Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение и анализ трансгенных растений Nicotiana tabacum со смысловой и антисмысловой формами агробактериальных генов ipt и iaaM

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Алексеева, Валерия Витальевна

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Фитогормоны.

1.1.1. Цитокинины.

1.1.1.1. Структурно-функциональные свойства цитокининов.

1.1.1.2. Биосинтез цитокининов.

1.1.1.2.1. Прямой путь биосинтеза цитокининов (de novo).

1.1.1.2.2. Биосинтез цитокининов через тРНК.

1.1.1.3. Метаболизм цитокининов в растениях.

1.1.1.3.1. Конъюгация цитокининов.

1.1.1.3.2. Деградация цитокининов.

1.1.1.4. Рецепция, передача сигнала, транспорт и регуляторная роль цитокининов

1.1.2. Ауксины.

1.1.2.1. Открытие, структура и физиологические свойства ауксинов.

1.1.2.2. Биосинтез ИУК, метаболизм и транспорт ауксинов.

1.1.2.3. Рецепция ауксинов и регуляция ауксинами экспрессии генов.

1.3. Агробактериальные гены биосинтеза цитокининов и ауксинов.

1.4. Трансгенные растения с генами биосинтеза цитокининов и ауксинов агробактерий.

1.4.1. Трансгенные растения с геном ipt.

1.4.2. Трансгенные растения с генами биосинтеза ауксинов iaaM и iaaH.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды.

2.1.1. Условия культивирования бактерий.

2.2. Растения.

2.3. Среды.

2.3.1.Среды для культивирования растений.

2.3.2. Микробиологические среды.

2.4. Реактивы, растворы и ферменты.

2.5 Выделение, очистка и манипуляции с плазмидной ДНК.

2.6. Введение метки в ДНК.

2.7. Выделение суммарной растительной ДНК.

2.8. Перенос ДНК на фильтры по Саузерну.

2.9. Гибридизация ДНК на фильтрах по Саузерну.

2.10. Выделение тотальной растительной РНК с использованием горячего фенола

2.11. РНК-ДНК гибридизация.

2.12. ПЦР-анализ рекомбинантных бактерий и трансгенных растений.

2.13. Определение степени метилирования ДНК.

2.14. Трансформация листовых дисков табака.

2.15. Определение активности неомицинфосфотрансферазы II (NPTII).

2.16. Экстракция цитокининов из растительного материала.

2.17. Экстракция и очистка ауксинов из растительного материала.

2.18. Биотест на содержание ауксинов с помощью колеоптилей пшеницы.

2.19. Стерилизация семян табака.

2.20. Определение содержания хлорофиллов и каротиноидов в листьях.

2.21. Измерение СОг-газообмена.

2.22. Измерение флуоресценции хлорофилла в листьях растений.

2.23. Определение растворимого белка и углеводов в листьях табака.

2.24. Определение листовой поверхности листьев и общего сухого веса листьев.

2.25. Колонизация растений ассоциативными метилотрофными бактериями Methylovorus mays.

2.26. Выделение хлоропластов.

2.27. Измерение скорости фотосинтетического выделения кислорода.

2.28. Анализ устьиц.

2.29. Прививка растений.

2.30. Искусственное переопыление трансгенных растений табака.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1.Создание и изучение трансгенных растений Nicotiana tabacum, экспрессирующих агробактериальный ген биосинтеза цитокининов.

3.1.1. Конструирование рекомбинантных плазмид с геном ipt под контролем одинарного промотора 35S РНК вируса мозаики цветной капусты (CaMV 35S).

3.1.2. Агробактериальная трансформация растений Nicotiana tabacum генетическими конструкциями с агробактериальными геном биосинтеза цитокининов.

3.1.3. Молекулярно-генетический анализ трансгенных растений табака, трансформированных генетическими конструкциями с генами биосинтеза цитокининов.

3.1.4. Морфолого-биохимические характеристики растений с повышенным синтезом цитокининов.

3.1.4.1. Анализ содержания цитокининов в ipt-растениях.

3.1.4.2. Вариабельность фенотипов ipt-растений.

3.1.5. Анализ метилирования ДНК в ipt-растениях табака.

3.1.6. Изучение влияния цитокининов на ipt-растения и их экспланты в нормальных условиях и при действии стрессовых факторов.

3.2. Получение и анализ трансгенных растений с геном iaaM.

3.2.1. Конструирование рекомбинантных плазмид, содержащих ген iaaM под контролем двойного промотора 35S РНК вируса мозаики цветной капусты (CaMV 35SS).

3.2.2. Агробактериальная трансформация растений Nicotiana tabacum генетическими конструкциями, содержащими агробактериальный ген биосинтеза ауксинов.

3.2.3. Молекулярно-генетический анализ растений табака, трансформированных генетическими конструкциями с геном iaaM.

3.2.4. Морфолого-биохимические характеристики растений с повышенным синтезом ауксинов.

3.2.4.1. Анализ роста ¡ааМ-растений в условиях in vitro.

3.2.4.2. Анализ роста и развития ¡ааМ-растений в условиях закрытого грунта.

3.2.4.3. Определение уровня эндогенных ауксинов.

3.2.4.4. Репродуктивные свойства ¡ааМ-растений и анализ первого поколения трансгенных растений.

3.3. Изучение фотосинтетических параметров в трансгенных растениях с генами ipt и iaaM.

3.4. Изучение химерных трансгенных растений табака с различным уровнем ауксинов и цитокининов.

3.5. Исследование антисмыслового ингибирования генов биосинтеза фитогормонов в трансгенных растениях табака.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение и анализ трансгенных растений Nicotiana tabacum со смысловой и антисмысловой формами агробактериальных генов ipt и iaaM"

Развитие современных методов генной инженерии растений позволяет по-новому решать разнообразные задачи физиологии, биохимии и молекулярной биологии растений. В 1983 году были опубликованы первые работы по созданию трансгенных растений табака, содержащих чужеродные репортерные гены и гены устойчивости к антибиотикам. В настоящее время благодаря большому скачку в развитии молекулярной биологии стало возможным получение трансгенных растений, экспрессирующих разнообразные гены под контролем промоторов различной силы, локализации и специфичности. Полученные растения используются как в чисто научных целях, так и для создания новых сортов и продуцентов биологически активных веществ.

Как известно, жизнь растений находится под постоянным гормональным контролем. Изменение гормонального баланса растений за счет введения дополнительных генов, участвующих в биосинтезе или деградации гормонов, открывает широкие возможности для изучения гормональной регуляции растений по сравнению с использовавшимися прежде экзогенными методами. Такой подход является наиболее перспективным при решении самых сложных задач от изучения отдельных функций гормонов, системы их взаимной регуляции, их роли в защитных реакциях растений на абиотические стрессы до решения вопросов, связанных с механизмами действия гормонов, их рецепцией и трансдукцией гормонального сигнала в растении. Цитокинины и ауксины являются одними из важнейших гормонов растений. Трансгенные растения с измененным балансом цитокининов и ауксинов за счет встраивания агробактериальных генов их биосинтеза служат удобной моделью для пополнения наших знаний о роли этих гормонов в регуляции процессов роста, репродукций, старения и защитных реакциях растений на неблагоприятные условия. Получение трансгенных растений с антисмысловыми конструкциями этих генов позволяет исследовать возможность антисмыслового ингибирования онкогенов в процессе агробактериальной трансформации растений и создает предпосылки для создания растений с повышенной устойчивостью к этим фитопатогенам.

В связи с этим были поставлены следующие задачи: - получение трансгенных растений табака с агробактериальными генами биосинтеза цитокининов гр/ и синтеза ауксинов ¡ааМ, в прямой (смысловой) и обратной (антисмысловой) ориентациях по отношению к промоторам;

- исследование биохимических, физиологических и фотосинтетических свойств полученных растений в условиях in vitro и in vivo;

- анализ влияния измененного содержания фитогормонов на устойчивость растений к стрессовым факторам: пониженным температуре и освещенности, повышенным концентрациям соли, условиям фотоингибирования;

- получение и анализ химерных растений с различным уровнем цитокининов и ауксинов в привое и подвое;

- исследование ингибирования экспрессии агробактериальных генов синтеза фитогормонов с помощью стратегии антисмысловых РНК в полученных трансгенных растениях.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Фитогормоны

Гормональная регуляция занимает одно из основных мест в жизни и развитии растений. Именно под контролем фитогормонов происходит вся жизнь растительных организмов, начиная от процессов оплодотворения яйцеклетки и заканчивая старением и отмиранием растений. У растений обнаружено и исследовано несколько классов фитогормонов с характерными для каждого класса функциями. Основными фитогормонами являются цитокинины, ауксины, гиббереллины, абсцизовая кислота и этилен. В зависимости от внутриклеточного уровня гормонов и чувствительности к ним отдельных типов клеток и тканей происходит гормональная регуляция метаболизма и различных физиологических процессов в растениях. Количество известных гормонов у растений значительно меньше, чем гормонов животных, изученных в настоящее время. Важное различие между гормонами животных и растений заключается в том, что гормоны животных большей частью оказывают специфическое действие, тогда как фитогормоны вызывают широкий спектр ответных реакций в различных органах и тканях растений. Между тем, подобно гормонам животных, эти вещества активны в крайне низких концентрациях и во многих случаях они осуществляют регуляцию тканей, удаленных от места их синтеза. Очень важной особенностью растительных соматических клеток в отличие от клеток животных, является присущее им свойство тотипотентности, когда при определенных условиях одна клетка способна дать начало целому растению. Это свойство растений широко используется в биотехнологии растений. Регуляция этого и других процессов находится под гормональным контролем. Следует подчеркнуть, что действие фитогормонов проявляется как в контролировании нормального роста, развития и морфогенеза растений, так и в регуляции ответов растений на действие факторов внешней среды, фитопатогенов и абиогенные стрессы. Цитокинины играют важную роль в регуляции процессов клеточного деления и старения растений; действие ауксинов и гиббереллинов имеет решающее значение при растяжении клеток; абсцизовая кислота ингибирует созревание фруктов и вегетативный рост растений; этилен необходим при цветении и созревании семян и плодов - вот лишь малая часть процессов, в регуляции которых принимают участие эти фитогормоны. В последнее время кроме пяти «классических» фитогормонов стали выделять новые биологически активные соединения, для которых обнаружена регуляторная роль в развитии растений, такие как брассиностероиды, полиамины, жасмоновая и салициловая кислота. Гормоны растений различаются по способу и локализации синтеза, транспорту, рецепции и трансдукции гормонального сигнала в растении. Особое значение имеет взаимодействие различных гормонов растений, при котором осуществляется влияние одного гормона на метаболизм и функции другого. Изучение этих и других вопросов представляет огромное значение для биохимии, физиологии и молекулярной биологии растений, а также необходимо для решения сложных экономических задач современного растениеводства и биотехнологии.

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Алексеева, Валерия Витальевна

ВЫВОДЫ

1. Получены трансгенные растения табака, экспрессирующие агробактериальные гены изопентенилтрансферазы {ipt) и триптофанмонооксигеназы (iaaM) под контролем одинарного и двойного промоторов 35S РНК вируса мозаики цветной капусты.

2. Трансгенные растения с геном ipt имели кустистый карликовый фенотип и корней не образовывали. Синтез зеатина рибозида в этих растениях в три раза превышал контрольный уровень и составлял 400 нг/г сырого веса. Показано влияние экспрессии гена ipt на изменение различных фотосинтетических параметров и устойчивость растений к стрессовым факторам: холоду, пониженной освещенности, повышенным концентрациям соли, условиям фотоингибирования. В клетках ipt-растений картина метилирования ДНК не изменяется.

3. Трансгенные растения с геном iaaM при росте in vitro имели одинаковый аномальный фенотип, в то время как в условиях in vivo выявлялись различные морфологические формы. Показана корреляция этих фенотипов растений с содержанием в них свободных ауксинов и с их другими биохимическими и репродуктивными характеристиками.

4. Получены трансгенные химерные растения с различным уровнем гормонов в подвое и привое. У этих растений показано наличие акропетального транспорта ауксинов из подвоя в привой и не выявлено значительного перемещения ауксинов и цитокининов в базипетальном направлении.

5. Получены двойные трансформанты табака с агробактериальными генами ipt и iaaM в антисмысловой ориентации по отношению к одинарному и двойному промоторам 35S РНК вируса мозаики цветной капусты. Показано частичное ингибирование экспрессии агробактериальных онкогенов при заражении этих растений опухолевым штаммом Agrobacterium tumefaciens С58 (pTiC58).

110

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты проведенной работы подтверждают перспективность использования трансгенных растений с агробактериальными генами биосинтеза фитогормонов для исследования гормональной регуляции растений, а также изучения различных аспектов, связанных с метаболизмом и транспортом цитокининов и ауксинов.

Созданы генетические конструкции с агробактериальными генами биосинтеза цитокининов (ipt) и ауксинов (iaaM) в прямой и обратной ориентациях по отношению к промоторам вируса мозаики цветной капусты CaMV 35S и CaMV 35SS. Проведен генетический и молекулярно-биологический анализ полученных трансгенных растений табака с этими генами. Использование сильных вирусных промоторов привело к сверхсинтезу цитокининов и ауксинов в трансгенных растениях со смысловыми копиями этих генов. Растения с геном ipt (ipt-растения) приобретали кустистый, карликовый вид и корней не образовывали. У этих растений отсутствовало апикальное доминирование, имелось множество боковых побегов, сильно укороченный стебель, мелкие листья. В листьях ipt-растений количество активного цитокинина зеатин рибозида в три раза превышало уровень контрольных растений и составляло 400 нг/г сырого веса. Таким образом, изменение гормонального статуса в ipt-растениях повлияло на их фенотипические, биохимические, физиологические и фотосинтетические параметры. Нами обнаружено положительное влияние повышенных концентраций эндогенных цитокининов на рост и морфогенез ipt-растений в условиях осмотического стресса. Стимулирующее влияние цитокининов вызвало несущественное понижение кислородвыделяющей активности хлоропластов ipt-растений (2.5±1%) по сравнению с контрольными (20±2%) в условиях неблагоприятного освещения и температуры в течение 10 сут. При росте in vivo у ipt-растений наблюдалось сниженное старение листьев нижнего яруса, что привело к несоответствию между уменьшением площади листьев (на 84%) и падением фотосинтетической активности этих растений (на 69%).

Известно, что в опухолевых тканях растений синтез ауксинов контролируется двумя агробактериальными генами, iaaM и iaaH. Введение в растения гена iaaM под контролем мощного вирусного промотора (двойного промотора 35S РНК вируса мозаики цветной капусты CaMV 35SS) привело к увеличению синтеза эндогенных ауксинов. В условиях in vitro характеристики iaaM-растений разных линий не различались. При росте в закрытом грунте было выявлено три фенотипические группы этих растений - растения аномального, нормального и промежуточного фенотипов. Показана корреляция фенотипа 1ааМ-растений с содержанием свободных ауксинов и с другими биохимическими, физиологическими и репродуктивными характеристиками. Количество ауксинов в листьях ¡ааМ-растений возрастало более чем в 1.5-2 раза и составляло 35.9 мкг/г сухого веса для растений нормального фенотипа, а для растений аномального фенотипа - 43.7 и 51.7 мкг/г сухого веса. Показан наследуемый xapaicrep наблюдаемых фенотипов. У растений аномального фенотипа наблюдалась корреляция в снижении площади листьев и падении скорости фотосинтеза растений, которые составляли 39% по отношению к контролю. Увеличение темнового дыхания в iaaM-растениях до 50% (против 23.2% в контрольных) может быть связано с появлением придаточных корней на стеблях. Показано повреждающее действие эндогенных ауксинов в ¡ааМ-растениях в условиях фотоингибирования и неспособность этих растений к восстановлению после стресса.

Эксперименты по прививкам трансгенных и контрольных растений в различных сочетаниях выявили отсутствие значительного активного транспорта этих гормонов из привоя в подвой. При этом обнаружен эффективный пассивный транспорт ауксинов в акропетальном направлении.

Экспрессия генов гормонов агробактерий при заражении растений приводит к развитию фитопатогенного процесса и образованию опухоли. С помощью скрещивания трансгенных растений с антисмысловыми копиями этих генов (as-ipt-растений и as-iaaM-растений) созданы двойные трансформанты (as-ipt:as-iaaM-растения). При заражении всех форм трансгенных растений с антисмысловыми копиями онкогенов вирулентным штаммом Agrobacterium tumefaciens С58 (pTiC58) показано частичное ингибирование экспрессии этих генов. На опухолях, образованных на as-iaaM-растениях и двойных трансформантах, получены побеги. Обнаружено, что в этих побегах, уровень мРНК гена ipt снижается меньше, чем уровень мРНК гена iaaM. Такой эффект может объясняться большей силой контролирующего этот ген двойного промотора CaMV 35SS, а также более высокой гомологией генов iaaM. В дальнейшем для более эффективного ингибирования опухолеобразования предполагается использовать стратегию РНК-интерференции с помощью двуцепочечных РНК (Fire et al., 1998; Vance a. Vaucheret, 2001). Применение этой технологии открывает широкие перспективы для создания растений, устойчивых к агробаетериальному раку.

109

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Алексеева, Валерия Витальевна, Пущино

1. Ананьев Г.М. Методы измерения 02 и С02 газообмена // Экспериментальная экология. М.: Наука. 1991.

2. Аравин A.A., Кленов М.С., Вагин В.В., Розовский Я.М., Гвоздев В.А. Роль двуцепочечной РНК в подавлении экспрессии генов эукариот // Молекулярная биология. 2002. Т. 36. С. 240-251.

3. Баврина Т.В., Онджей М., Ложникова В. Н., Махачкова И, Дудка Н. Д., Крекуле Я. Трансгенные по цитокининам и ауксину растения длиннодневного табака сильвестрис (Nicotiana silvestris spegar et comes) // ДАН. 1996. Т. 351. С. 115-118.

4. Баврина Т.В., Ложникова В.Н., Махачкова И., Грянко Т.И. Трансформанты Табаков модель для изучения роли фитогормонов в цветении и плодоношении // Физиология растений. 1999. Т. 46. С. 226-230.

5. Веселов С.Ю., Кудоярова Г.Р., Мустафина А.Р., Вальке Р. Динамика содержания цитокининов в трансгенных и нетрансформированных проростках табака под влиянием теплового шока // Физиология растений. 1995. Т. 42. С. 696-699.

6. Доронина Н.В., Кудинова Л.В., Троценко Ю.А. Methylovorus mays новый вид облигатных метилобактерий, ассоциированных с растениями // Микробиология. 2000. Т. 69. С. 712-716.

7. Драйпер Дж., Скотт Р., Армитидж Ф., Уолден Р. Генная инженерия растений. Лабораторное руководство. М.: Мир, 1991. 408 с.

8. Захарьев В.М., Ташпулатов А.Ш., Нуркиянова K.M., Тальянский М.Э., Каплан И.Б., Атабеков И.Б., Скрябин К.Г. Индукция синтеза PR-белков эндогенным цитокинином в трансгенных растениях Nicotiana tabacum // Докл. АН СССР. 1988. Т. 301. С. 743-745.

9. Иванова Е.Г., Доронина Н.В., Шепеляковская А.О., Ламан А.Г., Бровко Ф.А., Троценко Ю.А. Факультативные и облигатные метилобактерии синтезируют цитокинины // Микробиология. 2000. Т. 69. С. 764-769.

10. Иванова Е.Г., Доронина Н.В., Троценко Ю.А. Аэробные метилобактерии синтезируют ауксины // Микробиология. 2001. Т. 70. С. 452-458.

11. И. Картель H.A., Лобанок Е.В., Фомичева В.В. Фитогормоны и фитопатогенность бактерий. Минск: Навука i тэхшка, 1994.

12. Кирнос М.Д., Александрушкина H.JI., Ванюшин Б.Ф. 5-Метилцитозин в пиримидиновых последовательностях ДНК растений и животных: специфичность метилирования // Биохимия. 1981. Т. 46. Вып. 8. С. 14581474.

13. Клонирование ДНК / Под ред. Гловера Д. М.: Мир, 1988. 538 с.

14. Корнеев Д.Ю. Информационный возможности метода индукции флуоресценции хлорофилла. К.: Альтпрес, 2002. 188 с.

15. Кулаева О.Н. Цитокинины, их структура и функции. М.: Наука, 1973. 263 с.

16. Кулаева О.Н. Гормональная регуляция физиологических процессов у растений на уровне синтеза РНК и белка. 41-е Тимирязевское чтение. М.: Наука, 1982. 83 с.

17. Кулаева О.Н., Кузнецов В.В. Новые достижения и перспеюпвы в области изучения цитокининов // Физиология растений. 2002. Т. 49. С. 626-640.

18. Лутова Л.А., Проворов H.A., Тиходееев О.Н., Тихонович И.А., Ходжайова Л.Т., Шишкова С.О. Генетика развития растений / Под ред. Инге-Вечтомова С.Г. Санкт-Петербург: Наука, 2000. 531 с.

19. Мазин A.B., Кузнеделов К.Д., Краев A.C. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск: Наука, 1990. 248 с.

20. Макарова Р.В., Андрианов В.М., Борисова Т.А., Пирузян Э.С., Кефели В.И. Морфогенетические последствия экспрессии бактериального j/tf-гена у регенерантов табака in vitro II Физиология растений. 1997. Т. 44. С. 11-19.

21. Малый практикум по физиологии растений / Под ред. Мокроносова А.Т. МГУ, 1994. С. 59-61.

22. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984.480 с.

23. Мерзляк М.Н. Пигменты, оптика листа и состояние растений. Соросовский образовательный журнал. 1998. №4. С. 19-24.

24. Мокроносов А.Т. Эндогенная детерминация фотосинтеза в системе растения. Вопросы регуляции фотосинтеза// Свердловск, 1970. Вып. 2. С. 3-19.

25. Мокроносов А.Т. Онтогенетический аспект фотосинтеза. М.: Наука, 1981. 196 с.

26. Муромцев Г.С., Чкаников Д.И., Кулаева О.Н., Гамбург К.З. Основы химической регуляции роста и продуктивности растений. М.: Агропромиздат, 1987. 383 с.

27. Павар С.С., Клячко Н.Л., Романко Е.Г., Циммерманн К.-Х., Кулаева О.Н. Активация цитокинином синтеза рибулезобисфосфаткарбоксилазы // Физиология растений. 1983. Т. 30. С. 459-465.

28. Пирузян Э.С., Андрианов В.М. Плазмиды агробактерий и генетическая инженерия растений. М.: Наука, 1985.274 с.

29. Романов Г.А. Цитокинины и тРНК: новый взгляд на старую проблему // Физиология растений. 1990. Т. 37. С. 1196-1210.

30. Романов Г.А Международный симпозиум «Ауксины и цитокинины в развитии растений» (хроника) // Физиология растений. 2000. Т. 47. С. 166169.

31. Рост растений и природные регуляторы / Под ред. Кефели В.И. Москва, 1983. С. 245-248.

32. Рукавцова Е.Б., Алексеева В.В., Золова О.Э., Каляева М.А., Муренец Л.Ю., Бурьянов Я.И. Комбинированное использование регулируемых промоторов и прививок в генно-инженерной биотехнологии растений // Биотехнология. 1996. N9. С. 24-28.

33. Савельев C.B., Ашапкин В.В., Ванюшин Б.Ф. Рибосомная ДНК гексаплоидной пшеницы: характер метилирования и временная организация репликации в развивающихся проростках // Мол. биол. 1990. Т. 24. С. 10421056.

34. Свердлов Е.Д. РНК-интерференция новый механизм регуляции экспрессии генов и новый метод исследования их функций // Биоорганическая химия. 2001. Т. 27. С. 237-240.

35. Теплова И.Р., Фархутдинов Р.Г., Митриченко А.Н., Иванов И.И., Веселов С.Ю., Вальке P.JL, Кудоярова Г.Р. Реакция трансформированных ¿pi-геном растений табака на повышенную температуру // Физиология растений. 2000. Т. 47. С. 416-419.

36. Хемлебен В., Беридзе Т.Г., Бахман Л., Коварик Я., Торрес Р. Сателлитные ДНК // Успехи биологичской химии. 2003. Т. 43. С. 267-306.

37. Чернядьев И.И. Фотосинтез и цитокинины // Прикладная биохимия и микробиология. 1993. Т. 29. С. 644-674.

38. Чернядьев И.И. Фотосинтез листьев сахарной свеклы в онтогенезе при обработке растений 6-бензиламинопурином и метрибузином // Физиология растений. 2000а. Т. 47. С. 183-189.

39. Чернядьев И.И. Онтогенетические изменения фотосинтетического аппарата и влияние цитокининов // Прикладная биохимия и микробиология. 20006. Т. 36. С. 611-625.

40. Эдварде Дж., Уокер Д. Фотосинтез Сз- и С4-растений: механизмы и регуляция. М.: Мир, 1986.

41. Юсибов В.М., Погосян Г.П., Андрианов В.М., Пирузян Э.С. Перенос в растения табака агробактериального гена биосинтеза цитокинина // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1989. № 7. С. 11-13.

42. Abel S., Theologis A. Early genes and auxin action // Plant Physiol. 1996. V. 111. P. 9-17.

43. Adams A., Zachau H.G. Serine specific transfer ribonucleic acids. 15. Some properties of the aggregates from serine specific transfer ribonucleic acids // Eur. J. Biochem., 1968. V. 5. P. 556.

44. Ainley W.M., McNeil K.J., Hill J.W., Lingle W.L., Simpson R.B., Brenner M.L., Nagao R.T., Key J.L. Regulatable endogenous production of cytokinins up to 'toxic' levels in transgenic plants and plant tissues // Plant. Mol. Biol. 1993. V. 22. P. 13-23.

45. Akiyoshi D.E., Klee H., Amasino R.M., Nester E.W., Gordon M.P. T-DNA-of Agrobacterium tumefaciens encodes an enzyme of cytokinin biosynthesis // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1984. V. 81. P. 5994-5998.

46. Amasino R.M., Miller C.O. Hormonal control of tobacco crown gall tumor morphology // Plant Physiol. 1982. V. 69. P. 389-392.

47. An G., Watson B.D., Stachel S., Gordon M.P., Nester E.W. New cloning vehicles for transformation of higher plants // EMBO J. 1985. V. 4. P. 277-288.

48. An G., Ebert P.R., Mitra A., Ha S.B. Binary Vectors // Plant Mol. Biol. Manual / Eds. Gelvin S.B., Schilperoort R.A., Verma D.P.S. Dordrecht: Kluwer Acad. Publ., 1988. A3. P. 1-19.

49. Anai T., Kono N., Takai R., Tsuge T., Matsui M., Kosemura S., Yamamura S., Hasegawa K. Nucleotide sequence of oat (Avena sativa L.) cDNA encoding an auxin-binding protein (ABP1) // DNA Seq. 1998. V. 8. P. 235-239.

50. Armstrong D.J. Cytokinin oxidase and regulation of cytokinin degradation. In Mok D.W.S and Mok M.C. (Eds.) Cytokinins: Chemistry, Activity and Function. CRC Press, 1994. P. 139-154.

51. Astot C., Dolezan K., Nordström A., Wang Q., Kunkel T., Moritz T., Chua N-H., Sundberg G. An alternative cytokinin biosynthesis pathway // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2000. V. 97. P. 14778-14783.

52. Barker R.F., Idler K.B., Thompson D.V., Kemp J.D. Nucleotide seguence of the T-DNA region from the Agrobacterium tumefaciens octopine Ti plasmid pTi 15955 // Plant Mol. Biol. 1983. V. 2. P. 335-350.

53. Bartel B. Auxin biosynthesis // Annu Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1997. V. 48. P. 51-66.

54. Barry G.F., Rogers S.G., Fraley R.T., Brand L. Identification of a cloned cytokinin biosynthetic gene // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1984. V. 81. P. 4776-4780.

55. Beveridge C., Symons G., Turnbull C. Auxin inhibition of decapitation-induced branching is dependent on graft-transmissible signals regulated by genes rmsl and rms2 II Plant Physiology. 2000. V. 123. P. 689-697.

56. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA // Nucleic Acid Res. 1979. V. 7. P. 1513.

57. Blackwell J.R., Horgan R. Cytokinin biosynthesis by extracts of Zea mays II Phytochemistry. 1984. V. 35. P. 339-342.

58. Bosher J.M., Labouesse M. RNA interference: genetic wand and genetic watchdog // Nat. Cell Biol. 2000. V. 2. E31-36.

59. Bradford M.M. A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding // Anal. Biochem. 1976. V. 72. P. 248-254.

60. Brzobohaty B., Moore I., Kristoffersen P., Bako L., Campos N., Schell J., Palme K. Release of active cytokinin by P-glucoside localised to the maize root meristem // Science. 1993. V. 262. P. 1051-1054.

61. Brzobohaty B., Moore I., Palme K. Cytokinin metabolism: implication for regulation of plant growth and development // Plant Molecular Biology. 1994. V. 26. P. 1483-1497.

62. Buchmann I., Marner F-G., Schroder G, Waffenschmidt S., Schroder J. Tumour genes in plants: T-DNA encoded cytokinin biosynthesis // The EMBO Journal. 1985. V. 4. P. 853-859.

63. Bultynck L., Geuns J.M.C., Ginkel G.V., Caubergs R.J. Properties of plasma membranes of Phsp 70-ipt transformed tobacco (Nicotiana tabacum) II Phytochemistry. 1997. V. 45. P. 1337-1341.

64. Campanella J.J., Olajide A.F., Magnus V., Ludwig-MUller J. A novel auxin conjugate hydrolase from wheat with substrate specificity for longer side-chain auxin amide conjugates // Plant Physiology. 2004. V. 135. P. 2230-2240.

65. Cary A.J., Liu W, and Howell S.H. Cytokinin action is coupled to ethylene in its effects on the inhibition of root and hypocotyl elongation in Arabidopsis thaliana seedlings//Plant Physiology. 1995. V. 107. P. 1075-1082.

66. Casimiro I., Marchant A., Bhalerao R., Beeckman T., Dhooge S., Swarup R., Graham N., Inze D., Sandberg G., Casero, P., Bennett M. Auxin transport promotes Arabidopsis lateral root initiation // Plant Cell. 2001. V. 13. P. 843-852.

67. Chang H., Jones M.L., Banowetz G.M., Klark D.G. Overproduction of cytokinins in Petunia flowers transformed sensitivity to ethylene // Plant Physiol. 2003. V. 132. P. 2174-2183.

68. Chatfield J.M., Armstrong D.J. Regulation of cytokinin oxidase activity in callus tissues of Phaseolns vulgaris L. cv. Great Northern // Plant Physiol. 1986. V. 80. P. 493-499.

69. Chen C. Cytokinin biosynthesis and interconversion // Physiologia Plantarum. 1997. V. 101. P. 665-673.

70. Chow W.S., Anderson J.M. Photosynthetic responses of Pisum sativum to an increase in irradiance during growth. II. Thylakoid membrane components // Austr. J. Plant Physiol. 1987. V. 14. P. 9-19.

71. Clark D.G., Gubrium E.K., Barret J.E., Nell T.A., Klee A.J. Root formation in ethylene-insensitive plants // Plant Physiol. 1999. V. 121. P. 53-60.

72. Coenen C., Lomax T.L. Auxin-cytokinin interactions in higher plants: old problems and new tools // Trends Plant Sci. 1997. V. 2. P. 351-356.

73. Cornelissen M., Vandewiele M. Both RNA level and translation efficiency are reduced by anti-sense RNA in transgenic tobacco // NAR. 1989. V. 17. P. 833-843.

74. Crozier A., Kamiya Y., Bishop G., Yokota T. Biosynthesis of hormones and elicitor moleculas // Biochemistry and Molecular Biology of Plants / Eds. Buchanan B.B., Gruissem W., Jones R.L. ASPB-Publications. 2000. Ch. 17. P. 850-929.

75. D'Agostino B., Deruere Y., Kieber J.J. Characterization of the response of the Arabidopsis response regulator gene family to cytokinin // Plant Physiol. 2000. V. 124. P. 1706-1717.

76. Doree M., Guern J. Short-term metabolism of some exogenous cytokinins in Acer Pseudoplatanus cells // Biochim. Biophys. Acta. 1993. V. 304. P. 611-622.

77. Drevet C., Brasileiro A.C.M., Jouanin L. Oncogene arrangment in a shooty strain of Agrobacterium tumefaciens II Plant Molecular Biology. 1994. V. 25. P. 83-90.

78. DuBois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Rebers P.A., Smith F. Colorimetric method for the determination of sugars and related substances // Anal. Chem. 1956. V. 28. P. 350-356.

79. Durand J.M., Bjork G.R., Kuwae A., Yoshikawa M., Sasakawa C. The modified nucleoside 2-methylthio-N6-isopentenyladenosine in tRNA of Shigella flexneri is required for expression of virulence genes // J Bacteriol. 1997. V. 179. P. 57775782.

80. Edwards K., Johnstone C., Thomson C.A. A simple and rapid method for the preparation of plant genomic DNA for PCR analysis // Nucleic Acids Res. 1991. V. 19. P. 1349.

81. Eklof S., Astot C., Blackwell J., Moritz T., Olsson O., Sandberg G. Auxin-cytokinin interaction in wild-tipe and transgenic tobacco // Plant Cell. Physiol. 1997. V. 38. P. 225-235.

82. Emery R.J., Ma Q., Atkins C.A. The forms and sources of cytokinins in developing white lupine seeds and fruits // Plant Physiol. 2000. V. 123. P. 15931604.

83. Faiss M., Zalubilova J., Strnad M., Schmulling T. Conditional transgenic expression of the ipt gene indicates a function for cytokinins in paracrine signaling in whole tobacco plants // The Plant Journal. 1997. V. 12. P. 401-415.

84. Farkhutdinov R.G., Veselov S.U., Kudoyarova G.R., Valcke R. Influence of temperature increase on évapotranspiration rate and cytokinin content in wheat seedlings II Biol. Plantarum. 1997. V. 39. P. 289-291.

85. Fire A., Xu S., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mello S.S. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans II Nature. 1998. V. 391. P. 801-811.

86. Flavell R.B., O'Dell M. Regulation of cytosine methylation in ribosomal DNA and nucleolus organizer expression in wheat // J. Mol. Biol. 1988. V. 204. P. 523-534.

87. Friml J., Wisniewska J., Benkova E., Mendgen K., Palme K. Lateral relocation of auxin efflux regulator PIN3 mediates tropism in Arabidopsis // Nature. 2002. V. 415. P. 806-809.

88. Gan S., Amasino R.M. Inhibition of leaf senescence by autoregulated production of cytokinin // Science. 1995. V. 270. P. 1986-1988.

89. Gan S., Amasino R.M. Cytokinins in plant senescence: from spray and pray to clone and play//BioEssays. 1996. V. 18. P. 557-565.

90. Garfinkel D.J. Simpson R.B., Ream L.W., Whitt F.F., GordonM.P., Nester E.W. Genetic analysis of crown gall: fine structure map of T-DNA by site-directed mutagenesis // Cell. 1981. V. 27. P. 143-153

91. Gaudin V., Vrain T., Jouanin L. Bacterial genes modifying hormonal balances in plants // Plant Physiol. Biochem. 1994. V. 32. P. 11-29.

92. Gillissen B., Burkle L„ Andre B., Ktihn C., Rentsch D, Brandl B., Frommer W.B. A new family of high-affinity transporters for adenine, cytosine, and purine derivatives in Arabidopsis // The Plant Cell. 2000. V. 12. P. 291-300.

93. Gray J., Gelvin S.B., Meilan R., Morris R.O. Transfer RNA is the source of exstracellular isopentenyladenine in a Ti-plasmidless strain of Agrobacterium tumefaciens II Plant Physiol. 1996. V. 110. P. 431-438.

94. Gruenbaum Y., NavehrMany T., Cedar H., Razin A. Sequence specificity of methylation in higher plant DNA // Nature. 1981. V. 292. P. 860-862.

95. Hansen H., Grossmann K. Auxin-indused ethylene triggers abscisic acid Biosynthesis and grows inhibition // Plant Physiol. 2000. V. 124. P. 1437-1448.

96. Hoekema A., Hirsch P.R., Hooykaas P.J.J., Schilperoort R.A. A binary vector strategy based on separation on vir and T-region of the A. tumefaciens Ti-plasmid //Nature. 1983. V. 303. P. 179-180.

97. Hood E.E., Jen G., Kayes L., Kramer J., Fraley R.T., Chilton M.-D. Restriction endonuclease map of pTi Bo542, a potential Ti plasmid vector for genetic engineering of plants //Bio/Technology. 1984. V. 2. P. 702-709.

98. Horgan R., Cytokinins. In "Advance Plant Physiology" (Wilkins M.B., Ed), Pitman, London, 1984. P. 53-75.

99. Houba-Herin N., Pethe C., ^Alayer J., Laloue M. Cytokinin oxidase from Zea mays: purification, cDNA cloning and expression in moss protoplasts // Plant J. 1999. V. 17. P. 615-626.

100. Inoue T., Higuchi M., Hashimoto Y., Seki M., Kobayashi m., Kato T., Tabata S., Shinozaki K., Kakimoto T. Identification of CRE1 as a cytokinin receptor from Arabidopsis //Nature. 2001. V. 409. P. 1060-1063.

101. Jin S., Komari T., Gordon M.P., Nester E.W. Genes responsible for the supervirulence phenotype of Agrobacterium tumefaciens A281 // Journal of Bacteriology. 1987. V. 169. P. 4417-4425.

102. Jones R.J., Schreiber B.M.N. Role of cytokinin oxidase in plants // Plant Growth Regul. 1997. V. 23. P. 123-136.

103. Joos H., Jnze D., Caplan A., Sormann M., Van Montagu M., Schell J. Genetic analysis of T-DNA transcripts in nopaline crown galls // Cell. 1983. V. 32. P. 1057-1067.

104. Kakimoto T. Identification of plant cytokinin biosynthetic enzymes as dimethylallyl diphosphate:ATP/ADP isopentenyltransferases // Plant Cell Physiol. 2001. V. 42. P. 677-685.

105. Kakimoto T. Biosynthesis of cytokinins // J. Plant Res. 2003a. V. 116. P. 233239.

106. Kakimoto T. Perception and signal transduction of cytokinins // Annu.Rev. Plant Biol. 20036. V. 54. P. 605-627.

107. Kaminek M., Armrong D.J., Genotypic variation in cytokinin oxidase from Phaseolus callus caltures // Plant Physiol. 1990. V. 93. P. 1530-1538.

108. Kaminek M. Progress in cytokinin research // Tibtech. 1992. V. 10. P 159-164.

109. Kemper E., Waffenschmidt E.W., Weiler E.W., Rausch T., Schroder J. T-DNA-encoded auxin formation in crown-gall cells // Planta. 1985. V. 163. P. 257-262.

110. Kim J., Harter K., Theologis A. Protein-protein interactions among the Aux/IAA proteins//PNAS USA. 1997. V. 94. P. 11786-11791.

111. Klee H.J., Horsch R.B., Hinchee M.A., Hein M.B., Hoffman. The effects of overproduction of two Agrobacterium tumefaciens T-DNA auxin biosynthetic gene products in transgenic petunia plants // Gene & Development. 1987. V. 1. P. 86-96.

112. Koncz C., Shell J. The promoter of TL-DNA gene 5 controls the tissue-specific expression of chimaeric genes carried by a novel type of Agrobacterium binary vector //Mol.Gen.Genet. 1986. V. 204. P. 383-396.

113. Kulaeva O.N., Corse J., Selivankina S.Y. Effect of trans- and c/s-zeatin and optical isomers of synthetic cytokinins // J. Plant Growth Regul. 1995. V. 14. P. 41-47.

114. Kunkel T., Niu Q-W., Chan Y-S., Chua N-H. Inducible isopentenyl transferase as a high-efficiency marker for plant transformation // Nature Biotechnology. 1999. V. 17. P. 916-919.

115. Kuroha T., Kato H., Asami T., Yoshida S., Kamada H., Satoh S. A trans-zeatin riboside in root xylem sap negatively regulates adventitious root formation on cucumber hypocotyls // Journal of Experimental Botany. 2002. V. 53. P. 21932200.

116. Letham D.S. Zeatin, a factor inducing cell division from Zea mays II Life Sci. 1963. V. 8. P. 569-573.

117. Letham D.S., Paini L.M.S. The biosynthesis and metabolism of cytokinins // Ann Rev Plant Physiol. 1983. V. 34. P.163-197.

118. Leyser O. Regulation of shoot branching by auxin // Trends Plant Sci. 2003. V. 8. P. 541-545.

119. Li Yi., Nagen G., Guilfoyle T.J. Altered morphology in transgenic tobacco plants that overproduce cytokinins in specific tissues and organs // Developmental Biology. 1992. V. 153. P. 386-395.

120. Lichtenthaler H.K. Chlorophylls and carotenoids: pigments of photosynthetic biomembranes // Methods in Ensymology. 1987. V 148. P. 350-382.

121. Liu C., Xu Z., Chua N. Auxin polar transport is essential for the establishment of bilateral symmetry during early plant embryogenesis // Plant Cell. 1993. V. 5. P. 621-630.

122. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin reagent//J.Biol. Chem. 1951. V. 193. P. 265-275.

123. Martin R.C., Mok M.C., Mok D.W.C. Isolation of cytokinin gene, ZOG1, encoding zeatin O-glucosyltransferase from Phaseolus lunatus II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V. 96 P. 284-289.

124. Martineau B., Summerfelt K.R., Adams D.F., DeVerna J.W. Production of high solids tomatoes through molecular modification of levels of the plant growth regulator cytokinin // Bio/Technology. 1995. P. 250-254.

125. Matil P. Biochemistry of Indian sammer: physiology of autumnal leaf coloration // Exp Gerontol. 2000. V. 35. P. 145-158.

126. Mattsson J., Sung Z., Berleth T. Responses of plant vascular systems to auxin transport inhibition // Development. 1999. V. 126. P. 2979-2991.

127. McGaw B.A., Heald J.K., Horgan R. Dihydrozeatin metabolism in radish seedlings II Phytochemistry. 1984. V. 23. P. 1373-1377.

128. Merritt F., Kemper A., Tallman G. Inhibitors of ethylene synthesis inhibit auxin-indused stomatal opening in epidermis detached from leaves of Vicia faba II Plant and Cell Physiol. 2001. V. 42. P. 223-230.

129. Medford J.I., Horgan R., El-Sawi Z., Klee H.J. Alterations of endogenous cytokinins in transgenic plants using a chimeric isopentenyl transferase gene // Plant Cell. 1989. V. 1. P. 403-413.

130. Merzlyak M.N., Gitelson A.A., Chivkunova O.B., Rakitin V.U. Non-destractive optical detection of pigment changes during leaf senescence and fruit ripening // Physiologia Plantarum. 1999. V. 106. P. 135-141.

131. Mezzetti B., Lucia Tiziana L., Pandolfini T., Spena A. The defH9-iaaM auxin-synthesizing gene increases plant fecundity and fruit production in strawberry and raspberry // BMC Biotechnology. 2004. V. 4. № 4.

132. Miller C.O., Skoog F., Saltzam M.N.von, Strong F.M. Kinetin, a cell division factor from deoxyribonucleic acid // J. Am. Chem. Soc. 1955. V. 77. P. 1329-1334.

133. Miyawaki K, Matsumoto-Kitano K, Kakimoto T. Expression of cytokinin biosynthestic isopentenyltransferase genes in Arabidopsis: tissue specificity and regulation by auxin, cytokinin, and nitrate // The Plant Journal. 2004. V. 37. P. 128-138.

134. Mok D.W., Mok M.C. Cytokinin metabolism and action // Annu Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 2001. V. 52. P. 89-118.

135. Morris R.O. Genes specifying auxin and cytokinin biosynthesis in phytopathogens // Ann.Rev.Plant Physiol. 1986. V. 37. P. 509-538.

136. Murasige T., Skoog F. A. Revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures // Physiol. Plant. 1962. V. 15. P. 473-497.

137. Nagy F., Kay S.A., Chua N-H. Analysis of gene expression in transgenic plants // Plant Mol. Biol. Manual / Eds. Gelvin S.B., Schilperoort R.A., Verma D.P.S. Dordrecht: Kluwer Acad. Publ., 1988. B 4. P. 1-29.

138. Nandi S.K., De Klerk G.J.M., Parker C.W., Palni L.M.S. Endogenous cytokinin levels and metabolism of zeatin riboside in genetic tumour tissues and non-tumorous tissues of tobacco // Physiol. Plant. 1990. V. 78. P. 197-204.

139. Normanly J. Auxin metabolism // Physiol. Plant. 1997. V. 100. P. 431-442.

140. Normanly J., Slovin J.P., Cohen J.D. Rethinking auxin biosynthesis and metabolism //Plant Physiol. 1995. V. 107. P. 323-329.

141. Ooms G., Hooykaas P.J., Moleman G., Schilperoot R.A. Crown gall plant tumors of abnormall morphology, induced by Agrobacterium tumefaciens carrying mutated octopine Ti plasmids; analysis of T-DNA functions // Gene. 1981. V. 14. P.33-50.

142. Pandolfini T., Rotino G.L., Camerini S., Defez R., Spena A. Optimisation of transgene action at the post-transcriptional level: high quality parthenocarpic fruits in industrial tomatoes // BMC Biotechnology. 2002. V. 2. №1. P.l.

143. Pawlowski K., Kunze R., De Vries S., Bisseling T. Isolation of total, poly(A) and polysomal RNA from plant tissues // Plant Mol. Biol. Manual / Eds. Gelvin S.B., Schilperoort R.A. Dordrecht: Kluwer APubl., 1994. D 5. P. 1-13.

144. Quirino B., Noh Y-S., Himelblau E., Amasino R.M. Molecular aspects of leaf senescence // Trends in Plant Science. 2000. V. 5. P. 278-282.

145. Rashotte A., Brady S., Reed R., Ante S., Muday G. Basipetal auxin transport is required for gravitropism in roots of Arabidopsis II Plant Physiol. 2000. V. 122. P. 481—490.

146. Rashotte A, DeLong A., Muday K. Genetic and chemical reductions in protein phosphatase activity alter auxin transport, gravity response, and lateral root growth //The Plant Cell. 2001. V. 13. P. 1683-1697.

147. Reed R., Brady R., Muday G. Inhibition of auxin movement from the shoot into the root inhibits lateral root development in Arabidopsis // Plant Physiol. 1998. V. 118. P. 1369-1378.

148. Reinecke D.M., Brenner M.L., Rubenstein I. Cytokinin biosynthesis in developing corn kernels // Plant Physiol. 1991. V. 96. P. 77.

149. Reiss B., Sprengel R.,' Will H., Schaller H. A new sensitive method for quantitative and qualitative assay of neomycin phosphotransferase in crude cell extracts // Gene. 1984. V. 30. P. 211-218.

150. Riemann M., Muller A., Korte A., Furuya M., Weiler E.W., Nick P. Impaired induction of jasmonate pathway in the rise mutant hebiba // Plant Physiol. 2003. V. 133. P. 1820-1830.

151. Rinaldi A.C., Comandini O. Cytokinin oxidase: new insight into enzyme properties // Trends in Plant Science. 1999. V. 4. P. 127-128.

152. Sa G., Mi M., He-Chun Y., Ben-Ye L., Guo-Feng L., Kang C. Effects of ipt gene expression on the physiological and chemical characteristics of Artemisia annua L. II Plant Sci. 2001. V. 160. P. 691-698.

153. Sachs T., Thimann K.V. The role of auxins and cytokinins in the release of buds from dominance // American J. Bot. 1967. V. 54, P. 136.

154. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular cloning: a Laboratory Manual. NY: CSHL Press, 1989. 1626 p.

155. Schiebl C., Walther A., Rescher U., Klambt D. Interaction of auxin-binding protein 1 with maize coleoptile plasma membranes in vitro // Planta. 1997. V. 201. P. 470-476.

156. Schmülling T., Beinsberger S., De Greef J., Schell J., Van Onckelen H., Spena A. Construction of a heat-inducible chimeric gene to increase the cytokinin content in transgenic plant tissue // FEBS Letters. 1989. V. 249. P. 401-406.

157. Schmülling T., Schäfer S., Romanov G. Cytokinin as regulators of gene expression // Physiologia Plantarum. 1997. V. 100. P. 505-519.

158. Schroder G., Waffenschmidt S., Weiler E., Schroder J. The T-region of Ti-plasmids codes for an enzyme synthesizing indole-3-acetic acid // Eur. J. Biochem. 1984. V. 138. P. 387-391.

159. Scott I.M., Martin G.C., Horgan R., Heald J.K. Mass spectrometric measurement of zeatin glycoside levels in Vinca rosea L. crown gall tissue // Planta. 1982. V. 154. P. 273-276.

160. Sheehy R. E., Kramer M., Hiatt W. R. Reduction of polygalacturonase activity in tomato fruit by antisense RNA // PNAS. 1988. V. 85. P. 8805.

161. Skoog F., Miller C.O. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro // Symp. Soc. Exp. Biol. 1957. V. 11. P. 118-131.

162. Smart C.M., Scofield S.R., Bevan M.W., Dyer T.A. Delayed leaf senescence in tobacco plants transformed with tmr, a gene for cytokinin production in Agrobacterium II The Plant Cell. 1991. V. 3. P. 647-656.

163. Smigocki A.C. Expression of a wound-inducible cytokinin biosynthesis gene in transgenic tobacco: correlation of root expression with induction of cytokinin effects//Plant Sci. 1995. V. 109. P. 153-163.

164. Smith C.J.S., Watson C.F., Ray J., Bird C.R., Morris P.C., Schuch W., Grierson D. Antisense RNA inhibition of polygalacturonase gene expression in transgenic tomatoes // Nature. 1988. V. 334. P. 724-726.

165. Southern E.M. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis // J. Mol. Biol. 1975. V. 98. P. 503-517.

166. Stoeckle M.Y., Guan L. Improved Resolution and Sensivity of Nothern Blots Using Polyacrilamide-Urea Gels // BioTechniques. 1993. V. 15. P. 227-231.

167. Strabala T.J., Bednarek S.Y., Bertoni G., Amasino R.M. Isolation and characterization of an ipt gene from the Ti plasmid Bo542 // Mol. Gen. Genet. 1989. V. 216. P. 388-394.

168. Suzuki T., Miwa K., Ishikawa K., Yamada H., Aiba H., Mizuno T. The Arabidopsis sensor kinase, AHK4, can respond to cytokinin // Plant Cell Physiol.2001. V. 42. P. 107-113.

169. Swarup R., Parry G., Graham N., Allen T., Bennett M. Auxin cross-talk: integration of signalling pathways to control plant development // Plant Mol Biol.2002. V. 49. P. 411-426.

170. Synkova H. Valcke R., Response to mild water stress in transgenic Pssu-jip/ tobacco // Physiologia Plantarum. 2001. V. 112. P. 513-523.

171. Takei K., Sakakibara H., Sugiyama T. Identification of genes encoding adenylate isopentenyltransferase, a cytokinin biosynthesis enzyme, in Arabidopsis thaliana II JBC Papers in Press. Published on April 19, 2001a as Manuskript M102130200.

172. Thomas J.C., Smigocki A.C., Bohnert H.J. Light-induced expression of ipt from Agrobacterium tumefaciens results in cytokinin accumulation and osmotic stress symptoms in transgenic tobacco // Plant Mol. Biol. 1995. V. 27. P. 225-235.

173. Thomashow M.F., Hugly S., Buchholz W.G., Thomashow L.S. Molecular basis for the auxin-independent phenotipe of crown gall tumour tissues // Science. 1986. V. 231 P. 616-618.

174. Topfer R., Matzeit V., Gronenborn B., Schell J., Steinbiss H.H. A Set of a plant expression vectors for transcriptional and translational fusions // Nucleic Acids Res. 1987. V. 15. P. 5890.

175. Tuominen H., Puech L., Regan S., Fink S., Olsson O., Sundberg B. Cambial-region-specific of the Agrobacterium iaa genes in transgenic aspen vizualized by a linked uidA reported gene // Plant Physiol. 2000. V. 123. P. 531-541.

176. Udomprasert N., Li P.H., Davis D.W., Markhart A.H., Root cytokinin level in relation to heat tolerance of Faseolus acutifolius and Faseolus vulgaris II Crop Sci. 1995. V. 35. P. 486-490.

177. Vance V., Vaucheret H. RNA silencing in plants defense and counterdefense // Science. 2001. V. 292. P. 2277-2280.

178. Vlasova T.I., Demidenko Z.N., Kirnos N.D., Vanyushin B.F. In vitro DNA methylation by wheat nuclear cytosine DNA methyltransferase: effect of phytohormones // Gene. 1995. V. 157. P. 279-281.

179. Voss A., Niersbach M., Hain R., Hirsch H.J., Liao Y.C., Kreuzaler F., Fischer R Reduced virus infectivity in N. tabacum secreting a TMV-specific full-size antibody // Molecular Breeding. 1995. V. 1. P. 39-50.

180. Watson J.C., Kaufman L.S., Thompson W.F. Developmental regulation of cytosine methylation in the nuclear ribosomal RNA genes of Pisum sativum II J. Mol. Biol. 1987. V. 193. P. 15-26.

181. Warner G.J., Rusconi C.P., White I.E., Faust J.R. Identification and sequencing of two isopentenyladenosine-modified transfer RNAs from Chinese hamster ovary cells//Nucleic Acids Res. 1998. V. 26. P. 5533-5535.

182. Weiler E., Ziegler H. Determination of phytohormones in the phloem exudate from tree species by radioimmunoassay // Planta. 1981. V. 152. P. 168-170.

183. Werner T., Motyka V., Strnad M., Shmulling T. Regulation of plant growth by cytokinin // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2001. V. 98. P. 10487-10492.

184. Werner T„ Hanus J., Holub J., Schmülling T., Van Onckelen H., Strnad M. New cytokinin metabolites in IPT transgenic Arabidopsis thaliana plants // Physiol. Plant. 2003. V. 118. P. 127-137.

185. Willmitzer L., Schmalenbach W., Schell J. Transcription of T-DNA in octopine and nopaline crown gall tumours is inhibited by low concentration of a-amanitin /7 Nucl. Acid Res. 1981. V. 9. P. 4801-4812.

186. Yagisawa F., Mori T., Higashiyama T., Kuroiwa H., Kuroiwa T. Regulation of Brassica rapa chloroplast proliferation in vivo and in cultured leaf disks // Protoplasma. 2003. V. 222. P. 139-148.

187. Zhang R., Zhang X., Wang J., Letham D.S., McKinney S.A., Higgins T.J.V. The effect of auxin on cytokinin levels and metabolism in transgenic tobacco tissue expressing an ipt gene // Planta. 1995. V. 196. P. 84-94.

188. Zhao Y., Hull A.K., Gupta N.R., Goss K.A., Alonso J. Trp-dependent auxin biosynthesis in Arabidopsis: involvement of cytochrome P450s SYP79B2 and CYP79B3 // Genes & Development. 2002. V. 16. P. 3100-3112.1301. БЛАГОДАРНОСТИ