Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение и развитие потомства из созревших и оплодотворенных вне организма яйцеклеток коровы

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Получение и развитие потомства из созревших и оплодотворенных вне организма яйцеклеток коровы"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЕЯЙСТВШНЫХ НАУК

РОССИЙСКИЙ МУЧНО-ЖОВДОМТЕЯШШЯ ИНСТИТУТ

СЕДЪСК0Х03ЯЙСТВ5ННСЙ БИОТЕШОЯОПт____________________

На правах рукописи

УДШЕННИКСЁА. Нина- Николаевна

; ПОЛУЧЕК® И РАЗВИТИЕ ПОТСЫСШ ИЗ СОЗРЕВШИХ И (ШОДОТВФШШХ ВНЕ ОРГАНИЗМА ЯЙЦЕКЛЕТОК КОРОВЫ

03.00.23 - биотехнология .

, ' АВТОРЕФЕРІI . .. .

дяооертацин на соискание ученой степени' кандидата баодопгсэашх паук

МОСКВА

1992

Диссертационная работа выполнена г лаборатория эмбриогв-негяки отдела животноводства Всесоюзного научно-исследовательского института сельскохозяйственной биотехнология ВАСХНЩ.

Научный руководитель - доктор биологических наук, профессор Ы.И.ПРСКОЬЫВ '

Офшиалънке ощюнента: - доктор биологических наук -' А.Д.БУГРШ,

- кандидат биологически* наук АЛЛСВГСРСДШ

Ведущее учрездение: Всесоюзний научно-асследовательскЕй институт экспериментальной ветеринарнії.

Защита диссертации состоится "_____в______________19___г.

в_______чао. на заседании специализированного совета Д.020.40Ж

при Всесоюзной научно-кссдадоважольскои шстстуто сольскахо-зяйотвонной. биотехнологии.

Адрос: 127253, г.Ыоаша, уя .Псковская' дои 12» корпуо і

С дЕсоартадЕэй tiosno :05пагсантьса с бнішлеко ШИШБ

Двтсрофзрат разослан **' - - - - " ■ 19__г»

овога

; ....... ..... і иаук

Актуальность. Достижения в области экспериментальной эмбриологии млекопитающих дала поразительные практические результаты, преяде всего в медиаяке, іде из яйдеклэткп человека, оплодотворении а культуре получагтся полноценное здоровое потомство. Все пире развертывается исследования и на сельскохозяйственных жаотних. В поле зрения этих работ контролирующие факторы онтогенеза от эндокринной регуляции воспрогзводитольноЗ функции организма до созревания гамет, их оплодотворения и разнятая зародкзей в культуре и при трансплантации сакке-реютгенту.

Известно, что потенциальные возможности самок млекопитающих огромны. В яичниках коровы содержатся десятка и сотни тысяч ооцигов, большинство которых а процессе жизнедеятельности подвергается атреэия я в воспроизводстве не участвует. Эффективным путем решения проблеми получения больного чкслз эмбрионов крупного рогатого скота для трансплантации является метод культивирования ооцитов вне организма с последующим оплодотворением;

' Первый теленок-трансплан?ат получен методом оолодот-воре нал Сп і/цію о сайтов, извлеченных из лрэдовуяяторшос фолликулов, то есть после созревания іп і/й/ІР /ЬиискгН: 1982/. ’

В.изучении процессов созревания и оплодотворения яйцеклеток сельскохозяйственных животных особый интерес представляет культивирование осцитов вне организма в синтетических питательных средах с добавлением различных сывороток крови. К настоящему времени для оплодотворения культивированных яйіеклеток яспользуют не только систему іп , но а организм временных реципиентов /оща,

кролик/;

Ванно после проведенных машшулядий с эмбрионами прос-лодктъ т$чок;:в беременности норов-рещшентоэ, а также рост й развитие плода в онтогенезе.

Сед а затаен исследований. Целью работы являлось получение потомства короз после созревания и оплодотворения яйцеклеток вне организма и в организме другого вида; а таю» изучение их постнатального роста я развитая. Б задачу исследований входило:

1. Усовершенствовать состав культуральных сред для созревания ооцитов крупного рогатого скота вне организма и обеспеченно ранних стадий развития эмбрионов.

2. Провести сравнительное испытания эффективности метода оплодотворения яйцеклеток крупного рогатого скотар v'dms.

в организме другого вида (кролика).

Зі Изучить рост и развитие потомства, полученного методом трансплантации эмбрионов в сравнении со сверстниками й биологические особенности телят-трансплантатов по биохимическим и ишуио-геамическим показателям.

. Научная новизна. Впервые получено наш потомство крупного рогатого скота после хирургической и нехирургичаскоі пересадки нэ в яйцевод, а в рог штки эмбрионов из созревших яйцэклэток «Л fiitO и оплодотворенных in Vi-lbO ЕЛЯ в яйцеводе кролика. Соответствие телят-трансплантатов истинным радителям подтверждено по группам крови. Продемонстрировано шэрвне нормальное развитие а проявление воспроизводительной способности у телят, полученных из оплодотворенных £л fflitP яйцеклеток, При этом два из пяти телят погибла

о одинаковой патологической картшвЯ н у одного из них вцяв-денЕшуиодефицитио^М. ,

Продемонстрирована одинаковая эффективность использования сыворотки крови северных оленей и Легальной сиворотки при культивировании яйцеклеток и эмбрионов крупного рогатого скота; показала высокая эффективность применения монослоя эпителиальных клеток яйцевода доя культивирования ранних эмбрионов.

Практическая значимость. На основании результатов проведенных исследования разработаны оптимальные вриєш .

• г >

культивирования ооцитоз короэ in ыМл> , лх оплодотворе-нші в культура и в организма зро:.:ениого реципиента. Использование сиворотки крози сенергах оленей з составе среди культивирования эмбрионов коров обеспечивает одинаковую эффективность созревания яйцгклеток и ранних стадий развития эмбрионов крупного рогатого скота, а применение монослоя эпителиальных клеток яйцевода обеспечивает развитие ранних эмбрионов крупного рогатого скота in без

использования временных реципиентов.

Апппб°;п'.д г>або?-ч. Основные материалы диссертации доложены а обсухіанн на научных конференциях ВНИИ сельекохо- . зяйствекноЗ биотехнологии Діосква, 1986, 1987/;. на УП Всесоюзной конференции по культивирования к трансплантации эмбрионов /ВКЖРГЕ, Леяияград-Пуихин, 1987/; Всесоюзной конференции "Современные методы исследования в свиноводстве" /ЇШЙЯЗ, Полтава, 1991/; на заседании сотрудников отдела животноводства ВЫИИСБ Діосква, 1389/.

Пттггаггрч, аивпетугадди. Диссертационная работа излозвна на 131 странице маишопасного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методик исследования, результатов исследования, выводов и предложений. игровой материал представлен в 20 таблицах и 3 графіках»

- А -

Список литературы шиш чает 132 источника отечественных в зарубежных авторов.

Публикации. По твме диссертации опубликовано 3 статьи.

МАТЕРИАЛ И 1ЛЗТ0ДЫ ИСОЩШАГОЙ Собственные исследования состояли из лабораторных я научно-производственных опытов и наблюдений.

Лабораторные исследования проводили в лаборатории эмбриогенетики отдела животноводства ВНИИ сельскохозяйственной биотехнолвгаи на материале, полученном на Московском мясокомбинате и а подсобном хозяйстве "Горки Ленинские".

Научко-пзюизводстшшша опыты проводила в той из хозяйстве. .

Для проведеная опытов по культивированию ооодтов яичники помещали в физиологический раствор ара температуре 33-35° и доставляли в лаборатории через 1,5-2 часа после убоя животных. Ооцктн из фолликулов извлекала пут ел надреза лезвием видимых фолликулов в фосфатно-солевом растворе Дюль-бенко. . .

■ Для культивирования отбирала ооцаты, окруженные компактніш пластом клеток яйценосного бугорка; Осциты с дегенерирующим кумузгюсом, малого диаметра и имеющие грубую структурную цитоплазму выбраковывали. -

Для культивирования оацитов использовали среду 199 фирмы "Джибко", Отобранные для культивирования ооадтов помещали по 20-30 штук в одну чашку Петри /35 х II т/ ■ и инкубировали при 37° С в увлажненной атмосфере Ь% СС£,

90% А'2 1 5? 0^ в течение 24-25 часов. К культуральной среде добавляла 20% по объему инактивированную сыворотку крова севертпс оденеа в параллельно эмбриональную сыворотку коров, рВ среды поддерживали з диапазоне от 7,2 до 7,4.

В опытах по оплодотворению яйцеклеток использовали свелиполучешуи сперму быков, доставленную о Цент-, ральной станция искусственного осеменэнкя. Калацитацив сперматозоидов проводили по методика Blе-'Ь ¿J. /1973/ в среде с высокой ионной силої ІЛ ’iCb^jD . При оплодотворении ІЛ fi6tü сперму быка в количестве 50 мкл вводила через бахромку яйцевода крольчихе. Концентрация спермиев в среде в обоих случаях составляла 1-2x10®..

В халдом опыте проводили цитологический анализ исходного материала, а также после проведенного эксперимента готовили тотальные препараты с окраской дакмои-дом. Для дальнейшего развития часть оплодотворенных . яйцеклеток переносили в яйцеводы временного реципиента-крольчихи. Другуп часть на шнослой эпителиальных клеток. Полученные зародыши оценивали по назшчт материала ядерного в кадцом бластомере. Все полученные эмбрионы были трансплантированы телкаы-рецшиентам черно-пестрой породы в возрасте 18 месяцев, с живой массой не менее 360 кг.

Достоверность происхождения потомства устанавливали на основе генетического анализа іруш крови о использованием моноспещфічізских антисывороток во системе ABC, а так» полиморфным белкам и {«рментам крови. Типы крови определяли гемолитическими тестами.

С целью исследования роста и развитая полученных гелят-травсшантатов из культивированных эмбрионов исследовали интерьерныэ и экстврьеркые показателя до 18 месячного возраста в сравнении с таковыми у телят от обычной репродукции.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЯССШСВАШІ!

Дотагчение..полноценных .ЯІІІ2ЄКЛЄГ0К КОРОВ ГО2 КУДЬГИЗКРОВа-

яик 1/1 <іїіі*ср___________

Б настоящее время не решена проблема эффективности созревания їп ІЇі'іійооцитав крушого рогатого скота. Была проведена возмолсность использования оленьей сыворотки в качестве добавки в среду культаирования яйцеклеток коров.

‘ . Таблица I

, Влияние разных сывороток на созреваниа ооцитов крупного рогатого скота /у? Ь'ь&сС

Сыворот-¡Число ка ¡яйцеклеток крови [ і

Из шна стад ил. к ¡Разрыв ни !і

ЯП* ¡гадуыд оа ¡м6тафаза ДіДетенапаТ

асЗс.! % !айс.'! 5? “"Іабс’Л'55 \айа.Т%

Эмбриональная 149 8 5,4 23 15,4 III 74,5а 7 4,7

Северных ■

оленей 135 б 4,5 19 14,1 99. 73,3(3 II 8,1

ж - зародышей пузырек; Р /а,б/>0,05

На витологических препаратах было исследовано 284 яйцеклетки. Как видно из таблицы I, в процесс созревания вступило 210 клеток. Как в среде с эмбриональной . сывороткой /СЗК/, так и в среде с оленьей сывороткой примерно одинаковый процент яйцеклеток достигая стадии метафази П А4.5Я и 73,3^/.

' Судя по полученным данный, для получения пригодных для оплодотворения яйцеклеток и их дальнейшего развития, ■ одинаково успешно мошо использовать фетальную сыворотку и сыворотку крови северных оленей. '

- 7 -

Оплодотворение культивированных яйцеклеток /'/; в яйцевода кролгжа .

Наиболее объективным показательством полноценного созревания ооцитов является способность их к развит после оплодотворения. Важным этапом в полутени! полноценных зародкией вне организма является обеспеченно оптимальных условий для оплодотворения ооцитов, а такте условий инкубаияг зародшей а яйцеводе промегуточного . реципиента другого вяда. Для этого проведена эксперименты по оплодотворен® иі ЗіЬ'сО з в яйцеводе крольчиха яйцеклеток норов. Результаты исследования приведены в таблдае 2 а 3. .

Таблаїа 2

Эффективность оплодотворения яйкекзатск коров ¿л ЛІІО под влиянием разных сывороток крова

Сиворотка! Число -"'.!Яз кшГсоз^!Чёсло'г по- ¡число сфор-іукьириїла, -ыы*и »ревите до !не?рирозанннх!ю5рованных

!_________¡метафази П ¡яйцеклеток -зигот_____________

¡опытов!яйце- !"1 ! 1г от Г п П»~от со?___________________________¡клатга! ц ! * ! Г ?созрев ? »здовшгх

Эмбриональная II 300 230 76,7 102 34,0 44,3 79 34,8

Северных .

оленей 7 161 119 73,9 55 34,1 46,2 35 29,4

Р>0,05

Критерием оплодотворения счнтаяи наличие на препаратах зигог двух прозуклауеов, второго налравдтельяого тельца я хвоста сперматозоида. В опытах по оплодотворении созрэвпшх Сп ЦйЬсо ооцитов коров было использовано два вада, сывороток -сыворотка крови северных оленей и Детальная сыворотка коров. При добавке в среду культивирования оленей сыворотки процент

ценвтрирозашшх яйцеклеток составил 46,2Й, а эмбриональной сывороткой - 44,3%, Таким образом, оленья сыворотка может <5ыть использована для успешного оплодотворения яйцеклеток коров в условиях

При последующем Р&ЗВ2ТЙЕ и/ 1$(£*оО /через трое суток/ в процессе формирования зигот отмечено, что при наличии эмбриональной сыворотки число зигот от созревших яйцеклеток на 5,4$ выла, чем при наличии оленьей сыворотки, но эта разнит была недостоверной /р у 0,05/.

При оплодотворении в яйцеводе крольчиха созревших ¿/? $1&сО яйцеклеток соответственно а оленьей а эмбриональной сыворотках, с используэшш добавками к средам, процент оплодотворенных яйцеклеток при созревании в оленьей сыворотке составил 33,7$, а а гмбриональноЗ - 36,Ъ% Даб-лкца 3/.

?а<3лица 3

Оплодотворяемость яйцеклеток коров в яйцеводе крольчихи

г!тэ»_ №с-!Иолу-11г1з’нвзюоозр0в-№сло пейетрк- !'А.ксло сфор^

' ‘ ‘ ‘ ' ‘ " Ншрованнкх

I (ток Iй!'* !и Гобщэ-!соз- I !созреэ-?! 1 1 ! !го !ревш. I 1шах

_______1.... I. . . I. . !________! !числа!________1 !_________

Эмбриональная 14 289 211 73,0 87 30,1 41,2 77 35,5

Север-

ша -

оленей 8 125 95 76,0 35 28,0 35,8 32 33,7

”гг,:0 ло чено ших до метаоа-¡роваяных язшек-

Р0™ {отИяйце-{.даЙ...,1Г~ ладо*.......................

!гов !кле- !„ ! 5 !„ !,» от !з от

Р ?0,05

Не выявлено также достоверной разницы по степени опло-дотворяемости яйцеклеток короз при использовании эмбриональной и оленьей сывороток для созревания яйцеклеток в условиях^ и ¿4 ¿¿ь'о . При этом стадии морулы а

бластоцисты достигая яйцеклетки оплодотворенные как Сп УСкЬо так и в яйцеводе другого ввда /Таблица 4/.

' Таблица 4

Эффективность развитт ранних эмбрионов короз после оплодотворения ¿П лЬк? и а яйцевода кролика

Число я.^:еклеток .¿Ьобя^’-хся яйцеклеток'

Всего¡Переса- !/.звлечено!р.рГП ¡Ь'том числе

.'хено а !из я!Ис- ! Нгооул г блас-

!яйцевод !г.ода_ ! ¡тоц/.ст

¡посла !члс-! « Пйс-Т^ТГГчис-Т %

Оплодот-

ворение

! опл од о- !ло

! творения!

! ло ! !ло бт дробя-

I I

;до&.

иЦЛЧО 77 77 70 90,9 12 17,1а

и УИГо • 56 78.9 15 23,56 2 12,5

и $¡00 430 баз использования ПО 25,6в 18 16,4 временного реципиента

Р /а,б,^<0,С5

В этих опытах установлено, что яйцеклетка, оплодотворенные 1п '¿¿Ъо и через сутки пересаженные в я&цеводы крольчихи прекратили истинное драЗлэние на ранних стадиях, а именно на 6-8-и клеточных, а оплодотворенные в организме кролика достигли стадии морулы на четвертые сутки после ыомэнта оплодотворения.

В данном опита в одном случае было получено два зародыша на стадии морулы из фолликулярных ооцитов, созрев-пих и оплодотворенных вне организма коровы. Удовлетворительные результаты получены при культивировании оплодотворенных яЗцеклеток £/» ^¿■¿и> на монослов эпителиальных клеток. На третьи сутки посла оплодотворения процент дробящихся яйцеклеток на стадии 10-12 блайтомаров дости-

- го -

гал 25,6, а полученных морул и йластоцист на 7-8-е сутки хультивирозаюя 16,4. Процент дробящихся яйцеклеток от числа проанализированных в организме кролика и на ыонос-лое эпителиальных клеток различался незначительно. Хотя процент- дробящихся яйцеклеток в организме был несколько вше, однако стадии морулы и бластоцисты больше достигнуто было при развитая Со

Оплодотворение яйцеклеток и раннее развитие зародышей протекает в яйцеводе, полость которой заполнена жид- ' костью, представляющей собой слокнув смесь веществ тран-судата сыворотки крозн и секрета клеток эпителия яйцевода. В настоящих исследованиях нами предпринята попытка имитации шкроокрухакия зародышей в жидкости яйцевода при совместном культивировании ранних зародыией коров с их эпителием яйцевода.

Анализ развития на 3 суток после оплодотворения показал, что число дробящихся зародышей достигло 34,2$

(п =87) от обаего числа яйцеклетки (п*2Б6), причем 78, зародышей достигало стадии 4-х и более бластоыеров (п-68). Через 5 суток после оплодотворения 36,8# зародышей (п*32) достигли стадии кошшктизованной морулы.

Таким образом, совместное культивирование ранних зародышей коров с клетками эпителия яйцевода обеспечивает нориаяьное развитие зародышей до стадии компактизированной морулы. ■ .

Транодлантадая .эмбрионов Одним аз важных моментов в процессе получения телят-травсплантатов из созревших и оплодотворенных яйцеклеток является ах полноценное развитие в половых путях реципиентов.

У гелок-реідаїнентов подучено шесть беременностей, в том числе одна двойневая: посла пересадки т по одному эмбриону в кавдый рог матки. Родилось по дза живых теленка аз ооцитов оплодотворенных в яйцевода крольчихи и Один теленок родился в результате нехирургической пересадки эмбриона, полученного после оплодотворения яйцеклетки, созревшей ¿п Л'£и>, К ним было подобрано две контрольные группы: телочка-аналоги по возросту /п=10/ и бычки /п=10/. Иммуногвнетичесікий контроль достоверности происхождения трансплантатов Достоверность происхоздения животных устанавливается на оство генетического анализа групп крози потомка и обоих его родителей на принципе исключения. При этом учитывается главное: потомок наследует в кадцом локусэ групп крова один аллель от огца, другой от матери в зависимости от того, какая хромосома попадает в образующую зародыш гамету после преобразования диплоидного набора хромосом в гаплоидный. Если какая-нибудь группа крови отсутствует у родителей, она не может появиться у потомка. По генетическому анализу групп крови установлено, что телята, полученные из яйцеклеток оплодотворенных Со гГі'ііо унаследовали антигенные факторы груш крова по тем же законам, как и телята-аналоги. Экспертиза антигенных факторов груш крови показала, что у родившихся телят ншуногенетически подтверждено точное происхождение от б ык а-нр о и з в од и т а, и, у которого взято семя дяя оплодотворения ІЯ ІІЇІ'Ю , и отсутствие родственных связей с реципиентами /Таблица 5/. •

У теленка /бичок 0С2-1/ происхождение генетическими системами групп крови обоих родителей. Происхоздениэ от телки 4849/520 подтверждается аллвллыи В&±/3, унаследованными от матери, а подтвердцение, что бычок 0024

' Табляца 5

Имыуиогенетический контроль ТООЕСХОЯДеНИЯ телят-трапсплввтатов

Хтлчкя

инд.Л

! РОДОТгИШ’гЗ I

| огнопенял

I

Гвнетсчоскяе с"о?сш групп крорз а по^г’.огОь^х бол к он

с » Р л м $1 К~ У Р» Т? П (\т Ср М

Зач 172138 отец Хина 6544/533 ре:цш::ент Искра 0001 потомок Истина 0012 потомок

Камзон 21705 оте ц Ряска 4849/520 г.кть Любляна 6547/595роцалаент Гром 0024 . потомок

Ба\зтр 095776 отоц Крлстпна 7528/001 реципиент Монолог 0005- потомок

Камзон 217005 отец Постряна 6756/057роц;шг.еит Пролог .0008 • потомок

А

Л

А

А

ЬзЕ\1' , £,£У/ Г/р сц'г

йэОМЧ'* ^зЩфлг Э&г/о' с,ъА Ф >ШШ2

Ъ&гКШШ^к Щт2 Екб/, С«У/Хд р/г 1/ \х!\>Ща^2

ш,тх$ н'г

^ л,- Р/Р

*2 МРА*41К7иг<у,Е^ Ш/о*, С<ЕХл Г//

' ' СаЕКдС* Р/р 3

А‘

аа

а о/а*

¿*Н'2

н/и"

Н/гги

5.Н'

4'т/ ев я©лш м й п кА'Фвв ¡¡ям а гв йй Ф туьв Я2 р/? ев М Р/? ?:/?: т/Ав т вй вв лв г/? кУ-т^вВ ^ЗЯЯ ВВ ДА ЯЙ А’Ж’ Х^ЯЕ» лэ № £>С м дя Я“/к’ 7/^* 66 йй ЛВ ВС ЛВ ЯА

рУр/ т^-Я б ЙЗ в/? вв -Лб */Г т'*

Г'*

в

является потомком (Зыка Каш она является наличие у него аллеля . Данный бычок не является потомком коровы-ре-

цшшеита 6547/535, что подтверждает отсутствием у нее аллелей системы В, обнаруженных у него.

■ В качестве примера в таблица 5 приведена также генетические системы г^упп крови бычка С005 по кличке Монолог, полученного от известного быка-проазводителя и неизвестного донора Ооцитов. Также подтверждено, что корова-реципиент 001/7522 на тлеет родственных связей о бычком Монологом: от своей матери он получал аллель B-ozcrei.i{Bj-£P/djl6^

отсутствующий у реципиента.

■ Динамика _ РОсга_и_ развития телят-юаноплаятатоя Изучение роста и развития кЕвотных-трансплантатоэ я

влияния организма матера-рвцшиента на развитие потомства проводили многие исследователи. При этом одни ученые /Курбатов АД., 1951} Серебряков В»Н., 1951/ считали, что при пересадке эмбрионов под влиянием материнского организма повышается жизнестойкость и энергия роста потсшт-ва, другие - отмечала определенное влияние материнского организма яа экстерьер потомства Допырин А.И;‘ и др.,

1950/* .

На основании данных» представленных в таблица 6 иоз-но заключить, что всэ педопыпшо швогнш от рождения до 18 месяцев ишлл сравнительно высокую живу» кассу. При этом наиболЬЕэй mccu к отсау периоду достиг бшс-трано-плантат 0005 Шшодог;

Таблица 6

Рост подопытных животных в период от рождения до 18 месяцев жизни

Животные \ ■^ивая касса, кг, в возрасте, мес.

jnpii рождении 1 s ! 4 ! 6 j 12 18

Бык 0005 28 ‘ 77 126 186 385 485

Телка OÜOI 18 60 98 157 287 377

Телка 0012 19 61 101 159 298 386

Бычки - . /п=Ю/ 33±2,32 6СЁ4.46 II6±6,83 I53£l0,62 294*6,45 407^13,3

Телочки . /п=10/ 31±2.74 55*2,77 99^3,87 I57t6,96 240±8,I7 353*11,4

Подопытные животные в период от ровдения до 18 месяцев жизни имели суточный прирост на уровне 812 грамм, что несколько выше /178 грамм/, чем у телят, полученных катодом искусственного осеменения.

Суточный прирост подопытных тодят-трансЕлактагов в, период от розденкя до IB месяцев жизни соответствует динамике их живой массы. Наибольшей энергией роста в интенсивный его период от рождения до 6 месяцев отличался подопытный бык-трансплантат 0005 Д'онолог/ от бычков опытной группы /17,7;?/, подопытные телочки-трансплантаты в этот период существенно нэ отличались от своих сверстниц.

Хозяйственную ценность животных в определенной степени может характеризовать экстерьер.

Существенной и статистической разницы мевду.группа- ' ми животных по основным признакам экстерьера не установлено. Небольшое превосходство в пользу опытных животных ■ отмечено по индексу растянутости, однако эта разнила недостоверна /Р>0,05/. У телок-трансплантантатов не наблюдалось заметных недостатков телосложения и статей экстерь-

ера, характеризующих данную породу скота. При исследовании экстерьера подопытных к контрольных телят оточена незначительная разнила по основным промерам /высота в холке, высота в крестце, глубина груди, ширина груди, обхват груди, косая длина туловища, ширина зада, обхват пясти/ в первые месяцы жизни. К четвертому месяцу развития разница абсолютных величия экстеръерных профилей всех телят минимальная и выявляется тенденция твлят-траксплантатов превосходить величину прокоров телят контрольной группы; Индексы длинноногости, тазо-грудной а сбитости с возрастом телят, несмотря на их происхождение, ¡теют тенденцию уменьшаться, а растянутости, грудной и массивности с возрастом увеличиваются. Изучение конституции и экстерьера животных позволяют заключить, что правильное выралцшансэ телок-трансплантатов и бычка-трансплантата создает предпосылки для более раннего продуктивного использования иг в сравнении с контрольными животными,

. воспроизводительная-способность опытных животных

По проведенным наблюдениям половая зрелость телок-трансплантатов наступила в 16 мэсянев, а по достижению ши зявоЯ кассы. 377 п 386 кг соответственно /0001 а 0012/ в 17,5-месячнсм возрасте их спаривали о бнком-трансцлантатсм 0005. Продолжительность беременности опытных тэлок-трансплантатов составила 234 а 275 дней соответственно телка 0001 я 0012. В результата чего бндо получено во втором поколении полноценное потомство.

У опытного бычка-трансплантата внешние признака начальных половых функций бшгя отмочены в возраста 6,5 ке-сяцев. В Ю-та )гзсяянам возрасте его приучали к взятию спермн. Густое семя у бычка появилось в возрасте II кэ-

сяцэв, а £ 14 месяцев густое семя значительно преобладало над средний. За период от 10 до 14 месяцев у быка концентрация семена увеличилась на 0,5 млрд. в I мл, а висло спермиев в эякуляте выросло с 0,97 млрд. до 3,48 ылрд. /Таблица 7/.

Таблица 7

Показатели качества семени быка-трансплантата

Возраст ¡масса! 'Аисло эяку-! исъем ¡концентра-¡Общее ¡Актив-месяцев! быка, !лятоа !эяку-!ция,млрд/ ¡число !ность,

1кг ! !лята ! I мл !спер- 1Салл

II II !миев в!

1 ! ! { !эяку- I

1 ! 1 1 ¡ляте, I

________I_____I_____________!______1___________'.млрд. 1________

10 337 3 1,70 0,57 0,97 0,80

10-12 385 5 2,10 1,10 2,48 0,86

12=14_ 408 3*й&„ ...й,Й7

В процессе формирования сеыяпродукции у бычка-трансплантата в возрасте от 10 до 14 месяцев нарастали количественные я устанавливались качественные признаки семена. Оплодотворяющая способность семени быка была проверена на

12 коровах. Процент повторных осеменений был не выше, чан в среднем по хозяйству. Следует отметить, что раннее взятке семени ОТ ПОДОПЫТНОГО бычка, полученного из оозревшх я сплодогворакник осцятов вне организма коровы не повлияло отрицательно на его дальнейший рост и физиологическое состояние в период иелсдьзованая.

I. Получено потомство крупного рогатого скота в результат е пересадка эмбрионов после дозревания я оплодотворения оацигов ин витро или в Яйцеводе кролика с последующим культивированием ах в яйцеводе лагыобераиешой крольчихи до стадии моруды.

2. Обеспечение развития эмбрионов крупного рогатого скота после оплодотворения ш витро до стадии морулы позволило впервые провести успешну» пересадку таких эмбрионов не в яйцевод, а в рог иатка реципиента.

• 3. После хирургической пересадки эмбрионов, оплодотворенных ин витро и в яйцеводе крольчихи, получено четыре теленка, по два при каадом способе оплодотворения, один теленок получен в результата нехирургическоа пересадки эмбриона, оплодотворенного ин витро.

4. Телята-трансплантаты по грушам крови соответствовали истинным родителям и не являлись потомками матерей-раципиантов, выносивших плод в результате трансплантация эмбрионов.

5. Телята, полученные после созревания и оплодотворения вне организма коровы были аналогичными по ингерьар-нш а экстзрьерннм данида телятам, полученных от истинных матерей. Онтогенез телят-трансшшнтатов протекал по закономерностям, присущим молодняку крупного рогатого скота соответствующего периода развития. 7 этих телят проявилась нормальные воспроизводительные способности* Однако два из пяти телят погибли в возрасте 32 и 39 оу-ток с одинаковой пататогоанатоьшческоі картиной -геыода-намиче.ских нарушений. 7 .одного из них выявлен острый

Е-.!уНОДОфЛЩГГ ПО $14:

6. Установлено, чяо добавка к среда культивирования сыворотки крови совераых оленей в сравнении о эмбриональной сывороткой одинаково эффективна на созревание яйцеклеток коров /*74,52 д 73,$/ а ошгодотвораниз

/36,5^ в 33,7^ сфср^сваншп зигот/. Виявлена тенденция увеличения процента дробящихся яйцеклеток коров, созревших ш і^СІЬо а при оощхохвореюш а яйцеводе кролик* so

сравнению с оплодотворением й/ гк'іьо /28,5% а 11,1%/. Прижлвляемость эмбрионов при хирургической пересадке после оплодотворения в яйцеводе кролика составила 27,3$ дрОГй2 4.8;» при оплодотворении ин витро.

7. Высокая эффективность развития ранних эмбрионов крупного рогатого скота в условиях ин витро достигнута при использовании в период культивирования ыонослоя из эпителия яйцевода коров; число дробящихся яйцеклеток достигало 34,2£, 78,2$ аз нас достигли стадии 4-х и более бластокеров, а 33.852 - стадии комлактизкрованной морули.

ПРАХТЗДЗСКИБ П?1Х’102ЕШ

1. В качестве добавки к среде культивирования использование 20£ сыворотки крови северных оленей одинаково оЗДектавно как и фетальной сыворотки теленка.

2. Для обеспечения элективного развития ранних вибрионов крупного рогатого скота, полученных из оплодотворенных ш вигро яйцеклеток, рекомендуется использовать монослой из эпителия яйцевода коров.

Список работ, опубликованных по теме.. диссертации.

1, Удавленникова НЛ., Эрнст Л .К., Прокофьев М.И., Прокофьева Е.С., Лагутина И.О., Черных В.Я., Мирины ЮЛ. Получение телят из дозревшие и оплодотворенных вне организма коровы фолликулярных ооцитов /Вестник с.-х. науки.-1987. - ИВ, - С. 82-67/

2. Удавленникова Б Л., Прокофьев Ы.И., Лагутина И.С., Морено Мело В., Юрченко H.H.

Развитие разных зародышей коров, полученных из яйцеклеток, созревших и оплодотворенных вне организма, при совместном культивировании о эпителиями яйцевода. /Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Современные методы исследования

в свиноводства". - 1991.» гЛодтава - с.95/.

. 3. Удавленникова Н.Н., Прокофьев М.И., Лагутина И.О.,

Морено Мело В., Юрченко НЛ;

Культивирование ранних эародшей коров, получошшх из яйцеклетки, созровпюс я оплодотворэншх вне оргшшзма, на ионослое гранулеэних клеток. /Гвзиси докладов Всесоюзной конференция "Совраиенннё методы исследования в сви-цаподотЕЭ". - 1991., г Лолтава - о.96.

Подписано в печать 29.04.93. Фсрг.йт 60x84/16 Тираж ТОО

Заказ 390

Москва. Тшогрсфп РАС2П