Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Полиморфизм мини- и микросателлитной ДНК свиней

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Полиморфизм мини- и микросателлитной ДНК свиней"

ой

1НСТИТУТ МОЛЕКУЛЯРНО! БЮЛОГИ I ГЕНЕТИКИ о 4/1 НАЦЮНАЛЬНОТ АКАДЕМП НАУК УКРА1НИ

ПОЧЕРНЯ6В Костяктин Федорович

УДК 575.1: 577.2

ПОЛ1МОРФ13М М1Н1- ТА М1КРОСАТЕЛ1ТНИХ ЛОКУС1В ДНК СВИН1

03.00.03 Молекулярна б'юлопя

АВТОРЕФЕРАТ дисертаф? на здобуття наукового ступеня кандидата 61олопчних наук

КиТа - 1997

Дисертац1ев е рукопис.

Робота виконана в лабораторИ генетики 1нституту свинарства УААН та вЦдШ молекулярной' генетики 1нституту молекулярноУ б!олог1У i генетики HAH УкраУни.

Науковий кер1вник - доктор б!олог!чних наук, професор

МАЛЮТй Стан1слав Станклавович зав!дувач в!дд!лу колекуларноУ генетики 1нституту молекулярноУ б!олог!У ! генетики HAH УкраУни.

OijiuiÄHi опонентк:

доктор б!олог!чних наук, професор НАЙН, ГЛЙЗКО .Валер!й 1вановнч, зав!дувач в1дд!лу б1отехнолог!У i генетики 1нституту агроеколог!У I б1отехнологИ" УААН,

доктор б1олог1чних наук. ШОИКО Олександр Петрович, завЦувач в!дд!лу б1охШчноУ генетики 1нституту молекулярноУ 51олог1У 1 генетики HAH УкраУни. Провiдна усталова - Харк1вський деряавний ун!верситет. ы. Харк1в.

У ре

Захист в!дбудеться "iL" 1997 р. о_™ годин!,

на засЦанн! спец1ал1зоваиоУ. вченоУ ради Д 0i.86.0i при 1н-'ститут! молекулярноУ б!олог!У i генетики HAH УкраУни. Адреса: 252527 КиУв 143. вул. Академ!на Заболотного. 150. 3 дисертац!еи мохна ознайомитись у б16л!отец1 1нституту молекулярноУ б!олог1У i-генетики НАНЗ

Автореферат роз!сланий 199? р.

Вчений секретар спец1ал!зованоУ вченоУ ради кандидат б!олог!чних наук

Лукав Л,Л.

ЗАГЙЛЬНЙ ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Вступ. Р1вень покращення еноном1чно ванливих показник!в у ;1льськогосподарськи тварин за останн1 десятир1ччя в середньому юр!внввав дек!льком в!дсоткам. Майяе половина цих зм!н вЦбула-;я завдяки полтпшення господарпвання, тобто скор!ше п!д Д1ея иочувчого середовища, н!з завдяки генетичним зрушенням. Таким ¡ином, темпи селекц!Т с!льськогосподарських тварин на тепер1шн1й 4ас вийили на плато. Сучасн! породи були створен! в минулих сто-пттях шляхом добору тварин, носив ун!кальних асоц!ац!й ген!в з 5аганими фенотип!чними сзнаками. Слроби одеряання нових порЦ з зиксристанням мтяпородного схречування, як правило зак1нчувалось 1евдачеи, якщо не зикористовувалось поглинавче схрещування, тоб-го повернення до початковоТ форми. Останн! досягнення ч'олекулярноТ б!олог 11 подавть надтя на п!двицення е&ективност! :елэкц!У св!йських тварин. Разом з тим методи молекулярной* 5холог!1 н! в якому разг не змозуть зам!нити траднцгйн! кетоди :елекц!Т, навпаки, 1*х потр}бно об'еднати для досягнення максимального покращення генетично1" ц!нност! популяц!й с!льськогоспода-зських тварин. Ннткальн! гени з сильной гндив{дуальной д!ею, зручн! для досл1двення. але звичайно навть ¡гк!дливу плейотропну ц!е. Наприклад, трансгенн! евин! з перенесении геном гормону ро-:та, но експресуеться, кавть низьку ниттездатн!сть та плодови-Нсть. Одночасно з тим, б!льа!сть екоиом1чно вавливих ознак це «1льк1сн1 ознаки, як! е результатом комулятивно\" д! 1* числених ген!в. Так! г.олхгенн! ознаки часто маить незначний !ндив!дуаль-иий ефект !, на сьогодн!шн!й день, ваяко п!ддаються досл1дяенни иолекулярно-б1олог!чними методами -клон'ування, сиквенування !тд.

Анал!з 1ндив!дуальних I пол!генних к1льк1сних ознак, аояли-зо провести з використанням маркерноТ селекц!'1 - комб!нац!\* нолекулярноТ та фенотип!чно"1 1нформац1Т. Для ус!иного вир!иення ц-1 е*1 проблеми необх!днои умовоп е поиуки ! досл!дяення маркерних яокус!в. Одним !з тип!в молекулярних маркер!в е пол!морф!зм ДНК з перентнною к1льк!ств тандемних повтор!в (УНТЮ. Посл!довност! цНК, пол!морф!зм яких зумовлений р!знов к!льк!ств тандемних пов-тор!в иКТй, умовно под!лявть на м!нх- та м!кросател!ти. 1снують ярйпуцення про еволюц!® м!н!сател1тхв !з н!кросател!т!в. М1кро-сател!ти мают'ь 'рознтр повторвваноУ одиниц'1 1-5 п.н., м!н1сател1-ти, в1ДПов!дно, 6-65 п.н. Розм!ри алельних вар!ант!в мояуть

складати вЦ 23 ООО п.н. до його повно'1 в1дсутност1 "нуль"алель. Використання зонду на ochobî варгабельних послг-довностей та г!бридизац}я в м'яких умовах, дозволяе виявляти од-ночасно спорЦнеш aлeлi р1зних локус!в. Складний Ha6ip смуг, через висоиу 1ндив}дуальну своертднгсть одернав назву ЛНК-oiH-герпринт. 1нший п!дх1д досл1дяення цього типу пол1морф1зму, ви-користаний у ц1й робот!, базуеться на анпл1ф1кацП' пол}морфних локус1в за допомогою пол{«еразно1' ланцвгово\' peaKuiï С PCR К Ус-падкування алел!в VNTR-^OKyciB в}дбуваеться за законами Менделя, вони pîBHOMipHo po3MÎ4eHHi по всьому геному, алелън1 вар1анти соматично стаб}льн! та селективно нейтрально Така властив1сть UNTR-^noKyciB дозволяе прилустити можлив^сть використання ïx як молекулярних «аркер}в. ДослЦження UNTR локуств у розрi3i використання ïx як молекулярних маркер!в î викладена у дан}й po6oTi.

йктуалыпсть теми. М1нлив1сть е основою таких фундаменталь-них б1олог!чних процесгв як адаптац!я та еволвц}я i, в1дпов}д-но, селекц!йних процес!в. М1рилон м!нливост! популяц!й е р!вень генетичного пол!морф1зму, ■

Йнал1з джерел в1тчизняно'1 та закордонно'1 л}тератури показуе, що найб1льи поширениии методичними п!дходами до досл!д-ження генетичного пол!морф!зму стають т!, як! базувться на виз-наченн! пол!морф!зму молекулярного р!вня. зокреиа ДНК. Як вже зазначалось, методично зручним для використання виявився тип по-сл1довностей ДНК, пол!морф!зм яких зумовлений р!зною к1льк!ств тандемних повтор!в.

Застовування метод{в ДНК-ф!нгерпринту та ампл!ф{кац!'1 ДНК за допомогоп пол!меразно\' ланцвгово\' реакц!\' як RftPD, так i пев-них к!кросател!тних локус1в, дозволило б!льи ефективно досл!джу-ват/ цей тип пол!морф!зму. Останн!й п!дх!д набув найширокого за-стосування.

Що до вивчення геному евин!, то 1ндив1дуальн! та порода характеристики високопол!морфних локус!в ДНК за допомогоа ДНК-ф!нгерпринту, зокрема з використанням ДНК фагу М13, як най-б!льи доступного, та RftPD визначен! не були. Також не були i по-р1внян{ результати, одержан! за допомогов цих метод1в. Одн!ев з причин обмеженост! даних, була в1дсутн!сть адекватних метод}в ïx визначення в об'ект! досл1джень. Все це i викликало необх1дн!сть планувати роботу по модиф!кацГ1 методу ДНК-ф!нгерпринту, добору за активн!стп та вар!абельн!ств праймер!в, здатних на ДНК виду Sus scrofa doœestica L. утворпвати пол!морфн! RflPD-малвнки, та

10 o en 1 se 1 X 1 1 •»-i 1 ts E»

co X -*—< <0 3= o O 1 X (0 E7> a> «í e=t

et W m d X X m X CQ <o 53 CC X

■4—4 o c=í En 03 s o X >* (_ CQ

* X H »*—1 ra (0 CQ ex cu H-t C0

•w VD eu CQ CQ X M o « O El ex ■4—4

X O 3B x •4-4 a. 1 X IO X X o X se

cu ct CJ a> <H «=t X tr EC

OI X X rn tn « ja s 4 ex X 3) >=t

cj "S ■4-4 a: o X ro X 07 o c fX X \o i- a X X ex co

Be ex >=: № o VD o cu ja (0

EC o o x c -n ct X o GJ ex <5 X

«=£ x (O o I-4 x X tí o o ex co X o «♦-4

¡4—4 t— X x o » O s o s X (0 X X

o o eO X !_ 3= o ca ex t- X X •»

x e X o O CE et ai X ¡i—i ca X X

•O * 00 ex X ac X <0 X a> o fr- o

>=: —i EE o ET En <0 X H X ST eo X

a> •i—i X ca as X 1- X ex 10 fct E3

vrj EJ x •4-4 1- 0} 1- '—' a> 0) X se co >=:

<a to x - eo ra * o • •*—t e- SG (O

•i—• se En o ae ca X ^ ©■ «=t CO

CX ■4—< co L- c CU i- <o o. H—1 i

ra ©■ x o o I- u X a> (0 tK H • a. ex en

CQ •í—4 SE x ex CQ t- u X M X c X cu D-

O IO CO o ra O X X X a> cu CJ ta CE

X c cj 63 X X <0 a> o « X <& OS

o X VO 52 o s o CL ta X co •t—4 X X ro

o ro co CQ X CQ 10 a> u ce o ex X

x O - s o X m os o c; c fr-

ca •=: 1- • o o ■s O fO

ex c 10 S • c_> >a •l-H •a o X » ac X ca

o; ^__; X t=t (0 X X cí ■ • X (0 s= X S3

X ex r0 s p* t- a? « es o ex as X ex

i o <0 Id o D5 X s> X H C£i o

l a> '.•—* Eí o cj a> f— « ci o e; X X CQ m

ET o ■x s •r-4 s o C_ >=C ro o B t? f-

ro (0 X x » CX K 1- • «í X u ci «=; o O a> X En

X s- x ca aj VI X o co u ta - OQ o h- » i- co

i co •t—4 o- i— cu X X cr> o (0 es ra 1- <33 X 10 •

x O ■=; cc X e a? < ^—< cí X co 10 as o CJ ex

CO x es Oí (0 o K vi 3 X L tí o 4#-4

rr X ca •o « a •Í-H x/\ cu •6-4 (0 m ex *o (0

x 03 ca (0 eo •!—« H- o K X w >=: X IO X X O O

o. x •4-4 t— ■=í 'H X ¿t co c ;»-» X *—1 ct *r~4

En o o. 10 C-) c> <e os SI -«—i X s •» -»J

>=c 1 o ET> o o ef. (O X X i— s w Vi

a? o x i- o et a. ro m rj> 22 ca o (0 rt-4 •4-í f- 03

rr =n X X c- <D (0 et CQ ca (0 <0 c; X EJ X e

o X x s ct CJ to O X X o. —( 1- 10 X c

o. o fr- o. o VI X X O CQ ¡IH « fr- 10 X CJ •o

c ■=: O c ex <0 s <0 sz se X •M s ío ex •4—4 <5

Q3 CL o tn X X Jí-4 l- <=t X f— <=t ex o •o O- •4-4 IO

ts E en <13 X 3 o r-í ■1 -í X «=t K* ta »o •»-■4 X -4—1 rt c—.

X O o C/-1 X =r 10 •i—« o X X X sa t ; co c.

X L_ CL X eO .,_, s l=> ro í- CQ »- o L, »-i C C-

03 O x •4—1 1- CQ o a. (U X cu X I ss l X ¡ o

E? X €> ■4—4 o H* » f- ü * X X re US

O o o 1 •1—1 X « o X zn CQ CQ co 1

a. En SC X x 1 a? sr X • IH O ex Ui

X O En 3= £> CQ o ca Id o X O 39 t- <_> p

• •< r—r t—■ 4 1 <"*-> *—■ • 4-4

1 1 ra 1 IÜ 1 l ¡4-4 <s 1

tn o 10 X o cu •4-4 cu eo 1

0} X 1 i_ ©• X ca X X ex •O

m 44H EC o <s ro X ■ IO

o as •4-4 ss se » •4-4 <s X co to X En

•a o t=C X o •4-4 CJ •4-4 CO

CJ X «=t X co X & ex X cu

X o o o co X •4-4 En X ex

<0 X <=£ «=t •4-4 co X co c; ÜC X X

Ct-4 X • CO ct CJ c EX X t=t

o fr- X o 0? X X <=I o •4-4

c_ CJ a X 10 X X ex se 10 ex X

C-> X C0 co CJ X >o PC 1 X o ro

en ex « En o ro •4—4 • ■=t CÜ X ex c M

a> o «D en t- En CJ CJ cu CX

til t- fr- (O En r=E X ex. tJ> c 10 eu

3 X CU cu •4-4 X fr- O X u X o fr- 4 C£

VI 10 E ta ex o t- O E0 ra o X CD

o. * ex o En u o <0 X o *=? co X X

r» <o X cu X *=c X X o t- s rt> •

« • « X X e X ex Ef o e; o X ct m

X X X ca X o e •4-4 !_ % •4—4 se •Q o 4H

X X X X (0 O •4—4 o X EC fr- H

X co • X X X X c. 1— IO eo to

se ES X •4—4 ta eo as ct ta- cu o •4— EJ> fr-

<=: t=t ex 4fr-t • h-4 es o cú X •4—4 ■=( Cí • W «=t JS

«=t ra o fr- ex X fr- C •4-4 ■=: OI ca X s e?

S3 ex <cs eo X eo o cu 10 fr- CL X m X E3>

<0 1 o cu fr- CO s fr- co ío ce c» X X co

X c=> c X ja cu fr- st •4-4 ío CJ ee •=; t=í X CU

ex. X >=: X CÍ ta O! o <=c o X co CX

•»-4 en co CQ » X X •4-4 X •4—4 o •4-4 ex s t=£

X K fr- O co m ex EJ X EJ o. n. X X X ex X

fr- o o o ro to X X o •4-4 •4-1 CQ CK X

eo •4-4 •4—4 ae a. X X fr- O. 44-4 E X X X X X

c=t X X 3= X se X •4—4 eí I— X X t=t X 10

CO X ja «=i EC CQ O- X ro !•—• O) O K X K

cu ■=: X «=t X ex X •4-4 O •4—4 fr- fr- X IO CX

» u C0 m X ro tt o X X X cu CQ P0 C13

X o C0 •fr-4 ra X o X « cu .o CU E X •t-4 ex «

ex ex Pt CJ »a o En as X X K CJ ta O ex 03 o

CU cu En ex » fr- CQ X ct l=£ <=£ U <c o Pt

53 i— m X cu X En cu •4-4 o o X X o Oí

"X a> X O K o X X co <=! ex >=: S! X X

(0 L. <=£ >=; o ex O .4-4 CJ o CJ O o o <s X

ex X ra c re to « o u o c 10 X CJ tu

E: X 44-4 X •4-4 c. >=5 —-4 CO rt ex w o t; 03 3C rr

fr- X X C) cc 32 o X (=t CQ >=; X to

X eo X X O I" 1- ex ES X •o en X

i- CQ S" K •4-4 X o eo «=; 10 O o CJ eo

X ¡a x «4>4 tt =5 •4-4 X L- (0 En ra En co X ex

V r¡. o 05 €> 0) to fr- VD r- 03 co eo

10 o •t-í « 7t li- 1 & X

X pa * t 18 li) se >D eo to í*—1 cu •4-4 >o cu p-

ci t J <f O ac o se ex E3 O ta ex o Í3 X

X E7) C.5 O ca •4—4 ex x: cu O. ex o rx ex X fr-

íül c o X to se Cí •4-4 eu c co cu E- X

ex te J»-4 ♦ o ■s X X o X c— to

1 X I") f3 SB X •4-4 ro o. •4-4 as 10 ex co CQ X X ex CQ CJ X ex e

í\ JO •4—4 X 3B o c O X ex

(0 X cu btí X cu X o o X X co 413 fr-

тати розвирювть уяву про м!н1- та м1кросател!тн1 локуси ДНК свиней як молекулярн1 маркери i ко*нть бути врахован! при моле-кулярно-б!олог!чних досл{дяеннях свин1, маркерн!й селекцП".

Особистий внесок здобувача. Теоретичн! половення розроблен1 в обсяз! 70%, лабораторн! роботи - 90Х. У всix наукових працях, опубл!кованих 1з сп!вавторами,персональний внесок Почерняева К.Ч становйть 50 в!дсотк1в.

Апробац1я результаттв досл1джень. Матер1али дисертацП' були заслухан! i обговорен на сильному науковому ceMiHapi в!дд1лу молекулярно'1 генетики та в!дд!лу 6ioxiMi4Hoï генетики 1ШГ НАНН, та на сильному науковому 3aciflaHHi лаборатор!й селекцН', генетики та лабораторп Г1бридизацп 1нституту свинар-ства УАЙН. Ochobhi полоаення дисертацИ доповЦалися: на I Mis-народн!й конференцп по молекулярно-генетичним маркерам тварин СКиГв, 1994), II М}янародн1й конференцй' по молекулярно-генетичним маркерам тварин СКиг'в, 1996), та на М}жнародн1й конференцП" "ДНК-технологии в нивотноводстве". (Kh'îb, 1997).

Публ!кац1"1. Результати дисертацП' обубл!кован1 в 3 статтях наукових вурнал!в, 2 зб1рниках наукових праць та 5 тезах конференц1й.

Структура днсертацН". Дисертац1я складаеться з вступу та 4 роздШв: огляд л!тератури, матер!али та методи досл1джень, результати досл!дкень, обговорення. Дисертац1я викладена на 109 стор1нках мавинописного тексту, м!стить 16 таблиць, 15 малюнк1в. Список л!тератури вкючае 215 дверел, в тому числ! 189 1нозем-них.

0СН0ВНИИ ЗМ1СТ МАТЕРIАЛИ I МЕТОДИ ДОСЛШЕНЬ

Основн! досл!дження проведено в лабораторН" генетики 1С SJAAH та в!ддШ молекулярно\" генетики 1нституту молекулярноГ б1ологП i генетики НАНУ.

Об'ект досл!д»ень. В досл{дах було використано 70 чистопо-родних свиней (Sus scrofa douestica L.).

Вид1лення ДНК. 1з кров! ДНК вид!ляли двома методами - фено-льним Vatheu С.Б.Р. та безфенольнии за Соколовим Б.П. ДНК Î3 сперми кнур!в вид!ляли за власнов модиф!кац1ею методу Gill Р.

ДНК-ф1нгерпринт1нг. 7-10 мкг ДНК г!дрол1зували за умовами постачальника (НБ0 "Ферментас" В}льнюс). Були використан! ендо-нуклеази: Alu I, Bsu RI, Msp I, Sau ЗА I, Tag I, Hlnf I. Елек-

зофоретичне розд!лення фрагменпв ДНК проводили в 0.8% агароз-зму гел1 у тр!с-боратному електрофорезному буфер!. Електрофорез доводили 48 годин. Напруга становила 2 вольти/см. гели. Перенос ЯК на капронов! ф!льтри зд!йснювали за Саузернон.Пбридизац1й-ий зонд на основi ДНК фагу Х13 шр8 готували з використанням ласноТ модяф!кац}'1 методу G.Uassart пгляхом добудови другого ла-цага з специф!чного г!бридизац!йиого прайнеру 5'TTCfiTftfiTCflflftflTC) фрагментом Кленова ДНК-пол1керази I з наступим розд1лення матриц! та синтизованого зонду. Пбридизац1п дШкюзали за 0.F.Hestneat.

Локус-специф!чна акпл!ф1кац!я кгкросаталгтних локусгв ДНК. еакц}в проводили на термоциклер1 BioTehra'91 СД1АМ, М. Москва) 50 мл ПЛР-cyMftri, з 1 мкг ДНК евин! та 1-2 од ДНК-пол!мерази heraus aquaticus СП1ЯФ, РАН м. Гатчина). Прозодилк 30 цикл!в мпл!ф)кацп за наступники параметрами: 1 хзилина - 94 С. 1 хви-ина - SO С для локусу SQG37 та 65 С для SST1IFB, 1 хвилина -0 С. 0станя!й цикл а»пл1о!кац}1: 1 хзилина - 34 С, 3 хвилини -0 С, 6 хвилин - 70 С, Структура праймер!в м!кросатэл!тних локу-!в ДНК евин} наведена в табл.!Л. Електрофорез проводили у 10% ативноку ПЙЙГ 3 годики при силг струну 10 мй.

Таблица 1.1.

Структура прайиер!в для ПНР ампл!ф!кац1'1 м!кросател!тних локус'в ДНК евин!

Локус Послхдовнкть з 5' к!нця

SQ097 1 - GflC СТА ТСТ ААТ GTC ЙТТ ЙТЙ GT

2 - ТТС СТС СТЙ GftS TTG АСА АЙС TT

SSTHFB 1 - АТС GCA ТСТ GGT CAG ССА ССй AGA

2 - ТТА GGA GGA ТТТ TGC ЙЙС ЙЙС СС

йапл!ф!кац13 ДНК евин! з використанням техн!ки ЯАРВ. Реак-дн проводилив 50 мл ПЯР-сунШ з 1 мкг ДНК евин!' та 1-2 од. ШК-пол-черази ТЬегшиз адиаМсиз СГосНИИ генетики микроорганизма, Москва), за елтдуючими параметрами: 1 хвилина - 94 С, 1 :вилина - 35 С, 1 хвилина - 70 С. Останнхй цикл ампл!®1кацп: 1 :силина - 94 С, 3 хзилини - 35 С, 8 хвилин - 70 С. Структура !АР0-праймер!в приведена в табл. 1.2. Електрофорез проводили у 27. [гарозноку гел! 2 години при напруз1 2 В/са.

Таблица 1.2

Структура КАРБ-праймер}в для ПЛР ампл1ф!кацН' пол!морфноУ ДНК свинт

RAPD-праймер ПослЦовн1сть з 5' К1нця

ILO 1065 CCG GTG TGG G

ILO 1127 CCG CGC CGG Т

L45 GGA ТСС АА ftflC GftC GGC CAG T

S12 АТБ TGG TGG Т

Математична обробка даних. Математичну обробку даних зд1йс-нювали користувчись програмою GELSTATS верс}я 2.6 на компьютер IBM АТ-386, в середовиц1 HS-DOS 6.0.

РЕЗЗЛЬТАТИ Д0СЯ1ДШЕНЬ

Пол1морф!зм мШсателгтних локуств ДНК свинг, до виявляеть-ся методом ДНК-ф!нгерпринту. Для ДНК-ф1нгерпринт1в свиней, оде-рманих з використанням модиф!кац!У приготування зонду М13, спос-терггались }ндив1дуальн1 особливоси за числом, розтаиуванню т< iHTeHCHBHicTB смуг. Найкраще електрофоретичне розд:лення рестри-ктних фрагменте було досягнуто при проведенн1 електрофорез' протягом 44-48 годин з рециркуляц1еп буфера та напругою I вольти/см.геля. За таких умов, виявилось можливим визначити по-ловення смуг в д1апазош в!д 4000 п.н. до 23000 п.н..

При г1бридизац!У в суворих умовах, коли зонд Mi3 виявля! т!льки локус з максимальною гомолог!ею, був продемонстровани! ефект "перетасовки" фермент!в. Так при зам:н1 рестриктази Alu на Hinf I та Tag I сильно зм1нився диапазон розм1ру фрагыенпв чо г!бридизувались з зондом.

Придатн1сть Tie'i чи tншоУ рестриктази для використання i TexHiyi ДНК-ф1нгерпринту, ми визначали за здатн!стю утворвват) максимальну к1льк1сть фрагнент1в на рад1оавтограф!. Використанн! рестриктази Msp I дозволило 1дентиф1кувати на ДНК-ф1нгерпринтi, найб1льшу к1льк1сть. р1зних за розтаюуваннян, смуг в диапазон: в!д 4 до 20 т.п.н. Всього було визначено 34 полояення, пол1мор-фних за довминов, Mspl-рестриктних фрагмент!в. Bei подальип дос-лЦяення, були проведен! з використанням рестриктази Mspl.

Максимальну к!льктсть аллельних BapiaHTiB, в вище зазначе-

ному дгапазон!, - 26, мали, деяк!, зразки ДНК свиней породи велика бгла. В середнъому. використання рестриктази Мэр I дозволило одержати для одн1 е'1 тварини вхд 16.75+1.43 до 21.11 ±0.84 смути на ДНК-ф1нгерпричп. Середня частота смуги для ДНК-фгнгерпри-нт!в тварин р1знкх поргд коливалася в1д 0.62±0.Об до 0.40+0.04.

1мовтрнгсть сп!впадання всгх смуг ДНК-ф1нгерпринт!в двох тварин велико!' бглоТ породи становила 5,5682x10-7.

Досл}дяення родин свиней проводили для з'ясування характеру успадкування смуг. Акал1з ДНК-ф1нгерпркнту гн1зда свиней вия-вив мекделевський характер насл!дузання. Аналтз кглькосп гтбри-дизац!йких смуг мппсател1тного зонду М13 серед окремих Л1нтй та вцхлоыу по пород! велика бит, не визначив достоверно! р1зниц1 по к!лькост! смуг, Показник середньо1 частоти смуги виявився р1-зним при пор1внянн1 показник!в окремих лппй та породи (Р<0,05), !'■!ч лШями Громкий та Леопард достовгрна р!зниця заф!ксована не була, Ктлыасть та частота г1бридизац1йних смуг н1н!сател!тного зонду Й13 серед лШй породи велика бгла приведена в табл.2.1.

Таблица 2.1.

К1льк1сть та частота г1бридизац1йних смуг м!н1ател1тного зонду М13 серед л!н!й породи велика б!ла (М+и)

н Порода К-сть Середня к-сть Середня частота

ЛШя смуг смуг (х) смуги Ср)

1 Громкий(п=4) 29 22.00±1.15 0.82+0.06 Р1-2>0.5

о С ЛеопардСп=3) 28 21.25+1.70 0.62+0.07 Р1-2>0.5

3 В.бхла Сп=Э) 34 21.11+0,84 0.40+0.04 Р1-3<0.05

Геномний профгль Мзр1-пол!чорфних фрагмент!в свиней велико'1 б 1лоТ породи наведений на г!стограмг рис.2.1. Пбридизац!йн1 скуги "16", "22" та "32" - зустр!чалися з найб1льиою частотою.

Рис.2.1. Розпод1л частот Игр 1-пол1морфних фрагментов ДНК-ф1нгерпринту свиней породи велика б1ла (по ос 1 абсцис в1дм1-чент номери смуг, по ос 1 ординат - частота стргчання смуги).

В напрямку поиуку породних особливостей геномних профШв, нами був проведений м1«породний анал1з ДНК-ф1нгерпринт1в свиней. Спочатку був оц1нений пол1морф!зм середньо'1 к1лькост! та частот г1бридизац!йних смуг м1н1сател1тного зонду М13 серед тварин по-р!д дюрок, ландрас та велика б1ла. Результати наведен! в табл.2.2.

Таблиця 2.2.

К1льк1сть та частота пбридизац!йних смуг и1н1сател!тного зонду М13 серед тварин породи дюрок, ландрас та велика б1ла (М±п)

N Порода К-сть Середня к1льк1сть Середня частота

смуг смуг (X) смуги (р)

1 Дюрок(п=4) 23 16.75+1.43 Р1-2>0.5 0.41+0.07 Р1-2>0.5

2 Ландрас(п=3) 25 17.33Ю.88 Р2-3<0.05 0.49±0.06 Р2-3>0.5

3 В.б1ла (п=9) 34 21.11+0.84 Р1—3<0.05 0.40+0.04 Р1—3>0.5

Достов1рна р1зниця по к1лькост! смуг СР<0,05) була заф1ксо-вана при пор1внянн! пор!д велика б1ла-дврок, велика бгла-лан-драс. Достов1рноУ ргзниц! за частотою г!бридизац!йних смуг знай-дено не було. Потбули оц1ненеИ1 частоти г1бридизац1йних смуг м!н1сател1тного зонду Ы13 серед тварин породи дврок, ландрас та велика б1ла, за якими були одеряан! геномн! профШ. Пор1вняння геномних профШв пол1морфних фрагменте ДНК-ф1нгерпринт1в свиней р!зних пор!д виявили диференц!ац1ю за частотами зустр!чаемо-ст1 маркерних смуг, Г1бридизац1йна смуга "16" - була заф1ксована на ДНК-ф1нгерпринтах вс1х досл!джених тварин. Частоти Мзр! - по-

¡морфних Фрагментов були використан! для оцгнки генетичноУ 4фереиц!ац!У поргд. Генетична ¡дентичгпсть та генетична дистан-!я м!ж тваринами наведена в табл. 2.3.

Таблиця 2.3.

Генетична !дентичн!сть(I) та генетична дисташпя(В) м!ж тваринами пор1Д днрок, ландрас, велика б!ла (ВБ) та тваринами лхн!й велико! бIло 1" породи породи

]ари К!льк!сть Генетична Генетична

юр !д смуг 1дентичн!сть(I) дистанц1я(В)

ЦарокСп=4) 23

(1андрас( п-3) 25 0,505 0,682

3.5.С п=9) 34 0,592 0,524

ЛандрасСп-3) 25

ДпрокСп=4) 23 0,588 0,534

В.Б. С п=9) 34

ГроакийС п=4) 29 0,024 0,478

ЛеопардСп=3) 28

Показник генетичноУ в!дстан! В виявився найб1льиим при по-!внанн1 пор!д дврок-ландрас ! дор!внввав 0.682, найменаий андрас-велика б!ла - 0.524. При розрахунку генетичноУ в!дстан!, меяах велико'! бтлоУ породи, ьпя л!н!ями Громкого та Леопарда, уло визначено мШмальне значения цього показника (В = 0,478).

Пол1морф!зи м!кросател!тних лакус!в ДНК евин!, що виявля-ться методой локус-специф!чноТ ПЛР акпл1ф1кац1Т. Нами був про-едений птдб!р умов ПЛР та анал!зу продукпв ампл!ф!кац!У мхе окус!в 50097 та ЗБТНРВ за спроценою схемой, яка виклшчала кеоб-1ДН1сть м!чення та використання сикзенсних гел!в. Проведения еакц11 аипл!ф!кац1У при температур! в!дяигу 55С, як зазначено в риг!нальн!й робот!, призводило до синтезу великоУ к!лькост! не-пециф!чних фрагкент!в ДКК. П!двищення температури в!даигу до 60 дало змогу усунути неспециф!чний синтез. Для розд!лення ампл!-!кованих фрагмент1в були випробуван1 67., 102 та 16% пол!акр1ла-1днт тел! (без д8натурац!У ДНК). Найкрац! результати були одер-ан! при эикоркстакн! 1С У. ПййГ. С!мейний анал!з локусу 50097 н!зда свиней виявив мендел1вський характер успадкування.

3 метэв визначення особливостей мтзпородного розпод!лу ас тот зустр!ча5мост1 алел!в ртзного розм!ру, нами була зд1йсне-

на ампл1ф1кац1я мткросателиних локу<лв свиней ргзних пор1д. ; крема, була досл1джена ДНК свиней велико'1 бхло"1 м1сцевоУ англ1йсько'1 селекцГУ I миргородсько'1 породи.

Виявлент нов! алел1 в популяц1У свиней ВБ породи розмгрс 264, 282 та 292 пар нуклеотид1в. За результатами ДНК-типуваь свиней, встановлен! алельн1 частоти, як! приведен! в табл.2.3.

Таблица 2.

Частота алел1в м!кросател1тного локусу 5009? в популяц1ях велико! бIдо1 та миргородсько'1 породи

N АлелНп.н.) ВБВ* (п=19) ВБА#*(п=19 > Ниргородська(п-12)

1 206 0.03 _ _

2 216 0.09 0.429 0.29

3 218 0.12 - -

4 234 0.03 - 0.18

5 238 0.09 0.429 0.71

6 242 0.34 - -

7 264 0.15 0.143 - 4.18

8 282 0.09 - ' -

9 298 0.01 - -

Прим1тки: 1. Велика б1ла порода в1тчизняноУ селекц!У, 2. Велика б1ла порода англ!йськоУ селекцГУ. Гетерозиготн1сть локусу БООЗ? в популяц!ях великоУ б!лоУ 0,84 знаходиться на одному р1вн! з иведськиии йоркширами, в I пуляц!ях миргородсько'1 породи, значно, ниячий - 0,44. Гетеро; готн1сть м1кросател!тного локусу 50097 в популяц1ях вели; 61Л01 та миргородськоУ породи приведена в табл.2.3.

Таблица 2

Гетерозиготн1сть м1кросател!тного локусу 50097 в популяц!ях великоУ б!ло'1 та миргородськоУ породи

N Порода К-к1сть Гетерозиготн1сть

алел!в

1 ВБА* (п=19) 9 0.84

2 ВБА*# (п=12) 3 0,61

3 Миргородська С п=12) 4 0.44

- и -

Примгтки: 1. Велика б1ла порода в!тчизняноТ селекцП", 2. Велика б!ла порода англ1йськоТ селекцН'.

Визначена однор!дн1сть ампл!фгкац!Т локусу 50097 на ДНК вид1лено1 з кров! та 13 сперми кнурхв.

С!мейний анализ локусу 55ТНРВ гнгзда свиней виявив менделе-вський характер наслгдування. Проведений генетичний анал!з локусу ЗБТНРВ визначив значну алельну р!зноман!тн!сть в популяцп свиней миргородсько'1 породи. За результатами ДНК-типування свиней, встановлен! алельн1 частоти, як! приведен! в табл.3.10. Ви-значепа гетерозиготн1стъ м1иросатем}тиого локусу 55ТИКВ в популяцП' свиней миргородськоТ породи (Н=0,7836).

Таблица 2.4.

Частота алел!в М1кросател1тного локусу ББТНРВ в популяц!Т свиней миргородсько'1 породи (п=30)

NN АлелИп.н.) Частота(Р) NN АлелКп.н.) Частота(Р)

1 180 0.1052

2 189 о.о^ - 12 231 - 0.0175

3 192 0.0175" 13 234 0.0175

■ 4 201 0.0175 . 14 237 0.0175

5 204 0.0175 15 240 0.0175

6 207 0.0350 16 243 0.1570

7 216 0.0877 17 245 0.0877

8 219 0.0350 18 249 0.0701

9 222 0.0175 19 252 0.0350

10 225 0.0526 20 264 0.1228

11 228 0.0175 21 270 0.0350

Породний та »пжпородний пол!морф!зи високовар!абельних ло-кус1в ДНК евин!, до виявляеться методом ПАРИ. Початковою метоп доелвдення пол!марф1зму високоваргабельних локус!в ДНК евин!, що виавлявться методом ЯДРО, було визначення праймер!в, як! у в!дноиен! виду СБиэ БсгоГа йоаезиса Ь.) давали вар!абельн! на-бори смуг - ЯАРО-малюнки, Нами були одержан! МРВ-малюнки, як! ргзнилися як за к!льк!ств ампл!ф!кованих фрагмент1в, так 1 за Тх молекулярной масов.

Використання праймеру 1,45 дозволило ампл!ф1кувати п'ять фрагмент!в ДНК, розм!ром приблизно в1д 500 до 1200 пар нуклеоти-д!в. Ц! фрагменти виявилися аналог!чними у вс!х досл!даених тва-

рин. Очевидно, праймер L45 мояливо оц1нити як консервативней у в!дношенн! виду. Використання праймеру L21 дозволило амплтф1ку-вати п'ть пол1морфних фрагмент1в ДНК, posaipou 300 - 800 пар ну-клеотид1в.

Прайиери IL01065 та IL0112? були описан!, як так1, що здатн! демонструвати пол1морфН1 RfiPD-малюнки для ДНК велико'1 рогатоУ худоби (Bos indicus та В. taurus3 та ззбувидноУ худоби. Праймування ILO 1065 виявляло до 10 фрагменпв розмтром 200 -800п,н. 3 використанням праймеру IL01127 була одержана най51льиа к1льк!сть пол!морфних смуг - 23, в дгапазон! в!д 350 п.н. до 2556 т.п.н. Зменшення концентрацИ" праймеру IL01127 з 0,33 мкМ до 0,033 мкМ, призвело до зменшення {нтенсивност! смуг низьконолекулярноУ та п!двищення Нтенсивност! високомолекуляр-ноУ фрйкц!'1

Для RflPD-нaлвнкiв ДНК свиней, одершшх з використанням праймеру ILO 1127, спсстер!гались гкдивЦуальн! особливостг за числом, розтаиуванням та !нтенсивн!стш сиуг. ©рагменти найбгльшоУ та найменмУ молекулярноУ маси були в!дм!чен! при доел! дженн! ДНК свиней nopifi дврок та ландрас. Максимальна к!л-ьк!сть аипл!ф!кованих фрагмен^ь ДНК - 16, мали RйPB~мaлюнки ДНК свиней пор!д велика б1ла та дюрок, м!н!мальну - 7, ДНК свиней пор!д миргородська та дкрок, В середньому використання праймеру ILO 1127 дозволило одеркати для OÄHie'i тварини 11,375 смуг на RftPD-ыалвнку.

Середня частота смуги для НАРБ-налвнк!в ДНК свиней р1зних пор1Д коливаласа втд 0,0219 до 1. Характерною ознаков використання праймеру ILO 1127, була наявн!сть у Bcix досл!джених тварин RflPDniparMeHTlB з розм1ром приблизно 550 та 2550 пар нуклеоти-д!в. За частотами RfiPD-MaflBHKiB, ДНК свиней р!зних пор!д був складений геномний проф1ль праймеру ILO 1127 приведений на. ric-тограм! рис.2.2.

i

:_—

Ш II

>>

Рис.2.2. Розпод!л частот RfiPD-nofliMopOüMX смуг свиней по-

р!д велика б!ла, миргородська, дврок та ландрас (по ос 1 абсцис в!дм!чен1 номери смуг, по ост ординат -частота стр!чання смуги).

Дослгдження родин свиней проводили з використанням прайме-ру ШШ27. Рнал!з ЯйРВ-малвнк1в ДНК гн!зда свиней виявив менде-л!вський характер насл!дування. Оц!ниячи процентну диференц!а-цхю !?ЙРП-калюнк1в родини свиней велико! б!лоТ породи були одержан! значения у в!дношенн1 кнур-свиноматка - 82'/., кнур-поросята - в1д 14,29% до 33,332, свиноматка-поросята - в!д 28,57% до 41,18%. Серед поросят одного гн1зда, як ! оч!кувалося, були оде-ржан1 некиг значения: вгд 9,09% до 26,32% табл.2.5.

Таблиця 2.5.

Процентна диференц1ац!я СРО > м!я тваринами родини велико!' бтлоУ породи за анал!зом КйРО-малюнкгв

Кнур Свиноматка П о р о с я т а

NN N189 N9932 N675 N679 N6710

N189 0.00 62.50 33.33 14.29 23.81

N9932 62.50 0.00 28.57 41.18 29.41

N675 33.33 28.57 0.00 15.79 26.32

N679 14.29 41.18 15.79 0.00 9.09

N6710 23.81 29.41 26.32 9.09 0.00

Результат« процентши диференц1ац11 (РИ) м1* тваринами одн!еУ породи та р!зними породами свиней мали сам1 р!зноман!тн! значения. Так при внутр!иньопородному пор!внянн! значения РО ко-ливалось В1Д 25% м!ж тваринами великоУ б!лоУ породи до 73,91% породи дврок. При м!жпородному пор!внянн! найыениа процентна ди-ференц1ац!я була зафгксована м!а тваринами дюрок-ландрас (20%), найбгльша,дюрок-велика бгла(52.94%), дврок-миргородська(52.36%).

ВЙСНОБКИ

1. Розроблена модиф1кац1я приготування зонду на основ! ДНК фага М13 з використанням специф!чного г1бридиза1цйного праймера I розд!лення матриц! та м!меного зондуб, що п1дви1дило хнформати-вн!сть методу ДНК-ф1нгерпринту М13. В середньому використання рестриктази Нгр I дозволило одержати для однхеУ тварини в!д 16.75+1.43 до 21.11+0.84 смуги на ДНК-ф!нгерпринт1.

2. Виявлено високу 1ндив1дуальну своер!дн1сть ДНК--ф!нгер-принт!в свиней. 1мовтрн!сть сп1впацання вс!х смуг ДНК~ф!нгерпри-нтIв двох тварин великоУ б!лоУ породи становила 5.5682x10-7, що дозволяв проводити тндивхдуальну паспортизацхю, та визначення походження тварин.

3. Виявлено диференц!ац!ю геномних лрофШв, по частотам стр1чання иаркерних смуг ДНК-ф1нгерпринт!в, свиней р1зних пор1Д, цо дало змогу визначати генетичн1 В1дстан1 м1я ними. В нашах до-сл!дах, генетична вгдстань виявилася найб!льиа при пср!внянгп пор!д дюрок-ландрас - 0.682, наймениа ландрас-велкка б1ла -0.524. При розрахунку генетичноУ в!дстан!, в меках великоУ б!лоУ породи, нхж лШями Громкого та Леопарда, була визначенп м!н!-мальне значення цього показника - 0,478.

4. Визначена середня процентна диференц!ац1й р1зних пор!д. Показник середньоУ процентноУ диференц!ац}У биявився найб!лыгим у великоУ 61л01 породи - 37,397, найменынм - 27,331 у породи дю-рок. При розрахунку середньоУ процентноУ диференц!ац!У, в кеяах гн1зда поросят великоУ б!лоУ породи л!н!У Леопарда, була визна-чено м!н1мальне значення цього показника - 10,552.

5. Вперше були досл!днен1 пол!морфн!- локуси ДНК свиней р1зних портд за допомогою техники КйРБ. 3 використанням прайме-ру И01127 були визначенх 23 иоелив! положения пол1морфних смуг в д1апазон1 в!д 350 п.н. до 2556 т.п.н.

6. Визначена процентна диферекц1ац1я (Р0) ЯАР0-малюнк1в ро-дини свиней великоУ бЫоУ породи: були одеряанх значення у в!д-ношенн! кнур-свиноматка - 62%. кнур-поросята - б!д 14,25% до 33,33%, свиноматка-поросята - в!д 28,57% до 41,18%. Серед поросят одного гшзда, як I оч1кувалося, були одернакх мени! значения ( в!д 9,09% до 26,32%). При внутргшньопородному пор1внянн1 значення Р0 поливалось в!д 25% тваринами великоУ б!лоУ породи до 73,91% породи дюрок. При м!жпородному порхвнянн! найменяа процентна диференщацхя була зафтксована м!а тваринзни

дирок-ландрас - 20/С, найбтльиа - дирок-велика б1ла - 52,947. та дярок-миргородська - 52,362.

7. Встановлено, що праймер ILO 112? дозволяе визначати,-1ндив1дуальний пол1морф1зм свиней. Виявлено високу 1ндив!дуал-ьну своер!дн!сть НАР0-малюнк1в ДНК свиней. 1мов1рн1сть сп!впада-ння вс1х RAPD-смуг двох тварин велико'1 б!лоУ породи становила 1,5234x10-03, що дозволяе проводити !ндив!дуальну паспортизац!и.

8. F!iдIбран! умови ПЛР та анал1зу продукт1в ампл!ф!кац!У м1кросател!тних лонусгв ДНК S0097 та SSTNFB за спрощеною схемою, яка викличала не0бх1дн1сть мочения та використання гел1в для си-квенсу. Вперше були досл1джен1 м1кросател1тн! локуси S0097 та SSTNFB ДНК свиней велико'1 6iлог та миргородськоТ пор1д за допо-ногои ПЛР-ампл!ф1кац1'1. Визначена Ух гетерозиготн!сть. Для м!к-росател1тного локусу S0097 вона становила, в популяц!ях велико'1 б!лоГ 0,84, миргородськоУ породи 0,44. Визначена гетерозигот-н1сть м!кросател1тного локусу SSTNFB з популяц1У свиней миргородськоУ породи (Н=0,7836),

9. Виявлен! нов! алел! локусу S0097 в популяцГУ свиней великоУ б!лоУ породи розм1ром 264, 282 та 292 пар нуклеотид!в.

СПИСОК 0ПНБЛ1К0ВЙНИХ ПРЙЦЬ ЗА ТЕМОЙ ДИСЕРТАЦИ

1. Почерняев К.Ф.,Кияниця К.1., Телегеев Г.Д., Дибков М.В., йалюта С.С. П!двицення !нформативност! зонду ДНК фага М13 при досл1д5енн! геному свинг // Биополимеры и клетка.- 1996. - 12. -С.64-66.

2. Балацкий В.Н., Почерняев К.Ф. Нолекулярно-генетические маркеры в оценке генотипов свиней // Свиноводство(Россия).-1995. - 1.- С.24-26.

3. Балацкий В.Н. Почерняев К.Ф. Bsu RI-полиморфизм гена гормона роста свиньи // Цитология и генетика.- 1995,- N1.- С.45-48.

4. Почерняев К.Ф. Метод вид1лення ДНК !з сперми кнур!в // Свинарство.- 1995.- В.51. - С.31-32.

5. Почерняев К.Ф. Визначення генетичноУ диференц!ац!У свиней методом ДНК-ф!нгерпринту // Науково-виробничий бвлетень "Се-лекц!я".- 199?. - 4. - С. 136-13?.

6. Pochernayev К.F., Balatsky U.M., Telegyev G.D., Maluta S.S. Specific variability and some peculiarities of Mi3 pig DNA minisatel1ites // Proceedlngslof the 5th World Congress on Genetics Applied to Livestock Production. Guelph, Canada.- 1994, - P.

151-153.

7. Почерняев К.Ф., Налшта С.С. Видовая изменчивость и .некоторые особенности Mi3 минисателлитов ДНК свиньи // I

Межд.конф. по молекул.-генетич. маркерам у аивотн. Тез.докл., Киев.- 1995,- С.21-22.

8. Почерняев К.Ф. Метлицкая Е.И. Калюта С.С. Телегеев Г.Д. Дыбков М.В. Использование высокополиморфных локусов ДНК для оценки генома свиньи // И Меяд.конф. по молекул.-генетич. маркерам у яивотн. Тез.докл., Киев.- 1996,- С.18-19.

9. Почерняев К. Ф., Метлицкая Е. й,, Балацкий В. Н., Кур-ман А. Ф., Калюта С. С. Поиск нестабильных микросателлитннх локусов для разработки биотестов мутагенного давления на геном // Агробиотехнологии растений и кивотных.Тез.докл,,Киев.-1997,-С.31.

10. Почерняев К.Ф., Малюта С. С. Сравнительный анализ результатов полученных с использованием ДНК-финге?принтинга и RfiPD // ДНК-технологии в амвотноводстве.Тез.докл..Киев.-1997.-С.51-.53.

АНОТАЦП

Почерняев К.Ф. Пол1ыорф1зи mIhï- та ыткросателиноТ ДНК свиней.- Рукопис.

Дисертац1я на здобуття наукового ступеня кандидата б!оло-.г!чних наук за спец!альн!ств 03.00.03 - молекулярна б!олог!я. 1нститут молекулярно!' б!олог!'1 i генетики HAH Укра'Уни, и. Ки\'в 1937 р. ~

Викладен! результат« досл!дяень високопол!морфних локусгв ДНК свин1 (Sus scrofa doaestica L.), приведен! !ндив!дуальн! та породи! характеристики, розроблен1 адекватн! методи ïx виявлен-ня. Модиф!кац!я методу приготування зонду на основ! ДНК фагу М13 дозволяе проводити досл!даення !ндив!дуальних та породних характеристик високополхморфних локус!в ДНК евин! методом ДНК-ф1нгер-принту, пор!авняльний анал!з метод1в ДНК-ф!нгерпринту i RAPD дозволяе застосовувати остакк!й, яак ргвноправный. Одержан! дан! про розпод1л частоталел1в м!кросател!тных локус!в S009? та SSTNFB, а такоя, знайден! hobî алел! локусу S0Ö97 в популяц!'! свиней велико!' бijioï породи дозволяють використовувати ïx для маркування геному евин!.

Клячов! слова: геном, ДНК-ф!нгерпринт, М13, м!кросателхт, м!н!сател!т, пол!морф!зм, породи, свиня, RfiPD.

Почерняев К.О, Полиморфизм мини- и микросателлитной ДНК свиней.- Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.03 - молекулярная биология. Институт молекулярной биологии и генетики НЙН Украины, г. Киев 199? г.

Изложены результаты исследований высокополиморфных локусов ДНК свиньи СSus scrofa dosestica L.) приведены индивидуальные и породные характеристики, разработаны адекватные методы их выявления, Модификация метода приготовления зонда на основе ДНК фага М13 позволяет проводить исследования индивидуальных и породных характеристик высокополиморфных локусов ДНК свиньи методом ДНК-фкнгерпринта, сравнительный анализ методов ДНК-фингер-принта и RAPD-метода позволяет применять последний, как равноправный. Полученые даные о разпределении частот аллелей микросателлитных локусов SQG97 и SSTNFB, а так же, обнаружение новые алели локуса S0097 в популяции свиней крупной белой породы позволяють использовать их для маркирования генома свиньи.

Ключевые слова: геном, ДНК-фингерпринт, М13, микросателлит, минисателлит, полиморфизм, породы, ПЦР, свинья, RAPD.

Pochernayev K.F. Polysorphisa of porcine mini- and aicrosa-tellite DNA. - Manuscript.

Thesis for a candidate's degree in speciality 03.00,03 -nolecular biology. - Molecular Biology & Genetics Institute under the National flcadesy of Science of Ukraine, Kyiv, 1997,

The results of the pig (Sus scrofa donestica L.) DNA highly polyaorphic loci study are presented together with the individual a breed-specified characteristics. The adequate methods for their determination are developed. The modified aethod of preparing the probe based on the DNA phage H13 permits to study the individual 3 breed-specified characteristics of the pig DNA highly polyaorphic loci by leans of DHA-flngerprint. The comparative analysis of the DNA-fingerprint & RftPD method permits to use the latter one on equal rights. The received data on the allelic frequencies distribution in uicrosatellite loci S0097 & SSTNFB together with the пен S0G9? loci allels determined in the large White pigs breedperoit their use for pig genome marking.

Key words: DNA fingerprints, genom, K13, aicrosatellite, ninisatellite, PCR, pig, breed, polysorphisa, RflPD.