработанный открытый способ лечения ожогов, базирующийся на замене химического медикаментозного струпа биологическим, может активно применяться в медицинской практике. При воздействии пуповинной крови человека на обожженную поверхность отмечается отчетливый болеутоляющий эффект, образуется более тонкий струп, под ним быстро протекает эпителизация, рубцов почти не образуется.

Основные положения и выводы работы используются при обучении студентов, слушателей на кафедрах биотехнологии и биоэкологии, зооинженерии и морфологии животных Инновационного Естественного института Астраханского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту:

> Разработанная методика применения пуповинной крови человека при ожоговых травмах отличается безопасностью, эффективностью и простотой выполнения.

> Процесс регенерации ожогового дефекта кожи и местно и на уровне организма в целом имеет более благоприятное течение при лечении пуповинной крови человека в сравнении с традиционным лечением «10%-ным линиментом синтомицина».

> Пуповинная кровь проявляет качества индуктора пролиферационной активности эпителиальных и соединительнотканных элементов, приводящий к значительному сокращению продолжительности всех стадий раневого процесса.

> Допускается криоконсервирование пуповинной крови, приводящее, однако, к снижению её репаративных свойств.

Апробация результатов исследования

Материалы диссертационного исследования обсуждены на IV международной конференции "Фундаментальные исследования" (Доминиканская республика, 2009), на IV научной международной конференции «Проблемы международной интеграции национальных образовательных стандартов», (Париж-Лондон, 2009).

Научно-исследовательская работа одержала победу в открытом конкурсе № 2008-Н-067 Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере «Проведение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ по приоритетным направлениям развития науки и техники в рамках реализации Программы «СТАРТ-09»: Лот №2. Проведение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ по приоритетным направлениям развития науки и техники в области медицины, фармакологии, биотехнологии для медицины (Направление Н2) (Пятигорск, 2009).

Положения диссертации были доложены на расширенном заседании кафедр биотехнологии и биоэкологии, зооинженерии и морфологии животных Естественного института Астраханского государственного университета (Астрахань, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, в т.ч. 1 статья в реферируемом журнале ВАК РФ, 1 статья опубликована в зарубежном издании.

Личный вклад автора в работы, выполненные в соавторстве, результаты которых включены в диссертацию, включает теоретическое обоснование проблем, выбор общего направления исследований, непосредственное участие в постановке экспериментов и выполнении исследований.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 4 глав, посвященных обзору литературы, описанию материалов и методов исследования, изложению и обсуждению результатов собственных исследований, заключения, выводов. Общий объем диссертации - 133 страницы, работа иллюстрирована 13 рисунками и 8 таблицами. Библиографический список включает 151 источник, из них - 78 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальный раздел работы выполнен на базе лаборатории экспериментальной физиологии Астраханского государственного университета (АГУ) (заведующий - профессор ДЛ.Теплый) и лаборатории биотехнологий АГУ (заведующий - профессор М.А.Егоров). Все процедуры по уходу за экспериметальными животными осуществляли в соответствии с нормами и правилами обращения с лабораторными животными с учетом требований Европейской конвенции по защите экспериментальных животных (1973). Во время эксперимента регистрировали общее состояние и поведение животных (Ронин B.C., 1989).

Экспериментальное исследование проведено на 120 белых беспородных крысах-самцах массой 220 - 250 г. Для повышения репрезентативности

результатов исследования эксперимент проводился 3 раза в осенне-зимний период.

В работе использовалась пуповинная кровь рожениц родильного отделения ГУЗ Александро-Мариинской областной клинической больницы (истории родов № 4232-4280), в осенне-зимний период.

На следующие сутки после нанесения термического ожога у всех животных измеряли величину ожоговой поверхности. После этого были сформированы 4 экспериментальные группы по 10 особей в каждой.

Животные I группы (контроль) после нанесения ожога не получали никакого лечения и заживление ожоговой раны происходило спонтанно. Животным II группы через сутки после нанесения ожога, а затем ежедневно 2 раза на ожоговую рану наносили по 1 мл. препарата «10% линимент синтомицина» и закрывали стерильным перевязочным материалом.

Животные III группы получали лечение по аналогичной программе, но вместо «10% линимент синтомицина» наносили на ожоговую рану по 1 мл. нативной пуповинной крови человека. Кровь для аппликаций брали ежедневно и хранили при температуре -4°С не более 8 часов.

Животным IV группы аналогично наносилось по I мл. криоконсервированной, а затем размороженной и подогретой до +37°С пуповинной крови человека.

Животных во всех группах выводили из эксперимента на 3, 5, 7 и 10-е сутки путем внутрибрюшинного введения этаминала натрия в дозе 4 мг/100 г массы тела. Учитывая, что ускоренное заживление поверхностных ран при применении пуповинной крови уже на 10 сутки способствовало почти полному покрытию их эпидермисом, дальнейшее исследование ран не проводилось.

Количественные данные, полученные в ходе выполнения исследования, проанализированы методами вариационной статистики и определения достоверности различий. При проведении статистической обработки использовалась утилита OpenOffice Cale из свободно распространяемого программного продукта OpenOffice (Ver. 3.0), работающая под управлением операционной системы Windows ХР Home Edition (сертификат OEM Х12-53766).

Количество биологически активных (живых) клеточных элементов нативной и криоконсервированной пуповинной крови человека оценивали путем окрашивания смесью акридинового оранжевого (Sigma) и бромистого этидия (Sigma) (раствор по 100 мкг/мл каждого в буферный раствор (PBS). Данный красящий раствор приливали к равному объему крови и просматривали в камере Горяева. Жизнеспособность клеточных элементов проводили визуально под микроскопом (зеленые - живые, а оранжевые -нежизнеспособные).

Уровень гемоглобина в образцах крови крыс определяли электрофотометрическим способом на гемоглобинометре APEL Hemoglobinmeter HG-202. Мазки фиксировали и окрашивали по Романовскому-Гимзе. Идентификация форменных элементов крови проводилась согласно

методике Н.Т. Ивановой (1982). Количество эритроцитов крови подсчитывали по стандартной методике в камере Горяева.

Гистологически исследованы биоптаты кожи крыс всех экспериментальных групп после 24 часов после криовоздействия, а также на 3, 5, 7 и 10 сутки после него. После фиксации в течение 3 суток при температуре +4°С в 10 % нейтральном растворе формалина фрагменты кожи заливались в парафин по стандартной методике. Использовались серийные парафиновые срезы толщиной 5-7 мкм, приготовленные на роторном микротоме модели 820 «Histocut» (фирма «Reichert-Jung»), которые окрашивались гематоксилином Караци - эозином и подвергались компьютерной морфометрии на автоматизированном морфометрическом комплексе «Морфолог».

Комплекс состоит из светового микроскопа Axioskop 20 (Zeiss), устройства считывания макроизображений, цветной высокоразрешающей телекамеры VC-C370 (Hitachi), платы ввода видеосигнала в компьютер «Aver 2000», компьютера Pentiun IV, струйного принтера C80SX (Epson) и пакета программ двух- и трехмерной морфометрии.

Площадь раневой поверхности в ходе эксперимента определяли по методике, разработанной В.Я.Васюковым, Н.В.Проценко в 1993 году.

Повторное измерение площади раны осуществляли через каждые 2 дня проводимой локальной терапии.

Площадь раневой поверхности равна площади окружности

S = Tt-R2

где R-расстояние от центра раны до периферии.

Процентное уменьшение площади раны (AS) или скорость эпителизации в процессе лечения определяли по формуле Л.Н.Поповой (1942):

s ■ t

где: S - величина площади раны при первом измерении (см2); S„ - величина площади раны в день последующего измерения (см2); t - число суток между измерениями.

Диагностику и прогнозирование течения раневого процесса ожоговых ран проводили, изучая цитологическую картину по данным микроскопии мазков-отпечатков по методу М.П. Покровской и М.С.Макарова (1942).

Изучали изменения основных клинико-лабораторных показателей крови крыс (общий анализ крови: количество эритроцитов, уровень гемоглобина), степень перекисной резистентности эритроцитов и уровень ацилгидроперекисей в плазме крови крыс сразу после забоя.

Кровь на исследование брали у крыс при декапитации, забой происходил под этаминал натриевым наркозом (4 мг. на 100 гр. массы животного, внутрибрюшинно). Плазму получали путём центрифугирования в течении 15 минут.

Для определения концентрации гидроперекисей липидов (ГПЛ) в периферической крови крыс измеряли УФ-поглощение липидных экстрактов

крови. Принцип метода основан на интенсивном поглощении коньюгированных диеновых структур ГПЛ в области 232-234 нм.

Для оценки уровня свободнорадикального окисления (СРО) и выраженности в связи с этим липолитических процессов в крови проводили измерение перекисной резистентности эритроцитов, используя методику определения перекисного гемолиза эритроцитов (Покровский A.A., Образцов A.A. 1964).

Состояние перекисного окисления липидов в печени оценивали по содержанию в ней малонового диальдегида, которое определялось по методике Ю.А.Владимирова и А.И.Арчакова (1972) в модификации И.Д.Стальной и Т.Т.Гаришвили (1977), Т.А.Кочетова (1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Отработка методики применения пуповинной крови человека для лечения

ожогов кожи

В ходе исследования было выявлено, что на количественное соотношение биологически активных (живых) и неактивных (мертвых) клеток пуповинной крови человека влияют время хранения и объем собранной крови.

Как показано в Табл.1, после 10 часов хранения при - 4°С количество живых клеточных элементов достоверно снижается. В столбце «Р» представлены достоверности различий средних арифметических количества живых клеток предыдущего и последующего сроков хранения.

Таблица 1

Снижение количества живых клеток пуповинной крови человека в зависимости от

сроков хранения

Срок хранения (ч) Доля живых клеток (%, Mim) Р

2-6 88,58±1,23

6-10 86,37±1,32 <0,05

10-18 82,25±1,48 >0,05

>24 78,44±1,28 >0,01

Таким образом, максимально только до 10 часов хранения убыль биологически активных клеточных элементов нативной пуповинной крови человека является статистически недостоверной и ею можно пренебречь.

Установлено, что объем получаемой пуповинной крови прямо пропорционально зависит от массы новорожденного.

Зафиксировано наличие врожденной стерильности нативной пуповинной крови человека, т.к. в 87% случаев забора крови отсутствал рост колоний в чашках Петри с 5% кровяным агаром при +37°С через 24 часа.

Установлено, что в криоконсервированной пуповинной крови человека на 7 сутки хранения содержится в 2,7 раза меньше жизнеспособных клеточных элементов по сравнению с нативной пуповинной кровью (0,42±0,57х109 и 1,13±0,57х109 соответственно, Р<0,01).

Морфологическая характеристика используемых методов лечения ожогов

кожи

У крыс, получавших лечение ожогов препаратом «10% линимент синтомицина» (Рис.1) по сравнению с животными, не получавшими никакого лечения (контрольными) (Рис.2), через 3 суток после ожоговой травмы на поверхности ран имелись остатки струпа в виде фиброзно-лейкоцитарного слоя, под которым располагалась грануляционная ткань с упорядоченным ходом слабофуксинофильных коллагеновых волокон.

у:.

Рис.1. Ожоговая рана крысы, получавшей лечение 10% линиментом синтомицина, через 3 суток после термического воздействия

■■. Ш

, &

' у...... - ..............."I

7 С2 ■

' ■ 1 ' А

Рис.2. Ожоговая рана крысы, не получавшей лечения, через 3 суток после термического

воздействия

У животных, которым проводились аппликации криоконсервированной пуповинной кровью человека (Рис.3), через 3 суток после ожога наблюдалась слабовыраженная диффузная инфильтрация грануляционной ткани раны лимфоидными и гистиоцитарными элементами. Грануляционная ткань заживающей ожоговой раны характеризовалась преобладанием клеточных элементов над коллагеновыми волокнами.

'С

Рис.3, Ожоговая рана крысы, получавшей лечение криоконсервированной пуповинной кровью, через 3 суток после термического воздействия У крыс, получавших аппликации нативной пуповинной кровью человека (Рис.4), уже через 3 суток после ожога было отмечено, что лучше сохранялись

жизнеспособные эпителиальные элементы кожи на фоне высокой плотности новообразованных сосудов и появления коллагеновых волокон; эпидермис был более сформирован за счет регенерирующих клеток базального слоя, отмечалось увеличение количества клеток шиповатого слоя.

Рис.4. Ожоговая рана крысы, получавшей лечение нативной пуповинной кровью, через 3 суток после термического воздействия В участках без базальной мембраны также отмечался рост эпидермального слоя различной степени выраженности.

Применение нативной пуповинной крови статистически достоверно (Р<0,05) сократило размер раны уже на второй день эксперимента. Примененный противовоспалительный препарат «10% линимент синтомицина» в дозе 1 мл достоверно не влиял на величину ожога у крыс в начальный период (1-2 сутки) ожоговой травмы.

На протяжении следующего за 5 сутками времени после нанесения ожога его площадь у животных подопытных групп, получавших лечение криоконсервированной пуповинной кровью человека, была достоверно меньше, чем у контрольных крыс, не получавших никакого лечения.

Следует отметить, что наибольшие различия с контролем при этом были зарегистрированы у крыс, получавших аппликации нативной пуповинной крови (Рис.5, Табл.2).

4,5

время после ожога (сут.) н Контроль о 1 о% линимент синтомицина

Ыкриоконсерв. пуповимная кровь впуповинная кровь

Рис.5. Временная динамика площадей ожоговых ран 11

Таблица 2

Динамика изменений площади жоговых ран крыс при лечении различными _препаратами (М±т, см2)_

Способ лечения Срок наблюдения (сут.)

1 2 5 7 10

Контроль 4,0±0,3 3,8±0,3 3,3±0,3 3,2±0,2 2,8±02

Нативная пуповинная кровь 4,0±0,3 3,3±0,3 2,0±0,1 1,3±0,2 1,0±0,2

«10% линимент синтомицина» 4,0±0,3 3,7±0,2 2,7±0,2 2,4±0,3 2,2±0,2

Криоконеервированная пуповинная кровь 4,0±0,3 3,5±0,3 2,3±0,2 2,1 ±0,2 1,5±0,4

Установлено, что скорость репаративной регенерации ожоговой раны прямо пропорционально зависит от её площади, то есть чем меньше площадь раны, тем быстрее скорость эпителизации (Табл.3).

Таблица 3

Способ лечения Срок наблюдения (сут.)

1 2 5 7 10

Контроль 0 2 8 10 16

Нативная пуповинная кровь 0 8 25 33 37

«10% линимент синтомицина» 0 3 16 20 22

Криоконеервированная пуповинная кровь 0 6 21 23 43

В отдаленные периоды наблюдения — на 7-10 сутки отмечалось ускоренное по сравнению с контролем заживление ожогов у крыс, получавших лечение нативной пуповинной кровью. Медленнее всего протекала регенерация ожоговой раны у крыс, получавших лечение препаратом сравнения - «10% линимент синтомицина».

При микроскопическом исследовании кожи в месте ожога у контрольных крыс на 7 сутки после нанесения ожоговой травмы отмечался выраженный отек всех слоев дермы, воспалительная клеточная инфильтрация, распространенный очаговый некроз всех слоев кожи, спазм мелких сосудов и их сдавливание экссудатом. Выявлялись места отторжения струпа и нагноения, отсутствие верхних слоев кожи (Рис.6 а, б, в)

К'чШЕШ* ШНЫ.- 1*» иг ивш»

Рис.6. Микрофотографии препаратов кожи в месте ожоговой раны у крыс, не получавших лечения, на 7 сутки после термического воздействия. Гематоксилин-эозин. Ув.об.20, ок.10.

На 7 сутки после термической травмы на фоне терапии препаратом «10% синтомициновая эмульсия» ожоговая рана покрыта кровяным струпом. Отмечается местная воспалительная инфильтрация, развитие молодой грануляционной ткани и новообразование капилляров. Наблюдалось повреждение шиловидного и базального слоев покровного эпителия. Отмечались признаки повреждения луковиц волосяных фолликулов, экзокринных и апокринных желез (Рис.7, а, б, в, г).

:Ч

Щ ! .

1*4 ;»

■

1 #1/1!

Д» №..

Рис.7. Микрофотографии препаратов кожи в месте ожоговой раны у крыс, получавших лечении 10% линиментом синтомицина, на 7 сутки после термического воздействия.

Гематоксилин-эозин. Ув.об.20, окЮ.

После терапии ожоговой раны аппликациями нативной пуповинной кровью на 7 сутки идет новообразование сосудов, рана приобретает розовый цвет, наблюдается значительное уменьшение воспалительной инфильтрации.

Морфологическая картина заживления раневых дефектов у крыс при лечении нативной пуповинной кровью на 10 сутки после нанесения ожога существенно отличалась от картины, описанной выше в контрольной группе крыс. У многих крыс отмечалась эпителизация ран. В грануляционной ткани выявлялось умеренное количество тонкостенных сосудов. Отмечалось достаточное число пикринофильных коллагеновых волокон. Наблюдалась диффузная и слабовыраженная инфильтрация грануляционной ткани (Рис.8, а, б, в, г).

- :Г Т' .....V ............

' , 1 .............

43.

ЩЛ *ц

Шт "Шш

у !

ш!

а б в г

Рис.8. Микрофотографии препаратов кожи в месте ожоговой раны у крыс, получавших лечении нативной пуповинной кровью человека, на 7 сутки после термического воздействия. Гематоксилин-эозин. Ув.об.20, окЮ.

Морфологическая картина при лечении аппликациями криоконсервированной пуповинной кровью человека сходна с предыдущим случаем. Однако, выраженность благоприятных для репарации ожоговой раны структурных признаков заметно слабее. В частности, количество

Рис.9. Микрофотографии препаратов кожи в месте ожоговой раны у крыс, получавших лечение криоконсервированной пуповинной кровью человека, на 7 сутки после термического воздействия. Гематоксилин-эозин. Ув.об.20, ок.10.

В мазках-отпечатках с поверхности ожоговой раны на 7 сутки обнаруживали уменьшение количества нейтрофилов, но относительное увеличение лимфоцитов, юных фибробластов и полибластов. Содержание макрофагов в ране и их фагоцитарная активность у крыс с терапией нативной пуповинной кровью человека был достоверно выше, чем в контрольной группе.

На Рис.10 представлен клеточный состав на 7 сутки эксперимента мазков отпечатков из ожоговых ран без лечения (розовые столбики) и в условиях местной терапии нативной пуповинной кровью человека. На данном рисунке цифрами обозначены: 1-эндотелиоциты, 2-нейтрофилы, 3-эозинофилы, 4-большие лимфоциты, 5-лимфоциты, 6-гемопоэтические стволовые клетки, 7-юные фибробласты и 8-плазмоциты.

О Контроль ЕЭ Пупов инная кровь

Рис. Ю.Содержание клеток в мазках-отпечатках из ран на 7 сутки при ожогах без терапии и с лечением нативной пуповинной кровью человека

Одной из причин более быстрого заживления ожоговых ран при использовании аппликаций нативной пуповинной крови человека является ее стимулирующее влияние на клеточную пролиферацию в эпителии кожи, на что косвенно указывают результаты измерения толщины росткового слоя эпидермиса в краях эпителизации ожоговых ран крыс, которые отражены в таблице 4. Вероятность различий с показателями в контрольных группах животных составила 99,95%.

Таблица 4

Средняя толщина росткового слоя эпидермиса в краяхэпителизации ожоговых ран крыс

через 7 суток после начала эксперимента (М±т, мкм)

Способ лечения Средняя толщина росткового слоя

Контроль 23,3 ±0,2

Нативная пуповинная кровь 36,9 ±0,3

«10% линимент синтомицина» 30,6 ±0,2

Криоконсервированная пуповинная кровь 33,8 ± 0,4

Так, уже через неделю после начала эксперимента у животных без воздействия и при аппликациях нативной пуповинной крови этот показатель составил соответственно 23,3±0,2 мкм и 36,9±0,3 мкм. Толщина росткового слоя эпидермиса после использования мази «10% линимент синтомицина» в этот же период наблюдения составила 30,б±0,2 мкм, а после лечения аппликациями криоконсервированной пуповинной кровью - 33,8±0,4 мкм. Вероятность различий с показателями в контрольных группах животных составила 99,5%.

Результаты анализа клеточного состава дермы под раневой поверхностью через неделю после нанесения ран коррелируют с указанными выше особенностями течения раневого процесса при использовании разных аппликаций.

Так, в сравнении с животными контрольных групп, суммарное число клеточных элементов в дерме, подсчитанное на поле зрения микроскопа, значимо снижается при аппликации пуповинной крови. При этом наблюдается отчетливо выраженный сдвиг в сторону клеток фибробластического ряда, что в совокупности свидетельствует о более быстром разрешении в этих условиях воспалительного процесса, развивающегося в месте ожога.

Примечательно, что у животных контрольной группы в течение первых 10 суток имелись клинические признаки интоксикации: снижение аппетита, веса и двигательной активности. При терапии и нативной, и криоконсервированной пуповинной кровью человека даже в течение первых суток клинические признаки интоксикации были умеренными и исчезали полностью к 6-8 суткам наблюдения.

Морфо-функциональная характеристика используемых методов лечения

ожогов кожи

Анализ гематологических исследований экспериментальных животных показал, что наиболее высокий и статистически достоверно отличающийся от контроля уровень гемоглобина периферической крови наблюдается у крыс, лечившихся аппликациями пуповинной крови человека. В остальных экспериментальных группах данный показатель незначительно и статистически недостоверно отличается от значений у животных, не получавших лечения (Табл. 5, * - Р<0,05 по сравнению с контролем).

Таблица 5

Гематологические показатели через 7 суток после ожоговой травмы

Способ лечения Эритроциты (шт./мкд.) ПГЭ (%) Гемоглобин (г/л)

Контроль 7,8х10Р 10 23,7

Нативная пуповинная кровь 8,8x1 * 6* 32,2*

«10% линимент синтомицина» 8,2x10? 8 25,3

Криоконсервированная пуповинная кровь 8,5х1СР 7* 26,7

Изучение перекисного гемолиза эритроцитов в эксперименте показало, что чувствительность последних к перекисной провокации зависит от метода лечения. Нелеченный термический ожог способствует наиболее полному гемолизу эритроцитов (степень гемолиза в среднем 10 %).

Лечение ожогов «синтомициновой эмульсией» вызывает средний гемолиз (степень гемолиза в среднем 8%, Р>0,05), при терапии нативной пуповинной кровью и криоконсервированной пуповинной кровью наблюдался частичный гемолиз (степень гемолиза в среднем 6% и 7% соответственно, Р<0,05).

Термический ожог кожи вызывает уменьшение количества эритроцитов периферической крови крыс. Установлено, что при лечении ожогов этот показатель увеличивается, но в различной степени в зависимости от способа лечения.

Только лечение ожогов аппликациями нативной пуповинной крови человека делает разницу средних арифметических содержания гемоглобина в периферической крови нелеченных и леченных животных статистически достоверной (Р<0,05).

Содержание ацилгидроперекисей в плазме крови экспериментальных животных через 7 суток после ожога при различных способах лечения представлено в Табл.6 и Рис.11.

Таблица 6

Содержание ацилгидроперекисей в плазме крови экспериментальных животных ври

Способ лечения М±т

Контроль 5,3±0,06

Нативная пуповинная кровь 4,2±0,08

«10% линимент синтомицина» 5,0±0,09

Криоконсервированная пуповинная кровь 4,8±0,07

Отмечено, что только лишь при лечении ожоговых ран аппликациями нативной пуповинной крови и криоконсервированной пуповинной крови человека отмечается статистически достоверное (Р<0,05) снижение уровня ацилгидроперекисей в плазме крови по сравнению со случаем отсуствия

В Контроль 0 пуповинная кровь

□ 10% ленимент синтомицина И Криоконсерв. пуповинная кровь

Рис.13. Содержание ацилгидроперекисей в плазме крови белых крыс при различных способах лечения ожогов Результаты изучения ПОЛ по содержанию в печени крыс малонового диальдегида на 7 сутки после ожоговой травмы и использования изучаемых препаратов показали (Табл.7), что локальный ожог кожи вызывает значительную, статистически высокодостоверную (Р<0,01) интенсификацию перекисного окисления липидов в печени экспериментальных животных. Как и в вышеизложенных исследованиях, местное применение нативной и криоконсервированной пуповинной крови человека способствует достоверной нормализации этого процесса (Р<0,01 и Р<0,05 соответственно). В случае использования 10% линимента синтомицина подобного статистически достоверного эффекта не наблюдается (Р>0,05).

Таблица 7

Содержание малонового диальдегида в печен! животных различных _экспериментальных групп (нМоль/мг.) _

Способ лечения Контроль Пуповинная кровь «10% линимент синтомицина» Криоконсерв. пуповинная кровь

Виды ПОЛ ....... _............... спонтанное аскорбатзависимое эошгохои о о в §3 X о 8 аскорбатзависимое исходное спонтанное о о 3 о к ш Щ ё (О о 8 сз исходное о о В | о о о а ё 0 1 1 <§ сГ СО исходное

8,1 35,1 1,6 7,7 50,3 1,3 13,2 56,6 1,8 8,7 24,3 1,6

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Ожог, а если говорить более точно, ожоговая болезнь, представляет собой не только, да и не столько местный патологический процесс, а страдание, несомненно, захватывающее организм в целом. Поэтому наше исследование было направлено и на изучение локальных изменений структуры кожи после воздействия термического фактора, и на исследование в этом случае некоторых гомеостатических механизмов. Данная работа преследовала также цель дать сравнительную оценку эффективности новых методов лечения ожогов кожи нативной, а также криоконсервированной пуповинной кровью человека по сравнению с классическим методом лечения таких травм 10% линиментом синтомицина.

Мы исходили из представления о главенствующей роли в репаративном послеожоговом процессе биологически активных клеточных элементов пуповинной крови по сравнению с неактивными. Было выявлено, что на количественное соотношение биологически активных (живых) и неактивных (мертвых) клеток пуповинной крови человека влияют время хранения и объем собранной крови.

Одним из побочных, но практически важных результатов нашей работы является установление того факта, что объем получаемой пуповинной крови находится в прямопропорциональной зависимости от массы новорожденного.

Также весьма интересным является выявление феномена, впрочем, требующего дальнейших исследований, свидетельствующего о прямопропорциональной зависимости количества биологически активных (живых) клеточных элементов нативной пуповинной крови человека от её получаемого объема.

Продемонстрировано наличие врожденной стерильности нативной пуповинной крови человека, что весьма практически важно, т.к. избавляет от необходимости проводить её стерилизацию, которая неизбежно ухудшила бы репаративные свойства. Наблюдаемую в незначительном числе случаев микробную обсемененность нативной пуповинной крови вполне можно объяснить недостатками техники её забора.

Включение в задачи нашего исследования изучения метода лечения ожогов кожи криоконсервированной пуповинной кровью человека объясняется чрезвычайной практической значимостью его в условиях возможного дефицита нативной пуповинной крови. Было установлено, что, хотя на 7 сутки криоконсервации содержание жизнеспособных клеточных элементов в крови уменьшается почти в 3 раза, терапевтический эффект остается на приемлемом уровне и превосходит классический метод.

Гистологическое исследование срезов кожи межлопаточной области спины в месте ожоговой травмы подтверждает правильность суждений в отношении большего терапевтического эффекта со стороны пуповинной крови по сравнению с лечением классическим препаратом сравнения. В частности, толщина росткового слоя эпидермиса в зоне эпителизации раневой поверхности

достоверно выше при лечении нативной и криоконсервированной пуповинной кровью.

Ускорение темпов заживления ожоговых ран под влиянием терапии пуповинной кровью достигается за счет ослабления выраженности деструктивно-воспалительной фазы раневого процесса и активизации пролиферативно-репаративной фазы.

Тяжелая термическая травма сопровождается развитием интоксикации и кровь, в первую очередь, подвергается действию токсических веществ, возникших в очаге поражения.

Исследование таких основополагающих гематологических показателей, как содержание эритроцитов, гемоглобина и перекисной резистентности эритроцитов свидетельствует, во-первых, о значительном поражении системы крови под воздействием местного действия термического фактора и, во-вторых, о наибольшем нормализующем влиянии на данные параметры гомеостаза противоожогового применения нативной пуповинной крови человека. Использование криоконсервированной крови в этом плане также эффективно и превосходит по действенности классический метод.

В патогенезе ожоговой токсемии исключительно важным звеном является нарушение функций печени, поскольку печень является главным детоксицирующим органом. Известно, что сразу после термической травмы печень подвергается влиянию токсических веществ на фоне резко сниженной ее антитоксической функции.

Обращает на себя внимание влияние местного ожога кожи, а затем его терапии или её отсуствия на окислительно-восстановительный баланс организма, который мы оценивали по содержанию ацилгидроперекисей в плазме крови экспериментальных животных и концентрации малонового диальдегида в их печени.

Ожог, даже местный, смещает окислительно-восстановительный баланс организма таким образом, что в крови и печени повышается содержание гидроперекисей и интенсифицируются процессы перекисного окисления липидов. Адекватная эффективная терапия ожогов, а в нашем случае это применение пуповинной крови человека, способствует нормализации этих механизмов и нейтрализует нарушения метаболизма. Анализируя перечисленные методы лечения ожоговых поражений кожи, мы выявили особую необходимость внедрения разработанного нами метода терапии ожоговых поражений кожи. Суть способа лечения заключается в том, что на сухую ожоговую поверхность наносится аппликация небольшого количества пуповинной крови человека. Необходимо соблюдать стерильные условия и режим ведения терапии.

Преимущества разработки в том, что новый метод местного и общего лечения больных с ожоговой травмой путем трансплантации на раневую поверхность компонентов пуповинной крови отменяет риски внутривенной и внутримышечной гемотрансплантации и способствует улучшению результатов лечения.

Терапию биологически активными компонентами пуповинной крови человека можно осуществлять как самостоятельно в виде аппликаций или в составе мягких лекарственных средств (линименты или мази), так и в дополнение к основным традиционным методам лечения. Это объясняется натуральностью состава и отсутствием побочных эффектов пуповинной крови, а также стимулирующим ее влиянием на организм.

Методика лечения термических повреждений кожи пуповинной кровью отличается дешевизной, доступностью получения, простотой выполнения и отсутствием рискованных моментов.

Пуповинная кровь человека обладает целым рядом терапевтических свойств, среди которых и восстановление кожи после различных повреждений (Рогга1а Ь.Б., 2001). Она имеет уникальный клеточный состав и биологически активные компоненты, которые помогают применять такую кровь как самостоятельно в виде аппликаций, так и совместно с другими лекарственными средствами, как дополнение к лечению.

Особенно важно подчеркнуть, что пуповинную кровь человека можно замораживать и хранить долгое время. При этом в большинстве случаев экспериментов сохраняется ее ранозаживляющая способность.

Разработка условий и режима хранения пуповинной крови требует дальнейших экспериментальных исследований.

Это объясняется особой актуальностью ее использования при массовых случаях поражений кожи.

Таким образом, можно отметить явное преимущество нативной пуповинной крови как стимулятора репарации термически поврежденной кожи, что позволяет её считать эффективным альтернативным методом лечения ожоговых травм.

ВЫВОДЫ

1. Разработана методика использования пуповинной крови человека, как нативной, так и криоконсервированной, для лечения ожогов кожи, отличающаяся безопасностью, эффективностью и простотой выполнения.

2. Местный ожог кожи крысы вызывает комплекс выраженных морфологических и функциональных реакций, как локально, так и на уровне целостного организма, которые значительно нарушают его клеточный и гуморальный гомеостаз.

3. Сравнительная оценка процессов репарации ожогов кожи крыс при различных видах лечения выявила значительные преимущества нативной пуповинной крови человека, которые проявляются и непосредственно в месте ожога и на уровне целостного организма.

4. Криоконсервация пуповинной крови в выбранных условиях снижает, но не устраняет её противоожоговую активность.

5. Сравнительный анализ биохимических показателей периферической крови и печени у крыс контрольной и опытных групп показал, что воздействие

пуповинной кровью способствует быстрой нормализации гемограммы в целом, нормализует перекисное окисление липидов в печени, активизирует иммунный ответ, что, несомненно, можно отнести к хорошим прогностическим признакам при лечении кожных ожоговых ран.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ажикова, А.К. Технология выделения стволовых клеток пуповинной крови и перспективы их криосохранения [Текст] // А.К.Имашева, М.В.Лазько Естественные науки, Астрахань: Издательский дом «Астраханский университет». № 1-2,2006.

2. Ажикова, А.К. Особенности регенераторных процессов кожи после термических ожогов [Текст] // А.К.Имашева, М.В.Лазько Успехи современного естествознания ISSN 1681-7494, Москва, № 7,2008.

3. Ажикова, А.К. Использование пуповинной крови для восстановления кожи после термической травмы [Текст] // А.К.Имашева, М.ВЛазько Естественные науки, Астрахань, № 4 (25). 2008, ВАК

4. Ажикова, А.К. Терапевтический эффект использования кедрового масла при ожоговой травме [Текст] // А.К.Имашева, М.ВЛазько, А.С.Ажиков Естественные науки, Астрахань, № 4 (25). 2008

5. Ажикова, А.К. Разработка биологического стимулятора на основе пуповинной крови для интенсификации репарации кожи [Текст] //А.К.Ажикова, А.С.Ажиков, М.В.Лазько Успехи современного естествознания, ISSN 16817494, Москва, № 2,2009 г.

6. Ажикова, А.К. Перспективы создания банка пуповинной крови [Текст] //А.К.Ажикова, А.С.Ажиков, М.ВЛазько. Материалы IV международной конференции "Фундаментальные исследования", Доминиканская республика 12-22 марта 2009 г. Журналы РАЕ "Фундаментальные исследования" ISSN 1812-7339 или "Современные наукоемкие технологии" ISSN 1812-7320.

7. Ажикова, А.К. Study of white rats skin accorfmg to their sex [Текст] Материалы IV научной международной конференции «Проблемы международной интеграции национальных образовательных стандартов», Париж-Лондон, 20-28 апреля 2009 г. Журнал "European journal of natural history"

8. Ажикова, А.К. Сбор и хранение пуповинной крови. Определение условий и срока хранения. Изучение биологических свойств пуповинной крови до и после хранения [Текст]: отчет о НИР (промежуточ.) / Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере; рук. Лазько М.В.- Астрахань, 2009 - 9 с. - Исполн.: Ажикова А.К. - Библиогр.: с. 6-7. - № ГР 01200956788. - Инв. №. 6550 гк/н.

9. Ажикова, А.К. Микробиологический и биохимический анализ пуповинной крови. Определение наличия биологически активных клеток в пуповинной крови [Текст]: отчет о НИР (промежуточ.) / Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере; рук. Лазько

М.В.- Астрахань, 2009 - 8 с. - Исполн.: Ажикова А.К. - Библиогр.: с. 5-7. - № ГР 01200956788. - Инв. №. 6550 гк/н.

10. Ажикова, А.К. Исследования по определению количества эритроцитов, лейкоцитов, клеток-предшественников в пуповинной крови [Текст]: отчет о НИР (промежуточ.) / Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере; рук. Лазько М.В.- Астрахань, 2009 -7 с. - Исполн.: Ажикова А.К. - Библиогр.: с. 4-6. - № ГР 01200956788. - Инв. №. 6550 гк/н.

11. Ажикова, А.К. Изучение биологической активности компонентов пуповинной крови на экспериментальной модели повреждения кожи [Текст]: отчет о НИР (промежуточ.) / Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере; рук. Лазько М.В.- Астрахань, 2009 -7 с. - Исполн.: Ажикова А.К. - Библиогр.: с. 6-7. - № ГР 01200956788. - Инв. №. 6550 гк/н.

12. Ажикова, А.К. Биохимическое исследование организма крыс в норме, после термического ожога и лечения поврежденной кожи стимулятором регенерации кожи, препаратом сравнения и концентратом пуповинной крови [Текст]: отчет о НИР (промежуточ.) / Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере; рук. Лазько М.В.- Астрахань, 2009 -9 с. - Исполн.: Ажикова А.К. - Библиогр.: с. 6-9. - № ГР 01200956788. - Инв. №. 6550 гк/н.

13. Ажикова, А.К. Гистологическое исследование поврежденной кожи после действия аппликаций концентрата пуповинной крови, препарата сравнения и биостимулятора [Текст]: отчет о НИР (промежуточ.) / Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере; рук. Лазько М.В.- Астрахань, 2010 -11 с. - Исполн.: Ажикова А.К. - Библиогр.: с. 9-11. -№ ГР 01200956788. - Инв. №. 6550 гк/н.

Уч.-изд. л. 1,4. Усл. печ. л. 1,3. Заказ № 2168. Тираж 100 экз.

Оттиражировано в Издательском доме «Астраханский университет» 414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 20 Тел. (8512) 48-53-47 (отдел маркетинга), 48-53-45 (магазин); тел. 48-53-44, тел./факс (8512) 48-53-46 E-mail: asupress@yandex.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ажикова, Альфия Кадыровна

I Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Морфофункциональные особенности строения кожи человека

1.1.1. Структура кожи в норме 13* |

1.1.2. Структура кожи при термических воздействиях 32 j

1.2 . Топографоанатомические особенности кожи человека 4 2 j

1.3. Регенерация кожи

1.4. Морфогенетические аспекты регенерации кожи

1.5. Методы лечения ожогов

1.6. Методы и особенности применения пуповинной крови 62(

ГЛАВА II МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Планирование и организация эксперимента

2.2. Подготовка пуповинной крови человека для лечения ожогов кожи

2.3. Методы исследования

ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Отработка методики применения пуповинной крови человека для лечения ожогов кожи

3.2. Морфологическая характеристика используемых методов лечения ожогов кожи 8f

3.3. Морфо-функциональная характеристика используемых методов лечения ожогов кожи 1 -1—

Введение Диссертация по биологии, на тему "Послеожоговая репарация кожи при воздействии компонентов пуповинной крови человека"

Формируя общий покров организма человека, кожа выполняет разнообразные функции. Она обеспечивает взаимодействие организма с внешней средой, образует связи практически со всеми системами органов - нервной, сердечно-сосудистой, эндокринной, пищеварительной, выделительной, иммунной защиты, и поэтому даже по внешнему виду кожи всегда можно сделать первые выводы о состоянии здоровья человека (Калантаевская К.А., 2000).

Ожоговые поражения кожи стали в современном мире одним из наиболее социально значимых и распространенных типов травматических повреждений у человека (Азолов В.В., Жегалов В.А., Дмитриев Г.И., 1997).

В современном мире резко повысились частота и тяжесть термических поражений, а также возросла летальность среди пораженных огнем, которая в России достигла 3,3 % (Герасимова Л.И. с соавт., 2003), особенно среди детей раннего возраста (Будкевич Л.И., 1998) .

В последние годы для улучшения результатов лечения ожоговых ран и снижения травматичности хирургического лечения, снятия остроты дефицита донорского материала, стали осуществлять трансплантацию клеток кожи и биоинженерных конструкций с иммобилизованными клетками дермы (Расулов М.Ф. с соавт.,2005).

В связи с развитием учения о стволовых клетках (Фриденштейн А.Я.,1991) появилась возможность их успешного применения в практической медицине для 4 ускоренного закрытия ожоговых повреждений кожи, в частности, использования для этого мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток - стволовых клеток костного мозга (Викторов И.В., 2 001) . Источниками стволовых клеток могут также служить зародышевый материал и пуповинная кровь (Chunmeng S. et al.,2004).

Однако применение фетальных фибробластов имеет морально-этические ограничения и юридические проблемы забора и использования материала (Расулов М.Ф.,2007). Высокая себестоимость процедуры наращивания клеточной массы кератиноцитов и фибробластов в культуре, трудности получения костного мозга способствовали поиску альтернативного источника стволовых клеток -пуповинной крови (Шумаков В.И, Онищенко Н.А., 2009).

Пуповинная кровь (ПК) представляет особый интерес ввиду ее доступности, относительной легкости получения и безопасности для потенциального донора (Белоконева О.С., 2002). Она содержит в своем составе биологически активные компоненты, активирующие репаративно-пролиферативные процессы: витамины, гормоны, ферменты, белки. Весьма важно, что через активацию репаративно-пролиферативных процессов можно добиться снижения выраженности воспалительной реакции не только непосредственно в месте приложения активирующего усилия (Саидгалин Г.З., Салистый П.В.,Панова О.В. и др. 2000), но и в отдаленных органах и тканях, что является результатом существования реципрокных отношений между этими процессами гомеостаза (Воздвиженский С. И. с соавт. , 1999).

В литературе мы не обнаружили публикации, обосновывающие клинико-биологическую целесообразность применения пуповинной крови для лечения ожоговых больных. Возникла задача экспериментального исследования этой проблемы.

Проводя анализ современных публикаций, мы обратили внимание на то, что в арсенале средств современной комбустиологии практически отсутствуют препараты на основе пуповинной крови или методы терапии клеточными элементами пуповинной крови, направленно восстанавливающие репаративные процессы в поврежденных тканях и органах.

Таким образом, учитывая вышеизложенное, целью нашего исследования явилось сравнительное экспериментальное выявление особенностей послеожоговой репарации кожи крыс в условиях воздействия биологически активных компонентов пуповинной крови человека и при стандартном лечении.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

5. Оценить влияние препаратов на количественные изменения периферической крови белых крыс, на биохимические показатели перекисного окисления липидов в печени крыс после термической травмы.

Впервые установлена динамика изменений клеточного состава ожоговых ран при экспериментальной ожоговой травме в условиях воздействия пуповинной крови.

Разработан способ лечения раневых дефектов кожного покрова после термической травмы за счет использования биологически активных компонентов пуповинной крови человека (заявка на изобретение «Биологический стимулятор для интенсификации поврежденной кожи» авторы Ажикова А.К., Лазько М.В., регистрационный номер 2008151998 от 2 6.12.2008.).

Научно-практическая значимость работы. Результаты настоящего исследования демонстрируют преимущество использования пуповинной крови как альтернативного способа лечения ожоговых повреждений кожи. Внедрение способа лечения раневых дефектов кожного покрова после термических ожогов за счет использования пуповинной крови человека позволит оптимизировать течение репаративных процессов в ране и снизить риск формирования рубцов.

На основании экспериментальной части диссертации был выигран открытый конкурс № 2008-Н-0 67 Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере «Проведение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ по приоритетным направлениям развития науки и техники в рамках реализации Программы «СТАРТ-09»: Лот № 2. Проведение научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ по приоритетным направлениям развития науки и техники в области медицины, фармакологии, биотехнологии для медицины (Направление Н 2).

Подписан государственный контракт № 6550р/9141 от 21.01.2009 г. Тема НИОКР «Исследование репаративной возможности поврежденной кожи белых крыс в условиях воздействия биологически активных компонентов пуповинной крови человека». Результаты НИОКР зарегистрированы во Всероссийском Научно-техническом информационном центре (ВНТИЦ), работе присвоен регистрационный номер № 01200956788.

Внедрение результатов исследования

Разработанный открытый способ лечения ожогов, базирующийся на замене химического медикаментозного струпа биологическим, может активно применяться в медицинской практике. Преимущества способа заключаются в следующем. При воздействии пуповинной крови человека на обожженную поверхность отмечается отчетливый болеутоляющий эффект, образуется более тонкий струп, под ним быстро протекает эпителизация, рубцов почти не образуется.

Основные положения и выводы работы используются при обучении студентов, слушателей на кафедрах биотехнологии и биоэкологии, зооинженерии и морфологии животных Естественного института Астраханского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту:

1.Разработанная методика применения пуповинной крови человека для целей комбустиологии отличается безопасностью, эффективностью и простотой выполнения.

2. Раневой процесс как местно, так и на уровне организма при лечении дефектов кожного покрова после термического воздействия имеет более благоприятное течение при использовании пуповинной крови человека в сравнении с традиционным лечением 10%-ным линиментом синтомицина.

3. Пуповинная кровь проявляет качества индуктора пролиферационной активности эпителиальных и содинительнотканных элементов, приводящий к значительному сокращению продолжительности всех стадий раневого процесса.

4. Пуповинная кровь допускает криоконсервирование, приводящее, однако, к снижению репаративных свойств.

Апробация результатов исследования

Материалы диссертационного исследования на IV международной конференции "Фундаментальные

10 исследования" (Доминиканская республика, 2009), на IV научной международной конференции «Проблемы международной интеграции национальных образовательных стандартов», (Париж-Лондон, 2 009) .

Положения диссертации были доложены на заседаниях кафедр биотехнологии и биозкологии, зооинженерии и морфологии животных Естественного института

Астраханского государственного университета (Астрахань, апрель 2010).

Публикации по теме диссертации

По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, в т.ч. 1 статья в реферируемом журнале ВАК РФ, 1 статья опубликована в зарубежном издании.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Ажикова, Альфия Кадыровна

выводы

1.Разработана методика использования пуповинной крови человека, как нативной, так и криоконсервированной, для лечения ожогов кожи, отличающаяся безопасностью, эффективностью и простотой выполнения.

2.Местный ожог кожи крысы вызывает комплекс выраженных морфологических и функциональных реакций, как локально, так и на уровне целостного организма, которые значительно нарушают его клеточный и гуморальный гомеостаз.

3.Сравнительная оценка процессов репарации ожогов кожи крыс при различных видах лечения выявила значительные преимущества нативной пуповинной крови человека, которые проявляются и непосредственно в месте ожога и на уровне целостного организма.

4.Криоконсервация пуповинной крови в выбранных условиях снижает, но не устраняет ее противоожоговую активность.

5.Сравнительный анализ биохимических показателей периферической крови и печени у крыс контрольной и опытных групп показал, что воздействие пуповинной кровью способствует быстрой нормализации гемограммы в целом, нормализует перекисное окисление липидов в печени, активизирует иммунный ответ, что, несомненно, можно отнести к хорошим прогностическим признакам при лечении кожных ожоговых ран.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Поэтому наше исследование было направлено и на изучение локальных изменений структуры кожи после воздействия термического фактора, и на исследование в этом случае некоторых гомеостатических механизмов.

Данная работа преследовала также цель дать сравнительную оценку эффективности новых методов лечения ожогов кожи нативной, а также криоконсервированной пуповинной кровью человека по сравнению с классическим методом лечения таких травм 10% линиментом синтомицина.

В частности, определено, что после 10 часов хранения при -4С° количество жизнеспособных клеточных элементов в пуповинной крови человека резко и статистически достоверно снижается. Поэтому мы для лечебных целей и для криоконсервирования использовали только те образцы крови, которые хранились при данных условиях не более 8 часов.

Гистологическое исследование срезов кожи межлопаточной области спины в месте ожоговой травмы подтверждает правильность суждений в отношении большего

107 терапевтического эффекта со стороны пуповинной крови по сравнению с лечением классическим препаратом сравнения. В частности, толщина росткового слоя эпидермиса в зоне эпителизации раневой поверхности достоверно выше при лечении нативной и криоконсервированной пуповинной кровью.

Заживление ожоговых ран в данном случае сопровождается более быстрым темпом разрастания сосудистой сети и формирования грануляционной ткани, а также активизацией краевой эпителизации, что происходит на фоне устранения иммунной дисрегуляции в ране.

Обращает на себя внимание влияние местного ожога кожи, а затем его терапии или ее отсутствия на окислительно-восстановительный баланс организма, который мы оценивали по содержанию ацилгидроперекисей в плазме крови экспериментальных животных и концентрации малонового диальдегида в их печени.

Адекватная эффективная терапия ожогов, а в нашем случае это применение пуповинной крови человека, способствует нормализации этих механизмов и нейтрализует нарушения метаболизма.

Подводя итог обсуждению результатов, можно отметить явное преимущество нативной пуповинной крови как стимулятора репарации термически поврежденной кожи, что позволяет ее считать эффективным альтернативным методом лечения ожоговых травм.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ажикова, Альфия Кадыровна, Астрахань

1. Автандилов, Г. Г. Медицинская морфометрия Текст. Руководство / Г. Г. Автандилов - М.: Медицина, 1990. -384 С. - Библиогр.: с. 150-382.

2. Автандилов, Г. Г. Перспективы применения вероятностных принципов изучения проблем нормальной и патологической морфологии Текст. /Г. Г. Автандилов // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии.- 1977.- № 5.- С.5-13. -Библиогр.: с. 5-10.

3. Азолов, В.В. Термические поражения и их последствия: прошлое, настоящее и будущее Текст. / В. В. Азолов,

4. B.А.Жегалов В.А., Г.И.Дмитриев // Тез. докл.VI съезда травмотологов и ортопедов России, Н-Новгород, 1997.1. C. 53 Библиогр.: с. 53.

5. Андреева, Л.Ю. Стволовые гемопоэтические клетки в крови онкологических больных: экспрессия CD34 и колониеоб-разование Текст. / Л.Ю. Андреева, Н.Н. Тупицын, Г.Ш. Овумян и др.// Гематология и трансфузиология -1999.-№ 44 -С.З-б. Библиогр.: с. 4-5.

6. Барышев, Б.А. Влияние методов замораживания и размораживания плазмы крови на активность прокоагулянтов и антитромбина-III Текст. / Б.А. Барышев, Е.А. Селиванов, В.И. Колябинская и др.// Вестник хир. 2002. -№ 6.- С.55-56. - Библиогр.: с. 55.

7. Белоконева, О.С. Праматерь всех клеток (эмбриональная стволовая клетка) Текст. / О.С. Белоконева // Биология в школе. 2002.- №8. - С.18-21. - Библиогр.: с. 18-19.

8. Берлин, JI.Б. Морфология кожи после ожогов и свободной пересадки Текст. / Л.Б. Берлин // Л.: Медицина. -1986. 222 с. - Библиогр.: с. 100-120.

9. Блуда, В. П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза Текст. / В. П. Блуда, З.С. Баркаган, Е.Д. Гольдберг// Томск. 1980. - 136 с. - Библиогр.: с. 90-114 .

10. Бобова, Л.П, Кузнецов С.Л., Сапрыкин В. П. Гистофизио-логия крови и органов кроветворения и иммуногенеза Текст. (учебное пособие)/ Л. П. Бобова, С.Л. Кузнецов, В.П. Сапрыкин //- М.: Изд. «Новая волна» 2003. -156 с. - Библиогр.: с. 150-156.

11. Ю.Будкевич, Л.И. Современные методы хирургического лечения детей с тяжелой термической травмой Текст. : авто-реф. дис. .док.мед.наук. / И.Л. Будкевич // М. - 1998. - 39 с. - Библиогр.: с. 150-156.

12. Ведерникова, О.Л. Результаты лечения больных с тяжелой термической травмой Текст. / О. Л. Ведерникова, В. А.

13. Верхнев, Е.Н. Аганина// Тез. докл. VII Всерос. научно-практ. конф. по проблеме термических поражений. Челябинск, - 1999 - С. 12-13. - Библиогр.: с. 12.

14. Викторов, И. В. Стволовые клетки мозга млекопитающих: Биология стволовых клеток in vitro и in vivo Текст. / И.В.Викторов // Известия Ак.Наук. Серия Биологическая.-2001-№б -С.646-655. Библиогр.: с. 646-650.

15. Виноградова, Е.В. Региональные особенности архитектоники волокнистого каркаса дермы кожи человека Текст. / Е.В. Виноградова, И.Н. Михайлов // Архив анат. 1978. - т. LXXV, №. 7.- С.91-97. - Библиогр.: с. 92-95.

16. Вихриев, Б. С. Ожоги Текст./ Б.С.Вихриев, В.М. Бурмистров// Руководство для врачей, 2-е изд., перераб. и доп. JI.: Медицина -1986. - 272 с. - Библиогр.: с. 63-272 .

17. Владимиров, Ю. А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах Текст. / Ю. А. Владимиров, А. И. Арчаков. М.: Наука, 1972. - 252 с. - Библиогр.: с. 120-252.

18. Владимирская, Е.Б. Биологические основы и перспективы терапии стволовыми клетками Текст. / Е.Б. Владимирская, С. А. Майорова, С. А. Румянцев, А. Г. Румянцев. М.: ИД МЕДПРАКТИКА - М. - 2005. - 393 с. -Библиогр.: с. 12-35.

19. Герасимова, JI. И. Термические и радиационные ожоги Текст. /Л.И. Герасимова, В. Н.Жижин, Е. В. Кижаев и др.//- М. : Медицина, 1996. 244 с. - Библиогр.: с. 150-164.

20. Глукман, Е. Заготовка и транспортировка пуповинной крови в Европе Текст. / В. Роха, К. Хастанг // Вест.службы крови России.- 1998.- № 4- С. 31- 37. -Библиогр.: с. 31-33.

21. Графова, Г. Я. Цитоархитектоника эпидермиса и эпидермально-пролиферативные единицы (ЭПЕ) Текст. / Г.Я. Графова // Арх. анат. 1982. - № 82(4) - С. 73-85. - Библиогр.: с. 73-75.

22. Графова, Г.Я. Гистоавторадиографическое исследование эпителия кожи в зонах огнестрельной раны Текст. / Г.Я. Графова // Гистогенез и регенерация тканей. СПб., 1995 - С. 7-8. - Библиогр.: с. 7.

23. Гришкевич, В. М. Руководство по реабилитации обожженных Текст. / В.М.Гришкевич, В.Ю. Мороз// М. : Медицина 1996 - С. 5-16. ~ Библиогр.: с. 72-77.

24. Данилов, Р.К. Регенерация кожи Текст. / Р.К. Данилов, Г.Я. Графова// Руководство по гистологии. Спб. : СпецЛит, 2001; 2: С. 45-52. Библиогр.: с. 45-48.

25. Дубинская, В. А. Кожа человека: влагообмен и старение Текст. / В.А. Дубинская, Е.В. Виноградова // Клинини-ческая геронтология.- 2000.- Т. 6, № 7-8. С.22-26. -Библиогр.: с. 25-26.

26. Иванова, Н.Т. Атлас клеток крови (сравнительная морфология и классификация форменных элементов крови рыб) / Н.Т. Иванова //М. Легкая и пищевая промышленность. -1982.- 184 с.

27. Калантаевскаял К.А. Морфология и физиология кожи человека Текст. / К.А. Калантаевская // Вопр. теор. и клин, медицины. Киев - Здоров'я - 2000- 2 67 с. -Библиогр.: с. 152-159.

28. Кассирский, Г. А. Клиническая гематология Текст. / Г.А.Кассирский, Г. А. Алексеев// М. 1970. - с. 156.

29. Катинас, Г. С. К методике анализа количественных показателей в цитологии Текст. /Г. С. Катинас, Ю. 3. Полонский // Цитология.- 1969.- №.3.- С. 399-403.

30. Катинас, Г. С. О нахождении стандартной ошибки среднего с учетом изменчивости признака в пределах организма Текст. / Г. С. Катинас, В. И. Булгак, Е. Н. Никифорова, К. М. Светикова // Арх. анат.гистол.и эмбриол.- 1969.- №.9. С. 97-104.

31. Козак, М.Ф. Биометрия Текст. / М.Ф.Козак // Учеб.пособие Астрахань: Изд-во Астраханского педагог.ин-та.-14 илл., 22 табл.- 1995,- 164 с. - Библиогр.: с. 12-22.

32. Кочетов, Т. А. Практическое руководство по энзимологии /Т. А. Кочетов. М. : Высшая школа, 1980. - 60 с.

33. Лакин, Г.Ф. Биометрия Текст. / Г.Ф. Лакин // Учеб.пособие для биолог.спец.вузов.- 3-е изд., перераб. и доп.- М.: Высшая школа, 1980.- 293 е., илл.

34. Малахов, С.Ф. Новые подходы к лечению тяжелых ожогов: трансплантация выращенных в культуре кератиноцитов Текст. / С.Ф. Малахов, Б.А.Парамонов, А.В.Емельянов и др.// Военно-медицинский журнал -1997. Т 318. -№ 9. -С.16-19. - Библиогр.: с. 19.

35. Матчин, Е. Н. Клинико-морфологическая оценка результатов комбинированной аутодермопластики с трансплантацией культивированных фибробластов у обожженных Текст. /

36. Е.Н.Матчин, А. А. Алексеев // Эл. версия журн. Комбу-стиология, 2000.

37. Машковский, М.А. Лекарственные средства Текст. / М.А. Машковский //Пособие для врачей. М.: Медицина 1993. -Т. 2. - С. 471- 472. - Библиогр.: с.472.

38. Ноздрачев, А.Д. Общий курс физиологии человека и животных Текст./А. Д. Ноздрачев, Ю.И. Баженов, И.А.Баранникова и др.// В 2 кн. Кн.2. Физиология висцеральных систем: Учеб. Для биол. и медиц. спец. вузов; Под ред.

39. A.Д.Ноздрачева. М.: Высш.Шк., 1991.- 528 е.: илл.

40. Ноздрин, В.И., Гистофармакологические исследования кожи (наш опыт) Текст. / В.И. Ноздрин, Т.А. Белоусова,

41. B.И.Альбанова, О.И. Лаврик // Москва: Изд. ЗАО «Ретино-иды», 2006 г. -376 е., 65 таблиц, 31 рис. Библиогр.: с. 8-89, 179-185.

42. Парамонов, Б. А. Ожоги Текст. / Б.А.Парамонов, О. Я.Порембский, В. Г. Яблонский // Руководство для врачей. СПб. - 2000. - 480 с. - Библиогр.: с.26-85.

43. Приказ Президента РФ «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» Текст. / Приказ РФ от 22 апреля 1985 г. № 535.

44. Расулов, М. Ф. Трансплантация мезенхимальных стромаль-ных клеток костного мозга для лечения термических ожогов кожи Текст. / М.Ф.Расулов// Автореф. дис. . докт. мед. наук. М. - 2007. - 4 6 с. - Библиогр.: с. 26-44.

45. Ронин, B.C. Руководство к практическим занятиям по методам клинических клинических лабораторных исследований Текст. / B.C. Ронин, Г.М. Старобинед // Учеб. пособие, 4-е изд., перераб. и доп. М. : Медицина- 1989. -320с.

46. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально биологических клиник (вивариев).- М.: МЗ СССР, 1973.-24 с.

47. Серов, В. В. Соединительная ткань: Функциональная морфология и общая патология) / В.В. Серов, А. Б.Шехтер // М. 1981. - С. 8-34.

48. Сологуб, В. К. Клиническое применение консервированных биопокрытий для ран и ожогов Текст. / В.К. Сологуб, Д. А. Донецкий, В.Я. Борисов, Г.Б. Яковлев, М.Г. Лагвилава// Бюлл. экспер. биол. и мед. 1990. - № 4.-С. 8.

49. Соболева, Э.Л. Стволовые клетки костного мозга и атеросклероз Текст. / Э.Л.Соболева, З.А.Габбасов // Природа.-2005.- №10 -с.36-39.

50. Сперанский, B.C. Органы чувств. Общий покров тела Текст. / Лекции по анатомии Саратов: Изд. Саратовского мед.ин-та, 1996. - 38 с.

51. Стальная, И. Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / И. Д. Стальная, Т. Т. Гаришвили // Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977. - С.66 - 68.

52. Туманов, В. П. Способ получения трансплантата из культивированных фибробластов человека для лечения обожженных Текст. / В.П.Туманов// Межд.симп."Новые методы лечения ожогов с использованием культивированных клеток кожи". Тула - 1996. - с.11.

53. Туманов, В. П. Использование культивированных фибробластов при лечении ожоговых ран/ В. П.Туманов, Е. В.Глущенко, С. С.Морозов, Д. С. Саркисов // Бюлл. зкспер. биол. и мед. 1990. - № 4. -С. 400-402. -Библиогр.: с.4 01-402.

54. Улумбеков, Э.Г. Кожа и ее производные Текст. / Э.Г.У-лумбеков, Ю.А. Челышев // В кн.: Гистология. М. : ГЭО-СТАР-МЕД, 2001. С.483-502.

55. Фриденштейн, А.Я. Стволовые остеогенные клетки костного мозга Текст. / А.Я.Фриденштейн // Онтогенез 1991. -т.22. - № 2 - С.189-197. - Библиогр.: с.189-192.

56. Хабриев, Р. У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ Текст. / Р.У.Хабриев // Под общей редакцией чл.-корр. РАМН проф. Р.У.Хабриева М.: Изд-во ЗАО «Шико» -2005 - 827 с.

57. Хрущев, Н.Г. Тканевые системы со стволовыми клетками Текст. / Н.Г.Хрущев // Онтогенез 1991- т.22, № 2, С. 118-123 .

58. Чертков, И.Л. Нормальное кроветворение: стволовая кроветворная клетка Текст. / И.Л. Чертков //

59. Гематология и трансфузиология.- 1993.- т. 38, № 4, С. 3-4. Библиогр.: с.4.

60. Чертков И.Л. Как обеспечивается поддержание кроветворной системы Текст. / И.Л. Чертков, Н.И. Дризе // Гематология и трансфузиология. 1998. - т. 43. - № 4. -С.3-8. - Библиогр.: с.4-7.

61. Шиффман, Ф.Д. Патофизиология кожи Текст. /Ф.Д. Шифф-ман // СПб.: Невский Диалект, 2000. 448 с. Библиогр.: с.150-158.

62. Шумаков, В. И. Биологические резервы клеток костного мозга и коррекция органных дисфункций Текст. /В. И. Шумаков, Н.А. Онищенко; под ред. Академика Шумакова В.И., профессора Онищенко Н.А // Москва: Лавр, 2009. - 308 с. - Библиогр.: с. 110-128.

63. Ai, G. The experimental study of bone marrow mesenchymal stem cells on the repair of skin wound combined with local radiation injury/ G.Ai, , Y.Su, G. Yan et al. // Zhonghua Yi Xue Za ZhL, 2002. V. 82, № 23. -P. 1632-1636.

64. Alitalo, K. Extracellular matrix proteins of human epidermal keratinocytes and feeder T3 cells/ K.Alitalo, , E. Kuismaren, R.Mullula et al. // J. Cell Biol., 1982. -V. 94. P. 409-505.

65. Badiavas, E. V. The potential of bone marrow cells to orchestrate homeostasis and healing in skin/ E. V. Ba-diavas // Blood Cells Mol. Dis, 2004. V. 32, JMb 1. -P. 21-23.

66. Badiavas, E. V., Participation of bone marrow derived cells in cutaneous wound healing/ E. V. Badiavas, M.Abedi, J.Butmarc et al. // J. Cell. Physiol., 2003. -V. 196, № 2. P. 245-250.

67. Brazelton, T.R. From Marrow to Brain: Expression of Neuronal Phenotypes in Adult Mice from Adult Bone Marrow-Derived Cells/ T.R. Brazelton, Rossi F.M. et al.//. 2000, Science, № 290: P. 1775-1779.

68. Chunmeng, S. Effects of dermal multipotent cell transplantation on skin wound healing / S. Chunmeng, C. Tianmin, S. Yongping et al. // J. Surg. Res., 2004. -V. 121, № 1. -P. 13-19.

69. Corradini, P., Reduced-intensity conditioning followed by allografting of gemalopoietic cells can produce clinical and molecular remissions in patients with poor-risk hematologic malignancies / P. Corradini,

70. С.Tarella, A. Olivieri et al.//Blood, 99 (1):2002 -P. 75-82.

71. Dantzer, D. Effect of radiation and cell implantation on wound healing in a rat model/ D. Dantzer, P.Ferguson, R. P. Hill et al. // J. Surg. Oncol., 2003. V. 83, № 3. -P. 185-190.

72. Deng, W., Engrafted bone marrow-derived flk- mesenchymal stem cells regenerate skin tissue/ W. Deng, Q.Han, L.Liao et al. // Tissue Eng., 2005. V. 11, № 1-2. -P. 110-119.

73. Detmar, M. L. Hypoxia regulates the expression of vascular permeability factor/ vascular endothelial growth factor (VPF/VEGF) and its receptors in human skin /М. L. Detmar F.Brown, B.Berse // J. Invest. DermatoL, 1997. -V. 108. P. 263-268.

74. Dorling, A. Prospects for xeno-grafting / A.Dorling, R. I.Lechler // Current Opinion in Immunol., 1994, V. 6, № 5. - P. 765-769.

75. Dormady, S. P. Immortalized multipotential mesenchymal cells and the hematopoietic microenvironment/ S. P. Dormady, O.Bashayan, R.Dougherty et al. // J. Hema-tother. Stem. Cell. Res., 2001. V. 10, № 1. - P. 125-140.

76. Egeland, T. Stem cell transplantation — more than bone marrow transplantation /Т. Egeland, E.Thorny// Nord Med., № 110 ( 12 ): 1995- P. 307-309.

77. Eridani, S. Cytokine effect on ex vivo expansion of haemopoietic stem cells from different human sources/ S.Eridani, U.Mazza, P.Massaro, M.L. Targia, A.T.Maio-lo, A.Mosca// Biotherapy. 11(4):1998 P. 291-296.

78. Good, R.A. Bone marrow transplamtation for immunodeficiencies and autoimmunities/ R.A. Good, T.Verjee // Biol. Blood Marrow Transplant., 7(3): 2001.- P. 123-135.

79. Gyger, M. Immunology of allogenesic peripheral blood mononuclear cells mobilized with granulocyte-colony stimulating factor/ M. Gyger, R.K. Stuart, С.Perreault// Bone Marrow Transplant.-2000.-26.-1-16.

80. Hansbrough, J.F. Burn wound closure with CAE & fibroblasts attached on to a collagen-glycosaminoglycan substrate / J.F. Hansbrough, S.T. Boyce et al.// JAMA 1989. Vol.262 N15 P.2125-2130.

81. Hardi, M.H. The secret life of the hair follicle/ M.H. Hardi //Trends Genet.,1992. Vol.8. -P.55-61.

82. Heuberger, A. Buchi Irreversible Katarakt als mogliche Nebenwirkung von Isotretinoin 1/ A. Heuberger, E.R.

83. Hardi Kim. Monatsbl. Augenheilkd. 1994. — Bd. 204, No.5. - P. 465 - 467.

84. Hilliges, M. Ultrastructural evidence for nerve fibers within all vital layers of the human epidermis/ M. Hilliges, L.X.Wang, O.Johansson // J. Invest. Dermatol. 1995. - Vol. 104, No.1. - P. 134- 137.

85. Hudson, D.L., CD44 is the major peanut lectin—binding glycoprotein of human epidermal keratinocytes and plays a role in intercellular adhesion / D.L. Hudson, J.Sle-man, F.M. Watt // J. Cell Scien. 1995. - Vol. 108, No.5. - p. 1959 - 1970.

86. Hunter, L. The proteins of living psoriatic epidermis/ L. Hunter, D. Skerrow // Biochem. Biophys. Acta. — 2001. Vol. No 714. P. 164- 169.

87. Iyengar, B. The hair follicle: a specialised UV receptor in the human skin?/ B. Iyengar//Biol. Signals Recept. 1998. - Vol. 7, No.3. - P. 188 - 194.

88. Jensen, B.K., The negligible systemic availability of retinoids with multiple and excessive topical application of isotretinoinO,05% gel (Isotrex) in patients with acne vulgaris / B.K. Jensen,L.A.Megann,

89. V.Kachevsky, T.J. Franz // J.Amer. Acad. Dermatol, — 1991. Vol. 24, No.3. - P. 425 -428.

90. Jullien, D. Mechanics and regulation of keratinocyte migration/ D. Jullien, Y.Sarret, C.Stamm et al. Med. Scien. 1993. -Vol.9, No.4. -P.403-411.

91. Jordan, C. The leukemia stem cells/ C. Jordan //-Hematology, 2004.- P.80-83.

92. Karamer, J. Embryonic stem cells-derived chondrogenet-ic differentiation in vitro activation by BMP-2 and ВМР-4/ J. Karamer, C.Hegert, K.Guan, A.Wobus, P.К Muller, J.Rohwedel//- Mech. Dev/-92.-2000- 193 p.

93. Kennedy, W.R. The innervation of human epidermis/ W.R. Kennedy, L. Wendelscha, G.J'ercrabb // J. Neurol. Scien. 1993. - Vol.115, No.2.-P.184- 190.

94. Юб.Корап, R. The use of retinoic acid to probe the relation between hyperproliferation-associated keratins and cell proliferation in normal and malignant epidermal cells/ R. Kopan, F.Fuchs // J. Cell Biol. 1989. -Vol. 109, No.1. - P. 295 -307.

95. Korge, B. Effect of retinoids on hyperproliferation-associated keratins Кб and K16 in cultured human ker-atinocytes: A quantitative analysis/ B. Korge, R.S-tadler, D.Mischke // J.Cell Physiol 2000, V. 120, N1, P. 70-106.

96. Majumdar, M.K. Isolation, characterization, and chon-drogenic potential of human bone marrow-derived multi-potential stromal cells/ M.K. Majumdar, V.Banks, D.P.Peluso, E.A.Morris// J. Cell Physiol 2000, V185, N1, P. 98-106.

97. Manitz, R. On the mathematical modeling of dermal and transdermal drug delivery/ R. Manitz, W.Lucht, K. Strehmel// J. Pharm. Sci. 1998. - Vol. 87, No. 7 . -P. 873- 879.

98. Masunaga, T. Desmoikin /AHNAK protein localizes to the non-desmosomal keratinocyte cell surface of human epidermis/ T. Masunaga, H.Shimizu, A.Ishiko et al.// J. Tnvest. Dermatol. 1995. - Vol. 104, No. 6. - P. 941 -945.

99. Megovern, U.B. Intracellular calcium as a second messenger following growth stimulation of human ker-atinocytes/ U.B. Megovern, K.T.Jones, G.R.Sharpe// Brit. J. Dermatol. 1995. - Vol.132, No. 6. - P. 892 -896.

100. Merritt, A.J. Suprabasal desmoglein 3 expression in the epidermis of transgenic mice results in hyperpro-liferation and abnormal differentiation/ A.J. Merritt, M.Y.Benika, W.Zhai et al.//J. Mol. Cell Biol. 2002. -Vol. 22, No.16. - P. 5846 - 5858.

101. Moll, I. Human Merkel cells — aspects of cell biology, distribution and functions/ I. Moll, M.Roessler, J.M.Brandner et al. // Eur. J. Cell Biol. 2005. -Vol. 84, No.2-3.- P. 259-271.

102. Moll, R. The catalog of human cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and culturedcells/ R. Moll, W.F. Werner, D.L. Schiller // Cell -1982. -Vol. 31, No.l.-P. 11-24.

103. Montagna, W. The structure and function of skin. Second edition/ W. Montagna // New-York-London: Academ. press, 2002.-454 p.

104. Morrison, S.J. Stem cell potential : can anything make aniting?/ S.J. Morrison // Curr.Biol/-ll-r.7.2001, .-P. 11-15.

105. Narisawa, Y. Apoptotic bulge of the terminal hair pocket-like structures of the follicles of the human scalp/ Y. Narisawa, K.Hashimoto, H.Kohda // J. Dermatol. Sci. 1997. -Vol. 14, No.1. - P.45-53.

106. Olszewski, W.L. Human keratinocyte stem cells survive for months in sodium chloride and can be successfully transplanted/ W.L. Olszewski, M.Moscicka, D.Zolich, Z.-Machowski// Transplant. Proc. -2005. Vol. 37, No. 1. - P. 525 - 526.

107. Panzenbuck, В. Giowth and differentiation of human stem cell factor/erythropoietindependent erythroid progenitor cells in vitro/ B. Panzenbuck, P.Bartunek, M.Y.Mapara, M.Zenke// Blood, 92 (10):1998.- P. 3658-3668.

108. Parkinson, E.K. Hemopoietic stem cell ingibitor (SCI/ MIP- 1-alpha) also inhibites clonogenic epidermal ker-atinocyte proliferation / E.K. Parkinson,G.J. Graham, P.Daubersies et al.// J. Invest. Dermat. — 1993. — Vol. 101, No.2. P. 113 -117.

109. Paus, R. Control of the hair cycle and hair diseases as cycling disorders/ R. Paus// Current opinion in Dermatol. 1996. - No.3. - P. 248-258.

110. Personelle, J. Injection of all-trans retinoic acid for treatment of thin wrindes/ J. Personelle, S.De-CampOS, R.Ruiz de 0. et al.// Aestetic Plast. Surg. — 1997. Vol. 21, No.3. - P. 196- 204.

111. Picardo, M., Characterization of cultured nail matrix cells/ M. Picardo, A.Tosti, C.Marchese et al.// J. Am. Acad. Dermatol. 1994. - Vol. 30. - No.3. - P. 434 -440.

112. Pittenger, M.F. Multilineage Potential of Adult Human Mesenchymal Stem Cells/ M.F. Pittenger, A.M.Mackay, S.С.Beck et. al.// Science , 1999, V.284, 2 april, P. 143-147.

113. Proskop, D.J. One strategy for cells and gene therapy: harnesing the power of adult stem cells to repair tissues/ D.J. Proskop, C.A.Gregory, J.L.Spees //.- Proc.-Nati Acad. Sci. USA-2003.-1917 P.

114. Rocha, V. Comparison of outcomes of unrelated bone marrow and umbilical cord blood transplants in children with acute leukemia/ V. Rocha, J.Cornish, E.L.Sievers,

115. A. Filipovich, R.Locatelli, C.Peters, M.Remberger et al. //. Blood. 97(10): 2001.- P. 2962-2971.

116. Rowley, S.D. Experiences of donors enrolled in a randomized study of allogenetic bone marrow or peripheral blood stem cell transplantation/ S.D. Rowley, G.Donaldson, K.Lilleby, W.I.Bensinger, F.R. Appelbaum // Blood, 97 (9): 2001- P. 2541-2548.

117. Seshi, B. Human Bone Marrow Stromal Cell: Coexpres-sion of Markers Specific for Multiple Mesenchymal Cell Lineages/ B. Seshi, S.Kumar, D.Sellers//Blood Cells, Molecules and Diseases , 2000, V.26, N.3, June, P. 234-246.

118. Smikodoub, A. Treatment of patients suffering from autoimmune intestinal diseeases with the use of fetal cell suspensions/ A. Smikodoub, V. Bushnera// Cell Transplantation, 8(2): 1999 P. 122-127.

119. Smikodoub, A. Treatment of patients with diabetes mel-litus complicated with diabetic glomerulosclerosis, chronic renal insufficiency by fetal stem cells/ A. Smikodoub, A.Novytskaja // Minimally Invasive Therapy-5 (1): 1997 P. 39-46.

120. Thaler, M. Comparafive studies of keratins isolated from psoriasis and atopic dermatitis/ M. Thaler, K.-Fukuyama, W.L.Epstein et al. // J. Invest. Dermatol. — 1980. -Vol. 75. P.158.

121. Teraki, Y. Apoptosis and the skin/ Y. Teraki, T.Shio-hara // Eur.J. Dermatol. 1999. - Vol. 9. - P. 413 -425.

122. Weber, J. M. Nosocomial infections in pediatric patients with burns/ J. M. Weber, R. L. Sheridan, M. S.

123. Pasternack et al. // Am. J. Infect. Control., 1997. № 25. - P. 195-201.

124. Werner, S., Large induction of keratinocyte growth factor expression in the dermis during wound healing/ S. Werner, K. G.Peters, M. T. Longaker et al.// Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1992. V. 89. P. 6896-6900.

125. Wilkinson, R. A. Effect of thermal injury with pseudo-moaas aeruginosa infection on pulmonary and systemic bacterial clearance/ R. A. Wilkinson, J. A. Fishman // J. Trauma, 1999. V. 47, № 5. - P. 912-917.

126. Wood, F. M. The use of cultured epithelial autograft in pediatric burn management/ F. M. Wood, M. L. Stoner// Abstracts book of first Interntional Congress Current Concepts in Pediatric Burn Care, 2006. P. 88-89.

127. Wickenhauser, C. Hematopoietic stem cells of the human. Function and morphology/ C. Wickenhauser, J.Thiele, X.Kummel, R.Fischer Pathology, 1995. № 16: P. 1-10.

128. Yohn, J.J. Cultured human keratinocytes synthesize and secrete endothelin/ J.J. Yohn, J.G.Morelli, S.J. Walchak et al.// J. Invest. Dermatol. -1993.-Vol. 100, No.1. -P.23-2 6.

129. Zelickson, A.S. Ultrastructural changes in open comedones following treatment of cystic acne with isotretinoin/ A.S. Zelickson, J.S.Strauss, J. Mottaz// Am. J. Dermatopathol. 1985. Vol. 7 (Jun). P. 241-244.

130. Zhu, G. R. Human bone marrow mesenchymal stem cells express multiple hematopoietic growth factors/ G. R. Zhu, X. У.Zhou, H.Lu et al. // Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi., 2003. V. 11, № 2. P. 115-119.

Информация о работе

Ажикова, Альфия Кадыровна
кандидата биологических наук
Астрахань, 2010
ВАК 03.03.04

Диссертация

Послеожоговая репарация кожи при воздействии компонентов пуповинной крови человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы