Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ПОЛУЧЕНИЕ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНОВ ОВЕН ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ПОЛУЧЕНИЕ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНОВ ОВЕН ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ"

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА

На правах рукописи

уда: 6i2.646.02

Мазепк-ин Оганисл^ь Алексеевич

ПОЛУЧЕНИЕ. ОЦЕНКА КАЧЕСТВА Й КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЕ ЭМБРИОНОВ ОВЕН ДЛЯ

трансплантации

Специальность 02.00.13 - Физиология человека в

животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровщхы, Московская ооласть 19 ёё

' у У * / '. '

с

-.2 -

Работа выделяема зо Зсесо^знс.л Ордека Трудового лрзелего Зяашенл яаучно-ясследовательском лнетгтутэ жхзоаг оводетва

Научный руководитбль - доктор олэ.'юпп^с^к наук,

профессор Н.П.Сгргеез

Сйлшальные оппоненты - доктор С у. алогически наук,

профессор А.Ш.Ы.Амарбаев кандидат биологических наук П.П.Кулашав

Ведущее учрвяцекле: Зсероссгг^с:::::: ааущ-:з-лсследозахол1.с;-:<Г1 институт племенного дала.

&0

Запита диссертации состоится "}% "ОМ^ШЛ И39 г., в (0 чао. на заседаний олецдаляздрезанного смета Д. 020.15.С2 пр;; Зсйоодз-ном Ордена Трудового Красного Знамена научко-;1сследовательском да статуте жгаотн ов оде та а,

Ддрас лнетгтута; 142С12, Московская область,

Подольск?, р-он, пос. Дуйров^щ

С дассертациеЗ мо^на озязт'.пться в Ояйтаотеке института«

Автореферат разослан " ,3 , " 1989 года

Ученый секретарь сдецзалззярсзай-гЮ-'и соь кандидат йкел'-:« 1 ^ ""ук

II. II. Шмыгая

I. ОВЭДЯ МРАКТКРЖТЖА РАБОТЫ

ОСН02ШГЛ? напранш!/-лш экономического и социального развит: и СССР на я 1990 гг. л на период до 2000 года предусмотрено о<3<зспич,:ть д.-ыъне^ш;: рост производства продутою ис-вотноводетва.

Рациональная подход к проблемам интенсиЗЕ^капш ллеотно-водетта в настоящее вре?ля невозможен без использования резервов производства. В овцеводстве, среди факторов, влкявдях на эффективность отра-—чл большое значение имеет воспроизводство высохолродуктярного скота я его сохранность.

В 5ic.fi связи болгыже кьучной и практическое значение приобретает кониИ подход к уехоренго те:,пов воспроизводства наиболее ценных в генетическо;.: отноабнди тавотных путем трансплантанта эмбрионов.

1.1. Актуальность теьп-Ч Метод трансплантации эмбрионов вошел з селекштонно-генегаческую практику работы с вняаЕодшся Ж1ВО-ГПН1.И. Генетики считают, что при применении метода транс-плантеши для размнояения животных с выдаетдв.гася генотипами ускоряет процесс вытеснения животных с худаш генотипом, а 5 пело:-! селекционный процесс в животноводстве ькжат <5ыть ускорен в 2-3 раза, чем пр:; использовании другой методов разведения.

Теоретической основой метода трансплантации является на-лпчле большого числа зародыззвю: клеток в яичниках самок животных, наследует сгъ генетических признаков и всего ген этического гютекц^&ла, после пересадки эмбриона реципиенту.

Сйжм из глазках факторов перевода метода траясплалтапии на практическую основу является разработка способов вызнванкя суперовулятда у овец-доноров. Ео.тьаув теоретическую и практи-

ческую значимость :Ыест ео гфо'з ЬГ рййр а'о тки ' ахнологии глубоксго

.V.; г- ■■.■».

СОЯ.ь й"

ш. 1£. Д.

замораживания зародышей, которая позволяет осуществлять транспортировку их на дальние расстожг.и к вести пересадки в запланированных стадах.

1.2. Цель и задача исследований, Це.ть исследования заключалась в усовершенствована! методов вызывания суттерозуля-щш, разработки методов извлечения и оценка качества, крно-консерзярования и пересадки эмбрионов овец. Для решение поставленной цедя <3ыля намечены следуйте задачи:

- усовершенствовать глетсд въпзаззкпя (.гнояествекной овуляции у овец с использованием отечественных тпжорткж гормональных препаратов;

- разработать методы извлечения, вдрфологкчаскоЯ оцеякг а пересадки эыбрлочоз эзец;

- усовершенствовать технологии крноконсервирования, хранения, дальней транспортировки, отталвання и пересадки эмбрионов.

1.3. Научная новизна. Заключается в усовершенствозашш методов гормонального вызывания аолиовулшши у овцематок с использованием отечественных и зарубежных гонадотропинов в комплексе с витаминами А и Е и простатландинаш. Сконструированы и успешно попользуются приборы и приспособления для хирургического извлечения эмбрионов. Изучено влияние типа го-аадотрошша на уровень суперозуляции, сплодотворяемость яйцеклеток, качество эмбрионов. Разработана технология эамората-ванля и оттаивания а дальней транспортировки эмбрионов овец. Впервые в нашей стране осуществлена дальняя транспортировка замороженных эмбрионов и пересадка их в условиях ферм. Новизна исследований подтверждена двумя авторскими свидетельствами.

1.4. Практэтескся значимость работы состоят в усовершенствовании. методов гор.юнального вызывания суперовулягта, оОеспе-чиваицие множественную овуляцию у В9% овец при числе овуляпгй 10,7 и шкоде нормальных эмбрионов 7,5 на донора.

Разработанный метод кргоконсеркгрованяя зародышей в жидкой азоте позволяет применять метод трансплантация на фермах в запланированных стадах. Отпадает необходимость в содержании стада реципиентов к появляется возможность создания банка зародышей от высокопродуктивных пород животных.

1.5. Апробапзя получение результатов. Основные положения диссертанта докладывались на ежегодных конференциях отдела трансплантаюа эмбрионов с.-х. животных (1983-1967 гг.), научной конференции молодых ученых (ВИН, 1984-1985 гг.). Всесоюзной конференция молодых ученых и специалистов по трансплантации эмбрионов (ШШЕП, 1986 г.), Уеждународяом симпозиуме то трансплантации и зашражгвашго эиЗрлоноэ ютвотных (ПЕР, Краков-Балшш, 1986 г.).

Работа дедакс трировалась на ДЦНХ СССР я была отмечена серебряной медаль» (1986 г.). По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ.

1.6. Объем работ. Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста, иллюстрирована 30 таблицами а 17 рисунками. Состоят яз введения, обзора литературы, материала и мвтоди-хи исследований, результатов исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Список использованной литературы включает 149 источников, в том числе 125 иностранных.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА. ИССЛЩОВАШЙ

Исследования по получению, оценке качества я криококсерви—

рованиь эмбрионов овец для трансплантации била проведены на овцах экспериментального хозяйства Клекоэзо-Чегодаево а отдела трансплантации эмбрионов с.-х. животных (BKS), совхоза "Кес-калекскиЙ" г в КазЩТЙО Алма-Атинской области в перяод с I9SI ш I9&S год включительно.

Испытание различных вариентов гормонального вызывания су-авровуяяцяВ провоетлз на овцах с нормальный проявлением яолоэо-го цикла. Для оценки сти^лЕрущего действия гонадотрогмиа определяли чйсло овуляцвА в неовуллровазшлх фолликулов на 5-7 день лослэ осеменетая при извлечении.

Dpa разработка новых сяособэв щщушрованая суттеро вуляцли овцам в день о хоти внутримшечно вводили татзшна А и Е к повторно перед гэршваяьной обработкой в подавднноЯ дозе ог первоначальной. £ля вызывания суаеровудяшш применяла патизннЗ препарат CEC, стакгсарГЕЫЯ очищенный предэраг (фсшятон) и фол-лшсулости^удируюдай гор.юн (ФСГ-п) в дозе от 14 до 26 мг (схема 1-2).

Схема Г

Дня цикла Название препарата Доза препарата

I Витамин А (I1.S.) 75000

Е (мг) 50

10-12 Внтшян А (К.£.) 30000

Е (иг) 25

ГСЕК (H.H.) 1200—1400

14 Гфостагландан (ласт) 250

I« Охота я осеменение

22 Хирургическое извлечение

Схема 2

Дня цикла

Название препарата

Доза препарата

7-12

I

Витамин А (И.Е.) Е (кг)

Витают А (И.Е,) Б (мг)

30000 25

16 25

75000 50

ФСГ-п

-п четырехдневная

мг

пятидневная

За 48 часов Простагландин (миг) до окончания о тки

250

12-17 18-23

Охота п осеменение Хирургическое извлечение

Извлекали зародыши у овец хирургическая методом 'через разрез по бвло£ листа 221вота с применением местного наркоза. Для извлечения использовали катетер ВИЗа и воронку, соединенную с гибкой трубкой.

Свежеподучешше эмбрионы подвергали морфологической оценке с учетов стадии развития и качества под световым инвертированным шкроскопом МБЙ-13 При 100-кратном увеличении.

Замораживали эмбрионы на программном заморадивателе УОП-1. Пршлекяли криозадитные вещества ДИС0 в 1,5 М и глицерин 1,0 в 1,4 М концентрации в фосфатно-солевом буфере. Охладцекие с ' ДГЛСО - медленное и такое же оттаивание, с глицерином - ускоренное и быстрое оттаивание. Насьзцекие криотгротектором было ступенчатое с нарастанием концентрации, удаление — в обратной последователь нос ти.

Эмбрионы после оттаивания оценивались по морфологическим признакам и пересаживались овцам-рецшшентам хирургическим ые-

ходом через разрез по белой дзнил тавота. Полученные данные подвергали статистической обработке на микрокалькуляторе "Электроника БЗ-21".

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Гормональное вызывание суперовуляцяа у овец

В опытах были использованы 73 овцы-донора породы финский ландрас, романовская, текселъ и иль-де фраяс. Важным при вызывании супоровулящщ у овец является день и доза препарата.

В первом опыте по вызыванию сулерозуляции у овец не ставилась задача выявления различий полиовуляшга у- животных в зависимости от дня и доза препарата.

Особенностью схемы № I является применение простагландина для синхронизации охота у овец. Так пра применении стандартного препарата СЖК (фоляигон) с простагланданом пришли в охоту 85$ овец-доноров, пра обработке животных дативным препаратом с простаглаадином 89,Это свидетельствует о тог/t, что стандартный я наганный препарат СНК в дозе 1200-1400 И.Е. в сочетании с простатланданом и штаманаш А"и Б можно использовать для вызывания множественной овуляции у овец. Однако показатель среднего числа овуляций был в пользу первой опытной группы и составил 10,X , а во второй - 8,5 . Необходимо оплатить, что вариабельность при применении стандартного препарата СЖК (фол-лигой) была ниже (55,4Й) при лимите от 4 до 19 овуляций, чем при использовании нативного препарата СЖК (95,450 при лзките от 4 до 36 овулядай. Среднее число неоплодотворенвых яйиеклаток^ било кеньаа у овэц это рой группы по сравнении с первой (0,6 против 2,2). У овец первой группы было получено только 50,0% зародышей, во второй на 18,2% выше и составил 68,В результате

выход кормалъшж эибр/.онов вэ второй группа овец был 4,8 , а в первой только 2,2 на донора' (табл. I).

Таблица I

Уровень суперовуляша я качество эмбрионов у овец в зависимости от шла гонадотропика

Показатель С К К

стандартный дативный

Обработано животных 20 19

Реагировало суперовуляцней (п-$) 17-65,0 17-89,5

^сло овуляций, всего 171 144

Процент от числа индуцированных к росту фолликулов 93,4 96,4

Число овуляций на донора 10,1 8,5

Вариабельность (%) 55,4 95,4

Извлечено зародышей, всего 86 98

Процент от числа овуляций 50,0 88,2

Число зародшей на донора 5,1 5,8

в т.ч. Еорг.талъкых 2,2 4,8

дегеяерироваккшс 0,7 0,4

нео плодотворенных яйцеклеток 2,2 0,6

Приведенные данные свидетельствуют о той, что стандартный препарат СКК при одинаковой дозе и схеме обработки обеспечивает более высоку» реакции яичников. Однако выход нормальна* эмбрионов заметно снижается по сравнению с группой овец, обработанных натнваым препаратом СЖК,

Во втором опыте провели сравнительное изучение действия натнвного. препарата СХК лкофкльной супки и гапофгзарного препарата ФСГ в сочетании с простагландизом а витаминами А и Б. Б пергой группе овец реагировало суперовуляцаей 87,5?, во второй группе - 84,6% (табл. 2). Среднее число овуляций на донора во второй группе животных было достоверно выше, чем в первой

(13,0 против 6,7). По числу зародышей и нормальных эмбрионов наилучшие результаты были получены во второй группе животных (11,0 против '4,4),

Таблица 2

Уровень суперовуляции и качество эмбрионов у овец

Гонадотрошш

Показатель натлвкый препарат С£К ФСГ-п

Обработано животных 8 26

Реагировало суперовуляцией (п-Й) 7-67,5 22-84,6

Число овуляций на донора 6,7 13,0

Вариабельность {%) 50,8 42,2

Извлечено зародышей, всего 31 242

Процент от числа озулаций 65,9 84,6

Число эародшей на оперированного донора 4,4 11,0

в т.ч. нормальных 4,3 7,5

дегеяерированных 0,1 2,2

неошгодотворешшх яйцеклеток - 1,3

Индивидуальная овулируицая реакция яичников на введение гонадотрошша обладает большой изменчивостью, которая обусловлена тшкж препарата и иншвидуалышг.21 особенностями обрабатываемых животных. Полученные результаты подтверждаю такой вызол. Число овуляций в первой группе животных варьировал от 4 до 17, ао второй — от 4 до 23* Множественная овуляция более 17 в первой труппе найлшалась у одной овцы л у пята в группе животных, обработанных ФСГ-п (табл. 3).

При вызывании; суперощуляции у овец день введения гокадо-тропина очень важен. Реакция яичников на ОСГ-п зарегистрирована, если её осуществляли на 8, 10, 12 дни полового цикла.

Тябшха. 3

Реакция ягчнкков и её изменчивость в зависимости от т::тха гонадотрогоша

Гонадотропин

Показатель лреЖгШС

п % П *

Обработано оэеа 8 26

Реагировало суперовуляцией 7 67,5 22 84,6

Число овуляций: 4-6 3 42,8 3 13,6

7-10 г 28,6 6 27,3

11-16 т X 14,3 8 36,4

17-22 I 14,3 4 18,2

23-36 0 I 4,6

Однако при введении 5СГ-п на 8 день получено 13,7 овуляций» 10-Й декь - 12,7, Отмочено повыгюнле реакции яичников при обработке животных на 12 декь. Число овулящй при этом составило 15,6 на донора. Вариабельность била высокой при обработке животных на 8 день (57,2$) в значительно ниже при обработке животных на 10 и 12 дни (37,6 и 31,0?).

Установлено, что обработка животных ФСГ-п на 12 день цикла дает лучике результаты по общему числу извлеченных зародышей, Еорглаяьншг эмбрионов и о плодо творяелос тл яйцеклеток <табл. 4).

Процент реагирующих овец суперовулядаей на введение экзогенного гонадотропика, находился в зависимости от дозы препарата. При обработке препаратом ССГ-п в дозе с 14-16 иг среднее число овуляций было меньше, чем при применении ФСГ-п в дозе 23-25 мг £10,7 против 16,5). Показатель среднего числа зароди-шей на донора был также в пользу второй дозы {14,4 против 8,9).

Таблица 4

Результаты суперовуляиил к качество эмбрионов s зависамости от дня обработки

Лень обработки Показатель ■■ - ..........

а ю 12

Обработано овец

Реагировало суперовуляшей (ц-

Число овуляций на донора

Вариабельность (?)

Число зародышей на донора

в т.ч. нормальных

дегенерлрованных

нео плодо творенных яйцеклеток

12 7 7

10-53,3 6-35,7 6-35,7

13,7 12,7 15,6

57,2 31,0 37,6

10,3 10.9 14,8

4,4 7,3 11,8

2,1 2,0 2,8

3,8 1,6 0,2

Аналогичная зависимость отвлечена д в числе нормальных эмбрионов (табл. 5).

Таблица 5

Уровень суперовуляцкя а число зародыией у овец в эависзьюсти от дозы 5СГ-п

Доза ФСГ-п (мг)

Показатель ■■■ ■ -----------

14-16 23-25

Обработано овец II II

Реагировало сунеровулгщней а-8Г,8 10-90,9

Число овуляций на донора 10,7 16,5

Вариабельность (%) - 35,1 27,9

Число зародышей на донора 8,9 14,4

в т.ч. нормальных 7,2 9,8

дегенеркроващшх 0,9 3,6

неоплодотгорекыпс яйцеклеток 0,8 1,0

Оплодотворяемоеть яйцеклеток у овец зависит от времени

овуляции и шзкрцткя с учетом продолжительное тя охоты. Дрн длительности охот до .48 часов было наибольшее число овуляпай на донора (10,3), при продолжительности охоты до 24 часов толы» 9,9. Однако с увеличением продолоттельноетя охоты до 40 часов ■иабдвдалбеь. снижение еплодотворяеглостя яйцеклеток (69,£¡6 про. тив--С увеличением продолжительности охота также.проис-.•хйдзш5 рнйжение, числа зародызей' к' нормальных эмбрионов (табл, 6).

. ■■ . ' '" . . ' - \ ■ "' ' '

' Таблица 6 ■

Оплодотворяемость яйцеклеток и качество э?.(брионов 5 эайисиг.гости от продолжительности охоты к 1фатноста осеменения

Показатель Продолжительность охетц (час)

24 48

число 5еб0тнйх II 16

Овуляций на донора 9,9 10,3

Число осеменений 2 4

ОплодотБОряешсть (%) 76,1 СО р 3

Число зародьаей на донора 6,4 5,8

в т.ч. нормальных 4,4 3,3

дегенерированках 0,4 С,7

неошгадотворенннк яйцеклеток 1.0 1,8

3.2. Хирургическое извлечение змЗрнонов у овец

Получение зародышей у ьквотных-доноров является одной из БалиеЙпгсс составных частей обвей технологии трйнстгсгнтгишг эмбрионов и требует тщательного и безошибочного осуществления.

Результаты извлечения стеклянной ворсжкоЗ и катетером ВИЕа доказали, что цри использовании разных"приспособлений дла извлечения хирургическим методом у 100% животнаэс удается

вымыть зародызи. Однако по объему извлеченной жидкости и часлу заро^оей результаты бкла разлгчну. Применение катетера 31Еа позволило собрать 86,3,« среды црот:ш 81, при ее пользовании стеклянной эорояки (табл. 7).

Таблица 7

Результаты промывании рогов матки разнили катетерами

Приборы

Показатель стеклянная ворокка катетер

Оперировано овец 34 29

Использовано с седы дот поомьаажя (МЯГ 4590 3915

На промывание одного тавотного 135,0 135,0

Извлечено среды, всего 3750 3381

ка донора 110,3 116,5

на I рог магкл 55,1 58,3

Процент извлечения среды 81,6 86.3

Потеряно жшасости Ст.-т) 18,4 13,7

Овуляций на донора 10,0 10,6

Дэлучено зародшей на донора 5,4 8,9

Главным показателем оценки эффективности используемых приборов при хирургическом промиьанни рогов матки является число извлеченных зародшей от обаего числа овуляыпй. При извлечении эмбрионов с помось» воронки обработанных овец катквиьел и стандартным препаратом CEC, число зародщой было почти одинаковы.! <5,8 и 5,1 на донора). 3 группе животных, обработанных нативным препаратом CSC, процент извлечения зародыаей от общего числа оэуллей составил 68,2% 1фотяв 50, CS в группе животных, обработанных стандартным препаратом. 7 овец, обработанных лгофализированнш натгзяш препаратом СЕК я ФСГ-п эмЗрискн извлекала кзтетером 2С!£а. Процент извлечения от числа ощгляцай

в первой группе составил 65,9$, во второй груша - 84, (табл. 8).

Таблица 8

Эффективность извлечения эмбрионов у овец в зависимости от конструкции прибора и типа гонадотрощща

Стеклянная воронки Катетер БИЕа

Показатель _Гонадотропины

стандаотныЯ (фОЛЕЗТОН) яативный СЕК лиофялиэи-рованный . * СЕК ФСГ-п

Оперировано овец 17 I? 7 22 '

Члсло овуляций, всего 1.71 144 47 286

Извлечено зародышей, всего 86 98 31 242

Процент от числа овуляций 50,0 68,2 65,9 84,6

Число эародшэЙ на донора 5,1 ' 5,8 4,4 11,0

в т.ч. нормальных 2,2 4,8 4,3 7,5

Приведенные данные свидетельствуют, что эффективность извлечения эмбрионов у овец зависит от типа говадотропкна и в меньшей степени от конструкции приборов и полноты извлечения промывной жидкости.

3.3. Морфологическая оценка качества эмбрионов овец

Результаты морфологической опенки качества свежеполучен-ных эмбрионов у овец-доноров показали, что иэ общего числа 457 получению: зародышей 312 бьют нормальные (66,3?), 67 (14,7£) дегенерированнне и 78 (17,КС) неоплодотворенные яйцеклетки.

Установлено, что на 5-7 день извлечения встречаются эаро-

дней почти веек стадий развитая. Так, на пятка день после осеменения преобладают ранние а поздние мерулы (96,6£), .а-также, встречается зародшк до 16 бластошров, на. 6-й. день больше поздаих морул я ранних, бластошст (6Э.6£) при Минимальна'.! числе ранних морул, (5,6^), на седьмые сутки преобладают ранние-д... поздние-бластовдстц (4?,2%) а '24,ё£'бЛастоццсты,ббэ-.зо'ны лет-', лщида (табл.. б) ■ ■ ' - ' ■

' '• ■ ■ ' .' -•Таблица?;^.'"

1 . - ' Стгиий-'развЕ'Гйя ■эгФЕЙонов овегс в ■ ^^таг.Ъйга. ■ от Дня дзйлеченая

День Заело СТ: здкя развитая (п-%)

извлечения эмбрионов шрулы бластоплсты

ранние поздние ранние поздние без зоны

5 202 39-19,3 155-77,2 7-3,5

6 124 7-5,6 86-69,4' 25-50,2 4-3,2 2-1,6

7 53 5-5,4 10-18,9 16-28,3 10-18,9* 12-24,5

Качество зародышей имело некоторую связь с типом гонадо-тротпег, используемого для вызывания суперовуляцаи. Так, при обработке лнвотнюе'препаратом ФСГ-п морул отличного и хорошего качества было 41,а при обработке овец препаратом СЖК -54,455. При этом число удовлетворительных эмбрионов в первом и во втором случае было почти одинаковым (35,2? к 33,6%) соответственно. В числе непригодных эмбрионов для трансплантации разница была в пользу С5К. По качеству бластоцнст различий не наблшхалось и оно бшю почта одинаковым в обоях группах животных (табл. 10).

Отмечена тенденция понижения числа отличных а хороших эмбрионов с увеличением числа овулгщий. Так, при числе овуляций

Тайлпца 10

КачостЕо э?я5ргсонов овец в зависимости от типа гонадотропина

Гонадотрогкя

Качество эг.йри- ФСГ СЕК

онов морулы Сп-202) бластошюты (п-Ш ГЛ5!) бластотгасты Гп-65)

Отличные 5-2,4 1-9,2 1-0,9 10-15,4

Херсоне 79-39,2 6-5-1,5 54-53,5 39-60,0

Уяовлет-зопктель- 71-35,2 34-33,6 7-10,6

Условно-годные 3-1,5 - 2-1,9 -

£егенео:г— рованные 44-21,7 4-36,3 10-9,9 9-13,8

от 4 до 6 от.'сгтаих к хорош:» эг«3?;:оноз бшга 73,6^, от 17 до 22 - этот показатель с игрался до 20,Аналогичная зависимость про слежквает ся и ло числу удовлетворительных эмбрионов {табл. II).

Таблита II

Качество эмбрионов огец в зависетгасти от уровня суперо пуляют

Качеотзо эгйрпоков

Число — -----■ ■ ------- -----------------

овуляпиЯ етр0£Нв УД^^-. Э^озно- несгстхдоше

4-6 - 39-73,6 8-15,1 - 6-11,3

7-10 1-1,0 55-56,7 16-16,5 1-1,0 ' 24-24,8

11-16 ■ 6-4,2 46-32,4 31-21,8 2-1,4 57-40,2

17-22 4—3,3 25-20,5 48-39,4 - 45-36,8

23-36 6-14,0 13-30,2 9-20,9 2-4,7 13-30,2

3.4. Замораживание и отталванле з:.йрионов овец

В настоящее вреги не вызывает сошеная то положение, что замораживание биологических объектов требует строго определенных режимов охлаждения и криозгсщтньа сред (крнопротекторов).

Результаты криоконсераироваккя эмбрионов показали, что из 158 оттаянных эмбрионов 137 (ВОД1?) были нормальными и 31 (13,6л) дегенерированными. Почти равные результаты по качество-эмбрионов были получены при замораживааки их в пробирках и ампулах.

При низкотемпературном замораживают эмбрионов необходима защитная среда (крлояротехтор). Вдд криопротектора лиеет важное значение длят сохранения жизнеспособности эмбрионоз. Поэтому главной программой налей работы 6еяо определение влияния типа криопротектора на ялзнесгсособность эмбрионов после замораживания и оттаивания.

Установлено, что э?л5рноны овец, замороженные с кр по протектором глицерин после оттаивания имели больаий процент жизнеспособных, чем при замораяиваняи с криоцротектором ИСО (тайл. 12).

Таблица 12

Результаты эамораетвания и отта:эания эмбрионов овец

Показатель Пряктроте.угор-

_этяориоаов тсо глтгетген

Заморожено эмбрионов 204 66 138

Оттаяно эмбрионов 158 59 99

Из них (п-£): нормальных 127-80,4 45-76,2 82-82,8

дегенерировашшх 31-19,6 14-23,8 17-17,2

До заморааизания необходим строгий отбор эмбрионов по зх

качеству. Из общего числа 167 (.юрул и 41 ранних бластошст до замора-кивания были отличного и хорошего качества. После оттаивания число т. заметно уменьшилось и возрастала доля удовлетворительных и дегенер;фованных. Эмбрионы, оцененные как удовлетворительные нецелесообразно подвергать криохонсервированию, ибо послс оттакпакзк большой процент Сдо 80 ) кх оказываются непригодны:« для пересадки (табл. 13).

Таблица 13

Влияние качества и стадии развития эмбрионов до затора^пзащ!? на их жизнеспособность после оттаивания

Качество эмбрионов

До эат.гара-кльаяля Число после оттанэаная (п -%)

эмбрионов хороиие удовлетворительные непригодные

Морулн: отличные- 6 2-33,3 2—33,3 2-33,3

хорошие 96 43-44,8 46-47,0 7-7,2

удовлетворит ель нке 15 _ 3-20,0 12-80,0

Еластоцдсты:

отличные 3 2-66,7 - 1-33,3

хорошие 29 16-55,1 11-37,9 2-7,0

удовлетворительные . 9 - 2-22,2 7-77,8

3.5. Результаты пересадки задарожешо-оттаянныг эмбрионов овец

Всего было пересажено'127 эмбрионов 51 реципиенту и получено 47 ягнят, что составило 37# от числа пересаженных. В том числе от пересадки замороженно-оттаянных эмбрионов с крлоцро-тектором ДОСО получено 16 ягнят {35,5^) и криопротекторсм

глицерин 31 (37,8^). Общий процент суягноети от числа реципиентов составил 62,7%, в том числе по криопротектору Д1ЛСО -56,и глицерином - 65,75? (табл. 14).

Таблица 14

Цряегаляемостъ зачороженяо-оттачнн-д эг.йрлоыов овец

Показатель Число Краопротектор

эмбрионов ДОСО глицерин

Пересажено эмбрионов 127 45 82

Число реютиентоз 51 16 35

Суягных реципиентов 32 9 23

Процент от числа реципиентов 62,7 56,21 65,7

Окотилось реципиентов 31 9 22

Подучено ягнят 47 16 31

Процент от числа пересаженных эмбрионов 37,0 35,5 37,8

Для успеха получения суягности от пересаженных эмбрионов немаловажным является число эмбрионов пересаженных реципиенту. При пересадке одного эьйриона процент суягности составил 45.двух згбржжов - 56,3£; 3 и 4 эмбрионов - 75,СЙ (табл. 15).

С увеличением числа пересаленных эмбрионов многоллоднш овцам (романовская, финский ландрас) гфяяивляешсть ях увеличивается (2-3 эмЗриона). Пересадка эмбрионов больше 3-х на одного реципиента ведет к снижению их приживляетети (22,2$).

Таблица 15

Приживляемость зашроженко-оттаянннх эьйриоков в зависимости от числа пересаживаемых

Число эмбрионов

Показатель -

12 3 4

Число реципиентов II 16 16 8

Пересажено зародышей II 32 46 36' '

Суягных реципиентов 5 Э 12 6

Окотилось 4 9 12 б

Процент от общего числа реципиентов 45,4 56,3 75,0 75,0

Получено ягнят 4 13 22 3

Процент от пересаженных эмбрионов 36,3 40,6 45,8 22,2

4. ВЫВОШ

1, Усовершенствованный способ гормонального вызывания су-серовулящет у овец с использованием СЕК в сочетании с простаг-ландинами и биологически активными веществами (витамин "А" и "Б") обеспечивает индуцирование суперовуляцга у 85-89£ овец, при средиам числе овуляции 10,1-8,5 и нормальных эмбрионов до 4,8 на донора, Оптимальным временем гормональной обработки . препаратами СЕК является 12-й день эстральвого цикла.

2. Гипофизарньй препарат ФСГ-п дает возможность получать более стабильные результаты суперовулящш у овец. Процент реагирующих овец супероаулясаей находится в зависимости от дозы ФСГ-п. При дозе 14-16 аг реагировало судеровуляцией 81,

овец, 23-25 мг - 915?. Аналогичная зависимость наблюдается, в числе овуляций (10,7 и 16,5) и нормальных эмбрионов (7,2 и

9,8) на доаора. Оптимальным временем обработки овец гппофязарным препаратом является 10-12-Й день астрального цикла, предпочтительнее - 12-й день.

3.'Б исследованиях установлено, что хирургическая технология с применением ковше устройств обеспечивает вымывание зародышей у 100£ животных и получение до В4% зародышей от обцего числа овуляций. Эффективность хирургического извлечения эмбрионов^ зависит от конструкции приборов, полноты удаления промывной жидкости, тиса гормональных препаратов, используемых дай вызывания судеровуллции. Соотношение нормальных и дегенерзро-ваняых эмбрионов находится в прямой зависимости от дозы и типа гонацотропика, дан гормональной обработки в извлечений эиЗрзоков, функционального состояния яичникоз и степени супер-овулшии.

4. Замораживание и оттаивание в медленном резите с 'использованием криопротектора ДИСО в 1.5 молярной концентрашш я программных заморазеивателей сохраняет жизнеспособность

'*€,2% эмбрионов и обеспечивает суягность у 56,2% овец-рещшя-ентов. Замораяиванзе по ускоренному режиму и быстрое оттаивание с нриопротектором глицерина 1,4 молярной концентрации -52,8 и 65.7Й, соответственно. Продолжательность пребывания эм!рионов в низкотемпературной среде не оказывает существенного влияния на последующую их жизнеспособность после оттаиразшя и трансплантации. Этот показатель в знатлтельной мере зависит от качества а стадии развития змбриоеов перед ззморажизаняем.

5. Усовершенствованный хирургически способ пересадки эмбрионов овцам-реципиентам, ооновей которого лвляется метод вентральной лагаротемки с использованием приспособлений нашей конструкции дает возможность получать до 66л суягностей с

при^нвляемостьа зйморо.'ксянэ-от таякнпх эмбрионов до .40£ от числа пересаженных. Наиболее подходядима для хирургической пересадка является поздние морулы и бластоцпсты,

6. ¡ТРШОЕЗИИ

X, 3 целях понижения эффективности гормонального вызывания суперовуляцпи у озец-доноров амбриоиов предлагается способ получения. зародшей для трансплантанта путем включения в ойцу» схему гормональной обработки лросгагданди^оз г биологически активных веществ (витамина А а Е), обеспечявашзе яовшпение оплодотворяв-моста яйцеклеток и чпсда нор-лальних э;жЗрионоз. Для получения стабильных результатов с^серовуляцпи, одлодогворяемости яйцеклеток г вшсода нормальных эмбрионов целесообразно использовать, наряду с гияотГазарный гормон (ОСТ) в дозе 23-2Л" иг на ливотное яо четырехдневной схеме обработка.

2. хирургического выми-вамия предлагается универсальное устройство, обеелечихакеее максимальное извлечение зародышей а укенъоагщее степень траг.-лпрозакгя тканей эндометрия рогов матки.

Основное содержание диссертация опубликовано в слеяущих работах:

1. Использование метода трансплантация эубриоков в овцеводстве./ Сергеев К.И., .'¿азепная С.А., Шахов ИЛ., Смыслова Н.И., Бу-кароэа В.«., Тойскбаков П.// Доклады ВАСЗКИК. - 1384.- й 2.

- С. 28-31.

2. Сергеев Н.;:., ¡Лазепкгн С.А. Биотехника трансплантация эмбрионов. // - Овцеводство. - 1Ь87. - Л 2. - С. 36-40,

3. даэепкин С.А. .Технология трансплантация эмбрионов у овец. / Б>Ш1. научн. работ. - Выпуск 89. - Дубровада. — 1585. — С. 38-40.

- 24 - ,

4. Мазщкия С,А. Жизнеспособность эмбрионов овец после заг.гаражг-вааия в оттаивания а зависимости от качества и веда криопро-тектора» / Билл, научн. работ. - Выпуск 89. - Дубровину. -IS88..--C. 60-63.

5. Иатошпаскав рекомендации по криоконсервированию эмбрионов крупного рогатого скота, овец и кроликов. / Сергеев H.H., Мазешсин С Д., Ефремова U.H., Тарасик H.H. // - ДубрОЕдац, -IS87. - 23с.

6. Сергеев Н.И., й!азешшя С,А., Баранова .'Летодзчвсгле рекомендации по трансплантации эмбрионов у овец. - Дубровину. -I&33. - 43с.

Подписано к печати 27.01.1989 г. Зак. 517. Тираж 100 экз.

_Л ~ 33028._

ПМП ВИЖа