Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Использование генотипирования по локусу BoLA DRB 3 в селекции крупного рогатого скота на устойчивость к персистентному лимфоцитозу

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Использование генотипирования по локусу BoLA DRB 3 в селекции крупного рогатого скота на устойчивость к персистентному лимфоцитозу"

На правах рукописи

МАСЛЕННИКОВ МИХАИЛ ГЕННАДЬЕВИЧ

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГЕНОТИПИРОВАНИЯ ПО ЛОКУСУ BOLA DRB 3 В СЕЛЕКЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА УСТОЙЧИВОСТЬ К ПЕРСИСТЕНТНОМУ ЛИМФОЦИТОЗУ

Специальность 03.00.23 - биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

I диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Краснодар -2005

Работа выполнена в лаборатории биотехнологии отдела разведения и генетики свиней Северо-Кавказского научно - исследовательского института животноводства в 2002- 2005 гг.

Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук,

Соколов Николай Витальевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Плотников Владимир Константинович

кандидат биологических наук, Зеркалёв Дмитрий Юрьевич

Ведущая организация: Кубанский государственный университет

Защита диссертации состоится <^>> 2005 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.09 при Кубанском государственном аграрном университете по адресу: 350044, г. Краснодар ул. Калинина 13

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета

Автореферат разослан « 1 & » г г*™ а 2005 г.

Ученый секретарь Ц,

диссертационного Совета, к.б.н. ¿^Т^ Чернышева Н.В.

Mtf

лзш

ПМШ

1. Общая характеристика работы

1.1. Актуальность исследований. В настоящее время все большую актуальность приобретают исследования, позволяющие выявлять полиморфизм на уровне ДНК и связывать его с качественными показателями животных (например, продуктивностью и устойчивостью к заболеваниям).

Использование отбора по генетическим маркерам выводит селекцию на новый уровень, позволяя непосредственно оценивать генотипы (С. Camaschella, А. Alfarano, Е. Gottadi, 1990; В.И. Глазко и др., 2000).

Инфицированность крупного рогатого скота вирусом лейкоза во многих хозяйств Краснодарского края достигла 100% у взрослых животных.

Одной из наиболее известных методик ликвидации лейкоза является так называемая «технологическая», предусматривающая выделение из стада больных особей, изолированное выращивание здоровых, выполнение других зооветеринарных мероприятий. В то же время селекционные методы борьбы с этим заболеванием разработаны недостаточно.

Между тем, отечественными и зарубежными исследователями установлено, что отдельные животные одной и той же породы имеют различную устойчивость (наследственную невосприимчивость) к лейкозу (персистентному лимфоцитозу), которая обуславливается наличием определенных аллелей генов, отвечающих за эффективный иммунный ответ в организме. M.J.T. Van Eijk, J.A. Stewart-Haynes, H.A. Levin (1992), Г.Е. Сулимова и др. (1995), С.О. Туркова, Г.Е. Сулимова (1996) считают, что присутствие в генотипе *11, *28 и *23 аллелей гена BoLA DRB 3 препятствует переходу лейкоза в стадию перси-

стентного лимфоцитоза. Сохранение и накопление этих аллелей в популяции повышает её устойчивость к персистентному лимфоцитозу, а это способствует воспроизводству наследственно устойчивых к заболеванию животных и, в конечном итоге, оздоровлению всего стада. Напротив, присутствие *8,*16, *22, *24 аллелей значительно увеличивает риск развития персистентного лимфоцитоза у вирусоносителей лейкоза крупного рогатого скота.

Так же актуально ведение селекции на увеличение частоты встречаемости В-аллели гена каппа-казеина, так как с присутствием этой аллели в генотипе животного технологические свойства получаемого от него молока улучшаются.

1.2. Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы -разработка направлений использования в селекции нового признака - наследственной устойчивости к персистентному лимфоцитозу.

В связи с этим программа исследований включала решение следующих задач:

- обосновать необходимость селекции крупного рогатого скота на устойчивость к персистентному лимфоцитозу;

- изучить популяции крупного рогатого скота Краснодарского края на предмет встречаемости аллельных вариантов гена ВоЬА ОЯВ 3, отвечающего за предрасположенность к персистентному лимфоцитозу;

- изучить структуру гена ВоЬА ОИВ 3 у племенных быков, используемых в системе искусственного осеменения края;

- в одном из хозяйств отобрать по основным зоотехническим характеристикам высокопродуктивных коров, предназначенных для воспроизводства племенных быков, и выявить среди них особей с устойчивостью к персистентному лимфоцитозу;

- представить возможные варианты скрещиваний для получения устойчивого к персистентному лимфоцитозу племенного молодняка.

1.3. Научная новизна исследований Оптимизированы методики проведения полимеразной цепной реакции и анализа полиморфизма длин фрагментов рестрикции для генотипирования по локусам ВоЬА ОКВЗ и каппа-казеина.

Впервые изучена генетическая структура популяций крупного рогатого скота Краснодарского края по генам ВоЬА ОЛВ 3 и каппа-казеина. Установлено преобладание аллелей чувствительности к персистентному лимфоцитозу над аллелями устойчивости и нейтральными аллелями в популяциях скота с высокой долей крови голштинской породы. Показано, что аллельный полиморфизм по гену Во1.А ОЛВЗ более разнообразен в популяции аборигенной красной степной породы. Установлена высокая частота встречаемости генотипа АА по гену каппа-казеина.

1.4. Практическая значимость. Обоснована необходимость использования при отборе селекционной части стада коров, предназначенных для воспроизводства племенных бычков, признака устойчивости к персистентному лимфоцитозу. В хозяйстве «Бейсуг» Приморско-Ахтарского района Краснодарского края отобраны коровы, несущие гомозиготный по устойчивости генотип и свободные от носительства про-вируса лейкоза крупного рогатого скота. В этом же хозяйстве изучена частота встречаемости генотипов по гену каппа-казеина. Проведены исследования образцов семени быков-производителей голштинской красно-пестрой породы и установлен их генотип по локусам ВоЬА ОЮЗЗ и каппа—казеину. Составлены варианты заказного подбора, позволяющие получить потомство, гомозиготное по устойчивости к персистентному лимфоцитозу.

1.5. Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на научно-практическом семинаре: «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения». «Генетические маркеры в селекции животных», п Быково, Московская обл.-2005

1.6. Положения, выносимые на защиту:

животные, несущие одну или две аллели гена ВоЬА ОЯВЗ, обуславливающие устойчивость к персистентному лимфоцитозу, генетически защищены от перехода лейкоза в стадию перси-стентного лимфоцитоза;

в различных популяциях крупного рогатого скота Краснодарского края аллели чувствительности к персистентному лимфоцитозу преобладают над аллелями устойчивости; популяция скота красной степной породы генетически более разнообразна по локусам Во1.А 1ЖВ 3 и каппа-казеина, чем популяции с высокой долей крови голштинской породы; в популяциях крупного рогатого скота, в значительной мере пораженных лейкозом, необходимо использовать быков-производителей, несущих аллели устойчивости к персистентному лимфоцитозу;

при отборе селекционной группы коров, предназначенных для воспроизводства племенных бычков, необходимо использовать признак устойчивости к персистентному лимфоцитозу.

1.7. Публикации. По материалам диссертации опубликованы 4 печатные работы.

1.8.Структура и объём работы. Диссертационная работа состоит из следующих разделов: «Введение», «Обзор литературы», «Материал и методика проведения исследований», «Собственные иссле-

дования», «Обсуждение результатов», «Выводы», «Рекомендации производству», «Список использованной литературы». Работа изложена на 90 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц и 10 рисунков. Список литературы включает 145 работ, в том числе 49 зарубежных авторов.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования были проведены в 2002-2005 годах на базе СевероКавказского научно-исследовательского института животноводства. Материалом для исследований служила кровь и сперма животных. Забор крови проводился в хозяйствах Краснодарского края: ОПХ СКНИИЖ «Рассвет» (п=60) (у животных голштинской черно-пестрой породы); племзаводе «Привольное» Каневского района (п=60) (у животных 1/8 кровности по красной степной породе и 7/8 кровности по голштинской красно- и черно-пестрой породе); ОАО «Дружба» При-морско-Ахтарского района (п=60) (после ликвидации животных фермы по причине туберкулеза в это хозяйство были собраны телки и коровы из 5 хозяйств Краснодарского края красной степной, голштинской черно пестрой, голштинской красно-пестрой, айрширской пород с различной долей кровности); племзаводе «Бейсуг» Приморско-Ахтарского района (п=60) (у животных красной степной породы, 1\2 кровности по голштинской красно-пестрой породе).

Образцы спермы (п^15) были предоставлены племпредприяшем ООО НПСХП «Астер» г. Краснодар.

Методика проведения исследований включала следующие этапы (схема 1):

Схема 1

Использование генотипироваиия по локусу ВоЬА ОЛВ 3 в селекции крупного рогатого скота на устойчивость к персистентному лимфоцитозу

Изучение взаимосвязи генотипа по ВоЬА ОИ.В 3 и Устойчивости к персистентному лимфоцитозу

±

Генотипирование по локусу ВоЬА ОЯВ 3 _(Методы ПЦР/ПДРФ)_

I

Изучение частоты встречаемости генотипов ВоЬА ОЯВ 3 в стадах популяций крупного рогатого скота Краснодарского

края

1 г

опхскни-иж «Рассвет» «Дружба» Приморско-Ахтарского района «Бейсуг» Приморско-Ахтарского района «Привольное» Каневского района

Отбор селекционной группы коров, предназначенных для воспроизводства племенных бычков с наследственной устойчивостью к персистентному лимфоцитозу и желательным в хозяйственном отношении генотипом по гену каппа-казеина

Составление вариантов скрещиваний для получения потомст-___ва, устойчивого к персистентному лимфоцитозу_

Отбор быков-производителей с наследственной устойчивостью

к персистентному лимфоцитозу

1. Изучение частоты встречаемости аллельных вариантов

гена ВоЬА ЭИВ 3 в популяции крупного рогатого скота ОПХ СКНИИЖ «Рассвет». Было отобрано три группы животных: первая -животные (п=24) , не реагирующие в РИД (здоровые), вторая (п=22) - животные, реагирующие в РИД (инфицированные), третья (п=14) -животные, реагирующие в РИД и имеющие гематологические изменения в крови (больные персистентным лимфоцитозом).

2. Изучение частоты встречаемости аллельных вариантов гена ВоЬА ОЛВ 3 в популяциях крупного рогатого скота племзавода «Привольное» Каневского района (п=60), «Дружба» Приморско-Ахтарского района (п=60).

3. Изучение частоты встречаемости аллельных вариантов гена ВоЬА ОИВ 3 в популяции высокопродуктивных коров племзавода «Бейсуг» Приморско-Ахтарского района (п=60). Для этого в племзаводе на основании предварительного изучения маточного поголовья по генотипу и фенотипу были отобраны наиболее ценные коровы, а именно:

обладающие максимально высокой продуктивностью, без экстерьерных недостатков;

имеющие ценный генотип (такую же высокую продуктивность и у предков родословной, то есть наследственно закрепленную).

4. Изучение частоты встречаемости аллельных вариантов гена каппа-казеина в популяции высокопродуктивных коров племзавода «Бейсуг» Приморско-Ахтарского района (п=60).

5. Отбор селекционной группы коров, предназначенных для воспроизводства ремонтных бычков, несущих выгодные варианты генов каппа-казеина и ВоЬА ОТ?В 3 и свободных от носительства провируса лейкоза крупного рогатого скота для заказного спарива-

ния с быками соответствующих генотипов.

6. Изучение генотипов быков-производителей и рекомендация использования быков с аллелями устойчивости к персистентному лим-фоцитозу для заказного спаривания с целью получения быков-производителей, несущих в своем генотипе аллели устойчивости к персистентному лимфоцитозу.

Генотипирование животных по локусам BoLA DRB 3 и капа-казеина включало следующие этапы:

1. Выделение ДНК;

2. Постановка полимеразной цепной реакции (для каждого из анализируемых фрагментов использовалась специфическая пара прай-меров);

3. Анализ полиморфизма длин фрагментов рестрикции (для участка гена BoLA DRB 3 с использованием эндонуклеаз Rsa I, Нае III, Bst Y I; для участка гена каппа-казеина - Hinfl) (M.J.T. Van Eijk, J.A. Stewart-Haynes, H.A. Levin,1992; Г.Е. Сулимова и др. 1995).

4. Электрофорез в агарозном или полиакриламидном геле

5. Выявление наличия провирусной ДНК вируса лейкоза КРС осуществлялось с использованием набора MasterMix (BLV gag) ООО «Изоген».

Анализ электрофореграмм позволял устанавливать генотипы животных и выявлять наличие провирусной ДНК вируса лейкоза крупного рогатого скота (Рис. 1 -2). Статистическая обработка результатов производилась по стандартным методикам (Е.К. Меркурьева, 1979; Т.Ф. Лакин, 1980).

284 пи

65пн 52 пн

А В

Рисунок 1. Электрофорез в 12% полиакриламидном геле продуктов амплификации экзона 2 гена BoLA DRB3 после рестрикции

эндонуклеазами BstY I, Rsa I, Нае Ш.

А -ДИК от животного с генотипом BoLA DRB3 2 *3/BoLA DRB3 2*11

1 Контрольный нерестрицированный продукт амплификации,

2 Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой BstY /,

3 Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой Rsa I,

4 Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой Нае III.

5 Маркер молекулярной массы (шаг маркера 50 пн)

В - ДНК от животного с генотипом BoLA DRB3 2 *22/BoLA DRB3 2 *22

6 Контрольный нерестрицированный продукт амплификации,

7 Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой Вч/Y /,

8 Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой Rsa I,

9 Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой Нае III

219 ПН 167 пн 112 пн

426 пн 326 пн

100 пн

1 2 3 4 5 Рисунок 2. Электрофорез в 8 % полиакриламидном геле продуктов ПЦР, обработанных рестриктазой НтГ I.

1. М (шаг маркера 100 пн);

2. ПЦР - продукт, не обработанный рестриктазой (453 пн),

3, 5 АА- генотип,

4, 6 ВВ — генотип

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Изучение частоты встречаемости генотипов ВоЬА 1ЖВ 3 гена в группах здоровых, инфицированных ВЛКРС и больных персистентным лимфоцитозом животных

В работе были использованы животные черно-пестрой породы из ОПХ СКНИИЖ «Рассвет» (п=60). У животных трех отобранных групп: первая - животные (п=24), не реагирующие в РИД (здоровые), вторая - животные (п=22), реагирующие в РИД (инфицированные), третья - животные (п=14), реагирующие в РИД и имеющие гематологические изменения в крови (больные персистентным лимфоцитозом).

Проведенные исследования показали (табл 1), что генотипы ВоЬА ЭЯВ 3 11* 23 и 12 *12 не встречались у больных, а 24 * 24, 15 »16, 8 *8 и 22 *22 - у здоровых животных. В исследуемой выборке больных лейкозом животных распространены те аллели, которые в литературе были описаны как аллели, обуславливающие чувствительность животных к лейкозу (Г. Е. Сулимова и др., 1995). Напротив, у животных, остававшихся здоровыми, несмотря на постоянный контакт с больными, встречаются аллели, обуславливающие устойчивость.

Таким образом, удалось подтвердить, что аллели гена Во1_А 3, обуславливающие чувствительность к персистентному лимфоцито-зу, встречаются у животных с клиническими проявлениями болезни; напротив, аллели гена ВоЬА О ИВ 3, обуславливающие устойчивость к персистентному лимфоцитозу, не встречаются в выборке гематологически больных.

Распределение аллелей гена ВоЬА ГШ В 3 в группах больных лейкозом и здоровых животных черно-пестрой породы

Отношение к лейкозу

1 ЧР в4 больные

.А ЭИВ 3 ■енотип Частота чаемости, здоровые РИД*-позитивные в том числе с гематологией

о ей еа п % п % и от больных, %

11 * 23(У/У)* 15,0 9 15,0 - - - -

23 * 23 (У/У) 3,0 3 5,0 - - - -

11* 24 (Ч/У) 16,7 6 10,0 4 6,7 - -

24 " 24 (Ч Ч) 17 0 - - 10 16,7 4 11 1

8 ' 8 ГЧ-Ч) 10 0 - - ъ 10,и ■> •5 5

22 * 22 (Ч'Ч! 8 3 - - 5 8,1 4 II 1

18*8 (Ч/Н) 10,0 2 3,3 4 6,7 - -

15 ♦ 16 (Ч/Н) 3,0 - - - - 2 5,5

18*22 (Ч/Н) 3,0 - - 1 1,6 - -

12 * 12 (Н/Н) 7,0 4 6,7 - - - -

25 * 8 (Ч/Н) 7,0 - - 6 10 2 5,5

Всего 100 24 40 36 60 14 38,7

Примечание: Н - нейтральные аллели; У - аллели, обуславливающие устойчивость к персистентному лимфоцитозу; Ч - аллели, обуславливающие чувствительность к персистентному лимфоцитозу

3.2. Изучение частоты встречаемости генотипов BoLA DRB 3 в различных популяциях Краснодарского края

В четырех разных хозяйствах Краснодарского края с целью изучения частоты встречаемости генотипов BoLA DRB 3 были взяты образцы крови у 240 коров и телок (по 60 образцов в каждом хозяйстве).

ПЦР с праймерами HLO 30 и HLO 32 и последующим анализом полиморфизма длин фрагментов рестрикции с использованием эндо-нуклеаз BstY I, Rsa I и Нае III позволили установить генотипы животных по гену BoLA DRB 3. Результаты исследований приведены в таблицах 2-5.

Таблица 2

Частота встречаемости аллелей гена BoLA DRB3*b популяции

крупного рогатого скота хозяйства «Рассве!» (п= 60)

Аллели Во!.A DRB 3

У-аллели Ч-аллсли Н-аллели

II 23 24 8 16 22 25 15 12 18

Частота встречаемости, (%)

15 12 24 18 2 9 5 2 7 6

''Примечание частоты встречаемости окрууюпы г)о цепых значении

Таблица 3

Частота встречаемости аллелей I ена ВоЬА 011ВЗ в популяции _крупного рогатого скота хозяйства «Бейсуг» (п= 60)

Аллели Во1 А DKB 3

У-аллслн ч- аллсли Н-алчели

2} II 2S 16 24 12 2 1 1* 25 29 21 15 S 26 J 20 13

часюга вирсчасжюи, Ч

2 2^ 2 2 7 8 1 3 5 II 1 ■I 3 1 1 1 3 1

Частота встречаемости аллелей гена ВоЬА ОКБ 3 в популяции крупного рогатого скота хозяйства «Дружба» (п= 60)

Аллели ВоЬА ОКБ 3

У-ЯЛ1СЛ1 т Ч аллели Н аллели

11 23 28 22 24 16 8 7 27 25 18 14 12 3 20 9 26 21 10

чаекгга вс грсчяемоп н %

II 1 17 II 5 (> 4 1 3 11 2 1 4 2 1

Таблица 5

Частота встречаемости аллелей гена ВоЬА 1ЖВ 3 в популяции крупного рогатого скота хозяйства «Привольное» (п= 60)

Аллели ВоЬА 1ЖВ 3

У-аллели Ч-аллели Н-аллели

11 22 24 8 16 21 12

частота встречаемости. %

3 13 37 18 13 11 5

Мы распределили аллели в группы по признаку отношения к развитию персисгентного лимфоцитоза. Аллели *8, * 16, *22, *24. обуславливающие повышенный риск развития гематологической стадии лейкоза, обозначили как Ч-аллели; * 11. *23.*28 - как У-аллели; все остальные - как Н -аллели, их наличие у животного не связывают с повышением или понижение риска развития персистентного лимфоцитоза. Па рисунке 3 показано распределение У- Ч- и Н-аллелей у исследованных животных.

Рисунок 3. Частоты встречаемости аллелей гена BoLA DRB 3 у животных различных хозяйств Краснодарского края

! Pat пределение ачче teil sena Bol A DRB 3 в хозяйстве « Heùcvv».

2 Распределение ал te ieii sena Bol Л DRB 3 в хотйстве «Uput.oib-пие»,

3 Распределение а чле чей репа Bol.4 DRB 3 в хотйстве «Дружба»

4 Распределение аллелей гена BoLA DRB 3 в хозяйстве «Рассвет»

си лепи, обуславливающие чувствите ¡ыюсть к персистешпио му лимфоцита ¡у ал te т. обусчав пманщиеустойчивость к персистентному лимфоцитозу нейтральные алчет

Как видно из рисунка 3, у животных хозяйства «Бсйсуг» наблюдается сбалансированная частота встречаемости различных аллелей гена BoLA DRB 3 (то есть, примерно равная частота встречаемое ги аллелей, обуславливающих устойчивость, чувствительность или нейтральность) Наибольший процент аллелей, обуславливающих устойчивость (У-аллелей) выявлен также в хозяйстве «Бейсуг».

Подобные закономерности распределения аллелей связаны с тем, что голштинский скот является более продуктивным, чем скот красной степной породы. Вероятно, имеет место сцепленное насле-

дование признаков: устойчивость к инфекционным заболеваниям /низкая продуктивность или чувствительность к инфекционным заболеваниям/ высокая продуктивность.

Для проверки этой гипотезы мы установили частоты встречаемости генотипов в хозяйстве «Дружба». Для создания статистически значимых групп объединили животных с генотипом, несущих одну или две аллели устойчивости в первую группу, а животных, несущих одну или две аллели чувствительности, - во вторую группу (табл. 6).

Таблица 6

Распределение генотипов по ВоЬА ГШВ 3 в хозяйс1ве «Дружба»Пр11морско-Ахтарскою района (п=60)

Группа Группа I Группа 11

1 оно 1 им по Во!,Л 1ЖВЗ Н/У У/У Ч/Ч Ч/У Н/Ч

Масюк» нсфсчаемосш. % 17 4 17 8 35

Продуктивное! 1. К1 Лшкпщию 6342 1 578 6006 • 338

Инфицировшшое-1 и ирониру-еом ЛКРС, % 62,5 82,4

Установлено, что группа I, вопреки ожиданиям, превосходит, хотя и не достоверно, группу II. Однако инфицированность лейкозом в группе II оказалась выше почти на 20%, и, вполне возможно, снижение продуктивности связано именно с более неблагополучным состоянием здоровья животных в этой группе. В хозяйстве с меньшей степенью инфицированное™ («Бейсуг»), животные с Ч-аплелыо в генотипе показали тенденцию к большей продуктивности, чем с У-аплелью (табл. 7).

Распределение геногипов по ВоЬА ИНВ 3 в хозяйстве «Бейсуг» Приморско-Ахтарского района (п=60)

Группа ГР; ^ппа I Группа И

Генотип по ВоЬА ОЯВ 3 Н/У У/У Ч/Ч Ч/У н/ч

Частота встречаемости, % 23 8 13 16 16

Продуктивность, кг /лакгацию 5843 ± 93 5991 + 139

Инфицированность провирусом ЛКРС. % 33,0 55,5

Интересно, что и в хозяйстве «Привольное» и в хозяйстве «Бейсуг» получены сходные результаты по разнице в уровне инфицированности устойчивых и чувствительных к персистентному лимфоцитозу группах. Вполне вероятно, что генотип по гену ВоЬА БЯВ 3 не только оказывает влияние на восприимчивость организма к персистентному лимфоцитозу, но и на восприимчивость организма к вирусу лейкоза крупного рогатого скота, хотя зашита в этом случае далека от абсолютной.

В условиях значительного распространения лейкоза, с учетом низкой частоты встречаемости устойчивых к персистентному лимфоцитозу и тенденции к увеличению числа чувствительных генотипов (в связи с повсеместной «голштинизацией» скота), необходимо начать работы по введению признака устойчивости животных к персистентному лимфоцитозу в селекцию крупного рогатого скота.

3.3. Отбор селекционной группы коров, предназначенных для

воспроизводства быков-производителей, и выявление животных, несущих признаки устойчивости к персистентному лимфоцитозу и улучшенных технологических качеств молока

Предварительные исследования показали, что используемые в крае быки-производители в большинстве своем несут аллели, определяющие чувствительность к персистентному лимфоцитозу Поэтому актуальным направлением исследований представляется поиск высокопродуктивных коров, у которых в генотипе, помимо хороших продуктивных качеств, был бы закреплен признак устойчивости к этому заболеванию. Естественно, что отобранные животные должны быть свободны от ВЛКРС, желательный признак - наличие выгодного в хозяйственном отношении генотипа ВВ по гену каппа-казеина. В исследуемой выборке (п=60, хозяйство Бейсуг) по результатам анализов было отобрано только 4 коровы, удовлетворяющие следующим требованиям:

гомозиготный по устойчивости к персистентному лимфоцитозу генотип;

отсутствие инфицированности ВЛКРС;

продуктивность не ниже 5500 кг молока за лактацию (жир 3,8

%),

и лишь одно из этих животных несло выгодный в хозяйственном отношении ВВ генотип каппа-казеина.

Таким образом, проведенные исследования показали, что даже в тех хозяйствах, где в относительно большом проценте случаев встречаются аллели устойчивости к персистентному лимфоцитозу количество коров, которых можно отобрать для воспроизводства быков-производителей с признаком устойчивости, очень невелико. Однако вести подобный отбор

необходимо сейчас, так как в крае работают производители, несущие в своем генотипе в основном аллели чувствительности и в ближайшее время подобный отбор будет невозможен.

Соответственно, становится понятно, что не эффективно ограничивать одним хозяйством работу по выявлению коров, которых можно отобрать для воспроизводства быков-производителей с признаком устойчивости.

3.4. Использование генотипирования по локусу ВоЬА ОЯВ 3 в установлении происхождения животных

Как было отмечено выше, ген ВоЬА ОЛВ 3 может быть представлен в популяции довольно большим количеством аллелей. Это дает возможность использовать генотипирование по ВоЬА Б11В 3 для определения происхождения животных. Генотип быка представлен двумя аллелями этого гена. В процессе образования гамет половина спермиев становится носителем одной аллели, а половина - другой. Понятно, что каждая из дочерей должна унаследовать одну из аллелей изначального генотипа родителя. Нами проанализировано потомство (п=34) 5 быков-производителей. Установлено, что 6 животных, которые согласно родословной происходили от того или иного производителя, не несли в своем генотипе, характерных для него аллелей гена ВоЬА ЭЯВ 3.

выводы

1. Аллели гена ВоЬА ОИВ 3, обуславливающие чувствительность к персистентному лимфоцитозу, встречаются у животных с клиническими проявлениями болезни; напротив, аллели гена ВоЬА БИВ 3, обуславливающие устойчивость к персистентному лимфоцитозу, не встречаются в выборке гематологически больных.

2. В группах животных племзавода «Привольное» и ОГ1Х «Рассвет» отмечена более высокая частота встречаемости аллелей, обуславливающих чувствительное! ь к персистентному лимфоцитозу (Ч-аллелей), по сравнению с группами животных хозяйств «Бейсуг» и «Дружба» (соответственно 81%. 53% и 32%. 39%).

3. Чем выше степень «голштинизаиии» скота в хозяйстве, тем меньшее количество вариантов аллелей гена Во1.А ОЯВ 3 там удастся встретить («Привольное» - 7 вариантов: ОПХ «Рассвет» - 10 вариантов).

4. В условиях значительного распространения лейкоза, учитывая низкую частоту встречаемости устойчивых к персистентному лимфоцитозу и тенденцию к увеличению числа чувствительных генотипов (в связи с повсеместной «голштинизацией» скота), необходимо начать работы по введению признака устойчивости в селекцию крупного рогатого скота.

5. Даже в тех хозяйствах, где в относительно большом проценте случаев встречаются аллели устойчивости к персистентному лимфоцитозу, количество коров устойчивой группы, которых можно отобрать в селекционную группу для воспроизводства ремонтных бычков, очень невелико (в хозяйстве «Бейсуг» - 6%). Однако, вести подобный отбор необходимо, так как в крае работают быки, несущие в

своем генотипе в основном аллели чувствительности, и в ближайшее время подобный отбор будет невозможен.

6. В группе быков голштинской красно-пестрой породы не удалось выявить животных, несущих обе аллели гена BoLA DRB 3, определяющих устойчивость к персистентному лимфоцитозу. В данном случае для закрепления можно использовать быков с гетерозиготным по устойчивости генотипом, с последующим генотипированием полученного потомства.

7. Возможно использование генотипирования по локусу BoLA DRB 3 для контроля происхождения животных и качества ведения селекционно- племенной работы в хозяйствах.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

В популяциях с высокой частотой встречаемости инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота животных использовать быков-производителей, несущих признак устойчивости к персистентному лимфоцитозу.

С целью получения устойчивых к персистентному лимфоцитозу быков - производителей ввести признак устойчивости как критерий отбора коров в селекционную группу, предназначенную для отбора ремонтных бычков

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ковалюк Н . Ковалюк А . Чурилова Е , Масленников М , Сивогривое Д. Использование генетических маркеров в селекционно - племенной работе Ч Молочное и мясное скотоводство. - 2004 - № 8. - С.20 -21

2. Ковалюк Н В , Ковалюк А. А., Масленников М. Г., Сивогривое Д. Е. Типироваиис аллелей гена BoLA DRB 3, отвечающего за формирование устойчивости крупного рогатого скота к псрси-стентному лимфоцитозу у быков-производителей // Материалы международной научно практической конференции: Роль и значение метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в прогрессе живот ново ic та XX и XXI веков. Дубровицы. 2004 С. 240-241

3. Коватюк Н Ковалюк А.. Чурилова Е„ Масленников М Изучение полиморфизма некоторых генов у быков - производителей// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 2005.-№ 1. С.64-65

4. Соколов И В , Ковалюк Н.В., Чурилова Е А.. Чижевская В.В., Ковалюк A.A., Масленников М.Г. Возможности использования молскулярно-биологических методов в комплексной оценке животных // Материалы научно-практического семинара по темам: «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения». «Генетические маркеры в селекции животных» п. Быково, Московской обл.- 2005. 104-106.

Подписано в печать 16.11.2005. Формат 60x84/1 б. Печ. л. 1 Тираж 100. Заказ № 673

Кубанский государственный аграрный университет 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13

J

i

*

to

к i

?

)

-329g

РНБ Русский фонд

2006-4 23538

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Масленников, Михаил Геннадьевич

Введение 3 Обзор литературы.

1.1 Общая характеристика вируса лейкоза крупного рогатого скота и заболевания, вызываемого этим вирусом.

1.2 Методы диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота.

1.3 Мировой опыт борьбы с лейкозом крупного рогатого скота.

1.4 Эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в Краснодарском крае и регионах Российской федерации.

1.5 Наследственная предрасположенность крупного рогатого скота к лейкозу и методы её выявления.

2. Материал и методика проведения исследования.

2.1 Методика проведения исследований.

2.2 Выделение ДНК.

2.3 Проведение полимеразной цепной реакции.

2.4 Анализ полиморфизма длин фрагментов рестрикции.

2.5 Электрофорез.

3. Собственные исследования.

3.1 Оптимизация методик взятия крови, выделения ДНК, проведения ПНР и ПДРФ-анализов.

3.2 Характеристика изученных животных.

3.3 Изучение частоты встречаемости генотипов BoLA DRB 3 гена в группах здоровых животных, инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота и больных персистентным лимфоцитозом.

3.4 Изучение частоты встречаемости аллелей гена BoLA DRB 3 в различных популяциях крупного рогатого скота Краснодарского края 57 3.5 Отбор селекционной группы коров, предназначенных для воспроизводства быков-производителей, и выявление животных, несущих признаки устойчивости к персистентному лимфоцитозу и улучшенных технологических качеств молока.

7 3.6 Изучение генотипов быков-производителей.

3.7 Использование генотипирования по локусу BoLA DRB в установлении происхождения животных.

3.8 Экономическая оценка эффективности использования генетического маркера устойчивости к персистентному лимфоцитозу в селекции крупного рогатого скота.

4. Обсуждение результатов исследований

Выводы.

Предложения производству.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Использование генотипирования по локусу BoLA DRB 3 в селекции крупного рогатого скота на устойчивость к персистентному лимфоцитозу"

Актуальность темы

Успехи биологических наук - физиологии, биохимии, гистологии и генетики — обусловили в начале нашего столетия развитие нового направления в селекции - оценки потенциальных возможностей (продуктивных и племенных) животных по их внутренним морфологическим особенностям - интерьеру. Одним из основоположников этого направления в нашей стране был Е.Ф. Лискун (цит. по Е.В. Эйдригевич, В.В. Раевская, 1978), который в начале прошлого века показал связь между гистологическим строением молочных желез и молочной продуктивностью коров. Большой интерес исследователи проявили к составу крови. В настоящее время накоплен довольно большой материал о связи ряда биохимических и иммунологических показателей с хозяйственно-полезными качествами различных животных (Е.В. Эйдригевич, В.В. Раевская, 1978). В настоящее время все большую актуальность приобретают исследования, позволяющие выявлять полиморфизм на уровне ДНК и связывать его с качественными показателями животных.

Зная нуклеотидную последовательность и локализацию конкретного участка ДНК, можно выявлять в нем полиморфные участки, то есть участки, различающиеся у представителей исследуемой группы. Затем устанавливается связь полиморфного варианта с тем или иным хозяйственно-полезным признаком, заболеванием, другими показателями.

Использование отбора по генетическим маркерам выводит селекцию на новый уровень, позволяя непосредственно оценивать генотипы (С. Camaschella, A. Alfarano, Е. Gottadi, 1990; В.И. Глазко и др., 2000).

Инфицированность крупного рогатого скота вирусом лейкоза в большинстве хозяйств Краснодарского края достигла 100% у взрослых животных.

В настоящее время одной из наиболее известных методик ликвидации лейкоза является так называемая «технологическая», предусматривающая выделение из стада больных особей, изолированное выращивание здоровых, выполнение других зооветеринарных мероприятий. В то же время селекционные методы борьбы с этим заболеванием, на наш взгляд, разработаны недостаточно.

Между тем, отечественными и зарубежными исследователями установлено, что отдельные животные одной и той же породы имеют различную устойчивость (наследственную невосприимчивость) к лейкозу (персистентному лим-фоцитозу), которая обуславливается наличием определенных аллелей генов, отвечающих за эффективный иммунный ответ в организме. Сохранение и накопление этих аллелей в потомстве повышает его устойчивость к персистентному лимфоцитозу, а это способствует воспроизводству наследственно устойчивых к заболеванию животных и, в конечном итоге, оздоровлению всего стада.

Цель и задачи исследований.

Цель настоящей работы - разработка направлений использования в селекции нового признака - наследственной устойчивости к персистентному лимфоцитозу.

В связи с этим программа исследований включала решение следующих задач:

- обосновать необходимость селекции крупного рогатого скота на устойчивость к персистентному лимфоцитозу;

- изучить популяции крупного рогатого скота Краснодарского края на предмет встречаемости аллельных вариантов гена BoLA DRB 3, отвечающего за предрасположенность к персистентному лимфоцитозу;

- изучить племенных быков, используемых в системе искусственного осеменения края на предмет структуры гена BoLA DRB 3;

- в одном из хозяйств отобрать по основным зоотехническим характеристикам высокопродуктивных коров, предназначенных для воспроизводства племенных быков, и выявить среди них особей с устойчивостью к персистентному лимфоцитозу;

- представить возможные варианты скрещиваний для получения устойчивого к персистентному лимфоцитозу племенного молодняка.

Научная новизна исследований.

Оптимизированы методики проведения полимеразной цепной реакции и анализа полиморфизма длин фрагментов рестрикции для генотипирования по локусам BoLA DRB3 и каппа-казеина.

Впервые изучена генетическая структура популяций крупного рогатого скота Краснодарского края по генам BoLA DRB 3 и каппа-казеина. Установлено преобладание аллелей чувствительности к персистентному лимфоцитозу над аллелями устойчивости и нейтральными аллелями в популяциях скота с высокой долей крови голштинской породы. Показано, что аллельный полиморфизм по гену BoLA DRB3 более разнообразен в популяции аборигенной красной степной породы. Установлена высокая частота встречаемости генотипа АА по гену каппа-казеина.

Практическая значимость и реализация результатов исследований.

Обоснована необходимость использования при отборе селекционной части стада коров, предназначенных для воспроизводства племенных бычков, признака устойчивости к персистентному лимфоцитозу. В хозяйстве «Бейсуг» Приморско-Ахтарского района Краснодарского края отобраны коровы, несущие гомозиготный по устойчивости генотип и свободные от носительства про-вируса лейкоза крупного рогатого скота. В этом же хозяйстве изучена частота встречаемости генотипов по гену каппа-казеина. Проведены исследования образцов семени быков-производителей голштинской красно-пестрой породы и установлен их генотип по локусам BoLA DRB3 и каппа-казеину. Составлены варианты заказного подбора, позволяющие получить потомство, гомозиготное по устойчивости к персистентному лимфоцитозу.

На защиту выносятся следующие положения: животные, несущие одну или две аллели гена BoLA DRB3, обуславливающие устойчивость к персистентному лимфоцитозу, генетически защищены от перехода лейкоза в стадию персистентного лимфоцитоза; в различных популяциях крупного рогатого скота Краснодарского края аллели чувствительности к персистентному лимфоцитозу преобладают над аллелями устойчивости; популяция скота красной степной породы генетически более разнообразна по локусам BoLA DRB 3 и каппа-казеина, чем популяции с высокой долей крови голштинской породы; в популяциях крупного рогатого скота, в значительной мере пораженных лейкозом, необходимо использовать быков-производителей, несущих аллели устойчивости к персистентному лимфоцитозу; при отборе селекционной группы коров, предназначенных для воспроизводства племенных бычков, необходимо использовать признак устойчивости к персистентному лимфоцитозу.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Масленников, Михаил Геннадьевич

ВЫВОДЫ

1. Аллели гена BoLA DRB 3, обуславливающие чувствительность к персистентному лимфоцитозу (8, 16, 22, 24), встречаются у животных с клиническими проявлениями болезни, напротив - аллели гена BoLA DRB 3, обуславливающие устойчивость к персистентному лимфоцитозу, не встречаются в выборке гематологически больных.

2. В группах животных племзавода «Привольное» и ОПХ «Рассвет» отмечена более высокая частота встречаемости аллелей, обуславливающих чувствительность к персистентному лимфоцитозу (Ч-аллелей), по сравнению с группами животных хозяйств «Бейсуг» и «Дружба» (соответственно 81%, 53% и 32% и 39%).

3. Чем выше степень «голштинизации» скота в хозяйстве, тем меньшее количество вариантов аллелей гена BoLA DRB 3 там удается встретить («Привольное» - 7 вариантов, ОПХ «Рассвет» - 10 вариантов).

4. В условиях значительного распространения лейкоза, учитывая низкую частоту встречаемости устойчивых к персистентному лимфоцитозу и тенденцию к увеличению числа чувствительных генотипов (в связи с повсеместной «голштинизацией» скота), необходимо начать работы по введению признака устойчивости в селекцию крупного рогатого скота.

5. Даже в тех хозяйствах, где в относительно большом проценте случаев встречаются аллели устойчивости к персистентному лимфоцитозу количество коров устойчивой группы, которых можно отобрать в селекционную группу для воспроизводства ремонтных бычков, очень невелико (в хозяйстве «Бейсуг» - 6%). Однако вести подобный отбор необходимо сейчас, так как в крае работают быки, несущие в основном в своем генотипе аллели чувствительности, и в ближайшее время подобный отбор будет невозможен.

6. В группе быков голштинской красно-пестрой породы не удалось выявить животных, несущих обе аллели гена BoLA DRB 3, определяющих устойчивость к персистентному лимфоцитозу. В данном случае для закрепления можно использовать быков с гетерозиготным по устойчивости генотипом, с последующим генотипированием полученного потомства.

7. Возможно использование генотипирования по локусу BoLA DRB 3 для контроля происхождения животных и качества ведения селекционно- племенной работы в хозяйствах.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

В популяциях с высокой частотой встречаемости инфицированных виру' сом лейкоза крупного рогатого скота животных использовать быков производителей, несущих признак устойчивости к персистентному лимфоцито зу.

С целью получения устойчивых к персистентному лимфоцитозу быков -производителей ввести признак устойчивости как критерий отбора коров в се лекционную группу, предназначенную для отбора ремонтных бычков.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Масленников, Михаил Геннадьевич, Краснодар

1. Авилов В.М., Нахмансон В.М. Проблемы оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза // Ветеринария. 1995. -№ 11. - С. 3-6

2. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж. Молекулярная биология клетки. М.: Мир, 1987.- 1050 с.

3. Альштеин А.Д. Подходы к созданию генно-инженерной вакцины против лейкоза на основе вируса осповакцины// Тез. докл. II международной научн. конф.: Биотехнология в животноводстве и ветеринарии. М., 2000. - С. 149 -151

4. Архипов А., Дульнев В. О типах и рационах кормления скота // Молочное и мясное скотоводство. 1997. -№ 1.- С. 12-15

5. Белов А.Д., Рогожина Г.В. О патогенезе лейкозов крупного рогатого скота // Ветеринария. -1997. № 12. - С. 16- 19

6. Бусол В.А., Лиманская О.Ю., Лиманский А.П. ПЦР-диагностика ВЛКРС // Ветеринарная медицина. 1998. -В. 74. -С. 35-44

7. Волкова Р.А. и др. Молекулярно генетическая диагностика гепатита В // Тез. докл. III Всероссийской научно - практической конференции: Генодиагностика в современной медицине. - М., 2000. - С. 45 - 47

8. Галеев Р.Ф. Вирус лейкоза КРС (культуральные, инфекционные и иммунологические свойства). Уфа: Ветеринарная медицина. - 1999. - 147 с.

9. Галеев Р.Ф. Теоретическое обоснование, экспериментальное подтверждение путей передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота, усовершенствование методов диагностики и мер борьбы с ним. Автореф. дисс. докт. вет. наук. Казань. - 2000

10. Галеев Р.Ф., Руденко А.А., Валиев Ф.Р. Диагностика и профилактика лейкоза КРС // Практик. № 5-6. - 2003. - С.44 - 48

11. Глазко В.И. и др. Полиморфизм молекулярно генетических маркеров у домашней лошади и лошади Пржевальского // Тез. докл. II международной на-учн. конф.: Биотехнология в животноводстве и ветеринарии. — М., 2000. — С. 151-152

12. Глазко В.И., Кириленко С.Д., Созинов А. А. Межлокусные ассоциации некоторых генетико биохимических систем у крупного рогатого скота // Генетика. - 1997. - Т. 33. -№ 4. - С. 512 - 517

13. Глазко В.И. ДНК-технологии животных.-Киев: Нора-принт.-1997.-173 с.

14. Глазко В.И., Доманский Н.Н., Созинов А.А. Современные направления использования ДНК-технологий/ЯДитология и генетика. 1998.- Т. 32.- №5.-С.80-93

15. Глазко В.И., Дунин И.М., Глазко Г.В., Калашникова Л.А.Ведение в ДНК-технологии. -М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2001.- 436 с.

16. Глазко В.И., Кириленко С.Д. Идентификация генотипов по каппа-казеину и BLAD-мутации с использованием полимеразной цепной реакции у крупного рогатого скота//Цитология и генетика. 1995.- № 6.-С.60-63

17. Говорун В.М., Момыналиев К.Т. Перспективы применения методов ДНК-диагностики в лабораторной службе // Клиническая лабораторная диагностика. 2000. - № 5. - С. 25-30

18. Гулюкин М.И. , Замараева Н.В. Медико биологические аспекты вируса лейкоза КРС // Сб.: Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбыс лейкозами сельскохозяйственных животных и птиц. 2000. -Екатеринбург. -С. 12-25

19. Гулюкин М.И. и др. Дифференциальная диагностика гемабластозов крупного рогатого скота// Бюл. ВИЭВ, М.: 1996. - Вып. 77. - С. 46

20. Гулюкин М.И. и др. Разработка эффективных мероприятий против лейкоза крупного рогатого скота // Ветеринария. 2002. - № 12. - С. 3 - 8

21. Гулюкин М. И. Состояние и перспективы борьбы с лейкозом крупного рогатого скота // Ветеринария. 1999. - № 12. - С. 3 - 8

22. Гулюкин М.И., Замараева Н. В., Седов В. А. и др. Основные тенденции в организации и проведении противолейкозных мероприятий // Труды ВИЭВ. -М.- 1999.-Т. 72.-С. 16-22

23. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота. Методические указания. — М.: Агропромиздат, 1989

24. Жебровский JI.C. Селекционно-генетические основы белкового состава молока коров. М.: Колос. - 1973, 248 с.

25. Жучаев К.В. Генетическая характеристика иммунореактвности и естественной резистентности сельскохозяйственных животных // Сельскохозяйственная биология. 1992. - № 6. - С. 36 - 46

26. Замараева Н.В. , Гулюкин М.И., Снежков М.Н. Экспериментальные исследования по выявлению возможности передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота через молоко лабораторным животным / Бюлл. ВИЭВ. 1996. - № 77.-С. 66

27. Иванова JI. А. Опыт применения иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу лейкоза на заключительном этапе оздоровления // Бюл. ВИЭВ. -1999. т. 72. С. 202-209

28. Калашникова JI.A., Дунин И.М., Глазко В.И., Рыжова Н.В. ДНК-технологии оценки сельскохозяйственных животных.- М., 1999.- 148 с.

29. Ковалюк Н., Ковалюк А., Чурилова Е., Масленников М. Изучение полиморфизма некоторых генов у быков производителей// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2005. - № 1. С.64-65

30. Коромыслов Г.Ф., Гулюкин М.И.,. Симонян Г.А. Основные итоги и перспективы научных исследований по проблеме лейкозов сельскохозяйственных животных //Тр. ВИЭВ. т. 72. - М.: 1999. - С.3-11

31. Коромыслов Г.Ф., Шишков В. П. Основы профилактики и ликвидации лейкоза крупного рогатого скота // Ветеринария. 1993. - № 4. - С. 15-18

32. Костенко Т.С. и др. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. М.: Агропромиздат. - 1989. - 272 с.

33. Крикун В. А. Лейкоз крупного рогатого скота и иммунологическая толерантность // Ветеринария. 2002. - № 6. -С. 7-9

34. Крикун В.А. Слизистая носа наиболее вероятный путь заражения животных вирусом лейкоза КРС // Лейкозы крупного рогатого скота. - М. - 1985. - С. 5 - 6

35. Кугенев П.В., Барабанщиков Н.В. Практикум по молочному делу. М.: Колос. - 1978, 240 с.

36. Кудрявцева Т.П. Лейкоз животных. М.: Россельхозиздат. - 1980. -158 с.

37. Кузин А.И., Закрепина Е.Н. Влияние лейкоза на продуктивность коров и качество молока // Ветеринария. -1997. № 2. - С. 19-21

38. Кузин А.И., Печерская М.В. К вопросу оздоровления хозяйств Вологодской области от лейкоза крупного рогатого скота // Тр. ВАСХНИЛ. 1974. -С. 228

39. Кузнецова Н.В. и др. Использование полимеразной цепной реакции для выявления инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота // Ветеринария. 1997. - С. 12 - 13

40. Кукайн Р.А. и др. Вирус лейкоза крупного рогатого скота. Рига: Зинат-не, 1982.-174 с.

41. Лакин Т.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. - 293 с.

42. Лактионов A.M. Селекционно генетические аспекты лейкозов крупного - рогатого скота // Ветеринария. - 1972. - № 6. - С. 66 - 69

43. Лемеш В.М. и др. Лейкоз крупного рогатого скота. Минск: «Ураджай», 1987. - 220 с.

44. Лиманский А.П., Лиманская О.Ю. Молекулярно генетические методы — основа программ по искоренению лейкоза крупного рогатого скота // Биотехнология. - 2001. - № 3. - С. 40-50

45. Мазин А.В., Кузнеделов К.Д., Краев А.С. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. Новосибирск: Наука, 1990. -248 с.

46. Мазин А.В., Краев А.С., Потапов В.А. Анализ генома. Методы. М.: Мир, 1990.- 176 с.

47. Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод ПЦР // Государственный комитет санитарно эпидемиологического надзора РФ. -1995

48. Мурватуллоев С.А. Носовые истечения больных лейкозом коров, как фактор передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота // Тр. ВИЭВ. 1999. - Т. 72. - С. 128-129

49. Меркурьева Е.К. Биометрия в селекции и генетике сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 1979. - 423 с.

50. Муровска М., Козырева С., Томсоне В. Ингибирование репликации вируса лейкоза крупного рогатого скота у трансгенных кроликов под влиянием антисмысловых РНК // Экспериментальная онкология. 2001. - № 1. - С. 15-20

51. Нахмансон В.М. Лейкоз крупного рогатого скота. М.: Россельхозиздат. - 1986.-221с.

52. Нахмансон В.М., Дун Е.А. Эпизоотология лейкоза крупного рогатого скота и меры борьбы с ним // Итоги науки и техники. — 1986. С.146 - 149

53. Ным Э.М. и др. Распространение лейкоза крупного рогатого скота в Эстонской ССР//Труды АН Латвийской ССР.- Рига: Зинатне, 1970. 145 с.

54. Орлянкин Б.Г. Классификация и номенклатура РНК — содержащих вирусов позвоночных // Сельскохозяйственная биология. 1996. - № 2. - С. 3-24

55. Панков Б.Г. Дифференциация лейкомоидных реакций у крупного рогатого скота // Ветеринария.- 1980. -№ 12. С. 32-33

56. Петров Р.В. Иммунология. М.: Медицина, 1982. - 368 с.

57. Плохинский Н.А. Биометрия. М.: Изд-во Московского ун-та, 1970. -367 с.

58. Плохинский Н.А. Руководство по биометрии для зоотехников. М.: Колос, 1969. - 256 с.

59. Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота. Утверждены приказом Минсельхозпрода России от 11 мая 1999, № 359. М.: Зарегистрировано распоряжением Минюста России, регистрационный знак № 1799 от 04 июня 1999

60. Приймак А.А. и др. ПЦР быстрый и высоко чувствительный метод определения возбудителя туберкулеза в биологических материалах // Пульмонология. - 1995. -№. 3. - С. 16 -20

61. Прохватилова Л.Б. и др. Диагностика лейкоза КРС методом ПЦР//Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 1998. - № 5 .-С. 65 - 68

62. Прохватилова Л.Б. и др. Применение ПЦР для раннего обнаружения про-вируса лейкоза крупного рогатого скота у экспериментально инфицированных животных // Ветеринария. -2001. -№ 8. С. 17-21

63. Прохоров А.В. Опыт работы по ликвидации лейкоза КРС в Каневском районе // Ветеринария Кубани. 2004. - № 4. - С. 4 - 6

64. Рис Э., Стернберг М. Введение в молекулярную биологию. М.: Мир, 2002. - 142 с.

65. Румянцев Н.В., Шатерникова Т.Н. Современные данные по лейкозу крупного рогатого скота//Ветеринария. 1963. -№ 4. - С. 20 - 26

66. Симонян Г.А. Морфологические изменения крови и пунктата костного мозга у коров при лейкозе //Ветеринария. 1963. -№ 6. - С. 33 - 38

67. Симонян Г.А. Степень заболеваемости лейкозом и инфицированности ВЛКРС поголовья скота в неблагополучных хозяйствах // Сб.: Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с лейкозами с. х. животных и птиц / Екатеринбург. - 2000. - С. 36 -44

68. Слепченко А.Р. Главный комплекс гистосовместимости сельскохозяйственных животных: иммуногенетические и популяционные аспекты // Успехи современной генетики. 1994. - № 19. - С. 178 - 205

69. Смирнов Ю.П. Влияние лейкоза на молочную продуктивность коров //Молочное и мясное скотоводство. 1999. - № 4. - С. 25-28

70. Смирнов Ю.П. Развитие лейкозного процесса у инфицированных ВЛКРС коров в зависимости от их возраста // Ветеринария 1999. - № 12.-С. 15-17

71. Смирнова В.Н. Ветеринарно санитарная оценка мяса при лейкозе крупного рогатого скота // Сб.: Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с лейкозами сельскохозяйственных животных и птиц. - 2000. - Екатеринбург. - С. 236 - 239

72. Смирнова В.Н. К вопросу о токсичности молока коров, больных лейкозом // Сб.: Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с лейкозами сельскохозяйственных животных и птиц. 2000. - Екатеринбург. - С. 240 -242

73. Сулимова Г.Е., Шайхаев Г.О., Берберов Э.М. Генотипирование локуса каппа казеина у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции // Генетика. -1991. -Т. 27. - с. 2053 - 2062

74. Сулимова Г.Е., Соколова С.С., Семикозова О.П. Анализ полиморфизма ДНК кластерных генов у крупного рогатого скота: гены казеинов и гены главного комплекса гистосовместимости (ВоЬА)Цитология и генетика. 1992.- Т. 26.-№5.- С. 18-25

75. Сулимова Г.Е., Удина И.Г., Шайхаев Г.О, Захаров И.А. ДНК-полиморфизм гена BoLA-DRB 3 у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу // Генетика. -1995. -№. 9. С. 1294-1299

76. Сюрин В. Н., Белоусова Р.В., Фомина Н. В. Ветеринарная вирусология -М.: Агропромиздат, 1991.-431с.

77. Удина И.Г. и др. Использование ДНК-технологий для оценки наследственной устойчивости к заболеванию лейкозом // Тез. докл. II международной научн. конф.: Биотехнология в животноводстве и ветеринарии. М., 2000. - С. 219-220

78. Удина И.Г. Гены главного комплекса гистосовместимости человека и животных // Успехи современной генетики. 1994. - № 19. - С. 133-177

79. Уильяме Б., Уилсон К. Методы практической биохимии. М.: Мир, 1978.- 272 с.

80. Федорова С.М. Наследственность в этиологии лейкозов крупного рогатого скота. Рига: Зинатне. - 1989. - 45 с.

81. Херингтон С. и др. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. -М.: Мир, 1999.-558 с.

82. Чохатариди Г. Нужно ли нам больше коров ? // Молочное и мясное скотоводство. 1997. - № 6. - С. 24-26

83. Шипицин А. Г. и др. К вопросу изучения лейкоза крупного рогатого скота в Краснодарском крае. Ставрополь. - 1999. - С. 156 - 158

84. Эйдригевич Е.В., Раевская В.В. Интерьер сельскохозяйственных животных М.: Колос, 1978. 255с.

85. Эрнст JI.K., Сулимова Г.Е., Орлова А.Р. Особенности распространения антигенов BoLA -А и аллелей гена BoLA -DRB3 у черно пестрого скота в связи с ассоциацией с лейкозом // Генетика. -1997. -Т.ЗЗ. - № 1. - С. 87-95

86. Юхманова Н., Калашникова JI. Влияние каппа казеина на качество молока и его сыропригодность // Молочное и мясное скотоводство. - 2004. - № 8.- С. 24 25

87. Aida, Y., Miyasaka M., Okada K. Further phenotypic characterization of target cells for bovine leukemia virus experimental infection in sheep // Am. J. Vet. Res. 1989. № - 50. - P. 1946-1951

88. Aird I., Bentall H.H., Roberts J.A. A relationship between cancer of stomach and the ABO blood groups // British Medical Journal. 1953. - №1. - P. 799 - 801

89. Amadori M.I. Archetti L., Verardi R., Berneri C. Role of a distinct population of bovine T cells in the immune response to viral agents.// Viral Immunol. 1995. -№ 8.-P. 81-91

90. Barroso A., Dunner S. Technical Note: Detection of Bovine Kappa-Casein Variants А, В, C, and E by Means of Polymerase Chain Reaction-Single StrandConformation Polymorphism (PCR-SSCP)// J. Anim. Sci. -1998. 76:15351538

91. Beier D., Blankenstein P., Fechner H. Possibilities and limitations for use of the polymerase chain reaction (PCR) in the diagnosis of bovine leukemia virus (BLV) infection in cattle. / Zentralbl. Veterinarmed. B. -1992. -V. 39 (1). -P. 69-77.

92. Biozzi G. et al. Genetic regulation of immunoresponsiveness in relation to resistance against infectious diseases / Proc. 2 World Congr. Genet.Appl. Liv. Prod. Madrid. 1982. - P. 150 - 163

93. Blankenstein P., Fechner H., Looman A., Beier A., Marguardt A., Ebner D. Polymerase chain reaction (PCR) for detection of BLV proviruses a practical complement BLV diagnostics. / Berl. Munch. Tierarztl. Wochenschr. -1998.- V. 111. P. 180-186.

94. Brown J.H, Jardetzry Т., Saper M. A hypothetical model of the foreign antigen binding site of class II histocompatibility molecules // Nature. 1988. -332 :845

95. Burny, A., Bruck C., Cleuter Y. Bovine leukemia virus: a new mode of leukemogenesis // Advances in viral oncology. 1985. P. 35 - 55

96. Camaschella C., Alfarano A., Gottadi E. Prenatal diagnosis of fetal hemoglobin Lefore Boston disease on maternal peripheral blood // Blood. - 1990. -№. 75.-P. 2102

97. Carli К.Т., Sen A., Batmaz Н., Kennerman Е. Detection of IgG antibody to bovine leukemia virus in urine and serum by two enzyme immunoassays // Lett. Appl. Microbiol.- 1999.- Vol.28, N.6.- P.416-418.

98. Da, Y., Shanks R.D., Stewart J.A., Lewin H.A. Milk and fat yields decline in bovine leukemia virus-infected dairy cattle with persistent lymphocytosis// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - № 94. - P. 6538-6541.

99. Daniel R.C, Gatei M.H., Good M.F., Boyle D.B., Lavin M.F. Recombinant viral vaccines for enzootic bovine leucosis // Immunol Cell Biol. 1993. -Oct;71.-P:399-404

100. Debacq C., Asquith, В., Reichert M., Burny A., Kettmann R., Willems L. Reduced Cell Turnover in Bovine Leukemia Virus-Infected, Persistently Lymphocytic Cattle // J. Virol. 2003. -№ 77. P. 13073-13083

101. Deren W, Szewczyk-Sadowska A, Rulka J. The eradication of enzootic bovine leucosis in a large farm population // Pol J Vet Sci. 2003. -№ 6. - P. 12-14.

102. Dietz A.B., Conen N.D. Bovine lymphocyte antigen Class II Alleles as risk factors for high somatic cell counts in milk of lactating dairy cows // J Dairy Sci. -1997.-№80.-P. 406-412

103. Fries R., Beckmann I.S., Georgies M. The bovine gene map // Animal Genetics.-1989.-V.20.-P. 3-29

104. Groenen M.A.M. et al. The nucleotide sequence of bovine MHC class II DQB and DRB genes // Immunogenetics. 1990. -№ 31. - P. 37

105. Hoj S. et al. Growth hormone gene polymorphism associated with selection for milk fat production in lines of cattle // Animal. Genetics. 1993. -V.24. -№2.-P. 91 -96

106. Horin P., Matiasovic J. BoLA DYA polymorphism in Czech cattle // Exp. Clin Immunogenet. 1998. -15 (1). - P. 56 - 60

107. Lagziel A. et al. An Msp I polymorphism at the bovine growth hormone gene is linked to a locus affecting milk protein percentage // Animal. Genetics. -1999. -V. 30. № P. 296 - 299

108. Lagziel A., Lipkin A., Soller M. Association between SSCP haplotypes as the bovine growth hormone gene and milk protein percentage // Genetics.-1996.-V.142.-P. 945-951

109. Ledwidge S.A., Mallard B.A. Multi primer target PCR for rapid identification of bovine DRB 3 alleles // Animal Genetics. - 2001. - № 32. - P. 219 - 221

110. Levin H.A., Wu M.C., Steward J.A. Association between BoLA and subclinical in bovine leukemia virus infection in a herd of Holstein Friesian cows // Immunogenetics. - 1988. -27(5). - P. 338 - 344

111. Lindberg P. G., Andersson L. Close association between DNA polymorphism of bovine histocompatibility complex class I genes and serological BoLA A specificities // Anim. Genet. - 1988. - № 19. - P. 245 - 255

112. Maltseva N.A., Kaledin A.S., Oliynik E.I., Zhivotov A.A., Baranov V. I. Use of diagnostic DNA probes for detection of the provirus of bovine leukemia virus in infected cows // Problems of Virology.- 2002. №6. - P. 25 - 33

113. McClure H.M., Kuling M.E., Custer P.Ph. Cancer Res. -1974. - V.34 -P.2745-2757.

114. Meirom R, Brenner J, Trainin Z. BLV-infected lymphocytes exhibit two patterns оf expression as determined by Ig and CD5 markers // Vet Immunol Im-munopathol.- 1993. -№ 36 (2). P.179-86.

115. Meirom R., Moss S., Brenner J., Heller D. and Trainin Z. Levels and role of cytokines in bovine leukemia virus (BLV) infection.// Leukemia. 1997. - 11 (Suppl. 3).-P. 219-220

116. Miller J.M., Miller L.D., Olson C., Gillette K.G. Virus like particles in phytohemagglutinin - stimulated lymphocyte cultures with referent to bovine lymphosarcoma // J. Natl. Cancer Inst. - 1969. - № 43. - P. 1297 - 1305

117. Miretti M.M., Ferro J.A. Restriction fragment length polymorphism (RLFP) in exon 2 of the BoLA DRB 3 gene in South American cattle // Biochem Genet.-2001.-№39.-P. 311-324

118. Mirsky M.L., Lewin H.A. Reduced bovine leukaemia virus proviral load in genetically resistant cattle // Anim. Genet. 1998. - 29. - P. 145 - 252

119. Mota A.F. et al. Distribution of bovine lymphocyte antigen (BoLA DRB 3) alleles in Brasilian dairy Gir catlle (Bos indicus) // Eur. J. Immunogenet.- 2002. -29 (3).-P. 223 -227

120. Mullis K., Faloona F. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase catalyzed chain reaction // Meth. Enzymol. -1987.-V.155.-P. 335-350

121. Naj S., Franholm M., Larsen N.J. Growth hormone gene polymorphism associated with selection for milk fat production in lines of cattle // Animal Genet-ics.-1993.-V.24.-P. 91-96

122. Rando A. et al. Identification of bovine k-casein genotypes at the DNA level // Anim. Genet. 1988. - V. 19. - P. 51 - 54

123. Shanks R.D., Steward J.A., Levin H.A. Milk and fat yields decline in bovine leuemia virus infected Holstein cattle with persistent lymphocytosis // Agricultural Sciences. -1993. -V. 90. -№ 6. - P. 6538 - 6541

124. Sharif S. et al. Characterization of naturally processed and presented peptides a ssociated with b ovine major h istocompatibility с omplex ( BoLA) с lass 11 DR molecules// Eur J Immunogenet. 2002. -29 (3). - P. 223 - 227

125. Sharif S., Mallard B.A. Presence of glutamine at position 74 of pocket 4 in the BoLA DR antigen binding groove with occurrence of clinical mastitis caused by Staphylococcus species // Immunogenetics.- 2000. - № 51. - P. 733 - 742

126. Takeshima S., Nakai Y., Ohta M. characterization of DRB3 alleles in the MHC of Japanese shorthorn cattle by polymerase chain reaction-sequence-based typing // Journal of Dairy Science. -2002. Vol 85, Issue 6 1630-1632

127. Van Eijk M.J.T., Stewart-Haynes J.A., Beever J.E. Development of persistent lymphocytosis in cattle is closely associated with DRB2 // Immunogenetics. -1992.-37:64

128. Van Eijk M.J.T., Stewart-Haynes J.A., Lewin H.A. Extensive polymorphism of the BoLA DRB3 gene distinguished PCR-RFLP // Anim. Genet. 1992. V.-23. - P.483 - 496

129. Ward W.H., Dimmock C.K., Eaves F.W. T lymphocyte responses of sheep to bovine leukaemia virus infection // Immunol. Cell Biol. 1992. -№ 70.- P. 329-336

130. Xu A., Van Eijk V.J. Т., Park Ch. Polymorphism in BoLA -DRB3 Exon 2 correlates with resistance to persistent lymphocytosis caused by bovine leukemia virus // J. of Immunology. -1993. -V. 151. -№ 12. P. 6977 - 6985

131. Yang D. et al. Milk and fat yields decline in bovine leukemia virus infected Holtein cattle with persistent lymphocytosis // Agricultural Science. - 1993. -V/90.-P. 6538-6541

132. Zadworny D., Kuhlein U. The identification of the kappa-casein genotype in Holstein dairy cattle using polymerase chain reaction // Theor.and Appl. Genetics.-1990.-V.80.-P. 631

133. Zanotti M. et al. Association of BoLA class II haplotypes with subclinical progression of bovine leukaemia virus infection in Holstein Friesian cattle // Anim. Genet. - 1996. - 27. - P.337 - 341