Показатели антиоксидантной защиты организма при экспериментальном дисбактериозе кишечника, обусловленном применением антибиотика широкого спектра действия

Гапон, Марина Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Показатели антиоксидантной защиты организма при экспериментальном дисбактериозе кишечника, обусловленном применением антибиотика широкого спектра действия
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Показатели антиоксидантной защиты организма при экспериментальном дисбактериозе кишечника, обусловленном применением антибиотика широкого спектра действия"

На правах рукописи

Гапон Марина Николаевна

ПОКАЗАТЕЛИ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ ОРГАНИЗМА ПРИ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ДИСБАКТЕРИОЗЕ КИШЕЧНИКА, ОБУСЛОВЛЕННОМ ПРИМЕНЕНИЕМ АНТИБИОТИКА ШИРОКОГО

СПЕКТРА ДЕЙСТВИЯ

03.00.04 — биохимия 03 00 07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соисканне ученой степени кандидата биологических наук

Ростов-на-Дону 2007

003162288

Работа выполнена в лаборатории микробиологии и разработки иммунобиологических препаратов Федерального государственного учреждения науки «Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и на кафедре общей и клинической биохимии №1 Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Росздрава «Ростовский государственный медицинский университет»

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ

доктор биологических наук, профессор Микашинович 3 И доктор медицинских наук, доцент Терновская Л Н

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ

доктор биологических наук, профессор Погорелова Т Н кандидат медицинских наук Валиева С 3

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ Федеральное государственное учреждение

здравоохранения «Ростовский-на-Дону Ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумной институт» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Защита состоится « 7 » ноября 2007 г в_ часов на заседании диссертационного совета Д 212 208 07 по биологическим наукам в Южном федеральном университете (344006, г Ростов-на-Дону, ул Б Садовая, 105, аудитория_)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Южного федерального университета (344006, г Ростов-на-Дону, ул Пушкинская, 148)

Автореферат разослан « » 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Бабенко В В

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования Организм человека и населяющая его микрофлора представляют собой единую высокоорганизованную, саморегулирующуюся, эволюционно сложившуюся систему, где взаимодействие микрофлоры и макроорганизма обеспечивает поддержание гомеостаза и равновесия на метаболическом, клеточном и молекулярно-генетическом уровнях (Бухарин О В с соавт, 1996, Гриневич В Б , Захарченко М М , 2003) Участие микроорганизмов в обмене веществ, иммунной защите и других процессах, поддерживающих гомеостаз макроорганизма, позволите высказать предположение, что нормальная микрофлора представляет собой «метаболически и регуляторно весьма активный «дополнительный орган» человеческого организма» (Шендеров Б А , 1998, Барановский А Ю , Кондрашина Э А , 2002) Взаимоотношения «хозяин-микрофлора» носят сложный характер и еще далеко не ясно, в каких формах они реализуются внутри эндо-экологической системы (Дубинин А В и др , 1991) Сбалансированность системы «хозяин-микрофлора» может нарушаться и «при превышении интенсивности негативных внешних воздействий над пороговыми значениями адаптационной системы организма» (Парфенов А И , Осипов Г А , Ручкина И Н , 2003), и при сдвигах в метаболической активности самой микрофлоры (Уголев А М , 1985) Известно и то, что состав и функционирование нормальной микрофлоры тою или иного биотопа во многом определяется состоянием среды их обитания (Бабин В Н , Минушкин О Н , Дубинин А В и др , 1998, Ма-янский А Н, 2002) Существенно влияют на качественный и количественный состав микрофлоры такие факторы как состав и количество слизи, разнообразие жидких и плотных структур, температура, поступление пищевых ресурсов, состояние барьерных тканей макроорганизма, локальная концентрация протонов (рН), факторы неспецифической резистентности, окислительно-восстановительный потенциал, концентрация кислорода и активность свободно-радикальных процессов (Дубинина ЕЕ, 2001, Захарченко М П с соавт , 2004, Голошва Е В , 2005) Изменение этих параметров, независимо от причин, их вызывающих, отражаются на составе и функционировании нормальной микрофлоры Одной из самых распространенных причин, вызывающих изменения этих параметров, является воздействие ксенобиотиков (в частности, антибиотиков) Существует мнение, что под действием ксенобиотиков в первую очередь наступает повреждение микрофлоры кишечника, так как именно она в виде биопленки препятствует их проникновению в макроорганизм (Воробьев А А с соавт,1997) Однако, по мнению Бабина В Н с соавторами (1998), «дисбактериоз есть не только нарушение видового состава и абсолютной численности популяций, но и более или менее значительные нарушения в системе хозяин-микрофлора»

Установление факта развития гипоксического состояния эпителиальных клеток кишечника, высказанное положение о способности колоноцитов продуцировать токсические формы кислорода, изменение физико-химических параметров контактной приэпителиальной зоны (Бабин В Н , Минушкин О Н , Дубинин А В , и др , 1998) создают предпосылки для более углубленного исследования взаимоотношений «хозяин-микрофлора»

Общепринятое представление о том, что нарушения в антиоксидантной защите макроорганизма лежат в основе развития многих патологических состояний, послужило основанием для выявления связи изменения микрофлоры толстого кишечника-животных и состояния антиоксидантной защиты макроорганизма в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного применением антибиотика широкого спектра действия -гентамицина

Цели и задачи. Целью настоящего исследования явилось определение состояния антиоксидантной защиты макроорганизма в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного применением антибиотика широкого спектра действия (гентамицина)

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи

1 Исследовать качественный и количественный состав микрофлоры кишечника в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного введением гентамицина

2 Исследовать состояние антиоксидантной защиты крови и колоноцитов в динамике экспериментального дисбактериоза

3 Установить связь между состоянием микрофлоры кишечника и состоянием антиоксидантной защиты эритроцитов и колоноцитов при экспериментальном дисбактериозе

4 Изучить влияние продукта функционального питания «Наринэ» на состояние микрофлоры и на некоторые показатели антиоксидантной защиты эритроцитов, колоноцитов в динамике экспериментального дисбактериоза

Научная новизна. Впервые установлена взаимосвязь между нарушениями антиоксидантной защиты и нарушением микроэкологического равновесия в кишечном биоценозе

Впервые установлено, что при дисбактериозе кишечника более выражены нарушения в состоянии антиоксидантной защиты эпителиоидных клеток кишечника

Впервые показано, что увеличение содержания условно-патогенной микрофлоры сочетается с повышенным содержанием ТБК-продуктов в копрофильтратах, что может свидетельствовать о повышенной агрессивности местной среды и являться дополнительным диагностическим тестом

Экспериментально обоснованы пути коррекции дисбактериоза кишечника и нарушений антиоксидантной защиты организма кисломолочным продуктом «Наринэ»

Основные положения, выносимые на защиту

1 При экспериментальном дисбактериозе, обусловленном применением антибиотика широкого спектра действия - гентамицина, происходят изменения в составе микрофлоры кишечника, выражающиеся в изменении состава эшерихий и увеличении содержания условно-патогенных микроорганизмов, при умеренном снижении численности нормальных эубионтов

2 При экспериментальном дисбактериозе, обусловленном применением гентамицина, развивается дисбаланс всех звеньев АОЗ Выявляется связь между состоянием антиок-сидантной защиты макроорганизма, содержанием ТБК-активных продуктов в копро-фильтратах и характером микрофлоры в динамике дисбактериоза

3 Кисломолочный продукт функционального питания «Наринэ» можно расценивать как препарат профилактического действия Использование «Наринэ» одновременно с применением антибиотика предотвращает изменения состава микрофлоры, способствует стабилизации окислительно-восстановительного гомеостаза макроорганизма

Теоретическая и практическая значимость. В теоретическом плане работа расширяет представления о механизмах развития дисбактериоза, обусловленного применением антибиотика широкого спектра действия Работа выполнена в рамках договора № 034/201/003 (2001-2005г г ) в соответствии с планом научно-исследовательских работ Рост НИИМП по теме «Отношение паразит-хозяин в биотопах кишечника при лекарственном дисбактериозе» Материалы диссертационной работы представлены в медицинской технологии «Технология диагностики местных метаболических и иммунологических нарушений при дисбактериозе», утвержденной Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (2006) Полученные результаты позволили обосновать новые подходы к диагностике и профилактике дисбактериоза кишечника и использованы в аналитическом обзоре «Новые подходы к коррекции и профилактике дисбактерио-зов» (2004), получившем положительную оценку Департамента организации медицинской помощи населению и профилактики неинфекционных заболеваний Минздрава России и рекомендованном для использования практическими врачами Результаты экспериментальной работы используются в лекционном курсе по дисбактериозу кишечника на факультете усовершенствования врачей в Рост ГМУ

Апробация работы Основные положения диссертационной работы доложены на Международной конференции «Пробиотики, пребиотики, симбиотики и функциональные продукты питания Современное состояние и перспективы» (Москва, 2004), 69-ой итоговой научной сессии КГМУ (Курск, 2004), 4-ой межвузовской международной биохимической научно-практической конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении»

Рост ГМУ (Ростов-на-Дону, 2005), Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 100-летию со дня основания филиала «Иммунопрепарат» ФГУП НПО «Микроген» МЗ и СР РФ (Уфа, 2005), 71-ой итоговой научной конференции сотрудников КГМУ и Центрально-Черноземного научного Центра РАМН (Курск, 2006), 1-ой научно-практической конференции по рациональному и лечебному питанию Южного Федерального Округа «Теоретические основы рационального и лечебного питания» Рост-ГМУ и МЗРО (Ростов-на-Дону, 2006)

Публикации По материалам диссертации опубликовано 8 научных публикаций, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК — 2, личный вклад 80%, 0,6 п л Получен патент на изобретение «Питательная среда для выделения лактобактерий» № 2202609 от 20 04 2003 г

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 153 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, заключения, выводов и списка литературы Список литературы включает 171 отечественных и 37 зарубежных источников Работа иллюстрирована 23 таблицами и 10 рисунками

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы, объем и методы исследования Модель экспериментального лекарственного дисбактериоза (Кашкин К П , Караев 3 О , 1984) воспроизводили на белых беспородных мышах, полученных из питомника ФГУН «РостовНИИМП» Роспотребнадзора В работе были задействованы половозрелые особи (самцы) весом 16-18 г в количестве 400 штук

Проведено 4 серии экспериментов в осенний и весенний периоды, что обусловлено высокой чувствительностью организма мышей к сезонным колебаниям В работе исследовали полостную и мукозную микрофлору кишечника, эритроциты, плазму, колоноциты и копрофильтраты мышей

Все исследования проводили в динамике лекарственного дисбактериоза на 3, 10, 17, 24,30 сутки после окончания введения антибиотика

Биологические методы. Для воспроизведения экспериментального дисбактериоза мышам вводили в терапевтической дозе (в объеме 0,2 мл) внутрибрюшинно антибиотик широкого спектра действия (гентамицин) в течение 5 дней

Эритроциты получали из крови, стабилизированной гепарином (10 ед/мл), отделяя от лейкоцитов и тромбоцитов в 3% желатиновом растворе с последующим центрифугированием (при 320 g в течение 15 мин) После отделения плазмы и верхнего слоя клеток,

эритроциты отмывали физиологическим раствором Для определения активности ферментов использовали 20% гемолизат, приготовленный на бидистиллированной воде

Колоноциты выделяли из участка толстого кишечника (длиной 5 см), который трижды промывали стерильньм физиологическим раствором Выделенные с внутренней поверхности кишечника колоноциты вносили в фосфатно-буферный раствор (рН=7,2), подсчитывали в камере Горяева и доводили их концентрацию до 1><106/мл Все дальнейшие расчеты производили в пересчете на мг белка

Копрофильтраты готовили в соответствии с методическими рекомендациями «Применение сигнального способа диагностики острой дизентерии по определению количества лизоцима в копрофильтратах» (Оренбург, 1979)

Микробиологические методы. Состав полостной микрофлоры кишечника изучали в соответствии с методическими рекомендациями «Бактериологическая диагностика дис-бактериоза кишечника» (Москва, 1991) Подсчет кочоний микроорганизмов производили в натуральных числах, умноженных на 10 в степени, равной разведению бактериологического материала, с последующим традиционно принятым выражением их через десятичный логарифм

Для исследования состава мукозной микрофлоры лоскут кишечника длиной 5-6 см трижды промывали фосфатно-буферным раствором (рН=7,2) Гомогенизированный в ступке с кварцевым песком отрезок кишечника переноси пи в стерильный физиологический раствор (рН=7,2) Характер микрофлоры определяли по той же методике (Москва, 1991)

Выделенные чистые культуры идентифицировали по морфологическим, тинктори-альным, биохимическим, культуральным свойствам в соответствии с рекомендациями «Краткий определитель бактерий Берги» (1980)

Биохимические методы Состояние системы АОЗ эритроцитов, колоноцитов и ко-профильтратов экспериментальных животных оценивали по активности ферментов различных линий защиты

Активность супероксиддисмутазы (СОД) определяли по методу М^га Н Р и Рпёо-У1сЬ I (1972) в модификации кафедры общей и клинической биохимии №1 Ростовского государственного медицинского университета (Саркисян О Г , 2000) Метод основан на определении степени ингибирования восстановления нитросинего тетразолия (НСТ) в присутствии супероксидного анион-радикала, генерируемого в реакции окисления адреналина в адренохром в щелочной среде Активность фермента эритроцитов выражали в уел ед /г НЬ/час, колоноцитов - в уел ед /мг белка/час

Активность каталазы определяли по методу Королюк М А с соавт (1988), основанному на способности пероксида водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс, интенсивность которого определяли на ФЭК при длине волны 410 нм Активность фермента эритроцитов выражали в мКатал/г НЬ/час, колоноцитов - в мКа-тал/мг белка/час

Содержание восстановленного глутатиона (ОЭН) определяли по методу, предложенному ЕИшап О Ь (1959), основанном на реакции 5,5-дитиобис(2-нитробензойной) кислоты с восстановленным глутатионом, в результате которой образуется окрашенное соединение с максимумом поглощения при длине волны 412 нм Концентрацию восстановленного глутатиона в эритроцитах выражали в мкмоль/г НЬ, в колоноцитах — в мкмоль/мг белка

Активность глутатионпероксидазы (ГПО) определяли по скорости окисления восстановленного глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила по методу Моина ВМ (1986) Определение проводили при 37° С Инкубационная среда включала 0,1 М трис-НС1 буфер (рН=8,5), 5,2 ммоль этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) (для связывания ионов переменной валентности, ускоряющих разложение трет-бутила), 10,4 ммоль азида натрия (ингибитор каталазы), 4,2 ммоль восстановленного глутатиона и 1,4 ммоль гидроперекиси трет-бутила. Использование гидроперекиси трет-бутила в качестве субстрата позволяет определять глутатионпероксидазную активность, включающую липопе-роксидазную активность глутатион-8-трансфераз (Ланкин В В , 1981) Реакцию останавливали добавлением 10 % раствора ТХУ Концентрацию восстановленного глутатиона определяли спектрофотометрически при длине волны 412 нм до и после инкубации В основе развития цветной реакции лежит взаимодействие БН-группы глутатиона с 5,5-дитиобис (2-нитробензойной) кислотой с образованием окрашенного продукта - тионит-рофенильного аниона (Торчинский ЮМ, 1976, Торчинский ЮМ, 1977) Активность фермента эритроцитов выражали в мкмоль/г НЬ/час, колоноцитов - в мкмоль/мг белка/час

Активность глутатионредуктазы (ГР) определяли по скорости окисления НАДФН+Н методом Юсуповой Л Б (1989) Инкубационная среда состояла из 0,04 М Ыа,К - фосфатного буфера, 0,05 М КС1, 4 мМ ЭДТА, 0,3 мМ окисленного глутатиона и 0,08 мМ НАДФН+Н Реакцию проводили при 37 в течение 10 минут и регистрировали уменьшение поглощения НАДФН+Н при 340 нм Активность фермента эритроцитов выражали в мкмоль/г НЬ/мин, колоноцитов - в мкмоль/мг белка/мин

В плазме крови, колоноцитах и копрофильтратах мышей определяли ТБК-активные продукты по концентрации вторичного перекисного метаболита - малонового диальдегида

(МДА), как показателя свидетельствующего о возможном повреждении клеточных мембран

Метод определения содержания МДА основан на том, что при нагревании в кислой среде, часть продуктов ПОЛ, относящихся к классу эндоперекисей, разлагаются с образованием МДА, молекула которого взаимодействует с 2 молекулами тиобарбитуровой кислоты (ТБК) с образованием окрашенного триметинового комплекса (Стальная И Д, Га-ришвили Т Г, 1977) Пробы фотометрировали при длине волны 535 нм Содержание МДА выражали в нмоль/мг белка

Содержание общего белка определяли по методу Ьо\\ту С с соавторами (1953) Метод основан на образовании комплекса, который дает характерную синюю окраску, пропорциональную количеству белка Интенсивность окраски измеряли на ФЭК при длине волны 750 нм Результаты выражали в мг/мл гомогената

Содержание гемоглобина (НЬ) определяли по методу, описанному Лугановой И С , Блиновым М Н (1975), при длине волны 540 нм на ФЭК в аммиачном растворе, концентрацию НЬ выражали в г/л

Статистические методы Статистическую обработку данных проводили с помощью компьютерной программы БТАТКТЮА Достоверность различий между исследуемыми группами определяли с помощью (-критерия Стьюдента после проверки распределения на нормальность Статистически достоверными считали отличия, соответствующие величине ошибки Р<0,05

В разделе автореферата «Результаты исследования и их обсуждение» приводятся только статистически достоверные отличия

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение характера полостной микрофлоры кишечника экспериментальных животных, получавших гентамицин, позволило установить, что его применение приводит к существенным изменениям в составе кишечного микробиоценоза При этом изменяется количество и частота обнаружения представителей как облигатной, так и транзиторной микрофлоры Несмотря на то, что бифидо- и лактобактерии обнаруживаются в составе микрофлоры кишечника у всех экспериментальных животных (частота распространения -100%), их количество умеренно снижается - бифидобактерий до ^ 7,5+0,3 против ^ 8,5+0,5 в контроле, лактобактерий - ^ 6,8+0,1 против ^ 7,2+0,6 в контроле Более существенные изменения отмечены в популяции эшерихий Одновременно с уменьшением общего количества эшерихий отмечается уменьшение частоты обнаружения эшерихий с нормальной ферментативной активностью (до 50,0+6,1 %), увеличение содержания эшерихий

со сниженной ферментативной активностью (lg 7,2+0,2 против lg 3,0+0,5 у интактных животных)

Среди транзиторной микрофлоры так же происходят выраженные изменения увеличивается частота обнаружения (с 80,0+2,6 % до 100 %) и количество лактозонегативных энтеробактерий (Ig 4,9+0,1 против lg 3,3+0,1), бактерий рода Proteus (частота находок с 40,0+7,7 % до 90,0+1,3 %, количество lg 4,1+0,5 против 0,8+0,2 в контроле), грибов рода Candida (частота обнаружения до 50,0+6,1 %, количество - lg 3,3+0,2 против lg 1,4+0,1 в контроле) Значительно изменяется состав кокковой флоры возрастает численность коа-гулазоотрицательных стафилококков (до lg 4,7+0,3 против lg 3,5+0,5), увеличивается частота обнаружения и количество золотистых стафилококков (80,0+2,6 % против 0, lg 4,3±0,1 против 0)

Исследование изменений состава кишечной микрофлоры животных в динамике экспериментального дисбактериоза показало, что нарушения в микробиоценозе регистрируются уже на третьи сутки после окончания введения антибиотического препарата, нарастают к десятым-семнадцатым суткам наблюдения и по ряду показателей не достигают значений контрольной группы к тридцатым суткам исследования Так, уже на третьи сутки наблюдения отмечается умеренное снижение количества бифидо-и лактобактерий, эшерихий с нормальной ферментативной активностью, увеличение содержания эшерихий со сниженной ферментативной активностью, лактозонегативных энтеробактерий, коагула-зоотрицательных и золотистых стафилококков, бактерий рода Proteus К десятому дню после отмены антибиотического препарата эти изменения приобретают более выраженный характер количество бифидо- и лактобактерий становится на порядок ниже, по сравнению с группой интактных животных, значительно уменьшается содержание эшерихий с нормальной ферментативной активностью, максимально высоких значений достигает количество лактозонегативных энтеробактерий, увеличивается содержание в составе микрофлоры кишечника популяции дрожжеподобных грибов рода Candida Эти изменения сохраняются и на семнадцатые сутки наблюдения, обнаруживая некоторую тенденцию к повышению содержания нормальных эубионтов Несколько иная зависимость выявляется среди представителей транзиторной условно-патогенной микрофлоры если количество лактозонегативных энтеробактерий в составе кишечного биоценоза уменьшается (с lg 5,8+0,4 - на десятый день наблюдения до lg 4,0+0,7 - на семнадцатый день), то количество золотистых стафилококков продолжает возрастать (до lg 5,3+0,4 против нулевых значений в контроле) В дальнейшие сроки наблюдения (двадцать четвертый и тридцатый дни после отмены антибиотика) тенденция увеличения содержания в составе микрофлоры кишечника количества нормальных эубионтов стойко сохраняется Однако если содержание лак-

тобактерий к концу срока наблюдения достигает показателей контрольных животных, то количество бифидобактерий в кишечной микрофлоре животных, получавших антибиотик, остается еще несколько сниженным (lg 7,7+0,3 против lg 8,5+0,5 в контроле) В составе кишечной микрофлоры экспериментальных животных регистрируется высокая численность золотистых стафилококков (lg 4,1+0,2), протеев (lg 3,1+0,1), грибов рода Candida (lg 4,0+0,2)

Так как состояние мукозной микрофлоры кишечника в большей степени отражает особенности местных условий среды кишечного биотопа (Несвижский ЮВ,2003), было проведено исследование состава мукозной микрофлоры в динамике экспериментального дисбактериоза Сопоставление количественного состава мукозной и полостной микрофлоры не выявило различий в спектре выделяемых микроорганизмов В составе как полостной, так и мукозной микрофлоры интактных животных присутствовали бифидо- и лакто-бактерии, эшерихии с нормальной и сниженной ферментативной активностью, энтерококки, коагулазоотрицательные стафилококки Однако бифидобактерии в составе мукозной флоры определялись в большем, чем в полостной флоре, количестве (lg 9,2+0,6 против lg 8,5+0,5) В несколько меньшем количестве, чем в полостной микрофлоре, в составе мукозной содержались лактобактерии (lg 6,0+0,3 против lg 7,2+0,6), эшерихии с нормальной ферментативной активностью (lg 4,2+0,3 против lg 6,4+0,3), эшерихии со сниженной ферментативной активностью (lg 2,0+0,1 против lg 3,0+0,5) и лактозонегативные энтеробакте-рии (lg 2,3+0,1 против lg 3,3+0,1) Гемолитические эшерихии, протеи, золотистые стафилококки и грибы рода Candida в составе мукозной микрофлоры интактных животных отсутствовали

При развитии экспериментального дисбактериоза изменения состава мукозной микрофлоры в целом соответствовали изменениям, отмечаемым в полостной микрофлоре кишечника Однако снижение содержания бифидобактерий было отмечено в более выраженной степени (lg 5,6+0,3 против !g 9,2+0,6 у интактных животных) В составе мукозной микрофлоры так же, как в составе полостной, уменьшилась численность эшерихий с нормальной ферментативной активностью, статистически достоверно выросло количество и частота обнаружения эшерихий со сниженной ферментативной активностью, лактозонега-тивных энтеробактерий, протеев, грибов рода Candida, золотистых стафилококков

До настоящего времени конкретные механизмы дисбаланса кишечной микрофлоры под влиянием различных по своей природе факторов риска остаются до конца не выясненными Типичной реакцией целостного организма на различные воздействия является стрессовый адаптационный синдром, при котором формируются изменения кишечного микробиоценоза Дополнительньм фактором, способствующим изменению количества

облигатной микрофлоры, является продукция токсических метаболитов кислорода как следствие активации гексозомонофосфачного шунта (Дубинин A.B., Бабин В.И., Раевский П.М., 1991; Ардатская М.Д., Минушкин O.i£.. Прихпо H.H. Дубинин A.B., 2000; Захарченко М.П., Гриневич В.Б,, Добрынин В.М, 2003; Захарченко М.П., Добрынин В.М., Захарченко М.М. с соавт., 2004; Ahmad M.S., Krishnan S.. Ramakrishna B.S. el al„ 2000). В связи с этим Целесообразным является изучение ключевой стрееслимитирующей, гомео-етатической системы макроорганизма - антиоксидантной системы в динамике Дисбйкте-риоза, обусловленного применением антибиотика широкого апектра действия. Поэтому следующим этапом исследования явилось изучение состояния антиоксидантной защиты эритроци тов и колоноцитов в динамике экспериментального дисбактериоза.

И _

Ä 500-

' I ■ ,'ib. ,. I .,. (др mt)

I ' ЕЗ Акта^чоси СОД □ О^лл^О-ПЬ ГШ> И AUiiüUscTbfft : :';у i. ■;■ ]

* - аосюмраосп, 1жиппе8 мшюмо loimwjw.i^o.o*

Рис. 1. Активность СОД, каталазы, Г110, ГР и количестве GSH в эритроцитах животных с экспериментальным яисбнктериозом.

Анализ результатов исследовании показал, что в процессе развития экспериментального дисбактериоза происходят существенные изменения активности ферментов антиоксидантной зашиты макроорганизма (Гие.1). Уже к третьему дню наблюдения отмечается снижение активности СОД в эритроцитах крови на 22,) %. по сравнению с животными контрольной группы. Начиная с десятого дня исследования активность СОД, постепенно увеличивается, достигая своих максимальных значений к двадцать четвертому дню. Несколько по иному изменяется активность катализы. Достоверное снижение ее активности прослеживается на третьи и семнадцатые сутки наблюдения, достигая своих минималъ-

ных значений к двадцать четвертому дню исследования Значительное снижение активности каталаэы при высокой активности СОД свидетельствует о резком дисбалансе в функционировании сопряженных ферментов, который может указывать на накопление перекиси водорода в эритроцитах, что, в свою очередь, может способствовать активации процессов перекисного окисления липидов

В динамике дисбактериоза происходят изменения и в состоянии глутатионового блока антиоксидантной системы эритроцитов Если на третьи сутки наблюдается достоверное снижение активности ГПО (на 11,7 %) и выраженное повышение активности ГР (на 25,9 %), то к десятым суткам метаболическая картина изменяется резко увеличивается активность ГР (на 69,6 %) и снижается содержание восстановленного глутатиона (на 19,5 %) относительно контрольных величин, что может указывать на интенсивное использование его восстановленных эквивалентов Максимальное повышение активности ГПО и ГР к семнадцатым суткам при количестве восстановленного глутатиона, соответствующем контрольным значениям, свидетельствует о напряженности глутатионзависимого блока и активации защитных механизмов, направленных на устранение токсических продуктов Эти данные также могут указывать на ведущую роль глутатионового звена в антиоксидантной защите эритроцитов при развитии экспериментального дисбактериоза

Многие исследователи полагают, что симбионтная микрофлора кишечника оказывает трофическое обеспечение слизистой оболочки кишечника и, в частности, ее эпителиального слоя (Шендеров Б А , 1998, Осипов Г А с соавт, 2001) Однако последствия разрушения этой экологической системы для организма в целом изучены недостаточно

Функциональная целостность макроорганизма (как симбиотической системы) определяется наличием интегративных регуляторных и трофических связей между организмом хозяина и его микрофлорой Именно колоноциты во многом, по-видимому, определяют «полноценность» этих связей и являются отражением развития дисбиоза кишечника, поэтому представилось необходимым исследовать состояние антиоксидантной защиты ко-лоноцитов

Результаты исследования показали, что нарушения АОЗ эпителиоидных клеток толстого кишечника при развитии дисбактериоза выражены сильнее, чем в эритроцитах, а изменения активности антиоксидантных ферментов колоноцитов носят несколько иной характер (Рис 2) Во все сроки исследования в колоноцитах отмечается достоверное снижение активности СОД относительно контрольных величин на фоне практически нормальных значений активности каталазы Лишь на 17-24 сутки происходит выраженное снижение активности обоих ферментов, что может свидетельствовать об интенсификации свободнорадикальных процессов

Н ХСОИфоль <Х>Д и ЕЗАкгиькость Г ПО & ! I, Колючее [ко- С-.ЧН

*- --¡:1ЧК Т ¡. ишказкш&й 01ЯОСИПГОДКО К9К1 [-■

Рис. 2, Активность СОД, каталазы, ГПО, ГР н кол ичество С811 б колоноцитнх жи-вотиых с эксперимент льны)« дисбат ер по з ом.

Со стороны глутатионзависимого блока автогендантной защиты колоноцитов в динамике дисбактериоза также наблюдаются изменении. В начальные' сроки развития дис-бактерио^ отмечается увеличение активности I ПО (па 51,9 %), но сравнению с контролем, при этом актлипоечъ ГР соответствует, а содержание восотанопленного глутатио-на ниже (на 26,0 %), чем у интактньи животных, что также может указывать на увеличение поступления перекисей липидов и интенсификацию ПОЛ вследствие снижения барьерной функции кишечного эпителия на фоне уже развивающихся изменений в микрофлоре. Поэтому изменения, определяемые и состоянии ештиоксидаитяой защиты тсолоиедитов в первые дни развития дисбактерярза, возможно, являются следствием действия антибиотика.

Характерной особенностью состояния г.чутатиотгового блока ЛОЗ колоноцитов к десятым суткам наблюдения является сохранение его напряженности, проявляющееся в увеличении (на 97,9 %) активности ГПО и содержания восстановленного глутатиона (на 25,1 %) относительно контрольного уровня. При этом активность ГР соответствует контрольным значениям, что сопряжено с максимальными ишетщШЩ в составе кишечной ыт-рофлоры. Напряженность глутатионзаииеимого блока сменяется истощением его адаптивно -комиси"еаторпых возможностей, отмечаемым па семнадцатый день исследования. Максимально снижается активность глутати о зависимых ферментов. Однако ведущим пата-

генетическим фактором в колоноцитах в этот срок наблюдения является пул восстановленного глутатиона, содержание которого более чем в 2 раза превышает соответствующие показатели у интактных животных

Таким образом, нарушение координированной работы ферментов антиоксидантной защиты колоноцитов может способствовать интенсификации свободнорадикального окисления и являться ответной реакцией организма на развитие дисбактериоза Следует отметить, что, хотя в этот период (с 17 по 24 сутки) наблюдается тенденция восстановления численности отдельных видов эубионтов (эшерихий с нормальной ферментативной активностью), в биоценозе кишечника сохраняются явления дисбактериоза, сопровождающиеся ростом числа золотистых стафилококков и грибов рода Candida, что сопряжено с нарушением работы ферментов первой линии антиоксидантной защиты колоноцитов Обращает на себя внимание синхронное снижение (по отношению к контролю) активности СОД и каталазы Особенно следует подчеркнуть сниженное (в 2,3 раза) относительно контроля содержание восстановленного глутатиона, что может быть связано с его интенсивным использованием глутатионпероксидазой, активность которой превышает в 2,39 раза контрольные показатели, при активности ГР практически соответствующей норме Таким образом, к тридцатым суткам эксперимента, в колоноцитах наблюдается усиленное функционирование глутатионзависимого блока АОЗ при депрессии линии СОД - катала-за На этом фоне в микрофлоре кишечника общая численность условно-патогенных микроорганизмов по-прежнему остается значительной

Высокое содержание условно-патогенных микроорганизмов, определяемое в кишечном биотопе на протяжении всего срока исследования, позволило сделать предположение о высоком содержании в местной среде их существования (в колоноцитах и копрофильт-ратах) ТБК-активного продукта - малонового диальдегида (МДА), что может являться косвенным свидетельством повреждения клеточных мембран По мнению некоторых исследователей (Гончарова Г И , Дорофейчук В Г, Смолянская A3 и др, 1989, Самойлова ЛМ, Князькова Л Г, Яснова ЛН и др, 2001), увеличение содержания условно-патогенных микроорганизмов в ассоциациях может приводить к накоплению токсических продуктов их метаболизма Повышенный уровень этих продуктов, в свою очередь, способен интенсифицировать продукцию активных форм кислорода, являющихся также токсичными для окружающих клеток, и активизируя свободнорадикальное окисление, нарушать целостность биологических мембран, что отражается на антиоксидантном статусе макроорганизма и нарушает гомеостаз Существующее мнение, а также установленные нами в динамике экспериментального дисбактериоза изменения в активности антиокси-дантных ферментов, косвенно свидетельствующие о возможной активации процессов

ПОЛ, послужили основанием для опредечения содержания ТБК-активных продуктов (МДА) в плазме крови, колоноцитах и копрофильтратах экспериментальных животных

Анализ полученных результатов показал, что во все сроки наблюдения в течение экспериментального дисбактериоза отмечается повышенное содержание МДА во всех изучаемых объектах Более высокое, относительно контроля, содержание МДА регистрируется в копрофильтратах, превосходя его значения на третьи сутки в 2 раза, на десятые сутки - в 4 раза, на семнадцатые сутки - более чем в 7 раз, на двадцать четвертые сутки -в 4,6 раза, на тридцатые сутки - в 4,3 раза Однако, если увеличение количества МДА в копрофильтратах и плазме отмечается уже в первые дни наблюдения (на 100 % и 66,6 %, соответственно), то в колоноцитах достоверное повышение уровня МДА выявляется лишь к десятому дню исследования и составляет 63,2 %, а с семнадцатого дня наблюдения рост количества МДА в колоноцитах превосходит его увеличение в плазме (271 % в колоноцитах против 122,2 % в плазме) Такое соотношение вечичин наблюдается и в последующие сроки исследования С двадцать четвертого дня наблюдения происходит уменьшение количества МДА во всех исследуемых объектах, однако даже к концу наблюдения (30 сутки) содержание МДА в копрофильтратах, колоноцитах и плазме достоверно превосходит данные контрольной группы животных (на 335 %, 242 %, 78 %, соответственно)

Обращает на себя внимание тот факт, что наиболее высокий уровень МДА в колоноцитах и копрофильтратах экспериментальных животных приходится на 10-17 сутки - срок наиболее высокого содержания условно-патогенных микроорганизмов в микрофлоре толстого кишечника Зафиксированные высокие значения МДА в копрофильтратах и колоноцитах экспериментальных животных могут свидетельствовать о возможном риске повреждения клеточных мембран, а так же подтверждают значительные изменения в АОЗ в зоне формирования дисбактериоза

Выявленные нами в динамике экспериментального дисбактериоза изменения в состоянии прооксидантной и антиоксидантной системы макроорганизма позволяют думать о том, что использование для коррекции дисбактериоза только пробиотических препаратов недостаточно Рациональным дополнением могут явиться продукты функционального питания, содержащие витамины и органические кислоты, необходимые для нормального состава и функционирования микрофлоры Наш выбор был остановлен на кисломолочном продукте функционального питания «Наринэ», содержащем живой штамм ацидофильных лактобактерий — Lactobactenum acidophilus ЕР 317/402 Данный штамм обладает выраженной антагонистической активностью по отношению к условно-патогенным микроорганизмам, а высокая устойчивость к антибиотикам и химиотерапевтическим средствам позволяет его использовать одновременно с этими препаратами (Костюк О П, Чернышева

Л И , Волоха А П , 1998, Гукасян Г Б и др , 2002) По данным нашего исследования (Га-пон М Н , Терновская JI Н , Микашинович 3 И , Белоусова Е С , 2005), кисломолочный продукт «Наринэ» содержит ключевые антиоксидантные ферменты - СОД и каталазу (псевдокаталазу), что позволяет предполагать, что его использование одновременно с антибиотиком сможет оказывать воздействие, как на состояние кишечной микрофлоры, так и на состояние антиоксидантной защиты макроорганизма

В связи с этим следующим этапом исследования стало изучение влияния одновременного использования с гентамицином кисломолочного продукта «Наринэ» на состояние микрофлоры кишечника и на некоторые показатели антиоксидантной защиты эритроцитов и колоноцитов в динамике экспериментального дисбактериоза

Проведенное исследование показало, что совместное использование кисломолочного продукта «Наринэ» с антибиотиком способствует сохранению нормального состава микрофлоры кишечника У животных, получавших наряду с антибиотиком кисломолочный продукт «Наринэ», количество бифидо- и лактобактерий не оттичалось от их числа у ин-тактных животных (lg 8,5+0,5 и lg 7,2+0,6 соответственно), сохранялась численность эше-рихий с нормальной ферментативной активностью (lg 6,4+0,3), а количество эшерихий со сниженной ферментативной активностью было значительно меньше (lg 1,88+0,08), чем у животных с экспериментальным дисбактериозом (lg 7,2+0,2) и животных контрольной группы (lg 3,0+0,5) В меньшей степени, чем у животных с экспериментальным дисбактериозом, увеличивалось содержание лактозонегативных энтеробактерий (lg 4,14+0,38 против lg 4,9+0,1), коагулазоотрицательных стафилококков (lg 1,96+0,2 против lg 4,7+0,3), грибов рода Candida (lg 1,18+0,24 против lg 3,3+0,2) В составе кишечной микрофлоры животных, получавших кисломолочный продукт «Наринэ», в течение всего срока наблюдения совсем отсутствовали золотистые стафитококки и бактерии рода Proteus

Оценка состояния антиоксидантной защиты эритроцитов животных, получавших одновременно с антибиотиком кисломолочный продукт «Наринэ» и животных с экспериментальным дисбактериозом, показала, что при использовании данного продукта, во все сроки исследования повышается активность изучаемых ферментов и содержание восстановленного глутатиона Уже с первых дней набчюдения определяется повышенная активность каталазы, относительно соответствующего показателя животных с экспериментальным дисбактериозом, которая сохраняется до конца наблюдения Однако использование кисломолочного продукта не приводит антиоксидантную систему эритроцитов к физиологической норме Активация каталазы, отмечаемая во все сроки наблюдения у животных, получавших «Наринэ», приводит к выраженному дисбалансу в функционировании сопряженных ферментов (СОД и каталазы), который наиболее выражен на 17-24 сутки и со-

храняется до последнего дня наблюдения На протяжении всего срока исследования у животных, получавших «Наринэ», прослеживается активация глутатионзависимых ферментов (ГР, ГПО) и высокое содержание восстановленного глутатиона, относительно этих же показателей у животных с дисбактериозом

Несколько по-иному отразилось использование кисломолочного продукта «Наринэ» на состояние АОЗ колоноцитов На протяжении всего срока исследования (исключая 3 сутки) активность СОД определяется выше, а активность каталазы (исключая 17, 24 сутки) -ниже активности изучаемых показателей у животных с экспериментальным дисбактериозом Несмотря на низкую, относительно контрольного уровня, активность СОД и каталазы, в колоноцитах животных, получавших «Наринэ», функционирование этих ферментов (на 10,24, 30 сутки) более сбалансировано, чем у экспериментальных животных В работе глутатионзависимого блока антиоксидантной системы колоноцитов значительной коррекции не отмечается Однако состояние глутатионзависимых показателей на 10 и 30 сутки наблюдения в группе животных, получавших «Наринэ» более уравновешено и близко к физиологическому состоянию

Проведенные исследования показали, что использование кисломолочного продукта «Наринэ» способствует нормализации содержания ТБК-активных продуктов (МДА) как во внутренней среде кишечника (копрофильтратах), так и в плазме крови экспериментальных животных (Табл 1)

Таблица 1. Содержание МДА в плазме и в копрофильтратах экспериментальных и интактных животных в динамике экспериментального дисбактериоза.

Показатели Группы животных П-12 Сроки наблюдения (сутки)

3 10 17 24 30

Содержание МДА в плазме нмоль/мг белка Контроль 3,0+0,15 3,0+0,15 3,6+0 3 3,6+0,18 3,3+0,16

ЭД 5,0+0,25* РКО 05 5,7+0,28* РКО 05 8,0+0,4* РКО 05 6,8+0,25* РКО 05 5,9±0Д9* РКО 05

эд+н 3,0+0,05" Р1>0 1 Р2<0,05 3,1+0,03** Р1>0 1 Р2<0 05 4,0+0,35** Р1>0 1 Р2<0 05 3,6+0,08" Р1>0 1 Р2<0 05 3,2+0,2" Р1>0 1 Р2<0 05

Содержание МДА в копрофильтратах нмоль/мг белка Контроль 1,0+0,05 1,0+0,05 1,2+0,04 1,2+0,04 1,1 ±0,045

ЭД 2,0+0,1 * РКО 05 4,0+0,21* РКО 05 8,9+0,4* РКО 05 5,58+0,24* РКО 05 4,78+0,23* РКО 05

эд+н 1,0+0,08** Р1>0 1 Р2<0 05 1,02+0,15** Р1>0 1 Р2<0 05 1,31+0,03" Р1>0 1 Р2<0 05 1,21+0,06** Р1>0 1 Р2<0 05 1,05+0,05" Р1>0 1 Р2<0 05

Примечание Контроль - группа интактных животных ЭД - группа животных с экспериментальным дисбактериозом, ЭД+Н — группа животных получавших одновременно с антибиотиком кисломолочный продукт «Наринэ», * - достоверность отличий изучаемого показателя от аналогичного у интактных животных, РКО 05, ** - достоверность отличий изучаемого показателя от аналогичного у животных с экспериментальным дисбактериозом Р2<0 05

Таким образом, можно думать, что использование кисломолочного продукта «Нари-нэ» приводит к повышению адаптивно-компенсаторных возможностей макроорганизма при экспериментальном дисбактериозе, обусловленном применением гентамицина При этом корригирующий эффект «Наринэ» связан, по-видимому, не только с его антиокси-дантными свойствами Не исключено, что его эффективность обусловлена и наличием в нем, по данным литературных источников, органических кислот, присутствие которых необходимо для поддержания метаболизма колоноцитов (Дубинин А В , Бабин В Н , Раевский ПМ, 1991)

В целом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о значительных изменениях в состоянии антиоксидантпой зашиты эритроцитов и колоноцитов экспериментальных животных, что, возможно, является одной из причин возникновения микроэкологических нарушений при использовании антибиотика широкого спектра действия

ВЫВОДЫ

1 При экспериментальном дисбактериозе, обусловленном применением гентамицина, изменение состава кишечной микрофлоры характеризуется снижением содержания постоянных (резидентных) представителей микрофлоры (бифидо- и лактобактерий, в большей степени - эшерихий с нормальной ферментативной активностью), увеличением частоты обнаружения и численности эшерихий со сниженной ферментативной активностью, лактозонегативных энтеробактерий, протеев, золотистых стафилококков, грибов рода Candida

2 При экспериментальном дисбактериозе существенно изменяется ферментативная активность всех звеньев антиоксидантной защиты, как эритроцитов, так и эпителио-идных клеток толстого кишечника (колоноцитов) Наиболее значительные изменения активности антиоксидантных ферментов отмечаются в колоноцитах, что указывает на нарушение адаптационно-компенсаторных механизмов антиоксидантной защиты на местном уровне

3 Вьивлена выраженная зависимость изменения показателей антиоксидантной защиты от характера изменений микрофлоры кишечника максимальные изменения в активности ферментов АОЗ макроорганизма (на 17 сутки) соответствуют максимальному содержанию в составе кишечной микрофлоры золотистых стафилококков

4 На протяжении всего срока развития дисбактериоза, обусловленного применением гентамицина, в плазме крови, колоноцитах и копрофильтратах экспериментальных животных обнаружено высокое содержание ТБК-активных продуктов (МДА) с более высоким их уровнем в копрофильтратах Максимальные концентрации МДА в плазме, колоно-

цитах и копрофильтратах (на 17 сутки) соответствуют более высокому содержанию в кишечном биоценозе условно-патогенных микроорганизмов (золотистых стафилококков, грибов рода Candida) и низким значениям активности антиоксидантных ферментов коло-ноцитов супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы

5 Использование кисломолочного продукта «Наринэ» одновременно с антибиотиком предотвращает развитие выраженных дисбиотических изменений, способствует повышению активности антиоксидантных ферментов и содержания восстановленного глута-тиона в эритроцитах, нормализует содержание ТБК-активных продуктов в плазме и копрофильтратах Однако для полного восстановления функциональной активности АОС колоноцитов использования данного продукта недостаточно

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации в изданиях, рекомендованных ВАК

1 Гапон М Н , Терновская J1 Н , Микашинович 3 И , Белоусова ЕС// Экспериментальное обоснование использования штамма Lactobactenum acidophilus ЕР 317/402 для профилактики дисбактериоза при антибиотикотерапии // Журн Известия ВУЗов, Северокавказский регион - 2005 - № 11 (приложение) - С 104-107 - 0,16 п л - личный вклад 50%

2 Терновская Л Н, Алешукина А В , Голошва Е В , Черкашина Н Е , Калинина Т Э , Гапон М Н Патент на изобретение «Питательная среда для выделения лактобактерий» № 2202609 от 20 04 2003 г - личный вклад 7,7%

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации.

1 Гапон М Н , Терновская Л Н , Алешукина А В Влияние кисломолочного продукта «Наринэ» на состав микрофлоры кишечника в динамике экспериментального лекарственного дисбактериоза // Материалы Международной конференции «Пробиотики, пребиоти-ки, симбиотики и функциональные продукты питания Современное состояние и перспективы» - Москва, 2004 - С 45-46 - 0,08 п л - личный вклад 60%

2 Гапон М Н , Микашинович 3 И , Саркисян О Г Показатели антиоксидантной защиты при экспериментальном лекарственном дисбактериозе // Сборник работ 69-ой итоговой научной сессии КГМУ -Курск, 2004 - С 81 -0,04пл - личный вклад 80%

3 Гапон М Н Перекисное окисление липидов и антиоксидантная активность организма при экспериментальном лекарственном дисбактериозе и его коррекции // Материалы 4-ой межвузовской Международной биохимической научно-практической конферен-

ции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» - Ростов-на-Дону, 2005 - С 49-50 -0,08 п л - личный вклад 100%

4 Гапон М Н Влияние молочнокислого продукта «Наринэ» на показатели антиокси-дантной защиты организма при экспериментальном лекарственном дисбактериозе // Материалы Всероссийской научной конференции с международным участием - Уфа, 2005 -42 -С 314-315 - 0,08 п л - личный вклад 100%

5 Гапон М Н , Белоусова Е С , Олемпиева ЕВ// Состояние глутатионзависимой системы организма при экспериментальном лекарственном дисбактериозе - Материалы итоговой научной конференции сотрудников КГМУ - Курск, 2006 - С 27 - 0,04 п л -личный вклад 80%

6 Гапон М Н , Белоусова Е С , Олемпиева Е В // О возможности профилактики лекарственного дисбактериоза кишечника пищевым продуктом - Материалы 1-ой научно-практической конференции ЮФО «Рациональное и лечебное питание» - Ростов-на-Дону, 2006 - С 116-118 - 0,12 п л - личный вклад 66,6%

Список сокращений.

АОЗ - антиоксидантная защита АОС - антиоксидантная система ГПО - глутатионпероксидаза ГР - глутатионредуктаза МДА - малоновый диальдегид ПОЛ - перекисиое окисление липидов СОД - супероксиддисмутаза ТБК - тиобарбитуровая кислота вБН - восстановленный глутатион

Отпечатано ООО «Офисный мир КМ», 344010, г Ростов-на-Дону, пр Театральный 123, стр 3, тел 264-51-35 Подписано в печать 21/09/07 Объем 1,2 п л Тираж 100 экз Заказ № 5

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гапон, Марина Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Нормальная микрофлора, как фактор гомеостаза макроорганизма.

1.2. Дисбактериоз кишечника: определение понятия, причины возникновения, диагностика, принципы коррекции.

1.3. Значение свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы в физиологических процессах макроорганизма и при некоторых заболеваниях органов пищеварения.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Постановка эксперимента.

2.2. Объекты и сроки исследований.

2.3. Методы исследований.

2.3.1. Биологические методы.

2.3.2. Микробиологические методы.

2.3.3. Биохимические методы.

2.3.4. Статистические методы.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 3. СОСТАВ МИКРОФЛОРЫ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА

ЖИВОТНЫХ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ДИСБАКТЕРИОЗЕ, ОБУСЛОВЛЕННОМ ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИБИОТИКА ШИРОКОГО

СПЕКТРА ДЕЙСТВИЯ.

ГЛАВА 4. ПОКАЗАТЕЛИ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ

ОРГАНИЗМА В ДИНАМИКЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ДИСБАКТЕРИОЗА, ОБУСЛОВЛЕННОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИБИОТИКА.

4.1. Показатели антиоксидантной защиты в эритроцитах животных при экспериментальном дисбактериозе кишечника.

4.2. Показатели антиоксидантной защиты в колоноцитах животных при экспериментальном дисбактериозе кишечника.

4.3. Содержание ТБК-активных продуктов в плазме крови, копрофильтратах и колоноцитах животных при экспериментальном дисбактериозе кишечника.

ГЛАВА 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА «НАРИНЭ» ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ДИСБАКТЕРИОЗЕ КИШЕЧНИКА.

5.1. Состав микрофлоры толстого кишечника животных в динамике экспериментального дисбактериоза при использовании кисломолочного продукта «Наринэ».

5.2. Показатели антиоксидантной защиты в эритроцитах и колоноцитах животных в динамике экспериментального дисбактериоза при использовании кисломолочного продукта «Наринэ».

5.3. Содержание ТБК-активных продуктов в плазме и копрофильтратах животных в динамике экспериментального дисбактериоза при использовании кисломолочного продукта «Наринэ».

Введение Диссертация по биологии, на тему "Показатели антиоксидантной защиты организма при экспериментальном дисбактериозе кишечника, обусловленном применением антибиотика широкого спектра действия"

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ Организм человека и населяющая его микрофлора представляют единую экологическую систему, находящуюся в состоянии динамического равновесия (Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., 1997; Шендеров Б.А., 1998, 1999; Gorbach S.L., 1986; Gorbach S.L. et al. 1988; Lloid D„ 1999). Достигнутые в последнее время успехи в изучении нормальной микрофлоры позволили сформулировать положение, что нормальная микрофлора организма человека является своеобразным экстракорпоральным органом «регулирующим биохимические реакции и физиологические функции макроорганизма в естественных условиях его обитания» (Воробьев А.А., Лыкова Е.А., 1999; Gibson G.R., Roberfroid М.В., 1999; Бондаренко В.М., Грачева Н.М., Мацулевич Т.В., 2003). Загрязнение окружающей среды, накопление в ней разнообразных по механизму действия ксенобиотиков, широкое применение антибиотических препаратов приводят к нарушению эволюционно сложившегося равновесия между организмом и населяющей его микрофлорой, к изменению эндоэкологического статуса, включая состав и функциональную активность микрофлоры (Куваева И.Б., 1976; Голошва Е.В., 2003, 2005; Захарченко М.П., Гриневич В.Б., 2003; Захарченко М.П. с соавт., 2004). Изменение качественно-количественного состава и функциональной активности микрофлоры, населяющей сообщающиеся с внешней средой полости организма человека, определяются понятием дисбактериоз (Красноголовец В.Н., 1989; Барановский А.Ю., Кондрашина Э.А., 2002). Дисбактериозы, особенно дисбактериоз кишечника, в последнее время стал широко распространенным состоянием и регистрируется практически у 65-90% населения (Шендеров Б.А., 1988; Воробьев А.А., 1995; Воробьев А.А., Лыкова Е.А., 1999; Куваева И.Б., Ладодо К.С., 1991). Опасность этого состояния заключается в том, что нарушения состава и функциональной активности микрофлоры провоцируют возникновение и развитие в организме человека многочисленных и разнообразных по проявлению патологических процессов, снижающих качество и продолжительность жизни населения (Билибин А.Ф., 1970; Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А., 1997; Haudberger Н., Nilsson L.F., 1996; Краснов В.В., 2003).

Достаточно полно освещены вопросы изменения характера микрофлоры при дисбактериозах разных отделов кишечника (Крамарь О.Г.,1984; Крамарь B.C., 1990; Коваленко А.Д. с соавт., 1991; Шендеров Б.А., 1998; Бондаренко В.М., Боев Б.В., Лыкова Е.А., Воробьев А.А., 1999; Коршунов В.М. с соавт., 1980, 1994, 1995, 1999), широко представлены работы о биологических свойствах условно-патогенной микрофлоры (Захарченко С.М., 2001; Леванова Л.А., Алешкин В.А., Воробьев А.А., 2002), предложены различные методы коррекции данного состояния (Горская Е.М., 1994, 1995; Боссарт В., Барзашка-Попова С.Н., 1990; Барзашка-Попова С.Н., 1990; Бондаренко В.М. с соавт., 1992, 1994; Златкина А.Р., 1999; Алешукина А.В., Патрушева Е.В., Голошва Е.В., 2000; Голошва Е.В., Алешукина А.В., Терновская Л.Н., 2000; Запруднов A.M., Мазанкова Л.Н., 2001; Гриневич В.Б., Захарченко М.М., 2003; Звягинцева Т.Д., Сергиенко Е.И., 2003; Хавкин А.И., 2004). Однако механизмы, приводящие к нарушению состава кишечной микрофлоры при действии на организм различных ксенобиотиков, в том числе и антибиотических препаратов до конца не ясны (Горская Е.М., 1994; Алиева Э.А., 2002). Остается неизвестным, нарушение состава микрофлоры является следствием или причиной изменений гомеостаза непосредственно в месте контакта микро- и макроорганизма (в эпителиоидных клетках кишечника) и организма в целом (Гуторова Л.Д.,1991; Ардатская М.Д. с соавт., 2001).

Известно, что одним из пусковых механизмов патологических состояний являются нарушения антиоксидантной защиты организма, которая регулирует уровень активных форм кислорода, которые при чрезмерной генерации являются повреждающими факторами (Белинский Б.Ф. с соавт.,

1992; Абрамченко В.В., 2001; Дубинина Е.Е., 2001; Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.В., 2001; Fridovich I., 1986). Однако в литературных источниках нет сведений о состоянии антиоксидантной защиты эпителиоидных клеток кишечника при таком широко распространенном состоянии, как дисбактериоз кишечника, обусловленный применением антибиотических препаратов.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящего исследования явилось определение состояния антиоксидантной защиты макроорганизма в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного применением антибиотика широкого спектра действия (гентамицина).

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать качественный и количественный состав микрофлоры кишечника в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного введением гентамицина.

2. Исследовать состояние антиоксидантной защиты крови и колоноцитов в динамике экспериментального дисбактериоза.

3. Установить связь между состоянием микрофлоры кишечника и состоянием антиоксидантной защиты эритроцитов и колоноцитов при экспериментальном дисбактериозе.

4. Изучить влияние продукта функционального питания «Наринэ» на состояние микрофлоры и на некоторые показатели антиоксидантной защиты эритроцитов, колоноцитов в динамике экспериментального дисбактериоза.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые установлена взаимосвязь между нарушениями антиоксидантной защиты и нарушением микроэкологического равновесия в кишечном биоценозе.

Впервые установлено, что при дисбактериозе кишечника более выражены нарушения в состоянии антиоксидантной защиты эпителиоидных клеток кишечника.

Экспериментально обоснованы пути коррекции дисбактериоза кишечника и нарушений антиоксидантной защиты организма кисломолочным продуктом «Наринэ».

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. При экспериментальном дисбактериозе, обусловленном применением антибиотика широкого спектра действия (гентамицина), происходят изменения в составе микрофлоры кишечника, выражающиеся в изменении состава эшерихий и увеличении содержания условно-патогенных микроорганизмов, при умеренном снижении численности нормальных эубионтов.

2. При экспериментальном дисбактериозе, обусловленном применением гентамицина, развивается дисбаланс всех звеньев АОЗ. Выявляется связь между состоянием антиоксидантной защиты макроорганизма, содержанием ТБК-активных продуктов в копрофильтратах и характером микрофлоры в динамике дисбактериоза.

3. Кисломолочный продукт функционального питания «Наринэ» можно расценивать как препарат профилактического действия. Использование «Наринэ» одновременно с применением антибиотика предотвращает выраженные изменения состава микрофлоры, способствует стабилизации окислительно-восстановительного гомеостаза макроорганизма.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

В теоретическом плане работа расширяет представления о механизмах развития дисбактериоза, обусловленного применением антибиотика широкого спектра действия. Работа выполнена в рамках договора № 034/201/003 (2001-2005 г.г.) в соответствии с планом научно-исследовательских работ Ростов НИИМП по теме «Отношение паразит-хозяин в биотопах кишечника при лекарственном дисбактериозе».

Материалы диссертационной работы представлены в медицинской технологии «Технология диагностики местных метаболических и иммунологических нарушений при дисбактериозе», утвержденной Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (2006).

Полученные результаты позволили обосновать новые подходы к диагностике и профилактике дисбактериоза кишечника и использованы в аналитическом обзоре «Новые подходы к коррекции и профилактике дисбактериозов» (2004), получившем положительную оценку Департамента организации медицинской помощи населению и профилактики неинфекционных заболеваний Минздрава России и рекомендованном для использования практическими врачами.

Результаты экспериментальной работы используются в лекционном курсе по дисбактериозу кишечника на факультете усовершенствования врачей в Ростовском-на-Дону государственном медицинском университете.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения диссертационной работы доложены на:

- Международной конференции «Пробиотики, пребиотики, симбиотики и функциональные продукты питания: Современное состояние и перспективы» (Москва, 2004);

- 69-ой итоговой научной сессии КГМУ (Курск, 2004);

4-ой межвузовской международной биохимической научно-практической конференции «Обмен веществ при адаптации и повреждении» Рост ГМУ (Ростов-на-Дону, 2005);

- Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 100-летию со дня основания филиала «Иммунопрепарат» ФГУП НПО «Микроген» МЗ и CP РФ (Уфа, 2005);

- 71-ой итоговой научной конференции сотрудников КГМУ и Центрально-Черноземного научного Центра РАМН (Курск, 2006);

- 1-ой научно-практической конференции по рациональному и лечебному питанию Южного Федерального Округа. Теоретические основы рационального и лечебного питания. Рост ГМУ и МЗРО (Ростов-на-Дону, 2006).

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертации опубликовано 8 научных публикаций, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК - 2. Получен патент на изобретение «Питательная среда для выделения лактобактерий» № 2202609 от 20.04.2003 г. и

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гапон, Марина Николаевна

ВЫВОДЫ

1. При экспериментальном дисбактериозе, обусловленном применением гентамицина, изменение состава кишечной микрофлоры характеризуется снижением содержания постоянных (резидентных) представителей микрофлоры (бифидо- и лактобактерий, в большей степени - эшерихий с нормальной ферментативной активностью), увеличением частоты обнаружения и численности эшерихий со сниженной ферментативной активностью, лактозонегативных энтеробактерий, протеев, золотистых стафилококков, грибов рода Candida.

2. При экспериментальном дисбактериозе существенно изменяется ферментативная активность всех звеньев антиоксидантной защиты, как эритроцитов, так и эпителиоидных клеток толстого кишечника (колоноцитов). Наиболее значительные изменения активности антиоксидантных ферментов отмечаются в колоноцитах, что указывает на нарушение адаптационно-компенсаторных механизмов антиоксидантной защиты на местном уровне.

3. Выявлена выраженная зависимость изменения активности показателей антиоксидантной защиты от характера изменений микрофлоры кишечника: максимальные изменения в активности ферментов АОЗ макроорганизма (на 17 сутки) соответствуют максимальному содержанию в составе кишечной микрофлоры золотистых стафилококков.

4. На протяжении всего срока развития дисбактериоза, обусловленного применением гентамицина, в плазме крови, колоноцитах и копрофильтратах экспериментальных животных обнаружено высокое содержание ТБК-активных продуктов (МДА), с более высоким их уровнем в копрофильтратах. Максимальные концентрации МДА в плазме, колоноцитах и копрофильтратах (на 17 сутки) соответствуют более высокому содержанию в кишечном биоценозе условно-патогенных микроорганизмов (золотистых стафилококков, грибов рода Candida) и низким значениям активности антиоксидантных ферментов колоноцитов: супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы.

5. Использование кисломолочного продукта «Наринэ» одновременно с антибиотиком предотвращает развитие выраженных дисбиотических изменений, способствует повышению активности антиоксидантных ферментов и содержания восстановленного глутатиона в эритроцитах, нормализует содержание ТБК-активных продуктов в плазме и копрофильтратах. Однако для полного восстановления функциональной активности АОС колоноцитов использования данного продукта недостаточно.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Организм человека и населяющая его микрофлора представляют собой единую высокоорганизованную, саморегулирующуюся эволюционно сложившуюся эндоэкологическую систему, где взаимодействие микрофлоры и макроорганизма, с их внутренними связями, обеспечивает поддержание гомеостаза и равновесия на метаболическом, клеточном и молекулярно-генетическом уровнях (Гриневич В.Б., Захарченко М.М., 2003). Участие микроорганизмов в обмене веществ, иммунной защите и других процессах, поддерживающих гомеостаз макроорганизма, позволило высказать предположение, что индигенная микрофлора представляет собой «метаболически и регуляторно весьма активный «дополнительный орган» человеческого организма» (Барановский А.Ю., Кондрашина Э.А., 2000; Шендеров Б.А., 1998). Взаимоотношения «хозяин-микрофлора» носят сложный характер и еще далеко не ясно, в каких формах они реализуются внутри эндоэкологической системы (Дубинин А.В. с соавт., 1991). Сбалансированность системы «хозяин-микрофлора» может нарушаться и при превышении интенсивности негативных внешних воздействий над пороговыми значениями адаптационной системы организма и при сдвигах в метаболической активности самой микрофлоры (Уголев A.M., 1985; Парфенов А.И., Осипов Г.А., Ручкина И.Н., 2003). Известно и то, что состав и функционирование нормальной микрофлоры того или иного биотопа во многом определяется состоянием среды их обитания (Бабин В.Н., Минушкин О.Н., Дубинин А.В. и др., 1998). Существенно влияют на качественный и количественный состав микрофлоры такие факторы как состав и количество слизи, разнообразие жидких и плотных структур, температура, поступление пищевых ресурсов, состояние барьерных тканей макроорганизма, локальная концентрация протонов (рН), факторы неспецифической резистентности, окислительно-восстановительный потенциал, концентрация кислорода и активность свободно-радикальных процессов (Захарченко М.П. и др., 2004).

Изменение этих параметров, независимо от причин их вызывающих, отражаются на составе и функционировании нормальной микрофлоры. Одной из самых распространенных причин вызывающих изменения этих параметров является воздействие ксенобиотиков (в частности антибиотиков). Существует мнение, что под действием ксенобиотиков, в первую очередь наступает повреждение микрофлоры кишечника, так как именно она в виде биопленки препятствует их проникновению в макроорганизм. Однако, по мнению Бабина В.Н. с соавторами (1998) « дисбактериоз есть не только нарушение видового состава и абсолютной численности популяций, но и более или менее значительные нарушения в системе хозяин-микрофлора ». Установление факта развития гипоксического состояния эпителиальных клеток кишечника, высказанное положение о способности колоноцитов продуцировать токсические формы кислорода, изменение физико-химических параметров контактной приэпителиальной зоны (Бабин В.Н., Минушкин О.Н., Дубинин А.В., и др., 1998) создают предпосылки для более детального исследования взаимоотношений «хозяин-микрофлора».

Учитывая, что развитие многих патологических состояний обусловлено нарушениями в антиоксидантной защите макроорганизма, целью нашего исследования стало выявление особенностей изменения микрофлоры толстого кишечника животных и состояния антиоксидантной защиты макроорганизма в динамике экспериментального дисбактериоза, обусловленного применением антибиотика широкого спектра действия.

Изучение характера полостной микрофлоры кишечника экспериментальных животных, получавших антибиотик широкого спектра действия (гентамицин), позволило установить, что применение антибиотического препарата приводит к существенным изменениям в составе кишечного микробиоценоза. При этом изменяется количество и частота обнаружения представителей как облигатной, так и транзиторной микрофлоры. Несмотря на то, что бифидо- и лактобактерии обнаруживаются в составе полостной микрофлоры кишечника у всех экспериментальных животных (частота распространения - 100%), их количество умеренно снижается - бифидобактерий до lg 7,5+0,3 против lg 8,5+0,5 в контроле, лактобактерий - lg 6,8+0,1 против lg 7,2+0,6 в контроле. Более существенные изменения отмечены в популяции эшерихий. Одновременно с уменьшением общего количества эшерихий отмечается уменьшение частоты обнаружения эшерихий с нормальной ферментативной активностью (до 50,0+6,1 %), увеличение содержания эшерихий со сниженной ферментативной активностью (lg 7,2+0,2 против lg 3,0+0,5 у интактных животных).

Среди транзиторной микрофлоры так же происходят выраженные изменения: увеличивается частота находок (с 80,0+2,6 % до 100 %) и количество лактозонегативных энтеробактерий (lg 5,7+0,1 против lg 3,3+0,1), бактерий рода Proteus (частота находок с 40,0+7,7 % до 90,0+1,3 %; количество lg 4,1+0,5 против 0,8+0,2 в контроле), грибов рода Candida (частота обнаружения до 50,0+6,1 %; количество lg 3,3+0,2 против lg 1,4+0,1 в контроле). Значительно изменяется состав кокковой флоры: возрастает численность коагулазоотрицательных стафилококков (до lg 4,7+0,3 против lg 3,5+0,5), увеличивается частота обнаружения и количество золотистых стафилококков (80,0+2,6 % против 0; lg 4,3+0,1 против 0).

Исследование изменений состава кишечной микрофлоры животных в динамике экспериментального дисбактериоза показало, что нарушения в микробиоценозе регистрируются уже на третьи сутки после окончания введения антибиотического препарата, нарастают к десятым-семнадцатым суткам наблюдения и по ряду показателей не достигают значений контрольной группы к тридцатым суткам исследования. Так, уже на третьи сутки наблюдения отмечается умеренное снижение количества бифидо- и лактобактерий, эшерихий с нормальной ферментативной активностью, увеличение содержания эшерихий со сниженной ферментативной активностью, лактозонегативных энтеробактерий, коагулазоотрицательных и золотистых стафилококков, бактерий рода Proteus. К десятому дню после отмены антибиотического препарата эти изменения приобретают более выраженный характер: количество бифидо- и лактобактерий становится на порядок ниже по сравнению с группой интактных животных, значительно уменьшается содержание эшерихий с нормальной ферментативной активностью, максимально высоких значений достигает количество лактозонегативных энтеробактерий, увеличивается и численность дрожжеподобных грибов рода Candida. Изменения в отношении индигенной микрофлоры сохраняются и на семнадцатые сутки наблюдения, обнаруживая некоторую тенденцию к повышению содержания нормальных эубионтов. Несколько иная зависимость выявляется среди представителей транзиторной условно-патогенной микрофлоры: если количество лактозонегативных энтеробактерий в составе кишечного биоценоза значительно уменьшается (с lg 5,8+0,4 на десятый день наблюдения до lg 4,0+0,7 на семнадцатый день), то количество золотистых стафилококков продолжает возрастать, достигая lg 5,3+0,4 на семнадцатые сутки против lg 4,0+0,2 на десятые сутки. В дальнейшие сроки наблюдения (двадцать четвертый и тридцатый дни после отмены антибиотического препарата) тенденция увеличения содержания в составе микрофлоры кишечника количества нормальных эубионтов стойко сохраняется, однако если содержание лактобактерий и эшерихий с нормальной ферментативной активностью к концу срока наблюдения достигает показателей контрольных животных, то количество бифидобактерий в кишечной микрофлоре животных, получавших антибиотик, остается еще низким (lg 7,7+0,3 против lg 8,5+0,5 в контроле). В этот же период в составе полостной микрофлоры экспериментальных животных регистрируется высокая численность золотистых стафилококков (lg 4,1+0,2), протеев (lg 3,1+0,1), грибов рода Candida (lg 4,0+0,2).

Так как состояние мукозной микрофлоры кишечника в большей степени отражает состояние местных условий среды кишечного биотопа (Несвижский Ю.В., 2003) было проведено исследование состава мукозной микрофлоры интактных и экспериментальных животных. Сопоставление количественного состава мукозной и полостной микрофлоры белых мышей не выявило различий в спектре выделяемых микроорганизмов. В составе как полостной, так и мукозной микрофлоры интактных животных присутствовали бифидо- и лактобактерии, эшерихии с нормальной и сниженной ферментативной активностью, энтерококки, коагулазоотрицательные стафилококки. Однако бифидобактерии в составе мукозной флоры определялись в большем, чем в полостной флоре, количестве (lg 9,2+0,6 против lg 8,5+0,5). В несколько меньшем количестве, чем в полостной микрофлоре, в составе мукозной содержались лактобактерии (lg 6,0+0,3 против lg 7,2+0,6), эшерихии с нормальной ферментативной активностью (lg 4,2+0,3 против lg 6,4+0,3), эшерихии со сниженной ферментативной активностью (lg 2,0+0,1 против lg 3,0+0,5) и лактозонегативные энтеробактерии (lg 2,3+0,1 против lg 3,3+0,1). Гемолитические эшерихии, протеи, золотистые стафилококки и грибы рода Candida в составе мукозной микрофлоры интактных животных отсутствовали.

При развитии экспериментального дисбактериоза изменения состава мукозной микрофлоры в целом соответствовали изменениям, отмечаемым в полостной микрофлоре кишечника. Однако снижение содержания бифидобактерий было отмечено в более выраженной степени, их количество при экспериментальном дисбактериозе соответствовало lg 5,6+0,3 против lg 9,2+0,6 у интактных животных. В составе мукозной микрофлоры так же как в составе полостной уменьшилась численность эшерихий с нормальной ферментативной активностью, статистически достоверно возросло количество и частота обнаружения эшерихий со сниженной ферментативной активностью, лактозонегативных энтеробактерий, протеев, грибов рода Candida, золотистых стафилококков.

До настоящего времени конкретные механизмы дисбаланса кишечной микрофлоры под влиянием различных по своей природе факторов риска, остаются до конца не выясненными. Типичной реакцией целостного организма на различные воздействия является стрессовый адаптационный синдром, при котором формируются изменения кишечного микробиоценоза. Дополнительным фактором, способствующим изменению количества облигатной микрофлоры, является продукция токсических метаболитов кислорода как следствие активации гексозомонофосфатного шунта (Дубинин А.В., Бабин В.Н., Раевский П.М., 1991; Ардатская М.Д., Минушкин О.Н., Прихно Н.И., Дубинин А.В., 2000; Захарченко М.П., Гриневич В.Б., Добрынин В.М., 2003; Захарченко М.П., Добрынин В.М., Захарченко М.М. с соавт., 2004; Ahmad M.S., Krishnan S., Ramakrishna B.S. et al., 2000). В связи с этим целесообразным является изучение ключевой стресслимитирующей, гомеостатической системы макроорганизма - антиоксидантной системы в динамике дисбактериоза, обусловленного применением антибиотика широкого спектра действия. Поэтому следующим этапом исследования явилось изучение состояния антиоксидантной защиты эритроцитов и колоноцитов в динамике экспериментального дисбактериоза.

Анализ результатов исследования показал, что в процессе развития экспериментального дисбактериоза происходят существенные изменения активности ферментов антиоксидантной защиты макроорганизма. Уже к третьему дню наблюдения отмечается снижение активности СОД в эритроцитах крови на 22,1 % (Р<0,05) по сравнению с животными контрольной группы. Начиная с десятого дня исследования активность СОД постепенно увеличивается, достигая своих максимальных значений к двадцать четвертому дню исследования. С несколько иной закономерностью изменяется активность каталазы. Достоверное снижение ее активности прослеживается на третьи, семнадцатые сутки наблюдения, достигая своих минимальных значений к двадцать четвертому дню исследования. Значительное снижение активности каталазы при высокой активности СОД свидетельствует о резком дисбалансе в функционировании сопряженных ферментов, который может указывать на накопление перекиси водорода в эритроцитах, что в свою очередь может способствовать активации процессов перекисного окисления липидов.

В динамике дисбактериоза происходят изменения и в состоянии глутатионового блока антиоксидантной системы эритроцитов. Если на третьи сутки наблюдения некоторое снижение активности ГПО (на 11,7 %, Р<0,05) и более выраженное повышение активности ГР (на 25,9 %, Р<0,05) можно расценивать как компенсаторный процесс, то к десятым суткам увеличение активности ГР (на 69,6 %, Р<0,05) и снижение содержания восстановленного глутатиона (на 19,5 %, Р<0,05) относительно контрольных величин может указывать на интенсивное использование его восстановленных эквивалентов. Максимальное повышение активности ГПО и ГР к семнадцатым суткам при количестве восстановленного глутатиона соответствующем контрольным значениям, может свидетельствовать о напряженности глутатионзависимого блока и истощении его адаптационно-компенсаторных механизмов.

Анализ активности основных ферментов антиоксидантной защиты эритроцитов экспериментальных животных в динамике дисбактериоза выявляет наличие напряженности антирадикальной защиты. Более выраженные изменения отмечаются на семнадцатый, двадцать четвертый день наблюдения. Определяемое в этот период значительное увеличение активности СОД на фоне снижения активности каталазы, по отношению к показателям интактных животных, на 17 сутки сопряжено с нормальным содержанием восстановленного глутатиона и несколько повышенной, относительно контроля, активностью ГПО, а на 24 сутки - со слегка сниженным содержанием восстановленного глутатиона и соответствующей контрольным значениям активностью ГПО. Повышенная относительно физиологического уровня активность ГР, определяемая на протяжении всего срока наблюдения в эритроцитах животных с экспериментальным дисбактериозом, при активности ГПО и количестве восстановленного глутатиона близких к контрольным значениям, могут свидетельствовать о ведущей роли глутатионового звена в антиоксидантной защите эритроцитов при развитии эксперименталього дисбактериоза.

Многие исследователи полагают, что симбионтная микрофлора кишечника оказывает трофическое обеспечение слизистой оболочки кишечника и, в частности, ее эпителиального слоя (Шендеров Б.А., 1998; Осипов Г.А. с соавт., 2001). Однако последствия разрушения этой экологической системы для организма в целом изучены недостаточно.

Функциональная целостность макроорганизма (как симбиотической системы) определяется наличием интегративных регуляторных и трофических связей между организмом хозяина и его микрофлорой. Именно колоноциты во многом, по-видимому, определяют «полноценность» этих связей и являются отражением развития дисбиоза кишечника, поэтому представилось необходимым исследовать состояние антиоксидантной защиты колоноцитов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гапон, Марина Николаевна, Ростов-на-Дону

1. Абрамченко В.В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. // СПб.: Издательство ДЕАН, 2001. - 400 с.

2. Алешукина А.В., Голошва Е.В. Колонизирующая способность лактобактерий, выделенных от людей с дисбактериозом кишечника. // Журн. Известия ВУЗов, Северо-Кавказский регион. 2003. - № 1. - С. 97 -99.

3. Алешукина А.В., Патрушева Е.В., Голошва Е.В. Симбионтная микрофлора желудочно-кишечного тракта человека. Дисбактериоз и его коррекция. Методические рекомендации. Ростов-на-Дону; Изд-во РГУ, -2000. - 22 с.

4. Алиева Э.А. Патогенетические механизмы заболеваний толстой кишки. // Педиатрия. 2002. - № 5. - С. 92.

5. Андреева Л.И., Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуратовой кислотой. // Лаб. дело. 1988. - № 11. - С. 19 - 20.

6. Ардатская М.Д. и др. Дисбактериоз кишечника современные аспекты изучения проблемы. Принципов диагностики и лечения (обзор). // Терапевт, архив. 2001. - 2. - С. 67 - 72.

7. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в бактериологических исследованиях. Л., 1962. - 250 с.

8. Бабин В.Н., Домарадский И.В., Дубинин А.В. Биохимические и молекулярные аспекты симбиоза человека и его микрофлоры // Росс, химический журнал. 2002. - Т. 38, № 6. - С. 66 - 78.

9. Бабин В.Н., Минушкин О.Н., Дубинин А.В. и др. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1998. - № 6. - С. 76 -82.

10. Байбанов В.И., Карих Т.Л., Борунаева Л.А. и др. Нормализация кишечной микрофлоры и общего состояния мышей линии JCR под влиянием концентрата бифидобактерий. // Антибиотики и химиотерапия. 1997. - Т. 42, №3.-С. 20-24.

11. Барановский А.Ю., Кондрашина Э.Ю. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника. СПб.: Питер, - 2002. - 224 с.

12. Барзашка-Попова С.Н. Коррекция микрофлоры и местного иммунитета при дисбактериозах с помощью лактобацилл: Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1990.-21 с.

13. Белобородова Н.В. О микрофлоре хозяина и ее участии в ответе на инфекцию // Антибиотики и химиотерапия. 1998. - Т. 43, № 9. - С. 44 -48.

14. Белинский Б.Ф., Фецич Т.Г., Тимочко М.Ф. Изменение перекисного окисления липидов антиоксидантной активности в сыворотке крови больных раком легких в процессе лечения. // Экспер. онкология. 1992. -№ 6. - С. 65 - 67.

15. Бельмер С.В., Гасилина Т.В. Рациональная терапия дисбактериоза кишечника у детей // Клиническая медицина. 1998. - № 10. - С. 35 - 38.

16. Билибин А.Ф. Дисбактериоз, аутоинфекция и их значение в патологии человека. // Клин, медицина. 1970. - № 2. - С. 34-37.

17. Билибин А.Ф. Проблемы дисбактериоза в клинике. // Тер. Архив. 1978. -№5.-С. 13-18.

18. Билибин А.Ф., Маркова А.Е., Двуреченская Г.С. Эндогенные инфекции и перспективы их лечения. // Тер. архив. 1975. - № 8. - С. 9 -18.

19. Бондаренко В.М., Бондаренко А.В. Пути совершенствования этиопатогенетической терапии дисбактериозов // Журн. микробиол. -1998.-№5.-С. 96-101.

20. Бондаренко В.М., Бондаренко А.В., Долженко J1.B. Идеи И.И. Мечникова и развитие современного естествознания. Харьков. - 1995. - С. 38 - 39.

21. Бондаренко В.М., Боев Б.В., Лыкова Е.А., Воробьев А.А. Дисбактериозы желудочно-кишечного тракта // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатопроктологии, колопроктологии. 1998. - Т. 8, № 1. - С. 66 - 70.

22. Бондаренко В.М., Горская Е.М. Новые подходы к моделированию, диагностика и лечение дисбактериозов // Медицинские аспекты микробной экологии. М., 1992. - Вып. 6. - С. 23 - 26.

23. Бондаренко В.М. Учайкин В.Ф., Мурашева О.А. и др. Дисбактериоз: современные возможности профилактики и лечения // М.: OA «Партнер», 1994. 22 с.

24. Бондаренко В.М., Грачева Н.М., Мацулевич Т.В. Дисбактериоз кишечника у взрослых. // М., 2003. 50 с.

25. Боссарт В., Барзашка-Попова С.Н. Изучение влияния препарата из лактобактерий «Солко» на выживаемость и микрофлору кишечника у облученных животных. // ЖМЭИ. 1990. - № 11. - С. 22 - 31.

26. Бурлакова Е.Б., Джалябова Н.И., Гвахарил В.О. и др. Влияние липидов мембран на активность ферментов. // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М., 1982. - С. 113 -140.

27. Бухарин О.В. Механизмы бактериальной персистенции // Персистенция бактерий / Под ред. О.В. Бухарина. Куйбышев, 1990. - С. 5 -14.

28. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М., 1999. - 360 с.

29. Валышев А.В., Зыкова J1.C., Коннова М.Е. Скрининговая диагностика дисбиоза кишечника. // Журн. микробиол. 1994, (приложение). - С. 71 -74.

30. Валышев А.В., Кирилов В.А., Кирилов Д.А., Бухарин. О.В. Влияние инулина на биологические свойства энтеробактерий.// Журн. микробиол. -2000.-№ 1.-С. 79-80.

31. Ван-дер-Ваай Д. Пищеварительный тракт как главный эндогенный источник бактерийных и гнойных инфекций. Важность поддержанияколонизационной резистентности. // Антибиотики и химиотерапия. -1992. № 6. - С. 36-41.

32. Васильева Т.У., Кухта В.Н. Содержание продуктов перекисного окисления липидов и состояние АОЗ системы эритроцитов в условиях охлаждения организма. // Вестн. АНБССР Сер. Биол. наук. 1983. - № 5. -С. 64 - 67.

33. Вилков Г.А., Лукаш И.А. Активность антиоксидантных ферментов в лимфоцитах при язвенной болезни. // В кн. «Материалы 4-го Всесоюзного съезда гастроэнтерологов. М.; Л. 1990, № 1- С. 174 - 175.

34. Владимиров Ю.А., Арганов А. И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Медицина, 1972. - 311 с.

35. Войчищина Л.Г., Чашинский В.Я., Въюницкая В.А. Применение спорообразующих бактерий в лечении больных дисбактериозом. // Врачебное дело. 1991. - № 12. - С. 73 - 75.

36. Воробьев А.А. Дисбактериозы актуальная проблема медицины. // Вестник РАМН. - 1997. - № 3. - С. 4 - 7.

37. Воробьев А.А. Изменение микрофлоры при различных заболеваниях. // Вестник РАМН. 1995. - № 5. - С. 59 - 63.

38. Воробьев А.А., Бондаренко В.М., Лыкова Е.А. и др. Микроэкологические нарушения при клинической патологии и их коррекция бифидосодержащими пробиотиками. // Вестник РАМН. 2004. - 2. - С. 13 -17.

39. Воробьев А.А., Иноземцев Л.О., Буданова Е.В. и др. Изменения микробиоценоза толстой кишки у больных различными заболеваниями // Вестник РАМН. 1995. - № 5. - С. 59 - 63.

40. Воробьев А.А., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной флоры: биологические свойства и защитные функции // Журн. микробиол. 1999. - № 6. - С. 102 -105.

41. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В., Липницкий Е.М., Аленов М.Н., Богданова Е.А., Корнев М.Л. Исследование пристеночной микрофлорыжелудочно-кишечного тракта человека в норме и при патологии. // Вестник РАМН. 2004. - 2. - С. 43 - 47.

42. Воробьев А.А., Несвижский Ю.В. Микрофлора человека: единство и противоположность. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии: Сб. научных трудов. М., 1997. - С. 137-141.

43. Воробьева Л.И. Микробиологический синтез витаминов. М.: МГУ, 1982. -117 с.

44. Гаврилов А.Ф. Бактерийные препараты в комплексном лечении больных острыми кишечными инфекциями: Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1989.-21 с.

45. Гаврилова Н.Н. Создание и производство новых пробиотиков на основе бактериальных культур: Автореф. дисс. докт. биол. наук. Алма-Ата, 1993.-46 с.

46. Гартье П. Ацидофильные бактерии кишечника грудных детей. СПб.: Практическая медицина, 1910. - 25 с.

47. Голошва Е.В. Изучение колонизационной резистентности кишечника при дисбактериозах, обусловленных антибиотиками широкого спектра действия: Автореф. дисс. канд. биол. наук. г. Ростов-на-Дону, 2005. - 21 с.

48. Голошва Е.В. Микроэкологические нарушения в составе нормальной кишечной микрофлоры кишечника у людей с лекарственным дисбактериозом. // Журн. Известия ВУЗов, Северо-Кавказский регион. -2003,-№2.-С. 87- 88.

49. Голошва Е.В., Алешукина А.В., Терновсакя JI.H. Антагонистическая и адгезивная активность лактобактерий, выделенных от людей с дисбактериозом кишечника. // Сб. «Актуальные вопросы биологии и медицины». Нальчик, 1999. - С. 34 - 36.

50. Голошва Е.В., Терновская JI.H., Алешукина А.В. Некоторые особенности состава микрофлоры кишечника при дисбиозах у взрослых людей. // Сб. «Актуальные вопросы биологии и медицины». Нальчик, 1999. - С. 36 -37.

51. Гончарова Г.И., Дорофейчук В.Г. Микробная экология кишечника в норме и патологии. // Антибиотики и химиотерапия. 1989. - № 4. - С. 462 -466.

52. Гончарова Г.И., Семенова Л.П., Ляная A.M. Бифидофлора человека, ее нормализующие и защитные функции. // Антибиотики. 1987. № 8 - С. 179- 183.

53. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции: Автореф. дисс. докт. мед. наук. М., 1994.-54 с.

54. Горская Е.М. Повышение неспецифической активности макроорганизма при пероральном применении эубиотиков из лактобацилл. // Иммунобиол. препараты. М., 1989. - С. 181 -185.

55. Горская Е.М. Протеолитическая активность содержимого толстой кишки в норме и при микроэкологических нарушениях. // Журн. микробиол. -1995.-№ 3-С. 116.

56. Готтшалк Г. Метаболизм бактерий. М.: Мир, 1982. - 310 с.

57. Гриневич В.Б., Захарченко М.М. Современные представления о значении кишечного микробиоценоза человека и способы коррекции его нарушений. // Новые СПб врачебные ведомости. 2003. - № 2 - С. 13-20.

58. Гриневич В.Б., Захарченко М.М. Современные представления о значении кишечного микробиоценоза человека и способы коррекции его нарушений. 4.2. Лечение дисбиоза кишечника. // Новые СПб. Врачебные ведомости. 2003. - С. 18 - 23.

59. Гукасян Г.Б и др. // Журн. микробиол., 2002. - № 5 - С. 63 - 65.

60. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. - М.: Изд-во МГУ, 1992. -448 с.

61. Гуторова Л.Д. Механизмы развития дисбактериоза при антибактериальной терапии. // Современные методы профилактики и лечения в практической медицине: Матер, годичн. конф. Тадж.

62. Госмединститута / Под ред. Д.З. Закиряходжаева. Душанбе, 1991. - С. 56 -57.

63. Далидович К.К., Мараховский Ю.Х., Шалинская О.В. и др. Состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы у больных хроническим гастродуоденитом и язв. болезнью.// Журн. Здравоохранение Белоруссии Минск, 1989. - 7 с.

64. Доморадский И.В. Некоторые проблемы адаптации патогенных бактерий в окружающей среде. // Журн. микробиол. 1997. - № 4. - С. 31 - 35.

65. Доморадский И.В. Роль токсинов в экологии бактерий. // Журн. микробиол. 1993.-№ 1.-С. 103 - 105.

66. Дубинин А.В., Бабин В.Н., Раевский П.М. Трофические регуляторные связи кишечной микрофлоры и макроорганизма. // Клин. мед. 1991. - № 7. - С.24 - 28.

67. Дубинина Е.Е. Окислительная и антиокислительная система крови в онтогенезе. // Вопросы мед. химии. 1984. - Т. 5, № 5 - С. 28-33.

68. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса. // Вопросы мед. химии. 2001. - Т. 47, № 6. - С. 561 - 581.

69. Журавлева Т.Д. и др. Возрастные особенности свободно радикального окисления липидов и антиоксидантной защиты в эритроцитах здоровых людей. // Клиническая лаб. диагностика. 2002. - № 8. - С. 17.

70. Запруднов A.M., Мазанкова JT.H. Микробная флора кишечника и пробиотики. М., 2001. - 31 с.

71. Захарченко С.М. Клиническая микробиология и антимикробная терапия. -2001. Т. 3 - № 1. - С. 79-80.

72. Звягинцева Т.Д., Сергиенко Е.И. Дисбактериоз кишечника клиническое значение и перспективы лечения. //Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2003. - 3. - С. 70 - 74.

73. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологические аспекты. М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. - 343 с.

74. Златкина А.Р. Современные подходы к коррекции дисбактериоза кишечника. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1999. - Т. 9, № 3. - С. 64 - 66.

75. Карасева В.Г. Кишечный дисбактериоз в патогенезе гастроэнтерологических заболеваний у детей и его коррекция: Дисс. канд. мед. наук. Горький, 1986. - 189 с.

76. Кашкин К.П., Караев 3.0. Иммунная реактивность организма и антибиотическая терапия. // Л.: Медицина, 1984. 200 с.

77. Князева Т.П. Угроза не вынашивания берменности и значение системы АОЗ в диагностике и профилактике: Автореф. дисс. канд. мед. наук -Барнаул, 1997. 25 с.

78. Коган А.Х., Погромов А.П. Активные формы кислорода, лейкоциты и патогенез гастродуоденальной язвенной болезни. // Учебное пособие. М.; 1991.

79. Кожевников Ю.Н. О перекисном окислении липидов в норме и патологии. // Вопросы мед. химии. 1985. - Т. 5, № 6. - С. 2 - 7.

80. Комаров Ф.И., Коган А.Х., Хуцишвили М.Б., Лаптева О.Н. Роль свободно радикальных процессов в патологии желудочно-кишечного тракта. // Росс, журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии . 1999. - № 9 (5).-С. 170.

81. Конев С.В., Волотовский И.Д. Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии.// М.: Наука, 1982. С. 37 - 50.

82. Коршунов В.М. Проблемы регуляции микрофлоры кишечника. // Журн. микробиол. 1995. - № 3. - С. 48 - 59.

83. Коршунов В.М., Иванова Н.П., Кафарская Л.И. и др. Нормальная микрофлора кишечника, дисбактериозы и их лечение. // Методические разработки. М., 1994.

84. Коршунов В.М., Иконникова Т.Б., Кисина Е.В. Изучение микрофлоры полости и слизистой оболочки кишечника в норме и после гамма облучения // Журн. микробиол. 1980. - № 9. - С. 65 - 70.

85. Коршунов В.М., Володин Н.Н., Ефимов Б.А., Пикина А.Г. Микроэкология желудочно-кишечного тракта. Коррекция микрофлоры при дисбактериозах кишечника. Учебное пособие. // М.: МЗРФ, 1999. 80 с.

86. Костюк О.П., Чернышова Л.И., Волоха А.П. Физиологические и терапевтические свойства лактобактерий // Педиатрия. 1998. - № 1. - С. 71-76.

87. Костюшов Е.В. Роль свободно радикального окисления и антиоксдантной системы организма в процессе жизнедеятельности. // В кн.: Арамченко

88. B.В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. СПб: Изд. ДЕАН, 2004. - 400 с.

89. Крамарь B.C. Колонизация микроорганизмами пищеварительного тракта людей в экологически неблагополучной обстановке. // Тез. итоговой годичной конф. ЦНИЛ Куйбышевского мединститута. Куйбышев, 1990.1. C. 17-18.

90. Крамарь О.Г. Микрофлоры и функциональное состояние толстого кишечника больных, страдающих дисбактериозом: Автореф. дисс. канд. мед. наук. -М., 1984.

91. Краснов В.В. Микрофлора кишечника и иммунитет. Клиническая лекция. Н. Новгород: Изд-во НГМА, 2003. - 46 с.

92. Красноголовец В.Н. Дисбактериоз кишечника. М.: Медицина, 1989. -207 с.

93. Краткий определитель бактерий Берги: Пер. с англ./ Под ред. Дж. Хоулта. М.: Мир, 1980.-454 с.

94. Куваева И.Б, Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей: диетическая коррекция. М.: Медицина, 1991. - 239 с.

95. Куваева И.Б. Обмен веществ организма и кишечная микрофлора. // М.: Медицина, 1976. 248 с.

96. Кулинский В.А., Колиниченко Л.С. Успехи биол. химии. М.: Наука, 1990. - Гл. 2: Обмен глутатиона - С. 157 - 180.

97. Кюнкрикова И.Е. Биокоррекция микрофлоры кишечника в комплексной терапии и профилактике дисбактериоза: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Волгоград, 2000. - 19 с.

98. Лебедев В.В. Супероксидная теория патогенеза и терапии иммунных расстройств. // Вестник РАМН. 2004. - № 2. - С. 34 - 40.

99. Ленцнер А.А., Ленцнер Х.П. Актуальные проблемы микроэкологии человека в норме и патологии, ее коррекция: Республ. сб. научных тр. / Под ред. И.Н. Блохиной, К.Я. Соколовой. Горький, 1988. - С. 10 -14.

100. Лесняк С.В., Евтухова Л.Н, Шимчук Л.Ф. О свойствах препарата из нормальной микрофлоры человека // Антибиотики и микроэкология человека и животных. М.: ВНИИА, 1988. - С. 136 - 137.

101. Лыкова Е.И. Коррекция пробиотиками микроэкологических нарушений при гастродуоденальной патологии у детей // Журн. микробиол. 1996. -№2.-С. 88-91.

102. Мазанкова Л.Н., Лыкова Е.А. Пробиотики: характеристика препаратов и выбор в педиатрической практике. // Детские инфекции. 2004. - № 1. -С. 18-23.

103. Мазо В.К. Глутатион как компонент антиоксидантной системы ЖКТ. // Росс, журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 1998. -Т. 8. № 1. - С. 47-53.

104. Малова А.А., Еналева Д.Ш. Диагностика и лечение дисбактериоза кишечника: Методич. Пособие // Казань: изд. КазГМУ, 2000. 46 с.

105. Мальцева Н.Н., Шкарупета М.М, Пинегин Б.В. Иммуномодулирующие свойства некоторых микробов представителей нормальной микрофлоры кишечника. // Антибиотики и химиотерапия. 1992. - № 12. - С. 41 - 43.

106. Маянский А.Н. Дисбактериоз: современный взгляд на проблему. // Новые медицинские технологии. 2002. - № 2. - С. 28 - 30.

107. ИЗ. Маянский А.Н. Клиническая микробиология и антимикробная терапия. -2000.-Т. 2.-С. 61-64.

108. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987. - 347 с.

109. Меньщикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К., Бондарь И.А., Круговых Н.Ф., Труфакин В.А. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. // М.: фирма «Слово», 2006. 526 с.

110. Микаэлян Э.М., Мхитарян В.Г. Динамика перекисного окисления липидов при стрессе. // Биол. журнал Армении 1985. - Вып. 5. - С. 393 -399.

111. Микельсаар М.Э., Сийгур У.Х., Ленцнер А.А. Оценка количественного состава микрофлоры фекалий. // Лаб. Дело. 1990. - № 3 - С. 62 - 66.

112. Митрохин С.Д. Метаболиты нормальной микрофлоры человека в экспресс-диагностике и контроле лечения дисбиоза толстой кишки: Дисс. докт. мед. наук. М., 1998. - 37 с.

113. Моин В.М. Простой и специфический метод определения активности глутатионпероксидазы в эритроцитах. // Лаб. Дело. 1986. - № 12. - С. 724 -727.

114. Назаренко И.В., Фролов А.Г., Бобкова Е.Д. и др. Динамика активности некоторых внутриклеточных ферментов в зависимости от периода иклинических проявлений острых кишечных заболеваний (Материалы пленума правления РНОГ) // Рига, 1986. С. 662 - 663.

115. Несвижский Ю.В. Изучение изменчивости кишечного микробиоценоза человека в норме и при патологии. // Вестник РАМН. 2003. - № 1. - С. 49 -53.

116. Осипов А.Н., Азизова О.А., Владимиров Ю.А. Успехи биол. химии. -М.: Наука, 1990. Гл.: Активные формы кислорода и их роль в организме. -С. 40-45.

117. Павлюченко И.И. Окислительный стресс, его мониторинг и критерии оценки антиокислительной активности лекарственных препаратов и БАД: Автореф. дисс. докт. мед. наук Кубань, 2005. - 43 с.

118. Парфенов А.И., Осипов Г.А., Ручкина И.Н. Теоретические и прикладные вопросы дисбактериоза кишечника. // Гастроэнтерология. -2003.-Т. 5.-№6.-С. 328- 330.

119. Перетц Л.Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека. // М., 1955. 250 с.

120. Петрович Ю.А., Гуткин Д.В. Глутатионпероксидазы в системе антиоксидантной защиты мембран. // Пат. Физиол. И экспер. тер. 1981. -Вып. 5. - С. 76 - 78.

121. Пинегин Б.В., Мальцев В.Н., Коршунов В.М. Дисбактериозы кишечника. М.: Медицина, 1984. - 144с.

122. Поберезкина Н.Б., Лосинская Л.Ф. Биологическая роль супероксиддисмутазы // Укр. биохим. журн. 1989. - Т. 61, № 2. - С. 14 -27.

123. Подопригорова В.Г. Роль свободно радикального окисления липидов и антиоксидантных систем в патогенезе язвенной болезни желудка и 12-п. кишки, возможности коррекции антиоксидантами. Дисс. докт. мед. наук. -М., 1998.

124. Положенкова JI.A., Бурков С.Г., Брокерия О.А., Новиков С.В. Значение флоневина БС в лечении дисбактероза кишечника. // Клин, медицина. -1999.-№2.-С.40-43.

125. Полякова А.В., Бектаева Н.Н., Лещенко В.И. Опыт лечения эрозивно-язвенных эзофагитов с применением гипербарической оксигенации. // В кн. «Материалы 4-го Всесоюзного съезда гастроэнтерологов. М.: Л,- 1990. 1-С. 500-501.

126. Помойнецкий В.Д., Кубатиева А.А Ферменты клеточной защиты и методы их исследования. М.: Медицина, 1986. - 225 с.

127. Поспелова В.В., Рахимова Н.Г., Ханина Г.И. и др. Биопрепараты, нормализующие микрофлору кишечника: итоги двадцатилетних исследований по проблеме. // Успехи в области изучения и применения препаратов эубиотиков: Сб. научн. тр. М., 1990. - С. 172 - 180.

128. Постникова Е.А., Ефимов Б.А., Володин Н.Н., Кафарская Л.И. Поиск перспективных штаммов бифидобактерий и лактобацилл для разработки новых биопрепаратов. // Журнал микробиол., эпидемиол. и иммнобиол. -2004. 2. - С. 64 - 69.

129. Прокопенко В.М., Парцалис Г.К., Павлова Н.Г. и др. Глутатионзависимая система АОЗ при преждевременных родах. // Бюллетень экспер. Биол. и медицины. 2002. - Т. 133, № 5. - С. 511 - 513.

130. Рябиченко Е.В., Бондаренко В.М., Рябиченко В.В. Роль активных форм кислорода, генерируемых фагоцитами, в патогенезе заболеваний. // ЖМЭИ- 2000. № 4 (приложение) - С. 65 - 71.

131. Саркисян О.Г. Особенности изменений метаболических процессов при атрофических кольпитах и их коррекции. Дисс. канд. мед. наук Ростов-на-Дону, 2000. - 125 с.

132. Сергиенко М.Г. Клинико-биохимические особенности и эффективность метаболической терапии неспецифического язвенного колита: Автореф. дисс. канд. мед. наук Ростов-на-Дону, 2006. - 21 с.

133. Слиянов В.В. Новые подходы к разработке препаратов на основе лактобактерий для лечения дисбактериозов кишечника: Дисс. канд. мед. наук. М., 1993.- 143 с.

134. Смолянская А.З. Дисбактериозы инфекционные процессы смешанной этиологии. // Антибиотики и микроэкология человека и животных: Тр. ВНИИ антибиотиков. - М., 1988. - С. 32 - 35.

135. Соколовский В.В. Окислительно-восстановительные процессы в биохимическом механизме неспецифической реакции организма на действие экстремальных факторов внешней среды. JL: Медицина, 1989. -519 с.

136. Суплотов С.Н., Журавлева Т.Д., Баранцева JI.A. Рациональная оценка активности свободно радикального окисления липидов в эритроцитах периферической крови. // Клиническая лаб. диагностика. 2002. - № 10. -С. 46.

137. Тарасова Н.Б., Соколова К.Я. Новый препарат лактобактерий для профилактики и лечения дисбактериозов кишечника. // Материалы 11 Всесоюзного съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. -Тбилиси, 1970.-С. 40-41.

138. Тец В.В., Борисов Л.Б. Влияние антибиотиков на популяционную изменчивость бактерий. // Антибиотики и химиотерапия. 1988. № 4. - С. 299 - 303.

139. Ткач Е.П., Воеводика О.С. Активность супероксиддисмутазы у больных хронической ишемической болезнью кишечника. // Российскийжурнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1998. - № 8 -С. 114.

140. Торчинский Ю.М. Сульфгидрильные и дисульфидные группы белков. М.: Наука. -1971. -С. 228.

141. Торчинский Ю.М. Сера в белках. М.: Наука. 1977. - С. 303.

142. Уайт, Хендлер Ф., Смит Э. Основы биохимии. М.: Мир, 1978. - С. 65 -78.

143. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М., 1975.

144. Учайкин В.Ф. Дисбактериоз кишечника. // Руководство по инфекционным болезням у детей. М.: ГЭОТАР Медицина, 1998. - С. 462 -473.

145. Федорук О.Б. Энзимодиагностика осложненных форм язвенной болезни желудка и 12-п. кишки.: Автореф. дисс. канд. мед. наук // Горький, 1983.- 19 с.

146. Хавкин А.И. Микробиоценоз кишечника и иммунитет. // РМЖ 2003. -Том 11. -№ 3. - С. 122- 125.

147. Хавкин А.И. Нарушение микроэкологии кишечника. Принципы коррекции (методические рекомендации). // Москва 2004.

148. Хавкин А.И., Бельмер С.В. Микроэкология кишечника: методы неспецифической коррекции. // РМЖ 2003. - Том 11. - № 13. - С. 7.

149. Хуцишвили М.Б., Рапопорт С.И. Свободно радикальные процессы и их роль в патогенезе некоторых заболеваний органов пищеварения (часть 1). // Клиническая медицина. 2002. - № 10. - С. 10 - 16.

150. Циммерман Я.С. Дисбактериоз (дисбиоз) кишечника и / или «синдром избыточного бактериального роста» // Клиническая медицина. 2005. - № 4. - С. 14 - 22.

151. Циммерман Я.С., Циммерман И.Я. Антибиотикоассоциированная диарея и псевдомембранозный колит суть клинически манифестныеформы кишечного дисбиоза // Клиническая медицина. 2005. - № 12. - С. 12-19.

152. Чахава О.В., Горская Е.М., Рубан С.З. Микробиологические и иммунологические основы гнотобиологии. М.: Медицина, 1982. - 158 с.

153. Чебуркин А.В. По поводу диагноза «Дисбактериоз кишечника». // Педиатрия. 1999. - № 1. - С. 102 - 103.

154. Чевари С., Андяя Т., Штренгер Я. Определение антиоксидантных параметров крови и их диагностическое значение в пожилом возрасте. / Лаб. дело, 1991.-№ 10.- С. 9-13.

155. Шамаль З.Ф., А.А. Жукова, Г.М. Суворова и др. Дисбактериоз и его лечение молоком «Наринэ» // Антропозитивные реакции и их профилактика: Сб. научн. тр. Хабаровск, 1988. - С. 47 - 49.

156. Шендеров Б.А. Значение колонизационной резистентности в патогенезе инфекционных заболеваний. // Иммунология инфекционных процессов. М., 1994. - С. 112 -122.

157. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 1: Микрофлора человека и животных и ее функции. - М.: Грантъ, 1998.-С. 288.

158. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1999. - Т. 7. - № 1. - С. 61 - 65.

159. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора человека и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии // Антибиотики и биотехнология. -1987. -№3.- С. 164-170.

160. Шендеров Б.А. Перспективы исследований в области микроэкологии человека и животных. // Медицинские аспекты микробной экологии. -1992.-Вып. 6.-С. 8-9.

161. Шендеров Б.А., Гончарова Г.И. Медицинские аспекты микробной экологии кишечника. // Медицинские аспекты микробной экологии. -1992.-Вып. 6.-С. 132- 136.

162. Щербаков П.Л. Кудрявцева Л.В. Зайцева С.В. и др. Микробиоценоз кишечника: его нарушения и коррекция с использованием бактисубтилла //Педиатрия. 1998. - № 5. - С. 99 - 103.

163. Эфендиев A.M., Помойнецкий В.Д. Биохимические методы исследования активности ферментов, осуществляющих защиту клетки при повреждающих воздействиях (методические рекомендации). // Баку, 1985. -29 с.

164. Юсупова Л.Б. о повышении точности определения глутатионпероксидазы эртироцитов. // Лаб. дело 1989. - № 14. - С. 19 -21.

165. Bennister T.V., Rotilio G.A. A decade of superoxide dismutase activity // The Biology and chemistry of active oxygen. New-York - 1984. - P. 146 -189.

166. Bennister T.V., Rotilio G.A. A decade of superoxide dismutase activity // The biology and chemisry of active oxygen. New-York - 1984. - P. 146 - 189.

167. Bhaskar L, Ramakriscna B.S. Colonic mucosal autioxidaut enzymes and lipid peroxide levels in normal subjects and patients with ulcerative colitis. J. Gastroenterol. Hepathol. 1995. - 10 (2), P. 140 - 143.

168. Biemond P., Swaak, H.S. van Eijk, J.F. Koster // Free Radical Biol. Med. -1988. 4. - P. 185-198. (цит. По Осипову А.Н. Успехи биол. химии. - М.: Наука, 1990).

169. Biemond P., Swaak. H.S., J.F. Koster // Free radical Biol. Med. 1984. - 4. -P. 185- 198.

170. Browin K., Fridovich I. Superoxide radical and superoxide dismutases: threat and difense. // Act. Physiol. Scaud. 1980. - Suppl. 492. - P. 9 -18.

171. Carrel R.W., Rachmilowitz E.A., Winterbourn C.C. Activated oxygen and haemolysis // Brit. J. Haemet. 1975. - V. 30. - P. 259 - 264.

172. Clark D.A, Fornabatio D.M. Contributio of oxygen-devided free radicals to experimental necrotizing enterocolitis. Am J. Pathol. 1988; 130 (3) P. 537 -527.

173. Collins M.D., Gibson G.R. Probiotics and synbyotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut // Am. J. Clin. Nutr. 1999.- V. 69, №5.-P. 152- 154.

174. Dat D., Walker W.A., Protective nutrients and bacterial colonization in the nature human gut // Adv. Pediatr. 1999. - № 46. - P. 353-382

175. Dauglas K.T. // Adv. Enzymol. 1987. - V. 59. - P. 103 - 167 (цит. По Владимирову Ю.А. Биофизика - М.: ВИНИТИ, 1991. - т. 29).

176. Ellman G.L. Tissue sulhydryl groups // Arch. Biochem. Biophys. 1959. -V. 82. - P. 70 - 77.

177. Famularo G., Pieluigi M., Coccia R., Mastroivoco P. Microecology, bacterial vaginosis and probiotics: perspectives for bacteriotherapy // Med. Hypotheses. 2001. - V. 56, № 4. - P. 421 - 430.

178. Fernandes C.F. A novel in vitro technique to simmulate growth of Lactobacillus acidophylus in small bowell // J. Diary Sci. 1987. - № 7. - S.l. -H. 81 -83.

179. Fridovich I. Biological effects of so radicals // Arch. Biochem., Biophysis. -1986.-V. 247,(1).-P. 1-11.

180. Fridovich I. Superoxide dismutases // Adv. Enzymol. 1986. - V. 58. - P. 61 -97.

181. Fridovich I. The biology of oxygen radicals // Scianca. 1978. - V. 201. - P. 875 - 880.

182. Fuller R., Probiotics in man and animals. // J. Appl. Bacteriol. 1999. - V. 66,№5.-P. 365 - 378.

183. Gibson G.R., Roberfroid U.B. Colonic microbiota nutrition and heals. -Dortrecht: Kluwer Academic, 1999. 304 p.

184. Gorbach S.L. Function of the normal microflora. // Scaud. J. Infect. Dis. -1986.-№49.-P. 17-23.

185. Gorbach S.L., Barcha M., Giuliano M. Colonisation resistance of the human intestinal microflora: testing the hypothesis in bormal volunteers. // Eur. J. Clin. Microbiol. 1988. - V. 7. - P. 98 - 102.

186. Haudberger H, Nilsson L.F. Increased antibiotics resistance of intestinal bacteria. // Lacartidhingen. 1996. - V. 93 - P. 148 -151.

187. Lloid D. Microbiological ecology. How to avoid oxygen (comment) // Science. 1999. - V. 286. - P. 249.

188. Lowry C., Rosebrouph N., Farr A., Randall R. Protein measurement with the folin phenol. Reagent. // J. Biol. Chem. 1953. - V. 193. - P. 265 - 275.

189. Maridonneeau L., Garay R.P. The effect of lipid peroxidation on transport function in human erythrocytes. // Biomed. Biochem. Acta. 1983. V. 42. - P. 58-61.

190. Mc Cord T.M. The superoxide free radical: its biochemistry and pathophysiology. // Surgery. 1983. - V. 84. - P. 412 - 414.

191. Miller M., Dumdey R., Rapoports Superoxide radicals in the metabolism of the red cells. // Biomed. Biochem. Acta. V. 42. - P. 297 - 301.

192. Mistra H.P, Fridovich I. Biol. Chem. 1972. - V. 247. - P. 188.

193. Mirrals-Barrachina O. et al. Low levels of glutations in endoscopic biopsies of patients with Crohns colitis: the role of malnutricion. Clin. Nutr. 1999. 18 (5)-P.313 -317.

194. Naya M. J., Pereboom D., Ortego J. et al. Superoxide amons produced by inflammatory cells play an important part in the pathogentsis of acid and pensin induced esophagytes in rabbits. Gut 1997 40 - P. 175 - 181.

195. Peach S.L., Tabagchali S. Some studies of bacterial flora assosiated with the mucosa of the gastrointestinal tract. //Nahrung. 1984. - V. 28. - P. 627 - 629.

196. Piorce S., Tappel A.L. Glutations peroxidase activities from rat liver. // Biomed. Biochem. Acta. V. 3. - P. 27 - 36.

197. Schau X., Aw T.X. Jones D.P. Glutations dependent protection against oxidative injury // Pharmacol, and Ther. - 1990. - 47. - P. 61 - 63.

198. Van der Waai D. Colonization resistance of the digestive tract: mechanism and clinical consequence // Nahrung. 1987. - № 5. - P. 507 - 516.

199. Wetscher G.J., Hinder P.R., Bagchi D. et al. Free radical scavenges prevents reflux esophagytes in rats. // Ibid. 1995. - P. 292 - 296.

200. Wharton B.A., Balmer S.E., Scott P.H. Faecal flora in newborn. Effects of lactobacterin and related nutrients. // Adv. Exp. Med. Diol. 1994. - V.357. - P. 91-98.

Информация о работе

Гапон, Марина Николаевна
кандидата биологических наук
Ростов-на-Дону, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Показатели антиоксидантной защиты организма при экспериментальном дисбактериозе кишечника, обусловленном применением антибиотика широкого спектра действия - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы