Получение и изучение свойств препаратов фактора переноса против некоторых вирусных и бактериальных инфекций животных

Кухаркина, Ольга Венедиктовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Получение и изучение свойств препаратов фактора переноса против некоторых вирусных и бактериальных инфекций животных
ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Получение и изучение свойств препаратов фактора переноса против некоторых вирусных и бактериальных инфекций животных"

На правах рукописи

КУХАРКИНА ОЛЬГА ВЕНЕДИКТОВНА

ПОЛУЧЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТОВ ФАКТОРА ПЕРЕНОСА ПРОТИВ НЕКОТОРЫХ ВИРУСНЫХ И БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЖИВОТНЫХ

03. 00. 06 "Вирусология"

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Владимир - 2003

Работа выполнена в ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ "ВНИИЗЖ")

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор 1

МИЩЕНКО Владимир Александрович

Официальные оппоненты: - доктор ветеринарных наук, профессор

УЗЮМОВ Василий Лаврентьевич, (Федеральный центр охраны здоровья животных, г. Владимир); - доктор биологических наук, старший научный сотрудник СТРИЖАКОВ Александр Анатольевич (ВНИИВВиМ, г. Покров) Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (ВНИиТИБП, г. Москва).

Защита диссертации состоится «16» декабря 2003 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.015.01 при ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» по адресу: 600901, г. Владимир, пос. Юрьевец.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ *

«Федеральный центр охраны здоровья животных»

Автореферат разослан «7^» НСкЯд^ьЗи 2003 г. Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук - Г. М. Семенова

17052

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Общеизвестно, что при действие патогенного возбудителя в организме включаются клеточные и гуморальные механизмы защиты. Вместе с тем установлены особые иммунологические реакции, не связанные с антителами, а свойственные только иммунокомпетентным клеткам. При воздействии антигена в иммунокомпетентных Т-клетках начинаются процессы деления и дифференцирования, в результате которых образуется популяция специфически сенсибилизированных лимфоцитов.

Сенсибилизированные лимфоциты содержат антигенспецифический фактор переноса (ФП), способный переносить опосредованный клетками иммунитет на несенсибилизированные лимфоциты. Данные литературы свидетельствуют, что диализат экстракта лейкоцитов (ДЭЛ), содержащий ФП, вызывает сенсибилизацию реципиентов продолжительностью несколько лет, а перенесенная им гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) сохраняется более года [М. Н. Грин, В. В. Серов, X. Хайкене, 1976 г.].

Препараты, содержащие ФП, широко используются в медицинской практике при иммунодефицитных состояниях с пониженной численностью или низкой биологической активностью Т-лимфоцитов, при заболеваниях, вызванных внутриклеточными паразитами, вирусами, бактериями, грибами, простейшими, а также при злокачественных опухолях [Bukowski R. М. Fazio Н, Fudenberg Н, Ivins I, Louie Е, Mikula I, Pizza G. 1982 г.].

В экспериментальных исследованиях на животных продемонстрирована возможность использования ДЭЛ для профилактики лейшманиоза, паратуберкулеза КРС, ньюкаслской болезни, ешерихиоза, плевропневмонии свиней [Clinton В, Delgado R, Sharma М, Viza D, Wilson G 1979 г.].

В научной литературе отсутствуют данные об использовании препаратов ФП для профилактики инфекционных болезней молодняка КРС. Однако заболевания новорожденных телят

•широко распространи РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ

библиотека

С.Петербур| 09 300

wpryse «

«ны и,

некоторых случаях, средства специфической профилактики этих заболеваний оказываются недостаточно эффективными. Поэтому перед нами была поставлена задача получить и испытать препараты ФП при патологиях, вызванных ротавирусом крупного рогатого скота, вирусами парагриппа - 3 и инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.

Диссертация имеет характер поискового экспериментального исследования, которое является частью научной темы по изучению клеточных медиаторов и новых средств специфической профилактики заболеваний молодняка.

Цепи и задачи исследования. Основная цель данных исследований заключалась в получении и тестировании иммуногенной активности антигенспецифического фактора переноса (ФП) на основе диализата экстракта лейкоцитов (ДЭЛ), а также его использовании для передачи клеточно-опосредованного иммунитета (КОИ) животным с целью предупреждения заболеваний вирусной и бактериальной этиологии.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

- оптимизировать методику получения лимфоцитарной массы из лимфоидных органов, молозива и периферической крови животных;

- получить иммунопотенцирующий препарат фактора переноса на основе диализата экстракта лейкоцитов (ДЭЛ) крови, лимфатических узлов, селезенки, молозива;

- протестировать иммунологическую активность ДЭЛ против некоторых бактериальных и вирусных инфекций;

- изучить особенности иммунитета, возникающего в ответ на введение препаратов фактора переноса на основе ДЭЛ;

- определить взаимодействие клеточного и гуморального иммунитета при различных способах активации иммунокомпетентных клеток;

- разработать научно-методическую документацию для оценки клеточно-опосредованного иммунитета (КОИ) животных.

Научная новизна. На основе экспериментальных исследований:

- разработана схема сенсибилизации животных - доноров ДЭЛ;

- получены препараты ФП на основе ДЭЛ к вирусным и бактериальным антигенам;

- разработана методика получения препаратов TF из периферической крови, лимфоидных органов, молозива;

- определена возможность перенесения КОИ ксеногенным животным с помощью ДЭЛ;

- определены сроки возникновения клеточного и гуморального иммунитета у животных при иммунизации и гипериммунизации вирусными антигенами;

- отмечено равноценное влияние клеточного и гуморального иммунитета при защите организма животных от кишечных инвазий.

Практическая ценность результатов исследования. На основе полученных экспериментальных материалов разработана нормативно -техническая документация по получению и тестированию препаратов ФП на основе ДЭЛ, одобренная ученым советом и утвержденная директором института.

- методика по получению ДЭЛ из лимфоцитов селезенки, лимфатических узлов и лейкоцитов периферической крови и молозива;

- методические рекомендации по тестированию иммунологической активности ДЭЛ in vitro в реакции замедления миграции лейкоцитов (ИМЯ) под слоем агарозы;

- методические рекомендации по тестированию активности ДЭЛ in vivo в реакции гиперчувствительности замедленного типа.

Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и опубликованы в материалах научных конференций: «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику» (г. Владимир, ВНИИЗЖ, 2000 г.); «Современные проблемы селекции, ветеринарной генетики и защиты животных» (г. Витебск, Республика Беларусь, 2001 г.); «Мониторинг распространения и предотвращения особо опасных болезней животных»

(г. Самарканд, Республика Узбекистан, 2001 г.); «Вет. медицина: МЬквщ. тем. наук., зб. 80 рок. 1ЕКВМ» (г. Харьков, Республика Украина, 2002 г.); «Актуальные проблемы свиней крупного и мелкого рогатого скота» (г. Владимир, 2002 г.), «Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных» (г. Минск, Республика Беларусь, 2003 г.), «Актуальные проблемы инфекционной патологии животных» (г. Владимир, 2003 г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 140 страницах и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, заключение, выводы, практические предложения и приложения. Список литературы включает 209 источников, в том числе 27 отечественных. Работа иллюстрирована 10 рисунками и 24 таблицами.

Диссертация выполнена в период 1999-2003 гг. в лаборатории болезней КРС ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных».

Основные положения, выносимые на защиту:

- методика получения лимфоцитарной массы из лимфоидных органов, молозива и периферической крови животных;

- способ получения препаратов ФП на основе ДЭЛ из периферической крови, лимфоидных органов и молозива лабораторных и естественно восприимчивых животных;

- результаты по тестированию иммунологической активности ФП в реакциях

ингибиции миграции лейкоцитов под слоем агарозы и в реакции гиперчувствительности замедленного типа;

- особенности иммунитета, возникающего в ответ на введение препаратов ФП на основе ДЭЛ;

- результаты, полученные при совместной активации клеточного и гуморального иммунитета при помощи ФП и вакцин на лабораторных и естественно восприимчивых животных;

Автор выражает искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории болезней крупного рогатого скота, за практическую и методическую помощь при выполнении и оформлении диссертации.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Животные. В качестве доноров для получения препаратов ФП на основе ДЭЛ и реципиентов использовали: белых мышей, массой 18-20 г; морских свинок, массой 0.4-0.5 кг; кроликов, массой 2.5-3.0 кг; телят, массой 35-70 кг.

Антигены и вакцины. Для сенсибилизации животных использовали:

1. Ротавирусный антиген, который получали путем концентрирования культурального ротавируса КРС полиэтиленгликолем (титр 9.0 lg ТЦД 5о/мл).

2. Вакцину против ротавирусной инфекции КРС сорбированную инактиеированную (ТУ 9384-033-00495527-02).

3. Вакцину против вируса парагриппа-3 (ПГ-3) сухую живую (ТУ 9384007-00495527-99).

4. Вакцину против инфекционного ринотрахеита (ИРТ) сорбированную инактивированную производства ВНИИЗЖ (ТУ 9384-019 - 00495527 - 00).

5. Экспериментальную инактивированную эмульсионную вакцину против ИРТ на основе масляного адъюванта Монтанид - 70 (ISA).

6. Бивалентную вакцину против сальмонелеза свиней из аттенуированных штаммов сальмонелла тифимуриум № 3 и сальмонелла холерасуис № 9 (сухая).

Методы исследования. Сенсибилизацию животных-доноров проводили вирусными антигенами (ротавирус), вирусными вакцинами (вакцина против ротавирусной инфекции КРС, вакцина против ИРТ КРС, вакцина против ПГ-3 КРС).

Оценка степени сенсибилизации. Степень сенсибилизации животных-доноров оценивали по результатам кожной пробы (реакция ГЗТ)

in vivo и реакции ингибиции миграции лейкоцитов (ИМЯ) под слоем агарозы in vitro.

Для перенесения ГЗТ использовали белых мышей, свинок, кроликов. Каждому животному подкожно инокулировали ДЭЛ в дозе 8.5-106 лейкоцитов. Через 72 часа после инъекции вводили 0.02 см3 соответствующего антигена мышам в плюсневый мякиш, кроликам и морским свинкам в область шеи (шерсть в месте инъекции предварительно удаляли), с противоположной стороны в область шеи (другую лапку) для контроля вводили такую же дозу стерильного физиологического раствора, гетерологичного антигена или плацебо. Положительными результатами считали утолщение плюсневого мякиша (кожной складки) через 24-72 часа в 2 - 2.5 раза по сравнению с данными у контрольных животных (интактных или обработанных неспецифическим ДЭЛ), затем рассчитывали коэффициент утолщения по формуле:

К=(Ау-Бк):Аи где:

А у - толщина складки кожи или плюсневого мякиша у животных опытных групп через 24-72 часа после введения антигена (в момент максимального утолщения);

Бк - этот же показатель у контрольных животных, которых не сенсибилизировали, или вводили неслецифический антиген;

Аи- толщина кожной складки или плюсневого мякиша перед введением антигена;

Как основной показатель оценки ГЗТ in vitro использовали реакцию ИМЛ под слоем агарозы, которая является высокоспецифичной и четко коррелируется с ГЗТ. Позитивной реакцией на антиген считали ингибицию миграции не менее 20% с индексом миграции (IM) < 0.8 через 18-24 часа. Индекс миграции вычисляли по формуле:

1М = А/В, где

А - среднее значение миграции клеток в исследуемых образцах;

В - среднее значение миграции клеток в контроле.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИСЛЕДОВАНИЙ

Анализ жидкостей и тканей организма, содержащих иммунокомпетентные клетки

В течение 1999-2003 гг. в ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» исследовали около 550 проб крови с целью установления количества лейкоцитов в 1 см3 в зависимости от возраста животных. Данные представлены в таблице 1.

Таблица 1

Количество лейкоцитов в 1 см3 периферической крови КРС разного возраста

Возраст животного (дни) Число животных (п) Количество лейкоцитов (ты с/см3)

телята до приема

молозива 10 8.2 ± 2.43

1 10 8.33 ± 0.74

10 8 8.20 ± 0.90

30 6 8.38 ± 0.34

60 10 8.57 ± 0.75

90 5 10.5 ±0.8

120 12 9.99 ±0.17

150 5 10 ±0.82

180 4 9.5 ± 0.57

210 7 10.4 ±0.48

240 7 10.2 ±0.76

270 5 9.8 ± 0.64

300 10 11.0 ± 1.2

330 8 10.8 ±0.98

360 5 10.2 ±1.3

3 года 3 7.98 ±1.4

Материалы таблицы 1 показывают, что у новорожденных телят отмечена относительно зрелая в количественном отношении лейкоцитарная система, что несомненно определяет положительную роль при контакте организма теленка с патогенными возбудителями. У телят более старшего возраста количество лейкоцитов оставалось относительно стабильным в течении всего первого года жизни (примерно 10 тыс/см3), после чего происходило плавное снижение лейкоцитов до 8 тыс/см3. Эти

данные говорят о стабилизации иммунной системы животного и зрелости ее иммунокомпетентных клеток.

Выбор оптимальных условий для выделения лимфоцитов методом центрифугирования в градиенте плотности Для выделения лейкоцитов из периферической крови, лимфоидных органов и молозива использовали центрифугирование суспензии иммунокомпетентных клеток в градиенте плотности РюоП-Раяие, которое проводили при различной скорости вращения ротора и времени. Результаты, полученные в ходе эксперимента, представлены в таблице 2.

Таблица 2

Оптимальные условия выделения лимфоцитов из жидкостей организма, содержащих иммунокомпетентные клетки

Вид животного Субстрат Время (мин.) Режим центрифугирования (д) Количество лимфоцитов (ед./см3)

кролик гепарин, кровь 20 400-600 25.9 -10е

КРС гепарин, кровь 20 600 42.4-10®

КРС молозиво (1 день) 30 600 74.6-107

Из данных, приведенных в таблице 2 видно, что для выделения иммунокомпетентных клеток из жидкостей организма оптимальными условиями центрифугирования являются, время 20-30 минут при центробежном ускорении 400-600д.

Получение и тестирование препаратов фактора переноса на основе диализата экстракта лейкоцитов, полученных из периферической крови кроликов, сенсибилизированных живой

вакциной против ПГ-3 КРС Для сенсибилизации животных вирусом ПГ-3 использовали вакцину против вируса ПГ-3 КРС, которую вводили двукратно с интервалом 14 дней

в дозе 3 см3. Затем тестировали иммуногенную активность доноров в реакции ГЗТ.

Максимальное утолщение кожной складки наблюдалось через 48 часов после введения антигена и составляло 0.77±0.043 см (К=1.87).

Из периферической крови исследуемых животных получали ДЭЛ, иммуногенную активность которого оценивали in vitro и in vivo.

Перенесенная ГЗТ морским свинкам, показала, что препарат ФП не только проявлял высокую активность, но и был способен преодолевать межвидовой барьер. Специфическое утолщение кожной складки составило 0.65±0.036 см (К=0.63) по сравнению с животными контрольной группы, у которых утолщение составило 0.42 см. На введение плацебо животные отвечали не значительным утолщением кожной складки.

Данные, полученные при тестирование ДЭЛ in vitro, показали, что IM в присутствии специфического антигена ПГ-3 - 0.57, а в присутствии неспецифических антигенов ротавируса - 0.99, ИРТ - 0.97, коронавируса -0.95, сапьмонелезного антигена 0.96. Эти данные свидетельствуют об антигенной специфичности препарата ФП.

Получение и тестирование препарата фактора переноса, из периферической крови и лимфоидных органов кроликов, сенсибилизированных ротавирусом КРС

Для проведения эксперимента использовали две группы кроликов. Кроликов первой группы (п=3) стимулировали ротавирусным. антигеном путем трехкратного введения антигена с интервалом 7-14 и 21 день. Первое введение с масляным адъювантом, второе и третье введение - без адъюванта. Антиген вводили в дозе 2 см3, первое введение в подушечки лап, второе - в подколенные лимфоузлы, третье - внутримышечно. Кроликов второй группы (п=3) сенсибилизировали вакциной против ротавирусной инфекции КРС, которую вводили двукратно с интервалом 21 день в область крупа.

Максимальное утолщение кожной складки на внутрикожное введение антигена наблюдалось через 48 часов и составило: у животных, сенсибилизированных вакциной 0.96±0.005 (К=3.3), а у животных, сенсибилизированных антигеном 1.03±0.07 (К=3.36).

1М лейкоцитов, полученных из лимфоидных органов, составил для животных, сенсибилизированных антигеном и вакциной - 0.70±0.018 и -0.79±0.029 соответственно.

Из периферической крови и лимфоидных органов кроликов, сенсибилизированных ротавирусным антигеном КРС, получали ДЭЛ, который тестировали описанными ранее методами.

По данным реакции ГЗТ, наибольшей активностью обладал ДЭЛ, полученный из лимфоидных органов. Максимальное утолщение кожной складки наблюдалось через 24 часа после введения антигена и составило 0.86±0.01 (К=1.77), а для ДЭЛ, полученного из периферической крови утолщение составило - 0.63±0.04 (К=1.63). На введение плацебо животные отвечали не значительным утолщением кожной складки.

Значения !М в присутствии специфического и неспецифических антигенов представлены в таблице 3.

Таблица 3

Индекс миграции ДЭЛ, полученных из лимфоидных органов и крови кроликов, сенсибилизированных ротавирусом КРС в

присутствии специфического и неспецифических антигенов

Проба Сенсиби лизатор Индекс миграции в присутствии антигенов

рота-вируса вируса ПГ-3 вируса ИРТ корона-вируса сальмо неллы

ДЭЛ (кровь) рота-вирус КРС 0.90 0.97 0.98 0.98 0.97

ДЭЛ (лимф, органы) 0.88 0.96 0.96 0.94 0.96

Приведенные в таблице 3 данные показывают, что ДЭЛ, в присутствии специфического антигена, замедлял миграцию индикаторных клеток, в то время как замедления миграции не происходило при добавлении неспецифических антигенов.

Таким образом, данные анализа иммуногенной активности ДЭЛ in vitro и in vivo подтвердили наличие у ДЭЛ антигенной специфичности и иммуностимулирующих свойств.

Активация иммунокомпетентных клеток при иммунизации против ротавирусной инфекции

Для анализа сроков возникновения клеточного и гуморального иммунитета кроликов трехкратно сенсибилизировали ротавирусным антигеном КРС (титр 9.0 lg ТЦД so/мп). затем устанавливали сроки развития клеточного иммунитета в реакции ГЗТ и гуморального иммунитета в реакции диффузной преципитации.

Результаты изучения развития клеточного иммунитета в реакции ГЗТ in vivo и гуморального иммунитета по данным реакции диффузной преципитации представлены в таблице 4.

Таблица 4

Динамика развития клеточного и гуморального иммунитета у кроликов, трехкратно сенсибилизированных ротавирусным

антигеном (п^З)

Дни после иммунизации Толщина кожной складки (см) Титр антител (iog2)

до иммунизации 0.22± 0.02 1.0± 0.37

6 0.45 ± 0.04 1.8± 0.79

2иммун.(14день) 0.47 ± 0.02 2.6± 0.59

20 0.63 ± 0.03 3.0± 0.25

26 0.64± 0.04 4.0± 0.47

3 иммун. (35 день) 0.65± 0.01 4.5± 0.49

38 0.87 ±0.03 6.0± 0.69

41 0.86 ± 0.01 6.5± 0.49

Из результатов приведенных в таблице 4 видно, что после каждого • введения антигена ротавируса КРС уровень клеточного иммунитета

скачкообразно повышался на 6 день после иммунизации, возрастая затем с I каждым последующим введением. Уровень гуморального иммунитета

начинал повышаться только после реиммунизации, его нарастание было плавным и достигло максимума не через 5, а через 12 дней после каждой сенсибилизации.

Для сравнения степени активации гуморального и клеточного иммунитета животных в ответ на введение иммуностимуляторов, активизирующих Т и В - лимфоциты, использовали 3 группы бычков (п=2).

Двум животным вводили сорбированную инактивированную вакцину против ротавирусной инфекции КРС. Двум животным вводили эмульгированную инактивированную вакцину против ротавирусной инфекции. Телятам первой и второй фупп за 3 дня до вакцинации был инокулирован препарат ФП в дозе 10 см3, полученный из селезенок кур, гипериммунизированных ротавирусом КРС. Телят третьей (контрольной) группы иммунизировали вакциной против ротавирусной инфекции аналогично 1 группе.

Степень активации гуморального иммунитета у естественно восприимчивых животных в ответ на введение различных иммуностимуляторов, активизирующих Т и В - лимфоциты, представлена в таблице 5.

Таблица 5

Динамика иммунного ответа телят на введение инактивированных вакцин против ротавирусной инфекции КРС

Дни Группы животных

после

имму- сорбированная эмульгированная сорбированная

низа- вакцина +ФП вакцина +ФП вакцина без ФП

ции

титр антител IM титр антител IM титр антител IM

(log2) • (loga) (1одг)

0 6.40 0.90 6.40 0.90 7.0 0.90

14 6.20 0.75 6.40 0.75 6.70 0.84

21 6.75 0.74 7.15 0.75 7.0 0.75

35* 7.55 0.73 7.30 0.74 7.1 0.75

49 8.65 0.72 8.65 0.75 8.05 0.74

63 8.65 0.72 8.40 0.72 8.05 0.73

77 8.65 0.72 8.25 0.73 8.05 0.73

107 8.05 н/и 8.25 н/и 8.05 н/и

120 н/и 0.82 н/и 0.83 н/и 0.83

* - Ревакцинация (все группы ревакцинировапись без использования ФП) н/и - не исследовали

1М - индекс миграции в реакции ингибиции миграции лейкоцитов под слоем агарозы

* 13

Из данных, приведенных в таблице 5 следует, что препарат ФП приводил к стимуляции клеточного иммунитета. Подтверждением чему являлось уменьшение IM в реакции ингибиции миграции лейкоцитов под слоем агарозы и более выраженной активации гуморального иммунитета.

Об этом свидетельствовало также повышение титров антител по данным Hi иммуноферментного анализа у животных 1 и 2 групп по сравнению с

титрами антител у животных 3 группы на 14 - 21 день после первой вакцинации.

Анализ степени активации клеточного и гуморального

иммунитета животных при стимуляции их организма препаратами

вируса ИРТ

Степень активации клеточного и гуморального иммунитета у телят тестировали после сенсибилизации их организма вакцинами, содержащими вирус ИРТ, опыт проводили на 6 телятах: двум животным вводили внутримышечно в дозе 3 см3 вакцину против вируса ИРТ сорбированную инактивированную производства ВНИИЗЖ (ТУ 9384-019 - 00495527 - 00) и 2 телятам вводили внутримышечно в дозе 1 см3 экспериментальную инактивированную эмульсионную вакцину против ИРТ на основе масляного адъюванта Монтанид - 70 (ISA) Телят третьей группы не вакцинировали (контроль).

В сыворотках крови иммунизированных телят определяли уровень \ вирусспецифических антител к вирусу ИРТ КРС в реакции непрямой

гемагглютинации. В цитратных пробах крови определяли уровень ^ клеточного иммунитета в реакции ингибиции миграции лейкоцитов под

слоем агарозы. Данные, полученные в ходе проведенного эксперимента, представлены в таблице 6.

Таблица б

Значения индексов миграции и титров антител телят, привитых инактивированной вакциной против ИРТ

Время с Вакцины

момента сорбированная эмульгированная

первой вакцинации (ДНИ) уровень антител (1од2) 1М уровень антител (1од2) 1М

0 5.70±0.68 0.90±0.02 4.40±0.54 0.90±0.04

(1 вакц.)

14 4.60±0.83 0.76±0.01 5.20±0.65 0.79±0.02

21 4.60±0.25 0.70±0.02 4.60±0.46 0.70±0.03

(2 вакц.)

35 7.60±0.67 0.69±0.04 5.10±0.73 0.68±0.01

49 8.00±0.73 0.67±0.02 6.10±0.29 0.67±0.02

63 8.30±0.47 0.68±0.01 6.20±0.48 0.67Ю.04

77 8.60±0.25 0.68 ±0.02 6.60±0.68 0.67±0.02

92 7.60±0.48 н/и 7.00±0.25 н/и

120 7.00±0.14 н/и 7.10±0.14 н/и

134 7.00±0.29 0.88±0.01 7.10±0.67 0.87±0.02

154 7.20±0.24 0.88±0.03 7.10±0.48 0.87±0.03

157 7.20±0.15 0.88±0.02 7.00±0.25 0.89±0.01

н/и - не исследовали

После восстановления 1М до первоначального значения телят заражали вирулентным вирусом ИРТ (титр 7.0 1д ТЦД 5о/„п) и оценивали уровень клеточного иммунитета в реакции ИМЯ под слоем агарозы с целью установления иммунологической памяти на клеточном уровне.

(

* У вакцинированных животных не было отмечено клинических

признаков ИРТ, у контрольных животных отмечены характерные признаки инфекции, одно из них пало.

Уменьшение индекса миграции у вакцинированных животных

наблюдалось на 6 день после заражения. Максимальное снижение ^ значения индекса миграции отмечалось на 15-20 день после заражения и

составляло 0.72-0.70. У невакцинированных животных снижение индекса миграции наблюдалось на 9-12 день и достигало максимума на 20 день, составляя 0.76.

Тестирование проявления клеточного и гуморального иммунитета стельных коров и их новорожденных телят в разные

сроки после отела Следующим этапом наших исследований был анализ сывороток крови, молозива и цитратных проб крови, полученных от коров и телят в разные сроки после отела на установление титра антител и !М к вирусам ПГ - 3 и ИРТ. Опыт проводили с целью установления уровня клеточного и гуморального иммунитета телят до и после приема молозива.

Значение титров антител к вирусу ПГ-3 в реакции торможения гемагглютинации и вирусу ИРТ в реакции непрямой гемагглютинации, а также значения индекса миграции в реакции ингибиции миграции лейкоцитов под слоем агарозы определяли у глубокостельных коров и их 0 новорожденных телят до приема молозива и на 1, 3, 5, 7 дни после отела.

Данные, полученные в ходе проведенного эксперимента представлены в таблице 7.

Таблица 7

Уровень антител и 1М к вирусам ПГ-3 и ИРТ КРС у

глубокостельных коров в разные сроки после отела и телят, полученных от этих коров

Пробы Животные Дни исследования Вирус ПГ-3 Вирус ИРТ

титр антител (ЮЯг) IM титр антител (log2) IM

кровь глубокостельные коровы 7 дней до отела 8.5±0.49 0.76±0.08 6.5±0.49 0.74±0.03

коровы после отела 1 день 8.5±0.63 077±0.08 7.0±0.23 0.73±0.04

3 дня 8.5±0.49 0.78±0.03 7.0±0.49 0.76±0.08

5 дней 9.0±0.75 0.74±0.08 6.0±0.76 0.74±0.08

телята после рождения ДО выпойки молозива 0 0.89±0.05 0 0.92±0.02

1 день 8.0±0.34 0.83±0.05 7.0±0.65 0.85±0.03

3 дня 9.0x0.49 0.75±0.03 7.0±0.49 0.80±0.02

5 дней 9.0±0.49 0.76±0.08 7.5±0.39 0.76±0.03

молозиво 3 день после отела 10.5±0.49 0.70±0.02 8.0±0.56 0.69±0.03

На основании проведенных исследований были сделаны следующие выводы: в период внутриутробного развития теленок полностью защищен от патогенных возбудителей - это подтверждается отсутствием титров антител и 1М у новорожденных телят до выпойки молозива.

Уровень антител в молозиве в первые дни после отела превышал уровень антител в крови коров в 1.2 раза. Уровень антител в крови телят после выпойки молозива повышался в 2.5 раза (титр антител у телят первого дня жизни был для вируса ПГ-3 - 8.0 1од2, а для вируса ИРТ - 7.0 1од2), то есть уровень антител в крови телят первых дней жизни находился в прямой зависимости от уровня антител в молозиве матери.

Тестирование препаратов фактора переноса на основе диализата экстракта лейкоцитов, полученного из молозива коров В ходе проведенного эксперимента было проанализировано 157 проб молозива от коров из хозяйств Владимирской области. Данные исследований показывают, что в молозиве коров после первой дойки количество лейкоцитов в 1 см3 было 25.76*1010. В течение первой недели после отела количество лейкоцитов в молоке резко снижалось вследствие разбавления молозива порциями молока, обедненного лейкоцитами (на 7 день количество лейкоцитов было - 0.46*1010). Из лимфоцитов молозива первой дойки путем их разрушения и диализа получали ДЭЛ, который тестировали в реакции ингибиции миграции лейкоцитов под слоем агарозы. Данные опытов представлены в таблице 8.

Таблица 8

Значение 1Млейкоцитов молозива коров, вакцинированных вакциной против вирусов ПГ-3 и ИРТ КРС в реакции ИМЛ под слоем агарозы в присутствии специфических и неспецифических

антигенов (п=8)

Проба Антиген Значение1М

• ротавирус 0.89±0.025

коронавирус 0.9210.043

0 лимфоциты молозива сальмонелла 0.96±0.010

вирус ПГ-3 0.74±0.024

вирус ИРТ 0.76±0.048

Данные таблицы 8 показывают, что лейкоциты, полученные из молозива КРС, содержат антигенспецифический ФП, который замедлял миграцию индикаторных клеток в присутствии специфических антигенов ПГ-

3 и ИРТ КРС (1М - 0.74 и 0.76 соответственно) и не замедлял их миграцию в присутствии неспецифических антигенов (для ротавируса 1М - 0.89, для коронавируса !М - 0.92, для сальмонеллы 1М - 0.96).

Получение и тестирование препаратов фактора переноса кроликов, сенсибилизированных аттенуированной вакциной против сальмонеллеза свиней (экспериментальный тест)

Для сенсибилизации кроликов сальмонелезным антигеном было сформировано 3 группы: 1, 2-опытные и 3-контрольная. Первой группе вакцину вводили трижды с интервалом 7 дней внутримышечно в область бедра в дозе 1 см3 (2.5-Ю10 живых микробных клеток), второй группе - в дозе 2 см3 (5-1010 живых микробных клеток), животным контрольной группы антиген не вводили.

В исследуемых и контрольной группах наиболее выраженная кожная реакция наблюдалась через 48 часов после введения антигена. В группе животных, которым ввели 1 см3 вакцины (1 исследуемая группа) после второго введения антигена утолщение кожной складки составило -0.9810.04 (К=2.4), а после третьего введения - 1.26± 0.16 (К=3,7). После второго введения антигена толщина кожной складки достигла нормы через 10 дней, а после третьего введения через 18 дней.

В группе животных, которым ввели 2 см3 вакцины, результаты постановки кожной пробы после 2 и 3 введения антигена практически не отличались. Утолщение складки после второго введения составило 1.03±0.07 (К=3.0), а после третьего введения 1.11Ю.13 (К=3.4). После второго введения толщина кожной складки достигла нормы через 14 дней, а после третьего введения через 16 дней.

Специфичность и уровень сенсибилизации оценивали так же в реакции ингибиции миграции лейкоцитов под слоем агарозы, используя не разведенный антиген и разведения антигена в 2 и 4 раза.

Данные, полученные при тестировании лимфоцитов, выделенных из периферической крови и лимфоидных органов животных - доноров 1, 2, и 3 групп в реакции ИМЛ под слоем агарозы, представлены на рисунке 1.

исследуемые пробы

□ цельное В разведение а 2 раза ■ разведение в 4 раза

Рис. 1. Индекс миграции лимфоцитов, полученных из крови и лимфоидных органов кроликов, сенсибилизированных различными дозами сальмонеллезного антигена

Из рисунка 1 следует, что по данным реакции ингибиции миграции лейкоцитов под слоем агарозы наиболее активными оказались лимфоциты кроликов, которых сенсибилизировали сальмонеллезным антигеном в дозе 2.5-1010 живых микробных клеток.

Тестирование иммуногенной активности ДЭЛ проводили в реакции ГЗТ. Для этого белым мышам подкожно инокулировали ДЭЛ в дозе эквивалентной 8.5-107 клеток, а через 7 дней внутрикожно ввели 0.02 см3 сальмонеллезного антигена. Перенесение ГЗТ показало, что все исследуемые образцы антигенспецифичных ДЭЛ были высокоактивными. Максимальное утолщение плюсневого мякиша наблюдалось через 48 часов после постановки кожной пробы и составляло 0.56±0.008 см, а у мышей, которым ДЭЛ не вводили, утолщение составило 0.28±0.030 см. Через 25

дней был проведен повторный опыт, который показал, что активность исследуемых образцов не снизилась. Толщина плюсневого мякиша у животных опытной группы составила 0.56±0.014 см, а у животных контрольной группы 0.29±0.05 см. На введение плацебо животные отвечали не значительным утолщением кожной складки.

Данные, полученные при тестировании ДЭЛ in vitro от кроликов-доноров, сенсибилизированных 1.0 и 2.0 см3 сальмонеллезного антигена с использованием различных разведений, представлены на рисунке 2.

1,2!

дал кр-1 дэл кр-2 дэл л.о-1 дэл л.о-2 контроль контроль

крови лимф.орг.

исследуемые пробы

□ цельное ■ разведение в 2 раза

■ разведение в 4 раза

Рис. 2. Значение индекса миграции ДЭЛ, полученных из крови и лимфоидных органов кроликов, сенсибилизированных различными дозами сальмонеллезного антигена.

Примечание: ДЭЛ кр-1 - диализат, полученный из крови кроликов, ,

сенсибилизированных 1см3 сальмонеллезного антигена, ДЭЛ кр-2 - диализат, полученный из крови кроликов, сенсибилизированных 2 см3 сальмонеллезного антигена, ДЭЛ кр 3 - диализат, полученный из крови интактных кроликов, ДЭЛ л. о.-1 -диализат, полученный из лимфоидных органов кроликов, сенсибилизированных 1см3 ^

сальмонеллезного антигена, ДЭЛ л. о.-2 - диализат, полученный из лимфоидных органов кроликов, сенсибилизированных 2 см3 сальмонеллезного антигена, ДЭЛ л. О.-З - диализат, полученный из лимфоидных органов интактных кроликов.

Из рисунка 2 следует, что по данным реакции ИМЛ под слоем

агарозы все тестируемые образцы ДЭЛ оказались активными, что

t )

подтверждается замедлением миграции леикоцитов в присутствии специфического антигена.

ВЫВОДЫ

1. Экспериментально установлено, что лимфоциты, выделенные из крови, молозива и лимфоидных органов (лимфоузлов и селезенки)

v животных, иммунизированных против ротавирусной инфекции телят,

парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и сальмонеллеза индуцируют у несенсибилизированных реципиентов развитие клеточного иммунитета.

2. Разработана методика получения лимфоцитарной массы из периферической крови животных, лимфоидных органов и молозива коров.

3. Оптимизирован способ получения препарата фактора переноса на основе диализата экстракта лейкоцитов из крови, молозива и лимфоидных органов (лимфоузлов и селезенки) иммунизированных доноров.

4. Усовершенствованы методы определения иммуногенной активности фактора переноса in vivo в реакции гиперчувствительности замедленного типа и in vitro в реакции ингибиции миграции лейкоцитов под слоем агарозы.

5. Изучены особенности сенсибилизации организма доноров в зависимости от дозы антигена, вводимого животному, и влияние этой дозы на скорость создания клеточно-опосредованного иммунитета у животных.

6. Установлено, что препарат фактора переноса, полученный из лимфоцитов иммунизированных животных, обладает строгой антигенспецифичностью и позволяет передавать клеточно-опосредованный

иммунитет ксеногенным животным, минуя видовои барьер.

7. Определены сроки возникновения клеточного и гуморального иммунитета у животных при введении препаратов фактора переноса на основе диализата экстракта лейкоцитов при иммунизации и гипериммунизации животных вирусными антигенами.

8. Показано, что препарат фактора переноса усиливает иммунный ответ телят на введение вакцины против ротавирусной инфекции крупного рогатого скота по сравнению с одной вакцинацией.

9. С помощью реакции ИМЯ под слоем агарозы и РДП были установлены сроки возникновения клеточного (3-7 дней) и гуморального (12-14 дней) иммунитета кроликов на введение ротавирусного антигена крупного рогатого скота.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического применения предлагаются следующие инструкции и методические рекомендации:

- Временные технические условия на препарат фактора переноса против вирусных и бактериальных инфекций животных.

- Временное наставление по применению препаратов фактора переноса против вирусных и бактериальных инфекций животных.

Инструкция по получению ДЭЛ из лимфоцитов селезенки, лимфатических узлов и лейкоцитов периферической крови и молозива.

Методические рекомендации по тестированию иммуногенной активности диализата экстракта лейкоцитов in vitro (реакции замедления миграции лейкоцитов под слоем агарозы).

Методические рекомендации по тестированию активности ДЭЛ in vivo (реакция гиперчувствительности замедленного типа).

Инструкция и методические рекомендации рассмотрены и одобрены ученым советом (протокол №14 от 4.10.2002 г.) и утверждены директором ФГУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных».

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Кухаркина О. В. Нетрадиционные способы иммунизации животных (Обзор) // Достижения молодых ученых - в ветеринарную практику: Матер, конф - Владимир, 2000.-С. 60-63.

| 23

* 2. Кухаркина О. В., Невинская О. В. Оценка различных способов

' сенсибилизации животных II Уч. Зап. Витебск. Гос. акад. вет. мед.- Витебск,

2001- Т.37, ч. 2.-С. 94-95.

3. Кухаркина О. В., Невинская О. В., Никешина Т. Б., Жбанова Т. В.

* Получение и тестирование диализата экстракта лейкоцитов, содержащего фактор переноса против ротавирусной инфекции КРС II Мониторинг,

* распространение и предотвращение особо опасных болезней животных: Матер, докл. науч. конф.- Самарканд, 2001,- С.88-89.

1 4. Кухаркина О. В., Невинская О. В., Мищенко В. А. Получение и

тестирование диализата экстракта лейкоцитов от кроликов, сенсибилизированных аттенуированной вакциной против сальмонеллеза II Актуальн. пробл. патологии свиней, крупного и мелкого рогатого скота: Матер, конф. молодых ученых. - Владимир, - 2002.-С. 20-24.

5. Кухаркина О. В., Мищенко В. А. Тестирование иммунологической активности сенсибилизированных лейкоцитов и их диализатов в реакции ингибиции миграции лейкоцитов под слоем агарозы // Вет. медицина: М!жвщ. тем. наук., зб. 80 рок. 1ЕКВМ - Харьюв, 2002.-С.370-373.

6. Кухаркина О. В., Мищенко В. А., Никешина Т. Б. Иммунитет у стельных коров и телят разного возраста на введение различных вирусных препаратов // Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных: Матер, междунар. научно-пракгич. конф. - Минск, - 2003.-С. 186189

7. Мищенко В. А., Захаров В. М., Кухаркина О. В. Использование колостральных антител при иммуномониторинге вирусных инфекций // Матер, междунар. научной конф, посвященной 45 -летию ФГУ «ВНИИЗЖ».

* - Владимир, - 2003. С. 77-82

Отпечатано на базе ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных».

Тираж 90 экз. 2003.

1705-2

H905J

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кухаркина, Ольга Венедиктовна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

• - лп

1.1. Медиаторы иммуннои системы.

1.2. Характеристика фактора переноса.

1.3. Химическая природа фактора переноса.

1.4. Свойства фактора переноса.

1.5. Механизм действия фактора переноса.

1.6. Животные, используемые для получения фактора переноса.

1.7. Получение фактора переноса

1.7.1. Выбор доноров

1.7.2. Подготовка антигена

1.7.3. Сенсибилизация доноров для репродукции фактора переноса.

1.7.4. Выделение лимфоцитарной массы из тканей и жидкостей организма доноров.

1.7.5. Получение диализата экстракта лейкоцитов.

1.8. Тестирование активности фактора переноса в диализатах экстрактах лейкоцитов.

1.8.1. Реакция замедления миграции лейкоцитов.

1.8.2. Реакция гиперчувствительности замедленного типа у животных.

1.9. Применение препаратов фактора переноса для лечения и профилактики инфекционных болезней животных и человека.

1.9.1. Применение фактора переноса для лечения болезней людей.

1.9.2. Экспериментальное изучение фактора переноса на животных.

1.9.3. Осложнения, возникающие у животных и человека при введении фактора переноса.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение и изучение свойств препаратов фактора переноса против некоторых вирусных и бактериальных инфекций животных"

Актуальность темы. Общеизвестно, что при многих заболеваниях, вызванных вирусными, бактериальными и другими инфекционными агентами, преимущественно главным фактором защиты организма является специфический гуморальный иммунный ответ [1,2]. Но при всей важности гуморальной формы реагирования отмечают, что, в первую очередь, гуморальные реакции имеют под собой клеточную основу [3].

Клеточно-опосредованной формой реагирования называют такие формы иммунных реакций, в которых эффекторными клетками являются лимфоциты, имеющие специфические рецепторы к тем или иным антигенам. Клеточно-опосредованный иммунитет (КОИ) передается клетками костного мозга, селезенки, лимфатических узлов и крови [9].

За клеточно-опосредованный иммунитет ответственны сформированные в тимусе Т-лимфоциты, которые встречаются особенно в тимусзависимых зонах лимфоидных органов, в лимфе (около 80 % всех лимфатических клеток, в выходящей из лимфатических узлов лимфе), а так же крови [5].

При воздействии антигена в иммунокомпетентных Т-клетках начинаются процессы деления и дифференцирования, в результате которых образуется популяция специфически сенсибилизированных лимфоцитов.

Сенсибилизированные лимфоциты содержат фактор, способный переносить опосредованный клетками иммунитет на несенсибилизированные лимфоциты. Эта способность была открыта в 1949 году, а фактор, отвечающий за перенос клеточно-опосредованного иммунитета, был назван фактором переноса (ФП). Это низкомолекулярная антигенспецифическая гетерогенная смесь пептидов и рибонуклеопептидов, способная специфически переносить ГЗТ к определенным антигенам [6].

Необходимость изучения передачи клеточного иммунитета с помощью фактора переноса обусловлена тем, что эта проблема недостаточно раскрыта. Многие исследователи предполагают, что трансфер фактор (TF) сможет обеспечить защиту организма от заболеваний, вызванных различными инфекционными агентами [15, 27, 43, 62, 69, 95, 107, 118, 122, 129, 136, 144, 162, 173, 182, 205].

Так как для препаратов фактора переноса не существует видового барьера, он может быть универсальным для любого вида животного и человека. Препараты, приготовленные из лимфоцитов крови и лимфоидных органов не иммуногенны, не токсичны, поэтому их применение безопасно. Иммунитет развивается по типу гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и сохраняется от нескольких месяцев до года [2, 25]. Все представленные данные говорят о необходимости изучения передачи клеточно-опосредованного иммунитета с помощью лимфоцитов, полученных от сенсибилизированных организмов.

Для испытания фактора переноса применяют тесты по оценке клеточного иммунитета [20].

В изучении клеточного иммунитета большую роль вносит познание возможности передачи состояния сенсибилизированности от одного организма другому с помощью иммунных лимфоцитов [4]. Реакция организма на введение иммунных лимфоцитов развивается по типу замедленной гиперчувствительности. Это может быть определено соответствующими кожными тестами. Развитие реакции ГЗТ хорошо коррелируетря с реакцией ингибиции миграции лейкоцитов in vitro. Реакция ингибиции миграции лейкоцитов (ИМЯ) является наиболее точным тестом для оценки клеточно-опосредованного иммунного ответа.

Заболевания молодняка крупного рогатого скота (КРС) наносят большой экономический ущерб, несмотря на наличие средств специфической и неспецифической профилактики, поэтому необходим новый подход к решению этой проблемы. Использование препаратов ФП в ветеринарной практике является новым направлением иммунологической науки, и ряд вопросов по этой теме остается не решенным.

Диссертация имеет характер поискового экспериментального исследования, которое является фрагментом научной темы по изучению клеточных медиаторов и новых средств специфической профилактики.

Цели и задачи исследования. Основной целью работы было экспериментальное изучение возможности использования препаратов ФП для профилактики некоторых инфекционных болезней молодняка КРС.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

- протестировать иммунологическую активность ДЭЛ против некоторых бактериальных и вирусных инфекций;

- изучить особенности иммунитета, возникающего в ответ на введение препаратов фактора переноса на основе ДЭЛ; определить взаимодействие клеточного и гуморального иммунитета при различных способах активации им мунекомпетентных клеток;

Научная новизна работы. Научная новизна проведенных экспериментальных исследований состоит в том, что:

- разработана схема сенсибилизации животных доноров ДЭЛ;

- получены препараты ФП на основе ДЭЛ к вирусным и бактериальным антигенам;

- разработана методика получения препаратов TF из периферической крови, лимфоидных органов, молозива;

- определена возможность перенесения КОИ ксеногенным животным с помощью ДЭЛ;

- отмечено равноценное влияние клеточного и гуморального иммунитета при защите организма животных от кишечных инвазий;

Практическая ценность результатов исследования. Экспериментальные материалы вошли в нормативно техническую документацию по получению и тестированию препаратов ФП на основе ДЭЛ, одобренную ученым советом и утвержденную директором института.

- регламент по получению препаратов ДЭЛ из лимфоцитов селезенки, лимфатических узлов и лейкоцитов периферической крови и молозива;

- методические рекомендации по тестированию иммунологической активности TF in vitro в реакции замедления миграции лейкоцитов под слоем агарозы;

- методические рекомендации по тестированию активности иммуностимулятора in vivo в реакции гиперчувствительности замедленного типа.

Публикация научных исследований. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и опубликованы в материалах научных конференций: «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику» (г. Владимир, ВНИИЖЗ, 2000 г.); «Современные проблемы селекции, ветеринарной генетики и защиты животных» (г. Витебск, Республика Беларусь, 2001 г.); «Мониторинг распространения и предотвращения особо опасных болезней животных» г г. Самарканд, Республика Узбекистан, 2001 г.); «Вет. медицина: Мжвщ. тем. наук., зб. 80 рок. 1ЕКВМ» (г. Харьков, Республика Украина 2002 г.); «Актуальные проблемы свиней крупного и мелкого рогатого скота» (г. Владимир, 2002 г.), «Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных» (г. Минск, Республика Беларусь, 2003 г.), «Актуальные проблемы инфекционной патологии животных» (г. Владимир, 2003 г.).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 140 страницах и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, выводы, практические предложения, приложения. Список литературы включает 209 источников, в том числе 27 работ на русском языке. Работа иллюстрирована 10 рисунками и 24 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Кухаркина, Ольга Венедиктовна

6. выводы

1. Экспериментально показано, что лимфоциты, выделенные из крови, молозива и лимфоидных органов (лимфоузлов и селезенки) животных, иммунизированных против ротавирусной инфекции телят, парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и сальмонеллеза индуцируют у несенсибилизированных реципиентов развитие клеточного иммунитета.

5. Изучены особенности сенсибилизации организма доноров в зависимости от дозы антигена, вводимого животному и влияние этой дозы на скорость создания клеточно-опосредованного иммунитета у животных.

6. Установлено, что препарат фактора переноса, полученный из лимфоцитов, иммунизированных животных, обладает строгой антигенспецифичностью и позволяет передавать клеточно-опосредованный иммунитет ксеногенным животным, минуя видовой барьер.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического применения предлагаются следующие инструкции и методические рекомендации: временные технические условия на препарат фактора переноса против вирусных и бактериальных инфекций животных;

- временное наставление по применению препаратов фактора переноса против вирусных и бактериальных инфекций животных; инструкция по получению ДЭЛ из лимфоцитов селезенки, лимфатических узлов и лейкоцитов периферической крови и молозива; методические рекомендации по тестированию иммунологической активности ДЭЛ in vitro (реакции замедления миграции лейкоцитов под слоем агарозы); методические рекомендации по тестированию активности

ДЭЛ in vivo (реакция гиперчувствительности замедленного типа)

Инструкция и методические рекомендации рассмотрены и одобрены ученым советом (протокол №14 от 4.10.2002 г.) и утверждены директором ФГУ «Федерального центра охраны здоровья животных».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кухаркина, Ольга Венедиктовна, Владимир

1. Авербах М. М., Герберт В .Я., Литвинов В. И. Повышенная чувствительность замедленного типа и инфекционный процесс .-М.: Медицина, 1974.-С.113.

2. Алкан С. Оценка антиген-специфической пролиферации мышиных Т-клеток// Методы исследований в иммунологии М., 1981.-С.320-326.

3. Арала-Чейвз П., Хоренгейма М., Гаует М., Фуденберг X. Биологические и клинические аспекты фактора переноса // Иммунологическая инженерия / Под ред. Д. Джирша. -М., Медицина, 1982.-С.53-104.

4. Бакулов И.А. Методологические рекомендации по изучению клеточного иммунитета у свиней при вирусных инфекциях.- Покров, 1988.-С.9-11, 65-69.

5. Бастен А., Крофт С. Фактор переноса: клиническое использование и экспериментальные данные // Иммунологическая инженерия / Под ред. Д. Джирша. -М.,Медицина, 1982.-С. 105-148.

6. Бернет Ф. Клеточная иммунология .-М.: Мир,1971.-С. 542.

7. Брондз Б.Д. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом распозновании.-М.:Медицина,1987.-С.З,4,85,233,305.

8. Бучвальд С., Перепечкина Н.П., Салов В.Ф., Мац А. Н. Местный специфический иммунный ответ к белку A Staphylococcus aureus в лимфоидной ткани миндалин человека //ЖМЭИ.-1985.-№5.-С. 78-83.

9. Вершигора А.Е. Общая иммунология. Киев: Высшая школа 1989-С.520-523.

10. Грин М. И., Шаттен С., Бранберг Д.С. Реакция гиперчувствительности замедленного типа // Иммунология. М., 1989.-Т.З.-С.152.

11. Майер В., Валаскова М.И. др. Концентрирование мышиного антигенспецифического фактора переноса с известной активностью //Acta Virol.-1983.-Т.27, №3.-С.228-237.

12. Мац А.Н., Перепечкина Н.П. Аффинолейкин биофармацевтический препарат для инструктивной противоинфекционной иммунотерапии при недостаточности клеточного иммунитета // Микробиологический журн.-1998.-№ 2.-С.78-83.

13. Петров Р.В., Хаитов P.M., Пинегин Б.В. и др. Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях, методические рекомендации для научных работников и врачей практического здравоохранения // Иммунология.-1992.-№6.-С. 51-62.

14. Погодина В.В., Левин Л.С., Перепечкина Н.П., Мац А.Н. Влияние препаратов специфического и неспецифического трансфер-фактора на течение экспериментального клещевого энцефалита // Вопр. вирусологии.-1989.-№8.-С.689-693.

15. Серов В.В., Кактурский Л.В. Гиперчувствительность замедленного типа М.: Архив патологии, 1973.-C.3-19.

16. Фримель X., Брок И. Основы иммунологии.- М. Мир:1986.-С.127-128.

17. Шивинда А.Э., Степанюк О., Скибицкий В.Г., Получение, тестирование и перспективы использования диализированного экстракта лейкоцитов, содержащих фактор переноса // Науковий вюник Нацюнального аграрного уыверситету.- Киев., 1998. Вип.- 6.-С. 94-101.

18. Шивинда А.Э Получение антигенспецифического ДЭЛ против ротавирусного и эшерихийного антигенов // Животноводство Украины.-1998.-№2.-С.16.

19. Шивинда А.Э Об индукции специфической резистентности и других факторов иммунитета при помощи ДЭЛ // Ветеринарна медицина Украини.-1998.- №4.-С.14-15.

20. Шредер И., Лоуренс У. Выделение фактора переноса // Иммунологические методы / Под ред. X. Фримеля М., Мир,1979.-С.187-194.

21. Шредер И., Перепечкина Н.П., Мац А.Н., Медуницын Н.В Адъювантные свойства препаратов трансфер-фактора из лимфоцитов миндалин человека // ЖМЭИ.-1979.-№2.-С.103-108.

22. Шиши В., Хайкене X. Кожные реакции замедленного типа // Иммунологические методы. М„ 1987.-С.342-348.

23. Шмидтмайерова X., Черман И., Рей Ф. Ингибирование вируса иммунодефицита человека ультрафильтратом лизированных лейкоцитов // Acta Virol.- 1990,- Т.34.-С.262-270.

24. Юшкова Т.А., Юшков В.В Иммуномоделирующая активность трансфер-факторного препарата трансфлавина, специфичного вирусу клещевого энцефалита //ЖМЭИ.- 1998.-№2.-С.83-85.

25. Ablash D.V.,Kruegtr G.R.,Levine Р.Н. et.al. In vivo effects of human herpes virus-6 (HSV) specific Transfer Factor in two patients with chronic fatigue sundrome // X lnt.Symp. of Transfer Factor: Abst. Book. Bologna. 1995.-P.18.

26. Annamalia A.E., Pal P.K., Colman R.F. Purification of nucleoside peptides by chromatography on dihydroxyboryl substituted polyacrylamide and cellulose animal // Anal. Biochem.-V.99.- P. 85-91.

27. Arala-Chaves M. P., Klesius P. H., Fudenberg H. H. Evidence for specific and non-specific effects of dialyzable leukocyte extracts (containing transfer activity) in mice // Immune Regulators in Transfer Factor. New York-1979.- P.15-26.

28. Arala-Chaves M. P., Lebaco L. G., Heremans I.F. Fractionation of human leukocyte exstracts transferring delayed hypersensitivity to tuberculin // Int. Arch. Allergy appl. / Immunol -1967.- V.31 .-P.353-356.

29. Arala-Chaves M.P., Ramos M.f Rosado R., Branco P Transfer factor "in vitro". Additional data concerning a new method // Int. Arch. Allergy Appl. / Immunol .-1974.-V.46.-P.612-618.

30. Arala-Chaves M. P., Rui Proenca and Miguel de Sousa. Transfer factor in case of complex immunodeficiency // Cell. Immunology. -1974.- V.10.-P.317-379.

31. Arala-Chaves M.P., Silva A., Porto M., Picoto A. In vitro and vivo studies of the target cell for dialyzable leukocyte extracts: Evidence for recipient specificity //Clin. Immunology and lmmunopathology.-1977.-№8.-P.430-447.

32. Arrenbrecht S., Aker O., Dubs R. et.al. Transfer factor in rats. // Immune Regulators in Transfer Factor / Eds. Khan A. et.al. New -York ets, 1979.-P.643.

33. Ascher M.S., Shneider W.I., Valentine F.T. In vitro properties of leukocytes dialysates countaining transfer factor// Proc. Nat. Acad. Sci. USA. -1974.- V.71.-P.1178.

34. Barnet K.p Vasek A., Cech K., Pakarek I. The effect of fractions of DLE-TF on GM-progenitors of haemopoetic cells in vitro. // X Int. Symp.of transfer factor: Abstr. Book.- Bologna ,1995.- P.9.

35. Bennett R.M., Gabor G.T., Merritt DNA binding to human leukocytes: evidence for receptor-mediated association and degradation of DNA // Clin lnvest.-1985.- V.76.- P.1.

36. Bennett R.M., Hefeneider S.H., Bakke A., et.al. The production and characterization of murine monoclonal antibodies to a DNA receptor on human leukocytes// Immunology. 1988.-V.140. P.2937.

37. Bhardwaj N. Brummer E., Foster U Transfer of DTL to SK-SD and tetanus, toxoid in BALB mice by Transfer Factor preparated from purified subpopulations-of murine lymphocytes // Immune Regulators in Transfer Factor.- New -York ets.- 1979.-P.285.

38. Bisutti L., Blotta A., Mastrorille M. Transfer factor adjuvant therapy in nonsmall cell lung carcinoma (NSCLC) after surgery radiotherapy // Exp. Pathol.-1987.-V.3, №4.- P.565-568.

39. Blume M.R., Rosendaum E.N., Cocher R.I. Dialyzable leukocyte extracts (specific and adjuvant) against disseminated melanoma // Cancer.-1981.- V.47, №5.-P.11-16.

40. Borisova E.V., Cheusova Z.V., Lobo A.A., Borisov V.A The suppression of the T-effector and Transfer Factor by Salmonella lipopolysacharide // X Int. Symp.of Transfer Factor: Abstr. Book.- Bologna, 1995.-P.15.

41. Borkowsky W., Lawrence H. Effects of human leukocyte dialyzates containing transfer factor in the direct Leukocyte Migration inhibition (LMI) / Specifity of Transfer Factor // Nature -1976.-V.262.-P.155-156.

42. Buchwald S., Perepechkina N., Salov V., Mats A. The local specific immune response to Staphylococcus aureus protein A in human tonsillar lymphoid tissue //Microbiol. Epidemiol. lmmunobiol.-1985.-№5.-P.78-83.

43. Bukowski R.M., Deodhar S., Hewlett J.S., Greenstreet R. Randomized controlled trial of transfer factor in stage (malignant melanoma ) // Cancer. -1983.-V.51, №2.-P.269-272.

44. Burger D.R., Klesius P.H., Vandenberk A.A., et al. Transfer of keyhole limpet hemocyanin dermal reactivity to man with bovine Transfer Factor // Cell.lmmunol.-1979.-V.43.-P.192-196.

45. Buchwald S., Schroder I., Mats A., Perepechkina N. Leukocyte dialysates and transfer factor.- Bratislava, 1987. -P. 305-313.

46. Burger D., Vanderbark A., Vetto R. Human Transfer Factor: specificity and structural models // Immunobiology of Transfer Factor / Eds. Kirkpatrik D., Burger H., Lowrence. -New-York, 1983.-P.33-42.

47. Burger D., Vandenbark A., Daves D Human Transfer Factor: fractionation ^ and biological activity// lmmunol.-1976.-V.117, №3.-P.789-796.

48. Burger D., leter W. Cell-free passive transfer of delayed hypersensitivity to chemicals in guinea pigs // Infect. lmmunol.-1971.-№4.P.575.

49. Cabera-Quiroga RM Estroda Parra S.f Padierna-Olivos L. Effects of DLE in patients with herpes // Research and Application of Transfer Factor and DLE / Huo Bao Lai, Wang Ru-Zhan, Zou Zhao Fen.-Beijing(China), Xucyuan. Press. -1989.-P.292-305.

50. Carey I., Leberman M., Toossi Z. Augmentation of skin test reactivity and lymphocyte blastogenesis in patients with AIDS treated with Transfer Factor // JAVMA .-1987.-V.275, № 5.-P.651-655.

51. Carey I., Leberman M Treated of AIDS with transfer factor // JAVMA V.258,24.-P.3515-3516.

52. Cech T. The chemistry of cell splicing of RNA and RNA enzymes // Science.-1987.-V.235.-P.1531.

53. Capman S., Kirkpatrik C. The two step leukocyte migration inhibition factor (LIF) .It is use in evaluation of cellular immune function in patients with immunodeficiency diseases // Cell. Immunol.-1978.-V.37.-P.209-220.

54. Cilchirst G., Ivins I., Ritt R. Adjuvant therapy for nonmetastatic octeogenic sarcoma: an evaluation of Transfer Factor versus combination chemotherapy //

55. Cancer Treat Rep.-1978.-V.62, № 2.-P.289.

56. Clausen I. The agarose migration technique for in vitro demonstration of cell mediated immunity in man // Danish. Med. Bull. -1975.-V.22.-P.181-194.

57. Clinton B., Magoc T. Leshmania enrietti infections in guinea pigs Transfer Factor obtained from convalescent yet immune animals // Transfer Factor: Basic Properties and clinical Applications / Eds. Ascher M, Gottlieb A.- New York,.-1976.-P.709.

58. Corrado F., De Vinci C., Corrado G., Pizza G. Immunotherapy of renal cellcarcinoma // Clinical and Experimental Developments / Eds. Debruyn M.-Berlin, 1991.-P.105-125.

59. Clowle A. Delayed hypersensitivity in the mouse // Adv.lmmunol.-1975.-V.20.-P. 197-264.

60. Debruyn M., Cornu G., Heremans Bracke T. Dialyzable leukocyte extracts in treatment of childhood leukemia // Haematology.-1976.-V.44, №2.-P.243-247.

61. De Corgolas M., Verdejo M., Fernandez M. Therapeutic approaches to cryptosporidiosis. A review of the literature // Rev. Clin. Res. Esp. -1993.-V.193.-№6.-P.322-328.

62. Delgado R., Romano E., Beffort E. Dialyzable leukocyte extract therapy in immunodepressed patients with cutaneous leishmaniasis // Clin. Immunol, and lmmunopathoI.-1981.-V.19.-P.351.

63. Dunnick W., Bach F. Guinea-pig "Transfer Factor in vitro". Physical and chemical properties and partial purification // Transfer Factor: Basic, properties and clinical applications / Eds. Asher M., Gottlieb A., Kirkpatrik C.- New York, 1975.-P.185.

64. Dwyer J.M. Transfer Factor revisited in the age of molecular biology // X Int. Symp. of Transfer Factor: Abstract Book. Bologna, 1995.-P.42.

65. Eichberg I., Steell R., Katler S. Cellular immunity in gnotobiotic primates induced by Transfer Factor // Cell. Immunol. -1976.- V.26.-P.114.

66. Fazio M., Camevale-Schianca F., Sabidussi A. Serial in vitro transfer of hypersensitivity to cancer antigens by sensitised lymphocytes // Panminerva med.-1995.-V.37.-P.386-389.

67. Fazio M., Negri L., Mostromatteo V. Osteosarcoma specific transfer factor: preliminary clinical results // Exp. Pathol. -1987.-V.3, №4.-P.250-254.

68. Fellowes R., Lehner T. An investigation of the T-cell requirements of In vitro antibody forming B-cell detected by the ELISPOT assay and a comparison with antibody synthesis // Immunol. Methods.-1990.-V. 132.- P171.

69. Fudenberg H. Ophtalmologic herpes zoster: complete remission in six hours with dialyzable Transfer Factor//Clin. Lab. lmmunol.-1985.-V.18.-P.49-51.

70. Fudenberg H., Levin V. The therapeutic uses of Transfer Factor (Invited review) II Hosp. Pract.-1974.-V.9.-P95-104.

71. Fudenberg H., Pizza G.Transfer Factor- new frontiers // Progress in Drug Research.-1994.-V. 42.-P.309-400.

72. Fudenberg H. Transfer Factor: Past, present, future // Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol -1989.-V.29. -P. 475-516.

73. Fudenberg H., Spitler L., Levin A. Treatment of immune defiance //Pathology. 1972.-V.69.-P.529-536.

74. Fudenberg H.H., Fudenberg H.L. Transfer Factor: past, present, future // Research and applications of Transfer Factor and DLE / Eds. Huo D., Wang R., Zou Z.-Beijing (Chine),-1989.-P.551-598.

75. Fudenberg H., Tsang K. Theories and models in cellular transformation.-New-York : London: Acad. Press, 1985.-P.23-34.

76. Fudenberg H., Tsang K. In utero osteosarcoma tolerized hamster: a model for human cancer and immunocyte differentiation // Theories and Models in Cellular Transformation / Saanti L., Zardi L- London, 1985.-P23-43.

77. Fujisawa T., Yamaguchi Y., Kimura H. Randomized controlled trial of transfer factor immunochemotherapy as an adjunct to surgical treatment for primary adenocarcinoma of the lung // Jap. J. Sung.-1984.-V.14, № 6.-P.452-458.

78. Galbraith G., Fudenberg H. Transfer Factor// Dermatology, Immunology and Allergy .-1985 .-V.3.- P.889-898.

79. Giambione i., Klesius P. Adoptive transfer of delayed wattle reactivity in chickens with dialyzable leukocyte extract containing Transfer Factorl 983 //Poultry Sci.- 1983.-V.62, №5. -P.767-777.

80. Goldenberg G. J., Brandes L. J, Lau W. H., et al. Cooperative trial of immunitherapy for nasopharyngeal carcimoma with transfer factor from donors with Epstein-Barr virus antibody activity // Cancer Treat. Rep. -1985.-V.69, № 7-8.-P.761-767.

81. Goldenberg G., Brandes L. Transfer Factor in treatment of nasopharyngeal carcinoma // Cancer Res. -1976.-V.36.- P.720-724.

82. Gonzalez R.f Wong P., Spitler L. Malignant melanoma: Dialyzable leukocyte extract -possible solution? // Cancer.-1980.-V.45, №1.- P.57-61.

83. Goust I., Marescot M., Lesourd B., Doumercq S. Characterization of human dialyzable transfer factor from normal and chronic lymphoid leukemia sources // Biomedicine .-1976.-V.24.- P.39.

84. Hainaid I., Dormont D., Haguesuer G., et. al. Immunobiology of Transfer Factor / Eds. Kirkpatrick et.al. -New-York, 1983.- P.273-277.

85. Hana N. Stara I., Bogyszava I. Results of long-term treatment of recurrent anteriors uveitis by Transfer Factor // X Int. Symp.of Transfer Factor: Abstr. Book.- Bologna, 1995.- P.32.

86. Hancock N., Bruce L., Sokal R., Clark A Transfer Factor in Hodgkin- s disease :A randomized clinical and immunolodical study // Cancer Clin. Oncol. -1986.-24.-№ 5.-P.929-933.

87. Heinonen E., Grohn P., Tarkkanen I. Transfer Factor in Hodgkin- s disease // Immunology .-1985.- № 11.-P.73-79.

88. Hoffman P., Sputler L., Hsu M.f Fudenberg H. Leukocyte migration-inhibition in agarose // Cell. Immunol.- 1975.-V.18,- P.20-21.

89. Ivins I., Ritts R., Pritchard G. Transfer Factor in treatment of osteosarcoma: a randomized double blind study // Ann. New York. Asad.Sci.-1976.-P.558.

90. Karhumaki E., Marnela K., Krohn K. Chromatographic and enzymatic effects on Transfer Factor like activity from human leukocytes and porcine spleen dialyzate // nt. J. Biochem.-1988.-V. 20, №10.-P. 1067-1072.

91. Kirkpatrick C., Burger D., Lawrence H Immunobiology of Transfer Factor. -New York: Academic. Press. -1983.

92. Kirkpatrick C., Greenberg L. Treatment of chronic mucocutaneous candidiasis with Transfer Factor // Immune regulators and Transfer Factor / Khan A., Kirkpatrick C., Hill N.- New-York, 1979.-P. 97-105.

93. Kirkpatrick C., Hamax A., Morton L. Murine transfer factor: dose response relationships and routes of administration // Cell. lmmunoi.-1995 .-№2.-P203-206.

94. Kirkpatrick C.H., Smith T.K. Specific and non-specific activities in dialyzable Transfer Factor II Symposium II leukocyte culture conference.-Tucson, 1976.-Arizona.

95. Kleisius P., Fudenberg H. Bovine Transfer Factor: in vitro transfer of cell -mediated immunity to cattle with alcohol precipitates // Clin. Immunol and Immunopathol .-1977.-V.8.- P.238-246.

96. Kleisius P., Kirkpatrick C. Dialyzable leukocyte extract containing transfer factor its future in veterinary medicine // Immunoblology of Transfer Facnor / Eds. Kirkpatrick C. H., Lawrence H.S., Burger D.R.- New - York.- 1983.-P.129-142.

97. Kleisius P., Quails D., Elston A., Fudenberg H. Effects of bovine transfer factor in mouse coccidiosis (Eimeria ferrlsi) // Clin. Immunol and Immunopathol.-1978.-V.10.-P.214-221.

98. Kleisius P., Kristenson F., Ernst I., Kramer T. Bovine transfer factor: Isolation and characteristics // Transfer Factor: Basic Properties and Applications / Eds. Ascher M., Gottlirb A., Kirkpatrick C.-New-York -1976.-P.311.

99. Komatsu T. Effects of dialyzable leukocyte extracts (DLE) and inosine on stimulated lymphocytes // Bull. Tokyo Med. Dent. Univ.-1989.- V.36, № 3.-P.35-40.

100. Lawrence H. The cellular transfer of coetaneous hypersensitivity to tuberculin in man // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. -1949.- V.71.- P.516-522.

101. Lawrence H. The transfer in humans of delayed skin sensitivity to streptococcal M substance and to tuberculin with disrupted leukocytes // Clin. Invest.-1955.-V.32.- P.219-230.

102. Lawrence H. Transfer Factor // Adv. Immunol. / Eds. Dixon F., Kunkel H. -New York, Asad. Press.-1969.-V. 11.-P. 159-266.

103. Lawrence H., Valentine T. Transfer Factor in delayed hypersensitivity // Ann. New York.-1970.-P.169,269.

104. Lawrence H. Transfer Factor in cellular immunity // The Harvey Lectures Series 68.-New-York. -1974.-V.126.-P.486-489.

105. Lawrence H. Deletion of antigen-specific activity from leukocyte dialysate containing Transfer Factor by antigen-coated polisterine II Immunology. -1981.-V.126.-P.486-489.

106. Lawrence H., Pappenheimer A. Transfer of delayed hypersensitivity to diphtheria toxin in man // Exper. Med. -1956.-V.104.-P.321.

107. Lee W., Holley H., Stewart I., Galbraith G. Refractory esophageal candidiasis associated with a plasma inhibitor T-lymphocytes function: Response to plasma exchange//Amer .J. Med. Sci.-1986.-V.292.-P.47-54.

108. Levin A., Byers V. Osteogenic sarcoma immunologic parameters before and during immunotherapy with tumor specific transfer factor // Clin. Invest.-1975.-V.55.-P.487.

109. Levine P., Pizza I., Cannon G. Transfer Factor as an immunostimulator in nasopharyngeal carcinoma / Eds. Grundmann et.al.-Stuttgart, New-York.-1988.-V.5.-P.137-168.

110. Lewis D.E., Cramer J. D., Reed R. E. Detection of a new protein component In canine plasma after transfer factor administration: correlation with delayed -type skin reactivity // Immune Regulators in Transfer Factor. New-York.-1979.-P. 93-116.

111. Li Z. Studies on porcine spleen cell dialysate: experimental application of Transfer Factor in veterinary and human medicine // Leukocyte Dialysates and Transfer Factor / Eds.Mayer V., Borvak J. Inst. Virol., Slovak, 1987.-P. 478-490.

112. Liburd E., Pabst H., Armstrong W. Transfer factor in rat coccidiosis // Cell. lmmunol.-1972.-№ 5.- P.486-489.

113. Littman B., Rocklin R., Parkman R., David I. Transfer factor treatment of chronic mucocutaneous candidiasis : requirement for donor reactivity to Candida antigen//Clin . Immunol, and Immunopathol.- 1987.-V. 9.-P. 97-103.

114. Lokaj I. Dialysate of leukocyte homogenate in the treatment of sepsis // Bratisl .Lek. Listy. -1988- V.89, № 8.- P.586-590.

115. Louie E., Borcowsky W., Klesius P. et. al. Treatment of cryptosporidiosis with oral bovine transfer factor // Clin. Immunol, and Immunopathol .-1987.-V.44, №3. P.329-334.

116. Lukacs K., Kavai M., Berenyi E. Early stades of Hodgkin's diseases and transfer factor//Haematologia Buolap.- 1985.-V.18.-P. 105-110.

117. Maddison S. E., Hickriin M. D, Conway B.P., Kagan I.G. Transfer Factor: delayed hypersensitivity to Schistosoma mansoni and tuberculin in Macaca mulatta // Science.-1972.V.178.-P.757.

118. Maddison S. E., Hickriin M. D., Kagan I. G. Schistosoma mansoni reduction in clinical manifestation and in worm burdens conferred by serum and transfer factor from immune on normal rhesus monkey // Exp. Parasitol.-1976.-V.39.-P.29-39.

119. McMeeking A., Borkowsky W., Klesius P. A controlled trial of bovine dialyzable leukocyte extract for cryptosporidiasis in patients with AIDS // Infect. Dis.-1990.-V.161 .-P. 108-112.

120. Meduri R., Campos E., Scorolly L. The transfer factor in recurrent herpetic keratitis and kerato-uveitis // X Int. Symp. on Transfer Factor : Abst. Book.-Bologna.1995.-P.31.

121. Metcalf I., lohn I., Wilson G. Mycobacterium fortuitum pulmonary infection associated with an antigen-selective defect in cellular immunity // Amer. J. Med.-1981.-V.71.-P.485.

122. Mikula I. Stabilization of Salmonella-specific dialyzable leukocyte extracts // Vet. Immunol, and lmmunopathol.-1993.-V.32, №1/2.-P.103-112.

123. Mikula I Dialyzable leukocyte extract used in the prevention of Salmonella infection in calves // Vet. Immunol, and Immunopathol .-1993.-V.32, №1/2.-P. 113-124.

124. Miller L., Spitler L., Allen R., Mitor D. A randomized double-blind, plasedp-controlled trial of transfer factor as adjuvant therapy for malignant melanoma // Cancer.-1988.-V.61, № 8.-P.1543-1549.

125. Montie I., Borkowski R., lames R. A clinical review of immunotherapy of disseminated renal adenocarcinoma//Sung. Oncol.-1982.-V.21, № 1.-P.5-8.

126. Mydill. I. Transfer Factor as an immunomodulator in Hodgkin's disease//Cheek. Pediatr.-1991.-V.46, №5.-P.105-109.

127. Neidhart I., Schwartz P., Myrphy S. Transfer Factor: Isolation of a biologically active component // Cell.lmmunol.-1973.-V.9.-P.319-323.

128. Nelson D. Macrophages and Immunity.-Amsterdam, 1969.

129. Nkrumah F., Pizza G., Neequaye J. Transfer Factor in prevention of Burkitt's lymphoma relapses // Limphokine Res.-1985.-V.4, №3.-P.237-241.

130. O'Dorisio N. Niedhart I., Lo Buglio. A . Identification of hypoxantine as a major component of chromatografically prepared transfer factor // Transfer

131. Factor: Basic Properties and Clinic Applications / Eds. Ascher M., Ascher A., Gottied A., Kirkpatrick .- New-York, 1976.-P215-224.

132. Oetteg H., Old L., Farrow J. Transfer factor in mastitis: a preliminary results // Clin. lnvest.-1971.-V.50.-P71-74.

133. Pekarek I., Cech K., Barnet K. The clinical use of specific transfer factor // Recent advances in Transfer Factor and dialyzable leukocyte extracts .-Tokyo, 1992.-P.256-263.

134. Percopo V., Taddeo F., Cobellis L., Tesauro B. Immunostimulation in sepsis//Ann. Hal. Chir.- 1994.-V.65, №1.-P45-48.

135. Perepechkina N., Raikher L.t Parhomenko T. Differential ultrafiltration as a main method of purification of transfer factor preparations // X Int. Symp. on Transfer Factor: Abstr. Book.-Bologna, 1995.-P.60.

136. Pizza G., De Vinci G., Viza D. et. al. Orally administrated HSV specific transfer factor prevents genital or labial herpes // X Int. Symp. on Transfer Factor: Abstr. Book.-Bologna, 1995.-P.29.

137. Pizza G., Meduri R., De Vinci C. Transfer Factor prevents relapses in herpes keratitis patients. A pilot study // Biotherapy.-1995.-V.8.-P.63-68.

138. Pizza G., Viza D., Corrado F. Effects of in vitro produces transfer factor on the immune respons of cancer patients // Eur. J. Cancer.-1977.-V.13.-P.917-923.

139. Pozdnyakova V., Maichuk Y., Pozdnyakov V., Matz A. Transfer Factor preparation " Affinoleukin" in the therapy of ophtalmoherpes with a tendency to take a prolonged course // X Int. Symp. on Transfer Factor: Abstr. Book.-Bologna, 1995.-P.33.

140. Qi H., Zhu X . HSV-1 specific transfer factor for treatment of herpes simplex keratitis // Recent advances in Transfer Factor and Dialysable Leukocyte Extracts / Eds. Fujisawa S., Sasakawa S., Jikura Y. -Tokyo, 1992.-P.227-230.

141. Radosevich I., Scott G., Olson G. Delayed type hypersensitivity responses induced by bovine colostral components // Amer. J. Vet. Res. -1985.-V.46,№4.-P.875-878.

142. Rapaport F., Millar I., Pappagianis D., Smith G. Transfer of delayed hypersensitivity to coccidioidin in man // Immunology. -1960.-V.80.-P.358-367.

143. Robert S., Holzman G.f Sherwood R. In vitro augmentation of lymphocytes sheep rosette formation by leukocyte dialyzates // lmmunology.-1977.-V.118.-P.5.

144. Rosenberg A., Lotze M., Muul L. Transfer factor in disseminated adenocarcenoma// New. Eng. J. Med.- 1987.-P.1223-1230.

145. Ross I., Halliday W. Investigation of transfer factor activity in the transfer of immunity to Trichostongylus acei infections in sheep // Res. Vet. Sci.-1979.-V.26.-P.41-46.

146. Rozzo S., Boymel I., Kirkpatrick C. Composition and purification of transfer factor // Recent advances of Transfer Factor and dialysable leukocyte extracts / Eds. Fujisawa T.-Tokyo, 1992.-P. 11-22.

147. Salaman M. The state of Transfer Factor // Immunology today.-1982.-P.3-4.

148. Scroder I., Rovensky I. In vitro determination of effects of dialysable leukocyte extracts containing transfer factor activity // Allergology.-1982.-V.10.-P.171.

149. Schu Z., Sicai S. Survey on the specific immune activity of oral antihepatic B placenta transfer factor // X Int. Symp. on Transfer Factor: Abstr. Book.-Bologna, 1995.-P.26.

150. Schwartz R., leter W. Oral administration of human dialysable transfer factor in patients with psoriasis //Arch. Dermatol.-1981.-V.117.-P.3-4.

151. Schwarz M„ Gutterman J., Burgess M. Dialysable leukocyte extracts in malignant melanoma: a double-blind study// Cancer.-1980.-45.-P.250-256.

152. Sharma M., Aharaki F., Ala F. Preliminary results of transfer factor therapy of persistent coetaneous leishmania infection // Clin. Immunol, and Immunophatol. -1979.-V.12.-P.183-187.

153. Sharma M., Firouz R., Ala F. Transfer factor therapy in human cutaneous leishmania (CLI): A double-blind clinical trial // Immune Regulators and Transfer Factor / Eds. Khan A., Kirkpatrick C., Hill N.- New-York, 1979.-P.563-570.

154. Shifrine M., Thilsted I. Canine transfer factor // Transfer Factor: Basic, Properties and Clinical Applications / Eds. Asher M., Gottlieb A., Kirkpatrick C.1. New-York, 1976.-P.349.

155. Sirianni M., Fiorilli M., Pana A., et al. In vitro transfer of specific reactivity to cytomegalovirus and Candida to cord blood leukocytes with dialysable leurocyte extracts//Clin. Immunol. Immunopatho!.- 1979.-V.14.-P.300.

156. Smith G., Morse P., Deraps G. Treatment of disséminât mastitis using specific and nobspecific transfer factor// Surgery .-1973.-V.74.-P.59-63.

157. Snirc I., Mikula I., Pistl I. The introduction of specific protection against Actinobacillus pleuropneumoniae infection by specific DLE // Acta. Microbiol. Hung.-1993.-V.40, №4.-P.325-333.

158. Soborg M., Bendixen G. Human lymphocyte migration as a parameter of hypersensensitivity. Acta med. Scand.- 1967.-P.181, 247-256/

159. Spitler L., Levin A., Stites D., Fudenberg H. The Wiskott- Aldrich syndrome results of therapy II Clin. Invest.-1972.-V.51 .-P.3216.

160. Spitler L., Levin A., Fudenberg H. Transfer Factor: Results of therapy // Primary Immunodeficiency Diseases in Man / Eds. Bergsma D., Good R., Finstad F., Paul N.-Birth. New-York, 1975.-V.11, №1 .-P.449-456.

161. Spilter L., Webb D., Muller C., Fudenberg H. Studies on the characterization of Transfer Factor // Clin. Invest.-1973.-V.52.-P.80.

162. Steele R., Myers M., Vinsent M. Transfer factor of the prevention of varicella zoster infection in childhood leukemia// New. Engl. J. Med.-1980.-V.303.-P.55.

163. Tsang K., Fudenberg H. Transfer factor and other T-cells derived factor (non-LKS) // Spriger Seminars in Immunopethology .-1986.-V.8.-P.4-12.

164. Tsang K., Fudenberg H., Pan I. Transfer of osteosarcoma specific cellmediated immunity in hamsters by rabbit dialyzable leukocyte extracts // Cell. lmmunol.-1985.-V.90.-295-302.

165. Turk I. Delayed hypersensitivity. Amsterdam, 1967.

166. Urbach F., Sones M., Israel H. Passive transfer of tuberculin sensitivity to patients with sareoidiosis // New. Engl. J. Med.-1952.-V.247.-P.794.

167. Vassali P., McLusky R. Inflammation, immunity and hypersensitivity. New-York: Harper.-1971 .-P. 179.

168. Vershigora A., Lyubchenko T., Goleva E. Human specific transfer factor of cell-mediated immunity to Staphylococcus antigen substances // X Int. Symp. of Transfer Factor: Abstr. Book.-Bologna, 1995.-P.14.

169. Vetto R., Burger D., Nolte I., Vandenbark A. Transfer factor immunotherapy in cancer // Transfer Factor: Basic, Properties and Clinical Applications / Eds. Ascher M., Gottlieb A., Kirkpatrick H.-New-York, 1976.-P.523-536.

170. Viza D. Specific transfer factor for the treatment of AIDS // X Int. Symp. of Transfer Factor: Abstr. Book.-Bologna, 1995.-P.5.

171. Viza D., Lefesire A., Parrasco M. A preliminary report on three AIDS patients treated with anti-HIV specific Transfer Factor// Exp.Pathol.-1987.-V.3, №4.-P.653-659.

172. Viza D., Rosenfeld F., Philips I., Davies D. Specific bovine transfer factor for the treatment of herpes infections // Immunobiology of Transftr Facnor / Eds. Kirkpatrick C., Lawrence H., Burger D. -1983. New York, P.245-260.

173. Viza D., Vich I., Philips I. Use specific transfer factor for the prevention or the treatment of herpes infection in mice and man // Exp. Pathol.- 1987.- V.3.- P. 407-420.

174. Viza D., Vich I., Philips I. Specific transfer factor protects mice against lethal challenge with herpes simplex virus // Cell. Immunol.-1986.-V.100.-P.555-562.

175. Volita A. Studies on the chemical nature of dialyzable transfer factor comparison of human leukocyte dialysate and dialysates derived from human serum and from mammalian lymphoid and non-lymphoid organs // lmmunobiology.-1979.-V.156.-P.353.

176. Wesley A., Dunnick I., Fritz H. Specifity and structural analysis of a guinea pig Transfer Factor-like activity// lmmunology.-1976.-V.18.-P.1944-1950.

177. Whyte R., Shork M., Sloan H. Transfer factor in bronchogenic carcinoma:a long-term follow-up//Ann. Thorax. Sung.-1992.-V.53, №3.-P.391-396.

178. Wilson G., Fudenberg H. Leukocyte migration inhibition as a method of assaying of transfer activities // Lymphokines / Eds. Pick E., Landy M.-1981.-V.4.-P.107.

179. Wilson G., Fudenberg H. Is controversy about transfer factor therapy nearing an end // Immunol. Today.-1983.-V.4.-P. 157-161.

180. Wilson G., Fudenberg H., Bahm V. Distinct components in dialyzable leukocyte extracts (DLE) have specific and non-specific effects on cellular immunity as shown by leukocyte migration inhibition // Trans. Assoc. Am. Physicians.-1978.-V.91 .-P.294.

181. Wilson G., Fudenberg H., Paddock G. Detected of dialyzable transfer factor in vitro. Structural and chemical characterization of the activity specific for tuberculin//Ann. New-York. Acad. Sci.-1979.-V.332.-P.579.

182. Wilson G., Paddock G., Fudenberg H. Bovine transfer factor an oligoribonucleotide which initiates antigen-specific lymphocyte responsiveness // Thymus.-1982.-V.4.-P.335.

183. Wilson G., Poidexter CM Fort I., Ludden K. De novo initiation of specific cellmediated immunity responsiveness in chickens by Transfer Factor (specific immunity indices) obtained from bovine colostrum and milk // Acta Virol.-1988.-V.32.-P.6-18.

184. Wilson G., Welch T., Fudenberg H. A component in human dialyzable Transfer Factor that induces delayed hypersensitivity in guinea-pigs // Clin. Immunol and Immunopathol.- 1977.-V.7.-P.189.

185. Wolf R., Fudenberg HM Gilliam I. Transfer factor therapy in a case of pemphigus vegetans associated with chronic mucocutaneous candidiasis // Clin. Immunol and Immunopathol .-1978.-№ 10.-P.292-297.

186. Wybran I., Levin A., Spitler L., Fudenberg H. Rosette forming cells: immunologic deficiency diseases and Transfer Factor // New. Engl. J. Med.-1973.-V.288.-P.710-713.

187. Xiu-Ying Z. Observation of curative effect on brucella specific Transfer Factor for the milk cows with brucellosis // Current researches in Transfer Factor // Eds. Zou Zhao Fen., Huo Bai., Lai Beijing, Chine.-1993.-P.187-194.

188. Xong W., Huo Bai Lai. The clinical test summarization of pain peptide oral liquor (DLE-TF) on the treatment of chronic hepatitis B /IX Int. Symp. on Transfer Factor: Abstr. Book .-Bologna, 1995.-P.25.

Информация о работе

Кухаркина, Ольга Венедиктовна
кандидата биологических наук
Владимир, 2003
ВАК 03.00.06

Диссертация

Получение и изучение свойств препаратов фактора переноса против некоторых вирусных и бактериальных инфекций животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы