Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение водорастворимых антигенных препаратов из опухолевых тканей и изучение их диагностической ценности

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Каргина, Ирина Борисовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Антигенные особенности опухолевых клеток.jg

2. Методы получения водорастворимых опухолеассоциированных антигенов.

3. Методы определения специфической биологической активности опухолеассоциированных антигенов.

4. Угнетение тимусзависимого звена системы иммунитета при онкологических заболеваниях и восстановление его активными факторами тимуса.

Глава П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Биологический материал.

2. Биохимические методы.

2.1. Методы получения водорастворимых препаратов трансплантиционных и опухолеассоциированных антигенов.

2.2. Физико-химические методы,применявшиеся в работе для частичной очистки препаратов тканевых антигенов.

2.3. Метод определения белка в препаратах.

3. Методы определения биологической активности антигенных препаратов.

3.1. Способ определения миграционной способности лейкоцитов в присутствии ОААГ.

3.2. Тест на угнетение цитотоксического действия антисыворотки препаратами ТАГ.

4. Статистическая обработка результатов.

Глава Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Разработка метода получения водорастворимых препаратов тканевых антигенов.

2. Изучение оптимальных условий теста миграции лейкоцитов.

3. Сравнение эффективности двух методов экстракции водорастворимых тканевых антигенов, ассоциированных с опухолью.

4. Получение препаратов ОААГ меланомы новым методом и исследование их специфической активности.

5. Исследование препаратов ОААГ при лимфогранулематозе.

6. Исследование влияния Т-активина in vitro на эффекты,вызываемые препаратом ОААГ ЛГМ в тесте миграции лейкоцитов.

7. Изучение некоторых физико-химических характеристик препарата ОААГ ЛГМ.

8. Изучение возможности применения нового метода для получения препаратов ОААГ из других опухолевых тканей. НО

Глава ДУ. ОБОТДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Разработка нового метода получения тканевых антигенов. И

2. Специфичность препаратов ОААГ ЛГМ.

3. Влияние Т-активина in vitro на ответ к препарату ОААГ ЛГМ в тесте миграции лейкоцитов.

4. Значение эффектов,вызываемых опухолевыми антигенами в тесте миграции лейкоцитов.

5. Выбор оптимальной концентрации препаратов

ОААГ.

6. Специфичность препаратов ОААГ,полученных при других злокачественных лимфомах.

Глава У. ЗАКЛШЕНИЕ И ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение водорастворимых антигенных препаратов из опухолевых тканей и изучение их диагностической ценности"

Актуальность работы. Одной из актуальных проблем биохимии опухолевого роста является исследование антигенной чужеродности злокачественных новообразований |^21,63,83J .Изучение этих особенностей опухолевых клеток имеет не только большое теоретическое^© и важное практическое значение [soj. Работы последних лет указывают на возможность использования специфических антигенов раковых клеток в иммунодиагностике злокачественных опухолей 67,68,84,129,138,147,148,154^. Ясно,что от правильной и своевременной диагностики новообразований зависит в значительной степени успех борьбы со злокачественными опухолями |?5,7б|.

До настоящего времени основным критерием подтверждения диагноза при развитии опухолей является гистологический анализ,проведение которого оказывается не всегда возможным,особенно при труднодоступной для биопсии локализации опухоли |76^. Поэтому ВОЗ указывает на необходимость разработки методов диагностики in vitro ,так как используемые в настоящее время методы in vivo могут приводить к нежелательной сенсибилизации организма больного 91,110j. И конечно,для диагностики опухолевого роста необходимо разрабатывать методы с использованием очищенных препаратов опухолеассоциированных антигенов (ОААГ) J^83J.K настоящему времени не предложено удовлетворительного метода получения ОААГ из опухолевых тканей ^44,77 .Первой задачей в этом направлении является получение биологически активных водорастворимых препаратов опухолей.

К настоящему времени установлено,что нарушение иммунологического надзора за антигенным составом организма является благоприятным для развития опухолевой ткани ^63,21

•Оценка функционального состояния тимусзависимого звена системы иммунитета,его активности в отношении к антигенам опухоли,является,таким образом, необходимой в осуществлении контроля за клиническим состоянием онкологических больных |^4б].Это еще раз указывает на важность создания высокоспецифических методов in vitro.

Еще более остро встал этот вопрос с появлением иммунокорре-гирукхцих препаратов.Стало необходимо быстро и четко решать вопрос о необходимости и эффективности иммунокоррегирукщей терапии в каждом отдельном случае 31,47].К настоящему времени разработан ряд подходов с использованием иммунологических методов для оценки Т-звена системы иммунитета человека.Однако,ни один из этих тестов не дает достаточно полной информации,так как иногда даже при явных клинических признаках заболевания могут выявляться нормальные основные показатели иммунитета

31,28,29,59

Состояние тимусзависимого иммунитета особенно подробно изучено при развитии лимфогранулематоза у детей [з1,46,47

Именно при этом заболевании был получен хороший клинический эффект при использовании иммунорегулятора Т-активина с целью восстановления функций тимуса [7,8,47]. Но надежных критериев для определения показаний к назначению Т-активина больным,страдающим лимфогранулематозом (ЛГМ),и оценки эффективности иммунокоррекции пока не предложено [з1].Это указывает на необходимость исследования диагностических возможностей антигенных препаратов,которые можно получать из лимфатических узлов,пораженных ЛШ,при гистологическом подтверждении диагноза.Однако,пока не удавалось получать препараты ОААГ,пригодные для диагностики ЛГМ [з2, Ив] .Практически все существующие методы экстракции ОААГ имеют недостатки,не позволяющие применять их для получения специфических диагностикумов Т-звена иммунитета .Показано, что наиболее перспективными являются методы,позволяющие получать антигенные препараты в водорастворимой форме,так как они дают возможность изучать не только физико-химические,но и биологические свойства ОААГ

Обнаружено,что антигены,ассоциированные с опухолями,вызывают в системе лn vitro эффекты,по которым можно судить о состоянии Т-звена иммунитета 28,32,57,58,147,148,15oJ .Однако,из-за низкой специфичности препаратов ОААГ,получаемых известными методами,вопрос о биологическом значении обнаруженных эффектов до настоящего времени не решен,что также препятствует применению препаратов ОААГ в диагностике [28,71,94,118,I49J.

Таким образом,вопросы о методе получения препаратов ОААГ и об их диагностической ценности остаются нерешенными ^83J.Решение этих вопросов является наиболее актуальными задачами в обсуждаемой проблеме.

Цель работы и основные задачи исследования. Целью работы явилась разработка метода получения водорастворимых антигенных препаратов из опухолевых тканей,изучение их биологической активности и диагностической ценности.

В соответствии с целью в работе были поставлены следующие задачи:

1. Разработать эффективный метод получения антигенных препаратов в водорастворимой форме из опухолевых тканей.

2. Провести сравнение нескольких методов экстракции ОААГ и выбрать оптимальный.

3. Получить препараты ОААГ из лимфатических узлов человека,пораженных лимфогранулематозом,исследовать их биологические свойства и некоторые физико-химические параметры.

4. Подобрать иммунологический метод для оценки in vitro реакции

Т-звена системы иммунитета на препараты ОААГ.

5. Провести исследования по оценке диагностических возможностей полученных препаратов ОААГ в случае лимфогранулематоза.

6. Изучить влияние иммунокорректора Т-активина на реакцию тимус-зависимого иммунитета к препаратам ОААГ у больных лимфогранулематозом.

Научная новизна результатов исследования. Взервые предложен биохимический метод экстракции тканевых антигенов,при котором исключается выход нуклеопротеидов в раствор,что не приводит к увеличению вязкости гомогената ткани при использовании ЗМ раствора KCl для фрагментирования цитоплазматических мембран.Этот эффект достигается благодаря найденным оптимальным значениям pH (4,5-5,0),при которых достигается максимальный выход водорастворимого антигенного материала,обладающего высокой биологической активностью.С помощью этого метода удалось получить препараты ОААГ,проявляющие высокоспецифические свойства в тесте миграции лейкоцитов.

Удалось значительно повысить точность метода миграции лейкоцитов для определения активности препаратов ОААГ.Благодаря разработанным в диссертации методам впервые найдено,что угнетение миграции лейкоцитов in vitro в присутствии ОААГ является показателем острого периода заболевания и нарушения функций тимусзависимого иммунитета,а стимуляция - это нормальная реакция на ОААГ,наблюдающаяся у больных ЛШ в фазе клинической ремиссии после иммунокор-регирующей терапии с Т-активином,а также у практически здоровых доноров.Показано,что у больных лимфогранулематозом в остром периоде заболевания (до лечения,в процессе лечения и при рецидиве заболевания) препараты ОААГ ЛШ,полученные из пораженных лимфатических у зло в, угнетают миграцию лейкоцитов практически в 1СШ случаев.В Фазе клинической ремиссии после химио-лучевой терапии у

10.

50% больных сохраняется эффект угнетения миграции лейкоцитов в ответ на препараты ОААГ ЛШ.У больных ЛГ¥, получавших комбинированную терапию с Т-активином,в фазе клинической ремиссии препараты ОААГ ЛГМ вызывают стимуляцию миграции лейкоцитов,то есть практически в 100% случаев наблюдается отмена эффекта угнетения.

Впервые показано влияние иммунокоррегирукнцего препарата тимуса Т-активина invitro на эффекты,вызываемые препаратами ОААГ в тесте миграции лейкоцитов: отмена угнетения миграции и восстановление до нормальных значений индекса миграции в присутствии ОААГ. Показана корреляция действия Т-активина in vivo и invitro на реакции Т-звена иммунитета к препаратам ОААГ,что позволяет определять показания к назначению иммунокоррекции и оценить ее эффективность.

Впервые предложен способ оценки диагностических возможностей препаратов ОААГ в тесте миграции лейкоцитов,а также определения оптимальной концентрации их при использовании с диагностической целью,что осуществляется путем вычисления коэффициента специфичности.

Практическое значение работы. Разработан эффективный способ получения водорастворимых препаратов тканевых антигенов (авт.свид. № 1079246 с приоритетом от 21.12.1982 г.). Разработан способ определения миграционной способности лейкоцитов периферической крови (авт.свид.Р 1076090 с приоритетом от 4.07.1983 г.).Предложен специфический тест invitro для оценки состояния тимус зависимого звена системы иммунитета у больных лимфогранулематозом с использованием препаратов ОААГ ЛГМ.Предложен также специфический тест invitro для оценки эффективности иммунокоррекции и определения показаний к назначению Т-активина больным лимфогранулематозом, Предложен способ определения оптимальной концентрации препаратов

ОААГ и оценки их диагностических возможностей в тесте миграции лейкоцитов.

Внедрение. Результаты,полученные в диссертационной работе,используются в научно-практической деятельности лаборатории молекулярной иммунологии НИИ ФХМ при 2 МОЛШИ им.Н.Й.Шфогова,в лаборатории клинической иммунологии 1У-го управления МЗ СССР,на кафедре внутренних болезней И педиатрического факультета 2 МОЛШИ им. Н.И.Пирогова,в лаборатории клинической иммунологии академической группы академика АМН СССР В.П.Бисяриной Омского государственного ордена Трудового Красного Знамени Медицинского института им. М.И.Калинина.

Практические рекомендации. Разработанный в диссертации способ получения водорастворимых препаратов,содержащих трансплантационные или опухолеассоциированные антигены,можно применять для получения специфических антигенных препаратов как из свежих,так и из замороженных тканей.Он может быть использован для получения антигенных препаратов из различных нормальных и опухолевых тканей.Разработанный способ определения миграционной способности лейкоцитов в присутствии препаратов ОААГ может быть использован для определения необходимости и эффективности иммунокоррекции Т-активином у больных лимфогранулематозом.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Каргина, Ирина Борисовна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ

Таким образом,благодаря разработке более эффективного метода получения препаратов опухо ле ас с оциир о ванных антигенов и более точного метода определения их специфической активности,получены результаты,которые могут найти применение в практической медицине.

Препараты ОААГ,полученные новым методом,обладали специфическими свойствами и вызывали два качественно различных диагностически важных эффекта в тесте миграции лейкоцитов периферической крови больных с онкологическими заболеваниями: угнетение и стимуляцию миграции.Корреляция между клинической фазой заболевания и эф-фектами,вызываемыми препаратами ОААГ ЛИЛ в тесте миграции лейкоцитов,позволяет применять эти препараты для оценки функционального состояния иммунной системы у детей,больных лимфогранулематозом,как до лечения,так и в процессе проводимой противоопухолевой терапии.

Показано восстановление тщунного ответа на опухолеассоцииро-ванные антигены ЛШ у больных лимфогранулематозом до уровня здоровых доноров после иммунокоррегирующей терапии с Т-активином. Аналогичный эффект (Р-активина получен in vitro у больных лимфогранулематозом в ответ на препарат ОААГ ЛГМ.Восстанавливающее действие Т-активина было конкретно у каждого больного.Поэтому тест миграции лейкоцитов с использованием одновременно ОААГ ЛГМ и Т-активина можно рекомендовать для оценки необходимости назначения Т-активина при лечении лимфогранулематоза.

Полученные в работе результаты позволили пересмотреть представления о диагностическом значении эффектов ингибирования и стимуляции миграции лейкоцитов в ответ на препараты ОААГ.Предложено новое объяснение этим эффектам: ингибирование - показатель патологического изменения иммунной системы,характерный для острого периода заболевания; стимуляция - показатель нормализации им

136. мунного ответа к ОААГ,характерный для фазы ремиссии или отсутствия данного онкологического заболевания.

Предварительные результаты по очистке препаратов ОААГ ЛГМ указывают на необходимость дальнейшего проведения этой работы. Отсюда открываются возможности получения эффективных стандартных диагностикумов онкологических заболеваний,в частности лимфогранулематоза.

Предложен способ оценки диагностических возможностей препаратов ОААГ с помощью определения следующих параметров: рабочего диапазона концентраций,коэффициента специфичности и оптимальной концентрации.Используя этот способ,можно оценить степень повышения специфической удельной активности препарата в процессе его очистки.

Получены предварительные результаты,указывагацие на возможность разработки in vitro метода дифференциальной диагностики злокачественных и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний.

Таким образом,разработан подход к использованию опухолеас-социированных антигенов в клинике с диагностической целью,а также к пониманию механизмов нарушения иммунного ответа на опухоль. Успехи в изучении иммунологической реактивности к опухолевым антигенам могут внести важный вклад в развитие подходов к имму-нокоррекции.

На основании полученных в данной работе результатов можно сделать следующие выводы:

I. Разработан биохимический метод экстракции водорастворимых антигенов из клеток животных и человека,позволивший увеличить в 4-5 раз выход активного материала с одновременным повышением удельной активности в два раза.Предотвращение выхода дезокси- и рибонуклеопротеидов в раствор высокой ионной силы

KCI достигается при экстракции антигенов в диапазоне рН 4,5-5,0.

2. С помощью гель-хроматографии и ультрафильтрации показано, что молекулы трансплантационных антигенов тлеют молекулярные массы более 200 ООО,а опухолеассоциированных - в диапазоне

40 ООО - 100 ООО дальтон.

3. Разработан эффективный метод оценки биологической активности опухолеассоциированных антигенов in vitro »заключающийся в измерении их влияния на подвижность лейкоцитов.

4. Полученные разработанным методом препараты ОААГ из лимфатических узлов,пораженных лимфогранулематозом,обладают высокой специфической активностью,что определяет их диагностическую ценР ность.

5. Найдена корреляция между действием Т-активина in vivo и in vitro на подвижность лейкоцитов в присутствии опухолеассоциированных антигенов,что позволяет использовать препараты ОААГ для оценки необходимости и эффективности иммунокоррекции Т-акти-вином.

6. В результате изучения активности препаратов ОААГ,полученных разработанным в диссертации методом,предложена новая интерпретация, отражающая суть биологических эффектов угнетения и стимуляции подвижности лейкоцитов в присутствии опухолеассоциированных антигенов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Каргина, Ирина Борисовна, Москва

1. Абелев Г. И. Иммунология злокачественных опухолей .Вестник АМН СССР,1974,112,с.23-29.

2. Абелев Г.И. Клеточные основы синтеза oC-фетопротеина в нормальных и опухолевых тканях. Экспер.онкол., 1979, т.I,të I, с.8-12.

3. Авдеев Г.И. Изучение антигенной структуры некоторых злокачественных новообразовании. Дисс.докт.,М.,1974,с.315.

4. Агеенко А.И.,Ерхов B.C. Роль эмбриональных опухолеассоции-рованных антигенов в иммуностимуляции роста опухоли.Экспер.онкол., 1979,т.1,Я I,с.35-37.

5. Агеенко А.И.,Гордиенко С.П.,Сакандш1Идзе O.P. Иммунитет и терапия злокачественных опухолей. Кишинев,1982,с.312.

6. Арион В.Я.,Москвина С.Н.Даргина И.Б.,Скопцова С.В.,Белова О.В. Биохимия трансплантационных антигенов. В кн.: Актуальные вопросы пересадки органов.Вып.3,М.,Мед.,1978,глава 3,с.37-52.

7. Арион В.Я. Иммунологически активные факторы тимуса .В кн.: Общие вопросы патологии.Итоги науки и техники,ВИНИТИ,иммунология, M.,1981,т.9,с.11-49.

8. Арион В.Я. Выделение,физико-химические свойства и биологическая активность Т-активина .В кн.: Итоги науки и техники, ВИНИТИ, иммунология,M.,1982,т.10,с.45-53.

9. Бабакова C.B. Изучение иммунитета к аденовирусным опухолям хомяков.Дисс.канд.,M.,1970. ,

10. Ю.Башиева С.А. ,Жалгасбаева Г.Т.,Калиев Ю.Ш.,Мезинова H.H. Показатели клеточного.иммунитета при доброкачественных опухолях» молочной железы.Вопр.онкол.,1980,т.26,№ 5,с.15-19.

11. П.Башкаев И.С. Органные и гетероорганные антигены нормальных и злокачественных тканей.Дисс.докт.,М.,1973,с.315.

12. Бергольц В.М. Дисляк Н.А.»Еремеев B.C. Иммунология и иммунотерапия лейкоза.М.,Мед.,1978,408 с.

13. Бизик И.,Грофова М. Анализ белков поверхности клеток опухолей мезенхимадьного происхождения.Экспер.онкол.,1983,т.5,JG 6, с. 39-43.

14. Быковская С.Н.,Грунтенко Е.В. Т-лищюциты в противоопухолевом иммунитете. Новосибирск,Наука,1982,271 с.

15. Васильев В.Н. Лимфогранулематоз и вилочковая железа. Вопр.онкол.,1980,т.26,J£ 7,с.87-95.

16. Воробьев С.И.,Бриллиант М.Д.,Чертков ИД. Современная схема кроветворения и возможные мишени гемобластозов. Терап.архив, I98I,T.53,J?i 9,с.3-14.

17. Григорович Н.А.,Монастырская П.Л. Иымунологиче ские и биофизические методы диагностики лимфогранулематоза. В кн.: Роль иммунной системы в патогенезе лимфопролиферативных заболеваний. Тез. докл.Новосибирск,1984,с.36-38.

18. Гриневич К).А.,Никольский И.О. Гуморальные факторы тимуса и перспективы их применения в онкологии.Экспер.онкол.,1982,т.4, гё 5,с.10-17.

19. Гублер Е.В. Вынислительные методы анализа и распознавания патологических процессов.М.,Мед., 1978,340 с.

20. Денисов В.Н. Агармиграционный тест для исследования фактора, ингибирующего подвижность лейкоцитов. Лаб.дело,1981,Л 6,с.359-362.

21. Детерман Г. Г ель хроматография.М., ЬЬф, 1970.

22. Евсевьева А.И.,Момиенко М.Д.,Зыбина М.А.Дманский Ю. А.Показатели клеточного иммунитета у больных раком прямой кишки при хирургическом и комбинированном лечении .Вопр. онкол., 1981,6, с.40-44.

23. Жаков И.Г.,Рыбаков Ю.А. Факторы клеточного иммунитета у больных раком легкого,леченных по программе расщепленного курса. Вопр.онкол., 1980,$ 4,с.75-79.

24. Жук А.Г.Диагностическая ценность некоторых.показателей клеточного. иммунитета в онкологической практике .Вопр.онкол.,1980, 5, с.59-63. , .

25. ЗО.Зильбер Л.А.Вирусо-генетическая теория возникновения рака. М.,Мед.,1962,477 с. .

26. Инджия JI.В.,Яковлева Л.А.,Лапин Б.А.,Цатурян Т.Н.,Маяковский М.,Бубеник Ян.Метод тормодения электрофоретической подеишос-ти макрофагов (MEM-тест) в иммунодиагностике злокачественных лим-фом павианов гамадрилов.Вопр.онкол., 1980,т.26,1& II,с.66-71.

27. Каргина И.Б.,Москвина С.Н.Дрион В.Я.Способ получения водорастворимых антигенов .Официальный бюллетень Го ском. Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий. 1984,& 10,с.13. Авторское свидельство & 1079246 с приоритетом от 21.12.82.

28. Зб.Кемилева З.Вилочковая железа.М.,Мед.,1984,200 с.

29. Кирзон С.С.,Чередеев А.Н.,Арион В.Я.,Кротова С.Б.,Ивануш=:: кин Е.Ф.,Барышков Ю.А. Действие Т-активина in vitro на лимфоциты больных лш/фогранулематозом.Имглунология, 1982,^ 5,с.61-65.

30. Кирзон С.С.Чередеев А.Н.,Степанова Ж.В.,Шеклаков Н.Д.,Ари-он В.Я. Состояние иммунной системы при хроническом генерализованн-ном С гранул ематоз ном) кадттддоз е .Иммунология.J983, В 5, с.83-88.

31. Ковальчук Л.В.,Алейникова Н.В.,Черменева Л.М.,Арион В.Я., Дшикант И.П. Нарушение регулятдрных функций тимуса в иммунных процессах и подходы к их коррекщш. Ж.общ.биол.,1981,^ 5,с.751-761.

32. Коган И.Я.,Ерхов B.C. Исследование трансплантационных антигенов саркомы A-I2 хомяков. Труды клин.к эксп.онкологии., М.,Мед.,1971,с.13-45.

33. Коен С.,Уорд H.A.,Мак-Класки Р.Т. Механизмы иммунопатолори гш.М.,Мед., 1983,400 с.41 .Колыгин Б.А. Лимфогранулематоз у детей.JI.,Мед., 1983,184 с•

34. Кочеткова В.А.Модификация метода торможения миграции лейкоцитов и его практическое значение у онкологических больных. Jlaó. дело. ,1980,1$ 12,с.744-746.

35. Кузьмина Е.Г.,Яршшн A.A.,Байсоголов Г.Д. Оценка иммунологического состояния больных лимфогранулематозом,находящихся в состоянии длительной решссш!.Иммунология,I98I,të 2,с.67-70.

36. Куртенков О.А.Клеточный противоопухолевый иммунитет в аутологичнои системе при раке желудка.Вопр.онкол.,1981,т.27,J6 6, с.36-40.

37. JÍOÓKO Г.Н.,Порубова С.М.Иммуногенетические основы резистентности опухолей .Минск,Вышейшая школа, 1980,176 с.

38. Лопухин Ю.М.,Петров Р.В.,Ковальчук Л.В.,Арион В.Я. Современные представления об иммунодефицита^ человека: диагностика и методы коррекции. В.сб.:Иммунодефицитные состояния и методы их коррекции.Труды 2 МОЛГМИ шл.Н.И.Пирогова,1981,вып.37,с.6-15.

39. Лопухин 10.М.Клинический опыт коррекции иммунной системы активным фактором тимуса (Т-активином). В кн.:Итоги науки и техн., иммунология,1982,т.10,с.30-44.

40. Людоговекая JÍ.B.,Цветков B.C.,Кирюхин Д.П. Об антигенной структуре опухолей человека. Вопр.онкол.,1964,т.З,с.18-22.

41. Малинин А.П.,Канаев C.B. Клинической значение исследования функциональной активности Т-лимфоцитов у больных лимфограну-лематозом.В кн.: Роль иммунной системы в патогенезе лтлфопроли-феративных заболевании.Тез.докл.»Новосибирск,1984,с.86-88,

42. Матэ Ж. /активная иммунотерапия paita, иммунопрофилактика и иммунореабияитация.M., Мед., 1980, с. 425.

43. Медушщин H.B .Повышенная чувствительность замедленного типа.М.,Мед.,1983,160 с.

44. Мокеева P.A.,Лукина Е.А.,Журавлев B.C. Характеристика иммунного статуса и его прогностическое значение у больных злокачественными лимфомами.В кн.: Роль иммунной системы в патогенезе лимфопролиферативных заболеваний.Тез.докл.,Новосибирск, 1984,с.90-92.

45. Молодык А.А.,0жерельев A.C. Бета-2-шкроглобулин в диагностике лимфопролиферативных заболевании. В кн.: Роль иммунной системы в патогенезе лш.хТюпролиферативных заболеваний. Тез. докл.,Ново сибирск,1984,с.92-93.

46. Москвина С.Н.Физико-химическая характеристика растворимых антигенов гистосовместимости,выделенных различными методами из селезенок мышей.Дисс.канд.,М.,1975.

47. Николаева Н.В.,Азизов Ю.М.,Алещенко A.B.,Семенова Л.П. Молекулярно-биологические и цитологические аспекты лшдфолейкоза. М.,Наука,1981. . ,

48. Новиков Д.К.,Шмаков А.П. Определение сенсибилизации1. J олеикоцитов к антигенам опухолей и эмбриональных, тканей при раке толстой кижи.Воцр.онкол.,1981,т.27,с.40-45.

49. Осипов С.Г.,Бергольц В.М.,Еремеев В.С,,Акимова Г.А.,Румянцев А.Г.Некоторые показатели специфического клеточного иммунитета при остром лейкозе у детей. Вопр.онкол.,1981,т.27,й I, с.20-22.

50. Панкина В.Х. .Данилова Г.С. Состояние иммунореактивности больных раком прямой кишки.Воцр.онкол.,1980,т.26, Js 6,с.31-34.

51. Петров Р.В.,Ковальчук JI.В.,Сотникова Н.Ю.,Арион В.Я.»Санина И.В .Роль тимуса и селезенки в регуляции выработки фактора, ингибирующего миграцию макрофагов .Иммунология, 1981, J5 4, с. 57 -61.

52. Петров Р .В. "Иммунология". ,М.,Мед., 1982, с.368.

53. Самойлова Р.С.Иммунологические клеточные маркеры при лим-фоггролиферативных заболеваниях. Терап. архив, 1980, т. 52, ß. 140-149.

54. Татай?инов 10.С. Обнаружение эмбриоспецифического аяьфа-глобулина в сыворотке крови больного первичным раком печени. Воцр.мед.химии, 1964,$ I,с.90-91. . .

55. Татаринов Ю.С.,Масюкевич В.И.,Афанасьева К.А.О выявлении первичного рака печени с использованием иммунохимической пробы на эмбриоспецифический ^-глобулин.Вопр .онкол., 1971, т. 17,$ 3,с.54-58.

56. Томпсон P.A. Последние достижения в клинической иммунологии .М.,Мед.,1983,496 с.

57. Трапезников Н.И.,,0нкологияп,М.,Мед,, 1981,480 с.

58. Уманский 10.А.Иммунологичеекая реактивность при раке.

59. Киев,Вдоровь е,1974,240 с.

60. Уманскш I0.A. Иммунологическая реактивность при раке.Киев, Здоровье,1975,148 с.

61. Фель В.Я.,Швемберг И.Н. К иммунологической характеристике шогенных опухолей крыс.JI.,Мед., 1968,194 с.

62. Balding P.Response of human lymphocytes to PHA and tumor-associated antigens as detected by fluorescence polarisation. ' Brit.J.Cancer.,v.41.,p.73-B5.

63. Baldv/in R.Modification of cell antigens during aminoaso due carcinogenesis in rat liver.Brit.J.Cancer,1964,v.18,p.285-288.

64. Baldwin R.,Havis P.,Pimmet M.Tumor specific antigen expression on chemicaly induced rat tumors.Ann.Inst.Pasteur,1972, v.122,p.715-728.

65. Basch R.S.,Stetson C.A.The relationship between hemaggiu-tinogens and histocompatibility antigens in the mouse.Ann.New York Acad.Sci.,1962,97,p.83*

66. Berlin N.I.Tumor markers in cancer prevention and detection. Cancer,1981,v.47,5,p.1151-1153.

67. Bernal S.D.,Speak J.A.Membrane antigen in small cell carcinoma of the lung defined by monoclonal antibody SMI.Can. Research,1984,v.44,p.265-270.

68. Billing R.,Terasaki P.J.Human leukemia antigen.1.Production and characterization of antisera.J.Natl.Cancer Inst.,1974, v.53,p.1635-1638.

69. Black M.M.,Leis H.P.Cellular responses to autologous breast cancer tissiue.Correlation with stage and lymphoreticulo-endothelial reactive.Cancer,1971,v.28,p. 263-273.

70. Blaszczyk M.,Rak K.Y.,Herlyn M. Characterizationn of gastrointestinal tumor-associatied carcinoembryonic antigen-related antigenes defined by monoclonal antibodies.Cancer Res.,1984, v.44,p.245-252.

71. Boddie A.W.,Holmes E.C.,Roth J.A.Inhibition of numan leukocyte migration in agarose by KC1 extracts of carcinoma of the lung.Int.J.Cancer,1975,v.15,p.823-829.

72. Boddie A.W.,Urist M.M.,Chee D.O. Inhibition of leukocyte migration in agarose by KC1 extracts of human melanoma cell linegrown in serum-free medium.Int.J.Cancer, 1 975,v.16,p.1035-1041.

73. Brandes L.S. Peripheral leukocyte migration inhibition reactivity to breast cancer antigens and normal controls.Cancer1. Res.,1976,v.36,p.3707.

74. Cochran A.J. Sensitization to tumor-associated antigens in human breast carcinoma.Int.J.Cancer,1974,v.14,p.19-24.

75. Cochran A.J. Leukocyte migration inhibition by cancer patients sera. Int.J.Cancer,1976,v.18,p.274-278.

76. Collins J.L.,Wast C.J.,Losrio B.B.,Losrio C.B. Caracteri-zation of an antigen from the myelogenous leucemiacell line K-562. J.Natl.Cancer Inst.,1977,v.59,p.1667-1674.

77. Currie L.A. Eighty years of immunotherapy: a reviev of immunological methods used for the treatment of human cancer. Brit.J.Cancer,1972,v.26,3,p.662-672.

78. Ewans D.S.,Parder D.V.,Prank M.K. Biochemical and phusical characterization of tumor-associated fetal antigens.Cancer Res., 1979,v.39,6,p.2006-2015.

79. Fukuda M. Leukocyte migration inhibition responce to varions antigen preparations of outologous and homologous bpeast cancer in patients with primary breast cancer.J.Natl.Cancer Inst., 1979,v.63,5,p.1161-1170.

80. Gering G.,01d L.,Boyse E. Antigens of leukemias. J.Exp. Med.,1966,v.124,p.753-769.

81. Gold P. Embrionic origion of human tumor specific antigens. Progr.Exxp.Tumor Res.,1971,v.14,p.43-58.

82. Gold P. Specific carcinoembrionic antigens of the humandigestive system. J.Exp.Med.,1965,v.3,p.467-481.

83. Goldrosen M.H. Cellular and humoral factors involved in the mechanism of the micro-leukocyte adherens inhibition reaction. Cacer Res.,1979,v.39,2,p.567-592.

84. Gutte^man I.V. Antigen solubilized from human leukemia: lymphocyte stimulation. Science,1972,v. 177,p.1114-1115.

85. Gutterman I.V. Chemoimmunotherapy 6f adult acute leukemia prolongation of remission lymphoblastic with BCG. Lancet,1974,v.4,p.1405-1416.

86. Hann H.W.L. Leukocyte migration inhibition of leukemia-assosiated antigen in children with acute leukemia and their famili members. Cancer,1980,v.46,2,p.293-298.

87. Hellstrom I.E.,Hellstrom K.E. The need to establish whether the leukocyte adherence inhibition test is a reliable assay of tumop immunity in humans. Cancer Res.,1979,v.39,2,p.649-650.

88. Herberman R. Delayed hypersensitivity skin reactions to antigens on human-tumors. Cancer (Philad),1974,v.34,4,p.1469-1473.

89. Hitzig W.H. Clinical tests for monitoring immunity function. Immune Syst.Funct.and Dysfunct.London.1980,p.263-266

90. Holan V.,Sill 0.,Hesch M. Monitoring of antitumary immunity in patients with laryncs cancer by tube leukocyte adherence inhibition assay. Cancer Res.,1979,v.39,2,p.651-653.

91. Hollidy W.J. Historical Backgrund and aspects of the median mechanismus of leukocyte adherence inhibition rection. Cancer

92. Res.,1979,v.39,2 part 2,p.558-563.

93. Hollinshead A.C. Cell membrane antigens associated with human adult acute leukemia. Blood Cell,1976,2,p.257-265.

94. Iwaki J. Inhibition of human leukocyte in agar by 3 M KC1 extracts of stomach,colon and lung cancer. J.Natl.Cancer Inst,1979,v.63.NI,p.5-10.

95. Jacobs R.M.,Valli V.E.,Wilke B.N.,Hollinshead A.C. Partial purification of a common antigen in bovine limphoma and its use in a lymphocyte histogenesis assay. Cancer Res.,1981, v.41,p.3000-3004.

96. Jones B.M.,Turnbull j.R. Horizontal studies of cell-mediated immune reactions to autologous: tumor-antigens in patients with operable mammary carcinoma. Brit.J.Cancer,1975,v.32,p.339.

97. Jones B.M. Tumor directed leukocyte migration in operable breast cancer: additional clinical correlation. Brit.J.Cancer, 1976,v.34,p.94.

98. Kabisch H. ,Arndt R. ,Thiele H.,Winder K. Partial molecular characyerization of an antigenic structure associated to cell of common acute lymphoma. Clin.Exp.Immunol.,1978,v.32,p.399-404.

99. Kadish A.A.,Marcus D.M.,Bloom B.R. Inhibition of leukocyte migration by human breast-cancer-associated antigens. Int.J.Cancer,1976,v.18,p.581-586.

100. Klein E.,Klein G. Tumor associated antigens.Potentialapplication in resarch,tumor therapy and tumor prevention. Triangle,1972,v.11, 1,p.15-20.

101. Klein G. herpes- viruses and oncogenesis. Proc.Nat.Acad. Sci.USA,1972,v.4,p.1056-1065.

102. Low L.Q. Studies of tumor antigens and tumor-specific immune mechanisms in experimental system. Transpl.Proc.,1970, v. 2, 1,p.117-132.

103. Lowry O.H.,Rosebrough J.,Parr A.L.,Randall R.J. Protein measurement v/ith the Polin phenol reagent. J.Biol.Chem., 1951, v.193,p.265-261.

104. Malusich A.E.,Halliday W.I. Hemocytometer leukocyte adherence inhibition technique. Cancer Res.,1979,v.39,part 2, p.625-628.

105. Mann D.L. ,Regentine G.H. ,Pahey J.L.,Nathenson

106. Masuran R.,Mujagic H.,Malenica B. In vitro detection of cellular immunity to melanoma antigens in man by the monocytespreading inhibition test. Int.J.Cancer,1976,v.17,p.14-20.

107. McCoy J.L.,Gerome L.E.,Dean J.H. Inhibition of leukocyte migration by breast carcinoma. J.Natl.Cancer Inst.,1974»v.53,p.11-17.

108. Meltzer M.S. TumoE-specific antigen solubilized by hyperto tonic potassium chloride. J.Nat.Cancer Inst.,1971,v.47,p.703-709.

109. Metzgar R.S. Antigens specific for human lymphocytes and myeloid leukemia cell: detection by nonhuman primate antiserum.

110. Science,1972,v.176,p.986-988.151.13 134«Morton M.D., Cancer immunology and the surgen. Surgery, 1970,v.67,2,p.396-398.

111. Pasternak G. Antigens induced by the mouse leukemia virus. AAV.Cancer Res.,1969,v.12,p.11-15.

112. Pasternak G. Petal extracts and leukocyte migration inhibition. J.Nat.Cancer Inst.,1980,v.56,1,p.5-8.

113. Powel A.,Slose A.M. Antigenic specificity and cellular mechanisms in leukocyte adherence inhibition analysis of immunity to simple proteins and hapten-protein conjugates. Cancer Res., 1979,v.39,2,p.570-575.

114. Schacterle A.»Pollack D. A simplified method for the quantitative assay of small amaunts of protein in "biologic material. Anal.Biochem.,1973,v.51,p.654-659.

115. Sega E. Specific blastogenic responce of peripherial blood lymphocytes from lung cancer patients to a fetal lung antigen. J.Nat.Cancer Inst.,1980,v.64,5,p.1001-1006.

116. Suslov I. High incidence of migration inhibition reactivity to lung tumor-associated antigen by normal donors in chose contact with lung cancer partients or materials. J,Nat.Cancer Inst.,1980,v.65,4,p.709-713.

117. Suslov I. Inderect leukocyte migration inhibition reactions to a 3 M KC1 extract of lung adenocarcinoma by lung cancer patients. J.Nat.Cancer Inst.,1981,v.66,2,p.233-238.

118. Thomson D.M.P.,Tataryn D.N. Human tumor-specific immunity assayed by a computerized tube leukocyte adherence inhibition. Cancer Res.,1979,v.39,2,part 2,p.668-643.

119. Walberg W.H. Inhibition of migration of human autogenous and allogenous leucocyte by extracts of patients cancer. Cancer Res.,1971,v.31,p.788- 806.

120. Wigzell H. Quantitative titration of mouse H-2 antibo-51dies using Cr-labelled target cells. Transplantation,1965,3, p.423-430.

121. Zembala M. ,Ptak W. The localisation of complement combined with polioma virusinduced antigen in gelfiltrated albumin (protein) fractions of tumor. Acta Virol,,1968,v.2,p.157-161.

122. Zolleie M. Leukocyte migration studies in gastric cancer detection: an approach to ward improved specificity and sensitivity. Nat.Cancer Inst.,1977,v.56,p.897-904.

123. Zoller M. Sensitization of leukocytes of cancer patients against fetal antigens: leukocyte migration studies. J.Nat.

124. Cancer Inst.,1979,v.64,2,p.285-294.

125. Zou R.Shi,Dean Tsao,Young S.Kim. Subcellular distribution, synthesis and release of carcinoembryonic antigen in cul-tered human colon adenocarcinoma cell lines. Cancer Res.,1983, v. 43,p. 4045-4049.