Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Получение исходного материала ячменя для селекции на засухоустойчивость

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Получение исходного материала ячменя для селекции на засухоустойчивость"

"о О Л

МИНИСТЕРСТВО НАУКИ - АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

I

Казахский научно-исследовательский институт

земледелия им. В.Р.Вильямса ^

»

На правах рукописи ]

ТЕРЛЕЦКАЯ НИНА ВЛАДИМИРОВНА

ПОЛУЧЕНИЕ ИСХОДНОГО МАТЕРИАЛА ЯЧМЕНЯ ДЛЯ СЕЛЕКЦИИ НА ЗАСУХОУСТОЙЧИВОСТЬ

06.01.05 "Селекция и семеноводство" 03.00.12 "Физиология растений"

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Алматы, 1996

Работа выполнена в отделе биотехнологии Казахского научно-исследовательского института земледелия им. В.Р.Вильямса в 1991-1994 гг.

Научные руководители:

кандидат биологических наук А. Р. Искаков , доктор биологических наук, доцент Б.С.Сариев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук.

профессор Е.1Н. Шаханов

доктор биологических наук, профессор Л.К.Мамонов

Ведущая организация: Казахский государственный национальный университет им. Аль-Фараби

Защита состоится 1996г. на заседании специа-

лизированного совета Д 55.05.01 при Казахском научно-исследовательском институте земледелия им. В.Р.Вильямса по адресу: 483133 Алматинская область, Каскеленский район, п. Алмалыбак, КазНИИЗ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " 1996 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор биологических наук л

£г .V сЯ^сЛЛ&Ъ Рамазанова С. Б.

Актуальность темы. В настоящее время перед селекционерами (азахстанз ьсе острее ставится вопрос о создании засухоустойчивых ^нотипов зерновых культур. Это направление в селекции предпола; -ает прежде всего выявление биологических-признаков, обеспечивавших наилучшее приспособление к природным условиям аридной зоны, юлучение исходного материала и выведение новых продуктивных сортов.

Основную роль в обеспечении общей полевой засухоустойчивости 1грают физиологические механизмы. Роль отдельных механизмов засу-соустойчивости. степень их влияния на продуктивность в засушливых условиях различны и мэгут меняться в зависимости-от типа засухи и (иологии сорта. Kar. правило, физиологическая основа засухоустой-швости Формируется в процессе создания сорта, при отборе матери-ив о высокой и стабильной по годам продуктивностью.- путем так (азнваемой косвенной селекции на устойчивость к засухе. В настоящее время селекционеры испытывают недостаток в хорошо изученном в ;изиологическом аспекте исходно;: материале для включения в селективные программы источников конкретных параметров засухоустойчи-шгли (Кумаков В. А., 1984; Коаушко 11. Н.1991).

С развитием биотехнологии, такие ее разделы как клеточная •-лг'кпня, сомаклональная вариация и гзплоидия ногут послужить хо-■-^■им дополнением традиционным приемам изучения механизмов засу-оустойчивости и ускоренного получения принципиально нового ис-однг'Го материала для селекции устойчивых и продуктивных сортов.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является олученне с помощью методов физиологии и биотехнологии исходного атериала для селекции ярового ячменя на засухоустойчивость.

В оя'.'и с этим для исследований Пыли поставлены следующие адячч:

-изучить связь отдельных физиолого-биохимических признаков прчтлеишт повреждений растений ячменя засухой и продуктив-

u'.TbKi;

-быягить срелк изучаемых сортообразцов ярового ячменя источ-ики а&'.'учоустоЯчивссш по отдельным физиолого-биохимическим притокам и ш комплексу с целью рекомендации этих образцов в качес-::t "схояного материала для селекции на засухоустойчивость;

■изучить связь между устойчивость» к осмотическому стрессу ылуат куль-тур и интактных растений;

-осуществить регенерацию растений ячменя из каллусов, индуцированных из незрелых зародышей различных генотипов;

- -получить методом "ЫДЬозшп" удвоенные гаплоиды ярового ячменя;

-оценить полученные сомаклональные и дигаплоидные линии на засухоустойчивость лабораторными методами с целью выявления образцов. устойчивых по ряду признаков, н рекомендовать их в качестве исходного материала для селекции.

Научная новизна исследований. Впервые в условиях Юго-Востока Казахстана проведена оценка сортообразцов ярового ячменя по комплексу физиологических параметров, влияниях на засухоустойчивость на клеточном и срганизменном уровне.

Выявлены физиологические признаки засухоустойчивости, (водоу-держивавщая способность флаг-листа и стабильность клеточных мембран), положительно коррелирующие с продуктивностью.

Показана корреляционная зависимость между устойчивостью к осмотическому стрессу каллусных культур и интактных растений.

Модифицирован для ячменя метод оценки засухоустойчивости проростков в рулонной культуре, пригодный для массовой оценки исходного и селекционного материала на начальных этапах селекции.

Методом "ЬШЬозиш" получены удвоенные гаплоиды ярового ячменя.

Полученные дигаплоидные и сомаклональные линии ярового ячменя оценены на устойчивость к засухе..

Практическая ценность работы. Лучшие сортообразцы, выделенные по ряду Физиологических признаков засухоустойчивости, рекомендуются в качестве исходного материала для селекции ярового ячменя на Юго-Востоке Казахстана.

Для -селекционных программ Юго-Востока Казахстана предлагается ряд Физиологических признаков, связанных с устойчивостью и продуктивностью ярового ячменя в условиях недостатка влаги: способность проростков к росту и накоплению биомассы в условиях индуцированной -засухи, их пролинообразующая способность, а также водоудерживакцая сп >собность и степень повреждения флагового листа засухой по изменению проницаемости плазмолеммы для электролитов.

Для дальнейшей селекционной опенки и использования в качестве исходного материала в отдел селекции ярового ячменя КазНКй земледелия им.В.Р. Вильякса переданы полученные нами дигаплоидные и

еомаклоналыше линии, имеющие ряд хозяйственно-ценных признаков, в том числе и устойчивость к недостатку влаги.

Установлена перспективность использования биотехнологичесвдс методов в селекции ярового ячменя на засухоустойчивость.

Апробация работы. Основные положения диссертации освещены в 10 научных работах. Результаты работы были доложены на Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов по актуальным проблемам интенсификации сельского хозяйства (Шортанды, КазНИИЗХ, 1993) и на.Международной конференции "Биология культивируемых клеток растеши! и биотехнология" (Алматы, 1993).

Структура и объем диссзртации. Работа изложена на 146 страницах машинописного текста. Она состоит из введения, 6 глав, выводов. практических рекомендаций для селекционеров. 2 приложений. Список литературы вшк"ает 231 источник. Текст иллюстрирован 22 таблицами-и 10 рисунками.

ОБЪЕКТЫ М МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объекты исследований

Объектами исследований служили различные по засухоустойчивости сортообразцы кормового и пивоваренного направления из питомника конкурсного сортоиспытания отдела .селекции ярового ячменя КазНИИ земледелия им. В. Р. Еильям'са. Все образцы по результатам предварительной полевой оценки были разбиты на группы богарного и орошаемого направления.

"Богарную" группу представляли сорта Днепровский 435 (31) и Донецкий 8. образцы 5/84-2. 1БД-22. 30/83-4, 93/80-3, М56/82-1, 173/83-17. 44/84-18, 4/84-17, 65/84-5, 13/80-9. ' .

Сортообразцы орошаемого направления были представлены сортом Эдесский 100 (Зи. и номерами 93/80-1; 5/84-6, 44/81-68,. 33/80-18. Г1344/1355, 30/83-1. '

Для получения каллусных тканей изолировали незрелые зародыши исследуемых образцов, выращенных в полевых условиях (1991-1992гг).

Для получения удвоенных гаплоидов использовались восемь гибридных комбинаций Г2. полученных из отдела селекции ячменя КазНИИ земледелия им.В.Р.Вильямса:

Г1344/1355 х Одесский 100; 44/81-68 X Одесский 100; Одесский 100 х 93/80-3; Одесский 100 х 5/84-2:

Одесский 100 х 44/81-68; Г1344/1355 X 5/84-2; Одесский 100 х Г1344/1355; 5/84-й X Г1344/1355.

Метода исследований

1. Оценку относительной засухоустойчивости проростков ярового ячменя проводили модифицированным нами методом рулонной культуры. За основу были взяты методики М.Н.Фирсовой и Е.Н.Попова (1982). В.И.Полонского и И.И.Калышевской (1987). Э.Л.Гончаровой (198ft). Ю.Ф.Осипова (1908). Н.Н.Кожушко и В.М.Царевской (1988).

В отличии от вышеназванных методик, предлагаема;! модификация базируется не на "показателе сосушеп силы семян, г нэ свойствах молодого растения д. в частности, первичной корневой системы. Использование рулонов - позволяет наглядно оценить посюеую реакцию проростков на водный дефицит, легко измерить длину проростка и зародышевых корешков, а также при необходимости подсчитать их число, что дает более полную характеристику развития молодого растения в стрессовых условиях. Метод технически прост и дает возможность . проводить оценку устойчивости к осмотическому стрессу одновременно большого набора еоргообразцов.

В одной .серии огштов определяли длину корешков, длину первого листа проростков, абсолютно сухую массу корневой и ли/ллоле-бельиой части, корнеобеспеченность проростков, снижение роста н степень , депрессии накопления биомассы проростками е условиях индуцированного осмотического стресса.

2. Выживаемость проростков при сильном водном дефиците определялась- по методике Кожушко КН. и др.(1937).

3. Оценка осмоустойчивости проростков и каллусов ярового ячменя по накоплению свободного пролина проводилась по методу Bates Z.C. et al. (1973) в модификации А. А.Курьянсвич (1991).

Экспериментальным путем били подобраны соответствующие концентрации раствор j сахарозы (проростки) и полиэтиленгликоля (ПЭГ 6000) (каллусы), наиболее дафйерешп'рувдие сортоебразцы по устойчивости к осмотическому стрессу. Концентрация сахарозы составила 15,8%. концентрация ПЭГ в пптагедьиоп среде го*.

Расчет содержания свободного пролина проводили ¡:о 4-сриуле

В.Н. Андрющенко и др. (1981).

Оценку пролинообразувдей способности растений в фазу колошения проводили с использованием изатин-бумажного индикатора нетеплом Ю.Ф. Осипова (1988).

4. Общая оводненность и водоудеркивающая способность листьев оценивались в одной серии опытов по методике Н. Н. Кожушко (1S76).

5. Степень повреждения мембран протоплазмы при обезвоживании и перегреве по изменению выхода электролитов из листовых пластинок определялась по методике Р.А.Бородиной (1S87).

Расчет степени повреждения проводили по формуле Claree J.M. et al.(1982).

6. Для получения каллусной культуры и регенерации растений использовали методику А.К.Гапоненко и др.(1985).Базовой питательной средой служила среда В5 по Гамборгу (Gamborg O.L..Evellng D.F.. ,1968).

7. Для получения препаратов пероксидазы использовали каллусы, культивировавшиеся на среде Гамборга В5 (с добавлением ПЭГ 6000 в концентраций 10,15,20 и 30% и без осмотика), а также незрелые зародыши. Ткани гомогенизировали трис-глициновын буфером (рН 8,3) в течение 1ч при 4° С. Электрофоретаческое разделение проводили в щелочной системе по B.J. Davles (1964). Относительную активность изопероксидаз расчитывали по Е.Н. Liu (1973).

8. Удвоенные гаплоиды ячменя получали по методике С.Ф. Лукь-янюк и С.А.Игнатовой (1988).

Э. Для идентификация полученных сомаклональных и дигаплонд-ннх линий и их родительских форм проводили электрофорез гордеянов по Ю.В. Перуанскому с сотр.(1985).

10. Для обозначения растений-регёнерантов использовали номенклатуру П.Ларкина с соавт. (Larkln P.et al. ,1984). Растения, регенерировавшие из каллусной культуры, обозначали SC1. а потомство, полученное от них - SC2, SC3 и т.д.

Для нумерации дигаплоидов использовалась аналогичная номенклатура De Раере R. et al. (1981). Поколения-дигаплоидов обозначались соответственно DH1, DH2, DH3.

Величина признаков, влияющих :„чна продуктивность растений, щенивалась по результатам структурного анализа. Рассматривались ;ледующие показателе высота растений, длина главного колоса, iacca 1000 зерен, а также длина колосонесущего междоузлия и открытой его части. - '

Все физиологические и биохимические эксперимента проводились не менее чем в трех лабораторных повторностях, а каждый вариант опыта включал 3-4 биологических повторное™.

il. Статистическая обработка полученных данных проводилась по Б.А. Доспехову (1973).

Корреляционный анализ малых выборок проводился с использованием рангового коэффициента корреляции Кэндалла (Терентьев [I. В., Ростова И.С.. 1977).

Для установления степени сходства-различия между генотипами по показателям засухоустойчивости и продуктивности, а также между группами изофернэнтов пероксидазц каллусных тканей, применялся кластерный анализ. Для кластеризации использовался в качестве критерия миниму!.! произведения между коэффициентами корреляции и евклидовыми расстояниями Д (1-R). Цифровой материал был обработан на компьютере IBM PC/AT с использованием пакета программ "static'', "disp", "Master".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЕ

ИЗУЧЕИВЕ ШИОЛОГИЧЕСИКХ НЕХШЗИОВ ЗАШОУСТОЙЧЙБОСТН ЯРОЗОГО ЯЧМЕНЯ ИА РАЗНЫХ .ЭТАИАХ ОНТОГЕНЕЗА Реакция проростков ячменя 5»а искусстиеннув засуху. Способность растений на начальных этапах своего развития использовать влагу"в условиях недостаточного водоснабжения - важный показатель. обеспечивающий его дальнейшее развитие и возможность адаптироваться к стрессам на более поздних этапах онтогенеза. В качестве показателей засухоустойчивости анализировали такие параметры как ростовая реакция проростков б условиях водного дефицита (сахароза. 15,8% г пи 14 атм, 72ч). их способность к накоплению биомассы и корнес •„■спеченность, а также выживаемость после 24-часового подсушивания, что дало возможность составить начальное представление об устойчивости изучаемых сортообразцов. По этим показателям были выделены сортообразцы богарного направления 65/84-5. 30/84-4. 93/80-3. Из сортообразцов поливного направления выделился номер 5/84-G.

Накопление свободного пролина в условиях осмотического стресса, в целях более глубокой диагностики засухоустойчивости и выявления связи пролинообразующей способности с уровнем устойчив вости молодых растений ячменя к засухе, нами был проведен эксперимент на стадии 10-дневных проростков. Наиболее высокой пролино-образувщей способностью при этом обладал! сортообразцы Одесский 100, 65/84-5, 30/83-1, 93/80-3, 5/84-6 и 30/-3-4. Наименьшим накоплением пролина характеризовались сортообразцы поливного направления 93/80-1 и 93/80-18. Результаты, полученные в этом опыте имели достоверную положительную корреляционную связь с результатами определения относительной засухоустойчивости проростков в рулонной культуре. Коэффициент корреляции по различным группам признаков составил от 0.42* до 0.70**.

У восьми сортообразцов ячменя оценивалась пролинообразующая способность в фазу колошения на полевом материале . по изатин-бумажному индикатору. Наиболее высокой пролинообразущей способностью в Фазу колошения отличалась сортообразцы 93/80-3, 5/84-6 и 30/83-4. Они же характеризовались и высоким накоплением пролина на стадии проростков, а также высокой засухоустойчивостью по ряду других параметров. В данном случае кы можем судить о высокой про-линообразующей способности как об одном из показателей лучшей адаптации к неблагоприятным условиям среды.

Проницаемость клеточных мембран для электролитов и водоудер-кивающая способность листьев. Проницаемость протоплазмы для электролитов изучалась у 10 различных по засухоустойчивости сортообразцов ярового ячменя ( Днепровский 435, Одесский 100, 35/84-5, 93/80-3, 173/33-17. 30/80-4. 93/80-1, П344/1355, 5/84-6.93/80-18) в фазы трубкования Тподфлаговый лист) и колошения (Флаг-лист).

В фазе выхода в трубку показатель стабильности мембран оказался менее информативным, чем в фазе колошения. Корреляционные ;вязи с элементами продуктивности практически отсутствовали. В разе колошения корреляционная связь повреждаемости мембран при действии обезвоживания с показателем массы 1000 зерен составила -0.78***, с массой зерна с главного коло'са г- -0,57**.

Полученные нами данные подтвэрадают более высокую стабиль-шеть клеточных мембран у более засухоустойчивых сортообразцов, таких как 30/83-4, 93/80-3, 65/84-5 в фазу колошения на протяже-ши двух лет эксперимента.

Стабильность клеточных мембран при действии высокой температуры в.среднем по годам исследований была выше у ссртообразцов, предназначенных для орошаемого возделывания, что говорит о необходимости учитывать этот:показатель при селекции сортов ярового ячменя для условий орошения.

Нарушение структур протоплазмы клеток под воздействием осмотического стресса изменяет состояние внутриклеточной воды, ее подвижность и, как внешнее выражение, водоудераивающую способность листьев. Признак водоудерживающей способности считается важным для шогих засушливых зон. Наши опыты подтвердили существенную роль водоудерживающей способности листьев ярового ячменя в формировании элементов продуктивности. Обнаружена значимая положительная связь водоудерживающей способности с массой зерна с главного колоса и кассой 1000 зерен (г- 0,57** и 0.69** соответственно). В фазу колошения была отмечена существенная отрицательная .корреляция между водоудерживающей способностью и проницаемостью протоплазмы для электролитов: г» -0,67** в 1992 году и г* -0,83*** в 1993 году, что" согласуется с литературными данными (Кожушко H.H. ,1991). , "

Высокой водоудерживающей способностью на протяжении двух лет эксперимента характеризовались сортообразцы 30/83-4, 93/80-3 и 65/84-5.

Таким образом, результаты наших экспериментов говорят о наличии положительных связей между параметрами водного режима и продуктивностью ярового ячменя и значимости изучаемых параметров для зоны Юго-Востока Казахстана.

С целью более полной характеристики изучаемых сортообразцов и выявления источников высокой засухоустойчивости и продуктивности, нами был использован кластерный анализ. Результаты кластеризации позволяют разделить изучаемые сортообразцы на три группы: 1 - сочетающие высокую'засухоустойчивость с высокой продуктивностью (93/80-3, 30/83-4. 65/84^5 и 5/84-6), отличающиеся также и высокой адаптационной способностью к условиям года; . 2 - сортообразцы. имеющие среднюю Устойчивость к, засухе и (или) невысокую зависимость урожайных параметров от изучаемых показателей водного режима (Днепровский 435, 173/83-17 И Г1344/1355); 3 - сортообразцы поливного направления," имеющие слабую устойчивость к недостатку влаги (93/80-1. 93/80-18 и Одесский 100)(рие.1).

1992г.

1993г.

Д(1-Ю

12 11

12

10

6 5 4 3

*

5 4 3 2

х

IL

1

#

-■ -- -Г±—\___

5 10 4 1 6 7 а 3 2 9

сортообразцы

57 10 4 1682 9 3

Рис.1. Кластеризация сорггюобразцов ярового ячменя по признакам засухоустойчивости и продуктивности, 1. Днепровский 435; 2. Одесский 100; 3.93/80-1; 4,65/84-5; 5.93/80-3; 6.Г1344/1355; 7.5/84-6; 87173/83-17; 9.93/80-18; 10.30/83-4.

СОМАКЛСИАЛЬИАЯ ВАРИАБЕЛЬНОСТЬ 5ШЕВЯ Н ВОЗНОШОСТЬ ЕЕ ЙСПОЛЬЗОВАШШ В СЕЛЕХЦЯИ НА ЗАСУХОУСТОЙЧИВОСТЬ Каллусогенез и регенерация растения. Для решения многих вопросов клеточной биологии, генетики и физиологии растений, в том числе и вопросов устойчивости растительных организмов к экстремальным факторам среда, в настоящее время широко используется метод культуры клеток In vitro. В связи с этим, для успешного получения сомаклональных вариантов с полезными для дальнейшей селекционной работы признаками, необходимы идентификация и скрининг генотипов, обладающих высокой степенью каллусообразования и регенерации In vitro.

Нами изучались процессы каллусогенеза и рёгенерации у 20 сортообразцов ярового ячменя. Способность к каллусогенезу проявили все генотипы, изучаемые нами на протяжении двух лет. Отмечены достоверные различия между ними по этому признаку. Частота каллусогенеза колебалась от 7.3 до 93% в зависимости от генотипа и значительно варьировала по годам. Высокой частотой каллусогенеза

характеризовались сортообразцы 93/80-3; 65/84-5; 30/83-4; Г1344/1355, Одесский 100. Сравнительно низкую способность к кал-лусогенезу проявил сортообразец 5/84-2 (18.90...35.97%). Каллус-ные линии всех генотипов отличались по форме, структуре и интенсивности роста. Наиболее интенсивный рост каллусов наблюдался у сортообразцов Г1344/1355, 93/80-3. Одесский 100. Наибольшее число каллусов, способных к регенерации растений, отмечено у сортообразцов Г1344/1355, 65/84-5. 4/84-17, 44/81-68. Максимальное число регенерантных проростков в 1992 году нами было получено у генотипов 65/84-5 и 44/81-68, в 1993 году - у сортообразцов Г1344/1355, 4/84-17 и 44/81-68. У генотипов 1БД-22, 13/80-9 и 44/84-18 регенерацию подучить не удалось.

Таким.образом, влияние генотипа на интенсивность каллусоге-неза и регенерации-растений не вызывает сомнений. Корреляционной связи между частотой каллусогенеза и способность» к регенерации растений отмечено не было. Но среди изучаемых сортообразцов выделены' генотипы, сочетающе хорошую способность и к каллусогенезу. и к регенерации растений, такие как Г1344/1355, 65/84-5. 44/81-68. 93/80-18, 173/83-17 и другие. Эти сортообразцы отобраны для дальнейших исследований.

Изучение ,расте:гкЯ~регенераитов ко количественным признагсам и паранотраи устойчивости к засухе.Проведенные исследования показали. что сомаклоналыше - линии в основном имеют больший размах изменчивости количественных признаков, чем исходные формы как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения значений признаков. Соотношение этих двух изменений зависело от генотипа и изучаемого признака. Так, например, у линии БТ-3 (исходная форма 93/80-18) изменчивость по всем параметрам была направлена в сторону уменьшения значений, а линия БТ-6 - напротив, несколько превосходила исходную форму 65/84-5 по многим показателям (табл.1).

Уровень генетического разнообразия изучаемых вариантов сравнивали по коэффициентам вариации. Коэффициенты вариации у сомак-лональных линий всех сортообразцов были как правило выше, чем у растений исходных б ом. Наибольшим варьированием характеризовался признак "масса зерна с главного колоса". Регенеранты генотипов 93/80-18 и 173/83-17 отличались наибольшими коэффициентами вариации этого признака.

8 качестве биохимического критерия генетической стабильности в данном эксперименте использовались гордеинн - запасные белки

Таблица 1

Статистические параметры привнакоБ урожайности и засухоустойчивости регенерантов ЗС2 (Р) и растений исходных форм (К)

Статисти- 1 ' I Высота I Ялика 1 •!Число 36 - Масса зерна | Общая ВУС,

ческие 1 растений. | главного Iрен с глав- с глазного | оводненность, X

параметры 1 см 1 1 колоса,см |ного колоса,шт 1 колоса,г I I 7.

- 65/84-5 (X)

Х- + Зх 61,18 + 1,21 10,36 + 0,31 24,90 + 0,57 1,27 + 0,08 70,60 + 0,50 42 50 + 1 80

V + ЗУ 6,27 + 0,31 9.37 + 0,47 7,20 + 0,36 19,19 + 0,95 2,40 + 0,10 13,30 + 0 70

пределы 53,50 - 67,50 8,50 - 11,50 '22,00 - 23,00 0,95 - 1,70 68,10 - 74,80 36 40 - 51 90

- * ВТ - 5 (Р)

X £ Зх 60,35 + 2,92 • 10,95 + 0',44 24,30 + 0,37 1,30 + 0,05 67,80 + 0,90* 45 40 + 3 10

V + ЗУ • 15,87 + 0,79* 12,63 + 0,63* 11,32 + 0,56* 12,03 + 0,60* 3,00 + 0,30 15 10 + 1 50

пределы 57,00 - 68,00 9,00 - 13,00 20,00 -ВТ - б (Р) 28,00 1,10 - 1,60 66,20 — 70,50 37 90 52 20

К + Зх 64,30 2,00 11,90 г 0,45* 26,20 + 1,15 1,43 + 0,09 69,00 + 0,40 47 00 - 4,80

V + Бу 9,74 + 0,49* 11,35 + 0,59* 13,91 + 0,69* 18,80 + 0,94 1,43 + 0,10* 22 80 + 2 30

пределы 52,00 - 73,00 9,00 - 13,50 18,00 - 31,00 1,00 ~ 1,75 68,10 - 70,40 37 60 - 55 50

* --разница достоверна при 0,05 ** - разница достоверна при 0,01 *** - разница достоверна при 0,001

ячменя. Установлено, что электрофоретические спектры гордеинов всех регенерантных растений SC2 трех исследуемых сортообразцов не отличались от контроля.

Преследуя цель выявить линии регенерантов. отличающиеся лучшей устойчивостью к засухе, чем исходные формы, мы проводили анализ растений на корню по показателям водного режима - общей овод-ненности и водоудерхзшающей способности флагового и подФлагового листьев в фазу колошения. Средние значения оводненности и водоудерживающей способности растений-регенерантов в большинстве случаев были ниже средних значений исходных форм. Достоверным снижением водоудерживающей способности характеризовались линии БТ-4 (65/84-5), БТ-1 и БТ-2 (173/83-17). Небольшое превышение контроля по данному параметру наблюдалось у линий БТ-5 и БТ-6 (65/84-5). У линии БТ-5 при этом наблюдалось достоверное снижение общей оводненности листовых цластинок. Так как увеличение водоудерживающей способности при завядании и большой потере воды - часто пассивный • процесс, то снижение оводненности листьев в данном случае говорит. и о понижении устойчивости к засухе. "Активным" считается увеличение водоудерживающей сйособности без существенного снижения оводненности,. когда в растении происходит перераспределение форм воды в сторону более прочно связанных (Бородина P.A..1987; Кожуш-КО H.H., 1991).

Е целом, регенеранти отличались большим размахом варьирования параметров засухоустойчивости по всем линиям.

Проведенные исследования позволяют говорить о том. что рас-тения-регенеранты, полученные в культуре незрелых зародышей ячменя. имеют широкий спектр варьирования количественных признаков и параметров устойчивости к засухе.

Выделенная при изучении сомаклонов в SC2 линия БТ-6. несколько превосходящая исходную форму 65/84-5 по урожайным параметрам и имеющая хорошую устойчивость к. засухе, может быть рекомендована нами для дальнейшего использования в селекционной работе.

Способность каллусов к росту и некоторые механизмы адаптации в условия?. csHOWiCKoro стресса.. В процессе получения спонтанных сомаклональных вариантов положительный результат - как правило случайное явление. Преимущества сомаклональной изменчивости проявляются в наибольшей степени в том случае, если испытания и отбор генотипов ведутся In vitro с использованием селективных сред. При этом скрининг образцов In vitro возможен лиаь при существом

нии корреляции между ответом на засуху у растений в природе и ответом клеточных культур в экспериментально созданных условиях.

С целью имитации эффекта засухи In vitro нами использовался ПЭГ 6000 в концентрациях 10, 15, 20 и 30%. Контролен служила биомасса каллусов, культивировавшихся на среде без осмотика. На протяжении эксперимента наблюдалась общая тенденция снижения биомассы каллусов с возрастанием концентрации ПЭГ в питательной среде. Однако, на всех концентрациях каллусы засухоустойчивых сортообразцов давали значительно больший прирост биомассы, чел каллусы сортообразцов, менее устойчивых к водному стрессу (рис.2).

концентрация ПЭГ,.? Рис.2. Накопление биомассы каллусаяи ячменя на средах с различные концентрациями ПЭГ 6000. 1.30/83-4; 2.93/80-3; 3.93/80-1; 4.Одесский 100.

Возможно, что именно способность к росту, накоплению биомассы каллусами наиболее точно отражает степень осмоустойчивости изучаемых образцов, так как данные, полученные при 20% концентрации ПЭГ-6000 в среде, которая оказалась наиболее дифференцирующей генотипы по устойчивости к осмотическому стрессу, достоверно коррелировали с показателями, полученными при проведении нами физиологической оценки засухоустойчивости интактных растений на разных этапах онтогенеза (рис.3). Выявленные корреляционные связи подтверждают возможность тестирования засухоустойчивых генотипов In vitro.

1.Прирост каллусной биомассы,% к контр.

2.ВУС (шруОкоеание).Х.

3.ВУС (колошение),%. ]* 4.Стабильность мембран протоплазмы, Ж.

5.Масса 1000 зерен.г.

6.Масса зерна с главного колоса, г.

7. Прирост корешков в растворе сахарозы. %.

8. Выживаемость проростков. %.

Рис.3. Корреляционная связь между различными параметрами устойчивости к засухе и элементами продуктивности ярового ячменя.

Для работ по клеточной селекции необходимо знание механизмов, обеспечивающих устойчивость растительной клетки к водному стрессу, основных ключевых реакций в ней, определяющих адаптацию.

Поэтому, исследования накопления свободного пролина каллус-ными тканями в условиях осмотического стресса представляют определенный интерес для снижения отрицательных реакций растительных организмов на экстремальные воздействия окружающей среды.

В ходе наших экспериментов было установлено, что изучаемые генотипы ярового ячменя значительно различались по содержанию свободного пролина. Наибольшее в процентном отношении к контролю накопление пролина было у каллусов засухоустойчивых сортообразцов (рис.4).

Интересно отметить также тот факт, что отдельные каллусы сортообразцов 30/83-4 и Одесский 100, характеризующиеся высоким содержанием пролина (в абсолютных значениях) как в контрольном, так и в опытном вариантах, отличались морфогенной структурой и оказались способными к побегообразованию и ризогенезу на среде, содержащей 20% ПЭГ 6000, что также говорит в пользу высокой про-линообразующей способности как показателя устойчивости к осмотическому стрессу. К тону же в стрессовых условиях накопление свободного пролина каллусами положительно коррелировало с накоплением свободного пролина 10-дцевными проростками (1 и 2 недели куль--тивирования г» +0.6**, 3 неделя г= +0,8***), что указывает на общность основных механизмов устойчивости на клеточном и организ-

менном уровнях и о пригодности показателя пролинообразующей способности каллусов для характеристики генотипов ярового ячменя по признаку засухоустойчивости.

Рис.4. Дина/,ша накопления свободного пролит каллусами ячнет. 1. Днепровский 435; 2.93/80-3; 3.30/83-4;-4.93/80-1; 5. Одесский 100.

Стрессовые реакции при перенесении каллусных тканей на среду с повышенным осмотическим давлением могут активировать пероксида-зу. Показано, что электрофоретический спектр изопероксидаз зародышей проще по сравнению с каллусами, что согласуется с литературными данными (Аскарова H.A. и др.. 1908; Реггеу R, et al.,1989), отмечающими увеличение ферментативной активности клеточных культур по сравнению с частями исходных растений. Видимо, замедление ростовых процессов в условиях осмотического стресса также отражается на изозимном спектре каллусов, пассированных на среду с добавлением .ПЭГ 6000. спектр пероксидаз каллусов в условиях осмотического стресса несколько упрощается. Влияние-же различных концентраций ПЭГ и длительности эксперимента'сопровождается в основном количественньи-ш изменениями в активности отдельных изозимов.

Различная кластеризация изопероксидаз каллусов в условиях контрольного и опытного вариантов (рис.5) свидетельствуют о неоднозначной роли отдельных компонентов, в условиях осмотического

стресса и о важности фермента для нормального развития клеточных культур.

Рис.5. Кластеризация изоформ пероксидазы каллусов ячменя в условиях осмотического стресса (а) и контроле <б).

Выделение оскоустоЯчивых форм In vitro. Современные селекционные программы часто направлены на выделение In vitro клеточных линий, толерантных к различным стресс-факторам. При наличии корреляционных связей, рассмотренных нами выше, это представляется вполне реальным. В большинстве случаев, клеточные культуры в присутствии Стресс-агента растут хуже, чем на обычной ергде, и с возрастанием концентрации ПЭГ рост и регенерационная способность каллусов пропорционально снижается. В течение месяца культивирования визуально различались четыре типа каллусов: I - каллусы практически не растущие, некротизирующие; II - каллусы медленно растущие, водянистые, грязно-белого цвета; III - каллусы умеренно растущие, плотные, светло-желтые, морфогенетические и IV - интен-

сивно растущие каллусы. Отдельные иорфогенетические каллусы всех сортообразцов были способны It регенерации растений (таблица 2).

Таблица я

Морфогенез и регенерация In vitro различных по засухоустойчивости генотипов ярового ячменя при осмотическом стрессе (ПЭГ-0000. 20%)

-1-1 --1-

Генотип I Всего | Количество МК | Количество полученных j | i регенерантоЕ

каллусов. |-1--1-г

ит i шт I % I шт !

_1_I_1_1_

Днепровский 435 39 17 43.6 + 0.08 5 ' 12.8 ±0.05

Одесский 100 , 46 15 32,5 + 0,07 2 4.3 + 0.09

93/80-1 50 20 40.0 + 0,07 3 6,0 + 0,03

93/80-3 ' 50 18 36.0 + 0.07 3 6.0 + 0^03

30/83-4 46 20 43.5 + 0,07 8 17,4 + 0,06

Наибольшей способностью к регенерации при осмотическом стрессе характеризрвались засухоустойчивые генотипы 30/83-4 и Днепровский 435. наименьшей - сорт Одесский 100, что согласуется и с литературными данными о зависимости результатов клеточной селекции от генотипа донорных растений (Тучин C.B., 1993).

Показано, что при отработанности методов регенерации растений из каллусов, подвергнутых несткому осмотическому стрессу, выделение сомаклональных вариантов, толерантных к засухе является вполне реальным.

РЕЗУЛЬТАТЫ ГАПЛОИДНОЙ СЕЛЕКЦИИ

С НСП0ЛЬ308А!ШЕМ ГАШШИРОЯШСЕРА В совместной работе с КиргНИИ земледелия на)«! получены удвоенные гаплоиды по восьми гибридным комбинациям F2, в которых задействованы изучаемые перспективные сортообразцы селекции КазНИИЗ им. В. Р. Вильямса. ' . •

Установлено, что разные гибридные комбинации имели различную степень скрещиваемости с H. bulbosum. Частота завязываемости колебалась от 35 до 67%. Гибридные зародыши, эксплантированные на питательную среду Р8 (модиф. Гамборга В5). сравнительно легко

прорастали. Частота прорастания зародышей составляла 8-40% в зависимости от генотипа. Хромосомы полученных гаплоидов удваивали методом вакуум-инфильтрации с использованием колхицина. Всего получено Л2 удвоенных гаплоидов, наилучший результат наблюдался по комбинации . Г1344/1355 х Одесский 100 - 4 удвоенных гаплоида. В целом эффективность метода зависела от завязываемости гибридных -зерен, их способности прорастать на питательной среде и выживаемости гаплоидных растений во время колхицинирования (рис.6).

Выжившие дигаплоиды были размножены в теплице и поло. Биохимическая идентификация показала стабильность спектрального состава гордеинов изучаемых .пиний на протяжении трех поколений, что подтверждает гомозиготность полученного материала. Следует отметить, что дигаплоиды двух комбинаций (Г1344/1355 х Одесский 100 и 44/81-68 х Одесский 100) имели электрофоретические спектры, идентичные спектрам материнских сортов . Дигаплоиды других комбинаций содержали в спектрах гордеинов компоненты обоих родителей.

Для определения селекционной ценности полученных дигаплоид-ных линий DH 3 был проведен структурный анализ с применением индекса интегральной оценки (ИИ0,%). который расчитывали по средним показателям элементов структуры урожая дигаплоидных линий относительно родительских форм. Индекс интегральной оценки варьировал по высоте растений от 91,3 до 116,0%, по длине главного колоса от 85,3 до 129,6%, по числу зерен в колосе от 82,4 до 121,0%. по массе зерна с колоса от 84,8 до 122,7% и по массе 1000 зерен от 83,2 до 124,8%. При этом, в комбинации Г1344/1355 х Одесский 100 практически по всем показателям дигаплоидные линии были на уровне или лучше, исходных родительских форм. У линии ДГ-26 (44/81-68 х, Одесский 100) значения всех изученных параметров были ниже родительских. а по остальным комбинациям наблюдалось варьирование индекса интегральной оценки.

Для определения засухоустойчивости дигаплоидных линий использовались такие параметры как общая оводненность и водоудержи-вающая "способность листьев (флаг + подфлаговый" лист), а также выживаемость проростков в условиях водного дефицита. Использование физиологических методов позволило составить предварительное мнение об устойчивости полученных, дигаплоидов к засухе на разных этапах- онтогенеза (таблицам 3). Были отмечены линии как с положительной, так и с отрицательной трансгрессией исследуемых признаков. Применение индекса интегральной оценки позволило выделить

Рис.6. Получение дигаплоидоа ячменя с использованием гапхспродюсера 1. Прорасжлие гаплоидного зародыша; 2. Гаплоида,-;] регенераит; 3. Удвоенный гагигозд

Интегральная оценка продуктивности и засухоустойчивости диг&тлоидных линий ( DH 3 )

Таблица 3

Линия, сорт

Индекс интегральной оценки.% -1-1-

Комбинация | Высота |Число зерен) Масса зерна 1 Масса | ВУС |Выживаемость [растений | в колосе |с г.*. колоса Ц000 зерен|листьев| проростков

ДГ-б Г 1344/1355х 112,3 111,9 113,3

ДГ-15 х ОдесскийЮО 108,7 111,1 118,1 44/81-бЗх

ДГ-26 хОдессккй 100 91,3 82,4 34,8 Одесский 100х

ДГ-27 х 93/80-3 108,7 98,8 106,3 Одесский 100х

ЯГ-34 х 5/84-2 ' 116,0 110,5 122,7

ДГ-38 Одесский 100х 109.8 103,3 111,1

ДГ-39 X 44/81-68 99.9 89,1 98,0

118.4

110.5

109,5

122,1 124,8 118,5

123.5 202,2

151,2

53,0

66,2 126,4 118,0

106,2

103.2

117.3 116,5

107,0

116.4 115,3

линии ДГ-6 и ДГ-15 (П344/1355 х одесский 100), ДГ-26 (44/81-68.X Одесский 100), ДГ-38 и ДГ'-ЗЭ (Одесский 100 х 44/81-68), отличающиеся лучшей, чем родительские формы устойчивостью к засухе пи комплексу признаков.

Главная задача селекции зерновых культур в засушливых регионах состоит в достижении оптимального сочетания высокой потенциальной продуктивности и -засухоустойчивости. Причем, нем шдаз засухоустойчивость. тем меньше мансов компенсировать ее за счет высокой продуктивности (Кожушко Н.Н..1990). Анализ физиологических параметров и элементов структуры урожая, проведенный нами, показывает, что среди полученных дигаплоидов есть линии, несущие в себе как признаки высокой засухоустойчивости . так и хорошие показатели продуктивности в полевых условиях - ДГ-6 и ДГ-15 (комбинация Г1344/1355 X Одесский 100), ДГ-38 ц ДГ-39 (комбинация Одесский 100 х 44/81-68).

Таким образом.' данные исследований подтверждают эффективность использования удвоенных гаплоидов для выявления ценных для практической селекции, в частности селекции на засухоустойчивость генотипов.

ВЫВОДЫ

1. Изученные сортообразцы ярового ячменя различаются по ряду физиолого-биохимических особенностей, которые обуславливают устойчивость к недостатку влаги на клеточном и организменном уровнях.

2. Корреляционный анализ связи показателей урожайности с физиологическими параметрами засухоустойчивости показал значимость признаков стабильности клеточных мембран и водсудерживающей способности листьев в фазу колошения для сортообразцов ярового ячменя на Юго-Востоке Казахстана.

3. Засухоустойчивые и продуктивные при засухе сортообразцы ярового ячменя 30/83-4. 65/84-5, 93/80-3 в засушливых условиях характеризуйся высоким уровнем накопления свободного пролина. высокой устойчивостью ростовых процессов и-хорошей выживаемостью проростков после действия водного' стресса, благоприятным водным режимом и высокой стабильностью клеточных мембран при действии обезвоживания.

4. Между устойчивостью растений ярового ячменя к засухе в пп.-г.пя:-: и лабораторных условиях на разных этапах онтогенеза и ус-

тоПчнзоетыо к осмотическому стрессу in vitro обнаружена достоверная полокительная корреляционная связь.

■5, Способность каллусных тканей адаптироваться к осмотическому стрессу in vitro применима для отбора засухоустойчивых вари-■ аотоз,4. Высокая ■пролинообразувдая способность каллусов (особенно в процентном отношении к контролю) может служить биохимическим критериев осмоустойчивости генотипов.

-6. ГенОТИЯЫ Г1344/1355, 65/84-5. 44/81-68. 173/83-17. 93/80-18 сочетают хорошую способность к каллусогенезу и регенерации растений. .

- 7. Растения-регенераиты, полученные в культуре незрелых зародышей ячменя 'имеют широкий спектр варьирования количественных признаков и параметров устойчивости к засухе. Изменчивость, возникающая в процессе культивирования In vitro направлена как в сторону увеличения,так и в сторону уменьшения значений признаков.

8. Анализ полученных с помощью техники "bulbosum" дигаплоид-ных линий ярового ячменя (DH3) показал варьирование признаков урожайности- И' засухоустойчивости в пределах каждой комбинации. Линий ДГ-6, ДГ-15, ДГ-38, ДГ-39 сочетают хорошую засухоустойчивость с высокой продуктивностью.

9. С использованием биотехнологических методов ( клеточной селекции, сомаклональной вариабельности и гаплоидии) возможно улучшение сортов ярового ячменя по признакам продуктивности и засухоустойчивости.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Предлагается способ для массовой оценки засухоустойчивое-^ ти исходного и селекционного материала ярового ячменя в рулонной культуре. .

2. Для использования в селекционных программах по яровому ячменю на ЮгогВостоке Казахстана рекомендуются такие физиологические показатели, связанные с устойчивостью и продуктивностью в условиях недостатка влаги, как водоудерживающая способность листьев и стабильность клеточных структур в экстремальных условиях во второй половине вегетации.

3.Для использования в качестве исходного материала для селекции ярового, ячменя на ' Юго-Востоке Казахстана рекомендуются сортообразцы, характеризующиеся комплексом физиологических признаков засухоустойчивости

а) еысокой водоудерживающей способностью и высокой стабильностью клеточных мембран при обезвоживании: 30/83-4, 65/йл-Г;. 93/80-3;

б) слабой депрессией ростовых процессов при осмотическом стрессе: 65/84-5, М56/82-1, Днепровский 435;

в) хорошей корнеобеспеченностыо и выживаемостью проростков при засухе: 65/84-5, 5/84-6. 30/83-4. 93/80-3;

г) высокой пролинообразующей способностью проростков и' ин-тактных растений: Одесский 100. 93/80-3. 65/84-5, 30'83-4. 5/8.1-6.

4. Для использования в селекции на засухоустойчивость предлагается сомаклональная линия БТ-6 (каталог отдела биотехнологии, исходная форма 65/84-5), имеющая хорошие•показатели продуктивности и водного режима в условиях недостатка влаги.

5. В качестве исходного материала рекомендуются полученные нами удвоенные гаплоиды (ШЗ), в том числе линии, несущие'в себе, как признаки засухоустойчивости - высокую оводненность.флагового подфлагояого листа, хорошую водоудерживаюшув способность при недостатке влаги в фазу колошения, хорошую выживаемость- проростков при водном дефиците, так и хорсике показатели продуктивности в полевых условиях: ДГ-6. ДГ-15. ДГ-33 и ДГ-39.

РАБОТЫ. ОНЛУШОВАШЕЖ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Терлецкая Н. В., Искаков А. Р.. Сариев Б. С. Способ диагностики засухоустойчивости ячменя в лабораторных условиях. КазНИИШИ N158-92

2. Сариев Б.С.. Искаков А.Р.. Терлецкая Н.В. Рулонный метод оценю; засухоустойчивости ячменя. КазНИИШШ N169-92.

3. Искаков А.Р., Мукашев A.M., Терлецкая Н.В. Создание удвоенных гаплоидов ячменя методом гаплопродюсерной технологии// Тез. докл. Международной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов по актуальным проблемам интенсификации сельского хозяйства. - Шортаиды. -1993. - с. 47. ■

4. Искаков А. Р., Терлецкая Hi В., АлимгазнНова'Б.Ш. Генотнпн-ческая зависимость процессов каллусогенеза и регенерации растений в культуре In vitro ячменя// Тез. докл. Международной науч-но-практичёской конференции молодых ученых и специалистов по актуальным проблемам интенсификации сельского хозяйства.- Шортанды.

-1993,- с.50.

5. Терлецкая Н.В., Аяимгазинова. С.С., Искаков А.Р. Осмотический стресс и динамика накопления свободного пролина в каллусах ярового ячменя// Тез. докл. II Международной конференции "Биология культивируемых клеток растений и биотехнология".- Алматы.-1993.-С. 193.

6. Алимгазшюва Б. Ш., Искаков А. Р.. Жамбакин К. Ж., Терлецкая Н.В. Изопероксидазы в культуре In vitro зерновых злаков// Сб. научи. трудов КазНИИЗ "Биотехнология в селекции сельскохозяйственных культур".- Алматы, КазАСХЧ - 1993.- с.82-89.

Т. Терлецкая И.В., Искано* А.Р.. Пприея B.C. Пути использования физиологических и биотеуноло-ичесюг/. мзтол'.чч в селекции яч-менп па засухоустойчивость// Со. науч.н. трудов КазНИИЗ "Биотехнология в селекцт; сельскохозяйственных культур".- Алматы. КазАСХН-19ЭЗ.- С.90-96.

8. Терлецкая Н. В. Некоторые Физиологические механизмы засу-хо- и жароустойчивости ярового ячменя// вестник с. -к. науки Казахстана. - Алматы, "Бастау".-1ЭЭ4.- N3.- с.53-59.

9 Терлецкая И.В. Арпаннн skL еселенген гаплоидтарын кургак-шылыкка тоз!мд1л1к селекниясында колдану// Жаршы. - Алматы, "Бастау'.- 1994. - N5-6,- с. 34-38.

10. 1ерлецкая Н.В. Сомаклоналышя вариабельность ячменя и возможность ее использования г; оелекшп; ня засухоустойчивость// Лен. КазгосИНТИ,- Н 521В - Ка94,- 12с

Терлецкая К. В. Арпа селекциясыньщ кургакртыльика TsaiMfli бастацгы материалы» алу.

Биология гылымдарынын, кандидаты гылыми дарежасih алу YmiH дайындалган диссертациянын, авторефераты 06.01.05. "Селекция жэие т*к,ым шаруашылыгы" 03.00.12. "QciMfliK физиологиясы" Алматы, 1996. 25 с.

Жаздык; арпа сорттарынын, к^ргащьшода тез1мд1л1пне эсер ie физиологиялык -- биохимиядык, децгейде, клеткалык, жэне тас органиэмд1К бага беру жтмысы жгрпз^лген. К^ргакдшлыкда 1Д1Л1К пен ен1мд1л1ктщ арасындагы THiMfli байланыс физиологи-децгейде Солатыны анык;талган. Каллустык, культураныц жэне •ан ес1мд1ктерд1ц осмостык кысымга TeaiMfliJiri арасындагы ти-байланыс керсет1лген. Осы ж*мыстьщ нэтижесгнде жогары ен!м-: пен к*ргакшылыеда таз1мдгл1к касиеттерг бар 14 сомаклонды [ жэне 29 eKi еселенген арпа гаплоиды алынып, ол epi к;арай щиялык зергтеу жэне с*рыптауга бер1лд1.

Terletskaya N. V. The obteining of the basic aaterial of barley for the breeding to the drought resistance.

The Candidat of Biology applicant thesis 06.01.05 "Breeding and seed production" 03.00.12 "Plant physiology" Almaty, 1996. p. 25.

here was done evaluation of the spring barley lines on the ex of physiological and biochemical parameteres, which have enced the drought resistance at the cell and organism s. The physiological parameteres of drought resistence has found, which'was positive correlated with the productivity, s been shown t^he correlations between the osmotical stress tence of calli 3nd intact plants. The 14 somaclonal lines 29 doubled haploids of barley, which combined the high pro-vity with the well drought resistance has been selected, ated and sent for the further breeding programm.