Молекулярно-генетические аспекты в селекции и ранней диагностике лейкоза крупного скота

Ковалюк, Наталья Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Молекулярно-генетические аспекты в селекции и ранней диагностике лейкоза крупного скота
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Молекулярно-генетические аспекты в селекции и ранней диагностике лейкоза крупного скота"

На правах рукописи

КОВАЛЮК НАТАЛЬЯ ВИКТОРОВНА

МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ В СЕЛЕКЦИИ И РАННЕЙ ДИАГНОСТИКЕ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

03.00.23,- биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Дубровицы, Московская область - 2008 г.

003452752

Работа выполнена в лаборатории биотехнологии отдела разведения и генетики свиней ГНУ «Северо-Кавказский научно-исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук».

Научные консультанты:

доктор сельскохозяйственных наук, профессор, академик РАСХН Эрнст Лев Константинович; доктор биологических наук, профессор, член-корр. РАСХН Зиновьева Наталия Анатольевна.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Калашникова Любовь Александровна; доктор биологических наук, профессор Сулнмова Галина Ефимовна; доктор биологических наук, профессор Шихов Игорь Яковлевич.

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кубанский государственный университет».

Защита диссертации состоится «25» ноября 2008 г., в 10 часов, на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д.006.013.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук».

Адрес института: 142132, Московская область, Подольский район, п. Дубровицы, ГНУ ВНИИЖ, т/факс (4967) 65-11-01

С диссертацией молено ознакомиться в научной библиотеке ГНУ ВНИИЖ

Автореферат разослан «АА1 Ученый секретарь совета,

кандидат биологических В.П. Губанова

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема широкого распространения лейкоза крупного рогатого скота является приоритетной для молочного животноводства России [ММ. Гулюкин, Г.А. Сшюнян, А.В. Шишкин, 2004]. В настоящее время определены два пути повышения эффективности традиционных противолейкозных мероприятий: разработка методов эффективной ранней диагностики [D.B. Макаров, Д.П. Гринишин, 2005] и использование в селекционной практике признака устойчивости к персистентному лимфоцитозу [Г.Е. Сулимова, КГ. Удина, Г. О. Шайхаев, И.А. Захаров , 1995]. Известно, что разные аллели гена BoLA DRB 3 играют не одинаковую роль в формировании устойчивости КРС к персистентному лимфоцитозу, вызываемому вирусом лейкоза КРС [Н.А. Levin , М.С. Wu, J.A Steward, 1988; M. J.T.Vcm Eijk, J.A. Stewart-Haynes, J.E. Beever, 1992; A. Xu, M. J.T. Van Eijk., Ch. Park, 1993; M.L. Mirsky, H.A. Lewin, 1998]. Показано, что животные, несущие аллели *11,*23, *28 - устойчивые (У), не склонны к переходу лейкоза в стадию персистентного лимфоцитоза, а животные, несущие в своем генотипе аллели *22, *24,*16, *8 - чувствительные (Ч), напротив, чаще других оказываются в выборке гематологических больных. Нейтральные (Н) аллели не ассоциируются ни с устойчивостью, ни с чувствительностью к персистентному лимфоцитозу.

Вместе с тем, внедрение новых подходов в практику требует проведения широкого спектра исследований, направленных на оценку их прикладной значимости, в частности, влияния на показатели молочной продуктивности коров, возможности комплексного использования различных методов.

Цель и задачи исследований. Исходя из выше изложенной актуальности, целью настоящей работы явилось изучение роли и результативности применения молекулярно-генетических методов в ранней диагностике лейкоза крупного рогатого скота и в селекционно-племенной работе для повышения резистентности и продуктивности крупного рогатого скота.

Для достижения цели работы были поставлены и решены следующие задачи:

• разработать способ и схему эффективной ранней диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) на основе использования ДНК-анализа;

• усовершенствовать молекулярно-генетические модели анализа полиморфизма локуса ВоЬА ОЛВЗ для массового тестирования животных;

• установить частоты встречаемости полиморфных вариантов гена ВоЬА 1ЖВЗ у крупного рогатого скота различных пород;

• изучить связь структуры гена ВоЬА ОЯВЗ с показателями молочной продуктивности коров;

• оценить экономическую эффективность применения отбора на основе использования маркера ВоЬА ОЯВЗ в условиях промышленной технологии производства молока.

Научная новизна исследований. Разработана система ДНК-анализа, позволяющая выявлять телят-носителей ВЛКРС в раннем возрасте. Усовершенствован способ генотипирования крупного рогатого скота по локусу ВоЬА ОГШЗ (Патент РФ № 2287587 «Способ определения генотипа крупного рогатого скота»). Впервые установлена связь генотипа ВоЬА 1ЖВЗ с показателями молочной продуктивности коров, причем эта связь прослеживается независимо от наличия или отсутствия у коров носительства ВЛКРС. Разработан селекционно-генетический способ повышения продуктивности и устойчивости к заболеваниям крупного рогатого скота (Патент РФ № 2316207 «Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцито-зу стада крупного рогатого скота»).

Практическая значимость и реализация результатов исследований. С использованием системы ДНК-анализа, разработанной в ходе выполнения диссертационной работы, показана результативность выявления в раннем возрасте телят-носителей ВЛКРС. На основе использования усовершенствованной методики массового скрининга стад по гену ВоЬА ОЯБЗ разработана система подбора быков-производителей, направленная на повышение в стаде доли животных, с высоким уровнем молочной продуктивности и генетически устойчивых к персистентному лимфоцитозу. Данная

система или ее отдельные элементы внедрены сегодня в 60 хозяйствах Краснодарского края и Ростовской области.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

• молекулярно генетический способ раннего выявления телят-носителей BJIKPC;

• схема оздоровления стад от лейкоза, основанная на использовании технологии ДНК-анализа;

• усовершенствованная методика анализа полиморфизма гена BoLA DRB3, направленная на выявление аллелей «У», «Ч» и «Н» гена и пригодная для массового тестирования животных;

• селекционно-генетический способ создания стад крупного рогатого скота с повышенной молочной продуктивностью и устойчивостью к персистентному лимфоцитозу.

Апробация результатов исследований. Материалы диссертации доложены и обсуждены на следующих конференциях.

• III, IV, V,VI региональные научно-практические конференции молодых ученых: «Научное обеспечение агропромышленного комплекса». - Краснодар. - 2002-2006 гг.;

• научно-практическая конференция: «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения». -п. Быково Московской обл.- 2006 г.;

• конференция грантодержателей регионального конкурса РФФИ и администрации Краснодарского края «Юг России: Вклад фундаментальных исследований в развитие экономики Краснодарского края». - Краснодар. - 2006 г. и других.

Материалы диссертации используются в учебном процессе ФГОУ ДПО «Краснодарский региональный институт агробизнеса».

Разработка «Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота» удостоена серебряной медали на VII Московском международном салоне инноваций и инвестиций в 2007 г.

Публикации результатов исследований. Материалы диссертации опубликованы в 32 научных работах, все по теме диссертации, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК РФ: «Вестник РАСХН», «Ветеринария», «Зоотехния», «Молочное и мясное ско-

товодство» - 7 работ. Приоритет исследований подтверждён двумя патентами Российской Федерации (№ 2316207, № 2287587).

Структура и объём работы. Диссертационная работа состоит из следующих разделов: «Введение», «Обзор литературы», «Материал и методы проведения исследования», «Собственные исследования», «Обсуждение результатов», «Выводы», «Рекомендации производству», «Список использованной литературы». Работа изложена на 174 страницах машинописного текста, содержит 32 таблицы и 25 иллюстраций. Список литературы включает 289 работ, в том числе 108 зарубежных авторов.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с 2000 по 2008 гг. в лаборатории биотехнологии отдела разведения и генетики свиней СевероКавказского научно-исследовательского института животноводства Россельхозакадемии в соответствии с государственной тематикой (№ 06.01.01.02 государственной регистрации) при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проект № 06-0496688). Исследования проводили по схеме, представленной на рисунке 1.

Всего проанализировано 2977 образцов крови и 220 образцов спермы животных голштино-фризской, айрширской и красной степной пород, отобранных в 15 хозяйствах Краснодарского края и областных племпредприятиях. Забор крови проводился с использованием одноразового инструмента; в качестве антикоагулянта использовался 1,5 М цитрат натрия или ЭДТА. Образцы спермы поступали на анализ в виде гранул, пайет или в высушенном на фильтровальной бумаге виде.

Для выделения ДНК из различных биологических жидкостей, постановки ПЦР, ПДРФ-анализа, электрофореза использовали стандартные методики с собственными модификациями [М. J. Т. Van Eijk, J. A. Stewart-Haynes, Н. A. Levin ,1992; A. Xu, М. J.T. Van Eijk., Ch. Park, 1993; С. Херрингтон и др., 1999].

Усовершенствование системы ПЦР/ПДРФ анализов для массового тестирования животных

_у_

Выявление частот встречаемости аллелей и генотипов локуса ВоЬА Б1ШЗ у животных различных хозяйств (п=823)__

СЗАО АФП АФП ЗАО ОАО ЗАОСС ОАО

«СКВО», «Нива» «Нива» !<ДруЖ «Суво- Племза- Шлемзавод

(п=117) (п=60) (п=60) ба», рова», вод «Кубань»,

[п=48) (п=121) «Бейсуг» (п=60) ¡п=417)

Определение связи между генотипами локуса ВоЬА ОЛВЗ и показателями молочной продуктивностью коров (п=356)

Тестеров ание быков - производителей по локусу ВоЬА БКВЗ (п= 220)

Разработка с« ния продук ¡лекционно-генетического способа повыше-тивности и устойчивости к заболеваниям крупного рогатого скота

Рис. 1. Схема исследований.

Разработка схемы ранней диагностики ВЛКРС

Выявление наличия ВЛКРСв молозиве (п= 10) Сравнительное тестирование животных методами РИД и ПЦР(п= 1563) Ежемесячное тестирование матерей и телят в возрасте до 6 мес. на наличие ВЛКРС (п= 110)

—¥ Выявление распределения генотипов по локусу ВоЬА БИВ 3 у выбракованных животных ( п=102)

Разработка схемы индивидуального подбора с целью повышения частот встречаемости «желательных» генотипов

Тестирование группы телят, полученных с использованием заказного подбора Гп=80)

Для определения наличия провирусной ДНК лейкоза крупного рогатого скота использовали наборы фирмы «Изоген» (г. Москва). В состав набора входят праймеры, позволяющие амлифицировать участок гена gag размером 347 пн (рис. 2).

347 пн

Рис. 2. Выявление провирусной ДНК лейкоза крупного рогатого скота методом ПЦР. -К - отрицательный контроль, +К - положительный контроль амплификации.

Разработку селекционно-генетического способа создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота проводили совместно с директором ООО НПСХП «Астер» Сацуком В.Ф.

Статистическую обработку результатов проводили по стандартным методикам [Меркурьева Е.А. и др., 1991] с использованием программного обеспечения MS Excel.

Для упрощения математической обработки результатов была разработана программа расчета частот встречаемости генотипов в выборке и характеристик продуктивности на основе шаблона MS Excel. Программа позволяет автоматически определять частоту встречаемости генотипов и отдельных аллелей, сортировать животных по генотипам, определять средние показатели молочной продуктивности в группе и степень достоверности различий.

При анализе экономической эффективности внедрения моле-кулярно-генетических методов рассчитывали рентабельность, используя формулу Р = (ОВ - 03) / 03 * 100%, где Р - рентабельность, ОВ - общая выручка, 03 - общие затраты.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 1 12 13 14 15 16 17 18 -К+К

■¡■¡Я

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Разработка способа и схемы ранней диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) на основе использования ДНК-анализа и оценка ее результативности

На основании проведенного анализа работы по оздоровлению от лейкоза ряда хозяйств Краснодарского края, в том числе: ОАО «Племзавод им. В.И. Чапаева»; ООО СК «Октябрь»; АПФ «Нива», нами были намечены научные приоритеты, сделан ряд общих выводов и определен спектр экспериментальных исследований, направленных на разработку, научное обоснование и экспериментальное подтверждение общей схемы оздоровления стад крупного рогатого скота от лейкоза.

Показано, что одним из основных условий успешного оздоровления стад от лейкоза является необходимость использования обслуживающим персоналом одноразового ветеринарно-зоотехнического инструмента, что позволяет предотвратить возможность инфицирования здоровых животных. Вторым обязательным требованием является наличие возможности пространственного разделения здоровых и больных животных, выпойка телят термически обработанным молоком. Только при выполнении этих условий применение различных методов диагностики ВЛКРС является результативным.

Исследование 1563 образцов крови на наличие провирусной ДНК ВЛКРС, проведенное в рамках выполнения диссертационной работы, показало идентичность результатов, полученных с помощью реакции иммунной диффузии (РИД) и полимеразной цепной реакции (ПЦР) в интервале от 30 до 100% случаев. Анализ данных собственных исследований в контексте с результатами исследований других авторов показывает, что наблюдаемое в ряде случаев несовпадение результатов РИД и ПЦР не является указанием на некомпетентность какого-либо из двух методов анализа, а является следствием различных методических приемов определения носителей ВЛКРС. Если РИД-диагностика ориентирована на выявление антител к ВЛКРС, то есть затрагивает реакцию организма в ответ на наличие ВЛКРС, то ДНК-диагностика позволяет выявлять соб-

ственную провирусную ДНК ВЛКРС вне зависимости от реакции организма на инфекцию. Из литературных данных известно, что лейкоз - это хроническое заболевание с волнообразным течением, во время развития которого у одного и того же животного может подниматься и снижаться уровень антител, количество лимфоцитов, исчезать и появляться вирусная РНК, количественно меняться уровень провирусной ДНК. В этой связи, точность диагностики ви-русоносителей определяется не только методом исследований, но и зависит от периода развития заболевания. Сопутствующие заболевания, стельность могут так же оказывать влияние на результаты РИД исследований. Таким образом, полученные нами данные показывают, что каждый из используемых методов анализа (РИД и ДНК-анализ) имеет свои преимущества и недостатки. Исходя из изложенного выше, становится понятным, что для результативной диагностики взрослых животных необходимо комбинировать различные методы анализа, подбирать оптимальный период отбора образцов, то есть работать индивидуально с каждым животным, что в условиях современного производства достаточно сложно и, в большинстве случаев, невыполнимо.

В этой связи, нами предложена схема, основанная на использовании технологии ДНК-анализа и направленная на ранее выявление и отделение от основного стада телят-носителей ВЛКРС. Использование данной схемы особенно актуально в том случае, если в стаде высок процент инфицированных животных. Так как используемая нами технология ДНК-анализа обеспечивает выявление непосредственно провируса, результаты анализа не зависят от возраста и состояния животного. Нами установлено, что процент инфицированных телят в возрасте 3-4 месяцев (по данным ДНК-анализа) практически соответствует проценту РИД-позитивных животных того же хозяйства, но в более позднем возрасте, что позволяет предположить, что заражение животных происходит в возрасте до трех месяцев.

С целью определения времени и возможного способа инфицирования был проведён анализ глубокостельных коров в хозяйствах ОАО «Племзавод им. В.И.Чапаева» (п=27) и АПФ «Нива» (п=27),

которые по результатам РИД являлись носителями ВЛКРС. В момент отёла у матери и телёнка были отобраны пробы крови, которые исследовали с использованием ПЦР. Процедуру повторяли каждые полтора месяца до достижения телятами возраста б месяцев. Последнее ПЦР исследование совмещали с плановым серологическим исследованием. Телята до двух месяцев содержались в индивидуальных домиках, при всех зооветеринарных манипуляциях применялся только одноразовый инструмент. Результаты анализа обобщены в таблице 1.

Таблица 1

Динамика выявления провирусной ДНК ВЛКРС у телят в

зависимости от возраста

Хозяйство Доля телят-носителей ВЛКРС %

ДНК-анализ (Г [ЦР) РИД

при рождении 1,5 мес. 3 мес. 4,5 мес. 6 мес.

ОАО «Племзавод им. В.И. Чапаева» 0 3,7 3,7 3,7 3,7 3,7

АПФ «Нива» 0 7,4 7,4 7,4 7,4 7,4

Как показано в таблице 1, исследование телят при рождении не выявило ни одного носителя провирусной ДНК ВЛКРС. Вирусоно-сители в каждом из хозяйств появились по результатам второго исследования (3,7-7,4%), проведенного в возрасте 1,5 мес. Исследование проб молозива (п=10), полученного от носителей ВЛКРС (по данным ПЦР анализа) не выявило наличия провирусной ДНК ВЛКРС, несмотря на присутствие ее в крови коров. Результаты проведенного анализа показывают отсутствие в молозиве провирусной формы ВЛКРС (в количествах, достаточных для определения методом ПЦР), однако не исключают наличие в молозиве РНК-формы ВЛКРС. Исследования, проведённые в возрасте 3- и 4,5-х месяцев подтвердили полученные ранее результаты. Новых инфицированных животных в эти периоды выявлено не было. Исследование всей выборки телят в возрасте 6-и месяцев методом РИД показало полное совпадение результатов анализа, полученных обоими

методами: РИД-анализ дал положительный результат только у ПЦР-положительных телят.

Важная роль соблюдения зооветеринарных мероприятий в оздоровлении стад от лейкоза была нами продемонстрирована при исследовании телят ООО СК «Октябрь» Калининского района (п=80), где были выявлены нарушения режима асептики при зооветеринарных манипуляциях, инфицированные и здоровые животные контактировали друг с другом. Исследование, проведенное в возрасте 3-х месяцев, показало наличие провирусной ДНК ВЛКРС у 8-и телят (10%). Повторное ДНК-исследование, проведённое в возрасте 6-и месяцев, показало наличие ещё 16 носителей ВЛКРС (+20%). Плановое РИД-исследование в возрасте 6-и месяцев полностью подтвердило данные ПЦР.

Таким образом, установлено, что ДНК-анализ, основанный на использовании метода ПЦР, позволяет выявлять инфицированных животных в возрасте 1,5 месяцев, а, следовательно, даёт возможность разделять телят на здоровых и вирусоносителей до 2-х месячного возраста. При содержании телят в индивидуальных домиках анализ и разделение телят необходимо проводить до объединения их в группы, что значительно снизит риск распространения инфекции. Предлагаемая нами схема оздоровления стад от лейкоза с описанием мероприятий, сроков и порядка их реализации представлена в таблице 2.

Важным аспектом ДНК-диагностики ВЛКРС является исследование импортного скота с целью предотвращения завоза ВЛКРС. Применение ДНК-диагностики эффективно и на последних этапах оздоровления стад. Комбинированное применение ДНК-анализа с другими методами снижает риск ложноотрицательных результатов, то есть не выявления скрытого вирусоносителя, и, следовательно, избавляет от необходимости возврата к проблеме через некоторое время. Таким образом, ДНК-диагностика, основанная на методе ПЦР, - один из инструментов, позволяющих решать проблему оздоровления стад от лейкоза на качественно новом уровне.

Таблица 2

Схема реализации оздоровительных мероприятий с использованием ПЦР - диагностики у телят

Этап Срок и порядок реализации

Формирование группы телочек (возраст 1,5-2 мес.) При достижении животными возраста 1,5 месяцев взятие крови специалистами хозяйства и доставка в лабораторию в шприцах типа «Моно-вет» с ЭДТА или цитратом в качестве консерванта. Срок реализации -по мере формирования группы от 50 голов.

ДНК-диагностика (диагностика методом ПЦР) Реализуется в специализированной лаборатории

Формирование группы ПЦР-отрицательных животных. Удаление ПЦР-положительных телочек на откорм или на другую ферму Производится специалистами хозяйства по результатам анализов

РИД-диагностика в группе ПЦР-отрицательных телочек с целью окончательного разделения групп инфицированных и здоровых животных (возраст 5-6 месяцев) Реализуется специалистами хозяйства

3.2. Усовершенствование способа ДНК-анализа, основанного на ПЦР-ПДРФ, для массового тестирования животных

В рамках выполнения диссертационной работы нами усовершенствован способ генотипирования животных гю локусу ВоЬА ОИВЗ, предусматривающий амплификацию фрагмента гена размером 284 пн с использованием праймеров НЬОЗО и НЬ032, гидролиз продуктов ПЦР рестриктазами Яза1, НаеШ, путём дополнительной обработки специально подобранной для массового

тестирования животных эндонуклеазой рестрикции Bst2UI (рис. 3, 4).

123456789

Рис. 3. Электрофорез в 12% полиакриламидном геле продуктов амплификации экзона 2 гена ВоЬА ОЛВЗ после рестрикции Вз1У1, Ява1, НаеШ. А - ДНК от животного с генотипом Во/А 1)В113 11*3: 1. Контрольный нергстрицированный продукт амплификации; 2. Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой 1; 3. Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой Ява I; 4. Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой Нае III; 5. Маркер молекулярной массы (шаг маркера 50 пн). В - ДНК от животного с генотипом ВоЬА ОЛВЗ 22*22: б. Контрольный нергстрицированный продукт амплификации; 7. Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой Вэ1¥ I; 8. Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой Лвд I; 9. Продукт амплификации, рестрицированный рестриктазой Нае III.

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Рис. 4. Электрофорез в 12% полиакриламидном геле продуктов амплификации экзона 2 гена BoLA DRB3 после рестрикции эндонуклеазой Bst2UI. 1,3, 4, 6,8- Bst2Ul -паттерны d/f (205, 124,79, 57, 24 пн); 5 - Bst2Ul -паттерны d)a (205, 111, 79, 57, 24 пн); 2 - Bst2UI -паттерны b/f (180, 80, ¡24, 79, 57, 24 пн); 7,- Bst2Ul -паттерны dJb 9 (205, 180, 79, 24 пн); 9 - маркер молекулярных весов (длины фрагментов ДНК: 8; 11; 18; 21; 51; 57; 64; 80; 89; 104; 123; 124; 184; 192; 213; 234; 267; 434; 458; 502; 540; 587).

Анализ рестрикционной картины позволяет определить генотип животного по локусу ВоЬА ОКВЗ, который записывали в виде номеров аллелей, входящих в генотип, например, 22* И или 16*24.

3.3. Характеристика генетической структуры стад крупного рогатого скота различных пород по локусу ВоЬА 1ЖВ 3.

Установлено, что распределение частот встречаемости аллелей и генотипов локуса ВоЬА ОЯВЗ зависит от породной принадлежности животных (табл. 3). Так, в профиле скота голштинской породы преобладают Ч-аллели, обуславливающие чувствительность (СЗАО «СКВО», ОАО «Племзавод «Кубань»); в профиле красной степной породы (ЗАОСС «Племзавод «Бейсуг») - У- (устойчивые) и Н- (нейтральные) аллели без акцентов на отдельные разновидности, у айрширской (АПФ «Нива») - Н-аллели, причём с ярко выраженной тенденцией к доминированию отдельно взятых аллелей (ВоЬА 01ШЗ *7 и *21). Как показано в таблице 3, у исследованных нами животных найдено 30 различных аллелей гена ВоЬА ОЯВЗ. Сопоставление эмпирических и теоретических частот показало высокую степень достоверности наблюдаемых между ними различий. Очевидно, что существует фактор или факторы, обуславливающие отклонение фактических частот от теоретически ожидаемых при случайном спаривании. Логично предположить, что подобное смещение вызвано давлением отбора на тот или иной признак. Для каждой из пород вектор искусственного отбора был направлен на разные качества. Так, у голштинского скота основным направлением селекции является увеличение количественных показателей молочной продуктивности. К факторам, оказывающим давление на эволюцию красной степной породы, относится, кроме того, необходимость адаптации к неблагоприятным условиям содержания и кормления. Наименьшие различия в фактических и расчетных значениях частот встречаемости аллелей наблюдались у коров айрширской породы, основное селекционное давление в которой было направлено на улучшение качественных показателей молока. Одной из причин этого, на наш взгляд, является элиминация значительного числа аллелей ВоЬА ГЗЯВЗ у животных данной породы.

Таблица 3

Распределение генотипов по локусу BoLA DRB 3 у животных различных хозяйств

Частота встречаемости генотипов (п=823), %

Генотип по голштинская красная шрширск; помесные животные

локусу BoLA DRB3 СЗАО «СКВО» (п=117) ОАО «ПЗ «Кубань» (п=417) ЗАО ПЗ «Бейсуг» (п=60) ПФ «Нивг (п=60) ЗАО «Дружба» (п=48) ÎAO «Суворова» (п=121)

1 2 3 4 5 6

8*8 4,3 0,4 8,3 - - 0,8

8*16 1,7 2,5 1,7 - 2,1 -

8*22 2,6 1,9 - - - -

2 с 8*24 3,4 2,3 - - 2,1 1,7

н о 16*16 1.7 4,1 3,3 - - -

5 и 16*22 0,9 8,2 - - 2,1 0,8

3" S" 16*24 2,6 7,5 - - - -

22*24 3,4 8,2 - - 4,2 0,8

22*22 4,3 4,9 - - 6,3 -

24*24 1,7 1,9 1,7 - - 5,0

Всего 26,6 41,9 15,0 0,0 16,8 9,1

11*8 1,7 0,8 7,8 - - 1,7

11*16 1,7 1,9 1,7 - 4,2 -

11*22 - 1,5 - - - -

11*24 0,9 1,9 1,7 - 4,2 3,3

с 23*8 3,4 0,8 1,7 - - 3,3

ё 23*16 1,7 1,9 1,7 - - -

<u im 23*22 1,7 4,5 - - - -

>> S» 23*24 4,3 5,2 1,7 - - 4,1

28*8 0,9 0,4 - 1,7 - -

28*16 0,9 1,1 - - - -

28*22 - 0,4 - 1,7 - 0,8

28*24 - - 1,7 - - 3,3

Всего 17,2 20,4 18,0 3,4 8,4 16,5

11*11 1,7 - 6,3 - - 2,0

11*23 1,7 0,8 1,7 - 2,1 1,0

в 11*28 0,9 - - - 2,1 1,0

о S 23*23 1,7 1,1 - - - -

h 28*28 - - - 1,7 - -

>> Всего 6,0 1,9 8,0 1,7 4,2 4,0

1 2 3 4 5 6

ЧЛ1 28,7 25,4 15,0 20,7 35,0 24,9

Н/Н 13,4 4,6 23,0 55,2 18,8 29,5

Н/У 8,1 5,8 21,0 19,0 16,8 16,0

Анализ распределения аллелей и генотипов позволил предположить, что определенные аллели локуса ВоЬА ОЯВЗ маркируют различные хозяйственно-ценные признаки молочного скота.

Для проверки данного предположения нами проанализированы показатели молочной продуктивности по законченной первой лактации у животных ЗАО «Дружба», ЗАО «СКВО» и ЗАОСС «Плем-завод «Бейсуг», разбитых на группы в зависимости от генотипа по локусу ВоЬА ОЛВЗ: Ч/Ч, Ч/У, Ч/Н, Н/У, Н/Н и У/У (табл. 4).

Таблица 4

Удой коров за 305 дней лактации в зависимости от генотипа _по локусу BoLA DRB 3_

Хозяйство Показатели Генотип по BoLA DRB 3

У/У Ч/У Н/У Н/Н Ч/Ч Ч/Н

ЗАО «Дружба» (п= 48) частота встречаемости, % 4,2 8,4 16,8 18,8 16,8 35,0

удой, кг М±т 5547 ±550 7248 ±270 6087 ±240 6108 ±360 6105* ±300 5960* ±270

удой в среднем, кг 6121

ЗАО «СКВО» Ростовской области (п= 117) частота встречаемости, % 6,0 17,2 8,1 13,4 26,6 28,7

удой, кг Mim 6183* ±425 7926 ±246 7096 ±260 6963* ±478 7013 ±256 6865 ±326

удой в среднем, кг 7071

ЗАОСС «Племза-вод «Бейсуг» (п= 60) частота встречаемости, % 8,0 18,0 21,0 23,0 15,0 15,0

удой, кг М±т 5730* ±142 6169 ±124 5885 ±185 5916 ±162 5867 ±214 5789* ±111

удой в среднем, кг 5910

Примечание: здесь и далее: *р<0,05; **р<0,01; ***р<0,001. Разница определена в сравнении с группой Ч/У

Более детальные исследования влияния генотипов ВоЬА 1ЖВЗ проведены в ОАО «Племзавод «Кубань». Выборка была представлена 356 коровами, молочную продуктивность которых по первой лактации оценивали по 3244 контрольным дойкам (табл. 5).

Таблица 5

Показатели молочной продуктивности коров ОАО «Племзавод «Кубань» в зависимости от генотипа по локусу ВоЬА 1ЖВЗ

Показатели Генотип по локусу BoLA DRB3 Итого

Ч\Н Ч\Ч Ч\У У\Н У\У Н\Н

Число животных 118 122 70 25 6 15 356

Число измерений 748 1376 649 254 70 147 3244

Среднесуточный удой, кг (М±т) *** 23,9± 0,15 ** * 24,3± 0,09 25,3± 0,14 *** 23,5± 0,24 24,9± 0,30 L® н- 24,5± 0,28

Содержание жира, % (М±т) 3,51± 0,13 3,50± 0,12 3,43± 0,12 3,51± 0,14 3,50± 0,15 3,51± 0,14 3.5± 0,11

Содержание 5елка, г\л (М±т) 3,01± 0,10 3,02± 0,09 3,01± 0,10 3,03± 0,10 3,00± 0,10 3,01± 0,10 3,01± 0,08

Содержание лактозы, г\л (М±т) 4,50± 0,03 4,51± 0,02 4,50± 0,03 4,51± 0,02 4,50± 0,03 4,51± 0,03 4,5± 0,02

Содержание сухого вещества, г\л (М±т) 11,8± 0,3 12,0± 0,1 11,7± 0,2 11,9± 0,3 11,8± 0,3 11,7± 0,2 11,8± 0,2

Удой за 305 дн. лактации, кг 7289 7411 7716 7167 7594 7472 7472

Из данных таблиц 4 и 5 следует, что уровень удоя коров с генотипом Ч/Н в разных хозяйствах оказался одним из самых низких, а у коров с генотипом Ч/У и Ч/Ч - как правило, выше, по сравнению с другими группами. Важным фактором является отсутствие статистически достоверных отличий между группами по содержанию жира, белка и лактозы в молоке изученных животных.

Результаты анализа распределения генотипов выбракованных по состоянию здоровья животных в хозяйствах ОАО «Племзавод «Кубань» и СЗАО «СКВО» обобщены в таблице 6. Отмечается уве-

личение среди выбракованных коров доли животных с генотипами Ч/Ч и Ч/Н по сравнению с распределением генотипов по группе в целом (табл. 6).

Таблица 6

Распределение генотипов локуса ВоЬА БИВЗ у коров,

выбракованных по состоянию здоровья

Хозяйство Распределение Частота встречаемости генотипа, %

У/У Ч/У У/Н Н/Н Ч/Ч Ч/Н

ОАО «Племзавод «Кубань» в целом по исследуемой группе (п=266) 1,9 20,4 5,8 4,6 41,9 25,4

среди выбракованных (п= 65) 3,1 12,3 4,6 10,8 40,0 29,2

среди выбракованных, без учёта травмированных (п= 48) 2,1 6,2 4,2 8,3 45,9 33,3

СЗАО «СКВО» в целом по исследуемой фуппе (п=117) 6,0 17,2 8,1 13,4 26,6 28,7

среди выбракованных (п= 37) 5,4 13,5 8,1 8,1 27,0 37,9

Таким образом, нами впервые установлена связь генотипов ВоЬА ОИ.ВЗ и уровня удоя коров, причем эта связь прослеживается независимо от наличия или отсутствия у коров ВЛКРС. Для селекционной практики установленная закономерность важна как возможность моделирования последующих поколений животных с высокой частотой встречаемости «желательного» генотипа.

3.4. Разработка селекционно-генетического способа создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота

Нами была поставлена задача - найти путь повышения устойчивости стад крупного рогатого скота к персистентному лимфоцитозу и другим заболеваниям с одновременным повышением их продуктивности. С этой целью нами предложен селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота (Патент РФ на изобретение № 2316207).

Разработанный способ предусматривает проведение на первом этапе ДНК-тестирования маточного поголовья и быков-производителей по гену ВоЬА Э11ВЗ с использованием разработанной в ходе выполнения диссертационной работы системы массового анализа.

На втором этапе животные распределяются по группам с различной чувствительностью к персистентному лимфоцитозу: с генотипом, включающим два аллеля, обуславливающих чувствительность (Ч/Ч); с генотипом, включающим два аллеля, обуславливающих устойчивость (У/У); с генотипом, включающим один аллель, обуславливающий чувствительность, а другой - устойчивость (Ч/У); с генотипом, включающим два нейтральных аллеля (Н/Н); с генотипом, включающим один аллель, обуславливающий чувствительность, а другой - нейтральный (Ч/Н); с генотипом, включающим один аллель, обуславливающий устойчивость, а другой -нейтральный (У/Н).

На третьем этапе проводится подбор родительских пар таким образом, чтобы обеспечить в потомстве максимальное насыщение стада генотипами Ч/У. При этом У-аллель в генотипе выполняет функцию защиты от развития персистентного лимфоцитоза и ряда других заболеваний, а Ч-аллель является маркером высокой продуктивности.

Изложенная выше система подбора и закрепления в той или иной степени применяется сегодня в 60 хозяйствах Краснодарского края и Ростовской области, которые приобретают сперму быков-

производителей в ООО НПСХП «Астер». Обязательным условием осуществления указанного способа является генетический анализ достаточного количества быков-производителей. Необходимо отметить, что такой подход не противоречит существующим принципам подбора быков-производителей, а лишь вводит дополнительный критерий подбора.

С целью оценки генетического потенциала устойчивости к персистентному лимфоцитозу нами проведено генотипирование по гену ВоЬА ОЯВЗ быков-производителей голштинской и айршир-ской пород (п=220), используемых в системе искусственного осеменения Краснодарского края (табл. 7).

Таблица 7

Частоты встречаемости генотипов ВоЬА В1ШЗ у быков-

пропзводителей голштцнекой и аирширской пород (п=220), %

Группы быков Частоты встречаемости генотипов, %

У/У Ч/У У/Н Н/Н Ч/Ч Ч/Н

Голштинская порода (п=142)

Всего 4 17 6 6 38 29

Черно-пестрые (п=107) 4 16 3 6 41 30

Красно-пестрые (п=35) 3 20 14 9 26 28

Племпредприятия (голштинская порода)

ОАО ЦСИО (п=76) 5 16 7 8 30 34

ОАО Московское (п=46) 2 15 4 4 55 20

ОАО Краснодарское (п=20) - 25 5 5 30 35

Линии быков голштинской породы

Рефлекшн Соверинга (п=38) - 14 - 8 39 39

Уес Идеала (п=4^) 2 16 5 5 47 25

Монтвик Чифтейна(п=21) 10 25 5 5 40 15

Айрширская порода (п=78)

- 5 7 63 4 21

Как показано в таблице 7, у голштинских быков-производителей преобладают генотипы Ч/Ч и Ч/Н (67%), в то время как а у айрширеких - генотипы Н/Н и Ч/Н (84%). Частота встречаемости У-аллелей по породам составляет, соответственно, 15,5% и 6,0%, что в свою очередь определяет ослабленный иммунный ответ большинства животных обеих пород на стресс-факторы и болезни, а в случае инфицированное™ BJIKPC - способствуют наступлению гематологической (клинической) стадии этого инфекционного заболевания. Сравнивая голштинских быков черно-пестрой и красно-пестрой масти, можно отметить у последних некоторые положительные тенденции в плане снижения частоты встречаемости генотипов, несущих ослабленный иммунный ответ (до 54%). Различия между племпредприятиями по частоте встречаемости генотипов невелики.

Из изученных линий по голштинской породе наиболее низкая частота втречаемости У-аллелей отмечена в линии Рефлекшен Со-веринга (7%). Наиболее насыщена У-аллелями линия Монтвик Чифтейна (25%). Линия Уес Идеала занимает промежуточное положение (12,5%). Очевидно, что как линейное разведение, так и межлинейное кроссирование не в состоянии обеспечить частоту встречаемости У-аллелей выше 25% (15,5% в целом по породе). Расчёты показывают, что при увеличении среди быков или коров доли Ч-аллелей, а это, возможно, будет происходить при последующей селекции на молочную продуктивность, в потомстве будет нарастать количество генотипов Ч\Ч . Это в большей степени касается импортных животных, отбор которых ведётся на фоне благоприятных условий внешней среды.

3.5. Практическая апробация селекционно-генетического способа создания высокопродуктивного и устойчивого к перси-стентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота.

Практическую апробацию селекционно-генетического способа создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота осуществляли в ОАО «Племзавод «Кубань»» Усть-Лабинского района. С этой целью было протестировано 417 коров и телок. Характерно преобладание в

выборке чувствительных аллелей BoLA DRB3. В структуре Ч-аллелей преобладают *22 (21,4%), *16 (19,3%) и *24 (17,1%). У-аплели представлены, в основном, *23 (9,9%) и *11 (4,1%).

Анализ выборки подтвердил выявленную ранее закономерность, что различные генетические группы (Ч/Ч, Ч/У, Ч/Н, У/У, У/Н, Н/Н) отличаются по своей продуктивности. Животные группы Ч/У с высокой степенью достоверности (Р<0,001) превосходили животных Ч/Н, Н/У, Ч/У групп по показателям среднесуточного удоя на 1,0-1,8 кг. При этом содержание жира и белка в молоке животных изученных групп достоверно не отличалось.

Нами применена схема индивидуального подбора, согласно которой закрепление производителей было направлено на получение в потомстве максимального числа животных с генотипом Ч/У. Так, например, для коров с генотипами Ч/Ч, Н/Н, Ч/Н подобраны быки с генотипами У/У, для коров с генотипами У/У, У/Н, Ч/У -быки с генотипами Ч/Ч. Исходя из частот встречаемости генотипов у матерей, следовало ожидать следующее распределение частот встречаемости генотипов: Ч/У - 69,5%, Ч/Ч - 10,0%, Ч/Н - 3,0% и У/Н - 17,5%.

Результаты распределения генотипов BoLA DRB3 у дочерей, полученных от проведенного нами подбора, обобщены в таблице 8.

Таблица 8

Частоты встречаемости аллелей и генотипов локуса ВоЪА 1ЖВЗ у матерей н дочерей, полученных от подбора с учетом _генотипа по данному гену_

Частота встречаемости у матерей (п=80)

аллелей, % генотипов,%

Ч У Н У/У Ч/У У/Н Н/Н Ч/Ч Ч/Н

68,2 13,6 18,2 - 25,0 2,3 2,3 40,9 29,5

Частота встречаемости у дочерей (п=80)

аллелей,% генотипов, %

Ч У Н У/У Ч/У I У/Н Н/Н Ч/Ч Ч/Н

43,5 44,6 11,9 - 63,1 23,9 - 13,0 -

Как показано в таблице 8, частоты встречаемости генотипов несколько отличаются от частот, полученных при тестировании выборки в целом. Однако очевидно, что у дочерей, полученных от подборов с учетом генотипа по локусу BoLA DRB3, произошло значительное увеличение частот встречаемости аллелей, ассоциированных с устойчивостью к персистентному лимфоцитозу за счет сокращения количества чувствительных и нейтральных аллелей. На 38,1 % выросла частота встречаемости <окелательного» в хозяйственном отношении генотипа Ч/У. Увеличение числа животных с генотипом Н/У - явление нежелательное в плане молочной продуктивности, но в данном случае мы сознательно произвели закрепление таким образом, чтобы повысить резистентность животных в новом поколении. Расчеты показывают, что при подобном подборе от коров следующего поколения можно получить за лактацию на 122 кг молока больше при сохранении условий содержания и кормления.

Таким образом, нами разработан механизм, позволяющий управлять свойствами той или иной группы животных в зависимости от поставленной задачи - повышения молочной продуктивности и резистентности к заболеваниям.

3.6. Экономическая эффективность применения молеку-лярно-генетических методов в молочном животноводстве

Результаты ожидаемого экономического эффекта от применения молекулярно-генетических методов, разработанных в рамках диссертационной работы, в расчете на 100 коров за три полных лактации приведены в таблице 9.

При проведении расчетов учитывались следующие показатели:

1. группа I (п=100) представлена животными с генотипами Ч/У, У/У, Н/У - 100%;

2. группа 11 (п=100) имеет следующую структуру: Н/Ч, Ч/Ч -70%; Н/Н, Ч/У, У/У, Н/У - 30%;

3. животные первой группы получены от инфицированных матерей, но в раннем возрасте с использованием предложенной в ходе выполнения диссертационной работы схемы из данной группы

удалены инфицированные животные, а оставшиеся свободны от носительства провирусной ДНК ВЛКРС;

4. животные второй группы являются носителями ВЛКРС, при этом процент инфицирования во время первой лактации составляет 40%, во время второй - 70%, во время третьей - 100%;

5. удой коров составляет в среднем 7000 кг молока в год;

6. выход телят в обеих группах составляет 78%, стоимость одного теленка приравнивается к стоимости 100 кг молока;

7. реализационная цена молока в среднем равна 12 руб/кг;

8. после 3 лет лактации животные реализуются на мясо по цене 30 руб. за 1 кг живой массы. Средняя живая масса 1 животного к концу 3 лактации равна 540 кг;

9. из группы II по причине персистентного лимфоцитоза выбраковывается 30% (по литературным данным, в течение жизни, гематологическими больными становятся 30% от числа инфицированных животных). Мясо выбракованных животных в соответствии с ветеринарным законодательством реализации не подлежит;

10. по другим причинам из опытной и контрольной групп животные не выбывают;

11. затраты на выращивание телок до первой лактации одинаковы в обеих группах (структура затрат: 70% корма, 30% - прочие расходы), возраст начала 1 лактации - 2,5 года (при расходе 8 кормовых ед./день себестоимость кормов составляет для одного животного - 36 500 руб., а себестоимость выращивания 1 животного -52140 руб.);

12. затраты на производство 1 кг молока также одинаковы (структура затрат: 70% корма, 30% - прочие расходы): на производство 1 кг молока затрачивается 1,1 к.е., стоимость 1 к.е. - 5 руб.; тогда себестоимость кормов составляет 5,5 руб., а себестоимость производства 1 кг молока - 8,0 руб.

Таблица 9

Экономический эффект от внедрения генетического маркера устойчивости к персистентному лимфоцитозу

Показатели Группа 1 (Ч/У, У/У, Н/У) Группа II СЧ/Н, Ч/Ч, Н/Н, Ч/У, У/У, Н/У)

Общая выручка от реализации всех видов продукции, руб. 27054000 21481000

Общие затраты, руб. 22014000 18654000

Затраты на ДНК анализы, руб. 47000 -

Прибыль, руб. 4993000 2827000

Рентабельность, % 22,6 15,2

Из данных таблицы 9 следует, что в результате использования молекулярно-генетических методов прибыль может составить 4993000 руб., что на 2166000 руб. больше, чем во второй группе, где данные методы не применялись. Проведенные расчеты показали, что внедрение методов ДНК-анализа позволяет увеличить рентабельность на 7,5%.

4. ВЫВОДЫ

1. Разработаны молекулярно-генетический способ и схема ранней диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) на основе использования ПЦР-анализа, позволяющие выявлять и осуществлять эффективное разделение телят на здоровых и носителей ВЛКРС, начиная с 1,5 месячного возраста.

2. Изучено распространение ВЛКРС в сельхозпредприятиях Краснодарского края и Ростовской области. Исследование 1563 образцов крови, отобранных в 13 хозяйствах показало, что процент коров-носителей ВЛКРС варьирует от 0,004 до 100% и в среднем составляет 17%.

3. Усовершенствованная методика ДНК-анализа полиморфизма гена ВоЬА ВЯБЗ, основанная на методе ПЦР-ПДРФ анализа с использованием эндонуклеазы рестрикции Bst2UI, пригодна для массового тестирования животных. Выполнена экспериментальная апробация методики для исследования 500 голов скота и показана ее

результативность в выявлении аллелей гена ВоЬА ОЛВЗ у животных различных пород.

4. Исследование с использованием разработанной методики 823 коров и телок и 220 быков-производителей голштинской, айршир-ской, красной степной пород и помесей выявило наиболее высокие частоты встречаемости Ч-аллелей гена ВоЬА ВИВЗ в группах чистопородного голштинского скота (до 64,4%), что было существенно выше по сравнению с группами скота красной степной (32%), айр-ширской пород (14,4%) и помесей (33,7%). Наибольшая частота встречаемости устойчивых аллелей отмечена у крупного рогатого скота красной степной породы (29,0%), что было выше по сравнению с животными голштинской (15,0%), айрширской (8,8%) и помесями (18,8%).

5. Установлено, что сочетание в генотипе голштинского и красного степного скота Ч- и Н-аллелей локуса ВоЬА ОЯВЗ обуславливает пониженную молочную продуктивность и снижает период их продуктивного использования. Удой в группе коров с генотипом Ч/Н гена ВоЬА 011ВЗ был на 339-1288 кг ниже (р<0,05) по сравнению с группой коров с генотипом Ч/У. Отмечена на 7,9-9,2% повышенная частота встречаемости коров с генотипом Ч/Н в выборке выбывших животных.

6. Показано, что оптимальными по уровню удоя и показателям здоровья у чистопородного голштинского скота являются животные, несущие в своем генотипе один устойчивый (У) аллель и один чувствительный (Ч) аллель, при этом У-аллель является маркером повышенной устойчивости к заболеваниям, а Ч-аллель - маркером повышенной молочной продуктивности. Животные с генотипом Ч/У гена ВоЬА ОИВЗ голштинской и красной степной пород в среднем на 339-1288 кг по удою за первую лактацию превосходили коров с другими генотипами данного гена (р<0,05; р<0,001).

8. Разработан селекционно-генетический способ, предусматривающий проведение подборов родительских пар с учетом генотипа по локусу ВоЬА ОЯВЗ с целью повышения в потомстве частоты встречаемости «желательного» генотипа Ч/У, обуславливающего повышенную устойчивость животных к персистентному лимфоци-

тозу и другим заболеваниям с одновременным повышением их продуктивности. Проведена экспериментальная апробация разработанного способа на 417 коровах и телках. Исследованием выборки 80 матерей и их дочерей, полученных от таких подборов, показано повышение частоты встречаемости желательного генотипа Ч/У за 1 поколение с 25,0 до 63,1%.

9. Проведенные экономические расчеты показывают, что ожидаемая дополнительная прибыль от применения молекулярно-генетических методов, разработанных в рамках диссертационной работы, в расчете на 100 коров за три полных лактации может составлять до 2166000 рублей при увеличении рентабельности на производства на 7,5%.

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Сельхозпредприятиям по разведению молочного крупного рогатого скота рекомендуется:

1. Для ускорения оздоровления хозяйств от лейкоза разделять телят с 1,5 месячного возраста на здоровых и вирусоносителей на основании результатов ДНК-анализа по предложенной нами схеме.

2. Для повышения уровня молочной продуктивности и резистентности коров к персистентному лимфоцитозу проводить подбор родительских пар с учетом генотипа по локусу ВоЬА ОЕШЗ в соответствии с разработанным нами селекционно-генетическим способом.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации.

В рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК:

1. Горковенко, Л.Г. Взаимосвязь генотипа по локусу BoLA DRB 3 главного комплекса гистосовместимости крупного рогатого скота с молочной продуктивностью / Горковенко Л.Г., Ковалюк Н.В., Са-цук В.Ф. // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2007. -№ 3. - С.73-74.

2. Ковалюк, Н.В. Использование генетических маркеров в селекционно - племенной работе / Ковалюк Н.В., Ковалюк A.A., Чурилова Е., Масленников М., Сивогривое Д. // Молочное и мясное скотоводство. - 2004. - № 8. - С.20 - 21

3. Ковалюк, Н.В. Изучение полиморфизма некоторых генов у быков - производителей / Ковалюк Н.В., Ковалюк A.A., Чурилова Е., Масленников М. // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2005. - № 1. С.64-65

4.Ковалюк, Н.В. Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу крупного рогатого скота./ Ковалюк Н.В., Шостак В.А., Сацук В.Ф., Фоменко Д.В. // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2005. -№ 6. - С.67-69.

5. Ковалюк, Н.В. Использование ДНК анализа при отборе матерей быков / Ковалюк Н.В., Шостак В.А., Сацук В.Ф.. Фоменко Д.В. // Зоотехния. - 2005. - №8. - С.7-8

6. Ковалюк, Н.В.Использование генетических маркеров для повышения молочной продуктивности коров I Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф., Мачульская Е.В. //Зоотехния. - 2007.- № 8. -С.2-4

7. Ковалюк, Н.В. Применение молекулярно-биологических методов для оздоровления стад крупного рогатого скота от лейкоза / Ковалюк Н.В. // Ветеринария. - 2008 - № 2. - С. 22-26

В сборниках научных трудов:

8. Ковалюк, Н.В. Изучение влияния строения гена BoLA DRB3 главного комплекса гистосовместимости на устойчивость крупного рогатого скота к лейкозу/Ковалюк Н.В., Ковалюк A.A., Шахназарова Ю.Ю.// Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики как основа улучшения продуктивных качеств и здоровья сельскохо-

зяйственных животных: Сборник научных трудов - Ставрополь,

2003,- С.341-343

9. Ковалюк, Н.В. Взаимосвязь генетической структуры популяций с устойчивостью к инфекционным заболеваниям и продуктивностью /Ковалюк Н.В., Мачульская Е.В., Фоменко Д.В.// «Юг России «Вклад фундаментальных исследований в развитие экономики Краснодарского края»: Сборник тезисов конференции грантодер-жателей регионального конкурса РФФИ и администрации Краснодарского края - Краснодар, 2006. - С. 141-142

10. Ковалюк, Н.В. Проблемы и перспективы использования моле-кулярно-биологических методов в ветеринарии /Ковалюк Н.В., Шумейко О.В. // Сборник научных трудов КРИА- Краснодар, 2007. -№16.- С.77-82

11.Ковалюк, Н.В. Наследственная предрасположенность к лейкозу у крупного рогатого скота и методы её выявления / Ковалюк Н.В., Шумейко О.В.// Сборник научных трудов КРИА- Краснодар, 2008. -№17.-С.83-93

В материалах международных конференций:

12. Ковалюк, Н. В. Типирование аллелей гена BoLA DRB 3, отвечающего за формирование устойчивости крупного рогатого скота к персистентному лимфоцитозу у быков-производителей/ Ковалюк Н.

B., Ковалюк А. А., Масленников М. Г., Сивогривое Д. Е. // Роль и значение метода искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в прогрессе животноводства XX и XXI веков: Материалы международной научно - практической конференции -Дубровицы,

2004.-С. 240-241

13.Ковалюк, Н.В. Способ определения BoLA DRB3 - генотипа крупного рогатого скота/ Ковалюк Н. В., Сивогривое Д. Е.,Ковалюк A.A.// Научное наследие П. Н. Кулешова и современное развитие зоотехнической науки и практики животноводства: Материалы международной научно - практической конференции -Москва, 2004.-

C. 46-48

14. Ковалгок, Н. В. Частоты встречаемости аллелей гена ВоЬА ОШЗ 3 и генотипов но гену каппа - казеина у животных различных хозяйств Краснодарского края / Ковалюк Н. В., Ковалюк А. А., Чу-рилова Е. А., Чижевская В. В., Фоменко Д. В. // Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики как основа улучшения продуктивных качеств и здоровья сельскохозяйственных животных: Материалы III Международной научно - практической конференции, посвященной 75- летию факультета технологического менеджмента Ставропольского ГАУ - Ставрополь,2005. - С. 283-286

15.Ковалюк, Н.В. Использование ДНК-технологий в молочном животноводстве /Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф., Мачульская Е.В., Фоменко Д.В. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве: Материалы IV Международной научной конференции,посвященной 100-летию со дня рождения академика Николая Александровича Шманенкова- Боровск, 2006. - С. 244-246

16.Ковалюк, Н.В. Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивных групп крупного рогатого скота / Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф., Мачульская Е.В. // Современные достижения и проблемы биотехнологии сельскохозяйственных животных: Материалы 6 Международной научной конференции- Дубровицы, 2006. -ВИЖ,- С. 82-84

17. Мачульская, Е.В. Изучение частот встречаемости генотипов по локусу ВоЬА Э1ШЗ у быков голштинской и айрширской пород /Мачульская Е.В., Ковалюк Н.В., Кононенко С.И.,. Сацук В.Ф. // Современные методы генетики и селекции в животноводстве: Материалы международной научной конференции ВНИИГРЖ- Санкт-Петербург, 2007.-С.252-253

В других изданиях:

18. Горковенко, Л.Г. Дойное стадо юга страны / Горковенко Л.Г., Шостак В.А, Ковалюк Н.В // Животноводство России. - 2005. - № 9. -С. 40-42

19. Горковенко, Л.Г. Проблему лейкоза можно решить быстрее /Горковенко Л., Ковалюк Н., Сацук В. // Животноводство России. -2006.-№ 12.-С. 39-40

20. Ковалюк, H.B., Возможные пути снижения заболеваемости крупного рогатого скота лейкозом в Краснодарском крае./ Ковалюк Н. В. // Ветеринария Кубани. - 2004. - № 4. - С. 7 - 8 21 .Ковалюк, Н.В. Лейкоз крупного рогатого скота и методы борьбы с ним/ Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф. Серия «Библиотечка животновода» Методические рекомендации - Краснодар, 2005. - 24 с.

22. Ковалюк, Н.В. Использование ДНК-технологий в молочном животноводстве/ Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф. Серия «Библиотечка животновода» Методические рекомендации - Краснодар, 2006. - 24 с.

23. Ковалюк Н.В., Ковалюк A.A., Сивогривов Д.Е. Патент РФ на изобретение № 2287587 «Способ определения генотипа крупного рогатого скота», заявка №2004108882. Приоритет изобретения 25 марта 2004г., зарегистрировано в государственном реестре изобретений 20 ноября 2006 РФ

24.Ковалюк, Н.В. Современные методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота / Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф., Мачульская Е.В. // Ветеринария Кубани.- 2007,- №1. - С. 11-12

25. Горковенко Л.Г., Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф. Патент РФ на изобретение № 2316207 «Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцито-зу стада крупного рогатого скота», заявка № 2005112494. Приоритет изобретения 25 апреля 2005 г., зарегистрировано в государственном реестре изобретений РФ 10 февраля 2008 г.

26.Ковалюк, Н.В. Лейкоз крупного рогатого скота. Методы диагностики./ Ковалюк Н.В., Шумейко О.В.// Учебное пособие с грифом «Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для системы профессионального образования Министерства сельского хозяйства Российской Федерации» - Краснодар, 2008. - 69 с.

Подписано в печать 8. .2008 Формат 60x84 1Лб.Бумага офсетная.Печать офсетная. Уч.-изд. л. 1,85. Усл. печ. л. 1,65. Тираж 100 экз. Заказ № 122. Типография «Биотех-Юг» ООО ,350000, г. Краснодар, ул. Рашпилевская 22

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Ковалюк, Наталья Викторовна

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Общая характеристика вируса лейкоза крупного рогатого скота и заболевания, вызываемого этим вирусом

1.2. Методы диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота

1.3. Наследственная предрасположенность к лейкозу у крупного рогатого скота и методы её выявления

1.4. Взаимосвязь полиморфизма различных локусов с продуктивными показателями крупного рогатого скота

1.5. Методы анализа ДНК и их использование в ветеринарии и селекции

2. Материал и методика проведения исследований

2.1. Выделение ДНК

2.2. Проведение полимеразной цепной реакции

2.3. Анализ полиморфизма длин фрагментов рестрикции

2.4. Электрофорез

3. Собственные исследования

3.1. Общая характеристика изученных животных

3.2. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота с использованием полимеразной цепной реакции

3.3. Оптимизация условий полимеразной цепной реакции

3.4. Анализ электрофореграмм и модификация ПДРФ - анализа

3.5. Оптимизация ПДРФ - анализа для массового тестирования животных

3.6. Распределение аллелей гена ВоЬА РЯВ 3 в группах больных лейкозом и здоровых животных голштинской черно - пестрой породы

3.7. Изучение частот встречаемости аллелей гена ВоЬА ОКБ 3 в различных группах крупного рогатого скота Краснодарского

3.8. Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота

3.9. Применение селекционно-генетического способа создания 125 высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лим-фоцитозу стада крупного рогатого скота в ОАО «Племзавод «Кубань»» Усть-Лабинского района ЗЛО. Использование генотипирования по локусу ВоЬА ЭКВ в установлении происхождения животных 3.11. Экономический эффект от внедрения маркера ВоЬА ОЬШЗ в селекцию животных 4. Обсуяедение результатов

Выводы

Предложения производству

Введение Диссертация по биологии, на тему "Молекулярно-генетические аспекты в селекции и ранней диагностике лейкоза крупного скота"

Актуальность темы. Проблема широкого распространения лейкоза крупного рогатого скота является приоритетной для молочного животноводства России [М.И. Гулюкин, Г.А. Симонян, A.B. Шишкин, 2004]. В настоящее время определены два пути повышения эффективности традиционных про-тиволейкозных мероприятий: разработка методов эффективной ранней диагностики [В.В. Макаров, Д.П. Гринишин, 2005] и использование в селекционной практике признака устойчивости к персистентному лимфоцитозу [Г.Е. Сулимова, И.Г. Удина, Г.О. Шайхаев, И.А. Захаров , 1995]. Известно, что разные аллели гена BoLA DRB 3 играют не одинаковую роль в формировании устойчивости КРС к персистентному лимфоцитозу, вызываемому вирусом лейкоза КРС [H.A. Levin , М.С. Wu, J.A Steward, 1988; М. J.T.Van Eijk, J.A. Stewart-Haynes, J.E. Beever, 1992; A. Xu, M. J.T. Van Eijk., Ch. Park, 1993; M.L. Mirsky, H.A. Lewin, 1998]. Показано, что животные, несущие аллели *11,*23, *28 - устойчивые (У), не склонны к переходу лейкоза в стадию пер-систентного лимфоцитоза, а животные, несущие в своем генотипе аллели *22, *24,*16, *8 - чувствительные (Ч), напротив, чаще других оказываются в выборке гематологических больных. Нейтральные (Н) аллели не ассоциируются ни с устойчивостью, ни с чувствительностью к персистентному лимфоцитозу.

Для достижения цели работы были поставлены и решены следующие задачи: разработать способ и схему эффективной ранней диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) на основе использования ДНК-анализа; усовершенствовать молекулярно-генетические модели анализа полиморфизма локуса ВоЬА РШЗЗ для массового тестирования животных; установить частоты встречаемости полиморфных вариантов гена ВоЬА БИВЗ у крупного рогатого скота различных пород; изучить связь структуры гена ВоЬА ЭЯВЗ с показателями молочной продуктивности коров; оценить экономическую эффективность применения отбора на основе использования маркера ВоЬА ОИВЗ в условиях промышленной технологии производства молока.

Научная новизна исследований. Разработана система ДНК-анализа, позволяющая выявлять телят-носителей ВЛКРС в раннем возрасте. Усовершенствован способ генотипирования крупного рогатого скота по локусу ВоЬА 011ВЗ (Патент РФ № 2287587 «Способ определения генотипа крупного рогатого скота»). Впервые установлена связь генотипа ВоЬА ВЫВЗ с показателями молочной продуктивности коров, причем эта связь прослеживается независимо от наличия или отсутствия у коров носительства ВЛКРС. Разработан селекционно-генетический способ повышения продуктивности и устойчивости к заболеваниям крупного рогатого скота (Патент РФ № 2316207 «Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу стада крупного рогатого скота»).

Практическая значимость и реализация результатов исследований. С использованием системы ДНК-анализа, разработанной в ходе выполнения диссертационной работы, показана результативность выявления в раннем возрасте телят-носителей ВЛКРС. На основе использования усовершенствованной методики массового скрининга стад по гену ВоЬА ОЫВЗ разработана система подбора быков-производителей, направленная на повышение в стаде доли животных, с высоким уровнем молочной продуктивности и генетически устойчивых к персистентному лимфоцитозу. Данная система или ее отдельные элементы внедрены сегодня в 60 хозяйствах Краснодарского края и Ростовской области.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту, молекулярно генетический способ раннего выявления телят-носителей ВЛКРС; схема оздоровления стад от лейкоза, основанная на использовании технологии ДНК-анализа; усовершенствованная методика анализа полиморфизма гена ВоЬА БИВЗ, направленная на выявление аллелей «У», «Ч» и «Н» гена и пригодная для массового тестирования животных; селекционно-генетический способ создания стад крупного рогатого скота с повышенной молочной продуктивностью и устойчивостью к персистентному лимфоцитозу.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Ковалюк, Наталья Викторовна

выводы

1. Разработаны молекулярно-генетическнй способ и схема ранней диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) на основе использования ПЦР-анализа, позволяющие выявлять и осуществлять эффективное разделение телят на здоровых и носителей ВЛКРС, начиная с 1,5 месячного возраста.

3. Усовершенствованная методика ДНК-анализа полиморфизма гена ВоЬА ОИВЗ, основанная на методе ПЦР-ПДРФ анализа с использованием эндонуклеазы рестрикции Вб121Л, пригодна для массового тестирования животных. Выполнена экспериментальная апробация методики для исследования 500 голов скота и показана ее результативность в выявлении аллелей гена ВоЬА БИВЗ у животных различных пород.

4. Исследование с использованием разработанной методики 823 коров и телок и 220 быков-производителей голштинской, айрширской, красной степной пород и помесей выявило наиболее высокие частоты встречаемости Ч-аллелей гена ВоЬА ОИВЗ в группах чистопородного голштинского скота (до 64,4%), что было существенно выше по сравнению с группами скота красной степной (32%), айрширской пород (14,4%) и помесей (33,7%). Наибольшая частота встречаемости устойчивых аллелей отмечена у крупного рогатого скота красной степной породы (29,0%), что было выше по сравнению с животными голштинской (15,0%), айрширской (8,8%) и помесями (18,8%).

5. Установлено, что сочетание в генотипе голштинского и красного степного скота Ч- и Н-аллелей локуса ВоЬА БИВЗ обуславливает пониженную молочную продуктивность и снижает период их продуктивного использования. Удой в группе коров с генотипом Ч/Н гена ВоЬА БИВЗ был на 339-1288 кг ниже (р<0,05) по сравнению с группой коров с генотипом Ч/У. Отмечена на 7,9-9,2% повышенная частота встречаемости коров с генотипом Ч/Н в выборке выбывших животных.

6. Показано, что оптимальными по уровню удоя и показателям здоровья у чистопородного голштинского скота являются животные, несущие в своем генотипе один устойчивый (У) аллель и один чувствительный (Ч) аллель, при этом У-аллель является маркером повышенной устойчивости к заболеваниям, а Ч-аллель - маркером повышенной молочной продуктивности. Животные с генотипом Ч/У гена ВоЬА 011ВЗ голштинской и красной степной пород в среднем на 339-1288 кг по удою за первую лактацию превосходили коров с другими генотипами данного гена (р<0,05; р<0,001).

8. Разработан селекционно-генетический способ, предусматривающий проведение подборов родительских пар с учетом генотипа по локусу ВоЬА ОКВЗ с целью повышения в потомстве частоты встречаемости «желательного» генотипа Ч/У, обуславливающего повышенную устойчивость животных к персистентному лимфоцитозу и другим заболеваниям с одновременным повышением их продуктивности. Проведена экспериментальная апробация разработанного способа на 417 коровах и телках. Исследованием выборки 80 матерей и их дочерей, полученных от таких подборов, показано повышение частоты встречаемости желательного генотипа Ч/У за 1 поколение с 25,0 до 63,1%.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Сельхозпредприятиям по разведению молочного крупного рогатого скота рекомендуется:

2. Для повышения уровня молочной продуктивности и резистентности коров к персистентному лимфоцитозу проводить подбор родительских пар с учетом генотипа по локусу ВоЬА ОЯВЗ в соответствии с разработанным нами селекционно-генетическим способом.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Ковалюк, Наталья Викторовна, Дубровицы

1. Авилов, В.М. Проблемы оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза /Авилов В.М., Нахмансон В.М. // Ветеринария 1995. -№ 11. - С. 3-6

2. Алтухов, Ю.П. Полиморфизм ДНК в популяциоиной генетике /Алтухов Ю.П., СалменковаЕ.А. //Генетика.- 2002.-Т. 38.-№ 9.- С. 1173-1195

3. Альберте, Б. Молекулярная биология клетки. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж. М.: Мир, 1987. - 1050 с.

4. Алыптеин, А.Д. Подходы к созданию генно-инженерной вакцины против лейкоза на основе вируса осповакцины /Алыптеин А.Д. // Тез. докл. II международной научн. конф.: Биотехнология в животноводстве и ветеринарии.-М., 2000.-С. 149-151

5. Апалышн, В.А. Организация и проведение научно-обоснованных мероприятий при оздоровлении от лейкоза КРС /Апалькин В.А. // Сборник научных трудов. Барнаул, 1997. - С.33-34.

6. Апалькин, В.А. Лейкоз крупного рогатого скота / Апалькин В.А., Гулю-кин М.И., Петров Н.И. //Библиотечка «Практик». Петролазер. - Санкт-Петербург.- 2005. - 106 с.

7. Архипов, А. О типах и рационах кормления скота / Архипов А., Дуль-нев В. // Молочное и мясное скотоводство. 1997. -№ 1.- С. 12-15

8. Белов, А.Д. О патогенезе лейкозов крупного рогатого скота / Белов А.Д., Рогожина Г.В. // Ветеринария. -1997. № 12. - С. 16- 19

9. Берзяк, А.Г. Опыт ускоренного оздоровления племенного хозяйства от лейкоза / Берзяк А.Г., Ковалючко B.C., Гротевич B.C., Киричук Л.И. // Ветеринария -№12. 1990. - С. 13-15.

10. Бич, А.И. Селекционная работа с молочным и молочно-мясным скотом / Бич А.И. // Зоотехния.-2002.- № в.- С.5-8

11. Блинов, В.А. Глюконеогенная функция печени у коров, поражённых лейкозом / Блинов В.А., Пилипченко О.В. // Ветеринария. 2007. - № 11. -С. 27-29

12. Боташева, Л.Х. Опыт эффективного производства молока в зарубежных странах / Боташева Л.Х. // Ваш сельский консультант.- 2007. -№ 4. С. 22-25

13. Бурба, Л.Г. Диагностика лейкозов сельскохозяйственных животных / Бурба Л.Г. Кунаков A.A. М., Колос.- 1983. - 191 с.

14. Бурба, Л. Г. Лейкозы и злокачественные опухоли животных / Бурба Л. Г., Вахилов А. Ф., Горбатов В. А. М. : Агропромиздат, 1988. - 399 с.

15. Бусол, В.А. ПЦР-диагностика ВЛКРС / Бусол В.А., Лиманская О.Ю., Лиманский А.П. //Ветеринарная медицина. 1998. -В. 74. -С. 35-44

16. Валихов, А.Ф. Лейкозы и злокачественные опухоли животных / Вали-хов А.Ф. // Под ред. В.П.Шишкова и Л.Г.Бурбы. -М., 1988. -С. 173-194.

17. Волкова, P.A. Молекулярно — генетическая диагностика гепатита В / Волкова P.A. и др.// Тез. докл. III Всероссийской научно — практической конференции: Генодиагностика в современной медицине. — М., 2000. — С. 45 -47

18. Галлеев, Р.Ф. Вирус лейкоза КРС (культуральные, инфекционные и иммунологические свойства) / Галеев Р.Ф. Уфа: Ветеринарная медицина. -1999.-147 с.

19. Галлеев, Р.Ф. Теоретическое обоснование, экспериментальное подтверждение путей передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота, усовершенствование методов диагностики и мер борьбы с ним / Галеев Р.Ф. -Автореф. дисс. докт. вет. наук. Казань. 2000

20. Галлеев, Р.Ф. Диагностика и профилактика лейкоза КРС / Галеев Р.Ф., Руденко A.A., Валиев Ф.Р. // Практик. № 5-6. - 2003. - С.44 - 48

21. Глазко, В.И. ДНК-технологии животных.- Глазко В.И.: Киев: Нора-принт.-1997.-173 с.

22. Глазко, В.И. Полиморфизм молекулярно — генетических маркеров у домашней лошади и лошади Пржевальского / Глазко В.И. и др. // Тез. докл. II международной научн. конф.: Биотехнология в животноводстве и ветеринарии. -М., 2000. -С. 151-152

23. Глазко, В.И. Современные направления использования ДНК-технологий / Глазко В.И., Доманский H.H., Созинов А.А.//Цитология и генетика. 1998.- Т. 32.- №5.-С.80-93

24. Глазко, В.И. Ведение в ДНК-технологии. Глазко В.И., Дунин И.М., Глазко Г.В., Калашникова JI.A.: М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2001.- 436 с.

25. Глазко, В.И. Идентификация генотипов по каппа-казеину и BLAD-мутации с использованием полимеразной цепной реакции у крупного рогатого скота / Глазко В.И., Кириленко С.Д.//Цитология и генетика. 1995.- № 6,-С.60-63

26. Глазко, В.И. Межлокусные ассоциации некоторых генетико биохимических систем у крупного рогатого скота / Глазко В.И., Кириленко С.Д., Созинов А. А. // Генетика. - 1997. - Т. 33. -№ 4. - С. 512 - 517

27. Говорун, В.М. Перспективы применения методов ДНК-диагностики в лабораторной службе / Говорун В.М., Момыналиев К.Т.// Клиническая лабораторная диагностика. 2000. - №> 5. - С. 25-30

28. Горбунов, А. П. Теоретические основы и практика оздоровления хозяйств от лейкоза крупного рогатого скота / Горбунов А. П. // Сборник научных трудов. Екатеринбург, 2005. - С.23-28.

29. Горковенко, JI. Г. Взаимосвязь генотипа по локусу BoLA DRB 3 главного комплекса гистосовместимости крупного рогатого скота с молочной продуктивностью / Горковенко JI. Г., Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф.// Вестник РАСХН. 2007. -№ з. - С.73-74

30. Гулюкин, М. И. Состояние и перспективы борьбы с лейкозом крупного рогатого скота / Гулюкин М. И.// Ветеринария. 1999. - № 12. - С. 3 - 8

31. Гулюкин, М.И. Медико биологические аспекты вируса лейкоза КРС / Гулюкин М.И. , Замараева Н.В.// Сб.: Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с лейкозами сельскохозяйственных животных и птиц. - 2000. —Екатеринбург. -С. 12-25

32. Гулюкин, М.И. Дифференциальная диагностика гемабластозов крупного рогатого скота / Гулюкин М.И. и др.// Бюл. ВИЭВ, М.: 1996. - Вып. 77. -С. 46

33. Гулюкин, М.И. Разработка эффективных мероприятий против лейкоза крупного рогатого скота / Гулюкин М.И. и др.// Ветеринария. 2002. - № 12. -С. 3-8

34. Гулюкин, М.И. Эпизоотологическая оценка методов прижизненной диагностики лейкоза КРС / Гулюкин М.И., Дун Е.А., Замараева Н.В., Баркова Н.В., Петров Н.И., Пау С.М.// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. -2000. -№3. -С. 60-62.

35. Гулюкин, М.И. Основные тенденции в организации и проведении про-тиволейкозных мероприятий / Гулюкин М.И., Замараева Н. В., Седов В. А. и др. // Труды ВИЭВ. М. - 1999. - Т. 72. - С. 16 - 22

36. Гулюкин, М.И. Особенности противолейкозных мероприятий, обеспечивающих высокую молочную продуктивность / Гулюкин М.И., Симонян Г.А., Мироменко А.К.//Сборник научных трудов. Екатеринбург, 2005. -С.28-34.

37. Гулюкин, М.И. О распространении лейкоза крупного рогатого скота / Гулюкин М.И., Симонян Г.А., Шишкин A.B.// Ветеринарный консультант. №18. -2004.-С. 4-5.

38. Дементьева, Н.В. Использование метода фингенпринтинга ДНК для изучения генетической дивергенции в популяциях сельскохозяйственных животных / Дементьева Н.В., Терлецкий В.П., Тыщенко В.И.// Вестник РАСХН.- 2003.- № 12,- С.79-80

39. Деринов, А.Н. Псевдоаллергические реакции на туберкулин при лейкозе КРС / Деринов А.Н., Овдиенко Н.П., Найманов А.Х.// Ветеринария. 2006. -11. -С.20-23

40. Джунина, С. И. Контроль эпизоотического процесса. Джунина С. И.: Новосибирск. 1994. - 162 с.

41. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота (Методические указания). М., 1998.- 29 с.

42. Диагностика лейкоза крупного рогатого скота. Методические указания. -М.: Агропромиздат, 1998. -29 с.

43. Донник, И.М. Эффективность работы по реализации противолейкозных мероприятий на фоне сложной эпизоотической обстановки по лейкозу / Донник И.М., Татарчук А.Т., Корнилов Н.А.// Сборник научных трудов. Екатеринбург, 2005. - С.52-59.

44. Епишко, Т.И. Некоторые аспекты анализа микросателлитных локусов при проведении генетической экспертизы крупного рогатого скота / Епишко

45. Т.И., Курак О.П., Кузуб H.H.// Материалы международной научной конференции «Современные методы генетики и селекции в животноводстве». -Санкт Петербург. - ВНИИРГЖ. - 2007. - с. 255-260

46. Жебровский, JI.C. Селекционно-генетические основы белкового состава молока коров. Жебровский JI.C.: М.: Колос. - 1973, 248 с.

47. Жучаев, К.В. Генетическая характеристика иммунореактвности и естественной резистентности сельскохозяйственных животных / Жучаев К.В. // Сельскохозяйственная биология. 1992. - № 6. - С. 36 - 46

48. Замараева, Н.В. Экспериментальные исследования по выявлению возможности передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота через молоко лабораторным животным / Замараева Н.В. , Гулюкин М.И., Снежков М.Н.// Бюлл. ВИЭВ. 1996. - № 77. - С. 66

49. Зиновьева, H.A. Генетическая оценка в племенном животноводстве / Зиновьева H.A.// Материалы международной научной конференции «Современные методы генетики и селекции в животноводстве». Санкт - Петербург. - ВНИИРГЖ. - 2007. - с. 34-37

50. Иванова, Л. А. Опыт применения иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу лейкоза на заключительном этапе оздоровления / Иванова Л. А.// Бюл. ВИЭВ. -1999. т. 72. С. 202-209

51. Калашникова, JI.A. Селекция XXI века: использование ДНК-технологий. Калашникова JI.A., Дунин И.М., Глазко В.И.: М., 2000.- 31 с.

52. Калашникова, JI.A. ДНК-технологии оценки сельскохозяйственных животных.- Калашникова Л.А., Дунин И.М., Глазко В.И., Рыжова Н.В.: М., 1999.- 148 с.

53. Коваленко, В. Новые мясные типы свиней / Коваленко В., Максимов Г.// Сельские зори. -1987. №. 5. - С. 41

54. Ковалюк, Н.В Селекционно-генетический способ создания высокопродуктивного и устойчивого к персистентному лимфоцитозу крупного рогатого скота / Ковалюк Н.В., Шостак В.А., Сацук В.Ф., Фоменко Д.В. // Вестник РАСХН. 2005. -№ 6. - С.67-69

55. Ковалюк, Н.В. Использование генетических маркеров для повышения молочной продуктивности коров / Ковалюк Н.В., Сацук В.Ф., Мачульская Е.В. // Зоотехния. 2007.-№ 8. -С.2-4

56. Коновалова, E.H. Характеристика симментальского скота различного происхождения с использованием ДНК-микросателлитов / Коновалова E.H., Сельцов В.И., Зиновьева H.A.// Зоотехния.- 2006.-№ 8. -С. 6-9

57. Коромыслов, Г.Ф. Научные исследования по инфекционной патологии животных / Коромыслов Г.Ф. //Ветеринария. -1995. № 8. - С.3-7.

58. Коромыслов, Г.Ф. Основные итоги и перспективы научных исследований по проблеме лейкозов сельскохозяйственных животных / Коромыслов Г.Ф., Гулюкин М.И., Симонян Г.А. //Тр. ВИЭВ. т. 72. - М.: 1999. - С.3-11

59. Коромыслов, Г.Ф. Основы профилактики и ликвидации лейкоза крупного рогатого скота / Коромыслов Г.Ф., Шишков В. П.// Ветеринария. 1993. - № 4. - С. 15-18

60. Костенко, Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. Костенко Т.С. и др.: М.: Агропромиздат. - 1989. - 272 с.

61. Крикун, В.А. Лейкоз крупного рогатого скота и иммунологическая толерантность / Крикун В. А.// Ветеринария. 2002. - № 6. -С. 7-9

62. Крикун, В.А. Слизистая носа наиболее вероятный путь заражения животных вирусом лейкоза КРС / Крикун В.А.// Лейкозы крупного рогатого скота.-М.- 1985.-С. 5-6

63. Кугенев, П.В. Практикум по молочному делу. Кугенев П.В., Барабанщиков Н.В.: М.: Колос. - 1978, 240 с.

64. Кудрявцева, Т.П. Лейкоз животных. Кудрявцева Т.П.: М.: Россель-хозиздат. - 1980. -158 с.

65. Кудряшов, А. А. Патологоанатомические изменения при лимфоидном лейкозе крупного рогатого скота / Кудряшов А. А., Петров Н.И. // Ветеринария.- 1999.-№ 11.-С. 14-15.

66. Кузин, А.И. Влияние лейкоза на продуктивность коров и качество молока / Кузин А.И., Закрепина E.H.// Ветеринария. -1997. № 2. - С. 19-21

67. Кузин, А.И. К вопросу оздоровления хозяйств Вологодской области от лейкоза крупного рогатого скота / Кузин А.И., Печерская М.В.// Тр. ВАСХ-НИЛ. 1974. -С. 228

68. Кузнецов, А.П. Экономический ущерб, причиняемый лейкозом крупного рогатого скота / Кузнецов А.П., Никитин И.Н.// Ветеринария. -1993. №8. -С. 14-16.

69. Кузнецова, А.П. Проблемы лейкоза сельскохозяйственных животных / Кузнецова А.П., Смирнов В.П.// Ветеринария. №3 1998 -С.32-33.

70. Кузнецова, Н.В. Использование полимеразной цепной реакции для выявления инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота / Кузнецова Н.В. и др.// Ветеринария. 1997. - С. 12 - 13

71. Кукайн, P.A. Вирус лейкоза крупного рогатого скота. Кукайн P.A. и др.: Рига: Зинатне, 1982. - 174 с.

72. Лакин, Т.Ф. Биометрия. Лакин Т.Ф.: М.: Высшая школа, 1980. - 293 с.

73. Лактионов, A.M. Селекционно генетические аспекты лейкозов крупного - рогатого скота / Лактионов A.M.// Ветеринария. - 1972. - № 6. - С. 66 -69

74. Лемеш, В.М. Лейкоз крупного рогатого скота. Лемеш В.М. и др.: Минск: «Ураджай», 1987. - 220 с.

75. Лиманский, А.П. Молекулярно генетические методы - основа программ по искоренению лейкоза крупного рогатого скота / Лиманский А.П., Лиманская О.Ю. // Биотехнология. - 2001. - № 3. - С. 40-50

76. Лиманский, А. П. Типирование вируса лейкоза крупного рогатого скота, циркулирующего в Украине / А. П. Лиманский, L. Geue, О. Ю. Лиманская, D. Beier // Вопр.вирусологии. 2004. - Т. 49. - № 1. - С. 39-44.

77. Мадисон, В. Лейкоз: пустые страшилки или общегосударственная проблема?/ Мадисон В., Мадисон Л.// Животноводство России. 2006.-№9.С - 28

78. Мазин, A.B. Анализ генома. Методы. Мазин A.B., Краев A.C., Потапов В.А.: М.: Мир, 1990 . - 176 с.

79. Мазин, A.B. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. — Мазин A.B., Кузнеделов К.Д., Краев A.C.: Новосибирск: Наука, 1990. -248 с.

80. Макаров, В.В. Избранные вопросы общей эпизоотологии и инфектоло-гии. Макаров В.В.: М., 1999. - 224 с.

81. Макаров, В.В. Эпизоотологические перспективы лейкоза крупного рогатого скота / Макаров В.В., Гринишин Д.П.// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 2005. -№ 2. - С. 70-73

82. Максимов, Г. В. Селекция на мясность и качество свинины / Максимов Г. В. // Сб. науч. тр. по проблеме «Свинина»: Актуальные проблемы производства свинины. Одесса, 1990. - С. 55 - 58

83. Максимов, Г.В. Качество мясной продукции и стрессустойчивость свиней в связи с селекцией на мясность / Максимов Г.В. // Сельскохозяйственная биология. 1995. -№. 2. - С. 13-35

84. Мандыгра, Н.С. Крупномасштабные оздоровительные мероприятия против лейкоза крупного рогатого скота / Мандыгра Н.С. // Тр. Свердловской НИВС. 1995. - С.9-12.

85. Маринин, Е.А. Прогнозирование сроков оздоровления хозяйств от лейкоза крупного рогатого скота / Маринин Е.А., Кузнецов А.П.// Ветеринария. -№ 6. 1996 - С.31-33

86. Маринин, Е.А. Прогнозирование сроков оздоровления хозяйств от лейкоза крупного рогатого скота / Маринин Е.А., Кузнецов А.П. // Ветеринария. 1997. -№6-С. 17-20.

87. Меркурьева, E.K. Биометрия в селекции и генетике сельскохозяйственных животных. Меркурьева Е.К.: М.: Колос, 1979. - 423 с.

88. Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод ПЦР // Государственный комитет сани-тарно — эпидемиологического надзора РФ. -1995

89. Методические указания по индикации генома провируса лейкоза крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции. Утв. Департаментом ветеринарии МСХ и ПРФ 21.02.1997г.

90. Мурватуллоев, С.А. Носовые истечения больных лейкозом коров, как фактор передачи вируса лейкоза крупного рогатого скота / Мурватуллоев С.А. // Тр. ВИЭВ. 1999. - Т. 72. - С. 128-129

91. Муровска, М. Ингибирование репликации вируса лейкоза крупного рогатого скота у трансгенных кроликов под влиянием антисмысловых РНК / Муровска М., Козырева С., Томсоне В. // Экспериментальная онкология. -2001.-№ 1.-С. 15-20

92. Нахмансон, В.М. Лейкоз крупного рогатого скота. Нахмансон В.М.: М.: Россельхозиздат. - 1986. - 221с.

93. Нахмансон, В.М. Серологический метод диагностики в системе проти-волейкозньгх мероприятий / Нахмансон В.М., Гулюкин М.И., Дун Е.А. // Ветеринария. -1997. №3. - С.7-10.

94. Нахмансон, В.М. Эпизоотология лейкоза крупного рогатого скота и меры борьбы с ним / Нахмансон В.М., Дун Е.А.// Итоги науки и техники. — 1986.-С.146- 149

95. Новиков, A.A. Генетическая экспертиза племенного материала / Новиков A.A., Романенко Н.И.// Зоотехния. 2001.-№7. - С. 14-17

96. Ным, Э.М. Распространение лейкоза крупного рогатого скота в Эстонской ССР / Ным Э.М. и др.//Труды АН Латвийской ССР.- Рига: Зинатне, 1970.-145 с.

97. Орлянкин, Б.Г. Классификация и номенклатура РНК содержащих вирусов позвоночных / Орлянкин Б.Г. // Сельскохозяйственная биология. -1996.-№2.-С. 3-24

98. Панков, Б.Г. Дифференциация лейкомоидных реакций у крупного рогатого скота / Панков Б.Г.// Ветеринария,- 1980. -№ 12. С. 32-33

99. Перепечина, И.О. Исследование объектов судебно-биологической экспертизы полимеразной цепной реакцией / Перепечина И.О., Стегнова Т.В., Пименов М.Г. // Методические рекомендации: М., ЭКЦ МВД РФ, 1996. 24 с.

100. Петров, Н.И. Возвращаясь к теме лейкоза крупного рогатого скота / Петров Н.И. // Ветеринарная газета, -1998.-№16(147).-С.5.

101. Петров, Н.И. Диагностика и меры борьбы с лейкозом крупного рогатого скота / Петров Н.И.// Материалы Всероссийского совещания-семинара. -Брянск, 2004. С. 104-106.

102. Петров, Н.И. Лейкоз КРС насколько он опасен? / Петров Н.И. // Зоо-индустрия. - 2001. - № 3.-С. 15-17

103. Петров, Н.И. Оздоровление хозяйств от лейкоза крупного рогатого скота /Петров Н.И. //Ветеринария. -1997.-М9.-С. 10-12.

104. Петров, Р.В. Иммунология. Петров Р.В.: М.: Медицина, 1982. - 368 с.

105. Плохинский, H.A. Биометрия. Плохинский H.A.: М.: Изд-во Московского ун-та, 1970. - 367 с.

106. Плохинский, H.A. Руководство по биометрии для зоотехников. Плохинский H.A.: М.: Колос, 1969. - 256 с.

107. Пономарев, А.Б. Эпизоотическая обстановка в России / Пономарев А.Б. // Ветеринарная газета 2003, №1 - с-4-6

108. Правила по профилактике и борьбе с лейкозом крупного рогатого скота. Утверждены приказом Минсельхозпрода России от 11 мая 1999, № 359. -М.: Зарегистрировано распоряжением Минюста России, регистрационный знак № 1799 от 04 июня 1999

109. Приймак, A.A. ПЦР быстрый и высоко чувствительный метод определения возбудителя туберкулеза в биологических материалах / Приймак A.A. и др. // Пульмонология. - 1995. -№. 3. - С. 16 -20

110. Смирнов, П.Н. Проблемы лейкоза животных / Смирнов П.Н., Незавитин А.Г., Смирнова В.В. и др. // Новосибирск, 1992. -476с.

111. Прохватилова, Л.Б. Диагностика лейкоза КРС методом ПЦР / Прохва-тилова Л.Б. и др. // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 1998. -№ 5 .-С. 65-68

112. Прохватилова, Л.Б. Применение ПЦР для раннего обнаружения прови-руса лейкоза крупного рогатого скота у экспериментально инфицированных животных / Прохватилова Л.Б. и др. // Ветеринария. -2001. -№ 8. С. 17-21

113. Прохоренко, П.Н. Современные методы генетики и селекции в животноводстве / Прохоренко П.Н. // Материалы международной научной конференции «Современные методы генетики и селекции в животноводстве». -Санкт Петербург. - ВНИИРГЖ. - 2007. - с. 3-5

114. Прохоров, A.B. Опыт работы по ликвидации лейкоза КРС в Каневском районе / Прохоров A.B.// Ветеринария Кубани. 2004. - № 4. - С. 4 - 6

115. Рис, Э. Введение в молекулярную биологию. — Рис Э., Стернберг М.: М.: Мир, 2002. 142 с.

116. Румянцев, Н.В. Современные данные по лейкозу крупного рогатого скота / Румянцев Н.В., Шатерникова Т.Н. // Ветеринария. 1963. -№ 4. - С. 20-26

117. Салимов, Х.С. Этиология, диагностика и меры профилактики лейкозов крупного рогатого скота.- Салимов Х.С.: Ташкент, 1986. 86 с.

118. Свириденко, Г.М. Плюсы и минусы новой технологии / Свириденко Г.М.//Молочная промышленность. -2003. -С. 10-15

119. Сенченко, Б.С. Руководство по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов животного и растительного происхождения.- Сенченко Б.С., Тро-шин А.Н., Кавунник Я.М.: 1998,-г. Краснодар. -Советская Кубань. 672 с.

120. Симонян, Г.А. Морфологические изменения крови и пунктата костного мозга у коров при лейкозе / Симонян Г.А. // Ветеринария. 1963. -№ 6. - С. 33 -38 ,

121. Симонян, Г.А. Разработка и совершенствование оздоровительных про-тиволейкозных мероприятий / Симонян Г.А.// Ветеринария. — 2007. -№ 7. — С. 3-7

122. Симонян, Г.А. Ветеринарная гематология. Симонян Г.А., Хисамугди-нов Ф.Ф.: М.: Колос. -1995. - 254 с.

123. Слепченко, А.Р. Главный комплекс гистосовместимости сельскохозяйственных животных: иммуногенетические и популяционные аспекты / Слепченко А.Р.// Успехи современной генетики. 1994. - № 19. - С. 178 - 205

124. Смирнов, A.M. Борьба с лейкозом крупного рогатого скота важнейший элемент системы обеспечения ветеринарного благополучия российского животноводства / Смирнов A.M.// Сборник научных трудов. Екатеринбург, -2005. - С.5-9

125. Смирнов, П.Н. Лейкоз крупного рогатого скота: проблемы и их решение на уровне субъекта Федерации / Смирнов П.Н.// Ветеринария Кубани. 2007. -№4. -С.4-7

126. Смирнов, П.Н. Практические аспекты лейкоза крупного рогатого скота / Смирнов П.Н.// Ветеринарная газета .-№13. —1998. 4с.

127. Смирнов, П.Н. Практические аспекты лейкоза крупного рогатого скота / Смирнов П.Н., Храмцов В.В., Смирнова В.В.// Ветеринария. -1998. №8. -С.6-8.

128. Смирнов, Ю.П. Влияние лейкоза на молочную продуктивность коров / Смирнов Ю.П. //Молочное и мясное скотоводство. 1999. - № 4. - С. 25-28

129. Смирнов, Ю.П. Основные пути распространения лейкоза / Смирнов Ю.П.//Ветгазета. 1999. -№4 - С.3-4.

130. Смирнов, Ю.П. Развитие лейкозного процесса у инфицированных ВЛКРС коров в зависимости от их возраста / Смирнов Ю.П.// Ветеринария.-1999.-№ 12.-С. 15-17

131. Смирнова, В.Н. К вопросу о токсичности молока коров, больных лейкозом / Смирнова В.Н.// Сб.: Актуальные вопросы диагностики, профилактики и борьбы с лейкозами сельскохозяйственных животных и птиц. — 2000. — Екатеринбург. С. 240 - 242

132. Снежков, Н. И. Молоко лейкозных животных — фактор эпизоотического процесса.- Снежков, Н. И.: Ученые-аграрники с.-х. пр-ву. - Кострома. -1995.-Т. 1.-С. 35.

133. Стегнова, Т.В. Исследование спермы при идентификации личности методом генотипоскопии / Стегнова Т.В., Перепечина И.О., Пименов М.Г., Сы-роквашева Е.Ю.// Методические рекомендации: М., ЭКЦ МВД РФ, 1993. 24 с.

134. Сулимова, Г.Е. Анализ полиморфизма ДНК кластерных генов у крупного рогатого скота: гены казеинов и гены главного комплекса гистосовме-стимости (BoLA) / Сулимова Г.Е., Соколова С.С., Семикозова О.П. // Цитология и генетика. 1992,- Т. 26.- №5.- С. 18-25

135. Сулимова, Г.Е. ДНК-полиморфизм гена BoLA-DRB 3 у крупного рогатого скота в связи с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу / Сулимова Г.Е., Удина И.Г., Шайхаев Г.О, Захаров И.А.// Генетика. -1995. -№. 9. -С.1294-1299

136. Сулимова, Г.Е. Генотипирование локуса каппа казеина у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции / Сулимова Г.Е., Шайхаев Г.О., Берберов ЭММ Генетика. -1991. -Т. 27. - с. 2053 - 2062

137. Сюрин, В.Н. Ветеринарная вирусология- Сюрин В. Н. , Белоусова Р.В., Фомина Н. В.: М.: Агропромиздат, 1991. 431с.

138. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я. и др.: М. - 1998 г. -С.383-406.

139. Тихомирова, Т. И. Исторические аспекты идентификации происхождения животных / Тихомирова Т. И.// Материалы международной научной конференции «Современные методы генетики и селекции в животноводстве». Санкт - Петербург. - ВНИИРГЖ. - 2007. - с. 222-227

140. Удина, И.Г. Гены главного комплекса гистосовместимости человека и животных / Удина И.Г.// Успехи современной генетики. 1994. - № 19. - С. 133-177

141. Удина, И.Г. Использование ДНК-технологий для оценки наследственной устойчивости к заболеванию лейкозом / Удина И.Г. и др. // Тез. докл. II международной научн. конф.: Биотехнология в животноводстве и ветеринарии. М., 2000. - С. 219-220

142. Уильяме, Б. Методы практической биохимии. Уильяме Б., Уилсон К.: М.: Мир, 1978.-272 с.

143. Федорова, С.М. Наследственность в этиологии лейкозов крупного рогатого скота. Федорова С.М.: Рига: Зинатне. - 1989. - 45 с.

144. Федотов, В.П. Лейкоз крупного рогатого скота в Ивановской области / Федотов В.П., Иванов О.В., Иванова О.Ю.// Ветеринария. 2007. -№ 5. -С.23-25

145. Херингтон, С. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. Хе-рингтон С. и др.: М.: Мир, 1999. - 558 с.

146. Чохатариди, Г. Нужно ли нам больше коров? / Чохатариди Г. // Молочное и мясное скотоводство. 1997. - № 6. — С. 24-26

147. Шипицин, А. Г. К вопросу изучения лейкоза крупного рогатого скота в Краснодарском крае. — Шипицин А. Г. и др.: Ставрополь. 1999. - С. 156 — 158

148. Шипицын, А.Г. Лейкоз крупного рогатого скота в краснодарском крае / Шипицын А.Г., Скориков A.B., Чопик Т.Н. и др. // Методические рекомендации ГНУ КНИВИ. 2006. - 28 с.

149. Эрнст, Л.К. Мониторинг генетического груза в черно-пестрой, гол-штинской и айрширской породах крупного рогатого скота / Эрнст Л.К., Жи-гачев А.И., Кудрявцев В.А.// Зоотехния. 2007. - №3 .- С.5-10

150. Эрнст, Л.К. Особенности распространения антигенов BoLA -А и аллелей гена BoLA -DRB3 у черно пестрого скота в связи с ассоциацией с лейкозом /Эрнст Л.К., Сулимова Г.Е., Орлова А.Р.// Генетика. -1997. -Т.ЗЗ. - № 1.-С. 87-95

151. Эрнст, Л.К. Новые аспекты селекции крупного рогатого скота на устойчивость к лейкозу / Эрнст Л.К., Шишков В.П. //С.-х. биология.- 1984.- №2. — С.96-104

152. Юхманова, Н. Влияние каппа казеина на качество молока и его сыро-пригодность / Юхманова Н., Калашникова Л.// Молочное и мясное скотоводство. - 2004. - № 8. - С. 24 - 25

153. Aida, Y. Identification of a New Bovine MHC Class II DRB Allele by Nucleotide Sequencing and an Analysis of Phylogenetic Relationships / Aida Y. et al.// Biochemical and Biophysical Research Communications. -1995.-vol. 209. -№ 3,P. 981-988.

154. Aida, Y. Phenotype and Ontogeny of Cells Carrying a Tumor-associated Antigen that is Expressed on Bovine Leukemia Virus-induced Lymphosarcoma / Aida Y. et al.// 1993.- Cancer Research.-№ 53.- P. 429-437

155. Aida, Y. Further phenotypic characterization of target cells for bovine leukemia virus experimental infection in sheep / Aida Y., Miyasaka M., Okada K.// Am. J. Vet. Res. 1989. № 50. - P. 1946-1951

156. Aird, I. A relationship between cancer of stomach and the ABO blood groups / Aird I., Bentall H.H., Roberts J.A.// British Medical Journal. 1953. -№1. - P. 799-801

157. Amadori, M.I. Role of a distinct population of bovine T cells in the immune response to viral agents / Amadori M.I. Archetti L., Verardi R., Berneri C.// Viral Immunol. 1995. -№ 8.- P. 81-91

158. Ashwell, M. S. A Genome Scan To Identify Quantitative Trait Loci Affecting Economically Important Traits in a US Holstein Population / Ashwell M. S., Van Tassell C. P., Sonstegard T. S.// J Dairy Sei, Desember .-№ 20, 2001.- P. 450 -457

159. Band, M. R. An Ordered Comparative Map of the Cattle and Human Genomes / Band M. R.// Genome Research. 2000- Vol. 10.-P. 1359-1368

160. Barroso, A. Technical Note: Detection of Bovine Kappa-Casein Variants A, B, C, and E by Means of Polymerase Chain Reaction-Single StrandConformation Polymorphism (PCR-SSCP) / Barroso A., Dunner SM J. Anim. Sei. -1998. -76:1535-1538

161. Behl, I.D. Characterization of genetic polymorphism of the bovine lymphocyte antigen DRB3.2 locus in Kankrej cattle (Bos indicus) / Behl I.D. et.al.// J Dairy Sei. 2007. - Jun 90(6). -P.2997-3001.

162. Biozzi, G. Genetic regulation of immunoresponsiveness in relation to resistance against infectious diseases / Biozzi G. et al. // Proc. 2 World Congr. Genet.Appl. Liv. Prod. Madrid. 1982. - P. 150 - 163

163. Brascamp, E. W. Economic appraisal of the utilization of genetic markers in dairy cattle breeding / Brascamp E. W., Arendonk J. A.// Journ. of Dairy Sci. -1993.-V. 76. №. 4. - P. 1204 - 1213

164. Brien, P.J. Porcine malignant hyperthermia susceptibility: halothane — induced increase in cytoplasmic free calcium in lymphocytes / Brien P.J, Kalow B.I.//Am. J. Vet. Res. -1989. №. 50. - P. 131 - 135

165. Brown, J.H. A hypothetical model of the foreign antigen binding site of class II histocompatibility molecules / Brown J.H, Jardetzry T., Saper M.// Nature. -1988. -332 :845

166. Burke, M.G. Nucleotide sequence and northern analysis of a bovine major histocompatibility class II DR beta-like cDNA / Burke M.G., Stone R.T., Muggli-Cockett N.E. // Anim. Genet. 1991. - № 22(4). P. 343-352

167. Burny, A. Bovine leukemia virus: a new mode of leukemogenesis / Burny, A., Bruck C., Cleuter Y.// Advances in viral oncology. 1985. P. 35 - 55

168. Camaschella, C. Prenatal diagnosis of fetal hemoglobin Lefore Boston disease on maternal peripheral blood / Camaschella C., Alfarano A., Gottadi E.// Blood. - 1990. - №. 75. - P. 2102

169. Carli, K.T. Comparison of Serum, Milk and Urine as Samples in an Enzyme-Immunoassay for Bovine Leukemia Virus Infection / Carli K.T., Batmaz H., Sen A., Minbay A.// Res.Vet.Sci.- 1993,- Vol.55.-№ 3.- P.394-395.

170. Carli, K.T. Detection of IgG antibody to bovine leukemia virus in urine and serum by two enzyme immunoassays / Carli K.T., Sen A., Batmaz H., Kennerman E.// Lett. Appl. Microbiol.- 1999.- Vol.28, N.6.- P.416-418.

171. Casas, E. Detection of quantitative trait loci for growth and carcass composition in cattle / Casas E., Shackelford S. D.,. Keele J. W, Koohmaraie M., Smith T. P. L. Stone R. T.// J. Anim. Sci. 2003. -№ 81. P. 2976-2983

172. Da, Y. Milk and fat yields decline in bovine leukemia virus-infected dairy cattle with persistent lymphocytosis / Da, Y., Shanks R.D., Stewart J.A., Lewin H.A.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - № 94. - P. 6538-6541.

173. Daniel, R.C. Recombinant viral vaccines for enzootic bovine leucosis / Daniel R.C., Gatei M.H., Good M.F., Boyle D.B., Lavin M.F.// Immunol Cell Biol. 1993.- Oct;71.-P:399-404

174. Davies, C.J. Polymorphism of bovine MHC class I genes Joint report of the Fifth International Bovine Lymphocyte Antigen (BoLA) / Davies C.J.// European Journal of Immunogenetics. - 1994. -№ 21. - P. 239-258.

175. Debacq, C. Reduced Cell Turnover in Bovine Leukemia Virus-Infected, Persistently Lymphocytotic Cattle / Debacq C., Asquith, B., Reichert M., Bumy A., Kettmann R., Willems L.// J. Virol. 2003. -№ 77. P. 13073-13083

176. Dequiedt, F. Bovine Leukemia Virus-Induced Persistent Lymphocytosis in Cattle Does Not Correlate with Increased Ex Vivo Survival of B Lymphocytes / Dequiedt F., Cantor G., Valerie T.// Journal of Virology. 1999. - №2. - V.73. -P. 1127-1137

177. Deren, W. The eradication of enzootic bovine leucosis in a large farm population / Deren W., Szewczyk-Sadowska A., Rulka J.// Pol J Vet Sci. 2003. -№ 6. -P. 12-14.

178. Dietz, A.B. Bovine lymphocyte antigen Class II Alleles as risk factors for high somatic cell counts in milk of lactating dairy cows / Dietz A.B., Conen N.D. // J Dairy Sci. -1997. № 80. - P. 406 - 412

179. Duklcipati, V.S. Ovar-Mhc Ovine major histocompatibility complex : Role in genetic resistance to diseases / Dukkipati V.S, Blair H.T, Garrick D.J, Murray A.//NZ Vet J.- 2006.- Aug;54(4).-P: 153-160

180. Fries, R. The bovine gene map / Fries R., Beckmann I.S., Georgies M.// Animal Genetics.-1989.-V.20.-P. 3-29

181. Fries, R. The bovine genome map / Fries R., Eggen A., Womack J.E.// Mamm. Genome. -1993.-№ 4.-P. 405-428

182. Fujii, J. Identification of a mutation in the porcine gene / Fujii J., Otsu K., Zorzato F.// J. Anim. Breed. Genetics. 1991. - №. 116.- P. 263-267.

183. Gasbarre, L.S. Role of the bovine immune system and genome in resistance to gastrointestinal nematodes / Gasbarre L.S., Leiqhton E.A., Sonstegard T.// Vet Parasitol. -2001. № 12.-P. 51-64

184. Gelhaus, A. Sequence and PCR-RFLP analysis of 14 novel BoLA-DRB3 alleles / Gelhaus A., Schnittger L., Mehlitz D., Horstmann R.D., Meyer C.G.II Anim. Genet. 1995. - № 26(3). - P. 147-153

185. Gilliespie, B.E. Analysis and frequency of bovine lymphocyte antigen DRB3.2 alleles in Jersey cows / Gilliespie B.E., Jayarao B.M., Dowlen H.H.// J Dairy Sci. -1999. № 82(9). -P.2049-2053

186. Groenen, M.A. The nucleotide sequence of bovine MHC class II DQB and DRB genes / Groenen M.A. et al.// Immunogenetics. 1990. -№ 31. - P. 37

187. Gupta, I. D. Genotyping of P-Lactoglobulin gene by PCR-RFLP in Sahiwal and Tharparkar cattle breeds / Gupta I. D., Gupta N., Gupta S.C.// BMC Genet.-2006.-№ 7.-P. 31-33

188. Harding, C.V. MHC molecules and antigen presentation / Harding C.V.// Animal. Genetics. 1997. - V. 27. - P. 91-96.

189. Hawken, R. J. Resolving the genetics of resistance to infectious diseases / Hawken R. J., Beattie C. W., Schook L. B.// Revue Scientifique et Technique. — 1998.-№ 17.-P. 17-25.

190. Heringstad, B. Association of toll-like receptor 4 polymorphisms with somatic cell score and lactation persistency in holstein bulls / Heringstad B., Gianola D., Chang Y. M., Odegard J., Klemetsdal G.// J Daily Sci. -2006. -№ 89. P. 3626 -3635

191. Hoj, S. Growth hormone gene polymorphism associated with selection for milk fat production in lines of cattle / Hoj S. et al.// Animal. Genetics. 1993. — V.24.-№2.-P. 91-96

192. Horin, P. BoLA DYA polymorphism in Czech cattle / Horin P., Matiasovic J.// Exp. Clin Immunogenet. 1998. -15 (1). - P. 56 - 60

193. Kabeya, H. Host immune responses in the course of bovine leukemia virus infection / Kabeya H., Ohashi K., Onuma M.// J Vet Med Sci. -2001.- Jul.-№ 63(7).- P. 703-708

194. Klintevall, K. Evaluation of an Indirect ELISA for the Detection of Antibodies to Bovine Leukemia-Virus in Milk and Serum / Klintevall K.// J. Vir.Meth.-1991.- Vol.33.-№.3.-P.319-333.

195. Kohara, J. Experimental transmission of Bovine leukemia virus in cattle via rectal palpation / Kohara J., Konnai S., Onuma M.// Jpn. J Vet Res.- 2006.- May.-№54(1).P. 25-30

196. Koivula, M. Genetic and Phenotypic Relationships Among Milk Yield and Somatic Cell Count Before and After Clinical Mastitis / Koivula M., Mantysaari E. A., Negussie E., Serenius T.// J Dairy Sci. -2005.-№ 88 P. 827-823.

197. Konnai, S. Tumor necrosis factor-alpha genetic polymorphism may contribute to progression of bovine leukemia virus-infection / Konnai S., Usui T., Ikeda M.H Microbes Infect.- 2006.- Jun 2.- P.312-315

198. Kucerova, J. Multitrait quantitative trait Loci mapping for milk production traits in danish Holstein cattle / Kucerova J., Lund M. S., Sorensen P., Sahana G.,

199. Guldbrandtsen B., Nielsen V. H., Thomsen B., Bendixen C.// J Dairy Sci.- June 1. 2006. -P. 2245 - 2256

200. Kulberg, S. Study on the association of BoLA-DRB3.2 alleles with clinical mastitis in Norwegian Red cows / Kulberg S., Heringstad B., Guttersrud O.A, Ol-saker I.// J Anim Breed Genet.- 2007. Aug; 124(4). - P.201-207

201. Lagziel, A. An Msp I polymorphism at the bovine growth hormone gene is linked to a locus affecting milk protein percentage / Lagziel A. et al.// Animal. Genetics. 1999. -V. 30. - № P. 296 - 299

202. Lagziel, A. Association between SSCP haplotypes as the bovine growth hormone gene and milk protein percentage / Lagziel A., Lipkin A., Soller M.// Genetics.-1996.-V.142.-P. 945-951

203. Ledwidge, S.A. Multi primer target PCR for rapid identification of bovine DRB 3 alleles / Ledwidge S.A., Mallard B.A.// Animal Genetics. - 2001. - № 32. -P. 219 - 221

204. Lee, J. Investigation of the bovine leukemia virus proviral DNA in human leukemias and lung cancers in Korea / Lee J., Kim Y., Kang C.S.// J Korean Med Sci.- 2005. 20(4). - P.603-606

205. Levin, H.A. Association between BoLA and subclinical in bovine leukemia virus infection in a herd of Holstein Friesian cows / Levin H.A., Wu M.C., Steward J.A.// Immunogenetics. - 1988. -27(5). - P. 338 - 344

206. Lindberg, P. G. Close association between DNA polymorphism of bovine histocompatibility complex class I genes and serological BoLA A specificities / Lindberg P. G., Andersson L.// Anim. Genet. - 1988. - № 19. - P. 245 - 255

207. Maillard, J.C. Characterization of 18 new BoLA-DRB3 alleles / Maillard J.C., Renard C., Chardon P., Chantai I., Bensaid A.// Anim. Genet. 1999. -№ 30(3). -P.200-203.

208. Maltseva, N.A. Use of diagnostic DNA probes for detection of the provirus of bovine leukemia virus in infected cows / Maltseva N.A., Kaledin A.S., Oliynik E.I., Zhivotov A.A., Baranov V. I.// Problems of Virology.- 2002. №6. - P. 25 -33

209. McClure, H.M. Cancer Res / McClure H.M., ICuling M.E., Custer P.Ph.//1974. V.34 -P.2745-2757.

210. Meirom, R. BLV-infected lymphocytes exhibit two patterns of expression as determined by Ig and CD5 markers / Meirom R, Brenner J, Trainin Z.// Vet Immunol Immunopathol.- 1993. -№ 36 (2). P. 179-86.

211. Meirom, R. Levels and role of cytokines in bovine leukemia virus (BLV) infection / Meirom R., Moss S., Brenner J., Heller D. and Trainin Z.// Leukemia. -1997.- 11 (Suppl. 3).-P. 219-220

212. Mikko, S. Extensive MHC class II DRB3 diversity in African and European cattle / Mikko S., Andersson L. // Immunogenetics. 1995. - № 42 (5).- P. 408413

213. Miller, J.M. Virus like particles in phytohemagglutinin - stimulated lymphocyte cultures with referent to bovine lymphosarcoma / Miller J.M., Miller L.D., Olson C., Gillette K.G.// J. Natl. Cancer Inst. - 1969. - № 43. - P. 1297 -1305

214. Miltiadou, D. Establishment of a sequence-based typing system for BoLA-DRB3 exon 2 / Miltiadou D., Law A.S., Russell G.C.// Tissue Antigens. -2003,-Jul.- № 62.- P. 55-65.

215. Miretti, M.M. Restriction fragment length polymorphism (RLFP) in exon 2 of the BoLA DRB 3 gene in South American cattle / Miretti M.M., Ferro J.A.// Biochem Genet. 2001. -№ 39. - P. 311- 324

216. Mirsky, M.L. Reduced bovine leukaemia virus proviral load in genetically resistant cattle / Mirsky M.L., Lewin H.A.// Anim. Genet. 1998. - 29. - P. 145 -252

217. Mota, A.F. Distribution of bovine lymphocyte antigen (BoLA DRB 3) alleles in Brasilian dairy Gir catlle (Bos indicus) / Mota A.F. et al.// Eur. J. Immunogenet.- 2002. -29 (3). P. 223 - 227

218. Mullis, K. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase catalyzed chain reaction / Mullis K., Faloona F.// Meth. Enzymol. -1987.-V.155.-P. 335-350

219. Naj, S. Growth hormone gene polymorphism associated with selection for milk fat production in lines of cattle / Naj S., Franholm M., Larsen N.J.// Animal Genetics.-1993.-V.24.-P. 91-96

220. Nassiry, M.R. Analysis and frequency of bovine lymphocyte antigen (BoLA-DRB3) alleles in Iranian Holstein cattle / Nassiry M.R., Shahroodi F.E., Mosafer J-// Genetlka. -2005. № 41(6). -P. 817-822

221. Olson, C. Goat lymphosarcoma from bovina leukemia virus / Olson C. et al.// J. Nuit Gmcer. Inst.,- 1981.- v. 67.- P. 671-675

222. Oshima, K. Evidence on Horisontal Transmission of Bovine Leukemia Virus due to Bloodsucking Tabanid flies / Oshima K., et al.// Jap J. Vet.Sci. -1981. -v. 43. -P.70-80

223. Otsu, K. Cosegregation of porcine malignant hyperthermia and probable cause mutation in skeletal muscle ryanodine receptor gene in backcross families / Otsu K. et al.// Genomics. 1991. - V. 11. - P. 744 -750

224. Puel, A. Mapping of genes controlling quantitative antibody production in Biozzi mice / Puel A., Groot P. C., Lathrop M. G., Demant P., Mouton D.// Journal of Immunology. 1995. -№ 154. - P. - 5799-5805.

225. Puel, A. Genes responsible for quantitative regulation of antibody production / Puel A., Mouton D.// Critical Reviews in Immunolog. 1996. - № 16. - P. 223250.

226. Rando, A. Identification of bovine k-casein genotypes at the DNA level / Rando A. et al. // Anim. Genet. 1988. - V. 19. - P. 51 - 54

227. Ripoli., M.V. New polymorphisms for the BoLA-DRB3 upstream regulatory region / Ripoli M.V., Villegas-Castagnasso E.E., Peral-Garcia P., Giovambattista G.//Tissue Antigens. 2005. - № 66 (2). - P. 136-137

228. Ripoli, M.V. Gene frequency distribution of the BoLA-DRB3 locus in Saavedreno Creole dairy cattle / Ripoli M.V., Liron J.P., Deluca J.C.// Biochem Genet. -2004. № 42(7-8)P.- 231-240

229. Rumyantsev, S. N. Observations on constitutional resistance to infection / Rumyantsev S. N.// Immunology Today. 1992. - № 13. - P. 184-187.

230. Rupp, R. Association of bovine leukocyte antigen (BoLA) DRB3.2 with immune response, mastitis, and production and type traits in Canadian Holsteins / Rupp R. et al.// J Dairy Sci.- 2007. Feb. - 90(2). -P. 1029-1038.

231. Russell, G.C. Structure of the BoLA DRB3 gene and promoter / Russell

232. G.C., Smith J.A., Oliver R.A.// European Journal of Immunogenetics. -2004. № 31.-P. 145-151

233. Shanks, R.D. Milk and fat yields decline in bovine leuemia virus infected Holstein cattle with persistent lymphocytosis / Shanks R.D., Steward J.A., Levin

234. H.A. // Agricultural Sciences. -1993. -V. 90. -№ 6. P. 6538 - 6541

235. Sharif, S. Characterization of naturally processed and presented peptides associated with bovine major histocompatibility complex (BoLA) class II DR molecules / Sharif S. et al.// Eur J Immunogenet. 2002. -29 (3). - P. 223 - 227

236. Sharif, S. Presence of glutamine at position 74 of pocket 4 in the BoLA DR antigen binding groove with occurrence of clinical mastitis caused by Staphylococcus species / Sharif S., Mallard B.A.// Immunogenetics.- 2000. - № 51. - P. 733 -742

237. Sharma, B. S. Genetic associations between clinical mastitis and somatic cell score in early first-lactation cows / Sharma B. S., Leyva I., Schenkel F., Karrow N. A.// J Dairy Sci. -2006. -№ 89. P.2236 - 2244

238. Sitte, K. Identification and characterization of new BoLA-DRB3 alleles by heteroduplex analysis and direct sequencing / Sitte K., East I.J., Lavin M.F., Jaz-winska E.C.// Anim. Genet.-1995. -№ 26(6). P. 413-417

239. So, A. Genetics, polymorphism and regulation of expression of HLA region genes / So A.// HLA and diseme. 1994. - № 4. - P. 1-34.

240. Straub, O.C. Horisontal Transmission studies on enzootic bovine leucosis / Straub O.C.// Ann. Rech. vet.- 1978.- V.9. № 4- P. 809-813

241. Suh, G. H. Establishment of a bovine leukemia virus-free dairy herd in Korea / Suh G. H., Lee J.C., Lee C.Y.// J Vet Sci.- 2005. Sep. - № 6(3).- P. 227-230

242. Tajima, S. Induction of expression of bovine leukemia virus (BLV) in blood taken from BLV-infected cows without removal of plasma / Tajima S., Aida Y.// Microbes Infect.- 2005.- Aug-Sep.- № 7.- P. 1211-1216

243. Takeshima, S. characterization of DRB3 alleles in the MHC of Japanese shorthorn cattle by polymerase chain reaction-sequence-based typing / Takeshima S., Nakai Y., Ohta M.// Journal of Dairy Science. -2002. Vol 85, Issue 6 16301632

244. United States Patent № 5,582,987 Methods for testing bovine for resistance or susceptibility to persistent lymphocytosis by detecting polymorphism in BoLA-DR3 exon 2/ Lewin H.A., van Eijk M. J. T.- December 10, 1996

245. United States Patent № 6,090,540 Methods forjudging the possibility of the onset of bovine leukemia and the resistance thereto/ Aida Y.- July 18, 2000

246. United States Patent № 6,815,158 Methods forjudging resistance to the onset of bovine leukemia/ Aida Y.- November 9, 2004

247. Vaiman, M. Porcine major histocompatibility complex / Vaiman M., Chardon P., Rothschild M. V.ll Revue Scientifique et Technique. 1998. - № 17. - P. 95-107.

248. Van Eijk, M.J.T. Development of persistent lymphocytosis in cattle is closely associated with DRB2 / Van Eijk M.J.T., Stewart-Haynes J.A., Beever J.E.// Im-munogenetics. — 1992. 37:64

249. Van Eijk, M.J.T. Extensive polymorphism of the BoLA DRB3 gene distinguished PCR-RFLP / Van Eijk M.J.T., Stewart-Haynes J.A., Lewin H.A.// Anim. Genet. 1992. V.-23. - P.483 - 496

250. Ward, W.H. T lymphocyte responses of sheep to bovine leukaemia virus infection / Ward W.H., Dimmock C.K., Eaves F.W.// Immunol. Cell Biol. 1992. -№ 70.- P. 329-336

251. Weikard, R. The bovine PPARGC1A gene: molecular characterization and association of an SNP with variation of milk fat synthesis / Weikard R., Kuhn C., Goldammer T., Freyer G., Schwerin M.// Physiol Genomics. March 21. - 2005. -P. 1 - 13.

252. Xu, A. Polymorphism in BoLA -DRB3 Exon 2 correlates with resistance to persistent lymphocytosis caused by bovine leukemia virus / Xu A., Van Eijk V.J. T., Park Ch.//J. of Immunology. -1993. -V. 151. -№ 12. P. 6977-6985

253. Yang, D. Milk and fat yields decline in bovine leukemia virus infected Holtein cattle with persistent lymphocytosis / Yang D. et al.// Agricultural Science. - 1993. - V/ 90. - P. 6538 - 6541

254. Zadworny, D. The identification of the kappa-casein genotype in Holstein dairy cattle using polymerase chain reaction / Zadworny D., Kuhlein U.// Theor.and Appl. Genetics.-1990.-V.80.-P. 631

255. Zanotti, M. Association of BoLA class II haplotypes with subclinical progression of bovine leukaemia virus infection in Holstein Friesian cattle / Zanotti M. et al.// Anim. Genet. - 1996. - 27. - P.337 - 341

256. Zerabruk, M. Analysis of genetic diversity and conservation priorities for six north Ethiopian cattle breeds / Zerabruk M., et al.// Journal of Animal Breeding and Genetics. 2007. - V. 124. -P. 236-241

Информация о работе

Ковалюк, Наталья Викторовна
доктора биологических наук
Дубровицы, 2008
ВАК 03.00.23

Диссертация

Молекулярно-генетические аспекты в селекции и ранней диагностике лейкоза крупного скота - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы