Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Использование маркера BOLA-DRB3 в селекционно-племенной работе с крупным рогатым скотом

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Использование маркера BOLA-DRB3 в селекционно-племенной работе с крупным рогатым скотом"

На правах рукописи

САЦУК ВЛАДИМИР ФЁДОРОВИЧ

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МАРКЕРА BOLA - DRB3 В СЕЛЕКЦИОННО-ПЛЕМЕННОЙ РАБОТЕ С КРУПНЫМ РОГАТЫМ СКОТОМ

06.02.01 - разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ставрополь, 2009

003489235

Работа выполнена на кафедре технологии животноводства Кубанского государственного аграрного университета

Научный руководитель:

доктор сельскохозяйственных

наук, профессор

Тузов Иван Никифорович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Букаров Нурмагомед Гаджикулиевич

доктор сельскохозяйственных наук, профессор

Чижова Людмила Николаевна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Кубанский

государственный университет»

Защита диссертации состоится 25 декабря 2009 г., в 14 часов, на заседании диссертационного совета Д 006.078.01 при Ставропольском научно-исследовательском институте животноводства и кормопроизводства по адресу: Ставропольский край, пер. Зоотехнический 15, тел./факс (8652)34-76-88

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского научно-исследовательского института животноводства и кормопроизводства

Автореферат разослан 23 ноября 2009 г. и размещен на официальном сайте института - http:www.sniizhk.ru 23 ноября 2009 года

Ученый секретарь * ^ £

диссертационного совета уМ- ^7/* М.И.Селионова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Темпы генетического улучшения молочного стада на 85-90% определяется племенной ценностью используемых в воспроизводстве быков - производителей. Следовательно, оценка их генетических качеств является одним из главных звеньев племенной работы в молочном скотоводстве. Племенная ценность производителя характеризуется рядом признаков и показателей. Это не только продуктивность дочерей, но и особенности их конституции и экстерьерные показатели, в первую очередь, крепость конечностей и свойства вымени, устойчивость к заболеваниям.

Совершенствование методов оценки животных, их отбора в основные селекционные группы, научное обоснование подбора и интенсивности использования производителей, имеющих лучшие, генетически обусловленные хозяйственно - полезные признаки - важнейшая задача сельскохозяйственной биологии. В этой связи выявление на основе ДНК анализа маркерных аллелей, свидетельствующих о наличии у тестируемых животных позитивных селекционных признаков, обуславливающих высокую продуктивность, устойчивость к заболеваниям и длительное хозяйственное использование - важнейший инструмент в преобразовании современного молочного скотоводства в высокоэффективную отрасль АПК России [Эрнст, 2009]. В частности, ген ВоЬА- ОЯВЗ представляет интерес как универсальный маркер, связанный с резистентностью, показателями продуктивности и биологическим разнообразием групп крупного рогатого скота [Ки1Ье^, Непг^ас!, Сийегэгис!, 01эакег, 2007].

Цель и задачи исследований. Целью настоящих исследований явилось изучение возможности селекции животных по локусу ВоЬА- ОЯВЗ для повышения молочной продуктивности и продолжительности племенного использования разводимого поголовья айрширского и голштин-ского скота.

Для достижения цели работы были поставлены и решены следующие задачи:

- определить частоту встречаемости полиморфных вариантов гена ВоЬА- ОЯВЗ у используемых в воспроизводстве популяций быков - производителей айрширской и голштинской пород;

- выявить характер связи структуры гена ВоЬА- ВКВЗ тестируемых быков с породной и генеалогической принадлежностью, оценкой их племенных качеств;

-разработать селекционную схему выведения и репродукции животных желательных генотипов по ВоЬА- ЭЯВЗ и её использование в работе со стадами молочного скота.

Научная новизна исследований. Впервые в России изучены закономерности распространения ВоЬА- ВИВЗ аллелей и генотипов в популяциях быков айрширской и голштинской пород. Научно обоснован и внедрён в производство селекционный способ повышения молочной продуктивности и устойчивости к заболеваниям крупного рогатого скота (Патент РФ № 2316207). Предложены технологические схемы использования ВоЬА- ВЛВЗ - генотипирования для увеличения срока племенного использования крупного рогатого скота.

Практическая значимость и реализация результатов исследований. Модели отбора и подбора производителей к маточному поголовью в молочном скотоводстве внедрены в 60 товарных и племенных хозяйствах ЮФО Российской Федерации. Ряд установленных закономерностей можно использовать учреждениям по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных при комплектовании быками-производителями.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

• маркирование некоторыми ВоЬА - ВЯВЗ аллелями и генотипами генетических блоков, связанных с обильномолочностью, жирномолочностью, белковомолочностью;

• селекционно - генетический способ повышения продуктивности и устойчивости крупного рогатого скота;

• существование зависимости частот встречаемости устойчивых, нейтральных и чувствительных аллелей локуса ВоЬА - БЯВЗ от породной принадлежности крупного рогатого скота.

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации докладывались на научных конференциях факультета зоотехнологии и менеджмента Кубанского государственного аграрного университета в 2007-2009 гг., а так же обсуждались на краевых совещаниях с участием специалистов зооветеринарного профиля. Результатом исследований явилась разработка «Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота», удостоенная серебряной медали на VII Московском международном салоне инноваций и инвестиций в 2007 г. и

бронзовой медали на 10 юбилейной российской агропромышленной выставке в 2008 г. (г. Москва). Материалы диссертации использовались в учебном процессе ФГОУ ДПО «Краснодарский региональный институт агробизнеса» и докладывались на IV Международной научной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве», посвященной 100-летию со дня рождения академика Николая Александровича Шманенкова в 2006 году (г. Боровск).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, все по теме диссертации, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК РФ: «Вестник РАСХН», «Зоотехния», «Животноводство России» - 5 работ. Приоритет исследований подтверждён патентом Российской Федерации (№ 2316207).

Структура и объём работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, глав собственных исследований, заключения, выводов, предложений производству, списка использованных источников, включающего 133 работы, в том числе 64 зарубежных авторов. Работа изложена на 118 страницах машинописного текста, содержит 27 таблиц, 6 рисунков и 1 приложение.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проведены на базе лаборатории биотехнологии СевероКавказского научно- исследовательского института животноводства Рос-сельхозакадемии и кафедры технологии животноводства Кубанского государственного аграрного университета в период с 2005 по 2009 гг. Гено-типирование быков - производителей по образцам спермы, коров по образцам крови выполнено в лаборатории биотехнологии. Общий объём выборки составил 932 животных (435 быков и 497 коров). Анализировались быки, принадлежащие ОАО «ГЦВ», ОАО «Московское» по племенной работе, ОАО «Краснодарское» по племенной работе, ГУПП РК «Ка-релиягосплем», ОАО «Невское» по племенной работе и ОАО «Плем-предприятие «Череповецкое», в основной своей массе используемые и планируемые к использованию в системе искусственного осеменения Краснодарского края, а так же коровы ЗАО «Дружба» Приморско-Ахтарского района, ЗАО «СКВО» Ростовской области, ОАО «Агрообъё-динение «Кубань» Усть-Лабинского района и ОАО «Племзавод им. Чапаева В.И.» Динского района.

Для выделения ДНК, постановки ПЦР, ПДРФ-анализа, электрофореза лаборатория применяла описанные в литературе методики [Van Eijk, Stewart-Haynes, Levin, 1992; Xu, M. Van Eijk., Park, 1993; Херринг-тон и др., 1999].

Статистическая обработка результатов производилась по стандартным методикам [Лакин, 1980] с использованием программных возможностей Microsoft Exel.

Исследования проводились по следующей схеме:

Генотипирование групп быков по локусу BoLA - DRB3 (п=435)

айрширскои породы (п=113)

других пород (11=29)

голштинскои породы (11=293)

_Изучение частот встречаемости аллелей и генотипов_

_в группах быков айрширской и голштинской пород_

в группах быков, принадлежащих разным племпредприятиям

_в группах быков, принадлежащих различным линиям_

в группах быков, принадлежащих различным племенным категориям

_в группах коров голштинской и айрширской пород_

Изучение взаимосвязи генотипа по локусу ВоЬА- РКВЗ _и обильномолочности (п=497)_

Разработка схем применения установленных закономерностей в _работе со стадами крупного рогатого скота_

Рисунок 1. Схема проведения исследований

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Распределение аллелей и генотипов по локусу ВоЬА-ОЯВЗ у быков - производителей айрширской и голштинской пород

Генотипированием по локусу ВоЬА-ОИВЗ образцов спермы, полученных от быков-производителей различных пород, установлены частоты встречаемости генотипов и аллельных вариантов этого локуса у 435 животных, в том числе у 293 представителей голштинской и 113 - айрширской породы (табл. 1).

Таблица 1

Принадлежность генотипированных быков

Принадлежность быков (гол.) Порода

голштинская айрширская другие

ОАО «ГЦВ» (п=162) 126 14 22

ГУПП «Карелиягос-плем» (п=38) - 38 -

ОАО «Краснодарское» по племенной работе (п=27) 22 4 1

ОАО «Московское» по племенной работе (п=104) 104 -

ОАО «Невское» по племенной работе (п=70) 41 28 1

ОАО «Племпредприя-тие «Череповецкое» (п=10) - 10 -

Ассоциация РАВА (Финляндия) (п=19) - 19 -

Норвегии (п=5) - - 5

Итого п=435 293 113 29

Выявлено, что голштинские и айрширские производители существенно отличаются друг от друга по частотам встречаемости генотипов (табл. 2). Так, в профиле айрширской породы преобладают Н/Н генотипы (65, 49 %), а голштинской - Н/Ч и Ч/Ч (33, 44 и 34,47% соответственно).

Таблица 2

Частота встречаемости BoLA-DRB3 генотипов у быков-производителей голштинской и айрширской пород

Генотип BOLA-DRB31 Частота встречаемости, %

в группе голштинских быков (п=293) в группе айрширских быков (п= 113)

(НШ) 7 J7*** 65,49

(Н\Ч) 33,44*** 16,82

(Ч\Ч) 34;47*** 2,65

(У\У) 2,39 -

(Н\У) 7,51 10,62

(У\Ч) 15,02** 4,42

Примечание: здесь и далее * рядом со значениями частот - Р<0.05; ** - Р<0.01; ***-Р<0.001.

При сравнении аллельных профилей исследуемых групп установлено, что в профиле голштинской породы преобладают Ч - аллели, частота их встречаемости составляет 59,79%. В профиле айрширской — Н-аллели (встречаются с частотой 75,46%). Наиболее типичными для голштинов являются BoLA-DRB3 *32, *8, *11, *16, *22, *24 аллели; для айрширов -BoLA-DRB3* 1, *3, *7, *8, *18 и *27 аллели.

- BoLA-DRB3 - ген, отвечающий за первичный иммунный ответ крупного рогатого скота на вирусные и бактериальные патогенны [А. Xu, М. J.T. Van Eijt, Ch. Park, 1993; Г.Е. Сулимова, ИТ. Удина, Г.О. Шайхаев, И.А. Захаров, 1995]; Ч, У, Н — аллели - аллели BoLA-DRB3, различающиеся по статусу устойчивости к инфекционным заболеваниям:

аллели, обуславливающие чувствительность(Ч): BoLA -DRB3*8,*16, *22, *24; устойчивость-(У): BoLA -DRB3 *11,*23, *28;

нейтральные (Н): BoLA -DRB3 *1, *2, *3 и др., влияние которых на восприимчивость или устойчивость не было отмечено. Ч/Ч, Ч/У, Н/Ч, У/У, Н/У, Н/Н- генотипы локуса BoLA-DRB 3. 2 - BoLA-DRB3*3 - обозначение аллеля локуса BoLA-DRB3, в данном случае третьего; BoLA-DRB3 11*22 - обозначение конкретного генотипа, например, генотипа одиннадцать/двадцать два

Следует отметить, что безусловное лидерство в распространении среди голштинов принадлежит BoLA-DRB3 *24 (аллель встречен с частотой 22, 02%); у айрширов мономорфизм ещё более выражен - частота встречаемости аллеля BoLA-DRB3 *7 составляет 26, 99 %. Если говорить об абсолютных значениях, то 115 из 293 (39,25 %) быков голштинской породы в тех или иных сочетаниях несут в своём генотипе аллель BoLA-DRB3 *24 и 49 из 113 (43,36 %) быков айрширской породы - BoLA-DRB3

*7

Нами установлено, что из 293 быков голштинской породы 30 (или 10,23 %) - гомозиготны (причём 46,67% из них несут генотип 24*24 и 20,00% генотип - 22*22); а у айрширов 17 (или 15,04 %) из 113 быков гомозиготны (из 17 гомозиготных быков - 12 или 70, 59% несут генотип 7*7). Таким образом, уровень гомозиготности быков айрширской породы превосходит уровень гомозиготности голштинской в 1,5 раза.

Проведённые исследования позволяют выявить ряд общих черт, характерных для быков-производителей айрширской и голштинской пород:

1. Аллельная «узость» - из описанных в литературе более чем 50 разновидностей аллелей BoLA-DRB3 гена (ПДРФ типов), нами встречено у 391 быка лишь 26, причём значительная часть этих аллелей находится в процессе элиминации, а некоторые, напротив занимают лидирующие с большим отрывом позиции, что свидетельствует об их селекционной предпочтительности. Однако, от BoLA-DRB3 генотипа зависит наследственная предрасположенность к развитию ряда заболеваний и со снижением генетического разнообразия по этому локусу, может произойти ограничение пределов компетентности иммунной системы у отдельных животных и стад в целом, что может сделать их уязвимыми перед внешними неблагоприятными воздействиями;

2. Для наиболее распространённых аллелей и генотипов характерны временные подъёмы и спады частот встречаемости. Вполне вероятно, что частота встречаемости того или иного аллеля в процессе подобных колебаний достигает некоторого пикового значения, а потом начинает резко снижаться. Мы связываем это с эффектом «насыщения», когда несмотря на явную селекционную предпочтительность того или иного аллеля (например, *24 - у голштинов), эффект его присутствия нивелируется высоким уровнем гомозиготности (появляется много животных с генотипом 24*24) и аллель несколько «сдает» свои лидирующие позиции, уступая аналогичным аллелям (например, *22 или *8), а затем возвращается на «свои позиции».

3.2. Распределение аллелей и генотипов по локусу ВоЬА-БКВЗ у быков - производителей айрширской и голштинской пород, принадлежащих различным племпредприятиям

Одной из поставленных задач исследований было определение отличий в ВоЬА-ОЯВЗ профиле у быков - производителей различных плем-предприятий. Для этого проанализированы быки айрширской и голштинской пород, принадлежащие ОАО «ГЦВ», ОАО «Московское» по племенной работе, ОАО «Краснодарское» по племенной работе, ГУПП РК «Карелиягосплем», ОАО «Невское» по племенной работе и ОАО «Племпредприятие «Череповецкое». Обоснованием проведения данных исследований служило то, что подходы к комплектованию поголовья быков, в силу тех или иных причин, различаются на отдельных плем-предприятиях. Так, например, из 57 быков голштинской породы чёрно-пёстрой масти, представленных в каталоге ОАО «Московское» по племенной работе за 2008-2009 гг. 35 имеют немецкое происхождение, 13 -американское, 7 - российское, 2 - канадское. А в каталоге ОАО «ГЦВ» из 82 голштинских черно-пёстрых быков: 17 - датские, 9 - голландские, 2 -канадских. 54 - родились в России, 17 из них имеют российских матерей, остальные - получены путём трансплантации эмбрионов, импортированных из Дании, Голландии и США, либо - от импортированных из этих стран матерей.

Установлено, что наибольший полиморфизм ВоЬА-ВЛВЗ аллелей и генотипов представлен у голштинов черно-пестрой и красно-пёстрой масти, принадлежащих ОАО «ГЦВ» и айрширов ГУПП РК «Карелиягосплем».

Тенденции преобладания у голштинов Ч - аллелей характерны для быков всех племпредприятий, однако, у быков ОАО «Московское» по племенной работе они преимущественно входят в состав Ч/Ч (48,31%), а у ОАО «Краснодарское» по племенной работе, ОАО «Невское» по племенной работе и ОАО «ГЦВ» - Н/Ч генотипов (53,85%, 43,90% и 36,00% - соответственно).

Нами были так же генотипированы лучшие быки Финляндии, принадлежащие ассоциации БАБА. Полученные данные представлены в таблице 3. Анализ табл.3 показывает, что финским селекционерам практически удалось «избавиться» от У- и Ч - аллелей у своих лучших быков - производителей и элиминировать большинство нейтральных аллелей, за исключением ВоЬА-ОЫВЗ*7 (28,95%), ВоЬА-011ВЗ*1 ( 28,95%) и ВоЬА-ОЫВЗ* 12 (10,53%).

Таблица 3

Частоты встречаемости ВоЬА-БШЗЗ аллелей в группе быков айрширской породы ассоциации РАВА (Финляндия)

Аллель ВоЬА-ОЯВЗ Частота встречаемости (п=19), %

1 28,95

2 2,63

7 28,95

8 5,26

10 2,63

11 2,63

12 10,53

21 5,26

23 2,63

25 2,63

27 7,90

Н 89,47

Ч 5,26

У 5,26

В данном случае можно говорить о значительном снижении ал-лельного разнообразия ВоЬА-ОКВЗ и, как следствие, мономорфизме генов, отвечающих за молочную продуктивность.

3.3. К вопросу о целесообразности разведения молочного скота по линиям и межлинейного кроссирования

Как правило, чем сильней различаются генетические профили групп животных, в частности по локусу ВоЬА- ОЯВЗ, тем дальше филогенетически эти группы отстоят друг от друга. Известно, что линии теоретически являются следующим «подразделением» после породы и типа. Логично предположить, что каждая линия, как нечто единое и консолидированное, должна отличаться от других своими частотами отдельных аллелей и генотипов.

При объединении животных, принадлежащих одним линиям, но разным племпредприятиям, можно наблюдать определённые отличия частот встречаемости аллелей и генотипов ВоЬА-ВШЗ (табл.4).

Таблица 4

Частоты встречаемости ВоЬА-БЯВЗ генотипов в группах быков - производителей различных линий голштинской породы __черно-пестрой масти_

Генотип ВоЬА-ОКВЗ Частота встречаемости, %

линия Рефлекшен Соверинг 198998 (п=66) линия Уес Идеал 933122 (п=110) линия Монтвик Чифтэйн 95679 (п=48)

(Н\Н) 9,09 8,18 6,25

(Н\Ч) 34,85 33,64 29,17

(Ч\Ч) 31,82 37,27 39,58

(У\У) 3,03 1,82 4,17

(Н\У) 7,58 7,27 4,17

(У\Ч) 13,64 11,82 16,67

Так в линии Рефлекшен Соверинг 198998 высокая частота встречаемости Во1А-ВКВЗ*16 (20,45%), в линии Уес Идеал 933122 - ВоЬА-ОКВЗ*22 и ВоЬА-ОКВЗ *24 (18,64 %), а в линии Монтвик Чифтейн 95679 ВоЬА-ОКВЗ *24 (29,17%).

При рассмотрении же линий в разрезе отдельно взятых племпред-приятий (например, ОАО «Московское» по племенной работе и ОАО «ГЦВ») отличия становятся более значимыми (табл. 5),

Так, например, частота встречаемости Ч-аллелей в линиях Рефлекшен Соверинга 95679, Уес Идеала 933122 и Монтвик Чифтэйна 198998 «ГЦВ» составляет соответственно 51,79%, 50,00%, 54,00% (то есть, практически не отличается). Аналогичные показатели ОАО «Московское» по племенной работе составляют - 62,00%, 65,56% и 73,68% (а разница между частотой встречаемости Ч-аллелей в линии Монтвик Чифтэйна 198998 «ГЦВ» и линии Монтвик Чифтэйна 198998 «Московское» -73,68% - 54,00% = 19,68 %). Подобные расчёты можно привести и для других аллелей и генотипов.

Таким образом, маркер ВоЬА- БКВЗ позволил установить, что понятия линии как некой обособленной структуры, обладающей выраженными генетическими отличиями, в данный момент не существует, что отличия, в большей степени, зависят от того, из какой страны преимущественно ввезены быки - производители конкретного племпредприятия.

Таблица 5

Частоты встречаемости ВоЬА-ВКВЗ генотипов в группах быков - производителей различных линий голштинской породы черно-пестрой масти, принадлежащих ОАО «ГЦВ» н ОАО «Московское» по племенной работе

Частота встречаемости, %

Генотип ВоЬА- ОАО «ГЦВ» ОАО «Московское» по племенной работе

ИКВЗ линия Рефлекшен Соверинг 198998 (п=28) линия Уес Идеал 933122 (п=37) линия Монтвик Чифтэйн 95679 (п=25) линия Рефлекшен Соверинг 198998 (п=25) линия Уес Идеал 933122 (п=45) линия Монтвик Чифтэйн 95679 (п=19)

(Н\Н) 10,71 18,92 8,00 8,00 4,44 5,26

(Н\Ч) 46,43 37,84 24,00 24,00 22,22 26,32

(Ч\Ч) 17,86 27,'03 28,00 44,00 46,67 57,89

(У\У) - 2,70 4,00 4,00 - 5,26

(Н\У) 3,57 5,41 8,00 8,00 11,11 -

(У\Ч) 21,43 8,11 28,00 12,00 15,56 5,26

У айрширов мы наблюдаем явление, названное нами «скрытым инбридингом», когда животные различных генеалогических групп, выходящие на разных родоначальников являются гомозиготами по одному и тому же аллелю ВоЬА-ОЯВЗ- маркерного гена. С высокой степенью вероятности можно утверждать, что они гомозиготны и по другим генетическим блокам, а значит, являются по сути своей инбредными. Такой инбридинг мы называем «скрытым» потому, что его невозможно проследить или исключить, располагая данными племенных свидетельств или генеалогических схем - для его исключения необходим ДНК - анализ.

Полученные материалы позволяют вполне обосновано предположить, что негативные проблемы, имеющиеся сегодня в айрширских стадах Краснодарского края: низкий выход телят, высокий уровень поражения скота лейкозом, низкий иммунитет, наряду со многими факторами, связаны с проявлением инбредной депрессии, обусловленной воздействием «скрытого» инбридинга, и низкой частотой использования в воспроизводстве особей с устойчивыми генотипами.

Следовательно, главными задачами в планировании селекционных мероприятий по совершенствованию айрширского скота являются:

- сокращение использования в воспроизводстве гомозиготных быков, прежде всего с генотипом ВоЬА-ВИВЗ 7*7;

- активизацию расширения аллелофонда айрширской породы за счёт введения быков с редкими аллелями и генотипами.

3.4. Использование маркера ВоЬА-ОЛВЗ для прогнозирования племенной ценности быков - производителей

С целью изучения возможности использования маркера ВоЬА-ВЯВЗ для прогнозирования племенной ценности быков - производителей, было определено какие аллели и генотипы изменяют свою частоту встречаемости в выборках быков-улучшателей голштинской породы чёрно-пёстрой масти категории А, категории Б, АБ и в категории нейтральных3 по отношению к частотам в выборке оценённых быков в целом (оценка быков приведена в каталогах племпредприятий и племенных свидетельствах быков).

Обращают на себя внимание факты достоверного снижения частоты встречаемости Н/Ч генотипа в выборке улучшателей категории АБ по сравнению с улучшателями А и Б категорий (с 35,29 и 30,77 до 6,25 %). Интересно, что генотип улучшателей АБ чаще, чем в других группах представлен генотипом Ч/У (25,00% против 9,80 и 15,38%).

Для практического использования нами предложен вариант группировки данных, который позволяет, зная генотип быка-производителя, прогнозировать вероятность попадания его в ту или иную племенную категорию. В таблицу 6 вошли генотипы, встречающиеся с частотой выше 4% в группе оценённых быков - производителей (табл.6). За 100% принималось количество животных определённого генотипа (например, семь быков с генотипом ВоЬА -ПКВЗ 16*22 - 100%).

6В категорию А вошли улучшатели А1, А2, АЗ; В категорию Б - Б1, Б2, БЗ

В категорию АБ-А1Б1, А1Б2, А1БЗ, А2Б1, А2Б2, А2БЗ, АЗБ1, АЗБ2, АЗБЗ

Таблица 6

Использование маркера ВоЬА-ОКВЗ для составления прогноза

оценки быков

Генотип Вероятность попадания в группу, %

ВоЬА - ПШЗ А (п=51) Б (п=13) АБ (п=16) Н (п=24)

11*22 25,0 - 75,0 -

11*24 33,3 33,3 33,4 -

16*16 50,0 - - 50,0

16*22 14,3 28,6 42,8 14,3

16*24 42,8 14,4 - 42,8

22*24 83,3 - 16,7 -

24*24 50,0 - 25,0 25,0

24*27 25,0 75,0 - -

7*22 75,0 - - 25,0

8*22 50,0 - 25,0 25,0

8*24 57,1 - 14,3 28,6

11*23 50,0 25,0 - 25,0

Для айрширов установлено, что наличие генотипа Н/Ч увеличивает, а Н/У снижает вероятность отнесения быка в категорию улучшателей обильномолочности. В выборке улучшателей категории А чувствительные аллели встречаются в три раза чаще, чем в выборке нейтральных быков, а устойчивые в три раза реже. Аллели Во1А- ОКВЗ*7 и ВоЬА-ОКВЗ*28 чаще встречаются в выборке нейтральных быков, а ВоЬА-Т)КВЗ*21, напротив, преобладает у улучшателей категорий А1 - АЗ.

Если обобщить все данные и тенденции, описанные выше, можно сформулировать следующие гипотезы: существуют аллели локуса Во1А -ОЛВЗ маркирующие определённые признаки (такие как повышенная

обильномолочность, повышенная жирномолочность, повышенная белко-вомолочность, резистентность и т.д.). Определённую роль играет сочетаемость аллелей в генотипе (как у коров, так и быков), усиливая или подавляя действие аллеля «лидера». При изменении вектора селекционного давления преимущества получают те аллели и включающие их генотипы, которые обеспечивают максимальный результат. Практическое применение сформулированных гипотез даёт возможность моделирования того или иного эффекта в стадах путём закрепления быков, несущих определённые аллели и генотипы локуса ВоЬА - /ЖВЗ.

3.5. Использование маркера ВоЬА-ВЯВЗ в работе со стадами крупного рогатого скота

Полученные данные позволяют предположить, что зоны ассоциаций основных селекционно-значимых признаков и аллелей ВоЬА-ОКВЗ располагаются следующим образом (рис.2).

'//Л';:"////////// У/

>у/ууу//уууу///у/,

'//уу///ууу/уууу/.- -■' л.1 ,■ -■■,' ,■ .■' ,'.■' --1 .-■ -■■,■.-■ .■■ ,'.'.■■ .■ у.-у .-1 -■■.-■ у .■■ ■■' -■у / -■' ■■' ■'^ .-■ -■'.-■

*ууууууууууууу/уууу/ууууууууууу//у/уу^^у/уууууууу/у-'ууу/ууу.'/уу/у/у/ууууу

•/УУУУ///УУУУУУУУ/УУУ//УУ/УУУУУУУУ/УУУУУУ\УУУУУ/У/У////УУУТУУУУУУ>-УУ/УУУУ уууу-ууууууууууууууууу/ууууууууууууууууууу/\^уууууууу/у/у/уу;у/уу*ууууууу

•УУУУУ/У/УУУУУУУ/УУ//У//У//У/:^УУ/У/УУУУ/У/У/*0'///^^/'-?'''///-У///<'////// уууу/-//уу/уу/уу/уууууууу/уууу/у/у/ууу/уу//у/у7>^/уууу*\'уу/ууу///у//л^у 'УУУУУУ/УУ/УУУУУУУУ//У/УУУ////УУ/УУУУУУУУУУУ////\^/У/'УУУУУ.^У^Г^У'УУ ^/У//УУ///УУУ/У/УУ/У//У///УУ/УУ///УУУ//У//УУУ//У1У\^(У/^^Я^ ,Уу/?УУУ/////У

у■' у;< ■'■■>>-1 /}.! ;;','!;.>>>>V■';'.■'!!>' /

Рисунок 2. Зоны ассоциаций аллелей ВоЬА-ЪКВЗ и селекционных признаков

Если рассмотреть с позиций этой схемы идею создания «идеального животного», становится понятно, что сделать это практически невозможно (к сожалению, ген включает лишь два аллеля, а не три, то есть в любом случае возможно совмещение лишь двух блоков, маркируемых этими аллелями).

Проведён целый ряд исследований4, целью которых являлось установить степень связи ВоЬА- ОЯВЗ полиморфных вариантов с продуктивными качествами крупного рогатого скота.

Полученные результаты могут быть кратко резюмированы следующим образом:

1. Показано, что оптимальными по уровню удоя и показателям здоровья у чистопородного голштинского скота являются животные, несущие в своем генотипе один устойчивый (У) аллель и один чувствительный (Ч) аллель, при этом У-аллель является маркером повышенной устойчивости к заболеваниям, а Ч-аллель - маркером повышенной молочной продуктивности. Животные с генотипом Ч/У гена ВоЬА- ОЯВЗ гол-штинской породы в среднем на 354-1811 кг по удою за первую лактацию превосходили коров с другими генотипами данного гена (Р<0,05; Р<0,001) (таблица 7).

2. Установлено, что сочетание в генотипе голштинского скота Ч- и Н- аллелей локуса ВоЬА- 011ВЗ обуславливает пониженную молочную продуктивность и снижает период их продуктивного использования. Удой в группе коров с генотипом Н/Ч гена ВоЬА- 1ЖВЗ был значительно ниже по сравнению с группой коров с генотипом Ч/У.

3. Разработан селекционно-генетический способ, предусматривающий проведение подборов родительских пар с учетом генотипа по локусу ВоЬА- 011ВЗ с целью повышения в потомстве частоты встречаемости «желательного» генотипа Ч/У.

4 Исследования проведены совместно с лабораторией биотехнологии СКНИ-ИЖ и отражены в публикациях.

Таблица 7

Показатели продуктивности первотёлок различных генотипов по локусу ВоЬА БИВ 3 в хозяйствах ЗАО «Дружба», ОАО «Агрообъединение «Кубань» и СЗАО «СКВО» _ _за 305 дней лактации_

Хозяйство Показатели Генотип BoLA DRB 3

Н/Н Н/Ч Ч/Ч У/У Н/У У/Ч

ЗАО «Дружба» (п= 46) Частота встречаемости, % 19,57 32,60 17,39 6,52 15,22 8,70

Удой, кг М±т 6108* ±297 6109* ±230 6105* ±237 5547* ±204 6279 ±385 7247 ±411

Удой в среднем, кг 6201±132

ОАО «Агрообъединение «Кубань» (п=163) Частота встречаемости, % 4,29 24,54 40,49 3,08 6,13 21,47

Удой, кг М±т 8058 ±296 7081** ±181 7381* ±179 7603 ±232 7306 ±280 7957 ±166

Удой в среднем, кг 7463 ± 84

ЗАО «СКВО» Ростовской области (п= 94) Частота встречаемости, % 15,96 32,97 21,28 6,38 7,45 15,96

Удой, кг М±ш 6859 ±513 7158* ±291 7214 ±419 6315* ±595 7469 ±536 8126 ±292

Удой в среднем, кг 7246±172

Примечание: * - Р<0.05; * * - Р<0.01

Проведена экспериментальная апробация разработанного способа в ОАО «Агрообъединение «Кубань».

В 2006-2007 годах было проведено индивидуальное закрепление быков-производителей на маточное поголовье. Для коров с генотипами Ч/Ч, Н/Н, Н/Ч были подобраны быки У/У; с генотипами У/У, Н/У, Ч/У -быки Ч/Ч:

$ч/ч

$НУЧ $НУН

X s У/У Баклан(11*23) Фокус (23*23)

?У/У $Н/У

$ч/у

X <$Ч/Ч Кубок (8*24) Хит(16*24)

Доказано повышение частоты встречаемости желательного генотипа Ч/У за одно поколение с 24,44 до 62,22% (по выборке 90 голов).

В данном случае была проведена коррекция резистентности у дочерей по сравнению с материнским поголовьем без потери продуктивности, так как поступившие из-за границы животные отличались высокими показателями заболеваемости и смертности.

Таким образом, возможно использование маркера BoLA-DRB3 как дополнительного критерия при подборе быков, позволяющего снизить вероятность несоответствия «бык - стадо».

Аналогичным образом предлагаем проводить подбор при низком удое, плохом качестве молока. Из всего многообразия улучшателей категорий А и Б следует выбирать быков с аллелями - лидерами (для увеличения обильномолочности - BoLA- DRB3 *22, *24; для повышения качества молока - BoLA- DRB3*3,*7, 27\ для увеличения содержания белка в молоке - BoLA- DRB3*26'). Одновременно необходимо прямо или косвенно оценивать BoLA- DRB3 генофонд самого стада. В зависимости от финансовых возможностей хозяйства мы предлагаем три варианта схемы работы:

1. Быки подбираются путём анализа родословных коров. Главный принцип - добавить те аллели и генотипы, которые не встречались у отцов и дедов коров. (Так, например, если у предков встречаются из Ч-аллелей BoLA- DRB3*16 и BoLA- DRB3*8, подбираем носителей BoLA-DRB3*22 и/или BoLA-DRB3*24).

2. Можно проанализировать генотипы животных материнского стада (около 10% поголовья, но не менее 50 голов) и закрепить быка-производителя таким образом, чтобы получить максимальный суммарный искомый эффект.

3. Но наиболее эффективен будет индивидуальный подбор. При этом анализируются генотипы всех животных стада, животные разбиваются на группы: У/У; Ч/У; Н/У; Ч/Ч; Н/Ч и Н/Н. Оценивается аллельный профиль групп животных. Быки подбираются таким образом, что бы в мак-

имально большом количестве комбинаций проявить у потомков эффект <минигетерозиса».

Важно, что данное нововведение не противоречит существующим принципам подбора быков - производителей, не нарушает никаких инструкций, а лишь вводит дополнительный критерий подбора.

Изложенная выше система подбора и закрепления в той или иной степени используется сегодня в 60 хозяйствах Краснодарского края, Ростовской области, Ставропольского края, которые приобретают сперму быков-производителей в ООО НПСХП «Астер».

3.6. Экономический эффект использования генетического маркера -ВКВЗ в селекционно - племенной работе с крупным рогатым скотом

Экономический эффект использования маркера ВоЬА-ОКВЗ был оценён в двух плоскостях: для племпредприятий, покупающих быков, оценённых с использованием генетических маркеров за границей и для сельхозпредприятий, использующих селекционно-генетический способ повышения продуктивности и устойчивости крупного рогатого скота.

Допустим, племпредприятие принимает решение о покупке 10 молодых, неоценённых быков за границей (в Голландии или Германии). Стоимость такой покупки составит не менее 52000 евро. В последнее время наши зарубежные партнёры помимо молодых неоценённых быков, предлагают молодых быков, оценённых по ряду генетических маркеров, гарантии для которых в будущем соответствовать высокой племенной категории увеличиваются на 25-30%. Стоимость такой покупки составит уже 65000 евро. При этом молодые быки отбираются по 30-40 маркерам, которые с большей частотой встречаются у быков, прошедших оценку по качеству потомства и показавших себя улучшателями. Следует учесть, что лишь два, три маркера будут являться «сильными», остальные больше будут создавать «шумы», причём объединяясь, «шумы» могут заглушать основные маркеры. Маркер ВоЬА - ОКВЗ по спектру своего взаимодействия вполне может претендовать на роль «сильного». Добавив к нему ещё 2-3 маркера, можно создать хорошую систему отбора необходимых нам быков. А стоить это будет 2-3 тысячи рублей в расчёте на одну голову.

Для расчёта возможного экономического эффекта от внедрения селекционно-генетического способа рассчитано в среднем по трём хозяйствам, в том процентном соотношении, котором встречались и будут встречаться генотипы до и после применения индивидуального подбора и возможная прибавка производства молока.

Таблица 8

Расчет возможного экономического эффекта от применения селекционно-генетического способа

Показатель (в среднем по 3 хозяйствам) Генотип по локусу BoLA -DRB3

У/У У/Ч У/Н Н/Н Ч/Ч ч/н

Фактическая частота встречаемости генотипа, % 5,33 15,37 9,60 13,27 26,39 30,04

Удой за 305 дней, кг 6488 7776 7018 6008 6900 6783

Средний удой за 305 дней, кг 6829

Предполагаемая частота встречаемости генотипа, % - 59,30 28,30 - 7,70 4,70

Средний удой по предполагаемой выборке, кг 7446

Разница между ожидаемым и реальным удоем, кг 618

Предполагается, что применение селекционно-генетического способа способно увеличить удой в следующем поколении на 618 кг молока, с одновременным повышением резистентности стада.

4. ВЫВОДЫ

1. Голштинские и айрширские быки - производители существенно отличаются друг от друга по частотам встречаемости BoLA-DRBS аллелей и генотипов. Так, в профиле айрширской породы преобладают Н/Н генотипы (65,49%), а голштинской - НА! и Ч/Ч (33,44 и 34,47% соответственно). Наиболее типичными для голштинов являются BoLA-DRB3 *3, *8, *11, *16, *22, *24 аллели; для айрширов - BoLA-DRB3* 1, *3, *7, *8, *18 и *27 аллели.

2. Безусловное лидерство в распространении среди голштинов принадлежит BoLA-DRB3 *24 (аллель встречен с частотой 22, 02%); у айрширов частота встречаемости аллеля BoLA-DRB3 *7 составляет 26,99 %; 115 из 293 (или 32,25%) быков голштинской породы в тех или иных сочетаниях несут в своём генотипе аллель BoLA-DRB3 *24 и 49 из 113 (43,36%) быков айрширскойBoLA-DRB3*7.

3. Для наиболее распространённых BoLA-DRB3 аллелей и генотипов характерны временные подъёмы и спады частот встречаемости.

4. Не выявлено значимых различий в BolA-DRB3 профилях быков, принадлежащих к различным линиям. Установлено, что страна происхождения, а вернее принятая там селекционная доктрина, определяет генетические особенности поступающих быков - производителей.

5. Возможно использование BoLA-DRB3 генотипирования для предварительной оценки быков, данная технология позволяет повысить эффективность по сравнению с другими методами предварительной оценки более чем в два раза.

6. Разработан селекционно- генетический способ повышения продуктивности и устойчивости крупного рогатого скота к персистентному лимфоцитозу. Экспериментальная проверка подобного подхода показала повышение частоты встречаемости желательного генотипа Ч/У за одно поколение с 24,44 до 62,22%.

7. Обосновано использование маркера BoLA-DRB3 как дополнительного критерия при подборе быков, позволяющего снизить вероятность несоответствия «бык - стадо».

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Органам государственной племенной службы РФ, организациям по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, товарным и племенным хозяйствам, разводящим молочный скот, рекомендуется использовать маркер BoLA-DRB3 в качестве дополнительного селекционного фактора при планировании и осуществлении:

- заказных (ассоциативных) спариваний;

- отбора животных в основные селекционные группы;

- индивидуального и группового подбора производителей к маточному поголовью, с целью повышения частоты встречаемости «желательного» генотипа в потомстве.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

В рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК:

1. Горковенко Л., Ковалюк Н., Сацук В. Проблему лейкоза можно решить быстрее // Животноводство России. - 2006. - № 12. - С. 39-40.

2. Горковенко Л. Г., Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф. Взаимосвязь генотипа по локусу BoLA DRB 3 главного комплекса гистосовместимости крупного ро-

гатого скота с молочной продуктивностью // Вестник РАСХН. - 2007. -№ 3.

- С.73-74.

3. Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф., Мачульская Е.В. Использование генетических маркеров для повышения молочной продуктивности коров // Зоотехния.

- 2007.-№ 8. - С.2-4.

4. Ковалюк Н.В., Шостак В.А., Сацук В.Ф., Фоменко Д.В. Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к перси-стентному лимфоцитозу крупного рогатого скота. // Вестник РАСХН. - 2005. -№ 6. - С.67-69.

5. Ковалюк Н.В., Шостак В.А., Сацук В.Ф.. Фоменко Д.В. Использование ДНК анализа при отборе матерей быков // Зоотехния. - 2005. - № 8. -С.7-8.

6. Горковенко Л.Г., Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф. Патент РФ на изобретение №2316207 «Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота», заявка № 2005112494. Заявитель и патентообладатель СевероКавказский научно-исследовательский институт животноводства. Заявлено 25.04.2005 г., зарегистрировано в государственном реестре изобретений РФ 10.02.2008 г.

В материалах международных конференций:

7. Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф., Мачульская Е.В. Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивных групп крупного рогатого скота // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных: материалы 6 Международной научной конференции, 2006. - Дубровицы. - ВИЖ.- С. 82-84.

8. Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф., Мачульская Е.В., Фоменко Д.В Использование ДНК-технологий в молочном животноводстве // Актуальные проблемы биологии в животноводстве: материалы IV Международной научной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика Николая Александровича Шманенкова.- Боровск, 2006. С. 244-246.

9. Мачульская Е.В., Ковалюк Н.В., Кононенко С.И., Сацук В.Ф. Изучение частот встречаемости генотипов по локусу ВоЬА ОИБЗ у быков гол-штинской и айрширской пород // Современные методы генетики и селекции в животноводстве: материалы международной научной конференции. -Санкт-Петербург. -ВНИИРГЖ. -2007. - С.252-253.

В других изданиях:

10. Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф. Использование ДНК-технологий в молочном животноводстве. - Краснодар, серия «Библиотечка животновода», 2006.- 24с.

11. Сацук В.Ф. Племенное дело по принципу «лучшее, потому что оно лучшее» // Эффективное животноводство. - 2009. -№ 8. - С.50-51.

12. Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф. К вопросу об адаптации импортного поголовья крупного рогатого скота в условиях Краснодарского края // Эффективное животноводство. - 2009. -№ 10. - С. 16.

Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Roman . печ. л.-1,0. Тираж 100 экз. Заказ №481 от 19.11.2009 Отпечатано в типографии ООО «Бюро новостей» г. Ставрополь, ул. Лермонтова, 191/43

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сацук, Владимир Федорович

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Состояние и перспективы изменения структуры поголовья коров молочного направления продуктивности в Краснодарском крае

1.2. Существующие подходы к оценке племенной ценности быков - производителей в России и за рубежом

1.3. Взаимосвязь полиморфизма различных локусов с продуктивными показателями крупного рогатого скота

1.4. Полиморфизм локуса BoLA- DRB3, методы его выявления и возможности использования

2. Материал и методика проведения исследований

3. Собственные исследования

3.1. Распределение аллелей и генотипов по локусу BoLA-DRB3 у быков - производителей айрширской и голштинской пород

3.2. Распределение аллелей и генотипов по локусу BoLA-DRB3 у быков - производителей айрширской и голштинской пород, принадлежащих различным племпредприятиям

3.3. К вопросу о целесообразности разведения молочного скота по линиям и межлинейного кроссирования

3.4. Использование маркера BoLA-DRB3 для прогнозирования племенной ценности быков - производителей

3.5. Использование маркера BoLA-DRB3 в работе со стадами крупного рогатого скота

3.6. Экономический эффект использования генетического маркера BoLA - DRB3 в селекционно - племенной работе с крупным рогатым скотом

4. Обсуждение результатов

Выводы

Предложения производству

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Использование маркера BOLA-DRB3 в селекционно-племенной работе с крупным рогатым скотом"

Актуальность темы

Темпы генетического улучшения молочного стада на 85-90% определяется племенной ценностью используемых в воспроизводстве быков - производителей. Следовательно, оценка их генетических качеств является одним из главных звеньев племенной работы в молочном скотоводстве. Племенная ценность производителя характеризуется рядом признаков и показателей. Это не только продуктивность дочерей, но и особенности их конституции и экстерьерные показатели, в первую очередь, крепость конечностей и свойства вымени, устойчивость к заболеваниям.

Совершенствование методов оценки животных, их отбора в основные селекционные группы, научное обоснование подбора и интенсивности использования производителей, имеющих лучшие, генетически обусловленные хозяйственно - полезные признаки - важнейшая задача сельскохозяйственной биологии. В этой связи выявление на основе ДНК анализа маркерных аллелей, свидетельствующих о наличии у тестируемых животных позитивных селекционных признаков, обуславливающих высокую продуктивность, устойчивость к заболеваниям и длительное хозяйственное использование - важнейший инструмент в преобразовании современного молочного скотоводства в высокоэффективную отрасль АПК России. В частности, ген BoLA- DRB3 представляет интерес как универсальный маркер, связанный с резистентностью, показателями продуктивности и биологическим разнообразием групп крупного рогатого скота.

Цель и задачи исследований

Целью настоящих исследований явилось изучение возможности селекции животных по локусу BoLA- DRB3 для повышения молочной продуктивности и продолжительности племенного использования разводимого поголовья айрширского и голштинского скота.

Для достижения цели работы были поставлены и решены следующие задачи:

- определить частоту встречаемости полиморфных вариантов гена BoLA-DRB3 у используемых в воспроизводстве популяций быков — производителей айрширской и голштинской пород;

- выявить характер связи структуры гена BoLA- DRB3 тестируемых быков с породной и генеалогической принадлежностью, оценкой их племенных качеств;

-разработать селекционную схему выведения и репродукции животных желательных генотипов по BoLA- DRB3 и её использование в работе со стадами молочного скота.

Научная новизна исследований

Впервые в России изучены закономерности распространения BoLA- DRB3 аллелей и генотипов в популяциях быков айрширской и голштинской пород. Научно обоснован и внедрён в производство селекционный способ повышения молочной продуктивности и устойчивости к заболеваниям крупного рогатого скота (Патент РФ № 2316207). Предложены технологические схемы использования BoLA- DRB3 - генотипирования для увеличения срока племенного использования крупного рогатого скота. Практическая значимость и реализация результатов исследований Модели отбора и подбора производителей к маточному поголовью в молочном скотоводстве внедрены в 60 товарных и племенных хозяйствах ЮФО Российской Федерации. Ряд установленных закономерностей можно использовать учреждениям по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных при комплектовании быками -производителями.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

• маркирование некоторыми BoLA - DRB3 аллелями и генотипами генетических блоков, связанных с обильномолочностью, жирномолочностью, белковомолочностью;

• селекционно - генетический способ повышения продуктивности и устойчивости крупного рогатого скота;

• существование зависимости частот встречаемости устойчивых, нейтральных и чувствительных аллелей локуса BoLA - DRB3 от породной принадлежности крупного рогатого скота.

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались на научных конференциях факультета зоотехнологии и менеджмента Кубанского государственного аграрного университета в 2007-2009 гг., а так же обсуждались на краевых совещаниях с участием специалистов зооветеринарного профиля. Результатом исследований явилась разработка «Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота», удостоенная серебряной медали на VII Московском международном салоне инноваций и инвестиций в 2007 г. и бронзовой медали на 10 юбилейной российской агропромышленной выставке в 2008 г (г. Москва).

Материалы диссертации использовались в учебном процессе ФГОУ ДПО «Краснодарский региональный институт агробизнеса» и докладывались на IV Международной научной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве», посвященной 100-летию со дня рождения академика Николая Александровича Шманенкова в 2006 году (г. Боровск).

Публикации результатов исследований

По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, все по теме диссертации, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК РФ: «Вестник РАСХН», «Зоотехния», «Животноводство России» - 5 работ. Приоритет исследований подтверждён патентом Российской Федерации (№ 2316207).

Структура и объём работы

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, глав собственных исследований, заключения, выводов, предложений производству, списка использованных источников, включающего 131 работу, в том числе 64 зарубежных авторов. Работа изложена на 118 страницах машинописного текста, содержит 27 таблиц, 6 рисунков и 1 приложение.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Сацук, Владимир Федорович

выводы

1. Голштинские и айрширские быки - производители существенно отличаются друг от друга по частотам встречаемости BoLA-DRB3 аллелей и генотипов. Так в профиле айрширской породы преобладают Н/Н генотипы (65,49%), а голштинской - Н/Ч и Ч/Ч (33,44 и 34,47% соответственно). Наиболее типичными для голштинов являются BoLA-DRB3 *3, *8, *11, *16, *22, *24 аллели; для айрширов - BoLA-DRB3* 1, *3, *7, *8, *18 и *27 аллели.

2. Безусловное лидерство в распространении среди голштинов принадлежит BoLA-DRB3 *24 (аллель встречен с частотой 22, 02%); у айрширов частота встречаемости аллеля BoLA-DRB3 *7 составляет 26,99 %; 115 из 293 (или 32,25%) быков голштинской породы в тех или иных сочетаниях несут в своём генотипе аллель BoLA-DRB3*24 и 49 из 113 (43,36%) быков айрширской BoLA-DRB3 * 7.

3. Для наиболее распространённых BoLA-DRB3 аллелей и генотипов характерны временные подъёмы и спады частот встречаемости.

4. Не выявлено значимых различий в BolA-DRB3 профилях быков, принадлежащих к различным линиям. Установлено, что страна происхождения, а вернее принятая там селекционная доктрина, определяет генетические особенности поступающих быков -производителей.

5. Возможно использование BoLA-DRB3 генотипирования для предварительной оценки быков, данная технология позволяет повысить эффективность по сравнению с другими методами предварительной оценки более чем в два раза.

6. Разработан селекционно- генетический способ повышения продуктивности и устойчивости крупного рогатого скота к персистентному лимфоцитозу. Экспериментальная проверка подобного подхода показала повышение частоты встречаемости желательного генотипа У/Ч за одно поколение с 24,44 до 62,22%.

7. Обосновано использование маркера BoLA-DRB3 как дополнительного критерия при подборе быков, позволяющего снизить вероятность несоответствия «бык - стадо» и уменьшить проблемные зоны конкретных стад.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Органам государственной племенной службы РФ, организациям по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, товарным и племенным хозяйствам, разводящим молочный скот, рекомендуется использовать маркер BoLA-DRB3 в качестве дополнительного селекционного фактора при планировании и осуществлении:

- заказных (ассоциативных) спариваний;

- отбора животных в основные селекционные группы;

- индивидуального и группового подбора производителей к маточному поголовью.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Сацук, Владимир Федорович, Ставрополь

1. Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике // Генетика.- 2002.-Т. 38.-№ 9.- С. 1173-1195

2. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж. Молекулярная биология клетки. М.: Мир, 1987.- 1050 с.

3. Бич А.И. Селекционная работа с молочным и молочно-мясным скотом // Зоотехния.-2002.- № 6.- С.5-8.

4. Боташева Л.Х. Опыт эффективного производства молока в зарубежных странах // Ваш сельский консультант,- 2007. -№ 4. С. 22-25.

5. Генжиева О., Рузина М., Сулимова Г Анализ генетической устойчивости калмычкого скота к лейкозу // Молочное и мясное скотоводство. 2008. - № 8. - С. 9-10.

6. Глазко В.И. ДНК-технологии животных. Киев: Нора-принт, 1997. -173 с.

7. Глазко В.И., Доманский Н.Н., Созинов А.А. Современные направления использования ДНК-технологий //Цитология и генетика. 1998.- Т. 32.- № 5.-С. 80-93.

8. Глазко В.И., Кириленко С.Д Идентификация генотипов по каппа-казеину и BLAD-мутации с использованием полимеразной цепной реакции у крупного рогатого скота // Цитология и генетика. 1995.- № 6.- С.60-63.

9. Горковенко JI. Г., Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф. Взаимосвязь генотипа по локусу BoLA DRB 3 главного комплекса гистосовместимости крупного рогатого скота с молочной продуктивностью // Вестник РАСХН. 2007. - № 3. - С.73-74.

10. Горковенко Л., В. Шостак В., Ковалюк Н. Дойное стадо юга страны // Животноводство России. 2005. - № 9. - С. 40-42.

11. Горковенко Л., Ковалюк Н., Сацук В. Проблему лейкоза можно решить быстрее // Животноводство России. 2006. - № 12. - С. 39-40.

12. Дементьева Н.В., Терлецкий В.П., Тыщенко В.И. Использование метода фингенпринтинга ДНК для изучения генетической дивергенции в популяциях сельскохозяйственных животных // Вестник РАСХН.- 2003.- № 12.- С. 79-80.

13. Долматова И.Ю, А.Г. Ильясов Связь полиморфизма гена соматотропина КРС симментальской породы с продуктивностью // Зоотехния. 2008. - № 8. - С. 6-8.

14. Инструкция по проверке и оценке быков молочных и молочно-мясных пород по качеству потомства.- М.:1980. — 15 с.

15. Калашникова Л.А., Дунин И.М., Глазко В.И. Селекция XXI века: использование ДНК-технологий. М., 2000.- 31 с.

16. Калашникова Л.А., Дунин И.М., Глазко В.И., Рыжова Н.В. ДНК-технологии оценки сельскохозяйственных животных,- М., 1999.- 148 с.

17. Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф. Использование ДНК-технологий в молочном животноводстве. Краснодар, серия «Библиотечка животновода», 2006.- 24с.

18. Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф. К вопросу об адаптации импортного поголовья крупного рогатого скота в условиях Краснодарского края // Эффективное животноводство. 2009. -№ 10. - С. 16.

19. Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф., Мачульская Е.В. Использование генетических маркеров для повышения молочной продуктивности коров // Зоотехния. 2007.-№ 8. - С. 2-4.

20. Ковалюк Н.В., Шостак В.А., Сацук В.Ф., Фоменко Д.В. Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу крупного рогатого скота // Вестник РАСХН. -2005.-№6.-С. 67-69.

21. Ковалюк Н.В., Шостак В.А., Сацук В.Ф., Фоменко Д.В. Использование ДНК анализа при отборе матерей быков // Зоотехния. 2005. - №8. - С. 7-8.

22. Коновалова Е.Н., Сельцов В.И., Зиновьева Н.А. Характеристика симментальского скота различного происхождения с использованием ДНК-микросателлитов // Зоотехния.- 2006.- № 8. С. 6-9.

23. Конюшихин Ю.В., Вдовиченко Т.Н. Организация племенной работы в молочном скотоводстве в хозяйствах краснодарского края, обслуживаемых ОАО «Краснодарское». Краснодар, 2008. - 26с.

24. Лакин, Т.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. - 293 с.

25. Максимова JI., Шульга Л. Актуальность общей резистентности при создании карельского типа айрширского скота // Молочное и мясное скотоводство. 2008. - № 3. - С. 16-18.

26. Морозов Н, Пугачёва 3. Для совершенствования айрширского стада выбрали канадских и финских быков // Животноводство России. -2006. С. 39-49.

27. Небасова Н., Рахматуллина Н. Оценка быков с учётом продолжительности использования их дочерей // Молочное и мясное скотоводство. 2008. - № 5. - С. 7-10.

28. Петров Р.В. Иммунология. -М.: Медицина, 1982. 368 с.

29. Плохинский Н.А. Биометрия.- М.: Изд-во Московского ун-та, 1970. -367 с.

30. Савенко Н.А. и др. Каталог быков производителей. - М.: Минсельхозпрод МО, 2008. - 108 с.

31. Сацук В.Ф. Племенное дело по принципу «лучшее, потому что оно лучшее» // Эффективное животноводство. 2009. -№ 8. - С.50-51.

32. Сулимова Г.Е., Соколова С.С., Семикозова О.П. Анализ полиморфизма ДНК кластерных генов у крупного рогатого скота: гены казеинов и гены главного комплекса гистосовместимости (BoLA) // Цитология и генетика. -1992.- Т. 26.- № 5.- С. 18-25.

33. Сулимова Г.Е., Удина И.Г., Шайхаев Г.О, Захаров И.А. ДНК-полиморфизм гена BoLA-DRB 3 у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу // Генетика. 1995. - №. 9. -С. 1294-1299.

34. Сулимова Г.Е., Шайхаев Г.О., Берберов Э.М. Генотипирование локуса каппа казеина у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции // Генетика. - 1991. - Т. 27. - С. 2053 - 2062.

35. Тузов И.Н., Гнатышак С.А. Взаимосвязь хозяйственно полезных признаков у голштинизированных коров // Труды Кубанского аграрного университета. - Коаснодар, 2005. - Вып. 414 (442). - С. 15-19.

36. Тузов И.Н., Одабашян Х.А. Результаты совершенствования красной степной породы голштинскими красно-пёстрыми быками // Труды Кубанского аграрного университета. Краснодар, 2005. - Вып. 414 (442). -С. 24-27

37. Турбина Г.С. и др. Каталог быков производителей ФГУП «ГЦВ». -Подольск, 2005. - 67 с.

38. Тучемский Л.И., Макарова Г.Г., Прохоренко П.Н., Бойков Ю.В., Васильева Е.Н., Чекменёва Н.Ю. Новое селекционное достижение в айрширской породе — тип Смена // Зоотехния. 2008: -№ 6. - С.2-4.

39. Удина И.Г. и др. Использование ДНК-технологий для оценки наследственной устойчивости к заболеванию лейкозом // Биотехнология в животноводстве и ветеринарии: тез. докл. II международной научн. конф. -М., 2000.-С. 219-220.

40. Удина И.Г. Гены главного комплекса гистосовместимости человека и животных // Успехи современной генетики. 1994. - № 19. — С. 133-177.

41. Удина И.Г., Карамышева Е.Е., Сулимова Г.Е., Павленко С.П., Туркова С.О., Орлова А.Р., Эрнст JI.K. Сравнительный анализ айрширской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота по маркерам гистосовместимости // Генетика.- 1998.- Т. 34. -№ 12.- С. 1-7.

42. Удина И.Г., Туркова С.О. Полиморфизм гена пролактина (микросателлиты, ПЦРПДРФ) у крупного рогатого скота // Генетика. — 2001. № 4. - Т. 37. - С. 511-516.

43. Эрнст JL, Зиновьева Н., Гладырь Е. Комплексный порок позвоночника у голштинов // Животноводство России. — 2007. № 12. — С. 51-53.

44. Эрнст JI.K. Современное состояние и перспективы биотехнологии в животноводстве // Современные достижения и проблемы генетики и биотехнологии сельскохозяйственных животных: материалы 8 международной конференции-школы. Дубровицы, 2009. - С. 10-27.

45. Эрнст JI.K., Жигачев А.И., Кудрявцев В.А. Мониторинг генетического груза в черно-пестрой, голштинской и айрширской породах крупного рогатого скота // Зоотехния. — 2007. № 3 .- С. 5-10.

46. Эрнст Л.К., Сулимова Г.Е., Орлова А.Р. Особенности распространения антигенов BoLA -А и аллелей гена BoLA -DRB3 у черно пестрого скота в связи с ассоциацией с лейкозом // Генетика. —1997. - Т. 33. - № 1. - С. 87-95.

47. Юхманова Н., Калашникова Л. Влияние каппа казеина на качество молока и его сыропригодность // Молочное и мясное скотоводство. - 2004. -№ 8. - С. 24-25.

48. Яковлев А.Ф. Использование полиморфизма ДНК и генов, в селекции сельскохозяйственных животных // Современные методы генетики иселекции в животноводстве: материалы международной научной конференции. Санкт - Петербург. - ВНИИРГЖ, 2007. - С. 18-23.

49. Янчуков И.Н. Перспективы совершенствования племенной работы с быками-производителями в молочном скотоводстве Московской области/ Янчуков И.Н.: автореферат канд. диссертации. М., 2006. - 24 с.70.

50. Aida У. et al. Identification of a New Bovine MHC Class II DRB Allele by Nucleotide Sequencing and an Analysis of Phylogenetic Relationships // Biochemical and Biophysical Research Communications. 1995.-V. 209. -№ 3,- P. 981-988.

51. Aida Y. et al. Phenotype and Ontogeny of Cells Carrying a Tumor-associated Antigen that is Expressed on Bovine Leukemia Virus-induced Lymphosarcoma // Cancer Research.- 1993.- № 53.- P. 429-437.

52. Aida Y., Miyasaka M., Okada K. Further phenotypic characterization of target cells for bovine leukemia virus experimental infection in sheep // Am. J. Vet. Res. 1989.- № - 50. - P. 1946-1951.

53. Ashwell M. S., Van Tassell C. P., Sonstegard T. S. A Genome Scan To Identify Quantitative Trait Loci Affecting Economically Important Traits in a US Holstein Population // J Dairy Sci, Desember 2001.- № 20. P. 450 - 457.

54. Brascamp E. W., Arendonk J. A. Economic appraisal of the utilization of genetic markers in dairy cattle breeding // Journ. of Dairy Sci. 1993. -V. 76. -№. 4.-P. 1204-1213.

55. Brown J.H, Jardetzry Т., Saper M. A hypothetical model of the foreign antigen binding site of class II histocompatibility molecules // Nature. 1998. - P. 845.

56. Burke M.G., Stone R.T., Muggli-Cockett N.E. Nucleotide sequence and northern analysis of a bovine major histocompatibility class IIDR beta-like cDNA // Anim. Genet. 1991. - № 22(4).- P. 343-352.

57. Casas E., Shackelford S. D.,. Keele J. W, Koohmaraie M., Smith T. P. L. Stone R. T. Detection of quantitative trait loci for growth and carcass composition in cattle // J. Anim. Sci.- 2003. -№ 81. P. 2976-2983.

58. Davies С .J. Polymorphism of bovine MHC class I genes Joint report of the Fifth International Bovine Lymphocyte Antigen (BoLA) // European Journal of Immunogenetics. - 1994. - № 21. - P. 239-258.

59. Dietz A.B., Conen N.D. Bovine lymphocyte antigen Class II Alleles as risk factors for high somatic cell counts in milk of lactating dairy cows // J Dairy Sci. -1997.-№80.-P. 406-412.

60. Fries R., Beckmann I.S., Georgies M. The bovine gene map // Animal Genetics.- 1989.- V.20.- P. 3-29.

61. Fries R., Eggen A., Womack J.E. The bovine genome map // Mamm. Genome. 1993.- № 4.- P. 405-428.

62. Gasbarre L.S., Leiqhton E.A., Sonstegard T. Role of the bovine immune system and genome in resistance to gastrointestinal nematodes // Vet Parasitol. -2001.-№ 12.-P. 51-64.

63. Gelhaus A., Schnittger L.} Mehlitz D.} Horstmann R.D., Meyer C.G. Sequence and PCR-RFLP analysis of 14 novel BoLA-DRB3 alleles // Anim. Genet. 1995. - № 26(3). - P. 147-153.

64. Gilliespie B.E., Jayarao B.M., Dowlen H.H. Analysis and frequency of bovine lymphocyte antigen DRB3.2 alleles in Jersey cows // J Dairy Sci. -1999. -№ 82(9). P.2049-2053.

65. Groenen M.A. et al. The nucleotide sequence of bovine MHC class II DQB and DRB genes // Immunogenetics. 1990. -№ 31. - P. 37.

66. Harding C.V. MHC molecules and antigen presentation // Animal. Genetics. -1997.-V.27.-P. 91-96.

67. Hawken R. J., Beattie C. W., Schook L. B. Resolving the genetics of resistance to infectious diseases // Revue Scientifique et Technique. 1998. - № 17.-P. 17-25.

68. Heringstad В., Gianola D., Chang Y. M., Odegard J., Klemetsdal G. Association of toll-like receptor 4 polymorphisms with somatic cell score and lactation persistency in holstein bulls // J Dairy Sci. -2006. -№ 89.- P. 3626 3635.

69. Hoj S. et al. Growth hormone gene polymorphism associated with selection for milk fat production in lines of cattle // Animal. Genetics. 1993. -V.24. - №2. - P. 91 - 96.

70. Horin P., Matiasovic J. BoLA DYA polymorphism in Czech cattle // Exp. Clin Immunogenet. 1998. -15 (1). - P. 56 - 60.

71. Kabeya H., Ohashi K., Onuma M. Host immune responses in the course of bovine leukemia virus infection // J Vet Med Sci. -2001.- Jul.-№ 63(7).- P. 703708.

72. Koivula M., Mantysaari E. A., Negussie E., Serenius T. Genetic and Phenotypic Relationships Among Milk Yield and Somatic Cell Count Before and After Clinical Mastitis // J Dairy Sci. -2005. -№ 88 P. 827-823.

73. Konnai S., Usui Т., Ikeda M. Tumor necrosis factor-alpha genetic polymorphism may contribute to progression of bovine leukemia virus-infection // Microbes Infect.- 2006.- Jun 2.- P.312-315.

74. Kucerova J., Lund M. S., Sorensen P., Sahana G., Guldbrandtsen В., Nielsen V. H., Thomsen В., Bendixen C. Multitrait quantitative trait Loci mapping for milk production traits in danish Holstein cattle // J Dairy Sci.- June 1. 2006. -P. 2245 - 2256.

75. Kulberg S., Heringstad В., Guttersrud O.A, Olsaker I. Study on the association of BoLA-DRB3.2 alleles with clinical mastitis in Norwegian Red cows // J Anim Breed Genet. 2007. - Aug; 124(4). - P. 201-207.

76. Lagziel A. et al. An Msp I polymorphism at the bovine growth hormone gene is linked to a locus affecting milk protein percentage // Animal. Genetics. -1999. -V. 30. № P. 296 - 299.

77. Lagziel A., Lipkin A., Soller M. Association between SSCP haplotypes as the bovine growth hormone gene and milk protein percentage // Genetics. -1996.-V. 142.-P. 945-951.

78. Ledwidge S.A., Mallard B.A. Multi primer target PCR for rapid identification of bovine DRB 3 alleles // Animal Genetics. - 2001. - № 32. - P. 219 -221.

79. Levin H.A., Wu M.C., Steward J.A. Association between BoLA and subclinical in bovine leukemia virus infection in a herd of Holstein Friesian cows // Immunogenetics. - 1988. -27(5). - P. 338 - 344.

80. Lindberg P. G., Andersson L. Close association between DNA polymorphism of bovine histocompatibility complex class I genes and serological BoLA A specificities // Anim. Genet. - 1988. - № 19. - P. 245 - 255.

81. Lunde'n A., Sigurdardottir S., Edfors-Lilja I., Danell В., Rendel J. The relationship between bovine major histocompatibility complex classll polymorphism and disease studied by use of bull breeding values // Anim Genet. -1990.-№ 21.-P. 221-232.

82. Maillard J.C., Renard C., Chardon P., Chantal I., Bensaid A. Characterization of 18 new BoLA-DRB3 alleles // Anim. Genet. 1999. -№ 30(3). -P.200-203.

83. Meirom R, Brenner J, Trainin Z. BLV-infected lymphocytes exhibit two patterns of expression as determined by Ig and CD5 markers // Vet Immunol Immunopathol.- 1993. № 36 (2). - P.179-86.

84. Meirom R., Moss S., Brenner J., Heller D. and Trainin Z. Levels and role of cytokines in bovine leukemia virus (BLV) infection // Leukemia. 1997. - 11 (Suppl. 3).-P. 219-220.

85. Mikko S., Andersson L. Extensive MHC class II DRB3 diversity in African and European cattle // Immunogenetics. 1995. - № 42 (5).- P. 408-413.

86. Miltiadou D.} Law A.S., Russell G.C. Establishment of a sequence-based typing system for BoLA-DRB3 exon 2 // Tissue Antigens. -2003.- № 62.- P. 5565.

87. Miretti M.M., Ferro J.A. Restriction fragment length polymorphism (RLFP) in exon 2 of the BoLA DRB 3 gene in South American cattle // Biochem Genet. -2001.-№39.-P. 311- 324.

88. Mirskry M.L., Lewin H.A. Reduced bovine leukaemia virus proviral load in genetically resistant cattle // Anim. Genet. 1998. - 29. - P. 145 - 252.

89. Mota A.F. et al. Distribution of bovine lymphocyte antigen (BoLA DRB 3) alleles in Brasilian dairy Gir catlle (Bos indicus) // Eur. J. Immunogenet.- 2002. -29(3).-P. 223-227.

90. Naj S., Franholm M., Larsen N.J. Growth hormone gene polymorphism associated with selection for milk fat production in lines of cattle // Animal Genetics.- 1993.- V.24.- P. 91-96.

91. Nassiry M.R., Shahroodi F.E., Mosafer J. Analysis and frequency of bovine lymphocyte antigen (BoLA-DRB3) alleles in Iranian Holstein cattle // Genetika. -2005. № 41(6). - P. 817-822.

92. Puel A., Groot P. C., Lathrop M. G., Demant P., Mouton D. Mapping of genes controlling quantitative antibody production in Biozzi mice // Journal of Immunology. 1995. - № 154. - P. - 5799-5805.

93. Puel A., Mevel J. C., Bouthillier Y., Feingold N., Fridman W. H., Mouton D. To ward genetic dissection of high and low antibody responsiveness in Biozzi mice // Proceedings of the Nationuf Academy of Sciences of the USA. 1996. -№93.-P. 14742-14746.

94. Puel A., Mouton D. Genes responsible for quantitative regulation of antibody production / // Critical Reviews in Immunolog. 1996. - № 16. - P. 223250.

95. Ripoli M.V., Villegas-Castagnasso E.E., Peral-Garcia P., Giovambattista G. New polymorphisms for the BoLA-DRB3 upstream regulatory region // Tissue Antigens. 2005. - № 66 (2). - P. 136-137.

96. Ripoli M.V., Liron J.P., Deluca J.C.Gene frequency distribution of the BoLA-DRB3 locus in Saavedreno Creole dairy cattle // Biochem Genet. -2004. -№42(7-8).-P.- 231-240.

97. Rupp R. et al. Association of bovine leukocyte antigen (BoLA) DRB3.2 with immune response, mastitis, and production and type traits in Canadian Holsteins // J Dairy Sci.- 2007. Feb. - 90(2). -P. 1029-1038.

98. Russell G.C., Smith J.A., Oliver R.A. Structure of the BoLA DRB3 gene and promoter // European Journal of Immunogenetics. -2004. № 31. - P. 145151.

99. Sharif S. et al. Characterization of naturally processed and presented peptides associated with bovine major histocompatibility complex (BoLA) class II DR molecules // Eur J Immunogenet. 2002. -29 (3). - P. 223 - 227.

100. Sharif S., Mallard B.A. Presence of glutamine at position 74 of pocket 4 in the BoLA DR antigen binding groove with occurrence of clinical mastitis caused by Staphylococcus species // Immunogenetics.- 2000. - № 51. - P. 733 — 742.

101. Sharma B. S., Leyva I., Schenkel F., Karrow N. A. Genetic associations between clinical mastitis and somatic cell score in early first-lactation cows // J Dairy Sci. -2006. -№ 89. P.2236 - 2244.

102. Sitte K., East I.J., Lavin M.F., Jazwinska E.C. Identification and characterization of new BoLA-DRB3 alleles by heteroduplex analysis and direct sequencing // Anim. Genet.-1995. -№ 26(6). P. 413-417.

103. Takeshima S., Nakai Y., Ohta M. Characterization of DRB3 alleles in the MHC of Japanese shorthorn cattle by polymerase chain reaction-sequence-based typing // Journal of Dairy Science. -2002. Vol 85, Issue 6. -P. 1630-1632.

104. Van Eijk M.J.T., Stewart-Haynes J.A., Beever J.E. Development of persistent lymphocytosis in cattle is closely associated with DRB2 // Immunogenetics. 1992. -P. 37-64.

105. Van Eijk M.J.T., Stewart-Haynes J.A., Lewin H.A. Extensive polymorphism of the BoLA DRB3 gene distinguished PCR-RFLP // Anim. Genet. 1992. V.-23. - P.483 - 496.

106. Weikard R., Kuhn C., Goldammer Т., Freyer G., Schwerin M. The bovine PPARGC1A gene: molecular characterization and association of an SNP with variation of milk fat synthesis // Physiol Genomics. March 21. - 2005. -P. 1-13.

107. Xu A., Van Eijk V.J. Т., Park Ch. Polymorphism in BoLA -DRB3 Exon 2 correlates with resistance to persistent lymphocytosis caused by bovine leukemia virus // J. of Immunology. -1993. -V. 151. -№ 12. P. 6977 - 6985.

108. Zanotti M. et al. Association of BoLA class II haplotypes with subclinical progression of bovine leukaemia virus infection in Holstein — Friesian cattle // Anim. Genet. 1996. - 27. - P.337 - 341.

109. Zerabruk M., et al. Analysis of genetic diversity and conservation priorities for six north Ethiopian cattle breeds // Journal of Animal Breeding and Genetics. -2007. V. 124. - P. 236-241.