Полиморфизм генов Bola-DRB3, пролактина и гормона роста у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью к лейкозу и молочной продуктивностью

Туркова, Светлана Олеговна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Полиморфизм генов Bola-DRB3, пролактина и гормона роста у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью к лейкозу и молочной продуктивностью
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Полиморфизм генов Bola-DRB3, пролактина и гормона роста у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью к лейкозу и молочной продуктивностью"

Светлана Олеговна

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ВОЬА-ОКВЗ, ПРОЛАКТИНА И ГОРМОНА РОСТА У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В СВЯЗИ С УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ЛЕЙКОЗУ И молочной ПРОДУКТИВНОСТЬЮ

03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2003

Работа выполнена в лаборатории сравнительной генетики животных Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Сулимова Галина Ефимовна кандидат биологических наук, с.н.с. Удина Ирина Геннадьевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Смирнов Александр Федорович кандидат биологических наук Малииина Татьяна Владимировна

Ведущая организация: Институт Биологии гена РАН

Защита состоится "_" _ 2003 года в _ часов на заседании

Диссертационного совета Д 002.214.01 при Институте общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН по адресу: 119991 ГСП-1, Москва, ул. Губкина, д.З. Факс: (095)132-89-62.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН.

Автореферат разослан "_" 2003года.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук

Полухина Г.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Лейкоз является одной из самых распространенных инфекционных болезней крупного рогатого скота. Лейкоз животных относят к тяжелым, с летальным исходом, заболеваниям опухолевой природы, основным признаком которых является злокачественное распространение клеток кроветворных органов с нарушением их созревания.

Лейкоз сельскохозяйственных животных представляет актуальную проблему для современной науки, имеющую как общебиологическое так и народнохозяйственное значение. Заболевание наносит большой экономический ущерб народному хозяйству, который состоит из потери племенного молодняка, утраты генофонда высокопродуктивных животных и недоброкачественной продукции. В тканях животных, больных лейкозом, накапливаются метаболиты, являющиеся онкогенными веществами.

Основным этиологическим фактором лейкоза является вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС), относящийся к группе ретровирусов. Инфицированность животного не всегда приводит к развитию заболевания, для этого необходимо определенное состояние иммунной системы животного и его генетическая восприимчивость к заболеванию. Вирус индуцирует хроническую инфекцию у крупного рогатого скота, приводящую к трем возможным патологическим формам заболевания: асимптоматическое течение, переиетентный лимфоцитоз (PL) и лимфосаркома. Однажды инфицированное животное остается вирусоносителем в течение всей своей жизни. В серологической реакции инфекция проявляется спустя несколько недель после инфицирования.

Изучены структура, химические, биологические, иммунологические свойства данного вируса, найден метод культивирования в лабораторных и промышленных условиях. Одновременно с выделением ВЛ КРС был изолирован вирус, который отнесен к иммунодефицитоподобному вирусу крупного рогатого скота. Интерес к данному возбудителю возрос после выделения вируса иммунодефицита человека (HIV), так как этот возбудитель мог быть использован в качестве модели для изучения вируса человека. Установлено также, что ретровирус типа С, также вызывающий лейкозы у крупного рогатого скота, структурно и функционально сходен с вирусом _ HTLV-I, HTLV-IV, вызывающим Т - клеточную лейкемию у человека (Derse et al., 1985; Sagata et al., 1985), хотя возможность заражения человека вирусом лейкоза крупною рогатого скота не доказана.

Разработка селекционно-генетических подходов к оздоровлению стад животных относительно лейкоза включает изучение ассоциативных связей антигенов Главного комплекса гастосовместимости крупного рогатого скота (Bovine leukocyte antigens-BoLA) с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу.

Изучение нуклеотидных последовательностей генов класса II BoLA-системы у крупного рогатого скота позволило описать аллели гена DRB3 (методом полимеразной цепной реакции с последующим анализом длин рестрикционных фрагментов) и выявить аллели, ответственные за устойчивость и восприимчивость к лейкозу. Поиск генетических маркеров устойчивости к данному заболеванию приобретает практическое значение для разработки селекционно-генетических методов борьбы с лейкозами и создания здоровых стад.

В настоящее время активно изучаются гены, отвечающие за молочную продуктивность, такие как пролактин и гормон роста. Ведется поиск ассоциаций конкретных аллелей этих генов с различными признаками молочной продуктивности. Описано несколько полиморфных сайтов рестрикции в генах гормона роста и пролактина, микросателлитные локусов и точечные мутации.

Однако многие вопросы, связанные с генетической обусловленностью формирования признаков устойчивости к заболеваниям и молочной продуктивности, остаются открытыми. Неизвестно, насколько универсальный характер носят аллели гена Во1Л-ВШЗ, ответственного за устойчивость и восприимчивость к лейкозу, а также, насколько широко они распространены у разных пород крупного рогатого скота. Мало изучены местные породы крупного рогатого скота в отношении полиморфизма генов, участвующих в формировании рассматриваемых признаков.

К настоящему времени выявлен только один вариант ДНК-полиморфизма (Шр I (-) - аллель) гена гормона роста, для которого показана положительная корреляция с одним из хозяйственно-полезных признаков, а именно, с жирностью молока. Но даже для этого варианта полиморфизма данные носят противоречивый характер. Для гена пролактина до сих пор не выявлено вариантов ДНК-полиморфизма, которые бы имели достоверную ассоциацию с хозяйственно-полезными признаками, хотя для гена пролактина показано участие в регуляции лактации.

В связи с вышесказанным очевидна необходимость исследований ДНК-полиморфизма генов, участвующих в формировании хозяйственно-полезных признаков.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы было изучение ДНК-полиморфизма генов ВоЫ-ОЯВЗ, пролактина и гормона роста у разных пород крупного рогатого скота в связи с устойчивостью к лейкозу и молочной продуктивностью. Дня достижения указанной цели были поставлены следующие нижеперечисленные задачи:

1. Провести сравнительный анализ аллельного разнообразия гена Во1А-ОЯВЗ у разных пород крупного рогатого скота.

2. Охарактеризовать выборки животных айрширской породы и черно-пестрой пород, различающиеся по своему статусу в отношении лейкоза (здоровые, инфицированные ВЛ КРС и больные персистентным лимфоцитозом животные) по разнообразию аллелей гена ВоЬА-ПЯВЗ и их частотам.

3. Исследовать полиморфизм гена гормона роста (ПЦР-ПДРФ по рестрицирующей эндонуклеазе ШрТ) у нескольких пород крупного рогатого скота и монгольских яков.

4. Несколькими независимыми методами изучить ДНК-полиморфизм гена пролактина у разных пород крупного рогатого скота и монгольских яков.

5. Изучить связи различных аллелей исследуемых генов с хозяйственно-полезными признаками (показателями молочной продуктивности и устойчивостью к лейкозу).

Научная новизна и практическая значимость работы. Проведен сравнительный анализ трех пород крупного рогатого скота отечественной селекции (айрширской, черно-пестрой и красной горбатовской) по разнообразию аллелей гена ВоЫ-ОЯВЗ и показаны достоверные различия исследуемых пород, как по спектру аллелей гена, так и по их частотам. Показано, что распределение ИЯВЗ-аллелей устойчивости и восприимчивости к лейкозу в выборках вирусоносителей, здоровых и больных персистентным лимфоцитозом животных различно: основной аллель, определяющий

устойчивость крупного рогатого скота к лейкозу (ВоЫ-ЛКВЗ*11), встречается только в выборках здоровых животных.

Впфвые на молекулярно-генетическом уровне охарактеризован генофонд отечественной красной горбатовской породы по ДНК-маркерам трех локусов: Во1А-ОЯВЗ, пролакпгаа и гормона роста. Показано высокое аллельное разнообразие (29 аллелей) и высокий уровень гетерозиготности данной породы по локусу ВоЬАФЯВЗ. Полученные данные служат основанием для практического использования в селекционной практике генофонда красной горбатовской породы как источника аллелей гена ВоЬА-йНВЗ для поддержания генетического разнообразия других пород по локусу, играющему основную роль в иммунном ответе организма на вирусные и бактериальные инфекции.

Впервые исследовано генетическое разнообразие монгольского скота и монгольских яков по двум локусам, участвующим в формировании признака молочной продуктивности (гены пролактина и гормона роста), с использованием ДНК-маркеров.

Впервые определена нуклеотидная последовательность полиморфной области гена гормона роста (интрон Ш) у монгольского скота и монгольских яков и показано, что наличие полиморфного М$р1(-)-сайта обусловлено транзицией С/Т в позиции 1162, а не одновременной инсерцией Т в позиции 1163 и заменой СЮ в позиции 1164, как описано для Айр1(-)-аллеля зебувидного происхождения. Эти данные и высокое содержание Му/>1(-)-аллеля у монгольских яков позволяют предполагать независимое происхождение описанного Л&/>1(-)-аллеля у яков.

Изучены связи различных аллелей исследуемых генов с показателями молочной продуктивности: подтверждена положительная ассоциация частоты Мр1(-)-аллеля гена гормона роста с жиростъю молока, выявлена положительная ассоциация уровня гетерозиготности по гену пролактина с жирностью молока и молочной продуктивностью. Показано, что высокопродуктивные животные в большей степени подвержены заболеваемости лейкозом, чем низкопродуктивные: в выборке больных животных айрширского скота доля высокопродуктивных (более 7000 кг молока) коров в 2,4 раза выше, чем в выборке здоровых животных (37,1% и 15,2% соответственно).

Предложен модифицированный метод быстрого тестирования аллелей гена Во1А-ОЯВЗ, ответственных за устойчивость и восприимчивость крупного рогатого скота к лейкозу, на основе аллель-специфичной ПЦР. Метод может быть рекомендован для быстрого тестирования животных по локусу ВоЬА-ВКВЗ как экспресс-метод для массовых анализов при проведении селекционных работ.

__Апробадия работы____Результаты работы были представлены на второй

международной конференции «Молекулярно-генетические маркеры животных» (Киев, 1996); на международной конференции «Агробиотехнологии растений и животных» (Киев, 1997); на международной конференции "ДНК-технологии" (Киев, 1997); на международной конференции по биотехнологии в животноводстве (Китай, 1997); на третьей международной конференции «Молекулярно-генетические маркеры животных» (Киев, 1999); на втором съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Санкт-Петербург, 2000); на третьей международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». (Боровск, 2000); на второй международной научной конференции "Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии" (Москва, 2000); на первой научной школе-конференции «Сохранение биоразнообразия и рациональное использование биологических ресурсов» (Москва, 2000. МГУ им. М.В. Ломоносова); на шестом международном ветеринарном иммунологическом симпозиуме (Уппсала, Швеция 2001); на международном симпозиуме "Молекулярные механизмы генетических процессов и биотехнология", (Москва, Минск 2001); на седьмом мировом конгрессе по

генетике продуктивности крупного рогатого скота (Франция, 2002); на третьей международной Ирано-Российской конференции «Сельское хозяйство и природные ресурсы» (Москва, 2002).

Объем и структура работы. Публикации. Диссертация, изложенная на 105 страницах, включает стандартные разделы и иллюстрирована 12 таблицами и 26 рисунками. Список цитируемой литературы содержит 119 источников, из них 9 на русском и 110 на английском языке.

Работа выполнена в сотрудничестве с Московской Академией биотехнологии и ветеринарной медицины им. К.И. Скрябина. Ряд данных, используемых в диссертации при анализе и обсуждении результатов, любезно предоставлен сотрудниками, дипломниками и аспирантами лаборатории сравнительной генетики животных ИОГен РАН Костюченко М.В., Лебедевой JI.A., Карамышевой Е.Е., которым автор приносит глубокую и искреннюю благодарность.

По теме диссертационной работы опубликована 21 печатная работа.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (проекты 99-04-48407, 0015-97777, 03-04-48776), НШ-827.2003.4, ФЦП «Интеграция» (проект 2.1-А0077), ФЦНТП по контракту «Сохранение и генетический мониторинг генофондов человека, животных, растений и микроорганизмов», программ фундаментальных исследований Президиума РАН «Разработка генетических основ биоразнообразия» и ОБН РАН (Госконхракт Jfe 12).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследования проводились на образцах ДНК, полученных из крови коров красной горбатовской породы (молочно-мясная) (п=54) из Нижегородской области Павловского района, черно-пестрой породы (молочная) отечественной селекции из хозяйств им. С.М. Кирова и "Коренево" Московской области (п=127), айрширской породы (молочная) (п=129) из Загорского района Московской области, монгольского скота (из равнинных районов Монголии) (п=30) и яков из горных районов Монголии (п=33). Объектом исследований айрширской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота являлись животные в возрасте от 3 до 12 лет из подмосковных хозяйств. Диагноз на лейкоз проводили сотрудники Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина на основании вирусологических, гематологических и патоморфологических исследований.

ДНК выделяли из цельной крови с помощью набора реагентов DIAtom™ DNA Prep (фирма "Биоком", Москва) согласно прописи, представленной изготовителем.

Определение аллельного полиморфизма гена BoLA-DRB3 методом ПЦР-ПДРФ с использованием рестрикгаз Rsal, НаеШ и XhoW проводили в соответствии с методом, предложенным Van Eijk et al. (1992). Аллель-специфичную ПЦР для тестирования аллелей BoLA-DRS3, ответственных за устойчивость и восприимчивость к лейкозу, проводили по методу Xu el al. (1993) с собственными модификациями. Электрофоретический анализ продуктов рестрикции проводили в 6-9%-ном полиакриламидном геле в соответствии со стандартными методиками (Маниатис и др., 1984).

Полиморфизм гена пролактина исследовали с использованием SSCP-анализа (анализ однонитевого конформационного полиморфизма ДНК) (Hart et al., 1993), микросателлитного анализа (MacHugh et al., 1997) и метода ПЦР-ПДРФ с использованием рестриктазы Rsal (Mitra et al., 1995).

Полиморфизм гена гормона роста изучали методом ПЦР-ПДРФ с использованием рестрктазы Mspl (Hoj et al., 1993).

Статистическая обработка данных. Частоты аллелей микросателлитных локусов определяли методом прямого подсчёта (Алтухов, 1989). Статистическую ошибку частот аллелей генов рассчитывали согласно формуле, приведенной в работе (Рокицкий, 1961). Для оценки избытка гетерозигот в изучаемых выборках животных использовали коэффициент Селендера (Pudovkin et al., 1996).

Соответствие фактического и ожидаемого распределения генотипов проверяли методом хи-квадрат. Число степеней свободы равнялось числу генотипов минус число аллелей. Ожидаемую гетерозиготность расчитывали по формуле, приведенной в работе (Айала, 1984).

Информационное содержание полиморфизма (PIC - polymorphism information content) вычисляли по формуле, приведенной в работе (Botstein et al., 1980).

В работе были использованы следующие компьютерные программы:

1) программы "Oligo" и "Primer" для подбора праймеров, расчета концентрации праймеров и расчета температуры отжига;

2) программу BLAST для анализа нуклеотидных последовательностей и поиска гомологии исследуемых последовательностей с последовательностями, размещенными в международных базах данных;

3) программы СНШХС и CHIHW (Pudovkin et al., 1996) для анализа частот аллелей генов, проверки изучаемых выборок на однородность, оценки соответствия равновесию Харди-Вайнберга, а также оценки избытка гетерозигот (коэффициент Селэндера);

4) программы Clustal и Vostorg для выравнивания нуклеотидных последовательностей ДНК.

В работе были использованы компьютерные базы данных, представленные на сервере NCBI - Национальный центр информации по биотехнологии (http://www.ncbi.nlm.nih.goW).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Полиморфизм гена BoLA-DRB3 в связи с устойчивостью к лейкозу и молочной

продуктивностью 1.1. Оптимизация условий типироеания аллелей гена SoLA-DRBi

__В данном исследовании_для амплификации. экзона 2 гена BoLA-DRB3

использовали метод двухэтапной ПЦР с применением праймеров: HL030, HL031 и HL032, описанными ранее (Van Eijk et al., 1992), и предложенной нами одноэтапной ПЦР - с праймерами HL030 и HL032. В обоих случаях продукты амплификации были представлены одним фрагментом размером 284 п.н. (или 281 п.н для аллелей с делецией). Была проведена оптимизация ПЦР по температуре отжига и концентрации ионов Mg, для повышения специфичности амплификации использовали ПЦР с «горячим» стартом (hot-start). Использование одноэтапной ПЦР позволило упростить метод, сократить время анализа, уменьшить вероятность загрязнения, а также снизить стоимость самого эксперимента.

Для типирования аллелей гена BoIA-DRB3 использовали также метод аллельспецифичной ПЦР (Xu et al., 1993), основанный на наличии у всех аллелей, определяющих устойчивость к лейкозу, нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислоты Glu-Arg в 70-71-м положении белковой молекулы, а у аллелей, ответственных за высокую восприимчивость к лейкозу, нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислоты Val-Asp-Thr-Tyr(Val) в 75-78-м

положении. Нами были введены собственные модификации, заключающиеся в проведении ПЦР в один раунд, повышении температуры отжига праймеров и использовании ПЦР с «горячим» стартом. Это позволило упростить метод и повысить его специфичность. Предложенный нами модифицированный метод аллельспецифичной ПЦР удобен для быстрого тестирования животных по локусу ВоЬА-ОЯВЗ и может быть рекомендован как экспресс метод для массовых анализов при проведении селекционных работ.

1.2. Сравнительный анализ отельного разнообразия гена ВоЬА-ИКВЗ у разных пород крупного рогатого скота.

Нами были изучен характер распределения аллелей гена ВоЬА-ОЯВЗ (методом ПЦР-ПДРФ с использованием эндонуклеаз НаеЩ и ХИо11 и аллельспецифичной ПЦР) в айрширской, черно-пестрой и красной горбатовской породах крупного рогатого скота (табл.1).

Все исследованные породы достоверно различались как по спектрам аллелей гена ВоЬА-ОЯВЗ, так и по их частотам, на что указывает проверка изучаемых выборок на однородность, проведенная при помощи статистической программы СНШХС. Было показано, что вероятность нулевой гипотезы (выборки гомогенны) равна 0,00096, при доверительном интервале 95%. Число степеней свободы <1/ =64, 517,656 (для р= 0,05 у?= 83,675).

Наиболее высокое разнобразие спектра аллелей гена ВоЬА-ОЯВЗ (29 аллелей) было показано для отчественной красной горбатовской породы. У черно-пестрой породы выявлен 21 аллель, у айрширской -18 аллелей (табл.1).

В исследуемой выборке айрширской породы широко распространены аллели ВоЬА-ОЯВ3.2*1 (0.376), *28 (0.136), *8 (0.112),*10 (0.093) и *24 (0.054), их суммарная частота составляет 77%, на остальные 13 аллелей приходится 23% (рис.12). Подобное распределение ранее было отмечено у аргентинского креольского скота, где на долю 5-ти аллелей приходится 68% от всего разнообразия (СюуашЬаШвЮ е1 а1., 1996). Наиболее часто у айрширского скота встречается аллель ВоЬА-ОЯЮ.2*7 (0.376), аллели *12, *13 и *14 встречались у единичных животных.

Для черно-пестрой породы показано более равномерное распределение частот аллелей гена ВоЬА-ОЯВЗ. Наиболее часто встречающимися аллелями у животных черно-пестрой породы были *22, *24, *11, *1б, *18, *23, *8 и *27. Аллель *7 у черно-пестрой породы относится к редким (0.04). Три аллеля (*Р, *17 и *12) отмечены у единичных животных (табл. 1). Спектр выявленных аллелей у черно-пестрой породы отличался большим сходством со спектром аллелей, отмеченным ранее у голпггано-фризской породы (Хи Л а1., 1993). У черно-пестрого скота отсутствовал аллель *10, представленный у айрширского скота с частотой 0,093, а также аллели *2, *13, *14 и *29, редкие у животных айрширской породы (табл. 1). В свою очередь в исследуемой выборке айрширского скота не встречались аллели ОЯВ3.2*16, *11, *4, *6, *9, *17, *25 и *27, представленные в черно-пестрой породе с частотами от 0,04 до 0,102.

В красной горбатовской породе наиболее широко представлен аллель *44 (0.15), который не встречался в предыдущих двух породах. С высокой частотой встречались также аллели *3, *18, *11 и *24 (табл. 1). Остальные 24 аллеля встречались с частотой не более 5%, из них больше трети - у единичных животных.

Аллели *], *31, *36, *44, *45, *46 и *49 не были обнаружены в исследованных выборках айрширской и черно-пестрой пород.

Таблица 1.

Частоты встречаемости аллелей гена ВоЬА-ЬКВЗ в трех породах крупного рогатого скота

Аллели BoLA-DRB3l Общая популяция

Айрширская Черно-пестрая Красная горбатовская

п Р N Р п Р

1 - - - 4 0,037

2 8 0.030 - - 1 0,0092

3 6 0.023 7 0.028 14 0,129

4 - - 2 0.008 -

6* - - 4 0.016 1 0,0092

7** 97 0.376 10 0.040 1 0,0092

8** 29 0.112 15 0.058 4 0,037

9 - - 1 0.004 1 0,0092

10** 24 0.093 - - 3 0,0276

11** - - 26 0.102 8 0,074

12 1 0.004 1 0.004 2 0,0184

13 1 0.004 - - -

14 1 0.004 - - 2 0,0184

15 2 0.008 6 0.024 3 0,0276

16** - - 25 0.097 5 0,046

17 - - 1 0.004 1 0,0092

18** 3 0.012 24 0.094 9 0,083

20 4 0.016 3 0.012 3 0,0276

21 8 0.030 3 0.012 1 0,0092

22** 4 0.016 46 0.181 4 0,0368

23 7 0.027 18 0.071 3 0,0276

24** 14 0.054 39 0.154 8 0,0736

25 - - 3 0.012 -

26** 11 0.043 2 0.008 2 0,0184

27** - - 14 0.055 3 0,0276

28** 35 0.136 4 0.016 2 0,0184

29 3 0.012 - - -

31 - - - - 1 0,0092

36 - - - - 1 0,0092

44 - - - - 16 0,148

45 - - - - 2 0,0184

46 - - - - 2 0,0184

49 - - - - 1 0,0092

Сумма 258 254 108

Примечание. 1 Номенклатура аллелей гена BoLA-DRB3, определяемых методом ПЦР-ПДРФ, дана в соответствии с приведенной в статье Van Ejik M.J.T. (1992). Сравнение частот аллелей в двух породах (айрширской и черно-пестрой) проведено по t-критерию Стьюдента: "*" - Р> 95%,"**" - Р> 99%. Ошибка частот аллелей не превышала 5%.

Сравнительно высокая доля редких аллелей (с частотой ниже 5%) в изученных выборках (23% у айрширов, 19% у черно-пестрого скота и 33% (24 аллеля) у красной горбатовской породы) свидетельствует о сохранении резерва изменчивости в данных породах, необходимого для поддержания полиморфизма по маркерам гистосовместимости, что важно для сохранения способности популяции к адекватному иммунному ответу на чужеродные антигены.

Ранее было показано, что на локусы гистосовместимости действует отбор, способствующий поддержанию полиморфизма, гетерозиготные особи способны распознавать более широкий спектр чужеродных антигенов (Hughes et al., 1989). Нами был определен уровень гетерозиготности исследуемых пород по гену BoLA-DRB3 и проведена сравнительная оценка с ожидаемой гетерозиготностью (табл.2). По сравнению с черно-пестрой (0.836) и красной горбатовской породами (0,880) в выборке айрпшрекой породы была отмечена наиболее низкая оценка уровня гетерозиготности (0.770), что свидетельствует о выраженной консолидированности айрширской породы.

Таблица 2.

Оценка ожидаемого и наблюдаемого уровня гетерозиготности

ПОРОДЫ N н. н. D

Айрширскаа 129 0,807 0,770 -0,050

Черно-пестрая 127 0,901 0,836 -0,070

Красная горбатовская 54 0,906 0,880 -0,001

Примечания: N - число исследованных животных, Не - ожидаемый уровень гетерозиготности, Но - наблюдаемый уровень гетерозиготности, Э - коэффициент Сэлендера (избыток гетерозигот).

В изученных стадах айрпшрекой и черно-пестрой пород крупного рогатого скота уровень наблюдаемой гетерозиготности ниже ожидаемого (табл. 2), вероятно, за счет особенностей их селекции и разведения, в отличие от данных о природных изолированных популяциях, где отбор поддерживает избыток гетерозигот по локусам главного комплекса гистосовместимости (Hughes etal., 1989; Hedrick et al., 1991). По уровню гетерозиготности красная горбатовская близка по своим показателям к природным популяциям.

1.3. Сравнительный анализ аллельного разнообразия гена BoLA-DRS3 у черно-пестрого и айрширского скота в подвыборках вирусоносителей, здоровых и больных лейкозом животных.

В работе были исследованы подвыборки животных, различающихся по своему статусу в отношении лейкоза. Данные по частотам аллелей гена BoLA-DRB3 в указанных подвыборках представлены в табл. 3 и 4.

Хозяйственно-ценными аллелями гена BoLA-DRB3 являются аллели *11, *28 и *23, определяющие устойчивость крупного рогатого скота к заболеванию лейкозом, вызываемым вирусом лейкоза крупного рогатого скота. Неблагоприятными аллелями

являются аллели *8, *1б, * 22 и *24, связанные с предрасположенностью крупного рогатого скота к лейкозу.

Таблица 3.

Распределение аллелей ВоЬАФЛВЗ в группах больных, вирусоносителей и здоровых животных айрширской породы.

Группы животных

Аллели BoLA- Больные Здоровые Вирусо- Общая

DRB3.2* N=4 10 N=58 носители популяция

N=31 N=129

п 1 Р а 1 Р п 1 Р п 1 Р

Аллели, обусловливающие чувствительность к лейкозу (Ч)

8 13 0.163 12 0.103 4 0.065 29 0.112

22 - - 4 0.035 - - 4 0.016

24 7 0.088 5 0.043 2 0.032 14 0.054

Аллели, обусловливающие устойчивость к лейкозу (У)

23 4 0.050 1 0.009 2 0.032 7 0.027

28 7 0.088 13 0.112 15 0.243 35 0.135

Нейтральные аллели (И)

2 - - 8 0.069 - - 8 0.031

3 4 0.050 2 0.017 - - 6 0.023

7 22 0.275 41 0.354 34 0.548 97 0.376

10 10 0.125 12 0.103 2 0.032 24 0.093

12 - - 1 0.009 - - 1 0.004

13 - - 1 0.009 - - 1 0.004

14 1 0.012 - - - - 1 0.004

15 1 0.012 - - 1 0.016 2 0.008

18 • - 3 0.026 - - 3 0.012

20 2 0.025 2 0.017 - - 4 0.015

21 2 0.025 5 0.043 1 0.016 8 0.031

26 6 0.075 4 0.034 1 0.016 11 0.043

29 1 0.012 2 0.017 - - 3 0.012

— Сумма 80 1.000 116 — 1.000 62 —1.000- 258 — 1.000-

Примечания: Номенклатура аллелей гена BoLA-DRBi дана в соответствии с приведенной в статье Van Eijk et al. (1992). Статус аллелей по отношению к лейкозу определяли по данным статьи Xu et al. (1993) и собственным данным. N-размер выборки, Р-частота аллелей. Ошибка частот аллелей не превышала 5%.

Распределение аллелей в подвыборках, различающихся по своему статусу в отношении лейкоза (вирусоносители, здоровые и больные лейкозом животные), как и ожидалось, было различным. У черно-пестрого скота аллель BoLA-DRBi.2*ll, который считается основным аллелем, обеспечивающим устойчивость к лейкозу (Lewin, 1994), встречается только в подвыборке здоровых животных. Суммарная частота аллелей *//, *23 и *28 у черно-пестрой породы составила 18,2%. Суммарная частота аллелей *8, *1б, *22 и *24, которые были описаны как аллели, обусловливающие чувствительность к лейкозу, составила 49%.

Таблица 4.

Распределение аллелей ВоЬАФПВЗ в группах больных, вирусоносителей и здоровых животных черно-пестрой породы.

Группы животных

Аллели Во1А- Больные Здоровые Вирусо- Общая

ОЯВ3.2* N=31 N=87 носители N=9 популяция N=127

Р п 1 Р п Р » Р

Аллели, обусловливающие чувствительность к лейкозу (Ч)

8 7 0.113 6 0.034 1 0.056 15 0.058

16 7 0.113 16 0.092 2 0.111 25 0.097

22 17 0.274 25 0.144 4 0.222 46 0.181

24 9 0.146 28 0.160 2 0.111 39 0.154

Аллели, обусловливающие устойчивость к лейкозу (У)

11 - - 26 0.148 - - 26 0.102

23 - - 15 0.086 3 0.165 18 0.071

28 1 0.016 2 0.012 1 0.056 4 0.016

Нейтральные аллели (Н)

2 3 2 0.032 4 0.023 1 0.056 7 0.028

4 1 0.016 1 0.006 - - 2 0.008

6 3 0.048 1 0.006 1 0.056 4 0.016

7 - - 10 0.057 - - 10 0.040

9 - - 1 0.006 - - 1 0.004

12 - 1 0.006 - - 1 0.004

15 1 0.016 5 0.029 - - 6 0.024

17 . - 1 0.006 - - 1 0.004

18 10 0.162 12 0.069 2 0.111 24 0.094

20 1 0.016 2 0.012 - - 3 0.012

21 1 0.016 2 0.012 - - 3 0.012

25 2 0.032 1 0.006 - - 3 0.012

26 - - 1 0.006 1 0.056 2 0.008

27 - - 14 0.080 - - 14 0.055

Сумма 62 1.000 174 1.000 18 1.000 254 1.000

Примечания: аналогичны таковым в табл.3.

У айрширского скота аллель *11 полностью отсутствует, а суммарная частота аллелей *23 и *28 составляет 16,3%. Частоты аллелей, (*8 и *24), в выборке животных больных лейкозом в 1.4 раза выше (0.163 и 0.088), чем в выборке здоровых животных (0.103 и 0.043), соответственно. А суммарная частота аллелей *8, *22 и *24 составляет 18,2% (аллель *1б обнаружен не был).

Была также проанализирована выборка коров красной горбатовской породы (п=54), в которой все животные были здоровы. У красной горбатовской породы

суммарная частота аллелей, ответственных за устойчивость к лейкозу (*11, *23 и *28), составляет 12%, причем 7,4% приходится на аллель*//, который во всех породах дает наиболее четкую ассоциацию с устойчивостью к лейкозу (Ьетип, 1994; Сулимова и др.1995; Эрнст и др.,' 1997; Мнзку е1 а1., 1998). Суммарная частота аллелей, обусловливающих чувствительно«, к лейкозу *8, *16, *22 и *24 составляет 19,4%.

В двух изученных популяциях айрширской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота рассмотрено влияние уровня гетерозиготности на устойчивость и восприимчивость животных к лейкозу. Прослежено снижение уровня гетерозиготности в группах животных, больных персистентным лямфоцигозом, по сравнению со здоровыми животными и с ожидаемым уровнем гетерозиготности (рис. 1). В группе вирусоносителей айрширской породы наблюдаемый уровень гетерозиготности выше, чем ожидаемый. У здоровых животных обеих пород уровни наблюдаемой и ожидаемой гетерозиготности различаются незначительно (рис. 1).

б) черно-пестрая порода _(п=104)_

■ Больные (п-28) □ Здоровые(п-76) И Черно-пестрая пород» (п=104)

Наблюдаемая Ожидаемая гетерозиготиость

а) айрширская порола (№=129)

■ Больные (п-40) В Вирусоносигели(г»-31) □Здоровые (п"58) И Айрширска» порода (и=129)

Наблюдаема» Ожидаема! гетерозиготиость

Рис.1. Уровень гетерозиготности в группах больных лейкозом крупного рогатого скота, вирусоносителей и здоровых животных айрширской и черно-пестрой пород.

Определены выборочные оценки коэффициента инбридинга на основе оценок ожидаемого и наблюдаемого уровня гетерозиготности, которые составили у айрширов в суммарной популяции 0.049, в выборке вирусоносителей Р= - 0.172, у больных ■РЮ.157; у черно-пестрых животных: в суммарной выборке - /Ч).051 и Я=0.092 - у больных.

Относительно низкий уровень гетерозиготности и обеднение разнообразия аллелей могут приводить к неспецифическому снижению иммунитета. В связи с чем, в селекционной работе следует поддерживать полиморфизм по маркерам гистосовместимости для избежания отрицательных эффектов, связанных со снижением уровня гетерозиготности, путем использования большего количества быков-производителей, гетерозиготных по маркерам гистосовместимости.

Выборки животных айрширской породы, в том числе группа больных персистентным лимфоцитозом животных, были сопоставлены по молочной

продуктивности (рис.2). Жирность молока в исследованных группах животных практически не отличались (4.36% ± 0.04).

Высокая Низкая Средняя

Продуктивность

Рис.2. Количество высоко-, средне- и низкопродуктивных коров в группах больных, вирусоносителей и здоровых животных в популяции айрширской породы по наивысшей лактации (п=109). Высокая продуктивность 7000 кг и выше, среднепродуктивные - от 5500 кг до 7000 кг и низкопродуктивные - 5500 кг и ниже.

У больных айрширов доля высокопродуктивных коров (37.1%) выше, чем у здоровых (15.2%). Данный факт указывает на большую чувствительность высокопродуктивных коров к лейкозу. В этой связи, следует рекомендовать проведение контроля на поддержание разнообразия по маркерам гистосовместимости при проведении селекции на продуктивность в стадах крупного рогатого скота.

2. Полиморфизм генов гормона роста и пролактина у крупного рогатого скота и

монгольских яков

2.1.Полиморфизм гена гормона роста у крупного рогатого скота и монгольских яков.

В представленной работе был исследован полиморфизм гена гормона роста (ЬОН), описанный ранее как результат одновременной инсерции Т в позиции 1163 и транзиции СЛЗ в позиции 1164 (интрон Ш). Указанный вариант полиморфизма тестируется методом ПЦР-ПДРФ по отсутствию сайта рестрикции для эндонуклеазы М$р\ (аллель Мхр\ (-)) (Но] е1 а!., 1993). Нами был проведен анализ Мр1-полиморфизма гена ЬОН у красной горбатовской породы, монгольского скота и монгольских яков. В исследованной нами выборке монгольских коров (п=35) частота Шр\ (-) аллеля составляла - 0,30, в выборке монгольских яков (п=32) - 0,94, а в выборке красной горбатовской породы (п=20) - 0,09.

Поскольку монгольский скот и монгольские яки ранее не исследовались по МрЬполиморфизму гена ЬОН, необходимо было подтвердить, что мы тестируем ту же мутацию, которая была описана ранее. Нами был проведен анализ нуклеотидной последовательности амшшфицированного фрагмента ДНК у гомозиготных по Мхр! (-)

- аллелю особей. Секвенирование было выполнено методом прямого секвенирования ПЦР-продукта в лаборатории проф. Янковского Н.К. и на автоматическом секвенаторе в лаборатории проф. Иванова П.Л. Данные по нуклеотидной последовательности фрагмента тестируемой полиморфной области гена bGHпредставлены на рис.3.

1143 1162 1187

1 ms(85)MspI(-) CTGCCCCAGCTCTCCGCACTGGGCCTGGGG CGGCCTTCTCCCCGA

2 ms(73)MpI(-) CTGCCCCAGCTCTCCGCACTGGGCCTGGGG CGGCCTTCTCCCCGA

3 yak(84)MpI(-) CTGCCCCAGCTCTCCGCACTGGGCCTGGGG CGGCCTTCTCCCCGA

4 yak(44)A/spI(-) CTGCCCCAGCTCTCCGCACTGGGCCTGGGG CGGCCTTCTCCCCGA

5 yak(97)MpI(-) CTGCCCCAGCTCTCCGCACTGGGCCTGGGG CGGCCTTCTCCCCGA

6 Bos taurus_MspI(+) CTGCCCCAGCTCTCCGCACCGGGCCTGGGG CGGCCTTCTCCCCGA

7 Bos taurus_Mspl(-) CTGCCCCAGCTC -CCGCACCTCGCCTGGGG CGGCCTTCTCCCCGA

Рис. 3. Сравнение нуклеотидных последовательностей фрагмента гена гормона роста крупного рогатого скота и яков. Полиморфный сайт рестрикции для эвдонуклеазы Mspl выделен жирным шрифтом и подчеркнут. 1,2 - монгольский скот (собственные данные); 3, 4, 5 - монгольский як (собственные данные); 6 - Bos taurus (J00008), зарегистрированный Woycbik et al. (1982); 7 - Bos taurus (AF117348) зарегистрированный Lagziel et aL (1999). Нумерация нуклеотидной последовательности гена дана в соответствии с данными Woychik et al. (1982).

Проведенный нами анализ нуклеотидной последовательности продуктов амплификации соответствующего участка гена bGH, включающего интрон Ш с отсутствующим сайтом рестрикции для эвдонуклеазы Mspl (Mspl (-) аллель) у монгольского скота и яков и сопоставление полученных данных с нуклеотидной последовательностью соответствующего аллеля, описанного в работе (Lagziel et al., 1999), показало, что рассматриваемые мутации не идентичны. Нами исследованы ДНК у двух монгольских коров, гомозиготных по Mspl (-) - аллелю и у трех монгольских яков, также гомозиготных по этому аллелю (рис.3). В результате сравнения их нуклеотидных последовательностей показана их абсолютная идентичность между собой. Соответствующий фрагмент ДНК гена ЮН, зарегистрированный под номером J00008 (Woychik et al.,1982), отличается от изученных нами последовательностей лишь тем, что в указанном образце сайт рестрикции для Mspl (CCGG) присутствует (Mspl (+) - аллель), что соответствует наличию Т в положении 1162 (рис.3). В изученных нами нуклеотидных последовательностях ДНК сайт рестрикции отсутствует, что обусловлено мутацией в положении 1162, в результате которой нуклеотид С заменен на Т. Аналогичная мутация была описана ранее (Yao et al., 1996).

Наиболее подробно ранее изучена мутация, приводящая к исчезновению сайта рестрикции для Mspl, как одновременная инсерция Т в позиции 1163 и замена C/G в позиции 1164 (Hoj et al., 1993; Lagziel et al., 1999). Однако как видно на рис.3, последовательности, фланкирующие Mspl сайт рестрикции по данным Lagziel et al. (1999), совпадают с остальными данными, за исключением делеции одного нуклеотида в положении 57. В результате эту мутацию можно рассматривать как трансверсию G/T и G/C в позициях 1163 и 1164 соответственно (Рис. 3). Таким образом, на настоящий момент описано две мутации в сайте рестрикции для эндонуклеазы Mspl в интроне Ш гена bGH, приводящие к его отсутствию.

Ранее было сделано предположение (Lagziel et al., 1996), что М$р1(-)-аллель гена bGH имеет зебувидное происхождение. Частота Айр1(-)-аллеля в различных породах крупного рогатого скота уменьшается с удалением от места происхождения

зебувидного скота (Индийский полуостров) (Ьа^е1 Я а1., 2000). Однако, как мы уже указывали выше, в подсемействе Воютае существует по крайней мере два варианта Шр\ (-) -аллеля. В цитируемой статье (Ьа^е1 е1 а1., 2000) не указывается какой из вариантов рассматривается. Не исключено, что для построения диаграммы использовались данные по частотам А/лр1(-)-аллеля, тестируемого по наличию/отсутствию сайта рестрикции для Шр\ и, следовательно, в этой работе вероятно объединены данные по разным мутациям в этой области гена. Широкое распространение описанного нами варианта М$р\ (-)-аллеля гена М?Я у монгольских яков, сопоставимое с его частотой у зебу, и иной тип мутации, обусловленный транзицией Т/С в позиции 1162, позволяют предположить независимое присхождение Шр\ (-)-аллеля гена ЪвН у яков.

Исследование полиморфизма гена ЮН имеет и практическое значение. Существует ряд независимых исследований, в которых были показаны ассоциации этого полиморфизма с молочной продуктивностью, жирностью и содержанием белка в молоке различных пород крупного рогатого скота. С наиболее высокой частотой Мгр1(-) - аллель был представлен в линиях с высокими показателями по указанным выше признакам (Ьее е1 а1., 1993; Ра1а1а е1 а1., 1996; Ьар-М е1 а1., 1999, е! а1., 1993). Кроме того, присутствие А/ур1 (-) - аллеля у конкретного животного положительно сказывалось на его молочной продуктивности и приводило к снижению количества соматических клеток в молоке (Ьа^е1 ег а!., 1999). Однако полученные ассоциации не всегда носили однозначный характер (Уао е1 а1., 1996). По данным Уао и др. (1996) мутация Мяр1 (-) ассоциировалась с понижением продуктивности и жирности молока. Скорее всего это связано с двумя вариантами мутаций в сайте рестрикции Мхр\.

Нами была показана чрезвычайно высокая частота Мр1(-) - аллеля (0,94) у монгольских яков. Молоко изученной выборки яков имеет высокий процент жирности (средняя 6,5%, у отдельных животных до 8%).

жирность Pi) частота №р !(•) аллеля

Рис.4 Покаители «родной жирности ■ и «ученных нами передах крупного рогатого скота в сравнении с частотой Msp\ (-) - аллеля гормона роста

На рис. 4 отражены полученные нами данные по частотам Шр\ (-) - аллеля и жирности молока в выборках монгольского скота и монгольских яков. Для сравнения приведены данные по красной горбатовской породе (Удина и др., 2000). На диаграмме приведены средние показатели жирности молока.

Прослеживается ассоциация частоты А%>1(-)-аллеля в выборке и процентом жирности молока. Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют в пользу положительной ассоциации между частотой Mspl (-) - аллеля гена bGH и жирностью молока у представителей Bos taurus.

2.2. Полиморфизм гена нролактина (bPRL) у крупного рогатого скота и монгольских яков.

Полиморфизм гена bPRL в айрширской, черно-пестрой и красной горбатовской породе, у монгольского скота и монгольских яков с использованием трех методов: SSCP, микросателлитного анализа и методом ПЦР-ПДРФ.

Ранее методом SSCP изучался полиморфизм 5-фланкирующего участка гена bPRL на выборках голштинского и австралийского скота. При помощи ПЦР был получен фрагмент длиной 160 kb и затем проводился SSCP анализ. У голштинского скота были выявлены три аллеля (В, С, D) с частотами 0.25,0.69 и 0.06 соответственно. У австралийского скота был найден ещё один аллель - А, частота которого в работе не указана (Hart et al., 1993). В красной горбатовской породе нами были обнаружены только два аллеля BuD.

Методом ПЦР-ПДРФ было изучено распределение частот аллелей гена bPRL, обусловленных молчащей A-G транзицией, возникающей в 103 ко доне (экзон 3) и приводящей к появлению полиморфного ÄMl-сайта. После обработки рестриктазой Rsal выявляюся три генотипа животных по гену PRL: генотипу АА соответствует продукт 156 п.н., генотипу AB - 156, 82 и 74 п.н. и генотипу ВВ - 82 и 74 п.н. (Mitra et al., 1995).

Таблица 5

Распределение полиморфных вариантов гена пролактина

Аллели Красная горбатовская порода к.р.с. Монгольский скот Монгольский як Айрширская порода

F,% N H F, % N H F, % N H F,% N H

Микросателлиты

162 Ьр 100 33 0,0 76.3 19 0,16 100 10 0.0 90,0 20 0,10

158 Ьр 0.0 15.8 0.0 10,0

164 Ьр 0.0 7.9 0.0

ПЦР-ПДРФ

A {Rsal-) 91.4* 35 0.17 67.5 20 0.5 100 20 0.0 85,9* 46 0,28

B{Rsa\+) 8.6 32.5 0.0 14,1

Примечание. N - число исследованных животных, H - наблюдаемый уровень гетерозиготности, * - совместные данные с Удиной И.Г., Костюченко М.В., Лебедевой Л.А., Сулимовой Г.Е. (Удина и др., 2001)

Частоты А- и 5-аллелей гена bPRL в исследованных выборках красной горбатовской и айрширской пород, монгольского скота и монгольского яка приведены в таблице 5.

Ранее в 5'-области гена bPRL был выявлен методом ПЦР полиморфный микросателлитный динуклеотидный повтор с аллелями (158 п.н., 162 п.н. и 164 п.н)

(MacHugh D.E. et al., 1997). Нами был использован этот метод для анализа полиморфизма гена bPRL. Распределение частот полиморфных вариантов гена bPRL представлено в табл.5. Установлена более высокая средняя оценка информационного содержания полиморфизма для ПЦР-ПДРФ в экзоне 3 (PIC- 0,26) по сравнению с оценкой для микросателлитного полиморфизма в регуляторной области (PIC-0,17) гена PRL для трех пород крупного рогатого скота и монгольских яков.

В выборке монгольских яков, тах же как и в красной горбатовской породе все животные были гомозиготны по микросателлитному локусу гена bPRL и содержали только аллель, соответствующий продукту амплификации длиной 162 п.н. Этот аллель является основным в изученных нами выборках. У монгольского скота присутствуют также аллели, которым соответствуют амшшфицированные продукты длиной 158 и 164 п.н. (рис.5).

Ml 2 3 4 5 б 7 8 9 10 11 12 13

Рис. 5. ПЦР-идентификация микросателлитных локусов в гене пролактина монгольского скота в 5'-регуляторпой области гена пролактина. Электрофореграмма в 8% полиакриламидпом геле продуктов амплификации.

Дорожки: маркер (М50Х), 1, 2, 5, 7, 9, 10, 11,13 - гомозиготы 1б2\162 п.н.; 4 и 8 -гетерозиготы 158\1б2 п.н., 6- гомозигота 158\158 п.н., 3 - гомозигота 164U64 п.н., 12 -гетерозигота 162X164 п.н..

Для вариантов гена bPRL, выявляемых с помощью ПЦР-ПДРФ метода, отмечен более высокий уровень гетерозиготности, чем для микросателлитного локуса (табл. 5). Гомозиготы по аллелю В встречались до сих пор только у зебувидного скота. Нами была обнаружена такая гомозигота в выборке монгольских коров (частота - 0,05). Вероятно генотип В/В не был выявлен ранее вследствие небольших размеров изучаемых выборок, а также из-за относительно низкой частоты встречаемости этого аллеля в породах вида Bos taurus. Внутри вида Bos taurus согласно литературным данным (Mitra et al., 1995; Chrenek et al., 1998) наблюдались породы с частотами аллеля В, находящимися в двух диапазонах: 0,05 0,14 и 0,20 + 0,39. Красная горбатовская и айрширская породы крупного рогатого скота относятся к группе пород с низкой частотой аллеля В гена bPRL, а монгольский скот - к группе пород с высокой частотой В-аллеля. Наибольшая частота встречаемости 5-аллеля была отмечена у зебу (0,49).

Таким образом, по аналогии с геном bGH можно предположить возникновение данной мутации у зебувидного скота, однако 5-аллель гена bPRL наблюдался также у представителей рода Bubalis, филогенетически более удаленных от зебу, по сравнению с яком (Bos grurmiens) (Ritz et al., 2000). У яков этой мутации обнаружено не было. Можно также предположить возможность независимого возникновения 5-аплеля гена bPRL у зебу и буйволов.

Не исключено, что генотип AB имеет какое-то селективное преимущество, однако до сих пор не получено достоверных данных о каких-либо корреляциях с признаками молочной продуктивности.

Полное отсутствие гомозигот ВВ в ряде пород Bos taurus может предполагать тесное сцепление аллеля В гена bPRL с другим геном, который вероятно является рецессивной деталью. Возможность такого предположения подтверждается тем фактом, что ген bPRL локализован на 23 хромосоме и сцеплен с областью генов иммунного ответа (класса П) главного комплекса гистосовместимости крупного рогатого скота с частотой рекомбинации г = 0,040. Ранее было показано присутствие деталей в области главного комплекса гистосовместимости, например, в t-области ГКГ у мыши (цит. по Удина, 1994). Тем не менее, аллель В в гомозиготном состоянии выявлен у зебу (Bos indicus) и у монгольского скота, что предполагает отсутствие у них такого сцепления.

В связи с тем, что пролактин является регуляторным белком, стимулирующим лактацию, рост органов и тканей животных, этот ген может являться потенциальным маркером продуктивности у КРС. Таким образом, изучение аллельного полиморфизма гена bPRL у крупного рогатого скота и родственных видов представляет большой интерес и требует дальнейших исследований.

Красная горбатовская порода (мясо-молочного направления селекции) характеризуется меньшим уровнем гетерозиготности по полиморфным вариантам гена bPRL по сравнению с айрширской и черно-пестрой породами (с высокой молочной продуктивностью) (Рис. 6).

H.I5 ч 1

п.Ii 5 - И

I с rvjiimnn тио егь

■у ■ Красная гчр Пагиьская

Жирность (%)

.8 Айрнгирская

Продуктн*ност|»

■ Черно-пестрая-.

Рис. 6. Распределение уровня гетерозиготности по гену ЬРЯЬ и параметров жирномолочной продуктивности у трёх пород крупного рогатого скота. Данные по черно-пестрой породе (немецкой селекции) приведены из литературных данных (Удина и др., 2001).

По-видимому, высокий уровень гетерозипшюсти по гену bPRL у молочных

пород связан с тем, что он участвует в формировании признака молочной

продуктивности, и в процессе селекционной работы на молочную продуктивность

поддерживается высокий уровень гетерозиготности по этому гену.

ВЫВОДЫ

1. Проведен сравнительный анализ аллельного разнообразия гена BoLA-DRB3 у трех пород крупного рогатого скота. Наиболее высокое разнообразие спектра аллелей и наиболее высокий уровень гетерозиготности по данному локусу отмечены у отечественной красной горбатовской породы (29 аллелей, H-0,880) по сравнению с айрширской (18 аллелей, Н=0,770) и черно-пестрой (21 аллель, #=0,536) породами.

2. Установлены различия в спектрах распределения аллелей гена BoLA-DRB3, ответственных за устойчивость и восприимчивость к лейкозу, в выборках животных, различающихся по своему статусу в отношении лейкоза. Выявлено, что аллель, обуславливающий устойчивость к лейкозу, BoLA-DRB3*ll встречался только в выборках здоровых животных (14,8% у черно-пестрой и 7,4% у красной горбатовской породы). В исследуемой популяции айрширского скота аллель *11 отсутствовал.

3. Параметры молочной продуктивности больных лейкозом и здоровых коров различаются. В выборке больных лейкозом животных айрширского скота доля коров с высокой продуктивностью (более 7000 кг молока за лактацию) в 2,4 раза выше, чем в выборке здоровых животных (37,1% и 15,2% соответственно).

4. Впервые у трех пород крупного рогатого скота (айрширской, монгольской и красной горбатовской) и у монгольских яков изучен полиморфизм микросателлитного локуса в 5'-области гена пролактина (bPRL) и Rsal-полиморфизм в интроне Ш гена. Показана более высокая информативность Rsal-ЦДРФ маркера (средняя оценка PIC = 0,26), при изучении генетического полиморфизма пород, по сравнению с микросателлитным маркером (PIC -0,17).

5. Впервые у монгольского скота обнаружены животные гомозиготные по 5-аллелю гена bPRL (Rsa I (+)), ранее генотип ВВ был выявлен только у зебувидного скота и не отмечен в восьми ранее изученных породах крупного рогатого скота. У монгольских яков Б-аллель гена bPRL не обнаружен.

6.- Отмечен высокий уровень гетерозиготности по двум изученным ДНК-маркерам гена bPRL у молочных пород крупного рогатого скота с высокой жирностью молока.

7. Впервые у монгольского скота, монгольских яков и красной горбатовской породы изучен Mspl-полиморфизм в интроне Ш гена гормона роста (bGH). Отмечена высокая частота Mspl (-) - аллеля у монгольских яков (0,94), сопоставимая с его частотой у зебу (0,92-0,99).

8. Впервые у представителей Bos taurus (монгольский скот) и Bos gruniens (монгольский як) определены нуклеотидные последовательности фрагмента Мр1(-)-аллеля гена bGH и установлена их идентичность. Показано, что отсутствие сайта рестрикции для Mspl у этих объектов обусловлено транзицией С/Т в позиции 1162. Постулируется независимое возникновение мутации Mspl (-) у яков по отношению к ранее описанной мутации Mspl (-) для зебу.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Туркова CO., Сулимова Г.Е. Метод определения аллельных вариантов гена BoLA-DRB3, ассоциирующихся с устойчивостью или чувствительностью к лейкозу, с помощью аллельспецифичной полимеразной цепной реакции//Молекулярно-генетические маркеры животных. Тезисы докладов II Международной конференции. Аграрна наука. Киев, 1996. С.21-22.

2. Сулимова Г.Е., Удина И.Г., Карсшышева Е.Е., Туркова С О. Павленко С.П., Орлова А.Р. Сравнительный анализ полиморфизма гена BoLA-DRB3 у черно-пестрой и айрширской пород крупного рогатого скота // Тезисы докладов международной конференции «Агробиотехнологии растений и животных». Киев, 1997. С.34-35.

3. Удина И.Г., Карамышева Е.Е., Сулимова Г.Е., Павленко С. П., Туркова CO.. Орлова А. Р. Сравнительный анализ внутри- и межпородной генетической дифференциации у айрширской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота по маркерам гистосовместимости //Тезисы докладов международной конференции "ДНК-технологии". Киев, 1997. С. 62-63.

4. Sulimova G.E., Udina I.C., Karamysheva Е.Е., Turkova SO.. Orlova A.R. BOLA-jDARJ-associated resistance to persistant lymphocytosis in Russian dairy cattle // Proceedings of International Conference on Animal Biotechnology, Beijing. 1997. P.81-84.

5. Удина И.Г., Карамышева E.E, Сулимова Г.Е., Павленко С.П., Туркова С.О.. Орлова А.Р., Эрнст JI.K. Сравнительный анализ айрширской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота по маркерам гистосовместимости // Генетика. 1998. Т.34. № 12. С. 1668-1674.

6. Сулимова Г.Е., Удина И.Г., Карамышева Е.Е., Павленко СЛ., Туркова С .О., Орлова А.Р. Сравнительный анализ айрширской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота по гену BoLA-DRB3 в связи с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу // Тезисы докладов 3-ей международной конференции «Молекулярно-генетические маркеры животных». Киев, 1999. С.62.

7. Удина И.Г., Сулимова Г.Е., Карамышева Е.Е., Туркова С. О.. Орлова А.Р. Сравнительный анализ айрширской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота в связи с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу по маркерам главного комплекса гистосовместимости // Тезисы докладов II съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров. Санкт-Петербург, 2000. Т.2. С.61.

8. Удина И.Г., Карамышева Е.Е., Сулимова Г.Е., Туркова С.О.. Орлова А.Р. Генетические механизмы устойчивости и чувствительности к лейкозу в айрширской и черно-пестрой породах крупного рогатого скота / Третья международная конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». Тезисы докладов. Боровск РАСХН, ВНИИ физиологии, биохимиии и питания сельскохозяйственных животных. 2000. С. 439.

9. Туркова С О.. Костюченко М.В., Удина И.Г., Столповский Ю.А., Сулимова Г.Е. Особенности распространения аллелей генов BoLA-DRB3, каппа-казеина и пролактина в красной горбатовской породе в связи с устойчивостью к заболеваниям и продуктивностью / II Международная научная конференция "Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии". Материалы конференции. Министерство Промышленноста, науки и технологий РФ, РАСХН, ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии.2000. С.231-232.

10. Удина И.Г., Карамышева Е.Е., Туркова СО, Сулимова Г.Е., Орлова А.Р. Использование ДНК-технологий для оценки наследственной устойчивости к заболеванию лейкозом у крупного рогатого скота / П Международная научная конференция "Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии." Материалы конференции. Министерство Промышленности, науки и технологий РФ, РАСХН, ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии. 2000. С. 219-220.

11. Туркова CO.. Костюченко М.В., Столповстй Ю.А., Удина И.Г., Сулимова Г.Е. Особенности генофонда красной горбатовской породы в связи с устойчивостью к заболеваниям и продуктивностью/ Первая научная школа-конференция «Сохранение биоразнообразия и рациональное использование биологических ресурсов». Тезисы докладов. М., 2000. МГУ им. М.В. Ломоносова и отд. общей биологии РАН. С. 97.

12. Удина И.Г., Туркова С. О.. Костюченко М.В., Лебедева JI.A., Сулимова Г.Е. Полиморфизм гена пролактина (микросателлиты, ПЦР-ПДРФ) у крупного рогатого скота//Генетика. 2001. Т.37. №4. С.511-516.

13. Udina I.G., Karamysheva Е.Е., Sulimova G.E, Turkova S.O.. Orlova A.R. Associations with leukemia of BoLA-DRB3 alleles in Russian Ayrshire and Black Pied breed In: Six International Veterinary Immunology Simposium. Uppsala, Sweden, Swedish University of Agricultural Sciences, July 15-20,2001, PS11.-3, P. 217.

14. Удина И.Г., Карамышева EE., Сулимова Г.Е., Туркова CO. Орлова А.Р. Молекулярные механизмы устойчивости и чувствительности к лейкозу: ассоциация аллелей BoLA-DRB3 с персистентным лимфоцитозом в отечественных стадах крупного рогатого скота / Тезисы докладов Международного Симпозиума "Молекулярные механизмы генетических процессов и биотехнология", 18- 21 ноября 2001, Москва (Россия), 22 - 24 ноября 2001, Минск (Республика Беларусь), С.332.

15. Соколова С.С, Удина И.Г., Туркова СО. Сулимова Г.Е. Анализ полиморфизма ДНК кластерных генов у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью к заболеваниям и продуктивностью / Тезисы докладов Международного Симпозиума "Молекулярные механизмы генетических процессов и биотехнология", 18- 21 ноября 2001, Москва (Россия), 22 - 24 ноября 2001, Минск (Республика Беларусь), С.330.

16. Туркова С.О.. Удина И.Г., Столповский Ю.А, Сулимова Г.Е. Особенности распределения частот аллелей генов каппа-казеина, пролактина, гормона роста и BoLA-DRB3 у красной горбатовской породы в связи с устойчивостью к заболеваниям и продуктивностью / Тезисы докладов Международного Симпозиума "Молекулярные механизмы генетических процессов и биотехнология", 18- 21 ноября 2001, Москва (Россия), 22 - 24 ноября 2001, Минск (Республика Беларусь), С. 174.

17. Sulimova G.E., Turkova S.O.. Tsedev Т., Zakharov I.A. Udina I.G., Polymorphisms of the bovine prolactin and growth hormone genes and associations with selection for milk fat production/ In: Proceedings of VII World congress on genetics applied to livestock production. Montpellier, France, 2002. Communication. 09-36 (CD).

18. Udina I.G., Karamysheva E.E., Turkova S.P.. Orlova A.R., Sulimova G.E. Resistance and susceptibility to persistent lymphocytosis in Russian cattle breeds by distribution of BoLA-DRB3 alleles / In: Proceedings of VII World congress on genetics applied to livestock production. Montpellier, France, 2002. Communication. 13-23 (CD).

19. Sulimova G.E., Turkova S.O.. Tsedev Т., Zakharov LA. Udina I.G., Polymorphisms of the bovine prolactin and growth hormone genes and associations with selection for milk fat production /The 3rd International Iran and Russia Conference. «Agriculture and

Natural resources.» Abstract. Moscow Timiriazev Agricultural Academy, Moscow, Russia, 2002, P.58-59.

20. Udina I.C., Karamysheva E.E., Turkova S.O.. Orlova A.R., Sulimova G.E. Molecular mechanisms of resistance to persistent lymphocytosis in Russian cattle breeds revealed by distribution of BoLA-DRB3 alleles/ The 3rd International Iran and Russia Conference. «Agriculture and Natural resources.» Abstract. Moscow Timiriazev Agricultural Academy, Moscow, Russia, 2002, P.65.

21. Удина И.Г., Карамышева E.E., Туркова С. О.. Орлова А.Р., Сулимова Г.Е. Генетические механизмы устойчивости и чувствительности к лейкозу айрпшрской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота, установленные на основе распределения аллелей гена BoLA-DRB3 И Генетика, 2003. Т.39, № 3, С.383-396.

2.0^5-А Ü16 2 1 2

Издательство ООО "МАКС Пресс". Лицензия ИД Ks 00510 от 01.12.99 г. Подписано к печати 08.09.2003 г. Формат 60x90 1/16. Усл.печ.л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ 585. Тел. 939-3890, 928-2227, 928-1042. Факс 939-3891. 119899, Москва, Воробьевы горы, МГУ.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Туркова, Светлана Олеговна

Введение 3

Обзор литературы 6

1. Гены главного комплекса гистосовместимости крупного рогатого скота

1.1. Структура главного комплекса гистосовместимости 7

1.2. Методы изучения главного комплекса гистосовместимости 11

1.3. Главный комплекс гистосовместимости крупного рогатого скота 13

1.4. Связь антигенов главного комплекса гистосовместимости крупного рогатого скота с болезнями и хозяйственно-полезными признаками 18

1.5. Распределение аллелей гена BoLA-DRB3 у различных пород крупного рогатого скота 23

2. Изучение полиморфизма генов пролактина и гормона роста крупного рогатого скота

2.1. Пролактин и гормон роста: структура и биологическая роль

2.1.1. Регуляция секреции 27

2.1.2 Биологическая роль 28

2.1.3 Структура генов пролактина и гормона роста 29

2.2. Полиморфизм гена пролактина и методы его определения 30

2.3. Изучение полиморфизма гена гормона роста (bGH) 35 - 37 Материалы и методы 38 - 52 Результаты и обсуяедение 53

1. Полиморфизм гена BoLA-DRB3 в связи с устойчивостью к лейкозу и молочной продуктивностью

1.1. Оптимизация условий типирования аллелей гена BoLA-DRBS 54

1.2. Определение аллельных вариантов гена BoLA-DRB3, ассоциирующихся с устойчивостью или чувствительностью к лейкозу, с помощью аллельспецифичной полимеразной цепной реакции 57

1.3. Сравнительный анализ аллельного разнообразия гена

BoLA-DRB3 у разных пород крупного рогатого скота 61

1.4. Сравнительный анализ аллельного разнообразия гена BoLA-DRB3 у черно-пестрого и айрширского скота в подвыборках вирусоносителей, здоровых и больных лейкозом животных 66

2. Полиморфизм генов гормона роста и пролактина у крупного рогатого скота и монгольских яков

2.1. Полиморфизм гена гормона роста у крупного рогатого скота и монгольских яков 72

2.2. Полиморфизм гена пролактина (bPRL) у крупного рогатого скота и монгольских яков 76

Выводы 84

Введение Диссертация по биологии, на тему "Полиморфизм генов Bola-DRB3, пролактина и гормона роста у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью к лейкозу и молочной продуктивностью"

Лейкоз является одной из самых распространенных инфекционных болезней крупного рогатого скота. Лейкоз животных относят к тяжелым, с летальным исходом, заболеваниям опухолевой природы, основным признаком которых является злокачественное распространение клеток кроветворных органов с нарушением их созревания.

Основным этиологическим фактором лейкоза является вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС), относящийся к группе ретровирусов. Инфицированность животного не всегда приводит к развитию заболевания, для этого необходимо определенное состояние иммунной системы животного и его генетическая восприимчивость к заболеванию. Вирус индуцирует хроническую инфекцию у крупного рогатого скота, приводящую к трем возможным патологическим формам заболевания: асимптоматическое течение, персистентный лимфоцитоз (PL) и лимфосаркома (Burny et al., 1980, 1988). Однажды инфицированное животное остается вирусоносителем в течение всей своей жизни. В серологической реакции инфекция проявляется спустя несколько недель после инфицирования.

Изучены структура, химические, биологические, иммунологические свойства данного вируса, найден метод культивирования в лабораторных и промышленных условиях. Одновременно с выделением ВЛ КРС был изолирован вирус, который отнесен к иммунодефицитоподобному вирусу крупного рогатого скота. Интерес к данному возбудителю возрос после выделения вируса иммунодефицита человека (HIV), так как этот возбудитель мог быть использован в качестве модели для изучения вируса человека. Установлено также, что ретровирус типа С, также вызывающий лейкозы у крупного рогатого скота, структурно и функционально сходен с вирусом HTLV-I, HTLV-IV, вызывающим Т - клеточную лейкемию у человека (Derse et al., 1985; Sagata et al., 1985), хотя возможность заражения человека вирусом лейкоза крупного рогатого скота не доказана.

Разработка селекционно-генетических подходов к оздоровлению стад животных относительно лейкоза включает изучение ассоциативных связей антигенов Главного комплекса гистосовместимости крупного рогатого скота (Bovine leukocyte antigens-BoLA) с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу.

Однако многие вопросы, связанные с генетической обусловленностью формирования признаков устойчивости к заболеваниям и молочной продуктивности, остаются открытыми. Неизвестно, насколько универсальный характер носят аллели гена BoLA-DRB3, ответственного за устойчивость и восприимчивость к лейкозу, а также, насколько широко они распространены у разных пород крупного рогатого скота. Мало изучены местные породы крупного рогатого скота в отношении полиморфизма генов, участвующих в формировании рассматриваемых признаков.

К настоящему времени выявлен только один вариант ДНК-полиморфизма (Msp I (-) — аллель) гена гормона роста, для которого показана положительная корреляция с одним из хозяйственно-полезных признаков, а именно, с жирностью молока. Но даже для этого варианта полиморфизма данные носят противоречивый характер. Для гена пролактина до. сих пор не выявлено вариантов ДНК-полиморфизма, которые бы имели достоверную ассоциацию с хозяйственно-полезными признаками, хотя для гена пролактина показано участие в регуляции лактации.

Целью данной работы было изучение ДНК-полиморфизма генов BoLA-DRB3, пролактина и гормона роста у разных пород крупного рогатого скота в связи с устойчивостью к лейкозу и молочной продуктивностью. Для достижения указанной цели были поставлены следующие нижеперечисленные задачи:

1. Провести сравнительный анализ аллелыюго разнообразия гена BoLA-DRB3 у разных пород крупного рогатого скота.

2. Охарактеризовать выборки животных айрширской породы и черно-пестрой пород, различающиеся по своему статусу в отношении лейкоза (здоровые, инфицированные BJT КРС и больные персистентным лимфоцитозом животные) по разнообразию аллелей гена BoLA-DRB3 и их частотам.

3. Исследовать полиморфизм гена гормона роста (ПЦР-ПДРФ по рестрицирующей эндонуклеазе Msp\) у нескольких пород крупного рогатого скота и монгольских яков.

Изучить связи различных аллелей исследуемых генов с хозяйственно-полезными признаками (показателями молочной продуктивности и устойчивостью к лейкозу).

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Туркова, Светлана Олеговна

выводы

1. Проведен сравнительный анализ аллельного разнообразия гена BoLA-DRB3 у трех пород крупного рогатого скота. Наиболее высокое разнообразие спектра аллелей и наиболее высокий уровень гетерозиготности по данному локусу отмечены у отечественной красной горбатовской породы (29 аллелей, Н=0,880) по сравнению с айрширской (18 аллелей, Н=0,770) и черно-пестрой (21 аллель, Н=0,836) породами.

2. Установлены различия в спектрах распределения аллелей гена BoLA-DRB3, ответственных за устойчивость и восприимчивость к лейкозу, в выборках животных, различающихся по своему статусу в отношении лейкоза. Выявлено, что аллель, обуславливающий устойчивость к лейкозу, BoLA-DRB3*l 1 встречался только в выборках здоровых животных (14,8% у черно-пестрой и 7,4% у красной горбатовской породы). В исследуемой популяции айрширского скота аллель *11 отсутствовал.

3. Параметры, молочной продуктивности больных лейкозом и здоровых коров различаются. В выборке больных лейкозом животных айрширского скота доля коров с высокой продуктивностью (более 7000 кг молока за лактацию) в 2,4 раза выше, чем в выборке здоровых животных (37,1% и 15,2% соответственно).

4. Впервые у трех пород крупного рогатого скота (айрширской, монгольской и красной горбатовской) и у монгольских яков изучен полиморфизм микросателлитного локуса в 5'-области гена пролактина (bPRL) и ftyal-полиморфизм в интропе III гена. Показана более высокая информативность Rsal-ПДРФ маркера (средняя оценка PIC = 0,26), при изучении генетического полиморфизма пород, по сравнению с микросателлитным маркером (PIC = 0,17).

5. Впервые у монгольского скота обнаружены животные гомозиготные по Л-аллелю гена bPRL (Rsa I (+)), ранее генотип ВВ был выявлен только у зебувидного скота и не отмечен в восьми ранее изученных породах крупного рогатого скота. У монгольских яков 5-аллсль гена bPRL не обнаружен.

6. Отмечен высокий уровень гетерозиготности по двум изученным ДНК-маркерам гена bPRL у молочных пород крупного рогатого скота с высокой жирностью молока.

7. Впервые у монгольского скота, монгольских яков и красной горбатовской породы изучен Mspl-полиморфи'зм в интроне III гена гормона роста (bGH). Отмечена высокая частота Msp\ (-) - аллеля у монгольских яков (0,94), сопоставимая с его частотой у зебу (0,92-0.99).

Впервые у представителей Bos taurus (монгольский скот) и Bos gruniens (монгольский як) определены нуклеотидные последовательности фрагмента Msp\(-)-аллеля гена bGH и установлена их идентичность. Показано, что отсутствие сайта рестрикции для Mspl у тгих объектов обусловлено транзицией С/Т в позиции 1162. Постулируется независимое возникновение мутации Mspl (-) у яков по отношению к ранее описанной мутации Mspl (-) для зебу.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Туркова, Светлана Олеговна, Москва

1. Айала Ф. Введение в популяционную генетику. / М.: Мир. 1984.

2. Алтухов Ю. П. Генетические процессы в популяциях. / М.: Наука. 1989.

3. Гаврилов O.K., Шишков В.П. Состояние и перспективы развития лейкозоологии // Вестник сельскохозяйственной науки. 1983. N 2. С. 69-76.

4. Джинчарадзе А.Г., Иванов П.Л., Рысков А.П. Геномная «дактилоскопия»: Характеристика клонированной последовательности генома человека, обладающей в составе вектора М13 свойствами высокополиморфного маркера ДНК//Докл. АН СССР.1987. Т.295. С. 230-233.

5. Карамышева Е.Е. Молекулярно-генетический анализ классов I и II главного комплекса гистосовместимости в связи с устойчивостью и восприимчивостью к гемобластозам крупного рогатого скота айрширской породы. / Диссертация на звание канд.биол.наук. М.1998.

6. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование / М.: Мир. 1984.

7. Марри Р. Биохимия человека / М.: Мир. 1993.

8. Рокицкий П.Ф. Основы вариационной статистики для биологов. // Минск: БГУ. 1961.

9. Рысков А.П. Диагностические возможности мультилокусных маркеров ДНК в систематике диких копытных животных//Генетика. 1997. Т.ЗЗ. С.961- 966.

10. Сулимова Г.Е. Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов ДНК у сельскохозяйственных животных: методы изучения и перспективы использования//Успехи соврем, генетики. 1993. Вып. 18. С. 3-35.

11. Сулимова Г.И., Удина И.Г., Шайхаев Г.О., Захаров И.А. ДНК-полиморфизм гена BoLA-DRB3 у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу // Генетика. 1995. Т. 31.№9. С. 1294-1299.

12. Удина И.Г. Гены главного комплекса гистосовместимости человека и животных // Успехи соврем, генетики 1994. Вып. 19. С. 133 177.

13. Удина И.Г., Карамышева Е.Е., Сулимова Г.Е., Павленко С.П., Туркова С.О., Орлова А.Р., Эрнст Л.К. Сравнительный анализ айрширской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота по маркерам гистосовместимости // Генетика. 1998. Т. 34. С. 1668-1674.

14. Удина И.Г., Туркова С.О., Костюченко М.В., Лебедева Л.А., Сулимова Г.Е. Полиморфизм гена пролактина (микросателлиты, ПЦР-ПДРФ) у крупного рогатого скота//Генетика. 2001. Т. 37. С. 511-516.

15. Эрнст Л.К., Сулимова Г.И., Орлова А.Р., Удина И.Г., Павленко С.П. Особенности распространения антигенов BoLA-A и аллелей гена BoLA-DRB3 у черно-пестрого скота в связи с ассоциацией с лейкозом // Генетика. 1997. Т.ЗЗ. С. 87-95.

16. Akers R.M., Bauman D.E., Capuco A.V., Goodman G.T. & Tucker H.A. Prolactin regulation of milk secretion and biochemical differentiation of mammary epithelial cells in periparturient cows // Endocrinology. 1981. V. 109. P. 23 30.

17. Aldridge BM, McGuirk SM, Clark RG, Knapp LA, Watkins DI, Lunn DP. Denaturing gradient gel electrophoresis: a rapid method for differentiating BoLA-DRB3 alleles//Animal Genetics 1998 V. 29. P. 389-94.

18. Alexander J.A., Bailey E., Woodward J. Analysis of equine lymphocyne antigen system by Southern blot hybridization // Immunogenetics.l 987. V. 25 P. 47-54.

19. Ammer H., Schwaiger F.W., Kammerbauer C., Gomolka M., Arriens A., Lazary S., Epplen J.T. Exonic polymorphism and intronic simple repeat hypervariability in MHC-DRB genes. I I Immunogenetics. 1992. V. 35. P.332-340.

20. Amorena В., Stone W.H. Serologically defined (SD) locus in cattle. // Science. 1978. V. 4. 201. P. 159-160.

21. Amorena В., Stone W.H. Bovine lymphocyte antigens (BoLA): a serologic, genetic and histocompatibility analysis // Tissue Antigens. 1980. V. 16. P. 212-225.

22. Andersson L. Organization of the bovine MHC class II region as revealed by genomic hybridizations // Animal Genetics. 1988a. V. 19. P. 32-34.

23. Andersson L. Genetic polymorphism of bovine t-complex gene (TCP1) linkage to major histocompatibility genes// Journal of Heredity. 1988b. V. 79. P.l-5.

24. Andersson L., Bohme I., Rask L., Peterson P.A. Genomic hybridization of bovine class II major histocompatibility genes: I. Extensive polymophism of DQ and DR genes//Animal Genetics 1986a. V. 17. P. 169-177.

25. Andersson L., Bohme J., Peterson P.A., Rask L. Genomic hybridization of bovine class II major histocompatibility genes: 2. Polymorphism of DR genes and linkage disequilibrium in the DO-DR region // Anim Genet. 1986b. V. 17. P. 295-304.

26. Andersson G., Lindblom В., Andersson L., Gorski J., Mach В., Rask L. The single DR beta gene of the DRw8 haplotype is closely related to the DR beta 3 gene encoding DRw52.//Immunogenetics. 1988. V. 28. P. 1-5.

27. Andersson L., Lunden A., Sigurdardottir S., Davies C.J., Rask L. Linkage relationships in the bovine MHC region. High recombination frequency between class II subregions. Immunogenetics. 1988. V. 27. P. 273-280.

28. Andersson L., Rask L. Characterization of the MHC class II region in cattle. The number of DO genes varies between haplotypes // Immunogenetics. 1988. V. 27. P. 110-120.

29. Auffray C., Strominger J.L. Molecular genetics of the human major histocompatibility complex//Adv. Hum. Genet. 1986. V. 15. P. 197-247.

30. Barta T.R., Stear M.J., Gavora J.S. Assoation of BoLA antigens with production traits in cows // Animal Genetics. 1989. V. 20, Suppl.l. P.32.

31. Bell J.I., Todd J.A., McDevitt H.O. The molecular basis of HLA-disease associations // In: Advances in human genetics (cd. by H. Harris, K. Hirschhorn). N.Y. and L: Plenum press. 1989. V. 18. Ch.l. P. 1-42.

32. Botstein D., White R.L., Skolnik M., and Davis R.W. Construction of genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphism // Am. J. Genet. 1980. V. 32. P. 314-331.

33. Briles W.E., Briles R.W., Pollock D.L., Petrison M. Marker s disease resistance in chicken affected by complementation of В alloalleles in a cross of commercial parent stocks // Anim. Blood Grps. and Biochem. Genet. 1980. N. 11, Suppl.l. P. 14.

34. Brown J.H., Jardetzky Th.S., Gorga J.C., Stern L.J., Urban R.G., Strominger J.L. and Wiley D.C. Three-dimensional structure of the human class II histocompatibility antigen HLA-DR1 //Nature. V.364. P. 33 39.

35. Burke M.G., Stone R.T. & Muggli-Cocket N.E. (1991) Nucleotide sequence and northern analysis of a bovine major histocompatibility class II DR beta-like cDNA. //Anim Genet. 1991. V. 22. P. 343-352.

36. Burny A., Bruck C., Chantrenne H. et al. Bovine leukemia virus: molecular biology and epidemiology // In: Viral Oncology (ed. by G. Klein). New York: Raven Press, 1980. P. 89-231.

37. Burny A., Cleuter Y., Kettmann R. et al. Bovine leukemia: facts and hypotheses derived from the study of an infectious cancer // Vet. Microbiol. 1988. V. 17. P. 197-218.

38. Caldwell J., Brayan C.F., Cumferland P.A., Weseli D.F. Serologically detected limphocyte antigens in Holstein cattle // Anim. Blood. Grps. Biochem. Genet. 1977. V. 8. P. 197-207.

39. Caldwell J., Cumferland P.A., Weseli D.F., Willians J.D. Breed differencies in frequency of BoLA specificities // Anim. Blood Grps. and Biochem. Genet. 1979. V. 10. P. 93-98.

40. Cameron V.A., Espiner E.A., Marsh N.B. Intracerebroventricular atrial natriuretic peptide infusion augments the adrenocorticotropin and angiotensin II responses to hemorrhage in sheep // Neuroendocrinology. 1990. V. 52. P. 589-594.

41. Cameron.P.U., Tabarais H.A., Pulendran В., Robinson W., Dawkins R.L. Consirvation of central MHC genome: PFGE mapping and RFLP analysis of complement, HSP70, and TNF genes in the goat // Immunogenetics 1990. V.31. P. 253-264.

42. Camper S.A., Lyck D.N., Yao Y., Woychik R.P., Goodwin R.G., Lyons RH. Jr., Rottman F.M. Characterization of the bovine prolactin gene // DNA. 1984 V. 3. P. 237-249.

43. Carrol C.L., Sommer F.G., McNeal J.E., Stamey T.A. The abnormal prostate: MR imaging at 1.5 'Г with histopathologic correlation // Radiology. 1987. V. 163. P. 521-525.

44. Casati M.Z., Ceriotti G., Polli M., Longeri M., Gliozzi T.M. Association of BoLA Antigens with milk production traits in Holstein Fresian cows // Animal Genetics. 1991. V.22. S.l. P. 102.

45. Chrenek P., Vasicek D., Bauerovf M., and Bulla J. Simultaneous analysis of bovine growth hormone and prolactin alleles by multiplex PCR and RFLP // Czech J. Anim. Sci. 1998. V.43. P. 53-55.

46. Cosgrove D., Gray D., Dierich A., Kaufman J., Lemeur M., Benoist C., Mathis D. Mice lacking MHC class II molecules. // Cell. 1991. V.66. P. 1051-1066.

47. Cowan С. M., Dentine M. R., Ax R. L., Schuler L. A., Restriction fragment length polymorphism associated with growth hormone and prolactin genes in Holstein bulls: evidence for a novel growth hormone allele // Animal Genetics. 1989. V. 20. P. 157- 165.

48. Crew M.D., Filipowsky M.E., Neshat M.S., Smith G.S., Walford R.L. Transmembrane domain length variation in the evolution of major histocompatibility complex class I genes. // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 1991. V. 88. P. 4666-4670.

49. Davies С. J., Andersson L., Ellis S.A. et al. Nomenclature for factors of the BoLA system, 1996: report of the ISAG BoL4 Nomenclature Committee // Animal Genetics. 1997. V. 28. P. 159-168.

50. Davies C.J., Joosten I., Bernoco D., Arriens M.A., Bester J., Ceriotti G., Ellis S., Hensen E.J., Hines H.C., Horin P., et al. Polymorphism of bovine MHC class I genes // Eur J Immunogenet. 1994 V. 21(4). P. 239-258.

51. Deverson E.V., Wright H., Watson S., Ballingall K., Huskisson N., Diamond A.G., Howard J.C. Class II major histocompatibility complex genes of the sheep // Animal Genetics. 1991. V.22. P. 211-227.

52. Derse D., Caradonna S.J., Casev I.W. Bovine leukaemia virus long terminal repeat: a cell type specific promoter // Science. 1985. V. 227. P. 317-320.

53. Dietz А. В., Georges M., Threadgill D. W., Womack J. E., Schuler L. A. Somatic cell mapping, polymorphism, and linkage analysis of bovine prolactin-related proteins and placental lactogen // Genomics. 1992. V. 14. P. 137-143.

54. Dietz A.B., Cohen N.D., Timms L., Kehrli M.E. Jr. Bovine lymphocyte antigen class II alleles as risk factors for high somatic cell counts in milk of lactating dairy cows//J. Dairy Sci. 1997a V. 80. P. 406-412.

55. Dietz A., Detilleux J., Freemann A. et al. Genetic association of bovine lymphocyte antigen DRB3 alleles with immonological traits of Holstein cattle // J. Dairy Sci. 1997b. V. 80. P. 400-405.

56. Dodol G.J., Bernoco D., Stormont C. Serological analysis for linked BoLA loci // Anim. Blood Grps. and Biochem. Genet. 1980. V. 11, Suppl.l. P.28-29.

57. Dusinsky R., Simon M., Nouzovska D. Study of bovine antigens in the Slovac pied bread population // Animal report of the Institute of Animal Phisiology (Slovac Academy of Sciences). 1987. V. 7. P. 35-43.

58. Dyer P.A., Martin S. Techniques used to define human MHC antigens: serology // Immunol Lett. 1991 V. 29(1-2) P. 15-21.

59. Ferrer I.F., Marshak R.R., Abt D.A., Ekenyon S.J. Relationship between lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in cattle. A review // J. Amer. Vet. Med. Ass. 1979. V. 175. P. 705-708.

60. Ferrer J., Marshak R., Abt D. et al. Persistent lymphocytosis in cattle; nature and relation to lymphosarcoma. // Ann. Rcch. Vet. 1978. V. 9. P. 851-857.

61. Figueroa F., Gutknecht J., Tyichy H., Klein J. Class II MHC genes in rodent evolution//Immunological reviews. 1990. V. 113. P. 27-46.

62. Flajnik M.F., Pasquier L.D. The major histocompatibility complex of frogs // Immunological Reviews. 1990. N. 113. P. 47-64.

63. Fries R., Hediger R., Stranzinger G.Tentative chromosomal localization of the bovine major histocompatibility complex by in situ hybridization. // Anim. Genet. 1986. V. 17. P. 287-294.

64. Gelhaus A., Schnittger L., Mehlitz D., Horstmann RD., Meyer C.G. Sequence and PCR-RFLP analysis of 14 novel BoLA-DRB3 alleles. // Anim. Genet. 1995 V. 26 P. 147-153.

65. Germain R.N., Hendrix L.R. MIIC class II structure, occupancy and surface expression determined by post-endoplasmic reticulum antigen binding. // Nature. 1991. V. 12. N.6340. P. 134-139.

66. Gilliespie B.E., Jayarao BM, Dowlen HH, Oliver SP. Analysis and frequency of bovine lymphocyte antigen DRB3.2 alleles in Jersey cows // J. Dairy Sci. 1999. V. 82. P. 2049-53

67. Giovambattista G., Golijow C., Dulout F. et al. Gene frequencies of DRB3.2 locus of Argentine Creole cattle // Animal Genetic. 1996. V. 27. P. 55-56.

68. Giovambattista G., Ripoli M.V., Peral-Garcia P., Bouzat J.L. Indigenous domestic breeds as reservoirs of genetic diversity: the Argentinean Creole cattle // Anim. Genet. 2001 V. 32. P. 240-247.

69. Gorer P.A. The detection of antigenetic differences in mouse eritrocytes by the employment of the immune sera//British. Exp. Pathol. 1936. Vol.17. P. 42-50.

70. Groenen M.A., van der Poel J.J., Dijkhof R.J., Giphart M.J. Cloning of the bovine major histocompatibility complex class II genes. // Anim. Genet. 1989. V. 20. P. 267-278.

71. Groenen M.A., van der Poel J.J., Dijkhof R.J., Giphart M.J. The nucleotide sequence of bovine MI 1С class II DQB and DRB genes. // Immunogenetics. 1990. V.31.P. 37-44.

72. Grosclaude F., Mahe M.F., Voglino G.F. The beta E variant and the phosphorylation code of bovine cascins // FEBS Lett. 1974. V. 1. 45. P. 3-5.

73. Hallerman E. M., Theilman J. L., Beckman J. S., Soller M., Womack E. Mapping of bovine prolactin and rhodopsin genes in hybrid somatic cells // Anim. Genet. 1988. V. 19. P. 123.

74. Hart G.L., Bastiaansen J., Dentine M.R., Kirkpatrick B.W. Detection of a four-allele single strand conformation polymorphism (SSCP) in the bovine prolactin gene 5' flank // Animal Genetics. 1993. V. 24. P. 149.

75. Hediger R., Jonson S.E., Barendse W., Drinkwater R.D., Moore S.S., Hetzel J. Assignment of the growth hormone gene locus to 19q26-qter in cattle and to 1 lq25-qter in sheep by in situ hybridization // Genomics. 1990 V. 8. P. 171-174.

76. Hedrick Ph. W., Whittam, Th.S., Parham, P., Heterozygosity at individual amino acid sites: extremely high levels for HLA-A and IILA-B genes // Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 1991. V. 88. P. 5897-5901.

77. Hirsch F., Sachs D., Gustafsson K.et al. Ch. Class II genes of miniature svine.III. Characterisation of an expressed pig class II gene homologous to HLA-DQA H Immunogenetics. 1990. V.31. P.52-56.

78. Hoj S., Fredholm M., Larsen N.J., Nielsen V.H. Growth hormone gene polymorphism associated with selection for milk fat production in lines of cattle // Animal Genetics. 1993. V.24. P.91-96.

79. Hughes A.L. and Nei M., Nucleotide substitutions at major histocompatibility complex class II loci: evidence for overdominant selection // Proc. Natl. Acad Sci. USA. 1989. V. 86. P. 958 -962.

80. Jeffreys A.J., Wilson V., Thein S.L. Hypervariable 'minisatellite' regions in human DNA. //Nature. 1985. V.314. P. 67-73.

81. Johansson S., Andersson L. Extreme diversity in the bovine MHC class II region revealed by sequencing the DRB3 exon 2 from African cattle // XXIII International conference on animal genetics. Congress-Center Interlaken, Switzerland. 1992. P.34.

82. Joosten I., Hensen E.J., Sanders M.F., Andersson L. Bovine MHC class II restriction fragment length polymorphism linked to expressed polymorphism // Immunogenetics. 1990. V.31. P. 123-126.

83. Joosten I., Sanders M.F., Hensen E.J. MHC class I compatibility between dam and calf increases the risk of bowin retained placenta// Animal Genetics. 1991. V. 22, Suppl.l. P. 114.

84. Kaufman J., Skjoedt K., Salmonsen J. The MHC molecules of nonmammalian vertebrates//Immunological reviews. 1990. N113. P. 83-118;

85. Krieger J.I., Karr R.W., Grey H.M. et al. Single amino acid changes in DR and antigen define residues critical for peptide-МНС binding and T cell recognition // J. Immunol. 1991. V. 146. P. 2331 2340.

86. Kroemer G., Bernot A., Behar G., Chausse A.M., Gastinel L.N., Guillemot F., Park I., Thorava 1.Р., Zoorob R., Auffray C. Molecular genetics of the chicken MHC: current status and evolutionary aspects. // Immunol. Review. 1990 V. 113. P. 119-145.

87. Lagziel A., DeNise S., Hanotte O., Dhara S., Glazko V., Broadhead A., Davoli R. Geographic and breed distribution of an Mspl PCR-RFLP in the bovine growth hormone (bGH) gene I I Animal Genetics. 2000. V.31. P.210 213.

88. Lagziel A., Lipkin E., Soller M. Association between SSCP haplotypes at the bovine growth hormone gene and milk protein percentage // Genetics. 1996. V. 142. P. 945-951.

89. Lagziel A., Lipkin E., Ezra E., Soller M., Veller J.I. An Mspl polymorphism at the bovine growth hormone (bGH) gene is linked to a locus affecting milk protein percentage // Animal Genetics. 1999. V.30. P.296-299.

90. Lagziel A., Soller M. DNA sequence of SSCP haplotypes at the bovine growth hormone (bGH) gene И Animal Genetics 1999. V. 30. P. 362-365.

91. Lanchbury J.S. Techniques used to define human MHC antigens: monoclonals, class I and class II biochemistry. // Immunol. Lett. 1991 V. 29. P. 23-29.

92. Ledwidge S.A., Mallard B.A., Gibson J.P., Jansen G.B., Jiang Z.H. Multi-primer target PCR for rapid identification of bovine DRB3 alleles // Animal Genetics. 2001 V. 32. P. 219-221.

93. Lee B.K., Lin G.F., Crooker B.A., Murtauth M.P., Hansen L.B., Chester-Jones H. Association of somatotropin (bST) gene polymorphism with selection for milk yield in Holstein cows // J. Dairy Science. 1993. V. 76 Suppl.l. P. 149.

94. Lee B.K., Lin G.F., Crooker B.A., Murtaugh M.P., Hansen L.B., Chester-Jones H. Association of somatotropin (bST) gene polymorphism at the 5th exon withselection for milk yield in Holstein cows. // Domest Anim Endocrinol. 1996. V. 13. P. 373-81.

95. Leveziel. J. Basedow's disease// Soins. 1983. V.404. P. 41-42.

96. Lewin H.A. Disease resistence and immune response genes in cattle: strategies for their detection and evidence of their existence// J. Dairy Sci. 1989. V. 72. P. 13341338.

97. Lewin H., Bernoco D. Evidence for BoLA-linked resistance and susceptibility to subclinical progression of bovine leukaemia virus infection // Animal Genetics. 1986. V. 17. P. 197-207.

98. Lewin H.A., Ming-Che Wu., Steawart J.A., Nolan T.J. Association between BoLA and subclinical bovine leukemia virus infection in a herd of Holstein-Friesian cows//Immimogenetics. 1988b. V. 25. P. 338-344.

99. Lewin H.A., Schmitt K., Hubert R., Vanelik M. I. Т., Arnheim N., Close linkage between bovine prolactin and BoLA-DRB3 genes mapping in cattle by single sperm typing//Genomics. 1992. V. 13. P. 44-48.

100. Lewin H., Wu M., Nolan T. et al. Peripheral В lymphocyte percentage as an indicator of subclinical progression to bovine leukemia virus infection //J. Dairy Sci. 1988a. V. 71. P. 2526-2534.

101. Lindberg P.G, Andersson L. Close association between DNA polymorphism of bovine major histocompatibility complex class I genes and serological BoLA-A specificities.//Animal Genetics. 1988. V. 19. P. 245-255.

102. Lucy M.C., Hauser S.D., Eppard P.J., Krivi G.G., Clark J.H., Bauman D.E., Collier R.J. Variants of somatotropin in cattle: gene frequencies in major dairy breeds and associated milk production. //Domest Anim Endocrinol. 1993. V. 10. P. 325-333.

103. Lunden A., Sigurdardottir S., Edfords-Lilja I. et al. The relationship between major histocompatibility complex class II polymorphism and disease studied by use ofbull breeding values//Animal Genetics. 1990. V. 21. P. 221-232.

104. MacHugh D.E., Shriver MD., Loftus R.T., Cunningham P., Bradley D. Microsatellite DNA variation and the evolution, domestication and phylogeography of Taurine and Zebu cattle (Bos taurus and Bos indicus) // Genetics. 1997. V. 146. P. 1071 1086.

105. Maillard J.C., Chantal I., Berthier D. Sequencing of four new BoLA-DRB3 and six new BoLA-DQB alleles // Animal Genetics. 2001. V. 32. P. 44-46.

106. Maillard J.C., Renard C., Chardon P., Chantal I., Bensaid A. Characterisation of 18 new BoLA-DRB3 alleles // Animal Genetics. 1999. V. 30. P. 200-203.

107. Maurer R.A. Transcriptional regulation of prolactin synthesis and prolactin messenger RNA accumulation in cultured pituitary cells // Nature. 1981. V. 294. P. 94-97.

108. Mikko S., Andersson L. Extensive MHC class II DRB3 diversity in African and European cattle// Immunogenetics. 1995. V. 45. P. 408-413.

109. Mikko S., Lewin H.A., Anderson L., A phylogenetic analysis of cattle DRB3 alleles with a deletion of codon 65 // Immunogenetics. 1997. V.47. P. 23 -29.

110. Miretti M.M., Ferro J.A., Lara M.A., Contel E.P. Restriction fragment length polymorphism (RFLP) in exon 2 of the BoLA-DRB3 gene in South American cattle // Biochem. Genet. 2001. V. 39. P. 311-324.

111. Mirsky M.L., Olmstead C.Da., Lewin H.A. Reduced bovine leukaemia virus proviral load in genetically resistant cattle// Animal Genetics. 1998. V. 29. P. 245252.

112. Mitra A., Schlee P., Balakrishnan C.R., Pirchner F. Polymorphism at growth -hormone and prolactin loci in Indian cattle and buffalo // J. Anim. Breed. Genet. 1995.V. 112. P. 71 -74.

113. Mullis K.B.The polymerase chain reaction in an anemic mode: how to avoid cold oligodeoxyribonuclear fusion. // PCR Methods Appl. 1991. V. 1. P. 1-4.

114. Nagaoka Y., Kabeya H., Onuma M. et al. Ovine MHC class II DRB1 alleles associated with resistance or susceptibility to development of bovine leukemia virus-induced ovine lymphoma // Cancer Res. 1999. V.59. P. 975-981.

115. Nakamura Y. The Japan Society of Human Genetics Award Lecture. Application of DNA markers to clinical genetics. //Jpn. J. Hum. Genet. 1996. V. 41. P. 1-10.

116. Nepom G.T. Determinants of genetic susceptibility in HLA-associated autoimmune disease. // Clin. Immunol. Immunopathol. 1989. V. 53. P. 53-62.

117. Oliver R.A., Morgan A.L.G., Miller P., Spooner R.L. A genetic study of BoLA antigens and their frequency in several British breeds // XVIIth Conf. Anim. Blood. Grps. Biochem. Polymorph. Wageningen. 1980.

118. Ostergard H., Berd P. Cattle MHC (BoLA) class I variation and female fertility // Animal Genetics. 1991. V.22, Suppl. 1. P. 104.

119. Ostergard H., Jensen N.E. Statistical analysis of associations between cattle MHC (BoLA) and subclinical mastitis // Animal Genetics. 1989. V. 20. P. 26-28.

120. Park C.A., Hines H.C., Monke D.R. Association between the bovine major histocompatibility complex and posterior spinal paresis in Holstein bulls // Animal Genetics. 1991. V.22. Suppl. 1. P. 94-95.

121. Potter L.M., Shelton J.R., McCarthy J.P. Lysine and protein requirements of growing turkeys. // Poult. Sci. 1981. V. 60. P. 2678-2686.

122. Pudovkin A.I., Zaykin D.V., Hedgecock D. On the potential for estimating the effective number of breeders from heterozygote-excess in progeny. // Genetics.1996. V. 144. P. 383-387.

123. Rask L., Andersson L., Gustafsson K., Jonsson A.K. Parsimony analysis of mammalian class II histocompatibility genes // Immunol. Rev. 1990. V. 113. P. 187-206.

124. Ritz L.R., Glovvatzki-Mullis M.L., MacHugh D.E., Gaillard C. Phylogenetic analysis of the tribe Bovini using microsatellites // Animal Genetics. 2000. V. 31. P. 178 185.

125. Rocha J.L., Baker J.F., Womfck J.T., Sanders J.O., Naylor J.F., Statistical associations between restriction fragment length polymorphisms and quantitative traits in beef cattle // J. Anim. Sci. 1992 V. 70. P. 3360-3370.

126. Rothel J.S., Dufty J.H., Wood P.R. Studies on the bovine MHC class I and class II antigens using homozygous typing cells and antigen-specific BoT4+blat cells// Animal Genetics. 1990. V. 21. P.141-148.

127. Russel G.C., Davies C.J., Andersson L. et al. BoLA class II nucleotide sequences, 1996: report of the IS AG BoLA Nomenclature Committee. // Animal Genetics1997. V. 28. P. 169-180.

128. Russell G.C., Marello K.L., Gallagher A., McKeever D.J., Spooner R.L. Amplification and sequencing of expressed DRB second exons from Bos indicus II Immunogenetics. 1994. V. 39. P. 432-436.

129. Sagata N., Yasunaga Т., Tsuzuku Kawamura J. et al. Complete nucleotide sequence of the genome of bovine leukemia virus: its evolutionary relationship to other retroviruses // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985. V. 82. P. 677-681.

130. Saiki R. K., Gclfand P. H., Staffel S. et al., Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA Polymerase // Science. 1988. V. 239. P. 487-491.

131. Sarmiento U.M., DeRose S., Sarmiento J.I., Storb R. Allelic variation in the DQ subregion of the canine major histocompatibility complex: I. DQA. // Immunogenetics. 1992. V. 35(6). P. 416-20.

132. Sarmiento U.M., Sarmiento J.I., Storb R. Allelic variation in the DR subregion of the canine major histocompatibility complex.// Immunogenetics. 1990. V. 32. P. 13-19.

133. Sarmiento U.M., Storb R. Nucleotide sequence of a dog class I cDNA clone. // Immunogenetics. 1990a. V. 31. P. 400-404.

134. Sarmiento U.M., Storb R. Nucleotide sequence of a dog DRB cDNA clone // Immunogenetics. 1990b. V. 31. P.396-399.

135. Scott P.C., Gogolin-Evvens KJ, Adams ТЕ, Brandon MR. Nucleotide sequence, polymorphism, and evolution of ovine MHC class II DQA genes // Immunogenetics. 1991a. V.34. P. 69-79.

136. Scott P.C., Madox J.F., Cogolin-Ewens K.J., Brandon M.R. The nucleotide sequence and evolution of ovine MHC class II В genes: DQB and DRB // Immunogenetics. 1991b. V.34. P. 80-87.

137. Sell S., Hunt J.M., Knoll B.J., Dunsford H.A. Cellular events during hepatocarcinogenesis in rats and the question of premalignancy // Adv. Cancer Res. 1987. V. 48. P. 37-111.

138. Sigurdardottir S., Borsch C., Gustafsson K., Andersson L. Cloning and sequence analysis of 14 DRB alleles of the bovine major histocompatibility complex byusing the polymerase chain reaction. // Animal Genetics. 1991a. V. 22. P. 199209.

139. Sigurdardottir S., Borsch C., Gustafsson K., Andersson L. Conserved polymorphism at major histocompatibility DRB loci in man and cattle // Animal Genetics. 19916. V. 22. P. 59-60.

140. Sigurdardottir S., Lunden A., Andersson L. Restriction fragment length polymorphism of DQ and DR class II genes of the bovine major histocompatibility complex.//Animal Genetics. 1988. V. 19. P.133-150.

141. Sitte K., Brinkworth R., East I.J., Jazwinska EC. A single amino acid deletion in the antigen binding site of BoLA-DRB3 is predicted to affect peptide binding // Vet. Immunol. Immunopathol. 2002. V. 85. P. 129-135.

142. Sitte K., East I.J., Lavin M.F., Jazwinska E.C. Identification and characterization of new BoLA-DRB3 alleles by heteroduplex analysis and direct sequencing. // Animal Genetics. 1995. V. 26. P. 413-417.

143. Spies Т., Morton C.C., Nedospasov S.A., Fiers W., Pious D., Strominger J.L. Genes for the tumor necrosis factors alpha and beta are linked to the human major histocompatibility complex. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V. 83. P. 86998702.

144. Spooner R.L., Leveziel H., Grosclaude F., Oliver R.A., Vaiman M. Evidence for a possible major histocompatibility complex (BoLA) in cattle // J. Immunogenet. 1978. V. 5. P. 325-346.

145. Starkenburg R.J., Hansen L.B., Kehrli M.E. Jr., Chester-Jones H. Frequencies and effects of alternative DRB3.2 alleles of bovine lymphocyte antigen for Holsteins in milk selection and control lines. // J. Dairy. Sci. 1997. V. 80. P. 3411-3419.

146. Stear M.J., Dimmock C.K., Newman M.J., Nicholas F.W. BoLA antigens are associated with increased frequency of persistent lymphocytosis in bovine leukaemia virus//Animal Genetics. 1988a. V. 19. P. 151-158.

147. Stear M.J., Pokorny T.S. et al. Breed differences in the distribution of BoLA-A locus antigens in American cattle // Animal Genetics. 1988b. Vol. 19. P. 171176.

148. Strominger I.L. Human Major Histocompatibility Complex Genes: class I antigens and Tumor Necrosis Factor// Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 1986. V. 11. P. 63-66.

149. Sulimova G.E., Udina I.G., Karamysheva E.E., Turkova S.O. and Orlova A.R. BoLA-DRB3-associated resistance to persistent lymphocytosis in Russian dairy cattle //The International Conference on Animal Biotechnology. China. 1997. P. 81-84.

150. Sutton V.R., Knowles R.W. An aberrant DRB4 null gene transcript is found that could encode a novel HLA-DR beta chain // Immunogenetics. 1990. V. 31. P. 112117.

151. Takashima I., Olsen C. Histocompatibility antigens in bovine lymphosarcoma. A preliminary study//Ann. Rech. Vet. 1982. V. 9. P. 821-823.

152. Takeshima S., Ikegami M., Morita M., Nakai Y., Aida Y. Identification of new cattle BoLA-DRB3 alleles by sequence-based typing // Immunogenetics. 2001. V.53. P. 74-81.

153. Takeshima S., Nakai Y., Ohta M., Aida Y. Short communication: characterization of DRB3 alleles in the MHC of Japanese shorthorn cattle by polymerase chain reaction-sequence-based typing//J. Dairy Sci. 2002. V. 85. P. 1630-1632.

154. Teatle A.J., Kemp S.I. A product of a second BoLA class I locus detected by a bovine monoclonal antibody // XXI st Int. Conf. Animal Blood Grps. and Biochem. Polymorph. Turin, 1988. P. 71.

155. Trowsdale J. Molecular organization of the MI 1С molecules // Immunological letters. 1991. V. 29. P. 178.

156. Unanian M.M., DeNise S.K., Zhang H.M., Ax R.L. Rapid communication: polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism in the bovine growth hormone gene. // J. Anim. Sci. 1994. V. 72. P. 2203.

157. Vaiman M., Chardon P., Cohen D. DNA polymorphism in the major histocompatibility complex of man and various farm animals. // Animal Genetics. 1986. V. 17. P. 113-133.

158. Van Eijk M.J., Beever J.E., Da Y., Stewart J.A., Nicholaides G.E., Green C.A., Lewin H.A. Genetic mapping of BoLA-A, CYP21, DRB3, DYA, and PRL on BTA23. // Mamm. Genome. 1995. V. 6. P. 151-152.

159. Van Eijk M.J.T., Stewart-Haynes J.A., and Lewin H.A. Extensive Polymorphism of the BoLA-DRB3 Gene Distinguished by PCR-RFLP // Animal Genetics. 1992. V. 23. P. 483 -496.

160. Williams I.L., Oliver R.A., Spooner R.L. Variation in BoLA antigens on bovine lymphocytes following infection with Theileria anmulata // Animal Genetics. 1991. V.22. Suppl. 1. P. 43.

161. Winkler Ch., Schults A., Ccvario St., O'Brien St. Genetic characterisation of FLA the cat major histocompatibility complcx // Proc.Natl Acad. Sci. USA. 1989. V.86. P.943-947.

162. Wolf D.V.A., and Deutch A.U. Identification of distal regulatory element in 5' flanking region of bovine prolactin gene // Nucleic Acids Res. 1990. V. 18. P.4905 -4912.

163. Woychik,R.P., Camper,S.A., Lyons,R.H., Horowitz,S., Goodwin,E.C. and Rottman,F.M. Cloning and nucleotide sequencing of the bovine growth hormone gene // Nucleic Acids Res. 1982. V. 10 . P. 7197-7210.

164. Xu A., Lewin H.A. Characterization of bovine malor histicompatibility complex class II genes using the polymerase reaction // Animal Genetics. 1991. V.22. Suppl. 1. P. 61-62.

165. Xu A., Van Eijk M.J.T., Park Ch. and Lewin H.A. Polymorphism in BoLA-DRB3 Exon 2 correlates with resistance to persistent lymphocytosis caused by Bovine Leukemia Virus // J. Immunol. 1993. V. 151. P. 6977 6985.

166. Yuhki N., Heidecker G.F., O'Brien S.J. Characterization of MHC cDNA clones in the domestic cat. Diversity and evolution of class I genes.// J. Immunol. 1989. V. 15; 142. P. 3676-3682.

167. Yuhki N., O'Brien S.J. Molecular characterization and genetic mapping of class I and class II genes for the domestic cat // Immunogenetics. 1988. V. 27. P. 414425.

168. Yuhki N., O'Brien S.J. DNA variation of the mammalian major histocompatibility complex reflects genomic diversity and population history. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V. 87. P. 836-40.

169. Zanotti M., Poli G., Poli W. et al. Association of the BoLA class II haplotypes with subclinical progression of bovine leukaemia virus infection in Holstein-Friesian cattle//Animal Genetics. 1996. V. 27. P. 337-341.

170. Zhang H.M., DeNisc S.K., Ax R.L. Rapid communication: Diallelic single-stranded conformational polymorphism detected in the bovine prolactin gene // J. Anim. Sci. 1994. V. 72. P. 256.

171. Zoorob R., Behar G., Kroemer G., Auffray Ch. Polymorphism of class II MHC genes in the domestic fowl//Animal Genetics. 1991. V.22. S.l. P.621. Благодарности

Информация о работе

Туркова, Светлана Олеговна
кандидата биологических наук
Москва, 2003
ВАК 03.00.15

Диссертация

Полиморфизм генов Bola-DRB3, пролактина и гормона роста у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью к лейкозу и молочной продуктивностью - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы